KR20210003825A - 항-il12/il23 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서의 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 - Google Patents

항-il12/il23 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서의 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 Download PDF

Info

Publication number
KR20210003825A
KR20210003825A KR1020207033178A KR20207033178A KR20210003825A KR 20210003825 A KR20210003825 A KR 20210003825A KR 1020207033178 A KR1020207033178 A KR 1020207033178A KR 20207033178 A KR20207033178 A KR 20207033178A KR 20210003825 A KR20210003825 A KR 20210003825A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
column
chromatography column
mobile phase
hetp
ser
Prior art date
Application number
KR1020207033178A
Other languages
English (en)
Inventor
파폴 란돌프
Original Assignee
얀센 바이오테크 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 얀센 바이오테크 인코포레이티드 filed Critical 얀센 바이오테크 인코포레이티드
Publication of KR20210003825A publication Critical patent/KR20210003825A/ko

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/56—Packing methods or coating methods
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/16—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the fluid carrier
    • B01D15/166—Fluid composition conditioning, e.g. gradient
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
    • B01D15/206—Packing or coating
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
    • B01D15/361—Ion-exchange
    • B01D15/362—Cation-exchange
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
    • B01D15/361—Ion-exchange
    • B01D15/363—Anion-exchange
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B01D15/3809—Affinity chromatography of the antigen-antibody type, e.g. protein A, G, L chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C07K16/065—Purification, fragmentation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8665—Signal analysis for calibrating the measuring apparatus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/89—Inverse chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/00584—Control arrangements for automatic analysers
    • G01N35/00594—Quality control, including calibration or testing of components of the analyser
    • G01N35/00613—Quality control
    • G01N35/00623—Quality control of instruments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/56—Packing methods or coating methods
    • G01N2030/562—Packing methods or coating methods packing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
    • G01N2030/8831—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving peptides or proteins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/889—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 monitoring the quality of the stationary phase; column performance

Abstract

본 발명은 항-IL-12/IL-23p40 항체, 예를 들어 항-IL-12/IL-23p40 항체 STELARA®(우스테키누맙), 상기 항체의 특정 약제학적 조성물, 및 이의 항원 결합 단편을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서 크로마토그래피 컬럼을 작동시키는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 컬럼 충전물(column packing)을 포함하는 크로마토그래피 컬럼의 작동 동안 2개 이상의 간격으로 적어도 하나의 이동상 전이 전선(mobile phase transition front)의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하는 단계를 포함한다. 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 수집된 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터에 기초하여 모델 감마 누적 분포 곡선이 결정된다. 모델 감마 누적 분포 곡선의 파라미터를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 이론단 상당 높이(HETP) 값이 계산되고, 계산된 HETP 값에 기초하여 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질이 평가된다. 일상적인 컬럼 모니터링 동안, HETP에서의 불리한 경향이 관찰되거나 관리 한계선이 초과되는 경우에는, 확인된 배치(batch)에 대한 생성물 품질을 보장하기 위해 용리 생성물 품질, 컬럼 공정 성능, 및/또는 불순물 제거 데이터가 평가되어야 한다. 생성물 품질 또는 컬럼 성능 중 임의의 것이 기준 세트에 합격하지 못한다면, 적절한 교정 활동, 예컨대 컬럼의 컨디셔닝, 재충전(repacking) 또는 교체, 그리고 적격성 평가(qualification)가 추가 사용을 위한 방출 전에 수행되어야 한다.

