CN118159289A

CN118159289A - 用于诱导持续免疫反应的含有磷酸化Tau肽的脂质体

Info

Publication number: CN118159289A
Application number: CN202280068508.8A
Authority: CN
Inventors: A·普法伊费尔; A·穆赫斯; W·加尔彭
Original assignee: AC Immune SA; Janssen Pharmaceuticals Inc
Current assignee: AC Immune SA; Janssen Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2021-08-12
Filing date: 2022-08-12
Publication date: 2024-06-07

Abstract

描述了用于在人中诱导针对磷酸化Tau的持续免疫反应的方法。该方法包括向受试者施用有效量的包括toll样受体4激动剂、辅助性T细胞表位、脂质化CpG寡核苷酸、和呈递在脂质体的表面上的Tau磷酸肽的脂质体，以由此获得持续免疫反应。

Description

用于诱导持续免疫反应的含有磷酸化Tau肽的脂质体

相关申请的交叉引用

本申请是国际申请，其要求2021年8月12日提交的美国临时专利申请号63/260,227、2021年11月4日提交的美国临时专利申请号63/263,541和2022年2月14日提交的美国临时专利申请号63/267,975中的每一个的优先权，其各自的公开内容通过引用全文并入本文。

对电子序列表的引用

电子序列表(SequenceListing_7WO1.xml；大小：42,600字节；和创建日期：2022年7月8日)的内容通过引用全文并入本文。

技术领域

本发明属于医学领域。本发明特别涉及含有磷酸化Tau肽的脂质体，其用于在需要预防或治疗Tau蛋白病(诸如阿尔茨海默病)的受试者中诱导针对磷酸化Tau蛋白(pTau)的持续抗体反应。

背景技术

阿尔茨海默病(AD)是一种进行性衰弱性神经退行性疾病，在世界范围内估计影响4400万人(Alzheimers.net)。目前商业化的AD疗法旨在作用于临床症状，而不靶向导致疾病的致病过程(疾病修饰作用)。不幸的是，目前的疗法仅最低限度有效，并因此迫切需要开发和测试另外的预防性和治疗性措施。

阿尔茨海默病的标志性病理是细胞外斑块的积聚，所述细胞外斑块包含显著聚集的淀粉样β蛋白和过度磷酸化的Tau蛋白的细胞内“缠结”或聚集体。导致这些蛋白的积聚的分子事件的表征不佳。对于淀粉样蛋白，有假说认为淀粉样蛋白前体蛋白的异常切割导致包含氨基酸1-42的易聚集片段的积聚。对于Tau，有假说认为激酶、磷酸酶或两者的失调导致Tau的异常磷酸化。一旦Tau变得过度磷酸化，其就会失去有效结合和稳定微管的能力，而改为积聚在受影响的神经元的细胞质中。未结合和过度磷酸化的Tau似乎会形成第一寡聚物，并随后形成更高阶的聚集体，其存在可能会对它们形成于其中的神经元的功能产生负面影响，可能经由正常轴突运输的中断。

在发达国家，被诊断患有阿尔茨海默病或其他痴呆性Tau蛋白病的个体通常用胆碱酯酶抑制剂(例如)或美金刚(例如Namenda^TM)来治疗。这些药物虽然耐受性相当不错，但功效非常一般。例如，在大约50％的经治疗的个体中，将症状的恶化延迟6-12个月。其余的治疗是非药理性的，并且聚焦于随着患者认知能力下降，使其更有能力处理日常事务。

近来已经公开了ADAMANT(其为AADvac1的一项24个月的双盲、平行组、随机化2期多中心安慰剂对照试验，AADvac1是设计为靶向阿尔茨海默病中的病理性Tau的活性肽疫苗(EudraCT 2015-000630-30))的结果(Novak等人,Nature Aging第1卷:521–534,2021)。AADvac1含有通过N末端半胱氨酸与钥孔戚血蓝素(KLH)连接的衍生自Tau序列的氨基酸294至305的合成肽。在试验过程中，以每剂40μg向患有轻度AD痴呆的患者施用11剂AADvac1。尽管该疫苗诱导高水平的IgG抗体，但在认知和功能测试中未发现对整个研究样本的显著影响(同上)。

ACI-35为使用基于人p-Tau396/404的合成肽的疫苗，其显示改善携带P301L突变的小鼠的运动能力并延长其存活(Theunis等人,PLOS ONE.2013.8(8):e72301)。在1b期研究中，ACI-35耐受良好并引发抗体反应，但可加强性(boostability)有限。

需要用于神经元退行性疾病，诸如阿尔茨海默病的安全和有效的治疗。

发明内容

本发明基于来自改善的脂质体疫苗的临床研究的发现，所述脂质体疫苗包含呈递在脂质体表面上的磷酸化Tau肽。该疫苗诱导有效和持续的免疫反应，诸如针对pTau的持续抗体反应，并且抗体反应可通过加强注射(booster shots)来加强。

因此，在一个一般方面，本发明提供在有需要的人受试者中诱导针对磷酸化Tau蛋白(pTau)的抗体反应的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的脂质体，所述脂质体含有：(1)由选自SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:31至SEQ ID NO:38的氨基酸序列组成的Tau磷酸肽，其量为每剂25-750纳摩尔，诸如300μg至1800μg；

(2)包含单磷酰基脂质A的toll样受体4激动剂；

(3)具有选自SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23至SEQ ID NO:26、和SEQ ID NO:39至SEQ ID NO:44的氨基酸序列的辅助性T细胞表位；和

(4)具有选自SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:22的核苷酸序列的CpG寡核苷酸，

其中：

Tau磷酸肽呈递在脂质体的表面上，且

在向人受试者初始施用有效量的脂质体后，抗体反应持续至少6周，诸如至少6、7、8、9、10周。

在一些实施方案中，有效量的脂质体包含：

(1)由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成的Tau磷酸肽，其量为每剂300μg至1800μg；

(2)toll样受体4激动剂，其量为每剂100μg至585μg；

(3)辅助性T细胞表位，其量为每剂75μg至550μg；和

(4)CpG寡核苷酸，其量为每剂100μg至1000μg。

在一些实施方案中，CpG寡核苷酸具有一个或多个硫代磷酸酯核苷酸间键，并且CpG寡核苷酸任选经由PEG接头与至少一个亲脂性基团共价连接。

在一些实施方案中，Tau磷酸肽以每剂约25纳摩尔至约750纳摩尔，诸如每剂约29.7纳摩尔至约742.5纳摩尔，优选约90纳摩尔至约715纳摩尔，诸如每剂约89.1纳摩尔至约712.8纳摩尔，或每剂约90纳摩尔至约535纳摩尔，诸如每剂约89.1纳摩尔至约534.6纳摩尔，或每剂约90纳摩尔至约275纳摩尔，诸如每剂约89.1纳摩尔至约267.3纳摩尔的量施用。在某些实施方案中，Tau磷酸肽由选自SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:31至SEQID NO:38的氨基酸序列组成，优选由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，四棕榈酰化Tau磷酸肽以每剂100μg至2500μg(对应于每剂29.7纳摩尔至742.5纳摩尔)，优选每剂300μg至2400μg(对应于每剂89.1纳摩尔至712.8纳摩尔)，诸如每剂300μg、900μg、1800μg或2400μg(对应于每剂89.1纳摩尔、267.3纳摩尔、534.6纳摩尔或712.8纳摩尔)的量施用。

在某些实施方案中，有效量的脂质体以每剂30μg至900μg，优选100μg至585μg的量包含toll样受体4激动剂。在某些实施方案中，有效量的脂质体以每剂30μg至900μg，优选100μg至585μg的量包含toll样受体激动剂3-脱酰基单磷酰基六酰基脂质A。

在某些实施方案中，有效量的脂质体以每剂25μg至625μg，优选75μg至550μg，诸如75μg至450μg的量包含辅助性T细胞表位。在某些实施方案中，有效量的脂质体以每剂25μg至625μg，优选75μg至450μg的量包含由SEQ ID NO:13的氨基酸序列组成的T50辅助性T细胞表位。在某些实施方案中，有效量的脂质体以每剂约2纳摩尔至约110纳摩尔，诸如每剂约4.02纳摩尔至约100.44纳摩尔，或每剂约4纳摩尔至约75纳摩尔，诸如每剂约4.02纳摩尔至约72.32纳摩尔，或每剂约10纳摩尔至约105纳摩尔，诸如每剂约12.06纳摩尔至约100.44纳摩尔，或每剂约70至约105纳摩尔，诸如每剂约72.32纳摩尔至约100.44纳摩尔的量包含辅助性T细胞表位。在某些实施方案中，有效量的脂质体以每剂约3纳摩尔至约105纳摩尔，优选每剂约10纳摩尔至约105纳摩尔，诸如每剂约12.06纳摩尔至约100.44纳摩尔的量包含由SEQ ID NO:13的氨基酸序列组成的T50辅助性T细胞表位。在一个实施方案中，有效量的脂质体以每剂2至5纳摩尔，例如每剂2、3、4或5纳摩尔或其间的任意值，诸如每剂约3.82、3.92、4.02或4.12纳摩尔的量包含辅助性T细胞表位。在另一实施方案中，有效量的脂质体以每剂10至15纳摩尔，诸如每剂10、11、12、13、14或15纳摩尔，或其间的任意值，诸如每剂11.86、11.96、12.06、12.16纳摩尔的量包含辅助性T细胞表位。在另一实施方案中，有效量的脂质体以每剂70至75纳摩尔，诸如每剂70、71、72、73、74或75纳摩尔，或其间的任意值，诸如每剂72.02、72.12、72.22、72.32、72.42纳摩尔的量包含辅助性T细胞表位。在再一实施方案中，有效量的脂质体以每剂98至103纳摩尔，诸如每剂98、99、100、101、102或103纳摩尔，或其间的任意值，诸如每剂100.24、100.34、100.44、100.54或100.64纳摩尔的量包含辅助性T细胞表位。

在某些实施方案中，有效量的脂质体以每剂50μg至1250μg，优选100μg至1000μg，诸如150μg至800μg的量包含脂质化CpG寡核苷酸。在某些实施方案中，有效量的脂质体以每剂50μg至1250μg，优选150μg至800μg的量包含由SEQ ID NO:18的核苷酸序列组成的CpG寡核苷酸。

在某些实施方案中，脂质体皮下施用。

在某些实施方案中，脂质体肌内施用。

在某些实施方案中，脂质体进一步包含一种或多种选自1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酰基-3’-rac-甘油(DMPG)和胆固醇的脂质。

在某些实施方案中，脂质体包含：

(1)具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的Tau磷酸肽；

(2)包含3-脱酰基单磷酰基六酰基脂质A的toll样受体4激动剂；

(3)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的辅助性T细胞表位；

(4)包含SEQ ID NO:18的核苷酸序列的脂质化CpG寡核苷酸；和

(5)至少一种选自1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酰基-3’-rac-甘油(DMPG)和胆固醇的脂质。

根据本申请的一个实施方案，抗体反应包含针对pTau的特异性IgG抗体反应。优选地，特异性IgG抗体反应具有为安慰剂对照的至少50、60、70、80、90、100或更多倍的抗pTauIgG滴度。

在本申请的另一实施方案中，抗体反应包含针对pTau的特异性IgM抗体反应和该特异性IgM抗体反应向针对pTau的特异性IgG抗体反应的类别转换。

在本申请的再一实施方案中，抗体反应包含相对于非磷酸化Tau蛋白优先识别pTau的IgG抗体反应。优选地，抗pTau IgG滴度与抗Tau IgG滴度的比率为至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70或更高。

在本申请的另一实施方案中，抗体反应包含针对富集成对螺旋丝(ePHF)的IgG抗体反应。优选地，IgG抗体反应具有为安慰剂对照的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多倍的抗ePHF IgG滴度。更优选地，抗ePHF IgG在初始施用有效量的脂质体后至少6周，或在加强施用后(如在加强施用后至少2周所测量的)具有提高的对病理性ePHF Tau的结合亲合力，优选抗ePHF IgG具有至少0.3、0.4、0.5、0.6或0.7的亲合力指数。

根据本申请的实施方案，抗体反应可以通过加强施用来加强。

在一个实施方案中，本申请的方法进一步包括在初始施用有效量的脂质体后4至12周，诸如8周，向受试者施用第二剂量的有效量的脂质体。如施用第二剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，抗体反应得到加强。优选地，如施用第二剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，抗体反应加强至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。

在另一实施方案中，本申请的方法进一步包括在初始施用有效量的脂质体后20至28周，诸如24周，向受试者施用第三剂量的有效量的脂质体。如施用第三剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，抗体反应得到加强，优选如施用第三剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，抗体反应提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。

在再一实施方案中，本申请的方法进一步包括在初始施用有效量的脂质体后44至52周，诸如48周，向受试者施用第四剂量的有效量的脂质体。在施用第四剂量的有效量的脂质体后至少2周，抗体反应得到加强，优选地，通过施用第四剂量的有效量的脂质体，抗体反应提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。

在某些实施方案中，人受试者需要清除Tau的聚集体。在某些实施方案中，受试者需要预防或治疗阿尔茨海默病，诸如临床前阿尔茨海默病、早期阿尔茨海默病、由阿尔茨海默病引起的轻度认知障碍(MCI)、轻度阿尔茨海默病、或轻度至中度阿尔茨海默病。在另一些实施方案中，受试者的脑中呈淀粉样蛋白阳性，但尚未显示出显著的认知障碍。

本发明还涉及用于在有需要的人受试者中诱导免疫反应，诸如针对磷酸化Tau蛋白(pTau)的抗体反应的疫苗组合，其中疫苗组合包含根据本发明的实施方案的初免疫苗和加强疫苗，并且免疫反应在向人受试者施用初免疫苗后持续至少10周，诸如至少10、15、20、25、30、35、40、45、50周或更长。

在阅读本发明的以下详述和权利要求后将更好地理解本发明的进一步的方面、特征和优点。

附图说明

当结合附图一起阅读时，将更好地理解上文的概述以及本发明的以下详述。应当理解的是，本发明不限于附图中显示的确切实施方案。

图1是1b/2a期研究(NCT04445831)中群组1(ACI-35.030或安慰剂)的研究设计的概述。

图2显示了在第0、8和24周用安慰剂或300μg或900μg剂量的ACI-35.030治疗的患有早期阿尔茨海默病的患者中抗pTau IgG滴度的几何平均值。

图3显示了在第0、8和24周用安慰剂或300μg或900μg剂量的ACI-35.030治疗的患有早期阿尔茨海默病的患者中抗Tau(非磷酸化的)IgG滴度的几何平均值。

图4显示了在第0、8和24周用安慰剂或300μg或900μg剂量的ACI-35.030治疗的患有早期阿尔茨海默病的患者中抗ePHF IgG滴度的几何平均值。

图5显示了用安慰剂或300μg、900μg或1800μg剂量的ACI-35.030治疗的患有早期阿尔茨海默病的患者中抗Tau(非磷酸化的)IgG滴度的几何平均值。

图6显示了用安慰剂或300μg、900μg或1800μg剂量的ACI-35.030治疗的患有早期阿尔茨海默病的患者中抗pTau IgG滴度的几何平均值。

图7显示了用安慰剂或300μg、900μg或1800μg剂量的ACI-35.030治疗的患有早期阿尔茨海默病的患者中抗ePHF IgG滴度的几何平均值。

图8A和8B显示了在第0、8和24周用安慰剂或900μg剂量的ACI-35.030治疗的患有早期阿尔茨海默病的患者中诱导的抗体的表位识别谱。

具体实施方式

在发明背景和说明书通篇中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献的每一个通过引用全文并入本文。包括在本说明书中的文件、法案、材料、装置、物品等的讨论是为了提供本发明的背景的目的。对于所公开或要求保护的任何发明，此类讨论并非承认任何或所有这些事项构成现有技术的一部分。

除非另行定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。否则，本文中使用的某些术语具有如说明书中所阐述的含义。

必须注意，如本文和所附权利要求中使用的，单数形式“一个(a)”、“一个(an)”和“该/所述”包括复数指代，除非上下文另行明确指出。

除非另行说明，任何数值，诸如本文中描述的浓度或浓度范围，应理解为在所有情况下均由术语“约”修饰。由此，数值通常包括所述值的±10％。例如，1mg/mL的浓度包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同样，1％至10％(w/v)的浓度范围包括0.9％(w/v)至11％(w/v)。如本文中所用，除非上下文另行明确说明，数值范围的使用明确地包括所有可能的子范围、该范围内的所有单个数值，包括此类范围内的整数和值的分数。

