KR20210106476A - 고농도의 항-vegf 항체를 함유하는 단백질 용액 제형 - Google Patents

Abstract

본 발명은 주사, 바람직하게는 유리체내 주사에 적합한 고농도의, 수성 약제학적 조성물로서 제형화된 항-VEGF 항체를 제공한다. 수성 약제학적 조성물은 고수준의 항체 응집 없이 그리고 고수준의 눈에 보이지 않는 미립자 물질 없이 환자에게 고농도의 항체 활성 성분을 전달하는 데 유용하다. 본 발명의 수성 조성물은 적어도 50 ㎎/㎖의 농도를 갖는 항체를 포함한다. 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 당, 완충제 및 계면활성제를 포함한다.

Description

고농도의 항-VEGF 항체를 함유하는 단백질 용액 제형

서열목록

본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출되고, 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된 서열 목록을 포함한다. 2019년 12월 11일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 파일명이 PAT058325_sequence_listing_2019_ST25.txt이며, 용량이 9 바이트이다.

기술분야

본 발명은 항-VEGF 항체의 수성 약제학적 제형, 이의 제조를 위한 공정 및 제형의 용도에 관한 것이다.

혈관 내피 성장 인자(VEGF)는 혈관신생 및 신생혈관형성의 공지된 조절인자이며, 종양 및 안내 장애와 관련된 신생혈관형성의 중요한 매개체인 것으로 나타났다(Ferrara et al. Endocr. Rev. 18:4-25 (1997)). VEGF mRNA는 다수의 인간 종양에서 과발현되고, 눈물 중 VEGF의 농도는 당뇨병성 및 기타 허혈-관련 망막병증을 갖는 환자에서 혈관의 활성 증식의 존재와 고도로 관련된다(문헌[Berkman et al., J Clin Invest 91:153-159 (1993)]; 문헌[Brown et al. Human Pathol. 26:86-91 (1995); Brown et al. Cancer Res. 53:4727-4735 (1993)]; 문헌[Mattern et al. Brit. J. Cancer. 73:931-934 (1996)]; 및 문헌[Dvorak et al. Am J. Pathol. 146:1029-1039 (1995)]; 문헌[Aiello et al. N. Engl. J. Med. 331:1480-1487 (1994)]). 또한, 최근의 연구는 AMD에 의해 영향받은 환자에서의 맥락막 신생혈관 막에서 국소화된 VEGF의 존재를 나타내었다(Lopez et al. Invest. Ophtalmo. Vis. Sci. 37:855-868(1996)). 항-VEGF 중화 항체는 누드 마우스에서 다양한 인간 종양 세포주의 성장을 억제하는 데 사용될 수 있고, 또한 허혈성 망막 장애 모델에서 안내 혈관신생을 저해한다(문헌[Kim et al. Nature 362:841-844 (1993)]; 문헌[Warren et al. J. Clin. Invest 95:1789-1797 (1995)]; 문헌[Borgstrom et al. Cancer Res. 56:4032-4039 (1996)]; 및 문헌[Melnyk et al. Cancer Res. 56:921-924 (1996)])(문헌[Adamis et al. Arch. Opthalmol. 114:66-71 (1996)]).

인간 및 다른 포유류에서의 치료용으로 항-VEGF 항체를 포함하는 다수의 항체가 승인되어 있다. 액체 약제학적 제형에서 치료적 항체의 농도는, 예를 들어, 투여 경로에 따라 크게 달라진다. 적은 용적이 요망될 때 종종 항체의 고농도 제형에 대한 필요가 있다. 예를 들어, 고농도 제형은 유리체내 주사 또는 피하 투여에 바람직할 수 있다.

그러나, 고농도의 항체를 갖는 제형은 짧은 저장수명을 가질 수 있고, 제형화된 항체는 저장 동안 화학적 및 물리적 불안정에 의해 야기되는 생물학적 활성을 상실할 수 있다. 응집, 탈아마이드화 및 산화는 항체 저하의 가장 통상적인 원인인 것으로 알려져 있다. 특히, 응집은 잠재적으로 환자에서 증가된 면역 반응을 유발하여, 안전성 우려를 야기할 수 있다. 따라서, 이는 최소화 또는 예방되어야 한다.

수십 마이크론 내지 서브밀리미터 및 밀리미터 크기 범위의 미립자는 일반적으로 인간의 육안에 의해 보일 수 있기 때문에, 바이오치료 제형에서 미립자의 형성은 또한 주된 품질 문제이다(문헌[Das, 2012, AAPS PharmSciTech, 13:732-746] 참조). 치료적 안과 제제에서 미립자는, 심지어 현미경 또는 광 차폐에 의해서만 보이는 것이라고 해도, 눈에 대한 손상을 야기할 수 있다. 따라서, 안과 제형에서 눈에 보이지 않는(sub-visible) 미립자 물질 함량이 특정 제한 이내인지를 확인하기 위한 규제 표준이 있다. 예를 들어, 미국 약전(USP)은 안과용 용액에서 미립자 물질에 대한 설정 요건을 가지며, 현미경 또는 광 차폐 방법 입자 계수에 의해 결정할 때, 예컨대, 직경이 10 ㎛ 이상인 입자의 최대 수는 ㎖당 50개이며, 직경이 25 ㎛ 이상인 입자의 최대 수는 ㎖당 5개이며, 직경이 50 ㎛ 이상인 입자의 최대 수는 ㎖당 2개이다(USP 일반 챕터 <789> 참조).

고농도 항체 제형을 생산하는 방법은 공지되어 있다. 그러나, 다양한 약제학적 부형제, 완충제 등의 존재 하에 응집물을 형성하거나 분해되는 경향에 대한 항체 아미노산 서열의 예측 불가능한 영향을 극복하기 위한 보편적 접근은 존재하지 않는다. 추가로, 눈에 보이지 않는 입자의 허용 가능한 수준을 함유하는 고농도의 단백질(예컨대 항체)를 이용하여 안과 제형을 제조하는 것은 어렵고, 예측 가능하지 않다. 고용량이 필요한 단백질 약물에 대한 제형의 개발은 용해도 제한 단백질에 대해서는 어렵고, 또한 몇몇 제조, 안정성, 분석 및 전달 문제를 초래한다. 응집의 농도 의존적 분해 경로는 이들 고농도에서 단백질 제형 개발에 대한 가장 큰 문제이다. 비천연 단백질 응집 및 미립자 형성에 대한 잠재력에 추가로, 가역적 자기-회합이 일어나는데, 이는 주사에 의한 전달을 복잡하게 하는 특성, 예컨대 점성도에 기여한다. 또한, 수성 단백질 제형은 이들이, 예를 들어, 냉장고 또는 냉동고에 저장되기 때문에 시간에 따라 흐려지고, 혼탁해질 수 있다. 흐림 및 혼탁은 일반적으로 제형 내 단백질의 응집 또는 결정화와 관련된다. 여과 또는 주사 전에 제형을 정화하는 다른 수단 또 다르게는 이를 환자에게 전달하는 것에 대한 임의의 필요를 피하기 위해 단백질 제형에서의 임의의 흐림 또는 혼탁을 피하는 것에 대한 강한 선호가 있다.

본 발명의 목적은 인간, 특히 인간 눈에 대한 투여에 적합하고, 흐림/혼탁/결정화를 피하는 고농도의 항-VEGF 항체 및 저수준의 항체 응집 및 눈에 보이지 않는 입자를 갖는 추가적인 그리고 개선된 제형을 제공하는 것이다.

따라서, 본 발명은 안과용 주사에 적합한 고농도의 항-VEGF 항체를 포함하는 수성 약제학적 조성물에 관한 것이다. 특정 양상에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 낮은 내지 검출 가능하지 않은 수준의 항체 응집 또는 분해를 나타내며, 제작, 제조, 수송 및 장기간의 저장 동안에 생물학적 활성이 거의 없거나 전혀 없고, 항-VEGF 항체의 농도는 적어도 약 50 ㎎/㎖, 60 ㎎/㎖, 80 ㎎/㎖, 90 ㎎/㎖, 100 ㎎/㎖, 120 ㎎/㎖, 140 ㎎/㎖, 160 ㎎/㎖, 180 ㎎/㎖ 또는 200 ㎎/㎖이다.

본 발명은 항-VEGF 항체, 안정제, 완충제 및 계면활성제를 포함하는 수성 약제학적 조성물을 제공한다. 특정 양상에서, 수성 약제학적 조성물은: (i) 적어도 50 ㎎/㎖의 항-VEGF 항체, (ii) 안정제로서 당(예컨대, 수크로스), (iii) 시트레이트 또는 히스티딘 완충제, 및 (iv) 계면활성제로서 폴리솔베이트 80을 포함한다.

특정 양상에서, 수성 약제학적 조성물은 적어도 50 ㎎/㎖의 서열번호 1 및 서열번호 2의 서열을 포함하는 항-VEGF 항체, 약 4.5% 내지 11%(w/v) 수크로스, 10 내지 20 mM 시트레이트 완충제, 및 0.001% 내지 0.05% 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함하되, 조성물의 pH는 약 7.0 내지 약 7.6이다.

본 발명의 특정 바람직한 실시형태는 특정 바람직한 실시형태의 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.

도 1: 165일 후 5%로 PEG를 갖는 제형 1 내지 6(F1 내지 F6)에서의 항체 1008.

