KR20210069676A - 촌충을 검출하기 위한 방법, 장치, 키트 및 조성물 - Google Patents

Abstract

샘플에서 1종 이상의 촌충 분변항원의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 방법, 장치, 키트 및 조성물이 본원에 개시된다. 본 발명의 방법, 장치, 키트 및 조성물은 포유동물로부터의 분변 샘플에서 촌충의 존재 또는 부재를 확인하는데 사용될 수 있으며, 또한 상이한 촌충 종 사이에서 및 연충 (예컨대 회충, 구충, 편충 및 심장사상충), 지아르디아 및 파르보바이러스로의 1종 이상의 감염의 존재 하에서 구별할 수 있다. 포유동물에서의 촌충의 존재 또는 부재의 확인은, 예를 들어, 포유동물을 치료하는 최적 과정을 선택하는 목적을 위해 및/또는 포유동물이 치료가 개시된 후에 감염에서 벗어났는지 여부를 결정하는 목적을 위해 수행될 수 있다.

Description

촌충을 검출하기 위한 방법, 장치, 키트 및 조성물

상호-참조

본 출원은 미국 가출원 일련 번호 62/740,100 (2018년 10월 2일에 출원됨); 62/741,849 (2018년 10월 5일에 출원됨); 및 62/746,805 (2018년 10월 17일에 출원됨)로부터의 우선권을 주장하며, 이들 모두는 그 전문이 참조로 포함된다.

1. 발명의 분야

본 발명은 포유동물에서 촌충 종의 검출 및 그 사이의 구별을 위한 조성물, 장치, 키트 및 방법에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 포유동물로부터의 샘플에서 촌충 종의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 및 촌충 항원 사이를 구별하기 위한 항체 및 항체 조성물, 장치, 키트, 및 방법에 관한 것이다.

2. 종래 기술의 설명

기생충 감염은 동물에서 흔하며, 진단되고 치료되지 않는 경우, 심각한 질환 또는 사망을 유발할 수 있다. 기생충 감염의 진단을 위한 현재의 방법은 주로 분변 얼룩에서 직접적으로 또는 밀도 배지에서의 부유에 의한 또는 침강에 의한 충란 및 기생체의 농축 후, 분변 샘플의 현미경적 검사를 포함한다. 이 절차의 높은 채택에도 불구하고, 방법은 상당한 단점을 갖는다. 이들 현미경적 방법은 시간 소비적이며, 특수화된 장비를 요구한다. 또한, 이들 방법의 결과의 정확성은 작동자의 기술 및 전문지식에 크게 의존한다. 예를 들어, 촌충의 존재는 알 또는 편절을 찾아 봄으로써 결정되지만, 이들은 간헐적으로 및 소수로 배설된다. 놀랍지 않게, 촌충 감염은 종종 통상적인 분변 검사 상에서 진단되지 않는다.

대변 취급은 불쾌하고 위험하다. 대변을 가공하기 위한 위생적이고 무해한 절차는 곤란하고 종종 복잡하다. 이러한 절차는 칭량, 원심분리 및 저장을 포함할 수 있으며, 적합한 장치, 보호 장비, 및 숙련된 기술자를 구비한 임상 실험실에서를 제외하고는 어렵다. 따라서, 분변 시험을 수행하는데 요구되는 단계의 수의 임의의 감소 및 시험 작동자 및 시험 물질 사이의 접촉의 임의의 감소가 요망된다. 임상 실험실은 분변에서의 다양한 바이러스, 박테리아 및 비-연충 기생체 및 유기체의 검출을 위한 면역검정 방법을 사용하고 있었다. 그러나, 분변, 전혈에서 또는 혈청에서 기생충 감염의 검출을 위한 간단한 면역검정 방법에 대한 필요가 남아 있다.

한 측면에서, 본 발명은 촌충 분변항원, 예컨대 타에니아(Taenia) 분변항원, 예를 들어, 타에니아 피시포르미스(Taenia pisiformis) 분변항원 또는 타에니아 타에니아에포르미스(Taenia taeniaeformis) 분변항원, 또는 디필리디움 카니눔(Dipylidium caninum) 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체에 관한 것이다. 항체는 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체에 부착될 수 있다.

한 실시양태에서, 단리된 항체는 타에니아 피시포르미스 분변항원에 특이적으로 결합한다. 항체는 촌충 타에니아 타에니아에포르미스, 촌충 디필리디움(Dipylidium), 구충 (예를 들어, 안실로스토마(Ancylostoma)), 회충 (톡소카라(Toxocara)), 편충 (예를 들어, 트리쿠리스(Trichuris)), 지아르디아(Giardia) 및 파르보바이러스의 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않고; 촌충 디필리디움은 디필리디움 카니눔이고; 구충은 안실로스토마 카니눔(Ancylostoma caninum) 또는 안실로스토마 투바에포르메(Ancylostoma tubaeforme)이고; 회충은 톡소카라 카니스(Toxocara canis) 또는 톡소카라 카티(Toxocara cati)이고; 편충은 트리쿠리스 불피스(Trichuris vulpis) 또는 트리쿠리스 펠리스(Trichuris felis)이고; 지아르디아는 지아르디아 람블리아(Giardia lamblia)이고; 파르보바이러스는 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스이다.

또 다른 실시양태에서, 단리된 항체는 타에니아 타에니아에포르미스 분변항원에 특이적으로 결합한다. 항체는 촌충 타에니아 피시포르미스, 촌충 디필리디움, 구충 (예를 들어, 안실로스토마), 회충 (톡소카라), 편충 (예를 들어, 트리쿠리스), 지아르디아 및 파르보바이러스의 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않고; 촌충 디필리디움은 디필리디움 카니눔이고; 구충은 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충은 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충은 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아는 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스는 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스이다.

다른 실시양태에서, 단리된 항체는 디필리디움 카니눔 분변항원에 결합한다. 항체는 촌충 타에니아, 촌충 디필리디움, 구충 (예를 들어, 안실로스토마), 회충 (톡소카라), 편충 (예를 들어, 트리쿠리스), 지아르디아 및 파르보바이러스의 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않고, 여기서 촌충 타에니아는 타에니아 피시포르미스 또는 타에니아 타에니아에포르미스이고; 구충은 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충은 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충은 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아는 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스는 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 촌충 분변항원 및 촌충 분변항원에 특이적으로 결합된 1종 이상의 항체를 포함하는 면역복합체에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 촌충 분변항원은 타에니아 피시포르미스, 타에니아 타에니아에포르미스, 타에니아 크라시셉스(Taenia crassiceps) 또는 디필리디움 카니눔으로부터의 분변항원일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 촌충의 전체 추출물, 촌충의 E/S 물질, 촌충의 웜 워시(Worm Wash), 또는 촌충의 TCA 가용성 물질로의 면역화에 의해 수득된다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 촌충-감염된 포유동물로부터 수득된 샘플, 예컨대 분변 샘플로부터의 촌충 분변항원에 특이적으로 결합된다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 회충, 편충 및 구충 중 1종 이상으로 추가로 감염되고, 항체는 샘플에 존재할 수 있는 회충, 편충, 또는 구충 중 1종 이상으로부터의 임의의 항원에 특이적으로 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체에 결합될 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 촌충 분변항원, 촌충 분변항원에 특이적으로 결합된 항체, 및 촌충 분변항원에 결합된 렉틴을 포함하는 면역복합체에 관한 것이다. 렉틴은 1종의 특이적 유형의 탄수화물에 특이적으로 결합할 수 있거나 또는 촌충 분변항원 상의 2종 이상의 탄수화물에 결합할 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 샘플로부터의 연충 항원, 예를 들어 분변 샘플로부터의 분변항원을 특이적으로 결합시키고 단리하기 위한 장치로서, 고체 지지체를 포함하며, 여기서 고체 지지체는 그 위에 (a) 제1 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체; (b) 제2 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및 (c) 제3 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체가 고정화되어 있는 것인 장치를 제공한다. 장치는, 예를 들어, ELISA 장치, 예컨대 측방 유동 면역검정 장치 또는 마이크로타이터플레이트 장치일 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 장치에 의해 촌충에 대해 시험될 수 있는 샘플은 예를 들어 분변, 소화관 점액, 소변, 전혈, 혈청, 유즙 및 전체 조직, 예컨대 유선, 장, 간, 심장, 폐, 식도, 뇌, 근육, 및 눈으로부터의 조직을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 장치는 추가로 1종 이상의 연충 기생체, 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충, 및 1종 이상의 박테리아로 이루어진 군 중 1종 이상의 검출을 위한 1종 이상의 시약을 포함할 수 있지만, 포함할 필요는 없다. 일부 실시양태에서, 고체 지지체는 그 위에 i) 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충, 구충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; (ii) 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충, 구충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; (iii) 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충, 회충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; (iv) 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 및 (v) 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 및 지아르디아 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체로부터 선택된 1종 이상의 항체가 추가로 고정화되어 있다. 실시양태에서, 구충은 안실로스토마이고, 회충은 톡소카라이고, 편충은 트리쿠리스이다. 다른 실시양태에서, 구충은 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충은 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충은 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아는 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스는 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스이다.

일부 실시양태에서, 고체 지지체는 다중화를 허용하기 위해 그 위에 2종 이상의 항체, 3종 이상의 항체, 4종 이상의 항체, 5종 이상의 항체, 6종 이상의 항체, 7종 이상의 항체 또는 8종 이상의 항체가 고정화되어 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 분변 샘플로부터 1종 이상의 촌충 분변항원의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 장치로서, 고체 지지체, 렉틴, 및 (a) 제1 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체; (b) 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및 (c) 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체를 포함하며, 여기서 고체 지지체는 그 위에 1종 이상의 렉틴 또는 1종 이상의 항체가 고정화되어 있는 것인 장치를 제공한다. 일부 실시양태에서, 렉틴은 고체 지지체 상에 고정화된다. 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 고체 지지체 상에 고정화된다. 다른 실시양태에서, 장치는 촌충 항원의 1종 이상의 종을 추가로 포함하며, 여기서 촌충 항원의 1종 이상의 종은 항체에 특이적으로 결합된다. 일부 실시양태에서, 제1 촌충 종은 타에니아 피시포르미스이고/거나, 제2 촌충 종은 타에니아 타에니아에포르미스이고/거나, 제3 촌충 종은 디필리디움 카니눔이다.

추가의 또 다른 측면에서, 본 발명은 (a) 포유동물로부터의 샘플을 (i) 제1 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체; (ii) 제2 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및 (iii) 제3 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 접촉시키는 단계; (b) 샘플에서 존재하는 경우, 분변항원의 존재 하에서 항체-분변항원 복합체를 형성하는 단계; 및 (c) 존재하는 경우, 항체-분변항원 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계를 포함하는, 샘플에서 1종 이상의 연충 항원, 예를 들어 분변 샘플에서 분변항원의 존재 또는 부재를 검출하는 방법을 제공한다. 촌충의 분변항원은 타에니아 종, 예를 들어, 타에니아 피시포르미스 및 타에니아 타에니아에포르미스; 및 디필리디움 종, 예를 들어, 디필리디움 카니눔의 분변항원을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계는 복합체 중 적어도 1종에 결합하는 렉틴을 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 렉틴은 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화된다. 일부 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있고, 렉틴은 검출가능하게 표지될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지될 수 있고, 렉틴은 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 여기서 포유동물로부터의 분변 샘플을 적어도 1종의 항체와 접촉시키는 단계 전에, 방법은 분변 샘플을 1종 이상의 렉틴과 접촉시키는 단계를 추가로 포함한다. 1종 이상의 렉틴은 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 대안적으로, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 한 실시양태에서 제1, 제2 및 제3 항체는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있고, 1종 이상의 렉틴은 검출가능하게 표지될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지될 수 있고, 1종 이상의 렉틴은 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다.

한 측면에서, 방법은 촌충 분변항원에 대한 분변 포유동물 샘플을 시험하기 위해 수행된다. 그러나, 방법은 분변 샘플을 시험하기 위해 수행되는 것에 제한되지는 않는다. 분변 외에도, 샘플은 따라서 예를 들어 전혈, 혈청, 유즙 및 전체 조직, 예컨대 유선, 장, 간, 심장, 폐, 식도, 뇌, 근육, 및 눈으로부터의 조직일 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다.

추가의 또 다른 측면에서, 본 발명은 (a) 포유동물로부터의 샘플을 (i) 제1 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체; (ii) 제2 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및 (iii) 제3 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 접촉시키는 단계; (b) 샘플에서 존재하는 경우, 분변항원의 존재 하에서 항체-분변항원 복합체를 형성하는 단계; (c) 존재하는 경우, 항체-분변항원 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계; 및 (d) 포유동물을 (i) 제1 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제1 촌충 감염; (ii) 제2 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제2 촌충 감염; 및 (iii) 제3 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제3 촌충 감염을 갖는 것으로서 진단하는 단계를 포함하는, 포유동물이 1종 이상의 기생충으로 감염되어 있는지 여부를 진단하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 2종 이상의 항체, 3종 이상의 항체, 4종 이상의 항체, 5종 이상의 항체, 6종 이상의 항체, 7종 이상의 항체 또는 8종 이상의 항체가 선택된다. 일부 실시양태에서, 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계는 복합체 중 적어도 1종에 결합하는 1종 이상의 렉틴을 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 렉틴은 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화된다. 일부 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있고, 렉틴은 검출가능하게 표지될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지될 수 있고, 렉틴은 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 여기서 포유동물로부터의 분변 샘플을 적어도 1종의 항체와 접촉시키는 단계 전에, 방법은 분변 샘플을 1종 이상의 렉틴과 접촉시키는 단계를 추가로 포함한다. 렉틴은 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 대안적으로, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 한 실시양태에서 제1, 제2 및 제3 항체는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있고, 렉틴은 검출가능하게 표지될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지될 수 있고, 렉틴은 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다.

추가의 측면에서, 본 발명은 (a) 포유동물로부터의 샘플을 (i) 제1 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체; (ii) 제2 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및 (iii) 제3 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 항체와 접촉시키는 단계; 및 (b) 샘플에서 존재하는 경우, 분변항원의 존재 하에서 항체-분변항원 복합체를 형성하는 단계; (c) 존재하는 경우, 항체-분변항원 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계; 및 (d) 포유동물을 (i) 제1 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제1 촌충 감염; (ii) 제2 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제2 촌충 감염; 및 (iii) 제3 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제3 촌충 감염을 갖는 것으로서 진단하는 단계; 및 (e) 제1, 제2, 또는 제3 촌충 감염 또는 그의 조합을 갖는 포유동물을 치료하는 1종 이상의 치료제의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 1종 이상의 기생충으로 감염된 포유동물을 진단하고 치료하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 2종 이상의 항체가 선택된다. 다른 실시양태에서, 단계 (e)는 1종 이상의 연충 기생체, 1종 이상의 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충, 또는 1종 이상의 박테리아에 의한 감염을 치료하는 1종 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 단계 (e)는 편형동물 충류 기생체, 연충 기생체, 비-충류 기생체, 바이러스, 진균, 또는 박테리아의 중간 숙주를 방제하거나, 퇴치하거나, 사멸시키는 1종 이상의 치료제를 추가로 포함한다. 중간 숙주의 대표적인 예는 촌충란을 운반할 수 있는 벼룩 및 개 새털이를 포함한다.

상기 방법의 추가의 실시양태에서, 단계 (a) 군은 (i) 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충, 구충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; (ii) 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충, 구충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; (iii) 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충, 회충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; (iv) 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 및 (v) 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원 및 지아르디아 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체로 추가로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 구충은 안실로스토마이고, 회충은 톡소카라이고, 편충은 트리쿠리스이다. 다른 실시양태에서, 구충은 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충은 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충은 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아는 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스는 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스이다. 따라서, 분변 샘플은 다중화를 허용하기 위해 2종 이상의 항체, 3종 이상의 항체, 4종 이상의 항체, 5종 이상의 항체, 6종 이상의 항체, 7종 이상의 항체 또는 8종 이상의 항체와 접촉된다.

상기 방법의 추가의 실시양태에서, 단계 (d) 진단은 회충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 회충 감염; 편충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 편충 감염; 구충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 구충 감염; 지아르디아 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 지아르디아 감염; 및 파르보바이러스 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 파르보바이러스 감염을 추가로 포함한다.

일부 실시양태에서, 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계는 복합체 중 적어도 1종에 결합하는 1종 이상의 렉틴을 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 렉틴은 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화된다. 일부 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있고, 렉틴은 검출가능하게 표지될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지될 수 있고, 렉틴은 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다.

방법은 또한 촌충으로의 환경 오염에 대해 시험하고, 그 사이에 구별하는데 사용될 수 있다. 장치에 의해 촌충에 대해 시험될 수 있는 환경적 샘플은 토양, 부패한 물질, 또는 마당, 정원, 샌드 박스, 놀이터를 비롯한 거주 환경으로부터의 분변물을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 시험 위치는 또한 공원, 해변, 삼림, 농장, 또는 개, 고양이, 또는 촌충의 다른 포유동물 숙주로부터의 분변 물질에 노출된 다른 위치를 포함할 수 있다. 실내 및 실외 리터 박스로부터의 분변은 또한 시험될 수 있다.

추가의 또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 방법의 하나 이상의 단계를 수행하기 위한 키트를 포함한다. 키트는 임의로, 예를 들어, 장치 및 본 발명의 조성물 중 1종 이상 및 본 발명의 방법을 수행하는 것에 대한 지침서를 포함할 수 있다. 키트는 임의로, 예를 들어, 장치의 부분으로서 사용되고/거나 방법을 수행하는데 사용되는 1종 이상의 지시제 시약, 1종 이상의 항체 표지화 화합물, 1종 이상의 항체, 1종 이상의 항원 포획 시약, 1종 이상의 억제제, 및 1종 이상의 세척 시약을 추가로 포함할 수 있다.

도 1은 실시예 1A에 나타내어진 바와 같은 본 발명의 방법을 따름으로써 촌충 감염에 대해 음성 또는 양성인 개로부터의 충류 추출물 및 분변 추출물에 대한 항체 ADX131의 OD 결정을 나타낸다. 양성 = 티. 피시포르미스 감염된 개로부터의 분변 추출물 (FEX); 음성 = 티. 피시포르미스로 감염되지 않은 개로부터의 FEX; 충류 추출물 = 티. 피시포르미스 충류 추출물 (WE).
도 2는 실시예 1A에 나타내어진 바와 같은 본 발명의 방법을 따름으로써 촌충 감염에 대해 음성 또는 양성인 개로부터의 충류 추출물 및 분변 추출물에 대한 항체 ADX132의 OD 결정을 나타낸다. 양성 = 티. 피시포르미스 감염된 개로부터의 분변 추출물 (FEX); 음성 = 티. 피시포르미스로 감염되지 않은 개로부터의 FEX; 충류 추출물 = 티. 피시포르미스 충류 추출물 (WE).
도 3은 ELISA 검정이 실시예 1B에 나타내어진 바와 같은 본 발명의 방법을 따름으로써 촌충으로 감염된 개의 분변 추출물을 사용하여 수행된 마이크로타이터 플레이트를 나타낸다. H11은 음성 대조군이다. A5, B6, B8, E6 및 E10은 5마리의 티. 피시포르미스 양성 개로부터의 분변 추출물이다. 다른 웰의 각각은 구충 안실로스토마 카니눔 감염된 개, 또는 회충 톡소카라 카니스 감염된 개, 또는 편충 트리쿠리스 불피스 감염된 개, 또는 디. 카니눔 감염된 개 중 하나로부터의 분변 추출물을 갖는다.
도 4는 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅된 항체 ADX131, 및 환자 샘플의 첨가 후에 적용된 ADX132-HRP 접합체를 사용한 샌드위치 분변항원 ELISA 검정의 특이성을 나타낸다. 검정을 실시예 1B에서 논의된 바와 같이 디. 카니눔 WE, 티. 피시포르미스 WE, 티. 크라시셉스 WE, 티. 타에니아에포르미스 WE, 티. 타에니아에포르미스 E/S, 뿐만 아니라 디. 카니눔 양성 개, 디. 카니눔 음성 개, 디. 카니눔 양성 고양이, 디. 카니눔 음성 고양이, 티. 피시포르미스 양성 개, 티. 피시포르미스 음성 개, 3마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이의 풀, 3마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이의 풀로부터의 FEX, 구충 안실로스토마 카니눔 WE, 회충 톡소카라 카니스 WE, 및 편충 트리쿠리스 불피스 WE에 대해 실행하였다.
도 5는 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅되고, 이어서 환자 샘플이 첨가되고, 이어서 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-HRP 접합체가 첨가된 항체 ADX185를 사용한 샌드위치 분변항원 ELISA 검정의 감수성을 나타낸다. 검정을 실시예 2B (파트 B)에서 논의된 바와 같이 7마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이, 및 3마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 FEX에 대해 실행하였다.
도 6은 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅된 항체 ADX184, 및 환자 샘플의 첨가 후에 적용된 ADX193-HRP 접합체를 사용한 샌드위치 분변항원 ELISA 검정의 특이성을 나타낸다. ADX193은 하기 기재된 티. 타에니아에포르미스 E/S 마우스 mAb이다. 검정을 실시예 2B (파트 B)에서 논의된 바와 같이 디. 카니눔 WE, 티. 피시포르미스 WE, 티. 크라시셉스 WE, 티. 타에니아에포르미스 WE, 티. 타에니아에포르미스 E/S, 뿐만 아니라 디. 카니눔 양성 개, 디. 카니눔 음성 개, 디. 카니눔 양성 고양이, 디. 카니눔 음성 고양이, 티. 피시포르미스 양성 개, 타에니아 피시포르미스 음성 개, 3마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이의 풀, 및 3마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이의 풀로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다.
도 7은 실시예 2C (파트 A)에서 논의된 바와 같이 6마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이로부터의 분변 추출물, 4마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 분변 추출물, 및 1개의 티. 타에니아에포르미스 E/S 단백질 샘플에 대해 실행된 ADX184 / ADX193-HRP ELISA 검정의 결과를 나타낸다.
도 8은 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅된 항체 ADX191 및 HRP와 접합된 ADX194를 사용한 분변항원 ELISA 검정의 결과를 나타낸다. 둘 다의 마우스 mAb를 3ug/ml의 농도에서 사용하였다. 이 ELISA를 실시예 2D에서 논의된 바와 같이 6마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이로부터의 분변 추출물, 4마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 분변 추출물, 및 1개의 티. 타에니아에포르미스 E/S 단백질 샘플에 대해 실행하였다.
도 9는 플레이트 상으로 코팅되고, 5 ug/ml의 FEX와 접촉되고, 이어서 3 ug/ml의 디. 카니눔 WE 토끼 pAb-HRP 접합체와 접촉되고, 이어서 색상 기재와 접촉된 디. 카니눔 WE 토끼 pAb를 사용한 ELISA 검정의 결과를 나타낸다. 디. 카니눔 WE 토끼 pAb ELISA 검정을 실시예 3B (파트 A)에서 논의된 바와 같이 여러 연충 종으로부터의 충류 추출물에 대해 실행하였다: 디. 카니눔 WE, 타에니아 피시포르미스 WE, 티. 크라시셉스 WE, 구충 안실로스토마 카니눔 WE, 회충 톡소카라 카니스 WE, 편충 트리쿠리스 불피스 WE.
도 10은 실시예 3E (파트 A)에서 논의된 바와 같이 디. 카니눔 WE 마우스 pAb가 플레이트 상으로 코팅되고, FEX와 접촉되고, 이어서 디. 카니눔 WE 마우스 pAb-HRP 접합체와 접촉되고, 이어서 색상 기재와 접촉된 분변항원 ELISA 검정의 결과를 나타낸다. 검정을 실시예 3E (파트 A)에서 논의된 바와 같이 4마리의 디. 카니눔 양성 개 및 3마리의 디. 카니눔 양성 고양이; 지아르디아 및 티. 타에니아에포르미스로 감염된 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이, 티. 타에니아에포르미스로 감염된 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이, 및 톡소카라 카니스 및 타에니아 피시포르미스로 감염된 1마리의 디. 카니눔 음성 개로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다.
도 11은 플레이트 상으로 코팅되고, FEX와 접촉되고, 이어서 마우스 mAb ADX251-HRP 접합체, 이어서 색상 기재와 접촉된 마우스 mAb ADX226을 사용한 제1 분변항원 ELISA 검정의 결과를 나타낸다. 검정을 실시예 3F (파트 A)에서 논의된 바와 같이 3마리의 디. 카니눔 양성 개, 5마리의 디. 카니눔 음성 개; 3마리의 디. 카니눔 양성 고양이, 및 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다.
도 12는 플레이트 상으로 코팅되고, FEX와 접촉되고, 이어서 마우스 mAb ADX227-HRP 접합체, 이어서 색상 기재와 접촉된 마우스 mAb ADX251을 사용한 제2 분변항원 ELISA 검정의 결과를 나타낸다. 검정을 실시예 3F (파트 A)에서 논의된 바와 같이 3마리의 디. 카니눔 양성 개, 5마리의 디. 카니눔 음성 개; 3마리의 디. 카니눔 양성 고양이, 및 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다.
도 13은 플레이트 상으로 코팅되고, FEX와 접촉되고, 이어서 디. 카니눔 WE 토끼 pAb-HRP 접합체, 이어서 색상 기재와 접촉된 마우스 mAb ADX251을 사용한 제3 분변항원 ELISA 검정의 결과를 나타낸다. 검정을 실시예 3F (파트 A)에서 논의된 바와 같이 3마리의 디. 카니눔 양성 개, 5마리의 디. 카니눔 음성 개; 3마리의 디. 카니눔 양성 고양양이, 및 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다.
도 14는 실시예 3G (파트 A)에서 논의된 바와 같이 디. 카니눔 WE 마우스 mAb ADX224, ADX225, ADX226 및 ADX227이 플레이트 상으로 개별적으로 코팅되고, FEX와 접촉되고, 이어서 디. 카니눔 WE 토끼 pAb-HRP 접합체, 이어서 색상 기재와 접촉된 분변항원 ELISA 검정 구성의 제1 세트의 결과를 나타낸다.
도 15는 실시예 3G (파트 A)에서 논의된 바와 같이 디. 카니눔 WE 마우스 mAb ADX226 및 ADX227이 플레이트 상으로 개별적으로 코팅되고, FEX와 접촉되고, 이어서 디. 카니눔 WE 마우스 mAb-HRP 접합체 ADX227-HRP, 이어서 색상 기재와 접촉된 분변항원 ELISA 검정 구성의 제2 세트의 결과를 나타낸다.
도 16은 실시예 3H (파트 1)에서 논의된 바와 같이 상업용 키트 (미국 캘리포니아주 벌링게임 소재 벡터 래보러토리즈(Vector Laboratories)로부터의 비오티닐화된 렉틴 키트 I, II 및 III)를 사용하여 분변항원에 결합하는 21가지 상이한 렉틴의 능력을 시험함으로써 디. 카니눔 WE 마우스 mAb ADX226에 의해 결합된 분변항원이 글리코실화되어 있는지 여부를 결정하는 것의 결과를 나타낸다.
도 17은 실시예 3H (파트 2)에서 논의된 바와 같이 21가지 상이한 렉틴을 상업용 키트 (미국 캘리포니아주 벌링게임 소재 벡터 래보러토리즈로부터의 비오티닐화된 렉틴 키트 I, II 및 III)를 사용하여 분변항원에 결합하는 그들의 능력에 대해 시험함으로써 항체 디. 카니눔 WE 토끼 pAb에 의해 결합된 분변항원이 글리코실화되어 있는지 여부를 결정하는 것의 결과를 나타낸다.
도 18은 실시예 3H (파트 3)에서 논의된 바와 같이 21가지 상이한 렉틴을 상업용 키트 (미국 캘리포니아주 벌링게임 소재 벡터 래보러토리즈로부터의 비오티닐화된 렉틴 키트 I, II 및 III)를 사용하여 분변항원에 결합하는 그들의 능력에 대해 시험함으로써 디. 카니눔 WE 토끼 pAb 및 ADX187 (디. 카니눔 WE 마우스 mAb)에 의해 결합된 분변항원(들)이 글리코실화되어 있는지 여부를 결정하는 것의 결과를 나타낸다.
도 19는 실시예 4에서 논의된 바와 같이 일련의 T.p., 티. 타에니아에포르미스, D.c., 구충, 회충, 편충 및 지아르디아 ELISA 검정이 다양한 감염된 개 및 고양이의 분변 추출물을 사용하여 수행된 마이크로타이터 플레이트를 나타낸다. 하기 공급원으로부터의 분변 추출물을 ELISA 검정에서 시험하였다: 티. 피시포르미스 양성 개 (도 19, 칼럼 1), 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 2), 디. 카니눔 감염된 개 (도 19, 칼럼 3), 디. 카니눔 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 4), 구충 에이. 카니눔 감염된 개 (도 19, 칼럼 5), 구충 에이. 투바에포르메 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 6), 회충 티. 카니스 감염된 개 (도 19, 칼럼 7), 회충 티. 카티 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 8), 편충 티. 불피스 감염된 개 (도 19, 칼럼 9), 편충 티. 펠리스 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 10), 지아르디아 감염된 개 (도 19, 칼럼 11), 지아르디아 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 12), 및 2마리의 파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 13 및 14). 도 19에서, 칼럼 1 내지 12는 단일 마이크로타이터 플레이트의 영상이고, 칼럼 13 및 14는 또 다른, 별개의 마이크로타이터 플레이트의 영상이다.
도 20은 실시예 5에서 논의된 바와 같이 타에니아 속, 예를 들어 티. 피시포르미스, 티. 타에니아에포르미스, 및 디필리디움 속, 예를 들어 디. 카니눔으로부터의 2 또는 3가지 촌충 종을 검출할 수 있는 일련의 ELISA 검정이 다양한 감염된 개 및 고양이로부터의 분변 추출물을 사용하여 수행된 마이크로타이터 플레이트를 나타낸다. 하기 공급원으로부터의 분변 추출물을 ELISA 검정에서 시험하였다: 4마리의 티. 피시포르미스 양성 개 (도 20, 칼럼 1, 4, 7 및 10), 4마리의 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이 (도 20, 칼럼 2, 5, 8 및 11), 2마리의 디. 카니눔 감염된 개 (도 20, 칼럼 3 및 6), 2마리의 디. 카니눔 감염된 고양이 (도 20, 칼럼 9 및 12). 도 20에서, 칼럼 1 내지 12는 단일 마이크로타이터 플레이트의 영상이다.

