KR20240082368A

KR20240082368A - 타우 포스포펩티드 접합체의 안전한 투여 방법

Info

Publication number: KR20240082368A
Application number: KR1020247013320A
Authority: KR
Inventors: 안드레아 파이퍼; 엘리자베스 앤 람스부르그
Original assignee: 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드; 에이씨 이뮨 에스에이
Priority date: 2021-09-29
Filing date: 2022-09-29
Publication date: 2024-06-10
Also published as: AU2022356435A1; CA3233247A1; WO2023056369A1

Abstract

인간에게 심각한 부작용을 유발하지 않고 항포스포릴화 타우 항체를 유도하는 방법이 기재된다. 이 방법은 면역원성 담체에 접합된 타우 포스포펩티드를 함유하는 조성물의 유효량을 대상에게 투여하는 것을 포함한다.

Description

타우 포스포펩티드 접합체의 안전한 투여 방법

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2021년 9월 29일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/261,793에 대한 우선권을 주장하는 국제 출원이며, 상기 출원의 개시 내용은 그 전체가 본 명세서에 참조로 원용된다.

전자 서열 목록에 대한 언급

전자 서열 목록(065794_8WO1.xml; 크기: 35,700; 작성 일자: 2022년 8월 29일)의 내용은 그 전체가 참조로 본 명세서에 포함된다.

발명의 분야

본 출원은 의학 분야에 관한 것이다. 본 발명은 특히 면역원성 담체에 접합된 포스포릴화된 타우(pTau) 펩티드를 포함하는 조성물을 사용하여 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태를 앓고 있는 대상에서 타우 단백질에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다.

알츠하이머병(AD)은 전 세계적으로 어림잡아 약 4천 4백만 명에 영향을 끼치는 진행성 쇠약성 신경퇴행성 질환이다(Alzheimers.net). 현재 상용화된 AD 치료제는 임상 증상에 작용하는 것을 목표로 하고 질환 기저를 이루는 병원성 과정을 목표로 하지는 않는다(질환 조절 효과). 불행하게도, 현재의 치료법은 최소 효과만 있으므로 추가적인 예방 및 치료 방법을 개발하고 시험하는 것이 시급하다.

알츠하이머병에 대한 특징적인 병리는 특히 응집된 아밀로이드 베타 단백질을 포함하는 세포 외 플라크의 축적 및 과포스포릴화된 타우 단백질의 세포 내 "매듭" 또는 응집이다. 이들 단백질의 축적을 초래하는 분자 사건은 잘 특성화되어 있지 않다. 아밀로이드의 경우, 아밀로이드 전구체 단백질의 비정상적 절단이 아미노산 1-42를 포함하는 응집되기 쉬운 단편의 축적을 초래한다고 가정하고 있다. 타우의 경우, 키나제, 포스파타제 또는 둘 다의 조절 장애가 타우의 비정상적인 포스포릴화를 유발한다고 가정하고 있다. 일단 타우가 과포스포릴화되면, 미세소관을 효과적으로 결합하고 안정화시키는 능력을 상실하고, 대신 영향받은 뉴런의 세포질에 축적된다. 결합되지 않은 과포스포릴화된 타우는 제1 올리고머 및 이어서 고차 응집체를 형성하는 것으로 보이며, 이의 존재는 아마도 정상적인 축색 돌기 수송의 중단을 통해 이들이 형성하는 뉴런의 기능에 부정적인 영향을 미치는 것으로 보인다.

선진국에서, 알츠하이머병 또는 다른 치매성 타우병증으로 진단된 개인들은 일반적으로 콜린에스테라제 억제제(예를 들어, Aricept^®) 또는 메만틴(예를 들어, Namenda™)으로 치료된다. 이들 약물은 상당히 내약성이 있지만 효능은 대단치 않다. 예를 들어, Aricept^®는 치료받은 개인의 약 50%에서 6-12 개월 동안 증상 악화를 지연시킨다. 나머지 치료법은 비약리학적이며, 인지 능력이 떨어졌을때 환자가 일상 업무를 보다 잘 관리할 수 있도록 하는 데 중점을 둔다.

면역요법이 현재 AD의 예방 및 치료를 위해 개발중에 있다. AD와 관련된 항원으로의 능동 면역화는 잠재적으로 AD에 대한 항체 기반 및 세포 면역 모두의 반응을 자극할 수 있다. 그러나, 광범위하게 시험된 최초의 인간 항아밀로이드 베타 백신에 대한 평가는 2002년에 중단되었다. 치명적일 수 있는 중추 신경계 염증의 일종인 수막뇌염이 Aβ를 표적으로 하는 활성 면역치료제 AN-1792의 AD 환자에 대한 임상 연구에서 관찰되었다(Orgogozo et al., 2003). AN-1792에 노출된 환자의 6%에서 발생한 뇌염 반응은 원치 않는 Aβ-특이적 T-세포 활성화에 의해 유도된 것으로 생각된다.

현재까지 타우 병리를 특이적으로 표적화하는 제제에 대한 연구는 거의 수행되지 않았다. 타우 면역요법은 현재 임상 시험으로 옮겨가고 있지만 이 분야는 아직 걸음마 단계에 있으며 다양한 접근법의 효능과 안전성에 대한 기계론적 이해가 잘 확립되어 있지 않다(Sigurdsson, Neurodegener Dis. 2016; 16(0): 34-38). 뇌의 염증인 뇌염은 전장 타우 단백질에 대해 면역된된 마우스에서도 보고되었다. 그러나, CNS 전염증성 환경하에서 포스포릴화된 타우 펩티드의 단일 주사로 면역화된 동물로부터 이상 반응은 보고되지 않았다(Rosenmann H., 2013. Curr. Alzheimer Res. 10, 217-228).

경증 내지 중등도의 알츠하이머병에 걸린 인간 환자에서 비-타우 포스포펩티드 백신(AADvac1)의 장기 안전성 프로파일이 최근에 발표되었다(Novak et al., Alzheimer's Research & Therapy(2018) 10:108). 백신은 N-말단 시스테인을 통해 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 결합된 타우 서열의 아미노산 294 내지 305에서 유래된 합성 펩티드를 함유하고 있다. 이는 0.3 ml 부피 인산염 완충액 중 수산화알루미늄 애쥬번트(0.5 mg Al3⁺ 함유)와 함께, KLH에 결합된 40 ㎍의 펩티드(CKDNIKHVPGGGS, 서열 번호 13) 용량으로 투여되었다. 연구에 등록되고 1상 연구(FUNDAMANT 연구)에서 AADvac1 치료와 관련된 26명의 환자로부터 관찰된 이상 반응(AE)은 주사 부위 반응(홍반, 부기, 온기, 가려움증, 통증, 결절)이었다. 이러한 AE 중 하나 이상이 AADvac1 치료를 받은 환자 50%에서 관찰되었다. 주사 부위 반응은 가역적이었고 주로 경미하게 나타났다. 6건의 심각한 유해 사건(SAE)이 관찰되었다(복부 감돈 탈장, 탈수, 급성 정신증, 치매의 행동 및 정신 증상, 2급 방실 차단 및 동서맥). 조사관에 의해 SAE 중 어느 것도 AADvac1 치료와 관련된 것이라고 판단되지 않았다. 알레르기 또는 아나필락시스 반응은 관찰되지 않았다. 실험실 평가(응고, 혈액 생화학, 혈액학 및 소변 검사), 활력 징후 평가 또는 신경 및 신체 검사에서 안전 신호는 나타나지 않았다. MRI 평가에서 안전 신호는 검출되지 않았다. 부종 변화는 발생하지 않았다. 수막 변화와 수막뇌염은 관찰되지 않았다. ApoE4 동형접합체 1개에서 새로운 미세 출혈이 관찰되었고 ApoE4 이형접합체 1개에서 표면 헤모시데린이 검출되었으나 두 사건 모두 임상적으로 무증상이었다. 이것은 AD 환자 집단에서 그러한 병변의 배경 발생률과 일치하는 것으로 간주되었다.

그러나, 인간 환자에서 타우 포스펩티드 접합체의 안전성 프로파일은 보고되지 않았다. 알츠하이머병과 같은 신경퇴행성 질환에 대한 안전하고 효과적인 치료제가 필요하다.

발명의 요약

하나의 일반적인 측면에서, 본 출원은 용량당 5 μg 내지 200 μg의 하기 화학식 (I)의 구조 또는 또는 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 접합체를 포함하는 조성물을 인간 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 인간 대상에서 타우, 바람직하게는 포스포릴화된 타우 및 풍부한 쌍나선 필라멘트(ePHF) 중 적어도 하나에 대한 항체를 유도하는 방법에 관한 것이다:

[화학식 (I)]

[화학식 (II)]

상기 식에서,

x는 0 내지 10, 바람직하게는 2 내지 6, 가장 바람직하게는 3의 정수이고;

n은 3 내지 15, 바람직하게는 3 내지 12의 정수이고;

담체는 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH), 파상풍 톡소이드, CRM197 및 N. meningitidis로부터의 외막 단백질(OMP) 혼합물, 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 면역원성 담체를 나타내고;

타우 펩티드는 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드를 나타낸다.

하나의 일반적인 측면에서, 본 출원은 용량당 5 μg 내지 200 μg의 하기 화학식 (I)의 구조 또는 또는 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 접합체를 포함하는, 이를 필요로 하는 인간 대상에서 타우, 바람직하게는 포스포릴화된 타우 및 풍부한 쌍나선 필라멘트(ePHF) 중 적어도 하나에 대한 항체를 유도하기 위한 조성물에 관한 것이다:

[화학식 (I)]

[화학식 (II)]

상기 식에서,

n은 3 내지 15, 바람직하게는 3 내지 12의 정수이고;

일 실시양태에서, 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함한다.

본 출원의 일 실시양태에서, 접합체는 링커를 통해 CRM197에 접합된 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 또는 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드를 포함한다. 바람직하게는, 타우 펩티드는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드이다. 복수의 타우 포스포펩티드, 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 타우 포스포펩티드가 하나의 담체 단백질에 접합될 수 있다. 보다 바람직하게는, 접합체는 하기 구조를 갖는다:

상기 식에서, n은 3 내지 7의 정수이고, VYKS(p)PVVSGDTS(p)PRHL-CONH₂는 서열 번호 2의 포스포-타우 펩티드를 포함한다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 조성물은 적어도 하나의 애쥬번트를 추가로 포함한다. 예를 들어, 적어도 하나의 애쥬번트는 서열 번호 14 내지 서열 번호 18로 이루어진으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 갖는 CpG 올리고뉴클레오티드와 같은 TLR9 작용제(agonist)를 포함할 수 있다. 일 실시양태에서, 조성물은 서열 번호 14의 뉴클레오티드 서열을 갖는 CpG 올리고뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 수산화알루미늄을 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 서열 번호 14 내지 서열 번호 18로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 갖는 CpG 올리고뉴클레오티드 및 수산화알루미늄을 추가로 포함한다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 이를 필요로 하는 인간 대상에서 타우, 바람직하게는 포스포릴화된 타우 및 풍부한 쌍나선 필라멘트(ePHF) 중 적어도 하나에 대한 항체를 유도하는 방법은 약학적으로 허용되는 담체, 수산화알루미늄, 서열 번호 14의 뉴클레오티드 서열을 갖는 CpG 올리고뉴클레오티드, 및 용량당 5 μg 내지 200 μg의 하기 구조를 갖는 접합체를 포함하는 조성물을 인간 대상에게 투여하는 단계를 포함한다:

특정 실시양태에서, 본 출원의 방법은 용량당 5 μg, 10 μg, 15 μg, 20 μg, 25 μg, 30 μg, 35 μg, 40 μg, 45 μg, 50 μg, 60 μg, 70 μg, 80 μg, 90 μg, 100 μg, 110 μg, 120 μg, 130 μg, 140 μg, 150 μg, 160 μg, 170 μg, 180 μg, 190 μg, 200 μg 또는 그 사이의 임의의 값의 본원에 기술된 접합체를 포함하는 조성물을 인간 대상에게 투여하는 것을 포함한다.

특정 실시양태에서, 조성물은 근육내로 투여된다. 다른 실시양태에서, 조성물은 피하 투여된다.

특정 실시양태에서, 항체는 포스포릴화된 Tau(pTau)에 대한 IgG 항체를 포함하며, 바람직하게는 위약 대조군보다 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100배 이상 더 높은 항-pTau IgG 역가를 갖는다.

특정 실시양태에서, 항체는 비포스포릴화 타우에 대한 IgG 항체를 포함하며, 바람직하게는 위약 대조군보다 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100배 이상 더 높은 항-타우 IgG 역가를 갖는다.

특정 실시양태에서, 항체는 강화된 쌍나선형 필라멘트(ePHF)에 대한 IgG 항체를 포함하며, 바람직하게는 위약 대조군보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20배 이상 더 높은 항-ePHF IgG 역가를 갖는다.

특정 실시양태에서, 본 출원의 방법은 약학적으로 허용되는 담체 및 용량당 5 μg 내지 200 μg, 예컨대 15 μg 또는 60 μg의 접합체를 포함하는 조성물의 제2 용량을 조성물의 초기 투여 후 4 내지 12주, 예컨대 8주에 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.

특정 실시양태에서, 조성물의 제2 용량의 투여는 조성물에 의해 유도된 항체 반응, 예컨대 항-pTau IgG 반응 및/또는 항-ePHF IgG 반응을 포함하는 항체 반응을 부스팅(boosting)시킬 수 있으며, 바람직하게는 항체 반응은 제2 용량 투여 후 적어도 2주에 측정했을 때 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 이상 증가한다.

특정 실시양태에서, 본 출원의 방법은 약학적으로 허용되는 담체 및 용량당 5 μg 내지 200 μg, 예컨대 15 μg 또는 60 μg의 접합체를 포함하는 조성물의 제3 용량을 조성물의 초기 투여 후 20 내지 28주, 예컨대 24주에 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.

특정 실시양태에서, 조성물의 제3 용량의 투여는 조성물에 의해 유도된 항체 반응, 예컨대 항-pTau IgG 반응 및/또는 항-ePHF IgG 반응을 포함하는 항체 반응을 부스팅시킬 수 있으며, 바람직하게는 항체 반응은 제3 용량 투여 후 적어도 2주에 측정했을 때 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 이상 증가한다.

특정 실시양태에서, 본 출원의 방법은 약학적으로 허용되는 담체 및 용량당 5 μg 내지 200 μg, 예컨대 15 μg 또는 60 μg의 접합체를 포함하는 조성물의 제4 용량을 조성물의 초기 투여 후 44 내지 52주, 예컨대 48주에 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.

특정 실시양태에서, 조성물의 제4 용량의 투여는 조성물에 의해 유도된 항체 반응, 예컨대 항-pTau IgG 반응 및/또는 항-ePHF IgG 반응을 포함하는 항체 반응을 부스팅시킬 수 있으며, 바람직하게는 항체 반응은 제4 용량 투여 후 적어도 2주에 측정했을 때 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 이상 증가한다.

하나의 일반적인 측면에서, 본 출원은 이를 필요로 하는 인간 대상에서 포스포릴화된 타우 단백질(pTau)에 대한 지속적인 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이며, 이는

i. 유효량의 접합체를 포함하는 프라이머 백신을 대상에게 근육내 투여하는 단계; 및

ii. 프라이머 백신 투여 6 내지 10주 후에 유효량의 접합체를 포함하는 1차 부스터 백신을 대상에게 근육내 투여하는 단계를 포함하며,

여기서

지속적인 면역 반응은 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 20주 동안 지속되고;

접합체는 하기 화학식 (I) 또는 하기 화학식 (II)의 구조를 가지며:

[화학식 (I)]

[화학식 (II)]

상기 식에서,

n은 3 내지 15, 바람직하게는 3 내지 12의 정수이고;

타우 펩티드는 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드를 나타내고;

접합체의 유효량은 용량당 5 μg 내지 200 μg의 접합체를 포함한다.

특정 실시양태에서, 담체는 CRM197이다.

특정 실시양태에서, 접합체의 유효량은 용량당 15 μg의 접합체를 포함한다.

특정 실시양태에서, 접합체의 유효량은 용량당 60 μg의 접합체를 포함한다.

특정 실시양태에서, 본 출원의 방법은 프라이머 백신 투여 후 20 내지 26주에 유효량의 접합체를 포함하는 2차 부스터 백신 조성물을 대상에게 근육내 투여하는 것을 추가로 포함하고, 지속적인 면역 반응은 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 36주 동안 지속된다.

특정 실시양태에서, 2차 부스터 백신 조성물은 프라이머 백신 투여 후 24주 에 투여되고, 지속적인 면역 반응은 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 48주 동안 지속된다.

특정 실시양태에서, 본 출원의 방법은 프라이머 백신 투여 후 45 내지 50주에 유효량의 접합체를 포함하는 3차 부스터 백신 조성물을 대상에게 근육내 투여하는 것을 추가로 포함하고, 지속적인 면역 반응은 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 67주 동안 지속된다.

특정 실시양태에서, 3차 부스터 백신 조성물은 프라이머 백신 투여 후 48주 에 투여되고, 지속적인 면역 반응은 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 74주 동안 지속된다.

특정 실시양태에서, 지속적인 면역 반응은 바람직하게는 위약 대조군보다 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100배 더 높은 항-pTau IgG 역가를 갖는 포스포릴화된 타우(pTau)에 대한 IgG 반응을 포함한다.