본 발명은 고농도의 항-VEGF 항체를 포함하는 수성 약제학적 조성물을 제공한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 2 내지 8℃에서 적어도 18개월 동안 안정하고, 주사 또는 주입을 포함하는 눈에 대한 투여, 예를 들어, 안구 투여, 예를 들어, 유리체내 투여에 적합하다.

본 발명은 신규한 약제학적 제형, 특히 활성 성분이 인간 VEGF에 대한 항체를 포함하는 신규한 약제학적 제형을 제공한다. 일 양상에서, 본 발명은 고농도의 항-VEGF 항체를 갖는 수성 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 제형에서 바람직한 항-VEGF 항체는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용되는 WO 2009/155724에 기재되어 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "항체"는 전체 항체 및 임의의 항원 결합 단편(즉, "항원-결합 부분", "항원 결합 폴리펩티드" 또는 "면역결합제") 또는 이의 단일 쇄를 포함한다. "항체"는 이황화결합에 의해 상호 연결되는 적어도 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 당단백질을 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 V_H로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, 즉, CH1, CH2 및 CH3으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 명세서에서 V_L로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인, 즉, CL로 이루어진다. V_H 및 V_L 영역은 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 다시 나눌 수 있으며, 이들 사이에는 프레임워크 영역(FR)으로 불리는 더 보존된 영역이 배치되어 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 아미노-말단에서 카복시-말단까지 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 이루어진다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은, 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예컨대 효과기 세포) 및 고전적 보체 시스템의 첫 번째 성분(Clq)을 포함하는, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.

항체의 "항원-결합 부분"(또는 간단히 "항체 부분")이라는 용어는 항원(예를 들어, VEGF)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 나타났다. 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어 내에 포함된 결합 단편의 예는 (i) Fab 단편, V_L, V_H, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 브리지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) V_H 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 V_L 및 V_H 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) V_H 도메인으로 이루어진 단일 도메인 또는 dAb 단편(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR) 또는 (vii) 선택적으로 합성 링커에 의해 결합될 수 있는 2 이상의 단리된 CDR의 조합을 포함한다. 더 나아가, Fv 단편의 두 도메인, 즉, V_L 및 V_H는 별개의 유전자에 의해 암호화되지만, 이들은 재조합 방법을 사용하여 합성 링커에 의해 연결될 수 있으며, 이러한 링커는 이들을 V_L 영역 및 V_H 영역이 짝을 이루어 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 쇄(단쇄 Fv(scFv)로서 알려져 있음)로서 만들어질 수 있게 한다(예를 들어, 문헌[Bird et al. (1988) Science 242:423-426]; 및 문헌[Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참조). 이러한 단일 쇄 항체는 또한 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어에 포함되는 것으로 의도된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적인 기법을 사용하여 얻어지며, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 효용을 위해 선별된다. 항원-결합 부분은 재조합 DNA 기법에 의해, 또는 온전한 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 항체는 상이한 아이소타입, 예를 들어, IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아형), IgA1, IgA2, IgD, IgE 또는 IgM 항체를 가질 수 있다.

바람직한 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 서열번호 1에 제시된 바와 같은 서열을 갖는 가변 중쇄 및 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 가변 경쇄를 포함한다.

다른 바람직한 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 서열번호 3에 제시된 바와 같은 서열을 포함하는 단일쇄 Fv(scFv) 항체 단편이다:

본 발명의 수성 약제학적 조성물 중의 항-VEGF 항체는, 예를 들어, WO 2009/155724에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다. scFv는 본 명세서에 기재된 바와 같은 발현 벡터를 이용하여 생성될 수 있다. 발현 벡터에서 개시 코돈으로부터 유래된 메티오닌은 번역 후에 절단되지 않은 경우에 최종 단백질에 존재한다:

특정 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물 중의 항-VEGF 항체는 서열번호 5, 6 및 7에 각각 제시된 바와 같은 중쇄 HCDR1, HCDR2 및 HCDR 3, 및 서열번호 8, 9 및 10에 각각 제시된 바와 같은 경쇄 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물 중의 항-VEGF 항체의 농도는 적어도 50 ㎎/㎖이다. 바람직하게는, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 약 50 ㎎/㎖, 약 60 ㎎/㎖, 약 70 ㎎/㎖, 약 80 ㎎/㎖, 약 90 ㎎/㎖, 약 100 ㎎/㎖, 약 110 ㎎/㎖, 약 120 ㎎/㎖, 약 130 ㎎/㎖, 약 140 ㎎/㎖, 약 150 ㎎/㎖, 약 160 ㎎/㎖, 약 170 ㎎/㎖, 약 180 ㎎/㎖, 약 190 ㎎/㎖, 약 200 ㎎/㎖, 약 210 ㎎/㎖, 약 220 ㎎/㎖, 약 230 ㎎/㎖, 약 240 ㎎/㎖, 약 250 ㎎/㎖ 또는 약 300 ㎎/㎖의 항-VEGF 항체를 포함한다.

특정 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 약 60 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의 항-VEGF 항체, 예를 들어, 서열번호 1 및 서열번호 2를 포함하는 항체를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 약 60 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의, 서열번호 3을 포함하는 항-VEGF 항체를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 약 60 ㎎/㎖의, 서열번호 3을 포함하는 항-VEGF 항체를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 약 90 ㎎/㎖의, 서열번호 3을 포함하는 항-VEGF 항체를 포함한다.

다른 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 약 120 ㎎/㎖의, 서열번호 3을 포함하는 항-VEGF 항체를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 약 60 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의, 서열번호 4를 포함하는 항-VEGF 항체를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 약 60 ㎎/㎖의, 서열번호 4를 포함하는 항-VEGF 항체를 포함한다.

다른 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 약 120 ㎎/㎖의, 서열번호 4를 포함하는 항-VEGF 항체를 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은, 용어 "약"은 값 또는 파라미터 그 자체를 포함하고 설명한다. 예를 들어, "약 x"는 "x" 그 자체를 포함하고 설명한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은, 용어 "약"은 측정과 관련하여 사용될 때 또는 값, 단위, 상수 또는 값의 범위를 변형시키기 위해 사용될 때, 값 또는 파라미터 그 자체를 포함하는 것에 추가로 ±1 내지 10%의 변형을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 용어 "약"은 측정과 관련하여 사용될 때, 또는 값, 단위, 상수 또는 값의 범위를 변형시키기 위해 사용될 때, ±1, ±2, ±3, ±4, ±5, ±6, ±7, ±8, ±9 또는 ±10%의 변형을 지칭한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은, 용어 "사이"는 값 또는 파라미터 그 자체를 포함하고 설명한다. 예를 들어, "x와 y 사이"는 "x" 및 "y"를 포함하고 설명한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "안정한"은 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-VEGF 항체가 저장 시 이의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 안정성을 본질적으로 보유한다는 것을 의미한다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기법은 당업계에서 이용 가능하며, 예를 들어, 문헌[Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)] 및 [Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)]에서 검토된다. 안정성은, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 AEX-HPLC(음이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피)를 이용하여 선택된 온도에서 선택된 시간 기간 동안 측정될 수 있다. 바람직하게는, 수성 제형은 실온(약 25℃)에서 또는 40℃에서 적어도 1주 동안 안정하고/안정하거나, 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월 또는 적어도 24개월 동안 안정하다.

본 명세서에 기재된 바와 같은 항-VEGF 항체는, 색 및/또는 투명함의 시각적 검사 시 응집, 분해, 침전 및/또는 변성에 대해, 또는 UV 광 산란, AEX-HPLC에 의해 또는 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 또는 다른 적합한 당업계에 공지된 방법에 의해 측정하여 정해진 방출 세부사항을 충족시킨다면, 약제학적 제형에서 "그의 물리적 안정성을 보유한다".

특히, 이것이 미국 약전 일반 챕터 <789>에서 규정된 안과용 용액에 대한 요건을 충족한다면 물리적 안정성을 보유한다. 일 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 미립자 물질의 존재에 비해 USP <789> 요건을 충족시킨다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물에서 직경이 10 ㎛ 이상인 입자의 최대 수는 ㎖당 50개이고, 본 발명의 수성 약제학적 조성물에서 직경이 25 ㎛ 이상인 입자의 최대 수는 ㎖당 5개이며, 본 발명의 수성 약제학적 조성물에서 직경이 50 ㎛ 이상인 입자의 최대 수는 ㎖당 2개이고, 상기 입자 수는 미국 약전 일반 챕터 <789>에 의해 요구되는 바와 같은 광 차폐 및/또는 현미경 입자 계수 방법에 의해 결정된다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "단백질 응집"은 생체 약제학적 약물의 요망되는 규정된 종(예를 들어, 단량체) 대신에 보다 고분자량의 단백질 종, 예컨대, 올리고머 또는 다량체의 형성을 의미한다. 따라서 단백질 응집은 공유 결합 또는 비공유 상호작용에 의해 형성된 모든 종류의 추가로 정의되지 않은 다량체 종에 대한 보편적인 용어이다. 응집물은 크기 배제 크로마토그래피(SE-HPLC 또는 SEC)에 의해 측정될 수 있다. 일 실시형태에서, 항-VEGF 항체의 응집물은 정량 한계 미만이다.

