KR20210103976A - 베타 코어 단편 hCG를 표지자로 하는 자궁 외 임신 진단 장치 - Google Patents

베타 코어 단편 hCG를 표지자로 하는 자궁 외 임신 진단 장치 Download PDF

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Abstract

본 발명의 면역 장치는 1) 분석하고자 하는 피검 시료를 수용하는 검체 영역; 2) 상기 검체 영역과 연동되어 있고, 탐침물질-표지가 접합된 항 I-hCG 항체 및 탐침물질-표지가 접합된 항 βcf hCG 항체를 포함하는 콘쥬게이트 영역; 및 3) 상기 검체 영역에 연결되어, 항 I-hCG 항체가 고정된 제1검출라인, 항 βcf hCG 항체가 고정된 제2검출라인 및 대조라인을 포함하는, 상기 콘쥬게이트 영역과 연동된 신호검출 영역; 및 신호검출 반응이 종료된 피검 시료를 흡수하는, 상기 신호검출 영역의 다운스트림에 위치하는 흡수 영역을 포함하여 정상 임신에 비해 βcf hCG / I-hCG의 신호세기가 낮은 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정하여 정확하고 간편한 자궁 외 임신 진단이 가능하다.

Description

베타 코어 단편 hCG를 표지자로 하는 자궁 외 임신 진단 장치{Novel ectopic pregnancy test devices by using beta core fragment hCG as diagnostic marker}
본 발명은 자궁 외 임신 진단용 면역장치, 그리고 이를 사용한 자궁 외 임신 진단 방법에 관한 것이다.
자궁 외 임신은 임신 첫 삼분기(first trimester) 동안 임신 여성의 모든 사망 중 9%를 차지하여, 임신 여성의 사망률을 증가시키며, 자궁 외 임신의 유병률은 전 세계적으로 점차 증가하고 있다. 1976년에서 1993년 사이에 북유럽에서 자궁 외 임신의 발생률은 임신 1,000 건당 11.2에서 18.8로 증가했다. 한국에서 자궁 외 임신의 발생률은 20 ~ 26 건의 임신 중 1 건으로 추정되며, 이는 서양 국가보다 상대적으로 높다.
과거에는 질 출혈과 하복부 통증과 같은 임상 소견을 바탕으로 자궁 외 임신을 진단하여 조기 발견에 어려움이 있었지만, 최근에는 혈청 인간융모막성 생식선자극호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG)을 결정하여 초기 단계에서 자궁 외 임신을 감지하는 것이 가능해졌다. 그러나, 이러한 진전에도 불구하고, hCG 측정 및 질 초음파 촬영은 여전히 정확도가 낮고 비용 효율성이 부족하여 일차 진료 센터에서 자궁 외 임신을 진단하는 데 효과가 제한적이다.
또한, 진단 결과가 모호할 경우 혈청 β-hCG 측정법을 시행하고 있는데, 정상 임신의 경우 β-hCG 호르몬은 배란 후 7일부터 혈액에서 검출되며 임신 6주까지는 지속적으로 혈중 농도가 증가하나, 자궁 외 임신의 경우는 β-hCG 농도의 증가 추세가 현저히 느리거나, 증가하지 않는 것에 기반하여, β-hCG의 혈중 농도가 2배로 증가하는 데 3일 이상 소요될 경우 자궁 외 임신으로 진단하는 방법으로, 혈청 hCG 수준의 반복 정량화를 수행해야 하므로 추가 시간과 비용이 필요할 수 있다.
혈청 프로게스테론 수치는 자궁 외 임신의 혈청 마커로 제안되었지만 일부 연구에 따르면 혈청 프로게스테론 수치는 정상 임신, 자궁 외 임신 및 자연 유산의 감별 진단에서 효과적이지 않고 임상 양상이 좋지 않은 것으로 나타났다. 자궁 외 임신을 빠르고 정확하게 진단하는 것이 바람직하지만 어려우며, 진단의 지연으로 나팔관 파열, 복강 내 출혈, 수혈 및 응급 개복 수술이 발생할 수 있다. 자궁 외 임신의 의학적 또는 외과적 치료에 의한 조기 진단 및 중재(intervention)는 사망률을 최소화할 수 있다. 특히, 초기에 최소 침습 복강경 수술은 나팔관의 보존을 촉진하고 장래 생식력을 증가시킬 수 있다.
인간융모막성 생식선자극호르몬(hCG)은 임신 중에 생성되는 당단백질 호르몬이다. hCG는 태반의 융모세포영양막에서 생성되어 임신초기에 프로게스테론을 계속 생산하도록 하여 태반기능이 완성되는 임신 10주까지 착상을 유지시켜 주는 기능을 한다. 체내 활성형태인 완전형 hCG(Intact hCG; I-hCG)는 약 37kDa의 분자량을 가지며 244개의 아미노산으로 구성된다. I-hCG는 크게 알파(α)와 베타(β) 2개의 서브 유닛(subunit)으로 이루어져 있으며, 알파-서브 유닛은 92개의 아미노산을 포함하고 베타-서브 유닛은 145개의 아미노산을 포함한다. I-hCG는 일반적으로 임신 기간 중 다양한 단계에 존재하며 체내에 존재하는 주된 구조이며, 임신초기에는 이러한 활성형 구조가 높은 비율로 다당쇄 hCG(hyperglycosylatedhCG; H-hCG) 형태로 존재한다. 상기 활성형 외에도 hCG의 다양한 해리 및 분해 생성물이 혈액 및 소변에서 발견되며, 이들은 단편화 hCG(nicked hCG; N-hCG), 유리베타 hCG(free β-hCG), 유리알파 hCG(freeα-hCG), 유리베타 코어 단편 hCG(free β-core fragment hCG) 등으로 존재한다.