I. 도입

본 발명은 일반적으로 포유동물로부터 수득된 분변 샘플에서 촌충 종을 검출하고 그 사이를 구별하기 위한 방법, 장치, 및 키트에 관한 것이다. 본 발명은 타에니아 피시포르미스, 타에니아 타에니아에포르미스, 및 디필리디움 카니눔을 비롯한 다양한 촌충 종으로부터의 촌충 분변항원에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 촌충 감염을 검출하고 2종 이상의 촌충 종 사이를 구별하기 위한 방법, 장치 및 키트에 관한 것이다.

본 발명은 기존의 현미경적 검사 기술에 대한 우수한 대안을 제공한다. 이는 본 발명이 (1) 사용하기에 용이하면서도 일관성있게 신뢰성있는 결과를 산출하고; (2) 그 포유동물이 1종 이상의 촌충 종 및/또는 다른 연충 기생체, 예컨대 구충, 회충, 편충 및/또는 심장사상충으로 감염되어 있는지 여부와 무관하게 포유동물에서 특이적 촌충 종의 부재 또는 존재가 확인되는 것을 허용하고; (3) 충란 및 편절이 감염된 숙주의 분변에서 최초로 나타나는 시간 전에 촌충을 검출할 수 있고; (4) 상이한 촌충 종 뿐만 아니라 연충 기생체, 예컨대 회충, 편충 및 구충 감염 사이에 구별할 수 있는 포유동물로부터의 샘플에서 촌충의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 장치, 키트 및 방법을 제공하기 때문에 사실이다.

본 발명은 부분적으로 촌충 감염에 특이적인 조성물의 예상치 않은 특성의 발견에 기반한다. 구체적으로, 촌충 특이적 폴리펩티드에 대해 발생된 (또는 전체 촌충의 추출물, 촌충의 E/S 물질, 촌충의 웜 워시, 또는 촌충의 TCA 가용성 물질에 대해 발생된) 항체는 포유동물에서 상이한 종으로부터의 촌충 항원을 포획하고, 검출하고, 그 사이에 구별하는데 사용될 수 있음이 결정되었다. 촌충 종의 각각의 유형에 대한 특이성은 촌충이 관련된 촌충류이고, 이들 촌충 종 중 어느 하나로부터 단리된 단백질에 대해 발생된 항체는 다른 촌충 종, 숙주 항원, 또는 다른 숙주 성분 중 1종 이상과 교차반응할 것으로 예상될 것이기 때문에 놀라운 것이다.

이 항체는 알 및 편절이 분변에서 볼 수 있기 전에 포유동물에서 촌충 항원을 포획하고 검출하는데 사용될 수 있음이 추가로 결정되었다. 감염 후에 그렇게 빨리, 및 감염된 포유동물의 분변에서 임의의 충란의 출현 전에 촌충을 검출하는 이 능력은 충란 및 편절이 일반적으로 숙주가 감염된 후 수 주까지 감염성 숙주의 분변에서 나타나지 않기 때문에 놀라운 것이다.

따라서, 본 발명은 포유동물에서 상이한 촌충 종의 항원을 특이적으로 포획하고, 검출하고 그 사이를 구별하기 위해 항체 및/또는 그의 단편을 사용하는 방법, 장치, 및 키트를 포함한다. 비록 1종 이상의 다른 촌충 종 또는 상이한 충류 유형이 또한 존재하더라도 특이적 촌충 종을 검출하고 진단하는 본 발명의 능력은 포유동물의 보호자에게 포유동물로부터 촌충 뿐만 아니라 다른 충류, 예컨대 회충, 편충 및/또는 구충을 제거하기 위한 치료를 최적으로 선택하는 기회를 허용한다. 또한, 일부 경우, 알 및 편절이 분변에서 나타나기 전에 촌충을 검출하는 본 발명의 능력은 포유동물이 심각하게 아프게 되기 전에 보호자가 이러한 치료를 시작할 수 있는 가능성을 제공한다. 분변에서 충란 및 편절의 출현 전의 개입은 또한 침입이 다른 동물 또는 인간에게 확산될 가능성을 크게 감소시키거나 제거할 것이다.

II. 용어의 정의 및 사용

용어 "본 발명의 조성물"은 명백하게 기재되거나, 암시적으로 포함되거나, 다른 식으로 본원에 개시된 본 발명의 방법을 수행함으로써 포유동물로부터 수득된 샘플에서 촌충의 존재 또는 부재를 검출하는데 사용될 수 있는 핵산, 폴리펩티드, 당단백질, 탄수화물, 당지질, 항체, 및 그러한 핵산, 폴리펩티드, 당단백질, 탄수화물, 당지질, 및 항체 중 1종 이상 및 1종 이상의 다른 화합물을 포함하는 혼합물 모두를 지칭한다.

촌충이 본 발명에 의해 검출될 수 있는 "포유동물로부터의 샘플"은 촌충 항원이 가능한 모든 신체 성분 및 그의 추출물, 예컨대 임의의 유체, 고체, 세포 또는 조직을 포함한다. 따라서, 예시적인 샘플은 분변, 유즙, 전혈 및 혈청을 비롯한 그의 부분을 포함하지만, 이에 제한되지는 않으며, 예를 들어 유선, 장, 간, 심장, 폐, 식도, 뇌, 근육, 및 눈으로부터의 조직을 비롯한 조직 추출물을 추가로 포함한다. 샘플은 포유동물로부터 직접적으로 취해질 수 있거나, 샘플은 포유동물을 접촉한 임의의 것으로부터 취해질 수 있다. 예를 들어, 샘플은 포유동물로부터의 신선하거나 부패하고 있는 분변 배설물일 수 있다. 또 다른 예로서, 샘플은 예를 들어 포유동물에 의해 남겨질 수 있는 신체 성분, 예컨대 분변과 혼합될 수 있는 토양, 먼지, 모래, 식물 물질, 또는 임의의 다른 물질을 포함할 수 있다. 따라서, 샘플은 토양, 부패한 물질, 또는 삼림, 농장, 또는 리터 박스, 마당, 정원, 샌드 박스, 놀이터, 공원, 및 해변을 비롯한 거주 환경으로부터의 분변물을 비롯한 환경적 공급원으로부터 취해질 수 있다. 샘플의 기원 또는 함량이 무엇이든, 이 샘플은 때때로 본원에서 "샘플", "포유동물 샘플", "시험 샘플" 또는 "시험 하의 샘플"로 지칭된다.

본원에 사용된 바와 같은 "핵산"은 "유전자", "DNA", "cDNA", "EST", "폴리뉴클레오티드", "올리고뉴클레오티드", "폴리핵산", "RNA" 및 "mRNA"와 동의어이며, 따라서 그와 상호교환가능하게 사용된다. 핵산은 이중-가닥 형태일 수 있거나, 이는 단일-가닥 형태일 수 있다. 또한, 핵산은, 예를 들어, 전체 촌충 또는 그의 부분으로부터와 같이 천연적으로 단리되거나, 이는 재조합 숙주 유기체에서, 또는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 다른 인공적 수단에 의해, 예컨대 예를 들어 PCR-기반 기술을 채용함으로써, 핵산을 합성하는 트랜스제닉 유기체를 생성함으로써, DNA 합성 기계를 사용함으로써, 또는 임의의 또 다른 분자-기반 기술에 의해 인공적으로 합성된다.

"폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위한 본원에서 상호교환가능하게 사용되는 동의어적 용어이다. 본 발명의 폴리펩티드, 펩티드 및 단백질은 예를 들어 전체 촌충으로부터 또는 촌충의 부분으로부터와 같이 천연적으로 단리되거나, 재조합 숙주 유기체에서, 또는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 다른 인공적 수단에 의해 인공적으로 합성될 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드, 펩티드 및 단백질은 글리코실화될 수 있다.

용어 "항체" 또는 "본 발명의 항체"는 다른 충류로부터의 항원에 결합하지 않으면서 특정한 충류에 대한 1종 이상의 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 항체를 지칭한다. 예를 들어 한 촌충 종에 대한 항체는 촌충 종의 항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 상이한 촌충 종으로부터의 임의의 항원에는 그렇지 않다. 본 발명의 항체는 본 발명의 1종 이상의 면역원성 폴리펩티드, 당단백질, 탄수화물, 또는 당지질에 대해 발생될 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 본 발명의 항체는 2종 이상의 상이한 유형의 항체의 혼합물을 포함할 수 있음이 이해되어야 한다. 예를 들어, 항체는 2가지 유형의 항체의 혼합물일 수 있으며, 여기서 2가지 유형 중 하나는 한 특정한 항원에 특이적으로 결합하고, 2가지 유형 중 다른 것은 일부 다른 항원에 특이적으로 결합한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "제1 항체"는 제1 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 1종 이상의 항체를 의미한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "제2 항체"는 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 1종 이상의 항체를 의미한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "제3 항체"는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 1종 이상의 항체를 의미한다.

"본 발명의 면역원성 폴리펩티드" 및, 보다 간단히, "본 발명의 폴리펩티드"는 본 발명의 항체가 발생될 수 있는 면역원이다. 모든 "본 발명의 폴리펩티드"는 면역원성이며, 따라서 본 발명의 항체를 생산하는 숙주 동물에서 면역 반응을 유발하는데 사용될 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 본 발명의 폴리펩티드는 복수의 성분의 혼합된 조성물의 한 성분일 수 있음이 이해되어야 한다.

"면역원"은 작용제에 노출된 동물에서 면역 반응을 유발할 수 있는 임의의 작용제, 예컨대 예를 들어 본 발명의 면역원성 추출물, 폴리펩티드, 당단백질, 탄수화물, 또는 당지질이다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "촌충"은 편형동물 충류 기생체, 예컨대 타에니아 및 디필리디움 속을 포함하는 장 촌충을 지칭한다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "촌충"은 촌충류 강의 전체를 지칭하지 않지만, 오히려 슈도필리데아(pseudophyllidea) 목을 비롯한 아강 유세스토다(eucestoda)를 지칭한다. 촌충의 대표적인 예는 타에니아 피시포르미스, 타에니아 타에니아에포르미스, 타에니아 크라시셉스, 디필리디움 카니눔, 디필로보트리움 만소노이데(Diphyllobothrium mansonoide), 디필로보트리움 라툼(Diphyllobothrium latum), 및 스피로메트라 에리나세이유로파에이(Spirometra erinaceieuropaei)를 포함한다.

"촌충 분변항원" 또는 "촌충으로부터의 분변항원"은 촌충 감염을 갖는 포유동물의 분변에 존재하고 본 발명의 항체 중 1종 이상에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 임의의 촌충 산물이다. 예를 들어, 촌충 분변항원은 본 발명의 폴리펩티드 중 1종 이상일 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "회충"은 톡소카라, 톡사스카리스(Toxascaris), 바일리사스카리스(Baylisascaris), 아스카리디아(Ascaridia), 파라스카리스(Parascaris), 아스카리스(Ascaris), 아니사키스(Anisakis), 및 슈도테라노바(Pseudoterranova) 속을 포함하는 연충, 예컨대 회충목(Ascaridida)의 장 회충을 지칭한다. 따라서, 예시적인 회충은 톡소카라 카니스, 톡소카라 카티 및 톡사스카리스 레오니나(Toxascaris leonina)를 포함한다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "회충"은 선형동물 문의 전체를 지칭하지는 않는다. 따라서, "회충"은 안실로스토마, 운시나리아(Uncinaria), 네카토르(Necator), 트리쿠리스, 부케레리아(Wuchereria), 브루기아(Brugia) 또는 디로필라리아(Dirofilaria) 속의 임의의 구성원을 포함하지 않는다.

"회충 분변항원" 또는 "회충으로부터의 분변항원"은 회충 감염을 갖는 포유동물의 분변에 존재하고 본 발명의 항체 중 1종 이상에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 임의의 회충 산물이다. 예를 들어, 회충 분변항원은 개가 티. 카니스로 최초로 감염된 후 38일만큼 빨리 티. 카니스-감염된 개의 분변에 존재하는, 티. 카니스의 배설/분비 단백질인 DIV6728의 신규한 C-말단 7 kD 이소형일 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 따라서, "회충 분변항원"은 미국 특허 번호 7,951,547에서 논의된 바와 같은 개 분변에서 관찰된 DIV6728의 이 신규한 C-말단 7 kD 이소형 (본원에서 "Copro6728"로 지칭됨)일 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "편충"은 트리쿠리스 및 트리코세팔루스(Trichocephalus) 속의 연충, 예컨대 장 편충을 지칭한다. 따라서, 예시적인 편충은 트리쿠리스 불피스, 트리쿠리스 캄파눌라(Trichuris campanula), 트리쿠리스 세라타(Trichuris serrata), 트리쿠리스 펠리스, 트리쿠리스 수이스(Trichuris suis), 트리쿠리스 트리키우라(Trichuris trichiura), 트리쿠리스 디스콜로르(Trichuris discolor) 및 트리코세팔루스 트리키우리스디스콜로르(Trichocephalus trichiuris)를 포함한다. 또한, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "편충"은 선형동물 문의 전체를 지칭하지는 않는다. 예를 들어, "편충"은 안실로스토마, 운시나리아, 네카토르, 톡소카라, 톡사스카리스, 아스카리스, 부케레리아, 브루기아 또는 디로필라리아 속의 임의의 구성원을 포함하지 않는다.

"편충 분변항원" 또는 "편충으로부터의 분변항원"은 편충 감염을 갖는 포유동물의 분변에 존재하고 본 발명의 항체 중 1종 이상에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 임의의 편충 산물이다. 예를 들어, 편충 분변항원은 "DIV6901" 또는 "DIV6902"일 수 있지만, 이에 제한되지는 않으며, 이하, 이 특정한 항체는 미국 특허 번호 7,951,547에서 논의된 바와 같이 "항-DIV6901" 또는 "항-DIV6902"로 지칭된다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "구충"은 안실로스토마, 네카토르 및 운시나리아 속의 연충, 예컨대 장 구충을 지칭한다. 따라서, 예시적인 구충은 안실로스토마 카니눔, 안실로스토마 브라질리엔세(Ancylostoma braziliense), 안실로스토마 두오데날(Ancylostoma duodenal), 안실로스토마 세이라니쿰(Ancylostoma ceylanicum), 안실로스토마 투바에포르메 및 안실로스토마 플루리덴타툼(Ancylostoma pluridentatum), 네카토르 아메리카누스(Necator americanus), 및 운시나리아 스테노세팔라(Uncinaria stenocephala)를 포함한다. 또한, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "구충"은 선형동물 문의 전체를 지칭하지는 않는다. 예를 들어, "구충"은 트리쿠리스, 트리코세팔루스, 톡소카라, 톡사스카리스, 아스카리스, 부케레리아, 브루기아 또는 디로필라리아 속의 임의의 구성원을 포함하지 않는다.

"구충 분변항원" 또는 "구충으로부터의 분변항원"은 구충 감염을 갖는 포유동물의 분변에 존재하고 본 발명의 항체 중 1종 이상에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 임의의 구충 산물이다. 예를 들어, 구충 분변항원은 개가 안실로스토마로 최초로 감염된 후 9일만큼 빨리 안실로스토마-감염된 개의 분변에 존재하는, 안실로스토마의 배설/분비 단백질인 ASP5의 신규한 N-말단 28 kDa 이소형일 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 따라서, "구충 분변항원"은 미국 특허 번호 7,951,547에서 논의된 바와 같은 개 분변에서 관찰된 ASP5의 이 신규한 N-말단 28 kDa 이소형 (본원에서 "CoproASP5"로 지칭됨)일 수 있다.

본원에 언급된 바와 같은 용어 "지아르디아"는 지아르디아 속의 원충을 지칭한다. 따라서, 예시적인 지아르디아 종은 지아르디아 인테스티날리스(Giardia intestinalis)로도 공지된 지아르디아 람블리아를 포함한다.

"지아르디아 분변항원" 또는 "지아르디아의 분변항원"은 지아르디아 감염을 갖는 포유동물의 분변에 존재하고 본 발명의 항체 중 1종 이상에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 임의의 지아르디아 산물이다.

"렉틴"은 특이적 모노사카라이드 또는 올리고사카라이드 구조 (탄수화물)를 인식하고 그에 결합하는 단백질이다. 렉틴은 통상적으로 탄수화물 단위에 대한 2개 이상의 결합 부위를 함유한다. 특정 렉틴의 탄수화물-결합 특이성은 탄수화물에 결합하는 아미노산 잔기에 의해 결정된다. 탄수화물에의 렉틴의 결합 강도는 분자 상호작용의 수와 함께 증가할 수 있다. 탄수화물에의 렉틴의 결합에 대한 해리 상수는 약 10^-5 내지 10^-7의 K_d이다. 렉틴은, 예를 들어, 형광, 화학발광, 방사성, 효소, 콜로이드성 금속, 방사성동위원소 및 생물발광 표지를 비롯한 관련 기술분야에 공지된 임의의 유형의 표지로 표지될 수 있다.

본 발명의 실시양태에서, 사용되는 렉틴은 촌충 분변항원에 특이적으로 결합하는 것들이다. 본 발명의 실시양태에서 O-글리코실화된 단백질에 특이적으로 결합하는 렉틴은 본 발명에 유용하다. 이러한 렉틴은, 예를 들어, ECL 렉틴 (에리티나 크리스타갈리(Erythina cristagalli)), GSL I (그리포니아 심플리시폴리아(Griffonia Simplicifolia) 렉틴 I), GSL II (그리포니아 심플리시폴리아 렉틴 II), 자칼린, LCA 렉틴 (렌스 쿨리나리스(Lens culinaris)), RCA 123 (리시누스 콤뮤니스(Ricinus Communis)), 및 PSA 렉틴 (파세올루스 불가리스(Phaseolus vulgaris) 백혈구응집소), WGA (밀 배아 응집소) 및 sWGA (숙시닐화된 밀 배아 응집소)를 포함한다. 렉틴은, 예를 들어, 미국 캘리포니아주 벌링게임 소재 벡터 래보러토리즈로부터 상업적으로 입수가능하다.

인간, 개, 고양이, 말, 소, 양, 또는 원숭이 촌충 항원 상의 탄수화물에 특이적으로 결합하는 렉틴이 사용될 수 있다.

"대해 특이적인", "특이적으로 결합하다", 및 "안정하게 결합하다"는 본 발명의 특정한 조성물, 예컨대 예를 들어, 본 발명의 항체, 폴리펩티드, 또는 올리고뉴클레오티드가 적어도 1종의 다른 작용제에 대해서보다 더 큰 친화도로 1종 이상의 다른 작용제를 인식하고 그에 결합하는 것을 의미한다. 한 예로서, 본 발명의 항체는 그 항체가 비-촌충 기생충으로부터의 임의의 다른 항원에 대해서보다 더 큰 친화도로 그러한 회충 항원을 인식하고 그에 결합할 수 있는 경우에는 언제든지 촌충 항원에 "대해 특이적인", "특이적으로 결합하는", 및 "안정하게 결합하는" 것으로 이야기된다. 이러한 결합 특이성은 관련 기술분야에 널리 공지된 방법론, 예를 들어, ELISA 또는 방사선면역검정 (RIA)을 사용하여 시험될 수 있다. 본 발명의 특정한 조성물의 결합 특이성에 관해 관찰된 정보에 기반하여, 본 발명의 방법은 그 조성물이 특정한 작용제 또는 작용제들에 결합하는 것을 허용하지만 (따라서 그에의 이러한 결합의 검출을 허용하지만), 그러한 조건이 유지되는 반면 다른 작용제에는 유의하게 결합하지 않는 조건 하에서 수행될 수 있다. 한 예로서, 본 발명의 방법은 본 발명의 항체가 특정한 샘플에 존재하는 촌충 항원의 종의 1종 이상의 항원에 결합하는 것을 허용하지만 (및 따라서 그에의 이러한 결합의 검출을 허용하지만), 그 샘플에 존재할 수 있는 다른 촌충 종 또는 다른 연충 종으로부터의 임의의 항원에는 유의하게 결합하지 않음으로써, 촌충 및 회충, 편충 및 구충의 종 사이의 식별을 허용하는 조건 하에서 수행될 수 있다.

