KR20210011376A - 충전된 크로마토그래피 컬럼의 컨디셔닝 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 방법에 관한 것이며, 이 방법은 불활성 및 친수성인 크로마토그래피 수지로 충전된 컬럼을 제공하는 단계; 및 상기 컬럼을 통해 용매 또는 용매 혼합물을 통과시키는 단계를 포함한다. 용매는 크로마토그래피 수지보다 친수성이 낮도록 선택되며, 용매의 유량은 시스템 압력이 미리 정의된 임계값을 초과하지 않도록 하는 유량으로 제어된다.
본 발명은, 유리하게는, 발열이 높은 유량에서 플라스틱 프릿 또는 필터 및/또는 건조 수지의 습윤에 문제를 일으킬 수 있는 FLASH 크로마토그래피에서 사용된다.
본 발명은, 유리하게는, 발열이 높은 유량에서 플라스틱 프릿 또는 필터 및/또는 건조 수지의 습윤에 문제를 일으킬 수 있는 FLASH 크로마토그래피에서 사용된다.
Description
본 발명은 크로마토그래피 분야, 더 구체적으로는 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은, 유리하게는, FLASH 크로마토그래피에서 사용될 수 있다.
액체 크로마토그래피는 액체로부터 하나 이상의 표적 화합물을 분리하기 위한 잘 확립된 기술이다. 액체는 이동상을 구성하고, 정지상을 통과하며, 이 액체 중에 존재하는 분자 또는 화합물은 다양한 방식으로 상호작용한다. 따라서, 강한 상호작용은 일부의 분자 또는 화합물의 속도를 늦추는 반면에 약한 상호작용은 신속한 통과를 허용하여 상이한 시점에서 상이한 획분의 화합물 또는 분자를 용출시킨다.
순상 크로마토그래피에서, 친수성 화합물에 대해 강한 친화성을 갖는 친수성 정지상은 친수성이 낮은, 즉 극성이 낮은 이동상과 함께 사용된다. 이와 같은 이동상이, 예를 들면, 펌핑에 의해 또는 양압을 가함으로써 정지상을 포함하는 컬럼을 통과하는 경우, 이 기술은 FLASH 크로마토그래피로 알려져 있다. 이것은 극성과 관능기가 다른 화합물을 분리하는데 자주 사용되는 빠르고 비교적 간단한 방법이다.
FLASH 크로마토그래피에서 일반적으로 사용되는 정지상은 비개질 실리카이고, 이것은 유리하게는 다공질이며 건조 재료로서 컬럼 내에 충전된다. 극성을 높이기 위해, 실리카는 때때로 실란올 기와 같은 친수성 기로 관능화된다.
FLASH 크로마토그래피에 의해 수행되는 대부분의 분리 이전에 이동상의 통과에 의해 정지상을 컨디셔닝하는 단계가 있다. 목적에 따라, 컨디셔닝에 사용되는 이동상은 분리 중에 표적 화합물을 용출하기 위해 사용되는 용매이거나 다른 액체일 수 있다. 컨디셔닝은 원하지 않는 불순물을 제거하기 위해, 또는 실행들 사이에 정지상을 재생시키기 위해, 또는 단순히 건조 정지상을 적시기 위해 수행될 수 있다. 원하는 경우, 컨디셔닝은 완충액을 가함으로써 적절한 pH를 확립하기 위해 수행될 수 있다.
순상 FLASH 크로마토그래피에서, 정지상은 일반적으로 건식으로 공급되고, 이것의 컨디셔닝은 이것을 습윤하는 것을 포함한다.
건조 실리카의 컨디셔닝에서, 극성 용매가 극성 기와 상호작용하여 기공 내의 공기를 배출시킨다. 용매가 실리카 표면에 흡착됨에 따라, 발열 반응으로 인해 열이 발생된다. 또한 프로세스 중에 마찰이 축적되어 추가의 열을 발생시킬 수 있다.
