KR20200139730A - Il-2 접합체 - Google Patents

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토마스 크나페
니콜라 비섹
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Abstract

본 발명은 IL-2 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염, 상기 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 약학 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.

Description

IL-2 접합체
본 발명은 IL-2 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염, 이러한 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 약학 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
건강한 사람의 경우, 면역계는 종종 건강한 세포와 암 세포를 구분할 수 있다. 주어진 세포를 암 세포로 식별하면, 면역계는 일반적으로 이를 제거한다. 그러나, 면역계가 예를 들어 급성 또는 만성 결함으로 인해 손상되거나 압도되는 경우, 손상된 면역계가 암세포를 식별하여 이를 제거할 수 없기 때문에 암이 발생할 수 있다. 암을 앓고 있는 환자의 경우, 면역 조절 단백질을 환자에게 투여하면 환자의 면역계를 활성화하여 암세포를 제거하는 면역계의 능력이 향상될 수 있다. 이러한 방식으로, 암은 추가로 성장하는 것이 지연되거나, 잠재적인 확산이 억제되거나, 심지어 제거될 수도 있다.
특정 암을 앓고 있는 환자의 치료에 사용되는 면역 조절 단백질 중 하나는 인터류킨-2이다. 인터류킨-2(IL-2)는 자연 살해 세포(NK 세포)의 자극제로서의 활성과 T 세포 증식 및 기능적 활성을 모두 갖는 자연 발생 사이토카인이다. IL-2는 면역 이펙터 세포의 생성, 분화, 생존 및 항상성에서 중심적인 역할을 수행한다. IL-2는 활성화된 CD4+ 헬퍼 T 세포에 의해 합성되며, 차등 수용체 상호작용을 통해 IL-2는 면역 또는 내성에 대한 면역 반응을 조절할 수 있다.
IL-2는 IL-2 수용체(IL-2R)에 결합함으로써 작용한다. α-(CD25), β-(CD122) 및 일반적인 γ-(γc, CD132) 서브유닛의 회합은 삼량체 고친화성 IL-2R을 생성한다. 이량체 중간 친화성 IL-2Rβγ는 β-서브유닛 및 γ-서브유닛으로 구성되며, 50배 더 낮은 친화성으로 IL-2에 결합한다. CD25는 IL-2 신호전달에 필요하지 않지만, 삼량체 수용체의 고친화성 결합을 부여하는 반면, β-서브유닛 및 γ-서브유닛은 신호 전달을 매개한다. IL-2Rβγ는 NK 세포, 단핵구, 대식세포 및 휴지 CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 발현되는 반면, IL-2Rαβγ는 활성화된 T 및 NK 세포에서 일시적으로 유도되고, T 조절 세포에서 구성적으로 발현된다. IL-2가 선천 및 적응형 이펙터 세포를 확장하고 활성화하는 능력은 이의 항종양 활성의 기초이다.
환자에서, IL-2는 고용량 투여(즉, 인간에서 사이클당 최대 14회 투여 동안 600,000-720,000 IU/kg 체중의 1일 3회 투여)시에, 이펙터 T 및 NK 세포를 포함하는 세포독성 림프구의 증가를 특징으로 하는 항종양 효능을 자극할 수 있다. 아마도, 상기 치료 동안 모든 T 세포는 고용량 투여 후 IL-2에 의해 자극되고, 치료 사이클이 끝나고 IL-2 수준이 어느 시점에서 떨어지면 IL-2가 제한되고 IL-2Rαβγ를 발현하는 T 조절(Treg) 세포는 나머지 야생형 IL-2에 대해 IL-2Rβγ를 발현하는 이펙터 T 세포를 능가할 것이다.
재조합 인간 IL-2인 알데스류킨은 1992년에 FDA에서 승인된 최초의 암 면역 요법이다. 적절한 지지 요법을 사용하여, 알데스류킨은 전이성 흑색종 및 신장암 치료를 받은 환자의 약 10%에서 완전한 암 퇴행을 입증하였다. 완전 반응을 보인 환자의 약 70%가 완치되었고, 초기 치료 후 25년 초과의 기간 동안 완전한 퇴행을 유지하였다.
항종양 효능을 기초로 하여, 고용량 IL-2(알데스류킨)는 전이성 신세포 암종 및 악성 흑색종 환자에게 승인되었다. 그러나, 이의 항종양 면역은 심각한 심혈관, 폐, 간, 위장, 신경 및 혈액학적 부작용에 의해 용량이 제한되어, 전문 센터의 환자에게만 제공된다. 또한, 일단 투여된 IL-2 수준이 IL-2Rβγ 활성에 필요한 수준 미만으로 떨어지면, 고친화성 IL-2Rαβγ를 발현하는 Treg의 활성화가 선호되어 항종양 면역을 제한할 수 있을 것이다.