"촌충을 검출하는"은 예를 들어 본 발명의 폴리펩티드, 항체 및 핵산 중 1종 이상, 또는 1종 이상의 촌충 항원을 포함하는 1종 이상의 촌충-특이적 산물을 검출하는 것을 의미한다. 포유동물로부터의 샘플에서의 1종 이상의 이러한 촌충 산물의 존재는 임의의 전체 촌충 유기체 또는 그의 충란이 또한 그 샘플에 존재하는지 여부와 무관하게, 포유동물이 촌충 감염을 가짐을 지시한다. 반대로, 포유동물로부터의 샘플에서의 1종 이상의 이러한 촌충 산물의 부재는 포유동물이 촌충 감염을 갖지 않음을 지시한다.

"치료"는 환자에 대한 유의한 손상을 유발하지 않으면서, 기생충 (연충) 또는 다른 내부 기생체를, 그들을 방제하거나, 기절시키거나, 사멸시킴으로써 신체로부터 감소시키거나 제거하는, 및/또는 기생충 또는 다른 내부 기생체로의 감염을 전파할 수 있는 중간 숙주, 예컨대 곤충, 예를 들어 벼룩에 의한 침입을 감소시키거나 제거하는 임의의 적합한 투여 경로에 의한 환자에의 치료제의 투여를 의미한다.

III. 본 발명의 항체

본 발명은 본 발명의 1종 이상의 폴리펩티드의 전부 또는 일부에 대해 발생되고, 그에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 추가로 포함하고, 또한 상기 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 포유동물로부터 수득된 샘플에 접촉되는 경우, 이들 항체 및 항원-결합 단편은 특정한 연충 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. 예를 들어 촌충 항체 및 항원-결합 단편은 샘플에 존재하는 촌충 항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 샘플에 존재할 수 있는 다른 충류, 예컨대 회충, 구충 또는 편충으로부터의 임의이 항원에는 특이적으로 결합할 수 없다. 본 발명의 항체는 단지 1종 이상의 촌충 항원을 포획하는데, 단지 1종 이상의 촌충 항원을 검출하는데, 또는 보다 바람직하게는, 1종 이상의 촌충 항원을 포획하고 검출하는 둘 다에 사용되기에 적합하다.

본 발명의 항체는, 예를 들어, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 비롯한 임의의 항체 부류에 속할 수 있으며, 통상의 기술자에게 공지된 다양한 기술 중 임의의 것에 의해 제조될 수 있다. (예를 들어, 문헌 [Dean, Methods Mol. Biol. 80:23-37 (1998)]; [Dean, Methods Mol. Biol. 32:361-79 (1994)]; [Baileg, Methods Mol. Biol. 32:381-88 (1994)]; [Gullick, Methods Mol. Biol. 32:389-99 (1994)]; [Drenckhahn et al. Methods Cell. Biol. 37:7-56 (1993)]; [Morrison, Ann. Rev. Immunol. 10:239-65 (1992)]; [Wright et al. Crit. Rev. Immunol. 12:125-68(1992)]; [Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)]; 및 [Making and Using Antibodies: A Practical Handbook, Howard and Kaser, eds., CRC Press (2006)]을 참조하며, 이들의 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.)

한 기술에서, 본 발명의 폴리펩티드는 숙주 동물 내로, 예컨대 예를 들어 토끼, 마우스, 래트, 기니 피그, 염소, 돼지, 소, 양, 당나귀, 개, 고양이, 닭, 또는 말 내로 도입된다. 향상된 면역 반응은 폴리펩티드를 운반체와 회합시킴으로써 및/또는 숙주를 아주반트에 노출시킴으로써 숙주 동물에서 유발될 수 있지만, 본 발명은 폴리펩티드가 운반체와 회합되거나, 숙주가 아주반트에 노출되는 것을 요구하지는 않음이 이해되어야 한다. 이 목적을 위해 사용될 수 있는 예시적인 운반체는 소 혈청 알부민, 소 티로글로불린, 및 대두 트립신 억제제이다. 예시적인 아주반트는 프로인트 완전 또는 불완전 아주반트 및 MDL-TDM 아주반트를 포함한다. 폴리펩티드가 이러한 운반체와 회합되는지 여부 또는 숙주가 아주반트에 노출되는지 여부와 무관하게, 부스터 면역화는 임의로 수행될 수 있으며, 숙주 동물은 그 후 1회 이상 채혈된다. 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 폴리클로날 항체 (pAb)는 이어서 채혈 또는 채혈들로부터 수득된 항혈청으로부터 정제될 수 있다. 이러한 정제는, 예를 들어, 폴리펩티드를 고체 지지체에 회합시키는 것을 포함하는 친화도 크로마토그래피 기술을 채용함으로써 달성될 수 있다. 이러한 친화도 크로마토그래피 기술은 통상의 기술자에 의해 널리 공지되어 있다.

여러 실시양태에서, 본 발명의 촌충 항체는 하기 기재된 바와 같이, 그 숙주 동물을 전체 촌충의 추출물, 촌충의 E/S 물질, 촌충의 웜 워시, 또는 촌충의 TCA 가용성 물질로 면역화함으로써 토끼에서 발생된 항체이다.

본 발명의 항체는 임의로 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 (mAb), 단일 쇄 항체 (scFv), 키메라 항체, 및 그의 단편일 수 있음이 또한 이해되어야 한다. 관심의 폴리펩티드에 대해 특이적인 모노클로날 항체는, 예를 들어, 관심의 폴리펩티드에 대한 요망되는 특이성을 갖는 항체를 생성하는 세포주를 제조함으로써 수득되고 정제될 수 있다. 이 종류의 세포주는 전에 기재된 바와 같이 폴리펩티드로 이전에 면역화된 숙주 동물로부터 단리된 특정한 유형의 세포 (예를 들어, 비장 세포)로부터 유래될 수 있다. 이러한 경우, 이들 세포는 이어서 예를 들어, 통상의 기술자에게 공지된 다양한 융합 기술 중 어느 하나를 수행함으로써 이들을 골수종 세포와 융합함으로써 불멸화될 수 있다. 한 예시적인 기술에서, 면역화된 숙주 동물로부터의 세포는 세정제의 존재 하에서 짧은 시간의 기간 동안 그들의 융합 상대, 예를 들어, 골수종 세포와 공동-인큐베이션된 후, 하이브리드 세포 (그러나 골수종 융합 상대는 아님)의 성장을 지지하는 배지 상에 플레이팅된다. 이러한 선택은, 예를 들어, 히포크산틴, 아미노프테린, 및 티미딘 (HAT)을 사용함으로써 달성될 수 있다. 하이브리드 세포가 선택 동안 나타나는 경우, 선택 프로세스를 시작한 후 아마 1 또는 2주에, 단일 하이브리드 콜로니 (및 그들의 상청액)는 숙주 동물이 면역화된 폴리펩티드 또는 폴리펩티드들에 결합하는 그들의 능력에 대해 시험된다. 가장 최적의 결합 특이성을 갖는 하이브리드 콜로니는 모노클로날 항체가 단리될 수 있는 가장 좋은 후보를 나타낼 것이다. 이들 모노클로날 항체는, 예를 들어, 통상의 기술자에게 공지된 다양한 기술 중 어느 하나를 채용함으로써 이들 콜로니가 성장되는 상청액 (즉, 배지)으로부터 직접적으로 단리될 수 있다.

본 발명의 항체는 또한 단일 쇄 항체 (scFv), 또는 항체의 항원 결합 단편일 수 있다. 항체의 항원-결합 단편은 무손상 항체의 항원 결합 부위 또는 가변 영역을 포함하는 무손상 항체의 부분이며, 여기서 부분은 무손상 항체의 Fc 영역의 불변 중쇄 도메인이 없다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂ 및 F_v 단편을 포함한다. 동물 또는 포유동물 세포로부터의 생산 및 정제 외에도, 항체, 항체 단편, 또는 비-항체 스캐폴드는 파지 제시, 리보솜 제시, 또는 박테리아 제시를 비롯한 다양한 시험관내 기술에 기반하여 선택될 수 있다.

2차 항체를 비롯한 항체는, 예를 들어, 형광, 화학발광, 방사성, 효소, 콜로이드성 입자, 방사성동위원소 및 생물발광 표지를 비롯한 관련 기술분야에 공지된 임의의 유형의 표지로 표지될 수 있다. 본 발명의 다양한 실시양태에서, 본 발명의 항체 중 1종 이상은 효소, 콜로이드성 입자, 방사성핵종 또는 형광단으로 표지된다. 미립자 표지는, 예를 들어, 항체에 접합된 색상 있는 라텍스 입자, 염료 졸, 또는 금 졸일 수 있다.

IV. 본 발명의 방법, 장치 및 키트

A. 본 발명의 장치 및 키트

본 발명은, 한 측면에서, 샘플로부터의 1종 이상의 촌충 항원의 존재 또는 부재를 검출하는 장치로서, 고체 지지체를 포함하며, 여기서 고체 지지체는 그 위에 (a) 제1 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체; (b) 제2 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및 (c) 제3 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체; 및 임의로, (d) 지아르디아 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 및/또는 구충 분변항원 중 1종 이상의 유형으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체가 고정화되어 있고, 여기서 회충 분변항원, 편충 분변항원, 및 구충 분변항원 중 1종 이상의 유형은 항체에 특이적으로 결합되는 것인 장치이다. 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 번호 7,951,547을 참조한다. 장치는 포유동물로부터의 샘플에서의 임의의 지아르디아, 회충, 편충 및 구충 항원으로부터 촌충 분변항원에 특이적으로 결합하고, 이를 단리하는 것을 보조하도록 배열된다.

한 측면에서, 장치는 고체 지지체를 포함하며, 여기서 본 발명의 1종 이상의 항체는 고체 지지체 상에 고정화된다. 고체 지지체는 예를 들어 측방 유동 장치의 부분으로서 포함되는 마이크로타이터 플레이트의 웰의 내부, 바닥 표면, 미세입자, 미세유체 장치의 채널, 카트리지, 막, 또는 기재일 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 마이크로타이터 플레이트는 이뮬론(Immulon) 1B 96-웰 플레이트 (미국 매사추세츠주 밀포드 소재 써모 사이언티픽(Thermo Scientific)으로부터 상업적으로 입수가능함)이지만, 통상의 기술자는 이뮬론 1B 96-웰 플레이트가 아닌 아주 다양한 다른 마이크로타이터 플레이트가 그 위에 항체의 고정화를 허용하고, 따라서 본 발명의 고체 지지체를 제공하기에 적합할 것임을 인식할 것임이 이해되어야 한다.

예시적인 측방 유동 장치는 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 5,726,010에 기재된 측방 유동 장치이다. 측방 유동 검정을 수행하기 위한 장치는 미국 메인주 웨스트브룩 소재 아이덱스 래보러토리즈, 인크.(IDEXX Laboratories, Inc.)로부터 상업적으로 입수가능한 스냅(SNAP)® 장치일 수 있다. 그러나, 통상의 기술자는 스냅® 장치가 아니거나 미국 특허 번호 5,726,010에 의해 기재되지 않은 아주 다양한 다른 측방 유동 장치가 그 위의 항체의 고정화를 허용하고, 따라서 본 발명의 장치로서 사용되기에 적합할 것임을 인식할 것임이 이해되어야 한다. 이들 장치는, 예를 들어, 콜로이드성 금 기술을 사용하는 측방 유동 장치를 포함할 수 있다.

본 발명의 장치에 사용되는 항체는, 예를 들어, 항체를 고치 지지체에 공유적으로 또는 비-공유적으로, 직접적으로 또는 간접적으로 부착시키는 것을 비롯한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법론에 의해 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 따라서, 이들 항체는 물리적 흡착에 의해 (즉, 화학적 링커를 사용하지 않고) 고체 지지체에 부착될 수 있지만, 이들 항체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 공지된 임의의 화학적 결합 (즉, 화학적 링커를 사용하여) 방법에 의해 고체 지지체 상에 고정화될 수 있음은 또한 사실이다.

일부 실시양태에서, 제1 항체는 제1 촌충 종의 전체 추출물, 제1 촌충 종의 E/S 물질, 제1 촌충 종의 웜 워시 물질, 또는 제1 촌충 종의 TCA 가용성 물질에 대해 발생될 수 있거나; (b) 제2 항체는 제2 촌충 종의 전체 추출물, 제2 촌충 종의 E/S 물질, 제1 촌충 종의 웜 워시 물질, 또는 제2 촌충 종의 TCA 가용성 물질에 대해 발생될 수 있거나; (c) 제3 항체는 제3 촌충 종의 전체 추출물, 제3 촌충 종의 E/S 물질, 제1 촌충 종의 웜 워시 물질, 또는 제3 촌충 종의 TCA 가용성 물질에 대해 발생될 수 있다.

일부 실시양태에서, 고체 지지체는 그 위에 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충 또는 구충 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 또는 구충 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충 또는 회충 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 및 파르보바이러스에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 및 지아르디아 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체로부터 선택된 1종 이상의 항체가 추가로 고정화되어 있다. 실시양태에서, 구충은 안실로스토마이고, 회충은 톡소카라이고, 편충은 트리쿠리스이다. 다른 실시양태에서, 구충은 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충은 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충은 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아는 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스는 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스이다.

고체 지지체는 본 발명의 항체의 고정화를 위한 임의의 적합한 물질일 수 있음이 또한 이해되어야 한다. 예를 들어, 고체 지지체는 비드, 입자, 튜브, 웰, 프로브, 딥스틱, 피펫 팁, 슬라이드, 섬유, 막, 종이, 천연 및 변형된 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 아가로스, 유리, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리스티렌, 덱스트란, 나일론, 아밀라제, 플라스틱, 자철석 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 공지된 임의의 다른 적합한 물질일 수 있다. 일부 실시양태에서, 고체 지지체는 복수의 입자, 미세입자, 칩 또는 비드를 포함할 수 있다. 복수의 입자, 미세입자, 칩 또는 비드는 장치에 부착되거나, 장치와 느슨하게 회합될 수 있다. 복수의 입자, 미세입자, 칩 또는 비드는 장치의 표면 상에 또는 장치 내에 위치될 수 있다. 복수의 입자, 미세입자 또는 비드는 장치 상에 또는 내에서 고정적일 수 있거나, 이들은 장치 내에서 또는 장치를 통해 움직일 수 있다.

장치는 임의로 본 발명의 장치의 적용 전에 포유동물로부터의 샘플과 혼합될 수 있는 1종 이상의 표지된 항원 포획 시약을 포함할 수 있다. 표지된 항원 포획 시약이 포함되는 경우, 표지된 항원 포획 시약은 장치의 고체 표면 상에 침착되거나 건조될 수 있거나, 그렇지 않을 수 있다. "항원 포획 시약"은 관심의 항원 또는 항원들에 대해 특이적인 임의의 화합물을 지칭한다. 표지된 항원 포획 시약은, 포유동물 샘플에 첨가되든지, 장치 상에 사전-침착되든지, 예를 들어, 본 발명의 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는 회충 항원에 대해 특잊거인 표지된 항체일 수 있다.

장치는 또한 임의로 반응 구역 (고체 상)으로부터 멀리 비결합된 물질 (예를 들어, 포유동물 샘플의 비반응된 부분, 예컨대, 예를 들어, 분변 추출물의 비반응된 부분, 및 비결합된 항원 포획 시약)을 수송하거나 (예컨대 장치가 예를 들어 스냅® 장치인 경우), 다르게는 그의 제거를 용이하게 하는 (예컨대 장치가 예를 들어 마이크로타이터 플레이트를 포함하는 경우) 액체 시약을 포함할 수 있다. 액체 시약은 세척 시약이고, 단지 비결합된 물질을 반응 구역으로부터 제거하도록 기능할 수 있거나, 이는 검출제 시약을 포함하고, 비결합된 물질을 제거하고, 항원 검출을 용이하게 하는 둘 다로 기능할 수 있다. 예를 들어, 효소에 접합된 항원 포획 시약의 경우, 검출제 시약은 반응 구역 (고체 상)에서 효소-항체 접합체와의 반응 시 검출가능한 신호를 생성하는 기재를 포함한다. 대안적으로, 방사성, 형광, 또는 광-흡수 분자에 접합된 표지된 항원 포획 시약의 경우, 액체 시약은 단지 비결합된 표지된 시약을 세척 제거함으로써 반응 구역에서 복합체 형성의 검출을 용이하게 하는 세척 용액으로서 작용한다.

액체 시약은 제한된 양의 "억제제", 즉, 검출가능한 최종 산물의 발달을 차단하는 물질을 추가로 포함할 수 있다. 제한된 양은 대부분의 또는 모든 과량의 비결합된 물질이 제2 영역으로부터 수송 제거되고, 이 때 검출가능한 최종 산물이 생성될 때까지 최종 산물 발달을 차단하는데 충분한 억제제의 양으로서 정의된다.

본 발명의 장치는 또한 항원 포획 시약 또는 시약들과는 별개의 위치에 고정화된 다양한 결합 시약을 포함할 수 있다. 예를 들어, 표지된 항체 또는 항원 포획 시약의 종-특이적 (예를 들어, 회충-특이적) 항체 부분, 또는 효소-표지된 시약의 효소 부분을 인식하는 면역시약 (항체, 항원 또는 폴리펩티드)는 장치 내의 시약의 생존력을 평가하기 위한 양성 대조군으로서 포함될 수 있다. 예를 들어, 양성 대조군은, 예를 들어, 염소 또는 마우스에서 발생된 항-서양고추냉이 퍼옥시다제 항체일 수 있다. 추가적으로, 항원-항체 복합체의 항체 부분이 유래된 종의 비-면역 구성원으로부터 단리된 시약, 예를 들어, 항체는 면역복합체 (즉, 항원-항체 복합체) 형성의 특이성을 평가하기 위한 음성 대조군으로서 포함될 수 있다.

포유동물 샘플에서 촌충 분변항원에 특이적으로 결합하고 이를 단리하도록 디자인된 것 외에도, 본 발명의 장치는 임의로 하나 이상의 다른 진단 시험이 수행되는 것을 허용하도록 디자인될 수 있다. 예를 들어, 고체 지지체는 또한 1종 이상의 연충, 예컨대 회충, 편충, 심장사상충 및 구충, 1종 이상의 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스 (예컨대 파르보바이러스), 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충 (예컨대 지아르디아), 또는 1종 이상의 박테리아의 검출을 위한 시약을 포함할 수 있다. 1종 이상의 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충, 또는 1종 이상의 박테리아의 검출을 위한 시약은, 예를 들어, 1종 이상의 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충, 또는 1종 이상의 박테리아에 대해 특이적인 항체에 의해 인식되는 1종 이상의 항체 또는 1종 이상의 항원일 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명의 장치는 복수의 웰을 포함하는 마이크로타이터 플레이트이며, 여기서 각각의 웰은 고체 지지체 위에 고정화된 본 발명의 1종 이상의 항체를 갖는 고체 지지체를 포함한다.

마이크로타이터 플레이트는 샘플에서 1종 이상의 연충 분변항원의 존재 또는 부재를 검출하는 본 발명의 방법과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 촌충 감염은 1종 이상의 촌충 항원을 고체 지지체 상에 고정화된 항체로 검출함으로써 포유동물에서 진단될 수 있다. 한 실시양태에서, 검출되는 항원은 분변항원이다. "분변항원"은 숙주 종 (예를 들어, 개 또는 고양이)으로부터의 분변 샘플에 존재하고, 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 위장 기생체, 예컨대 촌충의 임의의 산물 또는 산물들이다. 따라서, 분변항원은 전체 충류, 충란, 충류 단편, 또는 충류로부터 분비되거나, 배설되거나 흘려진 산물 또는 그의 조합일 수 있다.

마이크로타이터 플레이트 외에도, 관련 기술분야에 공지된 다중 면역검정을 병행하여 수행하기 위한 (즉, 다중화 면역검정) 다수의 다른 대안적 접근법이 있다. 전형적으로, 다중화 면역검정은 단일 용기에서, 다중 면역검정의 성분이 유체 통신하는 조성물 또는 장치에서 수행될 수 있다. 이들 기술은 어레이, 마이크로어레이, 및/또는 마이크로비드 또는 미세입자에 기반할 수 있다. 어레이 또는 마이크로어레이에서, 포획 시약은 전형적으로 단일 장치, 예컨대 막의 이산 영역에 스폿팅되거나 다르게는 침착된다. 비드-기반 접근법에서, 각각의 검정을 위한 포획 시약은 비드에 부착되고, 여기서 각각의 검정의 비드는 다른 검정의 비드로부터 구별가능하다. 구별은 광의 색상, 물리적 위치, 바코드 등에 의해 일어날 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Tighe, P. J., Ryder, R. R., Todd, I. and Fairclough, L. C. (2015), ELISA in the multiplex era: Potentials and pitfalls. Prot. Clin. Appl., 9: 406-422. doi:10.1002/prca.201400130]을 참조한다.

다수의 이러한 다중화 플랫폼은 상업적으로 입수가능하다. 예는 루미넥스(Luminex)® (예를 들어, 미국 특허 번호 7,523,637 참조); π코드(πCode)™ 마이크로디스크(MicroDiscs) (플렉스바이오(Plexbio), 예를 들어, 미국 특허 출원 번호 US2014/0274778 참조); 바코드화 자성 비드(Barcoded Magnetic Beads) 및 그로 검정을 실행하기 위한 방법 및 기기 (예를 들어, 어플라이드 바이오코드, 인크.(Applied BioCode, Inc.), 미국 캘리포니아주 산타 페 스프링스; 자성 바코드화 칩 (예를 들어, 어플라이드 바이오코드, 인크.; 예를 들어, 미국 특허 번호 8,232,092); 미세유동 시험 스트립 (예를 들어, 루미라Dx(LumiraDx)®, 미국 특허 번호 9,919,313); 및 평면 광 데크 기술, 예컨대 라이트데크(LightDeck)® (m바이오(mBio)®, 미국 특허 번호 9,739,714)를 포함한다. 추가적인 다중화 면역검정 기술은 멀티-어레이(MULTI-ARRAY) (메소 스케일 디아그노스틱스(Meso Scale Diagnostics), 미국 메릴랜드주 록빌), 바이오-플렉스(Bio-Plex)® 멀티플렉스 시스템 (바이오-래드(Bio-Rad), 미국 캘리포니아주 허큘레스), 액세스(Access) 2 (베크만 쿨터(Beckman Coulter), 미국 조지아주 아틀란타); 및 프로카르타플렉스(ProcartaPlex)® 및 프로콴텀(ProQuantum)® 기술 (써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific), 미국 매사추세츠주 월텀)을 포함한다 (문헌 [Fu Q, Zhu J, Van Eyk JE. Comparison of multiplex immunoassay platforms. Clin Chem. 2010 Feb;56(2):314-8. doi:10.1373/clinchem.2009.135087] 참조).

본 발명의 또 다른 측면에서, 분변 샘플로부터 1종 이상의 촌충 분변항원의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 장치는 고체 지지체, 1종 이상의 렉틴, 및 (a) 제1 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체; (b) 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및 (c) 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 고체 지지체는 그 위에 1종 이상의 항체, 2종 이상의 항체, 3종 이상의 항체, 4종 이상의 항체, 5종 이상의 항체, 6종 이상의 항체, 7종 이상의 항체, 또는 8종 이상의 항체가 고정화되어 있다. 표지된 렉틴은 검출 목적을 위한 고정화된 항체에 의해 포획된 촌충 분변항원 상의 탄수화물에 결합할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 렉틴은 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 고정화된 렉틴은 존재하는 경우에는 촌충 분변항원을 포획할 수 있으며, 생성된 복합체는 1종 이상의 표지된 항체에 의해 검출될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 장치는 촌충 항원의 1종 이상의 종을 추가로 포함하며, 여기서 촌충 항원의 1종 이상의 종은 항체에 특이적으로 결합된다.

본 발명은 포유동물 샘플에서 상이한 종의 촌충을 검출하고 그 사이를 구별하기 위한 검정 키트 (예를 들어, 제조품)를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 검정 키트는 포유동물 샘플에서 연충, 예컨대 회충, 편충 및/또는 구충으로의 공동-감염을 추가로 검출하고 구별할 수 있다. 따라서, 키트는 본 발명의 1종 이상의 장치 및/또는 조성물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트는 항-촌충 항체 및 촌충 항원에의 항체의 결합을 결정하기 위한 수단 및 촌충 항원에의 항체의 결합을 결정하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 한 특정한 예에서, 이러한 키트는 촌충의 1종 이상의 상이한 종에 대한 고정화된 항-촌충 항체, 1종 이상의 항원 포획 시약 (예를 들어, 비-고정화된 표지된 항원 포획 시약 및 고정화된 항원 포획 시약) 및 세척 시약, 뿐만 아니라 요망되거나 적절한 경우, 검출제 시약 및 양성 및 음성 대조군 시약을 갖는 장치를 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 성분, 예컨대 완충제, 대조군 등은 이러한 시험 키트에 포함될 수 있다. 다양한 시약의 상대적인 양은 검정의 감수성을 실질적으로 최적화하는 시약의 용액 중의 농도를 제공하기 위해 다양할 수 있다. 특히, 시약은 용해 시 샘플과 배합하기 위한 적절한 농도를 갖는 시약 용액을 제공할 통상적으로 동결건조된 건조 분말로서 제공될 수 있다. 본 키트는 키트와 함께 포함되는 본 발명의 임의의 장치 및/또는 조성물을 사용하는 것에 대한 지침서를 비롯한, 본 발명의 하나 이상의 방법을 수행하는 것에 대한 지침서를 추가로 포함할 수 있다.