베타 코어 단편 hCG(βcf hCG)는 hCG의 하나의 뚜렷한 분해 산물인 free β-hCG의 단편이며 약 14kDa의 분자량을 가진다. βcf hCG는 마지막 생리일(last menstrual period, LMP) 2주 이후부터 소변에서 I-hCG 대비 적은 양인 약 0.01pmol/mL 농도로 나타나기 시작하며, 임신 주수가 경과함에 따라 점차 증가하여, 5주가 경과하면 I-hCG 보다 우세한 농도로 나타난다. 또한, βcf hCG는 다른 대사산물과는 다르게 오직 소변에만 존재한다(J ClinEndocrinolMetab, 76, 1993, 704-10).
I-hCG의 농도는 혈청 및 소변에서 9-12주 사이에 가장 높은 수치를 보이며, 임산부의 소변 내 농도는 10주에 150,000mIU/mL이며, 개인차에 따라 900,000mIU/mL의 높은 농도로 검출되기도 한다.
본 발명자들은 자궁 외 임신의 경우 정상 임신에 비해 βcf hCG의 농도가 매우 낮으며, 정상 임신과 자궁 외 임신의 소변 내 βcf hCG 및 I-hCG 농도 비율의 변화를 비교하는 경우, 보다 정확하고 효율적으로 자궁 외 임신의 진단이 가능함을 확인하여 본 발명을 완성하였다. 본 발명은 hCG의 해리 및 분해 생성물의 구조적 변화를 특이적으로 인식하는 단일 클론 항체를 사용하여 샘플의 βcf hCG / I-hCG 수준을 측정하여 정상 임신의 βcf hCG / I-hCG 수준과 비교하여 높은 수준의 정확도로 자궁 외 임신 진단 결과를 제공한다. 따라서, 초음파 검사에 의해 진단하는 경우와 달리 기술자의 경험에 좌우되지 않고, 자궁 외 임신 진단에 소요되는 시간이 기존 진단 방법에 비해 상대적으로 짧고, 반복적인 테스트가 필요하지 않아 비용 및 시간 효율적이며 정확한 자궁 외 임신 진단 키트를 제공한다.
등록공보 제10-0403871호
본 발명자들은 I-hCG를 감지하는 제1검출라인 외에 βcf hCG를 감지하는 제2검출라인을 추가한 면역 장치를 통해 정상 임신의 βcf hCG / I-hCG 에 비해 낮은 수준의 βcf hCG / I-hCG를 자궁 외 임신으로 진단이 가능한 면역 장치를 발명하여 효율적이며 정확한 자궁 외 임신 진단이 가능하도록 하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 I-hCG 및 βcf hCG를 특이적으로 인식하는 항체를 포함하는 자궁 외 임신 진단키트를 제공한다.
또한, 본 발명은
1) 분석하고자 하는 피검 시료를 수용하는 검체 영역(Sample region);
2) 상기 검체 영역과 연동되어 있고, 탐침물질(Probe)에 접합된 항 I-hCG 항체 및 탐침물질에 접합된 항 βcf hCG 항체를 포함하는 콘쥬게이트 영역(Conjugate region);
3) 상기 검체 영역에 연결되어, 항 I-hCG 항체가 고정된 제1검출라인, 항 βcf hCG 항체가 고정된 제2검출라인 및 대조라인을 포함하는, 상기 콘쥬게이트 영역과 연동된 신호검출 영역; 및
4) 신호검출 반응이 종료된 피검 시료를 흡수하는, 상기 신호검출 영역의 다운스트림에 위치하는 흡습 영역을 포함하는 자궁 외 임신 진단용 면역 장치를 제공한다.
본 발명의 다른 양태에 따르면,
1) 시료를 상기 면역 장치에 적용하여 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG가 탐침물질-표지가 접합된 항 I-hCG 항체 및 항 βcf hCG 항체와 반응하는 단계;
2) 제1검출라인 및 제2검출라인에 의해 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG의 반응을 확인하는 단계로서, I-hCG, βcf hCG는 각각의 검출 라인에서 샌드위치 복합체의 존재에 의해 발생하는 신호에 의해 감지되는 단계; 및
3) 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 낮은 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정하는 단계를 포함하는 자궁 외 임신 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 실시 예에 따른 면역크로마토그래피 스트립은 I-hCG를 감지하는 검출라인 외에 βcf hCG를 감지하는 검출라인을 포함하여 βcf hCG / I-hCG의 농도 비율에 의해 자궁 외 임신을 진단하여 효율적이면서도 정확도가 높은 자궁 외 임신 진단이 가능하도록 하였다.
도 1은 본 발명에 따라 제조된 면역크로마토그래피 스트립의 구현 예를 보여주는 개요도이다.
도 2는 본 발명에 따른 면역크로마토그래피 스트립을 키트에 적용하는 구체 예를 보여주는 모형도이다.
도 3은 정상 임신군에서 Intact hCG, βcf hCG의 농도 변화량을 나타낸 도이다(Intact hCG : Circle spot,βcf hCG : Diamond spot).
도 4는 자궁 외 임신 환자군의 Intact hCG, βcf hCG 농도 변화량을 나타낸 도이다(Intact hCG : Circle spot,βcf hCG : Diamond spot).
도 5는 임신 주수 별 정상 임신과 자궁 외 임신 환자군에서 측정된 βcf hCG / Intact hCG의 농도 비(정상 임신: Circle spot, 자궁 외 임신 : Diamond spot)(도 5a) 및 βcf hCG / Intact hCG의 농도 비의 분포(EP : Ectopic pregnancy, NP : Normal pregnancy)(도 5b)를 나타낸 도이다
도 6는 일(day) 별 정상 임신과 자궁 외 임신 환자군에서 측정된 βcf hCG / Intact hCG의 농도 비(정상 임신: Circle spot, 자궁 외 임신 : Diamond spot) (도 6a) 및 βcf hCG / Intact hCG의 농도 비의 분포(EP : Ectopic pregnancy, NP : Normal pregnancy)(도 6b)를 나타낸 도이다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시 예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시 예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시 예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다. 아래 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시를 위한 구체적인 내용을 상세히 설명한다. 도면에 관계없이 동일한 부재번호는 동일한 구성요소를 지칭하며, "및/또는"은 언급된 아이템들의 각각 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어는 실시 예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 명세서에서 사용되는 "포함한다(comprises)" 및/또는 "포함하는(comprising)"은 언급된 구성요소 외에 하나 이상의 다른 구성요소의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다.