除非另行说明，一系列要素之前的术语“至少”应理解为是指该系列中的每个要素。本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验来确定本文中描述的本发明的特定实施方案的许多等同物。此类等同物意在被本发明涵盖。

如本文所用，术语“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“具有(has)”、“具有(having)”、“含有(contains)”或“含有(containing)”或其任何其他变型将理解为意指包括所述整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组，并且意在为非排他性的或开放式的。例如，包含一系列要素的组合物、混合物、过程、方法、制品或设备不一定仅限于那些要素，而是可包括未明确列出或此类组合物、混合物、过程、方法、制品或设备固有的其他要素。此外，除非有相反的明确说明，“或”是指包含性的“或”而不是排他性的“或”。例如，条件A或B由以下任一个来满足：A为真(或存在)且B为假(或不存在)、A为假(或不存在)且B为真(或存在)以及A和B两者均为真(或存在)。

还应当理解的是，如本领域普通技术人员将理解的那样，当指代优选发明的组件的尺寸或特征时，本文中使用的术语“约”、“大约”、“大体上”、“基本上”以及类似术语指示所描述的尺寸/特征不是严格的界限或参数，并且不排除在功能上相同或相似的与其的微小变化。至少，包括数字参数的此类指代将包括使用本领域中公认的数学和工业原理(例如四舍五入、测量或其他系统误差、制造公差等)不会改变最低有效数字的变化。

本发明提供了在有需要的人受试者中诱导抗磷酸化Tau抗体而不诱导被认为可能或很可能与研究疫苗相关的严重不良事件(诸如脑炎)的方法。在特定实施方案中，该方法包括向受试者施用有效量的脂质体，所述脂质体包含呈递在脂质体表面上的Tau磷酸肽和toll样受体4激动剂。

如本文中所用，术语“抗磷酸化Tau抗体”是指结合至已经在Tau的氨基酸序列的一个或多个位置处的氨基酸残基上被磷酸化的Tau的抗体。磷酸化的氨基酸残基可以是例如丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)或酪氨酸(Tyr)。磷酸化Tau上抗磷酸化Tau抗体与之结合的位点优选是在神经退行性疾病(诸如阿尔茨海默病)中被特异性磷酸化的位点。抗磷酸化Tau抗体与之结合的磷酸化Tau的位点的实例包括例如Tyr18、Ser199、Ser202、Thr205、Thr212、Ser214、Ser396、Ser404、Ser409、Ser422、Thr427。如本申请通篇中所用，氨基酸位置参考具有GenBank登录号NP_005901.2中呈现的氨基酸序列的人微管相关蛋白tau亚型2的序列给出。

施用后诱导抗磷酸化Tau抗体的能力可以通过测试来自受试者的生物样品(例如血液、血浆、血清、PBMC、尿液、唾液、粪便、CSF或淋巴液)中针对药物组合物中施用的免疫原性Tau肽的抗体(例如IgG或IgM抗体)的存在来确定(参见例如Harlow,1989,Antibodies,Cold Spring Harbor Press)。例如，响应于提供免疫原的组合物的施用而产生的抗体的滴度可以通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、其他基于ELISA的测定(例如MSD-Meso ScaleDiscovery)、斑点印迹、SDS-PAGE凝胶、ELISPOT或抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)测定来测量。

如本文中所用，术语“不良事件”(AE)是指施用药物产品的患者中的任何不良医学事件，并且其不一定与治疗具有因果关系。根据本发明的实施方案，使用以下定义基于严重程度渐增的3点量表对AE进行评级：轻度(1级)，是指受试者容易耐受的AE，其引起最小的不适并且不干扰日常活动；中度(2级)，是指不适足以干扰正常日常活动并可能需要干预的AE；重度(3级)，是指阻止正常的日常活动并通常需要治疗或其他干预的AE。严重AE(SAE)可以是导致任何以下结果的在任何剂量下发生的任何AE：死亡，其中死亡是结果而非事件；危及生命，是指患者在事件发生时处于死亡风险中的事件；其并不是指如果事件更严重则可能假设导致死亡的事件；患者住院，即计划外的过夜住院或现有住院的延长；持续或显著无能力进行正常生活功能或进行正常生活功能的能力的实质中断；先天性异常/出生缺陷；可能危害患者或可能需要医疗或手术干预以预防上文列举的其他结果之一的重要医学事件(如研究者所认为的)(例如在急诊室或家中对过敏性支气管痉挛或血质不调或惊厥的强化治疗，其不会导致住院)。住院是正式入院。住院或住院的延长构成AE严重的标准；然而，其本身并不被视为SAE。在不存在AE的情况下，参与研究者不应将住院或住院的延长报告为SAE。在下列情形下，可能是这种情况：方案所要求的程序需要住院或住院的延长；或者，住院或住院的延长是中心遵循的常规程序的一部分(例如手术后移除支架)。这应当记录在研究文件中。在研究期间，未恶化的先前存在的状况的选择性治疗的住院不被视为AE。

在住院期间发生的并发症是AE。如果并发症使住院延长，或符合任何其他SAE标准，则该事件为SAE。

如本文中所用，术语“脑炎”是指可由感染性和非感染性原因引起的脑部炎症。如本文中所用，术语“脑膜脑炎”是指以脑膜和脑的感染或炎症为特征的状况。脑炎或脑膜脑炎的诊断可以鉴于本公开，通过本领域技术人员已知的技术，例如通过临床、神经学和精神病学检查、生物取样(包括血液和CSF取样)、MRI扫描和脑电图(EEG)来确定。

如本文中所用，术语“脂质体”通常是指由具有高脂质含量的材料(例如磷脂、胆固醇)制成的脂质囊泡。这些囊泡的脂质通常以脂质双层的形式组织。脂质双层通常包封散布在脂质双层的多个洋葱状壳之间，形成多层脂质囊泡(MLV)的体积，或包含在无定形中央空腔内的体积。具有无定形中央空腔的脂质囊泡是单层脂质囊泡，即具有围绕空腔的单个外围双层的那些。大单层囊泡(LUV)通常具有100nm至几微米，诸如100-200nm或更大的直径，而小单层脂质囊泡(SUV)通常具有小于100nm，诸如20-100nm，通常为15-30nm的直径。

如本文中所用，术语“Tau”或“Tau蛋白”(也称为微管相关蛋白Tau、MAPT、神经原纤维缠结蛋白、成对螺旋丝-Tau、PHF-Tau、MAPTL、MTBT1)是指具有多个亚型的丰富的中枢和外周神经系统蛋白。在人中枢神经系统(CNS)中，由于可变剪接，存在大小范围为352至441个氨基酸长度的六种主要的Tau亚型(Hanger等人,Trends Mol Med.15:112-9,2009)。Tau的实例包括但不限于CNS中的Tau亚型，诸如441个氨基酸的最长Tau亚型(4R2N)(也称为微管相关蛋白tau亚型2)，其具有四个重复和两个插入，诸如具有GenBank登录号NP_005901.2中呈现的氨基酸序列的人Tau亚型2。Tau的其他实例包括352个氨基酸长的最短(胎儿)亚型(3R0N)(也称为微管相关蛋白tau亚型4)，其具有三个重复且没有插入，诸如具有GenBank登录号NP_058525.1中呈现的氨基酸序列的人Tau亚型4。Tau的实例还包括在外周神经中表达的“大Tau”亚型，其含有300个另外的残基(外显子4a)。Friedhoff等人,Biochimica etBiophysica Acta 1502(2000)122-132。Tau的实例包括人大Tau，其是由6762个核苷酸长的mRNA转录物(NM_016835.4)编码的758个氨基酸长的蛋白或其亚型。例举的人大Tau的氨基酸序列呈现在GenBank登录号NP_058519.3中。如本文中所用，术语“Tau”包括来自除人以外的物种(诸如食蟹猕猴(Macaca Fascicularis,cynomolgus monkey)、恒河猴或黑猩猩(Pantroglodytes,chimpanzee))的Tau的同源物。如本文中所用，术语“Tau”包括包含突变(例如点突变、片段、插入、缺失)的蛋白和全长野生型Tau的剪接变体。术语“Tau”还涵盖Tau氨基酸序列的翻译后修饰。翻译后修饰包括但不限于磷酸化。

如本文中所用，术语“肽”或“多肽”是指由经由肽键连接的氨基酸残基、其相关的天然存在的结构变体和合成的非天然存在的类似物构成的聚合物。该术语是指任何大小、结构或功能的肽。通常，肽为至少三个氨基酸长。肽可以是天然存在的、重组的或合成的、或其任意组合。合成肽可以例如使用自动化多肽合成仪来合成。Tau肽的实例包括长度为约5个至约30个氨基酸，优选长度为约10个至约25个氨基酸，更优选长度为约16个至约21个氨基酸的Tau蛋白的任何肽。在本公开中，使用标准的三字母或一字母氨基酸缩写，从N末端至C末端列出肽，其中磷酸化残基用“p”指示。可用于本发明中的Tau肽的实例包括但不限于包含SEQ ID NO:1-12中任一个的氨基酸序列的Tau肽，或具有与SEQ ID NO:1-12中任一个的氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％或95％同一性的氨基酸序列的Tau肽。

如本文中所用，术语“磷酸肽”或“磷酸化表位”是指在一个或多个氨基酸残基处磷酸化的肽。Tau磷酸肽的实例包括包含一个或多个磷酸化氨基酸残基的任何Tau肽。

本发明的Tau肽可以通过固相肽合成或通过重组表达系统来合成。肽自动合成仪可商业获得自许多供应商，诸如Applied Biosystems(Foster City,Calif.)。重组表达系统可包括细菌(诸如大肠杆菌(E.coli))、酵母、昆虫细胞、或哺乳动物细胞。重组表达的程序由Sambrook等人,Molecular Cloning:ALaboratory Manual(C.S.H.P.Press,NY 2ded.,1989)描述。

根据特定实施方案，脂质体包含一种或多种Tau肽。根据特定实施方案，脂质体中的Tau肽可以相同或不同。鉴于本公开，本领域技术人员已知的任何合适的Tau肽可用于本发明。根据特定实施方案，Tau肽中的一种或多种包含SEQ ID NO:1-12之一的氨基酸序列。在其他实施方案中，Tau肽中的一种或多种包含与SEQ ID NO:1-12之一的氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％或95％同一性的氨基酸序列，其中氨基酸残基均未磷酸化，或者一个或多个氨基酸残基被磷酸化。

根据特定实施方案，Tau肽中的一种或多种是Tau磷酸肽。根据特定实施方案，一种或多种Tau磷酸肽包含SEQ ID NO:1-3或5-12之一的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:1-3或5-12之一的氨基酸序列具有至少75％、80％、85％、90％或95％同一性的氨基酸序列，其中所指示的氨基酸残基中的一个或多个被磷酸化。优选地，Tau磷酸肽包含SEQ ID NO:1-3之一的氨基酸序列。Tau肽的C末端可酰胺化。

根据本申请的实施方案，Tau肽呈递在脂质体的表面上。鉴于本公开，可以使用本领域已知的方法将Tau肽，优选Tau磷酸肽呈递在脂质体的表面上。参见例如美国专利号8,647,631和9,687,447以及国际专利申请号PCT/US18/57286(其内容通过引用并入本文)中的相关公开内容。根据特定实施方案，一种或多种Tau肽(包括磷酸肽)进一步包含一种或多种修饰(诸如棕榈酰化或十二烷基修饰)以允许Tau肽呈递在脂质体的表面上。另外的氨基酸残基(诸如Lys、Cys或者有时为Ser或Thr)可以添加至Tau肽以促进修饰。据报道，脂质锚的位置诱导肽序列的不同构象(Hickman等人,J.Biol.Chem.第286卷,第16期,第13966–13976页,2011年4月22日)。不希望受理论束缚，据信在两个末端处添加疏水性部分可增加Tau肽的病理性β折叠构象。由此，一种或多种Tau肽在两个末端处进一步包含疏水性部分。修饰的Tau肽的C末端可酰胺化。优选地，呈递在脂质体的表面上的Tau肽由SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:31至SEQ ID NO:38之一的氨基酸序列组成。

可用于本发明的tau脂质体的实例包括但不限于美国专利号8,647,631和9,687,447以及国际专利申请号PCT/US18/57286(各自的公开内容通过引用全文并入本文)中描述的tau脂质体。

如本文中所用，术语“有效量”是指在受试者中引发所需生物或药物反应的活性成分或组分的量。具体有效剂量的选择可由本领域技术人员基于对若干因素的考虑来确定(例如经由临床试验)，所述因素包括待治疗或预防的疾病、所涉及的症状、患者的体重、患者的免疫状态和本领域技术人员已知的其他因素。制剂中采用的精确剂量还将取决于施用模式、施用途径、靶部位、患者的生理状态、施用的其他药物和疾病的严重程度，并且应当根据从业者的判断和每位患者的情况来决定。例如，tau磷酸肽的有效量还取决于是否还施用佐剂，其中在不存在佐剂的情况下需要更高的剂量。有效剂量可以从源自体外或动物模型测试系统的剂量-反应曲线外推。

根据本申请的实施方案，有效量的脂质体包含足以提高抗磷酸化Tau抗体的水平而不诱导严重不良事件(诸如脑炎)的量的Tau磷酸肽。在特定实施方案中，有效量的脂质体以每剂约25纳摩尔至约750纳摩尔，诸如每剂约29.7纳摩尔至约742.5纳摩尔，优选每剂约90纳摩尔至约715纳摩尔，诸如每剂约89.1纳摩尔至约712.8纳摩尔，或每剂约90纳摩尔至约535纳摩尔，诸如每剂约89.1纳摩尔至约534.6纳摩尔，或每剂约90纳摩尔至约275纳摩尔，诸如每剂约89.1纳摩尔至约267.3纳摩尔的量包含Tau磷酸肽。施用的Tau磷酸肽的量也可以通过重量来表示。例如，每剂29.7纳摩尔对应于每剂100μg的由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成的四棕榈酰化Tau磷酸肽，每剂742.5纳摩尔对应于每剂2500μg的由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成的四棕榈酰化Tau磷酸肽，每剂89.1纳摩尔对应于每剂300μg的由SEQ IDNO:28的氨基酸序列组成的四棕榈酰化Tau磷酸肽，每剂712.8纳摩尔对应于每剂2400μg的由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成的四棕榈酰化Tau磷酸肽，以及每剂534.6纳摩尔对应于每剂1800μg的由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成的四棕榈酰化Tau磷酸肽。四棕榈酰化Tau磷酸肽具有四个允许Tau磷酸肽呈递在脂质体的表面上的脂质链。300、900、1800μg的由SEQID NO:28的氨基酸序列组成的四棕榈酰化Tau磷酸肽的剂量分别对应于169、508、1016μg的没有任何脂质链的相应“裸”肽。

根据本申请的实施方案，有效量的脂质体以每剂约25纳摩尔至约750纳摩尔的量包含Tau磷酸肽，诸如每剂约25纳摩尔、约30纳摩尔、约35纳摩尔、约40纳摩尔、约45纳摩尔、约50纳摩尔、约55纳摩尔、约60纳摩尔、约65纳摩尔、约70纳摩尔、约75纳摩尔、约80纳摩尔、约85纳摩尔、约90纳摩尔、约95纳摩尔、约100纳摩尔、约125纳摩尔、约150纳摩尔、约175纳摩尔、约200纳摩尔、约225纳摩尔、约250纳摩尔、约275纳摩尔、约300纳摩尔、约325纳摩尔、约350纳摩尔、约375纳摩尔、约400纳摩尔、约425纳摩尔、约450纳摩尔、约475纳摩尔、约500纳摩尔、约525纳摩尔、约550纳摩尔、约575纳摩尔、约600纳摩尔、约625纳摩尔、约650纳摩尔、约675纳摩尔、约700纳摩尔、约725纳摩尔、约750纳摩尔的包含SEQ ID NO:1-3或5-12之一的氨基酸序列的Tau磷酸肽。优选地，Tau磷酸肽由SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:29和SEQID NO:31至SEQ ID NO:38之一的氨基酸序列组成。更优选地，Tau磷酸肽由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成。

根据本申请的实施方案，有效量的脂质体以每剂100μg至2500μg、300μg至2400μg、300μg至1800μg、或300μg至900μg，诸如每剂100μg、150μg、200μg、250μg、300μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg、1000μg、1100μg、1200μg、1300μg、1400μg、1500μg、1600μg、1700μg、1800μg、1900μg、2000μg、2100μg、2200μg、2300μg、2400μg、或2500μg的量包含四棕榈酰化Tau磷酸肽。