특정 실시양태에서, 지속적인 면역 반응은 바람직하게는 위약 대조군보다 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100배 더 높은 항-타우 IgG 역가를 갖는 비포스포릴화된 타우에 대한 IgG 반응을 포함한다.

특정 실시양태에서, 지속적인 면역 반응은 바람직하게는 위약 대조군보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20배 이상 더 높은 항-ePHF IgG 역가를 갖는 강화된 쌍나선 필라멘트(ePHF)에 대한 IgG 반응을 포함한다.

특정 실시양태에서, 대상은 타우 응집체의 제거를 필요로 한다.

특정 실시양태에서, 대상은 신경섬유 병변의 형성에 의해 유발되거나 이와 관련된 신경퇴행성 질환 또는 장애의 치료를 필요로 한다. 바람직하게는, 인간 대상은 초기 알츠하이머병, 알츠하이머병으로 인한 경도 인지 장애(MCI), 경도 알츠하이머병, 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병과 같은 알츠하이머병의 치료를 필요로 한다. 특정 실시양태에서, 대상은 뇌에서 아밀로이드 양성이지만 아직 유의미한 인지 장애를 나타내지는 않는다. 다른 실시양태에서, 대상은 AD 병리와 일치하는 뇌척수액(CSF) A베타 아밀로이드 42(Aß42)의 비정상적인 수준을 갖는다. 다른 실시양태에서, 대상은 신경원섬유 병변의 형성에 의해 유발되거나 이와 관련된 신경퇴행성 질환 또는 장애의 치료를 필요로 한다.

본 발명의 추가 측면, 특징 및 장점은 본 발명의 다음의 상세한 설명 및 청구범위를 읽음으로써 더 잘 이해될 것이다.

전술한 요약뿐만 아니라 본 발명의 다음의 상세한 설명은 첨부된 도면과 결부하여 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 본 발명을 예시할 목적으로, 현재 바람직한 실시양태가 도면에 도시되어 있다. 그러나, 본 발명은 도면에 도시된 정확한 실시양태로 제한되지 않음을 이해해야 한다.
도 1은 JACI-35.054(15 μg 또는 60 μg) 또는 위약(ITT 분석 세트)으로 처리한 후 하위 코호트 2.1에서 시간 경과에 따른 포스포릴화된 타우 펩티드(pTau)에 대한 항-pTau IgG 반응의 기하 평균(± 95% 신뢰 구간) 그래프이다.
도 2는 JACI-35.054(15 μg 또는 60 μg) 또는 위약(ITT 분석 세트)으로 처리한 후 하위 코호트 2.1에서 시간 경과에 따른 비포스포릴화 타우 펩티드에 대한 항-타우 IgG 반응의 기하 평균(± 95% 신뢰 구간) 그래프이다.
도 3은 JACI-35.054(15 μg 또는 60 μg) 또는 위약(ITT 분석 세트)으로 처리한 후 하위 코호트 2.1에서 시간 경과에 따른 항-ePHF(풍부한 쌍 나선 필라멘트) IgG 역가의 기하 평균(± 95% 신뢰 구간) 그래프이다.
도 4는 짧은 8-mer 중첩 펩티드 상에서 에피토프 매핑 ELISA에 의해 결정된 JACI-35.054(15 μg) 백신 접종에 의해 유도된 8명의 AD 환자에서의 항체의 에피토프 인식 프로파일의 그래프로서, 포스포-펩티드 T3.30(서열 번호 19) 및 T3.85(서열 번호 21) 및 비-포스포-펩티드 T3.56(서열 번호 20) 및 T3.86(서열 번호 22)을 포함한다. 도 4A는 하위 코호트 2.1에서 항포스포릴화 타우 항체의 에피토프 인식 프로파일을 보여준다. 도 4B는 하위 코호트 2.1에서 항-타우 항체의 에피토프 인식 프로파일을 보여준다. O.D. = 광학 밀도.

발명의 상세한 설명

다양한 간행물, 논문, 특허 및 특허 출원이 배경기술과 본 명세서 전반에 걸쳐 인용 또는 기재되어 있으며; 이들 참고문헌은 각각 전체적으로 본 명세서에 참조로 원용된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행동, 재료, 장치, 물품 등에 대한 논의는 본 발명에 대한 상황을 제공하는 것을 목적으로 한다. 그러한 논의는 이들 대상 중 임의의 것 또는 모든 것이 개시되거나 청구된 임의의 발명에 대하여 종래 기술의 일부를 형성한다고 인정하는 것은 아니다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 용어 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본원에서 사용된 특정 용어는 본 명세서에 제시된 바와 같은 의미를 갖는다.

본 명세서 및 이어지는 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.

달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치 값은 모든 경우에 용어 "약"으로 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 수치 값은 전형적으로 인용된 값의 ±10%를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10%(w/v)의 농도 범위는 0.9%(w/v) 내지 11%(w/v)를 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같이, 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는 한, 수치 범위의 사용은 모든 가능한 하위범위, 그 범위 내의 모든 개별 수치 값, 예를 들어 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분수를 명시적으로 포함한다.

달리 지시되지 않는 한, 일련의 요소 앞에 있는 "적어도"라는 용어는 시리즈의 모든 요소를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 당업자는 본원에 기술된 본 발명의 특정 실시양태에 대한 많은 등가물을 일상적인 실험을 사용하여 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.

본원에 사용된 용어 "포함하다", "포함하는", "포함한다", "포함한", "가지고 있다", "갖는", "함유하다" 또는 "함유하는" 또는 이의 임의의 다른 변형은 언급된 정수 또는 정수 그룹을 포함하지만 다른 정수 또는 정수 그룹을 배제하지 않는 것을 의미하며 비배타적이거나 개방적인 것으로 의도된 것임이 이해될 것이다. 예를 들어, 요소 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치는 반드시 이들 요소에만 한정되는 것은 아니며, 그러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치에 명시적으로 열거 또는 고유하지 않은 다른 성분을 포함할 수 있다. 또한, 반대로 명시적으로 언급되지 않는 한, "또는"은 배타적 또는 배타적이지 않은 것을 의미한다. 예를 들어, 조건 1 또는 2는 다음 중 하나에 의해 충족된다: 1이 사실 (또는 존재), 2가 사실이 아님 (또는 존재하지 않음)이고, 1이 사실이 아님 (또는 존재하지 않음), 2가 사실 (또는 존재)이고, 1과 2가 모두 사실 (또는 존재)이다.

또한, 본 발명의 구성 요소의 치수 또는 특성을 언급할 때 본원에 사용된 용어 "약", "대략", "일반적으로", "실질적으로" 및 유사한 용어는 기술된 치수/특성이 엄격한 경계 또는 파라미터가 아니며, 당업자가 이해하는 바와 같이 기능상 동일하거나 유사한 작은 변형을 배제하지 않음을 가리키는 것으로 이해되어야 한다. 최소한, 수치 파라미터를 포함하는 이러한 참조는 당업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리(예를 들어, 반올림, 측정 또는 다른 체계적 오차, 제조 공차 등)를 사용하여 최소 유효 자릿수를 변화시키지 않는 변형을 포함할 것이다.

본 발명은 이를 필요로 하는 인간 대상에서 뇌염과 같은 심각한 유해 사례를 유발하지 않으면서 타우, 바람직하게는 포스포릴화된 타우 및 풍부한 쌍나선 필라멘트(ePHF) 중 적어도 하나에 대한 항체를 유도하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 방법은 면역원성 담체에 공유적으로 연결된 타우 포스포펩티드를 포함하는 접합체의 유효량을 대상에게 직접적으로 또는 링커를 통해 투여하는 것을 포함한다.

본 발명에서 용어 "항포스포릴화 타우 항체"는 타우의 아미노산 서열 중 하나 이상의 위치에 있는 아미노산 잔기에서 포스포릴화된 타우에 결합하는 항체를 지칭한다. 포스포릴화된 아미노산 잔기는 예를 들어 세린(Ser), 트레오닌(Thr) 또는 티로신(Tyr)일 수 있다. 항포스포릴화 타우 항체가 결합하는 포스포릴화 타우 상의 부위는 바람직하게는 알츠하이머병과 같은 신경퇴행성 질환에서 특이적으로 포스포릴화되는 부위이다. 항포스포릴화 타우 항체가 결합하는 포스포릴화 타우 부위의 예는 예를 들어 Tyr18, Ser199, Ser202, Thr205, Thr212, Ser214, Ser396, Ser404, Ser409, Ser422, Thr427을 포함한다. 본 출원 전반에 걸쳐 사용된 바와 같이, 아미노산 위치는 GenBank 접근 번호 NP_005901.2에 표시된 아미노산 서열을 갖는 인간 미세소관 관련 단백질 타우 이소형 2의 서열을 참조하여 제공된다.

투여 시 항포스포릴화 타우 항체를 유도하는 능력은 약학적 조성물로 투여되는 면역원성 타우 펩티드(들)에 대한 항체, 예를 들어, IgG 또는 IgM 항체의 존재에 대해 대상으로부터의 생물학적 샘플(예를 들어, 혈액, 혈장, 혈청, PBMC, 소변, 타액, 대변, 간질액(CSF) 또는 림프액)을 검사하여 결정될 수 있다(예를 들어 Harlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor Press 참조). 예를 들어, 면역원을 제공하는 조성물의 투여에 반응하여 생성된 항체의 역가는 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA), 기타 ELISA 기반 분석(예를 들어, MSD-Meso Scale Discovery), 도트 블롯, SDS-PAGE 젤, ELISPOT 또는 항체 의존성 세포 식균 작용(ADCP) 분석에 의해 측정될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "유해 사건"(AE)은 반드시 치료와 인과 관계를 갖는 것은 아닌, 의약품이 투여된 환자에게서 발생하고 임의의 예상치 못한 의학적 사건을 지칭한다. 본 발명의 실시양태에 따르면, AE는 다음 정의를 사용하여 심각도가 올라가는 3점 척도로 평가된다: 경도(등급 1) - 대상이 쉽게 견딜 수 있고 최소한의 불편함을 유발하며 일상 활동을 방해하지 않는 AE를 지칭함; 중등도(등급 2), 정상적인 일상 활동을 방해할 만큼 충분히 불편하고 개입이 필요할 수 있는 AE를 지칭함; 중증(등급 3), 정상적인 일상 활동을 방해하고 일반적으로 치료 또는 기타 개입이 필요한 AE를 지칭함. 중증 AE(SAE)는 다음 결과 중 하나를 초래하는 모든 용량에서 발생하는 임의의 AE일 수 있다: 사망(여기서 사망은 사건이 아니라 결과임); 생명 위협(사건 당시 환자가 사망할 위험이 있는 사건을 지칭함); 이는 더 심각했다면 가정적으로 사망을 초래할 수 있는 사건을 지칭하지 않는다; 환자 입원, 예를 들어 계획되지 않은 야간 입원 또는 기존 입원의 연장; 정상적인 생활 기능을 수행하는 능력의 지속적이거나 심각한 무능력 또는 실질적인 중단; 선천적 기형/선천적 결함; 환자를 위험에 빠뜨릴 수 있거나 위에 나열된 다른 결과 중 하나를 예방하기 위해 의학적 또는 외과적 개입이 필요할 수 있는 중대한 의학적 사건(조사자 판단에 따름)(예를 들어, 알레르기성 기관지 경련 또는 혈액 질환에 대한 응급실 또는 가정에서의 집중 치료 또는 입원을 초래하지 않는 경련). 입원은 병원에 공식적으로 입원하는 것이다. 입원 또는 입원의 연장은 AE가 심각하다는 기준을 구성하지만; 그 자체로는 SAE로 간주되지 않는다. AE가 없는 경우, 참여 조사자는 입원 또는 입원 연장을 SAE로 보고해서는 안 된다. 이는 다음과 같은 상황에 해당될 수 있다: 프로토콜에서 요구하는 절차를 위해 입원 또는 입원 연장이 필요한 경우; 또는 입원 또는 입원 연장이 센터에서 따르는 일상적인 절차의 일부인 경우(예를 들어, 수술 후 스텐트 제거). 이는 연구 파일에 기록되어야 한다. 연구 기간 동안 악화되지 않은 기존 질환의 선택적 치료를 위한 입원은 AE로 간주되지 않는다.

입원 중에 발생하는 합병증은 AE이다. 합병증으로 인해 입원이 연장되거나 다른 SAE 기준을 충족하는 경우 해당 사건은 SAE이다.

본원에서 사용된 용어 "뇌염"은 감염성 및 비감염성 원인으로 인해 발생할 수 있는 뇌의 염증을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "뇌수막염"은 뇌 수막 및 뇌의 감염 또는 염증을 특징으로 하는 상태를 지칭한다. 뇌염 또는 수막뇌염의 진단은 본 개시 내용을 고려하여 당업자에게 공지된 기술, 예를 들어 임상, 신경학적 및 정신과 검사, 혈액 및 CSF 샘플링을 포함하는 생물학적 샘플링, MRI 스캐닝 및 뇌파검사(EEG)에 의해 결정될 수 있다.

본원에서 사용된 용어 "타우" 또는 "타우 단백질"(미세소관 관련 단백질 타우, MAPT, 신경원섬유 매듭 단백질, 쌍 나선형 필라멘트-타우, PHF-타우, MAPTL, MTBT1이라고도 함)은 다수의 이소형을 갖는 풍부한 중추 및 말초 신경계 단백질을 지칭한다. 인간 중추 신경계(CNS)에는, 선택적 스플라이싱으로 인해 크기가 352 내지 441 아미노산 길이의 범위인 6개의 주요 타우 이소형이 존재한다(Hanger et al., Trends Mol Med. 15:112-9, 2009). 타우의 예에는 CNS의 타우 이소형, 예컨대 GenBank 접근 번호 NP_005901.2로 표시된 아미노산 서열을 갖는 인간 타우 이소형 2와 같이 4개의 반복부와 2개의 삽입부를 가지는 미세소관 관련 단백질 타우 이소형 2라고도 불리는 441개 아미노산의 가장 긴 타우 이소형(4R2N)이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 타우의 다른 예로는 GenBank 접근 번호 NP_058525.1로 표시된 아미노산 서열을 갖는 인간 타우 이소형 4와 같이 3개의 반복부가 있고 삽입부가 없는 미세소관 관련 단백질 타우 이소형 4라고도 불리는 352개 아미노산 길이의 가장 짧은(태아) 이소형(3R0N)이 있다. 타우의 예는 또한 300개의 추가 잔기(엑손 4a)를 함유하는 말초 신경에서 발현된 "빅 타우" 이소형을 포함한다. Friedhoff et al., Biochimica et Biophysica Acta 1502 (2000) 122-132. 타우의 예는 mRNA 전사체 6762 뉴클레오티드 길이(NM_016835.4)에 의해 인코딩된 758 아미노산-길이 단백질인 인간 빅 타우, 또는 이의 이소형을 포함한다. 예시된 인간 빅 타우의 아미노산 서열은 GenBank 접근 번호 NP_058519.3에 제시되어 있다. 본원에 사용된 용어 "타우"는 인간 이외의 종, 예컨대 필리핀 원숭이(Macaca Fascicularis), 사이노몰거스 원숭이 또는 Pan troglodytes(침팬지)으로부터의 타우 상동체를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "타우"는 돌연변이, 예를 들어, 전장 야생형 타우의 점 돌연변이, 단편, 삽입, 결실, 및 스플라이스 변이체를 포함하는 단백질을 포함한다. 용어 "타우"는 또한, 타우 아미노산 서열의 번역후 변형을 포함한다. 번역후 변형은 포스포릴화를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

본원에 사용된 용어 "펩티드" 또는 "폴리펩티드"는 아미노산 잔기, 관련 자연 발생 구조 변이체 및 펩티드 결합을 통해 연결된 이의 합성 비자연 발생 유사체로 구성된 중합체를 지칭한다. 상기 용어는 임의의 크기, 구조 또는 기능의 펩티드를 지칭한다. 전형적으로, 펩티드는 적어도 3개의 아미노산 길이를 가진다. 펩티드는 자연 발생, 재조합 또는 합성, 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 합성 펩티드는 예를 들어 자동 폴리펩티드 합성기를 사용하여 합성될 수 있다. 타우 펩티드의 예는 약 5 내지 약 30개 아미노산 길이, 바람직하게는 약 10 내지 약 25개 아미노산 길이, 보다 바람직하게는 약 16 내지 약 21개 아미노산 길이의 타우 단백질의 임의의 펩티드를 포함한다. 본 개시에서, 펩티드는 표준 3 또는 1 문자 아미노산 약어를 사용하여 N에서 C 말단으로 열거되며, 여기서 포스포 잔기는 "p"로 표시된다. 본 발명에 유용한 타우 펩티드의 예는 서열 번호 1 내지 12 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 타우 펩티드, 또는 서열 번호 1 내지 12 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 타우 펩티드를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

항체의 결합력은 본 개시내용의 관점에서 당업계에 공지된 방법을 사용하여 결합력 지수에 의해 측정될 수 있다. 특정 항원에 대한 항체의 역가는 코팅된 항원의 두 가지 서로 다른 농도에서 측정된다: 하나는 모든 항체가 항원에 결합할 수 있는 포화 농도이고, 다른 하나는 가장 높은 결합 능력을 가진 항체만 항원에 결합할 수 있는 낮은 농도이다. 본원에서 사용된 "결합력 지수"는 항원의 저밀도 코팅과 고밀도 코팅에서 측정된 항체 역가 수준의 비율을 지칭한다. 예를 들어, ePHF 또는 pTau와 같은 항원에 대한 항체의 결합력은 면역화 후 또는 상이한 면역화 후 여러 시점에서 측정하여 결합력(결합력 지수로 측정)이 시간이 지남에 따라 증가하는지 여부를 평가할 수 있다. 본원에 사용된, 항원에 대한 "증가된 결합력" 또는 "결합 증가 결합력"을 갖는 항체는 치료 또는 면역화 과정 동안 시간이 지남에 따라 항원에 대한 결합력 지수가 증가된 항체를 지칭한다. 증가된 결합력은 항체의 잠재적인 친화성 성숙을 암시한다.

