KR20210041035A - 알츠하이머병의 판정약 및 판정 방법 - Google Patents

알츠하이머병의 판정약 및 판정 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20210041035A
KR20210041035A KR1020217006577A KR20217006577A KR20210041035A KR 20210041035 A KR20210041035 A KR 20210041035A KR 1020217006577 A KR1020217006577 A KR 1020217006577A KR 20217006577 A KR20217006577 A KR 20217006577A KR 20210041035 A KR20210041035 A KR 20210041035A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
disease
alzheimer
gly
leu
ser
Prior art date
Application number
KR1020217006577A
Other languages
English (en)
Inventor
아츠시 오노
야스히로 데라니시
마사노리 구스모토
마사카즈 하시모토
쇼지 가시와바라
마키 하시모토
Original Assignee
다이닛본 스미토모 세이야꾸 가부시끼가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 다이닛본 스미토모 세이야꾸 가부시끼가이샤 filed Critical 다이닛본 스미토모 세이야꾸 가부시끼가이샤
Publication of KR20210041035A publication Critical patent/KR20210041035A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)

Abstract

본 발명은, 알츠하이머병의 판정에 유용한 이하 중 어느 것인 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드: (1) 서열 번호: 1로 나타내어지는 아미노산 서열; 또는 (2) 서열 번호: 1로 나타내어지는 아미노산 서열에 있어서, 1∼수 개의 아미노산이 치환, 결실, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열 등을 제공한다.

