CN112567039A - 阿尔茨海默氏病的诊断药物和诊断方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了由以下氨基酸序列中的任一者组成且可用于确定阿尔茨海默氏病的多肽：(1)SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列；和(2)由SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列中的一个至几个氨基酸的取代、缺失、添加或插入产生的氨基酸序列。

Description

阿尔茨海默氏病的诊断药物和诊断方法

[技术领域]

本发明涉及用于确定阿尔茨海默氏病的试剂，用于确定阿尔茨海默氏病的方法，用于治疗阿尔茨海默氏病的方法，用于筛选阿尔茨海默氏病的治疗药物的候选物质的方法，新型抗S38AA抗体等。

[背景技术]

阿尔茨海默氏病是一种进行性痴呆症，其始于短期记忆的减退和轻度的学习失能，发展更高的脑功能障碍，尤其是视觉空间失认，观念性失用，结构性失用等，并且最终达到运动障碍和所谓的人格破坏，迄今为止对其尚未找到根治治疗方法。预计在2040年，世界上有240万具有阿尔茨海默氏病的患者，并且对其进行根治治疗方法或其早期诊断的重要性日益增加。其进展不同于在日本经常发现的血管病性痴呆症，并且被认为持续数年至十年或更长时间。在具有由异常基因突变引起的家族性阿尔茨海默氏病(其为阿尔茨海默氏病之一)的患者的情况下，许多患者的状况在几年内迅速恶化，并且该疾病的特征在于早期发病，因为发病时的年龄在其30-40岁。除了基因突变以外，年龄、家族史、基因型、高血压、糖尿病、吸烟等已知为阿尔茨海默氏病的风险因素。

作为阿尔茨海默氏病中特征性的病理变化，广泛知道发生含有淀粉样蛋白β为主要组成组分的淀粉样蛋白斑的细胞外积聚和神经细胞中高度磷酸化的tau蛋白的积聚。至于大脑中的时空病理变化，由于在具有早期发作阿尔茨海默氏病的患者中已经观察到海马(尤其是称为CA1的区域)中的锥体细胞中的磷酸化tau的积累，因此该区域中的锥体细胞被认为是在早期在空间和时间上暴露于阿尔茨海默氏病的强烈影响，即显示脆弱性(非专利文献2)。另一方面，由于如上所述运动障碍几乎在阿尔茨海默氏病的最后阶段出现，所以小脑中的浦肯野细胞被认为对阿尔茨海默氏病最有抗性。

认为阿尔茨海默氏病的发病率在75岁后迅速增加，并且早期检测和早期开始治疗对于通过对症药物疗法抑制病理进展是重要的。由于目前无法根治治愈阿尔茨海默氏病，因此积极寻找用于早期检测阿尔茨海默氏病的诊断标志物，并考虑血液或脑脊液中的淀粉样蛋白β(Aβ40、Aβ42)和磷酸化tau蛋白的测量是最有希望的。然而，甚至当单独或组合使用这些标志物(例如，Aβ40与Aβ42的比率)时，在将来清楚地发现阿尔茨海默氏病的获得(即潜在的具有阿尔茨海默氏病的患者)也仍然是困难的。

另一方面，S38AA，尤其是其胞外结构域，已经被报道为阿尔茨海默氏病的诊断标志物(专利文献1)。

然而，由于早期检测和早期开始治疗对于阿尔茨海默氏病是重要的，因此已经需要一种能够以更高灵敏度确定阿尔茨海默氏病的发作和处于阿尔茨海默氏病的风险中的人的方法。

[文件列表]

[专利文件]

专利文件1：WO 2012/091138

[非专利文件]

非专利文件1：Exp Gerontol.(2000)35:851-64。

[发明概述]

[技术问题]

本发明目的在于提供用于确定阿尔茨海默氏病的试剂，用于确定阿尔茨海默氏病的方法，用于治疗阿尔茨海默氏病的方法，用于筛选阿尔茨海默氏病的治疗药物的候选物质的方法等。

[问题的解决方案]

已知S38AA片段在阿尔茨海默氏病患者(下文中有时称为“AD患者”)的脑脊液和血浆中增加。本发明人已经发现具有与阿尔茨海默氏病的特别高度相关性的两种S38AA片段(S38AA短片段(下文中有时简称为“短片段”)和S38AA长片段(下文中有时简称为“长片段”)。本发明人已经进一步进行了深入研究，并且发现S38AA短片段作为用于高度准确地确定阿尔茨海默氏病的发作和处于阿尔茨海默氏病的风险中的人以及该疾病的进展程度的指标具有极高的可靠性，其导致本发明的完成。

也就是说，本发明涉及以下内容。

[1]由以下氨基酸序列中的任一者组成的多肽：

(1) SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列；和

(2)由SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列中的一个至几个氨基酸的取代、缺失、添加或插入产生的氨基酸序列。

[2]抗体，其特异性识别[1]的多肽。

[3]核酸，其编码[1]的多肽。

[4]试剂盒，其包含[2]的抗体。

[5] [4]的试剂盒，其进一步包含[1]的多肽。

[6]用于检测[1]的多肽的方法，其包括使测试样品与[2]的抗体接触的步骤。

[7] [4]或[5]的试剂盒，其用于确定阿尔茨海默氏病。

[8]用于确定阿尔茨海默氏病的试剂，其包含一种或多种能够测量[1]的多肽的量的抗S38AA抗体。

[9] [8]的试剂，其中前述抗S38AA抗体是[2]的抗体。

[10] [2]的抗体用于制备用于确定阿尔茨海默氏病的试剂的用途。

[11]用于确定测试动物目前患有阿尔茨海默氏病或所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的可能性的方法，其包括检测从所述动物收集的样品中的[1]的多肽。

[12] [11]的方法，其包括以下步骤(i)至(iii)：

(i)定量从测试动物收集的样品中的[1]的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与从健康动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，和

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于所述对照值时，确定前述测试动物目前可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤。

[13]用于辅助确定阿尔茨海默氏病的进展的方法，其包括以下步骤(i)至(iii)：

(i)定量从患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的[1]的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，和

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于对照值时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤。

[14] [11]至[13]中任一项的方法，其中所述测试动物是人。

[15] [11]至[14]中任一项的方法，其中所述样品是血液、脑脊液、唾液、泪液或尿液。

[16] [11]至[15]中任一项的方法，其进一步包括检测其他一种或多种阿尔茨海默氏病诊断标志物。

[17]用于治疗或预防阿尔茨海默氏病的方法，其包括以下步骤(i)-(iv)：

(i)定量从测试动物收集的样品中的[1]的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与从健康动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于所述对照值时，确定前述测试动物目前患有或可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤，和

(iv)向基于(iii)的结果确定其目前患有或可能患有阿尔茨海默氏病或者在将来可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物施用阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的步骤。

[18]用于治疗或预防阿尔茨海默氏病的药物治疗的方法，其包括以下步骤(i)-(v)：

(i)定量从目前患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的[1]的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中为对照值)的步骤，

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于对照值时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤，

(iv)基于(iii)的结果选择阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的步骤，和

(v)向测试动物施用(iv)中选择的阿尔茨海默氏病的治疗药物的步骤。

[19] [17]或[18]的方法，其中所述阿尔茨海默氏病的治疗药物选自胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、淀粉样蛋白β去除剂和累积抑制剂以及tau蛋白去除剂和累积抑制剂。

[20] [19]的方法，其中所述胆碱酯酶抑制剂是多奈哌齐、加兰他敏、利凡斯的明、石杉碱甲或他克林，并且所述NMDA受体拮抗剂是美金刚。

[21]用于患者的阿尔茨海默氏病的治疗药物，所述患者的阿尔茨海默氏病的进展通过以下步骤(i)-(iv)确定：

(i)定量从目前患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的[1]的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中为对照值)的步骤，

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于对照值时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤，和

(iv)基于(iii)的结果选择阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的步骤。

[22]阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物，其包含以下作为活性成分：减少阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的[1]的多肽的量的药物，或抑制阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的所述多肽的产生的药物。

[23]用于筛选阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质的方法，其包括使用以下作为指标：阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的[1]的多肽的量的减少，或阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的所述多肽的产生的抑制。

[24]识别SEQ ID NO:1或2的多肽的抗体，其包含：

重链可变区，其具有与以下具有至少95%同源性的氨基酸序列：

SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22，和

轻链可变区，其具有与以下具有至少95%同源性的氨基酸序列：

SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:23。

[25]识别SEQ ID NO:1或2的多肽的抗体，其包含：

(1) SEQ ID NO:4的重链可变区，和SEQ ID NO:5的轻链可变区，

(2) SEQ ID NO:6的重链可变区，和SEQ ID NO:7的轻链可变区，

(3) SEQ ID NO:8的重链可变区，和SEQ ID NO:9的轻链可变区，

(4) SEQ ID NO:10的重链可变区，和SEQ ID NO:11的轻链可变区，

(5) SEQ ID NO:12的重链可变区，和SEQ ID NO:13的轻链可变区，

(6) SEQ ID NO:14的重链可变区，和SEQ ID NO:15的轻链可变区，

(7) SEQ ID NO:16的重链可变区，和SEQ ID NO:17的轻链可变区，

(8) SEQ ID NO:18的重链可变区，和SEQ ID NO:19的轻链可变区，

(9) SEQ ID NO:20的重链可变区，和SEQ ID NO:21的轻链可变区，或

(10) SEQ ID NO:22的重链可变区，和SEQ ID NO:23的轻链可变区。

[26]试剂盒，其包含[24]或[25]的抗体。

[27] [26]的试剂盒，其进一步包含SEQ ID NO:1的多肽。

[28]用于检测SEQ ID NO:1的多肽的方法，其包括使测试样品与[24]或[25]的抗体接触的步骤。

[29] [26]或[27]的试剂盒，其用于确定阿尔茨海默氏病。

[30]用于确定阿尔茨海默氏病的试剂，其包含能够测量SEQ ID NO:1的多肽的量的[24]或[25]的抗体。

[31]用于确定测试动物目前患有阿尔茨海默氏病或所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的可能性的方法，其包括通过使用[24]或[25]的抗体检测从所述动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽。

[32] [31]的方法，其包括以下步骤(i)至(iii)：

(i)通过使用[24]或[25]的抗体定量从测试动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与从健康动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，和

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于所述对照值时，确定前述测试动物目前可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤。

[33]用于确定阿尔茨海默氏病的进展的方法，其包括以下步骤(i)至(iii)：

(i)通过使用[24]或[25]的抗体定量从患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的权利要求1的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，和

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于对照值时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤。

[34] [31]至[33]中任一项的方法，其中所述测试动物是人。

[35] [31]至[34]中任一项的方法，其中所述样品是血液、脑脊液、唾液、泪液或尿液。

[36] [31]至[35]中任一项的方法，其进一步包括检测其他一种或多种阿尔茨海默氏病诊断标志物。

[37]用于治疗阿尔茨海默氏病的方法，其包括向具有确定的阿尔茨海默氏病的进展的患者施用阿尔茨海默氏病的治疗药物，所述方法包括以下步骤(i)-(iv)：

(i)通过使用[24]和[25]中任一项的抗体定量从患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，和

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于对照值时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤，和

(iv)基于(iii)的结果，将阿尔茨海默氏病的治疗药物施用于有此需要的测试动物的步骤。

[38]用于治疗或预防阿尔茨海默氏病的方法，其包含以下作为活性成分：减少使用[24]和[25]中任一项的抗体诊断的阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的SEQ ID NO:1的多肽的量的药物，或抑制前述阿尔茨海默氏病患者或前述可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的所述多肽的产生的药物。

[39]用于通过使用[24]和[25]中任一项的抗体筛选阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质的方法，其包括使用以下作为指标：阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的SEQ ID NO:1的多肽的量的减少，或阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的所述多肽的产生的抑制。

[项目1] 由以下氨基酸序列中的任一者组成的多肽：

(1) SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列；和

(2)由SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列中的一个至几个氨基酸的取代、缺失、添加或插入产生的氨基酸序列。

[项目2]项目1的多肽，其由SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列组成。

[项目3]核酸，其编码项目1或2的多肽。

[项目4]抗体，其识别项目1或2的多肽。

[项目5]项目4的抗体，其进一步识别SEQ ID NO:2的多肽。

[项目6]项目4或5的抗体，其包含：

重链可变区，其具有与以下具有至少95%同源性的氨基酸序列：

SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22，和

轻链可变区，其具有与以下具有至少95%同源性的氨基酸序列：

SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:23。

[项目7]项目4至6中任一项的抗体，其包含：

重链可变区，其具有与以下具有至少99%同源性的氨基酸序列：

SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22，和

轻链可变区，其具有与以下具有至少99%同源性的氨基酸序列：

SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:23。

[项目8]项目4至6中任一项的抗体，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22，且

所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:23。

[项目9]项目4-8中任一项的抗体，其中所述抗体为

(1)包含SEQ ID NO:4的重链可变区和SEQ ID NO:5的轻链可变区的抗体，

(2)包含SEQ ID NO:6的重链可变区和SEQ ID NO:7的轻链可变区的抗体，

(3)包含SEQ ID NO:8的重链可变区和SEQ ID NO:9的轻链可变区的抗体，

(4)包含SEQ ID NO:10的重链可变区和SEQ ID NO:11的轻链可变区的抗体，

(5)包含SEQ ID NO:12的重链可变区和SEQ ID NO:13的轻链可变区的抗体，

(6)包含SEQ ID NO:14的重链可变区和SEQ ID NO:15的轻链可变区的抗体，

(7)包含SEQ ID NO:16的重链可变区和SEQ ID NO:17的轻链可变区的抗体，

(8)包含SEQ ID NO:18的重链可变区和SEQ ID NO:19的轻链可变区的抗体，

(9)包含SEQ ID NO:20的重链可变区和SEQ ID NO:21的轻链可变区的抗体，或

(10)包含SEQ ID NO:22的重链可变区和SEQ ID NO:23的轻链可变区的抗体。

[项目10] 用于检测项目1或2的多肽的方法，其包括使测试样品与项目4-9中任一项的抗体接触的步骤。

[项目11] 试剂盒，其包含项目4-9中任一项的抗体。

[项目12] 项目11的试剂盒，其进一步包含项目1或2的多肽。

[项目13] 项目11或12的试剂盒，其用于确定阿尔茨海默氏病。

[项目14] 用于确定阿尔茨海默氏病的试剂，其包含一种或多种能够测量项目1或2的多肽的量的抗S38AA抗体。

[项目15] 项目14的试剂，其中前述抗S38AA抗体是项目4-9中任一项的抗体。

[项目16] 项目4-9中任一项的抗体用于制备用于确定阿尔茨海默氏病的试剂的用途。

[项目17] 用于确定测试动物目前患有阿尔茨海默氏病或所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的可能性的方法，其包括检测从所述动物收集的样品中的项目1或2的多肽。