다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다.
이하, 본 발명의 실시 예들에 따른 자궁 외 임신 진단용 면역 장치 및 이를 사용한 진단 방법에 관해 설명한다.
본 발명의 일 실시 예에 따른 자궁 외 임신 진단용 면역 장치는,
1) 분석하고자 하는 피검 시료를 수용하는 검체 영역;
2) 상기 검체 영역과 연동되어 있고, 탐침물질-표지가 접합된 항 I-hCG 항체 및 탐침물질-표지가 접합된 항 βcf hCG 항체를 결합시킨 콘쥬게이트 영역;
3) 상기 검체 영역에 연결되어, 항 I-hCG 항체가 고정된 제1검출라인, 항 βcf hCG 항체가 고정된 제2검출라인 및 대조라인을 포함하는, 상기 콘쥬게이트 영역과 연동된 신호검출 영역; 및
4) 신호검출반응이 종료된 피검 시료를 흡수하는, 상기 신호검출 영역의 다운스트림에 위치하는 흡습 영역을 포함하는 자궁 외 임신 진단용 면역 장치를 제공한다.
상기 항 I-hCG 항체는 α와 β의 2개의 서브유닛이 결합된 I-hCG를 특이적으로 인식하는 항체이며, βcf hCG 항체는 free β-hCG의 단편인 베타 코어 단편 hCG(βcf hCG)를 특이적으로 인식하는 항체이다. 한편, 항 α-hCG 항체는 I-hCG 와 free α-hCG를 인식하고, hCG의 유사호르몬인 LH, FSH, TSH의 α부분을 인식하여 자궁 외 임신 진단에 사용하는 경우 항 I-hCG 항체에 비해 민감도가 떨어지고 교차반응의 위험성을 갖게 된다.
본 발명의 2개의 검출라인으로 이루어진 면역 장치는 검체 내 I-hCG 및 βcf hCG를 감지하는 검출라인 및 이의 신호 세기를 정성, 반 정량, 정량 분석하여 정상 임신과 비교함으로써 자궁 외 임신 진단 정확도를 넓히고 효율성을 개선한 특징이 있다.
상기 3) 신호검출 영역의 제1검출라인에 비해 제2검출라인의 신호가 없거나 미미한 경우 육안으로 정성 또는 반 정량 분석을 통해 자궁 외 임신으로 판정할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 장치에는 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기의 표준 신호 데이터가 추가로 제공될 수 있다. 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신에 대하여 미리 완성해둔 표준 신호 데이터와 비교하여 낮은 경우, 자궁 외 임신으로 판정할 수 있다.
상기 검체 영역은 가임기 여성의 혈액 또는 소변과 같은 액상 시료를 수용하는 것이 바람직하나, I-hCG 및/또는 βcf hCG를 포함하는 것으로 예상되는 시료라면 모두 사용 가능하다.
상기 검체 영역은, 분석물질에 대한 선택성을 보다 향상시키기 위해 또는 상기 시료에 포함될 수 있는 간섭물질에 의한 영향을 최소화하기 위해, 필터링의 기능을 추가로 가질 수 있다. 필요한 경우, 상기 검체 영역의 업스트림에 분석물질과 콘쥬게이트 사이의 반응을 증가시키거나 또는 간섭물질에 의해 영향을 배제할 수 있는 물질을 포함하는 보조 영역을 추가로 구비할 수 있다.
상기 콘쥬게이트 영역의 대조라인은 피검 시료 중 I-hCG 또는 βcf hCG의 농도와 관계없이 일정한 신호를 내는 부분을 의미한다. 상기 대조라인은 I-hCG 또는 βcf hCG와는 결합하지 않으면서, 피검 시료와 함께 이동상에 의해 검출영역을 따라 이동하는 제3콘쥬게이트와 결합하는 리간드를 고정시켜 형성할 수 있다. 검체중의 I-hCG 및 βcf hCG의 존재유무와 무관하게 일정한 신호를 방출할 수 있는 리간드를 고정시키는 것이다. 따라서, 제1콘쥬게이트 및/또는 제2콘쥬게이트가 타겟 시료와 결합되지 않아 제1검출라인 및/또는 제2검출라인을 지나치더라도 제3콘쥬게이트가 시료와 결합되어 대조라인 상에서 포획될 수 있다. 예를 들면, 시료 내에 타겟 시료가 존재하지 않는 경우, 검출라인에서 색상 등이 발현하지 않더라도 대조라인에서는 색상 등이 발현하게 된다. 이처럼, 상기 대조라인에서의 응답(response)은 액상 샘플이 센서를 적절히 통과하고 있음을 의미한다. 상기 제3콘쥬게이트는 마우스 IgG 또는 치킨 IgY등이 사용될 수 있다. 상기 대조라인으로 항-래빗 IgG, 항-치킨 IgY, 스트렙트아비딘(streptavidin), 소 혈청 알부민, 산양 항-마우스 IgG 또는 산양-항-치킨 IgY 등이 사용될 수 있다.