根据本申请的实施方案，Tau磷酸肽呈递在脂质体的表面上。根据本申请的实施方案，Tau磷酸肽包含SEQ ID NO:1-3或5-12之一的氨基酸序列。优选地，Tau磷酸肽由SEQ IDNO:27至SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:31至SEQ ID NO:38之一的氨基酸序列组成。更优选地，Tau磷酸肽由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成。

根据本申请的其他实施方案，有效量的脂质体以每剂30μg至900μg，优选100μg至585μg的量进一步包含toll样受体4激动剂。例如，有效量的脂质体可以以每剂30μg、50μg、100μg、150μg、200μg、250μg、300μg、330μg、360μg、390μg、420μg、450μg、480μg、500μg、520μg、540μg、560μg、580μg、600μg、700μg、800μg或900μg的量包含toll样受体4激动剂。

根据本申请的实施方案，toll样受体4包含3D-(6-酰基)

根据本申请的其他实施方案，有效量的脂质体以每剂25μg至625μg，优选75μg至550μg，诸如75μg至450μg、80μg至540μg、82.5μg至535μg、85μg至530μg、87.5μg至525μg、或90μg至520μg的量进一步包含辅助性T细胞表位。例如，有效量的脂质体可以以每剂25μg、50μg、70μg、72.5μg、75μg、77.5μg、80μg、82.5μg、85μg、87.5μg、90μg、100μg、125μg、150μg、175μg、200μg、225μg、250μg、275μg、300μg、325μg、350μg、375μg、400μg、425μg、450μg、475μg、500μg、525μg、550μg、575μg、600μg、或625μg的量包含辅助性T细胞表位。

根据本申请的其他实施方案，有效量的脂质体以每剂约3纳摩尔至约105纳摩尔，诸如每剂约4纳摩尔、约5纳摩尔、约6纳摩尔、约7纳摩尔、约8纳摩尔、约9纳摩尔、约10纳摩尔、约15纳摩尔、约20纳摩尔、约25纳摩尔、约30纳摩尔、约35纳摩尔、约40纳摩尔、约45纳摩尔、约50纳摩尔、约55纳摩尔、约60纳摩尔、约65纳摩尔、约70纳摩尔、约75纳摩尔、约80纳摩尔、约85纳摩尔、约90纳摩尔、约95纳摩尔、约100纳摩尔、或约105纳摩尔的量进一步包含辅助性T细胞表位。

根据本申请的实施方案，辅助性T细胞表位是由SEQ ID NO:13的氨基酸序列组成的T50辅助性T细胞表位、由SEQ ID NO:14的氨基酸序列组成的T46辅助性T细胞表位、由SEQID NO:15的氨基酸序列组成的T48辅助性T细胞表位、由SEQ ID NO:16的氨基酸序列组成的T51辅助性T细胞表位、或由SEQ ID NO:17的氨基酸序列组成的T52辅助性T细胞表位，优选地，辅助性T细胞表位是由SEQ ID NO:13的氨基酸序列组成的T50辅助性T细胞表位。

在某些实施方案中，有效量的脂质体以每剂50μg至1250μg，优选100μg至1000μg，诸如150μg至800μg、150-900μg、125μg至950μg或150μg至850μg的量进一步包含脂质化CpG寡核苷酸。例如，有效量的脂质体可以以每剂50μg、100μg、150μg、200μg、250μg、300μg、350μg、400μg、450μg、500μg、550μg、600μg、650μg、700μg、750μg、800μg、850μg、900μg、950μg、1000μg、1050μg、1100μg、1200μg、或1250μg的量包含脂质化CpG寡核苷酸。

根据本申请的实施方案，脂质化CpG寡核苷酸是包含SEQ ID NO:18-22之一的核苷酸序列的CpG寡核苷酸，优选地，脂质化CpG寡核苷酸是包含SEQ ID NO:18的核苷酸序列的CpG寡核苷酸。根据本申请的实施方案，脂质化CpG寡核苷酸是包含SEQ ID NO:18的核苷酸序列的CpG寡核苷酸，其具有一个或多个硫代磷酸酯核苷酸间键并经由包含聚乙二醇(PEG)的接头与胆固醇共价连接。

根据实施方案，有效量的脂质体包含每剂50μg、100μg、150μg、200μg、250μg、300μg、350μg、400μg、450μg、500μg、550μg、600μg、650μg、700μg、750μg、800μg、850μg、900μg、950μg、1000μg、1050μg、1100μg、1200μg、或1250μg的经由PEG接头与胆固醇共价连接的CpG寡核苷酸。

如本文所用，“持续免疫反应”或“可持续免疫反应”是指在初始施用有效量的脂质体后持续至少六周的免疫反应。根据本申请的实施方案，“持续免疫反应”是持续至少六周、至少12周、至少24周、至少36周、至少48周、至少60周、至少72周或更长的持续抗体反应，并且抗体反应可以通过抗磷酸化Tau IgG、抗磷酸化Tau IgM或抗ePHF的存在来表征。抗磷酸化Tau IgG、抗磷酸化Tau IgM和抗ePHF可以通过本领域技术人员已知的任何方法(包括本文中描述的那些)来检测和测量。

如本文所用，“持续……的抗体反应”是指在初始施用有效量的脂质体后的指定时间段期间，维持在等于或高于限定的阈值水平的水平的抗体反应，并且限定的阈值水平高于在初始施用有效量的脂质体之前测量的基线水平。在一些实施方案中，基于初始施用前抗体滴度的平均测量水平来确定基线水平，优选进行两次测量。在一个实施方案中，抗体反应包括针对pTau的特异性IgG抗体反应，并且限定的阈值水平是基线水平的至少1.5倍或更多倍，诸如基线水平的至少1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0倍或更多倍。在另一实施方案中，抗体反应包括针对ePHF的IgG免疫反应，并且限定的阈值水平是基线水平的至少2.0倍或更多倍，诸如基线水平的至少2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5倍或更多倍。

根据特定实施方案，人受试者需要治疗神经退行性疾病、病症或状况。

如本文所用，“神经退行性疾病、病症或状况”包括本领域技术人员鉴于本公开已知的任何神经退行性疾病、病症或状况。神经退行性疾病、病症或状况的实例包括由神经原纤维病变的形成引起或与之相关的神经退行性疾病或病症，诸如Tau相关疾病、病症或状况，其称为Tau蛋白病。根据特定实施方案，神经退行性疾病、病症或状况包括显示出Tau与淀粉样蛋白病理的共存的任何疾病或病症，包括但不限于阿尔茨海默病、帕金森病、克-雅二氏病、拳击员痴呆、唐氏综合征、病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、外伤性脑损伤、肌萎缩性侧索硬化、关岛震颤麻痹痴呆综合征、伴有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元病、嗜银颗粒痴呆、皮质基底节变性、痴呆路易氏肌萎缩性侧索硬化、伴有钙化的弥漫性神经原纤维缠结、额颞痴呆，优选17号染色体连锁伴随帕金森综合征的额颞痴呆(FTDP-17)、额颞叶痴呆、哈-斯二氏病、多系统萎缩、C型尼曼-匹克症、匹克病、进行性皮质下胶质增生、进行性核上性麻痹、亚急性硬化性全脑炎、仅有缠结性痴呆、脑炎后帕金森综合征、肌强直性营养不良、慢性创伤性脑病(CTE)、原发性年龄相关性Tau蛋白病(PART)、脑血管病或路易体痴呆(LBD)。根据特定实施方案，神经退行性疾病、病症或状况是阿尔茨海默病或另一种Tau蛋白病。根据优选的实施方案，神经退行性疾病、病症或状况是阿尔茨海默病。

阿尔茨海默病的临床过程可以分成数个阶段，具有认知和功能损伤的进行性模式。可以使用本领域已知的分级量表(包括例如NIA-AA研究框架)来定义阶段。参见例如Dubois等人,Alzheimer’s&Dementia 12(2016)292-323；Dubois等人,Lancet Neurol2014；13:614–29；Jack等人,Alzheimer’s&Dementia 14(2018)535-562，其各自的内容通过引用全文并入本文。

根据优选的实施方案，神经退行性疾病、病症或状况是早期阿尔茨海默病、由阿尔茨海默病引起的轻度认知障碍(MCI)、轻度阿尔茨海默病、或轻度至中度阿尔茨海默病。

在一些实施方案中，需要治疗的受试者的脑中呈淀粉样蛋白阳性，但尚未显示出显著的认知障碍。可以使用本领域中已知的方法(诸如PET扫描、免疫沉淀质谱法或其他方法)检测脑中的淀粉样蛋白沉积。

如本文中所用，术语“toll样受体”或“TLR”是指在先天免疫反应中起关键作用的一类模式识别受体(PRR)蛋白。TLR识别来自微生物病原体(诸如细菌、真菌、寄生物和病毒)的病原体相关分子模式(PAMP)，可将其与宿主分子区分开。TLR是跨膜蛋白，其通常作为二聚体起作用，并由参与先天免疫反应的细胞(包括抗原呈递树突细胞和吞噬性巨噬细胞)来表达。存在至少十个人TLR家族成员(TLR1至TLR10)以及至少十二个鼠TLR家族成员(TLR1至TLR9和TLR11至TLR13)，并且它们的不同之处在于它们识别的抗原类型。例如，TLR4识别脂多糖(LPS)(其为存在于许多革兰氏阴性细菌中的组分)以及病毒蛋白、多糖和内源性蛋白，诸如低密度脂蛋白、β-防御素和热休克蛋白；并且TLR9是一种核苷酸感应TLR，其由未甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)单链或双链二核苷酸激活，所述二核苷酸富含在原核生物基因组中，但在脊椎动物基因组中罕见。TLR的激活导致一系列信号传导事件，导致I型干扰素(IFN)、炎性细胞因子和趋化因子的产生，以及免疫反应的诱导。最终，这种炎症还激活适应性免疫系统，这随后导致入侵的病原体和受感染细胞的清除。

如本文中所用，术语“激动剂”是指与一种或多种TLR结合并诱导受体介导的反应的分子。例如，激动剂可以诱导、刺激、提高、激活、促进、增强或上调受体的活性。此类活性被称为“激动性活性”。例如，TLR4或TLR9激动剂可以通过结合的受体来激活或提高细胞信号传导。激动剂包括但不限于核酸、小分子、蛋白、碳水化合物、脂质或与受体结合或相互作用的任何其他分子。激动剂可以模拟天然受体配体的活性。激动剂在序列、构象、电荷或其他特征方面可以与这些天然受体配体同源，使得它们可以被受体识别。这种识别可导致细胞内的生理和/或生物化学变化，使得细胞以与天然受体配体存在时相同的方式对激动剂的存在作出反应。根据特定实施方案，toll样受体激动剂是toll样受体4激动剂和toll样受体9激动剂中的至少一种。

如本文中所用，术语“诱导”和“刺激”及其变型是指细胞活性的任何可测量的提高。免疫反应的诱导可包括例如免疫细胞群体的活化、增殖或成熟、增加细胞因子和/或提高的免疫功能的另一指标的产生。在某些实施方案中，免疫反应的诱导可包括增加B细胞的增殖、产生抗原特异性抗体、增加抗原特异性T细胞的增殖、改善树突细胞抗原呈递和/或增加某些细胞因子、趋化因子和共刺激标志物的表达。

如本文中所用，术语“toll样受体4激动剂”是指充当TLR4的激动剂的任何化合物。鉴于本公开，本领域技术人员已知的任何合适的toll样受体4激动剂均可用于本发明。可用于本发明的toll样受体4配体的实例包括TLR4激动剂，其包括但不限于单磷酰基脂质A(MPLA)。如本文中所用，术语“单磷酰基脂质A”或“MPLA”是指脂质A的修饰形式，其是革兰氏阴性细菌脂多糖(LPS)内毒素的生物活性部分。MPLA的毒性低于LPS，同时维持免疫刺激活性。作为疫苗佐剂，MPLA刺激对疫苗抗原的细胞和体液反应两者。MPLA的实例包括但不限于3-O-脱酰基-4’-单磷酰基脂质A、3-脱酰基单磷酰基六酰基脂质A(合成的)(也称为3D-(6-酰基))、单磷酰基3-脱酰基脂质A及其结构相关变体。可用于本发明的MPLA可使用本领域已知的方法或从商业来源获得，诸如来自Avanti Polar Lipids(Alabaster,Alabama,USA)的3D-(6-酰基) 或来自各种商业来源的MPL^TM。根据特定实施方案，toll样受体4激动剂是MPLA。

根据特定实施方案，包含Tau磷酸肽和toll样受体4激动剂的脂质体还包含能够结合大多数或所有HLA DR(人白细胞抗原-抗原D相关)分子的辅助性T细胞表位。辅助性T细胞表位随后能够激活CD4⁺T细胞并向Tau特异性B细胞提供必要的成熟和存活信号。Tau脂质体可用于在同源或异源免疫方案中产生针对pTau抗原的高品质抗体，其中脂质体用于初免和/或加强。

如本文中所用，术语“辅助性T细胞表位”是指包含能够被辅助性T细胞识别的表位的多肽。辅助性T细胞表位的实例包括但不限于破伤风类毒素(例如P2和P30表位，也分别称为T2和T30)、乙型肝炎表面抗原、霍乱毒素B、白喉类毒素、麻疹病毒F蛋白、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)主要外膜蛋白、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)环子孢子T、恶性疟原虫CS抗原、曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)磷酸丙糖异构酶、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、粗果鸡皮衣(Pertusaria trachythallina)、大肠杆菌TraT和流感病毒血凝素(HA)。

鉴于本公开，本领域技术人员已知的任何合适的辅助性T细胞表位均可用于本发明。根据特定实施方案，辅助性T细胞表位包含至少一种选自SEQ ID NO:23至SEQ ID NO:26的氨基酸序列。优选地，辅助性T细胞表位包含经由接头融合在一起的SEQ ID NO:23至SEQID NO:26的氨基酸序列中的两种或更多种，所述接头诸如包含一个或多个氨基酸，例如Val(V)、Ala(A)、Arg(R)、Gly(G)、Ser(S)、Lys(K)的肽接头。接头的长度可以不等，优选为1-5个氨基酸。优选地，辅助性T细胞表位包含经由一个或多个选自VVR、GS、RR、RK的接头融合在一起的SEQ ID NO:23至SEQ ID NO:26的氨基酸序列中的三种或更多种。辅助性T细胞表位的C末端可酰胺化。

根据本申请的实施方案，辅助性T细胞表位可以并入到脂质体表面上，例如通过共价结合的疏水性部分锚定，其中所述疏水性部分是烷基、脂肪酸、甘油三酯、甘油二酯、类固醇、鞘脂、糖脂或磷脂，特别是烷基或脂肪酸，其特别具有至少3个碳原子，特别是至少4个碳原子、特别是至少6个碳原子、特别是至少8个碳原子、特别是至少12个碳原子、特别是至少16个碳原子的碳主链。在本发明的一个实施方案中，疏水性部分是棕榈酸。备选地，辅助性T细胞表位可以包封在脂质体中。根据特定实施方案，辅助性T细胞表位包封在脂质体中。

鉴于本公开，可以使用本领域已知的方法来修饰辅助性T细胞表位在脂质体中的所需位置。根据特定实施方案，可用于本发明的辅助性T细胞表位包含SEQ ID NO:39至SEQID NO:44之一的氨基酸序列。优选地，辅助性T细胞表位由选自SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:17的氨基酸序列组成。

根据特定实施方案，包含Tau磷酸肽和toll样受体4激动剂的脂质体还包含toll样受体9激动剂。如本文中所用，术语“toll样受体9激动剂”是指充当TLR9的激动剂的任何化合物。鉴于本公开，本领域技术人员已知的任何合适的toll样受体9激动剂均可用于本发明。可用于本发明的toll样受体9配体的实例包括TLR9激动剂，其包括但不限于CpG寡核苷酸。

如本文中所用，术语“CpG寡核苷酸”、“CpG寡脱氧核苷酸”或“CpG ODN”是指包含至少一个CpG基序的寡核苷酸。如本文中所用，“寡核苷酸”、“寡脱氧核苷酸”或“ODN”是指由多个连接的核苷酸单元形成的多核苷酸。此类寡核苷酸可以获自现有核酸来源，或者可以通过合成方法产生。如本文中所用，术语“CpG基序”是指含有通过磷酸键或磷酸二酯主链或其他核苷酸间键连接的未甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)二核苷酸(即胞嘧啶(C)接着是鸟嘌呤(G))的核苷酸序列。