본원에서 사용된 용어 "포스포펩티드" 또는 "포스포-에피토프"는 하나 이상의 아미노산 잔기에서 포스포릴화된 펩티드를 지칭한다. 타우 포스포펩티드의 예에는 하나 이상의 포스포릴화된 아미노산 잔기를 포함하는 임의의 타우 펩티드가 포함된다. 당업자에게 공지된 임의의 적합한 타우 포스포펩티드가 본 개시내용의 관점에서 접합체에 사용될 수 있다. 특정 실시양태에 따르면, 하나 이상의 타우 포스포펩티드는 서열 번호 1 내지 3 또는 5 내지 12 중 하나의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 1 내지 3 또는 5 내지 12 중 하나의 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 제시된 아미노산 잔기 중 하나 이상은 포스포릴화된다. 바람직하게는, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 1 내지 3 중 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 비정상적인 포스포릴화된 타우는 신경독성이 있고 신경퇴행성에 기여하는 불용성 올리고머로 쉽게 응집된다(Goedert et al, 1991). 올리고머는 소위 쌍을 이루는 나선형 필라멘트(PHF)의 매듭으로 진행된다(Alonso et al., 2001). 신경원섬유 매듭 병리의 정도는 AD 대상의 치매 정도와 상관관계가 있는 것으로 일관되게 나타났다(Bierer et al, 1995; Braak and Braak, 1991; Delacourte, 2001).

본 발명에 유용한 타우 펩티드는 고체상 펩티드 합성 또는 재조합 발현 시스템에 의해 합성될 수 있다. 자동 펩티드 합성기는 Applied Biosystems(Foster City, CA)와 같은 수많은 공급업체로부터 상업적으로 구입 가능하다. 재조합 발현 시스템은 박테리아, 예컨대 대장균(E. coli), 효모, 곤충 세포 또는 포유동물 세포를 포함할 수 있다. 재조합 발현을 위한 절차는 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (CSHP Press, NY 2d ed., 1989)]에 기술되어 있다.

접합체

본 발명에 유용한 접합체의 예는 미국 특허 공개 번호 US 2019/0119341에 기술된 타우 포스포펩티드 접합체를 포함하지만 이에 제한되지는 않으며, 이의 개시내용은 그 전체가 본원에 참조로 원용된다.

특정 측면에 따르면, 접합체는 하기 구조:

또는 화학식 (II)의 구조를 갖는다:

[화학식 (II)]

상기 식에서,

x는 0 내지 10의 정수이고;

n은 2 내지 15, 바람직하게는 3 내지 11의 정수이고;

담체는 면역원성 담체를 나타내고;

타우 펩티드는 타우 포스포펩티드를 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "면역원성 담체"는 타우 펩티드에 커플링될 수 있는 면역원성 물질을 지칭한다. 타우 펩티드에 커플링된 면역원성 모이어티는 면역 반응을 유도하고 타우 펩티드에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 생성을 유도할 수 있다. 면역원성 모이어티는 단백질, 폴리펩티드, 당단백질, 복합 다당류, 입자, 핵산, 폴리뉴클레오티드 등을 포함하는 작동 모이어티로, 외래로 인식되어 숙주로부터 면역학적 반응을 이끌어낸다. 본 개시에 비추어 당업자에게 공지된 임의의 적합한 면역원성 담체가 본 발명에 사용될 수 있다. 특정 실시양태에 따라, 면역원성 담체는 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH), 파상풍 톡소이드, CRM197(비독성 형태의 디프테리아 독소), N. meningitidis로부터의 외막 단백질(OMP) 혼합물 또는 이의 유도체이다. 특정 실시양태에 따라, 면역원성 담체는 CRM197이다.

특정 실시양태에 따라, 타우 펩티드는 링커를 통해 담체에 접합된다. 본원에 사용된 용어 "링커"는 면역원성 담체를 타우 펩티드에 연결하는 화학적 모이어티를 지칭한다. 본 개시에 비추어 당업자에게 공지된 임의의 적합한 링커가 본 발명에서 사용될 수 있다. 링커는 예를 들어 단일 공유 결합, 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알킬 모이어티, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 링커, 펩티드 링커, 당-기반 링커 또는 절단 가능한 링커, 예컨대 이황화 결합 또는 프로테아제 절단 부위, 또는 아미노산, 또는 이들의 조합일 수 있다. 링커의 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 숙신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트(SBAP), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르(MBS), 또는 하나 이상의 아미노산, 예컨대 Cys, Lys, 또는 때때로 Ser 또는 Thr 또는 이들 조합의 하나 이상을 포함할 수 있다.

특정 실시양태에 따르면, x는 1 내지 10, 2 내지 9, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 또는 2 내지 3의 정수이다. 특정 실시양태에 따르면, x는 3이다.

특정 실시양태에 따르면, 다수의 타우 포스포펩티드가 하나의 면역원성 담체에 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, n은 2 내지 15, 3 내지 11, 3 내지 9, 3 내지 8, 또는 3 내지 7이다.

특정 실시양태에 따르면, 접합체는 하나 이상의 타우 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 접합체의 타우 펩티드는 동일하거나 상이할 수 있다.

특정 실시양태에 따르면, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 1 내지 3 중 하나의 아미노산 서열로 이루어진다.

특정 실시양태에 따르면, 링커는 (C2H4O)x-시스테인-아세트아미도프로피온아미드 또는 m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르 - 시스테인 -(C2H4O)x를 포함하며, 여기서 x는 0 내지 10의 정수, 예컨대 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.

특정 실시양태에 따르면, 담체는 링커를 통해 타우 포스포펩티드의 N-말단에 공유적으로 연결된다.

다른 특정 실시양태에 따르면, 담체는 링커를 통해 타우 펩티드의 C-말단에 공유적으로 연결된다.

특정 실시양태에 따르면, 접합체는 하기 구조를 갖는다:

상기 식에서 n은 2 내지 15, 바람직하게는 3 내지 11, 보다 바람직하게는 3 내지 7의 정수이고, VVYKS(p)PVVSGDTS(p)PRHL-CONH₂는 서열 번호 2의 포스포-타우 펩티드를 포함한다.

본 발명의 접합체는 본 개시내용의 관점에서 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 접합체는 숙신이미딜-3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트(SBAP)를 CRM197의 아미노기와 반응시켜 아미드 결합을 형성함으로써 형성될 수 있다:

이후 이 CRM197 전구체를 N-말단 또는 C-말단에서 유리 친핵성 티올기를 갖는 PEG-시스테인 링커에 접합된 타우 펩티드(예를 들어 서열 번호 2의 타우 포스포펩티드)와 반응시켜 타우 포스포펩티드 접합체를 형성할 수 있다.

약학적 조성물

약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체와 함께 본 발명에 유용한 유효량의 접합체를 포함하는 약학적 조성물은 본 개시내용의 관점에서 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 조성물 중 각 성분의 최적 비율은 본 개시내용의 관점에서 당업자에게 널리 공지된 기술에 의해 결정될 수 있다.

약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체는 당업계에 잘 알려져 있다(Remington's Pharmaceutical Science(15th ed.), Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1980 참조). 약학적 조성물의 바람직한 제형은 의도된 투여 방식 및 치료적 적용에 좌우된다. 조성물은 약학적으로 허용되는 비독성 담체 또는 희석제를 포함할 수 있으며, 이는 동물 또는 인간 투여용으로 약학적 조성물을 제형화하는데 일반적으로 사용되는 비히클로 정의된다. 희석제는 조합물의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않도록 선택된다. 이러한 희석제의 예는 증류수, 생리적 인산 완충 염수, 링거액, 덱스트로스 용액 및 행크액이다. 또, 약학적 조성물 또는 제형은 또한 다른 담체, 애쥬번트, 또는 비독성, 비치료성, 비면역원성 안정화제 등을 포함할 수 있다. 담체, 부형제 또는 희석제의 특성은 특정 적용을 위한 투여 경로에 좌우될 것이라는 것이 이해될 것이다.

약학적 조성물은 동일한 면역원성 타우 펩티드와의 접합체의 혼합물을 함유할 수 있다. 대안적으로, 약학적 조성물은 본 발명의 다양한 면역원성 타우 펩티드와의 접합체의 혼합물을 함유할 수 있다.

특정 실시양태에 따르면, 접합체는 대상에서 원하는 면역 반응을 달성하기 위해 적합한 애쥬번트와 조합하여 투여될 수 있다. 적합한 애쥬번트는 본 발명의 접합체 투여 전, 투여 후 또는 투여와 동시에 투여될 수 있다. 바람직한 애쥬번트는 반응의 질적 형태에 영향을 미치는 면역원의 구조적 변화를 일으키지 않고 면역원에 대한 내재적 반응을 증가시킨다.

일 실시양태에서, 본 출원의 방법에 유용한 애쥬번트는 수산화알루미늄, 인산알루미늄 및 황산알루미늄과 같은 알루미늄 염(명반(alum))이다.

다른 실시양태에서, 본 출원의 방법에 유용한 애쥬번트는 CpG 올리고뉴클레오티드와 같은 TLR 작용제이다. 본원에 사용된 용어 "CpG 올리고뉴클레오티드", "CpG 올리고데옥시뉴클레오티드" 또는 "CpG ODN"은 적어도 하나의 CpG 모티프를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, "올리고뉴클레오티드", "올리고데옥시뉴클레오티드" 또는 "ODN"은 연결된 복수의 뉴클레오티드 단위로부터 형성된 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 이러한 올리고뉴클레오티드는 기존 핵산 공급원으로부터 얻을 수 있거나 합성 방법에 의해 생산될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "CpG 모티프"는 포스페이트 결합 또는 포스포디에스테르 백본 또는 포스포로티오에이트(ps), 포스포로디티오에이트(ps2), 메틸포스포네이트(mp) 또는 메틸포스포로티오에이트(rp)와 같은 다른 뉴클레오티드 간 연결에 의해 연결된 메틸화되지 않은 시토신-포스페이트-구아닌(CpG) 디뉴클레오티드(즉, 시토신(C)에 이어 구아닌(G))를 함유하는 뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 메틸포스포네이트 및 메틸포스포로티오에이트는 안정화 뉴클레오티드 연결인 반면 포스포디에스터는 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드 연결이다. 올리고뉴클레오티드 포스포로티오에이트는 전형적으로 Rp 및 Sp 포스포로티오에이트 결합의 무작위 라세미 혼합물로 합성된다. 당업자에게 공지된 임의의 적합한 CpG 올리고뉴클레오티드가 본 개시내용의 관점에서 본 발명에 사용될 수 있다. 이러한 CpG 올리고뉴클레오티드의 예에는 CpG2006(CpG 7909로도 알려짐), CpG 1018, CpG2395, CpG2216 또는 CpG2336이 포함되지만 이에 제한되지 않는다.

특정 실시양태에 따르면, CpG 올리고뉴클레오티드는 지질화되며, 즉 지질 모이어티에 접합(공유 결합)된다. 본원에 사용된 "지질 모이어티"는 친유성 구조를 함유하는 모이어티를 지칭한다. 알킬기, 지방산, 트리글리세리드, 디글리세리드, 스테로이드, 스핑고지질, 당지질 또는 인지질, 특히 콜레스테롤과 같은 스테롤 또는 지방산 등의 지질 모이어티가 핵산과 같은 고도로 친수성인 분자에 부착되는 경우, 친수성 분자의 혈장 단백질 결합 및 결과적으로 순환 반감기를 실질적으로 향상시킬 수 있다. 또한, 지단백질과 같은 특정 혈장 단백질에 대한 결합은 상응하는 지단백질 수용체(예를 들어, LDL-수용체 HDL-수용체 또는 스캐빈저 수용체 SR-B1)를 발현하는 특정 조직에서의 흡수를 증가시키는 것으로 나타났다. 특히, 포스포펩티드 및/또는 CpG 올리고뉴클레오티드에 접합된 지질 모이어티는 상기 펩티드 및/또는 올리고뉴클레오티드를 소수성 모이어티를 통해 리포솜의 막에 고정시킬 수 있다.

이러한 애쥬번트는 MPLA 류(3 De-O-아실화 모노포스포릴 지질 A(MPLTM), 모노포스포릴 헥사-아실 지질 A 3-데아실 합성(3D-(6-아실) PHAD®), PHAD™, PHAD®-504, 3D-PHAD®) 지질 A), 폴리글루탐산 또는 폴리리신 등의 중합체 또는 단량체 아미노산과 같은 다른 특정 면역자극제와 함께 또는 없이 사용될 수 있다. 이러한 애쥬번트는 다른 특정 면역자극제, 예컨대 뮤라밀 펩티드(예를 들어, N-아세틸뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-노르뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민(nor-MDP), N-아세틸뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'디팔미토일-sn-글리세로-3-하이드록시포스포릴옥시)-에틸아민(MTP-PE), N-아세틸글루코사미닐-N-아세틸뮤라밀-L-Al-D-이소글루-L-Ala-디팔미톡시 프로필아미드(DTP-DPP) Theramide™), 또는 다른 박테리아 세포벽 성분과 함께 또는 없이 사용될 수 있다. 수중유 에멀젼은 미세유동화기를 사용하여 서브마이크론 입자로 제형화된 5% 스쿠알렌, 0.5% Tween 80 및 0.5% Span 85(임의로 다양한 양의 MTP-PE를 함유함)를 함유하는 MF59(WO 90/14837 참조); 서브마이크론 에멀젼으로 미세유동화되거나 더 큰 입자 크기의 에멀젼을 생성하기 위해 와동된 10% 스쿠알렌, 0.4% Tween 80, 5% 플루로닉-차단 중합체 L121 및 thr-MDP를 함유하는 SAF; 및 0.2% Tween 80, 및 모노포스포릴 지질 A(MPLTM), 트레할로스 디마이콜레이트(TDM) 및 세포벽 골격(CWS)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 세균 세포벽 성분을 함유하는 Ribi^™ 애쥬번트 시스템(RAS)(Ribi ImmunoChem, Hamilton, Mont.), 바람직하게는 MPLTM + CWS(Detox™)를 포함한다. 다른 애쥬번트는 CFA(완전 프로인트 애쥬번트(Complete Freund's Adjuvant)) 및 인터루킨(IL-1, IL-2 및 IL-12)과 같은 사이토카인, 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF) 및 종양 괴사 인자(TNF)를 포함한다.

특정 실시양태에서, 본 출원의 방법에 유용한 약학적 조성물은 본원에 기재된 하나 이상의 적합한 애쥬번트, 예를 들어 알루미늄 염, 예를 들어 수산화알루미늄, 인산알루미늄 및/또는 황산알루미늄, 및/또는 CpG, 예를 들어 CpG2006(CpG 7909라고도 함), CpG 1018, CpG2395, CpG2216 또는 CpG2336을 추가로 포함한다. 일 실시양태에서, 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 수산화알루미늄, CpG 7909 및 링커를 통해 CRM197에 공유적으로 연결된 타우 포스포펩티드의 접합체를 포함한다.

다른 실시양태에서, 약학적 조성물은 본원에 기술된 접합체, 하나 이상의 애쥬번트, 및 히스티딘 또는 글리신과 같은 하나 이상의 아미노산, 글루코스 또는 수크로스와 같은 하나 이상의 탄수화물, 및/또는 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20 등과 같은 계면활성제를 포함하는 완충제를 포함한다.

사용 방법

본 출원의 일반적인 측면은 유효량의 포스포릴화된 타우 접합체를 포함하는 약학적 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태를 앓고 있는 인간 대상에서 타우 단백질에 대한 면역 반응을 안전하게 유도하는 방법에 관한 것이다. 특정 측면에 따르면, 면역 반응은 타우 단백질, 바람직하게는 포스포릴화된 타우 단백질, 보다 바람직하게는 ePHF에 대해 유도된다.

본원에 사용된 용어 "유효량"은 대상에서 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 이끌어내는 활성 성분 또는 구성 성분의 양을 지칭한다. 특정 유효 용량의 선택은 치료 또는 예방할 질환, 관련 증상, 환자의 체질량, 환자의 면역 상태 및 숙련자에게 알려진 기타 요인을 고려하여 당업자가 (예를 들어 임상 시험을 통해) 결정할 수 있다. 제형에 사용되는 정확한 용량은 투여 방식, 투여 경로, 표적 부위, 환자의 생리적 상태, 투여되는 기타 약물 및 질환의 중증도에 따라 달라지며, 의사의 판단 및 환자 개개인의 상황에 따라 결정되어야 한다. 예를 들어, 면역원성 담체에 접합된 타우 포스포펩티드의 유효량은 애쥬번트가 투여되는지 여부에 따라 달라지며, 애쥬번트가 없는 경우 더 높은 용량이 필요하다. 유효 용량은 시험관 내 또는 동물 모델 시험 시스템에서 유도된 용량-반응 곡선을 통해 추정할 수 있다.