[项目18]项目17的方法，其中使用项目4-9中任一项的抗体检测前述项目1或2的多肽。

[项目19]项目17或18的方法，其包括以下步骤(i)至(iii)：

(i)定量从测试动物收集的样品中的[1]的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与从健康动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，和

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于所述对照值时，确定前述测试动物目前可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤。

[项目20]项目19的方法，其中(i)中定量的前述多肽的前述量不少于对照值的1.1倍。

[项目21]项目17或18的方法，其包括以下步骤(i)至(iii)：

(i)定量从测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽的步骤，和

(ii)当(i)中定量的前述多肽的量高于所述截止值时，确定前述测试动物目前可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤。

[项目22]项目21的方法，其中前述截止值为45-75单位。

[项目23]项目21的方法，其中前述截止值为45 - 75 ng/mL。

[项目24]项目17-23中任一项的方法，其中前述测试动物是人。

[项目25]项目17-24中任一项的方法，其中前述样品是血液、脑脊液、唾液、泪液或尿液。

[项目26]项目17-25中任一项的方法，其进一步包括检测其他一种或多种阿尔茨海默氏病诊断标志物。

[项目27]用于确定阿尔茨海默氏病的进展的方法，其包括检测从测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽。

[项目28]项目27的方法，其中使用项目4-9中任一项的抗体检测前述项目1或2的多肽。

[项目29]项目27或28的方法，其包括以下步骤(i)至(iii)：

(i)定量从测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与从健康动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，和

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于所述对照值时，确定前述测试动物目前可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤。

[项目30]项目29的方法，其中(i)中定量的前述多肽的前述量不少于对照值的1.1倍。

[项目31]项目27或28的方法，其包括以下步骤(i)至(ii)：

(i)定量从测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽的步骤，和

(ii)当(i)中定量的前述多肽的量高于所述截止值时，确定前述测试动物目前可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤。

[项目32]项目31的方法，其中前述截止值为45-75单位。

[项目33]项目31的方法，其中前述截止值为45 - 75 ng/mL。

[项目34]项目27-34中任一项的方法，其中前述测试动物是人。

[项目35]项目27-34中任一项的方法，其中前述样品是血液、脑脊液、唾液、泪液或尿液。

[项目36]项目27-35中任一项的方法，其进一步包括检测其他一种或多种阿尔茨海默氏病诊断标志物。

[项目37]用于治疗或预防阿尔茨海默氏病的方法，其包括：检测从测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽，和向所述测试动物施用阿尔茨海默氏病的治疗药物。

[项目38]项目37的方法，其中使用项目4-9中任一项的抗体检测前述项目1或2的多肽。

[项目39]项目37或38的方法，其包括以下步骤(i)-(iv)：

(i)定量从测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与从健康动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于所述对照值时，确定前述测试动物目前患有或可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤，和

(iv)向基于(iii)的结果确定其目前患有或可能患有阿尔茨海默氏病或者在将来可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物施用阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的步骤。

[项目40]项目39的方法，其中(i)中定量的前述多肽的前述量不少于对照值的1.1倍。

[项目41]项目37或38的方法，其包括以下步骤(i)至(ii)：

(i)定量从测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽的步骤，和

(ii)当(i)中定量的前述多肽的量高于所述截止值时，确定前述测试动物目前可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤。

[项目42]项目41的方法，其中前述截止值为45-75单位。

[项目43]项目41的方法，其中前述截止值为45 - 75 ng/mL。

[项目44]项目37-43中任一项的方法，其中前述测试动物是人。

[项目45]项目37-44中任一项的方法，其中前述样品是血液、脑脊液、唾液、泪液或尿液。

[项目46]项目37-45中任一项的方法，其进一步包括检测其他一种或多种阿尔茨海默氏病诊断标志物。

[项目47]项目37-46中任一项的方法，其中所述阿尔茨海默氏病的治疗药物是选自胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂以及tau蛋白去除剂和产生抑制剂的至少一种。

[项目48]项目47的方法，其中前述胆碱酯酶抑制剂是选自多奈哌齐、加兰他敏、利凡斯的明、石杉碱甲和他克林的至少一种。

[项目49]项目47的方法，其中前述NMDA受体拮抗剂是美金刚。

[项目50]项目47的方法，其中前述淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂是选自淀粉样蛋白β疫苗、淀粉样蛋白β去除抗体、淀粉样蛋白β产生酶抑制剂、淀粉样蛋白β凝固抑制剂和淀粉样蛋白β分解促进剂的至少一种。

[项目51]项目47的方法，其中前述淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂是选自以下的至少一种：CNP-520、E-2609、aducanumab、索拉珠单抗、gantenerumab、crenezumab、amilomotide、ASD-005、HSH-971、ELND-005、ALZT-OP1、nilvadipine、ACI-24、UB-311、AFFITOPE AD-02、LY-3002813、BAN-2401、Neurostem-AD、CT-1812、ID-1201、NIC5-15、BI-425809、Posiphen、PQ-912、苔藓抑素-1、Apabetalone、PBT-2、RIV-1061-IR、MEDI-1814、PF-05236812、SAR-228810、Lu-AF20513、PRI-002、IRX-4204、GC-021109、AAD-2004、CTS-21166、LY-3323795、苯磷硫胺、bisnorcymserine、MDR-1339、KHK-6640和NPT-088。

[项目52]项目47的方法，其中前述tau蛋白去除剂和产生抑制剂是选自tau蛋白疫苗、tau蛋白去除抗体、tau蛋白修饰抑制剂、tau蛋白凝固抑制剂和tau蛋白水解促进剂的至少一种。

[项目53]项目47的方法，其中前述tau蛋白去除剂和产生抑制剂是选自TRx-237、TPI-287、ABBV-8E12、RG-6100、AADvac1、RO7105705、PTI-80、JNJ-63733657、UCB-0107、BIIB-076、MC-1、ACI-35和AZP-2006的至少一种。

[项目54]用于治疗或预防阿尔茨海默氏病的药物治疗的方法，其包括：定量从测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽，选择阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物，和向所述测试动物施用阿尔茨海默氏病的治疗药物。

[项目55]项目54的方法，其中使用项目4-9中任一项的抗体定量前述项目1或2的多肽。

[项目56]项目54或55的方法，其包括以下步骤(i)-(v)：

(i)定量从目前患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的[1]的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中为对照值)的步骤，

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于对照值时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤，

(iv)基于(iii)的结果选择阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的步骤，和

(v)向所述测试动物施用(iv)中选择的阿尔茨海默氏病的治疗药物的步骤。

[项目57]项目56的方法，其中当(i)中定量的前述多肽的前述量不小于对照值的1.1倍时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展。

[项目58]项目56的方法，其中当(i)中定量的前述多肽的前述量不大于对照值的0.9倍时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在改善。

[项目59]项目54-58中任一项的方法，其中前述测试动物是人。

[项目60]项目54-59中任一项的方法，其中前述样品是血液、脑脊液、唾液、泪液或尿液。

[项目61] [54]至[60]中任一项的方法，其进一步包括检测一种或多种其他阿尔茨海默氏病的诊断标志物。

[项目62]项目54-61中任一项的方法，其中所述阿尔茨海默氏病的治疗药物选自胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂以及tau蛋白去除剂和产生抑制剂。

[项目63]项目62的方法，其中前述胆碱酯酶抑制剂是选自多奈哌齐、加兰他敏、利凡斯的明、石杉碱甲和他克林的至少一种。

[项目64]项目62的方法，其中前述NMDA受体拮抗剂是美金刚。

[项目65]项目62的方法，其中前述淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂是选自淀粉样蛋白β疫苗、淀粉样蛋白β去除抗体、淀粉样蛋白β产生酶抑制剂、淀粉样蛋白β凝固抑制剂和淀粉样蛋白β分解促进剂的至少一种。

[项目66]项目62的方法，其中前述淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂是选自以下的至少一种：CNP-520、E-2609、aducanumab、索拉珠单抗、gantenerumab、crenezumab、amilomotide、ASD-005、HSH-971、ELND-005、ALZT-OP1、nilvadipine、ACI-24、UB-311、AFFITOPE AD-02、LY-3002813、BAN-2401、Neurostem-AD、CT-1812、ID-1201、NIC5-15、BI-425809、Posiphen、PQ-912、苔藓抑素-1、Apabetalone、PBT-2、RIV-1061-IR、MEDI-1814、PF-05236812、SAR-228810、Lu-AF20513、PRI-002、IRX-4204、GC-021109、AAD-2004、CTS-21166、LY-3323795、苯磷硫胺、bisnorcymserine、MDR-1339、KHK-6640和NPT-088。

[项目67]项目62的方法，其中前述tau蛋白去除剂和产生抑制剂是选自tau蛋白疫苗、tau蛋白去除抗体、tau蛋白修饰抑制剂、tau蛋白凝固抑制剂和tau蛋白水解促进剂的至少一种。

[项目68]项目62的方法，其中前述tau蛋白去除剂和产生抑制剂是选自TRx-237、TPI-287、ABBV-8E12、RG-6100、AADvac1、RO7105705、PTI-80、JNJ-63733657、UCB-0107、BIIB-076、MC-1、ACI-35和AZP-2006的至少一种。

[项目69]用于患者的阿尔茨海默氏病的治疗药物，所述患者具有通过定量从测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽确定的阿尔茨海默氏病的进展。

[项目70]项目69的药物，其中使用项目4-9中任一项的抗体定量前述项目1或2的多肽。

[项目71]用于患者的项目69或项目70的药物，所述患者的阿尔茨海默氏病的进展通过以下步骤(i)-(iv)确定：

(i)定量从患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽的步骤，

(ii)比较(i)中定量的前述多肽的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，

(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于对照值时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤，和

(iv)基于(iii)的结果确定施用阿尔茨海默氏病的治疗药物的步骤。

[项目72]项目71的药物，其中当(i)中定量的前述多肽的前述量不小于对照值的1.1倍时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展。

[项目73]项目71的药物，其中当(i)中定量的前述多肽的前述量不大于对照值的0.9倍时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在改善。

[项目74]用于患者的项目69或项目70的药物，所述患者通过以下步骤(i)-(iv)确定目前可能患有阿尔茨海默氏病或者在将来可能患有阿尔茨海默氏病：

(i)定量从患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的项目1或2的多肽的步骤，和

(ii)当(i)中定量的前述多肽的量高于所述截止值时，确定前述测试动物目前可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤，和

(iii)基于(ii)的结果确定施用阿尔茨海默氏病的治疗药物的步骤。

[项目75]项目74的药物，其中前述截止值为45-75单位。

[项目76]项目74的药物，其中前述截止值为45 - 75 ng/mL。

[项目77]项目69-76中任一项的药物，其中前述测试动物是人。

[项目78]项目69-77中任一项的药物，其中前述样品是血液、脑脊液、唾液、泪液或尿液。

[项目79]项目69-78中任一项的药物，其进一步包括检测其他一种或多种阿尔茨海默氏病诊断标志物。

[项目80]项目69-79中任一项的药物，其中所述阿尔茨海默氏病的治疗药物选自对于阿尔茨海默氏病描述的胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂以及tau蛋白去除剂和产生抑制剂。

[项目81]项目80的药物，其中前述胆碱酯酶抑制剂是选自多奈哌齐、加兰他敏、利凡斯的明、石杉碱甲和他克林的至少一种。

[项目82]项目80的药物，其中前述NMDA受体拮抗剂是美金刚。

[项目83]项目80的药物，其中前述淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂是选自淀粉样蛋白β疫苗、淀粉样蛋白β去除抗体、淀粉样蛋白β产生酶抑制剂、淀粉样蛋白β凝固抑制剂和淀粉样蛋白β分解促进剂的至少一种。

[项目84]项目80的药物，其中前述淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂是选自以下的至少一种：CNP-520、E-2609、aducanumab、索拉珠单抗、gantenerumab、crenezumab、amilomotide、ASD-005、HSH-971、ELND-005、ALZT-OP1、nilvadipine、ACI-24、UB-311、AFFITOPE AD-02、LY-3002813、BAN-2401、Neurostem-AD、CT-1812、ID-1201、NIC5-15、BI-425809、Posiphen、PQ-912、苔藓抑素-1、Apabetalone、PBT-2、RIV-1061-IR、MEDI-1814、PF-05236812、SAR-228810、Lu-AF20513、PRI-002、IRX-4204、GC-021109、AAD-2004、CTS-21166、LY-3323795、苯磷硫胺、bisnorcymserine、MDR-1339、KHK-6640和NPT-088。

[项目85]项目80的药物，其中前述tau蛋白去除剂和产生抑制剂是选自tau蛋白疫苗、tau蛋白去除抗体、tau蛋白修饰抑制剂、tau蛋白凝固抑制剂和tau蛋白水解促进剂的至少一种。

[项目86]项目80的药物，其中前述tau蛋白去除剂和产生抑制剂是选自TRx-237、TPI-287、ABBV-8E12、RG-6100、AADvac1、RO7105705、PTI-80、JNJ-63733657、UCB-0107、BIIB-076、MC-1、ACI-35和AZP-2006的至少一种。