根据特定实施方案，CpG寡核苷酸是脂质化的，即与脂质部分缀合(共价连接)。

如本文中所用，“脂质部分”是指含有亲脂性结构的部分。脂质部分(诸如烷基、脂肪酸、甘油三酯、甘油二酯、类固醇、鞘脂、糖脂或磷脂，特别是甾醇(诸如胆固醇)或脂肪酸)，当附接于高度亲水性分子(诸如核酸)时，可以大大增强血浆蛋白结合，并因此提高亲水性分子的循环半衰期。此外，已经显示与某些血浆蛋白(诸如脂蛋白)的结合提高在表达相应脂蛋白受体(例如LDL受体、HDL受体或清道夫受体SR-B1)的特定组织中的摄取。特别地，与磷酸肽和/或CpG寡核苷酸缀合的脂质部分允许经由疏水性部分将所述肽和/或寡核苷酸锚定到脂质体的膜中。

根据特定实施方案，鉴于本公开，CpG寡核苷酸可包含任何合适的核苷酸间键。

如本文中所用，术语“核苷酸间键”是指通过两个核苷酸的糖连接两个核苷酸的化学键，其由磷原子和相邻核苷之间的带电或中性基团组成。核苷酸间键的实例包括磷酸二酯(po)、硫代磷酸酯(ps)、二硫代磷酸酯(ps2)、甲基膦酸酯(mp)和甲基硫代磷酸酯(rp)。硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯和甲基硫代磷酸酯是稳定性核苷酸间键，而磷酸二酯是天然存在的核苷酸间键。寡核苷酸硫代磷酸酯通常被合成为Rp和Sp硫代磷酸酯键的随机外消旋混合物。

鉴于本公开，本领域技术人员已知的任何合适的CpG寡核苷酸均可用于本发明。此类CpG寡核苷酸的实例包括但不限于CpG2006(也称为CpG7909)(SEQ ID NO:18)、CpG1018(SEQ ID NO:19)、CpG2395(SEQ ID NO:20)、CpG2216(SEQ ID NO:21)或CpG2336(SEQ IDNO:22)。

鉴于本公开，可以使用本领域中已知的方法将CpG寡核苷酸脂质化。在一些实施方案中，CpG寡核苷酸与胆固醇分子直接共价连接。在一些实施方案中，CpG寡核苷酸的3’末端通过磷酸键，任选经由PEG接头与胆固醇分子共价连接。在一些实施方案中，CpG寡核苷酸的5’末端通过磷酸键，任选经由PEG接头与胆固醇分子共价连接。其他亲脂性部分也可以与CpG寡核苷酸的5’或3’末端共价连接。例如，CpG寡核苷酸可以任选经由PEG接头与长度与来自脂质体的磷脂相同的脂质锚共价连接，所述脂质锚为：一条棕榈酸链(使用Pal-OH或类似物，其被激活用于连接)或两个棕榈酸(例如使用1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(琥珀酰基)或类似物，其被激活用于连接)。参见例如美国专利号7,741,297(其内容通过引用并入本文)中的相关公开内容。PEG的长度可以例如从1至5个PEG单元变化。

其他接头也可用于将CpG寡核苷酸与亲脂性部分(诸如胆固醇分子)共价连接，其实例包括但不限于具有3至12个碳的烷基间隔子。需要与寡核苷酸化学相容的短接头作为氨基二醇。在一些实施方案中，未使用用于共价键合的接头。参见例如Ries等人,“Convenient synthesis and application of versatile nucleic acid lipidmembrane anchors in the assembly and fusion of liposomes”,Org.Biomol.Chem.,2015,13,9673，其相关公开内容通过引用并入本文。

根据特定实施方案，可用于本发明的脂质化CpG寡核苷酸包含选自SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:22的核苷酸序列，其中核苷酸序列包含一个或多个硫代磷酸酯核苷酸间键，并且核苷酸序列经由接头与至少一个胆固醇共价连接。根据优选的实施方案，脂质化CpG寡核苷酸包含SEQ ID NO:18的核苷酸序列，具有一个或多个硫代磷酸酯核苷酸间键，并且与胆固醇共价连接。可以使用任何合适的接头来将CpG寡核苷酸与胆固醇分子共价连接。优选地，接头包含聚乙二醇(PEG)。

根据特定实施方案，脂质体进一步包含一种或多种选自1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酰基-3’-rac-甘油(DMPG)和胆固醇的脂质。

根据特定实施方案，脂质体进一步包含缓冲液。鉴于本公开，本领域技术人员已知的任何合适的缓冲液均可用于本发明。在一个实施方案中，脂质体包含磷酸盐缓冲盐水。根据特定实施方案，缓冲液包含组氨酸和蔗糖。

本发明中使用的示例性脂质体包含Tau四棕榈酰化磷酸肽(pTau肽T3，SEQ ID NO:28)，其经由在Tau肽的每个末端处的两个棕榈酸呈递在脂质体的表面上；TLR-9配体，其包含经由胆固醇分子并入脂质体膜中的脂质化CpG(佐剂CpG7909(CpG2006)；SEQ ID NO:18)，所述胆固醇分子经由PEG接头与CpG共价连接；并入膜中的TLR-4配体(单磷酰基脂质A(例如3D-(6-酰基)))；包封的辅助性T细胞表位(PAN-DR结合剂T50；SEQ ID NO:13)；和作为脂质体的脂质组分的1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-[磷酸-rac-(1-甘油)]钠盐(DMPG)和胆固醇。

鉴于本公开，可以使用本领域中已知的方法制造本发明的脂质体。鉴于本公开，可以通过本领域技术人员已知的技术确定脂质体的每种组分的最佳比率。

脂质体可以通过合适的方式施用以进行预防性和/或治疗性处理。根据优选的实施方案，脂质体通过皮下或肌内注射进行施用。肌内注射最通常在手臂或腿部肌肉中进行。

在一个一般方面，本发明涉及包含治疗有效量的脂质体以及药学上可接受的赋形剂和/或载体的药物组合物。药学上可接受的赋形剂和/或载体在本领域中是公知的(参见Remington’s Pharmaceutical Science(第15版),Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1980)。药物组合物的优选制剂取决于预期的施用模式和治疗应用。组合物可以包括药学上可接受的、无毒的载体或稀释剂，其被定义为通常用于配制用于动物或人施用的药物组合物的媒介物。对稀释剂进行选择以免影响组合的生物学活性。此类稀释剂的实例是蒸馏水、生理磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和Hank’s溶液。此外，药物组合物或制剂还可包括其他载体、佐剂或无毒、非治疗性、非免疫原性的稳定剂等。应当理解的是，载体、赋形剂或稀释剂的特性将取决于用于特定应用的施用途径。

疫苗的靶抗原位于脑中，并且脑通过称为血脑屏障(BBB)的特化细胞结构与循环分隔。BBB限制物质从循环进入脑中。这防止了毒素、微生物等进入中枢神经系统。BBB还具有阻止免疫介体(诸如抗体)有效进入围绕脑的间质和脑脊液中的潜在不太合意的作用。

存在于体循环中的抗体的大约0.1％穿过BBB并进入脑。这表明由靶向CNS抗原的疫苗诱导的全身滴度必须为在脑中有效的最小有效滴度的至少1000倍。触发效力所需的血清中抗体的最小滴度并非显而易见。此外，对于安全和有效的靶向CNS病症(诸如神经退行性疾病、病症或状况)的免疫疗法，不仅必须考虑免疫反应的数量，而且还必须考虑免疫反应的质量(例如亲合力)。

鉴于本公开，可以使用本领域中已知的方法通过亲合力指数测量抗体的亲合力。在以下两种不同浓度的包被抗原下测量针对特定抗原的抗体的滴度：一种是饱和浓度，其中所有抗体均可与抗原结合，而另一种是低浓度，其中只有具有最高结合能力的抗体可以与抗原结合。如本文中所用，“亲合力指数”是指在抗原的低密度和高密度包被下测量的抗体滴度水平的比率。例如，可在免疫之后的不同时间点或在不同的免疫之后测量抗体针对抗原(诸如ePHF或pTau)的亲合力，以评估亲合力(如通过亲合力指数测量的)是否随着时间推移而提高。如本文中所用，对抗原具有“提高的亲合力”或“提高的结合亲合力”的抗体是指在治疗或免疫过程期间，对抗原具有随着时间推移而提高的亲合力指数的抗体。提高的亲合力表明抗体的潜在亲和力成熟。

根据特定实施方案，本发明的药物组合物因此进一步包含一种或多种合适的佐剂以在受试者中实现所需免疫反应。合适的佐剂可以在施用脂质体之前、之后或与其同时施用。优选的佐剂增强对免疫原的固有反应而不引起影响该反应的定性形式的免疫原的构象变化。佐剂的实例是铝盐(矾)，诸如氢氧化铝、磷酸铝和硫酸铝。此类佐剂可以与其他特定免疫刺激剂一起使用或不与其他特定免疫刺激剂一起使用，所述免疫刺激剂诸如MPLA类别(3脱-O-酰化单磷酰基脂质A(MPL^TM)、合成的3-脱酰基单磷酰基六-酰基脂质A(3D-(6-酰基)PHAD^TM、)脂质A)、聚合或单体氨基酸，诸如聚谷氨酸或聚赖氨酸。此类佐剂可以与其他特定免疫刺激剂一起使用或不与其他特定免疫刺激剂一起使用，所述免疫刺激剂诸如胞壁酰肽(例如N-乙酰胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰基-正胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺(nor-MDP)、N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺酰-L-丙氨酸-2-(1’-2’二棕榈酰-sn-甘油基-3-羟基磷酰氧基)-乙胺(MTP-PE)、N-乙酰葡糖胺基-N-乙酰胞壁酰-L-Al-D-异谷氨酸-L-丙氨酸-二棕榈氧基丙基酰胺(DTP-DPP)Theramide^TM)或其他细菌细胞壁组分。水包油乳液包括MF59(参见WO90/14837)，其含有5％角鲨烯、0.5％ Tween 80和0.5％ Span 85(任选含有各种量的MTP-PE)，使用微流化器配制成亚微米颗粒；SAF，其含有10％角鲨烯、0.4％ Tween 80、5％普朗尼克-嵌段聚合物L121和thr-MDP，被微流化为亚微米乳液或涡旋以产生较大粒度的乳液；和Ribi^TM佐剂系统(RAS)(Ribi ImmunoChem,Hamilton,Mont.)0.2％Tween 80和一种或多种选自单磷酰基脂质A(MPL^TM)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和细胞壁骨架(CWS)的细菌细胞壁组分，优选MPL^TM+CWS(Detox^TM)。其他佐剂包括完全弗氏佐剂(CFA)和细胞因子，诸如白介素(IL-1、IL-2和IL-12)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和肿瘤坏死因子(TNF)。

在向受试者施用两种或更多种疗法的背景下，如本文中所用，术语“组合”是指使用多于一种疗法。术语“组合”的使用不限制向受试者施用疗法的顺序。例如，可以在向受试者施用第二疗法之前(例如之前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同时或之后(例如之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)施用第一疗法(例如本文中描述的组合物)。在本发明的一些实施方案中，根据本发明的药物组合物可以与生物活性物质组合使用，所述生物活性物质诸如用于药物治疗tau蛋白病和/或淀粉样变性的已知化合物，所述淀粉样变性是一组与淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白(诸如阿尔茨海默病中涉及的淀粉样蛋白β蛋白)相关的疾病和病症。其他生物活性化合物可以包括中子透射增强剂、精神神经疾病治疗药、乙酰胆碱酯酶抑制剂、钙通道阻断剂、生物胺、苯二氮类镇静剂、乙酰胆碱合成、储存或释放增强剂、乙酰胆碱突触后受体激动剂、单胺氧化酶A或单胺氧化酶B抑制剂、N-甲基-O-天冬氨酸谷氨酸受体拮抗剂、非甾体抗炎药、抗氧化剂和血清素能受体拮抗剂。特别地，其他生物活性化合物可以选自与根据本发明的治疗性疫苗和任选的药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂一起的针对氧化应激的化合物、抗凋亡化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂，诸如哌仑西平和代谢物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1,3-丙二磺酸盐(1,3PDS)、分泌酶激活剂和v-分泌酶抑制剂、tau蛋白、神经递质、β-折叠形成阻断剂(β-sheet breaker)、抗炎分子或胆碱酯酶抑制剂(ChEl)，诸如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐和/或加兰他敏以及其他药物和营养补充剂。在一个进一步的实施方案中，其他生物活性化合物可以包含与根据本发明的脂质体和任选的药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂一起的烟酸或美金刚。在本发明的再一实施方案中，其他化合物包括与本发明的脂质体一起的“非典型抗精神病药”，诸如氯氮平、齐拉西酮、利培酮、阿立哌唑或奥氮平，其用于治疗阳性和阴性精神病症状，包括幻觉、妄想、思维障碍(表现为明显的不连贯、脱轨、言不及义)和怪异或紊乱的行为以及快感缺乏、情绪淡然、冷漠和社交退缩。可以与根据本发明的药物组合物合适地组合使用的其他化合物描述在例如WO2004/058258(尤其参见第16和17页)中，包括治疗性药物靶标(第36-39页)、链烷磺酸和烷醇硫酸(第39-51页)、胆碱酯酶抑制剂(第51-56页)、NMDA受体拮抗剂(第56-58页)、雌激素(第58-59页)、非甾体抗炎药(第60-61页)、抗氧化剂(第61-62页)、过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)激动剂(第63-67页)、降胆固醇剂(第68-75页)；淀粉样蛋白抑制剂(第75-77页)、淀粉样蛋白形成抑制剂(第77-78页)、金属螯合剂(第78-79页)、抗精神病药和抗抑郁药(第80-82页)、营养补充剂(第83-89页)和提高脑中生物活性物质可用性的化合物(参见第89-93页)和前药(第93和94页)，该文献通过引用并入本文，但尤其是上述页中提及的化合物。

施用的时机可以从每天一次到每年一次，到每十年一次显著变化。典型的方案由以下组成：免疫，随后以时间间隔(诸如1至24周间隔)进行加强注射。另一方案由以下组成：免疫，随后在1、2、4、6、8、10和12个月后进行加强注射。另一方案需要终生每两个月注射一次。备选地，如通过监测免疫反应所指示，加强注射可以是不定期的。

本领域技术人员容易理解的是，可以基于施用后测量的免疫反应来调整初免和加强施用的方案。例如，加强组合物通常在施用初免组合物后数周或数月(例如约1周、或2周、或3周、或4周、或8周、或16周、或20周、或24周、或28周、或32周、或36周、或40周、或44周、或48周、或52周、或56周、或60周、或64周、或68周、或72周、或76周)或在施用初免组合物后一至两年施用。

根据特定方面，可以施用一次或多次加强免疫。各个初免组合物和加强组合物中的抗原(无论采用多少加强组合物)不必相同，但应当共享抗原决定簇或彼此实质上相似。

如本领域技术人员已知的，免疫原性、可加强性和可持续性是疫苗有效性的重要考虑因素。在本发明中发现，施用有效量的本文中描述的脂质体能够在有需要的患者中诱导针对pTau的有效抗体反应，所述患者诸如需要治疗阿尔茨海默病(例如轻度至中度阿尔茨海默病或早期阿尔茨海默病)或由阿尔茨海默病引起的轻度认知障碍(MCI)的患者。该抗体反应是可持续的，例如在初始施用脂质体后持续至少6周。该抗体反应也通过一次或多次后续加强施用来加强。在抗体反应的背景下，如本文中所用，“加强”是指如在后续施用的施用后至少两周所测量的，在后续施用后维持或增强的抗体反应。例如，如果与后续施用前的抗体滴度相比，在后续施用后2周测量时抗体滴度提高，则抗体反应被后续施用“加强”。

鉴于本公开，本发明的药物组合物可以根据本领域中已知的方法来配制。鉴于本公开，可以通过本领域技术人员已知的技术确定组合物中每种组分的最佳比率。

在本发明的一个优选实施方案中，经由施用根据本发明的一个实施方案的药物组合物施用Tau肽在受试者中诱导活性免疫反应，诸如对Tau肽和对Tau的病理形式的抗体反应，由此促进相关Tau聚集体的清除，减慢Tau病理相关行为的进展和/或治疗潜在的Tau蛋白病。

Tau是人“自身”蛋白。这意味着，原则上，所有携带tau特异性受体的淋巴细胞都应当在发育期间被删除(中枢耐受)或被外周耐受机制导致无反应。该问题已证明是开发针对自身或“改变的自身”蛋白(例如肿瘤抗原)的疫苗的重大障碍。产生针对抗原(自身或感染性)的高品质抗体不仅需要产生抗体的B淋巴细胞的作用，而且还需要CD4⁺T“辅助性”淋巴细胞的作用。CD4⁺T细胞为B淋巴细胞提供了关键的存活和成熟信号，并且CD4⁺T细胞缺陷动物受到严重的免疫抑制。CD4⁺T-细胞也受耐受机制的影响，并且产生强抗自身(例如抗Tau)抗体反应的另一障碍是tau反应性CD4⁺T细胞也可能在人/动物库中为罕见至不存在的。