하나 이상의 타우 포스포펩티드가 면역원성 담체에 접합될 수 있기 때문에,접합체의 유효량은 면역원성 담체 단백질, 이에 접합된 하나 이상의 타우 포스포펩티드, 및 접합체 중 하나 이상의 링커(사용된 경우)의 총 중량을 포함한다. 본 출원의 실시양태에 따르면, 접합체의 유효량은 용량당 약 5 μg 내지 약 200 μg, 바람직하게는 용량당 약 15 μg 내지 약 150 μg, 예컨대 용량당 5 μg, 10 μg, 15 μg, 20 μg, 25 μg, 30 μg, 35 μg, 40 μg, 45 μg, 50 μg, 60 μg, 70 μg, 80 μg, 90 μg, 100 μg, 110 μg, 120 μg, 130 μg, 140 μg, 150 μg, 175 μg, 200 μg 또는 그 사이의 임의 값의 면역원성 담체이다. 바람직하게는 유효량은 용량당 15 μg, 최대 60 μg, 예컨대 45 μg, 50 μg, 55 μg, 60 μg, 또는 그 사이의 임의 값, 또는 최대 150 μg, 예컨대 120 μg, 125 μg, 130 μg, 135 μg, 140 μg, 145 μg, 150 μg, 또는 그 사이의 임의 값이다.

본원에 사용된 용어 "유도한다" 및 "자극한다" 및 이의 변형은 세포 활성의 임의의 측정 가능한 증가를 지칭한다. 면역 반응의 유도는 예를 들어 면역 세포 집단의 활성화, 증식 또는 성숙, 사이토카인의 생성 증가 및/또는 증가된 면역 기능의 다른 지표를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 면역 반응의 유도는 B 세포의 증식 증가, 항원-특이적 항체 생성, 항원-특이적 T 세포의 증식 증가, 수지상 세포 항원 제시 개선 및/또는 특정 사이토카인, 케모카인 및 공동-자극 마커의 발현 증가를 포함할 수 있다.

동물 또는 인간 유기체에 투여시 항-타우 면역 반응을 유도 또는 자극하는 능력은 관련 기술 분야에서 표준인 다양한 분석법을 사용하여 시험관 내 또는 생체 내에서 평가될 수 있다. 면역 반응의 개시 및 활성화를 평가할 수 있는 기술에 대한 일반적인 설명은, 예를 들어 [Coligan et al. (1992 and 1994, Current Protocols in Immunology; ed. J Wiley & Sons Inc, National Institute of Health)]를 참조한다. 세포 면역의 측정은 당 업계에 공지된 방법, 예를 들어 CD4⁺ 및 CD8⁺ T-세포로부터 유래된 것을 포함하는 활성화된 이펙터 세포에 의해 분비된 사이토카인 프로파일의 측정 (예를 들어, ELISPOT에 의한 IL-4 또는 IFN 감마-생산 세포의 정량화), 면역 이펙터 세포의 활성화 상태 결정 (예를 들어, 고전적인 [3H] 티미딘 흡수에 의한 T-세포 증식 분석), 감작된 대상에서 항원-특이적 T 림프구의 분석 (예를 들어, 세포 독성 분석에서 펩티드 특이적 용해 등)에 의해 수행될 수 있다

세포 및/또는 체액성 반응을 자극하는 능력은 대상으로부터의 생물학적 샘플 (예를 들어, 혈액, 혈장, 혈청, PBMC, 소변, 타액, 대변, CSF 또는 림프액)에 대해 약학적 조성물로 투여된 면역원성 타우 펩티드(들)에 대한 항체의 존재를 검사함으로써 결정될 수 있다 (예를 들어 Harlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor Press 참조). 예를 들어, 면역원을 제공하는 조성물의 투여에 반응하여 생성된 항체의 역가는 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA), 도트 블롯, SDS-PAGE 겔, ELISPOT 또는 항체-의존성 세포성 식세포 작용(ADCP) 분석에 의해 측정될 수 있다.

접합체 조성물은 예방적 및/또는 치료적 치료를 위해 비경구, 국소, 정맥내, 경구, 피하, 동맥내, 두개내, 복강내, 피내, 비강내 또는 근육내 수단으로 투여될 수 있다. 면역원성 제제의 가장 일반적인 투여 경로는 피하 또는 근육내 주사이다. 후자 유형의 주사는 가장 전형적으로 팔이나 다리 근육에서 수행된다.

프라이밍 및 부스팅 투여를 위한 요법이 투여 후 측정된 면역 반응에 기초하여 조정될 수 있다는 것을 당업자라면 쉽게 인식할 수 있을 것이다. 예를 들어, 부스팅 조성물은 일반적으로 프라이밍 조성물 투여 후 수주 또는 수개월, 예를 들어 프라이밍 조성물 투여 후 약 1주, 또는 2주, 또는 3주, 또는 4주, 또는 8주, 또는 16주, 또는 20주, 또는 24주, 또는 28주, 또는 32주, 또는 36주, 또는 40주, 또는 44주, 또는 48주, 또는 52주, 또는 56주, 또는 60주, 또는 64주, 또는 68주, 또는 72주, 또는 76주, 또는 1 내지 2년 후 투여된다.

특정 측면에 따르면, 하나 이상의 부스팅 면역화가 투여될 수 있다. 각각의 프라이밍 및 부스팅 조성물 중의 항원은 많은 부스팅 조성물이 사용되더라도 동일할 필요는 없지만 항원 결정자를 공유하거나 서로 실질적으로 유사해야 한다.

당업자에게 알려진 바와 같이, 면역원성, 부스트 가능성 및 지속성은 백신의 유효성에 대한 중요한 고려사항이다. 본원에 기술된 유효량의 접합체의 투여가 이를 필요로 하는 환자, 예컨대 알츠하이머병(예를 들어, 경도 내지 중등도의 알츠하이머병 또는 초기 알츠하이머병) 또는 알츠하이머병으로 인한 경도 인지 장애(MCI)의 치료가 필요한 환자에서 pTau에 대한 효능있는 항체 반응을 유도할 수 있는 것이 발견되었다. 항체 반응은 지속 가능하며, 예를 들어 적어도 6주 동안 지속된다. 항체 반응은 또한 1회 이상의 후속 부스팅 투여에 의해 부스팅된다. 본원에 사용된 바와 같이, 항체 반응과 관련하여 "부스팅"은 후속 투여의 투여로부터 적어도 2주 후에 측정된 바와 같이 후속 투여 후에 유지되거나 강화되는 항체 반응을 지칭한다. 예를 들어, 후속 투여 전의 항체 역가와 비교하여 후속 투여 2주 후에 측정했을 때 항체 역가가 증가한 경우 항체 반응은 후속 투여에 의해 "부스트"된 것이다.

특정 실시양태에 따르면, 인간 대상은 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태의 치료를 필요로 한다.

본원에 사용된 "신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태"는 본 개시에 비추어 당업자에게 공지된 임의의 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태를 포함한다. 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태의 예는 신경원섬유 병변의 형성에 의해 유발되거나 이와 관련된 신경퇴행성 질환 또는 장애, 예컨대 타우병증으로 지칭되는 타우 관련 질환, 장애 또는 상태를 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태는 알츠하이머병, 파킨슨병, 크로이츠펠트-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만 슈트로이슬러 샤잉커(Gerstmann-Straeussler-Scheinker) 병, 봉입체 근염, 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 맥관장애, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 괌 파킨슨증-치매 복합체(parkinsonism-dementia complex of Guam), 신경원섬유 매듭을 동반하는 비-괌(non-Guamanian) 운동 신경세포 질환, 은친화성 과립성 치매(argyrophilic grain dementia), 피질기저핵 변성, 루이 치매 근위축성 측삭 경화증, 석회화가 있는 확산성 신경원섬유 매듭, 전측두엽 치매, 바람직하게는 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반하는 전측두엽 치매(FTDP-17), 이마관자엽 치매, 할러포르텐-스파츠병(Hallervorden-Spatz disease), 다계통 위축, C형 니만-픽병(Niemann-Pick disease type C), 픽병, 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비, 아급성 경화성 범뇌염, 매듭 단독 치매, 뇌염 후 파킨슨증, 근긴장성 이영양증, 만성 외상성 뇌병증(CTE), 일차 연령 관련 타우병증(PART), 대뇌 맥관병증 또는 루이소체 치매(LBD)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 타우 및 아밀로이드 병리의 공존을 나타내는 임의의 질환 또는 장애를 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태는 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증이다. 바람직한 실시양태에 따르면, 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태는 알츠하이머병이다.

알츠하이머병의 임상 과정은 인지 및 기능 장애의 점진적인 패턴으로 여러 단계로 나눌 수 있다. 단계는 예를 들어 NIA-AA 연구 프레임워크(Research Framework)(예를 들어, Dubois et al., Alzheimer's & Dementia 12 (2016) 292-323, Dubois et al., Lancet Neurol 2014; 13: 614-29, Jack et al., Alzheimer's & Dementia 14 (2018) 535-562 참조) 및 임상적 치매 평가 척도(CDR)(예를 들어, Berg L. Clinical Dementia Rating (CDR). Psychopharmacol Bull. 1988;24(4):637-639. 참조)를 포함하여 당업계에 공지된 등급 척도를 사용하여 정의될 수 있으며, 상기 각 내용은 전체 내용이 참조로 본원에 원용된다.

예를 들어, NIA-AA(National Institute on Aging-Alzheimer's Association) 연구 프레임워크는 신경병리학적 변화 또는 바이오마커를 통해 AD를 생물학적으로 정의하고 인지 장애를 질병의 정의가 아닌 질병의 증상/징후로 취급한다(예를 들어 Clifford RJ, NIA-AA Research Framework: Toward a biological definition of Alzheimer's disease. Alzheimer's & Dementia 14 (2018) 535-562 참조: 그 내용은 본원에 참조로 원용된다). NIA-AA 정의에 따르면, 정상적인 병리학적 타우 바이오마커와 함께 Aβ 침착의 바이오마커 증거(비정상 아밀로이드 PET 스캔 또는 낮은 CSF Aβ42 또는 Aβ42/Aβ40 비율)만 있는 개인에게는 "알츠하이머 병리학적 변화"라는 라벨이 부여되고, Aβ와 병리학적 타우의 바이오마커 증거가 모두 존재하는 경우 "알츠하이머병"이라는 용어가 적용된다. NIA-AA는 또한 AD의 중증도 단계를 분류하는 시스템을 개발하였다. 특히, NIA-AA 정의에 따른다(위의 Clifford RJ, 2018의 텍스트 박스 2에서 재인용):

정의:

A: Aβ 바이오마커는 개인이 알츠하이머 연속체에 속하는지 여부를 결정한다.

T: 병리학적 타우 바이오마커는 알츠하이머 연속체에 있는 사람이 알츠하이머병을 앓고 있는지 여부를 결정한다.

단계 중증도:

(N): 신경퇴행성/신경 손상 바이오마커

(C): 인지 증상

A와 T는 알츠하이머병을 정의하는 특정 신경병리학적 변화를 나타내는 반면, (N)과 (C)는 알츠하이머병에 특이적이지 않으므로 괄호 안에 표시된다.

바람직한 실시양태에 따르면, 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태는 초기 알츠하이머병, 알츠하이머병으로 인한 경도 인지 장애(MCI) 또는 경도 알츠하이머병이다.

일부 실시양태에서, 신경퇴행성 질환, 장애 또는 상태는 경증 내지 중등도 알츠하이머병이다.

일부 실시양태에서, 치료가 필요한 대상은 뇌에서 아밀로이드 양성이지만 아직 유의한 인지 장애를 나타내지 않는다. 뇌 내 아밀로이드 침착은 PET 스캔, 면역침강 질량 분석법 또는 기타 방법(예를 들어, CSF 바이오마커의 사용)과 같은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 검출할 수 있다(Clifford RJ, NIA-AA Research Framework: Toward a biological definition of Alzheimer's disease. Alzheimer's & Dementia 14 (2018) 535-562).

다른 실시양태에서, 치료가 필요한 인간 대상은 AD 병리와 일치하는 비정상적인 수준의 CSF Ab베타 아밀로이드 42(Aß42)를 갖는다. 예를 들어, 대상은 AD 병리와 일치하는 낮은 수준의 CSF Aβ42 또는 낮은 Aβ42/Aβ40 비율을 가질 수 있다(예를 들어, Clifford RJ, 2018, 상기 문헌 및 그 안의 참고문헌 참조, 이들 각각의 내용은 그 전체가 참고로 본 명세서에 원용됨).

특정 측면에 따르면, 하나 이상의 추가 치료가 타우 포스포펩티드 접합체와 조합하여 투여될 수 있다. 추가 치료는 접합체 투여 전, 투여 후 또는 투여와 동시에 타우 항원을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 추가 조성물 중의 항원은 동일할 필요는 없지만 항원 결정기를 공유하거나 접합체의 타우 포스포펩티드와 실질적으로 유사해야 한다.

따라서, 특정 실시양태에서, 본 출원의 방법은 리포솜의 표면 상에 제시된 타우 포스포펩티드를 포함하는 리포솜을 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 본 발명에 유용한 타우 리포솜의 예는 미국 특허 번호 8,647,631 및 9,687,447, 및 미국 특허 공개 번호 US 2019/0119341에 기술된 타우 리포솜을 포함하지만 이에 제한되지는 않으며, 각각의 개시 내용은 그 전체가 참조로 본원에 원용된다. 예를 들어, 본 출원에 유용한 리포솜은 타우 포스포펩티드; 헬퍼 T 세포 에피토프; 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드; 및 톨-유사 수용체 4 리간드를 함유하는 애쥬번트를 포함할 수 있으며; 여기서 타우 포스포펩티드는 리포솜의 표면 상에 제시된다.

특정 실시양태에서, 대상에게 유효량의 본 출원의 접합체를 투여하면 적어도 20주, 예컨대 적어도 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30주에 걸쳐 항-pTau IgG 또는 항-Tau IgG(비포스포릴화 타우 펩티드) 반응이 발생한다. 다른 실시양태에서, 대상에게 유효량의 본 출원의 접합체를 투여하면 인간 AD 뇌로부터 유래된 병리학적 ePHF 타우를 인식하는 IgG 반응이 발생하고, 여기서 반응은 적어도 20주, 예컨대 적어도 20 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30주에 걸쳐 지속된다.

본원에 사용된 용어 "조합하여"는 대상에게 2 이상의 치료법을 투여하는 것과 관련하여 복수의 치료법을 사용하는 것을 지칭한다. "조합하여"라는 용어의 사용은 치료법이 대상에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다.

필요한 경우, 조성물은 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 투여 형태를 포함할 수 있는 키트, 팩 또는 디스펜서로 제공될 수 있다. 예를 들어, 키트는 블리스터 팩과 같은 금속 또는 플라스틱 호일을 포함할 수 있다. 키트, 팩 또는 디스펜서는 투여 설명서를 동반할 수 있다.

특정 실시양태에 따르면, 키트는 본 발명의 실시양태에 따른 리포솜을 포함하는 약학적 조성물 및 본 발명의 실시양태에 따른 접합체를 포함하는 약학적 조성물 중 적어도 하나를 포함한다.

실시예

실시예 1. 접합 백신의 제조

펩티드 및 애쥬번트

본 연구에 사용된 타우 포스포펩티드(서열 번호 2)는 합성 중에 포스포 잔기를 첨가하여 합성적으로(Pepscan, NL) 생산하였다. 링커를 통해 CRM 담체에 공유적으로 연결된 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드를 포함하는 접합체는 본원에서 JACI-35.054로 지칭된다.

백신 펩티드를 폴리에틸렌 글리콜(PEG)-시스테인-아세트아미도프로피온아미드 링커를 통해 담체 단백질 CRM197에 접합시켰다. 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드는 합성 동안 포스포 잔기와 PEG3 스페이서를 첨가하여 합성적으로 생산하였다(Polypeptide Laboratories SAS). 숙신이미딜 3-(브로모아세트아미드)프로피오네이트(SBAP) 링커를 통해 담체 단백질 CRM197을 펩티드의 N-말단에 있는 시스테인에 접합시켜 JACI-35.054를 제조하였다. SBAP를 NHS 에스테르 반응 화학을 통해 CRM197 단백질 1차 아민(-NH2)에 결찰시켰다. 한외여과 및 정용여과(UF/DF)를 사용하여 과잉 SBAP 링커를 제거하였다. CRM197-SBAP 중간체를 타우 포스포펩티드에 접합시키고, 반응이 완료되면 과량의 L-시스틴을 첨가하여 반응을 종결시켜 접합 반응을 종료시켰다. 조 CRM197-펩티드 접합 산물을 Capto Q ImpRes(GE Healthcare) 크로마토그래피 컬럼을 사용하여 정제하고 염 등용매 방법을 사용하여 용출하였다. 이어서, 정제된 CRM197-펩티드 산물을 UF/DF를 사용하여 pH 8.1에서 20 mM 트리스, 250 mM 수크로스와 같은 트리스와 수크로스를 함유하는 완충액으로 제형화하였다. CRM197-타우 펩티드 약물 물질(DS) 스톡 용액은 0.01% PS80의 최종 농도에 도달하도록 10% PS80 스톡 버퍼와 같은 폴리소르베이트 80(PS80) 스톡 버퍼를 추가하여 생성하였다. 여과하기 전에 용액을 철저히 혼합하였다. 주사 전에, 스톡 용액을 PBS 및 CpG/명반으로, 예를 들어 0.8 mg/mL CRM197-타우 펩티드의 제1 농도로 희석한 다음, 최종 농도 30 ug/mL의 주사용 CRM197-타우 펩티드까지 PBS 및 CpG/명반으로 추가로 희석하였다. 대안적으로, CRM197-타우 펩티드 스톡 용액을 10 mM PBS(pH 7.3)에서 3.1 mg/mL의 농도로 유지하고 원하는 작업 농도에 도달할 때까지 PBS에서 추가로 희석하였다. 이어서, CpG 올리고뉴클레오티드, 명반 및 PBS를 첨가하여 CRM197-pTau 펩티드를 기준으로 30 ug/mL의 최종 농도에 도달시키고 최종 제형을 주사 전에 철저히 혼합하였다.