Description

항-IL12/IL23 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서의 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가
관련 출원과의 상호 참조
본 출원은 2018년 4월 20일자로 출원된 미국 가출원 제62/660,340호에 대한 우선권을 주장하며, 이 출원은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
기술분야
본 발명은 항-IL-12/IL-23p40 항체, 예를 들어 항-IL-12/IL-23p40 항체 STELARA®(우스테키누맙), 상기 항체의 특정 약제학적 조성물, 및 이의 항원 결합 단편을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서의 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가(qualification)의 방법에 관한 것이다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 언급
본 출원은 파일명이 "JBI6082USNP1 Sequences"이고, 작성일이 2019년 4월 17일이며, 크기가 14 kb인 ASCII 포맷 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-웹을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
컬럼 크로마토그래피는 치료용 단백질을 생성하기 위한 정제 공정에 사용되는 중요한 기법이다. 컬럼의 성능은 상기 공정이 벤치 톱(bench top)으로부터 제조 플랜트까지 스케일 확대됨에 따라 유지되어야 하고 컬럼 수명 전체에 걸쳐 유지되어야 한다. 상기 공정의 스케일 확대를 위해 컬럼 직경, 장비, 및 완충액 소비가 증가함에 따라, 컬럼 평가 절차에 있어서의 어려움, 충전된 베드(packed bed)의 완전성에 대한 잠재적인 변화, 및 로지스틱스(logistics)가 발생될 수 있다.
크로마토그래피 컬럼 적격성 평가를 위한 현재 방법은, 최대 피크로부터 평균을 그리고 반높이에서의 피크의 폭으로부터 표준 편차를 추정함으로써, 펄스 주입 후의 분산의 척도인 이론단 상당 높이(Height Equivalent to Theoretical Plate, HETP)를 계산한다. 이러한 방법의 주요 제한은 피크 형상이 가우시안 분포로부터 벗어날 때 분산의 정확한 척도(즉, HETP)를 제공하지 않는다는 것이다. 감도의 결여를 보상하기 위해, 제2 측정치인 비대칭도(Asymmetry)가 피크 왜도(peak skewness)를 평가하는 데 이용된다. 이러한 척도는 최대 피크 높이의 10%에서 리딩(leading) 피크 폭과 테일링(tailing) 피크 폭을 비교한다. 이러한 접근법의 제한은 컬럼 성능의 변화에 대한 감도의 결여를 초래하고, 종종 컬럼의 재충전(repacking) 또는 컨디셔닝을 초래하지만, 컬럼 성능은 실제로 허용가능하다. 컬럼 적격성 평가를 위한 다른 전략이 보고되어 있다. 이들 전략은 공정 전이(process transition)에서 가우시안 또는 비가우시안 분포를 사용하여 모델링하는 것을 포함한다(예를 들어, 문헌[Larson, et al., "Use of Process Data to Assess Chromatographic Performance in Production-Scale Protein Purification Columns," Biotechnol. Prog. 19:485-492 (2003)] 및 Belousov et al.에게 허여된 미국 특허 제9,047,438호, 및 Ganguly에게 허여된 제8,410,928호 참조). 가우시안 접근법은 주입 방법에 대해 상기에 언급된 바와 같이 감도에 있어서 동일한 제한을 가지며, 보고된 비가우시안 접근법은 복잡한 계산을 필요로 한다.
반복된 작동 동안 크로마토그래피 컬럼 성능의 변화를 모니터링하고 컬럼이 그의 수명에 걸쳐 수행할 유효성을 평가하기 위해 더 큰 감도 및 더 합리적으로 정의된 제한을 갖는 개선된 적격성 평가 절차가 필요하다. 본 발명은 당업계에서의 이러한 결함을 극복하는 것에 관한 것이다.
본 발명의 실시 형태는 본 명세서에 첨부된 독립항 및 종속항에 의해 각각 정의되어 있으며, 이들은 간략함을 위하여 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 발명의 다양한 태양의 다른 실시 형태, 특징 및 이점이 첨부 도면과 관련하여 취해진 하기의 상세한 설명으로부터 명백하다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은 항-IL-12/IL-23p40 항체, 상기 항체의 특정 약제학적 조성물, 및 이의 항원 결합 단편을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서 크로마토그래피 컬럼을 작동시키는 방법을 제공하며, 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체는 (i) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC) 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC); (ii) 서열 번호 7의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호 8의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열; 및 (iii) 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 중쇄 CDR 아미노산 서열, 및 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 경쇄 CDR 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 이 방법은 컬럼 충전물(column packing)을 포함하는 크로마토그래피 컬럼의 제1 작동 동안 2개 이상의 간격으로 적어도 하나의 이동상 전이 전선(mobile phase transition front)의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하는 단계를 포함한다. 이 방법은 상승 전이 전선에 대한 식 Ia 또는 하강 전이 전선에 대한 식 Ib를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 수집된 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터에 기초하여 모델 감마 누적 분포 곡선을 결정하는 단계를 추가로 포함한다:
[식 Ia]
Figure pct00001
또는
[식 Ib]
Figure pct00002
(여기서, C는 주어진 V에 대한 컬럼 출구 신호이고, V는 누적 유량을 컬럼 부피로 나눈 값이고, k, θ, 및 V i 는 상기 곡선을 정의하는 데 사용되는 형상, 스케일 및 오프셋 파라미터임). 이론단 상당 높이(HETP) 값이 식 II, 및 k, θ, 및 V i 의 모델 감마 누적 분포 곡선 파라미터를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 계산된다:
[식 II]
Figure pct00003
(여기서,
Figure pct00004
,
Figure pct00005
, 및
L = 컬럼 길이).
크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질이, 계산된 HETP 값에 기초하여 평가된다. 이 평가에 기초하여, 크로마토그래피 컬럼은 재사용, 컨디셔닝, 교체, 또는 재충전된다.
본 명세서에서 감마 분포 전이 분석(Gamma Distribution Transition Analysis, GDTA)으로 지칭되는, 컬럼 완전성을 평가하기 위한 새로운 방법을 개발하였다. 이 새로운 방법은 컬럼 작동의 규칙적인 공정 단계들 동안 생성되는 이동상 전이 전선 데이터를 통해 곡선을 적합화하기 위해 수학적 모델을 사용한다. 이어서, 모델 곡선 파라미터를 이용하여 컬럼 품질의 척도로서 컬럼 베드를 가로지르는 분산을 계산한다. 이동상 전이 전선은 크로마토그래피 정제 공정에서 별개의 단계들로부터 발생하는데, 여기서는 전도도, pH, 및/또는 완충액 성분과 같은 상이한 특성을 갖는 공정 완충액/세척 용액이 사용된다. 상기 방법은 일반적으로 통상적인 컬럼 처리 동안 생성되는 임의의 하나 이상의 이동상 전이 전선에 적용될 수 있다.
GDTA 방법의 주요 이점은 가우시안 HETP 추정 방법보다 컬럼 베드를 가로지르는 분산의 더 민감한 게이지를 제공한다는 것이다. GDTA를 사용함으로써 비대칭도를 측정하는 것이 더 이상 필요하지 않은데, 그 이유는, GDTA 모델은 곡선 적합(curve fit)으로부터 분산을 정확하게 측정하기 때문이다. 추가적으로, 감마 분포 함수의 사용은 이전에 보고된 대안적인 비가우시안 방법과 비교할 때 전선 전이의 용이한 분석을 가능하게 한다. 크로마토그래피 공정에 이미 존재하는 이동상 전이의 사용은 추가의 오프라인 처리 단계에 대한 필요성을 피하게 해준다. 더욱이, 많은 경우에, 이력 데이터는 구현 전에 컬럼 효율의 이력 범위의 확립을 가능하게 한다. 마지막으로, GDTA 방법은 일관된 적용을 보장하기 위해 자동화될 수 있다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은 항-IL-12/IL-23p40 항체, 상기 항체의 특정 약제학적 조성물, 및 이의 항원 결합 단편을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서 크로마토그래피 컬럼을 작동시키는 방법을 제공하며, 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체는 (i) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC) 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC); (ii) 서열 번호 7의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호 8의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열; 및 (iii) 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 중쇄 CDR 아미노산 서열, 및 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 경쇄 CDR 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 방법은
컬럼 충전물을 포함하는 상기 크로마토그래피 컬럼의 제1 작동 동안 2개 이상의 간격으로 적어도 하나의 이동상 전이 전선의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하는 단계;
상승 전이 전선에 대한 식 Ia 또는 하강 전이 전선에 대한 식 Ib를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 수집된 상기 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터에 기초하여 모델 감마 누적 분포 곡선을 결정하는 단계:
[식 Ia]
Figure pct00006
또는
[식 Ib]
Figure pct00007
(여기서, C는 주어진 V에 대한 컬럼 출구 신호이고, V는 누적 유량을 컬럼 부피로 나눈 값이고, k, θ, 및 V i 는 상기 곡선을 정의하는 데 사용되는 형상, 스케일 및 오프셋 파라미터임);
식 II, 및 k, θ, 및 V i 의 상기 모델 감마 누적 분포 곡선 파라미터를 사용하여 상기 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 이론단 상당 높이(HETP) 값을 계산하는 단계:
[식 II]
Figure pct00008
(여기서,
Figure pct00009
Figure pct00010
L = 컬럼 길이); 및
상기 계산된 HETP 값에 기초하여 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질을 평가하는 단계를 포함한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은,
상기 평가에 기초하여 상기 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝, 교체, 또는 재충전하는 단계를 추가로 포함하는, 방법을 제공한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은,
상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 1회 이상의 후속 사용 동안 2개 이상의 간격으로 상응하는 이동상 전이 전선의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하는 단계;
상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 1회 이상의 후속 사용의 매회 사용 동안 수집된 상기 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 사용하여 상기 결정하는 단계 및 상기 계산하는 단계를 수행하는 단계;
상기 수행하는 단계에 기초하여 상기 1회 이상의 후속 사용의 매회 사용 동안 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 HETP 값을 결정하는 단계;
2회 이상의 후속 사용의 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 결정된 HETP 값의 경향을 컴파일하는 단계; 및
상기 컴파일된 경향에 기초하여 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질의 변화를 확인하는 단계를 추가로 포함하는, 방법을 제공하며, 상기 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝, 교체 또는 재충전하는 단계는 상기 확인하는 단계에 기초한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은, 상기 컬럼 충전물의 1회 이상의 조기 사용에서의 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 HETP 값과 대비하여 상기 컬럼 충전물의 1회 이상의 후속 사용에서의 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 HETP 값의 증가가 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질의 감소를 확인시켜 주는, 방법을 제공한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은, 상기 컬럼 충전물의 상기 제1 작동 동안 2개 이상의 상이한 이동상 전이 전선의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터가 수집되는, 방법을 제공하며, 상기 방법은
상기 2개 이상의 상이한 이동상 전이 전선 각각에 대해 수집된 상기 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 사용하여 상기 결정하는 단계 및 상기 계산하는 단계를 수행하여 독립적으로 상기 2개 이상의 상이한 이동상 전이 전선 각각에 대해 HETP 값을 계산하는 단계;
상기 2개 이상의 계산된 HETP 값에 기초하여 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질을 평가하는 단계를 포함하며, 이로써 상기 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝, 교체 또는 재충전하는 단계는 상기 평가하는 단계에 기초한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은, 상기 크로마토그래피 컬럼이 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼, 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼, 및 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법을 제공한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은, 상기 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼은 MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼을 포함하고, 상기 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼은 UNOsphere S™ 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼 또는 SP Sepharose XL 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 포함하고, 상기 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼은 Q Sepharose™ XL 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 포함하는, 방법을 제공한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은, 상기 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼에서의 상기 이동상 전이 전선이 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체의 정제 동안 생성된 세척 전선, 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체의 용리 동안 생성된 전선, 구아니딘 HCl을 사용한 상기 컬럼의 위생처리(sanitization) 동안 생성된 전선, 0.1 M 소듐 시트레이트(pH 3.5)를 사용한 상기 컬럼의 위생처리 후 헹굼 동안 생성된 전선으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 전선으로부터 생성되는, 방법을 제공한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은, 상기 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼에서의 상기 이동상 전이 전선이 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체를 포함하는 용매/세제(S/D) 처리된 물질의 로딩 동안 생성된 전선, 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체의 용리 동안 생성된 전선, 및 컬럼 스트립핑 동안 생성된 전선으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 전선으로부터 생성되는, 방법을 제공한다.
소정 실시 형태에서, 본 발명은, 상기 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼에서의 상기 이동상 전이 전선이 수산화나트륨을 사용한 상기 컬럼의 세정 동안 생성된 전선 및 컬럼 스트립핑 동안 생성된 전선으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 전선으로부터 생성되는, 방법을 제공한다.
도 1a 및 도 1b는 예시적인 감마 분포 전이 분석 곡선 적합의 그래프를 나타낸다. 도 1a는 이동상 전이 데이터에 대한 예시적인 감마 분포 전이 분석 곡선 적합을 나타낸 그래프이다. 도 1b는 파라미터와 함께, 이동상 전이 데이터에 대한 예시적인 감마 분포 전이 분석 곡선 적합을 나타낸 그래프로서, 이때 그 곡선으로부터의 상기 파라미터는 컬럼 효율의 척도로서의 이론단 상당 높이(HETP)를 계산하는 데 사용된다.
도 2는 본 명세서에 기재된 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 시스템을 나타낸 다이어그램이다.
도 3은 변환을 갖지 않은 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 HETP의 확률 도표이다.
도 4는 변환을 갖지 않은 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 제곱합(SS)의 확률 도표이다.
도 5는 변환을 갖지 않은 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 HETP의 확률 도표이다.
도 6은 변환을 갖지 않은 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 SS의 확률 도표이다.
도 7은 자연 로그(λ=0) 변환을 갖는 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 HETP의 확률 도표이다.
도 8은 자연 로그(λ=0) 변환을 갖는 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 SS의 확률 도표이다.
도 9는 자연 로그(λ=0) 변환을 갖는 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 HETP의 확률 도표이다.
도 10은 자연 로그(λ=0) 변환을 갖는 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 SS의 확률 도표이다.
도 11은 단백질 A 컬럼 평형에 대한 평균(V m )의 확률 도표이다.
도 12는 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 평균(V m )의 확률 도표이다.
도 13은 자연 로그(λ=0) 변환을 갖는 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 HETP의 관리도(control chart)이다. UCL = 상한 관리 한계선; LCL = 하한 관리 한계선. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙(Shewhart rule) 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치(outlier) 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 14는 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 HETP의 시계열 도표이다. UCL은 도 13에서의 변환 데이터로부터 도출된다.
도 15는 자연 로그(λ=0) 변환을 갖는 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 SS의 관리도이다. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 16은 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 SS의 시계열 도표이다. UCL은 도 15에서의 변환 데이터로부터 도출된다.
도 17은 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 평균(V m )의 관리도이다. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 18은 자연 로그(λ=0) 변환을 갖는 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 HETP의 관리도이다. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 19는 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 HETP의 시계열 도표이다. UCL은 도 18에서의 변환 데이터로부터 도출된다.
도 20은 자연 로그(λ=0) 변환을 갖는 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 SS의 관리도이다. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 21은 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 SS의 시계열 도표이다. UCL은 도 20에서의 변환 데이터로부터 도출된다.
도 22는 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 평균(V m )의 관리도이다. 그래프 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 23은 컬럼 팩에 의해 그룹화된 직접 생성물 포획(direct product capture, DPC) 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 HETP 결과의 시계열 도표이다.
도 24는 컬럼 팩에 의해 그룹화된 DPC 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 HETP 결과의 시계열 도표이다.
도 25는 스키드(skid)에 의해 그룹화된 DPC 단백질 A 컬럼 평형 전선에 대한 HETP 결과의 시계열 도표이다.
도 26은 스키드에 의해 그룹화된 DPC 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 HETP 결과의 시계열 도표이다.
도 27은 DPC 단백질 A 컬럼 평형에 대한 평균 유량을 나타낸 차트이다. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 28은 평형 동안의 평균 사전-컬럼 압력의 차트이다. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 29는 DPC 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 평균 세척 유량의 차트이다. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 30은 DPC 단백질 A 컬럼 세척 전선에 대한 평균 세척 압력의 차트이다. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 31은 세척 유량의 변경 전과 후의 HETP를 나타낸 차트이다. 차트 상의 번호가 매겨진 포인트들은 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 HETP 결과에 있어서 명백한 이상치 및/또는 경향을 보여주며, 즉 1은 1개의 포인트가 관리 한계선 밖에 있음을 나타내고, 2는 8개의 포인트가 중심선의 동일한 측에 있음을 나타내고, 3은 6개의 연속적인 포인트가 꾸준히 증가하거나 감소함을 나타낸다.
