JP2022501615A - 条虫を検出するための方法、デバイス、キット、および組成物 - Google Patents

条虫を検出するための方法、デバイス、キット、および組成物 Download PDF

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Abstract

試料において１つまたは複数の条虫糞便抗原の存在または非存在を検出するための方法、デバイス、キット、および組成物が本明細書に開示されている。本発明の方法、デバイス、キット、および組成物は、哺乳動物由来の糞便試料において条虫の存在または非存在を確認するために用いられ得、また、蠕虫（例えば、回虫、鉤虫、鞭虫、およびイヌ糸状虫）、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスの１つまたは複数の感染の存在下で、異なる条虫種間を識別することができ得る。哺乳動物における条虫の存在または非存在の確認は、例えば、その哺乳動物を処置する最適なコースを選択するために、および／またはその哺乳動物が、処置が開始された後、感染が取り除かれているかどうかを決定するために、なされ得る。

Description

相互参照
本出願は、２０１８年１０月２日に出願された米国仮特許出願第６２／７４０，１００号、２０１８年１０月５日に出願された第６２／７４１，８４９号、および２０１８年１０月１７日に出願された第６２／７４６，８０５号からの優先権の恩恵を主張し、それらの全ては、全体として参照により本明細書に組み入れられている。
１．発明の分野
本発明は、哺乳動物において条虫種を検出しおよび条虫種間を識別するための組成物、デバイス、キット、および方法に関する。より具体的には、本発明は、哺乳動物由来の試料において条虫種の存在または非存在を検出するための、および条虫抗原間を識別するための抗体および抗体組成物、デバイス、ならびに方法に関する。
２．先行技術の説明
寄生虫感染は、動物においてよく見られ、診断も処置も行われなければ、重篤な疾患または死を引き起こし得る。寄生虫感染の診断のための現在の方法は、主に、糞便塗布において直接的か、または密度媒体における浮遊もしくは沈降による卵子および寄生体の濃縮後かのいずれかでの糞便試料の顕微鏡検査を含む。この手順の採用の多さにもかかわらず、その方法は、重大な欠点を有する。これらの顕微鏡方法は、時間がかかり、特殊な装置を必要とする。加えて、これらの方法の結果の精度は、操作者の技能および経験に大いに依存する。例えば、条虫の存在は、卵または片節を探すことにより決定されるが、これらは、断続的でかつ少数で排泄される。驚くほどのことではないが、条虫感染は、日常的な糞便検査で診断されないことが多い。
便の取り扱いは、不快で危険である。便を処理するための衛生的かつ不快にさせない手順はやりにくく、複雑である場合が多い。そのような手順は、計量、遠心分離、および保管を含み得、適切な器具、保護装置、および熟練した技術者を備えた臨床検査室以外では難しい。したがって、糞便試験を実施するのに必要とされるステップの数のいくらかの低減、および試験操作者と試験材料との間の接触のいくらかの低減が望ましい。臨床検査室は、糞便中の様々なウイルス、細菌、ならびに非蠕虫の寄生体および生物体の検出のためにイムノアッセイ方法を用いている。しかしながら、糞便、全血、または血清中の寄生虫感染の検出のための単純なイムノアッセイ方法の必要性が依然としてある。
一態様において、本発明は、Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、例えば、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原もしくはＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原、またはＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原などの条虫糞便抗原と特異的に結合することができる、単離された抗体に向けられる。その抗体を、検出可能に標識し、または固体支持体に付着させることができる。
一実施形態において、単離抗体は、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原と特異的に結合する。その抗体は、以下の群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない：条虫Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属、鉤虫（例えば、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属）、回虫（Ｔｏｘｏｃａｒａ属）、鞭虫（例えば、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ属）、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルス；条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属はＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである；鉤虫はＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅである；回虫はＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉである；鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓである；Ｇｉａｒｄｉａ属はＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａである；ならびにパルボウイルスはネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである。
別の実施形態において、単離抗体は、Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原と特異的に結合する。その抗体は、以下の群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない：条虫Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属、鉤虫（例えば、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属）、回虫（Ｔｏｘｏｃａｒａ属）、鞭虫（例えば、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ属）、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルス；条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属はＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである；鉤虫はＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅである；回虫はＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉである；鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓである；Ｇｉａｒｄｉａ属はＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａである；ならびにパルボウイルスはネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである。
他の実施形態において、単離抗体は、Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原と結合する。その抗体は、以下の群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない：条虫Ｔａｅｎｉａ属、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属、鉤虫（例えば、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属）、回虫（Ｔｏｘｏｃａｒａ属）、鞭虫（例えば、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ属）、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスであり、条虫Ｔａｅｎｉａ属はＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓまたはＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓであり；鉤虫はＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり；回虫はＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり；鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり；Ｇｉａｒｄｉａ属はＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり；パルボウイルスはネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである。
別の態様において、本発明は、条虫糞便抗原、および条虫糞便抗原と特異的に結合する１つまたは複数の抗体を含む免疫複合体に向けられる。一実施形態において、条虫糞便抗原は、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、Ｔａｅｎｉａ ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ、またはＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ由来の糞便抗原であり得る。別の実施形態において、抗体は、条虫の全抽出物、条虫のＥ／Ｓ材料、条虫の虫洗浄液（Ｗｏｒｍ Ｗａｓｈ）、または条虫のＴＣＡ可溶性材料での免疫化により得られる。別の実施形態において、抗体は、条虫感染哺乳動物から得られた糞便試料などの試料由来の条虫糞便抗原と特異的に結合する。いくつかの実施形態において、哺乳動物は、回虫、鞭虫、および鉤虫のうちの１つまたは複数にさらに感染しており、抗体は、試料に存在し得る回虫、鞭虫、または鉤虫のうちの１つまたは複数由来のいかなる抗原とも特異的に結合しない。いくつかの実施形態において、抗体を、検出可能に標識し、または固体支持体と結合させることができる。
別の態様において、本発明は、条虫糞便抗原、条虫糞便抗原と特異的に結合する抗体、および条虫糞便抗原と結合するレクチンを含む免疫複合体に向けられる。レクチンは、１つの特定の型の糖鎖と特異的に結合することができ、または条虫糞便抗原上の２つ以上の糖鎖と結合することができる。
別の態様において、本発明は、試料由来の蠕虫抗原、例えば、糞便試料由来の糞便抗原に特異的に結合し、それを単離するためのデバイスであって、固体支持体を含み、固体支持体が、（ａ）第１の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；（ｂ）第２の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および（ｃ）第３の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第２の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体からなる群から選択される１つまたは複数の抗体をその上に固相化している、デバイスを提供する。デバイスは、例えば、ラテラルフローイムノアッセイデバイスまたはマイクロタイタープレートデバイスなどのＥＬＩＳＡデバイスであり得るが、それに限定されない。デバイスにより条虫について試験され得る試料には、糞便、消化管粘液、尿、全血、血清、乳房の乳、ならびに組織全体、例えば、乳腺、腸、肝臓、心臓、肺、食道、脳、筋肉、および眼由来の組織が挙げられるが、それらに限定されない。デバイスは、１つまたは複数の蠕虫の寄生体、蠕虫ではない寄生体、１つまたは複数のウイルス、１つまたは複数の真菌、１つまたは複数の原生動物、および１つまたは複数の細菌からなる群の１つまたは複数の検出のための１つまたは複数の試薬をさらに含み得るが、含む必要はない。いくつかの実施形態において、固体支持体はさらに、以下から選択される１つまたは複数の抗体をその上に固相化している：（ｉ）回虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫、鉤虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；（ｉｉ）鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫、鉤虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；（ｉｉｉ）鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫、回虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；（ｉｖ）Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；ならびに（ｖ）パルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびＧｉａｒｄｉａ属糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体。実施形態において、鉤虫はＡｎｙｃｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫はＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である。他の実施形態において、鉤虫はＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり；回虫はＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり；鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり；Ｇｉａｒｄｉａ属はＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり；パルボウイルスはネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである。
いくつかの実施形態において、固体支持体は、多重化を可能にするために、２つ以上の抗体、３つ以上の抗体、４つ以上の抗体、５つ以上の抗体、６つ以上の抗体、７つ以上の抗体、または８つ以上の抗体をその上に固相化している。
別の態様において、本発明は、糞便試料から１つまたは複数の条虫糞便抗原の存在または非存在を検出するためのデバイスであって、固体支持体、レクチン、ならびに（ａ）第１の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；（ｂ）第２の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および（ｃ）第３の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫種由来の糞便抗原にも第２の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体からなる群から選択される１つまたは複数の抗体を含み、固体支持体が、１つもしくは複数のレクチンまたは１つもしくは複数の抗体をその上に固相化している、デバイスを提供する。いくつかの実施形態において、レクチンが固体支持体上に固相化されている。他の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体が、固体支持体上に固相化されている。他の実施形態において、デバイスは、１つまたは複数の種の条虫の抗原をさらに含み、１つまたは複数の種の条虫の抗原が、抗体と特異的に結合する。いくつかの実施形態において、第１の条虫種はＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓであり、第２の条虫種はＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓであり、および／または第３の条虫種はＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである。
なお別の態様において、本発明は、試料において１つまたは複数の蠕虫抗原、例えば、糞便試料由来の糞便抗原の存在または非存在を検出する方法であって、（ａ）（ｉ）第１の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；（ｉｉ）第２の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および（ｉｉｉ）第３の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第２の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体からなる群から選択される１つまたは複数の抗体と哺乳動物由来の試料を接触させるステップ；（ｂ）試料において、もしあれば、糞便抗原の存在下で、抗体−糞便抗原複合体を形成するステップ、ならびに（ｃ）もしあれば、抗体−糞便抗原複合体の存在または非存在を検出するステップを含む、方法を提供する。条虫の糞便抗原には、Ｔａｅｎｉａ種の糞便抗原、例えば、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ；ならびにＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ種、例えば、Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍを挙げることができる。一実施形態において、複合体の存在または非存在を検出するステップはさらに、複合体の少なくとも１つと結合するレクチンを供給するステップを含む。いくつかの実施形態において、レクチンを、検出可能に標識し、または固体支持体上に固相化することができる。他の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体は、検出可能に標識されているか、または固体支持体上に固相化されている。いくつかの実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、固体支持体上に固相化することができ、レクチンを検出可能に標識することができる。他の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、検出可能に標識することができ、レクチンを固体支持体上に固相化することができる。
別の実施形態において、哺乳動物由来の糞便試料を少なくとも１つの抗体と接触させるステップの前に、方法は、糞便試料を１つまたは複数のレクチンと接触させるステップをさらに含む。１つまたは複数のレクチンを、検出可能に標識し、または固体支持体上に固相化することができる。あるいは、第１、第２、および第３の抗体を、検出可能に標識し、または固体支持体上に固相化することができる。一実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、固体支持体上に固相化することができ、１つまたは複数のレクチンを検出可能に標識することができる。別の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、検出可能に標識することができ、１つまたは複数のレクチンを固体支持体上に固相化することができる。
一態様において、方法は、糞便の哺乳動物試料を条虫糞便抗原について試験するために行われる。しかしながら、方法は、糞便試料を試験するために行われることに限定されない。したがって、糞便に加えて、試料は、全血、血清、乳房の乳、ならびに組織全体、例えば、乳腺、腸、肝臓、心臓、肺、食道、脳、筋肉、および眼由来の組織であり得るが、それらに限定されない。
なお別の態様において、本発明は、哺乳動物が１つまたは複数の寄生虫に感染しているかどうかを診断する方法であって、（ａ）（ｉ）第１の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；（ｉｉ）第２の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および（ｉｉｉ）第３の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第２の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体からなる群から選択される１つまたは複数の抗体と哺乳動物由来の試料を接触させるステップ；（ｂ）試料において、もしあれば、糞便抗原の存在下で、抗体−糞便抗原複合体を形成するステップ；（ｃ）もしあれば、抗体−糞便抗原複合体の存在または非存在を検出するステップ；ならびに（ｄ）（ｉ）第１の条虫抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第１の条虫感染；（ｉｉ）第２の条虫抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第２の条虫感染；および（ｉｉｉ）第３の条虫抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第３の条虫感染を有すると哺乳動物を診断するステップ含む、方法を提供する。一実施形態において、２つ以上の抗体、３つ以上の抗体、４つ以上の抗体、５つ以上の抗体、６つ以上の抗体、７つ以上の抗体、または８つ以上の抗体が選択される。いくつかの実施形態において、複合体の存在または非存在を検出するステップはさらに、複合体の少なくとも１つと結合する１つまたは複数のレクチンを供給するステップを含む。いくつかの実施形態において、レクチンを、検出可能に標識し、または固体支持体上に固相化することができる。他の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体が、検出可能に標識されているか、または固体支持体上に固相化されている。いくつかの実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、固体支持体上に固相化することができ、レクチンを検出可能に標識することができる。他の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、検出可能に標識することができ、レクチンを固体支持体上に固相化することができる。
別の実施形態において、哺乳動物由来の糞便試料を少なくとも１つの抗体と接触させるステップの前に、方法は、糞便試料を１つまたは複数のレクチンと接触させるステップをさらに含む。レクチンを、検出可能に標識し、または固体支持体上に固相化することができる。あるいは、第１、第２、および第３の抗体を、検出可能に標識し、または固体支持体上に固相化することができる。一実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、固体支持体上に固相化することができ、レクチンを検出可能に標識することができる。別の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、検出可能に標識することができ、レクチンを固体支持体上に固相化することができる。
さらなる態様において、本発明は、１つまたは複数の寄生虫に感染した哺乳動物を診断および処置する方法であって、（ａ）（ｉ）第１の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；（ｉｉ）第２の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および（ｉｉｉ）第３の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第２の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体と哺乳動物由来の試料を接触させるステップ；（ｂ）試料において、もしあれば、糞便抗原の存在下で、抗体−糞便抗原複合体を形成するステップ；（ｃ）もしあれば、抗体−糞便抗原複合体の存在または非存在を検出するステップ；ならびに（ｄ）（ｉ）第１の条虫抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第１の条虫感染；（ｉｉ）第２の条虫抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第２の条虫感染；および（ｉｉｉ）第３の条虫抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第３の条虫感染を有すると哺乳動物を診断するステップ；ならびに（ｅ）第１、第２、もしくは第３の条虫感染またはそれらの組合せを有する哺乳動物を処置するために有効量の１つまたは複数の治療剤を投与するステップ含む、方法を提供する。一実施形態において、２つ以上の抗体が選択される。他の実施形態において、ステップ（ｅ）はさらに、１つもしくは複数の蠕虫の寄生体、１つもしくは複数の蠕虫ではない寄生体、１つもしくは複数のウイルス、１つもしくは複数の真菌、１つもしくは複数の原生動物、または１つもしくは複数の細菌による感染を処置するための、１つまたは複数の追加の治療剤を含む。他の実施形態において、ステップ（ｅ）はさらに、扁形動物の虫の寄生体、蠕虫の寄生体、蠕虫ではない寄生体、ウイルス、真菌、または細菌の中間宿主を制御、撃退、または殺害するための、１つまたは複数の治療剤を含む。中間宿主の代表的例には、条虫の卵を運ぶことができるノミおよびイヌのハジラミが挙げられる。
上記の方法のさらなる実施形態において、ステップ（ａ）の群はさらに以下からなる：（ｉ）回虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫、鉤虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；（ｉｉ）鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫、鉤虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；（ｉｉｉ）鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫、回虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；（ｉｖ）Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；ならびに（ｖ）パルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびＧｉａｒｄｉａ属糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体。いくつかの実施形態において、鉤虫はＡｎｙｃｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫はＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である。他の実施形態において、鉤虫はＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり；回虫はＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり；鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり；Ｇｉａｒｄｉａ属はＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり；パルボウイルスはネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである。したがって、糞便試料を、多重化を可能にするために、２つ以上の抗体、３つ以上の抗体、４つ以上の抗体、５つ以上の抗体、６つ以上の抗体、７つ以上の抗体、または８つ以上の抗体と接触させる。
上記方法のさらなる実施形態において、ステップ（ｄ）の診断することは、さらに以下を含む：回虫抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、回虫感染；鞭虫抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、鞭虫感染；鉤虫抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、鉤虫感染；Ｇｉａｒｄｉａ属抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、Ｇｉａｒｄｉａ属感染；およびパルボウイルス抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、パルボウイルス感染。
いくつかの実施形態において、複合体の存在または非存在を検出するステップはさらに、複合体の少なくとも１つと結合する１つまたは複数のレクチンを供給するステップを含む。いくつかの実施形態において、レクチンを、検出可能に標識し、または固体支持体上に固相化することができる。他の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体は、検出可能に標識されているか、または固体支持体上に固相化されている。いくつかの実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、固体支持体上に固相化することができ、レクチンを検出可能に標識することができる。他の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体を、検出可能に標識することができ、レクチンを固体支持体上に固相化することができる。
方法はまた、条虫での環境汚染について試験し、それらを識別するために用いられ得る。デバイスにより条虫について試験され得る環境試料には、庭、庭園、砂場、遊び場を含む居住環境からの土壌、分解物質、または糞便物質が挙げられるが、それらに限定されない。試験場所にはまた、公園、海辺、森、農場、またはイヌ、ネコ、もしくは条虫の他の哺乳動物宿主由来の糞便物質に曝された他の場所が挙げられ得る。屋内および屋外のネコ用のトイレからの糞もまた試験され得る。
なお別の態様において、本発明は、本発明の方法の１つまたは複数のステップを行うためのキットを含む。キットは、任意で、例えば、本発明のデバイス、および本発明の組成物の１つまたは複数、および本発明の方法を行うための使用説明書を含み得る。キットはさらに、任意で、例えば、デバイスの一部として用いられ、および／または本方法を行うのに用いられる、１つまたは複数の指示薬、１つまたは複数の抗体標識化合物、１つまたは複数の抗体、１つまたは複数の抗原捕獲試薬、１つまたは複数の阻害剤、および１つまたは複数の洗浄試薬を含み得る。