활성 백신으로 CNS 항원을 표적으로 삼는 데 있어 한 가지 우려 사항은 비특이적이거나 표적을 벗어난 염증이 원치 않는 신경병리학적 변화를 일으킬 수 있다는 것이다. 이를 조사하기 위해, 접합체 조성물로 면역화된 마우스의 전체 뇌를 수집하고 염색하여 혈관주위 또는 기타 세포 침윤을 시각화하였다. 면역화된 동물 중 어느 동물도 신경염증, 세포 침윤 또는 기타 바람직하지 않은 신경병리학적 변화의 징후를 보이지 않았다(데이터는 나타내지 않음). 이는 백신 유도 항체와 백신 접종에 대한 선천적 면역 반응이 마우스에서 신경병리학적 변화를 일으키지 않았음을 시사한다.

실시예 2. 붉은털원숭이(Rhesus Monkey)에서 JACI-35.054의 6개월 근육내 독성 연구

목적

전체 연구의 목적은 미경험(naive) 수컷 및 암컷 붉은털원숭이에게 약 6개월에 걸쳐 7회 근육내(i.m.) 주사한 후 JACI-35.054(JACI-35.054)의 독성을 확인하고 4주 회복 기간 후 모든 변화의 가역성을 평가하는 것이었다.

시험 품목과 참조 품목을 근육내 주사로 투여하였다. 대조군 동물에게는 최종 제형에서 활성 모이어티가 결여된 화합물을 투여받은 용량군과 동일한 치료 일정으로 투여하였다.

설계

적용된 연구 프로토콜은 다음과 같다(표 1).

^ACRM197-pTau 함량으로 표현된 용량.

^BTris 완충제, CpG7909 500 μg 및 수산화알루미늄 현탁액 562.5 μg/용량을 포함한다.

^cCRM197-pTau, CpG7909 500 μg 및 수산화알루미늄 현탁액 562.5 μg/용량을 포함한다.

시험 품목 JACI-35.054 조성물(저, 중간, 고용량 수준으로 각각 15, 50, 150 μg의 JACI-35.054; 및 500 μg의 CpG7909 및 562.5 μg의 수산화 알루미늄 현탁액을 함유) 및 참조 품목을 1, 29, 57, 85, 113, 141 및 169일에 근육내 주사로 투여하였다. 대조군 그룹은 참조 품목, Tris 완충액(활성 모이어티 대신), CpG7909 및 수산화 알루미늄 현탁액의 조합을 투여했다.

적응 기간부터 연구가 끝날 때까지 매주 체중을 평가하였다. 사전 검사 중 한 번, 네 번째 및 마지막 투여 후 5일에 검안경검사를 수행하였다. 사전 검사 동안과 네 번째 및 마지막 투여 후에 각 동물에 대해 심전도(사지 및 확장 리드)를 한 번 기록 하였다. 전처리 동안, 90일, 174일(메인 및 회복(Main and Recovery)) 및 207일(회복(Recovery))에 생존한 모든 동물에서 임상 병리학(혈액학, 응고, 임상 화학 및 요검사)을 위해 모든 동물로부터 혈액 및 소변 샘플을 한 번 수집하였다. ELISA에 의한 항-pTau, 항-CRM197 측정을 위한 혈청 혈액 샘플을 -14, 8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 99, 106, 120, 134, 148, 162, 176, 183일, (메인 및 회복) 및 190일, 204 및 211일(회복)에 수집하였다. CSF는 투여 전 및 부검 전에 한 번 수집하였다. 면역표현형검사를 위한 혈액을 투여 전, 169일 및 211일(회복 종료)에 수집하였다. PMBC를 -14일과 183일(메인 및 회복) 및 211일(회복)에 수집하였다(T 세포 반응에 대한 ELISpot). JACI-35.054(사전 검사 및 183일에 샘플링된 150 μg을 투여한 동물의 혈청)에 의해 유도된 항체의 3명의 비관련 개체로부터 얻은 42개의 냉동 인간 조직 패널에 대한 잠재적인 결합 활성을 면역조직화학(IHC)을 사용하여 평가하였다. 6개월의 투여 기간이 끝나고 4주간의 회복 기간이 끝난 후, 메인 및 회복 동물을 안락사시키고 부검을 실시했으며, 장기 무게와 거시적 관찰을 기록 하였다. 모든 메인 및 회복 연구 동물의 뇌, 주사 부위 및 림프절에 대해 조직병리학적 검사를 수행하였다.

JACI-35.054는 모든 시험 용량(15, 50 및 150 ug/mL)에서 치료된 모든 원숭이에서 항-pTau IgG 역가를 유도하였다.

결과

검사 보고서 초안의 결과에 따르면 1일, 29일, 57일, 85일, 113일, 141일 및 169일에 7번의 i.m. 주사 후 JACI-35.054의 모든 용량 수준을 붉은털원숭이는 잘 견뎠으며 예상치 못한 사망률도 없었고 체중, 안과학, 심전도 검사, 면역 표현형 검사, 임상 병리학 또는 뇌척수액 매개변수, 장기 중량 또는 거시적/현미경적 소견에 대한 JACI-35.054 관련 임상 징후 또는 영향도 없었다.

시험한 모든 항체 패널에 대해 연구 그룹 간에 면역 세포 집단 크기에는 눈에 띄는 차이가 없었다. 시험 품목 처리 그룹(그룹 2 내지 4)에서 측정된 다양한 관심 세포 집단의 농도는 대조군과 유사하였고 면역 세포 집단 크기의 변동은 대부분의 집단에 대한 생물학적 변동 내에 속하였다.

일부 JACI-35.054 처리 동물에서 관찰된 결과는 매우 경미하거나 중등도의 피부 민감도(홍반 및 부종)로 제한되었다; 그러나 발견의 일시적 성격과 지속성 또는 용량 관계의 부재는 JACI-35.054에 대한 명백한 피부 민감성 경향을 암시하지 않았다. 모든 거시적/현미경적 변화는 주사 용량 중 JACI-35.054의 존재로 인한 것이 아니라 실험 절차에 의해 혼동된 애쥬번트와 관련된 것으로 간주되었다. 약간 낮은 현미경적 변화 발생률과 회복 단계에서 근육층에 국한되는 경향은 4주 회복 기간 이후 염증 및 퇴행성/괴사 과정이 어느 정도 해소되었음을 시사할 수 있다.

3명의 비관련 개체로부터의 42개의 냉동 인간 조직에 대해 수행된 면역조직화학적 조사는 1/300 및 1/100 희석에서 검사된 JACI-35.054 유도 원숭이 항체가 시험 조직 중 어느 것에서도 표적외 염색을 생성하지 않았다는 것을 강조하였다.

결론

종합적으로, 1일, 29일, 57일, 85일, 113일, 141일 및 169일에 7번의 근육내 주사 후 명백한 시험 품목 관련 변화가 없었기 때문에 JACI-35.054(150 μg)의 최고 용량 수준은 본 연구에서 관찰된 효과 수준이 없는(NOEL) 것으로 간주된다.

실시예 3. 마우스에서의 3개월 반복 피하 투여에 대한 독성 연구

목적

본 연구의 목적은 CD1 마우스에게 3개월에 걸쳐 7회 피하(SC) 주사한 후 시험 품목 CRM197-pTau 및 CpG-7909와 애쥬번트로서 수산화알루미늄로 제형화한 애쥬번트 첨가 백신인 JACI-35.054 조성물의 잠재적 독성을 평가하는 것이었다. 치료 기간이 완료되면 지정된 동물을 마지막 주사 후 2주(초기 안락사) 또는 추가적인 2주간의 치료 중단 기간(후기 안락사) 후에 안락사시켜 결과의 가역성 또는 잠재적인 지연 효과를 평가하였다.

설계

적용된 연구 프로토콜은 다음과 같다(표 2)

^ACRM197-pTau 함량으로 표현된 용량.

^BTris 완충제, CpG7909 50 μg 및 수산화알루미늄 현탁액 425 μg/용량을 포함한다.

^cCRM197-pTau, CpG7909 50 μg 및 수산화알루미늄 현탁액 425 μg/용량을 포함한다.

실험 설계는 스위스 CD1 마우스(수컷 60마리, 암컷 60마리)를 4개 그룹으로 나누어 JACI-35.054(1.75 및 15 μg/용량; CRM197-pTau의 용량으로 표시[그룹 2, 3 및 4]) 또는 위약/대조 품목(Tris 완충제, CpG7909 및 수산화알루미늄 애쥬번트[그룹 1])을 견갑골 부위(1일, 15일, 29일, 43, 57, 71 및 85일)에 SC 주사하는 방식으로 이루어졌다. 치료 기간이 종료하면, 최종 투여 후 2주에 처음으로 이용 가능한 12마리/성별/그룹(초기 안락사)을 안락사시고, 2주간의 무치료 기간(즉, 마지막 시험 품목 또는 대조 주사 후 4주)에 그룹 1 및 4의 마지막 6마리/성별을 안락사시켰다(후기 안락사). 평가된 독성 매개변수 및 종료점에는 이병률/사망률, 임상 관찰, 국소 주사 반응, 체중, 음식 소비, 안과, 혈액학, 혈액 생화학 및 해부학적 병리학 평가(장기 중량 포함)가 포함되었다. 모든 조직(치료 기간을 끝내고 안락사된 그룹 1, 2, 3 및 4 동물과 무치료 기간 끝에 안락사된 그룹의 잠재적 표적 기관 포함)에 대한 거시적 이상을 기록 하고 현미경 검사를 통해 모든 동물에 대해 완전한 부검을 수행하였다. 항-CRM197 IgG 및 항-pTau IgG의 생성에 의해 측정된 면역원성을 결정하기 위해 모든 동물로부터 치료 전, 치료 및 무치료 기간 동안 혈액을 수집하였다.

결과

시험 품목 JACI-35.054(1.7, 5, 15 μg/용량) 및 위약은 연구 전반에 걸쳐 일반적으로 내약성이 좋았으며 SC 투여 후 대부분의 동물에 대해 체중, 음식 섭취, 안과학, 혈액학 또는 장기 중량에 대한 주목할만한 임상 징후나 영향은 관찰되지 않았다. 연구 기간 동안 두 마리의 동물이 죽은 채 발견되었다(78일차[12주차]에 그룹 1[대조군]에서 암컷 한 마리, 43일차[7주차]에 그룹 3[5 μg]에서 수컷 한 마리). 한 마리의 동물이 대조군에 속했고 독특한 임상 관찰, 생체 내 또는 현미경 소견이 그룹 3의 사망 수컷과 연관되거나 확인되지 않았기 때문에 이러한 사망은 JACI-35.054 투여와 부수적이고 관련이 없는 것으로 간주되었다. 또한, JACI-35.054 처리 그룹의 다른 동물은 연구 기간 동안 사망하거나 인도적인 이유로 안락사되지 않은 것으로 발견되었다.

JACI-35.054 투여 후, 항-pTau IgG 역가는 일반적으로 용량 의존적 방식으로 증가하여 예상되는 백신 관련 면역원성을 확인했으며, 항-CRM197 IgG 역가도 유도되었다. 치료 종료 시 추가 CRM197-pTau 관련 변화에는 5 μg/용량 이상을 투여받은 수컷 및 암컷에서 중등도(3 등급) 육아종성 염증 발생률 증가, 총 단백질 농도의 약간의 증가(+3.6% 내지 +8.1%) 및 항원 자극으로 인해 CRM197-pTau에 의해 유발된 글로불린 농도 증가를 반영하는 것으로 간주되는 보통으로 감소된 알부민 대 글로불린 비율(A/G; -7.9% 내지 -21.2%)이 포함되었다.

JACI-35.054 처리 동물 및 대조군 그룹에서 일반적인 SC 주사 절차 또는 공동 투여된 애쥬번트(특히 수산화알루미늄 현탁액)와 관련된 추가로 주목할 만한 발견으로 1) 연구 기간 동안 적어도 한 번의 홍반, 비후(thickening) 및/또는 부기에 대한 임상 관찰(일반적으로 대조군과 비교하여 JACI-35.054 처리 동물에서 용량 관련 경향으로 더 높은 빈도 및/또는 중증도로 관찰됨), 2) 대부분의 동물에서 주사 부위에서 괴사성/낭성 중심 및/또는 염증성 가성 낭종을 특징으로 하는 육아종성 염증의 현미경 관찰과 종종 상관관계가 있는 괴사 비후 및 백색 종괴의 관찰, 및 3) 겨드랑이 림프절의 림프 증식 및 거품성 대식세포의 침윤이 포함되었다.

회복 기간 이후, ≥ 1.7 μg/동물에서 비후화되고 부풀어오르는 임상 징후와 ≥ 5 μg/동물에서 육아종성 염증은 완전히 가역적이었다. A/G 감소가 암컷에서 여전히 관찰되었으며 모든 그룹의 주사 부위에서 회복이 없었다. 겨드랑이 림프절에서 애쥬번트 관련 소견이 부분적으로 회복되었다(발생률/심각도 또는 거품성 대식세포 감소).

결론

결론적으로, CpG7909 및 수산화알루미늄과 함께 CRM197-pTau의 애쥬번트 첨가 백신으로 제형화된 JACI-35.054(1.7, 5 및 15 μg/용량)를 CD1 마우스에 2주마다 7회 SC 투여하면 내약성이 뛰어났다. 예상된 면역원성과 일관되게, JACI-35.054 관련 항-pTau IgG 및 항-CRM197 IgG 역가는 일반적으로 용량 의존적 방식으로 유도되었다. 다른 CRM197-pTau 관련 결과는 완전히 가역적인 5 μg/동물/회 투여 시 육아종성 염증으로 제한되었으며, 총 단백질 농도가 약간 증가하고 부분적으로 가역적인 알부민 대 글로불린 비율이 보통으로 감소하는 것으로 나타났다. 모든 결과가 유해하지 않은 것으로 간주되었으므로 JACI-35.054(15 μg)의 최고 용량 수준은 이 연구에서 관찰된 부작용 없음 수준(NOAEL)으로 간주된다.

실시예 4. 인간에 대한 JACI-35.054의 안전성 및 유효성

초기 알츠하이머병 환자를 대상으로 50주(즉, 12개월)에 걸쳐 타우 표적 백신과 위약을 사용한 치료를 평가하기 위한 다기관 전향적 위약 대조, 이중 맹검 및 무작위 연구. 연구 모집단은 국립 노화 알츠하이머 협회(NIA-AA) 기준에 따라 경도 AD 또는 AD로 인한 MCI 진단을 받은 50 내지 75세(남성 및 여성)이다. 면역화를 0개월(0주), 2개월(8주), 6개월(24주) 및 12개월(48주)에 수행하였다. 안전성과 면역원성 결과에 따라 프로토콜을 수정하여 추가 요법을 시험할 수도 있다.

목표

주요 목적: 연구 백신의 안전성과 내약성을 평가하고 연구 백신의 면역원성을 평가(혈청 내 pTau에 대한 IgG 역가의 유도)하기 위함이다.

부차적 목적: 연구 백신의 면역원성(혈청 내 pTau 및 Tau에 대한 IgM 역가 및 Tau에 대한 IgG 역가 유도)을 추가로 평가하고 면역화에 의해 유도된 항체의 결합력을 평가하기 위함이다.

탐색 목적: AD 진행의 추정 바이오마커, 즉 총 타우 및 pTau 단백질의 혈액 및/또는 CSF 농도에 대한 연구 백신의 효과를 탐색하고; 혈액 내 T 세포 활성화에 대한 연구 백신의 효과를 탐색하고; 혈액 염증성 사이토카인(예를 들어, IL-1B, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ 및 TNF-α)에 대한 연구 백신의 활성을 탐색하고; 면역 반응(예를 들어, 백신 성분에 대한 항체, 백신 유발 항체의 기능적 능력)에 대한 연구 백신의 효과를 추가로 탐색하고; 행동, 인지 및 기능 수행에 대한 연구 백신의 효과를 탐색하기 위함이다.

치료

근육내 경로로 투여된 최대 3가지 용량 수준의 JACI-35.054가 최대 3개의 하위 코호트에서 시험될 것이다. 이 연구는 현재 진행 중이며 하위 코호트 2.1에서 시험되고 있다.