도 32는 45개의 배치의 REMICADE®(인플릭시맙)에 대한 평형 전선에 걸쳐 평가된 바와 같은 2개의 상이한 단백질 A 컬럼 팩에 대한 HETP의 시계열 그래프이다.
도 33은 SP-Sepharose 고성능(SPHP) 컬럼 평형 전선에 대한 HETP의 시계열 도표이다. 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스(Box-Cox) 변환 데이터로부터 도출된다.
도 34는 SPHP 컬럼 WFI 플러시 전선에 대한 HETP의 시계열 도표이다. 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환 데이터로부터 도출된다.
도 35는 SPHP 컬럼 저장 전선에 대한 HETP의 시계열 도표이다. 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환 데이터로부터 도출된다.
도 36은 Q2 컬럼 평형 전선에 대한 HETP의 시계열 도표이다. 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환 데이터로부터 도출된다.
도 37은 Q2 컬럼 스트립핑 평형 전선에 대한 HETP의 시계열 도표이다. 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환 데이터로부터 도출된다.
도 38은 Q2 컬럼 저장 전선에 대한 HETP의 시계열 도표이다. 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환 데이터로부터 도출된다.
도 39는 우스테키누맙 제조 공정의 10개의 스테이지의 개요를 나타낸다.
도 40은 STELARA®(우스테키누맙)의 정제 동안 생성된 세척 2 전선에 대한 스테이지 3의 MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다.
도 41은 STELARA®(우스테키누맙)의 용리 동안 생성된 전선에 대한 스테이지 3의 MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다.
도 42는 SIMPONI®(골리무맙)의 용리 동안 생성된 전선에 대한 스테이지 3의 MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다. DPC는 MabSelect™ 단백질 A 컬럼 상에의 SIMPONI®(골리무맙)의 직접 생성물 포획을 지칭한다.
도 43은 구아니딘 HCl을 사용한 위생처리 동안 생성된 전선에 대한 스테이지 3의 MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다. DPC는 MabSelect™ 단백질 A 컬럼 상에의 SIMPONI®(골리무맙)의 직접 생성물 포획을 지칭한다.
도 44는 0.1 M 소듐 시트레이트(pH 3.5)를 사용한 위생처리 후 헹굼 동안 생성된 전선에 대한 스테이지 3의 MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다. DPC는 MabSelect™ 단백질 A 컬럼 상에의 SIMPONI®(골리무맙)의 직접 생성물 포획을 지칭한다.
도 45는 SIMPONI®(골리무맙)를 함유하는 용매/세제(S/D) 처리된 물질의 로딩 동안 생성된 스테이지 6의 UNOsphere S™ 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼 전선에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다. PS1은 UNOsphere S™ 컬럼 상의 SIMPONI®(골리무맙)에 대한 폴리싱 단계(Polishing Step) 1을 지칭한다.
도 46은 SIMPONI®(골리무맙)의 용리 동안 생성된 스테이지 6의 UNOsphere S™ 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼 전선에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다. PS1은 UNOsphere S™ 컬럼 상의 SIMPONI®(골리무맙)에 대한 폴리싱 단계 1을 지칭한다.
도 47은 컬럼 스트립핑 동안 생성된 스테이지 6의 UNOsphere S™ 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼 전선에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다. PS1은 UNOsphere S™ 컬럼 상의 SIMPONI®(골리무맙)에 대한 폴리싱 단계 1을 지칭한다.
도 48은 수산화나트륨에 의한 세정 동안 생성된 스테이지 7의 Q Sepharose™ XL 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼 전선에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다. PS2는 Q Sepharose™ XL 컬럼 상의 SIMPONI®(골리무맙)에 대한 폴리싱 단계 2를 지칭한다.
도 49는 컬럼 스트립핑 동안 생성된 스테이지 7의 Q Sepharose™ XL 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼 전선에 대한 HETP 결과를 나타낸 차트이다. PS2는 Q Sepharose™ XL 컬럼 상의 SIMPONI®(골리무맙)에 대한 폴리싱 단계 2를 지칭한다.
본 발명은 항-IL-12/IL-23p40 항체, 예를 들어 항-IL-12/IL-23p40 항체 STELARA®(우스테키누맙), 및 상기 항체의 특정 약제학적 조성물을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서 크로마토그래피 컬럼의 반복된 작동 동안 충전된 크로마토그래피 컬럼 베드의 변화를 모니터링하기 위한 개선된 적격성 평가 절차에 관한 것이다. 스케일과 무관하게 이러한 방법은 컬럼이 컬럼 수명 전체에 걸쳐 수행할 유효성을 평가하기 위한 실제적인 수단을 제공한다.
크로마토그래피 컬럼 분리 효율은 종종 크로마토그래피의 이론단 모델을 사용하는 것을 특징으로 한다. 이러한 접근법을 사용하면, 크로마토그래피 컬럼은 다수의 스테이지 또는 이론단으로 이루어진 것으로 인식된다. 각각의 단은 샘플 성분들이 이동상과 고정상 사이에서 평형을 달성하는 거리이다(문헌[Van Deemter, Zuiderweg and Klinkenberg, "Longitudinal Diffusion and Resistance to Mass Transfer as Causes of Nonideality in Chromatography," Chem. Engng. Sci. 5: 271-289 (1956)]을 참조하며, 이는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함됨). 컬럼 효율은 컬럼 내의 이론단수 N p 에 의해 측정되며, 여기서 컬럼 내의 더 많은 단수는 더 많은 평형, 크로마토그래피 밴드의 더 적은 분산, 더 좁은 피크, 및 더 우수한 품질의 분리를 의미한다. 주어진 컬럼 내의 단수가 많을수록 단높이는 더 낮아진다. 따라서, 컬럼 효율은 또한 단높이를 계산함으로써 측정될 수 있으며, 이러한 단높이는 "이론단 상당 높이" 또는 HETP로 지칭된다. 이러한 접근법을 사용하면, HETP 값이 작을수록 컬럼 분리의 효율은 더 높아진다.
HETP는 크로마토그래피 컬럼 길이 L을 이론단수 N p 로 나눔으로써 계산된다.
HETP = L/ N p
컬럼이 갖는 이론단수는 역사적으로 하기 식을 사용하여 펄스 주입 후의 크로마토그래피 피크를 조사함으로써 결정되었다:
Figure pct00011
여기서, t R 은 체류 시간이고, w 1/2 는 반높이에서의 피크 폭이다. 그러나, 이러한 접근법은 N p 를 계산하는 데 사용되는 피크 형상이 가우시안 분포로부터 벗어날 때 컬럼 효율의 정확한 척도를 제공하지 못한다. 감도의 이러한 결여를 보상하기 위해, 제2 측정치인 비대칭도가 피크 왜도를 평가하는 데 사용된다. 이러한 척도는 최대 피크 높이의 10%에서 리딩 피크 폭과 테일링 피크 폭을 비교한다. 상기에 논의된 바와 같이, 이 모델은 컬럼 성능의 변화를 검출하는 감도가 결여되어 있다.
본 명세서에 기재된 방법은 일상적인 크로마토그래피 컬럼 작동 동안 발생하는 하나 이상의 이동상 전이 전선에 걸친 감마 분포에 기초하는 HETP의 대안적이고 더 정확한 척도를 제공한다. 따라서, 본 발명은 크로마토그래피 컬럼을 작동시키는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 컬럼 충전물이 담긴 크로마토그래피 컬럼의 제1 작동 동안 2개 이상의 간격으로 적어도 하나의 이동상 전이 전선의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하는 단계를 포함한다. 이 방법은 상승 전이 전선에 대한 식 Ia 또는 하강 전이 전선에 대한 식 Ib를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 수집된 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터에 기초하여 모델 감마 누적 분포 곡선을 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
[식 Ia]
Figure pct00012
또는
[식 Ib]
Figure pct00013
식 Ia 및 식 Ib와 관련하여, C는 주어진 V에 대한 컬럼 출구 신호이고, V는 누적 유량을 컬럼 부피로 나눈 값이고, k, θ, 및 V i는 곡선을 정의하는 데 사용되는 형상, 스케일 및 오프셋 파라미터이다. 이론단 상당 높이(HETP) 값이 식 II, 및 k, θ, 및 V i 의 모델 감마 누적 분포 곡선 파라미터를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 계산된다:
(여기서,
[식 II]
Figure pct00014
Figure pct00015
, 및
L = 컬럼 길이).
크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질이, 계산된 HETP 값에 기초하여 평가된다. 컬럼 품질의 평가에 기초하여, 크로마토그래피 컬럼이 후속 사용을 위해 허용가능한지, 아니면 컨디셔닝, 교체, 또는 재충전되어야 하는지가 결정된다.
본 명세서에 개시된 컬럼 적격성 평가의 방법은 임의의 크로마토그래피 컬럼에 적용될 수 있다. 예시적인 크로마토그래피 컬럼은, 제한 없이, 액체 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 이온 교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 분자 배제 크로마토그래피, 초임계 유체 크로마토그래피, 기체 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 2차원 크로마토그래피, 고속 단백질(FPLC) 크로마토그래피, 향류 크로마토그래피, 키랄 크로마토그래피, 수성 정상(ANP) 크로마토그래피, 혼합 모드 크로마토그래피, 및 유사-친화성 크로마토그래피에 사용되는 것들을 포함한다. 예시적인 컬럼 충전 재료는, 제한 없이, 친화성 크로마토그래피 충전 재료(예를 들어, 단백질 A 또는 단백질 G 친화성 크로마토그래피 충전 재료), 이온 교환 크로마토그래피 충전 재료(예를 들어, 양이온 교환(카르복시메틸 수지), 음이온 교환(아미노 에틸 수지), 및 혼합-모드 교환 크로마토그래피 충전 재료), 흡착 크로마토그래피 충전 재료(예를 들어, 실리카 겔 또는 알루미나 충전 재료), 소수성 상호작용 크로마토그래피 충전 재료(예를 들어, 페닐-세파로스, 아자-아레노필릭(aza-arenophilic) 수지, 또는 m-아미노페닐보론산 충전 재료), 금속 킬레이트 친화성 크로마토그래피 충전 재료(예를 들어, Ni(II)- 및 Cu(II)-친화성 재료), 크기 배제 크로마토그래피 충전 재료(예를 들어, 겔 전기영동 또는 모세관 전기영동 충전 재료), 또는 분자 배제 크로마토그래피 충전 재료(예를 들어, 폴리스티렌)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 방법은 일상적인 크로마토그래피 컬럼 작동 동안, 예를 들어, 샘플 내의 화학적 또는 생물학적 실체의 단리, 정제, 또는 확인 동안 적용될 수 있다. 그러한 화합물은, 예를 들어 그러나 제한 없이, 단백질(예를 들어, 항체 및 이의 단편), 핵산, 탄수화물, 지질, 유기 소분자, 무기 소분자, 바이러스, 리포솜, 및 임의의 그러한 화합물의 하이브리드 또는 변이체 형태를 포함할 수 있다.
테스트를 위해 컬럼이 오프라인에서 취해질 것을 요구하는 이전의 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 방법과는 대조적으로, 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법은 일상적인 컬럼 작동 동안 수행된다. 본 방법은 일상적인 컬럼 정제 공정 동안 발생하는, 상이한 특성을 갖는 공정 완충액 및 용액을 수반하는 이동상 공정 전이를 이용한다.
본 발명의 방법에 따르면, "이동상" 은 크로마토그래피 컬럼 충전물의 고정 크로마토그래피 재료를 둘러싸고 이를 통해 이동하는 컬럼 크로마토그래피 내의 액체상이다. 크로마토그래피 컬럼 작동 동안, 이동상의 조성 및 특성은 종종 각각의 공정 단계, 예를 들어 평형, 세척 등에 따라 변화한다. 이동상의 특성의 변화는 용리액, 즉 고정상을 통과한 후에 컬럼으로부터 용리되는 이동상에서 검출되고 측정될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "컬럼 출구 신호"는 용리액이 컬럼으로부터 용리되어 나옴에 따라 검출되는 이동상으로부터의 용리액의 물리적 또는 화학적 특성의 신호이다. 컬럼 출구 신호를 제공하는 물리적 또는 화학적 특성은 임의의 전형적인 크로마토그래피 검출기를 사용하여 측정될 수 있는 임의의 특성, 예컨대 pH, 전도도, 광 흡수, 형광, 전하, 염 농도, 편광측정치, 굴절률, 전기화학적 응답, 질량-대-전하 비 등일 수 있다. 컬럼 출구 신호를 측정하기에 적합한 크로마토그래피 검출기는, 제한 없이, 질량 분광계, 적외선 분광계, 가시광선 분광계, 자외선 분광계, 푸리에 변환 적외선 분광계, 화염 이온화 검출기, 소각 레이저 광 산란 검출기, 다이오드 어레이 검출기, 형광 분광기, pH 검출기, 전도도 검출기, 전기화학 검출기, 및 굴절률 검출기를 포함한다.
컬럼 출구 신호는 용리액으로부터 수집된다. 게다가, 컬럼 출구 신호를 수집하기 위해, "누적 유량"이 또한 수집된다. "누적 유량"은 시간 경과에 따라 컬럼으로부터 용리된 유체의 총 부피이다. 이 값을 컬럼의 부피로 나누어서 컬럼 부피의 단위로 표현한다.
누적 유량에 걸친 컬럼 출구 신호의 변화에 의해 전이 전선이 생성된다. 컬럼에 대한 하나 이상의 상이한 특성(예를 들어, 전도도, pH 등)을 갖는 상이한 이동상들의 순차적인 적용으로부터 전이 전선이 발생한다. 본 명세서에 기재된 방법에 따르면, 전이 전선에 걸친 컬럼 출구 신호는 1의 최대값 및 0의 최소값을 갖도록 정규화될 수 있다. 본 명세서에 언급된 바와 같이, "하강 전이 전선"은 출발 이동상의 컬럼 출구 신호, 예를 들어 전도도가 순차적으로 도입되는 이동상의 컬럼 출구 신호보다 높은 이동상 전이이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "상승 전이 전선"은 출발 이동상의 컬럼 출구 신호, 예를 들어 전도도가 순차적으로 도입되는 이동상의 컬럼 출구 신호보다 낮은 이동상 전이이다.
컬럼 작동 과정 동안 적격성이 평가될 컬럼 충전물이 담긴 크로마토그래피 컬럼에 제1 이동상을 첨가함으로써 전이 전선을 생성한다. 제1 이동상의 첨가 후 어떠한 시점에서, 예를 들어 제1 이동상이 용리되기 시작함에 따라, 제1 이동상과 비교하여 상이한 검출가능한 컬럼 출구 신호를 갖는 제2 이동상이 컬럼 충전물이 담긴 크로마토그래피 컬럼에 첨가된다. 전이 전선은 이동상이 제1 이동상과 제2 이동상 사이에서 전이할 때 2개 이상의 간격으로 이동상의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집함으로써 검출된다.
일 실시 형태에서, 제1 이동상과 제2 이동상에 대한 컬럼 출구 신호는 신호 잡음을 초과하는 양만큼 신호가 상이하다. 일 실시 형태에서, 제1 이동상과 제2 이동상 사이의 컬럼 출구 신호의 차이는 배경 신호 잡음보다 5% 더 크다. 다른 실시 형태에서, 제1 이동상과 제2 이동상 사이의 컬럼 출구 신호의 차이는 배경 신호 잡음보다 적어도 10% 더 크다. 다른 실시 형태에서, 제1 이동상과 제2 이동상 사이의 컬럼 출구 신호의 차이는 배경 신호 잡음보다 적어도 15% 더 크다.
일 실시 형태에서, 전이 전선에 걸쳐 검출된 컬럼 출구 신호는 전도도이다. 이 실시 형태에서, 제1 이동상과 제2 이동상 사이의 컬럼 출구 신호는 바람직하게는 적어도 1 μS/cm만큼, 적어도 10 μS/cm만큼, 적어도 100 μS/cm만큼, 적어도 1 mS/cm만큼, 또는 1 mS/cm 초과만큼 상이하다.
다른 실시 형태에서, 전이 전선에 걸쳐 검출된 컬럼 출구 신호는 pH이다. 이 실시 형태에서, 제1 이동상과 제2 이동상 사이의 컬럼 출구 신호는 바람직하게는 적어도 0.05 pH 단위만큼, 적어도 0.1 pH 단위만큼, 적어도 1 pH 단위만큼, 적어도 2 pH 단위만큼, 또는 2 pH 단위 초과만큼 상이하다.
다른 실시 형태에서, 전이 전선에 걸쳐 검출된 컬럼 출구 신호는 UV-Vis 흡광도이다. 이 실시 형태에서, 제1 이동상과 제2 이동상 사이의 컬럼 출구 신호는 바람직하게는 적어도 0.01 흡광도 단위만큼, 적어도 0.1 흡광도 단위만큼, 적어도 0.5 흡광도 단위만큼, 적어도 0.8 흡광도 단위만큼, 또는 0.8 흡광도 단위 초과만큼 상이하다.
다른 실시 형태에서, 전이 전선에 걸쳐 검출된 컬럼 출구 신호는 적외선 흡광도이다. 이 실시 형태에서, 제1 이동상과 제2 이동상 사이의 컬럼 출구 신호는 바람직하게는 적어도 1% 투과율만큼, 적어도 10% 투과율만큼, 적어도 20% 투과율만큼, 적어도 30% 투과율만큼, 또는 30% 투과율 초과만큼 상이하다.
일 실시 형태에서, 이동상 전이 전선은 변성제를 함유하는 이동상으로부터 비변성제를 함유하는 이동상으로의 변화에 의해 생성된다. 다른 실시 형태에서, 이동상 전이 전선은 비변성제를 함유하는 이동상으로부터 변성제를 함유하는 이동상으로의 변화에 의해 생성된다.
다른 실시 형태에서, 이동상 전이 전선은 알칼리성 이동상 조건으로부터 중성 또는 더 산성인 이동상 조건으로의 변화에 의해 생성된다. 대안적으로, 이동상 전이 전선은 산성 이동상 조건으로부터 중성 또는 더 알칼리성인 이동상 조건으로의 변화에 의해 생성된다.
다른 실시 형태에서, 이동상 전이 전선은 유기 용매-함유 이동상으로부터 수성 이동상으로의 변화에 의해 생성된다. 대안적으로, 이동상 전이 전선은 수성 이동상으로부터 유기 용매-함유 이동상으로의 변화에 의해 생성된다.
컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터는 이동상 전이 전선의 진행과정에 걸쳐 다양한 간격으로 수집된다. 바람직하게는, 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터는 최소 컬럼 출구 신호로부터 최대 컬럼 출구 신호까지 또는 그 반대로, 전체 이동상 전이 전선의 진행과정에 걸쳐 수집된다. 일 실시 형태에서, 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터는 불규칙한 간격으로 수집되며, 예를 들어 컬럼 출구 신호의 변화가 검출될 때 수집된다. 다른 실시 형태에서, 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터는 전체 이동상 전이 전선의 진행과정에 걸쳐 규칙적인 시간 간격으로 수집된다. 예를 들어, 일 실시 형태에서, 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터는 전체 이동상 전이 전선의 진행과정에 걸쳐 1초 간격으로 수집된다. 다른 실시 형태에서, 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터는 이동 전이상의 진행과정에 걸쳐 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 또는 60초 간격으로 수집된다.
일 실시 형태에서, 컬럼 출구 신호 데이터는 분석 기간에 걸쳐 최대값을 1로 설정하고 최소값을 0으로 설정함으로써 상기에 기재된 바와 같이 정규화된다. 또한, 상이한 컬럼 충전물들 사이의 데이터의 비교를 위해 표준화하기 위해 유량이 컬럼 부피로 변환된다. 이 데이터를 사용하여, 감마 누적 분포 함수("CDF")는 수집된 데이터 포인트에 최적으로 적합화되는 곡선을 생성하는 데 사용된다. 감마 CDF는 하기 식 I을 사용하여 3개의 값, 즉 형상 파라미터 k; 스케일 파라미터 θ(세타); 및 오프셋 파라미터 V i 에 의해 결정된다:
[식 I]
C = f (V, k, θ, Vi)
식 I과 관련하여, C는 주어진 V에 대한 컬럼 출구 신호이고, V는 누적 유량을 컬럼 부피로 나눈 값이다. 식 I로부터 도출된 식 Ia는 상승 전이 전선을 따른 감마 분포 함수 값을 결정하는 데 사용된다.
[식 Ia]
Figure pct00016
(여기서,
Γ는 상부 불완전 감마 함수이고,
γ는 하부 불완전 감마 함수임).
대안적으로, 식 I로부터 또한 도출된 식 Ib는 하강 전이 전선을 따른 감마 분포 함수 값을 결정하는 데 사용된다.
[식 Ib]
Figure pct00017
도 1a는 컬럼 전이 전선에 걸쳐 수집된 예시적인 정규화된 컬럼 출구 신호 및 컬럼 부피 데이터를 도표로 나타낸 그래프이다. 식 Ia를 사용하여 데이터에 대한 곡선 적합을 생성하였다.
최적 적합 감마 CDF 파라미터는 k, θ, 및 V i 의 값을 조작하여, 데이터로부터 최소 편차제곱합을 갖는 모델 곡선을 생성하는 파라미터를 찾아냄으로써 결정된다. 이 곡선을 전체 전이 전선으로부터의 데이터 포인트들을 통해 적합화하여 최적 적합 모델을 생성한다. 이 곡선으로부터의 k, θ, 및 V i 파라미터는 컬럼 효율의 지표로서의 컬럼 내의 단수 N p 또는 단높이, 즉 HETP를 계산하는 데 이용된다.
단수 N p 는 모델 곡선의 평균 μ 및 분산 σ 2 에 기초하여 계산된다. 평균 및 분산은 하기와 같이 곡선으로부터 도출된다:
평균, μ = kθ + V i
분산, σ 2 = kθ 2
단수는 하기와 같이 평균 및 분산에 기초하여 계산된다:
단수, N p = μ 2 / σ 2
HETP는 하기와 같이 컬럼 길이 L(단위: 센티미터)을 단수 N p 로 나눈 값에 기초하여 상기에 기재된 바와 같이 계산된다.
Figure pct00018
도 1b는 평균 μ 및 분산 σ 2 파라미터가 정의된, 도 1a에 나타낸 것과 동일한 그래프를 나타낸다.
본 명세서에 기재된 바와 같이 계산된 데이터에 대한 모델 적합을 평가하기 위해, 평균(V m ), 제곱합(SS), 및 모드가 또한 결정될 수 있다. SS는 모델 곡선이 도출된 공정 데이터로부터의 그러한 모델 곡선의 편차의 직접적 척도이다. V m 값은 컬럼 부피의 단위의 전이의 중심점의 척도이다. 이 값은, 전형적으로 완충액 전이를 위해 1 컬럼 부피를 취함에 따라 1에 가까워야 한다. 평균은 전형적으로 전선의 형상에 의해 영향을 받지 않는다. 평균 값은 오차에 대한 자동 계산을 검사하는 데 사용된다. 예를 들어, 낮은 값은 데이터 수집 오차를 나타낼 수 있고, 결과를 확인하기 위해 추가 조사를 필요로 할 수 있다. 모드는 변화율이 최대인 부피에 대응한다. 이는 전이 곡선이 대칭일 때의 평균과 동일할 것이다. 전형적으로, 전이들은 왜곡되고, 모드는 평균보다 낮다.
HETP에 더하여, k(형상) 파라미터로부터 계산될 수 있는 다른 인자들은, 비대칭과 관련된 척도인 왜도(γ1), 및 피크 첨예도(sharpness)의 척도인 첨도(kurtosis)(γ2)를 포함한다. 이들 인자는 컬럼 성능의 변화를 확인하는 데 사용될 수 있다.
Figure pct00019
본 명세서에 기재된 방법에 따르면, 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터는 컬럼 공정이 컬럼 상에서 실행될 때마다 동일한 이동 전이상에 대해 수집되어 감마 CDF로부터 HETP를 계산한다. 동일한 공정 단계 및 동일한 스케일에 사용되는 컬럼들에 의해 생성된 이력 데이터가 또한 검색되고 HETP를 계산하는 데 이용될 수 있다. HETP 데이터를 컴파일하여 이력상의 또는 현재의 작동 동안 상응하는 전이들의 HETP 값들에서의 경향을 확인하여 HETP 값의 상한 및 하한 관리 한계선을 확인한다. 이들 관리 한계선은 허용가능한 HETP 값들의 범위, 즉 허용가능한 컬럼 효율에 상응하는 HETP 값들의 범위를 정의하는 HETP의 높은 값 및 낮은 값이다. 이들 상한 및 하한 관리 한계선은 통계적 평가에 기초하여 설정될 수 있다. 예를 들어, 일 실시 형태에서, 상한 및 하한 관리 한계선은 평균 +/- 2, 3, 또는 4 표준 편차를 계산함으로써 설정된다. 일 실시 형태에서, 상한 및 하한 관리 한계선은 본 명세서의 실시예에 기재된 바와 같이 평균 +/- 3 표준 편차를 계산함으로써 설정된다. 다른 실시 형태에서, 상한 및 하한 관리 한계선은 이력 데이터로부터 신뢰 구간을 계산함으로써 설정될 수 있다. 일 실시 형태에서, 상한 및 하한 관리 한계선은 이력 데이터로부터 95%, 96%, 97%, 또는 98% 신뢰 구간을 계산함으로써 설정된다. 다른 실시 형태에서, 상한 및 하한 관리 한계선은 이력 데이터로부터 99% 신뢰 구간을 계산함으로써 설정된다.
상한 및 하한 관리 한계선을 이용하여 컬럼의 사용 및 시간 경과에 따른 컬럼 효율의 변화를 확인한다. 전형적으로, 상한 관리 한계선을 초과하는 HETP의 임의의 증가는 컬럼 효율의 감소를 나타낼 수 있다. 일상적인 컬럼 모니터링 동안, HETP에서의 불리한 경향이 관찰되거나 관리 한계선이 초과되는 경우에는, 확인된 배치(batch)에 대한 생성물 품질을 보장하기 위해 용리 생성물 품질, 컬럼 공정 성능, 및/또는 불순물 제거 데이터가 평가되어야 한다. 생성물 품질 또는 컬럼 성능 중 임의의 것이 기준 세트에 합격하지 못한다면, 적절한 교정 활동, 예컨대 컬럼의 컨디셔닝, 재충전 또는 교체, 그리고 적격성 평가가 추가 사용을 위한 방출 전에 수행되어야 한다. 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝하여 충전된 베드를 재분포시키는 방법은 사용되는 컬럼에 따라 달라지겠지만, 당업자에게 잘 이해된다.