実施例１Ａに示されているように、本発明の方法に従うことによる、虫抽出物、および条虫感染が陰性または陽性であるイヌ由来の糞便抽出物に対する抗体ＡＤＸ１３１のＯＤ決定値を示す図である。陽性＝Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ由来の糞便抽出物（ＦＥＸ）；陰性＝Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓに感染していないイヌ由来のＦＥＸ；虫抽出物＝Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ虫抽出物（ＷＥ）。 実施例１Ａに示されているように、本発明の方法に従うことによる、虫抽出物、および条虫感染が陰性または陽性であるイヌ由来の糞便抽出物に対する抗体ＡＤＸ１３２のＯＤ決定値を示す図である。陽性＝Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ由来の糞便抽出物（ＦＥＸ）；陰性＝Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓに感染していないイヌ由来のＦＥＸ；虫抽出物＝Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ虫抽出物（ＷＥ）。 実施例１Ｂに示されているように、本発明の方法に従うことにより、条虫に感染したイヌの糞便抽出物を用いてＥＬＩＳＡアッセイが行われたマイクロタイタープレートを示す図である。Ｈ１１は陰性対照である。Ａ５、Ｂ６、Ｂ８、Ｅ６、およびＥ１０は、５匹のＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ由来の糞便抽出物である。他のウェルのそれぞれは、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、または回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ感染イヌ、または鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ感染イヌ、またはＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌのうちの１匹に由来の糞便抽出物を有する。 マイクロタイタープレート上にコーティングされた抗体ＡＤＸ１３１、および患者試料の添加後に適用されるＡＤＸ１３２−ＨＲＰコンジュゲートを用いる、サンドイッチ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの特異度を示す図である。アッセイは、実施例１Ｂに論じられているように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓ、加えて、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ由来のＦＥＸ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ由来のＦＥＸ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ由来のＦＥＸ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ由来のＦＥＸ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ由来のＦＥＸ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陰性イヌ由来のＦＥＸ、３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコの集合に由来のＦＥＸ、３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコの集合に由来のＦＥＸ、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ ＷＥ、および鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ ＷＥにおいて実行された。 マイクロタイタープレート上にコーティングされた抗体ＡＤＸ１８５を用い、続いて、患者試料を加え、その後、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートを加える、サンドイッチ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの感度を示す図である。アッセイは、実施例２Ｂ（パートＢ）に論じられているように、７匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコ、および３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコに由来のＦＥＸにおいて実行された。 マイクロタイタープレート上にコーティングされた抗体ＡＤＸ１８４、および患者試料の添加後に適用されるＡＤＸ１９３−ＨＲＰコンジュゲートを用いる、サンドイッチ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの特異度を示す図である。ＡＤＸ１９３は、下に記載されたＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳマウスｍＡｂである。アッセイは、実施例２Ｂ（パートＢ）に論じられているように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓ、加えて、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陰性イヌ、３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコの集合、および３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコの集合に由来の糞便抽出物において実行された。 実施例２Ｃ（パートＡ）に論じられているように、６匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコ由来の糞便抽出物、４匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコ由来の糞便抽出物、および１つのＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓタンパク質試料において実行されたＡＤＸ１８４／ＡＤＸ１９３−ＨＲＰ ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。 マイクロタイタープレート上にコーティングされたＡＤＸ１９１およびＨＲＰにコンジュゲートされたＡＤＸ１９４を用いた糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。どちらのマウスｍＡｂも３ｕｇ／ｍｌの濃度で用いられた。このＥＬＩＳＡは、実施例２Ｄに論じられているように、６匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコ由来の糞便抽出物、４匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコ由来の糞便抽出物、および１つのＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓタンパク質試料において実行された。 プレート上にコーティングされたＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂを用い、５ｕｇ／ｍｌでのＦＥＸと接触させ、その後、３ｕｇ／ｍｌでのＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートと接触させ、その後、発色基質と接触させる、ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、実施例３Ｂ（パートＡ）に論じられているように、数個の蠕虫種由来の虫抽出物：Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ ＷＥ、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ ＷＥ、鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ ＷＥにおいて実行された。 実施例３Ｅ（パートＡ）に論じられているように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｐＡｂをプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートと接触させ、その後、発色基質と接触させる、糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。アッセイは、実施例３Ｅ（パートＡ）に論じられているように、４匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌおよび３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ；Ｇｉａｒｄｉａ属とＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓに感染した１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓに感染した１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ、およびＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓとＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓに感染した１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌに由来の糞便抽出物において実行された。 プレート上にコーティングされたマウスｍＡｂ ＡＤＸ２２６を用い、ＦＥＸと接触させ、その後、マウスｍＡｂ ＡＤＸ２５１−ＨＲＰコンジュゲート、続いて、発色基質と接触させた、第１の糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。アッセイは、実施例３Ｆ（パートＡ）に論じられているように、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、５匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコに由来の糞便抽出物において実行された。 プレート上にコーティングされたマウスｍＡｂ ＡＤＸ２５１を用い、ＦＥＸと接触させ、その後、マウスｍＡｂ ＡＤＸ２２７−ＨＲＰコンジュゲート、続いて、発色基質と接触させた、第２の糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。アッセイは、実施例３Ｆ（パートＡ）に論じられているように、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、５匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコに由来の糞便抽出物において実行された。 プレート上にコーティングされたマウスｍＡｂ ＡＤＸ２５１を用い、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲート、続いて、発色基質と接触させた、第３の糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。アッセイは、実施例３Ｆ（パートＡ）に論じられているように、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、５匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコに由来の糞便抽出物において実行された。 実施例３Ｇ（パートＡ）に論じられているように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂ ＡＤＸ２２４、ＡＤＸ２２５、ＡＤＸ２２６、およびＡＤＸ２２７を個々にプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲート、続いて発色基質と接触させる、第１のセットの糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイ設定の結果を示す図である。 実施例３Ｇ（パートＡ）に論じられているように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂ ＡＤＸ２２６およびＡＤＸ２２７を個々にプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂ−ＨＲＰコンジュゲート ＡＤＸ２２７−ＨＲＰ、続いて、発色基質と接触させる、第２のセットの糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイ設定の結果を示す図である。 実施例３Ｈ（パート１）に論じられているように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂ ＡＤＸ２２６と結合する糞便抗原がグリコシル化されているかどうかを、市販キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ製のビオチン化レクチンキットＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ）を用いて、２１個の異なるレクチンの糞便抗原に結合する能力を試験することにより決定した結果を示す図である。 実施例３Ｈ（パート２）に論じられているように、抗体Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂと結合する糞便抗原がグリコシル化されているかどうかを、市販キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ製のビオチン化レクチンキットＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ）を用いて、糞便抗原に結合する能力について２１個の異なるレクチンを試験することにより決定した結果を示す図である。 実施例３Ｈ（パート３）に論じられているように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂおよびＡＤＸ１８７（Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂ）と結合する糞便抗原がグリコシル化されているかどうかを、市販キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ製のビオチン化レクチンキットＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ）を用いて、糞便抗原に結合する能力について２１個の異なるレクチンを試験することにより決定した結果を示す図である。 実施例４に論じられているように、一連のＴ．ｐ．、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、Ｄ．ｃ．、鉤虫、回虫、鞭虫、およびＧｉａｒｄｉａ属のＥＬＩＳＡアッセイが、様々な感染したイヌおよびネコの糞便抽出物を用いて行われた、マイクロタイタープレートを示す図である。以下の源由来の糞便抽出物が、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて試験された：Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ（図１９、列１）、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ（図１９、列２）、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図１９、列３）、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ（図１９、列４）、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図１９、列５）、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ感染ネコ（図１９、列６）、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ感染イヌ（図１９、列７）、回虫Ｔ．ｃａｔｉ感染ネコ（図１９、列８）、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ感染イヌ（図１９、列９）、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ感染ネコ（図１９、列１０）、Ｇｉａｒｄｉａ属感染イヌ（図１９、列１１）、Ｇｉａｒｄｉａ属感染ネコ（図１９、列１２）、および２匹のパルボウイルス感染ネコ（図１９、列１３および１４）。図１９において、列１〜１２は、単一のマイクロタイタープレートの画像であり、列１３および１４は別の異なるマイクロタイタープレートの画像である。 実施例５に論じられているように、Ｔａｅｎｉａ属由来、例えば、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、およびＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属由来、例えば、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍなどの２つまたは３つの条虫種を検出する能力がある一連のＥＬＩＳＡアッセイが、様々な感染したイヌおよびネコ由来の糞便抽出物を用いて行われた、マイクロタイタープレートを示す図である。以下の源由来の糞便抽出物が、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて試験された：４匹のＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ（図２０、列１、４、７、および１０）、４匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ（図２０、列２、５、８、および１１）、２匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図２０、列３および６）、２匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ（図２０、列９および１２）。図２０において、列１〜１２は単一のマイクロタイタープレートの画像である。
Ｉ．序論
本発明は、一般的に、哺乳動物から得られた糞便試料において条虫種を検出し、条虫種間を識別するための方法、デバイス、およびキットに向けられる。本発明は、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、およびＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍを含む様々な条虫種由来の条虫糞便抗原に関する。特に、本発明は、条虫感染を検出し、２つ以上の条虫種間を識別するための方法、デバイス、およびキットに関する。
本発明は、既存の顕微鏡観察技術に代わる優れた手段を提供する。これは、本発明が、以下である、哺乳動物由来の試料において条虫の存在または非存在を検出するためのデバイス、キット、および方法を提供するという理由により言えることである：（１）使いやすさと、一貫して信頼できる結果を生じることの両方であること；（２）哺乳動物が１つもしくは複数の条虫種ならびに／または鉤虫、回虫、鞭虫、および／もしくはイヌ糸状虫などの他の蠕虫の寄生体に感染しているかどうかに関わらず、哺乳動物において特定の条虫種の非存在または存在を確認することができること；（３）感染宿主の糞便中に卵子および片節が初めて現れる時点の前に条虫を検出することができること；ならびに（４）異なる条虫種、加えて、回虫、鞭虫、および鉤虫感染などの蠕虫の寄生体の間を識別することができること。
本発明は、条虫感染に特異的な組成物の予期せぬ性質の発見に一部、基づいている。具体的には、条虫特異的ポリペプチドに対して産生された（または条虫全体の抽出物、条虫のＥ／Ｓ材料、条虫の虫洗浄液、もしくは条虫のＴＣＡ可溶性材料に対して産生された）抗体が、哺乳動物において異なる種由来の条虫抗原を捕獲し、検出し、およびそれらの間を識別するために用いられ得ることが決定された。各型の条虫種に対する特異性は、驚くべきことであり、なぜなら、条虫は、条虫綱の動物と関連しており、これらの条虫種のいずれか１つから単離されたタンパク質に対して産生された抗体は、その他の条虫種、宿主抗原、または他の宿主成分の１つまたは複数と交差反応することが予想されるものであるからである。
卵および片節が糞便中で目に見える前に、哺乳動物において条虫抗原を捕獲および検出するためにこの抗体を用いることができることが、さらに決定された。感染後すぐに、かつ感染した哺乳動物の糞便中のいくらかの卵子の出現前に、条虫を検出するこの能力は驚くべきことであり、卵子および片節は一般的に、宿主が感染してから数週間後までは、感染宿主の糞便中に現れないからである。
したがって、本発明は、哺乳動物において異なる条虫種を特異的に捕獲し、検出し、それらの間を識別するための、抗体および／またはその断片を用いる方法、デバイス、およびキットを含む。１つまたは複数の他の条虫種または異なる虫型も存在する場合でさえも、特定の条虫種を検出および診断する本発明の能力は、その条虫、加えて、回虫、鞭虫、および／または鉤虫などの他の虫を哺乳動物から取り除くための処置を最適に選択する機会を、哺乳動物の介護者に与える。さらに、場合によっては、卵および片節が糞便に現れる前に条虫を検出する本発明の能力は、哺乳動物の病気が重くなる前に、介護者はそのような処置を開始する可能性をもたらす。糞便における卵子および片節の出現前の治療介入はまた、その外寄生が他の動物またはヒトに広がる可能性を大いに低下させ、または排除するだろう。
ＩＩ．用語の定義および使用
用語「本発明の組成物」は、本明細書で明確に記載され、暗に包含され、または別なふうに開示されている本発明の方法を行うことにより、哺乳動物から得られた試料において条虫の存在または非存在を検出するために用いることができる、核酸、ポリペプチド、糖タンパク質、糖鎖、糖脂質、抗体、ならびにそれらの核酸、ポリペプチド、糖タンパク質、糖鎖、糖脂質、および抗体のうちの１つまたは複数を含む混合物、ならびに１つまたは複数の他の化合物の全部を指す。
条虫を本発明により検出することができる、「哺乳動物由来の試料」は、条虫抗原であることができる、全ての身体的成分およびその抽出物、例えば、任意の流体、固体、細胞、または組織を含む。したがって、例示的な試料には、糞便、乳、全血およびその一部分、例えば、血清が挙げられるが、それらに限定されず、さらに、組織抽出物、例えば、乳腺、腸、肝臓、心臓、肺、食道、脳、筋肉、および眼由来の組織が挙げられる。試料は、哺乳動物から直接、採取され得、または試料は、哺乳動物に接触している何かから採取され得る。例えば、試料は、哺乳動物からの新鮮なまたは腐敗した糞便の落下物であり得る。別の例として、試料には、例えば、糞便などの哺乳動物によって置き去りにされ得る身体的成分と混合され得る、土壌、泥、砂、植物性材料、または任意の他の材料が挙げられ得る。そのようなものとして、試料は、森、農場、または居住環境、例えば、トイレ、庭、庭園、砂場、遊び場、公園、および海辺からの土壌、分解物質、または糞便物を含む、環境的源から採取され得る。試料の起源または内容を問わず、この試料は、本明細書で、「試料」、「哺乳動物試料」、「試験試料」、または「試験用試料」と呼ばれる場合がある。
本明細書で用いられる場合、「核酸」は、「遺伝子」、「ＤＮＡ」、「ｃＤＮＡ」、「ＥＳＴ」、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「ポリ核酸」、「ＲＮＡ」、および「ｍＲＮＡ」と同義であり、したがって、それらと交換可能に用いられる。核酸は、二本鎖型の場合もあるし、一本鎖型の場合もある。さらに、核酸は、例えば条虫全体またはその一部分から、天然で単離されるか、または、それは、組換え宿主生物体においてか、もしくは当業者に知られた任意の他の人工的手段によるかのいずれか、例えば、ＰＣＲに基づいた技術を用いること、その核酸を合成するトランスジェニック生物体を作製すること、ＤＮＡ合成機を用いること、もしくは任意の別の分子に基づいた技術により、人工的に合成される。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、アミノ酸残基の重合体を指すために本明細書で交換可能に用いられる同義語である。本発明のポリペプチド、ペプチド、およびタンパク質は、例えば条虫全体から、もしくは条虫の一部分から天然で単離され得るか、または組換え宿主生物体においてか、もしくは当業者に知られた任意の他の人工的手段によるかのいずれかで、人工的に合成され得るかのいずれかであり得る。本発明のポリペプチド、ペプチド、およびタンパク質は、グリコシル化され得る。
用語「抗体」または「本発明の抗体」は、特定の虫についての１つまたは複数の抗原と、その他の虫由来の抗原と結合することなく、特異的に結合することができる任意の抗体を指す。例えば、１つの条虫種に対する抗体は、その条虫種の抗原と特異的に結合することができるが、異なる条虫種由来のいかなる抗原とも結合することができない。本発明の抗体は、本発明の１つまたは複数の免疫原性ポリペプチド、糖タンパク質、糖鎖、または糖脂質に対して産生され得る。他に明記されない限り、本発明の抗体は２つ以上の異なる型の抗体の混合物を含み得ることは理解されるべきである。例えば、抗体は、２つの型の抗体の混合物であり得、２つの型の一方が、１つの特定の抗原と特異的に結合し、２つの型の他方が、ある他の抗原と特異的に結合する。
本明細書で用いられる場合、用語「第１の抗体」は、第１の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない１つまたは複数の抗体を意味する。
本明細書で用いられる場合、用語「第２の抗体」は、第２の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない１つまたは複数の抗体を意味する。
本明細書で用いられる場合、用語「第３の抗体」は、第３の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない１つまたは複数の抗体を意味する。
「本発明の免疫原性ポリペプチド」、およびより簡単に、「本発明のポリペプチド」は、本発明の抗体が産生され得る免疫原である。全ての「本発明のポリペプチド」は、免疫原性であり、したがって、本発明の抗体を生じさせるために宿主動物において免疫応答を誘発するのに用いられ得る。他に明記されない限り、本発明のポリペプチドが、複数の成分の混合された組成物のうちの１つの成分であり得ることは、理解されるべきである。
「免疫原」は、その作用剤に曝されている動物において免疫応答を誘発する能力がある、例えば、本発明の免疫原性抽出物、ポリペプチド、糖タンパク質、糖鎖、または糖脂質などの任意の作用剤である。
本明細書で用いられる場合、用語「条虫」は、Ｔａｅｎｉａ属およびＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属を含む腸内条虫などの扁形動物の虫の寄生体を指す。したがって、本明細書で用いられる場合、用語「条虫」は、条虫綱（ｃｅｓｔｏｄａ）の全体を指さず、むしろ、擬葉目（ｐｓｅｕｄｏｐｈｙｌｌｉｄｅａ）を含む真正条虫亜綱（ｅｕｃｅｓｔｏｄａ）を指す。条虫の代表的例には、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、Ｔａｅｎｉａ ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ、Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ、Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ ｍａｎｓｏｎｏｉｄｅ、Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ ｌａｔｕｍ、およびＳｐｉｒｏｍｅｔｒａ ｅｒｉｎａｃｅｉｅｕｒｏｐａｅｉが挙げられる。
「条虫糞便抗原」または「条虫由来の糞便抗原」は、条虫感染を有する哺乳動物の糞便中に存在し、本発明の抗体の１つまたは複数と特異的に結合することができる、任意の条虫産物である。例えば、条虫糞便抗原は、本発明のポリペプチドの１つまたは複数であり得るが、それらに限定されない。
本明細書で用いられる場合、用語「回虫」は、Ｔｏｘｏｃａｒａ属、Ｔｏｘａｓｃａｒｉｓ属、Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉｓ属、Ａｓｃａｒｉｄｉａ属、Ｐａｒａｓｃａｒｉｓ属、Ａｓｃａｒｉｓ属、Ａｎｉｓａｋｉｓ属、およびＰｓｅｕｄｏｔｅｒｒａｎｏｖａ属を含む、Ａｓｃａｒｉｄｉｄａ目の腸内回虫などの蠕虫を指す。したがって、例示的な回虫には、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉ、およびＴｏｘａｓｃａｒｉｓ ｌｅｏｎｉｎａが挙げられる。このように、本明細書で用いられる場合、用語「回虫」は、線形動物門（Ｎｅｍａｔｏｄａ）の全体を指すものではない。したがって、「回虫」は、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属、Ｕｎｃｉｎａｒｉａ属、Ｎｅｃａｔｏｒ属、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ属、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ属、Ｂｒｕｇｉａ属、またはＤｉｒｏｆｉｌａｒｉａ属のいかなるメンバーも含まない。
「回虫糞便抗原」または「回虫由来の糞便抗原」は、回虫感染を有する哺乳動物の糞便中に存在し、本発明の抗体の１つまたは複数と特異的に結合することができる、任意の回虫産物である。例えば、回虫糞便抗原は、ＤＩＶ６７２８の新規のＣ末端７ｋＤアイソフォーム（Ｔ．ｃａｎｉｓの排泄性／分泌性タンパク質であり、イヌが初めてＴ．ｃａｎｉｓに感染してから早くも３８日後にＴ．ｃａｎｉｓ感染イヌの糞便中に存在する）であり得るが、それに限定されない。したがって、「回虫糞便抗原」は、米国特許第７，９５１，５４７号に論じられているようにイヌ糞便中に観察されているＤＩＶ６７２８のこの新規のＣ末端７ｋＤアイソフォーム（本明細書では「Ｃｏｐｒｏ６７２８」と呼ぶ）であり得る。
本明細書で用いられる場合、用語「鞭虫」は、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ属およびＴｒｉｃｈｏｃｅｐｈａｌｕｓ属の腸内鞭虫などの蠕虫を指す。したがって、例示的な鞭虫には、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｃａｍｐａｎｕｌａ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｓｅｒｒａｔａ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｓｕｉｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｄｉｓｃｏｌｏｒ、およびＴｒｉｃｈｏｃｅｐｈａｌｕｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒｉｓが挙げられる。さらに、本明細書で用いられる場合、用語「鞭虫」は、線形動物門の全体を指すものではない。例えば、「鞭虫」は、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属、Ｕｎｃｉｎａｒｉａ属、Ｎｅｃａｔｏｒ属、Ｔｏｘｏｃａｒａ属、Ｔｏｘａｓｃａｒｉｓ属、Ａｓｃａｒｉｓ属、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ属、Ｂｒｕｇｉａ属、またはＤｉｒｏｆｉｌａｒｉａ属のいかなるメンバーも含まない。
「鞭虫糞便抗原」または「鞭虫由来の糞便抗原」は、鞭虫感染を有する哺乳動物の糞便中に存在し、本発明の抗体の１つまたは複数と特異的に結合することができる、任意の鞭虫産物である。例えば、鞭虫糞便抗原は、「ＤＩＶ６９０１」または「ＤＩＶ６９０２」であり得るが、それらに限定されず、以下、この特定の抗体を、米国特許第７，９５１，５４７号に論じられているように「抗ＤＩＶ６９０１」または「抗ＤＩＶ６９０２」と呼ぶ。
本明細書で用いられる場合、用語「鉤虫」は、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属、Ｎｅｃａｔｏｒ属、およびＵｎｃｉｎａｒｉａ属の腸内鉤虫などの蠕虫を指す。したがって、例示的な鉤虫には、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ ａｎｄ Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｐｌｕｒｉｄｅｎｔａｔｕｍ、Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、およびＵｎｃｉｎａｒｉａ ｓｔｅｎｏｃｅｐｈａｌａが挙げられる。さらに、本明細書で用いられる場合、用語「鉤虫」は、線形動物門の全体を指すものではない。例えば、「鉤虫」は、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ属、Ｔｒｉｃｈｏｃｅｐｈａｌｕｓ属、Ｔｏｘｏｃａｒａ属、Ｔｏｘａｓｃａｒｉｓ属、Ａｓｃａｒｉｓ属、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ属、Ｂｒｕｇｉａ属、またはＤｉｒｏｆｉｌａｒｉａ属のいかなるメンバーも含まない。
「鉤虫糞便抗原」または「鉤虫由来の糞便抗原」は、鉤虫感染を有する哺乳動物の糞便中に存在し、本発明の抗体の１つまたは複数と特異的に結合することができる、任意の鉤虫産物である。例えば、鉤虫糞便抗原は、ＡＳＰ５の新規のＮ末端２８ｋＤアイソフォーム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属の排泄性／分泌性タンパク質であり、イヌが初めてＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａに感染してから早くも９日後にＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属感染イヌの糞便中に存在する）であり得るが、それに限定されない。したがって、「鉤虫糞便抗原」は、米国特許第７，９５１，５４７号に論じられているようにイヌ糞便中に観察されているＡＳＰ５のこの新規のＮ末端２８ｋＤアイソフォーム（本明細書では「ＣｏｐｒｏＡＳＰ５」と呼ぶ）であり得る。
本明細書で言及される場合、用語「Ｇｉａｒｄｉａ属」は、Ｇｉａｒｄｉａ属の原生動物を指す。したがって、例示的なＧｉａｒｄｉａ種には、Ｇｉａｒｄｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓとしても知られたＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａが挙げられる。
「Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原」または「Ｇｉａｒｄｉａ属の糞便抗原」は、Ｇｉａｒｄｉａ属感染を有する哺乳動物の糞便中に存在し、本発明の抗体の１つまたは複数と特異的に結合することができる、任意のＧｉａｒｄｉａ属産物である。
「レクチン」は、特定の単糖またはオリゴ糖構造（糖鎖）を認識し、およびそれに結合するタンパク質である。レクチンは、通常、糖鎖ユニットについて２つ以上の結合部位を含有する。ある特定のレクチンの糖鎖結合特異性は、その糖鎖に結合するアミノ酸残基によって決定される。レクチンの糖鎖への結合強度は、分子相互作用の数と共に増加し得る。レクチンの糖鎖との結合の解離定数は約１０−５〜１０−７のＫｄである。レクチンは、当技術分野において知られた任意の型の標識、例えば、蛍光、化学発光、放射性、酵素、コロイド金属、放射性同位元素、および生物発光の標識で標識することができる。
本発明の実施形態において、用いられるレクチンは、条虫糞便抗原に特異的に結合するレクチンである。本発明の実施形態において、Ｏ−グリコシル化タンパク質に特異的に結合するレクチンが本発明において有用である。そのようなレクチンには、例えば、ＥＣＬレクチン（Ｅｒｙｔｈｉｎａ ｃｒｉｓｔａｇａｌｌｉ）、ＧＳＬ Ｉ（Ｇｒｉｆｆｏｎｉａ Ｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ Ｌｅｃｔｉｎ Ｉ）、ＧＳＬ ＩＩ（Ｇｒｉｆｆｏｎｉａ Ｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ Ｌｅｃｔｉｎ ＩＩ）、ジャカリン（ｊａｃａｌｉｎ）、ＬＣＡレクチン（Ｌｅｎｓ ｃｕｌｉｎａｒｉｓ）、ＲＣＡ １２３（Ｒｉｃｉｎｕｓ Ｃｏｍｍｕｎｉｓ）、ならびにＰＳＡレクチン（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ白血球凝集素）、ＷＧＡ（コムギ胚芽凝集素）、およびｓＷＧＡ（スクシニル化コムギ胚芽凝集素）が挙げられる。レクチンは、例えばＶｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ、ＵＳＡから市販されている。
ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、またはサルの条虫抗原上の糖鎖と特異的に結合するレクチンを用いることができる。
「に特異的な」、「特異的に結合する」、および「安定的に結合する」とは、例えば本発明の抗体、ポリペプチド、またはオリゴヌクレオチドなどの本発明の特定の組成物が、少なくとも１つの他の作用剤に対するより高い親和性で、１つまたは複数の他の作用剤を認識および結合することを意味する。一例として、本発明の抗体は、その抗体が、条虫ではない寄生虫由来の任意の他の抗原に対するより高い親和性で、それらの回虫抗原を認識し、それらと結合することができる時はいつでも、条虫抗原に「特異的である」、「特異的に結合する」、および「安定的に結合する」と言われる。そのような結合特異性は、当技術分野においてよく知られた方法論、例えば、ＥＬＩＳＡまたはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を用いて試験することができる。本発明の特定の組成物の結合特異性に関して観察された情報に基づいて、本発明の方法は、その組成物が特定の作用剤と結合するのを可能にする（および、したがって、そのようなそれとの結合の検出を可能にする）条件下だが、それらの条件が維持される間、他の作用剤に有意に結合することを可能にしない条件下で行うことができる。一例として、本発明の方法は、本発明の抗体が、特定の試料に存在するある種の条虫の抗原のうちの１つまたは複数の抗原と結合するのを可能にする（および、したがって、そのようなそれらとの結合の検出を可能にする）が、その試料に存在し得る他の条虫種由来のいかなる抗原とも他の蠕虫種由来のいかなる抗原とも有意に結合するのを可能にしない条件下で、行うことができ、それにより、条虫の種と、回虫、鞭虫、および鉤虫との間の識別を可能にする。
「条虫を検出すること」は、例えば、本発明のポリペプチド、抗体、および核酸のうちの１つもしくは複数、または１つもしくは複数の条虫抗原を含む、１つまたは複数の条虫特異的産物を検出することを意味する。哺乳動物由来の試料中の１つまたは複数のそのような条虫産物の存在は、任意の条虫生物体全体またはその卵子もまたその試料に存在するかどうかに関わらず、その哺乳動物が条虫感染を有することを示している。逆に、哺乳動物由来の試料中の１つまたは複数のそのような条虫産物の非存在は、その哺乳動物が、条虫感染を有しないことを示している。
「処置」は、患者への有意な損傷を引き起こすことなく、寄生虫（蠕虫）または他の体内寄生体を、それらを制御するか、衝撃を与えるか、もしくは殺害するかのいずれかにより身体から低減もしくは排除し、および／または寄生虫もしくは他の体内寄生体の感染を伝染させることができる中間宿主、例えば、ノミなどの昆虫による外寄生を低減もしくは排除する、任意の適切な投与経路による患者へ治療剤の投与を意味する。
ＩＩＩ 本発明の抗体