하위 코호트 2.1 (8명의 대상): 6명 대상에게 15 μg/용량의 JACI-35.054이 투여되었고 2명의 대상에게는 위약이 투여되었다. 하위 코호트 2.1에서 모든 대상이 2차 주사를 받은 후의 안전성 및 내약성 데이터는 DSMB(Data and Safety Monitoring Board)의 검토를 거친 후 용량 증량이 허용되었다.

하위 코호트 2.2 (8명의 대상) (선택 사항): 6명의 대상에게 60 μg/용량의 JACI-35.054가 투여되었고 2명의 대상에게는 위약이 투여되었다. 이 하위 코호트는 하위 코호트 2.1에서 관찰된 우수한 안전성과 내약성을 바탕으로, 이전 하위 코호트의 항체 반응이 60 μg의 용량에서 최적화될 것으로 예상된다는 사실을 기반으로 현재 수행되고 있다.

하위 코호트 2.3 (8명의 대상) (선택 사항): 최대 150 μg/용량의 JACI-35.054가 6명의 대상에게 투여될 수 있으며 위약이 2명의 대상에게 투여될 수 있다. 이 하위 코호트는 선택 사항이며, 하위 코호트 2.2에서 관찰된 우수한 안전성과 내약성을 기반으로 하고 이전 하위 코호트의 항체 반응이 더 높은 용량에서 최적화될 것으로 예상되는 경우에 수행될 수 있다.

하위 코호트 확장: 각 코호트의 주어진 하위 코호트에서 최대 16명의 추가 대상(활성 치료 12명, 위약 4명)의 선택적 모집 확장을 고려할 수 있다. 목표는 면역원성, 안전성 및 내약성 측면에서 가장 유리한 프로파일을 제시할 것으로 예상되는 용량에서 추가 데이터를 수집하는 것이다. 주어진 하위 코호트를 확장하기로 한 결정은 각 코호트에서 나오는 축적된 안전성/내약성 및 면역원성 데이터를 기반으로 한다.

백신 또는 위약은 각각 0주, 8주, 24주 및 48주에 4회, 예를 들어 각 용량 사이에 8주, 16주 및 24주 간격으로 투여된다. 치료 기간은 50주(12개월), 이후 24 주(6개월)의 안전성 추적 기간이 예상된다. 전체 대상 참여는 첫 번째 선별 평가부터 마지막 안전성 후속 방문까지 최대 약 80주이다.

안전성 추적

모든 대상은 연구 백신을 처음 투여한 후 24시간 동안, 그리고 후속 연구 백신을 투여한 후 4시간 동안 임상 관찰을 받게 된다. 후속 안전성 평가도 모든 연구 대상에 대해 각 면역화 후 48 내지 72시간에 전화 통화를 통해 수행된다. 각 하위 코호트에서, 처음 4명의 대상에 대한 첫 번째 투여는 이전 대상의 48 내지 72시간에 안전성 평가가 수행된 후에 수행되어야 한다. 안전성 실험실 샘플이 기준선, 각 주사 전 및 각 주사 후 2 내지 4주에 수집될 것이다. 모든 치료 대상은 치료 기간 종료 후 24주(6개월)의 안전성 추적 기간을 갖게 된다. 이 기간 동안 대상은 마지막 투여 후 19주에 첫 번째 후속 방문에 참석하고 후속 기간이 끝날 때(마지막 투여 후 26주) 마지막 방문에 참석하도록 요청받게 된다. 참가자의 안전성은 DSMB(Data and Safety Monitoring Board)의 정기적인 안전 데이터 검토를 통해 연구 전반에 걸쳐 모니터링된다.

중간 분석(IA)

안전성, 내약성 및 면역원성의 중간 분석이 다음과 같이 각 하위 코호트에서 수행될 수 있다.

- 하위 코호트의 모든 대상은 방문 4(10주), 즉 2차 주사 후 2 내지 4주를 완료하였다 - 하위 코호트의 모든 대상은 방문 6(26주), 즉 3차 주사 후 2 내지 4주를 완료하였다.

- 하위 코호트의 모든 대상은 방문 9(50주), 즉 48주에 마지막 주사 후 2 내지 4주를 완료하였다.

- 하위 코호트의 모든 대상은 방문 11(74주), 즉, 안전성 종료를 완료하였다.

후속 추적 기간

사용 가능한 바이오마커 데이터가 또한 이들 임의의 IA 중에 검토될 수 있다. 위에서 설명한 IA는 확장된 하위 코호트에 대해서도 수행될 수 있다.

면역 반응 데이터의 지속 가능성을 검토하기 위한 추가 IA가 26주에서 50주 사이와 50주에서 74주 사이에 수행될 수 있다.

연구 모집단

연구 모집단은 미국 국립노화알츠하이머협회(NIA-AA) 기준 및 전체 점수 0.5 또는 1인 임상 치매 평가 척도(CDR)에 따라 경미한 AD 또는 AD로 인한 MCI로 진단을 받은 50 내지 75세(남성 및 여성)이다.

포함 기준은 다음과 같다:

1. 50세 이상 75세 이하의 남녀.

2. NIA-AA 기준에 따른 AD로 인한 경도 인지 장애(MCI) 또는 경도 AD 및 임상 치매 등급 척도(CDR) 전체 점수 각각 0.5 또는 1.

3. MMSE(간이 정신 상태 검사) 점수 22 이상.

4. 선별 시 AD 병리와 일치하는 CSF A베타 아밀로이드 42(Aß42)의 비정상적인 수준.

· CSF Aß42 수준이 경계선인 경우, 아밀로이드 양성을 결정하는 데 도움이 되는 것으로 간주되는 다른 결과, 예를 들어, Aß42/Aß40 비율 및 경우에 따라 양성 아밀로이드 PET 스캔 또는 양성 CSF Aß42 수준의 병력이 고려될 수 있다.

· 선별 전 6개월 이내에 수행된 CSF 샘플링의 결과는 아밀로이드 병리의 존재와 일치하고 해당 CSF 샘플이 시험을 위한 연구에 사용될 수 있다면, 사례별로 허용된다.

5. 기준선 이전 최소 3개월 동안 AD에 대해 시판되는 어떠한 치료제도 복용하지 않거나 안정 용량의 아세틸콜린에스테라제 억제제 및/또는 메만틴을 투여받고 있지 않는 대상.

6. 순응성을 보장하고, 임상 평가를 지원하고, 안전성 문제를 보고하기 위해 신뢰할 수 있는 정보 제공자 또는 간병인이 돌보고 있는 대상.

7. 여성은 최소 1년 동안 폐경기 상태여야 하고/거나, 수술로 불임 수술을 받아야 한다. 가임기 여성 또는 폐경 후 여성이 아닌 여성은 선별 시 혈액 임신 검사에서 음성 반응을 보여야 하며(기준일 전 -14일에서 -3일 사이에 채혈) 선별 방문부터 참여 끝까지 매우 효과적인 피임 방법을 기꺼이 사용해야 한다. 대상이 연구 백신을 계속 받을 수 있는지 확인하기 위해 치료 기간 내내 소변 임신 검사가 수행된다. 가임기 여성 파트너와 함께 임상 시험에 참여하는 남성 참가자는 전체 연구 기간 동안 여성 파트너가 사용하는 피임 방법에 더해 장벽 피임법(살정제가 포함된 콘돔)을 사용해야 한다.

8. 조사자의 의견에 따라 서면 동의서를 이해하고 제공할 수 있는 대상.

9. 대상와 정보 제공자 또는 간병인은 연구 언어 중 하나에 능통해야 하며 요추 천자를 포함한 모든 연구 절차를 따를 수 있어야 한다.

배제 기준은 다음과 같다:

1. 대상이 위약만으로 치료되었고 위약 백신이 특정 면역 반응을 유도하지 않을 것으로 예상된다는 문서화된 증거가 있는 경우를 제외하고 활성 면역화를 사용한 AD 및/또는 신경계 장애에 대한 이전 임상 시험에 참여.

2. 대상이 위약만으로 치료되었고 위약이 임의의 특정 면역 반응을 유발하지 않을 것으로 예상된다는 문서화된 증거가 있는 경우를 제외하고 선별 전 지난 12개월 이내에 수동 면역화를 사용한 AD 및/또는 신경 장애에 대한 이전 임상 시험에 참여.

3. 선별 전 지난 3개월 이내에 BACE-1 억제제를 포함하는 임의의 소분자 약물을 사용한 AD 및/또는 신경계 장애에 대한 이전 임상 시험에 참여.

4. 실험용 또는 승인된 약물 또는 요법을 사용하는 임의의 기타 임상 시험에 동시 참여.

5. 자가면역 질환의 임상 증상이 없는 대상에서 적어도 1:160의 희석 시 양성 항핵 항체(ANA) 역가의 존재.

6. 자가면역 질환의 현재 또는 과거 병력, 또는 자가면역 질환의 존재와 일치하는 임상 증상.

7. 선별 전 3개월 이상 일시적으로 처방된 경우를 제외하고 면역억제제 또는 전신 스테로이드의 사용을 포함하지만 이에 국한되지 않는 면역 억제.

8. 기존 백신 및/또는 약물에 대한 중증 알레르기 반응을 포함하나 이에 국한되지 않는 중증 알레르기 반응(예를 들면 아나필락시스)의 이력.

9. 임상적으로 유의한 저혈당 에피소드의 이전 이력.

10. DSM-V(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-V) 기준에 따라 현재 충족하거나 지난 5 년 이내에 약물 또는 알코올 남용 또는 의존.

11. 연구 치료제의 안전성 및 내약성 평가 및/또는 전체 연구 방문 일정 준수를 방해할 가능성이 있는 임상적으로 유의한 의학적 상태.

12. 면역 체계에 영향을 미칠 가능성이 있는 임상적으로 중요한 모든 의학적 상태(예를 들어, 후천적 또는 선천적 면역체계 장애 병력).

13. 선별 전 지난 12개월 이내에 하이드랄라진, 프로카인아미드, 퀴니딘, 이소니아지드, TNF-억제제, 미노사이클린의 사용.

14. 선별 전 적어도 3개월 동안 안정적인 용량인 경우를 제외하고 딜티아젬의 사용.

15. 대상이 자살 생각 질문 4 또는 5에 "예"로 대답: 지난 12개월 이내에 자살 행동에 대해 "예"로 대답함으로써 콜롬비아 자살 심각도 척도(Columbia-Suicide Severity Rating Scale)을 사용하여 정의된 자살의 유의미한 위험.

16. AD와 관련된 것으로 간주되지 않는 정신 또는 신경학적 장애(예를 들면, 의식 상실을 동반한 두부 손상, 증상성 뇌졸중, 파킨슨병, 중증 경동맥 폐쇄성 질환, TIA).

17. 통제되지 않는 발작의 이력 또는 존재. 발작 이력이 있는 경우, 선별 전 2년 이내에 발작이 발생하지 않고 잘 제어되어야 한다. 항간질약의 사용은 선별 전 최소 3개월 동안 안정적인 용량인 경우 허용된다.

18. 선별 전 지난 10년 이내에 수막뇌염의 병력.

19. 출혈성 및/또는 비출혈성 뇌졸중의 병력이 있는 대상.

20. 말초 신경병증의 존재 또는 병력.

21. CNS 침범 가능성이 있는 염증성 신경 장애의 병력.

22. 대상의 증상을 유발할 수 있는AD와 일치하지 않는 대체 병리의 구조적 증거를 보여주는 MRI 스캔 선별. 직경 1 cm 미만의 양성 수막종, 2개 이상의 열공 경색 또는 직경이 1 cm보다 큰 하나의 단일 경색 또는 표재성 철침착증의 어느 한 영역 또는 10 mm 이상의 이전 대출혈의 증거 이외의 공간 점유 병변의 증거. T2^* MRI의 미세 출혈은 위치에 관계없이 최대 10개까지 허용된다.

23. MRI 연구에 금기인 금속 임플란트 및/또는 심각한 밀실 공포증을 포함하되 이에 국한되지 않는 어떤 이유로 MRI 검사를 수행할 수 없는 경우.

24. 프로토콜을 준수하고 결과 측정을 수행하는 것을 방해하는 중대한 청력 또는 시각 장애 또는 조사자가 적절하다고 판단한 기타 문제.

25. 선별 전 3개월 이내에 임상적으로 유의한 감염 또는 주요 수술. 연구에 참여하는 동안 발생할 것으로 예상되는 계획된 수술은 선별 시 의료 모니터의 검토 및 승인을 받아야 한다.

26. 인플루엔자 백신을 포함하여 선별 전 지난 2주 이내에 임의의 백신을 받음.

27. 선별시 ECG에서 임상적으로 유의한 부정맥 또는 기타 임상적으로 유의한 이상.

28. 기준선 이전 1년 이내의 심근경색, 불안정 협심증 또는 심각한 관상동맥 질환.

29. 완전히 제거되어 완치된 것으로 간주되는 치료된 편평상피세포암, 기저세포암 및 제자리 흑색종, 제자리 전립선암 또는 제자리 유방암 이외의 과거 5년 이내에 암의 병력.

30. 혈액학적 매개변수, 간 기능 검사, 및 기타 생화학적 측정치에 대한 정상 수치로부터 임상적으로 유의미한 편차가 있으며, 연구자의 의견에 따라 임상적으로 유의미하다고 판단되는 경우.

31. 선별 시 혈액 검사를 통해 임신이 확인되거나, 임신 또는 수유를 계획 중인 대상.

32. 매일 100 mg 이하 용량의 아스피린을 제외한 모든 항응고제 또는 항혈소판제 복용(예정 또는 예정되지 않은 요추 천자 중 출혈 위험을 피하기 위해).

33. 불면증 치료를 위해 안정적으로 저용량을 복용하는 경우를 제외하고 모든 항정신병 약물을 받은 경우.

34. 선별 전 30일 이내에 혈액 또는 혈액 제제를 기증했거나 연구에 참여하는 동안 혈액을 기증할 계획.

35. 선별 시 활동성 매독과 일치하는 양성 VDRL(성병 연구 실험실).

36. 선별 시 HIV 검사에 양성.

37. 선별 시 활동성 B 및/또는 C형 간염의 실험실적 또는 임상적 증거.

38. 크레아티닌이 정상, 비정상 갑상선 기능 검사의 상한치의 1.5 배를 초과하거나 혈청 B12 또는 엽산 수치가 임상적으로 유의하게 감소한 대상(참고: 갑상선 대체제, B12 또는 엽산의 모든 경구 용량은 선별 전 적어도 3개월 동안 안정해야 한다).

연구 평가변수(Study Endpoint)

안전성 및 내약성에 대한 하기 1차 평가변수(endpoint)가 평가되었다: 유해 사건, 즉각적 및 지연 반응원성(예를 들면, 아나필락시스, 면역 복합 질환을 포함하는 국소 및 전신 반응원성); 자살 생각(C-SSRS); 행동(NPI); 안전성을 평가하기 위한 인지 및 기능 평가(RBANS, CDR-SB); 활력 징후; MRI 영상; 심전도; 혈액 및 소변의 일상적인 혈액학 및 생화학 평가; 혈액 내 항-DNA 항체를 포함한 자가면역 항체의 평가; 혈액 및 CSF에서 염증 마커.

면역 반응(즉, 면역원성)에 대한 하기 1차 평가변수가 평가되었다: 혈청 내 항-pTau IgG 역가(기하학적 평균, 기준선으로부터의 변화, 반응자 비율, 피크 및 곡선 아래 면적).

면역 반응(즉, 면역원성)에 대한 하기 2차 평가변수가 평가되었다: 혈청 내 항-타우 IgG, 항-pTau, 항-ePHF IgG 및 항-타우 IgM 역가(기하학적 평균, 기준선으로부터의 변화, 반응자 비율, 피크 및 곡선 아래 면적), 결합력 시험에 의한 IgG 반응 프로파일의 결정.

하기 탐구적 평가변수가 평가되었다: 혈액 및/또는 CSF(예를 들면, 총 타우 및 pTau 단백질)에서 추정 AD 바이오마커 역가의 기준선으로부터의 변화, 혈액에서 측정된 T-세포 활성화 수준의 기준선으로부터의 변화, 혈액에서 측정된 염증성 사이토카인 역가의 기준선으로부터의 변화, 혈액 중 항체 역가의 기준선으로부터의 변화, 행동(NPI), 인지 및 기능 수행(RBANS, CDR-SB) 점수의 기준선으로부터의 변화.

결과/결론:

하기 1차 평가변수가 평가되었다:

· 안전성 및 내약성 - 유해 사건, 즉각적 및 지연 반응원성(예를 들면, 아나필락시스, 통증, 발적, 면역 복합 질환, 붓기, 발열을 포함하는 국소 및 전신 반응원성); 내약성에 대한 종합적 평가; 자살 생각(C-SSRS); 행동(NPI); 안전성을 평가하기 위한 인지 및 기능 평가(RBANS, CDR-SB); 활력 징후; MRI 영상; 심전도; 혈액 및 소변의 일상적인 혈액학 및 생화학 평가; 혈액 내 항-DNA 항체를 포함한 자가면역 항체의 평가; 혈액 및 CSF에서 염증 마커.

· 면역 반응 - 혈청 내 항-pTau IgG 역가(기하학적 평균, 기준선으로부터의 변화, 반응자 비율, 피크 및 곡선 아래 면적).