Description

알츠하이머병의 판정약 및 판정 방법
본 발명은, 알츠하이머병의 판정약, 알츠하이머병의 판정 방법, 알츠하이머병의 치료 방법, 알츠하이머병의 치료약의 후보 물질의 선별 방법, 및 신규한 항 S38AA 항체 등에 관한 것이다.
알츠하이머병은, 단기 기억력의 저하, 경도 학습 장애로부터 시작되어, 고차 뇌 기능 장애, 특히 시공간 실인(失認), 관념 실행(失行), 구성 실행 등을 수반하고, 최종적으로 운동 장애나 이른바 인격적 파괴에 이르는 진행성 인지증으로서, 현재 근치적(根治的) 치료법은 발견되고 있지 않다. 2040년에는 알츠하이머병 환자는 세계에 240만 명이 될 것으로도 예측되고 있어, 그 근치 요법 또는 조기 진단의 중요성이 높아지고 있다. 그 진행은, 일본국에서 종종 인지되는 혈관 장애성 인지증과는 달리, 수년에서 10년 이상에 걸친다고 생각되고 있다. 알츠하이머병의 하나인, 유전자 변이의 이상에 의한 가족성 알츠하이머병 환자의 경우, 그 다수가 수년 사이에 급속하게 그 병상(病狀)이 악화되고, 발증 연령도 30대∼40대로 조기 발증인 것이 특징이다. 유전자 변이 이외의 알츠하이머병의 리스크 팩터로서, 연령·가족력·유전자형·고혈압·당뇨병·흡연 등이 알려져 있다.
알츠하이머병에 특징적인 병리 변화로서, 세포외에 아밀로이드 베타를 주된 구성 성분으로 하는 아밀로이드 플라크(amyloid plaque)가 축적하는 것, 및 신경세포내에 고도로 인산화된 타우 단백(tau protein)의 축적이 일어나는 것이 널리 알려져 있다. 공간적·시간적인 뇌내의 병리 변화에 대해서는, 조기 알츠하이머병 환자의 해마, 특히 CA1이라고 불리는 영역의 추체(錐體) 세포내 인산화 타우의 축적이 이미 인지되는 점에서, 본 영역의 추체 세포가 공간적으로도 시간적으로도 알츠하이머병의 영향을 강하고 또한 조기에 받는다고, 즉 취약성을 나타낸다고 생각된다(비특허문헌 2). 한편, 상술한 바와 같이 운동 장애는 알츠하이머병의 거의 최종 단계에서 나타나는 점에서, 소뇌의 푸르키네 세포(purkinje cell)는 가장 알츠하이머병에 저항성을 나타낸다고 생각되고 있다.
알츠하이머병의 발증율에 관해서는 75세를 경계로 급속하게 증가한다고 생각되고, 대증적 약물 요법에 의한 병태의 진행 억제를 위해, 조기 발견, 조기 치료의 개시가 중요하다. 현상(現狀)에서는 알츠하이머병의 근치 요법이 없기 때문에, 알츠하이머병의 조기 발견을 위한 진단 마커의 탐색이 정력적으로 행해지며, 혈중 또는 뇌척수액 중의 아밀로이드 베타(Aβ40, Aβ42), 인산화 타우 단백의 측정이 가장 유력하다고 생각되고 있다. 그러나, 이들 마커 단독 또는, 이들 마커의 조합(예를 들면, Aβ40과 Aβ42 비)을 이용하더라도, 장래에 있어서의 알츠하이머병의 이환(罹患), 즉 알츠하이머병 예비군을 명확하게 찾아내는 것은 곤란하다.
한편, 알츠하이머병의 진단 마커로서 S38AA, 특히 그 세포외 도메인이 보고되고 있다(특허문헌 1).
그러나, 알츠하이머병은, 조기 발견, 조기 치료의 개시가 중요하므로, 더욱 고감도로 알츠하이머병의 발증이나 알츠하이머병 예비군을 판정할 수 있는 방법이 요구되고 있다.
국제공개 제2012/091138호 팸플릿
Exp Gerontol. (2000) 35: 851-64
본 발명의 과제는, 알츠하이머병의 판정약, 알츠하이머병의 판정 방법, 알츠하이머병의 치료 방법, 알츠하이머병의 치료약의 후보 물질의 선별 방법 등을 제공하는 것에 있다.
S38AA 단편은, 알츠하이머병 환자(이하, 「AD 환자」라고 하는 경우가 있다)의 뇌척수액 및 혈장에서 증가하는 것이 알려져 있는바, 본 발명자들은, 알츠하이머병과 특히 상관성이 높은 2종의 S38AA 단편(S38AA short fragment(이하, 「short fragment」로 약기하는 경우가 있다), 및 S38AA long fragment(이하, 「long fragment」로 약기하는 경우가 있다))를 찾아냈다. 또한, 예의 검토를 거듭한 결과, 본 발명자들은, S38AA short fragment가, 고정밀도의 알츠하이머병의 발증이나 예비군의 판정 및 해당 질환의 진행 정도의 판정의 지표로서 매우 높은 신뢰성을 갖는 것을 찾아내어, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명은 이하에 관한 것이다.
[1] 이하 중 어느 것인 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드:
(1) 서열 번호: 1로 나타내어지는 아미노산 서열; 또는
(2) 서열 번호: 1로 나타내어지는 아미노산 서열에 있어서, 1∼수 개의 아미노산이 치환, 결실(缺失), 부가 또는 삽입된 아미노산 서열.
[2] [1]에 기재한 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 항체.
[3] [1]에 기재한 폴리펩티드를 코드하는 핵산.
[4] [2]에 기재한 항체를 포함하는 키트.
[5] [1]에 기재한 폴리펩티드를 추가로 포함하는, [4]에 기재한 키트.
[6] 피검 시료와 [2]에 기재한 항체를 접촉시키는 공정을 포함하는, [1]에 기재한 폴리펩티드를 검출하는 방법.
[7] 알츠하이머병을 판정하기 위해 이용되는, [4] 또는 [5]에 기재한 키트.
[8] [1]에 기재한 폴리펩티드의 양을 측정 가능한 단일, 또는 복수 종류의 항 S38AA 항체를 함유하는, 알츠하이머병의 판정약.
[9] 상기 항 S38AA 항체가 [2]에 기재한 항체인, [8]에 기재한 판정약.
[10] [2]에 기재한 항체의, 알츠하이머병의 판정약의 제조를 위한 사용.
[11] 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 [1]에 기재한 폴리펩티드를 검출하는 것을 특징으로 하는, 해당 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성을 판정하는 방법.
[12] 이하의 (i)∼(iii)의 공정을 포함하는, [11]에 기재한 방법:
(i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 [1]에 기재한 폴리펩티드를 정량(定量)하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 건상(健常, 건강하고 정상인) 동물로부터 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정.
[13] 이하의 (i)∼(iii)의 공정을 포함하는, 알츠하이머병의 진행도의 판정을 보조하는 방법:
(i) 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 [1]에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 해당 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정.
[14] 피검 동물이 인간인, [11]∼[13] 중 어느 하나에 기재한 방법.
[15] 시료가, 혈액, 뇌척수액, 타액, 누액 또는 소변인, [11]∼[14] 중 어느 하나에 기재한 방법.
[16] 다른 1 이상의 알츠하이머병 진단 마커를 검출하는 것을 추가로 포함하는, [11]∼[15] 중 어느 하나에 기재한 방법.
[17] 이하의 (i)∼(iv)의 공정을 포함하는, 알츠하이머병의 치료 또는 예방 방법:
(i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 [1]에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 건상 동물로부터 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정,
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있거나, 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정, 및
(iv) (iii)의 결과에 의거하여, 현재 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있거나, 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정된 피검 동물에게, 알츠하이머병 치료약 또는 예방약을 투여하는 공정.
[18] 이하의 (i)∼(v)의 공정을 포함하는, 알츠하이머병의 치료 또는 예방을 위한 투약 방법:
(i) 현재 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 [1]에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 해당 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정,
(iv) (iii)의 판정 결과에 의거하여, 알츠하이머병 치료약 또는 예방약을 선정하는 공정, 및
(v) (iv)에 의해 선정된 알츠하이머병 치료약을 피검 동물에게 투여하는 공정.
[19] 알츠하이머병 치료약이, 콜린에스테라아제 저해약, NMDA 수용체 길항 약, 아밀로이드 β 제거약 및 축적 억제약, 그리고 타우 단백질 제거약 및 축적 억제약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, [17] 또는 [18]에 기재한 방법.
[20] 콜린에스테라아제 저해약이, 도네페질, 갈란타민, 리바스티그민, 후페르진 A 또는 타크린이며, NMDA 수용체 길항약이 메만틴인, [19]에 기재한 방법.
[21] 이하의 (i)∼(iv)의 공정에서, 알츠하이머병의 진행도가 판정된 환자에게 이용되는, 알츠하이머병 치료약:
(i) 현재 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 [1]에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 해당 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정,
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정, 및
(iv) (iii)의 판정 결과에 의거하여, 알츠하이머병 치료약을 투여하는 것을 결정하는 공정.
[22] 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 [1]에 기재한 폴리펩티드의 양을 감소시키는 약제, 또는 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내에 있어서의 해당 폴리펩티드의 산생(産生)을 저해하는 약제를, 유효 성분으로서 함유하는 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약.
[23] 피검 물질이, 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 [1]에 기재한 폴리펩티드의 양을 감소시키는 것, 또는 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내에 있어서의 해당 폴리펩티드의 산생을 저해하는 것을 지표로 하는, 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질을 선별하는 방법.
[24] 서열 번호 1 또는 2의 폴리펩티드를 인식하는 항체로서,
상기 항체의 중쇄 가변영역의 아미노산 서열이, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 또는 서열 번호 22와 적어도 95％의 상동성(相同性)을 갖고,
상기 항체의 경쇄 가변영역의 아미노산 서열이, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 또는 서열 번호 23과 적어도 95％의 상동성을 갖는, 항체.
[25] 서열 번호 1 또는 2의 폴리펩티드를 인식하는 항체로서,
(1) 서열 번호 4의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 5의 경쇄 가변영역,
(2) 서열 번호 6의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 7의 경쇄 가변영역,
(3) 서열 번호 8의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 9의 경쇄 가변영역,
(4) 서열 번호 10의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 11의 경쇄 가변영역,
(5) 서열 번호 12의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 13의 경쇄 가변영역,
(6) 서열 번호 14의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 15의 경쇄 가변영역,
(7) 서열 번호 16의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 17의 경쇄 가변영역,
(8) 서열 번호 18의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 19의 경쇄 가변영역,
(9) 서열 번호 20의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 21의 경쇄 가변영역, 또는
(10) 서열 번호 22의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 23의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체.
[26] [24] 또는 [25]에 기재한 항체를 포함하는 키트.
[27] 서열 번호 1의 폴리펩티드를 추가로 포함하는, [26]에 기재한 키트.
[28] 피검 시료와 [24] 또는 [25]에 기재한 항체를 접촉시키는 공정을 포함하는, 서열 번호 1의 폴리펩티드를 검출하는 방법.
[29] 알츠하이머병을 판정하기 위해 이용되는, [26] 또는 [27]에 기재한 키트.
[30] 서열 번호 1의 폴리펩티드의 양을 측정 가능한 [24] 또는 [25]에 기재한 항체를 함유하는, 알츠하이머병의 판정약.
[31] 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1의 폴리펩티드를, [24] 또는 [25]에 기재한 항체를 이용하여 검출하는 것을 특징으로 하는, 해당 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성을 판정하는 방법.
[32] 이하의 (i)∼(iii)의 공정을 포함하는, [31]에 기재한 방법:
(i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1의 폴리펩티드를, [24] 또는 [25]에 기재한 항체를 이용하여, 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 건상 동물로부터 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정.
[33] 이하의 (i)∼(iii)의 공정을 포함하는, 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법:
(i) 알츠하이머병에 이환 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 [1]에 기재한 폴리펩티드를, [24] 또는 [25]에 기재한 항체를 이용하여, 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 해당 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정.
[34] 피검 동물이 인간인, [31]∼[33] 중 어느 하나에 기재한 방법.
[35] 시료가, 혈액, 뇌척수액, 타액, 누액 또는 소변인, [31]∼[34] 중 어느 하나에 기재한 방법.
[36] 다른 1 이상의 알츠하이머병 진단 마커를 검출하는 것을 추가로 포함하는, [31]∼[35] 중 어느 하나에 기재한 방법.
[37] 이하의 (i)∼(iv)의 공정을 포함하는, 알츠하이머병의 진행도가 판정된 환자에게 알츠하이머병 치료약을 투여하는 것을 특징으로 하는, 알츠하이머병의 치료 방법:
(i) 현재 알츠하이머병에 이환 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1에 기재한 폴리펩티드를, [24] 또는 [25] 중 어느 한 항에 기재한 항체를 이용하여, 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 해당 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정,
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정, 및
(iv) (iii)의 판정 결과에 의거하여, 그것을 필요로 하는 피검 동물에게 알츠하이머병 치료약을 투여하는 공정.
[38] [24] 또는 [25]에 기재한 항체를 이용하여 진단한 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 서열 번호 1의 폴리펩티드의 양을 감소시키는 약제, 또는 상기 알츠하이머병 환자 또는 상기 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내에 있어서의 해당 폴리펩티드의 산생을 저해하는 약제를, 유효 성분으로서 함유하는 알츠하이머병의 치료 방법 또는 예방 방법.
[39] 피검 물질이, 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 서열 번호 1에 기재한 폴리펩티드의 양을 감소시키는 것, 또는 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내에 있어서의 해당 폴리펩티드의 산생을 저해하는 것을 지표로 하는, [24] 또는 [25]에 기재한 항체를 이용한 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질을 선별하는 방법.
[항 1] 이하 중 어느 것인 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드:
(1) 서열 번호 1로 나타내어지는 아미노산 서열, 또는
(2) 서열 번호 1로 나타내어지는 아미노산 서열에 있어서, 1∼수 개의 아미노산이 치환, 결실, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열.
[항 2] 서열 번호 1로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는, 항 1에 기재한 폴리펩티드.
[항 3] 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 코드하는 핵산.
[항 4] 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 인식하는 항체.
[항 5] 추가로 서열 번호 2의 폴리펩티드를 인식하는, 항 4에 기재한 항체.
[항 6] 상기 항체의 중쇄 가변영역의 아미노산 서열이, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 또는 서열 번호 22와 적어도 95％의 상동성을 갖고, 또한
상기 항체의 경쇄 가변영역의 아미노산 서열이, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 또는 서열 번호 23과 적어도 95％의 상동성을 갖는, 항 4 또는 5에 기재한 항체.
[항 7] 상기 항체의 중쇄 가변영역의 아미노산 서열이, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 또는 서열 번호 22와 적어도 99％의 상동성을 갖고, 또한
상기 항체의 경쇄 가변영역의 아미노산 서열이, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 또는 서열 번호 23과 적어도 99％의 상동성을 갖는, 항 4∼6 중 어느 한 항에 기재한 항체.
[항 8] 상기 항체의 중쇄 가변영역의 아미노산 서열이, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 또는 서열 번호 22이고, 또한
상기 항체의 경쇄 가변영역의 아미노산 서열이, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 또는 서열 번호 23인, 항 4∼6 중 어느 한 항에 기재한 항체.
[항 9] (1) 서열 번호 4의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 5의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(2) 서열 번호 6의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 7의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(3) 서열 번호 8의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 9의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(4) 서열 번호 10의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 11의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(5) 서열 번호 12의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 13의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(6) 서열 번호 14의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 15의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(7) 서열 번호 16의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 17의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(8) 서열 번호 18의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 19의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(9) 서열 번호 20의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 21의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체, 또는
(10) 서열 번호 22의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 23의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체인, 항 4∼8 중 어느 한 항에 기재한 항체.
[항 10] 피검 시료와 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체를 접촉시키는 공정을 포함하는, 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 검출하는 방법.
[항 11] 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체를 포함하는 키트.
[항 12] 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 항 11에 기재한 키트.
[항 13] 알츠하이머병을 판정하기 위해 이용되는, 항 11 또는 12에 기재한 키트.
[항 14] 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드의 양을 측정 가능한 단일, 또는 복수 종류의 항 S38AA 항체를 함유하는, 알츠하이머병의 판정약.
[항 15] 상기 항 S38AA 항체가 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체인, 항 14에 기재한 판정약.
[항 16] 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체의, 알츠하이머병의 판정약의 제조를 위한 사용.
[항 17] 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 검출하는 것을 특징으로 하는, 해당 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성을 판정하는 방법.
[항 18] 상기 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를, 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체를 이용하여 검출하는 것을 특징으로 하는, 항 17에 기재한 방법.
[항 19] 이하의 (i)∼(iii)의 공정을 포함하는, 항 17 또는 18에 기재한 방법:
(i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 건상 동물로부터 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정.
[항 20] 상기 (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치의 1.1배 이상의 양인 것을 특징으로 하는, 항 19에 기재한 방법.
[항 21] 이하의 (i)∼(iii)의 공정을 포함하는, 항 17 또는 18에 기재한 방법:
(i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 컷 오프치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정.
[항 22] 상기 컷 오프치가, 45∼75 유닛인 것을 특징으로 하는, 항 21에 기재한 방법.
[항 23] 상기 컷 오프치가, 45∼75ng/mL인 것을 특징으로 하는, 항 21에 기재한 방법.
[항 24] 상기 피검 동물이 인간인, 항 17∼23 중 어느 한 항에 기재한 방법.
[항 25] 상기 시료가, 혈액, 뇌척수액, 타액, 누액 또는 소변인, 항 17∼24 중 어느 한 항에 기재한 방법.
[항 26] 다른 1 이상의 알츠하이머병 진단 마커를 검출하는 것을 추가로 포함하는, 항 17∼25 중 어느 한 항에 기재한 방법.
[항 27] 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 검출하는 것을 특징으로 하는, 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법.
[항 28] 상기 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를, 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체를 이용하여 검출하는 것을 특징으로 하는, 항 27에 기재한 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법.
[항 29] 이하의 (i)∼(iii)의 공정을 포함하는, 항 27 또는 28에 기재한 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법:
(i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 건상 동물로부터 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정.
[항 30] 상기 (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치의 1.1배 이상의 양인 것을 특징으로 하는, 항 29에 기재한 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법.
[항 31] 이하의 (i)∼(ii)의 공정을 포함하는, 항 27 또는 28에 기재한 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법:
(i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 컷 오프치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정.
[항 32] 상기 컷 오프치가, 45∼75 유닛인 것을 특징으로 하는, 항 31에 기재한 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법.
[항 33] 상기 컷 오프치가, 45∼75ng/mL인 것을 특징으로 하는, 항 31에 기재한 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법.
[항 34] 상기 피검 동물이 인간인, 항 27∼33 중 어느 한 항에 기재한 방법.
[항 35] 상기 시료가, 혈액, 뇌척수액, 타액, 누액 또는 소변인, 항 27∼34 중 어느 한 항에 기재한 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법.
[항 36] 다른 1 이상의 알츠하이머병 진단 마커를 검출하는 것을 추가로 포함하는, 항 27∼35 중 어느 한 항에 기재한 알츠하이머병의 진행도를 판정하는 방법.
[항 37] 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 검출하고, 피검 동물에게 알츠하이머병 치료약을 투여하는 것을 특징으로 하는, 알츠하이머병의 치료 또는 예방 방법.
[항 38] 상기 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를, 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체를 이용하여 검출하는 것을 특징으로 하는, 항 37에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 39] 이하의 (i)∼(iv)의 공정을 포함하는, 항 37 또는 38에 기재한 치료 또는 예방 방법:
(i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 건상 동물로부터 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정,
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있거나, 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정, 및
(iv) (iii)의 결과에 의거하여, 현재 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있거나, 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정된 피검 동물에게, 알츠하이머병 치료약 또는 예방약을 투여하는 공정.
[항 40] 상기 (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치의 1.1배 이상의 양인 것을 특징으로 하는, 항 39에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 41] 이하의 (i)∼(ii)의 공정을 포함하는, 항 37 또는 38에 기재한 치료 또는 예방 방법:
(i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 컷 오프치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정.
[항 42] 상기 컷 오프치가, 45∼75 유닛인 것을 특징으로 하는, 항 41에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 43] 상기 컷 오프치가, 45∼75ng/mL인 것을 특징으로 하는, 항 41에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 44] 상기 피검 동물이 인간인, 항 37∼43 중 어느 한 항에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 45] 상기 시료가, 혈액, 뇌척수액, 타액, 누액 또는 소변인, 항 37∼44 중 어느 한 항에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 46] 다른 1 이상의 알츠하이머병 진단 마커를 검출하는 것을 추가로 포함하는, 항 37∼45 중 어느 한 항에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 47] 알츠하이머병 치료약이, 콜린에스테라아제 저해약, NMDA 수용체 길항약, 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약, 그리고 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 항 37∼46 중 어느 한 항에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 48] 상기 콜린에스테라아제 저해약이, 도네페질, 갈란타민, 리바스티그민, 후페르진 A, 및 타크린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 47에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 49] 상기 NMDA 수용체 길항약이, 메만틴인, 항 47에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 50] 상기 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약이, 아밀로이드 β 백신, 아밀로이드 β 제거 항체, 아밀로이드 β 산생 효소 저해제, 아밀로이드 β 응집 억제제 및 아밀로이드 β 분해 촉진제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 47에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 51] 상기 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약이, CNP-520, E-2609, 아두카누맙(aducanumab), 솔라네주맙(solanezumab), 간테네루맙(gantenerumab), 크레네주맙(crenezumab), 아밀로모타이드(amilomotide), ASD-005, HSH-971, ELND-005, ALZT-OP1, 닐바디핀(nilvadipine), ACI-24, UB-311, 아피토프(AFFITOPE) AD-02, LY-3002813, BAN-2401, 뉴로스템-AD(Neurostem-AD), CT-1812, ID-1201, NIC5-15, BI-425809, 포시펜(Posiphen), PQ-912, 브리오스타틴-1(bryostatin-1), 아파베탈론(Apabetalone), PBT-2, RIV-1061-IR, MEDI-1814, PF-05236812, SAR-228810, Lu-AF20513, PRI-002, IRX-4204, GC-021109, AAD-2004, CTS-21166, LY-3323795, 벤포티아민(benfotiamine), 비스노르심세린(bisnorcymserine), MDR-1339, KHK-6640, 및 NPT-088로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 47에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 52] 상기 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약이, 타우 단백질 백신, 타우 단백질 제거 항체, 타우 단백질 수식(修飾) 억제제, 타우 단백질 응집 억제제, 및 타우 단백질 분해 촉진제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 47에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 53] 상기 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약이, TRx-237, TPI-287, ABBV-8E12, RG-6100, AADvac1, RO7105705, PTI-80, JNJ-63733657, UCB-0107, BIIB-076, MC-1, ACI-35, 및 AZP-2006로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 47에 기재한 치료 또는 예방 방법.
[항 54] 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하고, 알츠하이머병 치료약 또는 예방약을 선정하여, 피검 동물에게 알츠하이머병 치료약을 투여하는 것을 특징으로 하는, 알츠하이머병의 치료 또는 예방을 위한 투약 방법.
[항 55] 상기 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를, 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체를 이용하여 정량하는 것을 특징으로 하는, 항 54에 기재한 투약 방법.
[항 56] (i) 현재 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 해당 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정,
(iv) (iii)의 판정 결과에 의거하여, 알츠하이머병 치료약 또는 예방약을 선정하는 공정, 및
(v) (iv)에 의해 선정된 알츠하이머병 치료약을 피검 동물에게 투여하는 공정을 포함하는, 항 54 또는 55에 기재한 투약 방법.
[항 57] 상기 (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치의 1.1배 이상의 양인 경우, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하는 것을 특징으로 하는, 항 56에 기재한 투약 방법.
[항 58] 상기 (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치의 0.9배 이하의 양인 경우, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 것을 특징으로 하는, 항 56에 기재한 투약 방법.
[항 59] 상기 피검 동물이 인간인, 항 54∼58 중 어느 한 항에 기재한 투약 방법.
[항 60] 상기 시료가, 혈액, 뇌척수액, 타액, 누액 또는 소변인, 항 54∼59 중 어느 한 항에 기재한 투약 방법.
[항 61] 다른 1 이상의 알츠하이머병 진단 마커를 검출하는 것을 추가로 포함하는, 항 54∼60 중 어느 한 항에 기재한 투약 방법.
[항 62] 알츠하이머병 치료약이, 콜린에스테라아제 저해약, NMDA 수용체 길항약, 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약, 그리고 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 항 54∼61 중 어느 한 항에 기재한 투약 방법.
[항 63] 상기 콜린에스테라아제 저해약이, 도네페질, 갈란타민, 리바스티그민, 후페르진 A, 및 타크린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 62에 기재한 투약 방법.
[항 64] 상기 NMDA 수용체 길항약이, 메만틴인, 항 62에 기재한 투약 방법.
[항 65] 상기 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약이, 아밀로이드 β 백신, 아밀로이드 β 제거 항체, 아밀로이드 β 산생 효소 저해제, 아밀로이드 β 응집 억제제 및 아밀로이드 β 분해 촉진제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 62에 기재한 투약 방법.
[항 66] 상기 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약이, CNP-520, E-2609, 아두카누맙(aducanumab), 솔라네주맙(solanezumab), 간테네루맙(gantenerumab), 크레네주맙(crenezumab), 아밀로모타이드(amilomotide), ASD-005, HSH-971, ELND-005, ALZT-OP1, 닐바디핀(nilvadipine), ACI-24, UB-311, 아피토프(AFFITOPE) AD-02, LY-3002813, BAN-2401, 뉴로스템-AD(Neurostem-AD), CT-1812, ID-1201, NIC5-15, BI-425809, 포시펜(Posiphen), PQ-912, 브리오스타틴-1(bryostatin-1), 아파베탈론(Apabetalone), PBT-2, RIV-1061-IR, MEDI-1814, PF-05236812, SAR-228810, Lu-AF20513, PRI-002, IRX-4204, GC-021109, AAD-2004, CTS-21166, LY-3323795, 벤포티아민(benfotiamine), 비스노르심세린(bisnorcymserine), MDR-1339, KHK-6640, 및 NPT-088로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 62에 기재한 투약 방법.
[항 67] 상기 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약이, 타우 단백질 백신, 타우 단백질 제거 항체, 타우 단백질 수식 억제제, 타우 단백질 응집 억제제, 및 타우 단백질 분해 촉진제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 62에 기재한 투약 방법.
[항 68] 상기 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약이, TRx-237, TPI-287, ABBV-8E12, RG-6100, AADvac1, RO7105705, PTI-80, JNJ-63733657, UCB-0107, BIIB-076, MC-1, ACI-35, 및 AZP-2006로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 62에 기재한 투약 방법.
[항 69] 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하여, 알츠하이머병의 진행도가 판정된 환자에게 이용되는, 알츠하이머병 치료약.
[항 70] 상기 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를, 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체를 이용하여 정량하는 것을 특징으로 하는, 항 69에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 71] 이하의 (i)∼(iv)의 공정에서, 알츠하이머병의 진행도가 판정된 환자에게 이용되는, 항 69 또는 항 70에 기재한 알츠하이머병 치료약:
(i) 현재 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 해당 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정,
(iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정, 및
(iv) (iii)의 판정 결과에 의거하여, 알츠하이머병 치료약을 투여하는 것을 결정하는 공정.
[항 72] 상기 (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치의 1.1배 이상의 양인 경우, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하는 것을 특징으로 하는, 항 71에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 73] 상기 (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치의 0.9배 이하의 양인 경우, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 것을 특징으로 하는, 항 71에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 74] 이하의 (i)∼(iv)의 공정에서, 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정된 환자에게 이용되는, 항 69 또는 항 70에 기재한 알츠하이머병 치료약:
(i) 현재 알츠하이머병에 이환되어 있거나 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
(ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 컷 오프치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정,
(iii) (ii)의 판정 결과에 의거하여, 알츠하이머병 치료약을 투여하는 것을 결정하는 공정.