B. 본 발명의 방법

본 발명은 본 발명의 장치, 키트 및/또는 조성물 중 1종 이상을 사용하여 샘플에서 1종 이상의 촌충 항원의 존재 또는 부재를 검출하는 방법을 추가로 포함한다. 따라서, 방법은 개, 고양이, 돼지, 소 또는 인간을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 포유동물로부터 수득된 샘플, 예컨대, 예를 들어, 분변 샘플에서 촌충의 1종 이상의 종의 존재 또는 부재를 검출하기 위해 수행될 수 있다. 또한, 방법은 샘플에서 연충, 예컨대 회충, 편충, 구충 및 심장사상충, 비-충류 기생체, 예컨대 지아르디아, 및 바이러스, 예컨대 파르보바이러스 중 1종 이상을 검출하기 위해 수행될 수 있다.

본 발명의 방법에서, 촌충의 1종 이상의 종의 검출은 1종 이상의 촌충 항원의 존재 또는 부재를 검출함으로써 달성될 수 있다. 촌충 분변항원을 위한 시험 하의 샘플이 분변인 경우, 분변의 가용성 부분은 관련 기술분야에 공지된 임의의 프로토콜에 의해 수집될 수 있다. 예를 들어, 본원의 실시예 섹션에 기재된 구체적인 프로토콜 외에도, 샘플의 가용성 부분은 일반적으로 여과, 추출, 원심분리, 또는 간단한 혼합, 이어서 중량계측적 고정을 사용함으로써 수집될 수 있다. 통상의 기술자는 포유동물로부터의 비-분변 샘플을 추출하고 제조하는 다양한 방식이 있음을 또한 인식할 것이다. 예를 들어, 샘플은 포유동물에 의해 천연적으로 배설되거나 다르게는 방출되거나, 포유동물로부터 인공적으로 수득된 체액일 수 있다. 이러한 인공적 추출은 포유동물을 착유함으로써 또는 시린지를 포유동물 내로 주사하고, 체액을 시린지 내로 채취함으로써 수행될 수 있다. 수득되면, 유체는 임의로 분획화될 수 있다 (예를 들어, 혈청은 전혈로부터 분획화되고, 이어서 샘플로서 사용될 수 있다). 또 다른 예로서, 샘플은 예를 들어 포유동물, 예컨대 포유동물의 구강을 스와빙함으로써 수득될 수 있다. 추가의 또 다른 예로서, 조직 섹션은 생검에 의해 수득될 수 있다.

방법은 포유동물 샘플을 항원/항체 복합체, 즉, 면역복합체가 형성되는 것을 허용하는 조건 하에서 촌충 분변항원에 대해 특이적인 1종 이상의 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 즉, 항체는 샘플에 존재하는 분변항원에 특이적으로 결합한다. 통상의 기술자는 이러한 항원/항체 복합체 결합을 검출하는데 사용될 수 있는 검정 및 조건에 익숙하다. 예를 들어, 항원/항체 복합체는 항원/항체 복합체에 결합하는 2차 항체를 사용하여 검출될 수 있다. 샘플에서의 항원 및 항체 사이의 복합체의 형성은 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 검출될 수 있다.

또한, 한 특정한 반응에서 형성되는 항체-항원 복합체의 상대적인 양은 그 목표를 달성하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법론에 의해 임의의 다른 방법에서 형성된 것들에 관하여 측정될 수 있다. 시험 하의 샘플이 특이적 촌충 항체-항원 복합체를 갖는 것으로 결정되는 경우, 형성된 특이적 복합체에 기반하여, 특이적 촌충은 숙주 포유동물에 존재하고, 어느 촌충이 존재하는지 (예를 들어 촌충 종 타에니아 피시포르미스 및 디필리디움 카니눔) 결론내려질 수 있다. 이것이 사실인 경우, 시험 샘플이 수득된 포유동물은 장 촌충 감염을 갖는다고 결론내려질 수 있다. 시험되고 있는 포유동물이 장 촌충 감염을 갖는다는 결론은 예를 들어 진단 서비스 제공자에서의 임상의에 의해 또는 포유동물의 보호자, 예컨대 포유동물의 수의사에 의해 이루어질 수 있다. 포유동물의 보호자가 포유동물이 촌충 감염을 갖고, 어느 촌충이 존재하는지를 결정하는 (또는 다르게는 이를 알게 된) 경우, 보호자는 이어서 포유동물을, 일반적으로 기생충 감염의 것이라기 보다는, 촌충의 포유동물을 특이적으로 제거하도록 최적으로 디자인된 치료의 과정으로 처리할 수 있다. 또한, 본 발명은 특이적 촌충 감염을 위한 치료를 받은 임의의 동물이 그 감염이 제거되었는지를 확인하는데 사용될 수 있다. 샘플이 예를 들어 촌충 및 회충 둘 다를 포함하지만, 구충은 포함하지 않는 것을 안 보호자는 그 지식을 사용하여 촌충에 대해 최적으로 유효한 약물 및 회충에 대해 최적으로 유효한 제2 약물을 그 포유동물에게 투여함으로써 샘플이 취해진 포유동물을 촌충에 대해 특이적으로 치료할 수 있다. 이러한 지식이 없으면, 보호자는, 예를 들어, 그렇지 않다면 포유동물을 단지 촌충, 단지 회충, 또는 촌충도 회충도 아닌 것에 대해 최적으로 유효한 약물로 치료할 수 있다 (이 경우, 포유동물은 준최적 치료를 받을 위험이 있을 것이다). 또한, 감염된 동물 또는 그의 배설물과 접촉하게 될 수 있는 인간은 기생체 또는 기생체들을 획득하는 것에 대해 경계하도록 조언될 수 있다. 이 맥락에서, 높은 특이성 충류를 갖는 충류 종이 인간에서 유의한 질환 (예를 들어, 유충 이동)을 유발할 수 있음을 결정하는 것은 중요하다.

장 기생체로의 감염을 앓고 있는 환자는 환자로부터 기생체를 제거하는 것으로 공지된 특정 치료제로 치료될 수 있다. 따라서, 그의 분변이 장 기생체로부터의 특정 분변항원을 함유하는 것으로 밝혀진 환자는 장 기생체를 감소시키거나 제거하는 목표를 갖는 적절한 치료제로 치료될 수 있다.

장 기생충, 예컨대 촌충, 구충, 편충 및/또는 회충으로의 감염을 앓고 있는 환자는 구충제로도 공지된 제충 약물로 치료될 수 있다. 이러한 구충제는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 폭넓게 공지되어 있다. 촌충의 치료를 위한 구충제는 제한 없이 프라지콴텔, 니타족사니드, 알벤다졸, 엡시프란텔, 펜벤다졸, 또는 그의 조합을 포함한다. 구충제는 장 기생체의 치료 및/또는 예방에서 환자에게 경구로, 비경구로, 예컨대 피하로, 정맥내로, 근육내로 또는 복강내로, 또는 국소로 (피부로), 예컨대 노출된 피부 표면 상으로 직접적으로를 비롯한 다양한 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다.

지아르디아는 지아르디아증으로 공지된 설사 병을 유발하는 현미경적 기생체이다. 지아르디아 인테스티날리스, 지아르디아 람블리아 및 지아르디아 두오데날리스를 비롯한 지아르디아는 감염된 인간 또는 동물로부터의 분변으로 오염된 표면 상에 또는 토양, 음식, 또는 물에서 발견된다. 지아르디아 분변항원은 베트스캔(VetScan)® 개 지아르디아 신속 시험 (아박시스(Abaxis), 미국 유니온 시티), 아니젠(Anigen)® 신속 CPV-CCV-지아르디아 항원 시험 (바이오노트(BioNote), 대한민국 서울), 스냅® 지아르디아 시험 (아이덱스, 미국 메인주 웨스트브룩) 및 ELISA 시험에 의한 지아르디아 항원 (아이덱스), 프로스펙T(ProSpecT)® 지아르디아/크립토스포리디움 마이크로플레이트 검정 (써모 피셔 사이언티픽, 미국 매사추세츠주 월텀) 및 위트니스(Witness)® 지아르디아 시험 (제오티스(Zoetis), 미국 뉴저지주 파시파니)을 비롯한 다수의 상업적으로 입수가능한 시험으로 검출될 수 있다. (Barbecho JM, Bowman DD, Liotta JL. Comparative performance of reference laboratory tests and in-clinic tests for Giardia in canine feces. Parasit Vectors. 2018 Aug 1;11(1):444. doi: 10.1186/s13071-018-2990-6. PMID: 30068364; PMCID: PMC6090814.)

지아르디아 감염의 치료를 위한 치료제는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 폭넓게 공지되어 있다. 지아르디아 감염은 펜벤다졸, 알벤다졸, 메트로니다졸, 티니다졸, 니타족사니드, 파로모마이신, 퀴나크린, 및 푸라졸리돈, 페반텔, 피란텔 파모에이트, 프라지콴텔 또는 그의 조합을 비롯한 여러 약물 중 1종 이상으로 치료될 수 있다. 이들 약물은 지아르디아의 치료 및/또는 예방에서 환자에게 경구로, 비경구로, 예컨대 피하로, 정맥내로, 근육내로 또는 복강내로, 또는 국소적으로 (피부로), 예컨대 노출된 피부 표면 상으로 직접적으로를 비롯한 다양한 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다.

중간 숙주는 1종 이상의 충류 또는 비-충류 기생체, 진균, 바이러스 및 박테리아를 환자에게 전파하는데 관여할 수 있으며, 따라서 성공적인 치료 개입은 재감염을 방제하거나 예방하는 전략을 포함한다. 예를 들어, 촌충 감염은 중간 숙주, 예컨대 벼룩 및 개 새털이에 의해 전파될 수 있기 때문에, 촌충 감염의 경우에 성공적인 치료 개입은 환자 상에 존재할 수 있는 임의의 중간 숙주 (예를 들어, 벼룩) 침입을 방제하는 전력을 포함한다. 따라서, 중간 숙주, 예컨대 벼룩을 방제하는 것은 촌충으로의 환자의 재감염을 예방하는 것을 보조한다. 벼룩 침입의 치료 또는 방제를 위한 치료제는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 셀라멕틴, 피프로닐, 이미다클로프리드, 인독사카르브, 피레트린, 퍼메트린, 플루메트린, 스피노사드, 니텐피람, 아폭솔라너, 플루랄라너, 사랄란, 니텐피람, 메토프렌, 피리프록시펜, 및 루페누론, 또는 그의 조합을 포함한다. 벼룩 방제제는 환자에게 경구로, 비경구로, 예컨대 피하로, 정맥내로, 근육내로 또는 복강내로, 또는 국소적으로 (피부로), 예컨대 노출된 피부 상으로 직접적으로를 비롯한 다양한 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 대표적인 적합한 벼룩 방제 형태는 스프레이, 분말, 칼라, 경구 조성물, 또는 국소 치료를 포함한다.

본 발명의 방법의 단계는 포유동물 샘플을 (a) 제1 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체; (b) 제2 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및 (c) 제3 촌충으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체를 포함하는 본 발명의 장치에 적용하여, 샘플에서 존재하는 경우, 분변항원의 존재 하에서 항체-분변항원 복합체를 형성하고; 존재하는 경우, 항체-분변항원 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 것을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 장치는 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충 또는 구충 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 또는 구충 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충 또는 회충 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 및 파르보바이러스에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 및 지아르디아 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체로부터 선택된 1종 이상의 항체를 추가로 포함할 수 있다. 실시양태에서, 구충은 안실로스토마이고, 회충은 톡소카라이고, 편충은 트리쿠리스이다. 다른 실시양태에서, 구충은 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충은 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충은 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아는 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스는 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스이다.

한 실시양태에서, 존재하는 경우, 항체-분변항원 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계는 복합체 중 적어도 1종에 결합하는 1종 이상의 렉틴을 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 렉틴은 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 대안적으로, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 한 실시양태에서 제1, 제2 및 제3 항체는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있고, 렉틴은 검출가능하게 표지될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지될 수 있고, 렉틴은 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 포유동물로부터의 분변 샘플을 1종 이상의 항체와 접촉시키는 단계는 분변 샘플을 1종 이상의 렉틴과 접촉시키는 단계를 추가로 포함한다. 렉틴은 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 대안적으로, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 한 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 고체 지지체 상에 고정화될 수 있고, 렉틴은 검출가능하게 표지될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 항체는 검출가능하게 표지될 수 있고, 렉틴은 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다.

항체 및 렉틴은 고체 지지체 또는 기재, 예컨대 마이크로타이터 웰, 스냅® 장치의 항체-고정화 부분, 자성 비드, 비-자성 비드, 칼럼, 매트릭스, 막, 합성 또는 천연 섬유 (예를 들어, 유리 또는 셀룰로스-기반 물질 또는 열가소성 중합체, 예컨대, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 또는 폴리에스테르)로 구성된 섬유성 매트, 미립자 물질 (예를 들어, 유리 또는 다양한 열가소성 중합체)로 구성된 소결된 구조, 또는 니트로셀룰로스, 나일론, 폴리술폰 등 (일반적으로 성질상 합성)으로 구성된 캐스트 막 필름에 직접적으로 또는 간접적으로 부착될 수 있다. 이들 기재 물질 모두는 적합한 형상, 예컨대 필름, 쉬트, 또는 플레이트로 사용될 수 있거나, 이들은 적절한 불활성 담체, 예컨대 종이, 유리, 플라스틱 필름, 또는 패브릭 상으로 코팅되거나, 결합되거나 적층될 수 있다. 항체, 펩티드 및 렉틴을 고체 상 상에 고정화하는 적합한 방법은 이온성, 소수성, 공유 상호작용 등을 포함한다.

그러나, 본 발명의 방법은 고체 상 또는 기재의 사용을 요구하지는 않는다. 통상의 기술자는 본 방법이 고체 상 또는 기재의 사용을 포함하지 않으면서 회충의 존재 또는 부재를 검출하기 위해 수행될 수 있는 다수의 방식이 있음을 인식할 것이다. 단지 한 예에서, 고체 상 또는 기재의 사용을 요구하지 않는 면역침전 방법이 수행될 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 항원/항체 복합체는 항체에 결합된 지시제 시약, 예컨대 효소 접합체가 검출가능한 반응을 촉매하는 경우에 검출된다. 임의로, 신호 생성 화합물을 포함하는 지시제 시약은 검출가능한 항원/항체/지시제 복합체의 형성을 허용하는 조건 하에서 항원/항체 복합체에 적용될 수 있다. 임의로, 항체는 항원/항체 복합체의 형성 전에 지시제 시약으로 표지될 수 있다.

본 발명의 방법의 일부에서 항원/항체 복합체 또는 항원/항체/지시제 복합체의 형성은 구체적으로 예를 들어, 방사계측적, 효소적, 화학발광, 측색적, 비탁적, 형광계측적, 광도계측적, 크기-분리, 표면 플라스몬 공명, 또는 침전 방법에 의해 검출될 수 있다. 항원/항체 복합체의 검출은 또한 신호 생성 화합물을 포함하는 지시제 시약에 커플링된 2차 항체의 첨가에 의해 달성될 수 있다. 폴리펩티드/항체 복합체와 회합된 신호 생성 화합물 (표지)을 포함하는 지시제 시약은 상기 기재된 방법을 사용하여 검출될 수 있으며, 발색제, 촉매, 예컨대 효소 접합체, 형광 화합물, 예컨대 플루오레세인 및 로다민, 화학발광 화합물, 예컨대 디옥세탄, 아크리디늄, 페난트리디늄, 루테늄, 및 루미놀, 방사성 원소, 직접 가시 표지, 뿐만 아니라 보조인자, 억제제, 자성 입자 등을 포함할 수 있다. 효소 접합체의 예는 알칼리성 포스파타제, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 베타-갈락토시다제 등을 포함한다. 특정한 표지의 선택은 중요하지 않지만, 단독으로 또는 1종 이상의 추가적인 물질과 함께 신호를 생성할 수 있을 것이다.

본 발명의 방법은 ELISA, RIA, 면역-형광 검정 (IFA), 혈구응집 (HA), 형광 편광 면역검정 (FPIA), 및 마이크로타이터 플레이트 검정 (즉, 마이크로타이터 플레이트의 1개 이상의 웰에서 수행되는 임의의 검정)을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 경쟁, 직접 반응 또는 샌드위치-유형 검정에 기반한 것들을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 한 검정은, 예를 들어, 스냅® 장치를 사용함으로써 수행될 수 있는 가역적 유동 크로마토그래피 결합 검정을 포함한다. 미국 특허 번호 5,726,010을 참조한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 샌드위치 또는 경쟁-유형 특이적 결합 검정을 용이하게 한다. 샌드위치 검정에서, 항원 포획 시약은 반응 구역에서 고정화된다. 이들 항원 포획 시약은 촌충에 대해 시험되고 있는 샘플에서 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. 샘플로부터의 항원의 결합 후, 항원 포획 시약/항원 복합체는 임의의 적합한 방법에 의해 검출된다. 예를 들어, 복합체는 표지된 특이적 결합 시약 (예를 들어, 효소-항체 접합체)과 반응되고, 항원 검출될 수 있다 (예를 들어, 기재와의 반응 시).

본 발명의 방법의 다른 실시양태에서, 경쟁 검정이 수행된다. 경쟁 검정에서, 항원 포획 시약은 반응 구역에서 고정화되고, 샘플로부터의 항원 및 표지된 항원 (예를 들어, 항원-효소 접합체)과 동시에 접촉된다. 반응 구역에서 검출되는 표지의 양은 샘플 중의 항원의 양과 반비례한다.

방법의 일부 실시양태에서, 촌충 분변항원에 대해 특이적인 항체는 고체 상 또는 기재에 부착된다. 촌충으로부터의 항원을 잠재적으로 포함하는 샘플은 기재에 첨가된다. 촌충 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 첨가된다. 항체는 고체 상 상에 사용되는 동일한 항체일 수 있거나, 이들은 상이한 공급원 또는 종으로부터의 것일 수 있다. 또한, 이들 항체는 지시제 시약, 예컨대 효소 접합체에 연결될 수 있다. 세척 단계는 각각의 첨가 전에 수행될 수 있다. 발색단 또는 효소 기재가 첨가될 수 있고, 색상은 전개되도록 허용될 수 있다. 색상 반응은 정지될 수 있고/거나, 색상은, 예를 들어, 분광광도계를 사용하여 정량화될 수 있고/거나, 색상은 인간 눈에 의해 주관적으로 평가될 수 있다.

방법의 다른 실시양태에서, 촌충 분변항원에 대해 특이적인 항체는 고체 상 또는 기재에 부착된다. 촌충 항원을 잠재적으로 포함하는 샘플은 기재에 첨가된다. 분변항원에 특이적으로 결합하는 제2 항-종 항체가 첨가된다. 이들 제2 항체는 고체 상 항체인 것과는 상이한 종으로부터의 것이다. 제2 항체에 특이적으로 결합하고, 고체 상 항체에 특이적으로 결합하지 않는 제3 항-종 항체가 첨가된다. 제3 항체는 지시제 시약, 예컨대 효소 접합체를 포함할 수 있다. 세척 단계는 각각의 첨가 전에 수행될 수 있다. 발색단 또는 효소 기재가 첨가될 수 있고, 색상은 전개되도록 허용될 수 있다. 색상 반응은 정지될 수 있고/거나, 색상은, 예를 들어, 분광광도계를 사용하여 정량화될 수 있고/거나, 색상은 인간 눈에 의해 주관적으로 평가될 수 있다.

구체적인 예에서, 본 발명의 방법은 제조된 포유동물 샘플을 제1 영역 (샘플 적용 구역)에서 장치의 유동 매트릭스에 첨가함으로써 측방 유동 검정 장치인 장치와 함께 수행된다. 제조된 샘플은 유체 유동 경로에서 모세관 작용에 의해, 샘플에서 항원과의 제1 복합체에 결합하고 이를 형성할 수 있는 미립자 표지가 존재하는 유동 매트릭스의 제2 영역으로 운반된다. 미립자 표지는, 예를 들어, 회충 항원에 대해 특이적인 항체에 접합된 색상 있는 라텍스 입자, 염료 졸, 또는 금 졸일 수 있다. 제1 복합체는 회충 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 별개의 위치에서 고정화된 유동 매트릭스의 제3 영역으로 운반된다. 제2 복합체는 고정화된 항체 및 제1 복합체 사이에 형성된다. 제2 복합체의 부분인 미립자 표지는 인간 눈에 의해 직접적으로 가시화될 수 있다.

각각의 특이적 충류 항체는 반응 구역 (고체 상)에서의 고정화된 항원 포획 시약일 수 있다. 표지에 접합된 제2 항원 포획 시약, 즉, 제2 특이적 촌충 항체는 샘플이 장치에 첨가되기 전에 샘플에 첨가될 수 있거나, 제2 항원 포획 시약은 장치 내로 혼입될 수 있다. 예를 들어, 표지된 항원 포획 시약은 샘플 적용 구역 및 고체 상 사이의 유체 통신을 제공하는 유체 유동 경로 상에 침착되거나 건조될 수 있다. 표지된 항원 포획 시약과 시험 샘플의 접촉은 표지된 항원 포획 시약의 용해를 발생시킬 수 있다.

본 발명의 방법의 한 실시양태에서, 특이적 충류 분변항원은 ELISA에 의해 검출된다. 본 발명의 ELISA 방법의 구체적인 예는 본원에 포함된 실시예 섹션에 기재되어 있다. 본 발명은 그러한 구체적인 ELISA 방법에 관하여 기재되어 있지만, 그러나 관련 기술분야의 통상의 기술자는 대안적인, 추가적인 또는 대용의 ELISA 단계가 본 발명의 이 방법을 통해 달성되는 기본적 목표로부터 벗어나지 않으면서 사용될 수 있음을 인식할 것임이 이해되어야 한다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 촌충 분변항원은 예를 들어 측방 유동 장치, 예컨대 스냅® 장치를 사용함으로써 검출된다.

또한, 촌충 감염의 검출을 위한 본 발명의 방법은 다른 유기체 또는 조건의 존재를 검출하는 다른 진단 검정과 조합될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 검정은 1종 이상의 연충, 비-충류 분변 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충, 1종 이상의 박테리아, 1종 이상의 혈액-매개 기생체 또는 잠혈 또는 그의 조합을 검출하는 시약과 조합될 수 있다. 단일 검정 장치에서 2개 이상의 고유한 결합 부위 (예컨대, 예를 들어, 스냅® 검정 장치 상의 2개이 고유한 스폿)를 제공함으로써, 본 발명은 단일 샘플로부터 2종 이상의 유기체의 검출을 허용한다. 한 실시양태에서, 단일 샘플로부터 3종의 유기체로부터의 과거 또는 현재의 감염 또는 침입의 검출을 위한 3개의 고유한 스폿 (스폿은 항원 또는 항체 결합 시약임)이 있다 (즉, 동일한 개별적인 샘플은 단일 장치 상의 3종의 포획 시약에 노출된다). 추가의 또 다른 실시양태에서, 단일 샘플로부터 4종의 유기체로부터의 과거 또는 현재의 감염 또는 침입의 검출을 위한 4개의 고유한 스폿 (스폿은 항원 또는 항체 결합 시약임)이 있다 (즉, 동일한 개별적인 샘플은 단일 장치 상에 4종의 포획 시약에 노출된다). 그러나, 동일한 장치는 4개 초과의 고유한 스폿을 포함하고/거나, 4종 초과의 유기체의 검출을 허용할 수 있음이 이해되어야 한다.

1종 이상의 연충, 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충, 또는 1종 이상의 박테리아의 검출을 위한 시약은, 예를 들어, 1종 이상의 연충, 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 또는 1종 이상의 박테리아에 대해 특이적인 항체에 의해 인식되는 1종 이상의 항체 또는 1종 이상의 항원일 수 있다. 일부 실시양태에서, 시약은 1종 이상의 연충 기생체 (예를 들어, 회충, 편충, 구충, 및 심장사상충), 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스 (예를 들어, 파르보바이러스, 예컨대 개 파르보바이러스 또는 고양이 파르보바이러스), 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충 (예를 들어, 지아르디아, 예컨대 지아르디아 람블리아) 또는 1종 이상의 박테리아에 대해 특이적인 항체에 의해 인식되는 1종 이상의 항체 또는 1종 이상의 항원을 포함할 수 있다.