상기 콘쥬게이트 영역의 탐침물질은 금나노입자, 은나노입자, 퀀텀닷(quantum dot) 나노입자, 카본 나노입자, 라텍스 비드/형광 나노입자, 셀룰로오스 나노입자, 자기 나노입자, 실리카 나노입자, 폴리머비드(polymer bead), 형광물질(fluorescent substances), 발광물질(luminescent substances), 색소 비드, 단백질로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 탐침물질이 사용될 수 있다. 본 발명의 일 구현 예에 의하면 탐침물질이 콜로이드성 골드 나노입자이나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따르면, 상기 3)의 신호검출 영역은 항 I-hCG 항체가 고정된 제1검출라인, 상기 제1검출라인의 다운스트림에 항 βcf hCG 항체가 고정된 제2검출라인 및 상기 제2검출라인의 다운스트림에 대조라인을 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 상기 3)의 신호검출 영역은 항 βcf hCG 항체가 고정된 제2검출라인, 상기 제2검출라인의 다운스트림에 항 I-hCG 항체가 고정된 제1검출라인 및 상기 제1검출라인의 다운스트림에 대조라인을 포함할 수 있다.
상기 신호검출 영역은 이동상과 시료가 전개되는 매질로서, 이동상과 피검 시료는 신호검출 영역의 다공성 멤브레인의 모세관 현상에 의해 이동할 수 있다. 신호검출 영역은 니트로셀룰로오스, 셀룰로오즈, 폴리에틸렌, 폴리에테르설폰, 폴리스틸렌, 폴리카보네이트, 폴리메틸메타크릴레이트, 나일론, PVDF, 폴리비닐(Polyvinyl) 수지 또는 폴리스티렌(Polystyrene) 수지로 합성된 웰 플레이트(Well plate) 및 유리로 된 슬라이드 글라스(Slide glass)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 사용될 수 있다. 본 발명의 일 구현 예에 의하면 신호검출 영역은 니트로셀룰로오스가 사용되나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 일 구현 예에 의하면 5 내지 15μm의 기공을 가지는 니트로셀룰로스 멤브레인이 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 흡습 영역은 다공성지지체 및 상기 다공성지지체의 공동에 분산되거나 다공성지지체의 섬유사에 흡착 또는 코팅되어 있는 흡수제를 포함할 수 있으며, 상기 다공성지지체의 상부면에 다공성필름층을 추가로 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 상기 흡수제는 염화칼슘, 염화마그네슘, 규조토, 벤토나이트, 백운석, 석고, 실리카겔 및 이들의 혼합물로 구성되는 군에서 선택될 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 있어서, 제1검출라인 및 제2검출라인의 신호세기를 통한시료 내의표적 물질의 농도측정범위는 I-hCG는 5mIU/mL 이상이며, βcf hCG는 0.01pmol/mL 이상이다.
본 발명에 있어서, 상기 콘쥬게이트 영역 내에 존재하는 항 I-hCG 항체 제1콘쥬게이트는 가임기 여성의 혈액 또는 소변 등과 같은 액상 검체와 멤브레인 쪽으로 이동전개 시 검체 내 I-hCG와 결합하여 (I-hCG)-콘쥬게이트 제1복합체를 형성하게 된다. 상기 콘쥬게이트 영역 내에 존재하는 항 βcf hCG 항체 제2콘쥬게이트는 액상 검체와 신호검출 영역으로 이동 전개 시 검체 내 βcf hCG와 결합하여 βcf hCG-콘쥬게이트 제2복합체를 형성하게 된다. 상기 제1복합체는 전개되는 과정에서 제1검출라인에 고정된 항 I-hCG 항체와 반응하고, 상기 제2복합체는 전개되는 중 제2검출라인에 고정된 항 βcf hCG 항체와 반응한다.
또한, 본 발명의 면역 장치는 하부에 고체지지대를 포함할 수 있다.
상기 고체지지대는 니트로셀룰로스, 나일론, 피브이디에프(PVDF), 유리 및 플라스틱으로 이루어진 군에서 선택된 재료로 형성된 것일 수 있다. 상기 고체 지지대상에 스트립을 부착하여 제조하므로, 스트립의 내구성을 높일 수 있고, 취급 및 보관을 용이하게 할 수 있다. 또한, 추가적인 외부 디바이스 장착을 용이하게 할 수 있다.
상기 고체지지대로 사용될 수 있는 플라스틱 재질로는 폴리프로필렌(polypropylene) 필름, 폴리에스테르(polyester) 필름, 폴리카보네이트(polycarbonate) 필름, 아크릴(acrylic) 필름 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기면역 장치를 추가적으로 디바이스 내에 고정되는 것인 키트로서, 하부 디바이스에는 가이드 및 스트립지지부가 구비되어 있고, 상부 디바이스에는 검체투입구; 및 제1검출라인 및 제2검출라인, 대조라인이 상응하는 위치에 결과확인창이 구비된 키트를 제공한다.