컬럼 작동 동안의 컬럼 성능의 모니터링은 정제 프로토콜에 일상적으로 포함되는 하나 또는 하나 초과의 전이상에 기초할 수 있다. 바람직하게는, 모니터링은 정제 프로토콜 동안 2개, 또는 3개, 또는 그 이상의 전이상에 대한 감마 CDF에 기초하여 계산된 HETP 값에 기초한다.
하기에 언급된 바와 같이, 본 명세서에 기재된 바와 같은 GDTA 방법을 사용하여 HETP를 계산하여 컬럼 성능을 결정하는 것은 동일한 공정 단계 및 동일한 스케일에 사용되는 컬럼들로부터 수집된 이력 데이터에 기초할 수 있다. 공정 단계의 적격성 평가된 스케일 축소 모델로부터 생성된 데이터가 또한 평가에 사용될 수 있다. 이는 적격성 평가 데이터와 대비하여 컬럼의 성능의 품질의 평가를 가능하게 한다.
유량(반 딤터(Van Deemter) 효과), 잠재적인 완충액 상호작용 및 여분의 컬럼 부피와 같은 인자들은 본 명세서에 기재된 바와 같은 GDTA 방법의 결과들에 영향을 줄 수 있으며, GDTA에 대한 관리 한계선을 설정하는 데 있어서 평가되어야 한다. GDTA에 포함된 전이 전선은 바람직하게는, 이동상 컬럼 출구 신호 측정치 둘 모두는 스케일을 유지하고(on scale), 이동상들 사이의 컬럼 출구 신호 측정치 차이는 배경 신호 잡음보다 크고, 이동상과 수지 사이의 상호작용은 일관성 있고 재현가능하다는 것과 같은 기준을 충족시킨다.
사용 동안 방출 및 모니터링에 사용되는 일반적인 컬럼 평가 기준은 장비 및 수지 유형에 특이적인 이력 데이터를 평가함으로써 결정될 것이다. 컬럼 적격성 평가 결과와 성능 사이의 관계를 평가하는 데 사용될 수 있는 일상적인 생성물 품질 및 공정 성능 측정의 예가 표 1에 열거되어 있다. 평가에 사용되는 일상적인 품질 및 공정 성능 측정은 표 1에 열거된 것들로 제한되지 않으며, 이 목록은 가이드라인으로 여겨지고, 평가되는 프로젝트 및 공정 단계의 특정 요건에 기초해야 한다. 생성물 품질 및 공정 성능에 대한 규격 및 허용 기준은 프로젝트 특이적이며, 공정 요건에 기초하여 결정될 것이다.
[표 1]
Figure pct00020
본 명세서에 기재된 바와 같은 감마 분포 전이 분석 방법은 컬럼 작동 동안 실시간으로 수행될 수 있다. 이 방법은, 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스에 의해, 컬럼 충전물을 포함하는 크로마토그래피 컬럼의 제1 작동 동안 2개 이상의 간격으로 적어도 하나의 이동상 전이 전선의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하는 단계; 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스에 의해, 상승 전이 전선에 대한 식 Ia 또는 하강 전이 전선에 대한 식 Ib를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 수집된 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터에 기초하여 모델 감마 누적 분포 곡선을 결정하는 단계를 포함한다.
[식 Ia]
Figure pct00021
또는
[식 Ib]
Figure pct00022
.
식 Ia 및 식 Ib와 관련하여, C는 주어진 V에 대한 컬럼 출구 신호이고, V는 누적 유량을 컬럼 부피로 나눈 값이고, k, θ, 및 V i 는 곡선을 정의하는 데 사용되는 형상, 스케일 및 오프셋 파라미터이다. 이 방법은, 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스에 의해, 식 II, 및 k, θ, 및 V i 의 모델 감마 누적 분포 곡선 파라미터를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대한 이론단 상당 높이(HETP) 값을 계산하는 단계를 추가로 포함한다:
[식 II]
Figure pct00023
(여기서,
Figure pct00024
L = 컬럼 길이).
상기 방법은, 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스를 사용하여, 상기 계산된 HETP 값에 기초하여 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질을 평가하는 단계를 추가로 포함한다. 이러한 평가에 기초하여, 크로마토그래피 컬럼 조작자는 크로마토그래피 컬럼이 재사용될 수 있는지, 또는 다음 컬럼 작동 전에 교체, 재충전, 또는 컨디셔닝될 필요가 있는지의 여부를 결정할 수 있다.
도 2는 크로마토그래피 컬럼을 작동시키고 본 명세서에 기재된 바와 같이 실시간으로 컬럼 효율을 평가하는 방법 및 시스템의 개요를 제공하는 다이어그램이다. 도 2에 도시되고 상기에 기재된 바와 같이, 시스템(10)은 크로마토그래피 컬럼(12) - 이는 복합 혼합물, 즉 용리제(14)로서 이 컬럼 내로 도입되는 생체분자들을 분리하는 데 사용됨 -, 용리액이 크로마토그래피 컬럼으로부터 용리될 때 용리액에서 컬럼 출력 신호를 검출하는 검출기(20), 검출기(20)로부터의 신호/데이터를 송신하는 통신 인터페이스(22), 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24), 및 서버(26)를 포함한다.
크로마토그래피 컬럼(12)은 투과성, 반투과성, 또는 불투과성 고체상 컬럼 충전 재료로 채워진다. 적합한 크로마토그래피 컬럼 및 컬럼 충전 재료는 상기에 기재되어 있다. 관심 생체분자들을 함유하는 용리제(14)를 크로마토그래피 컬럼(12) 내로 도입한다. 이동상(16)이 또한 크로마토그래피 컬럼(12)에 도입된다. 이동상(16)은 크로마토그래피 컬럼(12)의 고정상을 통한 생체분자들의 분리 및 크로마토그래피 컬럼의 산출물(18)을 통한 용리액 내의 생체분자들의 용리를 용이하게 한다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법에 따르면, 이동상(16)은 하기에 기재된 바와 같이 서로 하나 이상의 물리적 또는 화학적 특성, 예를 들어 pH, 전도도, 염 농도가 상이한, 순차적으로 도입된 컬럼 완충액 및/또는 세척 시약을 포함한다. 하나 이상의 물리적 또는 화학적 특성의 이러한 차이는 검출기(20)에 의해 용리액에서 검출된다.
검출기(20)는 크로마토그래피 컬럼(12)의 산출물(18)에 결합된다. 따라서, 검출기(20)는 크로마토그래피 컬럼(12)의 용리액을 통해 컬럼 출력 신호를 모니터링하고 수집한다. 적합한 검출기 및 검출되는 용리액의 특성, 즉, 컬럼 출력 신호는 상기에 기재되어 있다. 검출기는 통신 인터페이스 유닛(22)에 결합되며, 통신 인터페이스 유닛은 검출기(20)에 의해 수집된 데이터(예를 들어, 컬럼 출력 신호 및 누적 유량 파라미터)를 데이터 처리를 위한 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24) 및/또는 저장을 위한 서버(26)에 송신한다.
본 명세서에 기재된 시스템의 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24)는 중앙 처리 장치(CPU) 또는 프로세서(32), 메모리(30), 네트워크 인터페이스(28), 및 버스(36) 또는 다른 링크에 의해 함께 결합되는 사용자 인터페이스(34)를 포함하는 임의의 컴퓨팅 디바이스, 예를 들어 컴퓨터, 개인용 컴퓨팅 디바이스, 스마트폰 등일 수 있다. 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24)는 다른 구성에서 다른 유형 및/또는 개수의 구성요소 및 요소를 포함할 수 있다.
컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24) 내의 프로세서(32)는 본 명세서에서 예로서 기재되고 예시된 감마 분포 전이 분석의 하나 이상의 태양에 대해 저장된 명령어들의 프로그램을 실행하지만, 다른 유형 및/또는 개수의 처리 디바이스가 사용될 수 있고 프로세서(32)는 다른 유형 및/또는 개수의 프로그래밍된 명령어를 실행할 수 있다. 일 실시 형태에서, 프로세서(32)는 오로지 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24) 상에만 위치된다. 다른 실시 형태에서, 프로세서는 검출기(20)와 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24) 사이에 분포된다. 예를 들어, 일 실시 형태에서, 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24)의 프로세서(32)는 검출기에 결합된 마이크로컨트롤러를 포함한다. 이 실시 형태에서, 마이크로컨트롤러는 검출기(20)에 의해 수집된 데이터를 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24)로 송신되는 디지털 신호로 맵핑 또는 변환시킬 수 있는 온-보드(on-board) 프로세서로서의 역할을 한다. 하나 이상의 검출기에 결합된 마이크로컨트롤러는 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24)의 하나 이상의 처리 기능을 수행할 수 있다.
컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24) 내의 메모리(30)는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GDTA의 하나 이상의 태양에 대한 이들 프로그래밍된 명령어를 저장한다. 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24) 내의 프로세서(32)에 결합된 자기, 광학, 또는 다른 판독 및 기록 시스템으로부터 판독되고 그에 의해 기록되는 플로피 디스크, 하드 디스크, CD ROM, DVD ROM, 또는 다른 컴퓨터 판독가능 매체, 또는 타이밍 프로세서 디바이스 내의 랜덤 액세스 메모리(RAM) 및/또는 판독 전용 메모리(ROM)와 같은 각종 다양한 유형의 메모리 저장 디바이스가 메모리(30)에 사용될 수 있다.
컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24)의 네트워크 인터페이스(28)는 작동식으로 결합하여 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24)와 검출기(20) 사이의 통신을 용이하게 하지만, 다른 유형 및/또는 개수의 통신 네트워크 또는 다른 유형 및/또는 개수의 접속부 및 구성을 갖는 시스템이 사용될 수 있다.
컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24)는 사용자 인터페이스(34), 예컨대 그래픽 사용자 인터페이스, 터치 사용자 인터페이스, 또는 웹-기반 사용자 인터페이스를 추가로 포함할 수 있다. 사용자 인터페이스는 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 파라미터에 관한 정보를 사용자에게 디스플레이하도록 구성된다. 사용자 인터페이스는 또한 사용자로부터 크로마토그래피 컬럼 파라미터에 관한 입력을 수신하도록 구성된다.
도 2에 도시된 서버(26)는 하나의 컴퓨팅 디바이스 또는 복수의 컴퓨팅 디바이스들일 있으며, 각각의 컴퓨팅 디바이스는 CPU 또는 프로세서, 메모리, 및 네트워크 인터페이스를 포함하며, 이들은 컬럼 적격성 평가 컴퓨팅 디바이스(24)에 대해 기재된 것과 유사한 버스 또는 다른 링크에 의해 함께 결합되어 있다. 서버(26)는 다른 구성에서 다른 유형 및/또는 개수의 구성요소 및 요소를 포함할 수 있다.
본 명세서에 기재된 시스템의 통신 인터페이스(들)(22)는 하나 이상의 근거리 네트워크(LAN) 및/또는 광역 네트워크(WAN)를 포함할 수 있다. 단지 예로서, 통신 인터페이스(들)(22)는 이더넷(Ethernet) 및 산업 표준 프로토콜 - 하이퍼텍스트 전송 프로토콜(HTTP) 및/또는 보안 HTTP(HTTPS)를 포함함 - 에 걸쳐 TCP/IP를 사용할 수 있지만, 다른 유형 및/또는 개수의 통신 네트워크가 이용될 수 있다.
본 발명의 다른 태양은 감마 분포 전이 분석을 사용하여 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가를 수행하기 위한 명령어들이 저장된 비일시적 컴퓨터 판독가능 매체에 관한 것이다. 이들 명령어는, 프로세서에 의해 실행될 때, 프로세서가 하기를 포함하는 단계들을 수행하게 하는 실행가능 코드를 포함한다: 컬럼 충전물을 포함하는 상기 크로마토그래피 컬럼의 제1 작동 동안 2개 이상의 간격으로 적어도 하나의 이동상 전이 전선의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하는 단계; 상승 전이 전선에 대한 상기에 기재된 바와 같은 식 Ia 또는 하강 전이 전선에 대한 상기에 기재된 바와 같은 식 Ib를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 수집된 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터에 기초하여 모델 감마 누적 분포 곡선을 결정하는 단계; 상기에 기재된 바와 같은 식 II, 및 상기에 기재된 바와 같은 k, θ, 및 V i 의 모델 감마 누적 분포 곡선 파라미터를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 이론단 상당 높이(HETP) 값을 계산하는 단계; 및 상기 계산된 HETP 값에 기초하여 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질을 평가하는 단계.
본 발명의 다른 태양은 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 디바이스에 관한 것이다. 이 디바이스는 프로세서 및 프로세서에 결합된 메모리를 포함한다. 메모리는 메모리에 저장된 프로그래밍된 명령어들을 실행하도록 구성된다. 이들 명령어는 하기를 포함한다: 컬럼 충전물을 포함하는 크로마토그래피 컬럼의 제1 작동 동안 2개 이상의 간격으로 적어도 하나의 이동상 전이 전선의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하라는 명령어; 상기에 기재된 바와 같은 상승 전이 전선에 대한 식 Ia 또는 하강 전이 전선에 대한 식 Ib를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 수집된 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터에 기초하여 모델 감마 누적 분포 곡선을 결정하라는 명령어; 상기에 기재된 바와 같은 식 II, 및 상기에 기재된 바와 같은 k, θ, 및 V i 의 모델 감마 누적 분포 곡선 파라미터를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 이론단 상당 높이(HETP) 값을 계산하라는 명령어; 및 상기 계산된 HETP 값에 기초하여 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질을 평가하라는 명령어.
실시예
실시예 1 - REMICADE®(인플릭시맙) 제조에 사용되는 단백질 A 크로마토그래피 컬럼의 컬럼 적격성 평가를 위한 감마 분포 전이 분석의 적용
개요:
치료용 항체, REMICADE®(인플릭시맙)의 제조 공정은 몇몇 스테이지를 수반하며, 이들 중 4개는 크로마토그래피 정제를 포함한다. 컬럼 적격성 평가를 위한 감마 분포 전이 분석(GDTA)을 각각의 이들 컬럼 단계 동안 2개 또는 3개의 전이에 적용하였다. 이 실시예는 REMICADE®(인플릭시맙) 제조 동안 사용되는 단백질 A 컬럼 정제 단계에 대한 GDTA 방법의 적용을 설명한다. 상기 정제 공정은 본 명세서에 기재된 바와 같은 GDTA에 적절한 2개의 전이 전선, 즉 평형 전선 및 중간 세척 전선을 포함한다.
GDTA를 69개의 배치의 REMICADE®(인플릭시맙)의 연속 정제로부터의 129개의 전선 상에서 실시하였으며, 이는 60개의 평형 전선 및 69개의 세척 전선을 포함하였다. 이러한 감마 전선 분포 분석은 제조와 병행하여 수행하였으며 제조 공정에 영향을 주지 않았다. 모든 제조, 모니터링 및 제어는 현재의 효과적인 절차를 사용하여 수행하였다. REMICADE®(인플릭시맙)의 컬럼 크로마토그래피 정제 동안, 전도도(즉, 컬럼 출구 신호) 및 용리제의 유량(즉, 누적 유량)을 기록하였다.
GDTA를 실시간으로 컬럼 작동에 적용하는 것에 더하여, 지난 4년에 걸쳐 처리된 285개의 배치에 대한 이력 데이터를 또한 수집하고 본 명세서에 기재된 바와 같이 분석하였다. 데이터 세트는 253개의 평형 전선 및 285개의 세척 전선을 포함하여, 총 538개의 이력 전선을 포함하였다. 사용전 위생처리가 수행된 32개의 배치에 대해서는 평형 전선이 생성되지 않았다. 이 데이터 세트는 컬럼의 수명 내내 균일한 분포를 제공하도록 선택되었으며, 11개의 컬럼 팩을 나타낸다.
GDTA 프로토콜:
단백질 A 컬럼 정제 동안 각각의 전이 전선에 대해, 즉 세척 전선 및 평형 전선에 대해, 전도도 및 누적 유량을 기록하였다. 출발점의 결정은, 컬럼이 인라인으로 배치된 곳의 포인트를 확인하기 위해 사전-컬럼 전도도 및 압력에 대한 경향을 평가함으로써 달성하였다. 스프레드시트를 생성하고, 전선의 지속시간 동안 계산된 10초 간격을 사용하여 서버로부터 유량 및 전도도 데이터를 검색하도록 셋업하였다.
최대값을 1로 설정하고 최소값을 0으로 설정하고 다른 포인트들을 비례적으로 증감시킴으로써 전도도 데이터를 정규화하였다. 추가로, 유량을 컬럼 부피로 변환하였다.
PI 모듈과 동일한 출발 k, θ, V i 파라미터를 사용함으로써 출발 감마 CDF를 계산하였다. 감마 분포 함수의 x 항에서 각각의 부피 값으로부터 V i 를 감산하였다. 정제 동안 증가하고 있는 전도도를 정규화하기 위하여, 전도도 값을 V i 미만의 부피에 대해서는 0으로 설정하였고, 최대값을 1로 설정하였다.
각각의 전도도 값과 각각의 부피 포인트에 대한 모델 적합 사이의 차이(오차)를 계산하였다. 추가적으로, 0.5 내지 1.8 CV의 오차에 대한 제곱합을 계산하였다. Excel Solver를 사용하여 제곱합에 대한 최소값을 갖는 모델 곡선을 생성하는 k, θ, 및 V i 파라미터를 찾아내어서, 하기 식을 사용하여 최적 적합 감마 CDF 파라미터를 계산하였다:
[식 Ia]
Figure pct00025
.
가장 가까운 적합에 도달하였음을 보장하기 위하여 k ≥ 0.0001 및 V i ≥ 0의 제약사항 하에서 GRG 비선형 방법을 사용하여 Solver를 10,000회 반복하여 실행하였다.
하기의 파라미터를 k, θ, 및 V i 의 최종 값으로부터 계산하였다:
평균 (V m ), μ= kθ+ V i ,
분산, σ 2 (시그마 제곱) = kθ 2
모드 = (k- 1)θ+ V i
Figure pct00026
평균 유량 및 사전-컬럼 압력을 각각의 전선에 대해 0.5 내지 1.8 CV의 기간 동안 계산하였다.
허용 기준의 분석 및 평가:
정규성
평형 전선 및 세척 전선 둘 모두에 대한 HETP 및 SS에 대한 결과를 확률 도표를 생성함으로써 정규성에 대해 평가하였다. 확률 도표(도 3 내지 도 12)에서, 데이터 포인트들(HETP 또는 SS에 대한 결과)은 샘플에서 관찰된 실제 누적 분포를 나타낸다. 선들은 샘플로부터 추정된 파라미터들을 사용하여 정규 분포에 기초하여 상한 및 하한 신뢰 구간 및 적합화된 누적 분포를 나타낸다. 백분위수 스케일은 변환되어, 적합화된 분포가 직선을 형성하게 된다. HETP 및 SS 데이터 세트들은 각각 하단에서 0에 의해 경계지어지지만, 정규 분포 모델은 음의 값을 시사한다. 결과적으로 얻어진 확률 도표는 만곡된 형상을 나타낸다. 도 3 내지 도 6을 참조한다. 따라서, 결과는 로그 변환을 사용하면 더 잘 적합화된다. 로그 변환 데이터의 확률 도표에 대해서는 도 7 내지 도 10을 참조한다.
평균(V m )에 대해 데이터를 또한 정규성에 대해 평가하였다. 도 11 및 도 12는 데이터가 정규 분포에 적합화됨을 나타내는데, 이때 이상치는 단지 수 개에 불과하다. 따라서, 변환이 필요하지 않았다. 이 파라미터는 프로토콜에서 특정되지 않았지만, 곡선 적합이 유효하다는 유용한 보증을 제공한다. 이 파라미터에 대한 관리 한계선이 또한 이 분석으로부터 생성될 것이다.
이상치의 확인 및 변동의 원인
이상치를 확인하고 결과의 변동성을 평가하기 위하여, 각각의 파라미터에 대한 관리도를 생성하였다. 도 13 내지 도 22를 참조한다. 관리도는 HETP 및 SS에 대한 변환 데이터를 사용하였으며, 여기서는 자연 로그 변환이 적용되었다. 데이터는 또한 이들 파라미터 각각에 대해 변환된 상한 관리 한계선과 함께 시계열 도표로 나타나 있다.
HETP: 평형 및 세척 전선 둘 모두에 대한 HETP 결과에서 많은 이상치 및 경향이 명백하다. 추가적으로, 도 13 및 도 18은, 이들 도면에서 정사각형으로 표현되어 있고 하기에 따라 번호가 매겨진 슈하르트 규칙 1, 2 및 3에 기초하여 데이터에 있어서 경향을 나타낸다.
Figure pct00027
이들 편위(excursion)와 관련된 배치들은 허용가능한 공정을 나타내기 때문에 분석으로부터 배제되지 않았다.
이들 관리도(도 13 및 도 18) 둘 모두는 다수의 슈하르트 규칙 1 위반을 나타내며, 이는 또한 관리 한계선을 초과한다. 각각의 경우에, 이러한 문제를 확인하고 컬럼들을 재컨디셔닝함으로써 보정하였다.
예상된 바대로, 다수의 실행은 컬럼 팩에서의 변동으로 인해 규칙 2 및 규칙 3에 대한 기준을 충족시켰다. 이러한 경향을 추가로 평가하기 위해, 컬럼 팩에 의해 그룹화된 데이터(도 23 및 도 24) 및 스키드에 의해 그룹화된 데이터(도 25 및 26)를 사용하여 시계열 도표를 작성하였다. 이들 차트는 많은 특별한 변동 요인이 컬럼 열화 및 일부 격리된 편위에 기인한다는 것을 보여준다. HETP를 증가시키는 경향은 평형 전선의 경우 시간 경과에 따라 각각의 컬럼에 대해 명백하다(도 23). 세척 전선에 대해 관찰된 편위들은 상이한 시간에서 하나의 스키드 또는 나머지 다른 하나의 스키드에 대해 격리되어 있는 것으로 보이는데(도 26), 이는, 스키드에 컬럼 성능 변동성의 원천이 있을 수 있음을 시사한다.
제곱합(SS): 제곱합은 감마 분포가 공정 데이터에 얼마나 잘 적합화되는지의 척도이다. 이 척도는 HETP 결과가 유효함을 보장하기 위한 검사를 제공할 것이다. 변환 데이터에 대한 관리도는 평형 및 세척에 대해 각각 도 15 및 도 20에 나타나 있다. 이 척도는 단지 상한 관리 한계선만을 갖는다. 도 15는 상한 관리 한계선을 초과하고 있는 6개의 포인트를 보여준다. 이들 중 4개는 더 높은 HETP와 관련된다. 배치 880572M은 전선 동안 유동 혼란을 가졌는데, 이는 SS는 높아지게 하였지만 HETP에는 영향을 주지 않았다.
유량 및 압력의 평가.
이 데이터 세트에 대한 평균 유량 및 사전-컬럼 압력을 평가하여 임의의 이상치를 확인하였다. 확인된 차이와 결과 사이의 관계를 평가하였다.
유량 및 사전-컬럼 압력에 대한 경향이 도 27 내지 도 30에 나타나 있다. 이들 차트는 각각의 단계에 대해 탁월한 유량 관리를 나타낸다. 이 평가 동안 세척 유량을 변화시켰다. 사전-컬럼 압력은 스키드 및 컬럼에 관련된 변동을 나타내지만, 일정 범위 이내에서 대체로 안정하다. 도 31은 HETP 값이 세척 유량 변화에 의해 유의하게 영향을 받지 않음을 나타낸다.
단백질 A 컬럼에 대한 관리 한계선
HETP:
HETP는 컬럼 성능에 직접 관련되며, 또한 분산을 증가시킬 수 있는 시스템 내의 다른 인자에 의해 영향을 받는다. 결과는 0 초과여야 한다. HETP에 대한 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환(λ=0)을 사용함으로써 최상으로 결정되는데, 이는, 평형 전선에 대해서는 도 13에 그리고 세척 전선에 대해서는 도 18에 나타낸 바와 같다. 이들 관리도는 평균 +/- 3 표준 편차를 사용하여 Minitab에 의해 계산된 변환 데이터에 대한 관리 한계선을 나타낸다(또한 하기 표 2 참조). 표준 편차는 평균 이동 범위에 기초하여 결정된다. 컬럼 수명에 걸친 컬럼 성능의 변동을 고려하여 100의 이동 범위를 선택하였다. 상한 및 하한 관리 한계선을 역변환(ex)하여 미변환 데이터에 대한 관리 한계선을 결정한다.
각각의 전선의 HETP 결과 및 관리 한계선들에 대한 시계열 도표가 도 14 및 도 19에 나타나 있다. 이들 한계선 이내에서의 작동은 이러한 이력 검토에 기초하여 허용가능한 크로마토그래피 성능을 생성할 것으로 예상된다. 상한 관리 한계선 위의 값은 컬럼 유량 문제를 나타낼 수 있으며, 추가로 평가되어야 한다. 하한 관리 한계선 아래의 값은 계산 오차를 나타낼 수 있다.
제곱합(SS):
SS는 감마 분포 모델이 데이터에 얼마나 잘 적합화되는지의 척도이다. 이 척도는 GDTA 방법을 사용하여 계산된 HETP 값이 공정 데이터를 나타냄을 보장하는 데 사용된다. 하한 한계선은 없으며, 결과는 0 초과여야 한다. SS에 대한 상한 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환(λ=0)을 사용함으로써 최상으로 결정되는데, 이는, 평형 전선에 대해서는 도 15에 그리고 세척 전선에 대해서는 도 20에 나타낸 바와 같다. 이들 관리도는 평균 +/- 3 표준 편차를 사용하여 Minitab에 의해 계산된 변환 데이터에 대한 관리 한계선을 나타낸다. 표준 편차는 평균 이동 범위에 기초하여 결정된다. 컬럼 수명에 걸친 컬럼 성능의 변동을 고려하여 100의 이동 범위를 선택하였다. 이들 관리도는 변환 데이터에 대한 상한 관리 한계선을 나타내는데, 변환 데이터는 역변환되어 평형 전선 및 세척 전선에 대해 각각 0.050 및 0.989를 제공한다(표 2 참조). 각각의 전선의 SS 결과 및 관리 한계선들에 대한 시계열 도표가 도 16 및 도 20에 나타나 있다. 한계선 이내의 결과는 모델이 데이터뿐만 아니라 이력 결과에도 적합화됨을 보장할 것이다. 결과가 이 범위 밖에 있는 경우, 특별한 요인이 있을 가능성이 높다.
평균:
평균은 감마 분포 모델의 정확도의 제2 척도로서 부가하였다. 평균은 전선에 대한 이론적 질량 중심을 나타내며, 큰 여분의 컬럼 부피 또는 이동상과 수지 사이의 상호작용과 같은, 시스템 내에 그것을 이동되게 할 다른 인자가 없다면, 항상 1 컬럼 부피 부근이어야 한다. 평형 전선 및 세척 전선 둘 모두에 대한 평균 값은 대체로 정규 분포되고 변환을 필요로 하지 않는다(도 11 및 도 12 참조). 평형 전선에 대한 평균은 1.07 CV 주위에 조밀하게 분포되며, 이때 일부 이상치가 어느 측에도 존재하고 높은 측에서는 1.2에 접근한다(도 17 참조). 세척 전선은 약간 더 많은 변동을 나타내고 0.99 CV에 중심이 있으며, 이때 몇몇 낮은 이상치는 0.8에 접근한다(도 22 참조). 두 전선 모두에 대한 평균에 대해 0.80 내지 1.20 CV의 관리 한계선을 적용할 것이 권장된다(표 2 참조). 평균은 컬럼 성능의 척도가 아니라 분석이 적절하였음을 보장하기 위한 검사로서 사용되기 때문에 이것이 적절하다. 더 엄격한 관리 한계선은 이러한 검사에 대한 불필요한 감도를 초래할 것이다.
[표 2]
Figure pct00028
실시예 2 - REMICADE®(인플릭시맙) 제조에 사용되는 단백질 A 크로마토그래피 컬럼의 최적 미만(sub-optimal) 성능의 검출을 위한 감마 분포 전이 분석의 적용
치료용 항체, REMICADE®(인플릭시맙)의 제조 공정은 몇몇 스테이지를 수반하며, 이들 중 4개는 크로마토그래피 정제를 포함한다. 컬럼 적격성 평가를 위한 감마 분포 전이 분석(GDTA)을 각각의 이들 컬럼 단계 동안 2개 또는 3개의 전이에 적용하였다. 이 실시예는 REMICADE®(인플릭시맙) 제조 동안 사용되는 단백질 A 컬럼 정제 단계에 대한 GDTA 방법의 적용을 설명한다. 상기 정제 공정은 본 명세서에 기재된 바와 같은 GDTA에 적절한 2개의 전이 전선, 즉 평형 전선 및 중간 세척 전선을 포함한다.
GDTA를 45개의 배치의 REMICADE®(인플릭시맙)의 연속 정제로부터의 45개의 평형 전선 상에서 실시하였으며, 이는 컬럼 팩 883333M001 상에서 처리되는 23개의 배치 및 컬럼 팩 885473M001 상에서 처리되는 22개의 배치를 포함하였다. 이러한 감마 전선 분포 분석은 제조와 병행하여 수행하였으며 제조 공정에 영향을 주지 않았다. 모든 제조, 모니터링 및 제어는 현재의 효과적인 절차를 사용하여 수행하였다. REMICADE®(인플릭시맙)의 컬럼 크로마토그래피 정제 동안, 전도도(즉, 컬럼 출구 신호) 및 용리제의 유량(즉, 누적 유량)을 기록하였다.
도 32를 참조하면, 45개의 배치에 대한 평형 HETP 결과의 경향은 컬럼 팩들 사이의 상당한 차이를 보여주었다. 컬럼 평가를 위한 현재의 관리에 대해서는 2개의 컬럼 팩 사이의 어떠한 차이도 확인되지 않았다. 배치 수율의 평가는 2개의 컬럼 팩 상에서 처리된 배치들 사이의 유의한(p = 0.001) 차이를 나타내었으며, 더 높은 HETP 값을 갖는 컬럼 팩에 대해 4.3% 더 낮게 추정되었다. 다른 잠재적인 인자를 평가하였으며 수율 차이와 상관관계를 나타내지 않았다. 따라서, 이 분석으로부터의 결론은 컬럼 성능 차이가 더 낮은 수율을 야기하였다는 것이다. 이러한 발견에 기초하여, 더 낮은 수율을 나타내는 컬럼을 계속 사용하기 전에 컬럼 충전물을 개선하도록 컨디셔닝하였다. 이 실시예는 크로마토그래피 컬럼 품질을 평가하는 데 있어서 GDTA 방법의 감도를 입증한다.
실시예 3 - REMICADE®(인플릭시맙) 제조에 사용되는 SP-Sepharose 고성능 크로마토그래피 컬럼의 컬럼 적격성 평가를 위한 감마 분포 전이 분석의 적용
개요:
상기에 논의된 바와 같이, REMICADE®(인플릭시맙)의 제조 공정은 몇몇 스테이지를 수반하며, 이들 중 4개는 크로마토그래피 정제를 포함한다. 이 실시예는 REMICADE®(인플릭시맙) 제조 동안 사용되는 SP-Sepharose 고성능(SPHP) 컬럼 정제 단계에 대한 GDTA 방법의 적용을 설명한다. SPHP 컬럼은 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼이다. 상기 정제 공정은 본 명세서에 기재된 바와 같은 GDTA에 적절한 3개의 전이 전선, 즉 평형 전선, WFI 플러시 전선, 및 저장 전선을 포함한다.
GDTA를 23개의 배치의 REMICADE®(인플릭시맙)의 정제로부터의 69개의 전선 상에서 실시하였으며, 이는 23개의 평형 전선, WFI 플러시 전선, 및 저장 전선을 포함하였다. 이러한 감마 전선 분포 분석은 제조와 병행하여 수행하였으며 제조 공정에 영향을 주지 않았다. 모든 제조, 모니터링 및 제어는 현재의 효과적인 절차를 사용하여 수행하였다. REMICADE®(인플릭시맙)의 컬럼 크로마토그래피 정제 동안, 전도도(즉, 컬럼 출구 신호) 및 용리제의 유량(즉, 누적 유량)을 기록하였다.
GDTA를 실시간으로 컬럼 작동에 적용하는 것에 더하여, 지난 4년에 걸쳐 처리된 189개의 전이 전선에 대한 이력 데이터를 또한 수집하고 본 명세서에 기재된 바와 같이 분석하였다. 데이터 세트는 64개의 평형 전선, 63개의 WFI 플러시 전선, 및 62개의 저장 전선을 포함하였다. 이 데이터 세트는 컬럼의 수명 내내 균일한 분포를 제공하도록 선택되었으며, 6개의 컬럼 팩을 나타낸다.
SPHP 컬럼 전선에 대한 GDTA를 상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다. 이 분석은 각각의 전선에 대한 HETP, SS 및 평균에 대한 측정치를 생성하였다. 통계적 평가에 기초하여 이들 3개의 파라미터 각각에 대해 도출된 관리 한계선이 하기 표 3에 열거되어 있다.
SPHP 컬럼에 대한 관리 한계선:
HETP:
HETP는 컬럼 성능에 직접 관련되며, 또한 분산을 증가시킬 수 있는 시스템 내의 다른 인자에 의해 영향을 받는다. 결과는 0 초과여야 한다. HETP에 대한 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환(λ=0)을 사용함으로써 최상으로 결정된다. 변환 데이터에 대한 관리 한계선은 평균 +/- 3 표준 편차를 사용하여 Minitab에 의해 계산하였다. 표준 편차는 평균 이동 범위에 기초하여 결정된다. 컬럼 수명에 걸친 컬럼 성능의 변동을 고려하여 25의 이동 범위를 선택하였다. 상한 및 하한 관리 한계선을 역변환(ex)하여 미변환 데이터에 대한 관리 한계선을 결정한다. 각각의 전선의 HETP 결과 및 관리 한계선들에 대한 시계열 도표가 도 33(평형 전선), 도 34(WFI 플러시 전선), 및 도 35(저장 전선)에 나타나 있다. 이들 한계선 이내에서의 작동은 이러한 이력 검토에 기초하여 허용가능한 크로마토그래피 성능을 생성할 것으로 예상된다. 상한 관리 한계선 위의 값은 컬럼 유량 문제를 나타낼 수 있으며, 추가로 평가되어야 한다. 하한 관리 한계선 아래의 값은 계산 오차를 나타낼 수 있다.
제곱합(SS):
SS는 감마 분포 모델이 데이터에 얼마나 잘 적합화되는지의 척도이다. 이 척도는 GDTA 방법을 사용하여 계산된 HETP 값이 공정 데이터를 나타냄을 보장하는 데 사용될 것이다. 하한 한계선은 없으며, 결과는 0 초과여야 한다. SS에 대한 상한 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환(λ=0)을 사용함으로써 최상으로 결정된다. 변환 데이터에 대한 관리 한계선은 평균 +/- 3 표준 편차를 사용하여 Minitab에 의해 계산하였다. 표준 편차는 평균 이동 범위에 기초하여 결정된다. 컬럼 수명에 걸친 컬럼 성능의 변동을 고려하여 100의 이동 범위를 선택하였다. 변환 데이터에 대한 상한 관리 한계선을 역변환하여, 평형 전선에 대해서는 0.110, WFI 플러시 전선에 대해서는 0.027, 그리고 저장 전선에 대해 0.073을 제공하였다(표 3 참조). 한계선 이내의 결과는 모델이 데이터뿐만 아니라 이력 결과에도 적합화됨을 보장할 것이다. 결과가 이 범위 밖에 있는 경우, 특별한 요인이 있을 가능성이 높다.
평균:
평균은 감마 분포 모델의 정확도의 제2 척도로서 부가하였다. 평균은 전선에 대한 이론적 질량 중심을 나타내며, 큰 여분의 컬럼 부피 또는 이동상과 수지 사이의 상호작용과 같은, 시스템 내에 그것을 이동되게 할 다른 인자가 없다면, 항상 1 컬럼 부피 부근이어야 한다. 평형 전선, WFI 플러시 전선 및 저장 전선의 평균 값은 불규칙한 분포를 가지며, 변환으로부터 이익을 얻지 못한다. 각각의 전선에 대한 평균에 대해 0.80 내지 1.20 CV의 관리 한계선을 적용할 것이 권장된다(표 3 참조). 평균은 컬럼 성능의 척도가 아니라 분석이 적절하였음을 보장하기 위한 검사로서 사용되기 때문에 이것이 적절하다. 이들 한계선은 예상된 계산 결과로부터의 상당한 벗어남을 확인하는 데 충분할 것으로 예상된다. 더 엄격한 관리 한계선은 이러한 검사에 대한 불필요한 감도를 초래할 것이며, 이는 각각의 컬럼 팩에 따라 달라지는 것으로 보인다.
[표 3]
Figure pct00029
실시예 4 - REMICADE®(인플릭시맙) 제조에 사용되는 Q2 크로마토그래피 컬럼의 컬럼 적격성 평가를 위한 감마 분포 전이 분석의 적용
개요:
이 실시예는 REMICADE®(인플릭시맙) 제조 동안 사용되는 2차 음이온 교환(Q2) 컬럼 정제 단계에 대한 GDTA 방법의 적용을 설명한다. Q2 컬럼은 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼이다. 상기 정제 공정은 본 명세서에 기재된 바와 같은 GDTA에 적절한 3개의 전이 전선, 즉 평형 전선, 스트립핑 전선, 및 저장 전선을 포함한다.
GDTA를 68개의 전선 상에서 실시하였으며, 이는 23개의 평형 전선 및 스트립핑 전선, 및 22개의 저장 전선을 포함하였다. 이러한 감마 전선 분포 분석은 제조와 병행하여 수행하였으며 제조 공정에 영향을 주지 않았다. 모든 제조, 모니터링 및 제어는 현재의 효과적인 절차를 사용하여 수행하였다. REMICADE®(인플릭시맙)의 컬럼 크로마토그래피 정제 동안, 전도도(즉, 컬럼 출구 신호) 및 용리제의 유량(즉, 누적 유량)을 기록하였다.
GDTA를 실시간으로 컬럼 작동에 적용하는 것에 더하여, 지난 4년에 걸쳐 처리된 324개의 전이 전선에 대한 이력 데이터를 또한 수집하고 본 명세서에 기재된 바와 같이 분석하였다. 데이터 세트는 121개의 평형 전선, 124개의 스트립핑 전선, 및 79개의 저장 전선을 포함하였다. 이 데이터 세트는 컬럼의 수명 내내 균일한 분포를 제공하도록 선택되었으며, 10개의 컬럼 팩을 나타낸다.
Q2 컬럼 전선에 대한 GDTA를 상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다. 이 분석은 각각의 전선에 대한 HETP, SS 및 평균에 대한 측정치를 생성하였다. 통계적 평가에 기초하여 이들 3개의 파라미터 각각에 대해 도출된 관리 한계선이 하기 표 4에 열거되어 있다.
Q2 컬럼에 대한 관리 한계선:
HETP:
HETP는 컬럼 성능에 직접 관련되며, 또한 분산을 증가시킬 수 있는 시스템 내의 다른 인자에 의해 영향을 받는다. 결과는 0 초과여야 한다. HETP에 대한 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환(λ=0)을 사용함으로써 최상으로 결정된다. 변환 데이터에 대한 관리 한계선은 평균 +/- 3 표준 편차를 사용하여 Minitab에 의해 계산하였다. 표준 편차는 평균 이동 범위에 기초하여 결정된다. 컬럼 수명에 걸친 컬럼 성능의 변동을 고려하여 100의 이동 범위를 선택하였다. 상한 및 하한 관리 한계선을 역변환(ex)하여 미변환 데이터에 대한 관리 한계선을 결정한다.
각각의 전선의 HETP 결과 및 관리 한계선들에 대한 시계열 도표가 도 36(평형 전선), 도 37(스트립핑 전선), 및 도 38(저장 전선)에 나타나 있다. 이들 한계선 이내에서의 작동은 이러한 이력 검토에 기초하여 허용가능한 크로마토그래피 성능을 생성할 것으로 예상된다. 상한 관리 한계선 위의 값은 컬럼 유량 문제를 나타낼 수 있으며, 추가로 평가되어야 한다. 하한 관리 한계선 아래의 값은 계산 오차를 나타낼 수 있다.
제곱합(SS):
SS는 감마 분포 모델이 데이터에 얼마나 잘 적합화되는지의 척도이다. 이 척도는 GDTA 방법을 사용하여 계산된 HETP 값이 공정 데이터를 나타냄을 보장하는 데 사용될 것이다. 하한 한계선은 없으며, 결과는 0 초과여야 한다. SS에 대한 상한 관리 한계선은 자연 로그 박스-칵스 변환(λ=0)을 사용함으로써 최상으로 결정된다. 변환 데이터에 대한 관리 한계선은 평균 +/- 3 표준 편차를 사용하여 Minitab에 의해 계산하였다. 표준 편차는 평균 이동 범위에 기초하여 결정된다. 컬럼 수명에 걸친 컬럼 성능의 변동을 고려하여 100의 이동 범위를 선택하였다. 표준 편차는 저장 전선에 대한 집계 데이터로부터 결정하였는데, 그 이유는, 이동 범위 방법은 더 높은 표준 편차를 생성하였기 때문이다. 관리 한계선은 하기 표 4에 기록되어 있다. 한계선 이내의 결과는 모델이 데이터뿐만 아니라 이력 결과에도 적합화됨을 보장할 것이다. 결과가 이 범위 밖에 있는 경우, 특별한 요인이 있을 가능성이 높다.
평균:
평균은 감마 분포 모델의 정확도의 제2 척도로서 부가하였다. 평균은 전선에 대한 이론적 질량 중심을 나타내며, 큰 여분의 컬럼 부피 또는 이동상과 수지 사이의 상호작용과 같은, 시스템 내에 그것을 이동되게 할 다른 인자가 없다면, 항상 1 컬럼 부피 부근이어야 한다. 평형 전선, 스트립핑 전선, 및 저장 전선의 평균 값은 불규칙한 분포를 가지며, 변환으로부터 이익을 얻지 못한다. 각각의 전선에 대한 평균에 대해 0.80 내지 1.20 CV의 관리 한계선을 적용할 것이 권장된다(표 4 참조). 평균은 컬럼 성능의 척도가 아니라 분석이 적절하였음을 보장하기 위한 검사로서 사용되기 때문에 이것이 적절하다. 이들 한계선은 예상된 계산 결과로부터의 상당한 벗어남을 확인하는 데 충분할 것으로 예상된다. 더 엄격한 관리 한계선은 이러한 검사에 대한 불필요한 감도를 초래할 것이며, 이는 각각의 컬럼 팩에 따라 달라지는 것으로 보인다.
[표 4]
Figure pct00030
실시예 5 - STELARA®(우스테키누맙)를 생성하기 위한 제조 공정
배경
STELARA®(우스테키누맙)는 높은 친화도 및 특이성으로 인간 인터류킨(IL)-12 및 IL-23 사이토카인의 공유 p40 하위단위에 결합하는 완전 인간 G1 카파 단일클론 항체이다. 우스테키누맙은 서열 번호 10의 아미노산 서열의 중쇄 및 서열 번호 11의 아미노산 서열의 경쇄; 서열 번호 7의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호 8의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열; 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 중쇄 CDR 아미노산 서열; 및 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 경쇄 CDR 아미노산 서열을 포함한다. IL-12/23p40 하위단위에 대한 우스테키누맙의 결합은 자연 살해 세포 및 CD4+ T 세포의 표면 상의 IL-12Rβ1 수용체에 대한 IL-12 또는 IL-23의 결합을 차단하여, IL-12- 및 IL-23-특이적 세포내 신호전달 및 후속 활성화 및 사이토카인 생성을 억제한다. IL-12 및 IL-23의 비정상적인 조절은 다수의 면역-매개 질병과 관련되어 있다.
지금까지, 우스테키누맙은, 만성 중등도 내지 중도 판상형 건선 및/또는 활성 건선성 관절염, 및 크론병(CD)을 가진 자들을 포함한 성인 환자의 치료를 위해, 북아메리카, 유럽, 남아메리카, 및 아시아-태평양 지역 내에 있는 국가들을 포함하여 전세계적으로 판매 승인을 받아 왔다. 또한, 우스테키누맙은 활성 전신 홍반성 루푸스(SLE)의 치료를 위한 3상 연구에서 평가된다.
서열
예시적인 항-IL-12/IL-23p40 항체 서열 - STELARA®(우스테키누맙)
항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 중쇄 1(CDRH1)의 아미노산 서열: (서열 번호 1)
TYWLG
항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 중쇄 2(CDRH2)의 아미노산 서열: (서열 번호 2)
IMSPVDSDIRYSPSFQG
항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 중쇄 3(CDRH3)의 아미노산 서열: (서열 번호 3)
RRPGQGYFDF
항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 경쇄 1(CDRL1)의 아미노산 서열: (서열 번호 4)
RASQGISSWLA
항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 경쇄 2(CDRL2)의 아미노산 서열: (서열 번호 5)
AASSLQS
항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 경쇄 3(CDRL3)의 아미노산 서열: (서열 번호 6)
QQYNIYPYT
항-IL-12/IL-23p40 항체 가변 중쇄 영역의 아미노산 서열(CDR은 밑줄 쳐져 있음): (서열 번호 7)
1 EVQLVQSGAE VKKPGESLKI SCKGSGYSFT TYWLGWVRQM PGKGLDWIGI MSPVDSDIRY
61 SPSFQGQVTM SVDKSITTAY LQWNSLKASD TAMYYCARRR PGQGYFDFWG QGTLVTVSS
항-IL-12/IL-23p40 항체 가변 경쇄 영역의 아미노산 서열(CDR은 밑줄 쳐져 있음): (서열 번호 8)
1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIS SWLAWYQQKP EKAPKSLIYA ASSLQSGVPS
61 RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNIYPYTFGQ GTKLEIKR
항-IL-12/IL-23p40 항체 중쇄의 아미노산 서열(CDR은 밑줄 쳐져 있음): (서열 번호 10)
1 EVQLVQSGAE VKKPGESLKI SCKGSGYSFT TYWLGWVRQM PGKGLDWIGI MSPVDSDIRY
61 SPSFQGQVTM SVDKSITTAY LQWNSLKASD TAMYYCARRR PGQGYFDFWG QGTLVTVSSS
121 STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
181 LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPELLGGP
241 SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
301 TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL
361 TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
421 QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK
항-IL-12/IL-23p40 항체 경쇄의 아미노산 서열(CDR은 밑줄 쳐져 있음): (서열 번호 11)
1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIS SWLAWYQQKP EKAPKSLIYA ASSLQSGVPS
61 RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNIYPYTFGQ GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP
121 SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT
181 LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
아미노산 서열 IL-12
알파 및 베타 하위단위를 갖는 인간 인터류킨(IL)-12의 아미노산 서열: (서열 번호 9)
1 RNLPVATPDP GMFPCLHHSQ NLLRAVSNML QKARQTLEFY PCTSEEIDHE DITKDKTSTV
61 EACLPLELTK NESCLNSRET SFITNGSCLA SRKTSFMMAL CLSSIYEDLK MYQVEFKTMN
121 AKLLMDPKRQ IFLDQNMLAV IDELMQALNF NSETVPQKSS LEEPDFYKTK IKLCILLHAF
181 RIRAVTIDRV MSYLNASIWE LKKDVYVVEL DWYPDAPGEM VVLTCDTPEE DGITWTLDQS
241 SEVLGSGKTL TIQVKEFGDA GQYTCHKGGE VLSHSLLLLH KKEDGIWSTD ILKDQKEPKN
301 KTFLRCEAKN YSGRFTCWWL TTISTDLTFS VKSSRGSSDP QGVTCGAATL SAERVRGDNK
361 EYEYSVECQE DSACPAAEES LPIEVMVDAV HKLKYENYTS SFFIRDIIKP DPPKNLQLKP
421 LKNSRQVEVS WEYPDTWSTP HSYFSLTFCV QVQGKSKREK KDRVFTDKTS ATVICRKNAS
481 ISVRAQDRYY SSSWSEWASV PCS
재조합 발현 카세트
본 발명은 핵산을 포함하는 재조합 발현 카세트를 사용한다. 본 발명의 방법에 사용되는 핵산 서열, 예를 들어 항체를 인코딩하는 cDNA 또는 게놈 서열이 적어도 하나의 원하는 숙주 세포 내로 도입될 수 있는 재조합 발현 카세트 작제에 사용될 수 있다. 재조합 발현 카세트는 전형적으로 원하는 숙주 세포 내에서 폴리뉴클레오티드의 전사를 유도하는 전사 개시 조절 서열에 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드를 포함할 것이다. 이종성 프로모터 및 비이종성(즉, 내인성) 프로모터 둘 모두가 핵산의 발현을 유도하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 프로모터, 인핸서 또는 기타 요소로서 작용하는 단리된 핵산이 폴리뉴클레오티드의 발현을 상향조절하거나 하향조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 비이종성 형태의 적절한 위치(상류, 하류 또는 인트론 내)에 도입될 수 있다. 예를 들어, 내인성 프로모터는 돌연변이, 결실 및/또는 치환에 의해 생체내(in vivo)에서 또는 시험관내(in vitro)에서 변경될 수 있다.
벡터 및 숙주 세포
본 발명은 또한, 당업계에 잘 알려진 바와 같이, 단리된 핵산 분자를 포함하는 벡터, 재조합 벡터로 유전자 조작된 숙주 세포, 및 재조합 기술에 의한 하나 이상의 항-IL-23 항체의 생성에 관한 것이다.
폴리뉴클레오티드는 숙주 내에서의 증식을 위해 선택가능한 마커를 함유하는 벡터에 선택적으로 결합될 수 있다. 일반적으로, 플라스미드 벡터가 침전물, 예를 들어 인산칼슘 침전물 내에, 또는 하전된 지질과의 복합체 내에 도입된다. 벡터가 바이러스인 경우, 적합한 패키징(packaging) 세포주를 사용하여 시험관내에서 패키징된 후, 숙주 세포 내로 형질도입될 수 있다.
DNA 삽입물은 적합한 프로모터에 작동가능하게 연결되어야 한다. 발현 작제물은 전사 개시를 위한 부위, 종결을 위한 부위 및 전사된 영역에서 번역을 위한 리보솜 결합 부위를 추가로 함유할 것이다. 작제물에 의해 발현된 성숙 전사물의 코딩 부분은 바람직하게는 번역될 mRNA의 시작부에서 개시하는 번역 개시 코돈 및 그의 말단부에 적절하게 위치한 종료 코돈(예를 들어, UAA, UGA 또는 UAG)을 포함할 것이며, 포유류 또는 진핵 세포 발현에는 UAA 및 UAG가 바람직하다.
발현 벡터는 바람직하게는 그러나 선택적으로 하나 이상의 선택가능한 마커를 포함할 것이다. 그러한 마커는, 예를 들어, 진핵 세포 배양을 위한 메토트렉세이트(MTX), 다이하이드로폴레이트 리덕타제(DHFR, 미국 특허 제4,399,216호; 제4,634,665호; 제4,656,134호; 제4,956,288호; 제5,149,636호; 제5,179,017호), 암피실린, 네오마이신(G418), 마이코페놀산, 또는 글루타민 신테타제(GS)(미국 특허 제5,122,464호; 제5,770,359호; 제5,827,739호) 저항성 유전자, 및 E. 콜라이(E. coli) 및 다른 세균 또는 원핵세포에서의 배양을 위한 테트라사이클린 또는 암피실린 저항성 유전자를 포함하지만 이로 한정되지 않는다(상기 특허는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함됨). 전술된 숙주 세포에 적절한 배양 배지 및 조건이 당업계에 알려져 있다. 적절한 벡터는 당업자에게 명백할 것이다. 숙주 세포 내로의 벡터 작제물의 도입은 인산칼슘 형질감염, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 양이온성 지질 매개 형질감염, 전기천공, 형질도입, 감염 또는 다른 알려진 방법에 의해 달성될 수 있다. 그러한 방법은 당업계에 잘 알려져 있고 잘 설명되어 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 적어도 하나의 항체는 융합 단백질과 같은 변형된 형태로 발현될 수 있고, 분비 신호뿐만 아니라 추가의 이종성 기능 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, 추가의 아미노산, 특히 하전된 아미노산의 영역이 정제 동안, 또는 후속 취급 및 저장 동안 숙주 세포에서의 안정성 및 지속성을 개선하기 위해 항체의 N-말단에 부가될 수 있다. 또한, 펩티드 모이어티가 정제를 용이하게 하기 위해 본 발명의 항체에 부가될 수 있다. 그러한 영역은 항체 또는 적어도 하나의 이의 단편의 최종 제조 전에 제거될 수 있다. 그러한 방법들은 많은 표준 실험실 매뉴얼에 기재되어 있으며, 이들 방법은 당업계에 잘 알려져 있고 잘 설명되어 있다.
당업자는 본 발명의 방법에 사용되는 단백질을 인코딩하는 핵산의 발현에 이용가능한 많은 발현 시스템에 대해 잘 알고 있다. 대안적으로, 핵산은 항체를 인코딩하는 내인성 DNA를 함유하는 숙주 세포 내에서 (조작에 의해) 턴온(turn on)하여 숙주 세포 내에서 발현될 수 있다. 그러한 방법은, 예를 들어 미국 특허 제5,580,734호, 제5,641,670호, 제5,733,746호, 및 제5,733,761호에 기재되어 있는 바와 같이 당업계에 알려져 있다.
항체, 이의 특정 부분 또는 변이체의 생성에 유용한 세포는 포유류 세포를 포함한다. 포유류 세포 시스템은 종종 세포의 단층의 형태로 배양될 것이지만, 세포는 또한, 예를 들어 진탕 플라스크 또는 생물반응기 내에서, 부유 상태로 성장하도록 조정될 수 있다. 온전한 글리코실화 단백질을 발현할 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주가 당업계에 개발되어 있고, 예를 들어 COS-1(예를 들어, ATCC® CRL1650), COS-7(예를 들어, ATCC® CRL-1651), HEK293, BHK21(예를 들어, ATCC® CCL-10), BSC-1(예를 들어, ATCC® CCL-26), 중국 햄스터 난소(CHO), Hep G2, P3X63Ag8.653, Sp2/0-Ag14, HeLa 세포 등을 포함하며, 이들은, 예를 들어 미국 버지니아주 매나서스 소재의 American Type Culture Collection(www. atcc.org)으로부터 용이하게 입수가능하다. 소정 실시 형태에서, 숙주 세포는 CHO 세포 및 림프계 기원 세포, 예컨대 골수종 및 림프종 세포, 예를 들어 CHO-K1 세포, P3X63Ag8.653 세포(ATCC® CRL-1580) 및 Sp2/0-Ag14 세포(ATCC® CRL-1581)를 포함한다.