[项目87]阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物，其包含以下作为活性成分：减少阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的项目1或项目2的多肽的量的药物，或抑制阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的所述多肽的产生的药物。

[项目88]项目87的药物，其中使用项目4-9中任一项的抗体检测前述项目1或2的多肽。

[项目89]用于筛选阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质的方法，其包括使用以下作为指标：阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的项目1或2的多肽的量的减少，或阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的所述多肽的产生的抑制。

[项目90]项目89的方法，其中使用项目4-9中任一项的抗体检测前述项目1或2的多肽的量的减少。

[本发明的有利效果]

根据本发明，可以提供用于确定阿尔茨海默氏病的试剂，用于确定阿尔茨海默氏病的方法，用于治疗阿尔茨海默氏病的方法，用于筛选阿尔茨海默氏病的治疗药物的候选化合物的方法，新型抗S38AA抗体等。

[附图简述]

图1显示S38AA的氨基酸序列。在鉴定S38AA长片段的N-末端中通过LC-MS/MS方法检测到的肽的序列以粗体字母显示。

图2显示在鉴定S38AA长片段的N-末端中通过LC-MS/MS方法检测到的³⁹⁹EEVPEDLAEEAPGGR⁴¹³肽的MS/MS峰谱图。纵轴显示每种离子的峰强度，且横轴显示m/z。

图3显示S38AA的氨基酸序列。在鉴定S38AA短片段的N-末端中通过LC-MS/MS方法检测到的肽的序列以粗体字母显示。

图4显示在鉴定S38AA短片段的N-末端中通过LC-MS/MS方法检测到的⁶¹⁷GLAVGGGEKAK⁶²⁷肽的MS/MS峰谱图。纵轴显示每种离子的峰强度，且横轴显示m/z。

图5显示S38AA的氨基酸序列。在鉴定S38AA长片段的C-末端中通过LC-MS/MS方法检测到的肽的序列以粗体字母显示。

图6显示在鉴定S38AA长片段的C-末端中通过LC-MS/MS方法检测到的¹⁰⁴⁰DLKLQAGSDL¹⁰⁴⁹肽的MS/MS峰谱图。纵轴显示每种离子的峰强度，且横轴显示m/z。

图7显示当分别通过长ELISA和总ELISA测量系统测量大肠杆菌中的S38AA长片段和S38AA短片段的重组蛋白的表达水平时的定量(校准曲线)。每个图的纵轴显示450 nm处的吸光度，且横轴显示每种蛋白的浓度。

图8显示当通过减法定量人血浆中的S38AA长片段和S38AA短片段时的各样品中的定量值。纵轴显示S38AA长片段和S38AA短片段的定量值，且横轴显示各样品。以D开始的数字指示健康的个体，且以AG开始的数字指示具有中度和严重AD的患者。

图9显示当通过减法定量人血浆中的S38AA长片段(左图)和S38AA短片段(右图)时的每组中的定量值。纵轴显示S38AA长片段和S38AA短片段的定量值，且横轴显示每组。在每个图中显示个别样品。图条显示(每组的平均值±标准偏差)。

图10显示当通过免疫沉淀去除方法定量人血浆中的S38AA长片段和S38AA短片段时的每组中的定量值。纵轴显示S38AA长片段和S38AA短片段的定量值，且横轴显示每组。

图11显示当通过减法定量人血浆中的S38AA长片段和S38AA短片段时的各样品中的定量值。纵轴显示S38AA长片段和S38AA短片段的定量值，且横轴显示各样品。以TSUM开始的数字指示健康的个体，且以ASUM开始的数字指示具有轻度AD的患者。

图12显示当通过减法定量人血浆中的S38AA长片段和S38AA短片段(左图)、S38AA短片段(中图)、S38AA长片段(右图)时的每组中的定量值。纵轴显示S38AA长片段和S38AA短片段的定量值，且横轴显示每组。在每个图中显示个别样品。图条显示(每组的平均值±标准偏差)。

图13显示用于长片段的抗体(抗体A、抗体B和抗体C)的识别位点。

图14显示当通过组合各种抗S38AA片段抗体来定量人血浆中的S38AA片段时各样品中的定量值。抗体的组合包括抗体A和抗体B、抗体A和抗体C以及抗体B和抗体C的3种模式，并且使用该组合进行ELISA。纵轴显示S38AA片段的总量的定量值，且横轴显示各样品。以TSUM开始的数字指示健康的个体，且以ASUM开始的数字指示AD患者。

图15显示当通过组合各种抗S38AA片段抗体来定量人血浆中的S38AA片段时各样品中的定量值。抗体的组合包括用于长片段的抗体和抗体A、用于长片段的抗体和抗体B以及用于长片段的抗体和抗体C的3种模式，并且使用该组合进行ELISA。纵轴显示S38AA长片段的定量值，且横轴显示各样品。以TSUM开始的数字指示健康的个体，且以ASUM开始的数字指示AD患者。

图16显示当基于图14和15的结果通过减法定量人血浆中的S38AA短片段时的各样品中的定量值。纵轴显示S38AA短片段的定量值，且横轴显示各样品。以TSUM开始的数字指示健康的个体，且以ASUM开始的数字指示AD患者。

[实施方案的描述]

在本说明书中，“阿尔茨海默氏病”包括前述“家族性阿尔茨海默氏病”和“散发性阿尔茨海默氏病”两者。

在本发明中，“患有阿尔茨海默氏病”，即为“阿尔茨海默氏病患者”是指可以通过基于记忆或认知功能的障碍的临床诊断或基于脑萎缩的诊断成像等来诊断为阿尔茨海默氏病的病况。

在本说明书中，“具有阿尔茨海默氏病”意指基于阿尔茨海默氏病的临床诊断标准(例如，美国国家神经障碍和中风与阿尔茨海默氏病及相关病症协会研究所(NINCDS-ADRDA)的诊断标准，或美国国家衰老和阿尔茨海默氏病协会研究所(NIA-AA)的阿尔茨海默氏病修订的诊断标准(下文中简称为“阿尔茨海默氏病修订的诊断标准(2011)”)等)诊断为具有阿尔茨海默氏病的病况。

在所有诊断标准中，集中于记忆障碍、缓慢的发作和进行性过程的认知功能障碍的存在、与认知损害相关的社交生活和日常生活活动受损以及非AD型痴呆的分化/排斥等是诊断的指标。

取决于症状的严重程度，阿尔茨海默氏病的发作状态被分为三个阶段(轻度、中度(或中等)，较高(或重度)或第一阶段(或健忘症阶段)，第二阶段(或精神错乱时段)，第三阶段(或躺卧时段)。严重程度可以使用以下进行评估：迷你精神状态检查(MMSE)(其测量认知功能障碍的程度)，痴呆症的功能评估分期(FAST)(其主要基于日常生活活动来确定严重程度)，临床痴呆症评级(CDR)(其临床确定严重程度)，临床测试中使用的阿尔茨海默氏病认知评价量表(ADAS-cog)和严重损害量表(SIB)等。

作为评估阿尔茨海默氏病中的认知功能障碍程度的方法，例如，迷你精神状态检查(MMSE)的评分可以用作标准之一。在0至30的量表中，作为指导，不超过9分被判断为重度阿尔茨海默氏病，10至19分被判断为中度阿尔茨海默氏病，20至23分被判断为轻度阿尔茨海默氏病，且24分或更多分被判断为轻度认知损害或正常。

在本说明书中，“处于阿尔茨海默氏病的风险中的人”(阿尔茨海默氏病前期)，即，“可能患有阿尔茨海默氏病的人(人)”、“阿尔茨海默氏病的高风险组中的人(人)”包括处于以下状态中的人：其中脑组织中的Aβ和tau蛋白的积聚已经开始并且在不久的将来非常可能发展阿尔茨海默氏病的状态，即，其中Aβ和tau蛋白在脑组织中积聚(也称为临床前AD)、即使根据前述诊断无法诊断出阿尔茨海默氏病的发作的状态。此处，可以使用淀粉样蛋白PET或tau PET、脑脊液中的Aβ或磷酸化的tau等作为生物标志物来证实Aβ或tau蛋白在脑组织中的积聚。

在本说明书中，如在前述阿尔茨海默氏病修订的诊断标准(2011)中的临床前AD研究标准中所定义，“临床前AD”是这样的状态，其中提示阿尔茨海默氏病的病理学的生物标志物为阳性，但认知功能是正常的或仅发现不符合轻度认知损害(MCI)的诊断标准的轻微认知功能障碍。

未诊断具有阿尔茨海默氏病、但被诊断具有轻度认知损害的人被包括在“可能患有阿尔茨海默氏病的人(人)”中，因为该症状是阿尔茨海默氏病的体征，并且在将来可能引起阿尔茨海默氏病。

在本说明书中，“轻度认知损害(或轻度认知功能障碍)”(MCI)是正常和痴呆之间的中间状态，其中认知功能比正常更差，但日常生活得以维持并且未诊断出痴呆，即，痴呆的前驱状态。

轻度认知损害的诊断可以基于，例如，在2003 MCI Key Symposium提出的诊断标准(Winblad B等人, (2004) J. Intern. Med. 256: 240-246)或NIA-AA在前述阿尔茨海默氏病修订的诊断标准(2011)中描述的轻度认知损害的诊断标准进行。

当痴呆的严重程度的评估评分为指标时，作为指导，0.5的CDR(临床痴呆评级)评分(怀疑的痴呆)或3的FAST(功能评价分期)阶段(怀疑的痴呆)对应于轻度认知损害。当前述MMSE评分为指标时，作为指导，未诊断出阿尔茨海默氏病的不小于24的评分对应于轻度认知损害。24-28的评分指示轻度认知损害的高可能性。

1.本发明的多肽

本发明人已经首先发现，通过在S38AA的膜外部分中切割产生的S38AA长片段的量在AD患者的血液中增加，此外，在AD患者的血液中，存在特异性切割所述长片段的C-末端侧的酶或所述酶的活性高，并且S38AA短片段的量显著增加，并且血液中的S38AA短片段的量高于健康个体中的S38AA短片段的量，而无论阿尔茨海默氏病的严重程度(认知功能障碍的进展)为轻度、中度还是重度，并且其在中度和重度中高于轻度中。因此，他们已经发现S38AA短片段的量作为用于确定阿尔茨海默氏病的发作和处于该疾病的风险中的人的高度准确的指标是非常可靠的。

因此，本发明首先提供了由SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列组成的多肽作为S38AA短片段(对应于SEQ ID NO:3中显示的S38AA的氨基酸序列(1-1119)中的第617-第1049位氨基酸序列)，以及由SEQ ID NO:2中显示的氨基酸序列组成的多肽作为S38AA长片段(对应于SEQ ID NO:3中显示的S38AA的氨基酸序列(1-1119)中的第399-第1049位氨基酸序列)。

只要被特异性结合由下述SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列组成的多肽的抗体识别，S38AA短片段的氨基酸序列中的1至几个氨基酸就可以被取代、缺失、添加或插入。类似地，只要被特异性结合由下述SEQ ID NO:2中显示的氨基酸序列组成的多肽的抗体识别，S38AA长片段的氨基酸序列中的1至几个氨基酸就可以被取代、缺失、添加或插入。如本文所用，几个没有特别限制，并且可以是例如2-10、2-8、2-6、2-4、2-3或2个。

S38AA短片段可以通过本领域技术人员众所周知的方法在其N-末端、C-末端或侧链处修饰，所述方法例如N-末端乙酰基修饰、C-末端酰胺基修饰、向N末端和/或C-末端添加蛋白标签(His标签等)、向侧链添加糖链等。

本发明的多肽可以根据已知的肽合成方法、例如固相合成方法、液相合成方法等来产生。获得的多肽可以通过已知的纯化方法、例如溶剂萃取、蒸馏、柱色谱、液相色谱、重结晶、这些的组合等来纯化和分离。

本发明的多肽还可以通过如下来产生：培养含有编码所述多肽的核酸的转化体并从所得培养物分离和纯化所述多肽。编码本发明的多肽的核酸可以是DNA、RNA或DNA/RNA嵌合体，但优选地是DNA。所述核酸可以是双链或单链的。在双链的情况下，其可以是双链DNA、双链RNA或DNA:RNA的杂合体。在单链的情况下，其可以是有义链(即编码链)或反义链(即非编码链)。

在本说明书中，“SEQ ID NO”和“SEQ ID NO:”是同义词。例如，“SEQ ID NO 1”和“SEQ ID NO:1”是同义词。

编码本发明的多肽的DNA包括合成DNA等，并且可以通过本身已知的方法获得，所述方法例如逆转录-PCR方法、ODA-LA PCR方法、缺口双链体方法、Kunkel方法等，或菌落或噬斑杂交方法或PCR方法。

2. 抗S38AA抗体

本说明书中使用的“抗S38AA抗体”没有特别限制，只要其为特异性识别S38AA的抗体或特异性识别S38AA长片段和/或S38AA短片段的抗体。例如，可以提及识别S38AA长片段的N-末端区域的抗体、识别S38AA长片段的C-末端区域的抗体、识别S38AA长片段和S38AA短片段共有的C-末端区域的抗体等。

所述抗S38AA抗体也可以是市售的抗S38AA抗体，通过使用已知方法产生的多克隆或单克隆抗体或其片段(例如，Fab、F(ab’)₂、ScFv、微型抗体等)。

作为待用于本发明中的抗S38AA抗体，源自哺乳动物的单克隆抗体和多克隆抗体是优选的。

源自哺乳动物的单克隆抗体和多克隆抗体的实例包括在动物的血液中产生的那些，由杂交瘤产生的那些，和由通过基因工程手段用含有抗体基因的表达载体转化的宿主产生的那些，在具有通过噬菌体展示从由1,000,000,000,000个分子组成的巨大克隆文库筛选的最佳抗体的基因的CHO细胞中大量产生的那些，或使用产生人抗体的转基因小鼠直接产生的人抗体等。