상기 상부 및 하부 디바이스는 통상의 플라스틱 소재를 이용하여 제조될 수 있으며, 예를들어 폴리카보네이트, 아크릴로니트릴부타디엔스티렌(acrylonitrile butadiene styrene; ABS) 등의 소재가 이용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따르면,
1) 본 발명은 분석하고자 하는 피검 시료를 수용하는 검체 영역(Sample region);
2) 상기 검체 영역과 연동되어 있고, 탐침물질(Probe)에 접합된 항 I-hCG 항체 및 탐침물질에 접합된 항 βcf hCG 항체를 포함하는 콘쥬게이트 영역(Conjugate region);
3) 상기 검체 영역에 연결되어, 항 I-hCG 항체가 고정된 제1검출라인, 항 βcf hCG 항체가 고정된 제2검출라인 및 대조라인을 포함하는, 상기 콘쥬게이트 영역과 연동된 신호검출 영역;
4) 신호검출반응이 종료된 피검 시료를 흡수하는, 상기 신호검출 영역의 다운스트림에 위치하는 흡습 영역; 및
5) 정량 분석 장치를 포함하는 자궁 외 임신 진단용 면역 장치를 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 5)의 정량분석 장치는 제1검출라인 및 제2검출라인의 신호세기를 평가할 수 있다. 정량분석 장치는 제1검출라인 및 제2검출라인에 축적된 표지된 분석물 복합체의 강도, 색상, 발광 및/또는 형광을 평가할 수 있는 소프트웨어 프로그램과 결합된 판독기를 포함한다. 판독기는 사전 프로그래밍된 임계 값과 강도, 색상, 발광 및/또는 형광을 비교할 수 있으며, 비교를 기반으로, 강도, 색상 등이 임계 값 이상이면 특정 디지털 출력을 제공할 수 있고, 강도, 색상 등이 임계 값 미만이면 다른 디지털 출력을 제공할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 정량 분석 장치는 CCD 카메라 또는 레이저 광원기반으로 분석 소프트웨어가 장착된 반사 리더기(reflectance reader)를 사용하였으며, 높은 정확도로 자궁 외 임신을 진단하였다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 정량분석 장치는 자궁 외 임신과 관련된 정보를 제공하는 디스플레이를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 정량분석 장치는 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기의 측정 비율 값이 임계 값으로 프로그래밍 된 것이다.
본 발명의 일 구현예에서, 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 임계 값인 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 낮은 경우, 예를 들어, 0.001 내지 0.9, 0.001 내지 0.8, 0.001 내지 0.7, 0.001 내지 0.6, 0.001 내지 0.5, 0.001 내지 0.4, 0.001 내지 0.3 또는 0.001 내지 0.2배인 경우, 자궁 외 임신으로 판정할 수 있다. 상기 비율은 LMP 주수에 따라 다르게 적용될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 LMP(last menstrual period) 2주에 0.001 내지 0.2배, LMP 3주에 0.001 내지 0.4배, LMP 4주 이상에 0.001 내지 0.5배 또는 이들의 조합인 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정할 수 있다. 본 발명에서 시험 결과를 평가하기 위한 또 다른 수단 또한 본 발명에 포함될 수 있다. 또한, 정상 임신과 자궁 외 임신을 구별하기 위한 βcf hCG / I-hCG 신호 세기의 비율은 탐침물질의 종류, 신호검출영역의 종류, 정량분석 장치의 민감도 등에 따라 달라질 수 있음은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 이해될 수 있다.
본 발명의 실시예에서, 자궁 외 임신 환자군은 정상 임신군에 비하여 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기인 βcf hCG / I-hCG의 측정 값이 유의하게 낮음을 확인하였으며, LMP 약 2주 부터 정상 임신과 자궁 외 임신을 명확히 구분함을 확인하였다.
본 발명의 다른 양태에 따르면,
1) 시료를 상기 면역 장치에 적용하여 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG가 탐침물질-표지가 접합된 항 I-hCG 항체 및 항 βcf hCG 항체와 반응하는 단계;
2) 제1검출라인 및 제2검출라인에 의해 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG의 반응을 확인하는 단계로서, I-hCG, βcf hCG는 각각의 검출 라인에서 샌드위치 복합체의 존재에 의해 발생하는 신호에 의해 감지되는 단계; 및
3) 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 없거나 미미한 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정하는 단계를 포함하는 자궁 외 임신 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 1) 시료를 상기 면역 장치에 적용하여 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG가 탐침물질-표지가 접합된 항 I-hCG 항체 및 항 βcf hCG 항체와 반응하는 단계;
2) 제1검출라인 및 제2검출라인에 의해 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG의 반응을 확인하는 단계로서, I-hCG, βcf hCG는 각각의 검출 라인에서 샌드위치 복합체의 존재에 의해 발생하는 신호에 의해 감지되는 단계; 및
3) 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 낮은 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정하는 단계를 포함하는 자궁 외 임신 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 3)의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 낮은 경우는 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기를 정상임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 대한 표준 신호 데이터와 비교하는 단계일 수 있다. 정상 임신에 대해 미리 완성해둔 표준 신호 데이터와 비교하여, 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 낮은 경우, 자궁 외 임신으로 판정할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호 세기는 정량분석 장치를 사용하여 분석할 수 있다. 정량분석 장치는 제1검출라인 및 제2검출라인의 신호세기를 평가할 수 있다. 정량분석 장치는 제1검출라인 및 제2검출라인에 축적된 표지된 분석물 복합체의 강도, 색상, 발광 및/또는 형광을 평가할 수 있는 소프트웨어 프로그램과 결합된 판독기를 포함한다. 판독기는 사전 프로그래밍된 임계 값과 강도, 색상, 발광 및/또는 형광을 비교할 수 있으며, 비교를 기반으로, 강도, 색상 등이 임계 값 이상이면 특정 디지털 출력을 제공할 수 있고, 강도, 색상 등이 임계 값 미만이면 다른 디지털 출력을 제공할 수 있다. 상기 임계 값은 정상 임신의 βcf hCG / I- hCG 의 측정 값 또는 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기의 측정 값에 기초하여 제공되며, βcf hCG/ I-hCG의 측정 값이 정상 임신에 비해 낮은 경우, 예를 들어, 0.001 내지 0.9, 0.001 내지 0.8, 0.001 내지 0.7, 0.001 내지 0.6, 0.001 내지 0.5, 0.001 내지 0.4, 0.001 내지 0.3 또는 0.001 내지 0.2의 비율인 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정할 수 있다. 예를 들어, 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 LMP(last menstrual period) 2주에 0.001 내지 0.2배, LMP 3주에 0.001 내지 0.4배, LMP 4주 이상에 0.001 내지 0.5배 또는 이들의 조합인 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 3) 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 0.001 내지 0.9, 0.001 내지 0.8, 0.001 내지 0.7, 0.001 내지 0.6, 0.001 내지 0.5, 0.001 내지 0.4, 0.001 내지 0.3 또는 0.001 내지 0.2의 비율인 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정한다.