발열의 문제를 극복하기 위해, 실리카 FLASH 카트리지는 통상적으로 샘플 주입 전에 균일농도로 컨디셔닝되고, 용매의 유량은 정지상과 설비의 다른 부분에 부정적인 영향을 미칠 수 있는 과도한 열을 피하도록 신중하게 제어된다. 이로 인해 비교적 시간이 걸리는 컨디셔닝 프로세스가 초래되어, 컬럼의 효율적인 습윤이 달성되기 전에 수 컬럼 부피의 용매를 필요로 한다.
Grivel 등의 "In J Chromatogr A 2010 Jan 22; 1217(4):459-72: Selection of suitable operating conditions to minimize the gradient equilibration time in the separation of drugs by Ultra-High-Pressure Liquid Chromatography with volatile mass spectrometry-compatible buffers"는 역상 크로마토그래피에 관한 것이다. 더 구체적으로는, 이 기사는 문제가 FLASH 크로마토그래피의 긴 평형화 시간에 관련된다는 것을 인식하고, 평형화에 사용되는 이동상에 대한 온도 변화, 다양한 유량 및 다양한 첨가제의 연구를 제시하고 있다. 저자들은 머무름 변동성(retention variability) 및 특정의 평형화 첨가제에 대한 특정의 결론을 도출함과 동시에 또한 평형화를 지배하는 메커니즘이 매우 복잡하게 유지되며 추가의 작업을 필요로 한다는 결론을 내렸다.
WO 2015/140326(Biotage AB)는 크로마토그래피 컬럼의 평형화, 특히 순상 FLASH 크로마토그래피에서 증가된 유량에서 발생할 수 있는 열관련 문제에 관한 것이다. 더 구체적으로, WO 2015/140326에 따르면, 컬럼 패킹의 평형화 중에 발생되는 열은 더 잘 제어될 수 있고, 평형화 단계에서 구배로서 용매의 조합을 사용하여 전체 샘플의 처리 속도를 증가시킬 수 있다.
그러나, 위에서 제안된 해결책에도 불구하고, 극성 용매로 친수성 정지상을 컨디셔닝하는 것은 정제 또는 분리 프로세스에서 시간이 많이 걸리는 단계로 남아있다. 따라서 대체 기술의 분야에서 친수성 정지상을 친수성이 낮은 용매의 흐름으로 처리할 때에 수반되는 발열 반응에 의해 유발되는 문제를 다룰 필요성이 여전히 존재한다.
제 1 양태에서, 본 발명은 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 방법에 관한 것으로, 이 방법은
a) 적어도 하나의 불활성 및 친수성인 크로마토그래피 수지로 충전된 컬럼을 제공하는 단계; 및
b) 상기 컬럼을 통해 하나 이상의 용매를 통과시키는 단계를 포함하며;
상기 용매는 상기 크로마토그래피 수지보다 친수성이 낮고;
상기 컬럼을 통과하는 용매의 유량은 상기 컬럼 압력이 미리 정의된 임계값을 초과하지 않도록 하는 유량으로 제어된다.
본 발명의 다른 양태, 세부사항 및 장점은 다음의 상세한 개시로부터 드러날 것이다.
정의
"극성" 용매라는 용어는 본 명세서에서는 산소 및 수소와 같은 매우 다른 전기음성도를 갖는 원자들 사이에 형성되는 극성 결합으로 인해 실질적인 쌍극자 모멘트를 갖는 용매에 대해 사용된다.
"비극성" 용매라는 용어는 본 명세서에서는 원자가 탄소 및 수소와 같은 보다 유사한 쌍극자 모멘트를 갖는 용매에 대해 사용된다.
"친수성"이라는 용어는 본 명세서에서는 정지상이 얼마나 물과 친한지의 척도로서 사용된다.
"소수성"이라는 용어는 본 명세서에서는 정지상 또는 이동상이 얼마나 물을 회피하는지의 척도로서 사용된다.
"평형화"라는 용어는 본 명세서에서는 2 개의 상이한 특성의 균형을 취하는 것을 포함하여 넓은 의미로 사용된다. 예를 들면, 완전히 습윤된 건조 재료는 평형화된 것으로 간주된다.