본 명세서에 기재된 바와 같은 항-VEGF 항체는, 항체의 순도가 감소되지 않거나, 또는 실온(약 25℃)에서 또는 40℃에서 적어도 1주 동안 저장 후에 실질적으로 감소되지 않고/않거나 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월 내지 18개월 동안 안정하다면, 수성 약제학적 제형에서 "이의 안정성을 보유한다". 항-VEGF 항체의 안정성은 임의의 적합한 수단, 예를 들어, 크기-배제 크로마토그래피(SEC), 모세관 전기영동법 및/또는 음이온 교환 크로마토그래피(AEX)에 의해 평가될 수 있다. 일 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 수성 약제학적 조성물에서 안정하되, SEC에 의해 평가되는 주요 피크에서의 상실%는 실온(약 25℃)에서 또는 40℃에서 적어도 1주 동안 그리고/또는 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 저장 후에 ≤5%, ≤4%, ≤3%, ≤2%, ≤1%, ≤0.5%, ≤0.4%, ≤0.3%, ≤0.2% 또는 ≤0.1%로 평가된다. 바람직한 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 저장 후에 SEC에 의해 평가된 주요 피크의 ≤0.5%, ≤0.4%, ≤0.3%, ≤0.2% 또는 ≤0.1% 상실을 가진다. 특히 바람직한 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 저장 후에 SEC에 의해 평가된 주요 피크의 ≤0.1% 상실을 가진다.

일 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 수성 약제학적 조성물에서 안정하되, 모세관 전기영동법에 의해, 예를 들어, 환원 조건, 예를 들어, SDS 하에 평가된 HC와 LC 합계의 상실%는 실온(약 25℃)에서 또는 40℃에서 적어도 1주 및/또는 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 저장 후에 ≤5%, ≤4%, ≤3%, ≤2%, ≤1%, ≤0.5%, ≤0.4%, ≤0.3% 또는 ≤0.2%로 평가된다. 바람직한 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 약 2 내지 8℃에서 저장 후에 모세관 전기영동법에 의해 평가된 HC와 LC 합계의 ≤0.5%, ≤0.4%, ≤0.3% 또는 ≤0.2% 상실을 가진다. 특히 바람직한 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 약 2 내지 8℃에서 저장 후에 모세관 전기영동법에 의해 평가된 HC와 LC 합계의 ≤0.2% 상실을 가진다.

일 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 수성 약제학적 조성물에서 안정하되, 음이온 교환 크로마토그래피(AEX)에 의해 평가된 산성 피크 합계%는 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 저장 후에 ≤2%, ≤1.9%, ≤1.8%, ≤1.7% 또는 ≤1.6%로 평가된다. 바람직한 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월에서 저장 후에 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 평가된 산성 피크 합계의 ≤2%를 가진다. 다른 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 수성 약제학적 조성물에서 안정하되, 음이온 교환 크로마토그래피(AEX)에 의해 평가된 산성 피크 합계%는 약 25℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 저장 후에 ≤6%, ≤5% 또는 ≤4%로 평가된다.

일 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 수성 약제학적 조성물에서 안정하되, 음이온 교환 크로마토그래피(AEX)에 의해 평가된 염기성 피크 합계%는 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 저장 후에 ≤2%, ≤1.9% 또는 ≤1.8%로 평가된다. 바람직한 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월에서 저장 후에 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 평가된 염기성 피크 합계의 ≤2%를 가진다. 다른 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 수성 약제학적 조성물에서 안정하되, 음이온 교환 크로마토그래피(AEX)에 의해 평가된 염기성 피크 합계%는 약 25℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 저장 후에 ≤6%, ≤5% 또는 ≤4%로 평가된다.

본 명세서에 기재된 바와 같은 항-VEGF 항체는, 주어진 시간에 항체의 생물학적 활성이 효능 분석에서, 예를 들어, HUVEC 증식 효능 분석에서 결정되는 바와 같이 약제학적 제형이 제조되는 때에 나타난 생물학적 활성의 약 10% 이내라면, 수성 약제학적 제형에서 "그의 생물학적 활성을 보유한다". 효능 분석의 예는 경쟁 ELISA이다. 예를 들어, 경쟁 ELISA에서, 비오티닐화된 VEGF에 대해 VEGFR2/Fc와 경쟁하는 본 명세서의 실시예에 기재된 바와 같은 1008의 능력이 측정될 수 있다. 증가된 양의 1008이 비오티닐화된 VEGF와 이의 수용체 VEGFR2/Fc의 결합을 효과적으로 차단하기 때문에, 관찰된 신호는 1008의 농도와 역으로 관련된다. 각 샘플은 1008 참조 표준에 대해 96-웰 미량정량판에서 분석될 수 있고, 기준 표준의 상대 효능에 대한 샘플의 상대 효능이 관찰될 수 있다.

일 실시형태에서, 항-VEGF 항체는 수성 약제학적 조성물에서 안정하되, 항-VEGF 항체의 생물학적 활성은 참조 샘플에 비해 약 65% 내지 135%이고, 생물학적 활성은 약 2 내지 8℃에서 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월 또는 적어도 18개월 동안 저장 후에 평가된다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 "수성" 약제학적 조성물은 약제학적 용도에 적합한 조성물이되, 수성 담체는 증류수이다. 약제학적 용도에 적합한 조성물은 멸균, 균질 및/또는 등장성일 수 있다. 수성 약제학적 조성물은, 예를 들어 바로 사용 가능한 사전 충전형 주사기(pre-filled syringe)에서 또는 바이알로부터 제조된 주사기에서 본 발명의 약제학적 조성물을 포함하는 수성 형태로("액체 제형") 직접적으로 또는 사용 직전에 재구성되는 동결건조물로서 제조될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "수성 약제학적 조성물"은 액체 제형 또는 재구성된 동결건조 제형을 지칭한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 인간 대상체에 대한 안과용 투여에 적합하다. 구체적 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 유리체내 투여에 적합하다.

본 발명의 수성 약제학적 조성물은, 항-VEGF 항체에 추가로, 추가 성분, 예컨대, 다음 중 하나 이상을 포함한다: (i) 안정제; (ii) 완충제; (iii) 계면활성제; 및 (iv) 유리 아미노산. 이러한 추가 성분 각각의 포함은 항-VEGF 항체의 낮은 응집을 갖는 조성물을 제공할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은, 항-VEGF 항체에 추가로: (i) 안정제; (ii) 완충제; 및 (iii) 계면활성제를 포함한다.

본 발명과 함께 사용하기 위한 적합한 안정제는, 예를 들어, 점도 향상제, 증량제, 가용화제 등으로서 작용할 수 있다. 안정제는 이온성 또는 비이온성(예를 들어, 당)일 수 있다. 당으로서 이들은 단당류, 예를 들어, 프럭토스, 말토스, 갈락토스, 글루코스, D-만노스, 소르보스 등; 이당류, 예를 들어, 락토스, 수크로스, 트레할로스, 셀로비오스 등; 다당류, 예를 들어, 라피노스, 멜레지토스, 말토덱스트린, 덱스트란, 전분 등; 및 알디톨, 예컨대, 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 자일리톨 솔비톨(글루시톨) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 예를 들어, 당은 수크로스, 트레할로스, 라피노스, 말토스, 솔비톨 또는 만니톨일 수 있다. 당은 당 알코올 또는 아미노당, 예컨대, 수크로스 또는 트레할로스일 수 있다. 수크로스가 바람직하다. 이온 안정제로서, 이들은 염, 예컨대 NaCl 또는 아미노산 성분, 예컨대, 아르기닌-HCl을 포함할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 당은 본 발명의 수성 약제학적 조성물 중에 3 내지 11%(w/v)의 농도로 존재한다. 특정 실시형태에서, 당은 약 4.5% 내지 약 11% 농도의 수크로스이다. 다른 실시형태에서, 당은 약 5.5% 내지 약 7.0%(w/v) 수크로스 농도의 수크로스이다. 다른 실시형태에서, 당은 약 5.5% 내지 약 6.8%(w/v) 수크로스 농도의 수크로스이다. 다른 실시형태에서, 당은 약 5% 내지 약 10%(w/v) 농도의 트레할로스이다. 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 5.8%(w/v) 농도의 수크로스이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 6.4%(w/v) 농도의 수크로스이다.

본 발명과 함께 사용하기 위한 적합한 완충제는 유기산염, 예컨대, 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 카본산, 타르타르산, 석신산, 아세트산 또는 프탈산의 염; 트리스, 트로메타민 염산염 또는 인산염 완충제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 추가로, 아미노산 성분이 또한 완충제로서 사용될 수 있다. 10 내지 20 mM의 히스티딘 완충제, 예를 들어, 0.13% 내지 0.26%(w/v) 히스티딘 및 0.03% 내지 0.07%(w/v) 히스티딘 염산염 일수화물), 또는 10 내지 20 mM 시트레이트 완충제, 예를 들어 0.006% 내지 0.012% 시트르산(w/v) 및 0.2% 내지 0.6% 시트르산나트륨(w/v)을 포함하는 시트레이트 또는 히스티딘 완충제가 특히 유용하다. 본 발명의 제형에서 사용되는 시트르산은 임의의 수화 형태, 예를 들어, 무수 또는 일수화물일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 약 1 내지 60 mM, 예를 들어, 약 10 내지 40 mM, 약 15 내지 30 mM, 약 15 내지 25 mM, 약 10 내지 20 mM, 약 10 내지 15 mM 농도로 완충제를 포함한다. 특정 실시형태에서, 완충제는 시트레이트 또는 히스티딘이다. 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 약 10 내지 15 mM 시트르산나트륨, 예를 들어, 약 0.01 ㎎/㎖ 시트르산 일수화물 및 약 0.43 ㎎/㎖ 시트르산나트륨 이수화물을 포함한다.