방법은 추가로 임의로 본 발명의 핵산을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 촌충으로부터의 1종 이상의 핵산을 사용하여 포유동물 샘플에서 1종 이상의 촌충 종의 존재 또는 부재를 결정하는 것을 포함할 수 있다. 연충의 존재를 결정하기 위한 이들 핵산의 이러한 용도는 항체에 의한 1종 이상의 촌충 종의 검출을 포함하는 방법의 임의의 다른 측면의 수행 전에, 후에 또는 수반하여 수행될 수 있다. 따라서, 한 측면에서, 1종 이상의 촌충 종이 특정한 샘플에서 검출되거나 검출되지 않고, 샘플이 수득된 포유동물이 촌충 감염을 갖거나 갖지 않는 것으로 진단된 후, 샘플 (또는 진단된 포유동물로부터의 이후-수득된 샘플)은 본 발명의 임의의 1종 이상의 핵산을 비롯한 핵산 중 임의의 1종 이상의 존재 또는 부재에 대해 시험될 수 있다. 1종 이상의 핵산을 사용함으로써 특정한 포유동물에서 특이적 연충을 검출하는데 실패한 사람 (연충이 1종 이상의 항체를 사용함으로써 검출된 후)은 항체가 샘플에서 검출가능한 연충 핵산의 출현 전에 검출된 연충 분변항원을 가졌을 가능성을 고려할 필요가 있을 것이다. 이러한 예에서, 포유동물의 보호자는 항체가 사실 검출된 연충을 가졌다는 관찰에 기반하여, 핵산이 연충을 검출하는데 실패한 관찰을 무시하고, 포유동물을 연충 감염에 대해 특이적으로 치료하는 것을 진행하도록 선택할 수 있다. 또 다른 측면에서, 핵산은 특정한 포유동물에서 연충의 존재 또는 부재를 결정하는데 사용되고, 이어서 연충의 존재 또는 부재는 본 발명의 항체를 사용함으로써 추가로 평가된다. 1종 이상의 연충 핵산의 검출은 통상의 기술자에게 공지된 임의의 핵산 검출 기술을 사용함으로써 수행될 수 있다. 예를 들어, 이러한 검출은 PCR-기반 기술, 예컨대, 예를 들어, 실시간 PCR-기반 기술 (그러나 이에 제한되지는 않음)을 수행함으로써 수행될 수 있다. 예시적인 PCR-기반 기술은, 예를 들어, 문헌 [PCR Protocols (Methods in Molecular Biology), 2^nd ed., Bartlett and Stirling, eds., Humana Press (2003)]; 및 [Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)]에 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

본 발명은 하기 실시예를 참조로 구체적으로 기재되지만, 이는 그에 제한되는 것으로 해석되지 않아야 한다.

실시예 A

달리 지시되지 않는 한, 하기 물질 및 기술을 사용하여 하기 기재된 바와 같은 실시예 1-5 중 하나 이상에 기재된 데이터를 생성하였다.

타에니아 피시포르미스 및 디필리디움 카니눔의 충류 추출물의 제조. 타에니아 피시포르미스 및 디필리디움 카니눔 충류 추출물을 미국 텍사스주 허스트 소재 안티바디 시스템즈, 인크.(Antibody systems, Inc.)로부터 구입하였다. 충류 추출물을 4℃에서 30분 동안 10,000 g에서 원심분리하였다. 상청액을 수집하고, PBS, pH 7.0 (막 분자량 컷오프 12-14 kD, 파트 132678, 스펙트럼(Spectrum), 레플리젠(Repligen), 미국 매사추세츠주 월텀) 내로 투석하고, 단백질 농도를 브래드포드(Bradford) 검정으로 결정하였다.

타에니아 타에니아에포르미스의 충류 추출물의 제조. 타에니아 타에니아에포르미스를 세인트 키츠 소재 로스 유니버시티 스쿨 오브 버테리너리 메디슨(Ross University School of Veterinary Medicine)으로부터 얻었다. 전체 충류를 차가운 PBS, pH 7.0으로 수 회 세척하여 실온에서 숙주로부터 임의의 분변 물질 및 점액을 제거하고, 명백한 조직 덩어리를 맨눈으로 볼 수 없을 때까지 4℃에서 조직 그라인더로 균질화하였다. 균질화된 물질을 50 ml 팔콘(Falcon) 튜브에 옮기고, 그라인더를 차가운 PBS, pH 7.0으로 2-3회 세정하였다. 그라인더의 세정과 함께 균질화된 촌충을 4℃에서 30분 동안 10,000 g에서 원심분리하고, 상청액을 수집한 후, PBS, pH 7.0 (막 분자량 컷오프 12-14 kD, 파트 132678, 스펙트럼, 레플리젠, 미국 매사추세츠주 월텀) 내로 투석하였다. 단백질 농도를 브래드포드 검정으로 결정하였다.

디필리디움 카니눔 TCA 가용성 분획의 제조. 이 항원을 충류를 수성 완충제 용액 (포스페이트 완충제, pH, 7.2)에서 파괴하고, 원심분리하여 불용성 및 미립자 성분을 제거하고, 30% 트리클로로아세트산 (TCA)을 15%의 최종 농도로 적가하고, 모든 TCA가 첨가된 후 18-27℃에서 추가의 15분 동안 교반하고, 18-27℃에서 건드리지 않고 추가의 45분 동안 벤치 상에 방치하고, 원심분리하여 불용성 성분을 제거하고, 스펙트라포르(Spectrapor) I 투석 튜브, MWCO: 6-8 K로 수성 완충제 용액 (0.01 M 포스페이트 완충제, pH 7.2)에 대해 투석하고, 동결건조기로 동결건조시킴으로써 제조하였다.

웜 워시의 제조. 동결된 원 충류 시편을 pH7.2의 PBS 완충제에서 4회 세정하였다. 최초 3회의 세정 단계로부터의 완충제 용액을 버렸다. 네번째 세정 단계로부터의 완충제 용액을 10,000g에서 20분 동안 원심분리하고, 상청액을 수집하였다. 상청액을 아이콘(iCON) 농축기 (MWCO: 20mL/9K; 써모 사이언티픽)를 사용하여 농축시켰다. 생성된 농축물을 "웜 워시" (WW)로 용어화하였다.

E/S 물질의 제조. 배설된/분비된 (E/S) 물질을 2주 동안 5% CO2를 갖는 37℃ 인큐베이터에서 조직 배양 배지 (D-글루코스, 겐타미신 및 펀지존을 갖는 EMEM, pH 7.2-7.3)를 갖는 T-150 플라스크에서 촌충을 살아 있게 유지함으로써 수집하였다. 간략하게, 살아 있는 촌충을 가온된 배지로 수 회 세척하여 임의의 분변 잔류물을 제거하고, 100 ml 가온된 배지 (EMEM)를 갖는 T-150 조직 배양 플라스크에 정치하였다. 촌충의 생존력을 매일 확인하고, 배지를 1일 3회 교환하였다. 사용된 배지를 풀링하고, 아이콘 농축기 (MWCO: 9 K; 써모 사이언티픽)로 농축시키고, 생성된 농축된 E/S 물질을 항체 생산에 사용하였다.

폴리클로날 항체 (pAb) 제조. 폴리클로날 항체를 SDIX, LLC (미국 메인주 윈드햄)에서 특이적 병원체 무함유(Specific Pathogen Free) (SPF) 토끼로 발생시켰다. 면역원은 전체 충류 추출물 (미국 텍사스주 허스트 소재 안티바디 시스템즈 인크.로부터의 디필리디움 카니눔 및 타에니아 피시포르미스; 아이덱스 래보러토리즈, 인크.로부터의 티. 타에니아에포르미스) 또는 E/S 물질 (아이덱스 래보러토리즈, 미국 메인주 웨스트브룩)이었다. 간략하게, 토끼를 50일의 기간에 걸쳐 4회 상이한 아주번트 중 동일한 면역원으로 피하로 챌린지하였다. 혈청을 면역화 절차의 종료 시에 수집하였다.

모노클로날 항체 (mAb) 제조. 뮤린 모노클로날 항체를 달리 언급되지 않는 한, 표준 절차에 따라 생산하였다. 간략하게, 3-5 Balb/c 마우스를 면역원으로 면역화하고, 비장 세포를 면역화 스케줄의 완결 후에 수확하였다. 비장 세포를 골수종 세포와 융합시켰다. 수 회 라운드의 스크리닝, 및 HAT 배지로의 선택, 이소타이핑 및 서브클로닝을 통해, 분비된 요망되는 mAb를 분비하는 특이적 하이브리도마 세포주를 수득하였다.

항체 정제 및 단리. 토끼 폴리클로날 항체 및 뮤린 모노클로날 항체 둘 다를 AKTA 정제 시스템을 사용하여 단백질 G 세파로스 4 패스트 플로우 (써모 피셔 사이언티픽) 친화도 크로마토그래피로 정제하였다. 간략하게, 토끼 혈청 또는 TCF (최종 배양액)를 세청 완충제로 희석하고, 단백질 G 칼럼 상으로 로딩하였다. 칼럼을 세척 완충제로 철저하게 세척한 후, 항체를 칼럼으로부터 용리하였다. 용리된 항체를 1 M 트리스 완충제, pH 8.0으로 중화시키고, 이어서 10 mM PBS, pH 7.2 내로 투석하고, 장래의 사용을 위해 -20℃에서 저장하였다.

분변 추출물 제조. 신선한, 비보존된 개 또는 고양이 분변 샘플 (1 그램)로부터의 샘플을 4 ml의 희석제 용액 ("희석제 용액"은 0.05 M 트리스 염기; 1 mM EDTA; 0.45% 카톤; 16 mg/ml 겐타미신 술페이트; 0.05% 트윈-20; 40% 소 태아 혈청; 10% 토끼 혈청; 및 5% 마우스 혈청이다)에 현탁시켰다. 현탁액을 4000 rpm에서 20분 동안 원심분리하여 제1 상청액을 생산하였다. 제1 상청액을 10000 g에서 10분 동안 원심분리하여 제2 상청액을 생산하였으며, 이는 본원에서 "분변 추출물"로 지칭된다.

ELISA 검정. 정제된 폴리클로날 Ab 또는 모노클로날 Ab (100 μl/웰 및 3 μg/ml)를 4℃에서 밤새 이뮬론 1B 96-웰 플레이트 상의 물리적 흡착에 의해 고정화시켰다. 이어서, 플레이트를 4℃에서 밤새 0.1M 트리스 pH 7.0 중 1% BSA로 차단시키고, 이어서 실온에서 건조시켰다. 대략 100 μl의 분변 추출물을 각각의 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 웰을 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 방법에 따라 PBS-트윈-20 용액으로 5회 세척하였다. 별개의 반응 용기에서, 유리 토끼 pAb (mAb의 경우, 동일한 표적에 대한 상이한 항체가 사용되었음)를 가교제 숙신이미딜 4-[N-말레이미도메틸]시클로헥산-1-카르복실레이트 (SMCC)를 사용함으로써 서양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)로 표지하여 접합체를 생성하고, 3 μg/ml의 이 접합체를 고정화된 pAb 또는 mAb를 갖는 각각의 웰에 첨가하였다. 실온에서 30-분 인큐베이션 기간 후, 비결합된 접합체를 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 방법에 따라 PBS-트윈-20 용액을 사용함으로써 웰로부터 세척하였다. 이어서, 50 μl의 티엠블루(TMBLUE)™ 퍼옥시다제 기재 (아이덱스 래보러토리즈, 미국 메인주 웨스트브룩)를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 10-분 인큐베이션 기간 후 0.1% 나트륨 도데실 술페이트 (SDS)로 각각의 효소 반응을 정지시킨 후, 96-웰 플레이트의 각각의 웰의 광학 밀도 (OD) 값을 ELISA 플레이트 판독기를 사용함으로써 표준 분광광도계측적 기술에 의해 A650에서 측정하여 각각의 웰에 대한 "OD650 값" (또는, 보다 간단히, "OD 값")을 생성하였다. 이 배열에서, 96-웰 플레이트의 임의의 특정한 웰에 대해 수득된 OD 값은 웰에 존재하는 특이적으로 결합된 항원의 양에 정비례하였다. 0.1 이하의 OD 값은 음성 결과로서 간주되었고, OD 값은 실시예에서 달리 언급되지 않는 한, 양성 결과로서 간주되었다.

자칼린-비오틴으로의 탄수화물-검증 ELISA를 사용한 탄수화물/글리코실화 특징규명. 뮤린 IgM mAb ADX226 코팅된 이뮬론 1B 플레이트를 탄수화물-검증 ELISA에 사용하였다. 대략 100 μl의 분변 추출물을 각각의 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 웰을 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 방법에 따라 PBS-트윈-20 용액으로 5회 세척하였다. 자칼린-비오틴 (0.25 ug/ml)을 각각의 웰에 첨가하고, 이어서 실온에서 1-시간 인큐베이션하였다. 비결합된 자칼린-비오틴 (벡터 래보러토리즈, 미국 캘리포니아주 벌링게임 인골드 로드 30)을 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 방법에 따라 PBS-트윈-20 용액을 사용함으로써 웰로부터 세척하였다. 스트렙타비딘-HRP 접합체 (벡터 래보러토리즈, 미국 캘리포니아주 벌링게임 인골드 로드 30)를 각각의 웰에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 비결합된 스트렙타비딘-HRP 접합체를 PBS-트윈 20 용액을 사용함으로써 다시 세척 제거하였다. 이어서, 50 μl의 티엠블루™ 퍼옥시다제 기재 (아이덱스 래보러토리즈 인크., 미국 메인주 웨스트브룩)를 각각의 웰에 첨가하고, 30분 후, 스트렙타비딘-HRP 접합체와 함께, 플레이트를 실온에서 1분 동안 인큐베이션하였다. 1-분 인큐베이션 기간 후 0.1% 나트륨 도데실 술페이트 (SDS)로 각각의 효소 반응을 정지시킨 후, 96-웰 플레이트의 각각의 웰의 광학 밀도 (OD) 값을 분변 검정 ELISA 섹션에서 상기 예시된 바와 같이 A650에서 측정하였다.

실시예 1A

타에니아 피시포르미스에 대한 뮤린 모노클로날 항체의 발생 및 스크리닝. 뮤린 mAb (모노클로날 항체)를 티. 피시포르미스의 충류 추출물 (WE) (이하, 티. 피시포르미스 추출물 또는 티. 피시포르미스의 추출물)로의 마우스의 면역화에 의해 발생시키고, 하이브리도마를 발생시켰다. 후보 하이브리도마를 ELISA 포획 검정에서 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅된 면역원 (즉, 티. 피시포르미스의 추출물)에 결합하는 분비된 mAb의 능력에 대해 스크리닝하였다. 이 스크린으로부터, 이 스크린에서 양성인 (즉, 티. 피시포르미스 추출물에 결합할 수 있는) 백 (100)개의 하이브리도마 (즉, 100개의 mAb)를 추가의 분석을 위해 선택하였다. 100개의 후보 mAb를 포획 검정 스크린에 의해, 분변항원 ELISA 검정에서 기능하는 그들의 능력에 대해 추가로 스크리닝하였다. 마이크로타이터 플레이트를 티. 피시포르미스 추출물로의 토끼의 표준 면역화에 의해 발생된 토끼 폴리클로날 항체로 코팅하였다. 개 분변 샘플로부터 제조된 FEX (분변 추출물)를 첨가하였다. 분변 샘플은 티. 피시포르미스 감염된 것으로 공지되고, 아이덱스 레퍼런스 래보러토리즈(IDEXX Reference Laboratories)로부터 받은 개로부터의 것이었다. 100개의 후보 mAb 상청액 중 하나를 각각의 웰에 첨가하고, 이어서 표지에 접합된 염소 a-마우스 IgG를 첨가하였다. 5가지 mAb (02D09, 03H02, 07C02, ADX131 및 ADX13)가 이 검정에서 특히 잘 수행되었으며, 추가의 분석을 위해 선택하였다.

5가지 mAb를 샌드위치 검정에서 서로와 쌍형성한 경우에 기능하는 그들의 능력에 대해 추가로 스크리닝하였다. 이 목적을 위해, 5가지 mAb의 각각을 마이크로타이터 플레이트의 웰 상으로 코팅하고, FEX (타에니아 피시포르미스 양성 샘플: n=10; 티. 피시포르미스 음성 샘플: n=10)와 함께, 이어서 표지에 접합된 5가지 mAb 접합체 중 하나, 또는 타에니아 피시포르미스 WE 마우스 pAb와 함께 인큐베이션하였다. 5가지 mAb는 다른 mAb 중 적어도 하나와 조합으로 잘 수행되었으며, 따라서 추가의 연구를 위해 선택하였다. 잘 수행된 5가지 mAb로부터, 2가지 (ADX131 및 ADX132)를, 이들이 분변항원 ELISA에서 서로와 쌍형성한 경우에 낮은 배경 및 높은 신호를 발생시켰기 때문에, 추가의 시험을 위해 선택하였다.

ADX131 및 ADX132는 또 다른 ELISA 검정에서 02D09, 03H02, 07C02, ADX131 및 ADX132의 HRP 접합체와 각각 쌍형성하였다. 티. 피시포르미스 WE 토끼 pAb와의 추가적인 쌍형성은 양성 대조군으로서 사용되었다. ADX131 및 ADX132를 마이크로타이터 플레이트의 웰 상으로 개별적으로 코팅하고; 티. 피시포르미스 감염된 개, 티. 피시포르미스 비감염된 개로부터의 FEX, 또는 티. 피시포르미스 충류 추출물과 함께; 이어서 접합체 및 HRP 기재와 함께 인큐베이션하였다. 5가지 항체 쌍형성의 각각에서, ADX131은 감염된 개로부터의 FEX로 및 충류 추출물로 강한 신호를 발생시켰다. 5가지 항체 쌍형성 중 4가지에서, ADX131은 03H02와의 쌍형성이 0.1 OD의 선택된 역치 약간 초과인 신호를 발생시킨 것을 제외하고는 비감염된 개로부터의 FEX로 음성 결과 (즉, 역치 미만의 신호)를 발생시켰다 (도 1). 모든 5가지 항체 쌍형성에서, ADX132는 감염된 개로부터의 FEX로 및 충류 추출물로 강한 신호를 발생시켰다. 모든 5가지 항체 쌍형성에서, ADX132는 비감염된 개로부터의 FEX로 낮은 배경 신호를 발생시켰다 (도 2).

실시예 1B

타에니아 피시포르미스 분변항원 ELISA 특이성 및 감수성 평가. 검정의 특이성을 평가하기 위해, 티. 피시포르미스 분변항원 ELISA 검정 (플레이트 상에 코팅된 ADX131 및 ADX132-HRP 접합체를 사용함)을 구충 안실로스토마 카니눔 (n=44), 회충 톡소카라 카니스 (n=9), 편충 트리쿠리스 불피스 (n=36), 디. 카니눔 (n=44), 또는 타에니아 피시포르미스 (n=5)로 감염된 개로부터의 FEX에 대해 시험하였다. 결과 (도 3 참조)는 모든 5가지 티. 피시포르미스 샘플이 검정에서 양성이었고, 다른 것들 모두는 음성이었음을 나타내었다. 티. 피시포르미스 분변항원 ELISA는 구충 안실로스토마 카니눔, 회충 톡소카라 카니스, 편충 트리쿠리스 불피스, 또는 디. 카니눔과 교차-반응하지 않았다. 따라서, 티. 피시포르미스 분변항원 ELISA 검정은 이 실험에서 100% 감수성이고, 특이적이었다. 검정의 특이성을 평가하기 위해, 샌드위치 분변항원 ELISA를 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅된 ADX131, 및 환자 샘플의 첨가 후 적용된 ADX132-HRP 접합체로 수립하였다. 검정을 디. 카니눔 WE, 티. 피시포르미스 WE, 티. 크라시셉스 WE, 티. 타에니아에포르미스 WE, 티. 타에니아에포르미스 E/S, 뿐만 아니라 디. 카니눔 양성 개, 디. 카니눔 음성 개, 디. 카니눔 양성 고양이, 디. 카니눔 음성 고양이, 티. 피시포르미스 양성 개, 티. 피시포르미스 음성 개, 3마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이의 풀, 및 3마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이의 풀로부터의 FEX에 대해 실행하였다. 전에 언급된 WE를 1 μg/ml 단백질의 농도에서 사용하였다. 검정을 여러 WE 샘플에 대해 2 μg/ml 단백질 및/또는 10 μg/ml 단백질에서 추가적으로 실행하였다. 이들 보다 높은 농도에서 실행된 WE 샘플은 디. 카니눔 WE, 티. 피시포르미스 WE, 티. 타에니아에포르미스 WE, 티. 크라시셉스 WE, 구충 안실로스토마 카니눔 WE, 회충 톡소카라 카니스 WE, 및 편충 트리쿠리스 불피스 WE였다. 이들 샘플 중에서, 검정은 단지 티. 피시포르미스 WE 및 티. 피시포르미스 양성 개에 대해 양성이었다 (도 4). 따라서, 이 실험에서 ADX131/ADX132-HRP ELISA는 고도로 특이적이었다.

티. 피시포르미스 분변항원 ELISA 검정 (플레이트 상에 코팅된 ADX131 및 ADX132-HRP 접합체를 사용함)의 특이성을 평가하기 위해, 검정을 822개의 개 샘플로부터의 FEX에 대해 실행하였다. 이들 샘플 중, 1개의 샘플은 현미경검사에 의해 티. 피시포르미스 양성으로서 확인되었고 (즉, 편절이 현미경검사에 의해 관찰되었음), 821개는 현미경검사에 의해 티. 피시포르미스 음성으로서 확인되었다. 결과는 821개의 현미경검사-음성 샘플 중, 818개가 티. 피시포르미스 분변항원 ELISA 검정에서 음성이었고, 3개가 양성이었음을 나타내었다. 현미경검사-양성 샘플은 티. 피시포르미스 분변항원 ELISA 검정에서 양성이었다. 따라서, 이 실험에서 티. 피시포르미스 분변항원 ELISA 검정은 99.7% 특이적이었다.

실시예 1C

항원 특징규명: 항- 티. 피시포르미스 mAb ADX131에 의해 결합된 항원의 글리코실화. mAb ADX131에 의해 결합된 분변항원이 글리코실화되어 있는지 여부를 결정하기 위해, 21가지 상이한 렉틴의 능력을 상업용 키트 (미국 캘리포니아주 벌링게임 소재 벡터 래보러토리즈로부터의 비오티닐화된 렉틴 키트 I, II 및 III)를 사용하여 분변항원에 결합하는 그들의 능력에 대해 시험하였다. 검정을 제조업자의 지침서에 따라 수행하였다. 간략하게, 티. 피시포르미스 양성 개로부터의 FEX를 ADX131로 코팅된 플레이트에 첨가하였다. 세척 후, 렉틴::비오틴 접합체, 이어서 스트렙타비딘-HRP 및 색상 기재를 첨가하였다. 이 시험에서, 하기 렉틴은 높은 신호 및 낮은 배경을 발생시켰으며, 이는 이들이 티. 피시포르미스 분변항원에 결합하였음을 지시한다: WGA, 숙시닐화된 WGA, PSA, GSLII 및 LCA.

항원 특징규명: 항- 티. 피시포르미스 mAb ADX132에 의해 결합된 항원의 글리코실화. mAb ADX132에 의해 결합된 분변항원이 글리코실화되어 있는지 여부를 확인하기 위해, 21가지 상이한 렉틴에 의해 결합된 FEX 물질에 결합하는 ADX132의 능력을 상업용 키트 (미국 캘리포니아주 벌링게임 소재 벡터 래보러토리즈로부터의 비오티닐화된 렉틴 키트 I, II 및 III)를 사용하여 시험하였다. 검정을 제조업자의 지침서에 따라 수행하였다. 간략하게, 웰 마이크로타이터 플레이트를 렉틴 중 하나로 코팅하고, 티. 피시포르미스 양성 개로부터의 FEX, 이어서 ADX132-HRP 접합체 및 색상 기재를 첨가하였다. 이 시험에서, 하기 렉틴은 분변항원에 결합하였다: WGA, UEA 및 GSLII.

렉틴 결합 데이터는 ADX131/ADX132 검정에 의해 결합된 티. 피시포르미스 분변항원이 글리코실화되어 있음을 지시한다. 렉틴 결합 데이터는 ADX131/132 분변항원이 하기 모이어티를 함유함을 추가로 지시한다: 비-환원된 GlcNac; 환원된 GlcNac; 푸코스; GSL II; 및 만노스.

실시예 2A

티. 타에니아에포르미스에 대한 토끼 폴리클로날 항체의 제조. 티. 타에니아에포르미스의 충류 추출물 (WE), E/S 물질 및 웜 워시 (WW)를 상기 기재된 바와 같이 제조하였다. 토끼를 상기 기재된 바와 같이 티. 타에니아에포르미스 WE, 티. 타에니아에포르미스 E/S, 또는 티. 타에니아에포르미스 WW로 면역화하여 폴리클로날 항체 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb, 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb 및 티. 타에니아에포르미스 WW 토끼 pAb를 발생시켰다.

A. 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정, 및 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정의 초기 평가.

티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb, 및 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb로의 분변항원 ELISA 검정의 성능의 초기 평가를 위해, 7마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 및 6마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 고양이 분변 추출물을 시험하였다.

티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정: 이 ELISA 검정에서, 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb를 플레이트 상으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-HRP 접합체와 접촉시키고, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다. 이 검정에서, 모든 7개의 티. 타에니아에포르미스 양성 샘플은 양성인 반면, 모든 6개의 티. 타에니아에포르미스 음성 샘플은 음성으로 시험되었다. 따라서, 이 실험에서 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정에 대한 감수성 및 특이성은 100%였다.

티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정: 이 ELISA 검정에서, 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb를 플레이트 상으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb-접합체와 접촉시키고, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다. 이 검정에서, 모든 7개의 티. 타에니아에포르미스 양성 샘플은 양성인 반면, 모든 6개의 티. 타에니아에포르미스 음성 샘플은 음성으로 시험되었다. 따라서, 이 실험에서 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정에 대한 감수성 및 특이성은 100%였다.