전임상 실험은 IL-2로 유도된 폐부종(혈관 누출 증후군의 모델로서의)이 폐 내피 세포 상의 CD25와 IL-2의 상호작용에 의해 유발될 수 있으며 CD25 차단 항체, 유전적 파괴 또는 IL-2-항체 복합체의 사용에 의해 제거될 수 있음을 보여주었다. IL-2가 혈관 누출 증후군을 유도하는 또 다른 제안된 메커니즘은 호산구의 활성화를 포함하고, 이것은 이들 세포가 IL-2Rαβγ를 발현할 수 있고 환자에서 IL-2 치료법이 전신 호산구 및 IL-5 수준의 상승과 관련이 있기 때문이다.
면역 내성으로 이어지는 면역 반응을 억제하는 역할을 하는 CD4+ 조절 T 세포(Treg 세포)는 IL-2R의 IL-2Rαβγ 형태를 우선적으로 발현한다. 따라서, IL-2Rαβγ에 결합하고 이에 대한 아고니스트인 화합물의 투여는 면역 반응을 억제하고, 따라서 암 환자의 항종양 반응도 방해할 것으로 예상된다.
항종양 면역 반응을 상당히 향상시키는 이펙터 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 및 NK 세포는 IL-2R의 IL-2Rβγ 형태를 우선적으로 발현한다. 따라서, IL-2Rβγ에 결합하고 이에 대한 아고니스트인 화합물의 투여는 종양에 대한 면역 반응을 향상시킬 것으로(예를 들어, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 및 NK 세포의 증식 및 효과의 활성을 증가시킴으로써) 예상될 수 있다.
따라서, IL-2Rβγ-선택적 아고니스트(IL-2Rα에 대한 결합이 감소되거나 상기 결합을 전혀 보이지 않거나 또는 IL-2Rβγ에 대한 결합이 향상됨)의 투여는 전신 혈관 누출 부작용, 예를 들어 폐부종을 감소시켜 개선된 치료 창을 제공할 것으로 예상되기 때문에, 특정 암을 앓고 있는 환자에게 유익할 것이다. 또한, IL-2Rβγ-선택적 아고니스트는 저용량에서 면역 억제 조절 T 세포의 선택적 활성화를 피한다는 이점이 있을 것이고, Treg 및 CD4+ 이펙터 T 세포, 세포독성 CD8+ 이펙터 T 세포 및 NK 세포에 대해 유사하게 효능을 보이고, 따라서 암세포를 제거하기 위해 환자의 면역계를 강화할 수 있는 더 많은 기회를 제공할 것이다.
최적으로, 이러한 IL-2Rβγ-선택적 아고니스트는 또한 투여 후에 상대적으로 긴 노출을 나타내어 치료에 대한 환자의 반응을 더욱 향상시킬 것이다. IL-2βγ-선택적 아고니스트의 투여를 통해 암 환자에서 면역계의 이펙터 암을 부스팅하는 것은 면역 억제 경로의 길항제(예를 들어, CTLA-4 및 PD-1의 길항제)의 투여를 통해 또는 TLR 리간드와 같은 면역 아고니스트, 또는 면역 활성화 수용체에 대한 아고니스트, 예를 들어 41BB(CD137), OX40, ICOS, CD40, CD28, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, LFA1, CD16, CD64, CD32A 및 CD3 활성화 수용체 아고니스트 또는 항체 유도 세포 매개성 세포독성(ADCC) 관여 항체의 투여를 통해 더욱 강화될 수 있다.
종양 반응성 T 세포의 입양 전이(adoptive transfer)는 환자에서 항종양 면역을 유도할 수 있는 임상적으로 유용한 치료법으로 발전하였다. 그러나, 암을 치료하기 위한 입양 T 세포 전이(ACT) 요법의 광범위한 적용에는 주입을 위한 충분한 양의 세포의 생산 및 전이된 T 세포가 생체 내에서 지속되고 기능을 유지하지 못하는 등과 같은 몇 가지 한계가 있다. 임상에서, T 세포 성장 인자 인터류킨-2(IL-2)의 병용 투여는 이식된 T 세포의 생존, 기능 및 항종양 활성을 향상시킨다. 그러나. ACT를 강화하기 위해 IL-2를 사용하는 것은 IL-2의 다면발현적(pleiotropic) 특성으로 인해 복잡해지며, 이것은 면역 자극 및 억제성 T 세포 반응과 잠재적으로 심각한 독성을 모두 유발한다.
IL-2의 독성 문제를 해결하려는 시도가 있었다. 한 경우에, 제제 접근법이 시도되어 왔으며, 예를 들어 미국 특허 제6,706,289호 및 국제 특허 출원 공개 WO 02/00243 및 WO 99/60128을 참조한다. 다른 접근법에서, IL-2의 특정 접합체가 제안되었고, 예를 들어 미국 특허 제4,766,106호, 제5,206,344호, 제5,089,261호 및 제4,902,502호를 참조한다. 또한, IL-2의 특정한 가역적 접합체가 제안되었고, 예를 들어, WO12065086A1을 참조한다.
그러나, 이러한 접근법에도 불구하고, 암 환자에게 보다 안전한 치료를 제공하는 IL-2 접합체에 대한 필요성이 계속 존재한다.