单克隆抗体和多克隆抗体可以通过本领域普通技术人员已知的方法产生。

(1)单克隆抗体的产生

将本发明的多肽单独或与载体或稀释剂一起施用至其中可通过施用于哺乳动物而产生抗体的部位。为了通过施用增加抗体生产力，也可以施用完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂。通常每2 – 6周一次进行施用，并且总共约2 – 10次。待使用的哺乳动物的实例包括猴、兔、狗、豚鼠、小鼠、大鼠、绵羊和山羊，其中优选小鼠和大鼠。

为了从用抗原免疫的哺乳动物(例如小鼠)产生的单克隆抗体产生细胞，选择发现显示抗体滴度的个体，在最终免疫后2-5天收集脾脏或淋巴结，将其中含有的产生抗体的细胞与骨髓瘤细胞融合，由此可以制备产生单克隆抗体的杂交瘤。抗血清中的抗体滴度可以通过例如如下测量：使下述标记的S38AA与抗血清反应，并测量与抗体结合的标记物的活性。融合操作可以通过已知的方法(例如，Köhler和Milstein [Nature, 256, 495 (1975)]的方法)进行。作为融合刺激剂，可以提及例如聚乙二醇(PEG)、仙台病毒等，并且优选使用PEG。此外，为了增强融合效率，还可以适当使用助剂、诸如二甲基亚砜。

作为骨髓瘤细胞，例如，可以提及NS-1、P3U1、SP2/0等，并且优选使用P3U1。待使用的产生抗体的细胞(脾细胞)和骨髓瘤细胞的数目的优选比率为约1:1 - 20:1，以约10-80%的浓度添加PEG(优选PEG 1000-PEG 6000)，并且细胞融合可以通过在约20-40℃、优选约30-37℃下孵育约1 – 10 min有效地进行。

为了筛选产生单克隆抗体的杂交瘤，可以使用各种方法。其实例包括：包括将杂交瘤培养上清液添加至用抗原(诸如蛋白等)直接或与载体一起吸附的固相(例如微板)、添加用放射性物质、酶等(当用于细胞融合的细胞来自小鼠时，使用抗小鼠免疫球蛋白抗体)或蛋白A标记的抗免疫球蛋白抗体和检测与固相结合的单克隆抗体的方法；包括将杂交瘤培养上清液添加至用抗免疫球蛋白抗体或蛋白A吸附的固相、添加用放射性物质、酶等标记的蛋白和检测与固相结合的单克隆抗体的方法等。

所述单克隆抗体可以通过本身已知的方法或与其类似的方法来选择，并且通常可以使用添加有HAT(次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸苷)的动物细胞的培养基等进行选择。作为用于选择和生长的培养基，可以使用任何培养基，只要杂交瘤可以生长。例如，可以使用含有1-20%、优选10-20%胎牛血清的RPMI 1640培养基，含有1-10%胎牛血清的GIT培养基(WakoPure Chemical Industries, Ltd.)，用于杂交瘤培养的无血清培养基(SFM-101, NissuiPharmaceutical Co., Ltd.)等。培养温度通常为20-40℃，优选约37℃。培养时间通常为5天 - 3周，优选1周 - 2周。培养通常可以在5%二氧化碳气体中进行。杂交瘤培养上清液的抗体滴度可以以与上述抗血清的抗体滴度的测量中相同的方式进行测量。

所述单克隆抗体可以根据免疫球蛋白的分离和纯化方法，以与通常的多克隆抗体的分离和纯化中相同的方式[例如，盐析方法，醇沉淀方法，等电点沉淀方法，电泳，通过离子交换剂(例如DEAE)的吸附和解吸方法，超速离心方法，凝胶过滤方法，包括通过活性吸附剂(诸如抗原结合的固相、蛋白A、蛋白G等)仅收集抗体和解离键以产生抗体的特异性纯化方法]进行分离和纯化。

(2)多克隆抗体的产生

可以通过本身已知的方法或与其类似的方法来产生针对本发明的多肽的多克隆抗体。例如，多克隆抗体可以通过如下产生：产生免疫抗原(抗原、诸如蛋白等)和载体蛋白的复合物，以与上述单克隆抗体的产生方法相同的方式免疫哺乳动物或鸡，从免疫的动物收集含有针对S38AA的抗体的物质，和分离和纯化抗体。

至于待用于免疫哺乳动物或鸡的免疫抗原和载体蛋白的复合物，载体蛋白的种类以及载体和半抗原的混合比率可以是任何和任一比率，只要可以针对用于免疫的与载体交联的半抗原有效地产生抗体。例如，使用包括以约0.1-20、优选约1-5的重量比将牛血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白、匙孔

血蓝蛋白等与半抗原(为1)偶联的方法。

尽管可以使用各种缩合剂用于偶联半抗原与载体，但可以使用含有戊二醛、碳二亚胺、马来酰亚胺活化的酯、硫醇基和二硫代吡啶基等的活化酯试剂。

将缩合的产物单独或与载体和稀释剂一起施用至哺乳动物或鸡的可产生抗体的部位。为了通过施用增加抗体生产力，也可以施用完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂。通常每2 – 6周一次进行施用，并且总共约3 – 10次。

所述多克隆抗体可以从通过上述方法免疫的哺乳动物的血液、腹水、母乳等收集，优选从血液收集，并且在鸡的情况下，其可以从血液和蛋黄收集。

可以以与上述抗血清的抗体滴度的测量中相同的方式测量抗血清中的多克隆抗体的滴度。可以根据免疫球蛋白的分离和纯化方法，以与上述单克隆抗体的分离和纯化中相同的方式，分离和纯化多克隆抗体。

作为本发明中的多克隆抗体，例如，可以提及兔来源的抗S38AA多克隆抗体(下文中也称为“MBL”或“用于长片段的抗体”)。用于长片段的抗体的特征在于其特异性识别S38AA长片段，并且不识别S38AA短片段。通过将用于长片段的抗体与抗体A、B或C一起使用，用于长片段的抗体可用于后面描述的长ELISA。

(3) 特异性识别S38AA短片段的抗体

作为本发明的一个实施方案，可以提及特异性识别SEQ ID NO:1中显示的S38AA短片段的抗体。作为特异性识别S38AA短片段的抗体，例如，可以提及识别S38AA短片段的C-末端序列或N-末端序列的抗体。可以通过本领域技术人员众所周知的方法来制备特异性识别S38AA短片段的抗体。例如，其可以如下获得：使用由从S38AA短片段的N-末端(SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列中的第617位甘氨酸)起的几个氨基酸组成的肽作为免疫抗原，和选择对肽是阴性的抗体，所述肽是向其N-末端侧添加几个氨基酸的免疫抗原或S38AA长片段。具体地，可以分别根据前述方法(1)或(2)获得单克隆抗体或多克隆抗体。

特异性识别S38AA短片段的抗体的实例包括下述抗体A、抗体B和抗体C。

抗体A(下文中也称为“小鼠来源的抗S38AA单克隆抗体A”)是识别S38AA的C-末端区域的抗体，并且意指通过如下获得的抗体：通过使用S38AA片段的C-末端氨基酸序列的肽的部分作为免疫原建立产生抗体的杂交瘤，随后进行分离和纯化。抗体A的特征在于其特异性识别S38AA短片段和S38AA长片段。抗体A可以与“用于长片段的抗体”一起用于长ELISA。通过将抗体A与抗体B或C一起使用，抗体A可以用于后面描述的总ELISA。

抗体A优选为选自以下的抗体：

(1)包含SEQ ID NO:4的重链可变区的抗体，

(2)包含SEQ ID NO:6的重链可变区的抗体，

(3)包含SEQ ID NO:8的重链可变区的抗体，和

(4)包含SEQ ID NO:10的重链可变区的抗体。

抗体A的另一个优选实施方案是选自以下的抗体：

(1)包含SEQ ID NO:5的轻链可变区的抗体，

(2)包含SEQ ID NO:7的轻链可变区的抗体，

(3)包含SEQ ID NO:9的轻链可变区的抗体，和

(4)包含SEQ ID NO:11的轻链可变区的抗体。

更优选地，抗体A是选自以下的抗体：

(1)包含SEQ ID NO:4的重链可变区和SEQ ID NO:5的轻链可变区的抗体，

(2)包含SEQ ID NO:6的重链可变区和SEQ ID NO:7的轻链可变区的抗体，

(3)包含SEQ ID NO:8的重链可变区和SEQ ID NO:9的轻链可变区的抗体，和

(4)包含SEQ ID NO:10的重链可变区和SEQ ID NO:11的轻链可变区的抗体。

抗体B是识别S38AA的C-末端区域的抗体，并且意指通过如下获得的抗体：通过使用S38AA片段的C-末端氨基酸序列的肽的部分作为免疫原建立产生抗体的杂交瘤，随后进行分离和纯化。抗体B的特征在于其特异性识别S38AA短片段和S38AA长片段。抗体B可以与“用于长片段的抗体”一起用于长ELISA。通过将抗体B与抗体A或C一起使用，抗体B可以用于总ELISA。

抗体B优选为选自以下的抗体：

(5)包含SEQ ID NO:12的重链可变区的抗体，

(6)包含SEQ ID NO:14的重链可变区的抗体，

(7)包含SEQ ID NO:16的重链可变区的抗体，和

(8)包含SEQ ID NO:18的重链可变区的抗体。

抗体B的另一个优选实施方案是选自以下的抗体：

(5)包含SEQ ID NO:13的轻链可变区的抗体，

(6)包含SEQ ID NO:15的轻链可变区的抗体，

(7)包含SEQ ID NO:17的轻链可变区的抗体，和

(8)包含SEQ ID NO:19的轻链可变区的抗体。

抗体B更优选为选自以下的抗体：

(5)包含SEQ ID NO:12的重链可变区和SEQ ID NO:13的轻链可变区的抗体，

(6)包含SEQ ID NO:14的重链可变区和SEQ ID NO:15的轻链可变区的抗体，

(7)包含SEQ ID NO:16的重链可变区和SEQ ID NO:17的轻链可变区的抗体，和

(8)包含SEQ ID NO:18的重链可变区和SEQ ID NO:19的轻链可变区的抗体。

抗体C是识别S38AA的C-末端区域的抗体，并且意指通过如下获得的抗体：通过使用大肠杆菌中的S38AA长片段的重组蛋白作为免疫原建立产生抗体的杂交瘤，随后进行分离和纯化。抗体C的特征在于其特异性识别S38AA短片段和S38AA长片段。抗体C可以与“用于长片段的抗体”一起用于长ELISA。通过将抗体C与抗体A或B一起使用，抗体C可以用于总ELISA。

抗体C优选为选自以下的抗体：

(9)包含SEQ ID NO:20的重链可变区的抗体，和

(10)包含SEQ ID NO:22的重链可变区的抗体。

抗体C的另一个优选实施方案是选自以下的抗体：

(9)包含SEQ ID NO:21的轻链可变区的抗体，和

(10)包含SEQ ID NO:23的轻链可变区的抗体。

抗体C更优选为选自以下的抗体：

(9)包含SEQ ID NO:20的重链可变区和SEQ ID NO:21的轻链可变区的抗体，和

(10)包含SEQ ID NO:22的重链可变区和SEQ ID NO:23的轻链可变区的抗体。

只要本发明的抗体A、B和C可以特异性识别S38AA短片段和S38AA长片段，则相应抗体可以含有具有与其中含有的前述可变区的氨基酸序列具有不小于90%、优选不小于95%、更优选不小于96%、仍更优选不小于97%、进一步优选98%、进一步更优选不小于99%、最优选不小于99.5%的同源性的可变区。

在本说明书中，“同源性”意指当使用技术领域中已知的数学算法比对两个氨基酸序列时，在最佳比对中与重叠的总氨基酸残基相同的氨基酸和相似的氨基酸残基的比例(%)(优选地，对于最佳比对，所述算法可以考虑将缺口引入一个或两个序列中)。

本说明书中的氨基酸序列的同源性可以在以下条件(期望值=10；缺口；矩阵 =BLOSUM62；过滤=OFF)下使用同源性计算算法NCBI BLAST (National Center forBiotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool)进行计算。确定氨基酸序列的同源性的其他算法的实例包括Karlin等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:5873-5877(1993)中描述的算法[该算法被并入NBLAST和XBLAST程序(2.0版)(Altschul等人, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402(1997))]，Needleman等人, J. Mol. Biol.,48:444-453(1970)中描述的算法[该算法被并入GCG软件包中的GAP程序]，Myers和Miller,CABIOS, 4:11-17(1988)中描述的算法[该算法被并入ALIGN程序(2.0版)，该程序是CGC序列比对软件包的一部分]，Pearson等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 2444-2448(1988)中描述的算法[该算法被并入GCG软件包中的FASTA程序]等，并且它们也可以优选地以相同的方式使用。

本发明的抗体A、B和C中含有的CDR可以含有在一个CDR的氨基酸序列中被取代、缺失、插入和/或添加的1至几个(2、3、4、5个等)，优选在2个以内，更优选一个氨基酸，只要所述抗体可以特异性识别S38AA短片段和S38AA长片段。每种上述抗体的氨基酸被取代、缺失、插入和/或添加的CDR的数目没有特别限制，只要每种抗体可以特异性识别S38AA短片段和S38AA长片段。其为每1个轻链可变区优选2以内，更优选为1，和每1个重链可变区优选2以内，更优选为1。氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加可以在轻链可变区和重链可变区两者中进行，或者在单独的任一者中进行。

例如，“相似氨基酸”意指物理化学特性相似的氨基酸，并且，例如，可以提及被分类至同一组中的氨基酸，诸如芳香族氨基酸(Phe、Trp、Tyr)，脂肪族氨基酸(Ala、Leu、Ile、Val)，极性氨基酸(Gln、Asn)，碱性氨基酸(Lys、Arg、His)，酸性氨基酸(Glu、Asp)，具有羟基基团的氨基酸(Ser、Thr)，具有小侧链的氨基酸(Gly、Ala、Ser、Thr、Met)等。预测用此类相似氨基酸取代不引起蛋白的表型的改变(即，保守的氨基酸取代)。保守氨基酸取代的具体实例是本领域众所周知的，并且描述于各种文献中(参见，例如，Bowie等人, Science,247:1306-1310(1990))。