B. 개 및 고양이 분변 샘플에 대한 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정의 성능

티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb로의 분변항원 ELISA 검정 (섹션 A 하에 기재된 바와 같음)의 성능을 개 및 고양이 분변 추출물에 대해 추가로 평가하였다. 개 샘플 세트는 31마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 개 및 74마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 개로부터의 분변 추출물을 포함하였다. 고양이 샘플 세트는 13마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이 및 39마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 분변 추출물을 포함하였다.

개에 대해, 31개의 양성 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 8개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 74개의 음성 개 샘플에서, 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 6개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 이 실험에서 감수성은 25.8%이고, 특이성은 91.9%였다.

고양이에 대해, 13개의 양성 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 12개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 39개의 음성 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 4개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 이 실험에서 감수성은 92.3%이고, 특이성은 89.7%였다.

C. 개 및 고양이 분변 추출물에 대한 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정의 성능.

티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb로의 분변항원 ELISA 검정 (섹션 A 하에 기재된 바와 같음)의 성능을 개 및 고양이 분변 추출물에 대해 추가로 평가하였다. 개 샘플 세트는 31마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 개 및 74마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 개로부터의 분변 추출물을 포함하였다. 고양이 샘플 세트는 13마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이 및 39마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 분변 추출물을 포함하였다.

개에 대해, 31개의 양성 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 4개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 74개의 음성 개 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 1개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 이 실험에서 감수성은 12.9%이고, 특이성은 98.6%였다.

고양이에 대해, 13개의 양성 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 12개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 39개의 음성 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 E/S 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 3개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 이 실험에서 감수성은 92.3%이고, 특이성은 92.3%였다.

D. 개 및 고양이 분변 샘플에 대한 티. 타에니아에포르미스 WW 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정의 성능

티. 타에니아에포르미스 WW 토끼 pAb로의 분변항원 ELISA 검정의 성능을 개 및 고양이 분변 추출물에 대해 평가하였다. 개 샘플 세트는 31마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 개 및 74마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 개로부터의 분변 추출물을 포함하였다. 고양이 샘플 세트는 13마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이 및 39마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 분변 추출물을 포함하였다.

개에 대해, 31개의 양성 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 WW 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 16개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 74개의 음성 개 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 3개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 이 실험에서 감수성은 51.6%이고, 특이성은 98.6%였다.

고양이에 대해, 13개의 양성 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 WW 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 12개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 39개의 음성 샘플 중에서, 티. 타에니아에포르미스 WW 토끼 pAb-토끼 pAb ELISA 검정은 3개의 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 이 실험에서 감수성은 92.3%이고, 특이성은 95.9%였다.

실시예 2B

티. 타에니아에포르미스 WE 및 티. 타에니아에포르미스 E/S에 대한 마우스 폴리클로날 및 모노클로날 항체의 제조. 티. 타에니아에포르미스의 충류 추출물 (WE) 및 티. 타에니아에포르미스의 E/S 물질을 상기 기재된 바와 같이 제조하였다. 마우스를 상기 기재된 바와 같이 티. 타에니아에포르미스 WE 또는 티. 타에니아에포르미스 E/S로 면역화하여 마우스 폴리클로날 항체 티. 타에니아에포르미스 WE 마우스 pAb 및 티. 타에니아에포르미스 E/S 마우스 pAb를 발생시켰다. 이들 폴리클로날 항체는 면역원을 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅한 경우에 그들의 각각의 면역원에 특이적으로 결합하였다.

A. 티. 타에니아에포르미스 WE 마우스 mAb의 제조

하이브리도마를 상기 기재된 바와 같이 티. 타에니아에포르미스 WE로 면역화된 마우스로부터 유도하였다. 생성된 마우스 모노클로날 항체 (마우스 mAb) 분비 하이브리도마로부터, 2가지 티. 타에니아에포르미스 WE 마우스 mAb를, 이들이 ELISA 검정에서 높은 신호 및 낮은 배경을 발생시켰기 때문에 선택하였다: ADX184 (IgG) 및 ADX185 (IgM).

B. 티. 타에니아에포르미스 WE 마우스 mAb로의 분변항원 ELISA의 성능

감수성을 평가하기 위해, 샌드위치 분변항원 ELISA 검정을, 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅되고, 이어서 환자 샘플이 첨가된 후, 이어서 티. 타에니아에조르미스 WE 토끼 pAb-HRP 접합체가 첨가된 ADX185로 수립하였다. 검정을 7마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이, 및 3마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 FEX에 대해 실행하였다. 도 5에 나타내어진 바와 같이, 검정은 7개의 양성 샘플 중에서 7개, 및 3개의 음성 샘플 중에서 0개에서 분변항원을 검출하였다. 따라서, 이 실험에서 ADX185 / 티. 타에니아에포르미스 WE 토끼 pAb-HRP ELISA의 감수성은 100%였다.

특이성을 평가하기 위해, 샌드위치 분변항원 ELISA를, 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅된 ADX184, 및 환자 샘플의 첨가 후 적용된 ADX193-HRP 접합체로 수립하였다.

ADX193은 하기 기재된 티. 타에니아에포르미스 E/S 마우스 mAb이다. 검정을 디. 카니눔 WE, 티. 피시포르미스 WE, 티. 크라시셉스 WE, 티. 타에니아에포르미스 WE, 티. 타에니아에포르미스 E/S, 뿐만 아니라 디. 카니눔 양성 개, 디. 카니눔 음성 개, 디. 카니눔 양성 고양이, 디. 카니눔 음성 고양이, 티. 피시포르미스 양성 개, 타에니아 피시포르미스 음성 개, 3마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이의 풀, 및 3마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이의 풀로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 전에 언급된 WE를 1 μg/ml 단백질의 농도에서 사용하였다. 검정을 여러 WE 샘플에 대해 10 μg/ml 단백질 및 2 μg/ml 단백질에서 추가적으로 실행하였다. 이들 보다 높은 농도에서 실행된 WE 샘플은 디. 카니눔 WE, 티. 피시포르미스 WE, 티. 타에니아에포르미스 WE, 티. 크라시셉스 WE, 구충 안실로스토마 카니눔 WE, 회충 톡소카라 카니스 WE, 및 편충 트리쿠리스 불피스 WE였다. 이들 샘플 중에서 및 도 6에 나타내어진 바와 같이, 검정은 단지 티. 타에니아에포르미스 WE (10 μg/ml에서) 및 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이의 풀에 대해 양성이었다. 따라서, 이 실험에서 ADX184/ADX193-HRP ELISA는 고도로 특이적이었다.

C. 티. 타에니아에포르미스 E/S 마우스 mAb의 제조 및 스크리닝

하이브리도마를 상기 기재된 바와 같이 티. 타에니아에포르미스 E/S로 면역화된 마우스로부터 유도하였다. 생성된 마우스 모노클로날 항체 (마우스 mAb) 분비 하이브리도마로부터, 5가지 티. 타에니아에포르미스 E/S 마우스 mAb를 선택하였다: ADX190, ADX191, ADX192, ADX193, ADX194. 이들 5가지 마우스 mAb를 각각이 항-E/S 마우스 pAb -HRP 접합체와 쌍형성한 경우에 ELISA 검정에서 그들의 성능에 대해 추가로 평가하였다. 5가지 검정 중을 티. 타에니아에포르미스 E/S, 7마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이로부터의 분변 추출물, 및 3마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 5가지 검정의 각각은 모든 7개의 양성 고양이 샘플을 검출하였다. 각각은 또한 3마리의 음성 고양이로부터의 샘플에 대해 음성이었지만, ADX193 및 ADX194는 3개의 음성 고양이 샘플 중 하나에 대해 보다 높은 배경을 가졌다.

실시예 2C

ADX193-HRP와 함께 ADX184를 사용한 ELISA의 성능

ELISA를 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅된 ADX184 및 HRP와 접합된 ADX193로 수립하였다. 둘 다의 마우스 mAb를 5ug/ml의 농도에서 사용하였다.

ADX184 / ADX193-HRP ELISA를 6마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이로부터의 분변 추출물, 4마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 분변 추출물, 및 1개의 티. 타에니아에포르미스 E/S 단백질 샘플에 대해 실행하였다. 도 7에 나타내어진 바와 같이, 검정은 모든 6개의 양성 분변 추출물 및 E/S 샘플에서 분변항원을 검출하였지만, 4개의 음성 분변 추출물 중 임의의 것에서는 분변항원을 검출하지 않았다.

ADX184 / ADX193-HRP ELISA를 68마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이로부터의, 및 디. 카니눔 양성인 108마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 검정은 68개의 티. 타에니아에포르미스 양성 샘플 중 55개에서 양성 신호를 발생시켰고 (80.9% 감수성), 108개의 티. 타에니아에포르미스 음성 샘플 중 1개에서 양성 신호를 발생시켰다 (99.1% 특이성; 디. 카니눔과의 0.9% 교차-반응성).

실시예 2D

ADX194-HRP와 함께 ADX191을 사용한 ELISA의 성능

분변항원 ELISA를 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅된 ADX191 및 HRP와 접합된 ADX194로 수립하였다. 둘 다의 마우스 mAb를 3ug/ml의 농도에서 사용하였다. 이 ELISA를 6마리의 티. 타에니아에포르미스 양성 고양이로부터의 분변 추출물, 4마리의 티. 타에니아에포르미스 음성 고양이로부터의 분변 추출물, 및 1개의 티. 타에니아에포르미스 E/S 단백질 샘플에 대해 실행하였다. 도 8에 나타내어진 바와 같이, 검정은 모든 6개의 양성 분변 추출물 및 E/S 샘플을 검출하였지만, 4개의 음성 분변 추출물 중 임의의 것에서는 분변항원을 검출하지 않았다.

실시예 3A

A. 디필리디움 카니눔 TCA 가용성 분획에 대한 토끼 pAb (디. 카니눔 TCA 토끼 pAb)의 제조

디. 카니눔 충류의 TCA 분획을 상기 기재된 바와 같이 제조하고, 2마리의 토끼를 면역화하는데 사용하였다. 이들 토끼 중 하나로부터의 항혈청을 추가의 분석을 위해 선택하였다.

B. 개 및 고양이 샘플로의 디. 카니눔 TCA 토끼 pAb ELISA 검정의 평가.

이 분변항원 ELISA 검정에서, 디. 카니눔 TCA 토끼 pAb를 상기 기재된 바와 같이 플레이트 상으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 디. 카니눔 TCA 토끼 pAb-HRP 접합체와 접촉시키고, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다.

개: 디. 카니눔 TCA 토끼 pAb ELISA 검정을 58마리의 디. 카니눔 양성 개로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였고; ELISA는 58개의 샘플 중 57개에서 양성 신호를 산출하였다. 검정을 또한 27마리의 디. 카니눔 음성 개로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였고; ELISA는 27개의 샘플 중 8개에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 98.3% 감수성 및 70.4% 특이적이었다.

고양이: 디. 카니눔 TCA 토끼 pAb ELISA 검정을 31마리의 디. 카니눔 양성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였고; ELISA는 31개의 샘플 중 28개에서 양성 신호를 산출하였다. 검정을 또한 13마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였고; ELISA는 13개의 샘플 중 5개에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 90.3% 감수성 및 61.5% 특이적이었다.

실시예 3B

A. 디. 카니눔 WE 분획에 대한 토끼 pAb (디. 카니눔 WE 토끼 pAb)의 제조.

WE를 상기 기재된 바와 같이 디. 카니눔 충류 (안티바디 시스템즈)로부터 제조하고, 2마리의 토끼를 면역화하는데 사용하였다. 이들 토끼 중 하나로부터의 항혈청을 추가의 분석을 위해 선택하였다.

B. 디. 카니눔 WE 토끼 pAb ELISA 검정의 평가

이 ELISA 검정에서, 디. 카니눔 WE 토끼 pAb를 상기 기재된 바와 같이 플레이트 상으로 코팅하고, 5 ug/ml의 FEX와 접촉시키고, 이어서 3 ug/ml의 디. 카니눔 WE 토끼 pAb-HRP 접합체와 접촉시키고, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다. 이 디. 카니눔 WE 토끼 pAb ELISA 검정을 여러 연충 종으로부터의 충류 추출물에 대해 실행하였다: 디. 카니눔 WE, 타에니아 피시포르미스 WE, 티. 크라시셉스 WE, 구충 안실로스토마 카니눔 WE, 회충 톡소카라 카니스 WE, 편충 트리쿠리스 불피스 WE. 도 9에 나타내어진 바와 같이, 단지 디. 카니눔 WE만이 이 ELISA에서 양성 신호를 산출하였으며, 이는 이 실험에서 검정의 특이성을 입증한다.

디. 카니눔 WE 토끼 pAb ELISA 검정의 성능을 하기와 같이 추가적인 실험에서 평가하였다. 검정을 44마리의 디. 카니눔 양성 개 및 48마리의 디. 카니눔 음성 개로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 검정은 44개의 양성 샘플 중 16개 및 0개의 음성 샘플에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 36.4% 감수성 및 100% 특이적이었다.

실시예 3C

A. 디. 카니눔 E/S에 대한 토끼 pAb (디. 카니눔 E/S 토끼 pAb)의 제조

E/S를 상기 기재된 바와 같이 개로부터의 디. 카니눔 충류로부터 제조하고, 2마리의 토끼를 면역화하는데 사용하였다. 이들 토끼 중 하나로부터의 항혈청을 추가의 분석을 위해 선택하였다.

B. 디. 카니눔 E/S 토끼 pAb ELISA 검정의 평가

이 분변항원 ELISA 검정에서, 디. 카니눔 E/S 토끼 pAb를 상기 기재된 바와 같이 플레이트 상으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 디. 카니눔 WE 토끼 pAb-HRP 접합체와 접촉시키고, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다.

검정을 7마리의 디. 카니눔 양성 개로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 검정은 7개의 양성 샘플 중 4개에서 양성 신호를 발생시켰다. 검정은 4마리의 디. 카니눔 음성 개 중 1마리에서 양성 신호를 발생시켰다. 따라서, 검정은 이 실험에서 57.1% 감수성 및 75% 특이적이었다.

실시예 3D

A. 디. 카니눔 WE에 대한 토끼 mAb (디. 카니눔 WE 토끼 mAb)의 제조

WE를 상기 기재된 바와 같이 개로부터의 전체 디. 카니눔 충류로부터 제조하였다. 토끼를 표준 면역화 절차 (SDIX, 미국 메인주 윈드햄)에 따라 디필리디움 카니눔 WE로 면역화하였다. 초기 면역화 후 적어도 3주에 부스트 후, 토끼로부터의 혈액 샘플을 모노클로날 항체 개발에 사용하였다 (이뮤노프리사이즈 안티바디즈, 엘티디.(ImmunoPrecise Antibodies, Ltd.), (IPA), 캐나다 브리티쉬 콜롬비아 빅토리아). 토끼로부터의 B 세포를 수집하고, B 세포 배양 상청액을 디. 카니눔 WE 코팅된 96-웰 플레이트 상에서 평가하고, 2차 항-토끼 IgG 항체로 프로빙하였다. 양성 웰로부터의 대략 50 μl의 B 세포 상청액을 다양한 분변 추출물로의 제2 스크린 (아이덱스)에서 특이적 결합에 대해 시험하였다. 이 제2 스크린으로부터의 가장 양호한 32개의 후보의 B 세포를 클로닝을 위한 용해 완충제에서 보존하였다. RNA를 이들 32개의 후보로부터 단리하고, 토끼 항체 중 및 경 (카파) 쇄 가변 영역을 별개의 포유동물 발현 벡터 (IPA) 내로 클로닝하였다. 항체 중쇄 및 경쇄 벡터로 형질감염된 포유동물 세포로부터 수집된 조직 배양 상청액을 다양한 분변 추출물로 다시 평가하였다. 재조합 토끼 mAb DNA 구축물의 상위 5개의 클론을 시퀀싱하였다 (IPA). 이들 5개의 토끼 mAb 클론 중 2개를 추가의 분석을 위해 선택하였다: RDX13 및 RDX12.

B. 개 및 고양이 샘플에 대한 디. 카니눔 WE 토끼 mAb로의 ELISA 검정의 평가.

이 계열의 분변항원 ELISA 검정에서, 마우스 mAb ADX226을 상기 기재된 바와 같이 플레이트 상으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 RDX13-HRP 및/또는 RDX12-HRP 접합체와 접촉시키고, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다.

제1 실험에서, RDX13-HRP 및 RDX12-HRP 접합체를 혼합하고, 검정을 38마리의 디. 카니눔 양성 개, 28마리의 디. 카니눔 음성 개, 20마리의 디. 카니눔 양성 고양이 및 7마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 검정은 38마리의 양성 개 중 28마리, 28마리의 음성 개 중 2마리, 20마리의 양성 고양이 중 18마리, 및 7마리의 음성 고양이 중 0마리에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 개 샘플에 대해 73.7% 감수성 및 92.9% 특이성, 및 고양이 샘플에 대해 90.0% 감수성 및 100% 특이성을 발생시켰다.

제2, 제3 및 제4 실험에서, RDX13-HRP 및 RDX12-HRP 접합체를 둘 다 개별적으로 사용하고, 혼합하고, 검정을 37마리의 디. 카니눔 양성 개, 28마리의 디. 카니눔 음성 개, 21마리의 디. 카니눔 양성 고양이 및 7마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다.

제2 실험에서, RDX13-HRP를 단독으로 사용하였으며, 검정은 37마리의 양성 개 중 20마리, 28마리의 음성 개 중 1마리, 21마리의 양성 고양이 중 15마리, 및 7마리의 음성 고양이 중 0마리에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 개 샘플에 대해 54.1% 감수성 및 96.4% 특이성, 및 고양이 샘플에 대해 71.4% 감수성 및 100% 특이성을 발생시켰다.

제3 실험에서, RDX12-HRP를 단독으로 사용하였으며, 검정은 37마리의 양성 개 중 13마리, 28마리의 음성 개 중 1마리, 21마리의 양성 고양이 중 16마리, 및 7마리의 음성 고양이 중 0마리에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 개 샘플에 대해 35.1% 감수성 및 96.4% 특이성, 및 고양이 샘플에 대해 76.2% 감수성 및 100% 특이성을 발생시켰다.

제4 실험에서, RDX13-HRP 및 RDX12-HRP 접합체를 혼합하였으며, 검정은 37마리의 양성 개 중 22마리, 28마리의 음성 개 중 1마리, 21마리의 양성 고양이 중 19 마리, 및 7 음성 고양이 중 0마리에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 개 샘플에 대해 59.5% 감수성 및 96.4% 특이성, 및 고양이 샘플에 대해 90.5% 감수성 및 100% 특이성을 발생시켰다.

실시예 3E

A. 디. 카니눔 WE에 대한 마우스 pAb (디. 카니눔 WE 마우스 pAb)의 제조

WE를 상기 기재된 바와 같이 개로부터의 디. 카니눔 충류로부터 제조하고, 마우스를 면역화하는데 사용하였다. 생성된 항혈청, 디. 카니눔 WE 마우스 pAb를 하기 기재된 ELISA 실험에 사용하였다.

B. 개 및 고양이 샘플에 대한 디. 카니눔 WE 마우스 pAb로의 ELISA 검정의 평가.

이 분변항원 ELISA 검정에서, 디. 카니눔 WE 마우스 pAb를 상기 기재된 바와 같이 플레이트 상으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 디. 카니눔 WE 마우스 pAb-HRP 접합체와 접촉시키고, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다.

검정을 4마리의 디. 카니눔 양성 개 및 3마리의 디. 카니눔 양성 고양이; 지아르디아 및 티. 타에니아에포르미스로 감염된 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이, 티. 타에니아에포르미스로 감염된 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이, 및 톡소카라 및 타에니아 피시포르미스로 감염된 1마리의 개로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 도 10에 나타내어진 바와 같이, 검정은 4마리의 양성 개 중 4마리에서, 1마리의 음성 개 중 0마리에서, 3마리의 양성 고양이 중 3마리에서, 및 2마리의 음성 고양이 중 0마리에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 높은 정도의 특이성 및 감수성을 발생시켰다.

실시예 3F

A. 디. 카니눔 TCA 가용성 분획에 대한 마우스 mAb (디. 카니눔 TCA 마우스 mAb)의 제조

TCA 가용성 분획을 상기 기재된 바와 같이 개로부터의 디. 카니눔 충류로부터 제조하고, 마우스 (MBS)를 면역화하는데 사용하였다. 면역화된 마우스의 비장을 사용하여 마우스 mAb, ADX251을 생성하고, 이를 하기 ELISA 실험에 사용하였다.

B. 개 및 고양이 샘플에 대한 디. 카니눔 TCA 마우스 mAb로의 ELISA 검정의 평가.

제1 분변항원 ELISA 구성에서, 마우스 mAb ADX226을 플레이트 상으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 마우스 mAb ADX251-HRP 접합체, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다.

검정을 3마리의 디. 카니눔 양성 개, 5마리의 디. 카니눔 음성 개; 3마리의 디. 카니눔 양성 고양이, 및 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 도 11에 나타내어진 바와 같이, 검정은 3마리의 양성 개 중 3마리에서, 5마리의 음성 개 중 0마리에서, 3마리의 양성 고양이 중 3마리에서, 및 1마리의 음성 고양이 중 0마리에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 높은 정도의 특이성 및 감수성을 발생시켰다.

제2 분변항원 ELISA 구성에서, 마우스 mAb ADX251을 플레이트 상으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 마우스 mAb ADX227-HRP 접합체, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다. 검정을 3마리의 디. 카니눔 양성 개, 5마리의 디. 카니눔 음성 개; 3마리의 디. 카니눔 양성 고양이, 및 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 도 12에 나타내어진 바와 같이, 검정은 3마리의 양성 개 중 3마리에서, 5마리의 음성 개 중 0마리에서, 3마리의 양성 고양이 중 3마리에서, 및 1마리의 음성 고양이 중 0마리에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 높은 정도의 특이성 및 감수성을 발생시켰다.

제3 분변항원 ELISA 구성에서, 마우스 mAb ADX251을 플레이트 상으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 디. 카니눔 WE 토끼 pAb-HRP 접합체, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다. 검정을 3마리의 디. 카니눔 양성 개, 5마리의 디. 카니눔 음성 개; 3마리의 디. 카니눔 양성 고양이, 및 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다. 도 13에 나타내어진 바와 같이, 검정은 3마리의 양성 개 중 3마리에서, 5마리의 음성 개 중 0마리에서, 3마리의 양성 고양이 중 3마리에서, 및 1마리의 음성 고양이 중 0마리에서 양성 신호를 산출하였다. 따라서, 검정은 이 실험에서 높은 정도의 특이성 및 감수성을 발생시켰다.

실시예 3G

A. 디. 카니눔 WE에 대한 마우스 mAb (디. 카니눔 WE 마우스 mAb)의 제조

WE를 상기 기재된 바와 같이 개로부터의 디. 카니눔 충류로부터 제조하고, 마우스를 면역화하는데 사용하였다. 이들 마우스로부터, 4가지 모노클로날 항체 (ADX224, ADX225, ADX226 및 ADX227)를 상기 기재된 바와 같이 생성하고, 추가의 분석을 위해 선택하였다.

B. 개 및 고양이 샘플에 대한 디. 카니눔 WE 마우스 mAb로의 ELISA 검정의 평가.

하기 ELISA 구성을 3마리의 디. 카니눔 양성 개, 4마리의 디. 카니눔 음성 개; 3마리의 디. 카니눔 양성 고양이, 및 1마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물에 대해 실행하였다.

분변항원 ELISA 구성의 제1 세트에서, 디. 카니눔 WE 마우스 mAb를 플레이트 상으로 개별적으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 디. 카니눔 WE 토끼 pAb-HRP 접합체, 이어서 색상 기재와 접촉시켰다. 결과를 도 14에 나타낸다. 따라서, 플레이트 상의 ADX224로의 검정은 6개의 양성 샘플 중 5개에서 및 0개의 음성 샘플에서 분변항원을 검출하였다. 플레이트 상의 ADX225로의 검정은 6개의 양성 샘플 중 6개에서 및 0개의 음성 샘플에서 분변항원을 검출하였다. 플레이트 상의 ADX226로의 검정은 6개의 양성 샘플 중 6개에서 및 0개의 음성 샘플에서 분변항원을 검출하였다. 플레이트 상의 ADX227로의 검정은 6개의 양성 샘플 중 6개에서 및 0개의 음성 샘플에서 분변항원을 검출하였다.

분변항원 ELISA 구성의 제2 세트에서, 4가지 디. 카니눔 WE 마우스 mAb의 각각을 플레이트 상으로 개별적으로 코팅하고, FEX와 접촉시키고, 이어서 4가지 디. 카니눔 WE 마우스 mAb-HRP 접합체의 각각, 이이서 색상 기재와 접촉시켰다. 결과를 도 15에 나타낸다. 시험된 조합 중에서, 2가지 쌍형성이 선택되었다. 플레이트 상의 ADX226 및 ADX227-HRP로의 검정은 6개의 양성 샘플 중 6개에서 및 0개의 음성 샘플에서 분변항원을 검출하였고; 플레이트 상의 ADX227 및 ADX227-HRP로의 검정은 6개의 양성 샘플 중 6개에서 및 0개의 음성 샘플에서 분변항원을 검출하였다. ADX227과 그 자신의 이 성공적인 쌍형성은 ADX227에 의해 검출된 분변항원이 반복적 에피토프를 함유함을 시사한다.