本発明はさらに、本発明の１つまたは複数のポリペプチドの全部または一部に対して産生され、それらに特異的に結合する、抗体およびその抗原結合断片を含み、また、前記抗体およびその抗原結合断片を含む組成物も含む。哺乳動物から得られた試料と接触した時、これらの抗体および抗原結合断片は、特定の蠕虫抗原と特異的に結合することができる。例えば、条虫抗体および抗原結合断片は、試料に存在する条虫抗原に特異的に結合することができるが、試料に存在する可能性がある回虫、鉤虫、または鞭虫などの他の虫由来のいかなる抗原にも特異的に結合することができない。本発明の抗体は、１つもしくは複数の条虫抗原を捕獲するためにのみ、１つもしくは複数の条虫抗原を検出するためにのみ、またはより好ましくは、１つもしくは複数の条虫抗原を捕獲することと検出することの両方のために、用いられるのに適している。
本発明の抗体は、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む任意の抗体クラスに属し得、当業者に知られた様々な技術のいずれかにより調製され得る。（例えば、Ｄｅａｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ８０：２３〜３７（１９９８）；Ｄｅａｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ３２：３６１〜７９（１９９４）；Ｂａｉｌｅｇ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ３２：３８１〜８８（１９９４）；Ｇｕｌｌｉｃｋ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ３２：３８９〜９９（１９９４）；Ｄｒｅｎｃｋｈａｈｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ． ３７：７〜５６（１９９３）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １０：２３９〜６５（１９９２）；Ｗｒｉｇｈｔら Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １２：１２５〜６８（１９９２）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）；ならびにＭａｋｉｎｇ ａｎｄ Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、ＨｏｗａｒｄおよびＫａｓｅｒ編、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００６）参照、それぞれ、全体として参照により本明細書に組み入れられている。）
一つの技術において、本発明のポリペプチドが、例えば、ウサギ、マウス、ラット、モルモット、ヤギ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ロバ、イヌ、ネコ、ニワトリ、またはウマなどの宿主動物へ導入される。ポリペプチドを担体と会合させることにより、および／または宿主をアジュバントに曝すことにより、宿主動物において増強した免疫応答が誘発され得るが、ポリペプチドが担体と会合することも、宿主がアジュバントに曝されることも本発明は必要としないことは、理解されるべきである。この目的として用いられ得る例示的な担体は、ウシ血清アルブミン、ウシチログロブリン、およびダイズトリプシン阻害剤である。例示的なアジュバントには、フロイント完全または不完全アジュバント、およびＭＤＬ−ＴＤＭアジュバントが挙げられる。ポリペプチドがそのような担体と会合されているか会合されていないか、または宿主がアジュバントに曝されているか曝されていないかに関わらず、任意で、追加免疫が、その後に１回または複数回、採血されることになっている宿主細胞に関して行われ得る。その後、ポリペプチドに特異的に結合するポリクローナル抗体（ｐＡｂ）が、１回または複数回の採血から得られた抗血清から精製され得る。そのような精製は、例えば、ポリペプチドを固体支持体に会合させることを含む、アフィニティクロマトグラフィー技術を用いることにより、達成され得る。そのようなアフィニティクロマトグラフィー技術は、当業者によりよく知られている。
数個の実施形態において、本発明の条虫抗体は、下で記載されているように、ウサギにおいて、条虫全体の抽出物、条虫のＥ／Ｓ材料、条虫の虫洗浄液、または条虫のＴＣＡ可溶性材料でその宿主動物を免疫することにより産生される抗体である。
本発明の抗体は、任意で、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、およびその断片であり得ることもまた理解されるべきである。関心対象となるポリペプチドに特異的であるモノクローナル抗体は、例えば、関心対象となるポリペプチドに対する望ましい特異性を有する抗体を生成する細胞株を調製することにより、獲得され、および精製され得る。この種の細胞株は、前に記載されているように、以前にポリペプチドで免疫されている宿主動物から単離される特定の型の細胞（例えば、脾臓細胞）に由来し得る。そのような場合、その後、これらの細胞は、例えば、当業者に知られた様々な融合技術のいずれか１つを行うことにより、それらを骨髄腫細胞と融合することにより、不死化することができる。一つの例示的な技術において、免疫化宿主動物由来の細胞は、それらの融合パートナー、例えば骨髄腫細胞と、界面活性物質の存在下で短い期間、共インキュベートされ、その後、ハイブリッド細胞の増殖を支援する（しかしながら、骨髄腫融合パートナーの増殖を支援しない）培地上にプレーティングされる。そのような選択は、例えば、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ）を用いることにより、達成され得る。ハイブリッド細胞が選択中に出現した時、おそらく、選択工程を開始してから１週間または２週間後、単一のハイブリッドコロニー（およびそれらの上清）を、宿主動物が免疫された１つまたは複数のポリペプチドに結合するそれらの能力について試験される。最適な結合特異性を有するハイブリッドコロニーは、モノクローナル抗体が単離され得る最良の候補を表す。これらのモノクローナル抗体は、例えば、これらのコロニーが増殖する上清（すなわち、培地）から、当業者に知られた様々な技術のいずれか１つを用いることにより、直接的に単離され得る。
本発明の抗体はまた、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、または抗体の抗原結合断片であり得る。抗体の抗原結合断片は、無傷抗体の抗原結合部位または可変領域を含む、無傷抗体の一部分であり、一部分は、無傷抗体のＦｃ領域の重鎖定常ドメインを含まない。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片が挙げられる。動物または哺乳動物細胞からの産生および精製に加えて、抗体、抗体断片、または非抗体スキャフォールドが、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ、または細菌ディスプレイを含む、様々なインビトロテクノロジーに基づいて選択することができる。
二次抗体を含む抗体は、当技術分野において知られた任意の型の標識、例えば、蛍光、化学発光、放射性、酵素、コロイド粒子、放射性同位元素、および生物発光の標識で標識され得る。本発明の様々な実施形態において、本発明の抗体の１つまたは複数が、酵素、コロイド粒子、放射性核種、またはフルオロフォアで標識される。粒子性標識は、例えば、抗体にコンジュゲートされる、着色ラテックス粒子、色素ゾル、または金ゾルであり得る。
ＩＶ．本発明の方法、デバイス、およびキット
Ａ．本発明のデバイスおよびキット
本発明は、一態様において、試料から１つまたは複数の条虫抗原の存在または非存在を検出するデバイスであり、固体支持体を含み、固体支持体が、（ａ）第１の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；（ｂ）第２の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および（ｃ）第３の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第２の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体からなる群から選択される１つまたは複数の抗体；ならびに任意で、（ｄ）Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、および／または鉤虫糞便抗原の１つまたは複数の型をその上に固相化しており、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、および鉤虫糞便抗原の１つまたは複数の型が抗体と特異的に結合する。全体として参照により本明細書に組み入れられている、米国特許第７，９５１，５４７号参照。デバイスは、哺乳動物由来の試料において、条虫糞便抗原を特異的に結合し、任意のＧｉａｒｄｉａ属、回虫、鞭虫、および鉤虫の抗原から単離することを助けるように設定される。
一態様において、デバイスは、固体支持体を含み、本発明の１つまたは複数の抗体が固体支持体上に固相化されている。固体支持体は、例えば、マイクロタイタープレートのウェルの内部、底部表面、マイクロ粒子、マイクロ流体デバイスのチャネル、カートリッジ、膜、またはラテラルフローデバイスの一部として含まれる基板であり得るが、それらに限定されない。例示的なマイクロタイタープレートは、Ｉｍｍｕｌｏｎ １Ｂ ９６ウェルプレート（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡのＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから市販されている）であるが、Ｉｍｍｕｌｏｎ １Ｂ ９６ウェルプレートではない多種多様な他のマイクロタイタープレートが、その上への抗体の固相化を可能にし、したがって、本発明の固体支持体を供給するのに適していることを当業者が認識しているだろうことは理解されるべきである。
例示的なラテラルフローデバイスは、全体として参照により本明細書に組み入れられている、米国特許第５，７２６，０１０号に記載されているラテラルフローデバイスである。ラテラルフローアッセイを実施するためのデバイスは、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、ＭＥのＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．から市販されているＳＮＡＰ（登録商標）デバイスであり得る。しかしながら、ＳＮＡＰ（登録商標）デバイスではない、または米国特許第５，７２６，０１０号により記載されている多種多様な他のラテラルフローデバイスが、その上への抗体の固相化を可能にし、したがって、本発明のデバイスとして用いられるのに適していることを当業者が認識しているだろうことは理解されるべきである。これらのデバイスには、例えば、コロイド金テクノロジーを用いるラテラルフローデバイスを挙げることができる。
本発明のデバイスに用いられる抗体は、当技術分野において知られた任意の方法論、例えば、抗体を固体支持体へ、共有結合性または非共有結合性に、直接的または間接的に、付着させることにより、固体支持体上に固相化され得る。したがって、これらの抗体は、固体支持体に物理的吸着により（すなわち、化学的リンカーの使用なしに）付着し得るが、これらの抗体が、当業者に広く知られた任意の化学的結合方法により（すなわち、化学的リンカーを用いて）固体支持体に固相化され得ることもまた事実である。
いくつかの実施形態において、第１の抗体は、第１の条虫種の全抽出物、第１の条虫種のＥ／Ｓ材料、第１の条虫種の虫洗浄液材料、もしくは第１の条虫種のＴＣＡ可溶性材料に対して産生することができる；（ｂ）第２の抗体は、第２の条虫種の全抽出物、第２の条虫種のＥ／Ｓ材料、第１の条虫種の虫洗浄液材料、もしくは第２の条虫種のＴＣＡ可溶性材料に対して産生することができる；または（ｃ）第３の抗体は、第３の条虫種の全抽出物、第３の条虫種のＥ／Ｓ材料、第１の条虫種の虫洗浄液材料、もしくは第３の条虫種のＴＣＡ可溶性材料に対して産生することができる。
いくつかの実施形態において、固体支持体はさらに、以下から選択される１つまたは複数の抗体をその上に固相化されている：回虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫糞便抗原にも鉤虫糞便抗原にも特異的に結合する能力がない抗体；鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原にも鉤虫糞便抗原にも特異的に結合する能力がない抗体；鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫糞便抗原にも回虫糞便抗原にも特異的に結合する能力がない抗体；Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；ならびにパルボウイルスに特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびＧｉａｒｄｉａ属糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体。実施形態において、鉤虫はＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫はＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である。他の実施形態において、鉤虫はＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅである；回虫はＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉである；鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓである；Ｇｉａｒｄｉａ属はＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａである；およびパルボウイルスはネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである。
固体支持体が本発明の抗体の固相化のための任意の適切な材料であり得ることもまた理解されるべきである。例えば、固体支持体は、ビーズ、粒子、チューブ、ウェル、プローブ、ディップスティック、ピペットチップ、スライド、繊維、膜、紙、天然および変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ガラス、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、プラスチック、マグネタイト、または当業者に広く知られた任意の他の適切な材料であり得る。いくつかの実施形態において、固体支持体は、複数の粒子、マイクロ粒子、チップ、またはビーズを含み得る。複数の粒子、マイクロ粒子、チップ、またはビーズは、デバイスに付着し、またはデバイスと緩く会合し得る。複数の粒子、マイクロ粒子、チップ、またはビーズは、デバイスの表面上またはデバイス内に位置し得る。複数の粒子、マイクロ粒子、またはビーズは、デバイス上もしくはデバイス内に静止し得、またはそれらはデバイス内をもしくはデバイスを通って移動することができ得る。
デバイスは、任意で、本発明のデバイスへの適用前に、哺乳動物由来の試料と混合され得る１つまたは複数の標識抗原捕獲試薬を含んでもよい。標識抗原捕獲試薬が含まれる場合、標識抗原捕獲試薬は、デバイスの固体表面上に沈着または乾燥していてもよいし、していなくてもよい。「抗原捕獲試薬」は、関心対象となる１つまたは複数の抗原に特異的である任意の化合物を指す。標識抗原捕獲試薬は、哺乳動物の試料に加えられようが、デバイス上にあらかじめ沈着していようが、例えば、回虫抗原に特異的な標識抗体であり得、その標識抗体には、本発明の抗体が挙げられるが、それに限定されない。
デバイスはまた、任意で、結合していない材料（例えば、糞便抽出物の反応していない部分などの哺乳動物試料の反応していない部分、および結合していない抗原捕獲試薬など）を反応ゾーン（固相）から、運び出し（デバイスが、例えばＳＮＡＰ（登録商標）デバイスである場合など）、または別な方法でそれの除去を促進する（デバイスが、例えばマイクロタイタープレートを含む場合など）液体試薬を含んでもよい。液体試薬は、洗浄試薬であり、結合していない材料を反応ゾーンから除去するためだけの役割を果たし得、またはそれは、検出試薬を含み、結合していない材料を除去し、抗原検出を促進することの両方の役割を果たし得る。例えば、酵素とコンジュゲートされた抗原捕獲試薬の場合、検出試薬は、反応ゾーン（固相）におけるその酵素−抗体コンジュゲートとの反応により、検出可能なシグナルを生じる基質を含む。あるいは、放射性、蛍光、または光吸収性分子とコンジュゲートされた標識抗原捕獲試薬の場合、液体試薬は、単に、結合していない標識試薬を洗い流すことにより反応ゾーンにおける複合体形成の検出を促進する洗浄溶液として働く。
液体試薬はさらに、限定された量の「阻害剤」、すなわち、検出可能な最終生成物の発生をブロックする物質を含み得る。限定された量は、ほとんどまたは全部の過剰な、結合していない材料が第２の領域から運び出される（その時点で、検出可能な最終生成物が生成される）まで、最終生成物の発生をブロックするのに十分な阻害剤の量であると定義される。
本発明のデバイスはまた、１つまたは複数の抗原捕獲試薬とは異なる場所で固相化された様々な結合試薬を含み得る。例えば、標識抗体もしくは抗原捕獲試薬の種特異的（例えば、回虫特異的）抗体部分または酵素標識試薬の酵素部分を認識する免疫試薬（抗体、抗原、またはポリペプチド）が、デバイス内で試薬のバイアビリティを評価するための陽性対照として含まれ得る。例えば、陽性対照は、例えばヤギまたはマウスにおいて産生されている抗西洋ワサビペルオキシダーゼ抗体であり得る。追加として、抗原−抗体複合体の抗体部分が由来した種の非免疫メンバーから単離された試薬、例えば、抗体が、免疫複合体（すなわち、抗原−抗体複合体）形成の特異性を評価するための陰性対照として含まれ得る。
哺乳動物試料において条虫糞便抗原を特異的に結合し、単離するように設計されることに加えて、本発明のデバイスは、任意で、１つまたは複数の他の診断試験を実施できるように設計され得る。例えば、固体支持体はまた、回虫、鞭虫、イヌ糸状虫、および鉤虫などの１つもしくは複数の蠕虫、１つもしくは複数の虫でない寄生体、１つもしくは複数のウイルス（例えば、パルボウイルス）、１つもしくは複数の真菌、１つもしくは複数の原生動物（例えば、Ｇｉａｒｄｉａ属）、または１つもしくは複数の細菌の検出のための試薬も含み得る。１つもしくは複数の虫でない寄生体、１つもしくは複数のウイルス、１つもしくは複数の真菌、１つもしくは複数の原生動物、または１つもしくは複数の細菌の検出のための試薬は、例えば、１つまたは複数の抗体、あるいは、１つもしくは複数の虫でない寄生体、１つもしくは複数のウイルス、１つもしくは複数の真菌、１つもしくは複数の原生動物、または１つもしくは複数の細菌に特異的な抗体により認識される１つまたは複数の抗原であり得る。
一実施形態において、本発明のデバイスは、複数のウェルを含むマイクロタイタープレートであり、各ウェルが、その上に固相化された本発明の１つまたは複数の抗体を有する固体支持体を含む。
マイクロタイタープレートは、試料において１つまたは複数の蠕虫糞便抗原の存在または非存在を検出するために、本発明の方法と共に用いられ得る。例えば、条虫感染は、固体支持体上に固相化されている抗体を用いて１つまたは複数の条虫抗原を検出することにより、哺乳動物において診断され得る。一実施形態において、検出される抗原は糞便抗原である。「糞便抗原」は、宿主種（例えば、イヌまたはネコ）由来の糞便試料に存在し、抗体と特異的に結合することができる、条虫などの胃腸内寄生体の１つまたは複数の任意の産物である。したがって、糞便抗原は、虫全体、虫の卵、虫の断片、もしくは虫から分泌され、排泄され、もしくは脱落した産物、またはそれらの組合せであり得る。
マイクロタイタープレートに加えて、当技術分野において知られている複数のイムノアッセイを並行して実施する（すなわち、多重イムノアッセイ）ための多数の他の代替アプローチがある。典型的には、多重イムノアッセイは、複数のイムノアッセイの成分が流体連結している組成物またはデバイスにおいて、単一の容器で実施することができる。これらのテクノロジーは、アレイ、マイクロアレイ、および／またはマイクロビーズもしくはマイクロ粒子に基づき得る。アレイまたはマイクロアレイにおいて、捕獲試薬は、典型的には、膜などの単一デバイスの別々のエリアにスポットされ、または別な方法で沈着している。ビーズに基づいたアプローチにおいて、各アッセイについての捕獲試薬は、ビーズに付着しており、各アッセイのビーズは、他のアッセイのビーズと識別できる。その識別は、光の色、物理的位置、バーコードなどにより生じ得る。例として、Ｔｉｇｈｅ，Ｐ．Ｊ．、Ｒｙｄｅｒ，Ｒ．Ｒ．、Ｔｏｄｄ，Ｉ．、およびＦａｉｒｃｌｏｕｇｈ，Ｌ．Ｃ． （２０１５）、ＥＬＩＳＡ ｉｎ ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｅｒａ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ ａｎｄ ｐｉｔｆａｌｌｓ． Ｐｒｏｔ．Ｃｌｉｎ．Ａｐｐｌ．、９：４０６〜４２２． ｄｏｉ：１０．１００２／ｐｒｃａ．２０１４００１３０参照。
多数のそのような多重化プラットフォームが市販されている。例には、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）（例えば、米国特許第７，５２３，６３７号参照）；πＣｏｄｅ（商標）ＭｉｃｒｏＤｉｓｃｓ（Ｐｌｅｘｂｉｏ、例えば、米国特許出願第ＵＳ２０１４／０２７４７７８号参照）；バーコード付き磁気ビーズおよびそれらを用いたアッセイを実行するための方法および装置（例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏＣｏｄｅ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎｔａ Ｆｅ Ｓｐｒｉｎｇｓ、ＣＡ、ＵＳＡ；磁気バーコード付きチップ（例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏＣｏｄｅ，Ｉｎｃ．；例えば、米国特許第８，２３２，０９２号）；マイクロ流体試験ストリップ（例えば、ＬｕｍｉｒａＤｘ（登録商標）、米国特許第９，９１９，３１３号）；および平面光デッキテクノロジー、例えば、ＬｉｇｈｔＤｅｃｋ（登録商標）（ｍＢｉｏ（登録商標）、米国特許第９，７３９，７１４号）が挙げられる。追加の多重イムノアッセイテクノロジーには、ＭＵＬＴＩ−ＡＲＲＡＹ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ、ＵＳＡ）、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ（登録商標）Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）、Ａｃｃｅｓｓ ２（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）；およびＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘ（登録商標）およびＰｒｏＱｕａｎｔｕｍ（登録商標）テクノロジー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）（Ｆｕ Ｑ、Ｚｈｕ Ｊ、Ｖａｎ Ｅｙｋ ＪＥ． Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｐｌａｔｆｏｒｍｓ． Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ． ２０１０ Ｆｅｂ；５６（２）：３１４〜８． ｄｏｉ：１０．１３７３／ｃｌｉｎｃｈｅｍ．２００９．１３５０８７参照）が挙げられる。
本発明の別の態様において、糞便試料から１つまたは複数の条虫糞便抗原の存在または非存在を検出するためのデバイスは、固体支持体、１つまたは複数のレクチン、および以下からなる群から選択される１つまたは複数の抗体を含む：（ａ）第１の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；（ｂ）第２の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および（ｃ）第３の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫種由来の糞便抗原にも第２の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体。一実施形態において、固体支持体は、１つ以上の抗体、２つ以上の抗体、３つ以上の抗体、４つ以上の抗体、５つ以上の抗体、６つ以上の抗体、７つ以上の抗体、または８つ以上の抗体をその上に固相化している。標識レクチンは、検出のために、固相化された抗体により捕獲された条虫糞便抗原上の糖鎖と結合することができる。別の実施形態において、レクチンは、固体支持体上に固相化することができる。固相化されたレクチンは、条虫糞便抗原を、存在しているならば、捕獲することができ、生じた複合体は、１つまたは複数の標識抗体により検出することができる。別の実施形態において、デバイスはさらに、１つまたは複数の種の条虫の抗原を含み、１つまたは複数の種の条虫の抗原は、抗体と特異的に結合する。
本発明はさらに、哺乳動物試料において異なる種の条虫を検出し、それらの間を識別するためのアッセイキット（例えば、製造品）を含む。いくつかの実施形態において、アッセイキットはさらに、哺乳動物試料において回虫、鞭虫、および／または鉤虫などの蠕虫の同時感染を検出および識別することができる。したがって、キットは、本発明の１つまたは複数のデバイスおよび／または組成物を含み得る。例えば、キットは、抗条虫抗体、および抗体の条虫抗原との結合を決定するための手段、および抗体の条虫抗原との結合を決定するための手段を含み得る。一つの特定の例において、そのようなキットは、１つまたは複数の異なる種の条虫に対する固相化された抗条虫抗体を有するデバイス、１つまたは複数の抗原捕獲試薬（例えば、固相化されていない標識抗原捕獲試薬および固相化された抗原捕獲試薬）、および洗浄試薬、加えて、望ましいまたは適切ならば、検出試薬、ならびに陽性および陰性対照試薬を含む。当業者に知られたバッファー、対照などの他の成分が、そのような試験キットに含まれ得る。様々な試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中の濃度を提供するように異なり得る。特に、試薬は、通常は凍結乾燥した、乾燥粉末として供給され得、それは、溶解により、試料と組み合わせるのに適切な濃度を有する試薬溶液を提供する。本キットはさらに、キットに含まれる本発明の任意のデバイスおよび／または組成物を使用するための使用説明書を含む、本発明の１つまたは複数の方法を行うための使用説明書を含み得る。
Ｂ．本発明の方法
本発明はさらに、試料において１つまたは複数の条虫抗原の存在または非存在を検出するための、本発明のデバイス、キット、および／または組成物の１つまたは複数を用いる方法を含む。したがって、方法は、非限定的にイヌ、ネコ、ブタ、ウシ、またはヒトを含む哺乳動物から得られる、例えば糞便試料などの試料において、１つまたは複数の種の条虫の存在または非存在を検出するために行われ得る。さらに、方法は、試料において、回虫、鞭虫、鉤虫、およびイヌ糸状虫などの蠕虫、Ｇｉａｒｄｉａ属などの蠕虫ではない寄生体、ならびにパルボウイルスなどのウイルスの１つまたは複数を検出するために行われ得る。
本発明の方法において、１つまたは複数の種の条虫の検出は、１つまたは複数の条虫抗原の存在または非存在を検出することにより達成され得る。条虫糞便抗原についての試験中の試料が糞便である場合、糞便の可溶性部分が、当技術分野において知られた任意のプロトコールにより収集され得る。例えば、本明細書における実施例セクションに記載された特定のプロトコールに加えて、試料の可溶性部分は、一般的に、濾過、抽出、遠心分離、または単純な混合、その後、重量測定的沈降により収集され得る。同様に、哺乳動物から糞便ではない試料を抽出および調製する様々な方法があることを当業者は認識しているだろう。例えば、試料は、哺乳動物により自然に排泄され、もしくは別なふうに放出される体液、または哺乳動物から人工的に得られる体液であり得る。そのような人工的抽出は、哺乳動物の乳を搾ることにより、または哺乳動物へ注射器を射して、体液を注射器へと引き出すことにより、行われ得る。いったん得られたならば、その流体は、任意で、分画され得る（例えば、血清が、全血から分画され、その後、試料として用いられ得る）。別の例として、試料は、哺乳動物、例えば哺乳動物の口腔を、綿球で採取することにより獲得され得る。なお別の例として、組織切片が生検により採取され得る。
方法は、抗原／抗体複合体、すなわち、免疫複合体が形成するのを可能にする条件下で、哺乳動物試料を、条虫糞便抗原に特異的な１つまたは複数の抗体と接触させることを含む。すなわち、抗体は、試料に存在する糞便抗原と特異的に結合する。当業者は、そのような抗原／抗体複合体結合を検出するために用いられ得るアッセイおよび条件に精通している。例えば、抗原／抗体複合体は、その抗原／抗体複合体と結合する二次抗体を用いて検出され得る。試料における抗原と抗体の複合体の形成は、当技術分野において知られた任意の適切な方法を用いて検出され得る。
さらに、１つの特定の反応において形成される抗体−抗原複合体の相対量は、その目的を達成するために当技術分野において知られた任意の方法論により、任意の他の反応において形成された量に対して測定され得る。試験中の試料が、特定の条虫抗体−抗原複合体を有することが決定された時、その形成された特定の複合体に基づいて、特定の条虫が宿主哺乳動物に存在すること、およびどの条虫が存在するのか（例として、条虫種Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ）を結論づけることができる。これが事実である場合、その試験試料が採取された哺乳動物が腸内条虫感染を有すると結論づけられ得る。試験されている哺乳動物が腸内条虫感染を有するという結論は、診断サービスプロバイダーにおける臨床医、または、例えばその哺乳動物の獣医などのその哺乳動物の介護者によりなされ得る。哺乳動物の介護者が、哺乳動物が条虫感染を有すること、およびどの条虫が存在するのかを決定した（または別な形で知らされた）時、その後、介護者は、一般的に寄生虫感染を取り除くというより、哺乳動物からその条虫を特異的に取り除くように最適に設計される処置コースを哺乳動物に受けさせ得る。さらに、本発明は、特定の条虫感染についての処置を受けた任意の動物が、その感染を脱していることを確認するために用いることができる。例えば、試料が、条虫と回虫の両方を含むが、鉤虫を含まないことを知る介護者は、その知識を用いて、その試料が採取された哺乳動物を、条虫に対して最適に有効な薬物および回虫に対して最適に有効な第２の薬物をその哺乳動物に投与することにより、条虫について特定的に処置することができる。そのような知識がない場合、介護者は、例えば、条虫のみ、回虫のみに対して最適に有効である薬物で、または条虫にも回虫にも有効ではない薬物で、別なふうにその哺乳動物を処置する可能性がある（そのような場合、その哺乳動物は、最適以下の処置を受けるリスクがある）。加えて、外寄生した動物またはそれの排泄物に接触し得るヒトは、その１つまたは複数の寄生体を得ることに対して警戒するよう忠告され得る。この関連において、ヒトにおいて重大な疾患（例えば、幼虫移行症）を引き起こし得る蠕虫の種を高特異性で決定することは重要である。
腸内寄生体の感染を患っている患者は、寄生体を患者から排除することが知られたある特定の治療用物質で処置され得る。したがって、糞便が、腸内寄生体由来の糞便抗原を含有することが見出されている患者は、その腸内寄生体を低減または排除することを目的として適切な治療で処置され得る。
条虫、鉤虫、鞭虫、および／または回虫などの腸内寄生虫の感染を患っている患者は、駆虫薬（ａｎｔｈｅｌｍｉｎｔｉｃ）（または駆虫薬（ａｎｔｈｅｌｍｉｎｔｈｉｃ））とも呼ばれる、虫下し薬で処置することができる。そのような駆虫薬は、当業者に広く知られている。条虫の処置のための駆虫薬には、非限定的に、プラジカンテル、ニタゾキサニド、アルベンダゾール、エプシプランテル、フェンベンダゾール、またはそれらの組合せが挙げられる。駆虫薬は、腸内寄生体の処置および／または防止において患者へ様々な適切な経路によって投与され得、その経路には、経口で、または非経口で、例えば、皮下に、静脈内に、筋肉内に、もしくは腹腔内に、または局所的に（皮膚性に）、例えば、露出した皮膚表面へ直接的に、などが挙げられる。
Ｇｉａｒｄｉａ属は、ジアルジア症として知られた下痢性病気を引き起こす顕微鏡レベルの寄生体である。Ｇｉａｒｄｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、およびＧｉａｒｄｉａ ｄｕｏｄｅｎａｌｉｓを含むＧｉａｒｄｉａ属は、感染したヒトまたは動物由来の糞便で汚染されている土壌、食物、または水の表面または中に見出される。Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原は、いくつかの市販の検査薬で検出することができ、その検査薬には、ＶｅｔＳｃａｎ（登録商標）イヌＧｉａｒｄｉａ高速検査薬（Ａｂａｘｉｓ、Ｕｎｉｏｎ Ｃｉｔｙ、ＵＳＡ）、Ａｎｉｇｅｎ（登録商標）高速ＣＰＶ−ＣＣＶ−Ｇｉａｒｄｉａ抗原検査薬（ＢｉｏＮｏｔｅ、Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）、ＳＮＡＰ（登録商標）Ｇｉａｒｄｉａ検査薬（ＩＤＥＸＸ、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、ＭＥ、ＵＳＡ）およびＥＬＩＳＡ試験によるＧｉａｒｄｉａ抗原（ＩＤＥＸＸ）、ＰｒｏＳｐｅｃＴ（登録商標）Ｇｉａｒｄｉａ／Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍマイクロプレートアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）、ならびにＷｉｔｎｅｓｓ（登録商標）Ｇｉａｒｄｉａ検査薬（Ｚｏｅｔｉｓ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）が挙げられる。（Ｂａｒｂｅｃｈｏ ＪＭ、Ｂｏｗｍａｎ ＤＤ、Ｌｉｏｔｔａ ＪＬ． Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｅｓｔｓ ａｎｄ ｉｎ−ｃｌｉｎｉｃ ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ Ｇｉａｒｄｉａ ｉｎ ｃａｎｉｎｅ ｆｅｃｅｓ． Ｐａｒａｓｉｔ Ｖｅｃｔｏｒｓ． ２０１８年８月１日；１１（１）：４４４． ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ１３０７１−０１８−２９９０−６． ＰＭＩＤ：３００６８３６４；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ６０９０８１４。）
Ｇｉａｒｄｉａ属感染の処置のための治療用物質は、当業者に広く知られている。Ｇｉａｒｄｉａ属感染は、いくつかの薬物、例えば、フェンベンダゾール、アルベンダゾール、メトロニダゾール、チニダゾール、ニタゾキサニド、パロモマイシン、キナクリン、およびフラゾリドン、フェバンテル、パモ酸ピランテル、プラジカンテル、またはそれらの組合せのうちの１つまたは複数で処置され得る。これらの薬物は、Ｇｉａｒｄｉａ属の処置および／または防止において患者へ様々な適切な経路によって投与され得、その経路には、経口で、非経口で、例えば、皮下に、静脈内に、筋肉内に、もしくは腹腔内に、または局所的に（皮膚性に）、例えば、露出した皮膚表面へ直接的に、などが挙げられる。
中間宿主は、１つまたは複数の蠕虫または蠕虫ではない寄生体、真菌、ウイルス、および細菌を患者に伝染させることに関与し得、したがって、治療介入の成功は、再感染を制御または防止するためのストラテジーを含む。例として、条虫感染は、ノミおよびイヌハジラミなどの中間宿主により伝染し得るため、条虫感染における治療介入の成功は、患者に存在する可能性がある任意の中間宿主（例えば、ノミ）外寄生を制御するためのストラテジーを含む。したがって、ノミなどの中間宿主を制御することは、患者の条虫の再感染を防止するのに役立つ。ノミ外寄生の処置または制御のための治療用物質は、当業者によく知られており、それには、セラメクチン、フィプロニル、イミダクロプリド、インドキサカルブ、ピレトリン、ペルメトリン、フルメトリン、スピノサド、ニテンピラム、アフォキソラネル（ａｆｏｘｏｌａｎｅｒ）、フルララネル（ｆｌｕｒａｌａｎｅｒ）、サララン（ｓａｒａｌａｎｅ）、ニテンピラム、メトプレン、ピリプロキシフェン、およびルフェヌロン、またはそれらの組合せが挙げられる。ノミ制御剤は、患者へ様々な適切な経路によって投与され得、その経路には、経口で、非経口で、例えば、皮下に、静脈内に、筋肉内に、もしくは腹腔内に、または局所的に（皮膚性に）、例えば、露出した皮膚表面へ直接的に、などが挙げられる。代表的な適切なノミ制御剤形には、スプレー、粉末、首輪、経口組成物、または局所的処置が挙げられる。