이들 세포에 대한 발현 벡터는 하기 발현 제어 서열 중 하나 이상, 비제한적인 예로서 복제 기점; 프로모터(예를 들어, 후기 또는 초기 SV40 프로모터, CMV 프로모터(미국 특허 제5,168,062호; 제5,385,839호), HSV tk 프로모터, pgk(포스포글리세레이트 키나제) 프로모터, EF-1 알파 프로모터(미국 특허 제5,266,491호), 하나 이상의 인간 면역글로불린 프로모터; 인핸서, 및/또는 프로세싱 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위(예를 들어, SV40 라지 T Ag 폴리 A 부가 부위), 및 전사 종결자 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 핵산 또는 단백질 생성에 유용한 다른 세포가 알려져 있고/있거나, 예를 들어 세포주 및 하이브리도마의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 카탈로그(www.atcc.org) 또는 다른 공지의 또는 상업 공급원으로부터 이용가능하다.
진핵 숙주 세포가 사용될 경우, 폴리아데닐화 또는 전사 종결자 서열이 전형적으로 벡터 내로 도입된다. 종결자 서열의 예는 소 성장 호르몬 유전자로부터의 폴리아데닐화 서열이다. 전사물의 정확한 스플라이싱을 위한 서열이 또한 포함될 수 있다. 스플라이싱 서열의 한 예는 SV40으로부터의 VP1 인트론이다(문헌[Sprague, et al., "Expression of a recombinant DNA gene coding for the vesicular stomatitis virus nucleocapsid protein." J. Virol. 45:773-781 (1983)]). 추가로, 당업계에 알려진 바와 같이, 숙주 세포 내의 복제를 제어하는 유전자 서열이 벡터 내로 도입될 수 있다.
CHO 세포주
몇몇 다른 포유류 세포주의 이용가능성에도 불구하고, 오늘날 생성되는 대다수의 재조합 치료용 단백질은 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서 제조된다(문헌[Jayapal KP, et al. Recombinant protein therapeutics from CHO cells-20 years and counting. Chem Eng Prog. 2007; 103:40-47]; 문헌[Kunert R, Reinhart D. Advances in recombinant antibody manufacturing. Appl Microbiol Biotechnol. 2016;100(8):3451-61]). 이들의 강점은, 예를 들어 부착성 세포로서의 또는 부유 상태로의 견고한 성장, 무혈청 및 화학적으로 한정된 배지에 대한 적응성, 높은 생산성, 및 치료용 재조합 단백질 생성을 위한 규제 승인의 확립된 이력을 포함한다. 이들은 또한 유전자 변형에 매우 적합하며, 세포 형질감염, 재조합 단백질 발현, 및 클론 선택에 대한 방법이 모두 잘 특징규명되어 있다. CHO 세포는 또한 인간-적합성 번역후 변형(human-compatible post-translational modification)을 제공할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "CHO 세포"는, 예를 들어 CHO-DG44, CHO-K1, CHO-M, CHO-S, CHO GS 녹아웃(knockout), 및 이들의 변형 및 유도체를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
CHO 세포에서의 클로닝 및 발현.
CHO 세포에서의 발현을 위해 통상적으로 사용되는 하나의 벡터는 pC4이다. 플라스미드 pC4는 플라스미드 pSV2-dhfr(ATCC® 37146)의 유도체이다. 이 플라스미드는 SV40 초기 프로모터의 제어 하에서 마우스 DHFR 유전자를 함유한다. 이들 플라스미드로 형질감염된, 다이하이드로폴레이트 활성이 결여된 중국 햄스터 난소 세포 또는 다른 세포가 화학요법제 메토트렉세이트로 보충된 선택 배지(예를 들어, 알파 마이너스 MEM, 미국 메릴랜드주 게이더스버그 소재의 Life Technologies) 중에서 세포를 성장시킴으로써 선택될 수 있다. 메토트렉세이트(MTX)에 저항성인 세포에서의 DHFR 유전자의 증폭은 잘 문서로 기록되어 있다(예를 들어, 문헌[F. W. Alt, et al., "Selective multiplication of dihydrofolate reductase genes in methotrexate-resistant variants of cultured murine cells." J. Biol. Chem. 253:1357-1370 (1978)]; 및 문헌[M. J. Page and M. A. Sydenham, "High level expression of the humanized monoclonal antibody Campath-1H in Chinese hamster ovary cells." Biotechnology 9:64-68 (1991)] 참조). 증가하는 농도의 MTX 중에서 성장된 세포는 DHFR 유전자의 증폭 결과물로서의 표적 효소인 DHFR을 과다생성함으로써 약물에 저항성을 발현한다. 제2 유전자가 DHFR 유전자에 연결되어 있으면, 그것은 통상 동시증폭되고 과발현된다. 증폭된 유전자(들)의 1,000개 초과의 카피를 운반하는 세포주를 개발하는 데 이 접근법이 사용될 수 있음이 당업계에 알려져 있다. 후속으로, 메토트렉세이트가 취출될 때, 숙주 세포의 하나 이상의 염색체(들)에 통합된 증폭된 유전자를 함유하는 세포주가 수득된다.
플라스미드 pC4는 관심 유전자를 발현하기 위하여 라우스 육종 바이러스(Rous Sarcoma Virus)의 긴 말단 반복부(LTR)의 강한 프로모터(문헌[Cullen, et al., "Functional analysis of the transcription control region located within the avian retroviral long terminal repeat." Mol. Cell. Biol. 5:438-447 (1985)]) + 인간 거대세포바이러스(CMV)의 전초기 유전자의 인핸서로부터 단리된 단편(문헌[Boshart, et al., "A very strong enhancer is located upstream of an immediate early gene of human cytomegalovirus." Cell 41:521-530 (1985)])을 함유한다. 프로모터의 하류에는 유전자의 통합을 가능하게 하는 BamHI, XbaI, 및 Asp718 제한 효소 절단 부위가 있다. 이들 클로닝 부위 뒤에, 플라스미드는 래트 프리프로인슐린 유전자의 3' 인트론 및 폴리아데닐화 부위를 함유한다. 또한, 다른 고효율 프로모터, 예를 들어 인간 베타-액틴 프로모터, SV40 초기 또는 후기 프로모터, 또는 다른 레트로바이러스, 예를 들어 HIV 및 HTLVI로부터의 긴 말단 반복부가 발현을 위해 사용될 수 있다. Clontech의 Tet-Off 및 Tet-On 유전자 발현 시스템 및 유사한 시스템이 또한 포유류 세포에서 조절되는 방식으로 단백질을 발현하는 데 사용될 수 있다(문헌[M. Gossen, and H. Bujard, "Tight control of gene expression in mammalian cells by tetracycline-responsive promoters." Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 5547-5551 (1992)]). mRNA의 폴리아데닐화를 위해, 예를 들어 인간 성장 호르몬 또는 글로빈 유전자로부터의 다른 신호가 마찬가지로 사용될 수 있다. 염색체에 통합된 관심 유전자를 운반하는 안정한 세포주가 또한 선택가능한 마커, 예컨대 gpt, G418, 또는 하이그로마이신으로의 동시-형질감염 시에 선택될 수 있다. 초기에 하나 초과의 선택가능한 마커, 예를 들어 G418 + 메토트렉세이트를 사용하는 것이 유리하다.
일반적 정제 방법
항-IL-12/IL-23p40 또는 IL-23 항체는, 예를 들어 단백질 A 정제, 황산암모늄 또는 에탄올 침전, 산 추출, 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 포스포셀룰로스 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 및 렉틴 크로마토그래피를 포함하지만 이로 한정되지 않는 잘 알려진 방법에 의해 재조합 세포 배양물로부터 회수되고 정제될 수 있다. 고성능 액체 크로마토그래피("HPLC")가 또한 정제에 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항체" 또는 "항체들"은 BPCI Act(Biologics Price Competition and Innovation Act of 2009) 및 전세계적으로 유사한 법칙 및 규제 하에서 승인된 바이오시밀러(biosimilar) 항체 분자를 포함한다. BPCI Act 하에서는, 데이터가, 임상적으로 불활성인 성분에 있어서의 미미한 차이에도 불구하고, 항체가 참조 제품과 "고도로 유사하다"는 것을 보여주고, 안전성, 순도 및 효력의 관점에서 참조 제품과 동일한 임상 결과를 생성할 것으로 "예상되는" 경우에 그러한 항체는 바이오시밀러인 것으로 입증될 수 있다(문헌[R. Dolinar, F. Lavernia, and S. Edelman. "A GUIDE TO FOLLOW-ON BIOLOGICS AND BIOSIMILARS WITH A FOCUS ON INSULIN." Endocrine Practice: February 2018, Vol. 24, No. 2, pp. 195-204]). 이들 바이오시밀러 항체 분자는 단축된 승인 경로로 제공되며, 그럼으로써 본 출원인은 규제 승인을 확보하기 위하여 이노베이터 참조 제품의 임상 데이터에 의존한다. 성공적인 임상 시험에 기초하여 FDA 승인된 원래의 이노베이터 참조 항체와 대비하여, 바이오시밀러 항체 분자는 본 명세서에서 "후속 생물학적 제제(follow-on biologic)"로 지칭된다. 본 명세서에 제시된 바와 같이, STELARA®(우스테키누맙)는 성공적인 임상 시험에 기초하여 FDA 승인된 원래의 이노베이터 참조 항-IL-12/23p40 항체이다. 우스테키누맙은 2009년 이래로 미국에서 판매되어 왔다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항원-결합 단편"은 항체 단편, 예컨대 다이아바디(diabody), Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 이황화물 안정화된 Fv 단편(dsFv), (dsFv)2, 이중특이성 dsFv(dsFv-dsFv'), 이황화물 안정화된 다이아바디(ds 다이아바디), 단일쇄 항체 분자(scFv), 단일 도메인 항체(sdab), scFv 이량체(2가 다이아바디), 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 일부분으로부터 형성된 다중특이성 항체, 낙타화(camelized) 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 2가 도메인 항체, 또는 항원에 결합하지만 완전한 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편을 지칭한다. 항원-결합 단편은 모(parent) 항체 또는 모 항체 단편이 결합하는 것과 동일한 항원에 결합할 수 있다. 특정 실시 형태에 따르면, 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 Fd 세그먼트(즉, Fab 단편 내에 포함되는 중쇄의 일부분)를 포함한다. 다른 특정 실시 형태에 따르면, 항원-결합 단편은 Fab 및 F(ab')을 포함한다.
제조 공정 개요
STELARA®(우스테키누맙)를 연속 관류 세포 배양 후 정제를 포함하는 10-스테이지 공정으로 제조한다. 제조 공정의 개요가 도 39에 제공되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "배양물", "배양하는", "배양된", 및 "세포 배양물"은 세포 집단의 생존 및/또는 성장에 적합한 조건 하에서 배지 중에 현탁된 세포 집단을 지칭한다. 문맥으로부터 당업자에게 명백한 바와 같이, 본 명세서에 사용될 때 이들 용어는 또한 세포 집단 및 그러한 집단이 현탁된 배지를 포함하는 조합을 지칭한다. 세포 배양물은, 예를 들어, 배치식, 유가식(fed-batch) 또는 관류 세포 배양 방법 등에 의해 성장된 세포를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 세포 배양물은 포유류 세포 배양물이다.
본 발명에 사용하기 위한 세포주는 중국 햄스터 난소 세포(CHO 세포), 인간 배아 신장 세포(HEK 세포), 새끼 햄스터 신장 세포(BHK 세포), 마우스 골수종 세포(예를 들어, NS0 세포 및 Sp2/0 세포), 및 인간 망막 세포(예를 들어, PER.C6 세포)를 포함하지만 이로 한정되지 않는 포유류 세포주를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "화학적으로 한정된 배지", "화학적으로 한정된 배지들", "화학적으로 한정된 하이브리도마 배지", 또는 "화학적으로 한정된 하이브리도마 배지들"은 모든 성분들의 정체 및 농도가 알려진 합성 성장 배지를 지칭된다. 화학적으로 한정된 배지는 세균, 효모, 동물, 또는 식물 추출물, 동물 혈청 또는 혈장을 함유하지 않지만, 이들은 개별 식물 또는 동물-유래 성분(예를 들어, 단백질, 폴리펩티드 등)을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있다. 화학적으로 한정된 배지는 성장을 지원하는 데 필요한 무기 염, 예컨대 인산염, 황산염 등을 함유할 수 있다. 탄소원은 한정되며, 통상 당, 예컨대 글루코스, 락토스, 갈락토스 등, 또는 다른 화합물, 예컨대 글리세롤, 락테이트, 아세테이트 등이다. 소정의 화학적으로 한정된 배지는 또한 완충액으로서 인산염을 사용하지만, 시트르산염, 트라이에탄올아민 등과 같은 다른 완충액이 사용될 수 있다. 구매가능한 화학적으로 한정된 배지의 예에는 ThermoFisher의 CD 하이브리도마 배지(Hybridoma Medium) 및 CD 하이브리도마 AGT™ 배지, 다양한 둘베코 변형 이글(Dulbecco's Modified Eagle, DME) 배지(Sigma-Aldrich Co; SAFC Biosciences, Inc), 햄의 영양 혼합물(Ham's Nutrient Mixture) (Sigma-Aldrich Co; SAFC Biosciences, Inc), 이들의 조합 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 화학적으로 한정된 배지를 제조하는 방법은 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 미국 특허 제6,171,825호 및 제6,936,441호, 국제 특허 출원 공개 WO 2007/077217호, 및 미국 특허 출원 공개 제2008/0009040호 및 제2007/0212770호에 알려져 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "생물반응기"는 세포 배양물의 성장에 유용한 임의의 베셀(vessel)을 지칭한다. 생물반응기는 세포의 배양에 유용한 한 임의의 크기일 수 있다. 소정 실시 형태에서, 그러한 세포는 포유류 세포이다. 전형적으로, 생물반응기는 적어도 1 리터일 것이며, 10, 100, 250, 500, 1,000, 2,500, 5,000, 8,000, 10,000, 12,000 리터 또는 그 이상, 또는 이들 사이의 임의의 부피일 수 있다. pH 및 온도를 포함하지만 이로 한정되지 않는 생물반응기의 내부 조건은 배양 기간 동안 선택적으로 제어된다. 생물반응기는 본 발명의 배양 조건 하에서 배지 중에 현탁된 포유류 세포 배양물을 유지하기에 적합한 임의의 재료로 구성될 수 있으며, 이러한 재료에는 유리, 플라스틱 또는 금속이 포함된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "생성용 생물반응기(production bioreactor)"는 관심 폴리펩티드 또는 당단백질의 생성에 사용되는 최종 생물반응기를 지칭한다. 생성용 생물반응기의 부피는 전형적으로 적어도 500 리터이며, 1,000, 2,500, 5,000, 8,000, 10,000, 12,000 리터 또는 그 이상, 또는 이들 사이의 임의의 부피일 수 있다. 당업자는 본 발명을 실시하는 데 사용하기에 적합한 생물반응기를 인식할 것이며 선택할 수 있을 것이다.
우스테키누맙의 전배양, 증폭, 및 생성이 스테이지 1 및 스테이지 2에서 수행된다. 스테이지 1에서는, 우스테키누맙의 HC 및 LC 서열을 발현하는 형질감염된 Sp2/0 세포의 하나 이상의 작업 세포 뱅크 바이알로부터 전배양을 개시하고, 배양 플라스크, 일회용 배양 백, 및 100 L 시드 생물반응기에서 증폭시킨다. 500 L 생성용 생물반응기의 접종에 필요한 세포 밀도 및 부피가 얻어질 때까지 세포를 배양한다. 스테이지 2에서는, 세포 배양물을 교번 접선 유동(alternating tangential flow, ATF) 중공 섬유 필터 세포 체류 시스템을 사용하는 500 L 생성용 생물반응기에서 관류시킨다. 세포 배양 투과물(수확물(harvest))을 ATF 시스템으로부터 수집하며, 한편 세포는 생물반응기 내에 체류시키고, 배양물을 신선한 배지로 보충한다. 스테이지 3에서는, 하나 이상의 500 L 생성용 생물반응기로부터의 수확물을 합할 수 있다. 수확물을 MabSelect 단백질 A 수지 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제한다. 생성된 직접 생성물 포획(DPC) 용리액을 추가의 처리 시까지 동결시킨다.
DPC로부터의 우스테키누맙의 정제를 스테이지 4부터 스테이지 8까지에서, 이온 교환 크로마토그래피 단계 및 잠재적인 바이러스 오염을 불활성화시키거나 제거하는 다른 단계(용매/세제[S/D] 처리 및 바이러스 제거 여과)에 의해 수행한다. 스테이지 4에서는, DPC 용리액을 해동시키고, 풀링하고, 여과하고, 스테이지 5에서는 트라이-n-부틸 포스페이트(TNBP) 및 폴리소르베이트 80 S/D 처리제와 함께 인큐베이션하여, 존재하는 임의의 지질-외피보유 바이러스를 불활성화시킨다. 스테이지 6에서는, TNBP 및 폴리소르베이트 80 시약, 응집체, 및 불순물을 SPXL® 세파로스 양이온 교환 수지 크로마토그래피를 사용하여 우스테키누맙으로부터 제거한다. 스테이지 7에서는, 우스테키누맙을 QXL® 세파로스 음이온 교환 수지 크로마토그래피를 사용하여 추가로 정제하여 DNA, 바이러스, 및 불순물을 제거한다. 스테이지 8에서는, 정제된 우스테키누맙을 희석시키고, 바이러스 체류용 필터(virus retentive filter)(NFP®)를 통해 여과한다.
스테이지 9 및 스테이지 10에서는 각각 우스테키누맙 예비제형화된 벌크(PFB) 및 제형화된 벌크(FB)의 제조를 수행한다. 스테이지 9에서, 한외여과 단계는 우스테키누맙을 농축시키고, 투석여과 단계는 제형화 부형제를 첨가하여 공정중 완충액 염을 제거한다. 스테이지 10에서는, 폴리소르베이트 80을 우스테키누맙 PFB에 첨가하여 FB를 얻는다. FB를 동결 저장을 위해 폴리카르보네이트 용기 내로 여과한다. 동결된 FB를 약물 제품 제조 현장으로의 수송을 위해 드라이 아이스를 갖는 단열 용기 내에 패키징한다.
대형 스케일의 제조 공정에 대한 상세한 설명
스테이지 1 - 전배양 및 증폭
우스테키누맙의 생성에서의 제1 스테이지는 우스테키누맙의 HC 및 LC 서열을 발현하는 형질감염된 Sp2/0 세포의 작업 세포 뱅크(WCB) 바이알로부터의 전배양의 개시 및 배양 플라스크, 일회용 배양 백, 및 100 L 시드 생물반응기 내에서의 증폭이다. 500 L 생성용 생물반응기의 접종에 필요한 세포 밀도 및 부피가 얻어질 때까지 세포를 배양한다.
제조 절차
WCB의 하나 이상의 동결보존된 바이알을 해동시키고, 6 mM L-글루타민, 0.5 mg/L 마이코페놀산, 2.5 mg/L 하이포잔틴, 및 50 mg/L 잔틴이 보충된 CD(화학적으로 한정된) 하이브리도마 배지(CDH-A)로 희석시킨다. 배양 생존력은 45% 이상이어야 한다. 세포를 배양 플라스크 내의 CDH-A를 사용하여 0.2 내지 0.5 × 106개의 생존가능 세포(VC)/mL의 시딩 밀도로 추가로 희석시킨다. 전배양물은 가습된 CO2 인큐베이터 내에서 유지되는데, 이때 온도, CO2 농도, 및 교반은 배치 기록에 규정된 범위 이내로 제어된다. 전배양물을 ≥0.6 × 106개의 VC/mL의 최소 세포 밀도 및 50% 이상의 배양 생존력이 얻어질 때까지 3일 이내 동안 인큐베이션한다. 전배양물을 일련의 배양 플라스크, 및 이어서 100 L 시드 생물반응기의 접종을 위해 스케일 업하기 위한 메커니즘으로서의 배양 백 내에서 순차적으로 증폭시킨다. 배양 증폭 단계 동안, 매 인큐베이션 단계마다 계대배양 조건을 달성하는 데 3일 이내의 시간이 걸리며, 이때 계대배양 조건은 ≥0.6 × 106개의 VC/mL의 세포 밀도 및 80% 이상의 배양 생존력을 필요로 한다. 각각의 계대배양물에 대한 시딩 밀도는 배양 플라스크에서는 0.2 내지 0.5 × 106개의 VC/mL이고, 배양 백에서는 0.2 내지 0.6 × 106개의 VC/mL이다. 매 계대마다 계대배양물을 생존가능 세포 밀도(VCD), 배양 생존력, 및 현미경 검사를 위해 샘플링한다. 100 L 시드 생물반응기의 접종 전에, 전배양물을 생물부하(bioburden)를 위해 샘플링한다.
전배양 증폭물은 해동후 최대 30일 동안 유지될 수 있다. 30일 이내에 사용되지 않은 전배양물은 폐기한다. 전술된 바와 같이 증폭되고, 1차 전배양물과 동일한 공정중 모니터링, 제어 시험, 및 공정 파라미터 하에 둔 백업 전배양물이 유지되고, 필요에 따라 다른 100 L 시드 생물반응기에 접종하는 데 사용될 수 있다.
전배양물이 접종물 기준을 충족시킬 때, 배양 백(들)의 내용물을 ≥0.3 × 106개의 VC/mL의 시딩 밀도를 목표로 하여, CDH-A가 담긴 100 L 시드 생물반응기에 옮긴다. 시드 생물반응기의 배양 pH, 온도, 및 용존 산소 농도는 배치 기록에 규정된 범위 이내로 제어된다. 배양물을 ≥1.5 × 106개의 VC/mL의 세포 밀도 및 80% 이상의 배양 생존력이 얻어질 때까지 증폭시킨다. 배양물을 시드 생물반응기 공정 전체에 걸친 VCD, 배양 생존력, 및 현미경 검사를 위해 샘플링한다. 500 L 생성용 생물반응기의 접종 전에, 배양물을 생물부하를 위해 샘플링한다.
시드 생물반응기 배양물의 VCD가 ≥1.5 × 106개의 VC/mL에 도달할 때, 배양물은 500 L 생성용 생물반응기에 접종하는 데 사용될 수 있다. 대안적으로, 배양물의 일부분이 100 L 시드 생물반응기로부터 인출될 수 있고, 남아 있는 배양물은 신선한 배지를 사용하여 희석될 수 있다. 이러한 "인출 및 채움" 공정 후에는, 배양물을 500 L 생성용 생물반응기에 접종하기에 충분한 세포 밀도로 증폭되게 한다. 100 L 시드 생물반응기 배양물의 최대 지속시간은 접종후 9일이다.
스테이지 2 - 생물반응기 생성
스테이지 2에서는, 세포 배양물을 교번 접선 유동 중공 섬유 필터 세포 체류 시스템(ATF 시스템)을 사용하는 500 L 생성용 생물반응기에서 연속적으로 관류시킨다. 세포 배양 투과물(수확물(harvest))을 ATF 시스템으로부터 수집하며, 한편 세포는 생물반응기로 반환시키고, 배양물을 신선한 배지로 보충한다.
제조 절차
500 L 생성용 생물반응기의 접종은 100 L 시드 생물반응기의 내용물을 6 mM L-글루타민, 0.5 mg/L의 마이코페놀산, 2.5 mg/L 하이포잔틴, 및 50 mg/L 잔틴이 보충된 CD(화학적으로 한정된) 하이브리도마 배지(CDH-A)가 담긴 500 L 생성용 생물반응기 내로 옮김으로써 수행된다. 옮겨진 부피는 ≥0.3 × 106개의 생존가능 세포(VC)/mL의 시딩 밀도를 목표로 하기에 충분하여야 한다. 배양물을 34 내지 38.0℃의 온도, 6.8 내지 7.6의 pH, 및 1 내지 100%의 용존 산소(DO) 농도로 유지한다.
연속 관류를 개시하고, 500 L 생물반응기로부터 ATF 시스템 내로 배양물을 인출하여 투과물로부터 세포를 분리시킨다. 투과물을 0.2 μm ATF 필터를 통해 여과하고, 생물공정 용기(BPC) 내에 수확물로서 수집한다. 세포를 생물반응기로 반환시키고, 신선한 CDH-A를 공급하여 일정한 배양 부피를 유지한다. 생존가능 세포 밀도(VCD), 배양 생존력, pH, DO, 온도 및 면역글로불린 G(IgG) 함량을 생성 실행 동안 모니터링한다. 하루당 대략 1의 생물반응기 부피의 목표 속도에 도달할 때까지 VCD에 비례하여 관류 속도를 점진적으로 증가시킨다. 관류 속도는 하루당 1.20 생물반응기 부피를 초과하지 않도록 제어된다. ATF 시스템의 체류를 모니터링하여, ATF 필터 전체에 걸친 IgG 체류가 50%를 초과하기 전에 ATF 필터의 셧다운을 가능하게 한다.
500 L 생물 반응기 내의 VCD가 8.0 × 106개의 VC/mL에 도달할 때이거나 일수 10에서는, 어느 것이든 먼저 일어나는 경우, pH 목표를 7.2 내지 7.1로 낮춘다. 일수 20에서 또는 12.0 × 106개의 VC/mL의 VCD에 도달할 때, 어느 것이든 먼저 일어나는 경우, 바이오매스 제거를 개시한다. 바이오매스를 하루당 최대 20% 생물반응기 부피의 속도로 500 L 생성용 생물반응기로부터 BPC 내로 취출한다. 각각의 수확물을 생물부하를 위해 샘플링한다.
500 L 생성용 생물반응기에서의 연속 관류 세포 배양 작업은 접종 후 최대 46일 동안 계속된다. 생성 종료 시점에서, 배양물을 마이코플라즈마 및 외래성 바이러스 시험을 위해 샘플링한다. 수확물은 생물반응기로부터의 분리 후 2 내지 8℃에서 30일 이하 동안 저장될 수 있다.