따라서, 본 발명의 목적은 상기 언급된 단점을 적어도 부분적으로 극복하는 것이다.
상기 목적은 화학식 (Ia) 또는 (Ib)의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로 달성된다.
Figure pct00001
Figure pct00002
여기서,
-D는 편향된 IL-2 모이어티이고, 상기 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티를 포함하고, 편향된 IL-2 모이어티에 대해, IL-2Rαβ에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD 의 비가, IL-2Rαβ에 대한 알데스류킨의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD의 비보다 더 크고;
-L1-은 -D에 공유적 및 가역적으로 부착된 링커 모이어티이고;
-L2-는 화학 결합이거나 스페이서 모이어티이고;
-Z는 중합체 모이어티 또는 치환된 지방산 모이어티이고;
x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
y는 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다.
본 발명에서, 용어는 다음과 같은 의미로 사용된다:
본 명세서에서 사용되는 용어 "인터류킨-2" 또는 "IL-2"는 바람직하게는 포유동물 종, 보다 바람직하게는 영장류 종, 가장 바람직하게는 인간으로부터의 모든 IL-2 단백질, 및 림프구 생성, 생존 및 항상성에서 중심 역할을 수행하는 것을 특징으로 하는 이들의 변이체, 유사체, 오르톨로그(ortholog), 및 이들의 유도체 및 단편을 지칭한다. 용어 "IL-2"는 또한 IL-2의 자연 발생 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립 유전자 변이체를 포함한다.
인간 IL-2는 서열 번호 1의 서열을 갖는다 :
Figure pct00003
처리되지 않은 인간 IL-2는 성숙한 IL-2 분자에 없는 N-말단 20개 아미노산 신호 펩타이드를 추가로 포함한다.
바람직하게 및 달리 명시되지 않는 한, 용어 "IL-2"는 바람직하게는 알데스류킨, 즉 인간 IL-2의 변이체를 지칭하며, 여기서 서열 번호 1의 인간 IL-2에 존재하는 위치 1의 아미노산(알라닌)은 결실되고(desA1), 위치 125에서 서열 번호 1의 인간 IL-2에 존재하는 시스테인은 세린으로 교환되었다(C125S). 알데스류킨의 서열은 서열 번호 2에 제시되어 있다:
Figure pct00004
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-2 단백질 변이체" 또는 "IL-2 변이체"는 참조 IL-2 단백질과는 상이한, 동일한 종으로부터의 단백질을 지칭한다. 바람직하게는, 상기 참조 IL-2 단백질 서열은 서열 번호 2의 서열이다. 일반적으로, 참조 단백질 및 변이체의 아미노산 서열이 전체적으로 매우 유사하고 많은 영역에서 동일하도록 그 차이가 제한된다. 바람직하게는, IL-2 단백질 변이체는 참조 IL-2 단백질, 바람직하게는 서열 번호 2의 IL-2 단백질과 적어도 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일하다. 예를 들어, 질의 아미노산 서열에 대해 적어도, 예를 들어 95% "동일한" 아미노산 서열을 갖는 단백질이라는 표현은, 대상 단백질의 아미노산 서열이 질의 아미노산 서열의 각각의 100개 아미노산당 최대 5개의 아미노산 변경을 포함할 수 있다는 점을 제외하고는 대상 단백질의 아미노산 서열이 질의 서열과 동일하다는 것이 의도된다. 참조 서열의 이러한 변경은 참조 아미노산 서열의 아미노(N-말단) 또는 카르복시 말단(C-말단) 위치에서 또는 참조 서열의 잔기 사이에서 개별적으로 또는 참조 서열 내의 하나 이상의 연속적인 군 내에 산재된 상기 말단 위치 사이의 임의의 곳에서 발생할 수 있다. 질의 서열은 참조 서열의 전체 아미노산 서열 또는 본 명세서에서 설명되는 바와 같이 특정된 임의의 단편일 수 있다. 바람직하게는, 질의 서열은 서열 번호 2의 서열이다.
이러한 IL-2 단백질 변이체는 자연 발생 변이체, 예를 들어 염색체 또는 유기체에서 주어진 유전자좌를 차지하는 IL-2의 여러 대체 형태 중 하나에 의해 코딩되는 자연 발생 대립 유전자 변이체 또는 단일 1차 전사체로부터 기원하는 자연 발생 스플라이스 변이체에 의해 코딩되는 이소형일 수 있다. 대안적으로, IL-2 단백질 변이체는 자연적으로 발생하는 것으로 알려져 있지 않고 관련 기술 분야에 공지된 돌연변이 유발 기술에 의해 제조될 수 있는 변이체일 수 있다.
하나 이상의 아미노산이 생물학적 기능의 실질적인 손실없이, 생활성 펩타이드 또는 단백질의 N-말단 또는 C-말단으로부터 또는 내부 위치, 즉 N-말단과 C-말단 아미노산 사이의 위치에서 결실될 수 있음이 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 이러한 N-말단, C-말단 및/또는 내부 결실도 또한 용어 IL-2 단백질 변이체에 포함된다.