根据本发明的这一方面，免疫反应涉及发展针对Tau肽的有益体液(抗体介导的)反应和针对T细胞表位或免疫原性载体的细胞(由抗原特异性T细胞或其分泌产物介导的)反应。

如本文中所用，Tau病理相关的行为表型包括但不限于认知障碍、早期人格改变和去抑制、冷漠、意志力丧失、缄默症、失用症、持续言语、刻板动作/行为、口欲亢进(hyperorality)、混乱、不能计划或组织连续任务、自私/冷酷无情、反社会特征、缺乏同理心、犹豫不决、言语错乱频繁但相对保留理解力的语法缺失言语、理解力受损和找词缺陷、缓慢进行性步态不稳、后退、僵硬、频繁跌倒、非左旋多巴反应性轴向强直、核上性凝视麻痹、方波急跳、缓慢的垂直扫视、假性延髓麻痹、肢体失用、肌张力障碍、皮质感觉丧失和震颤。

在实施本发明的方法时，根据本发明的特定实施方案，优选选择患有阿尔茨海默病或其他Tau蛋白病或处于患有阿尔茨海默病或其他Tau蛋白病的风险中的受试者、在脑中具有Tau聚集体的受试者或在施用本发明的免疫原性肽或抗体之前表现出缠结相关行为表型的受试者。适于治疗的受试者包括处于疾病的风险中但未显示出症状的个体以及目前显示出症状的患者。在阿尔茨海默病的情况下，实际上任何人都处于患有阿尔茨海默病的风险中。因此，本方法可以预防性地施用于一般群体而无需对受试者患者的风险进行任何评估。对于具有阿尔茨海默病的已知遗传风险的个体，本方法尤其有用于预防或治疗该疾病。此类个体包括具有已经经历该疾病的亲戚的那些，以及其风险通过遗传或生物化学标志物分析确定的那些。在优选的实施方案中，受试者需要治疗阿尔茨海默病，优选早期阿尔茨海默病、由阿尔茨海默病引起的轻度认知障碍(MCI)、轻度阿尔茨海默病、或轻度至中度阿尔茨海默病。在另外的优选的实施方案中，受试者需要预防阿尔茨海默病，优选临床前阿尔茨海默病、早期阿尔茨海默病、由阿尔茨海默病引起的轻度认知障碍(MCI)、轻度阿尔茨海默病、或轻度至中度阿尔茨海默病。临床前阿尔茨海默病是早期阿尔茨海默病之前的阶段。

在无症状患者中，治疗可以在任何年龄(例如10、20、30岁)开始。然后，通常直到患者达到40、50、60或70岁才有必要开始治疗。治疗通常需要在一段时间内的多次给药。治疗可以通过测定随时间推移抗体、或活化的T-细胞或B-细胞对治疗剂的反应来监测。如果反应降低，则指示加强剂量。

在预防性应用中，将含有Tau肽的药物组合物以足以消除或降低阿尔茨海默病或其他Tau蛋白病(包括该疾病的生物化学、组织学和/或行为症状、其并发症和在该疾病发展期间呈现的中间病理表型)的风险、减轻其严重程度或延迟其发作的量施用于易患阿尔茨海默病或其他Tau蛋白病或以其他方式处于阿尔茨海默病或其他Tau蛋白病的风险中的患者。在治疗性应用中，将含有Tau肽的药物组合物以足以治愈或至少部分阻止此类疾病的症状(生物化学、组织学和/或行为)(包括其并发症和疾病发展中的中间病理表型)的量施用于怀疑患有或已经患有此类疾病的患者。

如果需要的话，组合物可以以试剂盒、包装或分配器呈现，所述试剂盒、包装或分配器可以含有一种或多种含有活性成分的单位剂型。例如，试剂盒可以包含金属或塑料薄片，诸如泡罩包装。试剂盒、包装或分配器可以附有施用说明书。

实施方案

本发明还提供了以下非限制性实施方案。

实施方案1.在有需要的人受试者中诱导免疫反应，诸如针对磷酸化Tau蛋白(pTau)的抗体反应的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的脂质体，所述脂质体包含：

(1)由SEQ ID NO:27至SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:31至SEQ ID NO:38的氨基酸序列组成的Tau磷酸肽，其量为每剂300μg至1800μg；

(2)包含单磷酰基脂质A的toll样受体4激动剂；

(3)具有选自SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23至SEQ ID NO:26和SEQID NO:39至SEQ ID NO:44的氨基酸序列的辅助性T细胞表位；和

其中：

Tau磷酸肽呈递在脂质体的表面上，且

在向人受试者初始施用有效量的脂质体后，抗体反应持续至少6周。

实施方案2.实施方案1的方法，其中有效量的脂质体包含：

(1)其量为每剂300μg至1800μg的由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成的Tau磷酸肽；

(2)其量为每剂100μg至585μg的toll样受体4激动剂；

(3)其量为每剂75μg至450μg的辅助性T细胞表位；和

(4)其量为每剂150μg至800μg的CpG寡核苷酸。

实施方案3.实施方案1或2的方法，其中有效量的脂质体包含每剂300μg、900μg或1800μg的Tau磷酸肽。

实施方案3a.实施方案1或2的方法，其中有效量的脂质体包含每剂300μg的Tau磷酸肽。

实施方案3b.实施方案1或2的方法，其中有效量的脂质体包含每剂900μg的Tau磷酸肽。

实施方案3c.实施方案1或2的方法，其中有效量的脂质体包含每剂1800μg的Tau磷酸肽。

实施方案4.实施方案1-3c任一项的方法，其中有效量的脂质体皮下施用。

实施方案5.实施方案1-3c任一项的方法，其中有效量的脂质体肌内施用。

实施方案6.实施方案1-5任一项的方法，其中CpG寡核苷酸具有一个或多个硫代磷酸酯核苷酸间键，并且CpG寡核苷酸任选经由PEG接头与至少一个亲脂性基团共价连接。

实施方案7.实施方案1-6任一项的方法，其中Tau磷酸肽由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成，toll样受体4激动剂包含3-脱酰基单磷酰基六酰基脂质A，辅助性T细胞表位包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，CpG寡核苷酸包含SEQ ID NO:18的核苷酸序列，且脂质体进一步包含至少一种选自1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酰基-3’-rac-甘油(DMPG)和胆固醇的脂质。

实施方案8.实施方案1-7任一项的方法，其中抗体反应具有针对病理性Tau蛋白的构象特异性，其在向人受试者初始施用有效量的脂质体后随着时间推移提高，优选其中抗体反应包含针对pTau的特异性IgG抗体反应，优选特异性IgG抗体反应具有为安慰剂对照的至少50、60、70、80、90、100或更多倍的抗pTau IgG滴度。

实施方案9.实施方案1-8任一项的方法，其中抗体反应诱导特异性IgM抗体反应向针对pTau的特异性IgG抗体反应的类别转换，伴随记忆构建的指示。

实施方案10.实施方案1-9任一项的方法，其中抗体反应包含相对于非磷酸化Tau蛋白优先识别pTau的IgG免疫反应，优选抗pTau IgG滴度与抗Tau IgG滴度的比率为至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70。

实施方案10a.实施方案1-10任一项的方法，其中针对pTau的IgG免疫反应随着时间推移维持。

实施方案10b.实施方案1-10a任一项的方法，其中针对非磷酸化Tau蛋白的IgG免疫反应随着时间推移变低。

实施方案11.实施方案1-10b任一项的方法，其中抗体反应包含针对富集成对螺旋丝(ePHF)的IgG免疫反应。

实施方案12.实施方案11的方法，其中IgG免疫反应具有为安慰剂对照的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多倍的抗ePHF IgG滴度。

实施方案12a.实施方案11或12的方法，其中IgG免疫反应朝向更强的对结合ePHF的偏好成熟，同时伴随地降低针对非磷酸化Tau的抗体滴度。

实施方案12b.实施方案11或12的方法，其中IgG免疫反应具有比针对非磷酸化Tau的IgG滴度更高的针对ePHF的IgG滴度。

实施方案13.实施方案11、12、12a或12b的方法，其中在初始施用有效量的脂质体后，抗ePHF IgG具有提高的对病理性ePHF Tau的结合亲合力至少6周、8周、10周、12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周或更长，优选抗ePHF IgG具有至少0.3、0.4、0.5、0.6或0.7的亲合力指数。

实施方案14.实施方案1-13任一项的方法，其进一步包括在初始施用有效量的脂质体后4至12周，诸如8周，向受试者施用第二剂量的有效量的脂质体。

实施方案14a.实施方案14的方法，其中对于初始施用和第二剂量中的每一种，有效量的脂质体包含每剂300μg的Tau磷酸肽，并且第二剂量在初始施用后8周施用于受试者。

实施方案14b.实施方案14的方法，其中对于初始施用和第二剂量中的每一种，有效量的脂质体包含每剂900μg的Tau磷酸肽，并且第二剂量在初始施用后8周施用于受试者。

实施方案14c.实施方案14的方法，其中对于初始施用和第二剂量中的每一种，有效量的脂质体包含每剂1800μg的Tau磷酸肽，并且第二剂量在初始施用后8周施用于受试者。

实施方案15.实施方案14-14c任一项的方法，其中在施用第二剂量的有效量的脂质体后，包含针对pTau的IgG免疫反应的抗体反应得到加强，优选如施用第二剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，抗体反应提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。

实施方案15a.实施方案15的方法，其中如施用第二剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，在施用第二剂量的有效量的脂质体后，抗ePHF IgG反应得到加强。

实施方案16.实施方案14-15a任一项的方法，其进一步包括在初始施用有效量的脂质体后20至28周，诸如24周，向受试者施用第三剂量的有效量的脂质体。

实施方案16a.实施方案16的方法，其中对于初始施用、第二剂量和第三剂量中的每一种，有效量的脂质体包含每剂300μg的Tau磷酸肽，并且第二剂量和第三剂量分别在初始施用后8周和24周施用于受试者。

实施方案16b.实施方案16的方法，其中对于初始施用、第二剂量和第三剂量中的每一种，有效量的脂质体包含每剂900μg的Tau磷酸肽，并且第二剂量和第三剂量分别在初始施用后8周和24周施用于受试者。

实施方案16c.实施方案16的方法，其中对于初始施用、第二剂量和第三剂量中的每一种，有效量的脂质体包含每剂1800μg的Tau磷酸肽，并且第二剂量和第三剂量分别在初始施用后8周和24周施用于受试者。

实施方案17.实施方案16-16c任一项的方法，其中在施用第三剂量的有效量的脂质体后，包含针对pTau的IgG免疫反应的抗体反应得到加强，优选如施用第三剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，抗体反应提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。

实施方案17a.实施方案17的方法，其中如施用第二剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，在施用第三剂量的有效量的脂质体后，抗ePHF IgG反应得到加强。

实施方案18.实施方案16-17a任一项的方法，其进一步包括在初始施用有效量的脂质体后44至52周，诸如48周，向受试者施用第四剂量的有效量的脂质体。

实施方案18a.实施方案18的方法，其中对于初始施用、第二剂量、第三剂量和第四剂量中的每一种，有效量的脂质体包含每剂300μg的Tau磷酸肽，并且第二、第三和第四剂量分别在初始施用后8周、24周和48周施用于受试者。

实施方案18b.实施方案18的方法，其中对于初始施用、第二剂量、第三剂量和第四剂量中的每一种，有效量的脂质体包含每剂900μg的Tau磷酸肽，并且第二、第三和第四剂量分别在初始施用后8周、24周和48周施用于受试者。

实施方案18c.实施方案18的方法，其中对于初始施用、第二剂量、第三剂量和第四剂量中的每一种，有效量的脂质体包含每剂1800μg的Tau磷酸肽，并且第二、第三和第四剂量分别在初始施用后8周、24周和48周施用于受试者。

实施方案19.实施方案18的方法，其中在施用第四剂量的有效量的脂质体后，包含针对pTau的IgG免疫反应的抗体反应得到加强，优选如施用第四剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，抗体反应提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。

实施方案19a.实施方案19的方法，其中如施用第二剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，在施用第四剂量的有效量的脂质体后，抗ePHF IgG反应得到加强。

实施方案20.在有需要的人受试者中诱导针对磷酸化Tau蛋白(pTau)的持续免疫反应的方法，该方法包括：

i.向受试者肌内施用包含有效量的脂质体的初免疫苗；和

ii.在施用初免疫苗后6-10周向受试者肌内施用包含有效量的脂质体的第一加强疫苗，其中：

持续免疫反应在施用初免疫苗后持续至少约20周；

脂质体包含：

(1)由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成的Tau磷酸肽，并且Tau磷酸肽呈递在脂质体的表面上；

(2)包含单磷酰基脂质A的toll样受体4激动剂；

(3)具有选自SEQ ID NO:23、24、25和26的氨基酸序列的辅助性T细胞表位；和

(4)具有选自SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:22的核苷酸序列的CpG寡核苷酸；并且

有效量的脂质体包含：

(1)其量为每剂300μg至1800μg的Tau磷酸肽；

(2)其量为每剂100μg至585μg的toll样受体4激动剂；

(3)其量为每剂75μg至550μg，诸如每剂75μg至450μg、80μg至540μg、82.5μg至535μg、85μg至530μg、87.5μg至525μg、或90μg至520μg的辅助性T细胞表位；和

(4)其量为每剂100μg至1000μg，诸如150-800μg、125μg至950μg、150μg至900μg、或150μg至850μg的CpG寡核苷酸。

实施方案20a.实施方案20的方法，其中辅助性T细胞表位具有选自SEQ ID NO:39、40、41、42和43的氨基酸序列。

实施方案20b.实施方案20的方法，其中辅助性T细胞表位具有选自SEQ ID NO:13、14、15、16、17和44的氨基酸序列。

实施方案20c.实施方案20-20b任一项的方法，其中脂质化CpG寡核苷酸具有SEQID NO:18的核苷酸序列，且CpG寡核苷酸经由接头与至少一个胆固醇共价连接。

实施方案20d.实施方案20-20c任一项的方法，其中第一加强疫苗在施用初免疫苗后8周施用，并且持续免疫反应在施用初免疫苗后持续至少约24周。

实施方案20e.实施方案20-20d任一项的方法，其进一步包括在施用初免疫苗后22-26周向受试者肌内施用包含有效量的脂质体的第二加强疫苗，并且持续免疫反应在施用初免疫苗后持续至少约36周。

实施方案20f.实施方案20e的方法，其中第二加强疫苗在施用初免疫苗后24周施用，并且持续免疫反应在施用初免疫苗后持续至少约48周。

实施方案20g.实施方案20e或20f的方法，其进一步包括在施用初免疫苗后45-50周向受试者肌内施用包含有效量的脂质体的第三加强疫苗，并且持续免疫反应在施用初免疫苗后持续至少约60周。

实施方案20h.实施方案20g的方法，其中第三加强疫苗在施用初免疫苗后48周施用，并且持续免疫反应在施用初免疫苗后持续至少约72周。

实施方案20i.实施方案20-20h任一项的方法，其中有效量的脂质体包含每剂300μg的Tau磷酸肽。

实施方案20j.实施方案20-20h任一项的方法，其中有效量的脂质体包含每剂900μg的Tau磷酸肽。

实施方案20k.实施方案20-20h任一项的方法，其中有效量的脂质体包含每剂1800μg的Tau磷酸肽。

实施方案20k1.实施方案20i-20k任一项的方法，其中有效量的脂质体包含每剂80μg至540μg的辅助性T细胞表位，和每剂125μg至950μg的CpG寡核苷酸。

实施方案20k2.实施方案20i-20k任一项的方法，其中有效量的脂质体包含每剂82.5μg至535μg的辅助性T细胞表位，和每剂125μg至950μg的CpG寡核苷酸。

实施方案20k3.实施方案20i-20k任一项的方法，其中有效量的脂质体包含每剂87.5μg至525μg的辅助性T细胞表位，和每剂150μg至900μg的CpG寡核苷酸。

实施方案20k4.实施方案20i-20k任一项的方法，其中有效量的脂质体包含每剂85μg至530μg的辅助性T细胞表位，和每剂150μg至900μg的CpG寡核苷酸。

实施方案20l.实施方案20-20k4任一项的方法，其中持续免疫反应包括相对于非磷酸化Tau蛋白优先识别pTau的IgG免疫反应，优选抗pTau IgG滴度与抗Tau IgG滴度的比率为至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70。