用于用其他期望的氨基酸取代一个或多个氨基酸残基的方法的实例包括定点诱变(Hashimoto-Gotoh, T, Mizuno, T, Ogasahara, Y, 和Nakagawa, M. (1995) Anoligodeoxyribonucleotide-directed dual amber method for site-directedmutagenesis. Gene 152, 271-275, Zoller, MJ, 和Smith, M. (1983)Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA fragments cloned into M13vectors. Methods Enzymol. 100, 468-500, Kramer, W, Drutsa, V, Jansen, HW,Kramer, B, Pflugfelder, M, 和Fritz, HJ (1984) The gapped duplex DNA approachto oligonucleotide-directed mutation construction. Nucleic Acids Res. 12,9441-9456, Kramer W, 和Fritz HJ (1987) Oligonucleotide-directed constructionof mutations via gapped duplex DNA Methods. Enzymol. 154, 350-367, Kunkel, TA(1985) Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypicselection. Proc Natl Acad Sci USA. 82,488-492)。使用该方法，抗体的期望氨基酸可以被其他期望氨基酸取代。通过使用文库技术，诸如框架改组(Mol Immunol. 2007 Apr;44(11):3049-60)和CDR修复(US2006/0122377)等，也可能用其他适当的氨基酸取代框架和CDR中的氨基酸。

3. 用于确定阿尔茨海默氏病的试剂

本发明的确定试剂含有一种或多种能够检测S38AA短片段的量的抗S38AA抗体，并且不仅可以确定人是否患有阿尔茨海默氏病以及目前是否非常可能患有该疾病，而且可以确定处于阿尔茨海默氏病的风险中的人，也就是说，该人在不久的将来是否具有患有该疾病的高可能性，尽管该人尚未患有该疾病。换言之，本发明的试剂可以鉴定阿尔茨海默氏病，而无论严重程度是轻度，中度还是重度。因此，本发明中的阿尔茨海默氏病的“确定”不仅用于意指确定人是否已经患有阿尔茨海默氏病以及目前是否非常可能患有该疾病，而且还涵盖判断人在不久的将来是否具有患有该疾病的高可能性，尽管该人尚未患有该疾病。

4. 用于确定阿尔茨海默氏病的试剂盒

本发明提供了用于确定阿尔茨海默氏病的试剂盒。本发明的试剂盒包含用于测量S38AA短片段的量的试剂。通过使用本发明的试剂盒测量S38AA短片段的量，可以确定阿尔茨海默氏病。

本发明的试剂盒含有抗S38AA抗体，其为能够定量S38AA短片段的单一抗体或多种抗体的组合，并且具体地，可以提及特异性识别S38AA短片段的抗体或识别S38AA长片段且不识别S38AA短片段的抗体，和识别S38AA长片段和S38AA短片段两者的抗体的组合。作为识别S38AA长片段且不识别S38AA短片段的抗体，例如，可以提及识别前述S38AA长片段的N-末端侧区域的抗体。作为识别S38AA长片段和S38AA短片段两者的抗体，可以提及识别S38AA长片段和S38A短片段共有的C-末端侧区域的抗体。

用于本发明的试剂盒的抗体优选为用于长片段的抗体，抗体A、抗体B和/或抗体C。

所述抗体可以是荧光标记的抗体，酶标记的抗体，链霉抗生物素蛋白标记的抗体，生物素标记的抗体或放射性标记的抗体。

所述抗S38AA抗体通常以其以合适的浓度溶解于水或合适的缓冲液(例如，TE缓冲液、PBS等)中的水溶液或冻干产物的形式包含在本发明的试剂盒中。

为了测量S38AA短片段和/或S38AA长片段，可以使用一种抗体用于测量，并且可以使用多种、优选两种抗体用于测量(例如，夹心ELISA方法等)。

根据短S38AA片段的测量方法，本发明的试剂盒可以在其组成中进一步含有用于执行所述方法所必需的其他组分。例如，为了通过Western印迹进行测量，本发明的试剂盒可以进一步含有印迹缓冲液，标记试剂，印迹膜等，测定试剂，标准品溶液等。此处的“标准品溶液”的实例包括S38AA短片段和/或S38AA长片段的纯化参考标准品，例如，通过将本发明的肽以特定浓度溶解于水或合适的缓冲液(例如，TE缓冲液、含有胎牛血清的PBS等)中而获得的水溶液。

为了通过夹心ELISA进行测量，除了上述以外，本发明的试剂盒可以进一步含有固定的抗体测量板，洗涤溶液等。为了通过凝集方法(包括乳胶凝集方法)进行测量，可以含有抗体包被的乳胶、明胶等。为了通过化学荧光方法或化学荧光电子方法进行测量，可以含有抗体-缀合的磁性颗粒和合适的缓冲液。为了通过使用LC/MS、LC-MS/MS或免疫色谱方法检测S38AA，可以含有抗体包被的柱或微柱以及微芯片作为检测仪器的一部分。此外，在时间分辨的荧光测量方法或与其类似的荧光测量方法中，可以在结构中包含多种标记的抗S38AA抗体和其他必需组分。

作为本发明的试剂盒，例如，可以提及以下内容。可以将以下试剂盒中含有的抗体标记(例如，用过氧化物酶、生物素等标记)。当抗体未标记时，可以分开含有包含通过结合抗体来标记抗体的标记抗体。

1)一种或两种“特异性识别S38AA短片段的抗体”，洗涤溶液，显色试剂，反应淬灭液，稀释缓冲液和标准品溶液；

2)一种或两种“识别S38AA长片段的N-末端侧区域的抗体”，一种或两种“识别S38AA长片段的C-末端侧区域的抗体(即，识别S38AA长片段和S38A短片段共有的C-末端侧区域的抗体)”，洗涤溶液，显色试剂，反应淬灭液，稀释缓冲液和标准品溶液；

3)“特异性识别S38AA短片段的第一抗体”，“特异性识别S38AA短片段的第二抗体”，洗涤溶液，显色试剂，反应淬灭液，稀释缓冲液和标准品溶液；

4)“识别S38AA长片段的N-末端区域的第一抗体”和“特异性识别S38AA长片段的第二抗体”，一种或两种“识别S38AA长片段的C-末端侧区域的抗体(即，识别S38AA长片段和S38A短片段共有的C-末端侧区域的抗体)，洗涤溶液，显色试剂，反应淬灭液，稀释缓冲液和标准品溶液。

如本文所用，“特异性识别S38AA短片段的抗体”、“特异性识别S38AA短片段的第一抗体”和“特异性识别S38AA短片段的第二抗体”优选为抗体A、抗体B和抗体C。

如本文所用，“识别S38AA长片段的N-末端区域的抗体”和“识别S38AA长片段的N-末端侧区域的第一抗体”优选为“用于长片段的抗体”。

如本文所用，“识别S38AA长片段的C-末端侧区域的抗体(即，识别S38AA长片段和S38A短片段共有的C-末端侧区域的抗体)”优选包括抗体A、抗体B和抗体C。可以特异性检测S38AA长片段和S38AA短片段的抗S38AA长片段抗体和抗S38AA短片段抗体的实例包括在“2.本发明的抗体”中详细描述的抗体。

5. 本发明的方法

(1) 阿尔茨海默氏病的确定和测试方法

如上所提及，本发明人已经首先发现，通过在S38AA的膜外部分中的切割产生的S38AA长片段的量在AD患者的血液中增加，此外，在AD患者的血液中，特异性切割所述长片段的酶存在，或所述酶的活性高，并且通过S38AA的膜外部分中的直接切割产生的S38AA短片段的量显著增加，并且无论阿尔茨海默氏病的严重程度(认知功能障碍的进展)是轻度、中度还是重度，血液中的S38AA短片段的量都增加，并且其在中度和重度中高于轻度中。因此，他们已经发现S38AA短片段的量作为用于确定阿尔茨海默氏病的发作和处于该疾病的风险中的人的高度准确的指标以及用于确定阿尔茨海默氏病的进展程度的指标是极端高度可靠的。

因此，本发明提供了用于确定阿尔茨海默氏病、例如轻度或中度或重度阿尔茨海默氏病的方法，其包括检测从测试动物收集的样品中的S38AA短片段。

本发明的确定方法不仅可以确定人是否患有阿尔茨海默氏病以及目前是否非常可能患有所述疾病，而且还可以确定该人在不久的将来是否具有患有所述疾病的高可能性，尽管该人尚未患有所述疾病。

本发明还提供了用于测试目前患有阿尔茨海默氏病的可能性或在将来患有阿尔茨海默氏病的可能性的方法，所述方法包括检测从测试动物收集的样品中的S38AA短片段。

前述可能性的确定和测试(结果)至少可用于辅助医生明确诊断阿尔茨海默氏病。

本发明的确定和测试方法的特征在于检测从测试动物收集的样品中的S38AA短片段。另外，本发明的确定和测试方法可以包括以下作为特定步骤，例如，(i)定量从测试动物收集的样品中的S38AA短片段的步骤，和(ii)比较(i)中定量的S38AA短片段的量与从健康动物收集的样品中的S38AA短片段的量(在下文中称为“对照值”)的步骤。

作为(ii)中比较的结果，当(i)中定量的S38AA短片段的量高于对照值时，显示前述测试动物患有阿尔茨海默氏病，或者目前可能患有阿尔茨海默氏病，或者在将来可能患有阿尔茨海默氏病。

此外，除了上述步骤以外，本发明的确定和测试方法还可以包括，基于(ii)的结果，当(i)中定量的S38AA短片段的量高于对照值时，确定前述测试动物患有阿尔茨海默氏病或或者目前可能患有阿尔茨海默氏病或者在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤。

此外，本发明提供了用于辅助确定阿尔茨海默氏病的进展的方法，因为如上所述，血液中的S38AA短片段的值无论阿尔茨海默氏病的严重程度(认知功能障碍的进展)是轻度、中度还是重度都增加，并且进一步，其在中度和重度中高于轻度中。

本发明的用于辅助确定的方法特征性地检测从测试动物收集的样品中的S38AA短片段。本发明的用于辅助确定的方法可以包括以下作为特定步骤，例如，(i)定量从患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的S38AA短片段的步骤，和(ii)比较(i)中定量的S38AA短片段的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的S38AA短片段的量(下文中被称为“对照值”)的步骤。

作为(ii)中的比较的结果，当(i)中定量的S38AA短片段的量高于对照值时，其表明前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展或患有阿尔茨海默氏病的可能性高，并且当该量小于对照值时，其表明前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善或未患有阿尔茨海默氏病的可能性高。

除了上述步骤以外，本发明的用于辅助确定方法的步骤还可以包括：(iii)基于(ii)的结果，当(i)中定量的S38AA短片段的量高于对照值时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤。

此外，本发明还提供了用于评估治疗对阿尔茨海默氏病治疗下的患者或经治疗以预防阿尔茨海默氏病的处于阿尔茨海默氏病的风险中的人的影响的方法，因为如上所述，血液中的S38AA短片段的量无论阿尔茨海默氏病的严重程度(认知功能障碍的进展)是轻度、中度还是重度都增加，并且其在中度和重度中高于轻度中。

用于评估本发明的治疗效果的方法的特征还在于检测从测试动物收集的样品中的S38AA短片段。另外，本发明的用于评估治疗效果的方法可以包括例如以下作为特定步骤：(i)定量从已经开始阿尔茨海默氏病的药物治疗或预防阿尔茨海默氏病的发作的药物治疗的测试动物收集的样品中的S38AA短片段的步骤，和(ii)比较(i)中定量的S38AA短片段的量与从所述测试动物收集的样品(在开始药物治疗之前收集的样品，在开始药物治疗之后和(i)中的收集时之前收集的样品)中的S38AA短片段的量(下文中被称为“对照值”)的步骤。

作为(ii)中的比较的结果，显示当(i)中定量的S38AA短片段的量高于对照值时，当前的药物治疗(或选择的治疗药物)不是有效的，并且当该量小于对照值时，当前的药物治疗(或选择的治疗药物)是有效的。

除了上述步骤以外，本发明的用于评估治疗效果的方法还可以包括，(iii)步骤：基于(ii)的结果确定，当(i)中定量的S38AA短片段的量高于对照值时，当前的药物治疗(或选择的治疗药物)不是有效的，且当其小于对照值时，当前的药物治疗(或选择的治疗药物)是有效的。

在本说明书中，用于药物治疗的治疗药物是这样的概念，其不仅包括已经被批准和销售的治疗药物，而且还包括临床测试下的临床试验药物。本发明的用于评估治疗效果的方法也可以用于监测临床测试中的药效等。

尽管可以作为用于本发明的方法的测试受试者的动物没有特别限制，只要其表达S38AA即可，但可以提及例如哺乳动物(例如人、猴、牛、猪、马、狗、猫、绵羊、山羊、兔、仓鼠、豚鼠、小鼠、大鼠等)，禽类(例如鸡等)等。优选的是哺乳动物，且更优选为人。

尽管待作为样品的源自测试动物的生物样品没有特别限制，但可以提及例如血液、血清、血浆、唾液、泪液、尿液、脑脊液等。更优选的是血浆或脑脊液。

血清和血浆可以通过如下制备：根据常规方法从测试动物收集血液，和分离液体组分。脑脊液可以通过已知手段、诸如脊椎穿剌(spinal tap)等来收集。

样品中的S38AA长片段和S38AA短片段可以通过已知方法检测(定量)。它们可以通过进行例如以下来检测：Western印迹，凝胶电泳(例如，SDS-PAGE、二维凝胶电泳等)，各种分离和纯化方法(例如，离子交换色谱、疏水色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱、反相色谱、等电点色谱、毛细管电泳等)，电离方法(例如，电子碰撞电离方法、场解吸方法、二次电离方法、快速原子轰击、基质辅助激光解吸/电离( MALDI)方法、电喷雾电离方法等)，质谱仪(例如，双聚焦质谱仪、四极质谱仪、飞行时间质谱仪、傅立叶变换质谱仪、离子回旋质谱仪等)等。在本发明的方法中也包括使用应用这些测量原理的测量装置的检测(定量)。