[항 75] 상기 컷 오프치가, 45∼75 유닛인 것을 특징으로 하는, 항 74에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 76] 상기 컷 오프치가, 45∼75ng/mL인 것을 특징으로 하는, 항 74에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 77] 상기 피검 동물이 인간인, 항 69∼76 중 어느 한 항에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 78] 상기 시료가, 혈액, 뇌척수액, 타액, 누액 또는 소변인, 항 69∼77 중 어느 한 항에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 79] 다른 1 이상의 알츠하이머병 진단 마커를 검출하는 것을 추가로 포함하는, 항 69∼78 중 어느 한 항에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 80] 알츠하이머병 치료약이, 콜린에스테라아제 저해약, NMDA 수용체 길항약, 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약, 그리고 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 항 69∼79 중 어느 한 항에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 81] 상기 콜린에스테라아제 저해약이, 도네페질, 갈란타민, 리바스티그민, 후페르진 A, 및 타크린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 80에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 82] 상기 NMDA 수용체 길항약이, 메만틴인, 항 80에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 83] 상기 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약이, 아밀로이드 β 백신, 아밀로이드 β 제거 항체, 아밀로이드 β 산생 효소 저해제, 아밀로이드 β 응집 억제제 및 아밀로이드 β 분해 촉진제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 80에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 84] 상기 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약이, CNP-520, E-2609, 아두카누맙(aducanumab), 솔라네주맙(solanezumab), 간테네루맙(gantenerumab), 크레네주맙(crenezumab), 아밀로모타이드(amilomotide), ASD-005, HSH-971, ELND-005, ALZT-OP1, 닐바디핀(nilvadipine), ACI-24, UB-311, 아피토프(AFFITOPE) AD-02, LY-3002813, BAN-2401, 뉴로스템-AD(Neurostem-AD), CT-1812, ID-1201, NIC5-15, BI-425809, 포시펜(Posiphen), PQ-912, 브리오스타틴-1(bryostatin-1), 아파베탈론(Apabetalone), PBT-2, RIV-1061-IR, MEDI-1814, PF-05236812, SAR-228810, Lu-AF20513, PRI-002, IRX-4204, GC-021109, AAD-2004, CTS-21166, LY-3323795, 벤포티아민(benfotiamine), 비스노르심세린(bisnorcymserine), MDR-1339, KHK-6640, 및 NPT-088로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 80에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 85] 상기 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약이, 타우 단백질 백신, 타우 단백질 제거 항체, 타우 단백질 수식 억제제, 타우 단백질 응집 억제제, 및 타우 단백질 분해 촉진제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 80에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 86] 상기 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약이, TRx-237, TPI-287, ABBV-8E12, RG-6100, AADvac1, RO7105705, PTI-80, JNJ-63733657, UCB-0107, BIIB-076, MC-1, ACI-35, 및 AZP-2006로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나인, 항 80에 기재한 알츠하이머병 치료약.
[항 87] 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 항 1 또는 항 2에 기재한 폴리펩티드의 양을 감소시키는 약제, 또는 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내에 있어서의 해당 폴리펩티드의 산생을 저해하는 약제를, 유효 성분으로서 함유하는 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약.
[항 88] 상기 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드를, 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체를 이용하여 검출하는 것을 특징으로 하는, 항 87에 기재한 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약.
[항 89] 피검 물질이, 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드의 양을 감소시키는 것, 또는 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내에 있어서의 해당 폴리펩티드의 산생을 저해하는 것을 지표로 하는, 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질을 선별하는 방법.
[항 90] 상기 항 1 또는 2에 기재한 폴리펩티드의 양의 감소를, 항 4∼9 중 어느 한 항에 기재한 항체를 이용하여 검출하는 것을 특징으로 하는, 항 89에 기재한 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질을 선별하는 방법.
본 발명에 의하면, 알츠하이머병의 판정약, 알츠하이머병의 판정 방법, 알츠하이머병의 치료 방법, 알츠하이머병의 치료약의 후보 화합물을 선별하는 방법, 및 신규한 항 S38AA 항체 등을 제공할 수 있다.
도 1은, S38AA의 아미노산 서열을 나타내고 있다. 이 중, S38AA long fragment의 N 말단의 동정(同定)에 있어서, LC-MS/MS법에 의해 검출한 펩티드의 서열을 굵은 글씨로 나타낸다.
도 2는, S38AA long fragment의 N 말단의 동정에 있어서, LC-MS/MS법에 의해 검출한 399EEVPEDLAEEAPGGR413 펩티드의 MS/MS 피크 스펙트럼을 나타낸다. 종축은 각 이온의 피크 강도를, 횡축은 m/z를 나타내고 있다.
도 3은, S38AA의 아미노산 서열을 나타내고 있다. 이 중, S38AA short fragment의 N 말단의 동정에 있어서, LC-MS/MS법에 의해 검출한 펩티드의 서열을 굵은 글씨로 나타낸다.
도 4는, S38AA short fragment의 N 말단의 동정에 있어서, LC-MS/MS법에 의해 검출한 617GLAVGGGEKAK627 펩티드의 MS/MS 피크 스펙트럼을 나타낸다. 종축은 각 이온의 피크 강도를, 횡축은 m/z를 나타내고 있다.
도 5는, S38AA의 아미노산 서열을 나타내고 있다. 이 중, S38AA long fragment의 C 말단의 동정에 있어서, LC-MS/MS법에 의해 검출한 펩티드의 서열을 굵은 글씨로 나타낸다.
도 6은, S38AA long fragment의 C 말단의 동정에 있어서, LC-MS/MS법에 의해 검출한 1040DLKLQAGSDL1049 펩티드의 MS/MS 피크 스펙트럼을 나타낸다. 종축은 각 이온의 피크 강도를, 횡축은 m/z를 나타내고 있다.
도 7은, Long ELISA 및 Total ELISA 측정계(測定系)로 대장균 재조합 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 발현량을 각각 측정했을 때의 정량성(검량선)을 나타낸다. 각 그래프의 종축은 450nm에 있어서의 흡광도를, 횡축은 각 단백질의 농도를 나타내고 있다.
도 8은, 감산법(減算法)에 의한 인간 혈장 중 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량을 행하였을 때의 각 샘플에 있어서의 정량치를 나타낸다. 종축은 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량치를, 횡축은 각 샘플을 나타내고 있다. D로 시작되는 번호는 건상자, AG로 시작되는 번호는 중등도(中等度) 및 중도(重度) AD 환자를 나타내고 있다.
도 9는, 감산법에 의한 인간 혈장 중 S38AA long fragment(왼쪽 도면) 및 S38AA short fragment(오른쪽 도면)의 정량을 행하였을 때의 각 군에 있어서의 정량치를 나타낸다. 종축은 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량치를, 횡축은 각 군을 나타내고 있다. 개별의 샘플을 각 플롯으로 표기하고 있다. 그래프 바는 (각 군의 평균치±표준 편차)를 나타내고 있다.
도 10은, 면역 침강 제거법에 의한 인간 혈장 중 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량을 행하였을 때의 각 군에 있어서의 정량치를 나타낸다. 종축은 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량치를, 횡축은 각 군을 나타내고 있다.
도 11은, 감산법에 의한 인간 혈장 중 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량을 행하였을 때의 각 샘플에 있어서의 정량치를 나타낸다. 종축은 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량치를, 횡축은 각 샘플을 나타내고 있다. TSUM으로 시작되는 번호는 건상자, ASUM으로 시작되는 번호는 경도 AD 환자를 나타내고 있다.
도 12는, 감산법에 의한 인간 혈장 중 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment(왼쪽 도면), S38AA short fragment(중간 도면) 그리고 S38AA long fragment(오른쪽 도면)의 정량을 행하였을 때의 각 군에 있어서의 정량치를 나타낸다. 종축은 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량치를, 횡축은 각 군을 나타내고 있다. 개별의 샘플을 각 플롯으로 표기하고 있다. 그래프 바는 (각 군의 평균치±표준 편차)를 나타내고 있다.
도 13은, Long fragment용 항체, 항체 A, 항체 B 및 항체 C의 인식 부위를 나타낸 도면이다.
도 14는, 각종 항 S38AA fragment 항체를 조합한 인간 혈장 중 S38AA fragment의 정량을 행하였을 때의 각 샘플에 있어서의 정량치를 나타낸다. 항체의 조합은, 항체 A와 항체 B, 항체 A와 항체 C, 및 항체 B와 항체 C의 3패턴이고, 해당 조합에 의해 ELISA를 행하였다. 종축은 S38AA fragment 총량의 정량치를, 횡축은 각 샘플을 나타내고 있다. TSUM으로 시작되는 번호는 건상자, ASUM으로 시작되는 번호는 AD 환자를 나타내고 있다.
도 15는, 각종 항 S38AA fragment 항체를 조합한 인간 혈장 중 S38AA fragment의 정량을 행하였을 때의 각 샘플에 있어서의 정량치를 나타낸다. 항체의 조합은, Long fragment용 항체와 항체 A, Long fragment용 항체와 항체 B, 및 Long fragment용 항체와 항체 C의 3패턴이고, 해당 조합에 의해 ELISA를 행하였다. 종축은 S38AA long fragment의 정량치를, 횡축은 각 샘플을 나타내고 있다. TSUM으로 시작되는 번호는 건상자, ASUM으로 시작되는 번호는 AD 환자를 나타내고 있다.
도 16은, 도 14 및 15의 결과로부터, 감산법에 의해 인간 혈장 중 S38AA short fragment의 정량을 행하였을 때의, 각 샘플에 있어서의 정량치를 나타낸다. 종축은 S38AA short fragment의 정량치를, 횡축은 각 샘플을 나타내고 있다. TSUM으로 시작되는 번호는 건상자, ASUM으로 시작되는 번호는 AD 환자를 나타내고 있다.
본 명세서에 있어서 「알츠하이머병」에는, 상기의 「가족성 알츠하이머병」과 「고발성(孤發性) 알츠하이머병」이 모두 포함된다.
본 발명에 있어서, 「알츠하이머병에 이환되어 있다」 즉 「알츠하이머병 환자이다」란, 기억이나 인지 기능의 장애에 의거하는 임상 진단 또는 뇌의 위축 등에 의거하는 화상 진단에 의해 알츠하이머병을 발증하고 있다고 진단될 수 있는 상태를 말한다.
본 명세서에 있어서 「알츠하이머병을 발증하고 있다」란, 알츠하이머병의 임상 진단 기준, 예를 들면, 미국립 신경질환·뇌졸중 연구소와 알츠하이머병·관련 장애 협회(NINCDS-ADRDA)의 진단 기준, 또는 미국립 노화 연구소와 알츠하이머병 협회(NIA-AA)에 의한 알츠하이머병 개정 진단 기준(이하, 「알츠하이머병 개정 진단 기준(2011)」이라고 약기한다.) 등에 의거하여 알츠하이머병으로 진단된 상태를 나타낸다.
어떤 진단 기준도, 기억 장애를 중심으로 하는 인지 기능 장애의 존재, 완서(緩徐) 발증과 진행성의 경과, 인지 기능의 장애에 수반하는 사회 생활이나 일상생활 동작의 장애, 비(非)AD형 인지증의 감별·제외 등이, 진단의 지표로 되어 있다.
또, 알츠하이머병을 발증하고 있는 상태는, 그 증상의 위중도(重篤度)에 따라 3단계(경도, 중등도(또는 중도), 고도(또는 중도), 또는, 제 1 기(또는 건망기), 제 2 기(또는 혼란기), 제 3 기(또는 와상기(臥床期)))로 크게 나눠진다. 위중도의 평가는, 인지 기능 장애의 정도를 측정하는 미니 멘탈 스테이트 검사(MMSE), 일상생활 동작을 주체로 중증도를 판정하는 인지증 기능 평가별 병기 분류(FAST), 임상적으로 중증도를 판정하는 임상 인지증 척도(CDR) 등 외, 임상 시험에서 이용되는 알츠하이머병 인지 기능 평가 척도(ADAS-cog)나 고도 인지 기능 장애 검사(SIB) 등을 이용하여 행할 수 있다.
알츠하이머병에 있어서의 인지 기능의 장애의 정도를 평가하는 방법으로는, 예를 들면, 미니 멘탈 스테이트 검사(MMSE)의 스코어를 판단 기준의 하나로서 사용할 수 있으며, 0∼30점의 스케일 중, 기준으로서, 9점 이하는 중도 알츠하이머병, 10∼19점이 중등도 알츠하이머병, 20∼23점이 경도 알츠하이머병, 24점 이상은 경도 인지 장애 내지 정상이라고 판정되고 있다.
본 명세서에 있어서 「알츠하이머병 예비군」(Pre-Alzheimer's disease), 즉 「알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자(인간)」, 「알츠하이머병 하이리스크군인 자(인간)」로는, 상술의 진단으로는 아직 알츠하이머병을 발증하고 있다고 진단될 수 없지만, 뇌 조직에서의 Aβ나 타우 단백의 축적이 시작되고 있어 가까운 장래에 알츠하이머병을 발증할 가능성이 높은 알츠하이머병 발증 전(前)단계의 상태, 즉 뇌 조직에서의 Aβ나 타우 단백이 축적되어 있는 상태(Preclinical AD라고도 한다)의 인간을 들 수 있다. 여기에서, 뇌 조직에서의 Aβ 또는 타우 단백의 축적은, 아밀로이드 PET 또는 타우 PET나 뇌수액(腦髓液) 중의 Aβ 또는 인산화 타우 등을 바이오 마커로서 확인할 수 있다.
본 명세서에 있어서 「발증 전단계의 알츠하이머병(Preclinical AD)」이란, 상기의 알츠하이머병 개정 진단 기준(2011)에 있어서의 Preclinical AD의 연구 기준에서 정의되고 있는 바와 같이, 알츠하이머병의 병태를 시사하는 바이오 마커 양성이지만, 인지 기능은 정상 또는 경도 인지 장애(MCI)의 진단 기준을 만족시키지 않는 극히 경미한 인지 기능 장애만을 인정하는 상태이다.
또, 알츠하이머병에 이환되어 있다고 진단되지 않지만, 경도 인지 장애로 진단되는 상태의 인간은, 당해 증상이 알츠하이머병의 전조의 증상이고, 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있는 점에서, 「알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자(인간)」에 포함된다.
본 명세서에 있어서 「경도 인지 장애(또는 경도 인지 기능 장애)」(MCI)란, 정상과 인지증의 중간의 상태로, 인지 기능이 정상역을 넘어 나쁘지만, 일상생활은 유지되고 있고, 인지증으로는 진단되지 않는 상태, 즉 인지증의 전구 상태를 나타낸다.
경도 인지 장애의 진단은, 예를 들면, 2003년의 MCI Key Symposium에서 제창된 진단 기준(Winblad B 등, (2004) J. Intern. Med. 256:240-246), 또는 상기의 NIA-AA에 의한 알츠하이머병 개정 진단 기준(2011)에 기재된 경도 인지 장애의 진단 기준 등에 의거하여 행할 수 있다.
인지증의 중증도의 평가 척도를 지표로 한 경우, 기준으로서, CDR(Clinical Dementia Rating) 스코어가 0.5(인지증의 의심), 또는 FAST(Functinal Assessment Staging) 스테이지가 3(인지증의 의심)인 상태가 경도 인지 장애에 상당한다. 또, 전술의 MMSE 스코어를 지표로 한 경우는, 기준으로서, 스코어가 24 이상이며 알츠하이머병으로 진단되지 않는 상태가 경도 인지 장애에 상당하고, 동 스코어가 24∼28이면, 경도 인지 장애일 가능성이 높다고 할 수 있다.
1. 본 발명의 폴리펩티드
본 발명자들은, 우선, AD 환자의 혈액에서는, S38AA의 막외 부분에서 절단되어 발생하는 S38AA long fragment량이 상승하고 있는 것을 찾아내고, 또한 AD 환자의 혈액에서는, 해당 long fragment의 C 말단측을 특이적으로 절단하는 효소가 존재하거나, 또는 해당 효소의 활성이 높고, S38AA short fragment량이 크게 상승하고 있으며, 또한 혈중의 S38AA short fragment량은, 알츠하이머병의 위중도(인지 기능 장애의 진행도)가 경도, 중등도 및 중증 중 어느 것이어도 건상인에 비해 높은 것, 또한 중등도 및 중도에서는 경도에 비해 높은 것을 찾아내어, 해당 S38AA short fragment량이 고정밀도의 알츠하이머병의 발증이나 예비군의 판정의 지표로서 매우 높은 신뢰성을 갖는 것을 찾아냈다.
따라서, 본 발명은, 우선, S38AA short fragment인 서열 번호 1로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드(서열 번호 3으로 나타내어지는 S38AA의 아미노산 서열(1∼1119) 중, 617번째∼1049번째의 아미노산 서열 부분에 상당), 및 S38AA long fragment인 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드(서열 번호 3으로 나타내어지는 S38AA의 아미노산 서열(1∼1119) 중, 399번째∼1049번째의 아미노산 서열 부분에 상당)를 제공하는 것이다.
또, S38AA short fragment는, 후술하는 서열 번호 1로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체에 의해 인식되는 한, 해당 아미노산 서열에 있어서, 1∼수 개의 아미노산이 치환, 결실, 부가 또는 삽입되어 있어도 된다. 마찬가지로, S38AA long fragment는, 후술하는 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체에 의해 인식되는 한, 해당 아미노산 서열에 있어서, 1∼수 개의 아미노산이 치환, 결실, 부가 또는 삽입되어 있어도 된다. 여기에서, 수 개란, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 2∼10개여도 되고, 2∼8개여도 되며, 2∼6개여도 되고, 2∼4개여도 되며, 2∼3개여도 되고, 2개여도 된다.
S38AA short fragment는, 적절히 그 N 말단, C 말단, 또는 측쇄에 있어서 당업자에게 주지의 방법, 예를 들면, N 말단의 아세틸기 수식, C 말단의 아미드기 수식, N 말단 및/또는 C 말단에의 단백질 태그(His 태그 등)의 부가, 및 측쇄에의 당쇄(糖鎖)의 부가 등으로 수식되어 있어도 된다.
본 발명의 폴리펩티드는, 공지의 펩티드 합성법, 예를 들면, 고상(固相) 합성법, 액상(液相) 합성법 등에 따라 제조할 수 있다. 얻어진 폴리펩티드는, 공지의 정제법, 예를 들면, 용매 추출, 증류, 컬럼 크로마토그래피, 액체 크로마토그래피, 재결정, 이들의 조합 등에 의해 정제 단리(單離)할 수 있다.
또, 본 발명의 폴리펩티드는, 그것을 코드하는 핵산을 함유하는 형질 전환체를 배양하여, 얻어지는 배양물로부터 폴리펩티드를 분리 정제함으로써 제조할 수도 있다. 본 발명의 폴리펩티드를 코드하는 핵산은 DNA여도 RNA여도 되고, 또는 DNA/RNA 키메라여도 되지만, 바람직하게는 DNA이다. 해당 핵산은 이중가닥이어도, 외가닥이어도 된다. 이중가닥의 경우에는, 이중가닥 DNA, 이중가닥 RNA 또는 DNA:RNA의 하이브리드여도 된다. 외가닥의 경우는, 센스가닥(즉, 암호가닥)이어도, 안티센스가닥(즉, 비암호가닥)이어도 된다.
본 명세서에 있어서, 「서열 번호」와 「서열 번호:」는 동의이다. 예를 들면, 「서열 번호 1」과 「서열 번호: 1」은 동의이다.
본 발명의 폴리펩티드를 코드하는 DNA로는, 합성 DNA 등을 들 수 있고, 자체 공지의 방법, 예를 들면, Reverse Transcriptase-PCR법과 ODA-LA PCR법, Gapped duplex법, Kunkel법 등을 이용하거나, 또는 콜로니 또는 플라크 하이브리디제이션법 또는 PCR법을 이용하여 취득할 수 있다.
2. 항 S38AA 항체
본 명세서에 있어서 이용되는 「항 S38AA 항체」로는, S38AA를 특이적으로 인식하는 항체, 또는 S38AA long fragment 및/또는 S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체이면 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, S38AA long fragment의 N 말단측 영역을 인식하는 항체, S38AA long fragment의 C 말단측 영역을 인식하는 항체, S38AA long fragment 및 S38AA short fragment에 공통되는 C 말단측 영역을 인식하는 항체 등을 들 수 있다.
항 S38AA 항체는, 시판의 항 S38AA 항체, 공지의 수법을 이용하여 제조되는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체, 또는 이들의 프래그먼트(예를 들면, Fab, F(ab')2, ScFv, minibody 등)여도 된다.
본 발명에서 사용되는 항 S38AA 항체로는, 포유 동물 유래의 모노클로날 항체 및 폴리클로날 항체가 바람직하다.
포유 동물 유래의 모노클로날 항체 및 폴리클로날 항체로는, 동물의 혈중에 산생되는 것, 하이브리도마에 의해 산생되는 것, 및 유전자 공학적 수법에 의해 항체 유전자를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환한 숙주에 의해 산생되는 것, 파지 디스플레이에 의해 1조(兆)개의 분자로 이루어지는 막대한 클론 라이브러리로부터 최적 항체가 스크리닝되어, 그 유전자로부터 CHO 세포에 의해 대량 생산되는 것, 또는, 인간의 항체를 생산하는 트랜스제닉 마우스로부터 직접 얻어지는 인간 항체 등을 들 수 있다.
모노클로날 항체 및 폴리클로날 항체는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제작할 수 있다.
(1) 모노클로날 항체의 제작
본 발명의 폴리펩티드가, 포유 동물에 대하여 투여에 의해 항체 산생이 가능한 부위에 그 자체 또는 담체, 희석제와 함께 투여된다. 투여 시에 항체 산생능을 높이기 위해, 완전 프로인트 애쥬번트(complete Freund's adjuvant)나 불완전 프로인트 애쥬번트를 투여해도 된다. 투여는 통상 2∼6주마다 1회씩, 합계 2∼10회 정도 행하여진다. 이용되는 포유 동물로는, 예를 들면, 원숭이, 토끼, 개, 모르모트, 마우스, 래트, 양, 염소를 들 수 있지만, 마우스 및 래트가 바람직하게 이용된다.
모노클로날 항체 산생 세포의 제작 시에는, 항원을 면역된 포유 동물, 예를 들면, 마우스로부터 항체가(antibody titer)가 인지된 개체를 선택하여 최종 면역의 2∼5일 후에 비장 또는 림프절을 채취하고, 그들에 포함되는 항체 산생 세포를 골수종 세포와 융합시킴으로써, 모노클로날 항체 산생 하이브리도마를 조제할 수 있다. 항혈청 중의 항체가의 측정은, 예를 들면, 후기의 표식화(標識化) S38AA와 항혈청을 반응시킨 후, 항체에 결합한 표식제(標識劑)의 활성을 측정함으로써 행할 수 있다. 융합 조작은 이미 알려진 방법, 예를 들면, 쾰러와 밀스타인의 방법[Nature, 256, 495(1975년)]에 따라 실시할 수 있다. 융합 촉진제로는, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이나 센다이 바이러스 등을 들 수 있지만, 바람직하게는 PEG가 이용된다. 또한, 융합 효율을 높이기 위해 디메틸 술폭시드 등의 보조제를 적절히 사용할 수도 있다.
골수종 세포로는, 예를 들면, NS-1, P3U1, SP2/0 등을 들 수 있지만, P3U1이 바람직하게 이용된다. 이용되는 항체 산생 세포(비장 세포)수와 골수종 세포수의 바람직한 비율은 1:1∼20:1 정도이며, PEG(바람직하게는, PEG1000∼PEG6000)가 10∼80％ 정도의 농도로 첨가되고, 약 20∼40℃, 바람직하게는 약 30∼37℃에서 약 1∼10분간 인큐베이트함으로써 효율 좋게 세포 융합을 실시할 수 있다.
모노클로날 항체 산생 하이브리도마의 스크리닝에는 여러 가지의 방법을 사용할 수 있지만, 예를 들면, 단백질 등의 항원을 직접 또는 담체와 함께 흡착시킨 고상(固相)(예, 마이크로플레이트)에 하이브리도마 배양상청을 첨가하고, 다음으로 방사성 물질이나 효소 등으로 표식한 항면역글로불린 항체(세포 융합에 이용되는 세포가 마우스인 경우, 항마우스 면역글로불린 항체가 이용된다) 또는 프로테인 A를 첨가하여, 고상에 결합한 모노클로날 항체를 검출하는 방법, 항면역글로불린 항체 또는 프로테인 A를 흡착시킨 고상에 하이브리도마 배양상청을 첨가하고, 방사성 물질이나 효소 등으로 표식한 단백질 등을 첨가하여, 고상에 결합한 모노클로날 항체를 검출하는 방법 등을 들 수 있다.
모노클로날 항체의 선별은, 자체 공지 또는 그것에 준하는 방법에 따라 행할 수 있지만, 통상은 HAT(히포크산틴, 아미노프테린, 티미딘)를 첨가한 동물 세포용 배지 등으로 행할 수 있다. 선별 및 육종용 배지로는, 하이브리도마가 생육될 수 있는 것이라면 어떤 배지를 이용해도 된다. 예를 들면, 1∼20％, 바람직하게는 10∼20％의 소 태아 혈청을 포함하는 RPMI 1640 배지, 1∼10％의 소 태아 혈청을 포함하는 GIT 배지(와코 준야쿠 고교(주)) 또는 하이브리도마 배양용 무혈청 배지(SFM-101, 닛스이 세이야쿠(주)) 등을 이용할 수 있다. 배양 온도는, 통상 20∼40℃, 바람직하게 약 37℃이다. 배양 시간은, 통상 5일∼3주일간, 바람직하게는 1주일간∼2주일간이다. 배양은, 통상 5％ 탄산 가스하에서 행할 수 있다. 하이브리도마 배양상청의 항체가는, 상기의 항혈청 중의 항체가의 측정과 마찬가지로 하여 측정할 수 있다.
모노클로날 항체의 분리 정제는, 통상의 폴리클로날 항체의 분리 정제와 마찬가지로 면역글로불린의 분리 정제법[예, 염석법, 알코올 침전법, 등전점 침전법, 전기영동법, 이온 교환체(예, DEAE)에 의한 흡탈착법, 초(超)원심법, 겔 여과법, 항원 결합 고상 또는 프로테인 A 또는 프로테인 G 등의 활성 흡착제에 의해 항체만을 채취하고, 결합을 해리시켜 항체를 얻는 특이적 정제법]에 따라 행할 수 있다.
(2) 폴리클로날 항체의 제작
본 발명의 폴리펩티드에 대한 폴리클로날 항체는, 그 자체 공지 또는 그것에 준하는 방법에 따라 제조할 수 있다. 예를 들면, 면역 항원(단백질 등의 항원)과 캐리어 단백질의 복합체를 만들어, 상기의 모노클로날 항체의 제조법과 마찬가지로 포유 동물에게 면역을 행하거나 닭에게 면역을 행하고, 해당 면역 동물로부터 S38AA에 대한 항체 함유물을 채취하고, 항체의 분리 정제를 행함으로써 제조할 수 있다.
포유 동물 및 닭을 면역하기 위해 이용되는 면역 항원과 캐리어 단백질의 복합체에 관해, 캐리어 단백질의 종류 및 캐리어와 합텐(hapten)의 혼합비는, 캐리어에 가교시켜 면역한 합텐에 대해 항체가 효율 좋게 제조될 수 있으면, 어떠한 것을 어떠한 비율로 가교시켜도 되지만, 예를 들면, 소 혈청알부민, 소 타이로글로불린, 키홀 림펫 헤모시아닌(Keyhole limpet hemocyanin) 등을 중량비로 합텐 1에 대해, 약 0.1∼20, 바람직하게는 약 1∼5의 비율로 커플링시키는 방법이 이용된다.
또, 합텐과 캐리어의 커플링에는, 여러 가지의 축합제를 이용할 수 있지만, 글루타르알데히드나 카르보디이미드, 말레이미드 활성 에스테르, 티올기, 디티오피리딜기를 함유하는 활성 에스테르 시약 등이 이용된다.
축합 생성물은, 포유 동물 또는 닭에 대해, 항체 산생이 가능한 부위에 그 자체 또는 담체, 희석제와 함께 투여된다. 투여 시에 항체 산생능을 높이기 위해, 완전 프로인트 애쥬번트나 불완전 프로인트 애쥬번트를 투여해도 된다. 투여는, 통상 약 2∼6주마다 1회씩, 합계 약 3∼10회 정도 행할 수 있다.
폴리클로날 항체는, 상기의 방법으로 면역된 포유 동물의 혈액, 복수(腹水), 모유 등, 바람직하게는 혈액으로부터 채취할 수 있고, 닭의 경우는 혈액 및 난황으로부터 채취할 수 있다.
항혈청 중의 폴리클로날 항체가의 측정은, 상기의 혈청 중의 항체가의 측정과 마찬가지로 하여 측정할 수 있다. 폴리클로날 항체의 분리 정제는, 상기의 모노클로날 항체의 분리 정제와 마찬가지의 면역글로불린의 분리 정제법에 따라 행할 수 있다.
본 발명에 있어서의 폴리클로날 항체로서, 예를 들면 토끼 유래 항 S38AA 폴리클로날 항체(이하, 「MBL」, 또는 「long fragment용 항체」라고도 칭한다.)를 들 수 있다. long fragment용 항체는, S38AA long fragment를 특이적으로 인식하고, S38AA short fragment를 인식하지 않는 특징을 갖는다. long fragment용 항체는, 항체 A, B, 또는 C와 함께 이용함으로써, 후술의 Long ELISA에 사용할 수 있다.
(3) S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체
본 발명의 일양태로서, 서열 번호 1로 나타내어지는 S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체를 들 수 있다. S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체로서, 예를 들면 S38AA short fragment의 C 말단 서열 또는 N 말단 서열을 인식하는 항체를 들 수 있다. S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체는, 당업자에게 주지의 방법으로 작성할 수 있다. 예를 들면, S38AA short fragment의 N 말단(서열 번호 3으로 나타내어지는 아미노산 서열에 있어서의 617번째의 글리신)으로부터 수 개의 아미노산의 펩티드를 면역 항원으로 하고, 그것보다도 더 N 말단측에 수 개의 아미노산이 부가된 펩티드, 또는 S38AA long fragment에 대해서는 음성이 되는 항체를 선택함으로써 취득할 수 있다. 구체적으로는, 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항체를 각각 상기 (1) 또는 (2)의 방법에 준거하여 취득할 수 있다.
S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체로는, 예를 들면, 후술의 항체 A, 항체 B 또는 항체 C를 들 수 있다.
항체 A(이하, 「마우스 유래의 항 S38AA 모노클로날 항체 A」라고도 칭한다.)는, S38AA의 C 말단측 영역을 인식하는 항체이며, S38AA 단편의 C 말단 아미노산 서열의 일부의 펩티드를 면역원으로 하여 항체 산생 하이브리도마를 수립해, 분리 정제한 항체를 의미한다. 항체 A는 S38AA short fragment 및 S38AA long fragment를 특이적으로 인식하는 특징을 갖는다. 항체 A는, 「long fragment용 항체」와 함께, Long ELISA에 이용할 수 있다. 항체 A는, 항체 B 또는 C와 함께 사용함으로써, 후술의 Total ELISA에 사용할 수 있다.
항체 A로는, 바람직하게는, 이하:
(1) 서열 번호 4의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(2) 서열 번호 6의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(3) 서열 번호 8의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체, 및
(4) 서열 번호 10의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.
항체 A로는, 다른 바람직한 양태로는, 이하:
(1) 서열 번호 5의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(2) 서열 번호 7의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(3) 서열 번호 9의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체, 및
(4) 서열 번호 11의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.
항체 A로는, 보다 바람직하게는, 이하:
(1) 서열 번호 4의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 5의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(2) 서열 번호 6의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 7의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(3) 서열 번호 8의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 9의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체, 및
(4) 서열 번호 10의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 11의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.
항체 B는, S38AA의 C 말단측 영역을 인식하는 항체이며, S38AA 단편의 C 말단 아미노산 서열의 일부의 펩티드를 면역원으로 하여 항체 산생 하이브리도마를 수립해, 분리 정제한 항체를 의미한다. 항체 B는, S38AA short fragment 및 S38AA long fragment를 특이적으로 인식하는 특징을 갖는다. 항체 B는, 「long fragment용 항체」와 함께, Long ELISA에 이용할 수 있다. 항체 B는, 항체 A 또는 C와 함께 사용함으로써, Total ELISA에 사용할 수 있다.
항체 B로는, 바람직하게는, 이하:
(5) 서열 번호 12의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(6) 서열 번호 14의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(7) 서열 번호 16의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체, 및
(8) 서열 번호 18의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.
항체 B로는, 다른 바람직한 양태로는, 이하:
(5) 서열 번호 13의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(6) 서열 번호 15의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(7) 서열 번호 17의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체, 및
(8) 서열 번호 19의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.
항체 B로서, 보다 바람직하게는, 이하:
(5) 서열 번호 12의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 13의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(6) 서열 번호 14의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 15의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체,
(7) 서열 번호 16의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 17의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체, 및
(8) 서열 번호 18의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 19의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.
항체 C는, S38AA의 C 말단측 영역을 인식하는 항체이며, S38AA long fragment의 대장균 재조합 단백질을 면역원으로 하여 항체 산생 하이브리도마를 수립해, 분리 정제한 항체를 의미한다. 항체 C는, S38AA short fragment 및 S38AA long fragment를 특이적으로 인식하는 특징을 갖는다. 항체 C는, 「long fragment용 항체」와 함께, Long ELISA에 이용할 수 있다. 항체 C는, 항체 A 또는 B와 함께 사용함으로써, Total ELISA에 사용할 수 있다.
항체 C로서, 바람직하게는, 이하:
(9) 서열 번호 20의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체, 및
(10) 서열 번호 22의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.
항체 C로는, 다른 바람직한 양태로는, 이하:
(9) 서열 번호 21의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체, 및
(10) 서열 번호 23의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.
항체 C로서, 보다 바람직하게는, 이하:
(9) 서열 번호 20의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 21의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체, 및
(10) 서열 번호 22의 중쇄 가변영역, 및 서열 번호 23의 경쇄 가변영역을 포함하는 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.
본 발명의 항체 A, B 및 C가, S38AA short fragment 및 S38AA long fragment를 특이적으로 인식할 수 있는 한, 해당 각 항체는, 그것에 포함되는 상기 가변 영역의 아미노산 서열과 90％ 이상, 바람직하게는 95％ 이상, 보다 바람직하게는 96％ 이상, 보다 더 바람직하게는 97％ 이상, 더욱 바람직하게는 98％, 더욱더 바람직하게는 99％ 이상, 가장 바람직하게는 99.5％ 이상의 상동성을 갖는 가변 영역을 포함하는 것이어도 된다.
본 명세서에 있어서 「상동성」이란, 당해 기술 분야에 있어서 공지의 수학적 알고리즘을 이용하여 2개의 아미노산 서열을 얼라인(align)시킨 경우의, 최적의 얼라이먼트(바람직하게는, 해당 알고리즘은 최적의 얼라이먼트를 위해 서열의 한쪽 또는 양쪽에의 갭의 도입을 고려하여 얻는 것이다)에 있어서의, 오버랩하는 전체 아미노산 잔기에 대한 동일 아미노산 및 유사 아미노산 잔기의 비율(％)를 의미한다.
본 명세서에 있어서의 아미노산 서열의 상동성은, 상동성 계산 알고리즘 NCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool)를 이용하여, 이하의 조건(기대치＝10; 갭을 허락함; 매트릭스＝BLOSUM62; 필터링＝OFF)으로 계산할 수 있다. 아미노산 서열의 상동성을 결정하기 위한 다른 알고리즘으로는, 예를 들면, Karlin 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:5873-5877(1993)에 기재된 알고리즘[해당 알고리즘은 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(version 2.0)에 편입되어 있다(Altschul 등, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402(1997))], Needleman 등, J. Mol. Biol. 48:444-453(1970)에 기재된 알고리즘[해당 알고리즘은 GCG 소프트웨어 패키지 중의 GAP 프로그램에 편입되어 있다], Myers 및 Miller, CABIOS, 4:11-17(1988)에 기재된 알고리즘[해당 알고리즘은 CGC 서열 얼라이먼트 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램(version 2.0)에 편입되어 있다], Pearson 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:2444-2448(1988)에 기재된 알고리즘[해당 알고리즘은 GCG 소프트웨어 패키지 중의 FASTA 프로그램에 편입되어 있다] 등을 들 수 있고, 그들도 마찬가지로 바람직하게 이용될 수 있다.
또, 본 발명의 항체 A, B 및 C에 포함되는 CDR에 대하여, 해당 항체가, S38AA short fragment 및 S38AA long fragment를 특이적으로 인식할 수 있는 한, 1개의 CDR의 아미노산 서열에 대해, 1∼수 개(2, 3, 4, 5 등), 바람직하게는 2개 이내, 보다 바람직하게는 1개의 아미노산이 치환, 결실, 삽입, 및/또는 부가되어 있어도 된다. 또, 상기 각 항체가 갖는 아미노산이 치환, 결실, 삽입, 및/또는 부가된 CDR의 수는, 해당 각 항체가, S38AA short fragment 및 S38AA long fragment를 특이적으로 인식할 수 있는 한, 특별히 한정되지 않지만, 1개의 경쇄 가변영역에 대해, 바람직하게는 2개 이내, 보다 바람직하게는 1개이고, 1개의 중쇄 가변영역에 대해, 바람직하게는 2개 이내, 보다 바람직하게는 1개이다. 아미노산의 치환, 결실, 삽입, 및/또는 부가는, 경쇄 가변영역과 중쇄 가변영역의 양쪽에서 행해져도 되고, 어느 한 쪽에서만 행해져도 된다.
예를 들면, 「유사 아미노산」이란 물리 화학적 성질에 있어서 유사한 아미노산을 의미하고, 예를 들면, 방향족 아미노산(Phe, Trp, Tyr), 지방족 아미노산(Ala, Leu, Ile, Val), 극성 아미노산(Gln, Asn), 염기성 아미노산(Lys, Arg, His), 산성 아미노산(Glu, Asp), 수산기를 갖는 아미노산(Ser, Thr), 측쇄가 작은 아미노산(Gly, Ala, Ser, Thr, Met) 등의 동일 그룹으로 분류되는 아미노산을 들 수 있다. 이와 같은 유사 아미노산에 의한 치환은 단백질의 표현형에 변화를 초래하지 않는(즉, 보존적 아미노산 치환인) 것이 예측된다. 보존적 아미노산 치환의 구체예는 당해 기술 분야에서 주지이며, 여러 가지 문헌에 기재되어 있다(예를 들면, Bowie 등, Science, 247:1306-1310(1990)를 참조).