本発明の方法のステップは、（ａ）第１の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；（ｂ）第２の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および（ｃ）第３の条虫由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第２の条虫由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体を含む本発明のデバイスに哺乳動物試料を適用して、試料において、もしあれば、糞便抗原の存在下で、抗体−糞便抗原複合体を形成するステップ、ならびに、もしあれば、抗体−糞便抗原複合体の存在または非存在を検出するステップを含み得る。
いくつかの実施形態において、デバイスはさらに、以下から選択される１つまたは複数の抗体を含み得る：回虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫糞便抗原も鉤虫糞便抗原にも特異的に結合する能力がない抗体；鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原も鉤虫糞便抗原にも特異的に結合する能力がない抗体；鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫糞便抗原も回虫糞便抗原にも特異的に結合する能力がない抗体；Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；ならびにパルボウイルスに特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびＧｉａｒｄｉａ属糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体。実施形態において、鉤虫はＡｎｙｃｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫はＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である。他の実施形態において、鉤虫はＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅである；回虫はＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉである；鞭虫はＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓである；Ｇｉａｒｄｉａ属はＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａである；パルボウイルスはネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである。
一実施形態において、もしあれば、抗体−糞便抗原複合体の存在または非存在を検出するステップはさらに、複合体の少なくとも１つと結合する１つまたは複数のレクチンを供給するステップを含む。レクチンは、検出可能に標識することができ、または固体支持体上に固相化することができる。あるいは、第１、第２、および第３の抗体が、検出可能に標識することができ、または固体支持体上に固相化することができる。一実施形態において、第１、第２、および第３の抗体は、固体支持体上に固相化することができ、レクチンは検出可能に標識することができる。別の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体は、検出可能に標識することができ、レクチンは固体支持体上に固相化することができる。
別の実施形態において、哺乳動物由来の糞便試料を１つまたは複数の抗体と接触させるステップはさらに、糞便試料を１つまたは複数のレクチンと接触させるステップを含む。レクチンは、検出可能に標識することができ、または固体支持体上に固相化することができる。あるいは、第１、第２、および第３の抗体が、検出可能に標識することができ、または固体支持体上に固相化することができる。一実施形態において、第１、第２、および第３の抗体は、固体支持体上に固相化することができ、レクチンは検出可能に標識することができる。別の実施形態において、第１、第２、および第３の抗体は、検出可能に標識することができ、レクチンは固体支持体上に固相化することができる。
抗体およびレクチンは、固体支持体または基板、例えば、マイクロタイターウェル、ＳＮＡＰ（登録商標）デバイスの抗体固相化部分、磁気ビーズ、非磁気ビーズ、カラム、マトリックス、膜、合成または天然繊維（例えば、ガラスもしくはセルロースベースの材料またはポリエチレン、ポリプロピレン、またはポリエステルなどの熱可塑性ポリマー）で構成された繊維状マット、特定の材料（例えば、ガラスまたは様々な熱可塑性ポリマー）で構成された焼結構造、またはニトロセルロース、ナイロン、ポリスルホンなど（一般的には、本来、合成）で構成されたキャスト膜フィルムに直接的または間接的に付着し得る。これらの基板材料の全部は、適切な形、例えば、フィルム、シート、もしくはプレートの形をとって用いられ得、またはそれらは、適切な不活性担体、例えば、紙、ガラス、プラスチックフィルム、もしくは布の上へコーティングされ得、またはそれと結合し得、またはそれへラミネートされ得る。抗体、ペプチド、およびレクチンを固相上に固相化するための適切な方法には、イオン性、疎水性、共有結合性相互作用などが挙げられる。
しかしながら、本発明の方法は、固相または基板の使用を必要とはしない。本方法が、固相または基板の使用を含むことなく、回虫の存在または非存在を検出するために行われ得るいくつかの様式があることを当業者は認識しているだろう。一つの例にすぎないが、固相または基板の使用を必要としない免疫沈降方法が行われ得る。
本発明のいくつかの実施形態において、抗原／抗体複合体は、抗体に結合している酵素コンジュゲートなどの指示薬が、検出可能な反応を触媒する時、検出される。任意で、シグナル発生化合物を含む指示薬が、抗原／抗体複合体へ、検出可能な抗原／抗体／指示薬複合体の形成を可能にする条件下で、適用され得る。任意で、抗体は、抗原／抗体複合体の形成前に指示薬で標識されてもよい。
本発明の方法のいくつかにおける抗原／抗体複合体または抗原／抗体／指示薬複合体の形成は、具体的には、例えば、放射測定法、酵素法、化学発光法、比色法、比濁法、蛍光測定法、測光法、サイズ分離法、表面プラズモン共鳴法、または沈澱法により検出され得る。抗原／抗体複合体の検出はまた、シグナル発生化合物を含む指示薬と連結されている二次抗体の添加により達成され得る。ポリペプチド／抗体複合体と会合したシグナル発生化合物（標識）を含む指示薬は、上記の方法を用いて検出され得、それには、色素生産性物質、酵素コンジュゲートなどの触媒、フルオレセインおよびローダミンなどの蛍光化合物、ジオキセタン、アクリジニウム、フェナントリジニウム、ルテニウム、およびルミノールなどの化学発光化合物、放射性元素、直接視覚的標識、加えて、補助因子、阻害剤、磁気粒子などが挙げられ得る。酵素コンジュゲートの例には、アルカリフォスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼなどが挙げられる。特定の標識の選択は必須ではないが、それは、独力か、または１つもしくは複数の追加の物質と共にかのいずれかでシグナルを生じる能力がある。
本発明の方法には、競合アッセイ、直接的反応アッセイ、またはサンドイッチ型アッセイに基づいた方法、例えば、非限定的に、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）、赤血球凝集（ＨＡ）、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）、およびマイクロタイタープレートアッセイ（すなわち、マイクロタイタープレートの１つまたは複数のウェル内で行われる任意のアッセイ）が挙げられるが、それらに限定されない。本発明の一つのアッセイは、可逆性フロークロマトグラフィー結合アッセイを含み、それは、例えば、ＳＮＡＰ（登録商標）デバイスを用いることにより、実施され得る。米国特許第５，７２６，０１０号参照。
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、サンドイッチ型または競合型特異的結合アッセイを促進する。サンドイッチアッセイにおいて、抗原捕獲試薬が反応ゾーンに固相化されている。これらの抗原捕獲試薬は、条虫について試験されることになっている試料における抗原と特異的に結合し得る。試料由来の抗原の結合後、抗原捕獲試薬／抗原複合体は、任意の適切な方法により検出される。例えば、複合体は、標識特異的結合試薬（例えば、酵素−抗体コンジュゲート）と反応し、抗原が（例えば、基質との反応により）検出され得る。
本発明の方法の他の実施形態において、競合アッセイが実施される。競合アッセイにおいて、抗原捕獲試薬が反応ゾーンに固相化されており、試料由来の抗原と標識抗原（例えば、抗原−酵素コンジュゲート）に同時に接触させられる。反応ゾーンにおいて検出された標識の量は、試料中の抗原の量に反比例する。
本方法のいくつかの実施形態において、条虫糞便抗原に特異的な抗体が固相または基板に付着している。条虫由来の抗原を含む可能性がある試料が基板に加えられる。条虫抗原に特異的に結合する抗体が加えられる。抗体は、固相上に用いられた同じ抗体であってもよいし、またはそれらは、異なる源もしくは種由来であってもよい。さらに、これらの抗体は、酵素コンジュゲートなどの指示薬と連結され得る。洗浄ステップが、各添加前に実施され得る。発色団または酵素基質を加えて、色を発生させ得る。発色反応を停止させ得、その色を、例えば、分光光度計を用いて定量化し得、および／またはその色をヒトの目で主観的に評価し得る。
本方法の他の実施形態において、条虫糞便抗原に特異的な抗体が固相または基板に付着している。条虫抗原を含む可能性がある試料が基板に加えられる。糞便抗原に特異的に結合する第２の抗種抗体が加えられる。これらの第２の抗体は、固相抗体である種とは異なる種由来である。第２の抗体に特異的に結合し、固相抗体に特異的に結合することがない第３の抗種抗体が加えられる。第３の抗体は、酵素コンジュゲートなどの指示薬を含み得る。洗浄ステップは、各添加前に実施され得る。発色団または酵素基質を加え得、色を発生させ得る。発色反応を停止させ得、その色を、例えば、分光光度計を用いて定量化し得、および／またはその色をヒトの目で主観的に評価し得る。
特定の例において、本発明の方法は、ラテラルフローアッセイデバイスであるデバイスと連動して、調製された哺乳動物試料をデバイスのフローマトリックスへ第１の領域（試料適用ゾーン）に加えることにより、実施される。調製された試料は、流体流路において毛細管作用により、フローマトリックスの第２の領域へ運ばれ、その第２の領域において、試料中の抗原に結合し、それとの第１の複合体を形成する能力がある粒状標識が存在する。粒状標識は、例えば、回虫抗原に特異的な抗体とコンジュゲートされた着色ラテックス粒子、色素ゾル、または金ゾルであり得る。第１の複合体は、フローマトリックスの第３の領域に運ばれ、その第３の領域において、回虫抗原に特異的に結合する抗体が別個の位置で固相化されている。第２の複合体が、固相化抗体と第１の複合体の間で形成される。第２の複合体の一部である粒状標識は、ヒトの目によって直接、見えるようにすることができる。
各特定の虫の抗体は、反応ゾーン（固相）における固相化抗原捕獲試薬であり得る。第２の抗原捕獲試薬、すなわち、標識にコンジュゲートされている第２の特異的条虫抗体は、試料がデバイスに加えられる前に、試料に加えられてもよいし、または第２の抗原捕獲試薬をデバイスへ組み込むことができる。例えば、標識抗原捕獲試薬は、試料適用ゾーンと固相の間の流体連結を提供する流体流路上に沈着され、乾燥され得る。標識抗原捕獲試薬の試験試料との接触は、結果として、標識抗原捕獲試薬の溶解を生じ得る。
本発明の方法の一実施形態において、特定の虫の糞便抗原は、ＥＬＩＳＡにより検出される。本発明のＥＬＩＳＡ方法の特定の例は、本明細書に含まれる実施例セクションに記載されている。しかしながら、本発明は、それらの特定のＥＬＩＳＡ方法に関して記載されているが、代替の、追加の、または代わりのＥＬＩＳＡステップが、本発明のこの方法を通して達成される基本的目的から逸脱することなく、用いられ得ることを当業者は認識しているだろうことは理解されるべきである。
本発明の別の実施形態において、条虫糞便抗原は、例えば、ＳＮＡＰ（登録商標）デバイスなどのラテラルフローデバイスを用いることにより検出される。
さらに、条虫感染の検出のための本発明の方法は、他の生物体または状態の存在を検出するための他の診断アッセイと組み合わせることができる。例えば、本発明のアッセイは、１つもしくは複数の蠕虫、蠕虫ではない糞便寄生体、１つもしくは複数のウイルス、１つもしくは複数の真菌、１つもしくは複数の原生動物、１つもしくは複数の細菌、１つもしくは複数の血液によって感染する寄生体もしくは潜血、またはそれらの組合せを検出する試薬と組み合わせることができる。単一のアッセイデバイスにおいて２つ以上の固有の結合部位（例えば、ＳＮＡＰ（登録商標）アッセイデバイス上の２つの固有のスポット）を供給することにより、本発明は、単一試料由来の２つ以上の生物体の検出を可能にする。一実施形態において、単一の試料由来の３つの生物体からの過去または現在の感染または外寄生の検出のための３つの固有のスポット（そのスポットは、抗原結合試薬かまたは抗体結合試薬のいずれかである）がある（すなわち、同じ個々の試料が、単一のデバイス上で３つの捕獲試薬に曝される）。なお別の実施形態において、単一の試料由来の４つの生物体からの過去または現在の感染または外寄生の検出のための４つの固有のスポット（そのスポットは、抗原結合試薬かまたは抗体結合試薬のいずれかである）がある（すなわち、同じ個々の試料が、単一のデバイス上で４つの捕獲試薬に曝される）。しかしながら、同じデバイスは、４つより多い固有のスポットを含み得、および／または４つより多い生物体の検出を可能にし得ることは理解されるべきである。
１つもしくは複数の蠕虫、蠕虫ではない糞便寄生体、１つもしくは複数のウイルス、１つもしくは複数の真菌、１つもしくは複数の原生動物、または１つもしくは複数の細菌の検出のための試薬は、例えば、１つもしくは複数の抗体、あるいは１つもしくは複数の蠕虫、蠕虫ではない糞便寄生体、１つもしくは複数のウイルス、１つもしくは複数の真菌、または１つもしくは複数の細菌に特異的な抗体により認識される１つもしくは複数の抗原であり得る。いくつかの実施形態において、試薬には、１つもしくは複数の抗体、あるいは１つもしくは複数の蠕虫寄生体（例えば、回虫、鞭虫、鉤虫、およびイヌ糸状虫）、蠕虫ではない寄生体、１つもしくは複数のウイルス（例えば、イヌパルボウイルスまたはネコパルボウイルスなどのパルボウイルス）、１つもしくは複数の真菌、１つもしくは複数の原生動物（例えば、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａなどのＧｉａｒｄｉａ属）、または１つもしくは複数の細菌に特異的な抗体により認識される１つもしくは複数の抗原を挙げることができる。
方法はさらに、任意で、哺乳動物試料において１つまたは複数の条虫種の存在または非存在を決定するための条虫由来の１つまたは複数の核酸を用いることを含んでもよく、その核酸には、本発明の核酸が挙げられるが、それに限定されない。蠕虫の存在を決定するためのこれらの核酸のそのような使用は、抗体による１つまたは複数の条虫種の検出を含む本方法の任意の他の態様の実行の前、後、またはそれと同時に実行され得る。したがって、一態様において、特定の試料において１つまたは複数の条虫種が検出され、または検出されず、かつ試料が得られた哺乳動物が条虫感染を有するかまたは有しないかのいずれかと診断された後、試料（または診断された哺乳動物から後で得られた試料）は、本発明の任意の１つまたは複数の核酸を含む核酸の任意の１つまたは複数の存在または非存在について試験され得る。（蠕虫が、１つまたは複数の抗体を用いることにより検出された後で、）１つまたは複数の核酸を用いることにより特定の哺乳動物において特定の蠕虫を検出することができなかった誰でも、試料において検出可能な蠕虫核酸の出現前に抗体が蠕虫糞便抗原を検出していた可能性を考慮する必要がある。そのような場合、その哺乳動物の介護者は、その核酸が蠕虫を検出することができなかったという観察を無視して、抗体が実際、蠕虫を検出していたという観察に基づいて、蠕虫感染について特定的にその哺乳動物を処置するよう進めることを選択し得る。別の態様において、核酸が、特定の哺乳動物において蠕虫の存在または非存在を決定するために用いられ、その後、蠕虫の存在または非存在は、本発明の抗体を用いることによりさらに評価される。１つまたは複数の蠕虫核酸の検出は、当業者に知られた任意の核酸検出技術を用いることにより行われ得る。例えば、そのような検出は、ＰＣＲに基づいた技術、例えば、それに限定されないが、リアルタイムＰＣＲに基づいた技術を実施することにより行われ得る。例示的なＰＣＲに基づいた技術は、例えば、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）、第２版、ＢａｒｔｌｅｔｔおよびＳｔｉｒｌｉｎｇ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（２００３）；ならびにＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている；それらのそれぞれは、全体として参照により本明細書に組み入れられている。
本発明は、以下の実施例を参照して、具体的に記載されている；しかしながら、それは、それに限定されると解釈されるべきではない。
実施例Ａ
他に指示がない限り、以下の材料および技術が、下記のような実施例１〜５の１つまたは複数に記載されたデータを作製するために用いられた。
Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍの虫抽出物の調製
Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ虫抽出物を、Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．Ｈｕｒｓｔ、Ｔｅｘａｓ、Ｕ．Ｓ．Ａ．から購入した。虫抽出物を、４℃において１０，０００ｇで３０分間、遠心分離した。上清を収集し、ＰＢＳ、ｐＨ７．０へ透析し（膜分子量カットオフ１２〜１４ｋＤ、Ｐａｒｔ １３２６７８、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ、Ｒｅｐｌｉｇｅｎ、Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ、ＵＳＡ）、タンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを用いて決定した。
Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓの虫抽出物の調製
Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓを、Ｒｏｓｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｓａｉｎｔ Ｋｉｔｔｓから入手した。虫全体を、宿主由来のいかなる糞便材料も粘液も除去するために、室温で、冷たいＰＢＳ、ｐＨ７．０で数回、洗浄し、明らかな組織塊が肉眼で見えなくなるまで組織粉砕機を用いて４℃でホモジナイズした。ホモジナイズされた材料を、５０ｍｌ Ｆａｌｃｏｎチューブへ移し、破砕機を、冷たいＰＢＳ、ｐＨ７．０で２〜３回、すすいだ。粉砕機のすすぎ液と共に、ホモジナイズされた条虫を、４℃において１０，０００ｇで３０分間、遠心分離し、上清を収集し、その後、ＰＢＳ、ｐＨ７．０へ透析した（膜分子量カットオフ１２〜１４ｋＤ、Ｐａｒｔ １３２６７８、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ、Ｒｅｐｌｉｇｅｎ、Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ、ＵＳＡ）。タンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを用いて決定した。
Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡ可溶性画分の調製
この抗原を、水性バッファー溶液（リン酸バッファー、ｐＨ７．２）中で虫を破壊し、遠心分離して不溶性および粒状成分を除去し、３０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を１５％の最終濃度まで滴下し、全てのＴＣＡを加えた後、１８〜２７℃でさらに１５分間、撹拌し、１８〜２７℃でさらに４５分間、ベンチで静置し、遠心分離して、不溶性成分を除去し、Ｓｐｅｃｔｒａｐｏｒ Ｉ透析チューブ、ＭＷＣＯ：６〜８Ｋを用いて、水性バッファー溶液（０．０１Ｍリン酸バッファー、ｐＨ７．２）に対して透析し、凍結乾燥器を用いて凍結乾燥することにより調製した。
虫洗浄液の調製
凍結した生の虫検体を、ｐＨ７．２でのＰＢＳバッファー中で４回、すすいだ。最初の３回のすすぎステップからのバッファー溶液を捨てた。４回目のすすぎステップからのバッファー溶液を、１０，０００ｇで２０分間、遠心分離し、上清を収集した。上清を、ｉＣＯＮ濃縮器（ＭＷＣＯ：２０ｍＬ／９Ｋ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて濃縮した。生じた濃縮物を「虫洗浄液（Ｗｏｒｍ Ｗａｓｈ）」（ＷＷ）と名づけた。
Ｅ／Ｓ材料の調製
５％ＣＯ２の３７℃インキュベーター内で２週間、組織培養培地（Ｄ−グルコース、ゲンタマイシン、およびファンギゾンを含むＥＭＥＭ、ｐＨ７．２〜７．３）を含むＴ−１５０フラスコにおいて条虫を生かしておくことにより、排泄性／分泌性（Ｅ／Ｓ）材料を収集した。簡単に述べれば、生きている条虫を、温かい培地で数回、洗浄して、いかなる糞便残渣も除去し、１００ｍｌの温かい培地（ＥＭＥＭ）を含むＴ−１５０組織培養フラスコに入れた。条虫の生存率を、毎日検証し、培地を１日３回、交換した。用いられた培地をプールし、ｉＣＯＮ濃縮器（ＭＷＣＯ：９Ｋ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で濃縮し、生じた濃縮Ｅ／Ｓ材料を、抗体産生のために用いた。
ポリクローナル抗体（ｐＡｂ）調製
ポリクローナル抗体を、ＳＤＩＸ、ＬＬＣ（Ｗｉｎｄｈａｍ、Ｍａｉｎｅ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）において特定病原体除去（ＳＰＦ）ウサギを用いて産生させた。その免疫原は、虫全体の抽出物（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．、Ｈｕｒｓｔ、Ｔｅｘ．製のＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍおよびＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ；ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．製のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ）またはＥ／Ｓ材料（ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、Ｍａｉｎｅ）であった。簡単に述べれば、ウサギを、異なるアジュバント中の同じ免疫原に、皮下へ５０日間に渡って４回、曝露させた。免疫化手順の終わりに血清を回収した。
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）調製
マウスモノクローナル抗体を、特に断りのない限り、標準手順に従って作製した。簡単に述べれば、３〜５匹のＢａｌｂ／ｃマウスを免疫原で免疫し、免疫化スケジュールの完了後、脾臓細胞を採取した。脾臓細胞を、骨髄腫細胞と融合させた。数ラウンドのスクリーニング、ならびにＨＡＴ培地での選択、アイソタイピングおよびサブクローニングを通して、分泌される所望のｍＡｂを分泌する特定のハイブリドーマ細胞株を得た。
抗体精製および単離
ウサギポリクローナル抗体とマウスモノクローナル抗体の両方を、ＡＫＴＡ精製システムを用いるプロテインＧセファロース４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）アフィニティクロマトグラフィーで精製した。簡単に述べれば、ウサギ血清またはＴＣＦ（末期培養液）を、洗浄バッファーで希釈し、プロテインＧカラムに負荷した。カラムを洗浄バッファーで徹底的に洗浄し、その後、抗体をカラムから溶出した。溶出された抗体を、１Ｍ Ｔｒｉｓバッファー、ｐＨ８．０で中和し、その後、１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．２へ透析し、将来的な使用のために−２０℃で保存した。
糞便抽出物調製
新鮮な、保存処置がなされていないイヌまたはネコの糞便試料（１グラム）からの試料を、４ｍｌの希釈液（「希釈液」は０．０５Ｍ Ｔｒｉｓベース；１ｍＭ ＥＤＴＡ；０．４５％ Ｋａｔｈｏｎ；１６ｍｇ／ｍｌ 硫酸ゲンタマイシン；０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０；４０％ ウシ胎仔血清；１０％ ウサギ血清；および５％ マウス血清である）中に懸濁した。上清を４０００ｒｐｍで２０分間、遠心分離して、第１の上清が生じた。第１の上清を１００００ｇで１０分間、遠心分離して、第２の上清が生じ、それを本明細書では「糞便抽出物」と呼ぶ。
ＥＬＩＳＡアッセイ
精製されたポリクローナルＡｂまたはモノクローナルＡｂ（１００μｌ／ウェルおよび３μｇ／ｍｌ）を、Ｉｍｍｕｌｏｎ １Ｂ ９６ウェルプレート上に物理的吸着により４℃で一晩、固相化した。その後、プレートを、０．１Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．０中１％ ＢＳＡで、４℃、一晩、ブロッキングし、続いて、室温で乾燥させた。およそ１００μｌの糞便抽出物を各ウェルに加え、室温で１時間、インキュベートした。その後、ウェルを、当業者に知られた標準方法に従って、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０溶液で５回、洗浄した。別個の反応容器において、遊離ウサギｐＡｂ（ｍＡｂの場合、同じ標的に対する異なる抗体を用いた）に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で、架橋剤スクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）を用いることにより標識して、コンジュゲートを作製し、このコンジュゲートの３μｇ／ｍｌを、固相化ｐＡｂまたはｍＡｂを有する各ウェルに加えた。室温での３０分間のインキュベーション時間後、結合していないコンジュゲートを、当業者に知られた標準方法に従って、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０溶液を用いることによりウェルから洗い流した。その後、５０μｌのＴＭＢＬＵＥ（商標）ペルオキシダーゼ基質（ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、ＭＥ）を各ウェルに加え、プレートを、室温で１０分間、インキュベートした。１０分間のインキュベーション時間後、各酵素反応を０．１％ ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）で停止させた後、９６ウェルプレートの各ウェルの光学密度（ＯＤ）値を、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いることによって、標準分光光度法技術によりＡ６５０において測定して、各ウェルについての「ＯＤ６５０値」（または、より簡単に、「ＯＤ値」）を作成した。この設定において、９６ウェルプレートの任意の特定のウェルについて得られたＯＤ値は、ウェルに存在する特異的に結合した抗原の量に正比例した。実施例において特に断りのない限り、０．１以下のＯＤ値は、陰性結果とみなされ、ＯＤ値は陽性結果とみなされた。
ジャカリン−ビオチンでの糖鎖検証ＥＬＩＳＡを用いた糖鎖／グリコシル化特徴づけ
マウスＩｇＭ ｍＡｂ ＡＤＸ２２６コーティング化ｉｍｍｕｌｏｎ １Ｂプレートを、糖鎖検証ＥＬＩＳＡに用いた。およそ１００μｌの糞便抽出物を各ウェルに加え、室温で１時間、インキュベートした。その後、ウェルを、当業者に知られた標準方法に従って、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０溶液で５回、洗浄した。ジャカリン−ビオチン（０．２５ｕｇ／ｍｌ）を各ウェルに加え、その後、室温で１時間、インキュベートした。結合していないジャカリン−ビオチン（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、３０ Ｉｎｇｏｌｄ Ｒｏａｄ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）を、当業者に知られた標準方法に従って、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０溶液を用いることによりウェルから洗い流した。ストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲート（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、３０ Ｉｎｇｏｌｄ Ｒｏａｄ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）を各ウェルに加え、室温で３０分間、インキュベートした。結合していないストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲートを、再び、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０溶液を用いることによりウェルから洗い流した。その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲートとの３０分間の後、５０μｌのＴＭＢＬＵＥ（商標）ペルオキシダーゼ基質（ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、ＭＥ）を各ウェルに加え、プレートを、室温で１分間、インキュベートした。１分間のインキュベーション時間後、各酵素反応を０．１％ ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）で停止させた後、９６ウェルプレートの各ウェルの光学密度（ＯＤ）値を、糞便アッセイＥＬＩＳＡセクションにおいて、上記で例示されているように、Ａ６５０で測定した。
実施例１Ａ
Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓに対するマウスモノクローナル抗体の産生およびスクリーニング
マウスｍＡｂ（モノクローナル抗体）は、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓの虫抽出物（ＷＥ）（以下、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ抽出物またはＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓの抽出物）でのマウスの免疫化により産生され、ハイブリドーマを作製した。候補ハイブリドーマを、ＥＬＩＳＡ捕獲アッセイにおいてマイクロタイタープレート上にコーティングされた免疫原（すなわち、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓの抽出物）に結合する分泌ｍＡｂの能力についてスクリーニングした。このスクリーニングから、このスクリーニングにおいて陽性であった（すなわち、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ抽出物に結合することができた）百（１００）個のハイブリドーマ（すなわち、１００個のｍＡｂ）を、さらなる分析のために選択した。その１００個のｍＡｂ候補をさらに、捕獲アッセイスクリーニングにより、糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイにおいて機能するそれらの能力についてスクリーニングした。Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ抽出物でのウサギの標準免疫化により産生されたウサギポリクローナル抗体で、マイクロタイタープレートをコーティングした。イヌ糞便試料から作製されたＦＥＸ（糞便抽出物）を加えた。その糞便試料は、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓに感染していることがわかっているイヌ由来であり、ＩＤＥＸＸ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから受け取った。１００個の候補ｍＡｂ上清のうちの１つを各ウェルに加え、続いて、標識にコンジュゲートされたヤギ抗マウスＩｇＧを加えた。このアッセイにおいて５個のｍＡｂ（０２Ｄ０９、０３Ｈ０２、０７Ｃ０２、ＡＤＸ１３１、およびＡＤＸ１３）が特に良く機能し、さらなる分析のために選択した。
５個のｍＡｂを、サンドイッチアッセイにおいてお互いにペアにされた時に機能するそれらの能力についてさらにスクリーニングした。この目的のために、５個のｍＡｂのそれぞれを、マイクロタイタープレートのウェル上にコーティングし、ＦＥＸ（Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性試料：ｎ＝１０；Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陰性試料：ｎ＝１０）とインキュベートし、その後、標識にコンジュゲートされた５個のｍＡｂのうちの１個、またはＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥマウスｐＡｂとインキュベートした。５個のｍＡｂは、その他のｍＡｂのうちの少なくとも１個との組合せにおいて、よく機能し、したがって、さらなる研究のためにそれらを選択した。よく機能した５個のｍＡｂから、２個（ＡＤＸ１３１およびＡＤＸ１３２）をさらなる試験に選択し、その理由は、それらが、糞便抗原ＥＬＩＳＡにおいてお互いにペアにされた時、低いバックグラウンドおよび高いシグナルを生じたからである。
別のＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ＡＤＸ１３１およびＡＤＸ１３２をそれぞれ、０２Ｄ０９、０３Ｈ０２、０７Ｃ０２、ＡＤＸ１３１、およびＡＤＸ１３２のＨＲＰコンジュゲートとペアにした。Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂとの追加のペア形成を、陽性対照として用いた。ＡＤＸ１３１およびＡＤＸ１３２を、個々に、マイクロタイタープレートのウェル上にコーティングした；Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ由来のＦＥＸ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ非感染イヌ由来のＦＥＸ、またはＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ虫抽出物とインキュベートし、続いて、コンジュゲートおよびＨＲＰ基質とインキュベートした。５個の抗体ペア形成のそれぞれにおいて、ＡＤＸ１３１は、感染イヌ由来のＦＥＸおよび虫抽出物に関して、強いシグナルを生じた。５個の抗体ペア形成のうちの４個において、ＡＤＸ１３１は、非感染イヌ由来のＦＥＸに関して陰性結果（すなわち、閾値より下であるシグナル）を生じたが、ただし、０３Ｈ０２とのペア形成が、０．１ ＯＤの選択された閾値よりわずかに上であるシグナルを生じた（図１）。全ての５個の抗体ペア形成において、ＡＤＸ１３２は、感染イヌ由来のＦＥＸおよび虫抽出物に関して強いシグナルを生じた。全ての５個の抗体ペア形成において、ＡＤＸ１３２は、非感染イヌ由来のＦＥＸに関して低いバックグラウンドシグナルを生じた（図２）。