실시예 3H

A. 항원 특징규명: 항- 디. 카니눔 항체 ADX226에 의해 결합된 항원의 글리코실화

디. 카니눔 WE 마우스 mAb ADX226에 의해 결합된 분변항원이 글리코실화되어 있는지 여부를 결정하기 위해, 21가지 상이한 렉틴의 능력을 상업용 키트 (미국 캘리포니아주 벌링게임 소재 벡터 래보러토리즈로부터의 비오티닐화된 렉틴 키트 I, II 및 III)를 사용하여 분변항원에 결합하는 그들의 능력에 대해 시험하였다. 검정을 제조업자의 지침서에 따라 수행하였다. 간략하게, ADX226을 이뮬론 1b 플레이트 내로 코팅하였다. 디. 카니눔 양성 또는 음성 개로부터의 FEX를 플레이트에 첨가하였다. 세척 후, 렉틴::비오틴 접합체, 이어서 스트렙타비딘-HRP 및 색상 기재를 첨가하였다. 결과를 도 16에 나타낸다. 이 시험에서, 하기 렉틴은 ADX226 분변항원에 특이적으로 및 강하게 결합하였다: PSA, LCA, 자칼린, ECL, GSL1, RCA123, 및 WGA. 이 렉틴 결합 데이터는 ADX226에 의해 결합된 디. 카니눔 분변항원이 글리코실화되어 있음을 지시한다.

B. 항원 특징규명: 항- 디. 카니눔 WE 토끼 pAb에 의해 결합된 항원의 글리코실화

항체 디. 카니눔 WE 토끼 pAb에 의해 결합된 분변항원이 글리코실화되어 있는지 여부를 결정하기 위해, 21가지 상이한 렉틴을 상업용 키트 (미국 캘리포니아주 벌링게임 소재 벡터 래보러토리즈로부터의 비오티닐화된 렉틴 키트 I, II 및 III)를 사용하여 분변항원에 결합하는 그들의 능력에 대해 시험하였다. 검정을 제조업자의 지침서에 따라 수행하였다. 간략하게, 디. 카니눔 WE 토끼 pAb를 이뮬론 1b 플레이트 내로 코팅하였다. 디. 카니눔 양성 또는 음성 개 및 고양이로부터의 FEX를 플레이트에 첨가하였다. 세척 후, 렉틴::비오틴 접합체, 이어서 스트렙타비딘-HRP 및 색상 기재를 첨가하였다. 이 시험에서, 하기 렉틴은 디. 카니눔 WE 토끼 pAb 분변항원에 결합하였다: 자칼린, WGA, 숙시닐화된 WGA, GSL II. 결과를 도 17에 나타낸다. 이 렉틴 결합 데이터는 디. 카니눔 WE 토끼 pAb에 의해 결합된 디. 카니눔 분변항원이 글리코실화되어 있음을 지시한다. 이 데이터는 또한 항체-렉틴 샌드위치 검정이 디. 카니눔 분변항원을 검출하는데 사용될 수 있음을 나타낸다.

C. 항원 특징규명: 항- 디. 카니눔 항체 디. 카니눔 WE 토끼 pAb 및 ADX187에 의해 결합된 항원의 글리코실화

유사한 검정 구성을 사용하여 디. 카니눔 WE 토끼 pAb 및 ADX187 (디. 카니눔 WE 마우스 mAb)에 의해 결합된 분변항원(들)이 글리코실화되어 있는지 여부를 결정하고, 21가지 상이한 렉틴을 상업용 키트 (미국 캘리포니아주 벌링게임 소재 벡터 래보러토리즈로부터의 비오티닐화된 렉틴 키트 I, II 및 III)를 사용하여 분변항원에 결합하는 그들의 능력에 대해 시험하였다. 이 구성에서, 21가지 상이한 비오티닐화된 렉틴을 이뮬론 1b 플레이트 내로 코팅하였다. 디. 카니눔 양성 또는 음성 개로부터의 FEX를 플레이트에 첨가하였다. 세척 후, 디. 카니눔 WE 토끼 pAb-HRP 또는 ADX187-HRP 접합체, 이어서 스트렙타비딘-HRP 및 색상 기재를 첨가하였다. 결과를 도 18에 나타낸다. 이 시험에서, 하기 렉틴은 디. 카니눔 WE 토끼 pAb 분변항원에 결합하였다: 자칼린, WGA, 및 숙시닐화된 WGA. 렉틴의 동일한 세트는 ADX187 분변항원에 결합하였다: 자칼린, WGA, 및 숙시닐화된 WGA. 이 렉틴 결합 데이터는 디. 카니눔 WE 토끼 pAb 및 ADX187에 의해 결합된 디. 카니눔 분변항원(들)이 글리코실화되어 있음을 확인시켜 준다. 이 데이터는 또한 항체-렉틴 샌드위치 검정이 디. 카니눔 분변항원을 검출하는데 사용될 수 있음을 나타낸다.

ADX226에 의해 인식되는 분변항원의 O-글리코실화의 추가의 시험

이 실험에서, ADX226을 마이크로타이터 플레이트 상으로, 이어서 FEX, 이어서 자칼린-비오틴, 이어서 스트렙타비딘-HRP, 및 마지막으로 HRP 기재를 코팅하였다. FEX를 20마리의 디. 카니눔 양성 개, 24마리의 디. 카니눔 음성 개, 12마리의 디. 카니눔 양성 고양이, 및 3마리의 디. 카니눔 음성 고양이로부터의 분변 추출물로부터 제조하였다. 검정은 20마리의 양성 개 중 18마리 (95% 감수성), 24마리의 음성 개 중 0마리 (100% 특이성), 12마리의 양성 고양이 중 11마리 (91.7% 감수성), 및 3마리의 음성 고양이 중 0마리 (100% 특이성)에서 양성 신호를 발생시켰다. 이 데이터는 ADX226 분변항원이 O-글리코실화되어 있고, 항체 및 렉틴을 사용한 샌드위치 면역검정이 촌충 분변항원을 검출하는데 사용될 수 있음을 입증한다.

실시예 4

일련의 분변 ELISA 샌드위치 검정을 본질적으로 상기 섹션 "실시예 A"에 기재된 바와 같이 마이크로타이터 플레이트에서 수행하여 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 안실로스토마 카니눔 (에이. 카니눔), 구충 안실로스토마 투바에포르메 (에이. 투바에포르메), 회충 톡소카라 카니스 (티. 카니스), 회충 톡소카라 카티 (티. 카티), 편충 트리쿠리스 불피스 (티. 불피스), 편충 트리쿠리스 펠리스 (티. 펠리스) 및 원충 지아르디아 람블리아 (지아르디아)의 검출에 대한 ELISA 검정의 특이성을 시험하였다.

하기 공급원으로부터의 분변 추출물을 ELISA 검정에서 시험하였다: 티. 피시포르미스 양성 개 (도 19, 칼럼 1), 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 2), 디. 카니눔 감염된 개 (도 19, 칼럼 3), 디. 카니눔 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 4), 구충 에이. 카니눔 감염된 개 (도 19, 칼럼 5), 구충 에이. 투바에포르메 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 6), 회충 티. 카니스 감염된 개 (도 19, 칼럼 7), 회충 티. 카티 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 8), 편충 티. 불피스 감염된 개 (도 19, 칼럼 9), 편충 티. 펠리스 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 10), 지아르디아 감염된 개 (도 19, 칼럼 11), 지아르디아 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 12), 및 2마리의 파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 13 및 14). 도 19에서, 칼럼 1 내지 12는 단일 마이크로타이터 플레이트의 영상이고, 칼럼 13 및 14는 또 다른 별개의 마이크로타이터 플레이트의 영상이다.

촌충 티. 피시포르미스 분변항원 ELISA (도 19, 행 A). 티. 피시포르미스 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, mAb ADX131을 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 mAb ADX132-HRP 접합체와 함께 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. ADX131을 3 ug/ml의 농도에서 코팅하였다. ADX132-HRP를 3 ug/ml의 농도에서 사용하였다. 결과는 이 티. 피시포르미스 분변항원 ELISA가 티. 피시포르미스 감염된 개로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 티. 피시포르미스 ELISA는 하기 중 임의의 것으로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다: 촌충 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이, 디. 카니눔 감염된 개, 디. 카니눔 감염된 고양이, 구충 에이. 카니눔 감염된 개, 구충 에이. 투바에포르메 감염된 고양이, 회충 티. 카니스 감염된 개, 회충 티. 카티 감염된 고양이, 편충 티. 불피스 감염된 개, 편충 티. 펠리스 감염된 고양이, 지아르디아 감염된 개, 지아르디아 감염된 고양이, 및 파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 행 A). 따라서, 이 티. 피시포르미스 ELISA는 티. 피시포르미스 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 하기 중 임의의 것으로부터의 분변항원과 교차반응하지 않았다: 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 및 고양이 파르보바이러스. 따라서, 이 티. 피시포르미스 ELISA는 고도로 종 특이적이었다. 이 티. 피시포르미스 ELISA는 티. 피시포르미스로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하다. 이 티. 피시포르미스 ELISA는 티. 피시포르미스로의 감염을 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 개 파르보바이러스 및 고양이 파르보바이러스로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

촌충 티. 타에니아에포르미스 분변항원 ELISA (도 19, 행 B). 타에니아 타에니아에포르미스 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, mAb ADX184를 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 마우스 mAb ADX193-HRP 접합체와 함께 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. ADX184를 5 ug/ml의 농도에서 코팅하였다. ADX193-HRP를 3 ug/ml의 농도에서 사용하였다. 결과는 이 티. 타에니아에포르미스 분변항원 ELISA가 티. 타에니아에포르미스 감염된 개로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 티. 타에니아에포르미스 ELISA는 하기 중 임의의 것으로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다: 촌충 티. 피시포르미스 감염된 개, 디. 카니눔 감염된 개, 디. 카니눔 감염된 고양이, 구충 에이. 카니눔 감염된 개, 구충 에이. 투바에포르메 감염된 고양이, 회충 티. 카니스 감염된 개, 회충 티. 카티 감염된 고양이, 편충 티. 불피스 감염된 개, 편충 티. 펠리스 감염된 고양이, 지아르디아 감염된 개, 지아르디아 감염된 고양이, 및 파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 행 B). 따라서, 이 티. 타에니아에포르미스 ELISA는 티. 타에니아에포르미스 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 하기 중 임의의 것으로부터의 분변항원과 교차반응하지 않았다: 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 및 고양이 파르보바이러스. 따라서, 이 티. 타에니아에포르미스 ELISA는 고도로 종 특이적이었다. 이 티. 타에니아에포르미스 ELISA는 티. 타에니아에포르미스로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하다. 이 티. 타에니아에포르미스 ELISA는 촌충 티. 타에니아에포르미스로의 감염을 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 개 파르보바이러스 및 고양이 파르보바이러스로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

촌충 디. 카니눔 분변항원 ELISA (도 19, 행 C). 디. 카니눔 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, mAb ADX226을 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 mAb RDX5-HRP 접합체와 함께 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. ADX226을 3 ug/ml의 농도에서 코팅하였다. RDX5-HRP를 3 ug/ml의 농도에서 사용하였다. 결과는 이 디. 카니눔 분변항원 ELISA가 디. 카니눔 감염된 개 및 디. 카니눔 감염된 고양이로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 디. 카니눔 ELISA는 하기 중 임의의 것으로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다: 촌충 티. 피시포르미스 감염된 개, 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이, 구충 에이. 카니눔 감염된 개, 구충 에이. 투바에포르메 감염된 고양이, 회충 티. 카니스 감염된 개, 회충 티. 카티 감염된 고양이, 편충 티. 불피스 감염된 개, 편충 티. 펠리스 감염된 고양이, 지아르디아 감염된 개, 지아르디아 감염된 고양이, 및 파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 행 C). 따라서, 이 디. 카니눔 ELISA는 디. 카니눔 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 하기 중 임의의 것으로부터의 분변항원과 교차반응하지 않았다: 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 티. 피시포르미스, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 및 고양이 파르보바이러스. 따라서, 이 디. 카니눔 ELISA는 고도로 종 특이적이었으며, 디. 카니눔으로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하다. 이 디. 카니눔 ELISA는 디. 카니눔으로의 감염을 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 티. 타에니아에포르미스, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 개 파르보바이러스 및 고양이 파르보바이러스로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

구충 안실로스토마 분변항원 ELISA (도 19, 행 D). 에이. 카니눔 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 번호 7,951,547에서 논의된 바와 같이, 폴리클로날 토끼 항-ASP5-1 항체를 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 마우스 항-ASP5-1 mAb-HRP 접합체와 함께 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. 토끼 폴리클로날 항체를 5 ug/ml의 농도에서 코팅하였다. 마우스 mAb를 4 ug/ml의 농도에서 사용하였다. 결과는 이 안실로스토마 분변항원 ELISA가 에이. 카니눔 감염된 개 및 에이. 투바에포르메 감염된 고양이로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 안실로스토마 ELISA는 하기 중 임의의 것으로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다: 촌충 티. 피시포르미스 감염된 개, 촌충 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이, 촌충 디. 카니눔 감염된 개, 촌충 디. 카니눔 감염된 고양이, 회충 티. 카니스 감염된 개, 회충 티. 카티 감염된 고양이, 편충 티. 불피스 감염된 개, 편충 티. 펠리스 감염된 고양이, 지아르디아 감염된 개, 지아르디아 감염된 고양이, 및 파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 행 D). 따라서, 이 안실로스토마 ELISA는 에이. 카니눔 및 에이. 투바에포르메 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 하기 중 임의의 것으로부터의 분변항원과 교차반응하지 않았다: 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 디. 카니눔, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 및 고양이 파르보바이러스. 따라서, 이 안실로스토마 ELISA는 고도로 특이적이고, 구충 에이. 카니눔 및 에이. 투바에포르메로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하였다. 더욱이, 이 안실로스토마 ELISA는 구충 에이. 카니눔 또는 에이. 투바에포르메로의 감염을 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 디. 카니눔, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 개 파르보바이러스 및 고양이 파르보바이러스로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

회충 톡소카라 분변항원 ELISA (도 19, 행 E). 티. 카니스 및 티. 카티 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 번호 7,951,547에서 논의된 바와 같이, 티. 카니스 단백질 DIV6728C에 대해 발생된 마우스 mAb를 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 티. 카니스 단백질 DIV6728C에 대해 발생된 또 다른 마우스 mAb의 HRP 접합체와 함께 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. ADX5를 6 ug/ml의 농도에서 코팅하였다. ADX10-HRP를 5 ug/ml의 농도에서 사용하였다. 결과는 이 톡소카라 분변항원 ELISA가 티. 카니스 감염된 개 및 티. 카티 감염된 고양이로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 톡소카라 ELISA는 하기 중 임의의 것으로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다: 촌충 티. 피시포르미스 감염된 개, 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이, 촌충 디. 카니눔 감염된 개, 촌충 디. 카니눔 감염된 고양이, 구충 에이. 카니눔 감염된 개, 구충 에이. 투바에포르메 감염된 고양이, 편충 티. 불피스 감염된 개, 편충 티. 펠리스 감염된 고양이, 지아르디아 감염된 개, 지아르디아 감염된 고양이, 및 파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 행 E). 따라서, 이 톡소카라 ELISA는 톡소카라 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 하기 중 임의의 것으로부터의 분변항원과 교차반응하지 않았다: 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 및 고양이 파르보바이러스. 따라서, 이 톡소카라 ELISA는 고도로 특이적이고, 티. 카니스 및 티. 카티로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하였다. 이 회충 톡소카라 ELISA는 회충 티. 카니스 또는 티. 카티로의 감염을 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 원충 지아르디아 람블리아, 개 파르보바이러스 및 고양이 파르보바이러스로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

편충 트리쿠리스 분변항원 ELISA (도 19, 행 F).

티. 불피스 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 분변항원 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 번호 7,951,547에서 논의된 바와 같이, 티. 불피스 단백질 DIV6901에 대해 발생된 마우스 mAb (ADX6)를 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 티. 불피스 단백질 DIV6901에 대해 발생된 또 다른 마우스 mAb (ADX14)의 HRP 접합체와 함께 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. ADX6을 3 ug/ml의 농도에서 코팅하였다. ADX10-HRP를 3 ug/ml의 농도에서 사용하였다. 결과는 이 트리쿠리스 분변항원 ELISA가 티. 불피스 감염된 개 및 티. 펠리스 감염된 고양이로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 트리쿠리스 ELISA는 하기 중 임의의 것으로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다: 촌충 티. 피시포르미스 감염된 개, 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이, 촌충 디. 카니눔 감염된 개, 촌충 디. 카니눔 감염된 고양이, 구충 에이. 카니눔 감염된 개, 구충 에이. 투바에포르메 감염된 고양이, 회충 티. 카니스 감염된 개, 회충 티. 카티 감염된 고양이, 지아르디아 감염된 개, 지아르디아 감염된 고양이, 및 파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 행 F). 따라서, 이 트리쿠리스 ELISA는 티. 불피스 및 티. 펠리스 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 하기 중 임의의 것으로부터의 분변항원과 교차반응하지 않았다: 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 원충 지아르디아 람블리아, 및 고양이 파르보바이러스. 따라서, 이 트리쿠리스 ELISA는 고도로 특이적이고, 티. 불피스 및 티. 펠리스로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하였다. 이 편충 트리쿠리스 ELISA는 편충 티. 불피스 또는 티. 펠리스로의 감염을 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 원충 지아르디아 람블리아, 개 파르보바이러스 및 고양이 파르보바이러스로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

지아르디아 분변항원 ELISA (도 19, 행 G). 지아르디아 람블리아 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 분변항원 ELISA 검정을 가용성 항원을 특이적으로 검출하는 항체 쌍 (스냅® 지아르디아 시험, 아이덱스 래보러토리즈, 인크. 미국 메인주 웨스트브룩)으로 수립하였다 (Olson ME, Leonard NJ, Strout J. Prevalence and diagnosis of Giardia infection in dogs and cats using a fecal antigen test and fecal smear. Can Vet J. 2010 Jun;51(6):640-2. PMID: 20808578). 간략하게, 토끼 항-지아르디아 폴리클로날 항체를 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 마우스 항-지아르디아 모노클로날 항체의 HRP 접합체와 함께 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. 폴리클로날 항체를 3 ug/ml의 농도에서 코팅하였다. mAb-HRP를 3 ug/ml의 농도에서 사용하였다. 결과는 이 지아르디아 분변항원 ELISA가 지아르디아 감염된 개 및 지아르디아 감염된 고양이로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 지아르디아 ELISA는 하기 중 임의의 것으로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다: 촌충 티. 피시포르미스 감염된 개, 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이, 촌충 디. 카니눔 감염된 개, 촌충 디. 카니눔 감염된 고양이, 구충 에이. 카니눔 감염된 개, 구충 에이. 투바에포르메 감염된 고양이, 회충 티. 카니스 감염된 개, 회충 티. 카티 감염된 고양이, 편충 티. 불피스 감염된 개, 편충 티. 펠리스 감염된 고양이 및 파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 행 G). 따라서, 이 지아르디아 ELISA는 지아르디아 람블리아 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 하기 중 임의의 것으로부터의 분변항원과 교차반응하지 않았다: 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 불피스 및 고양이 파르보바이러스. 따라서, 이 지아르디아 ELISA는 고도로 종 특이적이고, 지아르디아 람블리아로의 감염의 검출 또는 진단에 유용하였다. 이 지아르디아 ELISA는 지아르디아 람블리아로의 감염을 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 개 파르보바이러스 및 고양이 파르보바이러스로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

파르보바이러스 감염된 고양이 (도 19, 칼럼 13 및 14)의 양성 감염 상태를 제조업자의 지침서 (아이덱스 래보러토리즈 인크, 미국 메인주 웨스트브룩)에 따라 스냅® 파르보 테스트(Parvo Test)로 확인하였다 (M. Abd-Eldaim, M. Beall and M. A. Kennedy. "Detection of feline panleukopenia virus using a commercial ELISA for canine parvovirus" Vet Ther. 2009 Winter; 10(4): E1-6). 이 다중화 분변 ELISA 검정은 촌충 티. 피시포르미스, 촌충 티. 타에니아에포르미스, 촌충 디. 카니눔, 구충 에이. 카니눔, 구충 에이. 투바에포르메, 회충 티. 카니스, 회충 티. 카티, 편충 티. 불피스, 편충 티. 펠리스, 및 원충 지아르디아 람블리아의 동시, 특이적 검출이 가능하다.

이 데이터는 본 발명의 방법이 종 특이적-방식으로 최소 8종의 상이한 장 기생체로의 감염을 용이하게 검출하고 그 사이에 구별하는데 사용될 수 있음을 입증한다.

실시예 5

타에니아 속, 예를 들어 티. 피시포르미스, 티. 타에니아에포르미스, 및 디필리디움 속, 예를 들어 디. 카니눔으로부터의 2 또는 3종의 촌충 종을 검출할 수 있는 일련의 분변 ELISA 검정을 개발하였다. ELISA를 본질적으로 상기 섹션 "실시예 A"에 기재된 바와 같이 마이크로타이터 플레이트에서 수행하였다.

하기 공급원으로부터의 분변 추출물을 ELISA 검정에서 시험하였다: 4마리의 티. 피시포르미스 양성 개 (도 20, 칼럼 1, 4, 7 및 10), 4마리의 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이 (도 20, 칼럼 2, 5, 8 및 11), 2마리의 디. 카니눔 감염된 개 (도 20, 칼럼 3 및 6), 2마리의 디. 카니눔 감염된 고양이 (도 20, 칼럼 9 및 12). 도 20에서, 칼럼 1 내지 12는 단일 마이크로타이터 플레이트의 영상이다.

타에니아 속의 촌충의 검출을 위한 분변항원 ELISA (도 20, 행 A). 타에니아 촌충으로 감염된 동물로부터의 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, mAb ADX131 및 mAb ADX184를 각각 3 ug/ml의 농도에서 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 mAb ADX132-HRP 및 ADX193-HRP 접합체와 함께 각각 3 ug/ml의 농도에서 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. 결과는 이 타에니아 분변항원 ELISA가 티. 피시포르미스 감염된 개 (도 20, 행 A, 칼럼 1, 4, 7 및 10) 및 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이 (도 20, 행 A, 칼럼 2, 5, 8 및 11)로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 타에니아 ELISA는 촌충 디. 카니눔 감염된 개 (도 20, 행 A, 칼럼 3 및 6) 또는 디. 카니눔 감염된 고양이 (도 20, 행 A, 칼럼 9 및 12)로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다. 따라서, 이 타에니아 ELISA는 티. 피시포르미스 및 티. 타에니아에포르미스 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 디. 카니눔으로부터의 분변항원과 교차반응하지 않았다. 이 타에니아 ELISA는 티. 피시포르미스 및 티. 타에니아에포르미스를 비롯한 1종 이상의 타에니아 촌충으로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하다. 이 타에니아 ELISA는 티. 피시포르미스 및 티. 타에니아에포르미스를 비롯한 1종 이상의 타에니아 촌충으로의 감염을 디. 카니눔을 비롯한 디필리디움 촌충으로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

촌충 티. 피시포르미스 및 디. 카니눔의 검출을 위한 분변항원 ELISA (도 20, 행 B). 촌충 티. 피시포르미스 및 디. 카니눔으로 감염된 동물로부터의 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, mAb ADX131 및 mAb ADX226을 각각 3 ug/ml의 농도에서 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 mAb ADX132-HRP 및 mAb RDX5-HRP 접합체와 함께 각각 3 ug/ml의 농도에서 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. 결과는 이 ELISA가 티. 피시포르미스 감염된 개 (도 20, 행 B, 칼럼 1, 4, 7 및 10), 촌충 디. 카니눔 감염된 개 (도 20, 행 B, 칼럼 3 및 6) 및 디. 카니눔 감염된 고양이 (도 20, 행 B, 칼럼 9 및 12)로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 ELISA는 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이 (도 20, 행 B, 칼럼 2, 5, 8 및 11)로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다. 따라서, 이 ELISA는 티. 피시포르미스 및 디. 카니눔 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 티. 타에니아에포르미스 분변항원과 교차반응하지 않았다. 이 ELISA는 촌충 티. 피시포르미스 및/또는 디. 카니눔으로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하고, 촌충 티. 피시포르미스 및/또는 디. 카니눔으로의 감염을 촌충 티. 타에니아에포르미스로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

촌충 티. 타에니아에포르미스 및 디. 카니눔의 검출을 위한 분변항원 ELISA (도 20, 행 C). 촌충 티. 타에니아에포르미스 및 디. 카니눔으로 감염된 동물로부터의 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, mAb ADX184 및 mAb ADX226을 각각 3 ug/ml의 농도에서 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 mAb ADX193-HRP 및 RDX5-HRP 접합체와 함께 각각 3 ug/ml의 농도에서 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. 결과는 이 ELISA가 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이 (도 20, 행 C, 칼럼 2, 5, 8 및 11), 촌충 디. 카니눔 감염된 개 (도 20, 행 C, 칼럼 3 및 6) 및 디. 카니눔 감염된 고양이 (도 20, 행 C, 칼럼 9 및 12)로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 그러나, 이 ELISA는 티. 피시포르미스 감염된 개 (도 20, 행 C, 칼럼 1, 4, 7 및 10)로부터의 FEX에서 분변항원을 검출하지 않았다. 따라서, 이 ELISA는 티. 타에니아에포르미스 및 디. 카니눔 분변항원을 특이적으로 검출하였고, 티. 피시포르미스 분변항원과 교차반응하지 않았다. 이 ELISA는 촌충 티. 타에니아에포르미스 및/또는 디. 카니눔으로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하고, 촌충 티. 타에니아에포르미스 및/또는 디. 카니눔으로의 감염을 촌충 티. 피시포르미스로의 감염으로부터 구별하는데 사용될 수 있다.