1 또는 복수의 아미노산 잔기를 목적이 다른 아미노산으로 치환하는 방법으로는, 예를 들면, 부위 특이적 변이 유발법(Hashimoto-Gotoh, T, Mizuno, T, Ogasahara, Y, and Nakagawa, M.(1995) An oligodeoxyribonucleotide-directed dual amber method for site-directed mutagenesis. Gene 152, 271-275, Zoller, MJ, and Smith, M.(1983) Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA fragments cloned into M13 vectors. Methods Enzymol. 100, 468-500, Kramer, W, Drutsa, V, Jansen, HW, Kramer, B, Pflugfelder, M, and Fritz, HJ(1984) The gapped duplex DNA approach to oligonucleotide-directed mutation construction. Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456, Kramer W, and Fritz HJ(1987) Oligonucleotide-directed construction of mutations via gapped duplex DNA Methods. Enzymol. 154, 350-367, Kunkel, TA(1985) Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection. Proc Natl Acad Sci USA. 82, 488-492)을 들 수 있다. 해당 방법을 이용하여, 항체의 원하는 아미노산을 목적이 다른 아미노산으로 치환할 수 있다. 또, 프레임워크 셔플링(framework shuffling)(Mol Immunol. 2007 Apr; 44(11):3049-60) 및 CDR 수복(修復)(US2006/0122377) 등의 라이브러리 기술을 이용함으로써, 프레임워크 및 CDR에 있어서의 아미노산을 적절한 다른 아미노산으로 치환하는 것도 가능하다.
3. 알츠하이머병의 판정약
본 발명의 판정약은 S38AA Short fragment량을 검출하는 것이 가능한 1 또는 복수 종류의 항 S38AA 항체를 포함하고, 알츠하이머병에 이환되어 있는지 여부의 판정, 현재 해당 질환에 이환되어 있을 가능성이 높은지 여부의 판정 뿐만 아니라, 알츠하이머병 예비군의 판정, 즉, 아직 해당 질환에 이환되어 있지 않지만, 가까운 장래 이환될 가능성이 높은지 여부의 판정을 할 수 있다. 환언하면, 본 발명의 판정약은, 알츠하이머병의 위중도가 경도, 또는 중등도·중도 중 어느 것이어도 식별할 수 있다. 그 때문에, 본 발명에 있어서 알츠하이머병의 「판정」이란, 이미 알츠하이머병에 이환되어 있는지 여부의 판정, 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성이 높은지 여부의 판정 뿐만 아니라, 아직 알츠하이머병에 이환되어 있지 않지만, 가까운 장래 이환될 가능성이 높은지 여부를 판정하는 것을 포함하는 의미로 사용된다.
4. 알츠하이머병을 판정하기 위한 키트
본 발명은, 알츠하이머병을 판정하기 위한 키트를 제공하는 것이다. 본 발명의 키트에는, S38AA short fragment량을 측정하기 위한 시약이 포함된다. 본 발명의 키트를 이용하여 S38AA short fragment량을 측정함으로써, 알츠하이머병을 판정할 수 있다.
본 발명의 키트는, S38AA short fragment를 정량 가능한 단일 또는 복수의 항체의 조합인 항 S38AA 항체를 포함하는 것이고, 구체적으로는, S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체이거나, 또는 S38AA long fragment를 인식하고 S38AA short fragment를 인식하지 않는 항체, 그리고 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment를 함께 인식하는 항체의 조합을 들 수 있다. S38AA long fragment를 인식하고 S38AA short fragment를 인식하지 않는 항체로서, 예를 들면, 상술의 S38AA long fragment의 N 말단측 영역을 인식하는 항체를 들 수 있다. 또, S38AA long fragment 및 S38AA short fragment를 함께 인식하는 항체로는, S38AA long fragment와 S38A short fragment 공통의 C 말단측 영역을 인식하는 항체를 들 수 있다.
본 발명의 키트에 사용되는 항체로서 바람직하게는, long fragment용 항체, 항체 A, 항체 B, 및/또는 항체 C를 들 수 있다.
또, 항체는, 형광 표식 항체, 효소 표식 항체, 스트렙트아비딘 표식 항체, 비오틴 표식 항체 또는 방사성 표식 항체여도 된다.
항 S38AA 항체는, 통상, 물 또는 적당한 완충액(예: TE 버퍼, PBS 등) 중에 적당한 농도가 되도록 용해된 수용액의 양태, 또는 동결 건조품의 양태로, 본 발명의 키트에 포함된다.
또, S38AA short fragment 및/또는 S38AA long fragment량을 측정할 때에는, 1종류의 항체로 측정해도 되고, 복수 종류, 바람직하게는 2종류의 항체를 사용하여 측정(예를 들면 샌드위치 ELISA법 등)해도 된다.
본 발명의 키트는, S38AA short fragment의 측정 방법에 따라, 당해 방법의 실시에 필요한 다른 성분을 구성으로서 추가로 포함하고 있어도 된다. 예를 들면, 웨스턴 블롯팅으로 측정하는 경우에는, 본 발명의 키트는, 블롯팅 완충액, 표식화 시약, 블롯팅막 등, 검출 시약, 표준액 등을 추가로 포함할 수 있다. 여기에서 「표준액」으로는, S38AA short fragment 및/또는 S38AA long fragment의 정제 표품, 예를 들면, 본 발명의 펩티드를 물 또는 적당한 완충액(예: TE 버퍼, 소 태아 혈청 함유 PBS 등) 중에 특정의 농도가 되도록 용해한 수용액을 들 수 있다.
또, 샌드위치 ELISA로 측정하는 경우에는, 본 발명의 키트는, 상기에 더해 고층화 항체 측정 플레이트, 세정액 등을 추가로 포함할 수 있다. 라텍스 응집법을 포함하는 응집법으로 측정하는 경우에는, 항체 코팅한 라텍스, 젤라틴 등을 포함할 수 있다. 화학 형광법, 화학 형광 전자법으로 측정하는 경우에는, 항체 결합 자성 입자, 적당한 완충액을 포함할 수 있다. LC/MS, LC-MS/MS 또는 이뮤노크로마토그래피법을 이용한 S38AA의 검출에는, 항체 코팅한 컬럼 또는 마이크로 컬럼, 마이크로 칩을 검출 기기의 일부로서 포함할 수 있다. 또한 시간 분해 형광 측정법 또는 그것에 유사한 형광 측정법이면, 복수의 라벨화한 항 S38AA 항체와 필요한 다른 성분을 구성으로서 포함해도 된다.
본 발명의 키트로서, 예를 들면, 이하의 것을 들 수 있다. 또한, 하기의 키트에 포함되는 항체에 관해서는, 표식화된 것(예를 들면, 페록시다아제나 비오틴에 의한 표식 등)이어도 되고, 표식화되어 있지 않은 경우는, 별도 항체에 결합하여 당해 항체를 표식하기 위한 표식화 항체가 포함되어 있어도 된다.
1) 1 또는 2종류의 「S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체」, 세정액, 발색 시약, 반응 정지액, 희석용 완충액 및 표준액;
2) 1 또는 2종류의 「S38AA long fragment의 N 말단측 영역을 인식하는 항체」, 1 또는 2종류의 「S38AA long fragment의 C 말단측 영역을 인식하는 항체(즉, S38AA long fragment 및 S38AA short fragment에 공통되는 C 말단측 영역을 인식하는 항체)」, 세정액, 발색 시약, 반응 정지액, 희석용 완충액 및 표준액;
3) 「S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 제 1 항체」, 「S38AA short fragment를 인식하는 제 2 항체」, 세정액, 발색 시약, 반응 정지액, 희석용 완충액 및 표준액;
4) 「S38AA long fragment의 N 말단측 영역을 인식하는 제 1 항체」 및 「S38AA long fragment를 인식하는 제 2 항체」, 1 또는 2종류의 「S38AA long fragment의 C 말단측 영역을 인식하는 항체(즉, S38AA long fragment 및 S38AA short fragment에 공통되는 C 말단측 영역을 인식하는 항체)」, 세정액, 발색 시약, 반응 정지액, 희석용 완충액 및 표준액.
여기에서, 「S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체」, 「S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 제 1 항체」, 및 「S38AA short fragment를 인식하는 제 2 항체」로서 바람직하게는, 항체 A, 항체 B 및 항체 C를 들 수 있다.
여기에서, 「S38AA long fragment의 N 말단측 영역을 인식하는 항체」 및 「S38AA long fragment의 N 말단측 영역을 인식하는 제 1 항체」로서 바람직하게는, 「long fragment용 항체」를 들 수 있다.
여기에서, 「S38AA long fragment의 C 말단측 영역을 인식하는 항체(즉, S38AA long fragment 및 S38AA short fragment에 공통되는 C 말단측 영역을 인식하는 항체)」로서 바람직하게는, 항체 A, 항체 B 및 항체 C를 들 수 있다. S38AA long fragment 및 S38AA short fragment를 특이적으로 검출할 수 있는 항 S38AA long fragment 항체 및 항 S38AA short fragment 항체로는, 예를 들면, 「2. 항 S38AA 항체」에 상세하게 기술되어 있는 항체를 들 수 있다.
5. 본 발명의 방법
(1) 알츠하이머병의 판정 및 시험 방법
상술한 바와 같이, 본 발명자들은, 우선, AD 환자의 혈액에서는, S38AA의 막외 부분에서 절단되어 발생하는 S38AA long fragment량이 상승하고 있는 것을 찾아내고, 또한 AD 환자의 혈액에서는, 해당 long fragment를 특이적으로 절단하는 효소가 존재하거나, 또는 해당 효소의 활성이 높거나, 또는 S38AA의 막외 부분에서 직접 절단됨으로써 발생하는 S38AA short fragment량이 크게 상승하고 있으며, 또한 혈중의 S38AA short fragment량은, 알츠하이머병의 위중도(인지 기능 장애의 진행도)가 경도, 중등도·중도인지 여부에 관계없이 상승하는 것, 또한 중등도 및 중도에서는 경도에 비해 높은 것을 찾아내고, 해당 S38AA short fragment량이 고정밀도의 알츠하이머병의 발증이나 예비군의 판정, 및 알츠하이머병의 진행의 정도의 판정의 지표로서 매우 높은 신뢰성을 갖는 것을 찾아냈다.
따라서, 본 발명은 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 S38AA short fragment를 검출함으로써, 알츠하이머병, 예를 들면, 경도 또는 중등도·중도의 알츠하이머병을 판정하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 판정 방법은, 알츠하이머병에 이환되어 있는지 여부의 판정, 현재 해당 질환에 이환되어 있을 가능성이 높은지 여부의 판정 뿐만 아니라, 아직 해당 질환에 이환되어 있지 않지만, 가까운 장래 이환될 가능성이 높은지 여부의 판정을 할 수도 있다.
또 본 발명은, 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 S38AA short fragment를 검출함으로써, 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성을 시험하는 방법도 제공한다.
상기 가능성의 판정 및 시험(결과)은, 적어도 의사에 의한 알츠하이머병의 확정 진단을 보조하기 위해 유용하다.
본 발명의 판정 및 시험 방법은, 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 S38AA short fragment를 검출하는 것을 특징으로 한다. 또 본 발명의 판정 및 시험 방법은, 구체적인 공정으로서, 예를 들면, (i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 S38AA short fragment를 정량하는 공정, 및 (ii) (i)에서 정량한 S38AA short fragment의 양을, 건상 동물로부터 채취한 시료 중의 S38AA short fragment의 양(이하, 「대조치」라고 한다)과 비교하는 공정을 포함해도 된다.
(ii)의 비교의 결과로서, (i)에서 정량한 S38AA short fragment의 양이, 대조치보다도 큰 경우, 상기 피검 동물이 알츠하이머병에 이환되어 있거나, 또는 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있는 것을 나타내고 있다.
또한 본 발명의 판정 및 시험 방법은, 상기 공정에 더해, (iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 S38AA short fragment의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 알츠하이머병에 이환되어 있거나, 또는 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정을 포함해도 된다.
또한 본 발명은, 상술한 바와 같이 혈중의 S38AA short fragment의 값이 알츠하이머병의 위중도(인지 기능 장애의 진행도)가 경도, 중등도, 중도인지 여부에 관계없이 상승하고, 더 나아가서는 중등도 및 중증에서는 경도에 비해 높기 때문에, 알츠하이머병의 진행도의 판정을 보조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 판정을 보조하는 방법도, 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 S38AA short fragment를 검출하는 것을 특징으로 한다. 또 본 발명의 판정을 보조하는 방법은, 구체적인 공정으로서, 예를 들면, (i) 알츠하이머병에 이환 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 S38AA short fragment를 정량하는 공정, 및 (ii) (i)에서 정량한 S38AA short fragment의 양을, 해당 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 S38AA short fragment의 양(이하, 「대조치」라고 한다)과 비교하는 공정을 포함해도 된다.
(ii)의 비교의 결과로서, (i)에서 정량한 S38AA short fragment의 양이, 대조치보다도 큰 경우, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있거나 또는 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성이 높은 것을 나타내고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있거나 또는 알츠하이머병에 이환되어 있지 않을 가능성이 높은 것을 나타내고 있다.
본 발명의 판정을 보조하는 방법은, 상기 공정에 더해, (iii) (ii)의 결과에 의거하여,
(i)에서 정량한 S38AA short fragment의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정을 포함해도 된다.
게다가 본 발명은, 상술한 바와 같이 혈중의 S38AA short fragment량이 알츠하이머병의 위중도(인지 기능 장애의 진행도)가 경도, 중등도, 중도인지 여부에 관계없이 상승하고, 더 나아가서는 중등도 및 중증에서는 경도에 비해 높기 때문에, 알츠하이머병의 치료 중인 환자 또는 알츠하이머의 발증을 예방하기 위한 치료 중인 알츠하이머병 예비군에 대하여, 그 치료 효과를 평가하는 방법도 제공한다.
본 발명의 치료 효과를 평가하는 방법도, 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 S38AA short fragment를 검출하는 것을 특징으로 한다. 또 본 발명의 치료 효과를 평가하는 방법은, 구체적인 공정으로서, 예를 들면, (i) 알츠하이머병의 투약 치료 또는 알츠하이머병의 발증을 예방하기 위한 투약 치료를 개시하고 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 S38AA short fragment를 정량하는 공정, 및 (ii) (i)에서 정량한 S38AA short fragment의 양을, 해당 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료(예: 투약 치료 개시 전에 채취한 시료, 투약 치료 개시 후로서 (i)의 채취 시점보다 전에 채취한 시료) 중의 S38AA short fragment의 양(이하, 「대조치」라고 한다)과 비교하는 공정을 포함해도 된다.
(ii)의 비교의 결과로서, (i)에서 정량한 S38AA short fragment의 양이, 대조치보다도 큰 경우, 현재의 투약 치료(또는 선정한 치료약)가 유효하지 않은 것을 나타내고, 대조치보다도 작은 경우, 현재의 투약 치료(또는 선정한 치료약)가 유효한 것을 나타내고 있다.
본 발명의 치료 효과를 평가하는 방법은, 상기 공정에 더해, (iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 S38AA short fragment의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 현재의 투약 치료(또는 선정한 치료약)가 유효하지 않다고 평가하고, 대조치보다도 작은 경우에, 현재의 투약 치료(또는 선정한 치료약)가 유효하다고 평가하는 공정을 포함해도 된다.
본 명세서에 있어서, 투약 치료에 이용되는 치료약은, 이미 승인되어 출시되어 있는 치료약 뿐만이 아니라, 임상 시험 중인 시험용 약(治驗藥)도 포함하는 개념이다. 즉 본 발명의 치료 효과를 평가하는 방법은, 임상 시험에 있어서의 약효의 모니터 등에도 이용할 수 있다.
본 발명의 방법의 피검 대상이 될 수 있는 동물은, S38AA를 발현하는 것이면 특별히 제한은 없고, 예를 들면, 포유 동물(예: 인간, 원숭이, 소, 돼지, 말, 개, 고양이, 양, 염소, 토끼, 햄스터, 모르모트, 마우스, 래트 등), 조류(예: 닭 등) 등을 들 수 있다. 바람직하게는, 포유 동물, 보다 바람직하게는 인간이다.
시료가 되는 피검 동물 유래의 생체 시료는 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 누액, 소변, 뇌척수액 등을 들 수 있다. 보다 바람직하게는, 혈장 또는 뇌척수액이다.
혈청이나 혈장은, 상법(常法)에 따라 피검 동물로부터 채혈하고, 액성 성분을 분리함으로써 조제할 수 있다. 뇌척수액은, 척추 천자(穿刺) 등의 공지의 수단에 의해 채취할 수 있다.
시료 중의 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 검출(정량)은, 공지의 방법에 의해 실시할 수 있다. 예를 들면, 웨스턴 블롯팅, 겔 전기영동(예: SDS-PAGE, 이차원 겔 전기영동 등)이나, 각종의 분리 정제법(예: 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 어피니티 크로마토그래피(affinity chromatography), 역상(逆相) 크로마토그래피, 등전점(等電點) 크로마토그래피, 캐필러리 전기영동(capillary electrophoresis) 등), 이온화법(예: 전자 충격 이온화법, 필드 디솝션법(field desorption method), 2차 이온화법, 고속 원자 충돌법, 매트릭스 지원 레이저 탈리 이온화(MALDI)법, 일렉트로 스프레이 이온화법 등), 질량 분석계(예: 이중 수속(收束) 질량 분석계(double-focusing mass spectrometer), 사중극형 분석계, 비행 시간형 질량 분석계, 푸리에 변환 질량 분석계, 이온 사이클로트론 질량 분석계 등) 등에 제공함으로써 행할 수 있다. 또, 이들 측정 원리를 응용한 측정 디바이스에서의 검출(정량)도 본 발명의 방법에 포함된다.
또, S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 검출(정량)은, 공지의 면역 화학적 방법(네펠로메트리(nephelometry), 경합법, 이뮤노메트릭법(immunometric method), 화학 형광법, 화학 형광 전자법 및 샌드위치법 등)으로 실시할 수도 있다. 이들 면역 화학적 방법은, 예를 들면, 이리에(Hiroshi Irie) 편저 「라디오이뮤노어세이(Radioimmunoassay)」(고단샤, 쇼와 49년(1974년) 발행), 이리에 편저 「속(續) 라디오이뮤노어세이」(고단샤, 쇼와 54년(1979년) 발행), 이시카와 에이지 등 편저 「효소 면역 측정법」(제 3 판) (의학서원, 쇼와 62년(1987년) 발행), 「Methods in ENZYMOLOGY」 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part I: Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies)) (아카데믹 프레스사 발행) 등을 참조할 수 있다.
구체적인 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 검출(정량) 방법으로는, 「S38AA long fragment 및 S38AA short fragment에 공통되는 C 말단측 영역을 인식하는 항체」를 이용하여 얻어지는 시료 중의 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 측정치로부터, 「S38AA long fragment의 N 말단측 영역을 인식하는 항체」만을 이용하여, 또는 「S38AA long fragment의 N 말단측 영역을 인식하는 항체」와 「S38AA long fragment의 C 말단측 영역을 인식하는 항체」를 조합하여 이용해 얻어지는 시료 중의 S38AA long fragment의 측정치를 뺌으로써, S38AA short fragment량을 정량해도 되고, 마찬가지의 방법으로 얻은 측정치를 S38AA long fragment량에 대한 S38AA short fragment량의 비로서 정량해도 되며, 본 발명의 「S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체」를 이용하여, S38AA short fragment량을 직접 정량해도 된다. S38AA long fragment 및 S38AA short fragment를 특이적으로 검출할 수 있는 항 S38AA long fragment 항체 및 항 S38AA short fragment 항체로는, 예를 들면, 「2. 항 S38AA 항체」에 상세하게 서술되어 있는 항체를 들 수 있다.
여기에서, 「S38AA long fragment 및 S38AA short fragment에 공통되는 C 말단측 영역을 인식하는 항체」로서 바람직하게는, 항체 A, B, 및 C를 들 수 있다.
「S38AA long fragment의 N 말단측 영역을 인식하는 항체」로서 바람직하게는, 「long fragment용 항체」를 들 수 있다.
「S38AA long fragment의 C 말단측 영역을 인식하는 항체」로서 바람직하게는, 항체 A, B, 및 C를 들 수 있다.
「S38AA short fragment를 특이적으로 인식하는 항체」로서 바람직하게는, 항체 A, B, 및 C를 들 수 있다.
본 발명에 있어서의 측정 방법으로서, 예를 들면, 「Long ELISA」를 들 수 있다. 「Long ELISA」는, S38AA long fragment의 양을 검출(정량)하는 방법이고, 「long fragment용 항체」, 및 「항체 A, B 및 C로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 항체」를 이용한 샌드위치 ELISA법인 특징을 갖는다.
본 발명에 있어서의 측정 방법으로서, 예를 들면, 「Total ELISA」를 들 수 있다. 「Total ELISA」는, 「S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 총량」을 검출(정량)하는 방법이며, 「항체 A, B 및 C로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 2개의 항체」를 이용한 샌드위치 ELISA법인 특징을 갖는다.
본 발명에 있어서의 「S38AA short fragment의 양을 검출(정량)하는 방법」으로서, 상기 「Total ELISA에서의 측정 결과(정량치)」로부터 「Long ELISA에서의 측정 결과(정량치)」를 감산하는 방법을 들 수 있다.
본 발명의 방법에 있어서 이용되는 「대조치」로는, 대조 시료 중의 S38AA short fragment량, 또는 미리 대조 등에 대하여 측정된, 또는 설정된 S38AA short fragment량을 이용해도 되며, 본 발명의 방법과 동시에 측정할 필요는 없다.
여기에서 대조치를 설정하기 위해, 복수 개체를 대조군으로서, 복수 개체의 측정치의 평균치를 대조치로서 이용할 수도 있다. 즉, 대조치로서, 이미 취득된 대조군(건상 동물, 특정의 진행도에 있는 알츠하이머병에 이환된 동물 등) 유래의 대조 시료 중의 S38AA short fragment량을 사용하여, 상기 판정 등을 행하는 것도, 본 발명의 방법의 범주에 포함된다.
예를 들면, 건상 동물 유래의 시료를 대조 시료로서 이용하는 경우, 피검 시료 중의 S38AA short fragment량이, 대조 시료 중의 해당 양보다도 많은 경우에는, 알츠하이머병에 이환되어 있거나, 또는 현재 알츠하이머에 이환되어 있을 가능성이 있거나 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정 또는 결정할 수 있다.
또, 특정의 진행도에 있는 알츠하이머병에 이환된 동물 유래의 시료를 대조 시료로서 이용함으로써, 피검 시료 중의 S38AA short fragment량이, 대조 시료 중의 해당 양보다도 많은 경우에는, 알츠하이머병의 진행도가 대조로 한 해당 질환에 이환된 동물의 진행도보다도 높다고 판정 또는 결정할 수 있다.
또한, 피검 시료를 채취한 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료를 대조 시료로서 이용함으로써, 피검 시료 중의 S38AA short fragment량이, 대조 시료 중의 해당 양보다도 많은 경우에는, 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조 시료 중의 해당 양보다도 적은 경우에는, 해당 질환이 개선되고 있다고 판정할 수 있다.
게다가, 알츠하이머병을 발증하고 있는 동물 유래의 대조 시료 및 건상 동물 유래의 대조 시료 등의 복수의 대조 시료를 이용함으로써, 피검 시료에 있어서의 S38AA short fragment량이 건상 동물 유래의 대조 시료보다도 크고, 또한 알츠하이머병을 발증하고 있는 동물 유래의 대조 시료보다도 작은 것을 지표로 하여, 알츠하이머병 예비군, 즉, 아직 해당 질환을 발증하고 있다고 확정 진단될 수 없지만, Aβ나 타우 단백의 축적이 시작되고 있어 가까운 장래 알츠하이머병을 발증할 가능성이 높다고 판정할 수도 있다.
또, 피검 시료를 채취한 알츠하이머병의 투약 치료를 개시하고 있는 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료를 대조 시료로서 이용함으로써, 피검 시료 중의 S38AA short fragment량이, 대조 시료 중의 해당 양보다도 많은 경우에는, 현재의 투약 치료가 유효하지 않다고 평가하고, 대조 시료 중의 해당 양보다도 적은 경우에는, 해당 투약 치료가 유효하다고 평가할 수도 있다.
「피검 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1의 폴리펩티드」가, 「건상 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1의 폴리펩티드의 양(대조치)」보다 큰 경우에, 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정할 수 있다.
「피검 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1의 폴리펩티드」의 양으로서 바람직하게는, 대조치의 1.1배∼10배를 들 수 있다. 보다 바람직하게는 1.1배∼8배를 들 수 있다. 더욱 바람직하게는, 1.2∼5배를 들 수 있다. 가장 바람직하게는, 1.2배∼3배를 들 수 있다.
「피검 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1의 폴리펩티드」가, 「피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(대조치)」보다 큰 경우에, 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정할 수 있다.
「피검 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1의 폴리펩티드」의 양으로서 바람직하게는, 대조치의 1.1배∼10배를 들 수 있다. 보다 바람직하게는 1.1배∼8배를 들 수 있다. 더욱 바람직하게는, 1.2∼5배를 들 수 있다. 가장 바람직하게는, 1.2배∼3배를 들 수 있다.
「피검 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1의 폴리펩티드」가, 「피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(대조치)」보다 작은 경우에, 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정할 수 있다.
「피검 동물로부터 채취한 시료 중의 서열 번호 1의 폴리펩티드」의 양으로서 바람직하게는, 대조치의 0.1배∼0.9배를 들 수 있다. 보다 바람직하게는 0.2배∼0.9배를 들 수 있다. 더욱 바람직하게는, 0.3∼0.9배를 들 수 있다. 가장 바람직하게는, 0.4배∼0.9배를 들 수 있다.
S38AA short fragment의 정량적 해석은, 시료 중의 S38AA short fragment량을 표준 단백질(내부 표준 단백질)의 양으로 표준화함으로써 실시해도 된다. 즉, 상기의 방법을 이용하여, 시료 중의 S38AA short fragment량과 표준 단백질의 양을 정량한 후, 양자의 시그널의 비(S38AA short fragment/표준 단백질)를 산출하고, 시료 중의 S38AA short fragment량을, 표준 단백질의 존재량과의 비로 나타내면 된다.
표준 단백질은, 항상(恒常)적으로 일정량 발현하고 있는 단백질이면 되고, 많은 조직이나 세포중에 공통적으로 발현하고 있는 단백질이 바람직하다. 예를 들면, 세포의 생존에 필수인 단백질, 예를 들면, RNA 합성 효소, 에너지 생성계 효소, 리보솜의 단백질, 세포 골격 단백질 등의 유전자(하우스키핑 유전자)에 의해 코드되는 단백질을 들 수 있다. 구체적으로는, 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, β 액틴, 글리세르알데히드-3-인산 디히드로게나아제(GAPDH), β 튜불린 등의 단백질을 들 수 있다. 특히 바람직하게는, β 액틴을 들 수 있다.
또 상술의 대조치에 대신하여, 혈중의 S38AA short fragment량의 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애에 관한 컷 오프치를 미리 설정해 두고, 피검 동물의 혈중의 S38AA short fragment량과 해당 컷 오프치를 비교해도 된다.
예를 들면, 피검 동물의 혈중의 S38AA short fragment량이 컷 오프치 이상인 경우에는, 피검 동물이 알츠하이머병에 이환되어 있거나, 또는 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성을 갖는다고 판정할 수 있다.
「컷 오프치」는, 그 값을 기준으로 하여 질환의 판정을 한 경우에, 높은 진단 감도(유병 정진율(有病正診率, true positive rate)) 및 높은 진단 특이도(무병 정진율(true negative rate))의 양쪽을 만족할 수 있는 값이다. 예를 들면, 알츠하이머병을 발증한 개체에서 높은 양성율을 나타내고, 또한, 알츠하이머병을 발증하고 있지 않은 개체에서 높은 음성율을 나타내는 값을 컷 오프치로서 설정할 수 있다.
컷 오프치의 산출 방법은, 이 분야에 있어서 주지이다. 예를 들면, 알츠하이머병을 발증한 개체 및 알츠하이머병을 발증하고 있지 않은 개체에 있어서의 혈중의 S38AA short fragment량을 산출하고, 산출된 값에 있어서의 진단 감도 및 진단 특이도를 구하고, 이들 값에 의거하여, 시판의 해석 소프트를 사용해 ROC(Receiver Operating Characteristic) 곡선을 작성한다. 그리고, 진단 감도와 진단 특이도가 가능한 한 100％에 가까울 때의 값을 구하고, 그 값을 컷 오프치로 할 수 있다. 또, 예를 들면, 다수의 건상 동물에 있어서의 혈중의 S38AA short fragment량의 「평균치＋2 표준편차」를 컷 오프치로 하는 것도 바람직하고, 이 값을 이용하면 양호한 감도 및 특이성으로 알츠하이머병을 발증하고 있다고 판정하는 것이 가능해진다. 또, 예를 들면, ROC 곡선으로부터 진단 감도와 진단 특이도의 우도비(尤度比, likelihood ratio)가 최대가 되는 것과 같은 값을 구하고, 그 값을 컷 오프치로 함으로써 고감도로 알츠하이머병을 판정하는 것이 가능해진다. 또는, ROC 곡선에 있어서 가장 진단능이 낮은 점, 즉 ROC 곡선 아래 면적이 0.5가 되는 선으로부터 가장 떨어진 점을 컷 오프치로 하는 것, 즉, 「감도＋특이도-1」을 계산하여, 그 값이 최대치가 되는 점을 컷 오프치로 하는 것도 바람직하다.
본원 명세서의 리콤비넌트 단백질로 환산한, S38AA short fragment량의 컷 오프치로서, 예를 들면, 45∼75 유닛을 들 수 있다. 컷 오프치로서 바람직하게는, 49∼69 유닛을 들 수 있다. 컷 오프치로서 보다 바람직하게는, 54∼64 유닛을 들 수 있다. 컷 오프치로서 보다 바람직하게는, 56∼62 유닛을 들 수 있다. 컷 오프치로서 더욱 바람직하게는, 58∼61 유닛을 들 수 있다. 컷 오프치로서 가장 바람직하게는, 59 유닛을 들 수 있다.
컷 오프치로서 다른 바람직한 값으로서, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 및 75 유닛을 들 수 있다.
생체내에 포함되는 S38AA short fragment량의 컷 오프치로서, 예를 들면, 45∼75ng/mL를 들 수 있다. 컷 오프치로서 바람직하게는, 49∼69ng/mL를 들 수 있다. 컷 오프치로서 보다 바람직하게는, 54∼64ng/mL를 들 수 있다. 컷 오프치로서 보다 바람직하게는, 56∼62ng/mL를 들 수 있다. 컷 오프치로서 더욱 바람직하게는, 58∼61ng/mL를 들 수 있다. 컷 오프치로서 가장 바람직하게는, 59ng/mL를 들 수 있다.
컷 오프치로서 다른 바람직한 값으로서, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 및 75ng/mL를 들 수 있다.
본 발명의 방법은, 알츠하이머병의 판정 등의 시에, S38AA short fragment에 더하여, 다른 알츠하이머병의 진단 마커의 변동을 조사해도 된다. 다른 알츠하이머병의 진단 마커로는, 예를 들면, 혈장 바이오 마커로서의 가능성이 연구되고 있는 Aβ, 호모시스테인, 뉴로필라멘트, 여러 가지의 염증 관련 단백질(C 반응성 단백, IL-1β, TNF, IL-6 및 TGFβ), 콜레스테롤, 타우, 인산화 타우 등의 공지의 마커를 들 수 있고, 이들은 주지 관용의 검출법에 따라 검출할 수 있다.
(2) 알츠하이머병의 치료 및 예방 방법
상기 본 발명의 알츠하이머병의 판정 방법 등에 있어서, 피검 동물이 알츠하이머병에 이환되어 있거나, 현재 알츠하이머에 이환되어 있을 가능성, 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성을 갖는다고 판정된 경우, 해당 판정 결과에 의거하여 해당 피검 동물에게 투여해야 하는 알츠하이머병 치료약 또는 예방약을 결정하고, 해당 피검 동물에게 치료적 유효량의 해당 치료약 또는 예방약을 투여함으로써, 알츠하이머병을 치료 또는 예방할 수 있다.
본 명세서에 있어서, 「알츠하이머병 치료약」에는, 알츠하이머병의 근치 치료를 목적으로 하는 의약 뿐만 아니라, 예를 들면, 알츠하이머병의 진행 억제를 목적으로 하는 의약도 포함되며, 해당 진행 억제를 목적으로 하는 의약은, 「알츠하이머병 예방약」으로서 이용되어도 된다.
알츠하이머병 치료약으로는, 예를 들면, 콜린에스테라아제 저해약, NMDA 수용체 길항약, 아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약, 그리고 타우 단백질 제거약 및 산생 억제약을 들 수 있다.
콜린에스테라아제 저해약으로는, 예를 들면, 도네페질, 갈란타민, 리바스티그민, 후페르진 A, 및 타크린을 들 수 있다.
NMDA 수용체 길항약으로는, 예를 들면, 메만틴을 들 수 있다.
아밀로이드 β 제거약 및 산생 억제약으로는, 예를 들면, 아밀로이드 β 백신, 아밀로이드 β 제거 항체, 아밀로이드 β 산생 효소 저해제, 아밀로이드 β 응집 억제제 및 아밀로이드 β 분해 촉진제를 들 수 있다. 구체적으로는, CNP-520, E-2609, 아두카누맙(aducanumab), 솔라네주맙(solanezumab), 간테네루맙(gantenerumab), 크레네주맙(crenezumab), 아밀로모타이드(amilomotide), ASD-005, HSH-971, ELND-005, ALZT-OP1, 닐바디핀(nilvadipine), ACI-24, UB-311, 아피토프(AFFITOPE) AD-02, LY-3002813, BAN-2401, 뉴로스템-AD(Neurostem-AD), CT-1812, ID-1201, NIC5-15, BI-425809, 포시펜(Posiphen), PQ-912, 브리오스타틴-1(bryostatin-1), 아파베탈론(Apabetalone), PBT-2, RIV-1061-IR, MEDI-1814, PF-05236812, SAR-228810, Lu-AF20513, PRI-002, IRX-4204, GC-021109, AAD-2004, CTS-21166, LY-3323795, 벤포티아민(benfotiamine), 비스노르심세린(bisnorcymserine), MDR-1339, KHK-6640, 및 NPT-088을 들 수 있다.
타우 단백질 제거약 및 산생 억제약으로는, 예를 들면, 타우 단백질 백신, 타우 단백질 제거 항체, 타우 단백질 수식 억제제, 타우 단백질 응집 억제제, 및 타우 단백질 분해 촉진제를 들 수 있다. 구체적으로는, TRx-237, TPI-287, ABBV-8E12, RG-6100, AADvac1, RO7105705, PTI-80, JNJ-63733657, UCB-0107, BIIB-076, MC-1, ACI-35 및 AZP-2006을 들 수 있다.
상기 치료약은, 환자의 증상에 맞춰, 적절히 조합하여 사용해도 된다.
6. 본 발명의 치료약
상기 알츠하이머 치료약은, 그 증상의 위중도(경도, 중등도, 중도 등)에 따라 사용할 수 있는 것이 다르기 때문에, 상술한 본 발명의 알츠하이머병의 진행도의 판정을 보조하는 방법의 판정 결과를 이용하여, 피검 동물에게 투여해야 하는 치료약을 결정해도 된다.
따라서, 본 발명은, 알츠하이머병의 진행도가 판정된 피검 동물(환자)에게 이용되는, 알츠하이머병 치료약을 제공하는 것이다.
또, 상술한 바와 같이 AD 환자의 혈액에서는 S38AA short fragment량이 크게 상승하고 있고, 또한 혈중의 S38AA short fragment량과 알츠하이머병의 위중도(인지 기능 장애의 진행도)의 사이에 양(正)의 상관이 있기 때문에, 본 발명은, 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자(인간)의 생체내의 S38AA short fragment의 양을 감소시키는 약제, 또는 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자(인간)의 생체내에 있어서의 S38AA short fragment의 산생을 저해하는 약제를 유효 성분으로서 함유하는 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약을 제공하는 것이다. 여기에서 환자 또는 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 S38AA short fragment의 양으로는, 환자 또는 이환 가능성이 있는 자의 생체내 조직 또는 체액에 포함되는 S38AA short fragment의 양을 들 수 있고, 구체적으로는, 혈액, 뇌척수액, 소변, 타액 또는 누액 등을 들 수 있다.
S38AA short fragment의 양을 감소시키는 약제로는, 예를 들면, 중화 항체를 들 수 있고, 환자 또는 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 S38AA short fragment와 결합함으로써, 생체 중의 유리(遊離)의 S38AA short fragment를 감소시킬 수 있다. S38AA short fragment의 산생을 저해하는 약제로는, 예를 들면, S38AA long fragment를 절단하여 S38AA short fragment를 산생하는 효소의 저해제를 들 수 있고, 각각 자체 당업자에게 주지의 방법에 의해 취득할 수 있다.
7. 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질의 선별 방법
본 발명은, 피검 물질이 S38AA short fragment를 제거하는지 여부, 또는 S38AA short fragment의 생성을 저해하는지 여부를 지표로 하는, 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질을 선별하는 방법, 및 해당 방법에 의해 취득될 수 있는 물질을 제공하는 것이다. 본 발명의 선별 방법에 있어서는, 혈중의 S38AA short fragment의 양을 저감하는 물질, 또는 S38AA short fragment의 생성을 하방 제어(down-regulates)하는 물질이, 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질로서 선별된다.
본 발명의 선별 방법에 제공되는 피검 물질은, 어떠한 공지 화합물 및 신규 화합물이어도 되고, 예를 들면, 핵산, 당질, 지질, 단백질, 펩티드, 유기 저분자 화합물, 콤비내토리얼 케미스트리 기술(combinatorial chemistry technique)을 이용하여 제작된 화합물 라이브러리, 랜덤 펩티드 라이브러리, 또는 미생물, 동식물, 해양생물 등 유래의 천연 성분 등을 들 수 있다.
본 발명의 선별 방법은, 예를 들면 (i) 피검 물질과 S38AA short fragment의 생성을 측정 가능한 세포를 접촉시키는 공정과, (ii) 피검 물질을 접촉시킨 세포에 있어서의 S38AA short fragment의 생성량을 측정하고, 해당 생성량과 피검 물질을 접촉시키지 않는 대조 세포에 있어서의 S38AA short fragment의 생성량을 비교하는 공정, 및 (iii) (ii)의 비교 결과에 의거하여, S38AA short fragment의 생성량을 하방 제어하는 피검 물질을, 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질로서 선별하는 공정을 포함해도 된다.
또 본 발명의 선별 방법은, 예를 들면, (i) 피검 물질과 S38AA short fragment를 생성하는 효소를 접촉시키는 공정과, (ii) 피검 물질을 접촉시킨 효소에 있어서의 S38AA short fragment의 생성량을 측정하고, 해당 생성량과 피검 물질을 접촉시키지 않는 대조 효소에 있어서의 S38AA short fragment의 생성량을 비교하는 공정, 및 (iii) (ii)의 비교 결과에 의거하여, S38AA short fragment의 생성량을 하방 제어하는 피검 물질을, 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질로서 선별하는 공정을 포함해도 된다. 상기 효소의 기질로는, S38AA short fragment를 생성하는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, S38AA, S38AA long fragment, S38AA 단편 등을 들 수 있다.