実施例１Ｂ
Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡ特異度および感度の評価
アッセイの特異度を評価するために、（プレート上にコーティングされたＡＤＸ１３１およびＡＤＸ１３２−ＨＲＰコンジュゲートを用いる）Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイを、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ（ｎ＝４４）、回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ（ｎ＝９）、鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ（ｎ＝３６）、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ（ｎ＝４４）、またはＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ（ｎ＝５）に感染したイヌ由来のＦＥＸに対して試験した。その結果（図３参照）は、全ての５個のＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ試料がアッセイにおいて陽性であり、その他の全部が陰性であったことを示した。Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡは、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍとも、回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓとも、鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓとも、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍとも交差反応しなかった。したがって、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイは、この実験において１００％の感度および特異度であった。アッセイの特異度を評価するために、サンドイッチ糞便抗原ＥＬＩＳＡを、マイクロタイタープレート上にコーティングされたＡＤＸ１３１で構築し、ＡＤＸ１３２−ＨＲＰコンジュゲートを、患者試料の添加後に適用した。アッセイを、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓ、加えて、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陰性イヌ、３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコの集合、および３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコの集合に由来のＦＥＸに関して実行した。前述のＷＥを、１μｇ／ｍｌタンパク質の濃度で用いた。追加として、アッセイを、２μｇ／ｍｌタンパク質および／または１０μｇ／ｍｌタンパク質における数個のＷＥ試料に関して実行した。これらのより高い濃度で実行されたＷＥ試料は、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ ＷＥ、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ ＷＥ、および鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ ＷＥであった。これらの試料の中で、アッセイは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥおよびＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌに関してのみ陽性であった（図４）。したがって、ＡＤＸ１３１／ＡＤＸ１３２−ＨＲＰ ＥＬＩＳＡは、この実験において非常に特異度が高かった。
（プレート上にコーティングされたＡＤＸ１３１、およびＡＤＸ１３２−ＨＲＰコンジュゲートを用いる）Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの特異度を評価するために、アッセイを、８２２個のイヌ試料由来のＦＥＸに関して実行した。これらの試料のうち、１個の試料が、顕微鏡観察によりＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性と確認されており（すなわち、片節が顕微鏡観察により観察された）、８２１個が、顕微鏡観察によりＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陰性と確認されていた。結果は、８２１個の顕微鏡観察による陰性試料のうち、８１８個が、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイにおいて陰性であり、３個が陽性であることを示した。顕微鏡観察による陽性試料は、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイにおいて陽性であった。したがって、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイは、この実験において９９．７％の特異度であった。
実施例１Ｃ
抗原特徴づけ：抗Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ｍＡｂ ＡＤＸ１３１と結合した抗原のグリコシル化
ｍＡｂ ＡＤＸ１３１と結合した糞便抗原がグリコシル化されているかどうかを決定するために、２１個の異なるレクチンの能力を、市販キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ製のビオチン化レクチンキットＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ）を用いて糞便抗原に結合するそれらの能力について試験した。アッセイを、製造会社の使用説明書に従って行った。簡単に述べれば、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ由来のＦＥＸを、ＡＤＸ１３１でコーティングされたプレートに加えた。洗浄後、レクチン：：ビオチンコンジュゲートを加え、続いて、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよび発色基質を加えた。この試験において、以下のレクチンが、高いシグナルおよび低いバックグラウンドを生じ、それらが、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原に結合したことを示している：ＷＧＡ、スクシニル化ＷＧＡ、ＰＳＡ、ＧＳＬＩＩ、およびＬＣＡ。
抗原特徴づけ：抗Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ｍＡｂ ＡＤＸ１３２と結合した抗原のグリコシル化
ｍＡｂ ＡＤＸ１３２と結合した糞便抗原がグリコシル化されているかどうかを決定するために、ＡＤＸ１３２が、２１個の異なるレクチンと結合したＦＥＸ物質に結合する能力を、市販キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ製のビオチン化レクチンキットＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ）を用いて試験した。アッセイを、製造会社の使用説明書に従って行った。簡単に述べれば、マイクロタイタープレートのウェルをレクチンのうちの１つでコーティングし、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ由来のＦＥＸを加え、続いて、ＡＤＸ１３２−ＨＲＰコンジュゲートおよび発色基質を加えた。この試験において、以下のレクチンが糞便抗原と結合した：ＷＧＡ、ＵＥＡ、およびＧＳＬＩＩ。
レクチン結合データは、ＡＤＸ１３１／ＡＤＸ１３２アッセイにより結合したＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原がグリコシル化されていることを示している。レクチン結合データはさらに、ＡＤＸ１３１／ＡＤＸ１３２糞便抗原が以下の部分を含有することを示している：非還元型ＧｌｃＮａｃ；還元型ＧｌｃＮａｃ；フコース；ＧＳＬ ＩＩ；およびマンノース。
実施例２Ａ
Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓに対するウサギポリクローナル抗体の調製
Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓの虫抽出物（ＷＥ）、Ｅ／Ｓ材料、および虫洗浄液（ＷＷ）を、上記のように調製した。ウサギを、上記のように、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓ、またはＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＷで免疫して、ポリクローナル抗体Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ、およびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＷウサギｐＡｂが産生された。
Ａ． Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイ、およびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイの最初の評価
Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ、およびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂでの糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの性能の最初の評価のために、７匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコおよび６匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコ由来のネコ糞便抽出物を試験した。
Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイ：
このＥＬＩＳＡアッセイにおいて、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂをプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートと接触させ、その後、発色基質と接触させた。このアッセイにおいて、全ての７個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性試料は陽性であり、一方、全ての６個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性試料は陰性と出た。したがって、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイについての感度および特異度はこの実験において１００％であった。
Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイ：
このＥＬＩＳＡアッセイにおいて、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂをプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートと接触させ、その後、発色基質と接触させた。このアッセイにおいて、全ての７個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性試料は陽性であり、一方、全ての６個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性試料は陰性と出た。したがって、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイについての感度および特異度はこの実験において１００％であった。
Ｂ． イヌおよびネコの糞便試料に関するＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイの性能
（セクションＡに記載されているような）Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂを用いた糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの性能を、イヌおよびネコの糞便抽出物に関してさらに評価した。イヌ試料セットは３１匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性イヌおよび７４匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性イヌに由来の糞便抽出物を含んだ。ネコ試料セットは１３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコおよび３９匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコに由来の糞便抽出物を含んだ。
イヌについて、３１個の陽性試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、８個の試料において陽性シグナルを生じた。７４個の陰性イヌ試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、６個の試料において陽性シグナルを生じた。したがって、この実験において、感度は、２５．８％であり、特異度は９１．９％であった。
ネコについて、１３個の陽性試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、１２個の試料において陽性シグナルを生じた。３９個の陰性試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、４個の試料において陽性シグナルを生じた。したがって、この実験において、感度は、９２．３％であり、特異度は８９．７％であった。
Ｃ． イヌおよびネコの糞便抽出物に関するＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイの性能
（セクションＡに記載されているような）Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂを用いた糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの性能を、イヌおよびネコの糞便抽出物に関してさらに評価した。イヌ試料セットは３１匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性イヌおよび７４匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性イヌに由来の糞便抽出物を含んだ。ネコ試料セットは１３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコおよび３９匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコに由来の糞便抽出物を含んだ。
イヌについて、３１個の陽性試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、４個の試料において陽性シグナルを生じた。７４個の陰性イヌ試料において、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、１個の試料において陽性シグナルを生じた。したがって、この実験において、感度は、１２．９％であり、特異度は９８．６％であった。
ネコについて、１３個の陽性試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、１２個の試料において陽性シグナルを生じた。３９個の陰性試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、３個の試料において陽性シグナルを生じた。したがって、この実験において、感度は、９２．３％であり、特異度は９２．３％であった。
Ｄ． イヌおよびネコの糞便試料に関するＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＷウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイの性能
Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＷウサギｐＡｂを用いた糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイの性能を、イヌおよびネコの糞便抽出物に関して評価した。イヌ試料セットは３１匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性イヌおよび７４匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性イヌに由来の糞便抽出物を含んだ。ネコ試料セットは１３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコおよび３９匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコに由来の糞便抽出物を含んだ。
イヌについて、３１個の陽性試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＷウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、１６個の試料において陽性シグナルを生じた。７４個の陰性イヌ試料において、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、３個の試料において陽性シグナルを生じた。したがって、この実験において、感度は、５１．６％であり、特異度は９８．６％であった。
ネコについて、１３個の陽性試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＷウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、１２個の試料において陽性シグナルを生じた。３９個の陰性試料の中で、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＷウサギｐＡｂ−ウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイは、３個の試料において陽性シグナルを生じた。したがって、この実験において、感度は、９２．３％であり、特異度は９５．９％であった。
実施例２Ｂ
Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥおよびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓに対するマウスポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の調製
Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓの虫抽出物（ＷＥ）およびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓのＥ／Ｓ材料を、上記のように調製した。上記のように、マウスを、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥまたはＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓで免疫して、マウスポリクローナル抗体Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥマウスｐＡｂおよびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳマウスｐＡｂが産生された。これらのポリクローナル抗体は、免疫原がマイクロタイタープレート上にコーティングされている時、それらのそれぞれの免疫原と特異的に結合した。
Ａ． Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥマウスｍＡｂの調製
ハイブリドーマは、上記のようにＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥで免疫されたマウスに由来していた。生じたマウスモノクローナル抗体（マウスｍＡｂ）分泌性ハイブリドーマから、以下の２個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥマウスｍＡｂを選択し、それらが、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて高いシグナルおよび低いバックグラウンドを生じたからである：ＡＤＸ１８４（ＩｇＧ）およびＡＤＸ１８５（ＩｇＭ）。
Ｂ． Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥマウスｍＡｂを用いた糞便抗原ＥＬＩＳＡの性能
感度を評価するために、ＡＤＸ１８５をマイクロタイタープレート上にコーティングし、その後、患者試料を加え、その後、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｊｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートを加えて、サンドイッチ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイを構築した。アッセイを、７匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコおよび３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコに由来のＦＥＸに関して実行した。図５に示されているように、アッセイは、７個の陽性試料のうち７個において、および３個の陰性試料のうち０個において、糞便抗原を検出した。したがって、ＡＤＸ１８５／Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰ ＥＬＩＳＡの感度は、この実験において、１００％であった。
特異度を評価するために、ＡＤＸ１８４をマイクロタイタープレート上にコーティングし、そして、患者試料の添加後、ＡＤＸ１９３−ＨＲＰコンジュゲートを適用することで、サンドイッチ糞便抗原ＥＬＩＳＡを構築した。ＡＤＸ１９３は、下記のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳマウスｍＡｂである。アッセイを、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓ、加えて、ｔｈｅ ｆｅｃａｌ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陰性イヌ、３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコの集合、および３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコの集合に関して実行した。前述のＷＥを、１μｇ／ｍｌタンパク質の濃度で用いた。追加として、アッセイを、１０μｇ／ｍｌタンパク質および２μｇ／ｍｌタンパク質での数個のＷＥ試料に関して実行した。これらのより高い濃度で実行されたＷＥ試料は、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ ＷＥ、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ ＷＥ、および鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ ＷＥであった。これらの試料の中で、図６に示されているように、アッセイは、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＷＥ（１０μｇ／ｍｌ）およびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコの集合に関してのみ陽性であった。したがって、ＡＤＸ１８４／ＡＤＸ１９３−ＨＲＰ ＥＬＩＳＡは、この実験において、非常に特異度が高かった。
Ｃ． Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳマウスｍＡｂの調製およびスクリーニング
ハイブリドーマは、上記のようにＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓで免疫されたマウスに由来していた。生じたマウスモノクローナル抗体（マウスｍＡｂ）分泌性ハイブリドーマから、以下の５個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／ＳマウスｍＡｂを選択した：ＡＤＸ１９０、ＡＤＸ１９１、ＡＤＸ１９２、ＡＤＸ１９３、ＡＤＸ１９４。これらの５つのｍＡｂをさらに、それぞれが抗Ｅ／ＳマウスｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートとペアにされた時のＥＬＩＳＡアッセイにおけるそれらの性能について評価した。５つのアッセイを、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓ、７匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコ由来の糞便抽出物、および３匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコ由来の糞便抽出物に関して実行した。５つのアッセイのそれぞれは、全ての７個の陽性ネコ試料を検出した。それぞれはまた、３個の陰性ネコ由来の試料に関して陰性であったが、ＡＤＸ１９３およびＡＤＸ１９４は、３個の陰性ネコ試料のうち１個に関してより高いバックグラウンドを有した。
実施例２Ｃ
ＡＤＸ１８４をＡＤＸ１９３−ＨＲＰと共に用いるＥＬＩＳＡの性能
ＥＬＩＳＡを、マイクロタイタープレート上にコーティングされたＡＤＸ１８４、およびＨＲＰにコンジュゲートされたＡＤＸ１９３を用いて構築した。両方のマウスｍＡｂを５μｇ／ｍｌの濃度で用いた。
ＡＤＸ１８４／ＡＤＸ１９３−ＨＲＰ ＥＬＩＳＡを、６匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコ由来の糞便抽出物、４匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコ由来の糞便抽出物、および１個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓタンパク質の試料に関して実行した。図７に示されているように、アッセイは、全ての６個の陽性糞便抽出物およびＥ／Ｓ試料において糞便抗原を検出したが、４個の陰性糞便抽出物のいずれにおいても糞便抗原を検出しなかった。
ＡＤＸ１８４／ＡＤＸ１９３−ＨＲＰ ＥＬＩＳＡを、６８匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコ由来の糞便抽出物、および１０８匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性であるＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性のネコ由来の糞便抽出物に関して実行した。アッセイは、６８個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性試料のうち５５個において陽性シグナルを生じ（８０．９％感度）、１０８個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性試料のうち１個において陽性シグナルを生じた（９９．１％特異度；Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍとの０．９％交差反応性）。
実施例２Ｄ
ＡＤＸ１９１をＡＤＸ１９４−ＨＲＰと共に用いるＥＬＩＳＡの性能
糞便抗原ＥＬＩＳＡを、マイクロタイタープレート上にコーティングされたＡＤＸ１９１、およびＨＲＰにコンジュゲートされたＡＤＸ１９４を用いて構築した。両方のマウスｍＡｂを３μｇ／ｍｌの濃度で用いた。このＥＬＩＳＡを、６匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陽性ネコ由来の糞便抽出物、４匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ陰性ネコ由来の糞便抽出物、および１個のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ Ｅ／Ｓタンパク質の試料に関して実行した。図８に示されているように、アッセイは、全ての６個の陽性糞便抽出物およびＥ／Ｓ試料を検出したが、４個の陰性糞便抽出物のいずれにおいても糞便抗原を検出しなかった。
実施例３Ａ
Ａ． Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡ可溶性画分に対するウサギｐＡｂ（Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡウサギｐＡｂ）の調整
Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ虫のＴＣＡ画分を、上記のように調製し、それを用いて２匹のウサギを免疫した。これらのウサギのうちの１匹由来の抗血清を、さらなる分析のために選択した。
Ｂ． イヌおよびネコの試料に関するＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイの評価
この糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、上記のように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡウサギｐＡｂをプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートと接触させ、その後、発色基質と接触させた。
イヌ： Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイを、５８匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ由来の糞便抽出物に関して実行した；ＥＬＩＳＡは、５８個の試料のうち５７個において陽性シグナルを生じた。アッセイをまた、２７匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ由来の糞便抽出物に関して実行した；ＥＬＩＳＡは、２７個の試料のうち８個において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、９８．３％の感度および７０．４％の特異度であった。
ネコ： Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイを、３１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ由来の糞便抽出物に関して実行した；ＥＬＩＳＡは、３１個の試料のうち２８個において陽性シグナルを生じた。アッセイをまた、１３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ由来の糞便抽出物に関して実行した；ＥＬＩＳＡは、１３個の試料のうち５個において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、９０．３％の感度および６１．５％の特異度であった。
実施例３Ｂ
Ａ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ画分に対するウサギｐＡｂ（Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ）の調製
ＷＥを、上記のように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ虫（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ）から調製し、それを用いて、２匹のウサギを免疫した。これらのウサギのうちの１匹由来の抗血清をさらなる分析のために選択した。
Ｂ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイの評価
このＥＬＩＳＡアッセイにおいて、上記のように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂをプレート上にコーティングし、５μｇ／ｍｌでのＦＥＸと接触させ、その後、３μｇ／ｍｌでのＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートと接触させ、その後、発色基質と接触させた。このＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイを、数個の蠕虫種由来の虫抽出物：Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＷＥ、Ｔ．ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ ＷＥ、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥ、回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ ＷＥ、鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ ＷＥに関して実行した。図９に示されているように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥだけが、このＥＬＩＳＡにおいて陽性シグナルを生じ、この実験におけるアッセイの特異性を実証した。
Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイの性能を、以下のように、追加の実験において評価した。アッセイを、４４匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌおよび４８匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ由来の糞便抽出物に関して実行した。アッセイは、４４個の陽性試料のうち１６個において、および０個の陰性試料において、陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、３６．４％の感度および１００％の特異度であった。
実施例３Ｃ
Ａ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ Ｅ／Ｓに対するウサギｐＡｂ（Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ）の調製