본 발명의 일 구현예에서, 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 LMP(last menstrual period) 2주에 0.001 내지 0.2배, LMP 3주에 0.001 내지 0.4배, LMP 4주 이상에 0.001 내지 0.5배 또는 이들의 조합인 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 상기 면역크로마토그래피 스트립을 이용하여 자궁 외 임신을 진단하는 방법을 제공한다.
1) 피검 시료를 상기 면역 장치에 적용하여 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG가 탐침물질-표지가 접합된 항 I-hCG 항체 및 탐침물질-표지가 접합된 항 βcf hCG 항체와 각각 반응하는 단계;
2) 제1검출라인 및 제2검출라인에 의해 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG의 반응을 확인하는 단계로서, I-hCG, βcf hCG는 각각의 검출 라인에서 샌드위치 복합체의 존재에 의해 발생하는 신호에 의해 감지되는 단계; 및
3) 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 낮은 경우, 예를 들어, 0.001 내지 0.9, 0.001 내지 0.8, 0.001 내지 0.7, 0.001 내지 0.6,0.001 내지 0.5, 0.001 내지 0.4,0.001 내지 0.3 또는 0.001 내지 0.2의 비율인 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정하는 자궁 외 임신 진단 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에서, 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 LMP(last menstrual period) 2주에 0.001 내지 0.2배, LMP 3주에 0.001 내지 0.4배, LMP 4주 이상에 0.001 내지 0.5배 또는 이들의 조합인 경우 자궁 외 임신 진단 방법을 제공한다.
실시 예
이하, 본 발명을 하기 실시 예에 의해 상세히 설명하다.
단, 하기 실시 예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시 예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시 예 1: 면역크로마토그래피스트립의 제조
A. 제1검사선, 제2검사선 및 대조선이 형성된 멤브레인 제작
3개의 분석 리간드를 멤브레인(nitrocellulose membrane)에 분주하였다. 제1검출라인의I-hCG 항체로서 항I-hCG 단클론항체 (Monoclonal anti-hCG)를, 제2검출라인의 βcf hCG 항체로서 항 βcf hCG 단클론항체 (Monoclonal anti- βcf hCG)를 대조선의 리간드로는 산양 항-쥐 면역글로불린(Goat anti-mouse IgG)을 분주 후 건조시켰다.
B. 콘쥬게이트패드(conjugate pad)제작
콜로이드성 골드나노입자(colloidal gold nanoparticle)와 항I-hCG 항체(Monoclonal anti-hCG)가 접합된 제1콘쥬게이트 용액을 준비하였고, 콜로이드성 골드나노입자와 항 βcf hCG 항체(Monoclonal anti-βcf hCG)가 접합된 제2콘쥬게이트용액을 준비하였다. 또한 콜로이드성 골드나노입자와 쥐 면역글로불린(Mouse IgG)이 결합된 제3콘쥬게이트 용액을 준비하였다. 상기 제1콘쥬게이트 용액, 제2콘쥬게이트 용액 및 제3콘쥬게이트 용액을 전처리 된 콘쥬게이트패드에 분주하고, 완전히 건조시킨 후, 적절한 크기로 절단하여 준비하였다.
C. 검체패드(sample pad) 제작
완충제 및 보존제가 포함되어 있는 검체패드 전처리 용액에 검체패드를 충분히 적셔, 완전히 건조시킨 후, 적절한 크기로 절단하여 준비하였다.
D. 흡습패드(absorbance pad) 제작
건조되어 있는 상태의 흡습패드를 적절한 크기로 절단하여 준비하였다.
E. 면역크로마토그래피스트립의제작
위의 각 과정을 통해 준비된 멤브레인, 콘쥬게이트패드, 검체패드 및 흡습패드를 도1에나타난 구조대로 조립한다.
즉, 검체패드를 콘쥬게이트패드의 일말단과 중첩되도록 부착하고, 검출패드의 일말단을 상기콘쥬게이트패드의 다른 일말단과 중첩되도록 부착하고, 검출패드의 다른 일말단과 흡습패드의 일말단을 서로 중첩되도록 부착하였다.
도 1에있어서, 각각의 도면부호가 의미하는 바는 아래와 같다.
1: 검체패드부(Sample pad)
2: 콘쥬게이트패드부(Conjugate pad)
3: 니트로셀룰로오스 멤브레인(Nitrocellulose membrane)
4: 흡습패드(Absorbent Pad)
5: I-hCG 항체가 고정된 제1검출라인
6: βcf hCG 항체가 고정된 제2검출라인
7: 산양 항-쥐 면역글로불린이 고정된 대조라인
F. 정량분석장치
CCD 카메라 또는 레이저 광원기반으로 분석 소프트웨어가 장착된 반사 리더기(reflectance reader)를 사용하여 검출라인의 발색 또는 명암감도를 정량화 하는데 사용하였다.
G. 디바이스 조립
제조된 자궁 외 임신 진단용 면역크로마토그래피 스트립을 플라스틱하부 디바이스의 스트립 고정위치에 넣은 후 검체투입구와 결과 확인창이 있는 상부 디바이스에 끼운 후 조립한다.
실시 예 2: 정상 임신군 및 자궁 외 임신 환자군의 Intact hCG, βcf hCG 농도 변화량 측정
1) 정상 임신군의 Intact hCG, βcf hCG 농도 변화량 측정
11명의 정상 임신군에서 Intact hCG와 βcf hCG의 농도 변화량을 측정하여 도 3에 나타냈다. 정상 임신군에서 Intact hCG와 βcf hCG는 LMP 2주 이후부터 주수에 따라 점차 증가하였으며, Intact hCG가 먼저 검출되는 것으로 확인되었다. βcf hCG는 LMP 2주차는 미약하게 검출되나, 지속적으로 증가하여 4주 이후에 Intact hCG의 검출량을 넘어서는 것으로 확인되었다.