본 발명은 용매가 높은 유량으로 수지를 통과할 때에, 예를 들면, FLASH 크로마토그래피에서 발생하는 것으로 알려진 발열이, 압력 임계값을 초과하지 않도록 하면서 용매 유량을 가능한 높게 유지함으로써, 제어될 수 있다는 발견에 기초한다. 다시 말하면, 사전에 충전된 크로마토그래피 패킹의 일상적인 테스트를 수행하여 어느 압력에서 발열이 바람직하지 않은지를 또는 사용되는 설비(특히 프릿)가 견뎌낼 수 없는지를 테스트할 수 있다. 압력 임계값이 알려지고 정의되면, 동일한 수지를 포함하는 동일한 치수의 크로마토그래피 컬럼은 이 컬럼을 통과하는 유량의 능동적 조절에 의해 컨디셔닝되어 압력을 미리 결정된 값으로 유지할 수 있고, 유량은 압력 임계값을 초과하지 않으면서 가능한 빠르게 컨디셔닝을 구동하기 위해 때로는 증가되고 때로는 감소된다. 따라서, 본 발명은 프릿 재료의 손상과 같은 열 손상을 피하기 위해 컬럼 컨디셔닝에서 압력 제어식 유량 조절을 사용한다.
더 구체적으로, 본 발명은 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 방법에 관한 것이며, 이 방법은
a) 적어도 하나의 불활성 및 친수성인 크로마토그래피 수지로 충전된 컬럼을 제공하는 단계; 및
b) 상기 컬럼을 통해 하나 이상의 용매를 통과시키는 단계를 포함하며;
상기 용매는 상기 크로마토그래피 수지보다 친수성이 낮고;
상기 컬럼을 통과하는 용매의 유량은 상기 컬럼 압력이 미리 정의된 임계값을 초과하지 않도록 하는 유량으로 제어된다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 예를 들면, 크로마토그래피 컬럼의 평형화에서 2 개의 상이한 용매가 혼합물로서 일반적으로 사용된다. 본 문맥에서, 이러한 혼합물은 컬럼을 통과하는 하나의 흐름을 구성하므로 "용매"라는 용어에 포함된다.
따라서, 본 발명자들은 유량이 설비에 과도한 가열을 초래하지 않는 유량으로 유지되는 종래의 컨디셔닝 대신, 용매의 양을 절약하고, 시간을 절약하기 위해, 컬럼 압력이 미리 정의된 임계값을 초과하지 않도록 하는 유량으로 컬럼을 통과하는 용매의 유량을 유지함으로써 이러한 컨디셔닝이 성공적으로 수행될 수 있다는 것을 발견하였다. 압력 임계값은, 유리하게는, 발열이 프릿 또는 필터와 같은 컬럼 또는 설비에 손상을 초래하기에 상당히 충분한 경우의 압력보다 낮은 수준으로 설정된다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 효율적인 프로세스를 얻기 위해, 가능한 한 높은 유량을 유지하는 것이 바람직하다.
압력 임계값은 각각의 특정의 컬럼 및 조건에 대해, 유리하게는 방출된 열을 특정의 압력에 대해 측정하는 테스트에 의해 당업자가 결정할 수 있다. 1 g - 1500 g 크기의 플래시 크로마토그래피 컬럼에 대한 예시적인 압력 임계값은 1 bar - 20 bar 범위에 있다.
이 프로세스의 목적은 습윤되거나, 평형화되거나, 또는 컨디셔닝된 컬럼을 달성하는 것일 수 있다. 이러한 문맥에서, 가장 넓은 의미에서, "컨디셔닝된"이라는 용어는 하나 이상의 특성을 변경하거나 수정하기 위해 액체를 이용하여 처리된 것으로 해석될 수 있다. FLASH 컬럼이 용매에 의해 완전히 습윤되었는지의 여부를 판단하기 위해, 용매의 전면이 종래의 투명하거나 실질적으로 투명한 FLASH 컬럼을 통해 확실하게 보일 때 친수성 수지를 포함하는 컬럼을 통한 용매의 통과를 시각적으로 추적할 수 있다.