또한, 예를 들면, (i) 피검 물질과 S38AA short fragment를 접촉시키는 공정과, (ii) 피검 물질을 접촉시킨 후에 잔존하는 유리의 S38AA short fragment의 존재량을 측정하고, 해당 유리의 S38AA short fragment량과 피검 물질을 접촉시키지 않는 경우의 유리의 S38AA short fragment량을 비교하는 공정, 및 (iii) (ii)의 비교 결과에 의거해, S38AA short fragment와 결합하여, 유리의 S38AA short fragment량을 하방 제어하는 피검 물질을, 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질로서 선별하는 공정을 포함해도 된다. 해당 방법은, 상술의 S38AA short fragment를 생성하는 효소와 그 기질을 포함하는 계(系)에 피검 물질을 첨가함으로써 행해도 되고, 미리 준비한 S38AA short fragment를 포함하는 계에 피검 물질을 첨가함으로써 행해도 된다. 또 (i)의 피검 물질과 S38AA short fragment를 접촉시키는 공정에 있어서, 해당 접촉에 의해 S38AA short fragment가 침강(예를 들면, 면역 침강 등)해도 된다.
본 발명의 선별 방법에 이용하는 「세포」란, 측정 대상의 S38AA short fragment의 생성 레벨이 평가 가능한 세포를 말한다. 해당 세포로는, 측정 대상의 S38AA short fragment를 천연으로 생성 가능한 세포, 자극을 가함으로써 S38AA short fragment를 생성할 수 있는 S38AA 발현 세포, 또는 S38AA short fragment를 생성할 수 있도록 유전자 재조합한 세포 등을 들 수 있다.
S38AA short fragment를 천연으로 생성 가능한 세포는, 특별히 한정되지 않지만, 당해 세포로서, 포유 동물(예를 들면, 인간, 마우스 등)의 초대 배양 세포, 당해 초대 배양 세포로부터 유도된 세포주 등을 이용할 수 있다. S38AA는 U251 세포나 SHSY-5Y 세포에 발현하고 있는 것이 공지이며, BE(2)-C 세포, SK-N-MC 세포에도 S38AA는 발현하고 있다. 공지 기술을 이용하여 S38AA, 또는 FLAG 태그 등의 라벨화 S38AA 등을 과잉 발현시킨 유전자 재조합 세포를 제작하는 것도 가능하다. S38AA 발현 세포는, 배양에 의해 S38AA의 절단 등을 거쳐, S38AA short fragment가 유리된다. 생성되는 S38AA short fragment의 양이 적은 경우에는, 적절히, S38AA가 절단 등 되기 쉬운 조건에서 배양함으로써, S38AA short fragment의 생성을 측정할 수 있다. S38AA가 절단 등 되기 쉬운 조건으로는, 예를 들면, 글루코오스를 고갈시킨 배지, 또는 뇌에 생리적으로 자극을 주는 것이 알려져 있는 물질을 포함하는 배지에서 배양하는 것을 들 수 있다. 당해 물질로는, 구체적으로는, TNFα, 인터페론 γ, 인터루킨 1, 인터루킨 6 등의 사이토카인, 아밀로이드 베타 또는 그 응집체 등을 예시할 수 있다.
피검 물질과 S38AA short fragment의 생성을 측정 가능한 세포와의 접촉은, 배양 배지 중에서 행해진다. 배양 배지는, S38AA short fragment의 생성을 측정 가능한 세포에 따라 적절히 선택되지만, 예를 들면, 약 5∼20％의 소 태아 혈청을 포함하는 최소 필수 배지(MEM), 둘베코 개변 이글 배지(DMEM) 등이다. 배양 조건도 마찬가지로 적절히 결정되지만, 예를 들면, 배지의 pH는 약 6∼약 8이고, 배양 온도는 통상 약 30∼약 40℃이며, 배양 시간은 약 0.1∼약 72시간이다.
또, 피검 물질과 S38AA short fragment를 생성하는 효소와의 접촉은, 해당 효소와 그 기질을 포함하는 반응계 중에서 행해진다. 반응계의 효소 농도, 기질 농도, pH, 온도 등, 효소 기질, 반응 시간 등은, 적절히 설정할 수 있다.
여기에서, S38AA short fragment를 생성하는 효소로서, 당해 효소를 포함하는 용액을 이용할 수 있다. 당해 용액으로는, S38AA short fragment를 생성 가능한 체액(혈장 등), 장기·조직 추출물, 및 세포 추출물 등을 들 수 있다.
S38AA short fragment의 생성량의 측정은, 세포의 배양상청 중 또는 반응계 중에 유리된 S38AA short fragment량을, (5. 본 발명의 방법)의 항에서 서술한 방법에 따라 측정함으로써 행할 수 있다.
생성량의 비교는, 바람직하게는, 유의차(有意差)의 유무에 의거하여 행해질 수 있다. 또한, 피검 물질을 접촉시키지 않는 대조 세포 또는 효소에 있어서의 S38AA short fragment의 생성량은, 피검 물질을 접촉시킨 세포 또는 효소에 있어서의 S38AA short fragment의 생성량의 측정에 대해, 사전에 측정한 생성량이어도, 동시에 측정한 생성량이어도 된다.
본 발명의 선별 방법으로 얻어지는 물질은, 새로운 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 개발을 위한 후보 물질로서 유용하다.
실시예
이하에 실시예를 들어 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명은 조금도 이들로 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 인간 혈장 중 S38AA long fragment의 N 말단 절단 부위의 동정
AD 환자 유래의 혈장 중 단백질을 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 의해 분리 후, S38AA 단편을 포함하는 겔편을 잘라내고, 트립신에 의한 인겔(in-gel) 소화 후에 액체 크로마토그래피-질량분석법(LC-MS/MS)에 의해 분석하고, 측정 데이터에 대해 MASCOT database search를 행하여, S38AA 단편의 N 말단의 서열을 결정했다.
구체적인 조작으로는, 복수 명의 AD 환자의 혈장을 혼합한 샘플을, 4-12％ Bis-TrisGel(invitrogen)에 어플라이하고, SDS-PAGE(25 mA, 110분, MOPS 버퍼)에 의해 단백질의 분리를 실시했다. 쿠마시 브릴리언트 블루(Coomassie Brilliant Blue) 염색으로 겔을 염색 후, 80-100kDa에서 보이는 밴드를 잘라내어, 소화 공정으로 진행시켰다.
잘라낸 겔편을 96 웰 마이크로플레이트에 넣고, 아세토니트릴을 첨가하여, 감압 원심 건조시키고, 10 mM DTT/100 mM NH4HCO3를 첨가하여, 인큐베이션을 행하였다. 용매 제거 후, 55 mM ICH2CONH2/100 mM NH4HCO3를 첨가하여, 인큐베이션하였다. 용매 제거 후, 100 mM NH4HCO3를 첨가하여, 겔을 감압 원심 건조시키고, 0.1％ RapiGest/25 mM NH4HCO3를 첨가하여, 인큐베이션을 행하였다. 그 후, 감압 원심 건조시키고, 효소 용액(50 mM NH4HCO3, 12.5 ng/μL 트립신)을 첨가하여, 효소 소화를 행하였다. 반응 후, 펩티드 용액을 다른 96 웰 마이크로플레이트로 옮기고, 아세토니트릴:milliQ:트리플루오로 초산(酢酸)(TFA)＝500:500:1의 혼합 용매를 겔에 첨가하고, 얻어진 펩티드 추출액을 감압 농축했다. 거기에 TFA를 첨가하고, 감압 농축을 가하여, MS 해석용 샘플로 했다.
얻어진 샘플을 LC-MS/MS에 의해 분석했다. 오비트랩 질량 분석계(Orbitrap mass spectrometer)에 의해 얻어진 데이터를, S38AA 단백질의 아미노산 서열에 대해 MASCOT database search를 실시한바, S38AA 단백질의 아미노산 서열 중, 복수의 펩티드 프래그먼트가 동정되었다(도 1). 이들 서열 중, 가장 N 말단측에 있는 펩티드는 399번째부터 413번째의 아미노산 서열이며, 당해 서열을 나타내는 MS/MS 스펙트럼이 관찰되었다(도 2). 또, 이 절단 개소는 398번째의 세린(S)의 C 말단측에 있었다. 소화 효소 트립신의 절단은, 리신(K)이나 아르기닌(R)의 C 말단을 특이적으로 절단하는 효소이고, 본 프래그먼트의 세린(S)의 C 말단측에서는 절단 반응이 일어나지 않기 때문에, 이미 이 부위에서 절단되어 있었던 것이 시사되었다. 본 펩티드 프래그먼트가 검출됨으로써, 정제한 S38AA 단편의 N 말단측은, 398번째부터 399번째의 S/E에서 절단되어 있는 것을 알았다. 여기에서 동정된 S38AA 단편을, S38AA long fragment라고 한다.
실시예 2: 인간 혈장 중 S38AA short fragment의 N 말단 절단 부위의 동정
S38AA long fragment의 N 말단을 인식하는 토끼 유래 항 S38AA 폴리클로날 항체(「MBL」, 「S38AA long fragment용 항체」, 또는 「long fragment용 항체」라고도 칭한다.)에 의한 면역 침강법으로 S38AA long fragment를 제거한 후, 마우스 유래 항 S38AA 모노클로날 항체 A(S38AA 단편의 C 말단 아미노산 서열의 일부의 펩티드를 면역원으로 하여 항체 산생 하이브리도마를 수립하고, 분리 정제한 것; 항체 A), 마우스 유래 항 S38AA 모노클로날 항체 B(S38AA 단편의 C 말단 아미노산 서열의 일부의 펩티드를 면역원으로 하여 항체 산생 하이브리도마를 수립하고, 분리 정제한 것; 항체 B) 또는 마우스 유래 항 S38AA 모노클로날 항체 C(S38AA long fragment의 대장균 재조합 단백질을 면역원으로 하여 항체 산생 하이브리도마를 수립하고, 분리 정제한 것; 항체 C)를 이용하여 잔존하는 S38AA 단편을 면역 침강하고, 그 획분(劃分)을 역상 컬럼으로 정제하고, 트립신에 의해 소화 후, LC-MS/MS에 의해 분석하여, 당해 S38AA 단편의 N 말단의 서열을 결정했다.
구체적인 조작으로는, AD 환자의 혈장의 혼합물에 프로테아제 저해제(cOmplete Tablets Mini, Roche)를 포함하는 PBS를 첨가하고, 추가로 Protein G Mag Sepharose Xtra(비즈, GE 헬스케어)를 첨가하여, 혼화시킴으로써 내재성 이뮤노글로불린을 제거했다. 비즈를 제거한 상청에, long fragment용 항체를 첨가하고, 항원 항체 반응을 실시했다. 혼화 후, 새롭게 비즈를 첨가하고, long fragment용 항체 및 항체에 흡착한 S38AA long fragment를 포함한 회수 단백질을 제거했다. 비즈를 제거한 상청에, 전술한 항체 A, B 또는 C를 첨가하고, 항원 항체 반응을 실시했다. 혼화 후, 새롭게 비즈를 첨가하고, 그 후 비즈를 회수함으로써 당해 항체와 이 항체에 흡착한 S38AA 단편을 얻었다. 면역 침강으로 회수한 비즈에, 8M 요소/1％ TFA 용액을 첨가하여, S38AA 단편을 용출했다. 얻어진 S38AA 단편을 포함하는 용액을 농축하고, 전량을 역상 컬럼(ZORBAX 300SB-C3, 4.6x150 mm with guardcolumn, Agilent)으로 분리했다. 분리 조건은 하기 표 1과 같다. 얻어진 각 획분을, S38AA 단편의 C 말단측 영역을 인식하는 2개의 항체에 의한 샌드위치 ELISA로 측정하고, S38AA 단편을 포함하는 획분을 효소 용액(1M NH4HCO3, 10mM CaCl2, 1ng/μL 트립신)으로 소화하고, 얻어진 펩티드를 GL-tip SDB 및 GL-Tip GC(GL 사이언스)로 농축했다.
얻어진 펩티드를 LC-MS/MS에 의해 분석했다. Q-Exactive HF 질량 분석계에 의해 얻어진 데이터를, SwissProt 데이터베이스에 대해 MASCOT database search를 실시한바, S38AA가 가장 높은 스코어로 동정되고, 복수의 펩티드 프래그먼트가 동정되었다(도 3). 이들 서열 중, 가장 N 말단측에 있는 펩티드는 617번째부터 627번째의 서열이며, 당해의 서열을 나타내는 MS/MS 스펙트럼이 관찰되었다(도 4). 또, 이 절단 개소는 616번째의 아스파라긴(N)의 C 말단측에 있었다. 소화 효소 트립신의 절단은, 리신(K)이나 아르기닌(R)의 C 말단을 특이적으로 절단하는 효소이고, 본 프래그먼트의 아스파라긴(N)의 C 말단측에서는 절단 반응이 일어나지 않기 때문에, 이미 이 부위에서 절단되어 있었던 것이 나타내어졌다. 본 펩티드 프래그먼트가 검출됨으로써, 정제한 S38AA 단편은, 617번째부터 618번째의 N/G에서 절단되어 있는 것을 알았다. 여기에서 동정된 S38AA 단편을, S38AA short fragment라고 한다.
[표 1]
Figure pct00001
실시예 3: 인간 혈장 중 S38AA long fragment 단편의 C 말단 절단 부위의 동정
실시예 2에서 사용한 「토끼 유래 S38AA long fragment용 폴리클로날 항체(long fragment용 항체)」에 의한 항체 컬럼 정제법으로 S38AA long fragment를 분취(分取)하고, 그 획분을 SDS-PAGE에 의해 분리 후, S38AA long fragment를 포함하는 겔편을 잘라내고, 트립신에 의한 인겔 소화 후에 LC-MS/MS에 의해 분석하고, 측정 데이터에 대해 MASCOT database search를 행하여, S38AA long fragment의 C 말단의 프래그먼트의 서열을 결정했다.
구체적인 조작으로는, 복수 명의 AD 환자의 혈장을 혼합한 샘플에 50 mM Tris-HCl/0.05％ Tween-20(pH 7.4)를 첨가하여, 음이온 교환 컬럼 정제(Hitrap Q FF, GE 헬스케어)에 어플라이했다. 계속해서, 50 mM 인산/0.05％ Tween-20/500 mM NaCl(pH 7.4)로 용출했다. 용출 획분을 long fragment용 항체를 결합시킨 컬럼(HiTrap NHS-activated HP column, GE 헬스케어)에 어플라이했다. 컬럼을 PBS-T로 세정 후, 0.1 M 글리신-HCl/0.05％ Tween-20(pH 2.7)로 용출했다. 용출액은 1M Tris-HCl(pH 9.0)로 즉시 중성으로 되돌렸다. 얻어진 샘플을 미리 50 mM Tris-HCl(pH 7.4)로 평형화시킨 HiTrap Q FF column(GE 헬스케어)에 어플라이하고, 계면활성제를 제거했다. 샘플을 감압 원심으로 농축하고, 거기에 50 mM DTT/LDS 버퍼를 첨가하여, 가열했다. 본 샘플을, 4-12％ Bis-Tris Gel(invitrogen)에 전량 어플라이하고, SDS-PAGE(50 mA, 90분, MOPS 버퍼)에 의해 단백질의 분리를 실시했다. 겔을 Sypro Ruby(pierce)로 염색 후, 80-100kDa에서 보이는 밴드를 잘라내어, 소화 공정으로 진행시켰다.
잘라낸 겔편을 96 웰 마이크로플레이트에 넣고, 아세토니트릴을 첨가하여, 소니케이션(sonication)을 행하였다. 그 후, 감압 원심 건조시키고, 10 mM DTT/25 mM NH4HCO3를 첨가하여, 인큐베이션을 행하였다. 용매 제거 후, 55 mM ICH2CONH2/25 mM NH4HCO3를 첨가하여, 차광하에서 인큐베이션했다. 용매 제거 후, 50 mM NH4HCO3를 첨가하여 정치(靜置)한 후, 아세토니트릴을 첨가하여, 소니케이션을 행하였다. 용매 제거 후, 겔을 감압 원심 건조시키고, 0.1％ RapiGest/25 mM NH4HCO3를 첨가하여, 인큐베이션을 행하였다. 그 후, 감압 원심 건조시키고, 인큐베이션을 행한 후, 효소 용액(50 mM NH4HCO3, 5ng/μL 트립신)을 첨가하여, 인큐베이션했다. 용매 제거 후, 50 mM NH4HCO3를 첨가하고, 인큐베이션하여, 효소 소화를 행하였다. 반응 후, 펩티드 용액을 다른 96 웰 마이크로플레이트로 옮기고, 아세토니트릴:milliQ:TFA＝500:500:1의 혼합 용매를 겔에 첨가하여, 소니케이션을 행하였다. 이 조작을 한 번 더 반복하고, 얻어진 펩티드 추출액을 감압 농축하여, MS 해석용 샘플로 했다.
얻어진 펩티드를 LC-MS/MS에 의해 분석했다. 오비트랩 질량 분석계에 의해 얻어진 데이터를, S38AA 단백질의 아미노산 서열에 대해 MASCOT database search를 실시한바, S38AA 단백질의 아미노산 서열 중, 복수의 펩티드 프래그먼트가 동정되었다(도 5). 이들 서열 중, 가장 C 말단측에 있는 펩티드는 1040번째부터 1049번째의 서열이며, 당해 서열을 나타내는 MS/MS 스펙트럼이 관찰되었다(도 6). 또, 이 절단 개소는 1049번째의 로이신(L)의 C 말단측에 있었다. 소화 효소 트립신의 절단은, 리신(K)이나 아르기닌(R)의 C 말단을 특이적으로 절단하는 효소이고, 본 프래그먼트의 로이신(L)의 C 말단측에서는 절단 반응이 일어나지 않기 때문에, 이미 이 부위에서 절단되어 있었던 것이 시사되었다. 본 펩티드 프래그먼트가 검출됨으로써, 정제한 S38AA long fragment의 C 말단측은, 1049번째부터 1050번째의 L/R에서 절단되어 있는 것을 알았다. 또한, S38AA short fragment는, 실시예 2에서 이용한 「S38AA long fragment의 C 말단을 인식하는 항체(항체 A, 항체 B, 또는 항체 C)」에의 반응성이 같았던 점에서, S38AA short fragment의 C 말단도 동일한 부위에서 절단되어 있다고 생각되었다.
실시예 4: S38AA long fragment 및 S38AA short fragment 대장균 재조합 단백질의 제작 및 ELISA에 의한 측정
S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 대장균 재조합 단백질을 제작하고, 그들을 표품으로 하여 S38AA long fragment만을 정량하는 Long ELISA 및 양쪽의 fragment를 정량하는 Total ELISA를 구축했다.
구체적인 조작으로는, S38AA long fragment 서열(399-1049 아미노산 서열) 및 S38AA short fragment 서열(617-1049 아미노산 서열)의 플라스미드 DNA를 도입한 대장균 BL21(DE3)의 형질 전환체를 제작했다. 진탕 배양을 계속한 후에, 원심하여 집균했다. 소량의 균체에 단백질 추출 시약 B-PER(Thermo Fisher Scientific)를 첨가하여 현탁하고, 그 원심 상청을 SDS-PAGE로 영동하여, 목적 단백질의 발현을 확인했다. 본 균체에 버퍼 A(20 mM Tris HCl pH 8.0, 200 mM NaCl, 10％ 글리세롤, 20 mM 이미다졸)와 프로테아제 저해제 cOmplete EDTA-free(Roche) 및 핵산 분해 효소 벤조나아제(Benzonase)를 첨가하고, 현탁하여 균체를 파쇄하고, 원심했다. 0.22㎛ 필터를 이용하여 원심 상청으로부터 잔존 균체를 제거한 후에, HisTrap HP를 이용하여 Ni 어피니티 정제를 행하였다. 목적 단백질의 용출 프랙션을 모아, 표품으로 했다. 표품의 단백질 농도를 측정한 결과, 각각 1.4 mg/mL(long fragment), 1.6 mg/mL(short fragment)였다.
「S38AA long fragment에 대한 N 말단측 영역을 인식하는 항체(실시예 2에서 이용한 long fragment용 항체)」와 「C 말단측 영역을 인식하는 항체 A」, 「항체 B」, 또는 「항체 C」에 의한 샌드위치 ELISA(Long ELISA)와, S38AA long fragment와 S38AA short fragment 양쪽에 공통되는 C 말단측 영역을 인식하는 「항체 A」, 「항체 B」 및 「항체 C」로부터 선택되는 2개의 항체에 의한 샌드위치 ELISA(Total ELISA)를 제작했다. 정량으로 이용하는 표품으로서, 상기의 대장균 재조합 단백질(스탠다드 단백질)을 준비하여, 양 ELISA로 측정했다. 각 항체를 고정한 플레이트에 샘플을 어플라이하여, 인큐베이션했다. 3회 세정 후, 각 HRP 표식 항체를 첨가하여, 인큐베이션했다. 3회 세정 후, 3％ 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB) 용액을 첨가하여, 차광하에서 인큐베이션했다. 마지막으로 8％ 황산을 첨가하여 반응을 정지하고, 450nm의 흡광도(O.D.)를 측정했다. 그 결과, 스탠다드 단백질 농도 의존적인 반응이 인정되어, 양호한 검량선이 얻어졌다(도 7). Long ELISA에서는, S38AA short fragment 스탠다드 단백질에의 반응은 인정되지 않았다.
실시예 5: 인간 혈장 중 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량(Total ELISA-Long ELISA 감산법)
인간 혈장 중에 포함되는 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment를 정량하기 위해, 감산법을 이용한 ELISA에 의한 정량을 실시했다.
구체적인 조작으로는, 4명의 건상자 및 8명의 중등도 및 중도 AD 환자 유래의 혈장 각각에 포함되는 S38AA short fragment량을, 상술의 Total ELISA 및 Long ELISA를 이용하여 정량했다. 정량은 실시예 4에 기재한 방법에 준하여 실시했다. 각 ELISA의 검량선은, S38AA long fragment 스탠다드 단백질의 측정에 의해 작성했다. S38AA short fragment량에 관해서는, Total ELISA의 정량치로부터 Long ELISA의 정량치를 감산함으로써 산출했다. 그 결과, 각 샘플에 있어서의 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량치가 얻어졌다(도 8).
얻어진 결과에 의거하여, 건상자 및 AD 환자 유래의 혈장에 포함되는 S38AA short fragment 및 S38AA long fragment량을 해석한 결과, S38AA long fragment량에 비하여, S38AA short fragment량이, 건상자와 AD 환자의 식별성이 높아, 고감도로 중등도 및 중도 AD 환자를 판정할 수 있는 것을 알았다(도 9).
실시예 6: 인간 혈장 중 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량(Long fragment 면역 침강 제거법)
인간 혈장 중에 포함되는 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment를 정량하기 위해, 면역 침강법을 이용한 S38AA long fragment의 제거 및 ELISA 정량을 실시했다.
구체적인 조작으로는, 복수 명의 건상자 및 AD 환자의 혈장을 혼합한 샘플 각각에 PBS를 첨가하고, Protein G Mag Sepharose Xtra(비즈, GE 헬스케어)를 첨가하여 혼화시킴으로써, 내재성 이뮤노글로불린을 제거했다. 반응 후, 상청에 토끼 유래 S38AA long fragment용 폴리클로날 항체(long fragment용 항체)를 첨가하여, 항원 항체 반응을 행하였다. 반응 후, 새로운 비즈에 본 반응액을 혼합하여, 항원 항체 복합체를 비즈로 회수했다. 회수한 비즈에 0.1M Gly-HCl(pH 2.8)을 첨가함으로써 S38AA long fragment를 포함한 회수 단백질을 용출했다. 용출액은, 1M Tris-HCl(pH 9.0)로 즉시 중성으로 했다. 얻어진 용출액(S38AA long fragment 획분) 및 상청(S38AA short fragment 획분)에 포함되는 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 양을, 각각 Total ELISA를 이용하여 정량했다. 정량은 실시예 4에 기재한 방법에 준하여 실시했다. 각 ELISA의 검량선은, S38AA long fragment 스탠다드 단백질의 측정에 의해 작성했다. 그 결과, 각 샘플에 있어서의 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량치가 얻어졌다(도 10). 본 결과로부터, AD 환자에서는 S38AA long fragment에 비하여 S38AA short fragment량이 크게 상승하고 있는 것이 시사되었다.
실시예 7: 각 S38AA fragment의 정량에 의한 AD 진단능 비교(Total ELISA-Long ELISA 감산법)
각 S38AA fragment의 정량에 의한 AD 진단능의 비교를 위해, 감산법을 이용한 ELISA 정량을 실시했다.
구체적으로는, 10명의 건상자 및 10명의 경도 AD 환자 유래의 혈장 각각에 포함되는 S38AA short fragment량 및 S38AA long fragment량을, Total ELISA 및 Long ELISA를 이용하여 정량했다. 정량은 실시예 4에 기재한 방법에 준하여 실시했다. 각 ELISA의 검량선은, S38AA long fragment 스탠다드 단백질의 측정에 의해 작성했다. S38AA short fragment량에 관해서는, Total ELISA의 정량치로부터 Long ELISA의 정량치를 감산함으로써 산출했다. 그 결과, 각 샘플에 있어서의 S38AA long fragment 및 S38AA short fragment의 정량치가 얻어졌다(도 11). 또, 총량이나 S38AA long fragment량에 비하여 S38AA short fragment량만을 정량함으로써 고감도로 경도 AD를 진단할 수 있는 것이 시사되었다(도 12).
실시예 8: 각종 항 S38AA fragment 항체를 조합한 인간 혈장 중 S38AA fragment의 정량 1
인간 혈장 중에 포함되는 『「S38AA short fragment의 양」과 「S38AA long fragment의 양」의 총량』을 정량하기 위해, 각종 항 S38AA fragment 항체를 조합 사용한 ELISA 정량을 실시했다.
구체적으로는, 4명의 건상자 및 8명의 AD 환자 유래의 혈장 각각을, 「항체 A, 항체 B, 항체 C 중의 2개의 조합으로 이루어지는 항체를 이용한 ELISA(패턴 1, 2, 또는 3)」를 이용하여 정량했다. 정량은 실시예 4에 기재한 방법에 준하여 실시했다. 각 ELISA의 검량선은, S38AA long fragment 스탠다드 단백질의 측정에 의해 작성하고, 각 샘플에 있어서의 정량치를 취득했다(도 14).
패턴 1: 항체 A, 및 항체 B를 이용한 ELISA
패턴 2: 항체 A, 및 항체 C를 이용한 ELISA
패턴 3: 항체 B, 및 항체 C를 이용한 ELISA
측정의 결과, 『「S38AA short fragment의 양」과 「S38AA long fragment의 양」의 총량』에 관한 측정치는, 각 샘플에 있어서 동등하고, 사용한 항체의 조합에 관계없이, 일관된 정량성이 얻어진다.
실시예 9: 각종 항 S38AA fragment 항체를 조합한 인간 혈장 중 S38AA fragment의 정량 2
인간 혈장 중에 포함되는 「S38AA long fragment의 양」을 정량하기 위해, 각종 항 S38AA fragment 항체를 조합하여 사용한 ELISA 정량을 실시했다.
구체적으로는, 4명의 건상자 및 8명의 AD 환자 유래의 혈장 각각을, 「한쪽이 Long fragment용 항체 및 다른쪽이 항체 A, 항체 B, 항체 C 중의 하나의 조합 ELISA(패턴 4, 5, 또는 6)」를 이용하여 정량했다. 정량은 실시예 4에 기재한 방법에 준하여 실시했다. 각 ELISA의 검량선은, S38AA long fragment 스탠다드 단백질의 측정에 의해 작성하고, 각 샘플에 있어서의 정량치를 취득했다(도 15).
패턴 4: Long fragment용 항체, 및 항체 A를 이용한 ELISA
패턴 5: Long fragment용 항체, 및 항체 B를 이용한 ELISA
패턴 6: Long fragment용 항체, 및 항체 C를 이용한 ELISA
측정의 결과, 「S38AA long fragment의 양」에 관한 측정치는, 각 샘플에 있어서 동등하고, 사용한 항체의 조합에 관계없이, 일관된 정량성이 얻어진다.
실시예 10: 실시예 8 및 9의 결과를 이용한 인간 혈장 중 S38AA short fragment의 정량
실시예 8에서 취득한 『「S38AA short fragment의 양」과 「S38AA long fragment의 양」의 총량」』으로부터, 실시예 9에서 취득한 「S38AA long fragment의 양」을 감산함으로써, 「S38AA short fragment의 양」을 구했다(도 16).
구체적으로는, 이하의 조합으로 감산을 행하였다.
패턴 1-4: 「패턴 1에서의 측정 결과」로부터 「패턴 4에서의 측정 결과」를 감산한 결과
패턴 1-5: 「패턴 1에서의 측정 결과」로부터 「패턴 5에서의 측정 결과」를 감산한 결과
패턴 1-6: 「패턴 1에서의 측정 결과」로부터 「패턴 6에서의 측정 결과」를 감산한 결과
패턴 2-4: 「패턴 2에서의 측정 결과」로부터 「패턴 4에서의 측정 결과」를 감산한 결과
패턴 2-5:「패턴 2에서의 측정 결과」로부터 「패턴 5에서의 측정 결과」를 감산한 결과
패턴 2-6: 「패턴 2에서의 측정 결과」로부터 「패턴 6에서의 측정 결과」를 감산한 결과
패턴 3-4: 「패턴 3에서의 측정 결과」로부터 「패턴 4에서의 측정 결과」를 감산한 결과
패턴 3-5: 「패턴 3에서의 측정 결과」로부터 「패턴 5에서의 측정 결과」를 감산한 결과
패턴 3-6:「패턴 3에서의 측정 결과」로부터 「패턴 6에서의 측정 결과」를 감산한 결과
감산하여 구한 「S38AA short fragment의 양」은, 어느 항체의 조합을 이용해도 일관된 정량성이 얻어졌다.
본 발명은, 일본국에서 출원된 일본국 특원2018-148924(출원일: 2018년 8월 7일)를 기초로 하고 있고, 그 내용은 모두 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.
산업상 이용가능성
본 발명은, 알츠하이머병의 진단 및 치료 등에 유용하다.
<110> Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. <120> Diagnostic reagent and diagnostic method of Alzheimer's disease <130> 092915 <150> JP 2018-148924 <151> 2018-08-07 <160> 23 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 433 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Leu Ala Val Gly Gly Gly Glu Lys Ala Lys Gly Gly Pro Pro Pro 1 5 10 15 Gly Asn Ala Ala Gly Asp Thr Gly Gln Pro Ala Glu Asp Ser Asp His 20 25 30 Gly Gly Lys Pro Pro Leu Pro Ala Glu Lys Pro Ala Pro Gly Pro Gly 35 40 45 Leu Pro Pro Glu Pro Arg Glu Gln Arg Asp Val Glu Arg Ala Gly Gly 50 55 60 Asn Gln Ala Ala Ser Gln Leu Glu Glu Ala Gly Arg Ala Glu Met Leu 65 70 75 80 Asp His Ala Val Leu Leu Gln Val Ile Lys Glu Gln Gln Val Gln Gln 85 90 95 Lys Arg Leu Leu Asp Gln Gln Glu Lys Leu Leu Ala Val Ile Glu Glu 100 105 110 Gln His Lys Glu Ile His Gln Gln Arg Gln Glu Asp Glu Glu Asp Lys 115 120 125 Pro Arg Gln Val Glu Val His Gln Glu Pro Gly Ala Ala Val Pro Arg 130 135 140 Gly Gln Glu Ala Pro Glu Gly Lys Ala Arg Glu Thr Val Glu Asn Leu 145 150 155 160 Pro Pro Leu Pro Leu Asp Pro Val Leu Arg Ala Pro Gly Gly Arg Pro 165 170 175 Ala Pro Ser Gln Asp Leu Asn Gln Arg Ser Leu Glu His Ser Glu Gly 180 185 190 Pro Val Gly Arg Asp Pro Ala Gly Pro Pro Asp Gly Gly Pro Asp Thr 195 200 205 Glu Pro Arg Ala Ala Gln Ala Lys Leu Arg Asp Gly Gln Lys Asp Ala 210 215 220 Ala Pro Arg Ala Ala Gly Thr Val Lys Glu Leu Pro Lys Gly Pro Glu 225 230 235 240 Gln Val Pro Val Pro Asp Pro Ala Arg Glu Ala Gly Gly Pro Glu Glu 245 250 255 Arg Leu Ala Glu Glu Phe Pro Gly Gln Ser Gln Asp Val Thr Gly Gly 260 265 270 Ser Gln Asp Arg Lys Lys Pro Gly Lys Glu Val Ala Ala Thr Gly Thr 275 280 285 Ser Ile Leu Lys Glu Ala Asn Trp Leu Val Ala Gly Pro Gly Ala Glu 290 295 300 Thr Gly Asp Pro Arg Met Lys Pro Lys Gln Val Ser Arg Asp Leu Gly 305 310 315 320 Leu Ala Ala Asp Leu Pro Gly Gly Ala Glu Gly Ala Ala Ala Gln Pro 325 330 335 Gln Ala Val Leu Arg Gln Pro Glu Leu Arg Val Ile Ser Asp Gly Glu 340 345 350 Gln Gly Gly Gln Gln Gly His Arg Leu Asp His Gly Gly His Leu Glu 355 360 365 Met Arg Lys Ala Arg Gly Gly Asp His Val Pro Val Ser His Glu Gln 370 375 380 Pro Arg Gly Gly Glu Asp Ala Ala Val Gln Glu Pro Arg Gln Arg Pro 385 390 395 400 Glu Pro Glu Leu Gly Leu Lys Arg Ala Val Pro Gly Gly Gln Arg Pro 405 410 415 Asp Asn Ala Lys Pro Asn Arg Asp Leu Lys Leu Gln Ala Gly Ser Asp 420 425 430 Leu <210> 2 <211> 651 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Glu Glu Val Pro Glu Asp Leu Ala Glu Glu Ala Pro Gly Gly Arg Leu 1 5 10 15 Gly Glu Ala Glu Gly Leu Met Lys Val Glu Ala Ala Arg Leu Ser Ala 20 25 30 Gln Asp Pro Val Val Ala Val Ala Glu Asp Gly Arg Glu Lys Pro Lys 35 40 45 Leu Pro Lys Glu Arg Glu Glu Leu Glu Gln Ala Gln Ile Lys Gly Pro 50 55 60 Val Asp Val Pro Gly Arg Glu Asp Gly Lys Glu Ala Pro Glu Glu Ala 65 70 75 80 Gln Leu Asp Arg Pro Gly Gln Gly Ile Ala Val Pro Val Gly Glu Ala 85 90 95 His Arg His Glu Pro Pro Val Pro His Asp Lys Val Val Val Asp Glu 100 105 110 Gly Gln Asp Arg Glu Val Pro Glu Glu Asn Lys Pro Pro Ser Arg His 115 120 125 Ala Gly Gly Lys Ala Pro Gly Val Gln Gly Gln Met Ala Pro Pro Leu 130 135 140 Pro Asp Ser Glu Arg Glu Lys Gln Glu Pro Glu Gln Gly Glu Val Gly 145 150 155 160 Lys Arg Pro Gly Gln Ala Gln Ala Leu Glu Glu Ala Gly Asp Leu Pro 165 170 175 Glu Asp Pro Gln Lys Val Pro Glu Ala Asp Gly Gln Pro Ala Val Gln 180 185 190 Pro Ala Lys Glu Asp Leu Gly Pro Gly Asp Arg Gly Leu His Pro Arg 195 200 205 Pro Gln Ala Val Leu Ser Glu Gln Gln Asn Gly Leu Ala Val Gly Gly 210 215 220 Gly Glu Lys Ala Lys Gly Gly Pro Pro Pro Gly Asn Ala Ala Gly Asp 225 230 235 240 Thr Gly Gln Pro Ala Glu Asp Ser Asp His Gly Gly Lys Pro Pro Leu 245 250 255 Pro Ala Glu Lys Pro Ala Pro Gly Pro Gly Leu Pro Pro Glu Pro Arg 260 265 270 Glu Gln Arg Asp Val Glu Arg Ala Gly Gly Asn Gln Ala Ala Ser Gln 275 280 285 Leu Glu Glu Ala Gly Arg Ala Glu Met Leu Asp His Ala Val Leu Leu 290 295 300 Gln Val Ile Lys Glu Gln Gln Val Gln Gln Lys Arg Leu Leu Asp Gln 305 310 315 320 Gln Glu Lys Leu Leu Ala Val Ile Glu Glu Gln His Lys Glu Ile His 325 330 335 Gln Gln Arg Gln Glu Asp Glu Glu Asp Lys Pro Arg Gln Val Glu Val 340 345 350 His Gln Glu Pro Gly Ala Ala Val Pro Arg Gly Gln Glu Ala Pro Glu 355 360 365 Gly Lys Ala Arg Glu Thr Val Glu Asn Leu Pro Pro Leu Pro Leu Asp 370 375 380 Pro Val Leu Arg Ala Pro Gly Gly Arg Pro Ala Pro Ser Gln Asp Leu 385 390 395 400 Asn Gln Arg Ser Leu Glu His Ser Glu Gly Pro Val Gly Arg Asp Pro 405 410 415 Ala Gly Pro Pro Asp Gly Gly Pro Asp Thr Glu Pro Arg Ala Ala Gln 420 425 430 Ala Lys Leu Arg Asp Gly Gln Lys Asp Ala Ala Pro Arg Ala Ala Gly 435 440 445 Thr Val Lys Glu Leu Pro Lys Gly Pro Glu Gln Val Pro Val Pro Asp 450 455 460 Pro Ala Arg Glu Ala Gly Gly Pro Glu Glu Arg Leu Ala Glu Glu Phe 465 470 475 480 Pro Gly Gln Ser Gln Asp Val Thr Gly Gly Ser Gln Asp Arg Lys Lys 485 490 495 Pro Gly Lys Glu Val Ala Ala Thr Gly Thr Ser Ile Leu Lys Glu Ala 500 505 510 Asn Trp Leu Val Ala Gly Pro Gly Ala Glu Thr Gly Asp Pro Arg Met 515 520 525 Lys Pro Lys Gln Val Ser Arg Asp Leu Gly Leu Ala Ala Asp Leu Pro 530 535 540 Gly Gly Ala Glu Gly Ala Ala Ala Gln Pro Gln Ala Val Leu Arg Gln 545 550 555 560 Pro Glu Leu Arg Val Ile Ser Asp Gly Glu Gln Gly Gly Gln Gln Gly 565 570 575 His Arg Leu Asp His Gly Gly His Leu Glu Met Arg Lys Ala Arg Gly 580 585 590 Gly Asp His Val Pro Val Ser His Glu Gln Pro Arg Gly Gly Glu Asp 595 600 605 Ala Ala Val Gln Glu Pro Arg Gln Arg Pro Glu Pro Glu Leu Gly Leu 610 615 620 Lys Arg Ala Val Pro Gly Gly Gln Arg Pro Asp Asn Ala Lys Pro Asn 625 630 635 640 Arg Asp Leu Lys Leu Gln Ala Gly Ser Asp Leu 645 650 <210> 3 <211> 1119 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Thr Ala Ala Ala Ala Ser Asn Trp Gly Leu Ile Thr Asn Ile Val 1 5 10 15 Asn Ser Ile Val Gly Val Ser Val Leu Thr Met Pro Phe Cys Phe Lys 20 25 30 Gln Cys Gly Ile Val Leu Gly Ala Leu Leu Leu Val Phe Cys Ser Trp 35 40 45 Met Thr His Gln Ser Cys Met Phe Leu Val Lys Ser Ala Ser Leu Ser 50 55 60 Lys Arg Arg Thr Tyr Ala Gly Leu Ala Phe His Ala Tyr Gly Lys Ala 65 70 75 80 Gly Lys Met Leu Val Glu Thr Ser Met Ile Gly Leu Met Leu Gly Thr 85 90 95 Cys Ile Ala Phe Tyr Val Val Ile Gly Asp Leu Gly Ser Asn Phe Phe 100 105 110 Ala Arg Leu Phe Gly Phe Gln Val Gly Gly Thr Phe Arg Met Phe Leu 115 120 125 Leu Phe Ala Val Ser Leu Cys Ile Val Leu Pro Leu Ser Leu Gln Arg 130 135 140 Asn Met Met Ala Ser Ile Gln Ser Phe Ser Ala Met Ala Leu Leu Phe 145 150 155 160 Tyr Thr Val Phe Met Phe Val Ile Val Leu Ser Ser Leu Lys His Gly 165 170 175 Leu Phe Ser Gly Gln Trp Leu Arg Arg Val Ser Tyr Val Arg Trp Glu 180 185 190 Gly Val Phe Arg Cys Ile Pro Ile Phe Gly Met Ser Phe Ala Cys Gln 195 200 205 Ser Gln Val Leu Pro Thr Tyr Asp Ser Leu Asp Glu Pro Ser Val Lys 210 215 220 Thr Met Ser Ser Ile Phe Ala Ser Ser Leu Asn Val Val Thr Thr Phe 225 230 235 240 Tyr Val Met Val Gly Phe Phe Gly Tyr Val Ser Phe Thr Glu Ala Thr 245 250 255 Ala Gly Asn Val Leu Met His Phe Pro Ser Asn Leu Val Thr Glu Met 260 265 270 Leu Arg Val Gly Phe Met Met Ser Val Ala Val Gly Phe Pro Met Met 275 280 285 Ile Leu Pro Cys Arg Gln Ala Leu Ser Thr Leu Leu Cys Glu Gln Gln 290 295 300 Gln Lys Asp Gly Thr Phe Ala Ala Gly Gly Tyr Met Pro Pro Leu Arg 305 310 315 320 Phe Lys Ala Leu Thr Leu Ser Val Val Phe Gly Thr Met Val Gly Gly 325 330 335 Ile Leu Ile Pro Asn Val Glu Thr Ile Leu Gly Leu Thr Gly Ala Thr 340 345 350 Met Gly Ser Leu Ile Cys Phe Ile Cys Pro Ala Leu Ile Tyr Lys Lys 355 360 365 Ile His Lys Asn Ala Leu Ser Ser Gln Val Val Leu Trp Val Gly