하기 2차 평가변수가 평가되었다:

· 면역 반응 - 혈청 내 항-타우 IgG, 항-pTau, 항-ePHF IgG 및 항-타우 IgM 역가(기하학적 평균, 기준선으로부터의 변화, 반응자 비율, 피크 및 곡선 아래 면적), 결합력 시험에 의한 IgG 반응 프로파일의 결정.

하기 탐구적 평가변수가 평가되었다:

· 혈액 및/또는 CSF(예를 들면, 총 타우 및 pTau 단백질)에서 바이오마커 역가의 기준선으로부터의 변화, 혈액에서 T-세포 활성화 수준의 기준선으로부터의 변화, 혈액 내 염증성 사이토카인(예: IL-1B, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ 및 TNF-α) 역가의 기준선으로부터의 변화, 자살 생각(C-SSRS), 행동(NPI), 인지 및 기능 수행(RBANS, CDR-SB) 점수의 기준선으로부터의 변화.

연구는 진행 중이다. 현재까지 하나의 하위 코호트에서 표 3에서와 같이 접합체 15 μg("15 μg 용량")의 투여량 수준으로 JACI-35.054와 위약(인산염 완충 식염수(PBS) 용액)을 투여받았다. 하위 코호트 2.2의 연구 대상에게는 접합체 60 μg의 투여량 수준("60 μg 용량")으로 JACI-35.054가 투여되고 있다.

임상 연구의 설계.

코호트	하위 코호트	연구 치료	용량 수준 ^A (μg)	초기 AD 대상의 수 #	투여 경로
2	2.1	JACI-35.054^B	15 μg	6	근육내
	2.1	위약 (PBS)	0 μg	2	근육내
	2.2	JACI-35.054^B	60 μg	6	근육내
	2.2	위약 (PBS)	0 μg	2	근육내

· ^ACRM197-pTau 함량으로 표현된 용량.

^· ^BCRM197-pTau, 500 μg의 CpG7909 및 562.5 μg의 수산화명반 현탁액/용량을 포함한다.

· 용량은 다음 시점에 4회 투여되었다: 0주, 8주, 24주 및 48주.

· 다음 시점에 항체 측정을 위한 혈액 샘플을 채취하였다: 선별, 0주차(투약 전), 2주, 8주, 10주, 15^*, 20^*, 24주, 26주, 31^*, 36주, 42^*, 48주, 50주, 67주 및 74주. (^*): 추가 시점이 추가되었다. (^#) AD로 인한 MCI 및 경도 AD 대상 포함

· 반응자는 양성 역치를 초과하는 항체 반응을 보이는 대상의 수로 정의된다. 기준선 이후(post-baseline) 값은 분석 역치 x 기준선 항체 역가 값 이상인 경우 양성으로 간주된다. 분석 역치는 인간 기증자의 샘플(각 분석의 검증 중에 얻은)에서 정의된다.

· 기준선 항체 역가 값은 1차 연구 백신 주사 이전에 발생한 경우 선별 및 1차 방문(예정되지 않은 방문 포함)에서 측정된 역가의 평균 값이다.

15 μg 용량의 경우 최대 74주차(4차 주사 후 2주), 60 μg 용량의 경우 최대 26주차(3차 주사 후 2주)까지의 중간 결과에서 JACI-35.054는 연구 백신과 관련하여 임상적으로 관련된 안전성 문제가 관찰되지 않았으므로 안전하고 내약성이 양호한 것으로 나타났다. 기준선에 비해 증가된 항-pTau-특이적 IgG 역가는 10주차 및 이후 24, 26, 36, 48, 50, 67 및 74주차에 15 μg 용량의 JACI-35.054를 2차 투여한 후 모두 반응자였던 적극적으로 치료받은 대상의 혈청에서 관찰되었다. 기준선에 비해 증가된 항-pTau-특이적 IgG 역가는 10주차 및 이후 15주, 20주, 24주 및 26주차에 60 μg 용량의 JACI-35.054의 2차 투여 후 모두 반응자였던 적극적으로 치료받은 대상의 혈청에서 관찰되었다. 증가된 항-타우-특이적 IgG 역가(서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 비-포스포펩티드 타우 펩티드에 대한 반응)가 또한 15 μg 용량에서 10주, 24주, 26주, 36주, 48주, 50주, 67주 및 74주차에 모두 반응자였고, 60 μg 용량에서 10, 15, 20, 24 및 26주차에 모두 반응자였던 적극적으로 치료받은 모든 연구 대상에서 관찰되었다. 병리학적 pTau에 대한 항-ePHF IgG 역가의 증가가 적극적으로 치료받은 초기 AD 대상에서 관찰되었으며, 이들 중 83.3%는 15 μg 용량에서 26주, 36주 및 50주차에 반응자였으며, 이들 중 83.3% 및 100%는 60 μg 용량에서 각각 10 및 26주차에 반응자였다. 위약을 투여받은 대상에서는 항체 반응이 관찰되지 않았다.

인간에서 JACI-35.054의 항-pTau IgG 반응

표 3의 하위 코호트에서 JACI-35.054 백신에 의해 유도된 포스포릴화된 타우 펩티드(pTau)에 대한 특이적 IgG 항체 반응을 MSD로 측정하였다. 도 1은 15 μg 및 60 μg 용량의 JACI-35.054 또는 위약으로 면역화한 후의 항-pTau IgG 역가를 보여준다. 도 1의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 15 μg 또는 60 μg 용량의 JACI-35.054로 면역화하면 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 포스포릴화된 타우 펩티드의 N-말단에 연결된 비오틴을 함유하는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 비오티닐화된 포스포릴화 타우 펩티드에 대한 강력한 항-pTau IgG 반응이 유도되었다.

8, 24 및 48주차에 15 μg 용량 수준으로 면역화하면 2주 후에 10주차, 26주차 및 50주차에 각각 측정된 항-pTau IgG 반응이 부스팅된다. 마찬가지로, 8주차와 24주차에 60 μg 용량 수준으로 면역화하면 2주 후에 10주차와 26주차에 각각 측정된 항-pTau IgG 반응이 부스팅된다.

표 4는 JACI-35.054 15 μg 용량, 60 μg 용량 또는 위약으로 면역화한 후 항-pTau IgG 반응자 비율(ITT 모집단)을 보여준다.

JACI-35.054 15 μg 또는 60 μg 용량 또는 위약으로 면역화 후 항-pTau IgG 반응자 비율(ITT 모집단).

	주
	2	8	10	15	20	24	26	36	48	50	67	74
JACI-35.054, 15μg	50 %	66.7%	100 %	NA	NA	100 %	100 %	100 %	100 %	100 %	100 %	100 %
JACI-35.054, 60μg	66.7%	83.3%	100 %	100 %	100 %	100 %	100 %	NA	NA	NA	NA	NA
위약	0%	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %

NA = 사용할 수 없음

표 4의 결과로 알 수 있는 바와 같이, 15 μg 용량 수준의 JACI-35.054로 치료받은 대상의 50%는 2주차에 반응자였으며 66.7%는 8주차에 반응자였다. 15 μg 용량 수준의 ACI-35.054로 치료받은 모든 대상은 10주차부터 74주차까지 반응자였다. 표 4의 결과로 알 수 있는 바와 같이, 60 μg 용량 수준의 JACI-35.054로 치료받은 대상의 66.7%는 2주차에 반응자였으며 83.3%는 2주차에 반응자였다. 60 μg 용량 수준의 JACI-35.054로 치료받은 모든 대상은 10주차부터 최소 26주차까지 반응자였다. 위약으로 치료받은 대상은 항-pTau IgG 반응을 생성하지 않았다.

인간에서 JACI-35.054의 항-Tau IgG 반응

표 3의 하위 코호트에서 JACI-35.054 백신에 의해 유도된 비포스포릴화 타우 펩티드에 대한 특이적 IgG 항체 반응을 MSD로 측정하였다. 도 2는 15 μg 또는 60 μg 용량의 JACI-35.054 또는 위약으로 면역화한 후 항-Tau IgG 역가를 보여준다. 도 2의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 15 μg 또는 60 μg 용량의 JACI-35.054로 면역화하면 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 비포스포릴화된 타우 펩티드의 N-말단에 연결된 비오틴을 함유하는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 비오티닐화된 비-pTau 펩티드에 대한 IgG 항체 반응이 유도되었다. 따라서, 15 μg 또는 60 μg 용량의 JACI-35.0 54로 면역화하면 IgG 항체 반응이 유도되었으며, 이는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 pTau 펩티드 외에 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 비-pTau 펩티드를 인식한다.

8, 24 및 48주차에 15 μg 용량 수준으로 면역화하면 2주 후인 10, 26 및 50주차에 각각 측정된 항타우 IgG 반응이 부스팅되었다. 8 및 24주차에 60 μg 용량 수준으로 면역화하면 2주 후 10 및 26주차에 각각 측정된 항타우 IgG 반응이 부스팅되었다.

표 5는 15 μg 또는 60 μg 용량의 JACI-35.054 또는 위약으로 면역화한 후 항-Tau IgG 반응자 비율(ITT 모집단)을 보여준다. 표 5의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 15 μg 용량 수준의 JACI-35.054로 치료받은 대상의 66.7%는 2주차에 반응자였으며, 83.3%는 8주차에 반응자였다. 15 μg 용량 수준의 JACI-35.054로 치료받은 모든 대상은 10주차부터 74주차까지의 반응자였다. 60 μg 용량 수준에서 JACI-35.054로 치료받은 대상의 66.7%는 2주차와 8주차에 반응자였다. 60 μg 용량 수준의 JACI-35.054로 치료받은 모든 대상은 10주차부터 최소 26주차까지의 반응자였다. 위약으로 치료받은 대상은 항-Tau IgG 반응을 생성하지 않았다.

JACI-35.054 15 μg 또는 60 μg 용량 또는 위약으로 면역화 후 항-Tau IgG 반응자 비율(ITT 모집단).

	주
	2	8	10	15	20	24	26	36	48	50	67	74
JACI-35.054, 15μg	66.7%	83.3 %	100 %	NA	NA	100 %	100 %	100 %	100 %	100 %	100 %	100 %
JACI-35.054, 60μg	66.7%	66.7 %	100 %	100 %	100 %	100 %	100 %	NA	NA	NA	NA	NA
위약	0%	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %

인간 AD 뇌에서 유래된 병리학적 pTau(풍부한 쌍나선 필라멘트 - ePHF) 인식

표 3의 하위 코호트에서 JACI-35.054를 사용한 면역화에 의해 유도된 IgG 다클론 항체의 인간 AD 뇌로부터 유래된 ePHF에 결합하는 능력을 시간 경과에 따라 MSD로 측정하였다. 도 3은 15 μg 또는 60 μg 용량의 JACI-35.054 또는 위약으로 면역화한 후 항-ePHF IgG 역가(ITT 모집단)를 보여준다. 도 3의 결과는 15 μg 또는 60 μg 용량의 JACI-35.054로의 면역화가 인간 AD 뇌에서 유래된 병리학적 ePHF Tau를 인식하는 IgG 항체 반응을 유도했음을 보여준다.

8, 24 및 48주차에 15 μg 용량 수준으로 면역화하면 2주 후 10, 26 및 50주차에 각각 측정된 항-ePHF IgG 반응이 부스팅되었다. 마찬가지로, 8 및 24주차에 60 μg 용량 수준으로 면역화하면 2주 후 10 및 26주차에 각각 측정된 항-ePHF IgG 반응이 부스팅되었다.

표 6은 15 μg 또는 60 μg 용량 수준의 JACI-35.054 또는 위약으로 면역화한 후 항-ePHF IgG 반응자 비율(ITT 모집단)을 보여준다. 15 μg 용량의 JACI-35.054으로 치료한 6명의 대상에서 항-ePHF IgG에 대한 반응률은 2주차(즉, 1차 주사 후 2주)에 0%에서 26주차(즉, 3차 주사 후 2주)에 83.3%로 증가하였으며, 이후 반응률은 66.7%(48주, 67주, 74주차)에서 83.3%(36주차, 50주차) 사이였다. 60 μg 용량의 JACI-35.054로 치료한 6명의 대상에서 항-ePHF IgG에 대한 반응률은 2주차(즉, 1차 주사 후 2주)에 16.7%에서 26주차(즉, 3차 주사 후 2주)에 100%로 증가하였다.

JACI-35.054 15 μg 또는 60 μg 용량 또는 위약으로 면역화 후 항-ePHF IgG 반응자 비율(ITT 모집단).

	주
	2	8	10	15	20	24	26	36	48	50	67	74
JACI-35.054, 15μg	0%	0 %	66.7 %	NA	NA	50 %	83.3 %	83.3 %	66.7 %	83.3 %	66.7 %	66.7 %
JACI-35.054, 60μg	16.7%	16.7 %	83.3 %	50 %	50 %	50 %	100 %	NA	NA	NA	NA	NA
위약	0%	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %	0 %

본 명세서에 기술된 실시예와 실시양태는 단지 예시를 위한 것이며, 넓은 발명의 개념을 벗어나지 않고 위에 기술된 실시양태에 대해 변경이 이루어질 수 있는 것으로 이해하여야 한다. 따라서, 본 발명은 개시된 특정 실시양태에 제한되지 않으며, 이어지는 청구범위에 의해 정의된 본 발명의 사상 및 범위 내에서 변형을 포함하도록 의도된다는 것을 알 수 있다.

실시예 5. JACI-35.054에 의한 백신접종은 에피토프 인식에서 높은 이질성을 갖는 항체를 유도한다

병리학적 pTau에 대한 폭 및 선택성에 대한 항체 반응을 추가로 프로파일링하기 위해, 짧은 pTau 및 비-pTau 아미노산 서열을 갖는 인간 대상의 혈청에 대해 에피토프 매핑을 수행하였다. 인간 대상에서 JACI-35.054에 의해 유도된 항체의 에피토프 인식 프로파일을 결정하기 위한 연구를 수행하였다. 8명의 AD 환자에게 0, 8, 24 및 48주차에 JACI-35.054 또는 위약을 용량당 15 ug씩 근육내 주사하여 면역화하였다. 1차 면역화 전(V1, 0주)과 3차 면역화 후(V6, 26주)에 1개의 아미노가 이동되고 포스포 타우 펩티드 T3.30(서열 번호 19)의 전체 서열뿐만 아니라 타우 펩티드 T3.56(서열 번호 20)의 서열을 포괄하는 N-말단 비오티닐화된 8-mer 펩티드 라이브러리를 사용하여 에피토프 매핑 ELISA에 의해 항체의 에피토프 인식 프로파일을 결정하였다. 또한, 전장 포스포타우 펩티드 T3.30(서열 번호 19) 및 타우 펩티드 T3.56(서열 번호 20)뿐만 아니라 포스포타우 펩티드 T3.85(서열 번호 21) 및 타우 펩티드 T3.86(서열 번호 22)(추가 C-말단 아미노산 포함)에 대한 항체의 결합을 결정하였다.

데이터는 각 펩티드 및 각 환자에 대해 치료 전 차감 광학 밀도(O.D.) 값(3차 면역화(V6, 26주) 후 얻은 O.D.에서 초기 면역화(V1, 0주) 전에 얻은 O.D.를 뺀 값)으로 표시된다. 차감 후 음수 값은 0.000으로 설정하였다.

표 7, 8 및 도 4는 포스포-펩티드 T3.30(서열 번호 19) 및 비-포스포-펩티드 T3.56(서열 번호 20)를 포함하는 짧은 8-mer 중첩 펩티드에 대한 에피토프 매핑 ELISA에 의해 결정된, JACI-35.054를 사용한 백신접종에 의해 유도된 항체의 에피토프 인식 프로파일을 보여준다.

포스포-타우 펩티드	환자
포스포-타우 펩티드	#1	#2	#3	#4	#5	#6	#7	#8
pTau393-400	0.000	0.000	2.694	2.162	0.119	0.815	3.402	0.622
pTau394-401	0.000	0.000	2.327	1.481	0.040	0.543	3.036	0.279
pTau395-402	0.000	0.000	0.569	1.212	0.030	0.420	2.553	0.041
pTau396-403	0.000	0.000	0.342	0.145	0.028	0.147	0.327	0.025
pTau397-404	0.000	0.000	0.169	0.080	0.023	0.014	0.098	0.030
pTau398-405	0.000	0.000	0.310	0.033	0.005	0.010	0.080	0.022
pTau399-406	0.000	0.000	0.545	1.269	0.138	0.146	1.591	0.109
pTau400-407	0.000	0.000	2.064	3.515	0.969	0.810	3.616	1.230
pTau401-408	0.000	0.000	2.952	3.620	3.459	3.510	3.670	3.444
pTau393-408	0.003	0.000	2.531	3.584	3.405	3.162	3.624	3.395
pTau393-409	0.000	0.006	2.961	3.127	0.324	0.954	3.560	2.504

표 7 및 도 4A는 두 명의 AD 환자가 포스포타우 펩티드 T3.30(서열 번호 19) 및 T3.85(서열 번호 21)(환자 #1 및 #2)의 서열에 대해 어떠한 IgG 항체도 생성하지 않았음을 보여준다. 6명의 AD 환자는 포스포타우 펩티드 T3.30(서열 번호 19) 및 T3.85(서열 번호 21)의 서열에 대한 IgG 항체를 생성했으며, 최소 4명의 AD 환자에서 포스포타우 펩티드 T3.85(서열 번호 21)의 서열에 대한 결합은 전체적으로 낮았다. 8-mer 펩티드에서 얻은 O.D. 값은 3회 면역화 후에 유도된 IgG 항체가 6명의 AD 환자 모두에서 포스포타우 펩티드 T3.30(서열 번호 19) 서열의 C-말단 부분에 결합했음을 나타낸다. 또한, 포스포타우 펩티드 T3.30(서열 번호 19) 서열의 N-말단 부분에 대한 일부 결합이 4명의 AD 환자에서 발견되었다.