수성 약제학적 조성물은 개선된 pH 제어를 제공하기 위해 이러한 완충제 또는 pH 조절제를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 pH가 7.0 내지 7.6이다. 일 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물의 pH는 약 7.0 내지 7.5, 또는 약 7.0 내지 7.4, 약 7.0 내지 7.3, 약 7.0 내지 7.2, 약 7.1 내지 7.6, 약 7.2 내지 7.6, 약 7.3 내지 7.6 또는 약 7.4 내지 7.6이다. 일 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 pH가 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 약 7.5 또는 약 7.6이다. 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 pH가 7.0이다. 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 pH가 약 7.2이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 pH가 약 7.4이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 pH가 약 7.6이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 본 명세서의 "계면활성제"라는 용어는 양친매성 구조를 갖는 유기 물질을 지칭한다. 계면활성제는, 표면-활성 모이어티의 전하에 따라서, 다양한 약제학적 조성물 및 생물학적 물질의 제제에 대한 비이온성, 음이온성, 양이온성 및 분산제로 분류될 수 있다.

본 발명과 함께 사용하기 위한 적합한 계면활성제는 비이온성 계면활성제, 이온성 계면활성제 및 양쪽성 계면활성제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 발명과 함께 사용하기 위한 전형적인 계면활성제는 소르비탄 지방산 에스테르(예를 들어, 소르비탄 모노카프릴레이트, 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노팔미테이트), 소르비탄 트리올리에이트, 글리세린 지방산 에스테르(예를 들어, 글리세린 모노카프릴레이트, 글리세린 모노미리스테이트, 글리세린 모노스테아레이트), 폴리글리세린 지방산 에스테르(예를 들어, 데카글리세릴 모노스테아레이트, 데카글리세릴 디스테아레이트, 데카글리세릴 모노리놀리에이트), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미테이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리올리에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리스테아레이트), 폴리옥시에틸렌 솔비톨 지방산 에스테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 테트라스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 테트라올리에이트), 폴리옥시에틸렌 글리세린 지방산 에스테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 글리세릴 모노스테아레이트), 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에스테르(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 디스테아레이트), 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르), 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 알킬 에테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 프로필 에테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 세틸 에테르), 폴리옥시에틸렌 알킬페닐 에테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 노닐페닐 에테르), 폴리옥시에틸렌 수소화된 피마자유(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 피마자유, 폴리옥시에틸렌 수소화된 피마자유), 폴리옥시에틸렌 밀랍 유도체(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 밀랍), 폴리옥시에틸렌 라놀린 유도체(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 라놀린) 및 폴리옥시에틸렌 지방산 아마이드(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아르산 아마이드); C₁₀-C₁₈ 알킬 설페이트(예를 들어, 세틸황산나트륨, 라우릴황산나트륨, 올레일황산나트륨), 평균 2 내지 4 ㏖의 산화 에틸렌 단위가 첨가된 폴리옥시에틸렌 C₁₀-C₁₈ 알킬 에테르 설페이트(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 라우릴 황산나트륨), 및 C₁-C₁₈ 알킬 설포석신산 에스테르 염(예를 들어, 라우릴 설포석신산 에스테르 나트륨); 및 천연 계면활성제, 예컨대, 레시틴, 글리세로인지질, 스핑고인지질(예를 들어, 스핑고미엘린) 및 C₁₂-₁₈ 지방산의 수크로스 에스테르를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 조성물은 이들 계면활성제 중 한 가지 이상을 포함할 수 있다. 바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들어, 폴리솔베이트 20, 40, 60 또는 80이다. 폴리솔베이트 80이 특히 바람직하다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.001% 내지 0.05%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 다른 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.001% 내지 0.01%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.001% 내지 0.005%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.001%, 0.002%, 0.003%, 0.004% 또는 0.005%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.001%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.002%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.003%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.004%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.005%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.01% 내지 0.05%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.01%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.02%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.03%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.04%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.05%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함한다.

본 발명과 함께 사용하기 위한 적합한 유리 아미노산은 아르기닌, 리신, 히스티딘, 오르니틴, 이소류신, 류신, 알라닌, 글리신, 글루탐산 또는 아스파르트산을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 염기성 아미노산, 즉, 아르기닌, 리신 및/또는 히스티딘의 포함이 바람직하다. 조성물이 히스티딘을 포함한다면, 이는 완충제와 유리 아미노산 둘 다로서 작용할 수 있지만, 히스티딘 완충제가 사용될 때, 비-히스티딘 유리 아미노산을 포함하는 것, 예를 들어, 히스티딘 완충제 및 리신을 포함하는 것이 전형적이다. 아미노산은 이의 D- 및/또는 L-형태로 존재할 수 있지만, L-형태가 전형적이다. 아미노산은 임의의 적합한 염, 예를 들어, 염산염, 예컨대, 아르기닌-HCl로서 존재할 수 있다. 하나의 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 임의의 이러한 유리 아미노산을 포함하지 않는다.

본 발명의 수성 약제학적 조성물에 사용될 수 있는 다른 고려되는 부형제는 예를 들어, 항균제, 산화방지제, 정전기 방지제, 지질, 예컨대 인지질 또는 지방산, 스테로이드, 예컨대 콜레스테롤, 단백질 부형제, 예컨대 혈청 알부민(인간 혈청 알부민), 재조합 인간 알부민, 젤라틴, 카제인, 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨 등을 포함한다. 본 발명의 제형에 사용하기에 적합한 상기 및 추가의 공지된 약제학적 부형제 및/또는 첨가제는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌["The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th edition, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003)]; 및 문헌[Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 21^st edition, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005)]에 열거되어 있다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 NaCl을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 120 mM의 NaCl을 포함한다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 히알루론산(HA)을 포함한다. 히알루론산은 분자량이 500 내지 700 kDa인 HA를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.1%의 HA를 포함한다. 다른 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 0.2%의 HA를 포함한다.

특정 실시형태에서, 항-VEGF 항체의 동결건조는 환자를 치료하기 위해 본 발명의 수성 약제학적 조성물을 제공하는 것이 상정된다.

항체의 동결건조를 위한 기법은 당업계에 잘 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌[John F. Carpenter and Michael J. Pikal, 1997 (Pharm. Res. 14, 969-975)]; 문헌[Xialin (Charlie) Tang and Michael J. Pikal, 2004 (Pharm. Res. 21, 191-200)]을 참조한다. 따라서, 일 실시형태에서 본 명세서에 기재된 수성 약제학적 조성물을 동결건조시킴으로써 제조된 동결건조 제형이 제공된다. 다른 실시형태에서, (i) 본 명세서에 기재된 항-VEGF 항체를 포함하는 수성 약제학적 조성물을 제조하는 단계 및 (ii) 수성 용액을 동결건조시키는 단계를 포함하는, 동결건조물의 제조 방법이 제공된다.

환자에게 동결건조물이 투여될 수 있기 전에, 수성 재구성물을 이용하여 재구성되어야 한다. 이 단계는 동결건조물 중의 항체 및 다른 성분이 재용해되어 환자에 주사하기에 적합한 용액을 제공하는 것을 가능하게 한다.

재구성을 위해 사용되는 수성 물질의 용적은 얻어진 약제학적 조성물 중의 항체 농도를 나타낸다. 동결건조전 용적보다 적은 용적의 재구성물을 이용하는 재구성은 동결건조 전보다 더 농축된 조성물을 제공한다. 재구성 인자(동결건조 후 제형의 용적:동결건조 전 제형의 용적)는 1:0.5 내지 1:6일 수 있다. 1:3의 재구성 인자가 유용하다. 상기 언급한 바와 같이, 본 발명의 동결건조물은 항-VEGF 항체 농도가 적어도 50 ㎎/㎖(즉, 적어도 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120 또는 130 ㎎/㎖)인 수성 조성물을 제공하도록 재구성될 수 있고, 재구성물의 용적은 그에 따라 선택될 것이다. 필요하다면, 재구성된 제형은 의도된 용량을 전달하는 데 적절한 경우 환자에 투여하기 전에 희석될 수 있다.

동결건조 항체에 대한 전형적인 재구성은 선택적으로 보존제를 함유하는 멸균수 또는 완충제를 포함한다. 동결건조물이 완충제를 포함한다면, 재구성물은 추가 완충제(동결건조물의 완충제와 동일하거나 상이할 수 있음)를 포함하거나 또는 대신에 완충제(예를 들어, WFI(주사용수), 또는 생리 식염수)를 포함하지 않을 수도 있다.

본 명세서에 기재된 수성 약제학적 조성물은 액체 형태일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 액체 형태이다. 일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 바이알에 액체로서 포함된다.

항-VEGF 항체를 포함하는 본 발명의 수성 약제학적 조성물은 다양한 질환 또는 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다. 항-VEGF 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 대상체의 신생혈관성 안질환을 치료하는데 특히 유용하다.