또한, IL-2 단백질의 일부 아미노산 서열은 펩타이드의 구조 또는 기능에 상당한 영향을 주지 않으면서 변할 수 있다는 것이 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 인식되고 있다. 이러한 돌연변이체는 활성에 거의 영향을 미치지 않는 것으로 관련 기술 분야에 공지된 일반적인 규칙에 따라 선택된 결실, 삽입, 역위, 반복 및 치환을 포함한다. 예를 들어, 표현형 상으로는 변화가 없는 아미노산 치환을 만드는 방법에 관한 지침은 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함되는 문헌 [Bowie et al. (1990), Science 247:1306-1310]에 제시되어 있고, 여기서 저자는 아미노산 서열 변화에 대한 내성을 연구하기 위한 두 가지 주요 접근법이 있음을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-2 유사체"는 각각의 유기체에서 동일한 기능을 수행하지만 유기체의 조상들이 공통적으로 갖는 조상 구조(ancestral structure)로부터 유래하지는 않은, 상이하고 관련되지 않은 유기체의 IL-2를 의미한다. 대신에, 유사한 IL-2가 개별적으로 발생하고, 나중에 동일하거나 유사한 기능을 수행하도록 진화하였다. 즉, 유사한 IL-2 단백질은 아미노산 서열이 상당히 상이하지만 동일한 생물학적 활성을 수행하는 단백질이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-2 오르톨로그"는 서열이 조상 종에서 공통적인 상동성 IL-2를 통해 서로 관련되지만 서로 상이하도록 진화한 2개의 상이한 종 내의 IL-2를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-2 상동체"는 각각의 유기체에서 동일한 기능을 수행하고 유기체의 조상이 공통적으로 갖는 조상 구조에서 유래하는, 상이한 유기체의 IL-2를 의미한다. 즉, 상동성 IL-2 단백질은 동일한 생물학적 활성을 수행하는 매우 유사한 아미노산 서열을 갖는 단백질이다. 바람직하게는, IL-2 단백질 상동체는 참조 IL-2 단백질, 바람직하게는 서열 번호 2의 IL-2 단백질에 대해 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%의 동일성을 나타내는 단백질로 정의될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-2 단백질 단편"은 IL-2 단백질의 아미노산 서열, 바람직하게는 서열 번호 2의 단백질의 일부의 연속적인 스팬을 포함하는 임의의 펩타이드를 지칭한다. 보다 구체적으로, IL-2 단백질 단편은 IL-2 단백질, 보다 바람직하게는 서열 번호 2의 단백질의 적어도 50개, 예를 들어 적어도 60개, 적어도 70개 또는 적어도 80개의 연속적인 아미노산을 포함한다.
용어 "IL-2"는 또한 상기 설명된 바와 같은 서열을 갖지만, 아마이드 결합 및 예를 들어 비-아마이드 결합, 예를 들어 뎁시펩타이드와 같은 에스테르 결합을 모두 포함하는 백본을 갖는 폴리(아미노산) 접합체를 포함한다. 뎁시펩타이드는 백본이 아마이드(펩타이드)와 에스테르 결합을 모두 포함하는 아미노산 잔기의 사슬이다. 따라서, 본 명세서에서 사용된 용어 "측쇄"는 예를 들어, 펩타이드 또는 단백질에서 아미노산 모이어티가 아민 결합을 통해 연결된 경우 아미노산 모이어티의 알파-탄소에 부착된 모이어티 또는 예를 들어 뎁시펩타이드의 경우에서처럼 폴리(아미노산) 접합체의 백본에 부착된 임의의 탄소 원자 함유 모이어티를 의미한다. 바람직하게는, 용어 "IL-2"는 아마이드(펩타이드) 결합을 통해 형성된 백본을 갖는 단백질을 의미한다.
IL-2라는 용어는 IL-2의 상기 설명된 변이체, 유사체, 오르토로그, 상동체, 유도체 및 단편을 포함하기 때문에, 참조 서열 내의 특정 위치에 대한 모든 언급은 특별히 언급되지 않으면, IL-2 모이어티의 상기 변이체, 유사체, 오르토로그, 상동체, 유도체 및 단편의 동등한 위치를 또한 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "편향된 IL-2"는 IL-2Rαβ에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD 의 비가 IL-2Rαβ에 대한 서열 번호 2의 알데스류킨의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD의 비보다 더 큰 변형된 IL-2를 지칭한다. 이것은 다음 공식으로 설명된다:
Figure pct00005
여기서,
Figure pct00006
"KD IL-2Rαβ에 대한 편향된 IL-2"는 IL-2Rαβ에 대한 편향된 IL-2의 KD이고,
"KD IL-2Rβ에 대한 편향된 IL-2"는 IL-2Rβ에 대한 편향된 IL-2의 KD이고,
"KD IL-2Rαβ에 대한 알데스류킨"은 IL-2Rαβ에 대한 알데스류킨의 KD이고,
"KD IL-2Rβ에 대한 알데스류킨"은 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD이다.