스테이지 3 - 직접 생성물 포획(DPC)
스테이지 3에서는, 하나 이상의 500 L 생성용 생물반응기로부터의 수확물을 자동화 크로마토그래피 스키드를 사용하는 MabSelect™(GE Healthcare Bio-Sciences, 미국 펜실베이니아주 피츠버그 소재) 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼을 사용하여 청징화하고 정제한다. 우스테키누맙을 수확물로부터 포획하고, 숙주-세포 불순물을 포함한 세포 배양 불순물을 제거한다. 생성된 DPC 용리액을 추가의 처리 시까지 동결시킨다.
단백질 A 컬럼 준비 및 재생
수확물 로딩 전에, 충전된 MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼을 50 mM 인산나트륨, 150 mM NaCl, 0.1% 폴리소르베이트 80(pH 7.3) 완충액(평형 완충액)으로 평형화시킨다. 전도도 및 pH를 모니터링하여 컬럼을 완전히 평형화시키는 것을 보장한다. 컬럼 유출물의 샘플을 채취하고, 모니터링하여 미생물 제어를 보장한다. 사용 후, 컬럼을 위생처리하고, 이어서 플러싱하고, 적용가능한 경우, 적절한 저장 조건에서 저장한다.
제조 절차
수확물을 생물부하, 내독소, 및 면역글로불린 G 함량을 위해 샘플링한다. 0.1 M 에틸렌다이아민테트라아테트산(EDTA)(pH 8.0) 완충액을 수확물에 인라인으로 첨가하여 5 내지 30 mM EDTA의 최종 농도를 달성한다. 수확물을 0.2 μm 여과하고, 14 내지 41 g/L의 부하비 및 300 내지 500 cm/h의 유량으로 단백질 A 컬럼 상에 로딩한다. 280 nm(A280)에서의 UV 흡광도가 ≤100 mAU/mm로 복귀될 때까지 컬럼을 300 내지 500 cm/h의 유량으로 평형 완충액으로 세척하고, 이어서 평형 완충액의 적어도 2의 추가 컬럼 부피(CV)로 세척한다. 결합된 우스테키누맙을 300 내지 500 cm/h의 유량으로 적어도 4.5 CV의 0.1 M 소듐 시트레이트(pH 5.0) 완충액으로 세척한다.
우스테키누맙을 300 내지 500 cm/h의 유량으로 0.1 M 시트레이트(pH 3.5)를 사용하여 용리한다. 용리된 생성물의 수집은 ≥50 mAU/mm 경로 길이의 상승하는 A280 신호에서 시작하여 ≥50 mAU/mm 경로 길이의 하강하는 A280 신호에서 정지한다.
수집 후, 필요에 따라 1.0 M Tris 완충액 및/또는 0.1 M 소듐 시트레이트 완충액을 첨가함으로써 DPC 용리액의 pH를 5.8 내지 6.2로 조정한다. pH 조정 동안, DPC 용리액을 혼합하여 용액의 균질성을 보장한다. pH 조정된 DPC 용리액을 여과 전에 생물부하를 위해 샘플링한다.
pH 조정된 DPC 용리액을 0.2 μm 최종 필터를 사용하여 여과한다. DPC 용리액을 폴리카르보네이트 용기 내로 분취한다. 여과된 DPC 용리액을 단량체 함량, 생물부하, 내독소, 및 단백질 농도(이로부터 단계 수율을 계산하고 60% 이상일 것으로 예상됨)의 분석을 위해 샘플링한다. 여과된 DPC 용리액은 -40℃ 이하에서 저장하기 전에, 실온에서는 48시간 이하의 누적 시간 동안 그리고 2 내지 8℃에서는 240시간 이하의 누적 시간 동안 유지될 수 있다. DPC 용리액은 동결 저장될 수 있다.
스테이지 4 - 직접 생성물 포획(DPC) 용리액의 해동 및 풀링
스테이지 4에서는, 용매/세제 바이러스 불활성화 전에 DPC 용리액을 해동시키고, 풀링하고, 여과한다.
제조 절차
동결된 DPC 용리액을 실온에서 해동시킨다. 해동은 일단 용리액에 얼음이 보이지 않으면 완료된 것이며; 해동은 120시간을 초과하지 않아야 한다. 해동된 용리액을 풀링하고 폐쇄 용기 내로 0.2 μm 여과하여 2.7 내지 5.4 ㎏의 단백질을 얻는다. 여과된 용리액을 혼합하여 용액의 균질성을 보장한다. 단백질 농도, 내독소, 생물부하, 및 pH를 위해 샘플을 채취한다. 단백질 농도는 4.5 내지 59 g/L로 측정된다. 이어서, 필요에 따라 1.0 M Tris 또는 1.0 M 시트르산을 첨가하여 pH를 5.5 내지 6.5로 조정한다. 풀링된 DPC 용리액은 스테이지 5에서의 추가 처리 전에 실온에서 최대 48시간까지 저장될 수 있다.
스테이지 5 - 풀링된 직접 생성물 포획(DPC) 용리액의 용매/세제(S/D) 처리
스테이지 5에서는, 풀링된 DPC 용리액을 트라이-n-부틸 포스페이트(TNBP) 및 폴리소르베이트 80(용매/세제[S/D] 처리)과 함께 인큐베이션하여 잠재적으로 존재하는 임의의 지질-외피보유 바이러스를 불활성화시킨다.
제조 절차
2% TNBP/10% 폴리소르베이트 80(w/w)을 함유하는 S/D 스톡 용액을 0.08 내지 0.12(v/v)의 비로 풀링된 DPC 용리액이 담긴 베셀에 옮겨서 0.2% TNBP/1% 폴리소르베이트 80(w/v)의 최종 농도를 산출한다. 용액을 혼합하여 용액의 균질성을 보장하고, 이어서 불활성화 베셀에 옮긴다. 우스테키누맙 및 S/D 처리 시약을 연속 혼합하면서 15℃ 이상에서 인큐베이션한다. 불활성화는 S/D-처리된 우스테키누맙이 불활성화 용기에 완전히 옮겨질 때 시작하고, 스테이지 6에서 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼-로딩 단계가 시작될 때 완료된다. 총 불활성화 시간은 60분 이상이다. S/D 시약 첨가의 시작부터 스테이지 6에서의 컬럼-로딩 단계의 종료까지의 총 시간은 36시간 이하이다.
스테이지 6 - 양이온 교환 크로마토그래피
스테이지 6에서는, 용매/세제(S/D)로 처리된 우스테키누맙을 자동화 크로마토그래피 스키드에 연결된 SP Sepharose XL(미국 펜실베이니아주 피츠버그 소재의 GE Healthcare Bio-Sciences) 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼에 결합시킨다. 트라이-n-부틸 포스페이트(TNBP) 및 폴리소르베이트 80 시약, 응집체, 및 불순물을 제거한다.
양이온 교환 크로마토그래피 컬럼 준비 및 재생
사용 전에, 충전된 SP Sepharose XL 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 30 mM 인산나트륨(pH 6.5) 완충액(평형 완충액)으로 평형화시킨다. 전도도 및 pH를 모니터링하여 컬럼을 완전히 평형화시키는 것을 보장한다. 컬럼 유출물의 샘플을 채취하고, 모니터링하여 미생물 제어를 보장한다. 사용 후에는, 컬럼을 잔류 단백질을 스트립핑하고, 재생하고, 위생처리하고, 적절한 저장 용액 중에 저장한다.
제조 절차
S/D-처리된 우스테키누맙을 2.4 내지 3.4 mS/cm의 전도도를 유지하도록 주사용수를 사용하여 인라인으로 희석시키고, 평형화된 SP Sepharose XL 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼 상에 로딩한다. 모든 로드, 세척, 및 용리 유량은 100 내지 300 cm/h이다. 생성물 대 수지 부하비는 45.5 내지 90.9 g 우스테키누맙/L 수지이다. 컬럼을 3 컬럼 부피 이상의 PBS로 세척한다. 이어서, 우스테키누맙을 30 mM 인산나트륨, 50 mM 염화나트륨(pH 6.5) 완충액을 사용하여 양이온 교환 컬럼으로부터 용리시킨다. 컬럼 유출물의 280 nm에서의 UV 흡광도(A280)가 최소 25 mAU/mm로 상승할 때 생성물의 수집을 개시한다. A280 피크를 모니터링하여, 유출물이 150 mAU/mm 이상으로 감소할 때 수집을 종료한다. 용리된 생성물을 생물부하의 분석을 위해 샘플링한다.
용리액을 0.2 μm 필터를 통해 폐쇄 용기 내로 여과한다. 이어서, 양이온 교환-정제된 우스테키누맙을 혼합하고, 샘플을 생물부하 및 내독소를 위해 채취한다. 수율을 모니터링하고 85% 이상일 것으로 예상된다. 우스테키누맙은 추가 처리 전에 실온에서는 최대 72시간 동안 그리고 2 내지 8℃에서는 최대 7일 동안 유지될 수 있다.
스테이지 7 - 음이온 교환 크로마토그래피
스테이지 7에서는, 우스테키누맙을 자동화 크로마토그래피 스키드를 사용하여 Q Sepharose™ XL(미국 펜실베이니아주 피츠버그 소재의 GE Healthcare Bio-Sciences) 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 추가로 정제한다. 우스테키누맙은 수지를 통해 유동하는 반면, DNA, 다른 불순물, 및 바이러스는 체류된다.
음이온 교환 크로마토그래피 컬럼 준비 및 재생
사용 전에, 충전된 Q Sepharose™ XL 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 50 mM Tris, 50 mM 염화나트륨(pH 8.0)(평형 완충액)으로 평형화시킨다. 전도도 및 pH를 모니터링하여 컬럼을 완전히 평형화시키는 것을 보장한다. 컬럼 유출물의 샘플을 채취하고, 모니터링하여 미생물 제어를 보장한다. 사용 후에는, 컬럼을 잔류 단백질을 스트립핑하고, 재생하고, 위생처리하고, 적절한 용액 중에 저장한다.
제조 절차
로딩 전에, 양이온 교환 용리액의 pH를, pH가 7.5 내지 8.0이 될 때까지 필요에 따라 1.0 M Tris 또는 1.0 M 시트르산을 첨가함으로써 조정한다. 용리액을 혼합하여 용액의 균질성을 보장한다. pH-조정된 우스테키누맙을 50 내지 250 cm/h의 유량으로 Q Sepharose™ XL 음이온 교환 컬럼 상에 로딩한다. 생성물 대 수지 부하비는 45.5 내지 136.4 g 우스테키누맙/L 수지이다.
우스테키누맙은 결합 없이 수지를 통해 유동하고, 일단 280 nm에서의 UV 흡광도(A280)가 최소 30 mAU/mm로 상승하면 수집된다. 우스테키누맙을 로딩한 후에, 컬럼을 50 내지 250 cm/h의 유량으로 평형 완충액을 사용하여 세척한다. A280 피크를 모니터링하여, 유출물이 50 mAU/mm 이상으로 감소할 때 수집을 종료한다. 용리된 생성물을 생물부하의 분석을 위해 샘플링한다.
우스테키누맙을 0.2 μm 필터를 통해 폐쇄 용기 내로 여과하고, 혼합하고, 생물부하 및 내독소를 위해 샘플링한다. 수율을 모니터링하고 85% 이상일 것으로 예상된다. 음이온 교환 정제된 우스테키누맙은 스테이지 8에서의 추가 처리 전에 실온에서는 최대 72시간 동안 또는 2 내지 8℃에서는 최대 7일 동안 유지될 수 있다.
스테이지 8 - 바이러스 제거 여과
스테이지 8에서는, 음이온 교환 정제된 우스테키누맙을 50 mM Tris, 50 mM NaCl(pH 8.0) 완충액으로 희석시키고, 바이러스 체류용 필터(NFP®)를 통해 여과하여 임의의 잠재적으로 존재하는 바이러스를 제거한다.
NFP 여과 시스템 준비
사용 전에, 오토클레이빙된 일회용 NFP 필터를 위생처리된 NFP 여과 시스템 상에 설치하고, 주사용수(WFI)로 플러싱하고, 이어서 투수성에 대해 시험한다. 필터를 50 mM Tris, 50 mM NaCl(pH 8.0) 완충액(평형 완충액)으로 평형화시킨다. 전도도 및 pH를 모니터링하여 시스템을 완전히 평형화시키는 것을 보장한다. 완충액 플러시액의 샘플을 채취하고, 모니터링하여 미생물 제어를 보장한다. NFP 여과 시스템은 사용 후에 위생처리하고 적절한 저장 용액 중에 저장한다.
제조 절차
여과 전에, 음이온 교환 정제된 우스테키누맙을 평형 완충액을 사용하여 8.2 g/L 이하의 농도로 희석시킨다. 이어서, 희석된 우스테키누맙을 NFP 필터를 통해 여과하고, NFP 여과액을 스테인리스 강 용기 내에 수집한다. 초기 유량을 여과 시작 5분 이내에 결정하고, 플럭스 감쇠(flux decay)를 모니터링하여 초기 플럭스(0% 플럭스 감쇠로 정의됨)로부터의 플럭스 감쇠가 85%를 초과하지 않음을 보장한다. 일단 NFP 여과가 완료되면, 스키드를 평형 완충액으로 플러싱하고, 남아 있는 생성물을 스테인레스 강 베셀 내에 수집하며, 여기서 그것을 혼합하고 내독소, 생물부하, 및 단백질 농도를 위해 샘플링한다. 수율을 모니터링하고 85% 이상일 것으로 예상된다. 우스테키누맙 NFP-여과액은 스테이지 9에서의 추가 처리 전에 실온에서는 최대 72시간 동안 그리고 2 내지 8℃에서는 최대 7일 동안 유지될 수 있다.
스테이지 9 - 농축 및 투석여과
스테이지 9에서, 한외여과 단계는 우스테키누맙을 농축시키고, 투석여과 단계는 제형화 부형제를 첨가하여 공정중 완충액 염을 제거한다.
한외여과 시스템 준비
사용 전에, 시스템을 50 mM Tris, 50 mM NaCl(pH 8.0) 완충액으로 평형화시킨다. 전도도 및 pH를 모니터링하여 시스템을 완전히 평형화시키는 것을 보장한다. 완충액 플러시액의 샘플을 채취하고, 모니터링하여 미생물 제어를 보장한다. 사용 후에는, 한외여과 시스템을 위생처리한다. WFI를 시스템을 통해 플러싱하고, 표준 투수성 시험을 수행한다. 필요하다면, 한외여과 시스템은 적절한 저장 용액 중에 저장된다.
제조 절차
우스테키누맙 바이러스 체류 여과액을 36 내지 82 g/L로 사전농축시킨다. 이어서, 투과물의 pH 및 전도도가 각각 5.5 내지 5.9 및 400 내지 700 μs/cm 이내에 있을 때까지, 생성물을 10 mM 히스티딘, 8.5% 수크로스(pH 5.7) 완충액에 대해 8 투석부피(diavolume) 이상으로 투석여과한다. 우스테키누맙을 180 g/L 이하로 추가로 농축시킨다. 공정 전체에 걸쳐, 막관통 압력을 모니터링하고 제어한다. 생성물을 10 mM 히스티딘, 8.5% 수크로스(pH 5.7) 완충액을 사용하여 완충액 플러시액과 함께 회수한다. 우스테키누맙의 최종 농도를 이러한 동일한 완충액을 사용하여 86.7 내지 95.8 g/L의 단백질 농도로 조정하고, 예비제형화된 벌크(PFB)로 지칭한다. 스테이지 9에 대한 수율을 모니터링하고 85% 이상일 것으로 예상된다. 필요하다면, 우스테키누맙은 한외여과 시스템을 통해 농축 단계를 반복함으로써 정확한 단백질 농도를 얻도록 재처리될 수 있다. 생성물을 혼합하여 용액의 균질성을 보장한다. 우스테키누맙 PFB는 실온 또는 2 내지 8℃에서 최대 48시간 동안 저장된다.
스테이지 10 - 제형화된 벌크의 제조
스테이지 10에서는, 폴리소르베이트 80을 우스테키누맙 예비제형화된 벌크(PFB)에 첨가하여 제형화된 벌크(FB)를 얻는다. FB를 동결 저장을 위해 폴리카르보네이트 용기 내로 여과한다.
제조 절차
1% 폴리소르베이트 80을 폐쇄 PFB 베셀 내에 0.003 내지 0.005 ㎏/L의 비로 우스테키누맙 PFB에 첨가하고 혼합하여 FB 용액을 얻는다. FB 용액을 검증된 파라미터에 따라 혼합하여 용액의 균질성을 보장한다. FB 용액은 여과 전에 실온 또는 2 내지 8℃에서 최대 48시간 동안 저장될 수 있다. FB 용액을 일회용 프리-필터(pre-filter)를 사용하여 FB 베셀 내로 여과하고 혼합한다. 이어서, 혼합된 FB를 폴리카르보네이트 용기 내로 0.2 μm 여과한다. 샘플을 방출 시험을 위해 채취한다. 우스테키누맙 FB 용기는 -40℃ 이하에서 저장한다.
실시예 6 - STELARA®(우스테키누맙) 제조에 사용되는 크로마토그래피 컬럼에 대한 감마 분포 전이 분석(GDTA) 방법의 적용
이 실시예는 항-TNF 항체, 예를 들어 항-TNFα 항체 SIMPONI®(골리무맙)의 제조 동안 정제 시에 크로마토그래피 컬럼, 예를 들어 제조의 스테이지 3 동안 사용되는 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼에 대한 GDTA 방법의 적용을 기술한다.
스테이지 3 -단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼
MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼을 사용하는 스테이지 3의 경우, 분석된 전이 전선들은, 예를 들어 세척 2 전선(도 40), 및 용리 동안 생성된 전선(도 41)을 포함하였다. 위생처리후 컬럼 세정, 및 평형후 헹굼 저장 단계 동안 생성된 추가의 전선이 또한 현재 MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼에 대해 평가되고 있다. 제시된 결과는 STELARA®(우스테키누맙) 제조에 사용되는 13개의 상이한 컬럼 팩 상에서 처리된 배치들의 분석을 나타낸다. 이들 경향의 예비 평가는 컬럼 성능에 있어서 명백한 약간의 드리프트 및 컬럼 팩들 사이에 관찰된 약간의 차이를 보여준다. 다른 이용가능한 배치 정보 및 컬럼 성능 데이터와의 비교를 포함한 이 데이터의 전체 분석이 실시간으로의 공정 모니터링을 위한 GDTA 방법의 향후 구현에서 사용하기 위한 관리 한계선을 확립하기 위해 완성될 것이다.
실시예 7 - SIMPONI®(골리무맙) 제조에 사용되는 크로마토그래피 컬럼에 대한 감마 분포 전이 분석(GDTA) 방법의 적용
이 실시예는 항-TNFα 항체 SIMPONI®(골리무맙)의 제조 동안 정제 시에 크로마토그래피 컬럼, 예를 들어 스테이지 3에서의 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼, 스테이지 6에서의 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼, 및 스테이지 7에서의 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼에 대한 GDTA 방법의 적용을 기술한다. SIMPONI®(골리무맙)의 제조 방법에 사용되는 이들 스테이지 및 컬럼은 STELARA®(우스테키누맙)를 제조하는 데 사용되는 것들과 유사하다.
스테이지 3 -단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼
MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼을 사용하는 스테이지 3의 경우, 분석된 전이 전선들은, 예를 들어 용리 전선(도 42), 구아니딘 HCl을 사용한 위생처리 동안 생성된 전선(도 43), 및 0.1 M 소듐 시트레이트(pH 3.5)를 사용한 위생처리 후 헹굼 동안 생성된 전선(도 44)을 포함하였다. 보여지는 결과는 160개의 배치의 SIMPONI®(골리무맙)의 분석을 나타낸다. 이들 경향의 예비 평가는 컬럼 성능에 있어서 명백한 약간의 드리프트 및 컬럼 팩들 사이에 관찰된 약간의 차이를 보여준다. 다른 이용가능한 배치 정보 및 컬럼 성능 데이터와의 비교를 포함한 이 데이터의 전체 분석이 실시간으로의 공정 모니터링을 위한 GDTA 방법의 향후 구현에서 사용하기 위한 관리 한계선을 확립하기 위해 완성될 것이다.
스테이지 6 - 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼
UNOsphere S™ 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 사용하는 스테이지 6의 경우, 분석된 전이 전선들은, 예를 들어 용매/세제(S/D) 처리된 물질의 로딩 동안 생성된 전선(도 45), 용리 동안 생성된 전선(도 46), 및 스트립핑 동안 생성된 전선(도 47)을 포함하였다. 보여지는 결과는 72개의 배치의 SIMPONI®(골리무맙)의 분석을 나타낸다. 이들 경향의 예비 평가는 컬럼 성능에 있어서 명백한 약간의 드리프트 및 컬럼 팩들 사이에 관찰된 약간의 차이를 보여준다. 다른 이용가능한 배치 정보 및 컬럼 성능 데이터와의 비교를 포함한 이 데이터의 전체 분석이 실시간으로의 공정 모니터링을 위한 GDTA 방법의 향후 구현에서 사용하기 위한 관리 한계선을 확립하기 위해 완성될 것이다.
스테이지 7 - 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼
Q Sepharose™ XL 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 사용하는 스테이지 7의 경우, 분석된 전이 전선들은, 예를 들어 수산화나트륨으로 세정하는 동안 생성된 전선(도 48) 및 스트립핑 동안 생성된 전선(도 49)을 포함하였다. 보여지는 결과는 71개의 배치의 SIMPONI®(골리무맙)의 분석을 나타낸다. 이들 경향의 예비 평가는 컬럼 성능에 있어서 명백한 약간의 드리프트 및 컬럼 팩들 사이에 관찰된 약간의 차이를 보여준다. 다른 이용가능한 배치 정보 및 컬럼 성능 데이터와의 비교를 포함한 이 데이터의 전체 분석이 실시간으로의 공정 모니터링을 위한 GDTA 방법의 향후 구현에서 사용하기 위한 관리 한계선을 확립하기 위해 완성될 것이다.
바람직한 실시 형태가 본 명세서에 상세히 묘사되고 기술되어 있지만, 다양한 변형, 첨가, 치환 등이 본 발명의 사상으로부터 벗어나지 않고서 이루어질 수 있으며, 이에 따라 이들은 하기의 청구범위에 정의된 바와 같은 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 여겨짐이 당업자에게 명백할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> JANSSEN BIOTECH, INC. Randolph, Paul <120> CHROMATOGRAPHY COLUMN QUALIFICATION IN MANUFACTURING METHODS FOR PRODUCING ANTI-IL12/IL23 ANTIBODY COMPOSITIONS <130> JBI6082USNP1 <160> 11 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Thr Tyr Trp Leu Gly 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Arg Arg Pro Gly Gln Gly Tyr Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Met Ser Val Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Arg Pro Gly Gln Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 9 <211> 503 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu 1 5 10 15 His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys 20 25 30 Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp 35 40 45 His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu 50 55 60 Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr 65 70 75 80 Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe 85 90 95 Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr 100 105 110 Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys 115 120 125 Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu 130 135 140 Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser 145 150 155 160 Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu 165 170 175 Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser 180 185 190 Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val 195 200 205 Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr 210 215 220 Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser 225 230 235 240 Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu 245 250 255 Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu 260 265 270 Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser 275 280 285 Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu 290 295 300 Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu 305 310 315 320 Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly 325 330 335 Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala 340 345 350 Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys 355 360 365 Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu 370 375 380 Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser 385 390 395 400 Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu 405 410 415 Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu 420 425 430 Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe 435 440 445 Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val 450 455 460 Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser 465 470 475 480 Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu 485 490 495 Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser 500 <210> 10 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Met Ser Val Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Arg Pro Gly Gln Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 11 <211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (10)