实施方案20m.实施方案20-20l任一项的方法，其中持续免疫反应包括针对富集成对螺旋丝(ePHF)的IgG免疫反应，所述IgG免疫反应具有为安慰剂对照的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多倍的抗ePHF IgG滴度。

实施方案21.实施方案1-20m任一项的方法，其中受试者需要清除Tau的聚集体。

实施方案22.实施方案1-21任一项的方法，其中受试者需要治疗阿尔茨海默病，诸如临床前阿尔茨海默病、轻度至中度阿尔茨海默病或早期阿尔茨海默病、由阿尔茨海默病引起的轻度认知障碍(MCI)。

实施方案23.实施方案1-21任一项的方法，其中受试者需要预防阿尔茨海默病，诸如临床前阿尔茨海默病、轻度至中度阿尔茨海默病或早期阿尔茨海默病、由阿尔茨海默病引起的轻度认知障碍(MCI)。

实施方案24.实施方案1-23任一项的方法，其中免疫反应包括特异性与包含磷酸化Ser396的表位结合的抗磷酸化Tau抗体。

实施方案25.实施方案24的方法，其中表位进一步包含磷酸化的Ser404。

实施例

本发明的以下实施例进一步说明本发明的性质。应当理解，以下实施例不限制本发明，并且本发明的范围由所附权利要求书确定。

除非另行说明，以下实施例中使用的实验方法均为普通方法。除非另行说明，以下实施方案中使用的试剂均购自普通试剂供应商。

在所有以下实施例中，ACI-35.030是根据本发明的实施方案的脂质体制剂，其含有具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的磷酸化Tau肽、MPLA(3D-(6-酰基))、DMPC、DMPG、胆固醇、SEQ ID NO:13的辅助性T细胞表位、经由PEG接头与胆固醇基团共价连接的CpG2006寡核苷酸和缓冲液，并且ACI-35是根据本发明的实施方案的脂质体制剂，其含有具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的磷酸化Tau肽、MPLA、DMPC、DMPG、胆固醇和缓冲液。

实施例1对ACI-35.030在人中的安全性和效力的临床研究

在欧洲的患有早期AD(由AD引起的轻度认知障碍(MCI)或轻度AD)的患者中进行的一项临床1b/2a期多中心、双盲、随机化、安慰剂对照研究(ACI-35-1802研究)中评估ACI-35.030疫苗(ACI-35.030)的安全性、耐受性和免疫原性。还参见clinicaltrials.gov的研究编号NCT04445831。研究设计的概述显示在图1中。

目的：在74周的时间范围内，在患有早期AD(例如由AD引起的轻度认知障碍(MCI)或轻度AD)的患者中评估最多达3个剂量的ACI-35.030的在患有早期AD的患者中的安全性和耐受性，以及针对Tau蛋白的异常形式的抗体反应的诱导，包括血清中的抗磷酸化Tau抗体(例如与抗pTau和ePHF Tau结合的抗磷酸化Tau抗体)的诱导。

次要目的：在74周的时间范围内，通过评估例如血清中针对Tau的IgG滴度的诱导和针对pTau和Tau的IgM滴度的诱导来进一步评估研究疫苗的免疫原性；以及评估由免疫引发的抗体的亲合力。

探索性目的：探索研究疫苗对AD进展的推定生物标志物(例如总Tau和pTau蛋白的血液和/或CSF浓度)的影响；探索研究疫苗对血液中T细胞活化的影响；探索研究疫苗对血液炎性细胞因子(例如IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ和TNF-α)的影响；探索研究疫苗对行为、认知和功能表现的影响，各自在74周的时间范围内。

方法：3个子群组各自由接受安慰剂或不同剂量的ACI-35.030(通过组合物中pTau肽T3的量(300μg、900μg或1800μg的四棕榈酰化磷酸肽pTau肽T3，SEQ ID NO:28)指代)的患者组成，所述安慰剂或不同剂量的ACI-35.030的接受分布在48周内(在第0、8、24和48周施用剂量)，随后为24周随访期。

将41名患者随机分入3个子群组以在每个子群组中接受ACI-35.030或安慰剂(活性物/安慰剂比为3:1)。肌内施用剂量。

对于所有研究患者，在每次给药后立即进行安全性评估，并在其后48至72小时通过电话呼叫进行安全性评估。在每个子群组中，根据现场主要研究者所述，一旦先前患者已进行了在48至72小时的安全性评估以证实不存在与研究疫苗相关的临床相关安全性问题，则对前4名患者进行首次给药。

在治疗期结束后，所有治疗的患者均有24周的随访期。在此期间，要求患者在最后一次施用后19周参加第一次随访，并在随访期(最后一次施用后26周)结束时参加最后一次随访。在整个研究中由独立数据安全监查委员会(Data and Safety Monitoring Board,DSMB)定期审查安全性数据来监测患者的安全性。

如下进行中期分析：

一旦其各自的子群组中的所有受试者已完成第4次访视(第10周)，即在第二次注射后2周，在群组1中进行的所有子群组中进行第一次中期分析。目的是审查ACI-35.030直到该时间点的安全性、耐受性和免疫原性数据。

一旦其各自的子群组中的所有受试者已完成第6次访视(第26周)，即在第三次注射后2周，在子群组1.1、1.2和1.3中进行第二次中期分析。目的是决定潜在地扩展群组1，以便在免疫原性、安全性和耐受性方面呈现最有利概况的剂量下收集另外的安全性/耐受性数据。

在治疗期结束时(即第4次注射后2周)进行第三次中期分析。目的是审查直到该时间点的安全性/耐受性和免疫原性数据，包括来自子群组扩展的患者的数据(如果适用的话)。可以包括生物标志物结果作为支持性探索性数据。将结果与随后获得的其他群组的结果进行比较，以便在所有研究群组中选择用于进一步临床开发的最佳策略。

在随访期结束时，即一旦所有群组1患者已完成第11次访视(第74周)，进行第四次中期分析。目标与第四次中期分析中的相同，并且随后在所有群组间比较结果。

研究群体为50-75岁(男性和女性)，根据NIA-AA标准诊断为轻度AD或由AD引起的MCI。

纳入标准如下：

1.年龄为从50岁并直至75岁(包含端值)的男性或女性。

2.根据NIA-AA标准的由AD引起的轻度认知障碍(MCI)或轻度AD，以及0.5或1的临床痴呆评级量表(CDR)总评分。

3.简易智力状态检查(MMSE)评分为22以上。

4.在筛选时CSF淀粉样蛋白β42(Aβ42)和磷酸化Tau的水平与AD病理学的NIA-AA2018标准一致。在CSF Aβ42水平的临界情况下，可以考虑其他结果来帮助确定淀粉样蛋白阳性，例如Aβ42/Aβ40比率，以及阳性淀粉样蛋白PET扫描或阳性CSF Aβ42水平的病史(根据个案情况而定)。来自在筛选前3个月内进行的CSF取样的结果根据个案情况而定是可接受的，条件是它们与淀粉样蛋白病理的存在一致，并且相应的CSF样品可以在研究中用于测试。

5.患者在基线前至少3个月未采用任何市售的AD治疗或接受稳定剂量的乙酰胆碱酯酶抑制剂和/或美金刚。

6.由可靠的信息提供者或护理人员照顾患者以确保依从性、协助临床评估和报告安全性问题。

7.女性必须为绝经至少一年和/或手术绝育。具有生育潜力或未绝经的女性在筛选时必须具有阴性妊娠测试，并愿意从筛选访视直至其参与结束采用高度有效的避孕方法。将在整个治疗期进行尿妊娠再测试以确定受试者是否可以继续接受研究疫苗。具有有生育潜力伴侣的男性患者必须愿意在研究期间采用适当的避孕措施。

8.研究者认为能够理解并提供书面知情同意书的患者。

9.患者和信息提供者或护理人员必须能流利使用研究语言之一，并能够遵守所有研究程序，包括腰椎穿刺。

排除标准如下：

1.参与使用主动免疫的AD和/或神经系统疾病的先前临床试验，除非有文件证明患者仅用安慰剂治疗且预期安慰剂制剂不会诱导任何特异性免疫反应。

2.在筛选前的过去6个月(或研究性抗体的5个半衰期，以较长者为准)内参与使用任何被动免疫的AD和/或神经系统疾病的先前临床试验，除非有文件证明受试者仅用安慰剂治疗且预期安慰剂不会诱导任何特异性免疫反应。

3.在筛选前的过去3个月内参与使用任何小分子药物(包括BACE-1抑制剂)的AD和/或神经系统疾病的先前临床试验。

4.同时参与任何其他使用实验性或批准的药物或疗法的临床试验。

5.在没有自身免疫疾病临床症状的患者中，在至少1/160的稀释度下存在阳性抗核抗体(ANA)滴度。

6.自身免疫疾病的当前或既往病史，或与自身免疫疾病的存在一致的临床症状。

7.免疫抑制，包括但不限于使用免疫抑制药物或全身性类固醇，除非它们是在筛选前超过3个月暂时开出处方的。

8.严重过敏反应(例如过敏症)史，包括但不限于对先前疫苗和/或药物的严重过敏反应。

9.先前的临床显著的低血糖发作史。

10.根据精神障碍诊断与统计手册第5版(Diagnostic and Statistical Manualof Mental Disorders-V,DSM-V)标准，当前满足或在过去五年内药物或酒精滥用或依赖。

11.可能干扰研究治疗的安全性和耐受性的评估和/或对完整研究访视时间表的遵守的任何临床显著的医学状况。

12.可能影响免疫系统和/或预期可能损害研究疫苗在患者中的免疫潜力的任何临床显著的医学状况(例如任何获得性或先天性免疫抑制疾病的病史)。

13.在筛选前的过去12个月内使用肼苯哒嗪、普鲁卡因胺、奎尼丁、异烟肼、TNF抑制剂、米诺环素。

14.使用地尔硫卓，除非在筛选前至少3个月剂量稳定。

15.使用哥伦比亚自杀严重程度量表(Columbia-Sulicide Severity RatingScale)，定义为受试者对自杀意念问题4或5回答“是”或对过去12个月内的自杀行为回答“是”的重大自杀风险。

16.除了被认为与AD相关的那些之外的伴随的精神或神经系统疾病(例如伴有意识丧失的头部损伤、症状性中风、帕金森病、严重的颈动脉闭塞性疾病、TIA)。

17.不受控制的癫痫发作的病史或存在。如果有癫痫病史，它们必须得到良好控制，在基线前2年内没有发生癫痫发作。如果在筛选前至少3个月剂量稳定，则允许使用抗癫痫药物。

18.筛查前的过去10年内的脑膜脑炎病史。

19.具有出血性和/或非出血性中风病史的患者。

20.周围神经病变的存在或病史。

21.具有CNS参与的可能性的炎性神经系统疾病的病史。

22.筛选MRI扫描显示与AD不一致的可能引起患者的症状的替代病理的结构证据。除直径小于1cm的良性脑膜瘤以外的占位病变、多于两个腔隙性梗塞或一个直径大于1cm的单个梗塞或任何单一区域的表面铁沉积症的证据，或≥10mm的先前大出血的证据。无论位置如何，T2*MRI上的微出血最多允许10个。

23.出于任何理由不能进行MRI检查，包括但不限于MRI研究禁忌的金属植入物和/或严重的幽闭恐惧症。

24.严重的听力或视力损伤或由研究者判断为相关的其他问题，其阻止遵守方案和进行结果测量。

25.筛选前3个月内临床显著的感染或大手术。预期在参与研究期间发生的计划手术必须在筛选时由医学监督员审查和批准。

26.基线前的过去2周内接受任何疫苗，包括流感疫苗。

27.筛选时在ECG上有临床显著的心律失常或其他临床显著的异常。

28.在基线前一年内的心肌梗塞、不稳定型心绞痛或显著的冠状动脉疾病。

29.过去5年内具有癌症病史的患者，除了已完全去除并被认为治愈的经治疗的鳞状细胞癌、基底细胞癌和原位黑色素瘤或原位前列腺癌或原位乳腺癌以外。

30.在现场研究者的意见中，被判断为临床显著的与血液学参数、肝功能测试和其他生物化学测量的正常值的临床显著偏差。

31.女性受试者在筛选时通过血清检测证实怀孕，或计划怀孕或哺乳的。

32.接受任何抗凝药物或抗血小板药物的患者，除了每日剂量低于100mg的阿司匹林(以避免在计划的或计划外的腰椎穿刺期间出血的风险)。

33.接受抗精神病药物的患者，除非是用于治疗失眠的稳定低剂量。

34.在筛选前30天期间捐献血液或血液制品或计划在参与研究时捐献血液的患者。

35.在筛选时与活动性梅毒一致的阳性VDRL(性病研究实验室(Venereal DiseaseResearch Laboratory))。

36.在筛选时具有阳性HIV测试的患者。

37.在筛选时如通过测试测量的患有活动性乙型肝炎和/或丙型肝炎的患者。

38.肌酐高于1.5倍正常上限、甲状腺功能测试异常或血清B12或叶酸水平临床显著降低的患者(注意：所有口服剂量的甲状腺替代剂、B12或叶酸在筛选前必须稳定至少3个月)。

患者人口统计：

该研究正在进行中。子群组1.1和1.2的患者人口统计(截至2021年9月底的截止日期)汇总在表1中。

表1

结果/结论：

评估了以下主要终点：

安全性和耐受性——不良事件、即时和延迟反应原性(例如过敏症、局部和全身反应原性，包括疼痛、发红、免疫-复合物疾病、肿胀、发热)；耐受性的总体评估；自杀意念(C-SSRS)；行为(NPI)；评价安全性的认知和功能评估(RBAN、CDR-SB)；生命体征；MRI成像；心电图；血液和尿液中的常规血液学和生物化学评估；血液中自身免疫抗体(包括抗DNA抗体)的评估；血液和CSF中的炎性标志物。

免疫反应——血清中的抗pTau IgG滴度(几何平均值、从基线的变化、反应者比率、峰值和曲线下面积)。

评估了以下次要终点：

免疫反应——血清中的抗Tau IgG、抗pTau IgM、抗ePHF IgG和抗Tau IgM滴度(几何平均值、从基线的变化、反应者比率、峰值和曲线下面积)，通过亲合力测试确定IgG反应概况。

评估了以下探索性终点：

血液和/或CSF中的生物标志物滴度(例如总Tau和pTau蛋白)从基线的变化、血液中T细胞活化水平的从基线的变化、血液中炎性细胞因子(例如IL-1B、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ和TNF-α)滴度的从基线的变化、自杀意念(C-SSRS)、行为(NPI)、认知和功能表现(RBANS、CDR-SB)评分的从基线的变化。

该研究正在进行中。三(3)个子群组已经如表2中那样接受300μg、900μg或1800μg的四棕榈酰化磷酸肽pTau肽T3(SEQ ID NO:28)的剂量水平的ACI-35.030和安慰剂。

表2：临床研究的设计

·对于每个子群组，以下列间隔施用剂量4次：第0、8、24和48周。

·在以下时间点抽取用于抗体测定的血液样品：筛选，第0(给药前)、2、8、10、15*、20*、24、26、31*、36、42*、48、50、67和74周。(*)：为某些受试者增加的另外的时间点；(#)包括由AD引起的MCI以及轻度AD受试者

·注：在子群组1.2中有25名受试者用ACI-35.030或安慰剂治疗。该研究仍然是盲法研究。

截至2022年6月20日的截止日期的中期安全性和耐受性结果指示，未鉴定出ACI-35.030的安全性或耐受性问题。在群组1的子群组1.1、1.2和1.3中，没有由不良事件引起的退出。此外，迄今为止检查的患者没有表现出CNS炎症或在MRI上报告的其他显著变化。

在第一次施用300μg、900μg或1800μg的四棕榈酰化磷酸肽pTau肽T3(SEQ ID NO:28)后，在100％的受试者的血清中观察到施用ACI-35.030后2周的抗pTau特异性IgG滴度相对于基线提高。这种抗pTau IgG反应在所有积极治疗的早期AD受试者中显示出相对于非pTau肽对pTau的偏好，并且如由在另外施用ACI-35.030后2周测量的提高的抗pTau特异性IgG滴度和/或提高的抗ePHF IgG滴度所示，抗体反应通过另外施用ACI-35.030得到加强。在接受安慰剂的受试者中未观察到抗体反应，除了在第67周的研究治疗期之后，在子群组1.2中的一名接受安慰剂的受试者中IgM和IgG抗pTau滴度的一个单一有限升高，其反应接近于为定义反应者设定的阈值。