IL-2Rαβ에 대한 편향된 IL-2의 KD, IL-2Rβ에 대한 편향된 IL-2의 KD, IL-2Rαβ에 대한 알데스류킨의 KD 및 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD를 결정하기 위해 필요한 결합 친화도/동역학은 다음과 같이 비아코어(Biacore) 기기(GE Healthcare)에서 측정된 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 평가할 수 있다. CM5(대안적으로, C1 또는 CM4) 칩 상의 인간 Fc 포획 표면은 항-인간 Fc 항체를 공유 코팅하여 제조하거나, 또는 대안적으로 단백질 A 칩을 사용한다. 다음으로, IL-2Rβ-Fc 또는 IL2-Rα-Fc와 IL2-Rβ-Fc의 적절한 혼합물, 예를 들어 1:1 혼합물이 칩에 고정된다. 친화성/동역학 상수를 측정하기 위해, 예를 들어 IL-2 화합물에 대해 1.5 nM에서 2 μM 사이 또는 100 nM 내지 1 μM에서 시작하여 분석물의 연속 희석액이 제조된다(예를 들어 0.03 nM 내지 100 nM 또는 0.1 nM 내지 1 nM에서 끝남). 분석물은 1 내지 30분, 예를 들어 2분 또는 3분일 수 있는 적절한 시간 동안 수용체-변형된 칩에 각각 노출된 후, 2 내지 60분, 예를 들어 10분일 수 있는 적절한 시간 동안 세척된다. 희석 시리즈에 의해 생성되는 결합 곡선은 관찰된 반응 단위(R)을 회합 및 해리 속도 상수, 즉 ka 및 kd에 서로 관련시키기 위한 1:1 동역학 모델에 적합하다:
Figure pct00007
여기서,
t는 시간이고;
C는 분석물의 농도이고;
Rmax는 표면의 최대 결합 용량이다.
동역학 1:1 모델을 통해 결정된 경우, 해리 및 회합 속도의 비율은 평형 해리 상수 KD를 제공한다.
대안적으로, 희석 시리즈에 의해 생성된 결합 곡선은 분석물 농도(C)에 대한 정상 상태 결합 수준(Req)의 플롯으로부터 1:1 상호작용에 대한 KD를 계산하는 1:1 정상 상태 상호작용 모델에 적합하다:
Figure pct00008
여기서,
Req는 정상 상태 결합 수준이고;
C는 분석물의 농도이고;
Rmax는 표면의 최대 결합 용량이다.
모든 편향된 IL-2 분자에 대해 모든 계산 방법이 가능한 것은 아닐 수 있음이 이해된다. 예를 들어, 반응이 너무 빠르면, 1:1 동역학 모델을 사용하지 못할 수 있으며, 1:1 정상 상태 상호작용 모델을 사용할 수 있다. 예를 들어, 평형을 얻지 못하면, 1:1 상호작용 모델을 사용하지 못할 수 있으며, 1:1 동역학 모델을 사용할 수 있다.
IL2Rαβ 및 IL2Rβ에 대한 편향된 IL-2의 KD는 본 발명의 IL-2 접합체가 아니라, 편향된 IL-2에 대해 측정되는 것으로 이해된다. 따라서, KD 측정은 모이어티 -L1-, -L2- 및 -Z가 없는 상태에서, 및 바람직하게는 IL-2 접합체가 번역 융합 단백질인 경우를 제외하고는 본 발명의 IL-2 접합체가 합성되기 전에 실시하며, 상기 번역 융합 단백질의 경우에, KD는 편향된 IL-2가 방출된 후, 예를 들어 프로테아제 절단 또는 화학적 절단 후에 측정된다.
이러한 편향된 IL-2는 적어도 하나의 아미노산 돌연변이 또는 적어도 하나의 결실, 적어도 하나의 변형 모이어티 Mmod, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10개의 변형 모이어티 Mmod 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 IL-2 모이어티, 바람직하게는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 IL-2 모이어티인 단백질 부분을 포함한다. 모이어티 Mmod는 단백질 모이어티 또는 비-단백질 모이어티일 수 있다. 편향된 IL-2가 하나 초과의 모이어티 Mmod를 포함하는 경우, 이들은 동일하거나 상이할 수 있다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 1의 서열을 갖는다.