본 발명의 수성 약제학적 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 "신생혈관성 안 질환"은 비정상적인 혈관신생, 맥락막 신생혈관형성(CNV), 망막 혈관 투과성, 망막 부종, 당뇨병성 망막증(특히 증식성 당뇨병성 망막증), 당뇨병성 황반 부종, nAMD(신생혈관성 AMD)와 관련된 CNV를 포함하는, 신생혈관(노화) 연령-관련 황반 변성(AMD), 망막 허혈과 관련된 후유증, 중심성 망막 정맥 폐쇄(CRVO) 및 후 분절 신생혈관형성을 비제한적으로 포함하는 안구 신생혈관형성과 관련된 병태, 질환 또는 장애를 포함한다.

본 발명의 수성 약제학적 조성물은 항-VEGF 항체에 더하여 추가 활성 성분을 포함할 수 있다. 추가 약학 제제는, 예를 들어, 안질환을 치료하는 데 유용한 다른 항체를 포함할 수 있다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 본 명세서에 기재된 치료 척도를 지칭한다. "치료" 방법은 장애 또는 재발 장애 중 하나 이상의 중증도를 예방, 치유, 지연, 감소시키기 위해 또는 이러한 치료가 존재하지 않을 때 예상된 것 이상으로 대상체의 생존을 연장시키기 위해, 본 발명의 항체를 이러한 치료가 필요한 대상체, 예를 들어, VEGF-매개 안장애를 갖는 대상체 또는 궁극적으로 이러한 장애를 획득하는 대상체에 투여하는 데 사용한다.

본 발명의 수성 약제학적 조성물은 환자에게 투여될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "대상체" 또는 "환자"는 영장류, 토끼, 돼지, 말, 개, 고양이, 양 및 소를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 인간 및 비-인간 포유류를 지칭한다. 바람직하게는, 대상체 또는 환자는 인간이다.

투여는 전형적으로 주사기를 통해 이루어질 것이다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 약제학적 조성물을 포함하는 전달 장치(예를 들어, 주사기)(예를 들어, 사전 충전 주사기) 및 본 발명의 약제학적 조성물을 포함하는 주사기 및 바이알을 포함하는 키트를 제공한다. 환자는 원칙적 활성 성분으로서 항-VEGF 항체의 유효량(즉, 목적하는 효과를 달성하거나 또는 적어도 부분적으로 달성하는 데 충분한 양)을 받을 것이다. 치료적 유효 용량은 질환과 연관된 증상 또는 병태에서의 점진적 변화라도 만들어낼 수 있다면 충분하다. 치료적 유효 용량이 질환을 완전히 치유하거나 또는 증상을 완전히 제거하여야만 하는 것은 아니다. 바람직하게는, 치료적 유효 용량은 질환을 이미 앓고 있는 환자에서 질환 및 이의 합병증을 적어도 부분적으로 저지할 수 있다. 이 용도에 효과적인 양은 치료 중인 장애 및 환자 자신의 면역계의 일반적 상태의 중증도에 의존할 것이다.

용량은 질환 또는 병태 치료에서 보통의 기술을 갖는 의사에 의해 공지된 투약량 조절 기법을 이용하여 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 수성 약제학적 조성물에서 사용되는 항-VEGF 항체의 치료적 유효량은, 예를 들어, 목적하는 용량 용적 및 투여 방식(들)을 고려하여 결정된다. 전형적으로, 치료적으로 유효한 조성물은 용량당 0.001 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖ 범위의 투약량으로 투여된다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에서 사용되는 투약량은 약 60 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖(즉, 약 60, 70, 80, 90, 100, 110 또는 120 ㎎/㎖)이다. 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 방법에서 사용되는 항-VEGF 항체의 투약량은 60 ㎎/㎖ 또는 120 ㎎/㎖이다.

특정 실시형태에서, 용량은 환자의 눈에 직접적으로 투여된다. 일 실시형태에서, 눈마다의 용량은 적어도 약 0.5 mg 내지 최대 약 6 mg이다. 눈마다의 바람직한 용량은 약 0.5 ㎎, 0.6 ㎎, 0.7 ㎎, 0.8 ㎎, 0.9 ㎎, 1.0 ㎎, 1.2 ㎎, 1.4 ㎎, 1.6 ㎎, 1.8 ㎎, 2.0 ㎎, 2.5 ㎎, 3.0 ㎎, 3.5 ㎎, 4.0 ㎎, 4.5 ㎎, 5.0 ㎎, 5.5 ㎎ 및 6.0 ㎎을 포함한다. 용량은 안과 투여에 적합한 다양한 용적, 예컨대 50 ㎕ 또는 100 ㎕, 예를 들어, 3 ㎎/50 ㎕ 또는 6 ㎎/50 ㎕로 투여될 수 있다. 20 ㎕ 이하, 예를 들어 약 20 ㎕, 약 10 ㎕, 또는 약 8.0 ㎕를 포함하는 더 적은 용적이 또한 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 2.4 ㎎/20 ㎕, 1.2 ㎎/10 ㎕ 또는 1 ㎎/8.0 ㎕(예를 들어, 1 ㎎/8.3 ㎕)의 용량은 상기 기재한 질환 및 장애 중 하나 이상을 치료하거나 개선시키기 위해 환자의 눈에 전달된다. 전달은, 예를 들어, 유리체내 주사 또는 주입일 수 있다.

본 발명은 또한 의약으로서 사용하기 위한, 예를 들어, 환자에 항체를 전달하는 데 사용하기 위한, 또는 상기 기재한 질환 및 장애 중 하나 이상을 치료 또는 개선시키는 데 사용하기 위한 본 발명의 제형(즉, 수성 약제학적 조성물)을 제공한다.

본 발명은 본 발명의 수성 약제학적 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에게 항-VEGF 항체를 전달하는 방법을 추가로 제공한다.

특정 실시형태에서, 본 발명의 항-VEGF 항체를 환자에게 전달하는 방법은: (i) 본 발명의 동결건조물을 재구성하여 수성 제형을 제공하는 단계, 및 (ii) 수성 제형을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 단계 (ii)는 단계 (i)의 24시간 이내에(예를 들어, 12시간 이내, 6시간 이내, 3시간 이내, 또는 1시간 이내에) 이상적으로 일어난다.

일 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 바이알에 포함된다. 다른 실시형태에서, 수성 약제학적 조성물은 전달 장치에 포함된다. 일 실시형태에서, 이러한 전달 장치는 사전 충전 주사기이다. 일 실시형태에서, 항-VEGF 항체를 환자에게 전달하는 방법은 유리체내 주사에 의해 수성 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 특정 구체적 실시형태는 본 명세서에서 이후에 넘버링되는 바와 같이 기재된다:

1. 수성 약제학적 조성물로서, 적어도 50 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의 서열번호 1 및 서열번호 2의 서열을 포함하는 항-VEGF 항체, 약 4.5% 내지 11%(w/v)의 수크로스, 5 내지 20 mM의 시트르산나트륨, 및 0.001% 내지 0.05%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함하되, 상기 조성물의 pH는 약 7.0 내지 약 7.6인, 수성 약제학적 조성물.

2. 실시형태 1에 있어서, 상기 항-VEGF 항체는 서열번호 3의 서열을 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

3. 실시형태 1 또는 2에 있어서, 상기 항-VEGF 항체는 서열번호 4의 서열을 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

4. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 7.0인, 수성 약제학적 조성물.

5. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 7.1인, 수성 약제학적 조성물.

6. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 7.2인, 수성 약제학적 조성물.

7. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 7.3인, 수성 약제학적 조성물.

8. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 7.4인, 수성 약제학적 조성물.

9. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 0.004% 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

10. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 0.02% 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

11. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 약 60 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의 항-VEGF 항체를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

12. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 약 60 ㎎/㎖의 항-VEGF 항체를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

13. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 약 120 ㎎/㎖의 항-VEGF 항체를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

14. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 5.5% 내지 7.0%(w/v) 수크로스를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

15. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 10 내지 12 mM의 시트레이트 완충제를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

16. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 5.9%(w/v) 수크로스, 10 mM 시트르산나트륨, 0.02%(w/v) 폴리솔베이트 80을 포함하되, pH는 약 7.2인, 수성 약제학적 조성물.

17. 실시형태 16에 있어서, 6 ㎎의 항-VEGF 항체를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

18. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 6.4%(w/v) 수크로스, 12 mM 시트르산나트륨, 0.02%(w/v) 폴리솔베이트 80을 포함하되, pH는 약 7.2인, 수성 약제학적 조성물.

19. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 5.8%(w/v) 수크로스, 10 mM 시트르산나트륨, 0.02%(w/v) 폴리솔베이트 80을 포함하되, pH는 약 7.2인, 수성 약제학적 조성물.

20. 실시형태 18 또는 19에 있어서, 3 ㎎의 항-VEGF 항체를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

21. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, NaCl을 더 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

22. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 0.1 내지 0.5%의 히알루론산(HA)을 더 포함하는, 수성 약제학적 조성물.

23. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 상기 조성물은 적어도 18개월 동안 2 내지 8℃에서 안정한, 수성 약제학적 조성물.

24. 선행하는 실시형태 중 임의의 것에 있어서, 상기 조성물은 액체인, 수성 약제학적 조성물.

25. 항-VEGF 항체를 대상체에게 전달하는 방법으로서, 실시형태 1 내지 24 중 임의의 것의 수성 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

26. VEGF에 의해 매개되는 안질환 또는 장애의 치료 방법으로서, 실시형태 1 내지 24 중 임의의 것의 수성 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

27. 실시형태 26에 있어서, 상기 안질환 또는 장애가 눈의 신생혈관 질환인, 방법.