2) 자궁 외 임신 환자군의 Intact hCG, βcf hCG 농도 변화량 측정
자궁 외 임신 환자군의 Intact hCG, βcf hCG 농도 변화량을 측정하여 도 4에 나타냈다. 자궁 외 임신 환자군의 경우 Intact hCG가 검출되는 양상을 보이나 임신 주수에 따른 농도의 증가패턴을 보이지 않으며, βcf hCG도 마찬가지로 초기 미약하게 검출된 시점부터 주수에 따른 상관성을 보이지 않았다.
그 결과, LMP 2 ~ 8주 사이에서 정상 임신의 경우 Intact hCG와 βcf hCG의 농도는 증가하는 반면 자궁 외 임신의 경우 5주까지 약하게 증가하다 감소하는 경향은 정상 임신과 자궁 외 임신을 구분짓는 유의한 결과로 확인하였다.
실시 예 3: 정상 임신군 및 자궁 외 임신 환자군의 Intact hCG / βcf hCG 측정
실시 예 2의 결과를 자궁 외 임신 환자군 진단에 사용하기 위하여 정상 임신군 및 자궁 외 임신 환자군의 βcf hCG / Intact hCG의 농도를 측정하여 비교하였다.
1) 임신 주수 별 정상 임신과 자궁 외 임신 환자군에서 βcf hCG / Intact hCG의 농도 측정
임신 주수 별 정상 임신과 자궁 외 임신 환자군에서 측정된 Intact hCG, βcf hCG 검출 농도를 바탕으로 βcf hCG / Intact hCG의 농도 비(도 5a) 및 βcf hCG / Intact hCG의 농도 비의 분포(도 5b)를 나타냈다. 그 결과, 자궁 외 임신의 경우 상기 농도 비 및 농도 비의 분포는 정상 임신 대비 낮음을 확인하였으며, P-value 값은 T 검정결과에서 1.66 x 10-7으로 유의한 차이를 나타냄을 확인하여, βcf hCG / Intact hCG 농도 값을 정상 임신과 자궁 외 임신 환자군을 구분하는 데 사용할 수 있음을 확인하였다.
2) 임신 일(day) 별 정상 임신과 자궁 외 임신 환자군에서 βcf hCG / Intact hCG의 농도 측정
LMP 2 ~ 3 주 기간 동안 일(day) 별 정상 임신과 자궁 외 임신 환자군에서 측정된 Intact hCG, βcf hCG 검출 농도를 바탕으로 βcf hCG / Intact hCG의 농도 비(도 6a) 및 βcf hCG / Intact hCG의 농도 비의 분포(도 6b)를 나타냈다. 그 결과, 자궁 외 임신의 경우 농도 비 및 농도 비의 분포가 정상 임신 대비 낮음을 확인하였으며, P-value 값은 T 검정결과에서 5. 82 x 10-10으로 매우 유의한 차이를 나타냄을 확인하여, βcf hCG / Intact hCG 농도 값을 정상 임신과 자궁 외 임신 환자군을 구분하는 데 사용할 수 있음을 확인하였다.
3) 실험 결과
LMP 2 ~ 8 주 기간 동안 정상 임신의 경우 βcf hCG / Intact hCG 농도 비가 점차적으로 1에 근접하였고(Median : 1.092), 자궁 외 임신의 경우 βcf hCG / Intact hCG 농도 비가 0.2에 근접하였으며(Median : 0.186), 정상 임신과 자궁 외 임신사이의 βcf hCG / Intact hCG 농도 비는 임신 주수가 경과할수록 차이를 나타냈다.
또한, 정상 임신과 자궁 외 임신 사이의 농도 비는 LMP 2 ~ 3주 사이의 day 결과치에서 5.82 x 10-10, 주수 별 결과치에서 1.66 x 10-7 (0.001>p-value)로 유의한 차이를 확인하여, βcf hCG / Intact hCG 농도 값을 정상 임신과 자궁 외 임신 환자군을 구분하는 데 사용할 수 있음을 확인하였으며, LMP 2주 이상부터 유의한 차이를 보이기 시작하여, 본 발명 장치는 LMP 2주 이상부터 정상임신과 자궁외 임신을 구별할 수 있는 장치임을 증명하였다.
실시 예 4: 정상 임신 및 자궁 외 임신 분석 결과
본 발명에 따른 면역 진단 장치의 자궁 외 임신 진단 여부의 정확도를 확인하기 위해 실험을 수행하였다. 정상 임신 및 자궁 외 임신 실험군 간에 평균 연령, LMP 이후 추정일 사이의 유의한 차이는 없었으며, 본 발명에 따른 면역 진단 장치는 블라인드 실험 결과 자궁 외 임신 환자군 모두를 정확히 진단함을 확인할 수 있었다.

Claims (9)

1) 분석하고자 하는 피검 시료를 수용하는 검체 영역;
2) 상기 검체 영역과 연동되어 있고, 탐침물질-표지가 접합된 항 I-hCG 항체 및 탐침물질-표지가 접합된 항 βcf hCG 항체를 포함하는 콘쥬게이트 영역;
3) 상기 검체 영역에 연결되어, 항 I-hCG 항체가 고정된 제1검출라인, 항 βcf hCG 항체가 고정된 제2검출라인 및 대조라인을 포함하는, 상기 콘쥬게이트 영역과 연동된 신호검출 영역; 및
4) 신호검출반응이 종료된 피검 시료를 흡수하는, 상기 신호검출 영역의 다운스트림에 위치하는 흡수 영역을 포함하는 자궁 외 임신 진단용 면역 장치.
제1항에 있어서, 정량 분석 장치를 더 포함하는 자궁 외 임신 진단용 면역 장치.