본 발명의 IL-2 접합체에서, 편향된 IL-2는 상응하는 편향된 IL-2 모이어티의 형태로 존재하고, 본 발명의 IL-2 접합체는 모든 모이어티 -Z의 방출시에, 즉, 편향된 IL-2 모이어티, 즉 -D와 -L1- 사이의 가역적 결합이 절단될 때 편향된 IL-2를 방출한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "친화성"은 분자의 단일 결합 부위(예를 들어, 수용체)와 이의 결합 파트너(예를 들어, 리간드) 사이의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 의미한다. 달리 표시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "친화성"은 결합쌍의 구성원 사이(예를 들어, 수용체와 리간드 사이)의 1:1 상호작용을 반영하는 고유한 결합 친화성을 의미한다. 이의 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화 성은 일반적으로 평형 해리 상수(KD)로 표현될 수 있으며, 이것은 평형 상태에서 측정된 해리 속도 상수 및 회합 속도 상수(각각 kd 및 ka)의 비이다. 따라서, 동등한 친화성은 속도 상수의 비가 동일하게 유지되는 한, 상이한 속도 상수를 포함할 수 있다. 친화성은 본 명세서에서 설명되는 것을 비롯하여 관련 기술 분야에 공지된 잘 확립된 방법에 의해 측정될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-2 수용체의 α-서브유닛" 및 "IL-2Rα"는 인간 CD25를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-2 수용체의 β-서브유닛" 및 "IL-2Rβ"는 인간 CD122를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-2 수용체의 α- 및 β-서브유닛", "IL-2R의 α- 및 β-서브유닛" 및 "IL-2Rαβ"는 혼합물, 예를 들어 IL-2Rα와 IL-2Rβ의 1:1 혼합물을 지칭한다.
본 발명의 IL-2 접합체는 편향된 IL-2를 방출하고, 즉, 본 발명의 IL-2 접합체는 편향된 IL-2의 프로드러그이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "프로드러그"는 링커 모이어티("가역적 프로드러그 링커"로도 지칭될 수 있음)를 통해 특수한 보호기에 가역적으로 공유 결합된 생물학적 활성 모이어티, 예를 들어 편향된 IL-2 모이어티를 지칭하고, 상기 링커 모이어티는 생물학적 활성 모이어티와의 가역적 결합을 포함하고, 특수한 보호기는 생물학적 활성 모이어티의 모 분자에서, 즉 상응하는 약물에서 바람직하지 않은 특성을 변경하거나 제거한다. 이것은 또한 약물의 바람직한 특성의 향상 및 바람직하지 않은 특성의 억제를 포함한다. 특수한 무독성 보호기는 "담체"로 칭해진다. 프로드러그는 가역적이고 공유 결합된 생물학적 활성 모이어티를 이의 상응하는 약물의 형태로 방출한다. 즉, 프로드러그는 가역적 프로드러그 링커 모이어티를 통해 담체 모이어티에 공유적으로 및 가역적으로 접합된 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 접합체이며, 상기 가역적 프로드러그 링커 모이어티에 대한 담체의 공유적 및 가역적 접합은 직접 또는 스페이서 모이어티를 통해 이루어진다. "생물학적 활성 모이어티"의 또 다른 용어는 "약물 모이어티"이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 제1 모이어티를 제2 모이어티에 부착하는 것과 관련하여 용어 "가역적", "가역적으로", "분해 가능한" 또는 "분해 가능하게"는 상기 제1 및 제2 모이어티를 연결하는 결합이 pH 7.4, 37℃의 수성 완충제인 생리학적 조건 하에서, 1시간 내지 3개월, 바람직하게는 1시간 내지 2개월, 훨씬 더 바람직하게는 1시간 내지 1개월의 반감기로 절단될 수 있음을 의미한다. 절단은 효소적 또는 비효소적 절단일 수 있으며, 바람직하게는 비효소적 절단이다. 따라서, 제1 모이어티를 제2 모이어티에 부착하는 것과 관련하여 용어 "안정한" 또는 "영구적인"은 상기 제1 및 제2 모이어티를 연결하는 결합이 생리학적 조건 하에서 3개월 초과의 반감기로 절단될 수 있음을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "변형 모이어티"는 바람직하게는 치환체 또는 중합체 모이어티를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "디설파이드 가교"는 디설파이드 다리의 2개의 황 원자 사이에 모이어티가 삽입되는 것을 의미한다. 이것은 2개의 티올-반응성 작용기 사이에 상기 모이어티를 갖는 시약을 사용하고, 상기 모이어티가 디설파이드 결합의 사전 환원 후에 상기 황 원자 사이에 삽입되도록 각각의 티올-반응성 작용기를 디설파이드 다리의 황 원자 중 하나와 반응시킴으로써 달성된다. 하나 초과의 디설파이드 다리가 펩타이드 또는 단백질에 존재하는 경우, 디설파이드 다리는 하나의 디설파이드 다리의 황 원자 사이에 삽입되거나, 상이한 디설파이드 다리의 황 원자 사이에 삽입될 수 있다. 이러한 디설파이드 다리는 펩타이드 또는 단백질에서 자연적으로 발생할 수 있거나, 예를 들어 존재하는 아미노산 모이어티를 시스테인 모이어티로 대체하거나 펩타이드 또는 단백질에 시스테인 모이어티를 추가함으로써 인공적으로 도입될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "시약"은 또 다른 화학적 화합물 또는 약물의 작용기와 반응하기 위한 적어도 하나의 작용기를 포함하는 화학적 화합물을 의미한다. 작용기(예를 들어, 1차 또는 2차 아민 또는 하이드록실 작용기)를 포함하는 약물도 시약인 것으로 이해된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "모이어티"는 상응하는 시약과 비교하여 하나 이상의 원자(들)가 없는 분자의 일부를 의미한다. 예를 들어, 화학식 "H-X-H"의 시약이 또 다른 시약과 반응하여 반응 생성물의 일부가 되는 경우, 반응 생성물의 상응하는 모이어티는 구조 "H-X-" 또는 "-X-"를 갖고, 각각의 "-"는 또 다른 모이어티에 대한 부착을 나타낸다. 따라서, 생물학적 활성 모이어티는 약물로서 가역적 결합로부터 방출된다.