另外，还可以通过已知的免疫化学方法(比浊法、竞争方法、免疫测定方法、化学荧光方法、化学荧光电子方法、夹心方法等)检测(定量)S38AA长片段和S38AA短片段。关于这些免疫化学方法，例如，可以参考例如由Hiroshi Irie编辑的“Radioimmunoassay”(Kodansha，在1974年出版)，由Hiroshi Irie编辑的“radioimmunoassay (sequel)”(Kodansha，在1979年出版)，由Eiji Ishikawa等人编辑的“Enzyme Immunoassay”(第3版，Igaku-Shoin，在1987年出版)，“Methods in ENZYMOLOGY” Vol. 121 (ImmunochemicalTechniques (Part I: Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies))(由Academic Press出版)等。

作为S38AA长片段和S38AA短片段的特异性检测(定量)方法，S38AA短片段的量可以通过从样品中的S38AA长片段和S38AA短片段的测量值(其使用“识别S38AA长片段和S38A短片段共有的C-末端侧区域的抗体”)减去使用单独的“识别S38AA长片段的N-末端侧区域的抗体”或组合使用“识别S38AA长片段的N-末端侧区域的抗体”和“识别S38AA长片段的C-末端侧区域的抗体”获得的S38AA长片段样品的测量值来定量，或者通过类似方法获得的测量值可以被定量为S38AA短片段的量与S38AA长片段的量的比率，或S38AA短片段的量可以使用本发明的“特异性识别S38AA短片段的抗体”直接定量。能够特异性检测S38AA长片段和S38AA短片段的抗S38AA长片段抗体和抗S38AA短片段抗体的实例包括在“2. 本发明的抗体”中详细描述的抗体。

如本文所用，“识别S38AA长片段和S38A短片段共有的C-末端侧区域的抗体”优选为抗体A、B或C。

作为“识别S38AA长片段的N-末端侧区域的抗体”优选为“用于长片段的抗体”。

“识别S38AA长片段的C-末端侧区域的抗体”优选为抗体A、B或C。

“特异性识别S38AA短片段的抗体”优选为抗体A、B或C。

作为本发明中的测量方法，例如，可以提及“长ELISA”。“长ELISA”是用于检测(定量)S38AA长片段的量的方法，并且特征性地是使用“用于长片段的抗体”和“至少一种选自抗体A、B和C的抗体”的夹心ELISA方法。

作为本发明中的测量方法，例如，可以提及“总ELISA”。“总ELISA”是用于检测(定量)“S38AA长片段和S38AA短片段的总量”的方法，并且特征性地是使用“至少两种选自抗体A、B和B的抗体”的夹心ELISA方法。

作为本发明中的“用于检测(定量)S38AA短片段的量的方法”，可以提及包括从上述“总ELISA的测量结果(定量值)”减去“长ELISA的测定结果(定量值)”的方法。

作为在本发明的方法中使用的“对照值”，可以使用对照样品中的S38AA短片段的量，或者对于对照预先测量或设置的S38AA短片段的量等。不必与本发明的方法同时测量该值。

为了在此设置对照值，也可以使用多个个体作为对照，并且使用多个个体的测量值的平均值作为对照值。也就是说，在本发明的方法的范围内还涵盖使用源自对照组(健康动物，患有特定进展程度的阿尔茨海默氏病的动物等)的对照样品中的S38AA短片段的量作为对照值进行的上述测定等。

例如，当将源自健康动物的样品用作对照样品时，可以判断或确定人目前患有阿尔茨海默氏病或具有患有阿尔茨海默氏病的高可能性，或具有在将来患有阿尔茨海默氏病的可能性。

另外，当使用源自具有特定进展程度的阿尔茨海默氏病的动物的样品作为对照样品时，当测试样品中的S38AA短片段的量高于对照样品中的量时，可以判断或确定阿尔茨海默氏病的进展程度高于患有该疾病的对照动物的阿尔茨海默氏病的进展程度。

此外，当使用在过去从由其收集测试样品的测试动物收集的样品作为对照样品时，当测试样品中的S38AA短片段的量高于对照样品中的量时，可以确定阿尔茨海默氏病正在进展，并且当该量低于对照样品中的量时，可以确定该疾病正在改善。

此外，使用多个对照样品，诸如源自具有阿尔茨海默氏病的动物的对照样品、源自健康动物的对照样品等，可以通过使用测试样品中的S38AA短片段的量大于源自健康动物的对照样品的S38AA短片段的量和小于源自具有阿尔茨海默氏病的动物的对照样品的S38AA短片段的量的指数，确定处于阿尔茨海默氏病的风险中的人，即其中Aβ和tau蛋白的积聚已经开始且在不久的将来非常可能发展阿尔茨海默氏病(即使无法明确诊断该疾病的发作)的人。

另外，使用在过去从由其收集测试样品且对其已经开始阿尔茨海默氏病的药物治疗的测试动物收集的样品作为对照样品，当测试样品中的S38AA短片段的量高于对照样品中的量时，可以评估当前的药物治疗不是有效的，并且当该量低于对照样品中的量时，可以评估所述药物治疗是有效的。

当“从测试动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽”大于“从健康动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽的量(对照值)”时，可以确定测试动物目前患有阿尔茨海默氏病或动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的可能性。

“从测试动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽”的量优选为对照值的1.1至10倍。其更优选为对照值的1.1至8倍。其进一步优选为对照值的1.2至5倍。其最优选为对照值的1.2至3倍。

当“从测试动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽”大于“在过去从测试动物收集的样品中的前述多肽的量(对照值)”时，可以确定测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展。

“从测试动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽”的量优选为对照值的1.1至10倍。其更优选为对照值的1.1至8倍。其进一步优选为对照值的1.2至5倍。其最优选为对照值的1.2至3倍。

当“从测试动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽”小于在过去从测试动物收集的样品中的前述多肽的量(对照值)”时，可以确定测试动物中的阿尔茨海默氏病正在改善。

“从测试动物收集的样品中的SEQ ID NO:1的多肽”的量优选为对照值的0.1至0.9倍。其更优选为对照值的0.2至0.9倍。其进一步优选为对照值的0.3至0.9倍。其最优选为对照值的0.4至0.9倍。

S38AA短片段的定量分析可以通过用标准蛋白(内部标准蛋白)的量对样品中S38AA短片段的量进行标准化来进行。也就是说，在通过使用上述方法定量样品中的S38AA短片段的量和标准蛋白的量之后，计算两者的信号比(S38AA短片段/标准蛋白)，并且样品中的S38AA短片段的量可以表示为与标准蛋白的丰度的比率。

标准蛋白可以是以给定量组成型表达的蛋白，并且在许多组织和细胞中普遍表达的蛋白是优选的。例如，可以提及对于细胞存活必不可少的蛋白，诸如由基因编码的蛋白、诸如RNA合酶、能量产生酶、核糖体蛋白、细胞骨架蛋白等(持家基因)。其具体实例包括但不限于蛋白，诸如β-肌动蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、β-微管蛋白等。特别优选的是β-肌动蛋白。

另外，代替前述对照值，可以预先设置与阿尔茨海默氏病或轻度认知损害相关的血液中的S38AA短片段的量的截止值，并且可以将测试动物的血液中的S38AA短片段的量与截止值进行比较。

例如，当测试动物的血液中的S38AA短片段的量不小于所述截止值时，可以确定所述测试动物患有阿兹海默氏病，或者目前可能患有阿兹海默氏病，或者在将来可能患有阿尔茨海默氏病。

“截止值”是当使用该值作为标准确定疾病时可以满足高诊断灵敏度(真阳性率)和高诊断特异性(真阴性率)的值。例如，可以将在已经发展阿尔茨海默氏病的个体中显示高阳性率和在未发展阿尔茨海默氏病的个体中显示高阴性率的值设置为截止值。

用于计算截止值的方法是本领域中众所周知的。例如，计算发展阿尔茨海默氏病的个体和未发展阿尔茨海默氏病的个体中的血液中的S38AA短片段的量，并且获得计算值的诊断敏感度和诊断特异性。基于这些值，使用市售的分析软件创建ROC(接受者操作特性)曲线。然后，获得诊断灵敏度和诊断特异性尽可能接近100%的值，并且该值可以用作截止值。另外，例如，优选将大量健康动物的血液中的S38AA短片段的量的“平均值+ 2标准偏差”设置为截止值。使用该值，可以以良好的灵敏度和特异性确定发展阿尔茨海默氏病。此外，例如，通过从ROC曲线获得使诊断灵敏度和诊断特异性之间的似然比最大的值并将该值用作截止值，可以以高灵敏度确定阿尔茨海默氏病。或者，将ROC曲线上具有最低诊断能力的点，即距ROC曲线下面积为0.5的线最远的点设置为截止值，即计算“灵敏度 + 特异性 -1”，并且优选将该值变为最大值的点设置为截止值。

用本说明书的重组蛋白转化的S38AA短片段的量的截止值为例如45-75单位。截止值优选为例如49 – 69单位。截止值更优选为例如54 – 64单位。截止值更优选为例如56 –62单位。截止值进一步优选为例如58 – 61单位。截止值最优选为例如59单位。

截止值的另一个优选值包括45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74和75单位。

体内含有的S38AA短片段的量的截止值为例如45 – 75 ng/mL。截止值优选为例如49 – 69 ng/mL。截止值更优选为例如54 – 64 ng/mL。截止值更优选为例如56 – 62 ng/mL。截止值进一步优选为例如58 – 61 ng/mL。截断值最优选为例如59 ng/mL。

截止值的另一个优选值包括45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74和75 ng/mL。

当通过本发明的方法确定阿尔茨海默氏病时，除了S38AA短片段以外，还可以检查阿尔茨海默氏病的其他诊断标志物的变化。阿尔茨海默氏病的其他诊断标志物包括，例如，已知的标志物，诸如已经研究其作为血浆生物标志物的潜力的Aβ，高半胱氨酸，神经丝，各种炎症相关蛋白(C-反应蛋白、IL-1β、TNF、IL-6和TGFβ)，胆固醇，tau，磷酸化的tau等。这些可以根据常规的众所周知的检测方法来检测。

(2)用于治疗和预防阿尔茨海默氏病的方法

当本发明的上述用于确定阿尔茨海默氏病的方法等确定测试动物患有阿尔茨海默氏病，或者目前可能患有阿尔茨海默氏病，或者在将来可能患有阿尔茨海默氏病时，阿尔茨海默氏病可以通过如下治疗或预防：基于结果，确定待施用于所述测试动物的阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物，以及向所述测试动物施用治疗有效量的所述治疗或预防药物。

在本说明书中，“阿尔茨海默氏病的治疗药物”不仅包括目的在于永久治愈治疗阿尔茨海默氏病的药物，而且还包括例如目的在于抑制阿尔茨海默氏病的进展的药物。目的在于抑制进展的药物可以用作“阿尔茨海默氏病预防药物”。

所述阿尔茨海默氏病的治疗药物的实例包括胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂以及tau蛋白去除剂和产生抑制剂。

所述胆碱酯酶抑制剂的实例包括多奈哌齐、加兰他敏、利凡斯的明、石杉碱甲和他克林。

所述NMDA受体拮抗剂的实例包括美金刚。

所述淀粉样蛋白β去除剂和产生抑制剂的实例包括淀粉样蛋白β疫苗、淀粉样蛋白β去除抗体、淀粉样蛋白β产生酶抑制剂、淀粉样蛋白β凝固抑制剂和淀粉样蛋白β降解促进剂。具体实例包括CNP-520、E-2609、aducanumab、索拉珠单抗、gantenerumab、crenezumab、amilomotide、ASD-005、HSH-971、ELND-005、ALZT-OP1、nilvadipine、ACI-24、UB-311、AFFITOPE AD-02、LY-3002813、BAN-2401、Neurostem-AD、CT-1812、ID-1201、NIC5-15、BI-425809、Posiphen、PQ-912、苔藓抑素-1、Apabetalone、PBT-2、RIV-1061-IR、MEDI-1814、PF-05236812、SAR-228810、Lu-AF20513、PRI-002、IRX-4204、GC-021109、AAD-2004、CTS-21166、LY-3323795、苯磷硫胺、bisnorcymserine、MDR-1339、KHK-6640和NPT-088。

所述tau蛋白去除剂和产生抑制剂的实例包括tau蛋白疫苗、tau蛋白去除抗体、tau蛋白修饰抑制剂、tau蛋白凝固抑制剂和tau蛋白水解促进剂。具体实例包括TRx-237、TPI-287、ABBV-8E12、RG-6100、AADvac1、RO7105705、PTI-80、JNJ-63733657、UCB-0107、BIIB-076、MC-1、ACI-35和AZP-2006。

上述治疗药物可以根据患者的症状以适当组合使用。

6. 本发明的治疗药物

可以使用的上述阿尔茨海默氏病的治疗药物根据症状的严重程度(轻度、中度、重度等)而不同。因此，可以使用上述本发明的用于辅助确定阿尔茨海默氏病的进展程度的方法的确定结果来确定待施用于测试动物的治疗药物。因此，本发明提供了用于其阿尔茨海默氏病的进展程度已经确定的测试动物(患者)的阿尔茨海默氏病的治疗药物。

如上所述，AD患者的血液中的S38AA短片段的量显著增加，并且血液中的S38AA长片段的量和阿尔茨海默氏病的严重程度(认知功能障碍的进展)之间存在正相关。因此，本发明提供了用于阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物，其含有以下作为活性成分：减少具有阿尔茨海默氏病的患者或可能患有阿尔茨海默氏病的患者(人)的体内的S38AA短片段的量的药物，或抑制具有阿尔茨海默氏病的患者或可能患有阿尔茨海默氏病的患者(人)的体内的S38AA短片段的产生的药物。如本文所用，具有阿尔茨海默氏病的患者或可能患有阿尔茨海默氏病的患者的体内的S38AA短片段的量是，例如，在该患者或可能患有阿尔茨海默氏病的患者的生物组织或体液中含有的S38AA短片段的量。具体地，可以提及血液、脑脊液、尿液、唾液、泪液等。

减少S38AA短片段的量的药物是例如中和抗体，并且它可以通过结合患者或可能患有阿尔茨海默氏病的患者的体内的S38AA短片段而减少体内的游离S38AA短片段。抑制S38AA短片段的产生的药物是例如通过切割S38AA长片段而产生38AA短片段的酶的抑制剂，并且它们各自都可以通过本领域技术人员已知的方法获得。

7. 用于筛选阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质的方法

本发明提供了通过使用测试物质是否去除S38AA短片段或其是否抑制S38AA短片段的产生作为指标来选择用于阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质的方法，以及通过所述方法获得的物质。在本发明的筛选方法中，选择减少血液中的S38AA短片段的量或下调S38AA短片段的产生的物质作为阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质。

待经受本发明的筛选方法的测试物质可以是任何已知或新型的化合物。其实例包括核酸，碳水化合物，脂质，蛋白，肽，有机低分子量化合物，使用组合化学技术产生的化合物文库，随机肽文库，源自微生物、动物和植物、海洋生物等的天然组分等。

例如，本发明的筛选方法可以包括：

(i)使测试物质与允许测量S38AA短片段的产生的细胞接触的步骤；(ii)测量与所述测试物质接触的细胞中的S38AA短片段的产生量并将产生量与不与所述测试物质接触的对照细胞中的S38AA短片段的产生量进行比较的步骤；和(iii)基于上述(ii)的比较结果，选择下调S38AA短片段的产生量的测试物质作为阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质的步骤。

另外，本发明的筛选方法可以包括：

(i)使测试物质与形成S38AA短片段的酶接触的步骤；(ii)测量与所述测试物质接触的酶中的S38AA短片段的产生量并将产生量与不与所述测试物质接触的对照酶中的S38AA短片段的产生量进行比较的步骤；和(iii)基于上述(ii)的比较结果，选择下调S38AA短片段的产生量的测试物质作为阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质的步骤。上述酶底物没有特别限制，只要其产生S38AA短片段，并且，例如，可以提及S38AA、S38AA长片段、S38AA片段等。

此外，例如，可以包括(i)使测试物质与S38AA短片段接触的步骤，(ii)测量与所述测试物质接触后剩余的游离S38AA短片段的量并将所述量与当所述游离S38AA短片段不与所述测试物质接触时所述游离S38AA短片段的量进行比较的步骤，和(iii)基于上述(ii)的比较结果，选择通过结合S38AA短片段下调游离S38AA短片段的量的测试物质作为阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质的步骤。所述方法可以通过如下进行：将测试物质添加至含有产生上述S38AA短片段的酶及其底物的体系中，或者将测试物质添加至含有预先制备的S38AA短片段的体系中。或者，在(i)使测试物质与S38AA短片段接触的步骤中，由于接触，S38AA短片段可能形成沉降物(例如，免疫沉淀等)。

待用于本发明的筛选方法的“细胞”意指允许评估测量目标S38AA短片段的产生水平的细胞。细胞的实例包括能够天然产生测量目标的S38AA短片段的细胞，能够通过刺激产生S38AA短片段的表达S38AA的细胞，以及能够产生S38AA短片段的基因工程改造的细胞。

能够天然产生S38AA短片段的细胞没有特别限制，并且作为这种细胞，可以使用哺乳动物(例如，人、小鼠等)的原代培养细胞，从所述原代培养细胞诱导的细胞系等。已知S38AA在U251细胞和SHSY-5Y细胞中表达，并且还在BE(2)-C细胞和SK-N-MC细胞中表达。另外，也可以使用已知技术来产生过表达S38AA或用FLAG标签标记的S38AA等的基因工程改造的细胞等。通过培养，从表达S38AA的细胞切割S38AA，并且释放S38AA短片段。当产生的S38AA短片段的量少时，可以通过在容易引起S38AA的切割的条件下适当地培养来测量S38AA短片段的产生。容易引起S38AA的切割的条件的实例包括在葡萄糖耗竭培养基或含有已知生理刺激大脑的物质的培养基中培养。这种物质的具体实例包括细胞因子，诸如TNFα、干扰素-γ、白介素-1、白介素-6等，淀粉样蛋白β或其聚集体等。

使测试物质和允许测量S38AA短片段的产生的细胞在培养基中接触。根据允许测量S38AA短片段的产生的细胞适当选择培养基。其实例包括基本必需培养基(MEM)，含有约5-20%胎牛血清的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)等。以相同的方式适当确定培养条件。例如，培养基的pH为约6-约8，培养温度通常为约30-约40℃，并且培养时间为约0.1-约72小时。

测试物质和形成S38AA短片段的酶之间的接触在含有该酶及其底物的反应体系中实施。可以适当设置反应体系的酶浓度、底物浓度、pH、温度等，以及酶底物、反应时间等。

如本文所用，作为产生S38AA短片段的酶，可以使用含有该酶的溶液。溶液的实例包括可以形成S38AA短片段的体液(血浆等)、器官或组织提取物、细胞提取物等。

S38AA短片段的产生量可以通过根据(5. 本发明的方法)的项目中描述的方法测量细胞培养上清液或反应体系中释放的S38AA短片段的量来测量。

可以优选基于存在或不存在显著差异来比较产生量。可以在测量与测试物质接触的细胞或酶中的S38AA短片段的产生量之前或同时，测量不与测试物质接触的对照细胞或酶中的S38AA短片段的产生量。

通过本发明的筛选方法获得的物质可用作用于开发阿尔茨海默氏病的新的治疗或预防药物的候选物质。

[实施例]

在下面通过参考实施例详细解释了本发明；然而，本发明不限于此。

实施例1：鉴定人血浆中的S38AA长片段的N-末端切割位点

在通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离源自AD患者的血浆蛋白之后，切出含有S38AA片段的凝胶片段，并在用胰蛋白酶进行凝胶内消化之后，通过液相色谱-质谱(LC-MS/MS)进行分析。对测量数据进行MASCOT数据库搜索，并确定S38AA片段的N-末端序列。

具体地，将一些AD患者的血浆的混合样品应用于4-12% Bis-Tris凝胶(invitrogen)，并通过SDS-PAGE (25 mA, 110 min, MOPS缓冲液)分离蛋白。在将凝胶用考马斯亮蓝染色染色之后，切出在80-100 kDa处看到的条带，并应用于消化过程。

将切割的凝胶片段置于96-孔微孔板中，添加乙腈，将混合物在减压下离心，添加10 mM DTT/100 mM NH₄HCO₃，并进行孵育。在去除溶剂之后，添加55 mM ICH₂CONH₂/100 mMNH₄HCO₃，并将混合物孵育。在去除溶剂之后，添加100 mM NH₄HCO₃，在减压下离心凝胶，添加0.1% RapiGest/25 mM NH₄HCO₃，并进行孵育。然后，将混合物在减压下离心干燥，添加酶溶液(50 mM NH₄HCO₃, 12.5 ng/μL胰蛋白酶)，并进行酶消化。在反应之后，将肽溶液转移至另一个96-孔微孔板中，将乙腈:milliQ:三氟乙酸(TFA)=500:500:1的混合溶剂添加至凝胶，并将获得的肽提取物在减压下浓缩。向其中添加TFA，并将混合物在减压下浓缩以提供样品用于MS分析。

通过LC-MS/MS分析获得的样品。当通过Orbitrap质谱仪获得的数据进行S38AA蛋白的氨基酸序列的MASCOT数据库搜索时，在S38AA蛋白的氨基酸序列中鉴定了多个肽片段(图1)。在这些序列中，最接近N-末端侧的肽是第399至第413位氨基酸序列，并且观察到显示该序列的MS/MS谱图(图2)。该切割位点在第398位丝氨酸(S)的C-末端侧。关于消化酶胰蛋白酶的切割，由于该酶特异性切割赖氨酸(K)或精氨酸(R)的C-末端，并且切割反应不在该片段的丝氨酸(S)的C-末端侧发生，建议在该位点处已经进行的切割。肽片段的检测揭示，纯化的S38AA片段的N-末端侧在第398至第399位S/E处被切割。此处鉴定的S38AA片段被称为S38AA长片段。

实施例2：鉴定人血浆中的S38AA短片段的N-末端切割位点

使用识别S38AA长片段的N-末端的兔来源的抗S38AA多克隆抗体(也称为“MBL”、“用于S38AA长片段的抗体”或“用于长片段的抗体”)通过免疫沉淀方法去除S38AA长片段后，使用小鼠来源的抗S38AA单克隆抗体A(使用S38AA片段的C-末端氨基酸序列的部分肽作为免疫原，建立产生抗体的杂交瘤，并分离和纯化；抗体A)，小鼠来源的抗S38AA单克隆抗体B(使用S38AA片段的C-末端氨基酸序列的部分肽作为免疫原，建立产生抗体的杂交瘤，并分离和纯化；抗体B)，或小鼠来源的抗S38AA单克隆抗体C(使用大肠杆菌中的S38AA长片段的重组蛋白作为免疫原建立产生抗体的杂交瘤，并分离和纯化；抗体C)，将剩余的S38AA片段进行免疫沉淀，其级分通过反相柱纯化，用胰蛋白酶消化，通过LC-MS/MS分析，并测定S38AA片段的N-末端序列。

具体地，向AD患者的血浆的合并混合物中添加含有蛋白酶抑制剂(cOmpleteTablets Mini, Roche)的PBS，并且进一步添加蛋白G Mag Sepharose Xtra (珠粒, GEHEALTHCARE)并混合以去除内源性免疫球蛋白。在去除珠粒之后，将用于长片段的抗体添加至上清液中，并进行抗原-抗体反应。在混合之后，新添加珠粒，并去除含有用于长片段的抗体和吸附至所述抗体的S38AA长片段的回收蛋白。向去除珠粒后的上清液中添加前述抗体A、B或C，并进行抗原-抗体反应。在混合之后，新添加珠粒，并收集珠粒以获得抗体和吸附在抗体上的S38AA片段。将8M尿素/1% TFA溶液添加至通过免疫沉淀回收的珠粒，并洗脱S38AA片段。浓缩获得的含有S38AA片段的溶液，并通过反相柱(ZORBAX 300SB-C3，4.6x150 mm，具有保护柱，Agilent)分离总量。分离条件如下表1中所示。使用两种识别S38AA片段的C-末端侧区域的抗体通过夹心ELISA测量获得的每种级分，用酶溶液(1M NH₄HCO₃，10 mM CaCl₂，1ng/μL胰蛋白酶)消化含有S38AA片段的级分，并将获得的肽用GL-tip SDB和GL-Tip GC (GLSciences)浓缩。

通过LC-MS/MS分析获得的肽。当通过Q-Exactive HF质谱仪获得的数据进行S38AA蛋白的氨基酸序列的MASCOT数据库搜索时，以最高评分鉴定S38AA，并鉴定多个肽片段(图3)。在这些序列中，最接近N-末端侧的肽是第617至第627位序列，并且观察到显示该序列的MS/MS谱图(图4)。该切割位点在第616位天冬酰胺(N)的C-末端侧。关于消化酶胰蛋白酶的切割，由于该酶特异性切割赖氨酸(K)或精氨酸(R)的C-末端，并且切割反应不在该片段的天冬酰胺(N)的C-末端侧发生，显示在该位点处已经进行的切割。肽片段的检测揭示，纯化的S38AA片段在第617至第618位N/G处被切割。此处鉴定的S38AA片段被称为S38AA短片段。

[表1]

表1 反相柱纯化分离条件

实施例3：鉴定人血浆中的S38AA长片段的C-末端切割位点

通过抗体柱纯化方法，使用实施例2中使用的“兔来源的S38AA长片段的多克隆抗体(用于长片段的抗体)”，分离S38AA长片段，切出含有S38AA长片段的凝胶片段，并且用胰蛋白酶进行凝胶内消化之后，通过LC-MS/MS分析。对测量数据进行MASCOT数据库搜索，并确定S38AA长片段的C-末端片段序列。

具体地，向一些AD患者的血浆的混合样品中添加50 mM Tris-HCl/0.05% Tween-20 (pH 7.4)，并将该混合物应用于阴离子交换柱纯化(Hitrap Q FF, GE HEALTHCARE)。相继地，其用50 mM磷酸/0.05% Tween-20/500 mM NaCl (pH 7.4)洗脱。将洗脱的级分应用于与用于长片段的抗体结合的柱(HiTrap NHS-活化的HP柱, GE HEALTHCARE)。该柱用PBS-T洗涤，并用0.1 M甘氨酸-HCl/0.05% Tween-20 (pH2.7)洗脱。洗脱液立即用1M Tris-HCl(pH9.0)回复至中性。将获得的样品应用至预先用50 mM Tris-HCl (pH 7.4)平衡的HiTrapQ FF柱(GE HEALTHCARE)，并去除表面活性剂。通过在减压下离心来浓缩样品，添加50 mMDTT/LDS缓冲液，并将混合物加热。将样品的总量应用至4-12% Bis-Tris凝胶(Invitrogen)，并通过SDS-PAGE (50 mA, 90 min, MOPS缓冲液)分离蛋白。用Sypro Ruby(pierce)对凝胶染色后，切出在80-100 kDa处看到的条带并应用于消化过程。

将切下的凝胶置于96-孔微孔板中，添加乙腈，并进行超声处理。其后，将混合物在减压下离心干燥，添加10 mM DTT/25 mM NH₄HCO₃，并进行孵育。去除溶剂后，添加55 mMICH₂CONH₂/25 mM NH₄HCO₃，并在遮光下进行孵育。去除溶剂后，添加50 mM NH₄HCO₃，孵育混合物，添加乙腈，并进行超声处理。去除溶剂后，将凝胶在减压下离心干燥，添加0.1%RapiGest/25 mM NH₄HCO₃，并进行孵育。其后，将混合物在减压下离心干燥，进行孵育，添加酶溶液(50 mM NH₄HCO₃, 5ng/μL胰蛋白酶)，并将混合物孵育。去除溶剂后，添加50 mMNH₄HCO₃，孵育混合物，并进行酶消化。反应后，将肽溶液转移至另一个96-孔微板中，将乙腈:milliQ:TFA=500:500:1的混合溶剂添加至凝胶中，并进行超声处理。再次重复该操作，并将获得的肽提取物在减压下浓缩以提供用于MS分析的样品。

通过LC-MS/MS分析获得的肽。当对通过Orbitrap质谱仪获得的数据进行针对S38AA蛋白的氨基酸序列的MASCOT数据库搜索时，在S38AA蛋白的氨基酸序列中鉴定多个肽片段(图5)。在这些序列中，最接近C-末端侧的肽是第1040至第1049位序列，并且观察到显示该序列的MS/MS谱图(图6)。该切割位点在第1049位亮氨酸(L)的C-末端侧。至于消化酶胰蛋白酶的切割，由于该酶特异性切割赖氨酸(K)或精氨酸(R)的C-末端，并且切割反应不发生在片段的亮氨酸(L)的C-末端测，建议在该位点处已经进行的切割。肽片段的检测揭示，S38AA长片段的C-末端在第1049至第1050位的L/R处被切割。由于S38AA短片段与实施例2中使用的“识别S38AA长片段的C-末端的抗体(抗体A、抗体B或抗体C)具有相同的反应性，因此认为S38AA短片段的C-末端也在相同位点处被切割。

实施例4：在大肠杆菌中产生S38AA长片段和S38AA短片段的重组蛋白并通过ELISA 测量它们

在大肠杆菌中产生S38AA长片段和S38AA短片段的重组蛋白。使用它们作为参考标准品，构建仅定量S38AA长片段的长ELISA和定量两种片段的总ELISA。

具体地，产生大肠杆菌BL21 (DE3)的转化体，其中引入S38AA长片段序列(399-1049氨基酸序列)和S38AA短片段序列(617-1049氨基酸序列)的质粒DNA。继续摇动培养，并通过离心收集细胞。将蛋白提取试剂B-PER (Thermo Fisher Scientific)悬浮于少量的细菌体中，通过SDS-PAGE对离心上清液进行电泳，并且证实目标蛋白的表达。将细菌体悬浮于缓冲液A (20 mM Tris HCl pH 8.0, 200 mM NaCl, 10%甘油, 20 mM咪唑)、蛋白酶抑制剂cOmplete EDTA-free (Roche)和核酸酶Benzonase中以破坏细菌体，并将悬浮液离心。使用0.22 μm过滤器，从离心上清液去除残留的细菌体，并使用HisTrap HP进行Ni亲和纯化。将目标蛋白的洗脱级分合并在一起，并用作参考标准品。参考标准品的蛋白浓度分别被测量为恰好1.4 mg/mL(长片段)和1.6 mg/mL(短片段)。

生成通过“识别S38AA长片段的N-末端侧区域的抗体(实施例2中使用的用于长片段的抗体)”、“识别C-末端侧区域的抗体A”、“抗体B”或“抗体C”的夹心ELISA(长ELISA)，以及通过两种选自“抗体A”、“抗体B”和“抗体C”的抗体的夹心ELISA(总ELISA)，其识别S38AA长片段和S38AA短片段两者共有的C-末端侧区域。作为定量的参考标准品，在大肠杆菌中制备上述重组蛋白(标准蛋白)，并通过两种ELISA进行测量。将样品应用至其上固定每种抗体的板，并孵育。洗涤3次后，添加每种HRP-标记的抗体并孵育。洗涤3次后，添加3% 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)溶液，并将混合物在遮光下孵育。最后，添加8%硫酸以终止反应，并测量450 nm处的吸光度(O.D.)。作为结果，观察到标准蛋白浓度依赖性反应，并且获得良好的校准曲线(图7)。在长ELISA中，未观察到对S38AA短片段标准蛋白的反应。

实施例5：定量人血浆中的S38AA长片段和S38AA短片段(总ELISA-长ELISA减法)

为了定量人血浆中含有的S38AA长片段和S38AA短片段，使用减法通过ELISA进行定量。

具体地，使用前述的总ELISA和长ELISA定量源自4个健康受试者以及8个中度和重度AD患者的各血浆中含有的S38AA短片段的量。根据实施例4中所述的方法进行定量。通过测量S38AA长片段标准蛋白来创建每种ELISA的校准曲线。通过从总ELISA的定量值减去长ELISA的定量值来计算S38AA短片段的量。作为结果，获得各样品中的S38AA长片段和S38AA短片段的定量值(图8)。

基于获得的结果，分析源自健康人和AD患者的血浆中的S38AA短片段和S38AA长片段的量。作为结果，发现S38AA短片段的量在健康受试者和AD患者之间是高度可区分的，并且可以与S38AA长片段的量相比以高灵敏度确定中度和重度AD患者(图9)。

实施例6：定量人血浆中的S38AA长片段和S38AA短片段(长片段免疫沉淀去除方 法)

为了定量人血浆中含有的S38AA长片段和S38AA短片段，使用免疫沉淀方法和ELISA定量进行S38AA长片段的去除。

具体地，将PBS添加至一些健康受试者和AD患者的血浆的各混合样品中，并且进一步添加蛋白G Mag Sepharose Xtra (珠粒, GE HEALTHCARE)并混合以去除内源性免疫球蛋白。反应后，将兔来源的S38AA长片段的多克隆抗体(用于长片段的抗体)添加至上清液中，进行抗原-抗体反应。反应后，将反应溶液与新的珠粒混合，并在珠粒上回收抗原-抗体复合物。通过向经回收的珠粒添加0.1M Gly-HCl (pH 2.8)，洗脱含有S38AA长片段的回收蛋白。洗脱液立即用1M Tris-HCl (pH9.0)回复至中性。获得的洗脱液(S38AA长片段级分)和上清液(S38AA短片段级分)中含有的S38AA长片段和S38AA短片段的量各自通过总ELISA定量。根据实施例4中所述的方法进行定量。通过测量S38AA长片段标准蛋白来创建每种ELISA的校准曲线。作为结果，获得各样品中的S38AA长片段和S38AA短片段的定量值(图10)。从结果表明，与S38AA长片段相比，AD患者中的S38AA短片段的量显著增加。

实施例7：通过定量每种S38AA片段比较AD诊断性能(总ELISA-长ELISA减法)

为了通过定量每种S38AA片段来比较AD诊断性能，使用减法进行ELISA定量。

具体地，使用总ELISA和长ELISA定量源自10个健康受试者和10个轻度AD患者的各血浆中含有的S38AA短片段的量和S38AA长片段的量。根据实施例4中所述的方法进行定量。通过测量S38AA长片段标准蛋白来创建每种ELISA的校准曲线。通过从总ELISA的定量值减去长ELISA的定量值来计算S38AA短片段的量。作为结果，获得各样品中的S38AA长片段和S38AA短片段的定量值(图11)。另外，表明可以通过与总量或S38AA长片段的量相比仅定量S38AA短片段的量来以高灵敏度诊断轻度AD(图12)。

实施例8：通过组合各种抗S38AA片段抗体定量人血浆中的S38AA片段 - 1

为了定量人血浆中含有的““S38AA短片段的量”和“S38AA长片段的量”的总和”，组合使用各种抗S38AA片段抗体进行ELISA定量。

具体地，通过“使用由抗体A、抗体B和抗体C中的两种的组合组成的抗体的ELISA(模式1、2或3)”定量源自4个健康受试者和8个AD患者的各血浆。根据实施例4中描述的方法进行定量。通过测量S38AA长片段标准蛋白来创建每种ELISA的校准曲线，并且获得每种样品的定量值(图14)。

模式1：使用抗体A和抗体B的ELISA

模式2：使用抗体A和抗体C的ELISA

模式3：使用抗体B和抗体C的ELISA

作为测定的结果，““S38AA短片段的量”和“S38AA长片段的量”的总和”的测量值在各样品中是相等的，并且获得一致的定量，而与使用的抗体的组合无关。

实施例9：通过组合各种抗S38AA片段抗体定量人血浆中的S38AA片段 - 2

为了定量人血浆中含有的“S38AA长片段的量”，组合使用各种抗S38AA片段抗体进行ELISA定量。

具体地，通过“使用其中一种是用于长片段的抗体且另一种是抗体A、抗体B和抗体C之一的组合的ELISA(模式4、5或6)”定量源自4个健康受试者和8个AD患者的各血浆。根据实施例4中所述的方法进行定量。通过测量S38AA长片段标准蛋白来创建每种ELISA的校准曲线，并且获得各样品的定量值(图15)。

模式4：使用用于长片段的抗体和抗体A的ELISA

模式5：使用用于长片段的抗体和抗体B的ELISA

模式6：使用用于长片段的抗体和抗体C的ELISA

作为测量的结果，“S38AA长片段的量”的测量值在各样品中是相等的，并且获得一致的定量，而与使用的抗体的组合无关。

实施例10：使用实施例8和9的结果定量人血浆中的S38AA短片段

通过从实施例8中获得的““S38AA短片段的量”和“S38AA长片段的量”的总和”减去实施例9中获得的“S38AA长片段的量”来测定“S38AA短片段的量”(图16)。

具体地，以以下组合进行减法。

模式1-4：通过从“模式1的测量结果”减去“模式4的测量结果”而获得的结果

模式1-5：通过从“模式1的测量结果”减去“模式5的测量结果”而获得的结果

模式1-6：通过从“模式1的测量结果”减去“模式6的测量结果”而获得的结果

模式2-4：通过从“模式2的测量结果”减去“模式4的测量结果”而获得的结果

模式2-5：通过从“模式2的测量结果”减去“模式5的测量结果”而获得的结果

模式2-6：通过从“模式2的测量结果”减去“模式6的测量结果”而获得的结果

模式3-4：通过从“模式3的测量结果”减去“模式4的测量结果”而获得的结果

模式3-5：通过从“模式3的测量结果”减去“模式5的测量结果”而获得的结果

模式3-6：通过从“模式3的测量结果”减去“模式6的测量结果”而获得的结果

通过减法获得的“S38AA短片段的量”显示一致的定量，而与使用的抗体的组合无关。

本申请基于在日本提交的专利申请号2018-148924(申请日：2018年8月7日)，其内容完全并入本文。

[工业适用性]

本发明可用于诊断和治疗阿尔茨海默氏病等。

Claims (18)

1.由以下氨基酸序列中的任一者组成的多肽：

(1) SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列；和

(2) 由SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列中的一个至几个氨基酸的取代、缺失、添加或插入产生的氨基酸序列。

2.抗体，其特异性识别根据权利要求1所述的多肽。

3.核酸，其编码根据权利要求1所述的多肽。

4.试剂盒，其包含根据权利要求2所述的抗体。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其进一步包含根据权利要求1所述的多肽。

6.用于检测根据权利要求1所述的多肽的方法，其包括使测试样品与根据权利要求2所述的抗体接触的步骤。

7.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其用于确定阿尔茨海默氏病。

8.用于确定阿尔茨海默氏病的试剂，其包含一种或多种能够测量根据权利要求1所述的多肽的量的抗S38AA抗体。

9.根据权利要求8所述的试剂，其中所述抗S38AA抗体是根据权利要求2所述的抗体。

10.用于确定测试动物目前患有阿尔茨海默氏病或所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的可能性的方法，其包括检测从所述动物收集的样品中的根据权利要求1所述的多肽。

11.根据权利要求10所述的方法，其包括以下步骤(i)至(iii)：

(i) 定量从测试动物收集的样品中的根据权利要求1所述的多肽的步骤，

(ii) 比较(i)中定量的所述多肽的量与从健康动物收集的样品中的所述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，和

(iii) 基于(ii)的结果，当(i)中定量的所述多肽的量高于所述对照值时，确定所述测试动物目前可能患有阿尔茨海默氏病或者所述动物在将来可能患有阿尔茨海默氏病的步骤。

12.用于辅助确定阿尔茨海默氏病的进展的方法，其包括以下步骤(i)至(iii)：

(i) 定量从患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的根据权利要求1所述的多肽的步骤，

(ii) 比较(i)中定量的所述多肽的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的所述多肽的量(下文中被称为对照值)的步骤，和

(iii) 基于(ii)的结果，当(i)中定量的所述多肽的量高于对照值时，确定所述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定所述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中所述测试动物是人。

14.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中所述样品是血液、脑脊液、唾液、泪液或尿液。

15.根据权利要求10至14中任一项所述的方法，其进一步包括检测其他一种或多种阿尔茨海默氏病诊断标志物。

16.用于患者的阿尔茨海默氏病的治疗药物，所述患者的阿尔茨海默氏病的进展通过以下步骤(i)-(iv)确定：

(i) 定量从目前患有或可能患有阿尔茨海默氏病的测试动物收集的样品中的根据权利要求1所述的多肽的步骤，

(ii) 比较(i)中定量的前述多肽的量与在过去从所述测试动物收集的样品中的前述多肽的量(下文中为对照值)的步骤，

(iii) 基于(ii)的结果，当(i)中定量的前述多肽的量高于对照值时，确定前述测试动物中的阿尔茨海默氏病正在进展，以及当所述量小于对照值时，确定前述测试动物的阿尔茨海默氏病正在改善的步骤，和

(iv) 基于(iii)的结果选择阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的步骤。

17.阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物，其包含以下作为活性成分：减少阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的根据权利要求1所述的多肽的量的药物，或抑制阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的所述多肽的产生的药物。

18.用于筛选阿尔茨海默氏病的治疗或预防药物的候选物质的方法，其包括使用以下作为指标：阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的根据权利要求1所述的多肽的量的减少，或阿尔茨海默氏病患者或可能患有阿尔茨海默氏病的人的体内的所述多肽的产生的抑制。

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