Leu 370 375 380 Gly Val Leu Val Val Ser Thr Val Thr Thr Leu Ser Val Ser Glu Glu 385 390 395 400 Val Pro Glu Asp Leu Ala Glu Glu Ala Pro Gly Gly Arg Leu Gly Glu 405 410 415 Ala Glu Gly Leu Met Lys Val Glu Ala Ala Arg Leu Ser Ala Gln Asp 420 425 430 Pro Val Val Ala Val Ala Glu Asp Gly Arg Glu Lys Pro Lys Leu Pro 435 440 445 Lys Glu Arg Glu Glu Leu Glu Gln Ala Gln Ile Lys Gly Pro Val Asp 450 455 460 Val Pro Gly Arg Glu Asp Gly Lys Glu Ala Pro Glu Glu Ala Gln Leu 465 470 475 480 Asp Arg Pro Gly Gln Gly Ile Ala Val Pro Val Gly Glu Ala His Arg 485 490 495 His Glu Pro Pro Val Pro His Asp Lys Val Val Val Asp Glu Gly Gln 500 505 510 Asp Arg Glu Val Pro Glu Glu Asn Lys Pro Pro Ser Arg His Ala Gly 515 520 525 Gly Lys Ala Pro Gly Val Gln Gly Gln Met Ala Pro Pro Leu Pro Asp 530 535 540 Ser Glu Arg Glu Lys Gln Glu Pro Glu Gln Gly Glu Val Gly Lys Arg 545 550 555 560 Pro Gly Gln Ala Gln Ala Leu Glu Glu Ala Gly Asp Leu Pro Glu Asp 565 570 575 Pro Gln Lys Val Pro Glu Ala Asp Gly Gln Pro Ala Val Gln Pro Ala 580 585 590 Lys Glu Asp Leu Gly Pro Gly Asp Arg Gly Leu His Pro Arg Pro Gln 595 600 605 Ala Val Leu Ser Glu Gln Gln Asn Gly Leu Ala Val Gly Gly Gly Glu 610 615 620 Lys Ala Lys Gly Gly Pro Pro Pro Gly Asn Ala Ala Gly Asp Thr Gly 625 630 635 640 Gln Pro Ala Glu Asp Ser Asp His Gly Gly Lys Pro Pro Leu Pro Ala 645 650 655 Glu Lys Pro Ala Pro Gly Pro Gly Leu Pro Pro Glu Pro Arg Glu Gln 660 665 670 Arg Asp Val Glu Arg Ala Gly Gly Asn Gln Ala Ala Ser Gln Leu Glu 675 680 685 Glu Ala Gly Arg Ala Glu Met Leu Asp His Ala Val Leu Leu Gln Val 690 695 700 Ile Lys Glu Gln Gln Val Gln Gln Lys Arg Leu Leu Asp Gln Gln Glu 705 710 715 720 Lys Leu Leu Ala Val Ile Glu Glu Gln His Lys Glu Ile His Gln Gln 725 730 735 Arg Gln Glu Asp Glu Glu Asp Lys Pro Arg Gln Val Glu Val His Gln 740 745 750 Glu Pro Gly Ala Ala Val Pro Arg Gly Gln Glu Ala Pro Glu Gly Lys 755 760 765 Ala Arg Glu Thr Val Glu Asn Leu Pro Pro Leu Pro Leu Asp Pro Val 770 775 780 Leu Arg Ala Pro Gly Gly Arg Pro Ala Pro Ser Gln Asp Leu Asn Gln 785 790 795 800 Arg Ser Leu Glu His Ser Glu Gly Pro Val Gly Arg Asp Pro Ala Gly 805 810 815 Pro Pro Asp Gly Gly Pro Asp Thr Glu Pro Arg Ala Ala Gln Ala Lys 820 825 830 Leu Arg Asp Gly Gln Lys Asp Ala Ala Pro Arg Ala Ala Gly Thr Val 835 840 845 Lys Glu Leu Pro Lys Gly Pro Glu Gln Val Pro Val Pro Asp Pro Ala 850 855 860 Arg Glu Ala Gly Gly Pro Glu Glu Arg Leu Ala Glu Glu Phe Pro Gly 865 870 875 880 Gln Ser Gln Asp Val Thr Gly Gly Ser Gln Asp Arg Lys Lys Pro Gly 885 890 895 Lys Glu Val Ala Ala Thr Gly Thr Ser Ile Leu Lys Glu Ala Asn Trp 900 905 910 Leu Val Ala Gly Pro Gly Ala Glu Thr Gly Asp Pro Arg Met Lys Pro 915 920 925 Lys Gln Val Ser Arg Asp Leu Gly Leu Ala Ala Asp Leu Pro Gly Gly 930 935 940 Ala Glu Gly Ala Ala Ala Gln Pro Gln Ala Val Leu Arg Gln Pro Glu 945 950 955 960 Leu Arg Val Ile Ser Asp Gly Glu Gln Gly Gly Gln Gln Gly His Arg 965 970 975 Leu Asp His Gly Gly His Leu Glu Met Arg Lys Ala Arg Gly Gly Asp 980 985 990 His Val Pro Val Ser His Glu Gln Pro Arg Gly Gly Glu Asp Ala Ala 995 1000 1005 Val Gln Glu Pro Arg Gln Arg Pro Glu Pro Glu Leu Gly Leu Lys Arg 1010 1015 1020 Ala Val Pro Gly Gly Gln Arg Pro Asp Asn Ala Lys Pro Asn Arg Asp 1025 1030 1035 1040 Leu Lys Leu Gln Ala Gly Ser Asp Leu Arg Arg Arg Arg Arg Asp Leu 1045 1050 1055 Gly Pro His Ala Glu Gly Gln Leu Ala Pro Arg Asp Gly Val Ile Ile 1060 1065 1070 Gly Leu Asn Pro Leu Pro Asp Val Gln Val Asn Asp Leu Arg Gly Ala 1075 1080 1085 Leu Asp Ala Gln Leu Arg Gln Ala Ala Gly Gly Ala Leu Gln Val Val 1090 1095 1100 His Ser Arg Gln Leu Arg Gln Ala Pro Gly Pro Pro Glu Glu Ser 1105 1110 1115 <210> 4 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 4 Gly Ser Leu Asp Gln Ser Asn Cys Leu Gly Tyr Ile Phe Ser Ser Ala 1 5 10 15 Pro Ser Arg Phe Leu Ser Tyr Ser Ser Ser Gly Leu Leu Ser Arg Thr 20 25 30 Val His Val Ala Ser Cys Trp Arg Pro Gln Gln Gly Met Thr Glu Gly 35 40 45 Leu His Arg Val Trp Gly Arg Ser Lys Lys Thr Glu Leu Lys Asn Gln 50 55 60 Asp Asn Pro Glu Gln Thr Val Arg Asp Met Leu Ser Ile Tyr Arg Gly 65 70 75 80 Cys Thr Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys 85 90 95 Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly 100 105 110 Tyr Phe <210> 5 <211> 194 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 5 Asp Ser Lys Val Leu Met Arg Ile Val Val Ile Ser Gly Pro Lys Phe 1 5 10 15 Lys Asp Lys Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile 20 25 30 Ser Ala Ser Val Ile Leu Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser 35 40 45 Pro Pro Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Ile Met Thr Cys 50 55 60 Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 65 70 75 80 Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser 85 90 95 Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser 100 105 110 Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 115 120 125 Gln Gln Trp Ser Tyr Tyr Pro Pro Ile Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys 130 135 140 Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro 145 150 155 160 Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe 165 170 175 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp 180 185 190 Gly Ser <210> 6 <211> 184 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 6 Lys Asn Asn Thr Cys Pro Met Ser Ser Pro Gln Thr Leu Asn Thr Leu 1 5 10 15 Thr Pro Thr Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly 20 25 30 Thr Gly Gly Val Leu Ser Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu 35 40 45 Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly 50 55 60 Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Met Lys Trp Val Arg Gln Ser His Gly 65 70 75 80 Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Asp Thr 85 90 95 Leu Tyr Asn Gln Met Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys 100 105 110 Ser Ser Thr Thr Ala Tyr Ile Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp 115 120 125 Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Asn Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 130 135 140 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr 145 150 155 160 Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu 165 170 175 Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe 180 <210> 7 <211> 194 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 7 Gly Val Thr Asp Gln Ser Pro Gln Ala Val Ser Ser Gly Cys Leu Leu 1 5 10 15 Lys Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro 20 25 30 Ala Ser Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro 35 40 45 Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser 50 55 60 Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys 65 70 75 80 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Lys Arg Phe 85 90 95 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 100 105 110 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr 115 120 125 Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 130 135 140 Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro 145 150 155 160 Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe 165 170 175 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp 180 185 190 Gly Ser <210> 8 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 8 Asn Asn Thr Cys Pro Met Ser Ser Pro Gln Thr Leu Asn Thr Leu Thr 1 5 10 15 Pro Thr Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr 20 25 30 Gly Gly Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 35 40 45 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 50 55 60 Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys 65 70 75 80 Ser Leu Glu Trp Ile Gly Asp Ile Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Asp 85 90 95 Ile Asp Pro Asn Asn Gly Asp Asn Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly 100 105 110 Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln 115 120 125 Phe Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg 130 135 140 Ser Asn Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala 145 150 155 160 Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp 165 170 175 Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe 180 185 190 Pro <210> 9 <211> 202 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 9 Ser Ser Gly Ile Asn Ala Glu Tyr Met Gly Thr Asp Gln Ser Pro Gln 1 5 10 15 Ala Val Ser Ser Gly Cys Leu Leu Lys Met Lys Leu Pro Val Arg Leu 20 25 30 Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala Ser Thr Ser Asp Val Leu Met 35 40 45 Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser 50 55 60 Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu 85 90 95 Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 100 105 110 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu 115 120 125 Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro 130 135 140 Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala 145 150 155 160 Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser 165 170 175 Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp 180 185 190 Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser 195 200 <210> 10 <211> 190 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 10 Glu Gly Tyr Gln His Pro Glu His Asn Thr Cys Pro Met Ser Ser Pro 1 5 10 15 Gln Thr Leu Asn Thr Leu Thr Pro Thr Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe 20 25 30 Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Gly Gly Val Leu Ser Glu Val Gln Leu 35 40 45 Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met 50 55 60 Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Leu Thr Asp Tyr Thr Met Lys Trp 65 70 75 80 Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Asp Ile Asp 85 90 95 Pro Asn Asn Gly Asp Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala 100 105 110 Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn 115 120 125 Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Asn 130 135 140 Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr 145 150 155 160 Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr 165 170 175 Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe 180 185 190 <210> 11 <211> 192 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 11 Thr Asp Gln Ser Pro Gln Ala Val Ser Ser Gly Cys Leu Leu Lys Met 1 5 10 15 Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala Ser 20 25 30 Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Leu Pro Val Ser 35 40 45 Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val 50 55 60 His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly 65 70 75 80 Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly 85 90 95 Val Pro Asp Arg Phe Ile Ala Thr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 100 105 110 Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Tyr Cys Phe 115 120 125 Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 130 135 140 Ile Thr Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser 145 150 155 160 Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn 165 170 175 Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser 180 185 190 <210> 12 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 12 Val Gly Ser Cys Pro Glu Phe Pro Asn Leu His Ile Gln Lys Ser Ala 1 5 10 15 Leu Ser Pro Val Thr Met Lys Leu Trp Leu Asn Trp Val Phe Leu Leu 20 25 30 Thr Leu Leu His Gly Ile Gln Cys Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly 35 40 45 Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr 50 55 60 Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Tyr Met Glu Trp Val Arg Gln Pro 65 70 75 80 Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile Ala Ala Ser Arg Asn Lys Ala Asn 85 90 95 Asp Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Val 100 105 110 Ser Arg Asp Thr Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu 115 120 125 Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Ala Leu Thr 130 135 140 Ser Ala Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 145 150 155 160 Ala Thr Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Val Pro Gly Cys Ser 165 170 175 Asp Thr Ser Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 180 185 190 Phe <210> 13 <211> 192 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 13 Ser Cys Gln Glu Pro Lys Lys His Pro Leu Phe Gln Leu Ser Glu Met 1 5 10 15 Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro Gly 20 25 30 Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val 35 40 45 Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val 50 55 60 Thr Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 65 70 75 80 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly 85 90 95 Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 100 105 110 Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 115 120 125 His Ser Arg Glu Leu Pro Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu 130 135 140 Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser 145 150 155 160 Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn 165 170 175 Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser 180 185 190 <210> 14 <211> 195 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 14 Leu Ala Val Gly Ser Cys Pro Glu Phe Pro Asn Leu His Ile Gln Lys 1 5 10 15 Ser Ala Leu Ser Pro Val Thr Met Lys Leu Trp Leu Asn Trp Val Phe 20 25 30 Leu Leu Thr Leu Leu His Gly Ile Gln Cys Glu Val Lys Leu Val Glu 35 40 45 Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys 50 55 60 Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Tyr Met Glu Trp Val Arg 65 70 75 80 Gln Pro Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile Ala Ala Ser Arg Asn Lys 85 90 95 Ala Asn Asp Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe 100 105 110 Ile Val Ser Arg Asp Thr Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn 115 120 125 Ala Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Ala 130 135 140 Leu Asn Ser Ala Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly 165 170 175 Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys 180 185 190 Gly Tyr Phe 195 <210> 15 <211> 201 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 15 Ser Ser Gly Gln Arg Arg Val His Gly Ser Cys Gln Glu Pro Lys Lys 1 5 10 15 His Pro Leu Phe Gln Leu Ser Glu Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu 20 25 30 Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu 35 40 45 Ala Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr 50 55 60 Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Thr Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr 65 70 75 80 Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 85 90 95 Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu 115 120 125 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Pro 130 135 140 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala 145 150 155 160 Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 165 170 175 Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 180 185 190 Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser 195 200 <210> 16 <211> 186 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 16 Ile Ala Leu Ser Ser Leu Gln Thr Leu Asn Leu Lys Val Leu Thr Met 1 5 10 15 Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly Val 20 25 30 Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro 35 40 45 Gly Ala Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys 50 55 60 Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu 65 70 75 80 Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Ile Thr Lys Tyr Asp Pro 85 90 95 Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr 100 105 110 Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr 115 120 125 Tyr Cys Ser Asp Tyr Tyr Arg Tyr Asp Asp Ser Met Asp Phe Trp Gly 130 135 140 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser 145 150 155 160 Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val 165 170 175 Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe 180 185 <210> 17 <211> 185 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 17 Leu Ser Leu Ser Leu Gln Ser Gly Leu Ser Met Asp Met Arg Ala Pro 1 5 10 15 Ala Gln Ile Phe Gly Phe Leu Leu Leu Leu Phe Pro Gly Thr Arg Cys 20 25 30 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 35 40 45 Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Asn 50 55 60 Leu Asn Trp Leu Gln Gln Glu Pro Asp Gly Thr Ile Arg Arg Leu Ile 65 70 75 80 Tyr Asp Thr Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly 85 90 95 Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser 100 105 110 Glu Asp Phe Val Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Thr Ser Pro Tyr 115 120 125 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala 130 135 140 Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 165 170 175 Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser 180 185 <210> 18 <211> 186 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 18 Ile Ala Leu Ser Ser Leu Gln Thr Leu Asn Leu Lys Val Leu Thr Met 1 5 10 15 Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly Val 20 25 30 Asn Ser Glu Val His Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro 35 40 45 Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys 50 55 60 Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ser Pro Glu Gln Gly Leu Glu 65 70 75 80 Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro 85 90 95 Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr 100 105 110 Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr 115 120 125 Tyr Cys Ser Asn Tyr Tyr Arg Tyr Asp Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly 130 135 140 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser 145 150 155 160 Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val 165 170 175 Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe 180 185 <210> 19 <211> 184 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 19 Ala Leu Ser Leu Gln Ser Gly Leu Ser Met Asp Met Arg Ala Pro Ala 1 5 10 15 Gln Thr Phe Gly Phe Leu Leu Leu Leu Phe Pro Gly Thr Arg Cys Asp 20 25 30 Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu 35 40 45 Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Ser Leu 50 55 60 Asn Trp Leu Gln Gln Glu Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr 65 70 75 80 Asp Thr Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly Ser 85 90 95 Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu 100 105 110 Asp Phe Val Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Tyr Thr 115 120 125 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro 130 135 140 Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn 165 170 175 Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser 180 <210> 20 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 20 Asp Arg Arg Thr Thr Leu Asp Ser Gln Val Phe Leu Phe Ser Asp Lys 1 5 10 15 His Arg Asn Arg Thr Phe Thr Met Tyr Leu Gly Leu Asn Cys Val Phe 20 25 30 Ile Val Phe Leu Leu Lys Gly Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu 35 40 45 Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys 50 55 60 Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg 65 70 75 80 Gln Ser Pro Asp Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Leu Lys 85 90 95 Ser Asn Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe 100 105 110 Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn 115 120 125 Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr Tyr Cys Glu Leu Gly Pro 130 135 140 Ala Trp Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ala 145 150 155 160 Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala 165 170 175 Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 180 185 190 Phe <210> 21 <211> 183 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 21 Asn Gln Phe Leu Pro Gly His Ser Leu Asp Met Arg Phe Gln Val Gln 1 5 10 15 Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Gln Cys Asp Val 20 25 30 Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly Glu Thr 35 40 45 Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala 50 55 60 Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile Tyr Ser 65 70 75 80 Gly Ser Thr Leu Lys Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 85 90 95 Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Thr Leu Glu Pro Glu Asp 100 105 110 Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Leu Thr Phe 115 120 125 Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr 130 135 140 Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala 145 150 155 160 Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val 165 170 175 Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser 180 <210> 22 <211> 191 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (heavy chain) of anti-S38AA antibody <400> 22 Val Thr Tyr Gln Gln Gly Ser Asp Gln Leu Val Leu Arg His His Ala 1 5 10 15 Gln Val Leu Asp Ile Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met 20 25 30 Ala Ala Ala Gln Ser Ile Gln Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly 35 40 45 Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala 50 55 60 Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala 65 70 75 80 Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly 85 90 95 Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu 100 105 110 Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn 115 120 125 Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Gly Pro Leu Tyr Val 130 135 140 Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys 145 150 155 160 Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr 165 170 175 Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe 180 185 190 <210> 23 <211> 187 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> variable region (light chain) of anti-S38AA antibody <400> 23 Gln Leu Pro Gly Ala Glu Ala Ser Ser Leu Pro Ala Leu Arg Asp Gly 1 5 10 15 Asp Arg His Thr Pro Val Met Gly Thr Ala Ala Leu Gly Ser Arg Phe 20 25 30 His Trp His Cys Ala Asp Thr Val Ser Cys Phe Leu Ser Cys Ile Ser 35 40 45 Gly Ala Glu Gly His His Leu Ile Gln Gly Gln Gln Lys Cys Gln Tyr 50 55 60 Ile Trp Leu Leu Tyr Ala Leu Glu Pro Thr Glu Thr Arg Thr Ala Thr 65 70 75 80 Gln Thr Pro His Leu Ser Cys Ile Gln Pro Arg Ile Trp Gly Pro Cys 85 90 95 Gln Val Gln Trp Gln Trp Val Trp Asp Arg Leu His Pro Gln His Pro 100 105 110 Ser Cys Gly Gly Gly Gly Cys Cys Asn Leu Leu Leu Ser Ala His Gly 115 120 125 Ala Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp 130 135 140 Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr 145 150 155 160 Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys 165 170 175 Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser 180 185