28. 실시형태 24 내지 27 중 임의의 것에 있어서, 상기 투여는 유리체내인, 방법.

29. 수성 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 항-VEGF 항체를 대상체에게 전달하는 용도를 위한, 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나의 수성 약제학적 조성물.

30. 수성 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 VEGF에 의해 매개되는 안질환 또는 장애를 치료하는 용도를 위한, 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나의 수성 약제학적 조성물.

31. 실시형태 30에 따른 용도를 위한 수성 약제학적 조성물로서, 상기 안질환 또는 장애는 눈의 신생혈관 질환인, 수성 약제학적 조성물.

32. 실시형태 29 내지 31 중 임의의 것에 따른 용도를 위한 수성 약제학적 조성물로서, 상기 투여는 유리체내인, 수성 약제학적 조성물.

33. 실시형태 1 내지 24 중 임의의 것의 수성 약제학적 조성물을 포함하는 투약 형태(dosage form).

34. 실시형태 1 내지 24 중 임의의 것의 수성 약제학적 조성물을 포함하는 전달 장치.

35. 실시형태 34에 있어서, 사전 충전형 주사기인, 전달 장치.

당업자는 본문에 교시된 특징, 양상 및 실시형태가 모두 서로 조합 가능하며, 본문의 다양한 부분으로부터의 특징 및/또는 실시형태를 조합하는 특정 양상이 당업자에게 적절하게 개시되는 것으로 간주될 것이다.

각 실시형태는 조합이 실시형태의 설명과 일치되는 정도로, 하나 이상의 다른 실시형태와 조합될 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 상기 제공된 실시형태는 실시형태의 조합으로부터의 결과로서의 이러한 실시형태를 포함하여 모든 실시형태를 포함하는 것으로 이해된다는 것이 추가로 이해되어야 한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 모든 백분율은 달리 언급되지 않는 한, 중량%이다.

달리 명시되지 않는 한, 단수의 용어는 "하나", "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미하도록 취해진다. 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 단수 용어는 복수를 포함하고, 복수의 용어는 단수를 포함한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "포함하는(comprising)"은 "포함하는(including)"뿐만 아니라 "이루어진" 및" 본질적으로 이루어진"을 포함하며, 예를 들어, X를 "포함하는" 조성물은 배타적으로 X로 이루어질 수 있거나 또는 추가적인 것, 예를 들어, X + Y를 포함할 수 있다.

용어 "또는"은 문맥상 명확히 다르게 나타나지 않는 한, 용어 "및/또는"을 의미하는 것으로 본 명세서에서 사용되고, 이와 상호 호환적으로 사용된다.

본 명세서 전체적으로 인용되는 임의의 특허, 특허 출원 및 참고문헌의 내용은 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 포함된다.

본 발명의 다른 실시형태는 당업자가 본 명세서 및 본 명세서에 개시된 본 발명을 실행을 고려할 때 분명하게 될 것이다. 본 명세서 및 실시예는 단지 예시적인 것으로 간주하며, 본 발명의 진정한 범주와 사상은 다음의 청구범위 및 이의 균등물로 나타내고자 한다.

실시예

다음의 실시예는 항체 1008을 포함하는 안정하고, 고도로 농축된 용액을 제공하는 적합한 안정화 접근 및 조성물을 확인하도록 설계된 제형 개발 노력을 기재하며, 이는 안과용 제품에 대한 규제 요건을 충족시키는 냉장 저장 조건에서 적어도 12개월의 저장수명을 갖는 유리체내(IVT) 제형을 가능하게 한다.

1008 항체는 인간 혈관 내피 성장 인자 A(VEGF-A)에 결합하고, 이의 생물학적 활성을 저해하는 단일쇄 항체이다. 발현된 1008의 아미노산 서열은 서열번호 4이다.

1008을 pH 6.75에서 0.05% 폴리솔베이트 80이 있는 15 mM 시트르산삼나트륨/시트르산 중의 등장 용액으로서 제형화하였을 때, 120 ㎎/㎖의 1008의 농도에서 눈에 보이지 않는 미립자가 관찰되었다. 이 초기 제형으로 인한 주된 문제는 주사용 안과용 용액에 대한 규제 제한을 초과하는 미립자 물질이었다(USP<789>).

다음의 실시예는 2 내지 8℃ 저장에서 적어도 18개월 동안 안정한 60 및 120 ㎎/㎖의 1008 유리체내(IVT) 용액의 제형 개발을 요약한다. 제형 개발 노력은 눈에 보이지 않는 입자의 형성의 저해, 및 함량, 순도 및 효능에 대한 USP 요건을 충족시키는 것에 중점을 두었다.

분석 방법

나타낸 바와 같은 실시예 전체적으로 다음의 방법을 사용하였다.

마이크로-유동 영상화(Micro-Flow Imaging: MFI) 방법

부형제 선별 분석을 위해 사용한 MFI 방법, 즉, 60 ㎎/㎖ 최적화 연구를 위한 연구 1 및 연구 2는 다음과 같았다:

사용한 총 샘플 용적: 0.50 ㎖

퍼지 용적: 0.20 ㎖

분석 용적: 0.26 ㎖

정제된 여과 입자가 없는 물을 이용하여 최적화된 조도(illumination) 단계를 수행하였다.

120 ㎎/㎖ 1008 연구 3 및 연구 4 분석을 위해 사용한 MFI 방법:

사용한 총 샘플 용적: 0.80 ㎖

퍼지 용적: 0.23 ㎖

분석 용적: 0.48 ㎖

정제된 여과 입자가 없는 물을 이용하여 최적화된 조도 단계를 수행하였다.

SEC 방법

SE-HPLC(크기 배제 크로마토그래피)는 단백질을 이들의 크기에 따라 분리시킨다. 샘플 분자가 다공성-입자 정지상을 통과함에 따라 이들의 차별적 배제 또는 포함에 의해 분리가 달성되었다. TOSOH SuperSW3000 칼럼(Tosoh Bioscience LLC, 펜실베니아주 킹 오프 프러시아에 소재) 및 214 ㎚ 및 280 ㎚에서 동시에 작동할 수 있는 검출기를 구비한, 0.25 ㎖/분의 유속 및 4℃의 샘플 온도를 유지할 수 있는 고성능 액체 크로마토그래피. 정제 시험을 위해 이 방법을 사용하였다.

AEX-HPLC 방법

AEX-HPLC(음이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피)는 단백질을 이들의 순전하에 따라 분리시킨다. 강한 음이온 교환 칼럼을 포함하는 온도 제어 칼럼 구획(25℃로 설정), 오토-샘플러(4℃로 설정), 및 280 ㎚에서 작동할 수 있는 가변 파장 UV 검출기를 갖는, 0.8 ㎖/분의 유속을 유지할 수 있는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 이 절차를 수행하였다.

CGE 방법

SDS 겔 모세관 전기영동에 의해 10 kDa 내지 225 kDa 분자량의 단백질의 정체 및 순도 결정을 위한 모세관 전기영동법을 수행하였다. 모세관을 Beckman Coulter 0.2% SDS 겔 완충제, pH 8, 등록상표 제형을 이용하여 역학적으로 충전시켰다. 분자체 전기영동에 의해 단백질 분리를 수행하였다. 단백질 분자량의 로그는 이의 상호 전기영동성과는 선형이었다. 단백질의 정체는 이의 이동을 분자량 표준과 비교함으로써 결정하였다. 모 피크 및 불순물의 면적% 분석에 의해 순도를 결정하였다. 광다이오드 어레이 검출기(PDA)를 사용하여 220 ㎚에서 샘플을 분석하였다.

실시예 1

6가지 제형을 이용하는 제형 선별 연구

120 ㎎/㎖의 농도에서 1008의 저장 시 관찰된 결정/흐림/혼탁 형성 문제를 처리하기 위해 적합한 제형을 확인하기 위한 제형 선별 연구를 수행하였다.

다양한 양의 염(0 및 120 mM NaCl), 폴리솔베이트 80(PS80)(0.05% 및 0.004%) 및 pH 값(6.8, 7.0, 7.3 및 7.6)을 갖는 5가지 제형(F2 내지 F6)을 시험하고, 대조군(F1)과 비교하였다. 표 1은 제형 F1 내지 F6의 조성물에 대한 상세한 설명을 제공한다.

혼탁도 및 pH

제형 2에서, 40℃에서 4주 후에 pH 6.8에서 120 mM NaCl 농도를 이용하여 혼탁도의 증가를 관찰하였다(도 1). 도 1에서, 결과는 pH 효과를 나타내는 pH와 상관관계가 있었다. 낮은 및 높은 폴리솔베이트 80 농도를 이용하여 pH 7.3에서 제형 4 및 5를 제형화하였다. 이들 두 제형(F4 및 F5)에 대한 혼탁도 값은 모든 시점 및 조건에서 서로로부터 한 자리 숫자 이내이며(표 2), 이들 값을 유의미하게 다른 것으로 간주하지 않았다. 데이터에 의해 pH 효과를 알 수 있었고, 여기서 보다 높은 pH 값은 보다 낮은 혼탁도에 대응하였다. 또한 NaCl이 없는 제형에 비해 NaCl을 포함하는 F2에 의해 5℃ 및 25℃에서 약간 더 높은 혼탁도가 관찰되었다. 모두 6가지 제형에 대해, 최대 12개월 동안 5℃ 및 25℃에서 저장 시 목표 pH는 안정하였다. 모든 pH 값은 목표 pH의 허용 가능한 범위 이내였다.