촌충 티. 피시포르미스, 티. 타에니아에포르미스 및 디. 카니눔의 검출을 위한 분변항원 ELISA (도 20, 행 D). 촌충 티. 피시포르미스, 티. 타에니아에포르미스 및 디. 카니눔으로 감염된 동물로부터의 분변항원의 검출을 위한 샌드위치 ELISA 검정을 수립하였다. 간략하게, mAb ADX131, mAb ADX184 및 mAb ADX226을 각각 3 ug/ml의 농도에서 마이크로타이터 플레이트 상으로 코팅하고, 분변 추출물과 함께 인큐베이션하고, 이어서 mAb ADX132-HRP, mAb ADX193-HRP 및 RDX5-HRP 접합체와 함께 각각 3 ug/ml의 농도에서 인큐베이션하고, 이어서 퍼옥시다제 기재로 검출하였다. 결과는 이 ELISA가 티. 피시포르미스 감염된 개 (도 20, 행 D, 칼럼 1, 4, 7 및 10), 티. 타에니아에포르미스 감염된 고양이 (도 20, 행 D, 칼럼 2, 5, 8 및 11), 촌충 디. 카니눔 감염된 개 (도 20, 행 D, 칼럼 3 및 6) 및 디. 카니눔 감염된 고양이 (도 20, 행 D, 칼럼 9 및 12)로부터의 FEX로 양성 신호를 산출하였음을 나타낸다. 따라서, 이 ELISA는 티. 피시포르미스, 티. 타에니아에포르미스 및 디. 카니눔 분변항원을 검출하였다. 이 ELISA는 촌충 티. 피시포르미스, 티. 타에니아에포르미스 및/또는 디. 카니눔으로의 감염 또는 침입의 검출 또는 진단에 유용하다. 이들 데이터는 이 ELISA 검정이 개 및 고양이에서 타에니아 및/또는 디필리디움 촌충으로의 감염을 용이하게 검출하는데 사용될 수 있음을 입증한다.

Claims (129)

1. 하기 단계를 포함하는, 분변 샘플에서 1종 이상의 편형동물 항원의 존재 또는 부재를 검출하는 방법:
   (a) 포유동물로부터의 분변 샘플을 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 접촉시키는 단계:
   (i) 제1 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체;
   (ii) 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및
   (iii) 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체; 및
   (b) 존재하는 경우, 항체-분변항원 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계.
2. 하기 단계를 포함하는, 포유동물이 1종 이상의 편형동물 충류로 감염되어 있는지 여부를 진단하는 방법:
   (a) 포유동물로부터의 분변 샘플을 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 접촉시키는 단계:
   (i) 제1 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체;
   (ii) 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및
   (iii) 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체; 및
   (b) 샘플에서 존재하는 경우, 분변항원의 존재 하에서 항체-분변항원 복합체를 형성하는 단계;
   (c) 존재하는 경우, 항체-분변항원 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계; 및
   (d) 포유동물을 하기를 갖는 것으로서 진단하는 단계:
   (i) 제1 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제1 촌충 감염;
   (ii) 제2 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제2 촌충 감염; 및
   (iii) 제3 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제3 촌충 감염.
3. 하기 단계를 포함하는, 1종 이상의 편형동물 충류로 감염된 포유동물을 진단하고 치료하는 방법:
   (a) 포유동물로부터의 분변 샘플을 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체와 접촉시키는 단계:
   (i) 제1 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체;
   (ii) 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및
   (iii) 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체; 및
   (b) 샘플에서 존재하는 경우, 분변항원의 존재 하에서 항체-분변항원 복합체를 형성하는 단계;
   (c) 존재하는 경우, 항체-분변항원 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계; 및
   (d) 포유동물을 하기를 갖는 것으로서 진단하는 단계:
   (i) 제1 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제1 촌충 감염;
   (ii) 제2 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제2 촌충 감염; 및
   (iii) 제3 촌충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 제3 촌충 감염; 및
   (e) 제1 촌충 감염, 제2 촌충 감염, 또는 제3 촌충 감염 또는 그의 조합을 갖는 포유동물을 치료하는 1종 이상의 치료제의 유효량을 투여하는 단계.
4. 제3항에 있어서, 단계 (e)가 (a) 1종 이상의 연충 기생체, 1종 이상의 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충, 또는 1종 이상의 박테리아에 의한 감염을 치료하는 1종 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함하는 것인 방법.
5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 단계 (e)가 (b) 편형동물 충류 기생체, 연충 기생체, 비-충류 기생체, 바이러스, 진균, 원충, 또는 박테리아의 중간 숙주를 방제하거나, 퇴치하거나, 사멸시키는 1종 이상의 치료제를 추가로 포함하는 것인 방법.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 분변 샘플이 개 또는 고양이인 포유동물로부터 수득되는 것인 방법.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종이 타에니아 피시포르미스(Taenia pisiformis)인 방법.
8. 제7항에 있어서, 제1 항체가 촌충 타에니아 타에니아에포르미스(Taenia taeniaeformis), 촌충 디필리디움(Dipylidium), 구충, 회충, 편충, 지아르디아(Giardia) 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 방법.
9. 제8항에 있어서, 구충이 안실로스토마(Ancylostoma)이고, 회충이 톡소카라(Toxocara)이고, 편충이 트리쿠리스(Trichuris)인 방법.
10. 제9항에 있어서, 촌충 디필리디움이 디필리디움 카니눔(Dipylidium caninum)이고; 구충이 안실로스토마 카니눔(Ancylostoma caninum) 또는 안실로스토마 투바에포르메(Ancylostoma tubaeforme)이고; 회충이 톡소카라 카니스(Toxocara canis) 또는 톡소카라 카티(Toxocara cati)이고; 편충이 트리쿠리스 불피스(Trichuris vulpis) 또는 트리쿠리스 펠리스(Trichuris felis)이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아(Giardia lamblia)이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 방법.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 촌충 종이 타에니아 타에니아에포르미스인 방법.
12. 제11항에 있어서, 제2 항체가 촌충 타에니아 피시포르미스 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 방법.
13. 제12항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 방법.
14. 제13항에 있어서, 촌충 디필리디움이 디필리디움 카니눔이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 방법.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 촌충 종이 디필리디움 카니눔인 방법.
16. 제15항에 있어서, 제3 항체가 촌충 타에니아, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 방법.
17. 제16항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 방법.
18. 제17항에 있어서, 촌충 타에니아가 타에니아 피시포르미스 또는 타에니아 타에니아에포르미스이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 방법.
19. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종 및 제2 촌충 종이 타에니아 종인 방법.
20. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종이 타에니아 피시포르미스이고, 제2 촌충 종이 디필리디움 카니눔인 방법.
21. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종 및 제2 촌충 종이 타에니아 종이고, 제3 촌충 종이 디필리디움 카니눔인 방법.
22. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종이 타에니아 피시포르미스이고, 제2 촌충 종이 타에니아 타에니아에포르미스이고, 제3 촌충 종이 디필리디움 카니눔인 방법.
23. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1, 제2 및 제3 항체가 회충, 편충, 및 구충으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 충류로부터 유래된 임의의 분변항원에 특이적으로 결합하지 않는 것인 방법.
24. 제23항에 있어서, 회충이 톡소카라 카니스, 톡소카라 카티, 톡소카라 비툴로룸(Toxocara vitulorum), 톡사스카리스 레오니나(Toxascaris leonina), 바일리사스카리스 프로시오니스(Baylisascaris procyonis), 아스카리디아 갈리(Ascaridia galli), 파라스카리스 에쿠오룸(Parascaris equorum), 아스카리스 수움(Ascaris suum), 아스카리스 룸브리코이데스(Ascaris lumbricoides), 아니사키스 심플렉스(Anisakis simplex), 또는 슈도테라노바 데시피엔스(Pseudoterranova decipiens)인 방법.
25. 제23항에 있어서, 편충이 트리쿠리스 불피스, 트리쿠리스 캄파눌라(Trichuris campanula), 트리쿠리스 세라타(Trichuris serrata), 트리쿠리스 펠리스, 트리쿠리스 수이스(Trichuris suis), 트리쿠리스 트리키우라(Trichuris trichiura), 트리쿠리스 디스콜로르(Trichuris discolor) 또는 트리코세팔루스 트리키우리스디스콜로르(Trichocephalus trichiuris)인 방법.
26. 제23항에 있어서, 구충이 안실로스토마 카니눔, 안실로스토마 브라질리엔세(Ancylostoma braziliense), 안실로스토마 두오데날(Ancylostoma duodenal), 안실로스토마 세이라니쿰(Ancylostoma ceylanicum), 안실로스토마 투바에포르메, 안실로스토마 플루리덴타툼(Ancylostoma pluridentatum), 네카토르 아메리카누스(Necator americanus), 또는 운시나리아 스테노세팔라(Uncinaria stenocephala)인 방법.
27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (a) 군이 하기로 추가로 이루어지는 것인 방법:
    (i) 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충, 구충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체;
    (ii) 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충, 구충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 및
    (iii) 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충, 회충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체;
    (iv) 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 및
    (v) 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원 및 지아르디아 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체.
28. 제27항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 방법.
29. 제28항에 있어서, 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 방법.
30. 제2항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 단계(d) 진단이 하기를 추가로 포함하는 것인 방법:
    (iv) 회충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 회충 감염;
    (v) 편충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 편충 감염;
    (vi) 구충 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 구충 감염;
    (vii) 지아르디아 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 지아르디아 감염; 및
    (viii) 파르보바이러스 항체-분변항원 복합체가 존재하는 경우에는 파르보바이러스 감염.
31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 분변 샘플이 2종 이상의 항체, 3종 이상의 항체, 4종 이상의 항체, 5종 이상의 항체, 6종 이상의 항체, 7종 이상의 항체 또는 8종 이상의 항체와 접촉되는 것인 방법.
32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계가 1종 이상의 복합체에 결합하는 적어도 1종의 2차 항체를 제공하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
33. 제32항에 있어서, 2차 항체가 표지되거나 또는 고체 지지체에 부착되는 것인 방법.
34. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 제1, 제2 및 제3 항체 중 1종 이상이 표지되는 것인 방법.
35. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 제1, 제2 및 제3 항체가 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 방법.
36. 제30항에 있어서, 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 및 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 중 1종 이상이 표지되는 것인 방법.
37. 제30항에 있어서, 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 및 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체가 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 방법.
38. 제35항 또는 제37항에 있어서, 고체 지지체가 효소-연결 면역흡착 검정 장치의 부분을 형성하는 것인 방법.
39. 제38항에 있어서, 효소-연결 면역흡착 검정 장치가 측방 유동 면역검정 장치인 방법.
40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플을 1종 이상의 연충 기생체, 1종 이상의 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충, 및 1종 이상의 박테리아로 이루어진 군 중 1종 이상을 검출하는 1종 이상의 시약과 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
41. 제40항에 있어서, 시약이 1종 이상의 연충 기생체, 비-충류 기생체, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충, 또는 1종 이상의 박테리아에 대해 특이적인 항체에 의해 인식되는 1종 이상의 항체 또는 1종 이상의 항원을 포함하는 것인 방법.
42. 제40항 또는 제41항에 있어서, 1종 이상의 연충 기생체가 회충, 편충, 구충 및 심장사상충 중 적어도 1종을 포함하는 것인 방법.
43. 제41항에 있어서, 1종 이상의 시약이 비-충류 기생체 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합하는 항체인 방법.
44. 제43항에 있어서, 지아르디아가 지아르디아 람블리아인 방법.
45. 제44항에 있어서, 항체가 티. 피시포르미스, 티. 타에니아에포르미스, 디. 카니눔, 에이. 카니눔 감염된 개, 에이. 투바에포르메, 티. 카니스, 티. 카티, 티. 불피스, 티. 펠리스 및 파르보바이러스로부터 유래된 분변항원에 결합하지 않는 것인 방법.
46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 회충, 편충, 또는 구충으로부터의 핵산의 존재 또는 부재를 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
47. 제46항에 있어서, 핵산의 존재 또는 부재를 결정하는 단계가 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)-기반 검정을 사용함으로써 수행되는 것인 방법.
48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 분변항원 중 적어도 1종이 글리코실화된 것인 방법.
49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 복합체의 존재 또는 부재를 검출하는 단계가 복합체 중 적어도 1종에 결합하는 1종 이상의 렉틴을 제공하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
50. 제49항에 있어서, 렉틴이 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 방법.
51. 제49항에 있어서, 제1, 제2, 제3 항체, 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 및 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체가 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 방법.
52. 제48항 또는 제49항에 있어서, 제1, 제2 및 제3 항체, 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 및 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체가 고체 지지체 상에 고정화되고, 렉틴이 검출가능하게 표지되는 것인 방법.
53. 제48항 또는 제49항에 있어서, 제1, 제2 및 제3 항체, 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 및 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체가 검출가능하게 표지되고, 렉틴이 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 방법.
54. 제48항에 있어서, 포유동물로부터의 분변 샘플을 1종 이상의 항체와 접촉시키는 단계 전에, 분변 샘플을 1종 이상의 렉틴과 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
55. 제54항에 있어서, 1종 이상의 렉틴이 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 방법.
56. 제54항에 있어서, 제1 항체, 제2 항체, 제3 항체, 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 및 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체가 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 방법.
57. 제54항에 있어서, 제1 항체, 제2 항체 및 제3 항체, 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 및 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체가 고체 지지체 상에 고정화되고, 1종 이상의 렉틴이 검출가능하게 표지되는 것인 방법.
58. 제54항에 있어서, 제1 항체, 제2 항체, 제3 항체, 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 및 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체가 검출가능하게 표지되고, 1종 이상의 렉틴이 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 방법.
59. 타에니아 피시포르미스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체.
60. 제59항에 있어서, 항체가 촌충 타에니아 타에니아에포르미스 분변항원, 촌충 디필리디움, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 단리된 항체.
61. 제60항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 단리된 항체.
62. 제60항에 있어서, 촌충 디필리디움이 디필리디움 카니눔이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 단리된 항체.
63. 타에니아 타에니아에포르미스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체.
64. 제63항에 있어서, 항체가 촌충 타에니아 피시포르미스 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 단리된 항체.
65. 제64항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 단리된 항체.
66. 제64항에 있어서, 촌충 디필리디움이 디필리디움 카니눔이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 단리된 항체.
67. 제63항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 표지되거나 또는 고체 지지체에 부착되는 것인 단리된 항체.
68. 디필리디움 카니눔 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항체.
69. 제68항에 있어서, 항체가 촌충 타에니아 분변항원, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 단리된 항체.
70. 제69항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 단리된 항체.
71. 제69항에 있어서, 촌충 타에니아가 타에니아 피시포르미스 또는 타에니아 타에니아에포르미스이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 단리된 항체.
72. 제68항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 표지되거나 또는 고체 지지체에 부착되는 것인 단리된 항체.
73. 촌충 분변항원 및 촌충 분변항원에 특이적으로 결합된 1종 이상의 항체를 포함하는 면역복합체.
74. 제73항에 있어서, 촌충이 타에니아 피시포르미스, 타에니아 타에니아에포르미스, 또는 디필리디움 카니눔인 면역복합체.
75. 제74항에 있어서, 촌충이 타에니아 피시포르미스이고, 항체가 촌충 타에니아 타에니아에포르미스 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 면역복합체.
76. 제75항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 면역복합체.
77. 제75항에 있어서, 촌충 디필리디움이 디필리디움 카니눔이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 면역복합체.
78. 제74항에 있어서, 촌충이 타에니아 타에니아에포르미스이고, 항체가 촌충 타에니아 피시포르미스 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 면역복합체.
79. 제78항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 면역복합체.
80. 제78항에 있어서, 촌충 디필리디움이 디필리디움 카니눔이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 면역복합체.
81. 제74항에 있어서, 촌충이 디필리디움 카니눔이고, 항체가 촌충 타에니아 분변항원, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 면역복합체.
82. 제81항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 면역복합체.
83. 제81항에 있어서, 촌충 타에니아가 타에니아 피시포르미스 또는 타에니아 타에니아에포르미스이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 면역복합체.
84. 제73항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 촌충의 전체 추출물, 촌충의 E/S 물질, 촌충의 웜 워시(Worm Wash), 또는 촌충의 TCA 가용성 물질로의 면역화에 의해 수득되는 것인 면역복합체.
85. 제73항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 촌충 분변항원이 촌충-감염된 포유동물로부터 취해진 샘플로부터 수득되는 것인 면역복합체.
86. 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 분변 샘플인 면역복합체.
87. 제73항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물이 회충, 편충 및 구충 중 1종 이상으로 추가로 감염되고, 항체가 샘플에 존재할 수 있는 회충, 편충, 또는 구충 중 1종 이상으로부터의 임의의 항원에 특이적으로 결합하지 않는 것인 면역복합체.
88. 제73항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 분변항원이 글리코실화된 것인 면역복합체.
89. 제73항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 촌충 분변항원에 결합된 렉틴을 추가로 포함하는 면역복합체.
90. 제73항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체에 결합되는 것인 면역복합체.
91. 제89항에 있어서, 렉틴이 검출가능하게 표지되거나 또는 고체 지지체에 결합되는 것인 면역복합체.
92. 제89항에 있어서, 항체가 검출가능하게 표지되고, 렉틴이 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 면역복합체.
93. 제89항에 있어서, 항체가 고체 지지체 상에 고정화되고, 렉틴이 검출가능하게 표지되는 것인 면역복합체.
94. 분변 샘플로부터 1종 이상의 촌충 분변항원의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 장치로서, 고체 지지체를 포함하며, 여기서 고체 지지체는 그 위에 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체가 고정화되어 있는 것인 장치:
    (a) 제1 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체;
    (b) 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및
    (c) 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체.
95. 분변 샘플로부터 1종 이상의 촌충 분변항원의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 장치로서, 고체 지지체, 1종 이상의 렉틴, 및 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체를 포함하며:
    (a) 제1 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제2 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제1 항체;
    (b) 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충으로부터의 분변항원 또는 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제2 항체; 및
    (c) 제3 촌충 종으로부터의 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 제1 촌충 종으로부터의 분변항원 또는 제2 촌충 종으로부터의 분변항원에는 그렇지 않은 제3 항체,
    여기서 고체 지지체는 그 위에 1종 이상의 렉틴 또는 1종 이상의 항체가 고정화되어 있는 것인
    장치.
96. 제95항에 있어서, 고체 지지체가 그 위에 2종 이상의 항체가 고정화되어 있는 것인 장치.
97. 제95항에 있어서, 1종 이상의 렉틴이 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 장치.
98. 제94항 또는 제95항에 있어서, (d) 지아르디아 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 및/또는 구충 분변항원 중 1종 이상의 유형을 추가로 포함하며, 여기서 회충 분변항원, 편충 분변항원, 및 구충 분변항원 중 1종 이상의 유형이 항체에 특이적으로 결합되는 것인 장치.
99. 제94항 또는 제95항에 있어서, 고체 지지체가 그 위에 2종 이상의 항체가 고정화되어 있는 것인 장치.
100. 제94항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 촌충 항원의 1종 이상의 종을 추가로 포함하며, 여기서 촌충 항원의 1종 이상의 종이 항체에 특이적으로 결합되는 것인 장치.
101. 제94항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서,
     (a) 제1 항체가 제1 촌충 종의 전체 추출물, 제1 촌충 종의 E/S 물질, 제1 촌충 종의 웜 워시 물질, 또는 제1 촌충 종의 TCA 가용성 물질에 대해 발생된 것이거나;
     (b) 제2 항체가 제2 촌충 종의 전체 추출물, 제2 촌충 종의 E/S 물질, 제1 촌충 종의 웜 워시 물질, 또는 제2 촌충 종의 TCA 가용성 물질에 대해 발생된 것이거나;
     (c) 제3 항체가 제3 촌충 종의 전체 추출물, 제3 촌충 종의 E/S 물질, 제1 촌충 종의 웜 워시 물질, 또는 제3 촌충 종의 TCA 가용성 물질에 대해 발생된 것인
     장치.
102. 제94항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종이 타에니아 피시포르미스인 장치.
103. 제102항에 있어서, 제1 항체가 촌충 타에니아 타에니아에포르미스 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 장치.
104. 제103항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 장치.
105. 제103항에 있어서, 촌충 디필리디움이 디필리디움 카니눔이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 장치.
106. 제94항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 촌충 종이 타에니아 타에니아에포르미스인 장치.
107. 제106항에 있어서, 제2 항체가 촌충 타에니아 피시포르미스 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 장치.
108. 제107항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 장치.
109. 제107항에 있어서, 촌충 디필리디움이 디필리디움 카니눔이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 장치.
110. 제94항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 촌충 종이 디필리디움 카니눔인 장치.
111. 제110항에 있어서, 제3 항체가 촌충 타에니아 분변항원, 구충 분변항원, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 지아르디아 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 분변항원과 특이적으로 교차-반응하지 않는 것인 장치.
112. 제111항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 장치.
113. 제111항에 있어서, 촌충 타에니아가 타에니아 피시포르미스 또는 타에니아 타에니아에포르미스이고; 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 장치.
114. 제94항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종 및 제2 촌충 종이 타에니아 종인 장치.
115. 제94항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종이 타에니아 피시포르미스이고, 제2 촌충 종이 타에니아 타에니아에포르미스인 장치.
116. 제94항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종 및 제2 촌충 종이 타에니아 종이고, 제3 촌충 종이 디필리디움 카니눔인 장치.
117. 제94항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 촌충 종이 타에니아 피시포르미스이고, 제2 촌충 종이 타에니아 타에니아에포르미스이고, 제3 촌충 종이 디필리디움 카니눔인 장치.
118. 제117항에 있어서, 제1, 제2 및 제3 항체가 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 지아르디아 분변항원, 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구성원으로부터 유래된 임의의 분변항원에 특이적으로 결합하지 않는 것인 장치.
119. 제94항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 장치가 1종 이상의 연충 기생체, 비-충류 기생체, 심장사상충, 1종 이상의 바이러스, 1종 이상의 진균, 1종 이상의 원충 및 1종 이상의 박테리아로 이루어진 군 중 1종 이상의 검출을 위한 1종 이상의 시약을 추가로 포함하는 것인 장치.
120. 제94항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 고체 지지체가 그 위에 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 항체가 추가로 고정화되어 있는 것인 장치:
     (i) 회충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충, 구충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체;
     (ii) 편충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충, 구충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 및
     (iii) 구충 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 편충, 회충, 촌충, 지아르디아 및 파르보바이러스로 이루어진 군으로부터 유래된 분변항원에는 그렇지 않은 항체;
     (iv) 지아르디아 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원 및 파르보바이러스 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체; 및
     (v) 파르보바이러스 분변항원에 특이적으로 결합할 수 있지만, 회충 분변항원, 편충 분변항원, 구충 분변항원, 촌충 타에니아 분변항원, 촌충 디필리디움 분변항원, 및 지아르디아 분변항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 분변항원에는 그렇지 않은 항체.
121. 제120항에 있어서, 고체 지지체가 2종 이상의 항체, 3종 이상의 항체, 4종 이상의 항체, 5종 이상의 항체, 6종 이상의 항체, 7종 이상의 항체 또는 8종 이상의 항체를 갖는 것인 장치.
122. 제120항에 있어서, 구충이 안실로스토마이고, 회충이 톡소카라이고, 편충이 트리쿠리스인 장치.
123. 제122항에 있어서, 구충이 안실로스토마 카니눔 또는 안실로스토마 투바에포르메이고; 회충이 톡소카라 카니스 또는 톡소카라 카티이고; 편충이 트리쿠리스 불피스 또는 트리쿠리스 펠리스이고; 지아르디아가 지아르디아 람블리아이고; 파르보바이러스가 고양이 파르보바이러스 또는 개 파르보바이러스인 장치.
124. 제90항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 장치가 효소-연결 면역흡착 검정 장치인 장치.
125. 제124항에 있어서, 효소-연결 면역흡착 검정 장치가 측방 유동 면역검정 장치인 장치.
126. 제94항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 개 또는 고양이로부터의 것인 장치.
127. 제94항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 분변항원 중 적어도 1종이 글리코실화된 것인 장치.
128. 포유동물 샘플에서의 1종 이상의 편형동물 분변항원의 검출을 위한 키트로서, 제94항 내지 제127항 중 어느 한 항의 장치, 및 1종 이상의 분변항원의 검출에 충분한 1종 이상의 시약을 포함하는 키트.
129. 제128항에 있어서, 1종 이상의 시약이 1종 이상의 지시제 시약, 1종 이상의 항체 표지화 화합물, 1종 이상의 항체, 1종 이상의 항원 포획 시약, 1종 이상의 억제제, 및 1종 이상의 세척 시약으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 키트.

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