Claims (18)

  1. 이하 중 어느 것인 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드:
    (1) 서열 번호: 1로 나타내어지는 아미노산 서열; 또는
    (2) 서열 번호: 1로 나타내어지는 아미노산 서열에 있어서, 1∼수 개의 아미노산이 치환, 결실, 부가 또는 삽입된 아미노산 서열.
  2. 제 1 항에 기재한 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 항체.
  3. 제 1 항에 기재한 폴리펩티드를 코드하는 핵산.
  4. 제 2 항에 기재한 항체를 포함하는 키트.
  5. 제 4 항에 있어서,
    제 1 항에 기재한 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 키트.
  6. 피검 시료와 제 2 항에 기재한 항체를 접촉시키는 공정을 포함하는, 제 1 항에 기재한 폴리펩티드를 검출하는 방법.
  7. 제 4 항 또는 제 5 항에 있어서,
    알츠하이머병을 판정하기 위해 이용되는, 키트.
  8. 제 1 항에 기재한 폴리펩티드의 양을 측정 가능한 단일, 또는 복수 종류의 항 S38AA 항체를 함유하는, 알츠하이머병의 판정약.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 항 S38AA 항체가 제 2 항에 기재한 항체인, 판정약.
  10. 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 제 1 항에 기재한 폴리펩티드를 검출하는 것을 특징으로 하는, 상기 동물이 현재 알츠하이머병에 이환(罹患)되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성을 판정하는 방법.
  11. 제 10 항에 있어서,
    이하의 (i)∼(iii)의 공정을 포함하는 방법:
    (i) 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 제 1 항에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
    (ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 건상(健常) 동물로부터 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
    (iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물이 현재 알츠하이머병에 이환되어 있을 가능성 또는 장래 알츠하이머병에 이환될 가능성이 있다고 판정하는 공정.
  12. 이하의 (i)∼(iii)의 공정을 포함하는, 알츠하이머병의 진행도의 판정을 보조하는 방법:
    (i) 알츠하이머병에 이환 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 제 1 항에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
    (ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 상기 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정, 및
    (iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정.
  13. 제 10 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    피검 동물이 인간인, 방법.
  14. 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    시료가, 혈액, 뇌척수액, 타액, 누액 또는 소변인, 방법.
  15. 제 10 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    다른 1 이상의 알츠하이머병 진단 마커를 검출하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  16. 이하의 (i)∼(iv)의 공정으로, 알츠하이머병의 진행도가 판정된 환자에게 이용되는, 알츠하이머병 치료약:
    (i) 현재 알츠하이머병에 이환 또는 이환되어 있을 가능성이 있는 피검 동물로부터 채취한 시료 중의 제 1 항에 기재한 폴리펩티드를 정량하는 공정,
    (ii) (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양을, 상기 피검 동물로부터 과거에 채취한 시료 중의 상기 폴리펩티드의 양(이하, 대조치라고 한다)과 비교하는 공정,
    (iii) (ii)의 결과에 의거하여, (i)에서 정량한 상기 폴리펩티드의 양이, 대조치보다도 큰 경우에, 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 진행되고 있다고 판정하고, 대조치보다도 작은 경우에 상기 피검 동물의 알츠하이머병이 개선되고 있다고 판정하는 공정, 및
    (iv) (iii)의 판정 결과에 의거하여, 알츠하이머병 치료약을 투여하는 것을 결정하는 공정.
  17. 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 제 1 항에 기재한 폴리펩티드의 양을 감소시키는 약제, 또는 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내에 있어서의 상기 폴리펩티드의 산생(産生)을 저해하는 약제를, 유효 성분으로서 함유하는 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약.
  18. 피검 물질이, 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내의 제 1 항에 기재한 폴리펩티드의 양을 감소시키는 것, 또는 알츠하이머병 환자 또는 알츠하이머병에의 이환 가능성이 있는 자의 생체내에 있어서의 상기 폴리펩티드의 산생을 저해하는 것을 지표로 하는, 알츠하이머병의 치료약 또는 예방약의 후보 물질을 선별하는 방법.
KR1020217006577A 2018-08-07 2019-08-06 알츠하이머병의 판정약 및 판정 방법 KR20210041035A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2018148924 2018-08-07
JPJP-P-2018-148924 2018-08-07
PCT/JP2019/030904 WO2020032027A1 (ja) 2018-08-07 2019-08-06 アルツハイマー病の判定薬および判定方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210041035A true KR20210041035A (ko) 2021-04-14