Ｅ／Ｓを、上記のように、イヌ由来のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ虫から調製し、それを用いて、２匹のウサギを免疫した。これらのウサギのうちの１匹由来の抗血清をさらなる分析のために選択した。
Ｂ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ Ｅ／ＳウサギｐＡｂ ＥＬＩＳＡアッセイの評価
この糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、上記のように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ Ｅ／ＳウサギｐＡｂをプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートと接触させ、その後、発色基質と接触させた。
アッセイを、７匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ由来の糞便抽出物に関して実行した。アッセイは、７個の陽性試料のうち４個において陽性シグナルを生じた。アッセイは、４匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌのうちの１匹において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、５７．１％の感度および７５％特異度であった。
実施例３Ｄ
Ａ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥに対するウサギｍＡｂ（Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｍＡｂ）の調製
ＷＥを、上記のように、イヌ由来のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ虫全体から調製した。ウサギを、標準免疫化手順に従って、Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥで免疫した（ＳＤＩＸ、Ｗｉｎｄｈａｍ、Ｍａｉｎｅ、ＵＳＡ）。最初の免疫化から少なくとも３週間後の追加免疫の後、ウサギ由来の血液試料をモノクローナル抗体発生のために用いた（ＩｍｍｕｎｏＰｒｅｃｉｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｌｔｄ．（ＩＰＡ）、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｃｏｌｕｍｂｉａ、Ｃａｎａｄａ）。ウサギ由来のＢ細胞を収集し、Ｂ細胞培養上清を、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥコーティング化９６ウェルプレートにおいて評価し、二次抗ウサギＩｇＧ抗体で探索した。陽性ウェルからのおよそ５０μｌのＢ細胞上清を、様々な糞便抽出物を用いた二次スクリーニング（ＩＤＥＸＸ）において特異的結合について試験した。この二次スクリーニングからの最良の３２個の候補のＢ細胞を、クローニングのために溶解バッファー中に保存した。これらの３２個の候補からＲＮＡを単離し、ウサギ抗体重鎖可変領域および軽鎖（κ）可変領域を、別々の哺乳動物発現ベクター（ＩＰＡ）へクローニングした。抗体重鎖および軽鎖ベクターをトランスフェクションされた哺乳動物細胞から収集された組織培養上清を、様々な糞便抽出物を用いて再び、評価した。組換えウサギｍＡｂ ＤＮＡ構築物の上位の５個のクローンを、シーケンシングした（ＩＰＡ）。これらの５個のウサギｍＡｂクローンのうちの以下の２個を、さらなる分析のために選択した：ＲＤＸ１３およびＲＤＸ１２。
Ｂ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｍＡｂを用いたＥＬＩＳＡアッセイのイヌおよびネコ試料における評価
この一連の糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、上記のように、マウスｍＡｂ ＡＤＸ２２６をプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、ＲＤＸ１３−ＨＲＰコンジュゲートおよび／またはＲＤＸ１２−ＨＲＰコンジュゲートと接触させ、その後、発色基質と接触させた。
第１の実験において、ＲＤＸ１３−ＨＲＰコンジュゲートおよびＲＤＸ１２−ＨＲＰコンジュゲートを混合し、アッセイを、３８匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、２８匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ、２０匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および７匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコに由来の糞便抽出物に関して実行した。アッセイは、３８匹の陽性イヌのうちの２８匹、２８匹の陰性イヌのうちの２匹、２０匹の陽性ネコのうちの１８匹、および７匹の陰性ネコのうちの０匹において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、イヌ試料について７３．７％の感度および９２．９％の特異度、ならびにネコ試料について９０．０％の感度および１００％の特異度を生じた。
第２、第３、および第４の実験において、ＲＤＸ１３−ＨＲＰコンジュゲートおよびＲＤＸ１２−ＨＲＰコンジュゲートを、個々に、および混合して、用い、アッセイを、３７匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、２８匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ、２１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および７匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ試料に関して実行した。
第２の実験において、ＲＤＸ１３−ＨＲＰを単独で用い、アッセイは、３７匹の陽性イヌのうち２０匹、２８匹の陰性イヌのうち１匹、２１匹の陽性ネコのうち１５匹、および７匹の陰性ネコのうちの０匹において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、イヌ試料について５４．１％の感度および９６．４％の特異度、ならびにネコ試料について７１．４％の感度および１００％の特異度を生じた。
第３の実験において、ＲＤＸ１２−ＨＲＰを単独で用い、アッセイは、３７匹の陽性イヌのうち１３匹、２８匹の陰性イヌのうち１匹、２１匹の陽性ネコのうち１６匹、および７匹の陰性ネコのうちの０匹において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、イヌ試料について３５．１％の感度および９６．４％の特異度、ならびにネコ試料について７６．２％の感度および１００％の特異度を生じた。
第４の実験において、ＲＤＸ１３−ＨＲＰコンジュゲートおよびＲＤＸ１２−ＨＲＰコンジュゲートを混合し、アッセイは、３７匹の陽性イヌのうち２２匹、２８匹の陰性イヌのうち１匹、２１匹の陽性ネコのうち１９匹、および７匹の陰性ネコのうちの０匹において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、イヌ試料について５９．５％の感度および９６．４％の特異度、ならびにネコ試料について９０．５％の感度および１００％の特異度を生じた。
実施例３Ｅ
Ａ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥに対するマウスｐＡｂ（Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｐＡｂ）の調製
ＷＥを、上記のように、イヌ由来のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ虫から調製し、それを用いて、マウスを免疫した。生じた抗血清、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｐＡｂを、下記のＥＬＩＳＡ実験に用いた。
Ｂ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｐＡｂを用いたＥＬＩＳＡアッセイのイヌおよびネコ試料における評価
この糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、上記のように、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｐＡｂをプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートと接触させ、その後、発色基質と接触させた。
アッセイを、４匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌおよび３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ；Ｇｉａｒｄｉａ属およびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓに感染した１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓに感染した１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ、およびＴｏｘｏｃａｒａ属およびＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓに感染した１匹のイヌに由来の糞便抽出物に関して実行した。図１０に示されているように、アッセイは、４匹の陽性イヌのうち４匹、１匹の陰性イヌのうち０匹、３匹の陽性ネコのうち３匹、および２匹の陰性ネコのうち０匹において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、高度の特異度および感度を生じた。
実施例３Ｆ
Ａ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡ可溶性画分に対するマウスｍＡｂ（Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡマウスｍＡｂ）の調製
ＴＣＡ可溶性画分を、上記のように、イヌ由来のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ虫から調製し、それを用いてマウスを免疫した（ＭＢＳ）。免疫されたマウスの脾臓を用いて、マウスｍＡｂ、ＡＤＸ２５１を作製し、それを以下のＥＬＩＳＡ実験に用いた。
Ｂ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＴＣＡマウスｍＡｂを用いたＥＬＩＳＡアッセイのイヌおよびネコ試料における評価
第１の糞便抗原ＥＬＩＳＡ設定において、マウスｍＡｂ ＡＤＸ２２６をプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、マウスｍＡｂ ＡＤＸ２５１−ＨＲＰコンジュゲート、続いて発色基質と接触させた。
アッセイを、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、５匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ；３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコに由来の糞便抽出物において実行した。図１１に示されているように、アッセイは、３匹の陽性イヌのうちの３匹、５匹の陰性イヌのうちの０匹、３匹の陽性ネコのうちの３匹、および１匹の陰性ネコのうちの０匹において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、高度の特異度および感度を生じた。
第２の糞便抗原ＥＬＩＳＡ設定において、マウスｍＡｂ ＡＤＸ２５１をプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、マウスｍＡｂ ＡＤＸ２２７−ＨＲＰコンジュゲート、続いて発色基質と接触させた。アッセイを、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、５匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ；３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ由来の糞便抽出物において実行した。図１２に示されているように、アッセイは、３匹の陽性イヌのうちの３匹、５匹の陰性イヌのうちの０匹、３匹の陽性ネコのうちの３匹、および１匹の陰性ネコのうちの０匹において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、高度の特異度および感度を生じた。
第３の糞便抗原ＥＬＩＳＡ設定において、マウスｍＡｂ ＡＤＸ２５１をプレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲート、続いて発色基質と接触させた。アッセイを、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、５匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ；３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ由来の糞便抽出物において実行した。図１３に示されているように、アッセイは、３匹の陽性イヌのうちの３匹、５匹の陰性イヌのうちの０匹、３匹の陽性ネコのうちの３匹、および１匹の陰性ネコのうちの０匹において陽性シグナルを生じた。したがって、アッセイは、この実験において、高度の特異度および感度を生じた。
実施例３Ｇ
Ａ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥに対するマウスｍＡｂ（Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂ）の調製
ＷＥを、上記のように、イヌ由来のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ虫から調製し、それを用いて、マウスを免疫した。これらのマウスから、上記のように、４つのモノクローナル抗体（ＡＤＸ２２４、ＡＤＸ２２５、ＡＤＸ２２６、およびＡＤＸ２２７）を作製し、さらなる分析のために選択した。
Ｂ． Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂを用いたＥＬＩＳＡアッセイのイヌおよび
ネコ試料における評価
以下のＥＬＩＳＡ設定を、３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、４匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ；３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および１匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコ由来の糞便抽出物において実行した。
第１のセットの糞便抗原ＥＬＩＳＡ設定において、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂを個々に、プレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲート、続いて発色基質と接触させた。結果は、図１４に示されている。このように、プレート上にＡＤＸ２２４を用いたアッセイは、６個の陽性試料のうち５個において、および０個の陰性試料において糞便抗原を検出した。プレート上にＡＤＸ２２５を用いたアッセイは、６個の陽性試料のうち６個において、および０個の陰性試料において糞便抗原を検出した。プレート上にＡＤＸ２２６を用いたアッセイは、６個の陽性試料のうち６個において、および０個の陰性試料において糞便抗原を検出した。プレート上にＡＤＸ２２７を用いたアッセイは、６個の陽性試料のうち６個において、および０個の陰性試料において、糞便抗原を検出した。
第２のセットの糞便抗原ＥＬＩＳＡ設定において、４つのＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂのそれぞれを個々に、プレート上にコーティングし、ＦＥＸと接触させ、その後、４つのＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートのそれぞれ、続いて発色基質と接触させた。結果は、図１５に示されている。試験された組合せの中で、２つのペア形成を選択した。プレート上のＡＤＸ２２６およびＡＤＸ２２７−ＨＲＰを用いたアッセイは、６個の陽性試料のうち６個において、および０個の陰性試料において、糞便抗原を検出した；ならびにプレート上のＡＤＸ２２７およびＡＤＸ２２７−ＨＲＰを用いたアッセイは６個の陽性試料のうち６個において、および０個の陰性試料において、糞便抗原を検出した。ＡＤＸ２２７のそれ自体とのペア形成のこの成功は、ＡＤＸ２２７により検出された糞便抗原が、反復性エピトープを含有することを示唆している。
実施例３Ｈ
Ａ． 抗原特徴づけ：抗Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ抗体ＡＤＸ２２６と結合した抗原のグリコシル化
Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂ ＡＤＸ２２６と結合した糞便抗原がグリコシル化されているかどうかを決定するために、２１個の異なるレクチンの能力を、市販キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ製のビオチン化レクチンキットＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ）を用いて、糞便抗原に結合するそれらの能力について試験した。アッセイを、製造会社の使用説明書に従って行った。簡単に述べれば、ＡＤＸ２２６をＩｍｍｕｌｏｎ １ｂプレートへコーティングした。Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性または陰性イヌ由来のＦＥＸをプレートに加えた。洗浄後、レクチン：：ビオチンコンジュゲートを加え、その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよび発色基質を加えた。結果は図１６に示されている。この試験において、以下のレクチンが、ＡＤＸ２２６糞便抗原と特異的かつ強く結合した：ＰＳＡ、ＬＣＡ、ジャカリン、ＥＣＬ、ＧＳＬ１、ＲＣＡ１２３、およびＷＧＡ。このレクチン結合データは、ＡＤＸ２２６と結合したＤ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原がグリコシル化されていることを示している。
Ｂ． 抗原特徴づけ：抗Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂと結合した抗原のグリコシル化
抗体Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂと結合した糞便抗原がグリコシル化されているかどうかを決定するために、２１個の異なるレクチンを、市販キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ製のビオチン化レクチンキットＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ）を用いて、糞便抗原に結合するそれらの能力について試験した。アッセイを、製造会社の使用説明書に従って行った。簡単に述べれば、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂをＩｍｍｕｌｏｎ １ｂプレートへコーティングした。Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性または陰性イヌおよびネコ由来のＦＥＸをプレートに加えた。洗浄後、レクチン：：ビオチンコンジュゲートを加え、その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよび発色基質を加えた。この試験において、以下のレクチンが、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ糞便抗原と結合した：ジャカリン、ＷＧＡ、スクシニル化ＷＧＡ、ＧＳＬ ＩＩ。この結果は図１７に示されている。このレクチン結合データは、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂと結合したＤ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原がグリコシル化されていることを示している。このデータはまた、抗体−レクチンサンドイッチアッセイが、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原を検出するために用いられ得ることも示している。
Ｃ． 抗原特徴づけ：抗Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ抗体 Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂおよびＡＤＸ１８７と結合した抗原のグリコシル化
Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂおよびＡＤＸ１８７（Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥマウスｍＡｂ）と結合した糞便抗原がグリコシル化されているかどうかを決定するために同様のアッセイ設定を用い、２１個の異なるレクチンを、市販キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ製のビオチン化レクチンキットＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ）を用いて、糞便抗原に結合するそれらの能力について試験した。この設定において、２１個の異なるビオチン化レクチンをＩｍｍｕｌｏｎ １ｂプレートへコーティングした。Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性または陰性イヌ由来のＦＥＸをプレートに加えた。洗浄後、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートまたはＡＤＸ１８７−ＨＲＰコンジュゲートを加え、その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよび発色基質を加えた。結果は図１８に示されている。この試験において、以下のレクチンが、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂ糞便抗原と結合した：ジャカリン、ＷＧＡ、およびスクシニル化ＷＧＡ。その同じセットのレクチン：ジャカリン、ＷＧＡ、およびスクシニル化ＷＧＡがＡＤＸ１８７糞便抗原と結合した。このレクチン結合データは、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ ＷＥウサギｐＡｂおよびＡＤＸ１８７と結合したＤ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原がグリコシル化されていることを確認している。このデータはまた、抗体−レクチンサンドイッチアッセイが、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原を検出するために用いられ得ることも示している。
ＡＤＸ２２６により認識された糞便抗原のＯ−グリコシル化のさらなる試験
この実験において、ＡＤＸ２２６を、マイクロタイタープレート上にコーティングし、続いて、ＦＥＸ、その後、ジャカリン−ビオチン、その後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ、および最後にＨＲＰ基質を加えた。ＦＥＸを、２０匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性イヌ、２４匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性イヌ、１２匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陽性ネコ、および３匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ陰性ネコの糞便抽出物から調製した。アッセイは、２０匹の陽性イヌのうち１８匹（９５％の感度）、２４匹の陰性イヌのうち０匹（１００％の特異度）、１２匹の陽性ネコのうち１１匹（９１．７％の感度）、および３匹の陰性ネコのうち０匹（１００％の特異度）において陽性シグナルを生じた。このデータは、ＡＤＸ２２６糞便抗原がＯ−グリコシル化されていること、および抗体とレクチンを用いるサンドイッチイムノアッセイが、条虫糞便抗原を検出するために用いられ得ることを実証している。
実施例４
一連の糞便ＥＬＩＳＡサンドイッチアッセイを、本質的に上記のセクション「実施例Ａ」に記載されているように、マイクロタイタープレートにおいて実施して、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ（Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ）、鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ（Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ）、回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ（Ｔ．ｃａｎｉｓ）、回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉ（Ｔ．ｃａｔｉ）、鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ（Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ）、鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓ（Ｔ．ｆｅｌｉｓ）、および原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ（Ｇｉａｒｄｉａ属）の検出についてのＥＬＩＳＡアッセイの特異度を試験した。
以下の源由来の糞便抽出物をＥＬＩＳＡアッセイにおいて試験した：Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ（図１９、列１）、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ（図１９、列２）、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図１９、列３）、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ（図１９、列４）、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図１９、列５）、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ感染ネコ（図１９、列６）、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ感染イヌ（図１９、列７）、回虫Ｔ．ｃａｔｉ感染ネコ（図１９、列８）、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ感染イヌ（図１９、列９）、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ感染ネコ（図１９、列１０）、Ｇｉａｒｄｉａ属感染イヌ（図１９、列１１）、Ｇｉａｒｄｉａ属感染ネコ（図１９、列１２）、および２匹のパルボウイルス感染ネコ（図１９、列１３および１４）。図１９において、列１〜１２は、単一のマイクロタイタープレートの画像であり、列１３および１４は別の異なるマイクロタイタープレートの画像である。
条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図１９、行Ａ）
Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原の検出のためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、ｍＡｂ ＡＤＸ１３１をマイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、ｍＡｂ ＡＤＸ１３２−ＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。ＡＤＸ１３１を、３ｕｇ／ｍｌの濃度でコーティングした。ＡＤＸ１３２−ＨＲＰを、３ｕｇ／ｍｌの濃度で用いた。その結果は、このＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡが、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＥＬＩＳＡは、以下のうちのいずれに由来するＦＥＸにおいても糞便抗原を検出しなかった：条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ感染ネコ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ感染イヌ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ感染ネコ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ感染イヌ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ感染ネコ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染イヌ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染ネコ、およびパルボウイルス感染ネコ（図１９、行Ａ）。したがって、このＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原を特異的に検出し、以下のいずれに由来する糞便抗原とも交差反応しなかった：条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、およびネコパルボウイルス。したがって、このＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＥＬＩＳＡは、非常に種特異性が高かった。このＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓの感染または外寄生の検出または診断に有用である。このＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ ＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓの感染を、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、イヌパルボウイルス、およびネコパルボウイルスの感染から識別するために用いることができる。
条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図１９、行Ｂ）
Ｔａｅｎｉａ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原の検出のためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、ｍＡｂ ＡＤＸ１８４をマイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、マウスｍＡｂ ＡＤＸ１９３−ＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。ＡＤＸ１８４を、５ｕｇ／ｍｌの濃度でコーティングした。ＡＤＸ１９３−ＨＲＰを、３ｕｇ／ｍｌの濃度で用いた。その結果は、このＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡが、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染イヌ由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原ＥＬＩＳＡは、以下のいずれに由来するＦＥＸにおける糞便抗原も検出しなかった：条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ感染ネコ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ感染イヌ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ感染ネコ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ感染イヌ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ感染ネコ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染イヌ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染ネコ、およびパルボウイルス感染ネコ（図１９、行Ｂ）。したがって、このＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原を特異的に検出し、以下のうちのいずれに由来する糞便抗原とも交差反応しなかった：条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、およびネコパルボウイルス。したがって、このＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＥＬＩＳＡは、非常に種特異性が高かった。このＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓの感染または外寄生の検出または診断に有用である。このＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ ＥＬＩＳＡは、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓの感染を、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、イヌパルボウイルス、およびネコパルボウイルスの感染から識別するために用いることができる。
条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図１９、行Ｃ）
Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原の検出のためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、ｍＡｂ ＡＤＸ２２６をマイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、ｍＡｂ ＲＤＸ５−ＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。ＡＤＸ２２６を、３ｕｇ／ｍｌの濃度でコーティングした。ＲＤＸ５−ＨＲＰを、３ｕｇ／ｍｌの濃度で用いた。その結果は、このＤ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原ＥＬＩＳＡが、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌおよびＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＥＬＩＳＡは、以下のいずれに由来するＦＥＸにおける糞便抗原も検出しなかった：条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ感染ネコ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ感染イヌ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ感染ネコ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ感染イヌ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ感染ネコ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染イヌ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染ネコ、およびパルボウイルス感染ネコ（図１９、行Ｃ）。したがって、このＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＥＬＩＳＡは、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原を特異的に検出し、以下のうちのいずれに由来する糞便抗原とも交差反応しなかった：条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、およびネコパルボウイルス。このように、このＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＥＬＩＳＡは、非常に種特異性が高く、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍの感染または外寄生の検出または診断に有用である。このＤ．ｃａｎｉｎｕｍ ＥＬＩＳＡは、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍの感染を、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、イヌパルボウイルス、およびネコパルボウイルスの感染から識別するために用いることができる。
鉤虫Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図１９、行Ｄ）
Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原の検出のためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、全体として参照により本明細書に組み入れられている米国特許第７，９５１，５４７号に論じられているように、ポリクローナルのウサギ抗ＡＳＰ５−１抗体をマイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、マウス抗ＡＳＰ５−１ ｍＡｂ−ＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。ウサギポリクローナル抗体を、５ｕｇ／ｍｌの濃度でコーティングした。マウスｍＡｂを、４ｕｇ／ｍｌの濃度で用いた。その結果は、このＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属糞便抗原ＥＬＩＳＡが、Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌおよびＡ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ感染ネコ由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属ＥＬＩＳＡは、以下のうちのいずれに由来するＦＥＸにおける糞便抗原も検出しなかった：条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ感染イヌ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ感染ネコ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ感染イヌ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ感染ネコ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染イヌ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染ネコ、およびパルボウイルス感染ネコ（図１９、行Ｄ）。したがって、このＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属ＥＬＩＳＡは、Ａ．ｃａｎｉｎｕｍおよびＡ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ糞便抗原を特異的に検出し、以下のうちのいずれに由来する糞便抗原とも交差反応しなかった：条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、およびネコパルボウイルス。このように、このＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属ＥＬＩＳＡは、非常に特異度が高く、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍおよびＡ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅの感染または外寄生の検出または診断に有用である。さらに、このＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属ＥＬＩＳＡは、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍまたはＡ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅの感染を、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、イヌパルボウイルス、およびネコパルボウイルスの感染から識別するために用いることができる。
回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ属糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図１９、行Ｅ）
Ｔ．ｃａｎｉｓおよびＴ．ｃａｔｉ糞便抗原の検出のためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、全体として参照により本明細書に組み入れられている米国特許第７，９５１，５４７号に論じられているように、Ｔ．ｃａｎｉｓタンパク質ＤＩＶ６７２８Ｃに対して産生されたマウスｍＡｂをマイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、Ｔ．ｃａｎｉｓタンパク質ＤＩＶ６７２８Ｃに対して産生された別のマウスｍＡｂのＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。ＡＤＸ５を、６ｕｇ／ｍｌの濃度でコーティングした。ＡＤＸ１０−ＨＲＰを、５ｕｇ／ｍｌの濃度で用いた。その結果は、このＴｏｘｏｃａｒａ属糞便抗原ＥＬＩＳＡが、Ｔ．ｃａｎｉｓ感染イヌおよびＴ．ｃａｔｉ感染ネコに由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＴｏｘｏｃａｒａ属ＥＬＩＳＡは、以下のうちのいずれに由来するＦＥＸにおける糞便抗原も検出しなかった：条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ感染ネコ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ感染イヌ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ感染ネコ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染イヌ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染ネコ、およびパルボウイルス感染ネコ（図１９、行Ｅ）。したがって、このＴｏｘｏｃａｒａ属ＥＬＩＳＡは、Ｔｏｘｏｃａｒａ属糞便抗原を特異的に検出し、以下のうちのいずれに由来する糞便抗原とも交差反応しなかった：条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、およびネコパルボウイルス。このように、このＴｏｘｏｃａｒａ属ＥＬＩＳＡは、非常に特異度が高く、Ｔ．ｃａｎｉｓまたはＴ．ｃａｔｉの感染または外寄生の検出または診断に有用である。この回虫Ｔｏｘｏｃａｒａ属ＥＬＩＳＡは、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓまたはＴ．ｃａｔｉの感染を、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、イヌパルボウイルス、およびネコパルボウイルスの感染から識別するために用いることができる。
鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ属糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図１９、行Ｆ）
Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ糞便抗原の検出のためのサンドイッチ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、全体として参照により本明細書に組み入れられている米国特許第７，９５１，５４７号に論じられているように、Ｔ．ｖｕｌｐｉｓタンパク質ＤＩＶ６９０１に対して産生されたマウスｍＡｂ（ＡＤＸ６）をマイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、Ｔ．ｖｕｌｐｉｓタンパク質ＤＩＶ６９０１に対して産生された別のマウスｍＡｂ（ＡＤＸ１４）のＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。ＡＤＸ６を、３ｕｇ／ｍｌの濃度でコーティングした。ＡＤＸ１０−ＨＲＰを、３ｕｇ／ｍｌの濃度で用いた。その結果は、このＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属糞便抗原ＥＬＩＳＡが、Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ感染イヌおよびＴ．ｆｅｌｉｓ感染ネコ由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ＥＬＩＳＡは、以下のうちのいずれに由来するＦＥＸにおける糞便抗原も検出しなかった：条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ感染ネコ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ感染イヌ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ感染ネコ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染イヌ、Ｇｉａｒｄｉａ属感染ネコ、およびパルボウイルス感染ネコ（図１９、行Ｆ）。したがって、このＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｖｕｌｐｉｓおよびＴ．ｆｅｌｉｓ糞便抗原を特異的に検出し、以下のうちのいずれに由来する糞便抗原とも交差反応しなかった：条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、およびネコパルボウイルス。このように、このＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ＥＬＩＳＡは、非常に特異度が高く、Ｔ．ｖｕｌｐｉｓおよびＴ．ｆｅｌｉｓの感染または外寄生の検出または診断に有用である。この鞭虫Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ属ＥＬＩＳＡは、鉤虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓまたはＴ．ｆｅｌｉｓの感染を、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、イヌパルボウイルス、およびネコパルボウイルスの感染から識別するために用いることができる。
Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図１９、行Ｇ）
Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ糞便抗原の検出のためのサンドイッチ糞便抗原ＥＬＩＳＡアッセイを、可溶性抗原を特異的に検出する抗体ペア（ＳＮＡＰ（登録商標）Ｇｉａｒｄｉａ試験、ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ． Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、ＭＥ、ＵＳＡ）（Ｏｌｓｏｎ ＭＥ、Ｌｅｏｎａｒｄ ＮＪ、Ｓｔｒｏｕｔ Ｊ． Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｇｉａｒｄｉａ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｄｏｇｓ ａｎｄ ｃａｔｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｆｅｃａｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｔｅｓｔ ａｎｄ ｆｅｃａｌ ｓｍｅａｒ． Ｃａｎ Ｖｅｔ Ｊ． ２０１０ Ｊｕｎ；５１（６）：６４０〜２、ＰＭＩＤ：２０８０８５７８）を用いて構築した。簡単に述べれば、ウサギ抗Ｇｉａｒｄｉａ属ポリクローナル抗体を、マイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、マウス抗Ｇｉａｒｄｉａ属モノクローナル抗体のＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。ポリクローナル抗体を、３ｕｇ／ｍｌの濃度でコーティングした。ｍＡｂ−ＨＲＰを、３ｕｇ／ｍｌの濃度で用いた。その結果は、このＧｉａｒｄｉａ属糞便抗原ＥＬＩＳＡが、Ｇｉａｒｄｉａ属感染イヌおよびＧｉａｒｄｉａ属感染ネコ由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＧｉａｒｄｉａ属ＥＬＩＳＡは、以下のうちのいずれに由来するＦＥＸにおける糞便抗原も検出しなかった：条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ感染ネコ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ感染イヌ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ感染ネコ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ感染イヌ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ感染ネコ、およびパルボウイルス感染ネコ（図１９、行Ｇ）。したがって、このＧｉａｒｄｉａ属ＥＬＩＳＡは、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ糞便抗原を特異的に検出し、以下のうちのいずれに由来する糞便抗原とも交差反応しなかった：条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、およびネコパルボウイルス。このように、このＧｉａｒｄｉａ属ＥＬＩＳＡは、非常に特異度が高く、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａの感染の検出または診断に有用である。このＧｉａｒｄｉａ属ＥＬＩＳＡは、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａの感染を、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、イヌパルボウイルス、およびネコパルボウイルスの感染から識別するために用いることができる。
パルボウイルス感染ネコ（図１９、列１３および１４）の陽性感染状態を、ＳＮＡＰ（登録商標）Ｐａｒｖｏ試験（Ｍ．Ａｂｄ−Ｅｌｄａｉｍ、Ｍ．Ｂｅａｌｌ、およびＭ．Ａ．Ｋｅｎｎｅｄｙ． 「Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｌｉｎｅ ｐａｎｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ ｖｉｒｕｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ＥＬＩＳＡ ｆｏｒ ｃａｎｉｎｅ ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ」 Ｖｅｔ Ｔｈｅｒ． ２００９ Ｗｉｎｔｅｒ；１０（４）：Ｅ１〜６）を用いて製造会社（ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、Ｍａｉｎｅ、ＵＳＡ）の使用説明書に従って確認した。この多重糞便ＥＬＩＳＡアッセイは、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ、鉤虫Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、回虫Ｔ．ｃａｎｉｓ、回虫Ｔ．ｃａｔｉ、鞭虫Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、鞭虫Ｔ．ｆｅｌｉｓ、および原生動物Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａの同時の特異的検出の能力がある。
このデータは、本発明の方法が、種特異的様式で、少なくとも８つの異なる腸内寄生体を容易に検出し、それらの間を識別するために用いられ得ることを実証している。
実施例５
Ｔａｅｎｉａ属由来、例えば、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、およびＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属由来、例えば、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍなどの２つまたは３つの条虫種を検出する能力がある一連の糞便ＥＬＩＳＡアッセイを開発した。そのＥＬＩＳＡを、本質的に上記のセクション「実施例Ａ」に記載されているように、マイクロタイタープレートにおいて実施した。
以下の源由来の糞便抽出物を、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて試験した：４匹のＴ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ陽性イヌ（図２０、列１、４、７、および１０）、４匹のＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ（図２０、列２、５、８、および１１）、２匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図２０、列３および６）、２匹のＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ（図２０、列９および１２）。図２０において、列１〜１２は単一のマイクロタイタープレートの画像である。
Ｔａｅｎｉａ属の条虫の検出のための糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図２０、行Ａ）
Ｔａｅｎｉａ ｔａｐｅｗｏｒｍｓに感染した動物由来の糞便抗原の検出のためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、ｍＡｂ ＡＤＸ１３１およびｍＡｂ ＡＤＸ１８４を、それぞれ３ｕｇ／ｍｌの濃度で、マイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、それぞれ３ｕｇ／ｍｌの濃度でのｍＡｂ ＡＤＸ１３２−ＨＲＰおよびＡＤＸ１９３−ＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。その結果は、このＴａｅｎｉａ属糞便抗原ＥＬＩＳＡが、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ（図２０、行Ａ、列１、４、７、および１０）およびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ（図２０、行Ａ、列２、５、８、および１１）由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＴａｅｎｉａ属ＥＬＩＳＡは、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図２０、行Ａ、列３および６）由来のＦＥＸにおける糞便抗原もＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ（図２０、行Ａ、列９および１２）由来のＦＥＸにおける糞便抗原も検出しなかった。したがって、このＴａｅｎｉａ属ＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原を特異的に検出し、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ由来の糞便抗原と交差反応しなかった。このＴａｅｎｉａ属ＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓを含む１つまたは複数のＴａｅｎｉａ属条虫の感染または外寄生の検出または診断に有用である。このＴａｅｎｉａ属ＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＴ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓを含む１つまたは複数のＴａｅｎｉａ属条虫の感染を、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍを含むＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属条虫の感染から識別するために用いることができる。
条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＤ．ｃａｎｉｎｕｍの検出のための糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図２０、行Ｂ）
条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＤ．ｃａｎｉｎｕｍに感染した動物由来の糞便抗原の検出のためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、ｍＡｂ ＡＤＸ１３１およびｍＡｂ ＡＤＸ２２６を、それぞれ３ｕｇ／ｍｌの濃度で、マイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、それぞれ３ｕｇ／ｍｌの濃度でのｍＡｂ ＡＤＸ１３２−ＨＲＰおよびｍＡｂ ＲＤＸ５−ＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。その結果は、このＥＬＩＳＡが、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ（図２０、行Ｂ、列１、４、７、および１０）、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図２０、行Ｂ、列３および６）、およびＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ（図２０、行Ｂ、列９および１２）由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ（図２０、行Ｂ、列２、５、８、および１１）由来のＦＥＸにおける糞便抗原を検出しなかった。したがって、このＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよびＤ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原を特異的に検出し、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原と交差反応しなかった。このＥＬＩＳＡは、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよび／またはＤ．ｃａｎｉｎｕｍの感染または外寄生の検出または診断に有用であり、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓおよび／またはＤ．ｃａｎｉｎｕｍの感染を、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓの感染から識別するために用いることができる。
条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓおよびＤ．ｃａｎｉｎｕｍの検出のための糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図２０、行Ｃ）
条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓおよびＤ．ｃａｎｉｎｕｍに感染した動物由来の糞便抗原の検出のためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、ｍＡｂ ＡＤＸ１８４およびｍＡｂ ＡＤＸ２２６を、それぞれ３ｕｇ／ｍｌの濃度で、マイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、それぞれ３ｕｇ／ｍｌの濃度でのｍＡｂ ＡＤＸ１９３−ＨＲＰおよびｍＡｂ ＲＤＸ５−ＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。その結果は、このＥＬＩＳＡが、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ（図２０、行Ｃ、列２、５、８、および１１）、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図２０、行Ｃ、列３および６）、およびＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ（図２０、行Ｃ、列９および１２）由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。しかしながら、このＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ（図２０、行Ｃ、列１、４、７、および１０）由来のＦＥＸにおける糞便抗原を検出しなかった。したがって、このＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓおよびＤ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原を特異的に検出し、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原と交差反応しなかった。このＥＬＩＳＡは、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓおよび／またはＤ．ｃａｎｉｎｕｍの感染または外寄生の検出または診断に有用であり、条虫Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓおよび／またはＤ．ｃａｎｉｎｕｍの感染を、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓの感染から識別するために用いることができる。
条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、およびＤ．ｃａｎｉｎｕｍの検出のための糞便抗原ＥＬＩＳＡ（図２０、行Ｄ）
条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、およびＤ．ｃａｎｉｎｕｍに感染した動物由来の糞便抗原の検出のためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを構築した。簡単に述べれば、ｍＡｂ ＡＤＸ１３１、ｍＡｂ ＡＤＸ１８４、およびｍＡｂ ＡＤＸ２２６を、それぞれ３ｕｇ／ｍｌの濃度で、マイクロタイタープレート上にコーティングし、糞便抽出物とインキュベートし、その後、それぞれ３ｕｇ／ｍｌの濃度でのｍＡｂ ＡＤＸ１３２−ＨＲＰ、ｍＡｂ ＡＤＸ１９３−ＨＲＰ、およびＲＤＸ５−ＨＲＰコンジュゲートとインキュベートし、続いて、ペルオキシダーゼ基質で検出した。その結果は、このＥＬＩＳＡが、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ感染イヌ（図２０、行Ｄ、列１、４、７、および１０）、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ感染ネコ（図２０、行Ｄ、列２、５、８、および１１）、条虫Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ（図２０、行Ｄ、列３および６）、およびＤ．ｃａｎｉｎｕｍ感染ネコ（図２０、行Ｄ、列９および１２）由来のＦＥＸに関して陽性シグナルを生じたことを示している。したがって、このＥＬＩＳＡは、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、およびＤ．ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原を検出した。このＥＬＩＳＡは、条虫Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、および／またはＤ．ｃａｎｉｎｕｍの感染または外寄生の検出または診断に有用である。これらのデータは、このＥＬＩＳＡアッセイが、イヌおよびネコにおけるＴａｅｎｉａ属および／またはＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属条虫の感染を容易に検出するために用いられ得ることを実証している。

Claims (129)

  1. 糞便試料において１つまたは複数の扁形動物抗原の存在または非存在を検出する方法であって、
    （ａ）（ｉ）第１の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；
    （ｉｉ）第２の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および
    （ｉｉｉ）第３の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫種由来の糞便抗原にも第２の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体
    からなる群から選択される１つまたは複数の抗体と哺乳動物由来の糞便試料を接触させるステップ；ならびに
    （ｂ）もしあれば、抗体−糞便抗原複合体の存在または非存在を検出するステップ
    を含む、方法。
  2. 哺乳動物が１つまたは複数の扁形動物の虫に感染しているかどうかを診断する方法であって、
    （ａ）（ｉ）第１の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；
    （ｉｉ）第２の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および
    （ｉｉｉ）第３の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫種由来の糞便抗原にも第２の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体
    からなる群から選択される１つまたは複数の抗体と哺乳動物由来の糞便試料を接触させるステップ；
    （ｂ）試料において、もしあれば、糞便抗原の存在下で、抗体−糞便抗原複合体を形成するステップ；
    （ｃ）もしあれば、抗体−糞便抗原複合体の存在または非存在を検出するステップ；ならびに
    （ｄ）（ｉ）第１の条虫の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第１の条虫感染；
    （ｉｉ）第２の条虫の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第２の条虫感染；および
    （ｉｉｉ）第３の条虫の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第３の条虫感染
    を有すると哺乳動物を診断するステップ
    を含む、方法。
  3. １つまたは複数の扁形動物の虫に感染した哺乳動物を診断および処置する方法であって、
    （ａ）（ｉ）第１の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；
    （ｉｉ）第２の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および
    （ｉｉｉ）第３の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫種由来の糞便抗原にも第２の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体
    からなる群から選択される１つまたは複数の抗体と哺乳動物由来の糞便試料を接触させるステップ；
    （ｂ）試料において、もしあれば、糞便抗原の存在下で、抗体−糞便抗原複合体を形成するステップ；
    （ｃ）もしあれば、抗体−糞便抗原複合体の存在または非存在を検出するステップ；ならびに
    （ｄ）（ｉ）第１の条虫の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第１の条虫感染；
    （ｉｉ）第２の条虫の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第２の条虫感染；および
    （ｉｉｉ）第３の条虫の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、第３の条虫感染
    を有すると哺乳動物を診断するステップ；ならびに
    （ｅ）第１の条虫感染、第２の条虫感染、もしくは第３の条虫感染、またはそれらの組合せを有する哺乳動物を処置するために有効量の１つまたは複数の治療剤を投与するステップ
    を含む、方法。
  4. ステップ（ｅ）がさらに、（ａ）１つもしくは複数の蠕虫の寄生体、１つもしくは複数の蠕虫ではない寄生体、１つもしくは複数のウイルス、１つもしくは複数の真菌、１つもしくは複数の原生動物、または１つもしくは複数の細菌による感染を処置するための、１つまたは複数の追加の治療剤を含む、請求項３に記載の方法。
  5. ステップ（ｅ）がさらに、（ｂ）扁形動物の虫の寄生体、蠕虫の寄生体、蠕虫ではない寄生体、ウイルス、真菌、原生動物、または細菌の中間宿主を制御、撃退、または殺害するための、１つまたは複数の治療剤を含む、請求項３または４に記載の方法。