위에서 나타나는 바와 같이, 본 발명에 따라 사용되는 크로마토그래피 수지는 소수성이 아니고 친수성이다. 달리 말하면, 이 재료는 순상 FLASH 크로마토그래피에서 전통적으로 사용되는 임의의 적절한 재료일 수 있고, 이것은 컨디셔닝 및/또는 용출에 적합한 용매와 함께 위의 배경기술란에서 설명된 이유로 높은 발열의 위험에 노출된다. 수지는 종래의 입자 형식의 비개질 실리카와 같은 다공질 실리카일 수 있다. 대안적으로, 수지는 또 다른 친수성 수지인 알루미나를 포함할 수 있다. 적절한 실리카 수지는 의도된 용도에 적절한 수준의 친수성을 제공하도록 실란올 기 또는 기타의 극성 리간드로 관능화될 수 있다.
당업자는 특정 입자 크기 및 유량에서 위에서 설명한 종류의 친수성 수지와 함께 사용될 때 과도한 발열의 위험을 수반할 수 있는 용매의 종류를 알고 있다. 예시적인 이러한 용매는, 예를 들면, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 메탄올, 에탄올, 2-프로판올, 포름산, 아세트산, 트리에틸아민, 및 N-에틸디이소프로필아민이다.
충전된 컬럼은 FLASH 크로마토그래피에 적합한 임의의 종래의 형식일 수 있다. 따라서, 컬럼은 수지의 상류에 샘플을 첨가하기 위한 특정의 구획; 수지의 하류 및/또는 상류에 배치된 하나 이상의 프릿 또는 필터; 및/또는 임의의 다른 일반적으로 사용되는 컴포넌트를 포함할 수 있다.
본 발명에 의해 얻어지는 제어된 발열로 인해, 크로마토그래피 컬럼은 감열 재료로 제조된 부품 또는 부품들을 포함할 수 있다. 따라서, 적어도 하나의 프릿 또는 필터가 컬럼 내의 수지의 하류에 배치될 수 있다. 본 발명의 사용에 의해 이익을 얻는 감열 재료는, 예를 들면, 폴리에틸렌과 같은 감열 플라스틱이다. 본 발명은, 유리하게는, 이러한 필터와 함께 사용될 수 있으며, 이에 의해 유리한 높은 유량에서 연화 또는 용융의 위험이 상당히 감소된다.
본 발명의 제 2 양태는 충전된 크로마토그래피 컬럼의 컨디셔닝 중에 유량의 제어하는 방법이며, 여기서 친수성 수지로 충전된 컬럼은 미리 정의된 압력을 초과하지 않으면서 친수성이 낮은 용매로 컨디셔닝된다. 이러한 컨디셔닝을 제어하는 방법은 최적의, 즉 가능한 한 높은 유량을 가능하게 하고, 본 발명자들은 건조 크로마토그래피 수지의 종래의 컨디셔닝보다 소량의 용매를 이용하는 것을 보여주었다. 대안적인 실시형태에서, 2 개의 컬럼 부피(CV)는 친수성이 낮은 용매로 친수성 수지를 완전히 습윤시키기에 충분하다. 본 발명의 제 1 양태와 관련된 위의 모든 세부사항은 제 2 양태에도 동등하게 적용가능하다.
위에서 설명한 FLASH 크로마토그래피 컬럼의 컨디셔닝 중에 발열을 제어하는 방법은 컴퓨터에 의해 수행될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 위에서 설명한 크로마토그래피 프로세스의 제어 및 이 방법을 수행하기 위한 소프트웨어를 포함한다.
본 발명의 제 3 양태는 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 시스템으로서, 상기 시스템은 적어도 하나의 불활성 및 친수성인 크로마토그래피 수지로 충전된 컬럼; 적어도 하나의 용매 용기; 상기 시스템 내의 압력을 측정하는 수단; 상기 용매를 능동적으로 제어된 유량으로 상기 컬럼을 통과시키는 수단; 및 상기 컬럼을 통과하는 용매의 유량을 상기 컬럼 내부의 미리 정의된 압력 임계값을 초과하지 않으면서 허용되는 최대값까지 조정하도록 설정된 소프트웨어를 포함한다.