타우 펩티드	환자
타우 펩티드	#1	#2	#3	#4	#5	#6	#7	#8
타우393-400	0.013	0.000	0.927	2.026	0.337	0.228	2.271	0.287
타우394-401	0.005	0.000	0.239	0.250	0.047	0.024	0.342	0.000
타우395-402	0.000	0.000	0.220	0.197	0.024	0.009	0.044	0.000
타우396-403	0.000	0.000	0.745	0.871	0.017	0.042	2.151	0.004
타우397-404	0.000	0.000	0.274	0.092	0.012	0.016	0.318	0.000
타우398-405	0.000	0.000	0.210	0.012	0.083	0.016	0.061	0.009
타우399-406	0.000	0.000	0.234	0.010	0.006	0.017	0.042	0.002
Tau400-407	0.001	0.000	0.516	0.502	0.029	0.102	1.715	0.297
Tau401-408	0.000	0.000	2.724	3.586	3.361	2.965	3.560	3.352
타우393-408	0.000	0.000	2.890	3.053	3.326	3.141	3.535	3.387
타우393-409	0.008	0.000	0.188	1.014	0.020	0.022	1.391	1.738

표 8 및 도 4B는 두 명의 AD 환자가 타우 펩티드 T3.56(서열 번호 20) 및 T3.86(서열 번호 22)(환자 #1 및 #2)의 서열에 대해 어떠한 IgG 항체도 생산하지 않았음을 보여준다. 6명의 AD 환자는 타우 펩티드 T3.56(서열 번호 20) 및 T3.86(서열 번호 22)의 서열에 대한 IgG 항체를 생성했으며, 전체적으로 타우 펩티드 T3.86(서열 번호 22)의 서열에 대한 결합이 더 낮았다. 8-mer 펩티드에서 얻은 O.D. 값은 3회 면역화 후에 유도된 IgG 항체가 6명의 AD 환자 모두에서 타우 펩티드 T3.56(서열 번호 20) 서열의 C-말단 부분에 결합했음을 나타낸다. 또한, 타우 펩티드 tau393-400 및 tau396-403에 대한 결합이 3명의 AD 환자에게서 발견되었다.

결과에 따르면 JACI-35.054로 백신접종된 대상은 타우 항원 서열의 C-말단 부분을 강력하게 인식하는 항체 반응과 포스포릴화된 타우 및 비포스포릴화된 타우 펩티드에 유사한 방식으로 결합하는 항체를 보여준 것으로 나타났다.

참고문헌

서열 목록

서열 번호 1 - 포스포-타우 펩티드 (7.1)

GDRSGYS[pS]PG[pS]PG[pT]PGSRSRT

서열 번호 2 - 포스포-타우 펩티드 (T3.5)

VYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHL

서열 번호 3 - 포스포-타우 펩티드 (22.1)

SSTGSIDMVD[pS]PQLA[pT]LA

서열 번호 4 - 타우 펩티드

VYKSPVVSGDTSPRHL

서열 번호 5 - 포스포-타우 펩티드

RENAKAKTDHGAEIVYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHL

서열 번호 6 - 포스포-타우 펩티드

RQEFEVMEDHAGT[pY]GL

서열 번호 7 - 포스포-타우 펩티드

PGSRSR[pT]P[pS]LPTPPTR

서열 번호 8 - 포스포-타우 펩티드

GYSSPG[pS]PG[pT]PGSRSR

서열 번호 9 - 포스포-타우 펩티드

GDT[pS]PRHL[pS]NVSSTGSID

서열 번호 10 - 포스포-타우 펩티드

PG[pS]PG[pT]PGSRSR[pT]P[pS]LP

서열 번호 11 - 포스포-타우 펩티드

HL[pS]NVSSTGSID

서열 번호 12 - 포스포-타우 펩티드

VSGDT[pS]PRHL

서열 번호 13 - 타우 펩티드

CKDNIKHVPGGGS

서열 번호 14 - CpG 2006 (CpG 7909 琯알?려?짐?)

5'-tcgtcgttttgtcgttttgtcgtt-3'

여기서 소문자는 포스포로티오에이트(ps) 뉴클레오티드 간 연결을 의미한다

서열 번호 15 - CpG 1018

5'-tgactgtgaacgttcgagatga-3'

여기서 소문자는 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결을 의미한다

서열 번호 16 - CpG2395

5'-tcgtcgttttcggcgcgcgccg-3'

서열 번호 17 - CpG2216

5'-ggGGGACGATCGTCgggggg-3'

여기서 소문자는 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결을 의미하고 대문자는 포스포디에스테르(po) 연결을 의미한다

서열 번호 18 - CpG2336

5'- gggGACGACGTCGTGgggggg -3',

여기서 소문자는 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결을 의미하고 대문자는 포스포디에스테르 연결을 의미한다

서열 번호 19 - 비오티닐화 포스포릴화 타우 펩티드 (T3.30)

비오틴-LC 링커 (Ahx)-GVYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHL-NH2

서열 번호 20 - 비오티닐화 비포스포릴화 타우 펩티드 (T3.56)

비오틴-LC 링커 (Ahx)-GVYKSPVVSGDTSPRHL-NH2

서열 번호 21 - 비오티닐화 포스포릴화 타우 펩티드 (T3.85)

비오틴-LC 링커 (Ahx)-VYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHLS-NH2

서열 번호 22 - 비오티닐화 비포스포릴화 타우 펩티드 (T3.86)

비오틴-LC 링커 (Ahx)-VYKSPVVSGDTSPRHLS-NH2

서열목록 전자파일 첨부

Claims

타우(Tau), 바람직하게는 적어도 하나의 포스포릴화된 타우 및 농축된 쌍나선형 필라멘트(ePHF) 중 적어도 하나에 대한 항체의 유도를 필요로 하는 인간 대상에서 타우, 바람직하게는 적어도 하나의 포스포릴화된 타우 및 농축된 쌍나선형 필라멘트(ePHF) 중 적어도 하나에 대한 항체를 유도하는 방법으로서, 약학적으로 허용되는 담체 및 용량당 5 μg 내지 200 μg의 하기 화학식 (I)의 구조 또는 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 접합체를 포함하는 조성물을 상기 인간 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법:
[화학식 (I)]

[화학식 (II)]

상기 식에서,
x는 0 내지 10, 바람직하게는 2 내지 6, 가장 바람직하게는 3의 정수이고;
n은 3 내지 15, 바람직하게는 3 내지 12의 정수이고;
담체는 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH), 파상풍 톡소이드, CRM197 및 N. meningitidis로부터의 외막 단백질(OMP) 혼합물, 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 면역원성 담체를 나타내고;
타우 펩티드는 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드를 나타낸다.
제1항에 있어서, 담체는 CRM197인 방법.
제2항에 있어서, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 방법.
제3항에 있어서, 접합체는 하기 구조를 갖는 방법 :

상기 식에서,
n은 3 내지 7의 정수이고, VYKS(p)PVVSGDTS(p)PRHL-CONH₂는 서열 번호 2의 포스포-타우 펩티드를 포함한다.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 적어도 하나의 애쥬번트를 추가로 포함하는 방법.
제5항에 있어서, 적어도 하나의 애쥬번트는 TLR9 작용제(agonist)를 포함하는 방법.
제6항에 있어서, TLR9 작용제는 서열 번호 14 내지 서열 번호 18로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 갖는 CpG 올리고뉴클레오티드인 방법.
제7항에 있어서, CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 14의 뉴클레오티드 서열을 갖는 방법.
제5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 애쥬번트는 수산화알루미늄을 포함하는 방법.
포스포릴화된 타우 및 풍부한 쌍나선 필라멘트(ePHF) 중 적어도 하나에 대한 항체의 유도를 필요로 하는 인간 대상에서 포스포릴화된 타우 및 풍부한 쌍나선 필라멘트(ePHF) 중 적어도 하나에 대한 항체를 유도하는 방법으로서, 약학적으로 허용되는 담체, 서열 번호 14의 뉴클레오티드 서열을 갖는 CpG 올리고뉴클레오티드 및 용량당 5 μg 내지 200 μg의 하기 구조를 갖는 접합체를 포함하는 조성물을 상기 인간 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법:

상기 식에서,
n은 3 내지 7의 정수이고, VYKS(p)PVVSGDTS(p)PRHL-CONH₂는 서열 번호 2의 포스포-타우 펩티드를 포함한다.
제10항에 있어서, 조성물이 수산화알루미늄을 추가로 포함하는 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 용량당 5 μg, 10 μg, 15 μg, 20 μg, 25 μg, 30 μg, 35 μg, 40 μg, 45 μg, 50 μg, 60 μg, 70 μg, 80 μg, 90 μg, 100 μg, 110 μg, 120 μg, 130 μg, 140 μg, 150 μg, 160 μg, 170 μg, 180 μg, 190 μg, 또는 그 사이의 임의의 값의 접합체를 포함하는 조성물을 인간 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제12항에 있어서, 용량당 15 μg의 접합체를 포함하는 조성물을 인간 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제12항에 있어서, 용량당 45 내지 60 μg, 예컨대 45 μg, 50 μg, 55 μg, 60 μg, 또는 그 사이의 임의의 값의 접합체를 포함하는 조성물을 인간 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제12항에 있어서, 용량당 120 내지 150 μg, 예컨대 120 μg, 125 μg, 130 μg, 135 μg, 140 μg, 145 μg, 150 μg, 또는 그 사이의 임의의 값의 접합체를 포함하는 조성물을 인간 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 근육 내로 투여되는 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 피하로 투여되는 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 바람직하게는 항-pTau IgG 역가가 위약 대조군의 것보다 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100배 이상 더 높은 포스포릴화된 타우(pTau)에 대한 IgG 항체를 포함하는 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 바람직하게는 바람직하게는 항-타우 IgG 역가가 위약 대조군의 것보다 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100배 이상 더 높은 비포스포릴화된 타우에 대한 IgG 항체를 포함하는 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 바람직하게는 항-ePHF IgG 역가가 위약 대조군의 것보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20배 이상 더 높은 강화된 쌍나선형 필라멘트(ePHF)에 대한 IgG 항체를 포함하는 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 최초 투여 후 4 내지 12주, 예컨대 8주차에 약학적으로 허용되는 담체 및 용량당 5 μg 내지 200 μg, 예컨대 15 μg 또는 60 μg의 접합체를 포함하는 조성물의 제2 용량을 대상에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제21항에 있어서, 조성물의 제2 용량의 투여는 조성물에 의해 유도된 항체 반응, 예컨대 항-pTau IgG 반응 및/또는 항-ePHF IgG 반응을 포함하는 항체 반응을 부스팅(boosting)할 수 있고, 바람직하게는 항체 반응은 조성물의 제2 용량의 투여 후 적어도 2주차에 측정했을 때 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 이상 증가하는 방법.
제21항 또는 제22항에 있어서, 조성물의 최초 투여 후 20 내지 28주, 예컨대 24주차에 약학적으로 허용되는 담체 및 용량당 5 μg 내지 200 μg, 예컨대 15 μg 또는 60 μg의 접합체를 포함하는 조성물의 제3 용량을 대상에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제23항에 있어서, 조성물의 제3 용량의 투여는 조성물에 의해 유도된 항체 반응, 예컨대 항-pTau IgG 반응 및/또는 항-ePHF IgG 반응을 포함하는 항체 반응을 부스팅할 수 있고, 바람직하게는 항체 반응은 조성물의 제3 용량의 투여 후 적어도 2주차에 측정했을 때 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 이상 증가하는 방법.
제23항 또는 제24항에 있어서, 조성물의 최초 투여 후 44 내지 52주, 예컨대 48주차에 약학적으로 허용되는 담체 및 용량당 5 μg 내지 200 μg, 예컨대 15 μg 또는 60 μg의 접합체를 포함하는 조성물의 제4 용량을 대상에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제25항에 있어서, 조성물의 제4 용량의 투여는 조성물에 의해 유도된 항체 반응, 예컨대 항-pTau IgG 반응 및/또는 항-ePHF IgG 반응을 포함하는 항체 반응을 부스팅할 수 있고, 바람직하게는 항체 반응은 조성물의 제4 용량의 투여 후 적어도 2주차에 측정했을 때 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 이상 증가하는 방법.
포스포릴화된 타우 단백질(pTau)에 대한 지속적인 면역 반응의 유도를 필요로 하는 인간 대상에서 포스포릴화된 타우 단백질(pTau)에 대한 지속적인 면역 반응을 유도하는 방법으로서,
i. 유효량의 접합체를 포함하는 프라이머 백신(primer vaccine)을 대상에게 근육내 투여하는 단계; 및
ii. 프라이머 백신 투여 후 6 내지 10주차에 유효량의 접합체를 포함하는 1차 부스터 백신(booster vaccine)을 대상에게 근육내 투여하는 단계를 포함하고,
여기서
지속적인 면역 반응은 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 20주 동안 지속되고;
접합체는 하기 화학식 (I)의 구조 또는 하기 화학식 (II)의 구조를 가지며:
[화학식 (I)]

[화학식 (II)]

상기 식에서,
x는 0 내지 10, 바람직하게는 2 내지 6, 가장 바람직하게는 3의 정수이고;
n은 3 내지 15, 바람직하게는 3 내지 12의 정수이고;
담체는 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH), 파상풍 톡소이드, CRM197 및 N. meningitidis로부터의 외막 단백질(OMP) 혼합물, 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 면역원성 담체를 나타내고;
타우 펩티드는 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드를 나타내고;
접합체의 유효량은 용량당 5 μg 내지 200 μg의 접합체를 포함하는 방법.
제27항에 있어서, 담체는 CRM197인 방법.
제27항 또는 제28항에 있어서, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 방법.
제29항에 있어서, 접합체는 하기 구조를 갖는 방법:

상기 식에서,
n은 3 내지 7의 정수이고, VYKS(p)PVVSGDTS(p)PRHL-CONH₂는 서열 번호 2의 포스포-타우 펩티드를 포함한다.
제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 적어도 하나의 애쥬번트를 추가로 포함하는 방법.
제32항에 있어서, 적어도 하나의 애쥬번트는 TLR9 작용제를 포함하는 방법.
제32항에 있어서, TLR9 작용제는 서열 번호 14 내지 서열 번호 18로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 갖는 CpG 올리고뉴클레오티드인 방법.
제33항에 있어서, CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 14의 뉴클레오티드 서열을 갖는 방법.
제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 애쥬번트는 수산화알루미늄을 포함하는 방법.
제27항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 접합체의 유효량은 용량당 15 μg의 접합체를 포함하는 방법.
제27항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 접합체의 유효량은 용량당 60 μg의 접합체를 포함하는 방법.
제27항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 프라이머 백신 투여 후 20 내지 26주차에 유효량의 접합체를 포함하는 2차 부스터 백신 조성물을 대상에게 근육내 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 36주 동안 지속적인 면역 반응이 지속되는 방법.
제38항에 있어서, 2차 부스터 백신 조성물이 프라이머 백신 투여 후 24주차에 투여되고, 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 48주 동안 지속적인 면역 반응이 지속되는 방법.
제38항 또는 제39항에 있어서, 프라이머 백신 투여 후 45 내지 50주차에 유효량의 접합체를 포함하는 3차 부스터 백신 조성물을 대상에게 근육내 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 67주 동안 지속적인 면역 반응이 지속되는 방법.
제40항에 있어서, 프라이머 백신 투여 후 48주차에 3차 부스터 백신 조성물이 투여되고, 프라이머 백신 투여 후 적어도 약 74주 동안 지속적인 면역 반응이 지속되는 방법.
제27항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 지속적인 면역 반응은 바람직하게는 항-pTau IgG 역가가 위약 대조군의 것보다 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100배 이상 더 높은 포스포릴화된 타우(pTau)에 대한 IgG 반응을 포함하는 방법.
제27항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 지속적인 면역 반응은 바람직하게는 항-타우 IgG 역가가 위약 대조군의 것보다 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100배 이상 더 높은 비포스포릴화 타우에 대한 IgG 반응을 포함하는 방법.
제27항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 지속적인 면역 반응은 바람직하게는 항-ePHF IgG 역가가 위약 대조군의 것보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20배 이상 더 높은 강화된 쌍나선 필라멘트(ePHF)에 대한 IgG 반응을 포함하는 방법.
제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 대상은 타우 응집체의 제거(clearance)를 필요로 하는 방법.
제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 대상은 신경원섬유(neurofibrillary) 병변의 형성에 의해 유발되거나 이와 관련된 신경퇴행성 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 방법.
제46항에 있어서, 대상은 알츠하이머병의 치료를 필요로 하는 방법.
제47항에 있어서, 대상은 초기 알츠하이머병 또는 알츠하이머병으로 인한 경도 인지 장애(MCI)의 치료를 필요로 하는 방법.