광 차폐에 의한 눈에 보이지 않는 입자

5℃ 및 25℃에서 최대 52주에 모든 제형에 대한 입자 계수는 USP<789> 제한 이내였다. 비-USP 소 용적 광 차폐 방법을 이용하여 측정을 수행하였다. 제형 간의 차이는 관찰되지 않았다.

SEC에 의한 순도/주요 피크

크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 평가한 바와 같은 순도는 12개월에 걸쳐 5℃에서 안정하였고, 임의의 제형에 대해 유의미한 감소는 관찰되지 않았다. pH 증가 및 폴리솔베이트 80 증가와 함께 SEC에 의한 주요 피크 순도의 유의미한 감소가 25℃에서 관찰되었다. 전반적 모델은 SEC에 의한 주요 피크에 대해, 폴리솔베이트 80이 pH보다 더 유의미한 효과가 있다는 것을 나타내었다. 25℃에서 SEC에 의한 주요 피크 순도를 최대화한 제형은 6.8 및 7.0의 pH 값에서 낮은 폴리솔베이트 80 농도를 포함하는 것이었다. 주요 피크의 감소는 주로 SEC에 의한 응집물의 형성으로 인한 것이었다.

AEX에 의한 순도/주요 피크

음이온 교환 크로마토그래피(AEX)에 의해 평가한 바와 같은 순도는 5℃에서 12개월 안정성에 대해 감소되었다(12개월에 걸쳐 5℃에서 AEX 순도의 대략 1% 감소). 가속화 및 스트레스 안정성 조건에서 AEX 순도의 유의미한 감소가 관찰되었다(6개월에 걸쳐 25℃에서 AEX 순도의 대략 12% 감소). AEX 주요 피크의 변화는 주로 온도 및 유도 시간을 나타냈다. pH 설정점 간에 적절한 차이가 관찰되지 않았다. F2 제형(pH 6.8, 0.004 % PS80, 120 mM NaCl)에 대해 AEX에 의해 5℃ 및 25℃에서 NaCl의 효과가 관찰되었는데, 이는 NaCl이 안정화 효과를 가지며 온도 스트레스로 인해 AEX 순도 감소를 최소화하였다는 것을 시사한다. AEX에 의한 순도는 최대 6주까지 40℃에서 대략 27% 감소되었다. 보다 높은 폴리솔베이트 80 농도(0.05%)는 보다 낮은 폴리솔베이트 80 농도(0.004%)를 갖는 제형에 비해 주요 피크 순도의 유의미한 감소를 초래하였다. 40℃(4주)에서 모두 6가지 제형에 대한 조합된 순도 데이터(SEC 및 AEX)는 pH 증가 및 폴리솔베이트 80 농도 증가와 함께 순도의 감소를 나타내었다.

CE-SDS에 의한 순도/주요 피크

환원 조건 하에 모세관-전기영동 도데실황산나트륨(CE-SDS)에 의해 평가한 바와 같은 항체 1008의 순도는 12개월에 걸쳐 5℃에서 대략 0.7%만큼 감소되었다. 환원 조건 하에 CE-SDS에 의해 평가한 바와 같은 항체 1008의 순도는 25℃에서 최대 6개월까지 가속화된 조건 하에서 대략 5%만큼 감소되었고, pH가 증가함에 따라 단편화 수준은 증가되었지만 폴리솔베이트 80 농도에 대해 영향을 나타내지 않았다는 것을 확인하였다.

전반적으로, pH, 이온 강도 및 폴리솔베이트 80 농도에 대한 안정성 결과는 pH 및 폴리솔베이트 80 농도가 모든 온도에서 가장 유의한 인자라는 것을 확인하였다. 보다 높은 pH 및 보다 높은 폴리솔베이트 80을 갖는 제형은 SEC 및 AEX에 의해 보다 낮은 순도를 초래하였다. 염의 첨가는 눈에 보이지 않는 미립자에 대해 적절한 영향 없이 안정성에 대해 최소의 영향을 가졌다. 최대 12개월(52주)까지의 제형 안정성 연구의 모든 분석 결과를 표 2에 요약한다.

표 2 계속

PEG 모델 분석

120 ㎎/㎖에서 항체 1008에 적합한 제형의 빠른 선택을 가능하게 하는 PEG 모델을 개발하였다. 첫째로, pH 6.8에서 본래 제형의 항체 1008이 2 내지 8℃에서 대략 7일 저장 후 눈에 보이는 결정을 형성하는 적합한 PEG 농도를 정하였다. 1, 2, 4, 5, 6 및 8%의 PEG 농도를 제조하였다.

PEG 펠릿을 항체 1008에 직접 첨가하고, 자기 교반에 의해 약 10분 동안 용해시켰다. 각각 1 ㎖를 함유하는 5개의 바이알을 각 PEG 농도에 대해 제조하고, 바이알을 2가지 온도 조건 - 온도(2 내지 8℃, 순환에 의해 40℃에서 안정)에 저장하였다. 1주 동안 각 바이알에 대해 매일 시각적으로 관찰하였다. 8% PEG 제형을 갖는 모든 바이알은 48시간 후에 고체 결정질 형성을 나타내었고, 이어서, 2개의 상으로 분리되는 것을 관찰하였다. PEG 6% 바이알에 대해, 3개 바이알에서 제3일에 결정화가 시작되었고, 모두 5개의 바이알은 6일 후에 고체 백색 결정을 형성하였다. 5% PEG 샘플에 대해, 모든 바이알은 제6일에 결정화를 시작하였다. PEG 4% 바이알에 대해, 5개의 바이알 중 4개에서 제8일에 결정화가 시작되었고, 5번째 바이알은 30일 후에 결정화되었다. PEG 1% 및 2% 바이알은 모두 30일 후에 맑게 남아있었다. 이들 결과에 기반하여, 추가 선별 연구를 위한 5% PEG 농도를 선택하였다.

각 바이알에 대해 표 1의 매일의 시각적 관찰에 기재한 바와 같이 제형 1 내지 6에 대해 각각 1 ㎖를 함유하는 5개 바이알을 준비하였다. 연구 설계 및 시험 조건을 표 4에 기재하고, 165일(5.5개월) 후의 결과를 도 1에 나타낸다. F1(대조군, pH 6.8)의 모든 바이알을 7일 후에 침전시켰다. F2(120 mM NaCl, pH 6.8) 바이알에 대해 19일 후에 그리고 F3 바이알(pH 7.0)에 대해 22일 후에 침전을 시작하였다. 남아있는 제형(F4, F5 및 F6)의 모든 바이알은 165일 후에 맑았다. 본 연구에 기반하여, 결정화는 대조군에 대해 pH 7.0에서 3배 더 길게(최대 22일) 그리고 보다 높은 pH(7.3 내지 7.6)에서 훨씬 더 높게 줄어들었고, F4, F5, F6의 모든 바이알은 165일(5.5개월) 후에 맑게 남아있었다. 보다 높은 pH(>7.0) 수준은 결정화 회피와 상관관계가 있었다. NaCl의 존재는 또한 보다 짧은 기간을 제외하고 결정화 회피와 상관관계가 있었다.

강인성 연구

120 ㎎/㎖에서 항체 1008의 강인성 연구를 설계하여 선택된 pH 및 폴리솔베이트 80 농도를 확인하였다. 결정 형성의 화학적 분해, 응집 및 위험을 최소화하기 위해 최소 pH 7.0으로 목표 pH 7.2를 선택하고, 제작 및 장기간 저장 동안 최소 pH 범위 ± 0.2를 허용하였다. 응집을 최소화하기 위해 0.02%의 목표 폴리솔베이트 80 농도를 선택하고, 흡착을 최소화하고 균질성을 유지하기 위해 충분량의 폴리솔베이트 80을 허용하였다. 다양한 양의 폴리솔베이트 80(0.01, 0.03% 및 목표 0.02%) 및 pH 값(7.0 내지 7.4, 목표 7.2)을 갖는 대조군으로서 제형 1(F1)을 이용하여 10가지 제형을 선택하였다. 또한, 모든 샘플을 실온에서 3일 동안 250 rpm에서 진탕시킨 후에 제작 조건 및 현실 수송 조건을 시뮬레이션하기 위해 안정하게 두었다. 제형 선별에서 사용한 성분의 농도를 표 5에 요약한다. 또한, 모든 제형은 5.9% 수크로스 및 10 mM 시트르산나트륨 완충제를 추가로 포함하였다.

3일의 진탕 스트레스 후에 25℃(T=0)에서 모든 폴리솔베이트 80 및 pH 수준에 대해 SEC 및 AEX에 의해 평가할 때 순도 감소는 없었다. F1(대조군)뿐만 아니라 보다 낮은 폴리솔베이트 80(0.01%)을 이용하는 F5 및 보다 높은 pH(7.4)를 이용하는 F9에 대해 3일의 진탕 후에 10 마이크론 초과의 미립자 물질 계수 증가를 관찰하였다. 이는 F6에 대해서는 보이지 않았다. 3일의 진탕에서 강인성 연구에 대한 분석 결과를 이하의 표 6A 및 표 6B에 요약한다.