제2항에 있어서, 상기 정량 분석 장치는 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기의 측정 비율 값이 임계 값으로 프로그래밍 된 것인 자궁 외 임신 진단용 면역 장치.
제3항에 있어서,
1) 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 LMP(last menstrual period) 2주에 0.001 내지 0.2배, LMP 3주에 0.001 내지 0.4배, LMP 4주 이상에 0.001 내지 0.5배 또는 이들의 조합인 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정하는 것을 특징으로 하는 자궁 외 임신 진단용 면역 장치.
제1항에 있어서, 상기 2)의 탐침물질은 금나노입자, 은나노입자, 퀀텀닷(quantum dot) 나노입자, 카본나노입자, 라텍스비드/형광 나노입자, 셀룰로오스나노입자, 자기나노입자. 실리카나노입자, 폴리머비드(polymer bead), 형광물질(fluorescent substances), 발광물질(Luminescent substances), 색소비드, 단백질로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 자궁 외 임신 진단용 면역 장치.
제1항에 있어서, 상기 3)의 신호검출 영역은 니트로셀룰로오스, 셀룰로오즈, 폴리에틸렌, 폴리에테르설폰, 폴리스틸렌, 폴리카보네이트, 폴리메틸메타크릴레이트 및 나일론으로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 자궁 외 임신 진단용 면역 장치.
제1항에 있어서, 상기 4)의 흡수 영역은 다공성지지체의 공동(pore)에 분산되거나 다공성지지체의 섬유사에 흡착 또는 코팅되어 있는 흡수제를 포함하는 것을 특징으로 하는 자궁 외 임신 진단용 면역 장치.
1) 피검 시료를 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 면역 장치에 적용하여 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG가 탐침물질-표지가 접합된 항 I-hCG 항체 및 탐침물질-표지가 접합된 항 βcf hCG 항체와 반응하는 단계;
2) 제1검출라인 및 제2검출라인에 의해 시료 내 I-hCG 및 βcf hCG의 반응을 확인하는 단계로서, I-hCG, βcf hCG는 각각의 검출 라인에서 샌드위치 복합체의 존재에 의해 발생하는 신호에 의해 감지되는 단계; 및
3) 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기가 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기에 비해 LMP(last menstrual period) 2주에 0.001 내지 0.2배, LMP 3주에 0.001 내지 0.4배, LMP 4주 이상에 0.001 내지 0.5배 또는 이들의 조합인 경우 자궁 외 임신인 것으로 판정하는 단계를 포함하는 자궁 외 임신 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.
제8항에 있어서, 상기 3) 정상 임신의 제1검출라인에 대한 제2검출라인의 신호세기는 측정 비율 값이 임계 값으로 프로그래밍 된 것인 방법.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115356479A (zh) * 2022-08-24 2022-11-18 厦门宇昊软件有限公司 一种金免疫层析检测方法和系统
KR102631747B1 (ko) * 2023-08-17 2024-01-31 에이디텍 주식회사 베타 코어 단편 hCG 분포비를 측정하여 정상 및 비정상임신을 판별하는 신규 면역 진단 장치

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100403871B1 (ko) 2000-08-12 2003-11-01 휴마시스 주식회사 정상 임신과 자궁외 임신을 진단하는 장치 및 이의제조방법
US20110256554A1 (en) * 1998-02-03 2011-10-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for predicting pregnancy outcome in a subject by hcg assay
US20130164858A1 (en) * 2011-12-21 2013-06-27 Church & Dwight Co., Inc. Diagnostic detection device
CN103777002A (zh) * 2014-01-15 2014-05-07 南通市伊士生物技术有限责任公司 一种早孕多功能检测试纸的制备方法
KR20160108695A (ko) * 2015-03-05 2016-09-20 (주)프로테옴텍 이종 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 구비한 임신 진단 키트
CN108931654A (zh) * 2018-07-05 2018-12-04 重庆早柒天生物科技股份有限公司 以尿液为检测样本的早孕检测试剂盒、其生产方法及用途
KR102079738B1 (ko) * 2019-07-04 2020-02-20 에이디텍 주식회사 베타 코어 단편 hCG를 표지자로 포함하는 신규 임신 진단 장치

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110256554A1 (en) * 1998-02-03 2011-10-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for predicting pregnancy outcome in a subject by hcg assay
KR100403871B1 (ko) 2000-08-12 2003-11-01 휴마시스 주식회사 정상 임신과 자궁외 임신을 진단하는 장치 및 이의제조방법
US20130164858A1 (en) * 2011-12-21 2013-06-27 Church & Dwight Co., Inc. Diagnostic detection device
CN103777002A (zh) * 2014-01-15 2014-05-07 南通市伊士生物技术有限责任公司 一种早孕多功能检测试纸的制备方法
KR20160108695A (ko) * 2015-03-05 2016-09-20 (주)프로테옴텍 이종 검사선을 구비한 임신진단용 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 구비한 임신 진단 키트
CN108931654A (zh) * 2018-07-05 2018-12-04 重庆早柒天生物科技股份有限公司 以尿液为检测样本的早孕检测试剂盒、其生产方法及用途
KR102079738B1 (ko) * 2019-07-04 2020-02-20 에이디텍 주식회사 베타 코어 단편 hCG를 표지자로 포함하는 신규 임신 진단 장치

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115356479A (zh) * 2022-08-24 2022-11-18 厦门宇昊软件有限公司 一种金免疫层析检测方法和系统
CN115356479B (zh) * 2022-08-24 2023-11-28 厦门宇昊软件有限公司 一种金免疫层析检测方法和系统
KR102631747B1 (ko) * 2023-08-17 2024-01-31 에이디텍 주식회사 베타 코어 단편 hCG 분포비를 측정하여 정상 및 비정상임신을 판별하는 신규 면역 진단 장치

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