이러한 문맥에서, "능동적으로 제어된"이라는 용어는 시스템 압력이 미리 결정된 값을 초과하지 않도록 유량이 변화됨을 의미하는 것으로 이해된다. 시스템은, 유리하게는, 적절한 펌프, 센서, 및 튜브와 같은 그 작동을 가능하게 하는 임의의 추가의 표준 설비를 포함한다.
본 발명의 시스템은 실리카와 같은 약 50-500g의 수지, 예를 들면, 약 50g을 초과하는 수지, 또는 약 100g을 초과하는 수지, 또는 약 300g을 초과하는 수지(예를 들면, 350g 또는 500g의 수지)를 수용하도록 설계된 크로마토그래피 컬럼을 포함할 수 있다.
시스템의 컬럼은 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌 또는 크로마토그래피 컬럼에서 일반적으로 사용되는 임의의 다른 플라스틱 재료와 같은 플라스틱일 수 있다. 유사하게, 적어도 저부 프릿, 또는 수지의 상류에 배치된 저부 프릿 및 상부 프릿은 컬럼과 동일한 재료일 수 있다. 본 발명은, 유리하게는, 열 감수성이 종래의 컨디셔닝에 부적절하게 되는 프릿 재료와 함께; 및/또는 그 열 감수성으로 인해 본 발명의 압력 제어식 유량 조정이 사용되지 않는 한 장시간 동안 및/또는 다량의 용매를 사용하여 컨디셔닝될 필요가 있는 프릿 재료와 함께 사용된다.
방법에 관련하여 본 명세서에 설명된 모든 세부사항은 시스템에도 동등하게 적용될 수 있고, 그 반대의 경우도 마찬가지이다.
따라서, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 방법에서의 본 발명에 따른 시스템의 용도를 포함한다.
실험 부분
본 실시례는 예시의 목적만을 위해 본 명세서에 제공되는 것이며, 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명을 한정하는 것으로서 해석되어서는 안 된다. 이하 또는 본 출원의 다른 곳에서 제공되는 참조는 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
실시례 1 - 압력 제어 하에서의 유량 변화에 의한 평형화(본 발명)
50 g의 20 μm의 구형 실리카를 수용한 카트리지(80 mL 컬럼 부피)를 70:30의 비율의 총 160 mL의 n-헵탄:에틸 아세테이트의 균일 농도 혼합물을 사용하여 10 bar의 최대 허용 압력에서 평형화하였고, 이 혼합물 중의 에틸 아세테이트는 열을 발생하는 것으로 알려진 용매이다. 유량은 최대 시스템 압력을 초과하지 않도록 제어하였고, 최대 150 mL/min에 도달하도록 허용하였다.
전체 평형화 프로세스는 1 분 36 초 동안 수행하였다. 본 발명에 따른 평형화 프로세스 중에, 압력은 10 bar로 유지하였고, 유량은, "히트 존(heat-zone)"이 약 80 mL(1 컬럼 부피) 이후에 카트리지의 저부 프릿에 도달했을 때, 자동적으로 최저로 몇 초 동안 20 mL/min까지 하향 조절하였다.
카트리지의 표면 온도를 연속적으로 모니터링하였고 최대 34℃로 나타났다. 추가의 80 mL의 균일 농도의 혼합물(총 160 mL, 2 컬럼 부피)을 10 bar 또는 150 mL/min로 펌핑한 후, 카트리지의 표면 온도를 연속적으로 모니터링하여 26℃임을 알았고, 압력은 150 mL/min에서 6.3 bar까지 떨어졌다. 카트리지를 주의 깊게 육안으로 검사한 결과 완전히 평형화된 것으로 나타났다.