2개의 모이어티에 부착되거나 모이어티가 개재되는 일군의 원자의 서열 또는 화학적 구조가 제공되는 경우, 상기 서열 또는 화학적 구조는 달리 명시적으로 언급되지 않는 한, 어느 방향으로든 2개의 모이어티에 부착될 수 있는 것으로 이해된다. 예를 들어, 모이어티 "-C(O)N(R1)-"은 2개의 모이어티에 부착되거나, 또는 "-C(O)N(R1)-" 또는 "-N(R1)C(O)-"로서 모이어티가 개재될 수 있다. 이와 유사하게, 모이어티
Figure pct00009
는 2개의 모이어티에 부착되거나,
Figure pct00010
또는
Figure pct00011
로서 모이어티가 개재될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치환된"은 분자 또는 모이어티의 하나 이상의 -H 원자(들)가 "치환체"로 지칭되는 상이한 원자 또는 일군의 원자로 대체됨을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치환체"는 바람직하게는 할로겐, -CN, -COORx1, -ORx1, -C(O)Rx1, -C(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2N(Rx1Rx1a), -S(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2Rx1, -S(O)Rx1, -N(Rx1)S(O)2N(Rx1aRx1b), -SRx1, -N(Rx1Rx1a), -NO2, -OC(O)Rx1, -N(Rx1)C(O)Rx1a, -N(Rx1)S(O)2Rx1a, -N(Rx1)S(O)Rx1a, -N(Rx1)C(O)ORx1a, -N(Rx1)C(O)N(Rx1aRx1b), -OC(O)N(Rx1Rx1a), -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 모이어티를 지칭하고, 여기서, -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, 및 -OC(O)N(Rx3)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
-Rx1, -Rx1a, -Rx1b는 서로 독립적으로 -H, -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, 및 -OC(O)N(Rx3)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
각각의 T0은 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 및 8 내지 11원 헤테로비사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 T0은 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 선택적으로 치환되고;
각각의 -Rx2는 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORx4, -ORx4, -C(O)Rx4, -C(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2N(Rx4Rx4a), -S(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2Rx4, -S(O)Rx4, -N(Rx4)S(O)2N(Rx4aRx4b), -SRx4, -N(Rx4Rx4a), -NO2, -OC(O)Rx4, -N(Rx4)C(O)Rx4a, -N(Rx4)S(O)2Rx4a, -N(Rx4)S(O)Rx4a, -N(Rx4)C(O)ORx4a, -N(Rx4)C(O)N(Rx4aRx4b), -OC(O)N(Rx4Rx4a), 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -Rx3, -Rx3a, -Rx4, -Rx4a, -Rx4b는 독립적으로 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
바람직하게는, 선택적으로 치환된 분자의 최대 6개의 -H 원자는 독립적으로 치환체로 대체되고, 예를 들어 5개의 -H 원자가 독립적으로 치환체로 대체되거나, 4개의 -H 원자가 독립적으로 치환체로 대체되거나, 3개의 -H 원자가 독립적으로 치환체로 대체되거나, 2개의 -H 원자가 독립적으로 치환체로 대체되거나, 1개의 -H 원자가 치환체로 대체된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "지방산"은 4 내지 28개의 탄소 원자를 포함할 수 있는 지방족 꼬리를 갖는 포화 또는 불포화 모노카르복실산을 지칭한다. 지방산은 포화 또는 불포화, 선형 또는 분지형일 수 있다. 용어 "지방산 변이체"는 특정 탄소 원자가 다른 원자 또는 일군의 원자로 대체될 수 있고 치환될 수 있는 변형된 지방산을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "펩타이드"는 펩타이드(아마이드) 결합에 의해 연결된 적어도 2개 내지 최대 50개의 아미노산 단량체 모이어티의 사슬을 지칭한다. 