Family

ID=69413505

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217006577A KR20210041035A (ko) 2018-08-07 2019-08-06 알츠하이머병의 판정약 및 판정 방법

Country Status (10)

Country Link
US (1) US12000844B2 (ko)
EP (1) EP3835424A4 (ko)
JP (2) JP7470041B2 (ko)
KR (1) KR20210041035A (ko)
CN (1) CN112567039A (ko)
AU (1) AU2019318888A1 (ko)
CA (1) CA3108440A1 (ko)
MX (1) MX2021001507A (ko)
TW (1) TW202035438A (ko)
WO (1) WO2020032027A1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20230098944A1 (en) * 2020-02-13 2023-03-30 Cognition Therapeutics, Inc. Method of decreasing amyloid beta monomer levels in patients with cognitive decline
CN117957003A (zh) * 2021-09-09 2024-04-30 上海日馨医药科技股份有限公司 治疗神经退行性疾病的方法
CN117447590B (zh) * 2023-11-23 2024-04-26 中国检验检疫科学研究院 一种抗赤羽病病毒单克隆抗体、分泌抗赤羽病病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012091138A1 (ja) 2010-12-28 2012-07-05 大日本住友製薬株式会社 アルツハイマー病の診断薬及び診断方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2555820C (en) 2004-02-19 2016-01-19 Genentech, Inc. Cdr-repaired antibodies
KR101647519B1 (ko) * 2008-07-08 2016-08-10 스미토모 베이클리트 컴퍼니 리미티드 포지티브형 감광성 수지 조성물, 경화막, 보호막, 절연막 및 그것들을 이용한 반도체 장치, 표시체 장치
WO2010048497A1 (en) * 2008-10-24 2010-04-29 Genizon Biosciences Inc. Genetic profile of the markers associated with alzheimer's disease
CN109924024B (zh) 2013-03-05 2021-11-23 现特技术有限公司 光子调制管理系统
CN115066610A (zh) 2020-02-05 2022-09-16 住友制药株式会社 用于tau病变和痴呆相关疾病的确定试剂和确定方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012091138A1 (ja) 2010-12-28 2012-07-05 大日本住友製薬株式会社 アルツハイマー病の診断薬及び診断方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Exp Gerontol. (2000) 35: 851-64

Also Published As

Publication number Publication date
AU2019318888A1 (en) 2021-03-18
CA3108440A1 (en) 2020-02-13
JP2024054181A (ja) 2024-04-16
US12000844B2 (en) 2024-06-04
EP3835424A4 (en) 2022-05-04
MX2021001507A (es) 2021-04-28
EP3835424A1 (en) 2021-06-16
CN112567039A (zh) 2021-03-26
JPWO2020032027A1 (ja) 2021-09-09
TW202035438A (zh) 2020-10-01
WO2020032027A1 (ja) 2020-02-13
US20210165002A1 (en) 2021-06-03
JP7470041B2 (ja) 2024-04-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8354236B2 (en) Detection of neurodegenerative disease
EP2163896B1 (en) Method for detection or treatment of graft versus host disease
JP2013092538A (ja) 脳損傷関連障害の診断法
DK2389587T3 (en) Diagnostic and prognostic methods related Alzheimer&#39;s Disease
JP2024054181A (ja) アルツハイマー病の判定薬および判定方法
US20190369124A1 (en) Diagnostic drug and diagnostic method for alzheimer&#39;s disease
Thouvenot et al. Enhanced detection of CNS cell secretome in plasma protein-depleted cerebrospinal fluid
WO2021157634A1 (ja) タウオパチーおよび認知症関連疾患の判定薬および判定方法
EP2817632B1 (en) New dual biomarker of neurodegeneration and of neuroregeneration
JP2023132247A (ja) シヌクレイノパシー検出用バイオマーカー及びその利用
KR101535717B1 (ko) 보체인자 ｉ 단백질에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 항체를 포함하는 췌장암 진단용 조성물
WO2019009231A1 (ja) 関節リウマチ診断薬

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination