KR20210013543A

KR20210013543A - 내피 세포 기능장애를 조절하기 위한 rps2 펩타이드의 용도

Info

Publication number: KR20210013543A
Application number: KR1020207022825A
Authority: KR
Inventors: 응옥 타이; 조나단 폴레트
Original assignee: 이매진 파마
Priority date: 2018-01-09
Filing date: 2019-01-09
Publication date: 2021-02-04
Also published as: EP3737398A1; WO2019138219A1; AU2019207951A1; JP2021510157A; CN112423772A; BR112020013845A2; CA3087785A1; MX2020007336A; US20230210942A1

Abstract

본원에는 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환의 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 제형이 제공되며, 폴리펩타이드 또는 이의 단편은 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 55%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하는 아미노산을 포함한다. 또한 이와 관련된 방법 및 용도가 제공된다.

Description

내피 세포 기능장애를 조절하기 위한 RPS2 펩타이드의 용도

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2018년 1월 9일에 출원된 앞서 출원된 미국 가특허 출원 번호 제 62/615,223호의 이익을 주장하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

내피 세포(endothelial cell) 및 맥관구조(vasculature)의 변화는 광범위한 인간 질환의 발병에서 중심적인 역할을 한다(더 포괄적인 검토를 위해, " Vascular Endolium and Human Diseases" Int. J. of Bio. Sciences, 2013; 9(10):1057-1069 참조). 내피 세포의 층으로 구성된 내피(endothelium)는 혈관의 내부 표면에 정렬되어 있으며, 혈관계의 중요한 측면, 예컨대 장벽 기능의 제공, 혈액 응고, 염증, 새로운 혈관의 형성, 혈관수축 및 혈관확장에 관여한다. 내피는 말초 혈관 질환, 뇌졸중, 심장 질환, 당뇨병, 인슐린 저항성, 만성 신부전, 종양 성장, 전이, 정맥 혈전증, 및 중증의 바이러스 감염성 질환에 직접 관여한다. 혈관 내피의 기능장애는 따라서 인간 질환의 특징이며, 손상된 내피 기능은 고혈당증 및 당뇨병(제1형 및 제2형), 및 뇌졸중, 폐 고혈압 및 말초 혈관 질환을 포함하는 심혈관 질환, 동맥경화증, 및 고콜레스테롤혈증을 포함하지만 이에 한정되지 않는 많은 임상 질환을 가진 환자들에서 자주 볼 수 있다.

본 발명은 내피 세포 기능장애와 관련된 질환의 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 당뇨병 동물로부터 분리된 기능장애 내피 세포의 성장을 정상화시킬 수 있을뿐만 아니라, 폐 고혈압을 앓고 있는 환자로부터 분리된 기능장애 내피 세포의 성장을 정상화시키는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 조성물은 또한 대조군과 비교하여 내피 세포의 성장률을 증가시키는 한편, 유해한 폐동맥 고혈압(pulmonary arterial hypertension, PAH) 내피 세포의 생존능력을 감소시키는 것으로 나타났다. 본 발명의 조성물은 또한 내피 세포를 포함하는, 많은 세포 유형에서 세포 항상성을 복원시키는 데에 유용하다.

이들 놀라운 결과는 조성물이 인간을 포함하는 포유류에서 많은 임상 질환, 특히 내피 세포에 영향을 미치는 질환(당뇨병, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 고혈압, 및 죽상 동맥경화증)을 치료하는 데 효과적임을 나타낸다. 유익한 효과는 세포 항상성의 복원 또는 조절뿐만 아니라, 내피 세포 및 내피 전구 세포의 자극 및 지지에 의한 그것의 혈관 치유 및 재생의 증가와 관련될 수 있다.

본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 조성물, 제형 및/또는 약제는 단백질 또는 활성 폴리펩타이드(천연이거나 합성이고, (D 또는 L)이며 그것의 변형, 단편 및 유사체를 포함함)를 포함하는 활성제를 포함하고, 여기에서 폴리펩타이드는 하기 표 I에 열거된 서열번호 01-04 중 하나 이상으로부터의 아미노산 서열을 포함한다. 서열번호 01은 40개의 리보솜 단백질 S2(RPS2)의 활성 영역을 포함하는 단편을 나타내는 반면, 서열번호 02, 03 및 04는 그것의 단편을 나타낸다.

[표 1]

서열번호 01 내지 04:

서열번호 01 (293 aa; 대략 31 kDa의 단편)

MADDAGAAGGPGGPGGPGMGNRGGFRGGFGSGIRGRGRGRGRGRGRGRGARGGKAEDKEWMPVTKLGRLVK

DMKIKSLEEIYLFSLPIKESEIIDFFLGASLKDEVLKIMPVQKQTRAGQRTRFKAFVAIGDYNGHVGLGVK

CSKEVATAIRGAIILAKLSIVPVRRGYWGNKIGKPHTVPCKVTGRCGSVLVRLIPAPRGTGIVSAPVPKKL

LMMAGIDDCYTSARGCTATLGNFAKATFDAISKTYSYLTPDLWKETVFTKSPYQEFTDHLVKTHTRVSVQR

TQAPAVATT

서열번호 2: (159 aa; 대략 17 kDa의 단편)

GHVGLGVKCSKEVATAIRGAIILAKLIVPVRRGYWGNKIGKPHTVPCKVTGRCGSVLVRLIPAPRGTGIVS

APVPKKLLMMAGIDDCYTSARGCTATLGNFAKATFDAISKTYSYLTPDLWKETVFTKSPYQEFTDHLVKTH

TRVSVQRTQAPAVATT

서열번호 3: (75 aa; 대략 8 kDa의 단편)

SIVPVRRGYWGNKIGKPHTVPCKVTGRCGSVLVRLIPAPRGTGIVSAPVPKKLLMMAGIDCYTSARGCTAT

LGN

서열번호 4 (87 aa; 대략 9 kDa의 단편)

GHVGLGVKCSKEVATAIRGAIILAKLSIVPVRRGYWGNKIGKPHTVPCKVTGRCGSVLVRLIPAPRGTGIV

SAPVPKKLLMMAGIDD

발명의 제1 양태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 단편은 서열번호 1, 2, 3, 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가진다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 단편은 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가진다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 단편은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가진다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 단편은 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가진다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 단편은 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가진다. 활성제를 포함하는 제형 및 약학 조성물의 예는 활성제가 서열번호 1 내지 4 중 하나 이상에 따른 폴리펩타이드 또는 이의 단편을 포함하는 미국 특허 공개번호 2018/0133280에 기재되어 있다.

제2 양태에서, 본 발명은 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환의 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 제형을 제공하며, 여기에서 폴리펩타이드는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 단편이다. 폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가질 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가질 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가질 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가질 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가질 수 있다.

폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열로 이루어질 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열로 이루어질 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열로 이루어질 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열로 이루어질 수 있다. 폴리펩타이드는 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 심혈관 질환, 죽상 동맥경화증, 비만 및 폐 동맥 고혈압으로부터 선택될 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 심혈관 질환, 예를 들어 죽상 동맥경화증일 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 비만일 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 폐 동맥 고혈압일 수 있다.

제형은 경구용 약학 제형일 수 있다. 제형은 비경구용 약학 제형일 수 있다. 제형은 국소용 제형일 수 있다.

제형은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 희석제 및/또는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. 제형은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체(들)를 포함할 수 있다. 제형은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 희석제(들)를 포함할 수 있다. 제형은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제(들)를 포함할 수 있다.

제형은 수성 약학 제형일 수 있다. 펩타이드는 수성 약학 제형에 0.05 내지 5 μg/L의 농도로 존재할 수 있다. 예를 들어, 펩타이드는 0.08 내지 3 μg/L의 농도로 존재하거나, 또는 0.1 내지 1 μg/L로 존재할 수 있다. 펩타이드는 적어도 0.05 μg/L, 예를 들어 적어도 0.7, 0.1 또는 0. 5 μg/L의 농도로 존재할 수 있다. 펩타이드는 5 μg/L 이하, 예를 들어 4, 3 또는 2 μg/L 이하(예를 들어, 1 μg/L 이하)의 농도로 존재할 수 있다. 수성 약학 제형은 완충액을 포함할 수 있다. 완충액은 약 7 내지 약 8의 pH를 가질 수 있고, 예를 들어 완충액은 약 7.2 내지 약 7.6의 pH를 가질 수 있으며, 예를 들어 완충액은 생리학적 pH(약 7.4의 pH, 예를 들어 7.3 내지 7.5의 pH)를 가질 수 있다. 완충액은 인산 완충 생리식염수일 수 있다.

제3 양태에서, 본 발명은 내피 세포 성장을 조절하는 방법을 제공하며, 방법은 내피 세포를 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 제형과 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기에서 폴리펩타이드 또는 제형은 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 제형(예를 들어, 본 발명의 양태 또는 구현예의 폴리펩타이드 또는 제형)이다. 폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 접촉 단계는 수용액에서 수행될 수 있다. 방법은 시험관 내(in vitro) 방법일 수 있다.

제4 양태에서, 본 발명은 내피 세포 성장을 조절하기 위한 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 제형의 용도를 제공하며, 여기에서 폴리펩타이드 또는 제형은 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 제형(예를 들어, 본 발명의 양태 또는 구현예의 폴리펩타이드 또는 제형)이다. 폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.

제5 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 폴리펩타이드(예를 들어, 본 발명의 양태 또는 구현예의 폴리펩타이드)를 포함하는 조성물의 치료학적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열 또는 이의 활성 단편 또는 유사체를 포함할 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 심혈관 질환, 죽상 동맥경화증, 비만 및 폐 동맥 고혈압으로부터 선택될 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 심혈관 질환, 예를 들어 죽상 동맥경화증일 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 비만일 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 폐 동맥 고혈압일 수 있다.

제6 양태에서, 본 발명은 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 본원에 개시된 적어도 하나의 폴리펩타이드(예를 들어, 본 발명의 양태 또는 구현예의 폴리펩타이드)의 용도를 제공한다. 폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 심혈관 질환, 죽상 동맥경화증, 비만 및 폐 동맥 고혈압으로부터 선택될 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 심혈관 질환, 예를 들어 죽상 동맥경화증일 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 비만일 수 있다. 내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 폐 동맥 고혈압일 수 있다.

제2, 제3, 제4, 제5 또는 제6 양태 중 임의의 양태에서, 폴리펩타이드 또는 적어도 하나의 폴리펩타이드는 제1 또는 제2 양태에서 정의된 폴리펩타이드일 수 있다.

제3 또는 제4 양태 중 임의의 양태에서, 제형은 제2 양태에서 정의된 제형일 수 있다.

다음의 용어가 발명의 상이한 양태를 기술하기 위해 본 개시에서 사용된다. 이들 용어는 단지 설명 목적으로 사용되며 발명의 어떠한 양태에 대한 범위를 제한하려는 의도가 아니다.

본원에서 사용되는 바와 같은 "활성 성분", "화합물" 및/또는 "활성제"는 상호교환적으로 사용될 수 있고, 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드 단편, 또는 이의 유사체를 지칭하며, 그것에 대한 임의의 변형을 포함하고, 서열번호 1; 또는 서열번호 2, 또는 서열번호 3, 서열번호 4, 또는 이들의 조합 중 하나 이상으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가진다. 활성 성분/화합물을 포함하는 본 발명의 예시적 제형은 제형과 관련하여 "IMG-1" 또는 "IMG-2"의 명명법을 사용하여 본원에서 언급될 수 있고, 활성 화합물의 임의의 특정 투여량 또는 농도를 함축하지 않는다.

본원에서 사용되는 바와 같은 "약학적 제형", "약학 조성물", "제형", 또는 "조성물"은 포유류, 예컨대 인간 또는 동물에게 직접 또는 재구성 후에 투여하기에 적합하도록 제조된, 소정량의 활성 화합물을 함유하는 액체(수성, 겔, 또는 연고), 또는 고체 형태를 (상호교환적으로) 지칭한다. 필요에 따라, 제형은 약학적으로 허용 가능한 담체, 완충액, 등장화제, 계면활성제 및/또는 첨가제 뿐만 아니라, 동시 치료 또는 병용 치료가 효과적일 수 있는 경우에 추가적인 활성제를 함유할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료", 및 본원에서 사용된 문법적 동등물은 질환 또는 상태 증상을 완화, 약화 또는 개선하는 것, 추가적인 증상을 방지하는 것, 증상의 기저에 있는 대사적 원인을 개선 또는 방지하는 것, 질환 또는 상태를 억제하는 것, 예를 들어 질환 또는 상태의 발생을 정지시키는 것, 질환 또는 상태를 완화시키는 것, 질환 또는 상태의 퇴행을 유발하는 것, 질환 또는 상태에 의해 유발된 상태를 완화시키는 것, 또는 질환 또는 상태의 증상을 중단시키는 것, 및 예방을 포함한다. 용어는 추가로 치료적 이익 및/또는 예방적 이익을 달성하는 것을 포함한다. 치료적 이익이란 치료될 근본적인 장애의 근절 또는 개선을 의미한다. 또한, 치료적 이익은, 환자가 여전히 근본적인 장애로 고통받을 수 있음에도 불구하고, 환자에게서 개선이 관찰되도록 근본적인 장애와 관련된 하나 이상의 생리학적 증상의 근절 또는 개선으로 달성된다. 예방적 이익을 위해, 조성물은 해당 질환의 진단이 이루어지지 않을 수 있어도, 특정 질환이 발생할 위험이 있는 환자에게, 또는 질환의 생리학적 증상의 하나 이상을 보고하는 환자에게 투여될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같은, "치료학적 유효량" 또는 "유효량"은 언급된 효과를 달성하기에 충분한 활성 화합물의 양을 나타낸다. 포유류, 예컨대 인간에서의 상태, 예컨대 당뇨병 또는 고혈압을 치료하기 위한 치료학적 유효량은 환자 또는 환자 집단에서 임상적으로 관련된 종점(end-point), 예컨대 당뇨병에서의 감소된 혈당 수준 또는 고혈압에서의 감소된 혈압 또는 고중성지방혈증 또는 고콜레스테롤혈증에서의 감소된 콜레스테롤을 달성할 수 있는 활성 화합물의 양이다. 비제한적인 예로서, IMG-1 조성물을 포함하는 제형의 유효량의 투여는 동물 연구에서 200 mg/dL 미만으로 혈당을 강하시키고(당뇨병 동물 모델에서); 140/90 mmHg 미만으로 혈압을 강하시키며; 200 mg/dL 미만으로 총 콜레스테롤을 강하시키는 것으로 나타났다.

본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "서열 동일성"은 서열간 동일성 또는 유사성의 관점에서 나타낸 둘 이상의 아미노산 서열 사이의 동일성을 나타낸다. 서열 동일성은 백분율 동일성의 관점에서 측정될 수 있고; 백분율이 높을수록 더 많은 서열이 동일하다. 백분율 동일성은 서열의 전체 길이에 걸쳐 계산된다. 아미노산 서열의 상동체 또는 오르토로그(ortholog)는 표준 방법을 사용하여 정렬될 때 상대적으로 고도의 서열 동일성을 가진다. 이 상동성은 오르토로그 단백질이, 보다 먼 관련이 있는 종(예를 들어, 인간과 C. 엘레간스(C. elegans) 서열)과 비교하여 보다 밀접하게 관련이 있는 종(예를 들어, 인간과 마우스 서열)으로부터 유래될 때 더욱 중요하다.

비교를 위한 서열의 정렬 방법은 당해 분야에 잘 알려져 있다. 다양한 프로그램 및 정렬 알고리즘이 문헌: Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482, 1981; Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970; Pearson & Lipman, Proc. Nat. Acad Sci. USA 85:2444, 1988; Higgins & Sharp, Gene, 73:23744, 1988; Higgins & Sharp, CABIOS 5:151-3, 1989; Corpet et al., Nuc. Acids Res. 16:10881-90, 1988; Huang et al. Computer Appls. in Biosciences 8, 155-65, 1992; 및 Pearson et al., Meth Mol. Bio. 24:307-31, 1994에 기술되어 있다. Altschul 등(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990)은 서열 정렬 방법 및 상동성 계산의 상세한 고려사항을 제시한다. 서열 동일성의 수준은 미국 국립 생물공학 정보 센터(NCBI, National Library of Medicine, Building 38A, Room 8N805, Besda, Md. 20894, US)를 포함한 여러 공급처 및 인터넷 상에서 이용 가능한 NCBI 염기 국소 정렬 탐색 도구(Basic Local Alignment Search Tool, BLAST)(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990)를 사용하여 결정될 수 있다.

본 발명은 개시의 단백질 또는 펩타이드와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 예를 들어 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 동일성을 가지는 단백질 및 펩타이드를 포함하며; 이러한 단백질은 개시의 상응하는 단백질 또는 펩타이드의 활성을 가질 수 있다.

본 발명은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제 또는 추가적인 활성제와 조합된, 서열번호 1, 서열번호.: 2, 서열번호 3, 서열번호 4 중 하나 이상에 상응하는 단백질, 폴리펩타이드 펩타이드 단편, 또는 유사체(천연이거나 합성이거나), 또는 이의 활성 영역을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 약학 조성물은 경구용(혀밑을 포함), 비경구용(예를 들어 피하, 근육내, 또는 정맥내), 및/또는 경피, 비강내 및 흡입 투여를 포함한 피부/국소용으로 제형화될 수 있다.

본 발명은 약학적 용도로 제형화되고 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 희석제, 부형제 및/또는 담체를 추가로 포함하는 개시의 활성물질(예를 들어, 본원에 개시된 단백질, 폴리펩타이드 펩타이드 단편, 또는 유사체)을 포함하는 제형을 제공한다. 그러므로 본 발명은 적어도 하나의 활성 성분 외에, 약학적으로 허용 가능한 희석제, 부형제 및/또는 담체를 포함할 수 있는 약학적 제형을 포함한다. 이러한 제형은 개시의 방법에 사용될 수 있다. 추가적으로 또는 대안으로, 약학 제형은 완충액, 안정화제 및/또는 당업자에게 잘 알려져 있는 다른 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 비독성이어야 하며 활성 성분의 효능을 간섭하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 본질은 임의의 적합한 경로일 수 있는 투여 경로에 좌우될 것이다. 투여 경로는 경구일 수 있다. 투여 경로는 비경구 경로일 수 있고, 특히 주입 또는 주사(바늘을 사용하거나 바늘 없이)에 의한 것일 수 있다. 투여 경로는 피하 주사일 수 있다. 투여 경로는 정맥내 주사 또는 주입일 수 있다.

또한 기능장애 내피 세포 활성과 관련되거나 또는 이에 의해 유발되는 포유류에서의 하나 이상의 상태를 예방하거나, 상태의 개시를 지연시키거나, 또는 상태의 중증도를 감소시키는 방법이 제공된다.

원하는 생물학적 효과를 달성하기에 필요한 특정 제형의 화합물의 양, 범위, 또는 투여량은 그것이 의도되는 용도, 투여 경로, 대상체, 및 수여자(체중, 연령(성인 또는 청소년), 성별)와 같은 여러 요인에 좌우될 것이다. 용량은 대상체에게 단일 단위 용량으로서, 여러 별개의 단위 용량으로서, 또는 연속적인 주입/흡수로서 투여될 수 있다. 조성물은 다른 화합물 또는 항고혈압제 또는 콜레스테롤 강하제와 같은 약학 제품과의 동시 투여에 적합할 수 있다.

본 발명 및 개시는 또한 다음 번호의 조항의 주제를 포함한다:

1. 서열번호 1 - 4 중 하나 이상에 따른 단백질 또는 활성 폴리펩타이드, 또는 이의 활성 단편 또는 유사체를 포함하는 조성물의 치료학적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 내피 기능장애를 특징으로 하는 포유류의 질환을 치료하는 방법.

2. 질환이 심혈관 질환, 예컨대 죽상 동맥경화증, 제1형 당뇨병 및 제2형 당뇨병을 포함한 당뇨병, 비만, 폐 동맥 고혈압을 포함한 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 및 고지혈증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 조항 1의 방법.

3. 내피 세포 성장을 조절하는 방법으로서, 서열번호 1 - 4에 따른 폴리펩타이드, 또는 이의 활성 단편 또는 유사체를 포함하는 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.

4. 당뇨병, 고혈당증, 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 대사 장애, 및/또는 비만 중 하나 이상의 치료를 위한 제형으로부터 선택된 활성제의 동시 투여를 추가로 포함하는, 조항 1 내지 3 중 어느 하나의 방법.

5. 서열번호 1 - 4에 따른 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 폴리펩타이드, 또는 이의 활성 단편 또는 유사체의 치료학적 유효량, 및 약학적 부형제, 담체, 등장화제, 계면활성제, 또는 완충액 중 하나 이상을 포함하는 약학 제형.

6. 서열번호 1 - 4에 따른 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 활성 폴리펩타이드, 또는 이의 활성 단편 또는 유사체를 포함하는 조성물.

도 1은 펩타이드 분자를 이용한 내피 세포의 치료가 세포 증식 검정에 의해 측정되고 상대적 광학 밀도(OD)로서 표시된 바와 같이 내피 세포의 수를 증가시키는 것을 도시한다. IMG-1은 전장 펩타이드로 처리된 세포를 나타내며, 여기에서 명명법 IMG-1은 서열번호 1을 나타내고; IMG-2는 17 kDa 단편으로 처리된 세포를 나타내며; IMG-2x는 14 kDa 펩타이드 단편으로 처리된 세포를 나타내고, 여기에서 명명법 IMG-2 및 IMG-2x는 전장 단편의 절단 후에 정제된 단편 크기를 나타내며; IMG-2는 서열번호 2에 상응하고, IMG-2x는 전장 단백질의 N-말단 영역의 단편에 상응한다.
도 2는 펩타이드 분자를 이용한 내피 세포의 치료가 배양에서 CD31/CD133 양성 세포의 퍼센트로 측정된 바와 같이 내피 전구 세포의 수를 증가시키는 것을 도시한다. IMG-1은 전장 펩타이드로 처리된 세포를 나타내며, 여기에서 명명법 IMG-1은 서열번호 1을 나타내고; IMG-2는 17 kDa 단편으로 처리된 세포를 나타내며; IMG-2x는 14 kDa 펩타이드 단편으로 처리된 세포를 나타내고, 여기에서 명명법 IMG-2 및 IMG-2x는 전장 단편의 절단 후에 정제된 단편 크기를 나타낸다.
도 3은 당뇨병-관련 심장 합병증 및 고혈압에 대한 IMG-1의 효과를 도시한다. 경구 또는 정맥내 투여에 상관없이, IMG-1를 이용한 주커 당뇨병 지방 래트의 치료는 수축기 및 이완기 혈압 둘 다에 대해 mmHg로 측정된 바와 같이 혈압을 정상화시킨다. IMG-1은 서열번호 1에 상응하는 전장 펩타이드를 나타내고; 대시선은 정맥내 투여에 의해 치료된 래트를 나타내며, 대시선 및 점선은 경구 투여에 의해 치료된 래트를 나타낸다.
도 4는 폐 카테터 삽입을 진행한 환자(Bcl-2 음성; 즉 비-폐동맥 고혈압 환자)로부터 수집된 내피 세포의 치료가 세포의 상대적 생존능력에 의해 측정된 바와 같이 Bcl-2 음성 폐 고혈압 내피 세포의 세포 성장을 증가시킨다는 것을 도시한다. 그래프에서, IMG-1은 전장 펩타이드(서열번호 1)를 나타내고, IMG-2는 17 kDa 단편(서열번호 2)(전장 단백질의 절단 후 정제됨)을 나타낸다.
도 5는 폐 카테터 삽입을 진행한 Bcl-2 양성 환자로부터 수집된 내피 세포의 치료가 세포의 상대적 생존능력에 의해 측정된 바와 같이, Bcl-2 양성 폐 고혈압 내피 세포의 세포 성장의 손상을 초래한 것을 도시한다. 그래프에서, IMG-1은 전장 펩타이드(서열번호 1)를 나타내고, IMG-2는 17 kDa 단편(서열번호 2)(전장 단백질의 절단 후 정제됨)을 나타낸다.

본 발명은 또한 예시적이며 완전하지 않은 것으로 의도되는 실시예 및 실험 결과를 통해 설명되며, 이에 한정되지 않는 것으로 이해되어야 한다.

실시예

실시예 1

서열번호 01에 상응하는 전장 폴리펩타이드를 하이드록실아민(NH2OH)으로 분해하였다. 하이드록실아민은 전장 단백질을 아미노산 134에서 위치 P1의 Asn 및 위치 P1'의 Gly에서 14 kDa 단편 및 17 kDa 단편의 2개의 하위단위로 절단한다. 그 결과로 생성된 14 kDa 및 17 kDa 단편을 비변성 폴리아크릴아미드 겔에서 분해하고, 시각화한 후 겔로부터 전기 용출시켰다. 그런 후 단편을 인간 피부 미세혈관 내피 세포(Human Dermal Microvascular Endothelial Cell, CADMEC) 배양물(Cell Applications, Inc로부터 이용 가능함)에 첨가하였다. CADMEC를 제조사의 설명서를 따라 5,000 세포/웰의 농도로 96-웰 접시에서 배양하였다. 72시간 동안 항온처리한 후에, 세포에 대해 MTT 세포 증식 검정(Sigma Aldrich 세포 증식 키트)을 수행하였다. 세포 증식 키트 I(MTT)은 세포 증식, 생존능력, 및 세포독성의 정량화를 위한 비색 검정이다. 검정은 전자 결합 시약의 존재 하에 테트라졸륨 염 MTT(3-(4,5-다이메틸티아졸-2-일)-2,5-다이페닐테트라졸륨 브로마이드)의 절단에 기초한다. 그 후, 세포를 증식 시약으로 검출하고, 이는 과정 중에 세포 환원효소 살해 세포에 의해 살아있는 세포에서 황색 테트라졸 MTT로부터 자주색 포르마잔 형태로 전환된다. 용해 후에, 포르마잔 염료를 주사 다중 웰 분광분석계(ELISA 판독기)를 사용하여 정량화하였다. 측정된 흡광도는 생존 가능한 세포 수와 직접적으로 상관이 있다; 따라서 광학 밀도(OD)의 증가는 세포 수의 증가를 나타낸다.

전장 펩타이드 또는 17 kDa 단편(들)으로 처리된 CADMEC는 내피 세포 수에서 대조군을 뛰어넘는 뚜렷한 증가(각각 164% 및 157%)를 보인 한편, 14 kDa 단편으로 처리된 세포는 세포수에서 증가를 나타내지 않았다(결과는 도 1에 도시됨). 나아가, 활성제로서 서열번호 1 및 서열번호 2를 포함하는 제형으로의 처리는 대조군과 비교하여 내피 전구 세포의 수를 증가시키는 것으로 나타났으며; 서열번호 3 또는 4를 포함하는 제형은 공유된 서열 및 기능성 영역이 제공된다면 유사한 결과를 나타낼 것으로 예상하였다.

CADMEC 세포를 전장 펩타이드, 14 kDa 단편, 17 kDa 단편 중 하나를 포함하는 0.5 ug/mL 제형으로 처리한 후, 72시간 동안 성장시켰다. 72시간 항온처리 후, 세포를 CD133 및 CD31에 대해 염색하였고, 형광-활성화 세포 분류(FACS) 분석을 통해 분석하였다. CD31/CD133인 세포는 내피 전구 세포인 것으로 간주되었다. 전장 펩타이드 및 17 kDa 단편으로 처리된 두 세포 배양 샘플은 모두 도 2 및 하기 표 2에 나타낸 바와 같이, 대조군과 비교하여 내피 전구 세포의 수의 증가를 보였다(4.3%와 비교하여 11% 및 9.8%).

[표 2]

실시예 2

래트의 주커(Zucker) 당뇨병 지방(ZDF) 주(strain)는 광범위하게 알려져 있으며, 흔히 비만과 관련된 제2형 당뇨병뿐만 아니라 고혈압 및 고콜레스테롤을 연구하기 위해 사용된다. ZDF 주는 fa/fa 수컷 래트가 전부 Purina 5008의 특수 식단으로 급식될 때 생후 10 내지 12주에 당뇨병이 발병한 조기-발병 당뇨병의 동계교배된 래트 모델이다. 주커 당뇨병 지방(ZDF) 래트에 Purina 5008을 급식하여 체중을 증가시켰다. 동물을 연구하기 전 혈당 수준을 평가하였다; 혈당 수준이 200 mg/dL보다 큰 래트만을 연구에 사용하였다. 동물을 무작위로 그룹으로 나누어, 처리하지 않거나, 매일 1회 10 μg(전장 펩타이드)을 정맥내로(IV) 투여하거나, 매일 1회 200 μg(전장 펩타이드)을 경구로(PO) 투여하였다. 용량은 대략적으로: 20 μg/kg/일 내지 33.5 μg/kg/일(IV), 및 401 μg/kg/일 내지 670 μg/kg/일(PO)의 범위였다. 동물을 이 식이로 35일 동안 유지시키고, 체중을 주 2회 측정하였다. 35일 후 동물들을 희생시켰다.

당뇨병-관련 심장 합병증 및 고혈압에 대한 IMG-1으로의 치료 효과를 검정하였다. 금식 혈당(fasting blood glucose, FBG) 수준을 래트 전체에서뿐만 아니라, 식이 3시간 후 및 테스트 물품 투여 후에 휴대용 혈당 측정기를 사용하여 평가하였다. 전장 펩타이드로 처리된 ZDF 래트는 투여된 양식에 관계없이 치료 후 3일 정도로 초기에 혈당 수준의 뚜렷한 감소를 보였고, 처리된 모든 동물은 7일째에 정상적인 FBG 수준(200 mg/dL 미만의 수준)을 보였다. ZDF 래트의 혈압을 CODA 비침습성 혈압 테일 커프 시스템 혈압 모니터를 사용하여 주 2회 모니터링하였다.

도 3은 대조군 동물 대비 전장 펩타이드로 처리된 동물에서의 수축기 및 이완기 혈압 수준을 보여준다. 전장 펩타이드(경구든 또는 정맥내이든)로의 치료는 당뇨병 동물 모델에서 혈압을 정상화시킨 것으로 나타났다. 치료 3일 이내에 전장 펩타이드로 처리된 래트는 더 낮은 혈압을 나타냈고, 전장 펩타이드를 경구로 받은 ZDF 래트는 7일째에 정상 BP를 달성한 한편, 정맥내로 전장 펩타이드를 받은 래트는 10일째에 정상 BP를 달성하였다(IV 및 PO 투여된 전장 펩타이드에 대해 각각 120/82 mmHg 및 115/80 mmHg). 반면, 처리된 동물과 비교하여, 대조군(비처리) ZDF 래트는 고혈압을 나타냈으며 이를 유지하였다(>140/90 mmHg).

실시예 3

IMG-1 및 IMG-2로의 치료가 Bcl-2-양성 폐 고혈압 내피 세포의 성장을 손상및/또는 감소시키는 것을 보여준 다른 연구를 수행하였다.

내피 세포를 Swan-Ganz(폐 동맥 내피 세포(PAEC) - 신규한 기법을 사용한 우측 심장 카테터삽입(right heart catheterization, RHC)(J Heart Lung Transplant. 2013 Jul;32(7):746-9))를 진행한 환자로부터 분리하였다. 분리된 내피 세포를 내피 세포 성장 키트-BBE가 보충된 혈관 세포 기저 배지(ATCC로부터 이용 가능함)에서 배양하였다. Swan-Ganz 카테터삽입은 심장의 우측과 폐로 이어지는 동맥으로 얇은 튜브(카테터)를 통과시키는 것이다. 이는 심장의 기능 및 심장 안과 주변의 혈류 및 압력을 모니터링하기 위해 시행하였다. PACE는 폐 동맥 고혈압(PAH; 세계 보건 기구 그룹 1) 환자로부터의 RHC로부터 얻을 수 있는 것으로 나타났다.

폐 동맥 고혈압은 폐 내피 세포 기능장애, 혈관 재형성(remodeling), 소혈관 소실, 및 증가된 폐혈관 저항성, 후속되는 우측 심부전, 및 조기 사망으로 이어지는 폐쇄성 혈관병증을 특징으로 하는 진행성 질환이다. PAH 환자로부터 분리된 PAECS는 고증식성, 아폽토시스-저항성이며, 기타 마커들 중에서도 마커 Bcl-2를 발현한다. Bcl-2(B-세포 림프종 2의 약어)는 세포 사멸(아폽토시스)을 조절하는 조절 단백질의 Bcl 패밀리의 구성원이며, Bcl-2는 미토콘드리아의 외막에 위치하고, 그곳에서 세포 생존을 촉진하고 전-아폽토시스 단백질의 작용을 억제하는 데 중요한 역할을 한다.

RHC가 진행 중인 환자로부터 세포를 분리하여 활성제로서 IMG-1 또는 IMG-2(각각 서열번호 1 및 2에 상응함)를 포함하는 조성물로 처리하였을 때, Bcl-2 로우(low)(비-PAH 환자) 세포는 세포 성장을 40% 이상 증가시킨 것으로 나타났고; 한편 Bcl-2 양성 PAH 환자로부터 유래된 세포는 IMG-1 및 IMG-2 펩타이드로 처리하면 Bcl-2 양성 세포 생존능력을 50% 감소시키는 것으로 나타났다.

도 4는 본원에 개시된 펩타이드를 포함하는 조성물이 Bcl-2 음성 폐 고혈압 내피 세포의 성장을 촉진시키는 것을 보여주며, 도 5는 본원에 개시된 펩타이드를 포함하는 조성물이 Bcl-2 양성 폐 고혈압 내피 세포의 성장의 손상을 촉진시키는 것을 보여줌으로써, 항고혈압제로서 그리고 폐 동맥 고혈압의 치료를 위한 펩타이드의 용도를 지지한다.

비-PAH 환자(웨스턴 블롯 분석에 의해 확인되는 바와 같이, Bcl-2 음성임)로부터 유래되고 IMG-1 및 IMG-2로 처리된 PAEC는 세포 성장에서 뚜렷한 증가를 나타냈으며, 이때 세포 수의 상대적인 증가는 48시간째에 대조군에서 15.6% 세포 성장 대비 35% 및 31%(각각 IMG-1 및 IMG-2), 및 처리 후 96시간 째에 33% 대비 78% 및 77%의 평균 성장을 보였다. 96시간 동안 약 40%의 세포 성장의 전체적인 증가가 입증되었다(도 4). PAH 환자(웨스턴 블롯 분석에 의해 확인되는 바와 같이, Bcl-2 양성)로부터의 PAEC가 48시간째에 그것들의 출발 값의 -26% 및 -30%(각각 IMG-1 및 IMG-2)에 동등한 상대적인 세포수로 세포 성장에서 상당한 감소를 보인 한편, 대조군은 26% 증가를 나타내었다. 96시간째에, IMG-1 및 IMG-2 처리된 세포는 대조군에서의 세포 수의 58%의 증가와 비교하여 -51%(IMG-1) 및 -45%(IMG-2)로 낮은 상대적인 세포수를 나타내었고, 이것은 처리된 PAEC와 대조군 PAEC 사이의 증식의 상당한 감소를 나타낸다(도 5).

본원에 기술된 조성물 및 방법은 다른 작용제(agent) 또는 치료 양식을 포함하거나, 그것과 함께 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 본원에 기술된 방법은 본원에 기술된 것과 같은 펩타이드 분자를 포함하는 조합물(combination)을 작용제 또는 치료 과정 또는 양식과 함께, 장애를 치료 또는 예방하기에 효과적인 양으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 펩타이드 분자 및 작용제 또는 치료 과정 또는 양식은 임의의 순서로 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 펩타이드 분자 및 다른 치료제, 과정 또는 양식(예를 들어, 본원에서 기술된 것과 같음)의 임의의 조합 및 순서를 사용할 수 있다. 펩타이드 분자 및/또는 다른 치료제, 과정 또는 양식은 활성 장애, 또는 활성이 적은 질환 상태의 기간 중에 투여될 수 있다. 펩타이드 분자는 다른 치료 전에, 치료와 동시에, 또는 치료 후에 투여될 수 있다.

본 발명의 제형, 펩타이드, 펩타이드 단편 및 조성물은 그래프와 도면에서 대조군 또는 비처리 샘플로부터 처리된 대상체를 구별하기 위하여 간단한 명명법에 의해(예컨대 "IMG-1" 또는 "IMG-2") 언급될 수 있다. 명명법은 어떠한 방식으로든 한정하고자 하는 의도가 아니다.

본원에 개시된 실험을 부분적으로는 쥣과 모델에서 수행하였고, 세포 배양 실험은 포유류(인간) 세포를 이용하였다. 상대성장 척도(allometric scaling)를 사용하면, 본원에 개시된 폴리펩타이드 활성제를 포함하는 조성물의 성인 인간으로의 투여를 위해 적합하고 예시적인 투여량 범위를 예측하는 것이 가능하다. 상대성장 척도는 약물 용량의 교환이 체표면적에 대한 용량의 정규화에 기초하며 당해 기술분야에 특성화가 잘 되어 있고 이해되는 경험적 접근법이다. 이 접근법은 종들 사이에 해부학적, 생리학적, 및 생화학적 과정에 몇몇 고유한 특징이 있고, 그와 같이, 약동학/생리학적 시간의 가능한 차이는 상대성장 척도에 의해 설명된다고 가정한다. 이 방법은 다른 종에 존재하는 데이터에 기초하여 대략적인 용량을 예측하기 위해 실험적 목적으로 연구에서 자주 사용된다. 인자별 방법에 의한 용량은 경험적 접근법이며, 전임상 독성 연구로부터의 약물의 관찰되지 않은 부작용 수준(no observed adverse effect level, NOAEL)을 사용하여 인체 등가 용량(human equivalent dose, HED)을 추정한다. 인자별 방법에 의한 용량은 동물과 인간 사이의 용량을 전환하기 위하여, 대사 속도의 차이를 설명해주는, 체표면적에 대한 지수(0.67)를 적용한다. 그러므로, HED는 다음 식에 의해 결정된다:

HED (mg / kg = 동물 NOAEL mg/kg) × (동물 체중 [kg]/인간 체중 [kg])(1-0.67) 식 (1)

본원에 개시된 예시의 제형에 기초하여, 체중이 대략 300 g인 래트에서 NOAEL 값은 300 μg/kg 내지 1700 μg/kg(일일 2회)이다.

인간 연구를 위한 출발 용량 범위를 계산하기 위해:

HED μg/kg = 300 × (0.30/60)(0.33) = 52.21 μg/kg이고 최대 295.86 μg/kg(일일 2회)이다. 그러므로, 60 kg 인간의 경우, 예시 용량은 일일 2회, 3.133 g 내지 최대 17.753 g일 것이다.

본 명세서의 설명 및 청구범위 전체에서, 단어 "포함하다" 및 "함유하다"와 이것들의 변형은 "포함하지만 이에 한정되지 않음"을 의미하며, 이것들은 다른 모이어티, 첨가제, 구성요소, 또는 단계를 배제하는 것(및 배제하지 않는 것)을 의도하지 않는다. 본 명세서의 설명 및 청구범위 전체에서, 단수는 문맥상 달리 요구하지 않는 한 복수를 포함한다. 특히, 부정 관사가 사용되는 경우, 명세서는 문맥상 달리 요구하지 않는 한 단수형뿐만 아니라 복수형을 고려하는 것으로 이해되어야 한다.

발명의 특정 양태, 구현예 또는 실시예와 함께 기술된 특징, 특성, 화합물, 화학적 모이어티 또는 기는 함께 양립되지 않는 것이 아닌 한 본원에서 기술된 임의의 다른 양태, 구현예 또는 실시예에도 적용 가능한 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서(임의의 첨부되는 청구범위, 요약 및 도면을 포함함)에 개시된 모든 특징, 및/또는 그렇게 개시된 임의의 방법 또는 과정의 모든 단계는, 그러한 특징 및/또는 단계의 적어도 일부가 상호 배타적인 경우의 조합을 제외하고, 임의의 조합으로 조합될 수 있다. 발명은 본 명세서(임의의 첨부되는 청구범위, 요약 및 도면을 포함함)에 개시된 특징의 임의의 신규한 하나의 특징, 또는 임의의 신규한 조합으로, 또는 그렇게 개시된 임의의 방법 또는 과정의 단계의 임의의 신규한 한 단계, 또는 임의의 신규한 조합으로 확장된다.

본 개시는, 본원에 개시된 구현예의 변형 및 변화가 본 발명의 범주 및 사상으로부터 벗어나지 않으면서 기술분야에 통상적인 지식을 가진 사람들에 의해 만들어질 수 있기 때문에, 발명을 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본 출원에서 인용된 모든 공개물 및 다른 참고문헌은 본원에 그 전문이 참조로 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> Imagine Pharma, LLC <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING ENDOTHELIAL CELL DYSFUNCTION <130> P20-061-INP-HGF <150> 62/615,223 <151> 2018-01-09 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 293 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 31 kDa fragment of 40s ribosomal protein S2 (RPS2) <400> 1 Met Ala Asp Asp Ala Gly Ala Ala Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Gly 1 5 10 15 Pro Gly Met Gly Asn Arg Gly Gly Phe Arg Gly Gly Phe Gly Ser Gly 20 25 30 Ile Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg 35 40 45 Gly Ala Arg Gly Gly Lys Ala Glu Asp Lys Glu Trp Met Pro Val Thr 50 55 60 Lys Leu Gly Arg Leu Val Lys Asp Met Lys Ile Lys Ser Leu Glu Glu 65 70 75 80 Ile Tyr Leu Phe Ser Leu Pro Ile Lys Glu Ser Glu Ile Ile Asp Phe 85 90 95 Phe Leu Gly Ala Ser Leu Lys Asp Glu Val Leu Lys Ile Met Pro Val 100 105 110 Gln Lys Gln Thr Arg Ala Gly Gln Arg Thr Arg Phe Lys Ala Phe Val 115 120 125 Ala Ile Gly Asp Tyr Asn Gly His Val Gly Leu Gly Val Lys Cys Ser 130 135 140 Lys Glu Val Ala Thr Ala Ile Arg Gly Ala Ile Ile Leu Ala Lys Leu 145 150 155 160 Ser Ile Val Pro Val Arg Arg Gly Tyr Trp Gly Asn Lys Ile Gly Lys 165 170 175 Pro His Thr Val Pro Cys Lys Val Thr Gly Arg Cys Gly Ser Val Leu 180 185 190 Val Arg Leu Ile Pro Ala Pro Arg Gly Thr Gly Ile Val Ser Ala Pro 195 200 205 Val Pro Lys Lys Leu Leu Met Met Ala Gly Ile Asp Asp Cys Tyr Thr 210 215 220 Ser Ala Arg Gly Cys Thr Ala Thr Leu Gly Asn Phe Ala Lys Ala Thr 225 230 235 240 Phe Asp Ala Ile Ser Lys Thr Tyr Ser Tyr Leu Thr Pro Asp Leu Trp 245 250 255 Lys Glu Thr Val Phe Thr Lys Ser Pro Tyr Gln Glu Phe Thr Asp His 260 265 270 Leu Val Lys Thr His Thr Arg Val Ser Val Gln Arg Thr Gln Ala Pro 275 280 285 Ala Val Ala Thr Thr 290 <210> 2 <211> 158 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 17kDa fragment of 40s ribosomal protein S2 (RPS2) <400> 2 Gly His Val Gly Leu Gly Val Lys Cys Ser Lys Glu Val Ala Thr Ala 1 5 10 15 Ile Arg Gly Ala Ile Ile Leu Ala Lys Leu Ile Val Pro Val Arg Arg 20 25 30 Gly Tyr Trp Gly Asn Lys Ile Gly Lys Pro His Thr Val Pro Cys Lys 35 40 45 Val Thr Gly Arg Cys Gly Ser Val Leu Val Arg Leu Ile Pro Ala Pro 50 55 60 Arg Gly Thr Gly Ile Val Ser Ala Pro Val Pro Lys Lys Leu Leu Met 65 70 75 80 Met Ala Gly Ile Asp Asp Cys Tyr Thr Ser Ala Arg Gly Cys Thr Ala 85 90 95 Thr Leu Gly Asn Phe Ala Lys Ala Thr Phe Asp Ala Ile Ser Lys Thr 100 105 110 Tyr Ser Tyr Leu Thr Pro Asp Leu Trp Lys Glu Thr Val Phe Thr Lys 115 120 125 Ser Pro Tyr Gln Glu Phe Thr Asp His Leu Val Lys Thr His Thr Arg 130 135 140 Val Ser Val Gln Arg Thr Gln Ala Pro Ala Val Ala Thr Thr 145 150 155 <210> 3 <211> 75 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 8kDA fragment of 40s ribosomal protein S2 (RPS2) <400> 3 Ser Ile Val Pro Val Arg Arg Gly Tyr Trp Gly Asn Lys Ile Gly Lys 1 5 10 15 Pro His Thr Val Pro Cys Lys Val Thr Gly Arg Cys Gly Ser Val Leu 20 25 30 Val Arg Leu Ile Pro Ala Pro Arg Gly Thr Gly Ile Val Ser Ala Pro 35 40 45 Val Pro Lys Lys Leu Leu Met Met Ala Gly Ile Asp Asp Cys Tyr Thr 50 55 60 Ser Ala Arg Gly Cys Thr Ala Thr Leu Gly Asn 65 70 75 <210> 4 <211> 87 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 9kDa fragment of 40s ribosomal protein S2 (RPS2) <400> 4 Gly His Val Gly Leu Gly Val Lys Cys Ser Lys Glu Val Ala Thr Ala 1 5 10 15 Ile Arg Gly Ala Ile Ile Leu Ala Lys Leu Ser Ile Val Pro Val Arg 20 25 30 Arg Gly Tyr Trp Gly Asn Lys Ile Gly Lys Pro His Thr Val Pro Cys 35 40 45 Lys Val Thr Gly Arg Cys Gly Ser Val Leu Val Arg Leu Ile Pro Ala 50 55 60 Pro Arg Gly Thr Gly Ile Val Ser Ala Pro Val Pro Lys Lys Leu Leu 65 70 75 80 Met Met Ala Gly Ile Asp Asp 85

Claims

내피 기능장애(endothelial dysfunction)를 특징으로 하는 질환의 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 제형으로서,
폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩타이드 또는 제형.
제1항에 있어서,
내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 심혈관 질환(cardiovascular disease), 죽상 동맥경화증(atherosclerosis), 비만(obesity) 및 폐 동맥 고혈압(pulmonary arterial hypertension)으로부터 선택되는 것인, 폴리펩타이드 또는 제형.
제1항 또는 제2항에 있어서,
폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가지는 것인, 폴리펩타이드 또는 제형.
제1항 또는 제2항에 있어서,
폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 폴리펩타이드 또는 제형.
제1항 또는 제2항에 있어서,
폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3, 또는 4에 제시된 아미노산 서열로 이루어지는 것인, 폴리펩타이드 또는 제형.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
제형은 경구용 약학 제형인 것인, 제형.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
제형은 비경구용 약학 제형인 것인, 제형.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
제형은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 희석제 및/또는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 것인, 제형.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
제형은 수성 약학 제형인 것인, 제형.
제9항에 있어서,
폴리펩타이드는 0.05 내지 5 μg/L의 농도로 존재하는 것인, 제형.
제9항에 있어서,
폴리펩타이드는 0.1 내지 1 μg/L의 농도로 존재하는 것인, 제형.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
수성 약학 제형은 완충액, 선택적으로 생리학적 pH를 가지는 완충액을 포함하는 것인, 제형.
제12항에 있어서,
완충액은 인산 완충 생리식염수인 것인, 제형.
내피 세포 성장을 조절하는 방법으로서,
상기 방법은 내피 세포를 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 제형과 접촉시키는 단계를 포함하며,
폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것인 방법.
제14항에 있어서,
접촉 단계는 수용액에서 수행되는 것인, 방법.
제14항 또는 제15항에 있어서,
폴리펩타이드 또는 제형은 제3항 내지 제13항 중 어느 한 항에 추가로 정의된 것과 같은 것인, 방법.
내피 세포 성장을 조절하기 위한 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 제형의 용도로서,
폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 것인, 용도.
제17항에 있어서,
폴리펩타이드 또는 제형은 제3항 내지 제13항 중 어느 한 항에 추가로 정의된 것과 같은 것인, 용도.
내피 기능장애를 특징으로 하는 질환을 치료하는 방법으로서,
서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 또는 이의 활성 단편 또는 유사체를 포함하는 조성물의 치료학적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제19항에 있어서,
내피 기능장애를 특징으로 하는 질환은 심혈관 질환, 죽상 동맥경화증, 비만 및 폐 동맥 고혈압으로부터 선택되는 것인, 방법.
제19항 또는 제20항에 있어서,
폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가지는 것인, 방법.
제19항 또는 제20항에 있어서,
폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
제19항 또는 제20항에 있어서,
폴리펩타이드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 제시된 아미노산 서열로 이루어지는 것인, 방법.
내피 기능장애를 특징으로 하는 질환의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 제1항, 제3항, 제4항 또는 제5항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 폴리펩타이드의 용도로서,
선택적으로 질환은 심혈관 질환, 죽상 동맥경화증, 비만 및 폐 동맥 고혈압으로부터 선택되는 것인 용도.