  1. 항-IL-12/IL-23p40 항체, 상기 항체의 특정 약제학적 조성물, 및 이의 항원 결합 단편을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서 크로마토그래피 컬럼을 작동시키는 방법으로서,
    상기 항-IL-12/IL-23p40 항체는 (i) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC) 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC); (ii) 서열 번호 7의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호 8의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열; 및 (iii) 서열 번호 1, 서열 번호 2, 및 서열 번호 3의 중쇄 CDR 아미노산 서열, 및 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6의 경쇄 CDR 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 방법은
    컬럼 충전물(column packing)을 포함하는 상기 크로마토그래피 컬럼의 제1 작동 동안 2개 이상의 간격으로 적어도 하나의 이동상 전이 전선(mobile phase transition front)의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하는 단계;
    상승 전이 전선에 대한 식 Ia 또는 하강 전이 전선에 대한 식 Ib를 사용하여 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 수집된 상기 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터에 기초하여 모델 감마 누적 분포 곡선을 결정하는 단계:
    [식 Ia]
    Figure pct00031

    또는
    [식 Ib]
    Figure pct00032

    (여기서, C는 주어진 V에 대한 컬럼 출구 신호이고, V는 누적 유량을 컬럼 부피로 나눈 값이고, k, θ, 및 V i 는 상기 곡선을 정의하는 데 사용되는 형상, 스케일 및 오프셋 파라미터임);
    식 II, 및 k, θ, 및 V i 의 상기 모델 감마 누적 분포 곡선 파라미터를 사용하여 상기 적어도 하나의 이동상 전이 전선에 대해 이론단 상당 높이(HETP) 값을 계산하는 단계:
    [식 II]
    Figure pct00033

    (여기서,
    Figure pct00034

    Figure pct00035

    L = 컬럼 길이); 및
    상기 계산된 HETP 값에 기초하여 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질을 평가하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 평가에 기초하여 상기 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝, 교체, 또는 재충전(repacking)하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 1회 이상의 후속 사용 동안 2개 이상의 간격으로 상응하는 이동상 전이 전선의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 수집하는 단계;
    상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 1회 이상의 후속 사용의 매회 사용 동안 수집된 상기 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 사용하여 상기 결정하는 단계 및 상기 계산하는 단계를 수행하는 단계;
    상기 수행하는 단계에 기초하여 상기 1회 이상의 후속 사용의 매회 사용 동안 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 HETP 값을 결정하는 단계;
    2회 이상의 후속 사용의 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 결정된 HETP 값의 경향을 컴파일하는 단계; 및
    상기 컴파일된 경향에 기초하여 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질의 변화를 확인하는 단계를 추가로 포함하며, 상기 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝, 교체 또는 재충전하는 단계는 상기 확인하는 단계에 기초하는, 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 컬럼 충전물의 1회 이상의 조기 사용에서의 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 HETP 값과 대비하여 상기 컬럼 충전물의 1회 이상의 후속 사용에서의 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 HETP 값의 증가가 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질의 감소를 확인시켜 주는, 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 컬럼 충전물의 상기 제1 작동 동안 2개 이상의 상이한 이동상 전이 전선의 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터가 수집되며, 상기 방법은
    상기 2개 이상의 상이한 이동상 전이 전선 각각에 대해 수집된 상기 컬럼 출구 신호 및 누적 유량 파라미터를 사용하여 상기 결정하는 단계 및 상기 계산하는 단계를 수행하여 독립적으로 상기 2개 이상의 상이한 이동상 전이 전선 각각에 대해 HETP 값을 계산하는 단계;
    상기 2개 이상의 계산된 HETP 값에 기초하여 상기 크로마토그래피 컬럼 충전물의 품질을 평가하는 단계를 포함하며, 이로써 상기 크로마토그래피 컬럼을 컨디셔닝, 교체 또는 재충전하는 단계는 상기 평가하는 단계에 기초하는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로마토그래피 컬럼은 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼, 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼, 및 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼은 MabSelect™ 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼을 포함하고, 상기 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼은 UNOsphere S™ 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼 또는 SP Sepharose XL 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 포함하고, 상기 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼은 Q Sepharose™ XL 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 포함하는, 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 단백질 A 친화성 크로마토그래피 컬럼에서의 상기 이동상 전이 전선은 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체의 정제 동안 생성된 세척 전선, 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체의 용리 동안 생성된 전선, 구아니딘 HCl을 사용한 상기 컬럼의 위생처리(sanitization) 동안 생성된 전선, 0.1 M 소듐 시트레이트(pH 3.5)를 사용한 상기 컬럼의 위생처리 후 헹굼 동안 생성된 전선으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 전선으로부터 생성되는, 방법.
  9. 제6항에 있어서, 상기 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼에서의 상기 이동상 전이 전선은 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체를 포함하는 용매/세제(S/D) 처리된 물질의 로딩 동안 생성된 전선, 상기 항-IL-12/IL-23p40 항체의 용리 동안 생성된 전선, 및 컬럼 스트립핑 동안 생성된 전선으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 전선으로부터 생성되는, 방법.
  10. 제6항에 있어서, 상기 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼에서의 상기 이동상 전이 전선은 수산화나트륨을 사용한 상기 컬럼의 세정 동안 생성된 전선 및 컬럼 스트립핑 동안 생성된 전선으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 전선으로부터 생성되는, 방법.
KR1020207033178A 2018-04-20 2019-04-19 항-il12/il23 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서의 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가 KR20210003825A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862660340P 2018-04-20 2018-04-20
US62/660,340 2018-04-20
PCT/US2019/028332 WO2019204734A1 (en) 2018-04-20 2019-04-19 Chromatography column qualification in manufacturing methods for producing anti-il12/il23 antibody compositions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210003825A true KR20210003825A (ko) 2021-01-12

Family

ID=66429636

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207033178A KR20210003825A (ko) 2018-04-20 2019-04-19 항-il12/il23 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서의 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가
KR1020207033238A KR20210003830A (ko) 2018-04-20 2019-04-19 항-tnf 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서의 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가
KR1020207033174A KR20210003824A (ko) 2018-04-20 2019-04-19 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가를 위한 전이 분석 방법

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207033238A KR20210003830A (ko) 2018-04-20 2019-04-19 항-tnf 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법에 있어서의 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가
KR1020207033174A KR20210003824A (ko) 2018-04-20 2019-04-19 크로마토그래피 컬럼 적격성 평가를 위한 전이 분석 방법

Country Status (21)

Country Link
US (5) US11079361B2 (ko)
EP (4) EP4063850A1 (ko)
JP (3) JP7268054B2 (ko)
KR (3) KR20210003825A (ko)
CN (3) CN112313511A (ko)
AU (2) AU2019256635A1 (ko)
BR (2) BR112020020480A2 (ko)
CA (3) CA3096902A1 (ko)
DK (1) DK3781943T3 (ko)
EA (4) EA039018B1 (ko)
ES (1) ES2914987T3 (ko)
HR (1) HRP20220676T1 (ko)
HU (1) HUE058711T2 (ko)
IL (2) IL278025B2 (ko)
LT (1) LT3781943T (ko)
PL (1) PL3781943T3 (ko)
PT (1) PT3781943T (ko)
RS (1) RS63424B1 (ko)
SG (1) SG11202010019YA (ko)
SI (1) SI3781943T1 (ko)
WO (3) WO2019204734A1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7262472B2 (ja) * 2018-09-21 2023-04-21 株式会社日立ハイテク 液体クロマトグラフを有する分析装置および液体クロマトグラフの分析方法
WO2023194944A1 (en) * 2022-04-08 2023-10-12 Csl Behring Ag Methods of sanitizing and/or regenerating a chromatography medium
WO2024092203A1 (en) * 2022-10-28 2024-05-02 Amgen Inc. Compositions of anti-interleukin 12/interleukin 23 antibody
CN116369936B (zh) * 2023-05-31 2023-10-03 深圳市奋达智能技术有限公司 一种心电信号处理方法、系统、装置及存储介质

Family Cites Families (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1353739A (fr) * 1963-03-06 1964-02-28 Gulf Research Development Co Appareil de chromatographie
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4656134A (en) 1982-01-11 1987-04-07 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Gene amplification in eukaryotic cells
US5149636A (en) 1982-03-15 1992-09-22 Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for introducing cloned, amplifiable genes into eucaryotic cells and for producing proteinaceous products
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4956288A (en) 1988-04-22 1990-09-11 Biogen, Inc. Method for producing cells containing stably integrated foreign DNA at a high copy number, the cells produced by this method, and the use of these cells to produce the polypeptides coded for by the foreign DNA
US5266491A (en) 1989-03-14 1993-11-30 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. DNA fragment and expression plasmid containing the DNA fragment
US5580734A (en) 1990-07-13 1996-12-03 Transkaryotic Therapies, Inc. Method of producing a physical map contigous DNA sequences
US5968502A (en) 1991-11-05 1999-10-19 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5641670A (en) 1991-11-05 1997-06-24 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5804420A (en) 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
US6475725B1 (en) 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
US6966991B2 (en) * 2000-07-28 2005-11-22 Pall Corporation Methods and apparatus for packing chromatography columns and chromatography column
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
US20070021277A1 (en) 2005-07-21 2007-01-25 Kuo Hai P Upper and lower body exerciser
PL2253644T3 (pl) * 2005-12-20 2014-04-30 Bristol Myers Squibb Co Kompozycje i sposoby wytwarzania kompozycji
US8833589B2 (en) 2005-12-21 2014-09-16 Pactiv Packaging Inc. Enhanced tamper evident bowl with blocked tab
LT1974014T (lt) 2006-01-04 2017-11-27 Baxalta Incorporated Ląstelių kultūros terpė be oligopeptidų
US20070215548A1 (en) 2006-01-05 2007-09-20 Zhou Joe Xin H Systems and methods for packing chromatography columns
SG170837A1 (en) * 2006-04-05 2011-05-30 Abbott Biotech Ltd Antibody purification
US8028562B2 (en) * 2007-12-17 2011-10-04 Schlumberger Technology Corporation High pressure and high temperature chromatography
US8568586B2 (en) * 2008-01-25 2013-10-29 Biogen Idec Ma Inc. Automated system and method for monitoring chromatography column performance, and applications thereof
US20090277254A1 (en) * 2008-05-09 2009-11-12 Medlmmune, Llc Methods of improving packed-bed chromatography performance
DK2338049T3 (da) * 2008-08-15 2021-03-01 Biogen Ma Inc Fremgangsmåder til evaluering af en kromatografisøjles ydeevne
CA2911256A1 (en) 2008-10-20 2010-12-09 Robert K. Hickman Isolation and purification of antibodies using protein a affinity chromatography
US7983852B2 (en) 2008-10-21 2011-07-19 Thermo Finnigan Llc Methods of automated spectral peak detection and quantification without user input
US20120282654A1 (en) * 2009-04-29 2012-11-08 Schering Corporation Antibody purification
SG177319A1 (en) * 2009-06-24 2012-02-28 Hoffmann La Roche Characterization of re-useable chromatography equipment
EP2467713A2 (en) 2009-08-20 2012-06-27 Spectrosense Ltd. Gas chromatographic analysis method and system
RU2571489C2 (ru) * 2009-10-26 2015-12-20 Нестек С.А. Способы выявления препаратов и аутоантител против tnf
WO2012084828A1 (en) 2010-12-21 2012-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Chromatography equipment characterization
FR2973880B1 (fr) 2011-04-06 2013-05-17 Commissariat Energie Atomique Procede et dispositif d'estimation de parametres biologiques ou chimiques dans un echantillon, procede d'aide au diagnostic correspondant
US9334319B2 (en) * 2012-04-20 2016-05-10 Abbvie Inc. Low acidic species compositions
CN103163237B (zh) * 2013-02-03 2014-06-11 大连理工大学 获得有机化合物在碳纳米管上保留的热力学参数和吸附等温线的方法
EP2970865B1 (en) 2013-03-15 2020-09-02 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antibody purification and purity monitoring
US10099156B2 (en) * 2013-04-08 2018-10-16 Chromacon Ag Chromatographic purification method
WO2015052721A1 (en) 2013-10-09 2015-04-16 Spectrosense Ltd. Modified data representation in gas chromatographic analysis
US8946395B1 (en) * 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
WO2016079061A1 (en) * 2014-11-17 2016-05-26 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab A method and appartus for performing liquid chromatography purification
FR3040215B1 (fr) 2015-08-20 2019-05-31 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Procede d’estimation d’une quantite de particules reparties en classes, a partir d’un chromatogramme.
EP3493843A1 (en) * 2016-08-03 2019-06-12 FYB 202 Project GmbH Production of biosimilar ustekinumab in cho cells
SG11201902667UA (en) * 2016-10-25 2019-05-30 Regeneron Pharma Methods and systems for chromatography data analysis

Also Published As

Publication number Publication date
RS63424B1 (sr) 2022-08-31
CA3097776A1 (en) 2019-10-24
LT3781943T (lt) 2022-07-11
EA202092510A1 (ru) 2020-12-22
EP3781942B1 (en) 2022-06-01
US20210332124A1 (en) 2021-10-28
EA039018B1 (ru) 2021-11-23
US11079361B2 (en) 2021-08-03
US20190321752A1 (en) 2019-10-24
CN112313511A (zh) 2021-02-02
DK3781943T3 (da) 2022-06-20
IL278025B2 (en) 2023-03-01
EA039041B1 (ru) 2021-11-25
HUE058711T2 (hu) 2022-09-28
KR20210003830A (ko) 2021-01-12
AU2019256635A1 (en) 2020-10-15
US11225516B2 (en) 2022-01-18
JP7344902B2 (ja) 2023-09-14
EP3781942A1 (en) 2021-02-24
IL278025A (en) 2020-11-30
US20220089716A1 (en) 2022-03-24
CN112041674A (zh) 2020-12-04
SG11202010019YA (en) 2020-11-27
CN112041674B (zh) 2024-04-02
WO2019204734A1 (en) 2019-10-24
EA202092511A1 (ru) 2020-12-29
CN112041673A (zh) 2020-12-04
JP2021522204A (ja) 2021-08-30
EA202192301A1 (ru) 2022-03-31
EA202192300A1 (ru) 2022-03-31
IL278025B (en) 2022-11-01
WO2019204747A1 (en) 2019-10-24
EP4063850A1 (en) 2022-09-28
AU2019256647A1 (en) 2020-10-22
WO2019204721A1 (en) 2019-10-24
CA3096902A1 (en) 2019-10-24
PT3781943T (pt) 2022-08-05
EP3781943A1 (en) 2021-02-24
US20190322736A1 (en) 2019-10-24
PL3781943T3 (pl) 2022-08-01
JP2021522471A (ja) 2021-08-30
EP3781941A1 (en) 2021-02-24
US20190324000A1 (en) 2019-10-24
BR112020021108A2 (pt) 2021-02-17
KR20210003824A (ko) 2021-01-12
ES2914987T3 (es) 2022-06-20
SI3781943T1 (sl) 2022-07-29
IL278039A (en) 2020-11-30
JP2021522477A (ja) 2021-08-30
BR112020020480A2 (pt) 2021-01-12
JP7268054B2 (ja) 2023-05-02
CA3097559A1 (en) 2019-10-24
HRP20220676T1 (hr) 2022-07-22
EP3781943B1 (en) 2022-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11079361B2 (en) Chromatography column qualification in manufacturing methods for producing anti-IL12/IL23 antibody compositions
US20210388407A1 (en) Cell culture process for making a glycoprotein
US20200062802A1 (en) Use of Raman Spectroscopy in Downstream Purification
US20230110811A1 (en) pH METER CALIBRATION AND CORRECTION
US20230116199A1 (en) Systems and methods of ph modeling and control
US20240002483A1 (en) Fab high mannose glycoforms