  6. 糞便試料が、イヌまたはネコである哺乳動物から採取される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 第１の条虫種がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 第１の抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属、鉤虫、回虫、鞭虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない、請求項７に記載の方法。
  9. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項８に記載の方法。
  10. 条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項９に記載の方法。
  11. 第２の条虫種がＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 第２の抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない、請求項１１に記載の方法。
  13. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項１２に記載の方法。
  14. 条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項１３に記載の方法。
  15. 第３の条虫種がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 第３の抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ属、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない、請求項１５に記載の方法。
  17. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項１６に記載の方法。
  18. 条虫Ｔａｅｎｉａ属がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓまたはＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項１７に記載の方法。
  19. 第１の条虫種および第２の条虫種がＴａｅｎｉａ種である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
  20. 第１の条虫種がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓであり、第２の条虫種がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
  21. 第１の条虫種および第２の条虫種がＴａｅｎｉａ種であり、第３の条虫種がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
  22. 第１の条虫種がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓであり、第２の条虫種がＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓであり、第３の条虫種がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
  23. 第１、第２、および第３の抗体が、回虫、鞭虫、および鉤虫からなる群から選択される少なくとも１つの虫に由来するいかなる糞便抗原にも特異的に結合しない、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
  24. 回虫が、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉ、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｖｉｔｕｌｏｒｕｍ、Ｔｏｘａｓｃａｒｉｓ ｌｅｏｎｉｎａ、Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉｓ ｐｒｏｃｙｏｎｉｓ、Ａｓｃａｒｉｄｉａ ｇａｌｌｉ、Ｐａｒａｓｃａｒｉｓ ｅｑｕｏｒｕｍ、Ａｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍ、Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ａｎｉｓａｋｉｓ ｓｉｍｐｌｅｘ、またはＰｓｅｕｄｏｔｅｒｒａｎｏｖａ ｄｅｃｉｐｉｅｎｓである、請求項２３に記載の方法。
  25. 鞭虫が、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｃａｍｐａｎｕｌａ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｓｅｒｒａｔａ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｓｕｉｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｄｉｓｃｏｌｏｒ、またはＴｒｉｃｈｏｃｅｐｈａｌｕｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒｉｓである、請求項２３に記載の方法。
  26. 鉤虫が、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｐｌｕｒｉｄｅｎｔａｔｕｍ、Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、またはＵｎｃｉｎａｒｉａ ｓｔｅｎｏｃｅｐｈａｌａである、請求項２３に記載の方法。
  27. ステップ（ａ）の群がさらに、
    （ｉ）回虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫、鉤虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない、抗体；
    （ｉｉ）鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫、鉤虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；ならびに
    （ｉｉｉ）鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫、回虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない、抗体；
    （ｉｖ）Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない、抗体；ならびに
    （ｖ）パルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原，鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびＧｉａｒｄｉａ属糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない、抗体
    からなる、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 鉤虫がＡｎｙｃｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項２７に記載の方法。
  29. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項２８に記載の方法。
  30. ステップ（ｄ）の診断することがさらに：
    （ｉｖ）回虫の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、回虫感染；
    （ｖ）鞭虫の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、鞭虫感染；
    （ｖｉ）鉤虫の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、鉤虫感染；
    （ｖｉｉ）Ｇｉａｒｄｉａ属の抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、Ｇｉａｒｄｉａ属感染；および
    （ｖｉｉｉ）パルボウイルスの抗体−糞便抗原複合体が存在する場合には、パルボウイルス感染
    を含む、請求項２〜２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 糞便試料を、２つ以上の抗体、３つ以上の抗体、４つ以上の抗体、５つ以上の抗体、６つ以上の抗体、７つ以上の抗体、または８つ以上の抗体と接触させる、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 複合体の存在または非存在を検出するステップが、１つまたは複数の複合体と結合する少なくとも１つの二次抗体を供給するステップをさらに含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 二次抗体が、標識されているか、または固体支持体に付着している、請求項３２に記載の方法。
  34. 第１、第２、および第３の抗体のうちの１つまたは複数が標識されている、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  35. 第１、第２、および第３の抗体が固体支持体上に固相化されている、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  36. 回虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、およびパルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体のうちの１つまたは複数が標識されている、請求項３０に記載の方法。
  37. 回虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、およびパルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体が固体支持体上に固相化されている、請求項３０に記載の方法。
  38. 固体支持体が、酵素結合免疫吸着アッセイデバイスの一部を構成する、請求項３５または３７に記載の方法。
  39. 酵素結合免疫吸着アッセイデバイスがラテラルフローイムノアッセイデバイスである、請求項３８に記載の方法。
  40. １つまたは複数の蠕虫の寄生体、１つまたは複数の蠕虫ではない寄生体、１つまたは複数のウイルス、１つまたは複数の真菌、１つまたは複数の原生動物、および１つまたは複数の細菌からなる群の１つまたは複数を検出するための１つまたは複数の試薬と試料を接触させるステップをさらに含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 試薬が、１つまたは複数の抗体、あるいは、１つもしくは複数の蠕虫の寄生体、蠕虫ではない寄生体、１つもしくは複数のウイルス、１つもしくは複数の真菌、１つもしくは複数の原生動物、または１つもしくは複数の細菌に特異的な抗体により認識される１つまたは複数の抗原を含む、請求項４０に記載の方法。
  42. １つまたは複数の蠕虫の寄生体が、回虫、鞭虫、鉤虫、およびイヌ糸状虫の少なくとも１つを含む、請求項４０または４１に記載の方法。
  43. １つまたは複数の試薬が、蠕虫ではない寄生体のＧｉａｒｄｉａ属糞便抗原と特異的に結合する抗体である、請求項４１に記載の方法。
  44. Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａである、請求項４３に記載の方法。
  45. 抗体が、Ｔ．ｐｉｓｉｆｏｒｍｉ、Ｔ．ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、Ｄ．ｃａｎｉｎｕｍ、Ａ．ｃａｎｉｎｕｍ感染イヌ、Ａ．ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅ、Ｔ．ｃａｎｉｓ、Ｔ．ｃａｔｉ、Ｔ．ｖｕｌｐｉｓ、Ｔ．ｆｅｌｉｓ、およびパルボウイルスに由来する糞便抗原と結合しない、請求項４４に記載の方法。
  46. 回虫、鞭虫、または鉤虫由来の核酸の存在または非存在を決定するステップをさらに含む、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 核酸の存在または非存在を決定するステップが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づいたアッセイを用いることにより行われる、請求項４６に記載の方法。
  48. 糞便抗原の少なくとも１つがグリコシル化されている、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 複合体の存在または非存在を検出するステップが、複合体の少なくとも１つと結合する１つまたは複数のレクチンを供給するステップをさらに含む、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. レクチンが、検出可能に標識されているか、または固体支持体上に固相化されている、請求項４９に記載の方法。
  51. 第１、第２、第３の抗体、回虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、およびパルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体が、検出可能に標識されているか、または固体支持体上に固相化されている、請求項４９に記載の方法。
  52. 第１、第２、第３の抗体、回虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、およびパルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体が、固体支持体上に固相化され、レクチンが検出可能に標識される、請求項４８または４９に記載の方法。
  53. 第１、第２、第３の抗体、回虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、およびパルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体が、検出可能に標識され、レクチンが固体支持体上に固相化されている、請求項４８または４９に記載の方法。
  54. 哺乳動物由来の糞便試料を１つまたは複数の抗体と接触させるステップの前に、糞便試料を１つまたは複数のレクチンと接触させるステップをさらに含む、請求項４８に記載の方法。
  55. １つまたは複数のレクチンが検出可能に標識されているか、または固体支持体上に固相化されている、請求項５４に記載の方法。
  56. 第１の抗体、第２の抗体、第３の抗体、回虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、およびパルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体が、検出可能に標識されているか、または固体支持体上に固相化されている、請求項５４に記載の方法。
  57. 第１の抗体、第２の抗体、第３の抗体、回虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、およびパルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体が、固体支持体上に固相化され、１つまたは複数のレクチンが検出可能に標識される、請求項５４に記載の方法。
  58. 第１の抗体、第２の抗体、第３の抗体、回虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体、およびパルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力がある抗体が、検出可能に標識され、１つまたは複数のレクチンが固体支持体上に固相化されている、請求項５４に記載の方法。
  59. Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原と特異的に結合することができる、単離抗体。
  60. 抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応することがない、請求項５９に記載の単離抗体。
  61. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項６０に記載の単離抗体。
  62. 条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項６０に記載の単離抗体。
  63. Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原と特異的に結合することができる単離抗体。
  64. 抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない、請求項６３に記載の単離抗体。
  65. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項６４に記載の単離抗体。
  66. 条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項６４に記載の単離抗体。
  67. 抗体が、標識されているか、または固体支持体に付着している、請求項６３〜６６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  68. Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍ糞便抗原と特異的に結合することができる単離抗体。
  69. 抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない、請求項６８に記載の単離抗体。
  70. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項６９に記載の単離抗体。
  71. 条虫Ｔａｅｎｉａ属がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓまたはＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項６９に記載の単離抗体。
  72. 抗体が、標識されているか、または固体支持体に付着している、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  73. 条虫糞便抗原、および条虫糞便抗原と特異的に結合した１つまたは複数の抗体を含む、免疫複合体。
  74. 条虫が、Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ、またはＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである、請求項７３に記載の免疫複合体。
  75. 条虫がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓであり、抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応することがない、請求項７４に記載の免疫複合体。
  76. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項７５に記載の免疫複合体。
  77. 条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項７５に記載の免疫複合体。
  78. 条虫がＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓであり、抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原の群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応することがない、請求項７４に記載の免疫複合体。
  79. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項７８に記載の免疫複合体。
  80. 条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項７８に記載の免疫複合体。
  81. 条虫がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍであり、抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応することがない、請求項７４に記載の免疫複合体。
  82. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項８１に記載の免疫複合体。
  83. 条虫Ｔａｅｎｉａ属がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓまたはＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項８１に記載の免疫複合体。
  84. 抗体が、条虫の全抽出物、条虫のＥ／Ｓ材料、条虫の虫洗浄液（Ｗｏｒｍ Ｗａｓｈ）、または条虫のＴＣＡ可溶性材料での免疫化により得られる、請求項７３〜８３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  85. 条虫糞便抗原が、条虫感染哺乳動物から採取された試料から得られる、請求項７３〜８４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  86. 試料が糞便試料である、請求項７３〜８５のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  87. 哺乳動物が、回虫、鞭虫、および鉤虫のうちの１つまたは複数にさらに感染しており、抗体が、試料に存在し得る回虫、鞭虫、または鉤虫のうちの１つまたは複数由来のいかなる抗原とも特異的に結合しない、請求項７３〜８６のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  88. 糞便抗原がグリコシル化されている、請求項７３〜８７のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  89. 条虫糞便抗原と結合するレクチンをさらに含む、請求項７３〜８８のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  90. 抗体が検出可能に標識されているか、または固体支持体と結合している、請求項７３〜８９のいずれか一項に記載の免疫複合体。
  91. レクチンが検出可能に標識されているか、または固体支持体と結合している、請求項８９に記載の免疫複合体。
  92. 抗体が検出可能に標識され、レクチンが固体支持体上に固相化されている、請求項８９に記載の免疫複合体。
  93. 抗体が固体支持体上に固相化され、レクチンが検出可能に標識される、請求項８９に記載の免疫複合体。
  94. 糞便試料から１つまたは複数の条虫糞便抗原の存在または非存在を検出するためのデバイスであって、固体支持体を含み、固体支持体が、
    （ａ）第１の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；
    （ｂ）第２の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および
    （ｃ）第３の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫種由来の糞便抗原にも第２の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体
    からなる群から選択される１つまたは複数の抗体をその上に固相化している、デバイス。
  95. 糞便試料から１つまたは複数の条虫糞便抗原の存在または非存在を検出するためのデバイスであって、固体支持体、１つまたは複数のレクチン、ならびに、
    （ａ）第１の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第２の条虫種由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第１の抗体；
    （ｂ）第２の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫由来の糞便抗原にも第３の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第２の抗体；および
    （ｃ）第３の条虫種由来の糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、第１の条虫種由来の糞便抗原にも第２の条虫種由来の糞便抗原にも特異的に結合する能力がない第３の抗体
    からなる群から選択される１つまたは複数の抗体を含み、固体支持体が、１つもしくは複数のレクチンまたは１つもしくは複数の抗体をその上に固相化している、デバイス。
  96. 固体支持体が２つ以上の抗体をその上に固相化している、請求項９５に記載のデバイス。
  97. １つまたは複数のレクチンが固体支持体上に固相化されている、請求項９５に記載のデバイス。
  98. （ｄ）１つまたは複数の型のＧｉａｒｄｉａ属糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、および／または鉤虫糞便抗原をさらに含み、当該１つまたは複数の型の回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、および鉤虫糞便抗原が、抗体と特異的に結合する、請求項９４または９５に記載のデバイス。
  99. 固体支持体が２つ以上の抗体をその上に固相化している、請求項９４または９５に記載のデバイス。
  100. １つまたは複数の種の条虫の抗原をさらに含み、１つまたは複数の種の条虫の抗原が抗体と特異的に結合する、請求項９４〜９９のいずれか一項に記載のデバイス。
  101. （ａ）第１の抗体が、第１の条虫種の全抽出物、第１の条虫種のＥ／Ｓ材料、第１の条虫種の虫洗浄液材料、もしくは第１の条虫種のＴＣＡ可溶性材料に対して産生され；
    （ｂ）第２の抗体が、第２の条虫種の全抽出物、第２の条虫種のＥ／Ｓ材料、第１の条虫種の虫洗浄液材料、もしくは第２の条虫種のＴＣＡ可溶性材料に対して産生され；または
    （ｃ）第３の抗体が、第３の条虫種の全抽出物、第３の条虫種のＥ／Ｓ材料、第１の条虫種の虫洗浄液材料、もしくは第３の条虫種のＴＣＡ可溶性材料に対して産生される、請求項９４〜１００のいずれか一項に記載のデバイス。
  102. 第１の条虫種がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓである、請求項９４〜１０１のいずれか一項に記載のデバイス。
  103. 第１の抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓ糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない、請求項１０２に記載のデバイス。
  104. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項１０３に記載のデバイス。
  105. 条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項１０３に記載のデバイス。
  106. 第２の条虫種がＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓである、請求項９４〜１０５のいずれか一項に記載のデバイス。
  107. 第２の抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓ糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない、請求項１０６に記載のデバイス。
  108. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項１０７に記載のデバイス。
  109. 条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項１０７に記載のデバイス。
  110. 第３の条虫種がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである、請求項９４〜１０９のいずれか一項に記載のデバイス。
  111. 第３の抗体が、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、鉤虫糞便抗原、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される１つまたは複数の糞便抗原と特異的に交差反応しない、請求項１１０に記載のデバイス。
  112. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項１１１に記載のデバイス。
  113. 条虫Ｔａｅｎｉａ属がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓまたはＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓであり、鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項１１１に記載のデバイス。
  114. 第１の条虫種および第２の条虫種がＴａｅｎｉａ種である、請求項９４〜１０１のいずれか一項に記載のデバイス。
  115. 第１の条虫種がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓであり、第２の条虫種がＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓである、請求項９４〜１０１のいずれか一項に記載のデバイス。
  116. 第１の条虫種および第２の条虫種がＴａｅｎｉａ種であり、第３の条虫種がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである、請求項９４〜１０１のいずれか一項に記載のデバイス。
  117. 第１の条虫種がＴａｅｎｉａ ｐｉｓｉｆｏｒｍｉｓであり、第２の条虫種がＴａｅｎｉａ ｔａｅｎｉａｅｆｏｒｍｉｓであり、第３の条虫種がＤｉｐｙｌｉｄｉｕｍ ｃａｎｉｎｕｍである、請求項９４〜１０１のいずれか一項に記載のデバイス。
  118. 第１、第２、および第３の抗体が、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーに由来するいかなる糞便抗原にも特異的に結合しない、請求項１１７に記載のデバイス。
  119. １つまたは複数の蠕虫の寄生体、蠕虫ではない寄生体、イヌ糸状虫、１つまたは複数のウイルス、１つまたは複数の真菌、１つまたは複数の原生動物、および１つまたは複数の細菌からなる群の１つまたは複数を検出するための１つまたは複数の試薬をさらに含む、請求項９４〜１１８のいずれか一項に記載のデバイス。
  120. 固体支持体がさらに、
    （ｉ）回虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫、鉤虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、パルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；
    （ｉｉ）鞭虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫、鉤虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；
    （ｉｉｉ）鉤虫糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、鞭虫、回虫、条虫、Ｇｉａｒｄｉａ属、およびパルボウイルスからなる群に由来する糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；
    （ｉｖ）Ｇｉａｒｄｉａ属糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびパルボウイルス糞便抗原から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体；ならびに
    （ｖ）パルボウイルス糞便抗原に特異的に結合する能力があるが、回虫糞便抗原、鞭虫糞便抗原、鉤虫糞便抗原、条虫Ｔａｅｎｉａ属糞便抗原、条虫Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ属糞便抗原、およびＧｉａｒｄｉａ属糞便抗原からなる群から選択される糞便抗原に特異的に結合する能力がない抗体
    からなる群から選択される１つまたは複数の抗体をその上に固相化している、請求項９４〜１１９のいずれか一項に記載のデバイス。
  121. 固体支持体が、２つ以上の抗体、３つ以上の抗体、４つ以上の抗体、５つ以上の抗体、６つ以上の抗体、７つ以上の抗体、または８つ以上の抗体を有する、請求項１２０に記載のデバイス。
  122. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ属であり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ属であり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ属である、請求項１２０に記載のデバイス。
  123. 鉤虫がＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｃａｎｉｎｕｍまたはＡｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｔｕｂａｅｆｏｒｍｅであり、回虫がＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉであり、鞭虫がＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｖｕｌｐｉｓまたはＴｒｉｃｈｕｒｉｓ ｆｅｌｉｓであり、Ｇｉａｒｄｉａ属がＧｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａであり、パルボウイルスがネコパルボウイルスまたはイヌパルボウイルスである、請求項１２２に記載のデバイス。
  124. デバイスが酵素結合免疫吸着アッセイデバイスである、請求項９０〜１２３のいずれか一項に記載のデバイス。
  125. 酵素結合免疫吸着アッセイデバイスがラテラルフローイムノアッセイデバイスである、請求項１２４に記載のデバイス。
  126. 試料がイヌまたはネコ由来である、請求項９４〜１２５のいずれか一項に記載のデバイス。
  127. 糞便抗原の少なくとも１つがグリコシル化されている、請求項９４〜１２６のいずれか一項に記載のデバイス。
  128. 哺乳動物試料における１つまたは複数の扁形動物糞便抗原の検出のためのキットであって、請求項９４〜１２７のいずれか一項に記載のデバイス、および１つまたは複数の糞便抗原の検出のために十分な１つまたは複数の試薬を含む、キット。
  129. １つまたは複数の試薬が、１つまたは複数の指示薬、１つまたは複数の抗体標識化合物、１つまたは複数の抗体、１つまたは複数の抗原捕獲試薬、１つまたは複数の阻害剤、および１つまたは複数の洗浄試薬からなる群から選択される、請求項１２８に記載のキット。
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