ACI-35.030在人中的抗pTau IgG反应

通过MSD测量表2的三个子群组中由ACI-35.030疫苗诱导的针对磷酸化Tau肽(pTau)的特异性IgG抗体反应。

表3显示了在子群组1.1中，用300μg的四棕榈酰化磷酸肽pTau肽T3的剂量水平的ACI-35.030(ACI-35.030 300μg)或安慰剂免疫后的抗pTau IgG滴度和反应者比率(ITT群体)。

表3

*由于Covid-19大流行，7/8的受试者在第24周未接受ACI-35.030(300μg剂量)或安慰剂的免疫，并且因此未报告n＝1的数据以避免可能的揭盲。同样，在第26周不进行血液取样。

#对于子群组1.1，在2名受试者从研究中退出后，在活性物和安慰剂之间汇集第48、50、67和74周的数据以避免可能的揭盲。

NA＝数据尚未公布

^◆反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者。如果≥分析阈值×基线，则认为基线后值是阳性。由来自人供体的样本(在每次测定的验证期间获得)定义分析阈值。特别地，反应者具有≥1.81×基线的抗pTau IgG滴度。

基线抗体滴度值是在筛选和第1次访视(包括计划外访视)(条件是它们在第一次注射之前发生)时测量的滴度的平均值。

在子群组1.2中，用900μg的四棕榈酰化磷酸肽pTau肽T3的剂量水平的ACI-35.030(ACI-35.030 900μg)或安慰剂免疫后的抗pTau IgG滴度和反应者比率(ITT群体)汇总在表4中。

表4

基线抗体滴度值是在筛选和第1次访视(包括计划外访视)(条件是它们在第一次注射的日期和时间之前发生)时测量的滴度的平均值。

在子群组1.3中用1800μg的四棕榈酰化磷酸肽pTau肽T3(ACI-35.030 1800μg)的剂量水平的ACI-35.030或安慰剂免疫后的抗pTau IgG滴度和反应者比率(ITT群体)汇总在表5中。

表5

NA＝数据尚未公布

^◆反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者的数量。如果≥分析阈值×基线，则认为基线后值是阳性。由来自人供体的样本(在每次测定的验证期间获得)定义分析阈值。特别地，反应者具有≥1.81×基线的抗pTau IgG滴度。

#对于子群组1.3，汇集来自活性物治疗的受试者在第31、48和50周的数据以避免可能的揭盲。

如表3、4和5以及图2和6中的结果所示，用300μg、900μg和1800μg剂量水平中的每一种的ACI-35.030免疫诱导了针对具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的T3.5肽的抗pTauIgG反应。用300μg剂量水平的ACI-35.030治疗的所有受试者在第2周至第10周均是反应者，并且他们中的66.7％在第36周是反应者，而在该子群组中，由于Covid-19大流行，7/8的受试者在第24周未进行预先注射。为了避免可能的研究揭盲，目前未报告子群组1中超过第36周的反应者的百分比。用900μg剂量水平的ACI-35.030治疗的所有受试者在第2周和第74周之间的所有时间点均是反应者，而接受安慰剂的1名受试者在第67周(治疗期后)产生仅略高于为定义反应者设定的阈值(1.81×基线)的有限抗pTau IgG反应(1.9×基线)。用1800μg剂量水平的ACI-35.030治疗的所有受试者在第2周和第50周之间的所有时间点均是反应者，而直至第42周没有接受安慰剂的受试者产生抗pTau IgG反应。

对于用300μg或900μg的ACI-35.030治疗的受试者，早在疫苗接种后2周观察到高反应者比率。总体而言，在第一次疫苗接种后和在所有疫苗接种后观察到高反应者比率。在900μg剂量的ACI-35.030下，当在从第2周至第74周的任何研究时间点分析时，磷酸化Tau的反应者比率为100％。在900μg剂量的ACI-35.030下，病理性ePHF的反应者比率在第2周和第48周之间的治疗期期间的任何时间点范围为66.7％至100％，并且在第50周至第74周的治疗后期期间的任何时间点范围为50％至100％。此外，在用300μg或900μg的ACI-35.030治疗的患者中观察到从IgM向IgG的快速类别转换。分别用300μg、900μg或1800μg的ACI-35.030治疗的子群组1.1、1.2和1.3的总体反应者比率的汇总显示在表6中。

表6

反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者，所述阳性阈值即治疗前值(基线抗体滴度)乘以阈值因子(>～2×)。大于或等于该值的任何基线后结果定义阳性抗体反应。基线抗体滴度值是在筛选和第1次访视(包括计划外访视)(条件是它们在第一次注射之前发生)时测量的滴度的平均值。特别地，反应者具有≥3.38×基线的抗Tau IgG滴度、≥1.81×基线的抗pTau IgG滴度和/或≥2.21×基线的抗ePHF IgG滴度。NA＝数据尚未公布

通常，在第8、24或48周以300和900μg剂量水平的每次附加免疫均导致抗pTau IgG反应的加强，如分别在第10、26和50周施用附加免疫后2周测量的提高的抗pTau特异性IgG滴度所示(图2和6)。在第8、24和48周用1800μg剂量水平进行的附加免疫也导致抗pTau IgG反应的加强，如在第10、26和50周施用附加免疫后2周测量的提高的抗pTau特异性IgG滴度所示(图4和7)。

ACI-35.030在人中的抗pTau IgM反应

通过MSD测量表2的三个子群组中由ACI-35.030疫苗诱导的针对磷酸化Tau肽的特异性IgM抗体反应。在子群组1.1中用ACI-35.030 300μg或安慰剂免疫后的抗pTau IgM滴度和反应者比率(ITT群体)显示在表7中。

表7

NA＝数据尚未公布

^◆反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者。如果≥分析阈值×基线，则认为基线后值是阳性。由来自人供体的样本(在每次测定的验证期间获得)定义分析阈值。特别地，反应者具有≥2.11×基线的抗pTau IgM滴度。

在子群组1.2中用ACI-35.030 900μg或安慰剂免疫后的抗pTau IgM滴度和反应者比率(ITT群体)显示在表8中。

表8

^·反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者。如果≥分析阈值×基线，则认为基线后值是阳性。由来自人供体的样本(在每次测定的验证期间获得)定义分析阈值。特别地，反应者具有≥2.11×基线的抗pTau IgM滴度。

在子群组1.3中用ACI-35.030 1800μg或安慰剂免疫后的抗pTau IgM滴度和反应者比率(ITT群体)显示在表9中。

表9

NA＝数据尚未公布

^◆反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者的数量。如果≥分析阈值×基线，则认为基线后值是阳性。由来自人供体的样本(在每次测定的验证期间获得)定义分析阈值。特别地，反应者具有≥2.11×基线的抗pTau IgM滴度。

#对于子群组1.3，汇集来自活性物治疗的受试者在第31、48和50周的数据以避免可能的揭盲

如表7至9的结果所示，早期AD受试者用300μg、900μg和1800μg剂量中的每一种的ACI-35.030免疫在第10周时诱导针对具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的T3.5肽的抗pTauIgM反应。用ACI-35.030治疗的所有受试者均是反应者，而没有用安慰剂治疗的受试者产生抗pTau IgM反应，除了在第67周(在治疗期后)的1名受试者，其显示仅略高于为定义反应者设定的阈值的有限的抗pTau IgM反应。总之，在第8周时抗pTau IgM反应的下降和从第2周开始测量的抗pTau IgG抗体反应表明ACI-35.030诱导IgM向IgG的类别转换。

相对于Tau(非pTau)对pTau的特异性

对于随时间推移由各种剂量的ACI-35.030或安慰剂诱导的针对非磷酸化Tau的IgG滴度(抗Tau IgG滴度)，参见图3和5。将表2的三个子群组中通过用ACI-35.030免疫诱导的IgG抗体反应相对于Tau结合pTau的特异性(其中对Tau的反应代表对非pTau的反应)测量为随时间推移的抗pTau IgG/抗Tau IgG反应的比率。在子群组1.1中用ACI-35.030 300μg或安慰剂免疫后的抗Tau IgG滴度和反应者比率(ITT群体)显示在表10中。

表10

NA＝数据尚未公布

^◆反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者。如果≥分析阈值×基线，则认为基线后值是阳性。由来自人供体的样本(在每次测定的验证期间获得)定义分析阈值。特别地，反应者具有≥3.38×基线的抗Tau IgG滴度。

在子群组1.2中用ACI-35.030 900μg或安慰剂免疫后的抗Tau IgG滴度和反应者比率(ITT群体)显示在表11中。

表11

在子群组1.3中用ACI-35.030 1800μg或安慰剂免疫后的抗Tau IgG滴度和反应者比率(ITT群体)显示在表12中。

表12

NA＝数据尚未公布

^◆反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者的数量。如果≥分析阈值×基线，则认为基线后值是阳性。由来自人供体的样本(在每次测定的验证期间获得)定义分析阈值。特别地，反应者具有≥3.38×基线的抗Tau IgG滴度。

#对于子群组1.3，汇集来自活性物治疗的受试者在第31、48和50周的数据以避免可能的揭盲NA＝数据尚未公布

*由于Covid-19大流行，7/8的受试者在第24周未接受ACI-35.030(300μg剂量)或安慰剂的免疫，并且因此未报告n＝1的数据以避免研究揭盲。同样，在第26周不进行血液取样。

在子群组1中用ACI-35.030 300μg免疫后的抗pTau IgG/抗Tau IgG滴度(ITT群体)的比率显示在表13中。

表13

NA＝数据尚未公布

#对于子群组1.1，在2名受试者从研究中退出后，在活性物和安慰剂之间汇集第48、50、67和74周的数据以避免研究揭盲

表14显示了在子群组1.2中用ACI-35.030 900μg免疫后的抗pTau IgG/抗Tau IgG滴度(ITT群体)的比率。

表14

表15显示了在子群组1.3中用ACI-35.030 1800μg免疫后的抗pTau IgG/抗TauIgG滴度(ITT群体)的比率。

表15

NA＝数据尚未公布

如表13至15的结果所示，用300μg、900μg和1800μg剂量中的每一种的ACI-35.030免疫诱导了IgG抗体反应，其相对于非pTau肽优先识别pTau肽，并且这种偏好随时间推移而持续。

源自人AD脑的病理性pTau(富集成对螺旋丝-ePHF)的识别

通过MSD随时间推移测量表2的三个子群组中通过用ACI-35.030免疫诱导的IgG多克隆抗体结合源自人AD脑的ePHF的能力。表16显示了子群组1.1中用ACI-35.030 300μg或安慰剂免疫后的抗ePHF IgG滴度和反应者比率(ITT群体)。

表16

NA＝数据尚未公布

^◆反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者。如果≥分析阈值×基线，则认为基线后值是阳性。由来自人供体的样本(在每次测定的验证期间获得)定义分析阈值。特别地，反应者具有≥2.21×基线的抗ePHF IgG滴度。

表17显示了子群组1.2中用ACI-35.030 900μg或安慰剂免疫后的抗ePHF IgG滴度和反应者比率(ITT群体)。

表17

表18显示了子群组1.3中用ACI-35.030 1800μg或安慰剂免疫后的抗ePHF IgG滴度和反应者比率(ITT群体)。

表18

NA＝数据尚未公布

^◆反应者定义为具有高于阳性阈值的抗体反应的受试者的数量。如果≥分析阈值×基线，则认为基线后值是阳性。由来自人供体的样本(在每次测定的验证期间获得)定义分析阈值。特别地，反应者具有≥2.21×基线的抗ePHF IgG滴度。

表16至18以及图4和图7的结果显示，用300μg、900μg和1800μg剂量中的每一种的ACI-35.030免疫可诱导识别源自人AD脑的病理性ePHF Tau的IgG抗体反应。此外，抗ePHFIgG滴度是可加强的。每次免疫后2周，抗ePHF IgG滴度的几何平均值提高。用ACI-35.030300μg治疗的受试者中IgG抗ePHF的反应者比率分别为：在第2周为66.7％，在第8周和第10周为83.3％，以及在第36周为33.3％，而由于Covid-19大流行，该子群组中7/8的受试者在第24周未进行预先注射。为了避免可能的研究揭盲，目前未报告子群组中超过第36周的反应者的百分比。用ACI-35.030 900μg治疗的受试者中抗ePHF IgG的反应者比率分别为：在第2、10和26周为100％，在第8和24周为66.7％，在第36和48周为83.3％，以及在第50周为100％。似乎相同的2名积极治疗的受试者在这2个时间点(第8周和第24周)是无反应者，而他们在第2、10和26周(例如分别在第0、8和24周进行注射后2周)是反应者。在第2、8和10周用ACI-35.030 1800μg治疗的受试者中IgG抗ePHF IgG的反应者比率分别为66.7％、33.3％和83.3％，随后在第24周为50％，在第26周为66.7％，以及在第50周为80％。

对源自人AD脑的病理性pTau(富集成对螺旋丝—ePHF)的亲合力

在子群组1.1、子群组1.2和子群组1.3中通过用ACI-35.030免疫诱导的IgG抗体反应结合源自人AD脑的ePHF的能力通过MSD，在板上使用ePHF的低密度和高密度涂层随时间推移测量。在低密度涂层(只有具有最高结合能力的抗体可以结合)和高密度涂层(所有抗体均可以结合)上测量抗体浓度。通过低/高密度涂层上抗体浓度的比率计算亲合力指数。表19显示了在子群组1.1中用300μg的ACI-35.030免疫后对ePHF的亲合力指数。

表19

(*)测量无效

表20显示了在子群组1.2中用900μg的ACI-35.030免疫后对ePHF的亲合力指数。

表20

(*)测量无效

表21显示了在子群组1.3中用1800μg的ACI-35.030免疫后对ePHF的亲合力指数。

表21

(*)测量无效

表19、20和21的结果显示，在大多数患者中，用300μg、900μg和1800μg剂量中的每一种的ACI-35.030免疫诱导了IgG免疫反应，其在第2周与第10周之间显示出结合亲合力的提高。

迄今为止，初步结果显示，例如，ACI-35.030诱导针对Tau病理性物类(磷酸化Tau和ePHF)的高、特异性和持续的抗体反应，在低剂量和中剂量之间具有表观剂量反应，具有从IgM向IgG的免疫球蛋白类别转换的证据。个体反应者比率高且一致，尤其对于抗pTau和ePHF抗体。截至数据分析之日，ACI-35.030的施用似乎未引起任何与研究疫苗相关的特定安全性问题，为ACI-35.030的有利的安全性和耐受性状况提供了支持，并且ACI-35.030能够在免疫患者中诱导高于基线值的持久抗体反应。随着时间的推移，数据证明IgG反应朝向对结合ePHF(更具病理性的物类)的更强偏好而成熟，同时伴随地降低针对非病理性、非磷酸化Tau的抗体滴度。初步结果支持该疫苗作为有效的AD疾病修饰治疗以及潜在预防AD的方法的进一步开发。

实施例2用ACI-35.030接种疫苗诱导具有广泛表位覆盖的相对均一的抗体反应

为了进一步分析抗体反应的广度和对病理性pTau的选择性，对人受试者的血清进行表位作图。进行研究以确定人受试者中由脂质体疫苗诱导的抗体的表位识别谱。在1/2期临床研究中，在第0、8、24和48周，用每剂900μg乙酸四棕榈酰化磷酸化Tau肽T3(SEQ ID NO:28)的脂质体疫苗或安慰剂(子群组1.2)肌内免疫七名阿尔茨海默病(AD)患者。抗体的表位识别谱通过使用N末端生物素化的8聚体肽的文库在第一次免疫接种(V1，第0周)之前和在第三次免疫接种(V6，第26周)之后的表位作图ELISA来确定，所述8聚体肽移位一个氨基酸并覆盖磷酸化Tau肽T3.30(SEQ ID NO:45)的整个序列以及非磷酸化Tau肽T3.56(SEQ IDNO:46)的相应序列。此外，确定抗体与全长磷酸化Tau肽T3.30(和Tau肽T3.56以及另一N端生物素化的磷酸化Tau肽T3.85(SEQ ID NO:47)和相应的非磷酸化Tau肽T3.86(SEQ ID NO:48)(具有另外的C端氨基酸))的结合。

数据表示为每种肽和每名患者的减去第三次免疫(V6，第26周)后获得的O.D.的减去治疗前的初始免疫(V1，第0周)之前获得的光密度(O.D.)值。减去后的负值设定为0.000。

表22和23显示了如通过对覆盖磷酸化肽T3.30和T3.85以及非磷酸化肽T3.56和T3.86的短8聚体重叠肽的表位作图ELISA所确定的，通过用ACI-35.030接种疫苗诱导的抗体的表位识别谱。