실시례 2 - 고정된 유량에서의 평형화(비교례)
전술한 카트리지를 실시례 1과 동일한 용매를 사용하여 고정된 유량에서 수행된 평형화 방법을 적용하였으며, 본 발명의 압력 제어는 적용하지 않았다.
첫 번째 방법에서는, 240 mL(3 컬럼 부피)의 용매 혼합물을 50 mL/min로 사용하여, 용매가 컬럼의 저부에 도달하는 것을 시각적으로 판단할 때, 평형화를 완료하는데 7 분 12 초가 필요하였다.
두 번째 방법에서는, 100 mL/min에서 400 mL(5 컬럼 부피)의 용매 혼합물은, 컬럼의 저부에 용매가 도달하는 것을 시각적으로 판단할 때, 평형화를 완료하는데 6 분이 걸린다.
따라서, 위에서 비교한 2 가지 종래의 방법으로부터 알 수 있듯이, 더 큰 유량 및 더 큰 용매 부피를 사용하여 평형화 프로세스의 지속시간을 줄일 수 있다. 그러나, 이러한 종래 방법은 비용이 들고 환경에 영향을 미치는 더 큰 용매 부피와 같은 단점을 여전히 수반한다.
실시례 3 - 100g의 크로마토그래피 컬럼의 평형화(본 발명)
100 g의 20 μm의 구형 실리카를 수용한 카트리지(150 mL 컬럼 부피)를 70:30의 비율의 총 300 mL의 n-헵탄:에틸 아세테이트의 균일 농도 혼합물을 사용하여 10 bar의 최대 허용 압력에서 평형화하였다. 유량을 제어하여 최대 100 mL/min에 도달하도록 허용하였다.
전체 평형화 프로세스는 3 분 동안 수행하였다. 본 발명에 따른 새로운 평형화 프로세스 중에, 압력은 10 bar로 유지하였고, 유량은, "히트 존"이 대략 150 mL(1 컬럼 부피) 이후에 카트리지의 저부 프릿에 도달했을 때, 자동적으로 최저로 몇 초 동안 17 mL/min까지 하향 조절하였다.
카트리지의 내부 온도를 연속적으로 모니터링하였고, 최대 116℃로 나타났다. 추가의 150 mL의 균일 농도의 혼합물(총 300 mL, 2 컬럼 부피)을 10 bar 또는 100 mL/min로 펌핑한 후, 카트리지의 내부 온도를 연속적으로 모니터링하여 28℃임을 알았고, 압력은 150 mL/min에서 3.1 bar까지 떨어졌다. 카트리지를 주의 깊게 육안으로 검사한 결과 완전히 평형화된 것으로 나타났다. 다음에 이 카트리지를 300 mL/min의 유량 및 10.3 bar의 압력으로 실행할 수 있다.
이 카트리지를 본 발명의 압력 조절 없이 실행했을 때, 카트리지의 내부 온도를 모니터링하여 123℃임을 알았고, 압력은 약 1 컬럼 부피(150 mL) 후에 20 bar를 초과하는 압력에 도달하였다. 이 카트리지는 블록화하여 폐기하였다.
실시례 4 - 350 g의 크로마토그래피 컬럼의 평형화(본 발명)
350 g의 20 μm의 구형 실리카를 수용한 카트리지(530 mL 컬럼 부피)를 50:50의 비율의 총 1060 mL의 디클로로메탄:메탄올의 균일 농도 혼합물을 사용하여 10 bar의 최대 허용 압력에서 평형화하였고, 이 혼합물 중의 메탄올은 열을 발생하는 것으로 알려진 용매이다. 유량을 제어하여 최대 200 mL/min에 도달하도록 허용하였다.
전체 평형화 프로세스는 10 분 동안 수행하였다. 본 발명에 따른 평형화 프로세스 중에, 압력은 10 bar로 유지하였고, 유량은, "히트 존"이 약 530 mL(1 컬럼 부피) 이후에 카트리지의 저부 프릿에 도달했을 때, 자동적으로 최저로 몇 초 동안 49 mL/min까지 하향 조절하였다.