[표 6A]

[표 6B]

5℃ 및 25℃에 최대 52주 안정성 시점까지, >10 ㎛ 및 >25 ㎛의 크기 범위의 입자 계수는 모든 제형에 대해 각각 50개의 입자/㎖ 및 5개의 입자/㎖의 USP<789> 제한 미만에 잘 머물러 있었다. 2 내지 8℃에서 저장한 120 ㎎/㎖의 모든 제형의 혼탁도 수준은 평균 5 내지 12 NTU의 범위이며, 개시 시점에 18 NTU(F4)에서 하나의 이상점이 있었다(3일의 진탕 스트레스 후에 25℃(T=0)에서 모든 폴리솔베이트 80 및 pH 수준에 대해 SEC 및 AEX에 의해 평가할 때 순도 감소는 없었다. F1(대조군)뿐만 아니라 보다 낮은 폴리솔베이트 80(0.01%)을 이용하는 F5 및 보다 높은 pH(7.4)를 이용하는 F9에 대해 3일의 진탕 후에 10 마이크론 초과의 미립자 물질 계수 증가를 관찰하였다. 이는 F6에 대해서는 보이지 않았다. 3일의 진탕에서 강인성 연구에 대한 분석 결과를 이하의 표 6A 및 표 6B에 요약한다. 표 6). 용액 중의 혼탁도 수준은 3개월 안정성 저장 후에 10.8로부터 6.3 NTU까지 약간 감소되었다. 이 시점을 지나서, 최대 52주까지 임의의 제형에 대한 유의미한 변화는 없었다. 임의의 제형에 대해 색 및 pH 값의 적절한 변화를 관찰할 수 없었다. 모든 제형은 AEX 및 SEC에 의해 평가한 주요 피크 순도에 관해 52주에 걸쳐 대략 1.1 내지 1.2% 감소로 최소 변화를 나타내었다. 관찰 가능한 차이는 없었고, 이는 제형이 2 내지 8℃에서 12개월의 저장에 걸쳐 강하다는 것을 나타낸다.

SEC에 의한 순도: 응집물 수준의 적절한 변화는 관찰되지 않았고 최대로 관찰된 변화는 0.1%였다. 단량체 피크는 99% 초과였고, 2 내지 8℃에서 12개월의 저장에 걸쳐 변화를 거의 나타내지 않았다.

SEC에 의한 응집물: SEC에 의해 평가한 응집물 수준이 정량 한계 미만이기 때문에 모든 제형은 2 내지 8℃에서 12개월에 걸쳐 안정하였다.

CE-SDS에 의한 순도: 12개월에 걸쳐 5℃(대략 1%)에서 약간의 감소가 관찰되었고, 보다 높은 pH를 갖는 제형에 대해 더 확연하였다. 폴리솔베이트 80의 농도는 단편 형성과 독립적이었다. 순도 데이터(25℃, 6개월)는 pH가 증가함에 따라 단편화 수준이 증가함을 확인한다. CE-SDS에 의해 순도에 대해 폴리솔베이트 80 농도의 영향 없음을 알 수 있다.

강인성 연구에 대한 분석 결과를 이하의 표 7에 요약한다.

표 7 계속

본 발명 및 이의 실시형태가 상세히 설명되었다. 그러나, 본 발명의 범위는 본 명세서에 기재된 임의의 공정, 제조, 물질 조성, 화합물, 수단, 방법 및/또는 단계의 특정 실시형태에 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 본 발명의 정신 및/또는 본질적인 특성을 벗어나지 않으면서, 다양한 변경, 대체 및 변형이 개시된 물질에 적용될 수 있다. 따라서, 당업자는 본 명세서에서 기재된 실시형태와 실질적으로 동일한 기능을 수행하거나, 실질적으로 동일한 결과를 달성하는 이후의 변경, 대체 및/또는 변형이 본 발명의 관련 실시형태에 따라 이용될 수 있음을 본 발명으로부터 용이하게 인지할 것이다. 따라서, 이하의 청구범위는 본 명세서에 개시된 물질, 화합물, 수단, 방법 및/또는 단계의 공정, 제조, 조성물의 변경, 대체 및 변형을 그의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 청구범위는 해당 효과에 대해 언급되지 않는 한, 설명된 순서 또는 요소에 제한되는 것으로 해석되어서는 안된다. 첨부된 청구범위의 범주를 벗어나지 않으면서 형태 및 세부사항의 다양한 변경이 이루어질 수 있음을 이해하여야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG Sigg, Juergen De Moor, Pamela <120> PROTEIN SOLUTION FORMULATION CONTAINING HIGH CONCENTRATION OF AN ANTI-VEGF ANTIBODY <130> PAT058325 <150> 62/781,003 <151> 2018-12-18 <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Gly Phe Ile Asp Pro Asp Asp Asp Pro Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Asp His Asn Ser Gly Trp Gly Leu Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 2 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ile Ile His Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Tyr Leu Ala Ser Thr 85 90 95 Asn Gly Ala Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 3 <211> 251 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 3 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ile Ile His Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Tyr Leu Ala Ser Thr 85 90 95 Asn Gly Ala Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 130 135 140 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu 145 150 155 160 Thr Asp Tyr Tyr Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Val Gly Phe Ile Asp Pro Asp Asp Asp Pro Tyr Tyr Ala 180 185 190 Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 195 200 205 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 210 215 220 Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Asp His Asn Ser Gly Trp Gly Leu Asp Ile 225 230 235 240 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 4 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 4 Met Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ile Ile His Ser 20 25 30 Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Tyr Leu Ala Ser 85 90 95 Thr Asn Gly Ala Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 130 135 140 Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser 145 150 155 160 Leu Thr Asp Tyr Tyr Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 165 170 175 Gly Leu Glu Trp Val Gly Phe Ile Asp Pro Asp Asp Asp Pro Tyr Tyr 180 185 190 Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys 195 200 205 Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala 210 215 220 Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Asp His Asn Ser Gly Trp Gly Leu Asp 225 230 235 240 Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 5 Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Tyr Tyr Met Thr 1 5 10 <210> 6 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 6 Phe Ile Asp Pro Asp Asp Asp Pro Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 7 Gly Asp His Asn Ser Gly Trp Gly Leu Asp Ile 1 5 10 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 8 Gln Ala Ser Glu Ile Ile His Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 9 Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 10 Gln Asn Val Tyr Leu Ala Ser Thr Asn Gly Ala Asn 1 5 10

Claims (27)

1. 수성 약제학적 조성물로서, 적어도 50 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의, 서열번호 1 및 서열번호 2의 서열을 포함하는 항-VEGF 항체, 약 4.5% 내지 11%(w/v)의 수크로스, 5 내지 20 mM의 시트르산나트륨, 및 0.001% 내지 0.05%의 폴리솔베이트 80(w/v)을 포함하되, 상기 조성물의 pH는 약 7.0 내지 약 7.6인, 수성 약제학적 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체는 서열번호 3 또는 4의 서열을 포함하는, 수성 약제학적 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항-VEGF 항체는 서열번호 3 및 4의 서열을 포함하는, 수성 약제학적 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 6.8인, 수성 약제학적 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 7.2인, 수성 약제학적 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 0.004%의 폴리솔베이트 80(w/v)를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 0.02%의 폴리솔베이트 80(w/v)를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 약 60 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의 항-VEGF 항체를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.
9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20 ㎎/㎖의 항-VEGF 항체를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 5.5% 내지 7.0%(w/v)의 수크로스를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.
11. 제1항에 있어서, 6.5%(w/v) 수크로스, 12 mM 시트르산나트륨, 0.02%(w/v) 폴리솔베이트 80을 포함하되, pH는 약 7.2인, 수성 약제학적 조성물.
12. 제11항에 있어서, 3 ㎎의 항-VEGF 항체를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.
13. 제1항에 있어서, 5.8%(w/v) 수크로스, 10 mM 시트르산나트륨, 0.02%(w/v) 폴리솔베이트 80을 포함하되, pH는 약 7.2인, 수성 약제학적 조성물.
14. 제13항에 있어서, 6 ㎎의 항-VEGF 항체를 포함하는, 수성 약제학적 조성물.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 18개월 동안 2 내지 8℃에서 안정한, 수성 약제학적 조성물.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 액체인, 수성 약제학적 조성물.
17. 항-VEGF 항체를 대상체에게 전달하는 방법으로서, 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 수성 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
18. VEGF에 의해 매개되는 안질환 또는 장애의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 수성 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
19. 제18항에 있어서, 상기 안질환 또는 장애는 눈의 신생혈관 질환인, 방법.
20. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 유리체내인, 방법.
21. 수성 약제학적 조성물로서, 상기 수성 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 항-VEGF 항체를 대상체에게 전달하는 용도를 위한, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 수성 약제학적 조성물.
22. 수성 약제학적 조성물로서, 상기 수성 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 VEGF에 의해 매개되는 안질환 또는 장애를 치료하는 용도를 위한, 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 수성 약제학적 조성물.
23. 제22항에 있어서, 상기 안질환 또는 장애는 눈의 신생혈관 질환인, 수성 약제학적 조성물.
24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 유리체내인, 수성 약제학적 조성물.
25. 제1항 내지 제16항 또는 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항의 수성 약제학적 조성물을 포함하는 투약 형태(dosage form).
26. 제1항 내지 제16항 또는 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항의 수성 약제학적 조성물을 포함하는 전달 장치.
27. 제26항에 있어서, 사전 충전형 주사기(pre-filled syringe)인, 전달 장치.

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