表22

表23

表22和图8A显示，两名AD患者在第26周在三次免疫后基本上不产生针对磷酸化Tau肽T3.30和T3.85的序列或在磷酸化Tau肽T3.30和T3.85内的序列的任何IgG抗体(患者#1和#2)，而另外五名AD患者产生针对磷酸化Tau肽T3.30和T3.85的序列的IgG抗体或针对在磷酸化Tau肽T3.30和T3.85内的序列的IgG抗体，其具有与磷酸化Tau肽T3.30和T3.85的序列整体类似的结合。在8聚体肽上获得的O.D.值指示在三次免疫后诱导的IgG抗体主要与磷酸化Tau肽T3.30(SEQ ID NO:45)和T3.85(SEQ ID NO:47)的序列的N末端部分(包括位置396处的磷酸化丝氨酸)结合。观察到与磷酸化Tau肽T3.30(SEQ ID NO:45)和T3.85(SEQ IDNO:47)的序列的C末端部分(包括位置404处的磷酸化丝氨酸)的总体较低的结合。

表23和图8B显示了两名AD患者在第26周基本不产生针对非磷酸化Tau肽T3.56和T3.86的序列的任何IgG抗体(患者#1和#2)。四名AD患者产生IgG抗体，其具有对非磷酸化Tau肽T3.56和T3.86的序列或在非磷酸化Tau肽T3.56和T3.86内的序列的轻微识别，并且结合似乎与C末端8聚体肽(tau401-408)的结合相关联。一名AD患者(患者#3)产生针对非磷酸化Tau肽T3.56和T3.86的序列或在非磷酸化Tau肽T3.56和T3.86内的序列的IgG抗体，并且结合似乎主要与序列的N末端部分相关联。

对于ACI-35.030，受试者的IgG反应是相对均一的，表现出广泛的表位覆盖，因为结合发生在测试的pTau序列上，并且重要的是，没有对肽序列的末端的实质性特异性或与非磷酸化序列的实质性结合。

序列表

SEQ ID NO:1-磷酸化Tau肽(7.1)

GDRSGYS[pS]PG[pS]PG[pT]PGSRSRT

SEQ ID NO:2-磷酸化Tau肽(T3.5)

VYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHL

SEQ ID NO:3-磷酸化Tau肽(22.1)

SSTGSIDMVD[pS]PQLA[pT]LA

SEQ ID NO:4-Tau肽(T3.6)

VYKSPVVSGDTSPRHL

SEQ ID NO:5-磷酸化Tau肽

RENAKAKTDHGAEIVYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHL

SEQ ID NO:6-磷酸化Tau肽

RQEFEVMEDHAGT[pY]GL

SEQ ID NO:7-磷酸化Tau肽

PGSRSR[pT]P[pS]LPTPPTR

SEQ ID NO:8-磷酸化Tau肽

GYSSPG[pS]PG[pT]PGSRSR

SEQ ID NO:9-磷酸化Tau肽

GDT[pS]PRHL[pS]NVSSTGSID

SEQ ID NO:10-磷酸化Tau肽

PG[pS]PG[pT]PGSRSR[pT]P[pS]LP

SEQ ID NO:11-磷酸化Tau肽

HL[pS]NVSSTGSID

SEQ ID NO:12-磷酸化Tau肽

VSGDT[pS]PRHL

SEQ ID NO:13-T50 T细胞表位

AKFVAAWTLKAAAVVRQYIKANSKFIGITELVVRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-NH₂SEQ ID NO:14-T46 T细胞表位

AKFVAAWTLKAAAGSQYIKANSKFIGITELGSFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEK(Pal)K(Pal)-NH₂

SEQ ID NO:15-T48辅助性T细胞表位

AKFVAAWTLKAAAGSQYIKANSKFIGITELGSFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEGSLINSTKIYSYFPSVISKVNQ-NH₂

SEQ ID NO:16-T51辅助性T细胞表位

AKFVAAWTLKAAARRQYIKANSKFIGITELRRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-NH₂

SEQ ID NO:17-T52辅助性T细胞表位

AKFVAAWTLKAAARKQYIKANSKFIGITELRKFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-NH₂

SEQ ID NO:18-CpG 2006(也称为CpG 7909)

5’-tcgtcgttttgtcgttttgtcgtt-3’

其中小写体表示硫代磷酸酯(ps)核苷酸间键

SEQ ID NO:19-CpG 1018

5’-tgactgtgaacgttcgagatga-3’

其中小写体表示硫代磷酸酯核苷酸间键

SEQ ID NO:20-CpG2395

5’-tcgtcgttttcggcgcgcgccg-3’

其中小写体表示硫代磷酸酯核苷酸间键

SEQ ID NO:21-CpG2216

5’-ggGGGACGATCGTCgggggg-3’

其中小写体表示硫代磷酸酯核苷酸间键，且大写字母表示磷酸二酯(po)键

SEQ ID NO:22-CpG2336

5’-gggGACGACGTCGTGgggggg-3’,

其中小写体表示硫代磷酸酯核苷酸间键，且大写字母表示磷酸二酯键

SEQ ID NO:23-Pan DR表位(PADRE)肽

AKFVAAWTLKAAA

SEQ ID NO:24–P2

QYIKANSKFIGITEL

SEQ ID NO:25–P30

FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

SEQ ID NO:26-TT_586–605

LINSTKIYSYFPSVISKVNQ

SEQ ID NO:27–棕榈酰化磷酸化Tau肽(棕榈酰化7.1)

K(pal)K(pal)GDRSGYS[pS]PG[pS]PG[pT]PGSRSRTK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:28-棕榈酰化磷酸化Tau肽(T3,棕榈酰化T3.5)

K(pal)K(pal)VYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHLK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:29-棕榈酰化磷酸化Tau肽(棕榈酰化22.1)

K(pal)K(pal)SSTGSIDMVD[pS]PQLA[pT]LAK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:30-棕榈酰化Tau肽

K(pal)K(pal)VYKSPVVSGDTSPRHLK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:31-棕榈酰化磷酸化Tau肽

K(pal)K(pal)RENAKAKTDHGAEIVYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHLK(pal)K(pal)SEQ IDNO:32-棕榈酰化磷酸化Tau肽

K(pal)K(pal)RQEFEVMEDHAGT[pY]GLK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:33-棕榈酰化磷酸化Tau肽

K(pal)K(pal)PGSRSR[pT]P[pS]LPTPPTRK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:34-棕榈酰化磷酸化Tau肽

K(pal)K(pal)GYSSPG[pS]PG[pT]PGSRSRK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:35-棕榈酰化磷酸化Tau肽

K(pal)K(pal)GDT[pS]PRHL[pS]NVSSTGSIDK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:36-棕榈酰化磷酸化Tau肽

K(pal)K(pal)PG[pS]PG[pT]PGSRSR[pT]P[pS]LPK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:37-棕榈酰化磷酸化Tau肽

K(pal)K(pal)HL[pS]NVSSTGSIDK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:38-棕榈酰化磷酸化Tau肽

K(pal)K(pal)VSGDT[pS]PRHLK(pal)K(pal)

SEQ ID NO:39–不具有C末端酰胺的T50

AKFVAAWTLKAAAVVRQYIKANSKFIGITELVVRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

SEQ ID NO:40-在C末端不具有-Lys(Pal)-Lys(Pal)-NH₂的T46

AKFVAAWTLKAAAGSQYIKANSKFIGITELGSFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

SEQ ID NO:41-不具有C末端酰胺的T48

AKFVAAWTLKAAAGSQYIKANSKFIGITELGSFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEGSLINSTKIYSYFPSVISKVNQ

SEQ ID NO:42-不具有C末端酰胺的T51

AKFVAAWTLKAAARRQYIKANSKFIGITELRRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

SEQ ID NO:43-不具有C末端酰胺的T52

AKFVAAWTLKAAARKQYIKANSKFIGITELRKFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

SEQ ID NO:44-T57

AKFVAAWTLKAAAVVRQYIKANSKFIGITELVVRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-K(Pal)K(Pal)-NH2

SEQ ID NO:45–生物素化磷酸化Tau肽(T3.30)

生物素-LC接头(Ahx)-GVYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHL-NH2

SEQ ID NO:46-生物素化非磷酸化Tau肽(T3.56)

生物素-LC接头(Ahx)-GVYKSPVVSGDTSPRHL-NH2

SEQ ID NO:47-生物素化磷酸化Tau肽(T3.85)

生物素-LC接头(Ahx)-VYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHLS-NH2

SEQ ID NO:48-生物素化非磷酸化Tau肽(T3.86)

生物素-LC接头(Ahx)-VYKSPVVSGDTSPRHLS-NH2

Claims

1.在有需要的人受试者中诱导针对磷酸化Tau蛋白(pTau)的抗体反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的脂质体，所述脂质体包含：

(2)包含单磷酰基脂质A的toll样受体4激动剂；

(3)具有选自SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23至SEQ ID NO:26、和SEQ IDNO:39至SEQ ID NO:44的氨基酸序列的辅助性T细胞表位；和

其中：

所述Tau磷酸肽呈递在所述脂质体的表面上，且

在向所述人受试者初始施用所述有效量的脂质体后，所述抗体反应持续至少6周。

2.权利要求1的方法，其中所述有效量的脂质体包含：

(1)其量为每剂300μg至1800μg的所述Tau磷酸肽；

(2)其量为每剂100μg至585μg的所述toll样受体4激动剂；

(3)其量为每剂75μg至550μg的所述辅助性T细胞表位；和

(4)其量为每剂150μg至900μg的所述CpG寡核苷酸。

3.权利要求1或2的方法，其中所述有效量的脂质体包含每剂300μg、900μg或1800μg的所述Tau磷酸肽。

4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述有效量的脂质体皮下施用。

5.权利要求1-3任一项的方法，其中所述有效量的脂质体肌内施用。

6.权利要求1-5任一项的方法，其中所述CpG寡核苷酸具有一个或多个硫代磷酸酯核苷酸间键，并且所述CpG寡核苷酸任选经由PEG接头与至少一个亲脂性基团共价连接。

7.权利要求1-6任一项的方法，其中所述Tau磷酸肽由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成，所述toll样受体4激动剂包含3-脱酰基单磷酰基六酰基脂质A，所述辅助性T细胞表位包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，所述CpG寡核苷酸包含SEQ ID NO:18的核苷酸序列，且所述脂质体进一步包含至少一种选自1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酰基-3’-rac-甘油(DMPG)和胆固醇的脂质。

8.权利要求1-7任一项的方法，其中所述抗体反应包含针对所述pTau的特异性IgG抗体反应，优选所述特异性IgG抗体反应具有为安慰剂对照的至少50、60、70、80、90、100或更多倍的抗pTau IgG滴度。

9.权利要求1-8任一项的方法，其中所述抗体反应诱导特异性IgM抗体反应向针对所述pTau的特异性IgG抗体反应的类别转换。

10.权利要求1-9任一项的方法，其中所述抗体反应包含相对于非磷酸化Tau蛋白优先识别所述pTau的IgG免疫反应，优选抗pTau IgG滴度与抗Tau IgG滴度的比率为至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70。

11.权利要求1-10任一项的方法，其中所述抗体反应包含针对富集成对螺旋丝(ePHF)的IgG免疫反应。

12.权利要求11的方法，其中所述IgG免疫反应具有为安慰剂对照的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多倍的抗ePHF IgG滴度。

13.权利要求11或12的方法，其中在初始施用所述有效量的脂质体后，所述抗ePHF IgG具有提高的对病理性ePHF Tau的结合亲合力至少6周、8周、10周、12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周或更长，优选所述抗ePHF IgG具有至少0.3、0.4、0.5、0.6或0.7的亲合力指数。

14.权利要求1-13任一项的方法，其进一步包括在初始施用所述有效量的脂质体后4至12周，诸如8周，向所述受试者施用第二剂量的有效量的脂质体。

15.权利要求14的方法，其中在施用所述第二剂量的有效量的脂质体后，所述抗体反应，优选所述抗ePHF IgG滴度得到加强，优选如施用所述第二剂量的有效量的脂质体后至少2周测量的，所述抗体反应提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。

16.权利要求14或15的方法，其进一步包括在初始施用所述有效量的脂质体后20至28周，诸如24周，向所述受试者施用第三剂量的有效量的脂质体。

17.权利要求16的方法，其中在施用所述第三剂量的有效量的脂质体后，所述抗体反应，优选所述抗ePHF IgG滴度得到加强，优选如施用所述第三剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，所述抗体反应提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。

18.权利要求16或17的方法，其进一步包括在初始施用所述有效量的脂质体后44至52周，诸如48周，向所述受试者施用第四剂量的有效量的脂质体。

19.权利要求18的方法，其中在施用所述第四剂量的有效量的脂质体后，所述抗体反应，优选所述抗ePHF IgG滴度得到加强，优选如施用所述第四剂量的有效量的脂质体后至少2周所测量的，所述抗体反应提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多。

20.在有需要的人受试者中诱导针对磷酸化Tau蛋白(pTau)的持续免疫反应的方法，所述方法包括：

i.向所述受试者肌内施用包含有效量的脂质体的初免疫苗；和

ii.在施用所述初免疫苗后6-10周，向所述受试者肌内施用包含有效量的脂质体的第一加强疫苗，

其中：

所述持续免疫反应在施用所述初免疫苗后持续至少约20周；

所述脂质体包含：

(1)由SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成的Tau磷酸肽，并且所述Tau磷酸肽呈递在所述脂质体的表面上；

(2)包含单磷酰基脂质A的toll样受体4激动剂；

所述有效量的脂质体包含：

(1)其量为每剂300μg至1800μg的所述Tau磷酸肽；

(2)其量为每剂100μg至585μg的所述toll样受体4激动剂；

(3)其量为每剂85μg至525μg的所述辅助性T细胞表位；和

(4)其量为每剂150μg至900μg的所述CpG寡核苷酸。

21.权利要求20的方法，其中所述辅助性T细胞表位具有选自SEQ ID NO:39、40、41、42和43的氨基酸序列。

22.权利要求20的方法，其中所述辅助性T细胞表位具有选自SEQ ID NO:13、14、15、16、17和44的氨基酸序列。

23.权利要求20-22任一项的方法，其中所述脂质化CpG寡核苷酸具有SEQ ID NO:18的核苷酸序列，且所述CpG寡核苷酸经由接头与至少一个胆固醇共价连接。

24.权利要求20-23任一项的方法，其中所述第一加强疫苗在施用所述初免疫苗后8周施用，并且所述持续免疫反应在施用所述初免疫苗后持续至少约24周。

25.权利要求20-24任一项的方法，其进一步包括在施用所述初免疫苗后22-26周，向所述受试者肌内施用包含有效量的脂质体的第二加强疫苗，并且所述持续免疫反应在施用所述初免疫苗后持续至少约36周。

26.权利要求25的方法，其中所述第二加强疫苗在施用所述初免疫苗后24周施用，并且所述持续免疫反应在施用所述初免疫苗后持续至少约48周。

27.权利要求25或26的方法，其进一步包括在施用所述初免疫苗后45-50周，向所述受试者肌内施用包含有效量的脂质体的第三加强疫苗，并且所述持续免疫反应在施用所述初免疫苗后持续至少约60周。

28.权利要求27的方法，其中所述第三加强疫苗在施用所述初免疫苗后48周施用，并且所述持续免疫反应在施用所述初免疫苗后持续至少约72周。

29.权利要求20-28任一项的方法，其中所述有效量的脂质体包含每剂300μg的所述Tau磷酸肽。

30.权利要求20-28任一项的方法，其中所述有效量的脂质体包含每剂900μg的所述Tau磷酸肽。

31.权利要求20-28任一项的方法，其中所述有效量的脂质体包含每剂1800μg的所述Tau磷酸肽。

32.权利要求20-31任一项的方法，其中所述持续免疫反应包括相对于非磷酸化Tau蛋白优先识别所述pTau的IgG免疫反应，优选抗pTau IgG滴度与抗Tau IgG滴度的比率为至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70。

33.权利要求20-32任一项的方法，其中所述持续免疫反应包括针对富集成对螺旋丝(ePHF)的IgG免疫反应，所述IgG免疫反应具有为安慰剂对照的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多倍的抗ePHF IgG滴度。

34.权利要求1-33任一项的方法，其中所述受试者需要清除Tau的聚集体。

35.权利要求1-34任一项的方法，其中所述受试者需要预防或治疗阿尔茨海默病，诸如临床前阿尔茨海默病、轻度至中度阿尔茨海默病或早期阿尔茨海默病、由阿尔茨海默病引起的轻度认知障碍(MCI)。