카트리지의 표면 온도를 연속적으로 모니터링하였고 최대 53℃로 나타났다. 추가의 530 mL의 균일 농도의 혼합물(총 1060 mL, 2 컬럼 부피)을 10 bar 또는 200 mL/min로 펌핑한 후, 카트리지의 내부 온도를 연속적으로 모니터링하여 28℃임을 알았고, 압력은 150 mL/min에서 6.0 bar까지 떨어졌다. 카트리지를 주의 깊게 육안으로 검사한 결과 완전히 평형화된 것으로 나타났다.
다음에 이 카트리지를 300 mL/min의 유량 및 8.7 bar의 압력으로 실행할 수 있다.
이 카트리지를 200 mL/min의 고정된 유량에서 압력 조절 없이 실행했을 때, 카트리지의 내부 온도를 모니터링하여 59℃임을 알았고, 압력은 약 1 컬럼 부피(530 mL) 후에 20 bar를 초과하는 압력에 도달하였다.
이 카트리지는 블록화하여 폐기하였다.
따라서, 종래에 사용되는 컨디셔닝은 본 발명에 따른 방법보다 많은 용매를 사용하고 더 긴 시간을 요하는 것으로 나타났다.
Claims (11)
- 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 방법으로서,
상기 방법은,
a) 적어도 하나의 불활성 및 친수성인 크로마토그래피 수지로 충전된 컬럼을 제공하는 단계; 및
b) 상기 컬럼을 통해 하나 이상의 용매를 통과시키는 단계를 포함하며;
상기 용매는 상기 크로마토그래피 수지보다 친수성이 낮고;
상기 컬럼을 통과하는 용매의 유량은 컬럼 압력이 미리 정의된 임계값을 초과하지 않도록 하는 유량으로 제어되는, 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼의 컨디셔닝 방법. - 제 1 항에 있어서,
상기 용매는 상기 크로마토그래피 수지의 평형화를 제공하는, 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼의 컨디셔닝 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 단계 b)는 2 컬럼 부피의 용매의 통과를 포함하는, 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼의 컨디셔닝 방법. - 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 수지는 다공질 실리카를 포함하는, 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼의 컨디셔닝 방법. - 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 충전된 컬럼은 적어도 하나의 필터 또는 프릿(frit)을 포함하며, 적어도 하나의 이러한 필터 또는 프릿은 상기 컬럼 내에서 상기 수지의 하류에 배치되는, 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼의 컨디셔닝 방법. - 제 5 항에 있어서,
상기 적어도 하나의 필터 또는 프릿은 폴리에틸렌과 같은 감열 재료로 제조되는, 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼의 컨디셔닝 방법. - 용매가 이 용매보다 친수성인 크로마토그래피 수지를 통과할 때의 유량을 제어함으로써 발열을 제어하는 방법으로서,
상기 방법은, 컬럼 압력이 미리 정의된 임계값을 초과하지 않도록 하는 유량으로, 용매를 컬럼을 통과시키는 단계를 포함하는, 발열 제어 방법. - 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제어는 컴퓨터에 의해 수행되는, 발열 제어 방법. - 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 시스템으로서,
상기 시스템은 적어도 하나의 불활성 및 친수성인 크로마토그래피 수지로 충전된 컬럼; 적어도 하나의 용매 용기; 상기 시스템 내의 압력을 측정하는 수단; 상기 용매를 능동적으로 제어된 유량으로 상기 컬럼을 통과시키는 수단; 및 상기 컬럼을 통과하는 용매의 유량을 상기 컬럼 내부의 미리 정의된 압력 임계값을 초과하지 않으면서 허용되는 최대값까지 조정하도록 설정된 소프트웨어를 포함하는, 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 시스템. - 제 9 항에 있어서,
상기 시스템은 하나 이상의 펌프 및 센서를 포함하는, 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 시스템. - 제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,
상기 시스템은 FLASH 크로마토그래피 컬럼의 평형화를 위한 시스템인, 건조 충전식 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하는 시스템.
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