용어 "펩타이드"는 또한 D-펩타이드, 펩토이드 또는 베타-펩타이드와 같은 펩타이드 모방체를 포함하고, 50개 이하의 단량체 모이어티를 포함하는 상기 펩타이드 모방 사슬을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단백질"은 펩타이드 결합에 의해 연결된 "아미노산 잔기"로도 지칭될 수 있는 50개 초과의 아미노산 단량체 모이어티의 사슬을 의미하며, 여기서 바람직하게는 12000개 이하의 아미노산 단량체, 예를 들어 10000개 이하의 아미노산 모노머 모이어티, 8000개 이하의 아미노산 모노머 모이어티, 5000개 이하의 아미노산 모노머 모이어티 또는 2000개 이하의 아미노산 모노머 모이어티가 펩타이드 결합에 의해 연결된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 수치값과 조합된 용어 "약"은 상기 수치값의 플러스 및 마이너스 25% 이하, 보다 바람직하게는 상기 수치값의 플러스 및 마이너스 20% 이하, 가장 바람직하게는 상기 수치값의 플러스 및 마이너스 10% 이하를 포함하는 범위를 나타내기 위해 사용된다. 예를 들어, "약 200"이라는 문구는 200 +/- 25%를 포함하는 범위, 즉 150 내지 250을 포함하는 범위; 바람직하게는 200 +/- 20%를 포함하는 범위, 즉 160 내지 240를 포함하는 범위; 훨씬 더 바람직하게는 200 +/- 10%를 포함하는 범위, 즉 180 내지 220을 포함하는 범위를 의미하기 위해 사용된다. "약 50%"로 주어진 백분율은 "50% +/- 25%", 즉 25 내지 75%를 포함하는 범위를 의미하지 않고, "약 50%"는 37.5 내지 62.5%를 포함하는 범위, 즉 50이라는 수치값의 플러스 및 마이너스 25%의 범위를 의미한다는 것이 이해된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "중합체"는 합성 또는 생물학적 기원 또는 이 둘의 조합일 수 있는, 선형, 원형, 분지형, 가교결합된 또는 덴드리머 방식 또는 이들의 조합으로 화학적 결합에 의해 연결된 반복 구조 단위, 즉 단량체를 포함하는 분자를 의미한다. 중합체는 또한 하나 이상의 다른 화학적 기(들) 및/또는 모이어티/모이어티들, 예를 들어 하나 이상의 작용기(들)를 포함할 수 있음이 이해된다. 마찬가지로, 개별 아미노산 잔기의 측쇄가 상이할 수 있음에도 불구하고, 펩타이드 또는 단백질도 역시 중합체인 것으로 이해된다. 바람직하게는, 가용성 중합체는 적어도 0.5 kDa의 분자량, 예를 들어 적어도 1 kDa의 분자량, 적어도 2 kDa의 분자량, 적어도 3 kDa의 분자량 또는 적어도 5 kDa의 분자량을 갖는다. 중합체가 가용성인 경우, 중합체는 바람직하게는 최대 1000 kDa, 예를 들어 최대 750 kDa, 예를 들어 최대 500 kDa, 예를 들어 최대 300 kDa, 예를 들어 최대 200 kDa, 예를 들어 최대 100 kDa의 분자량을 갖는다. 하이드로겔과 같은 불용성 중합체의 경우, 의미있는 분자량 범위가 제공될 수 없음이 이해된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "중합체"는 하나 이상의 중합체(들) 또는 중합체 모이어티/모이어티들을 포함하는 시약 또는 모이어티를 의미한다. 중합체 시약 또는 모이어티는 또한 하나 이상의 다른 모이어티/모이어티들을 선택적으로 포함할 수 있으며, 이것은 바람직하게는 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택된다:
- C1-50 알킬, C2-50 알케닐, C2-50 알키닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 및 테트라리닐;
- 다음을 포함하는 군으로부터 선택되는 결합
Figure pct00012
여기서, 점선은 모이어티 또는 시약의 나머지에 대한 부착을 나타내고, -R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
관련 기술 분야의 통상의 기술자는 중합 반응으로부터 수득된 중합 생성물이 모두 동일한 분자량을 갖는 것이 아니라, 오히려 분자량 분포를 나타낸다는 것을 이해한다. 따라서, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 분자량 범위, 분자량, 중합체 내의 단량체 수의 범위 및 중합체 내의 단량체의 수는 단량체의 수 평균 분자량 및 수 평균, 즉 중합체 또는 중합체 모이어티의 분자량의 산술 평균 및 중합체 또는 중합체 모이어티의 단량체 수의 산술 평균을 지칭한다.
따라서, "x" 단량체 단위를 포함하는 중합체 모이어티에서, "x"에 대해 주어진 임의의 정수는 따라서 단량체의 산술 평균 수에 대응한다. "x"에 대해 주어진 임의의 정수 범위는 단량체의 산술 평균 수가 있는 정수의 범위를 제공한다. "약 x"로서 주어진 "x"에 대한 정수는 단량체의 산술 평균 수가 x +/- 25%, 바람직하게는 x +/- 20%, 보다 바람직하게는 x +/- 10%의 정수 범위에 있음을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "수 평균 분자량"은 개별 중합체의 분자량의 일반적인 산술 평균을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 모이어티 또는 시약과 관련하여 용어 "PEG 기반"은 상기 모이어티 또는 시약이 PEG를 포함함을 의미한다. 바람직하게는, PEG 기반 모이어티 또는 시약은 적어도 10%(w/w) PEG, 예를 들어 적어도 20%(w/w) PEG, 예를 들어 적어도 30%(w/w) PEG, 예를 들어 적어도 40%(w/w) PEG, 예를 들어 적어도 50%(w/w), 예를 들어 적어도 60(w/w) PEG, 예를 들어 적어도 70%(w/w) PEG, 예를 들어 적어도 80%(w/w) PEG, 예를 들어 적어도 90%(w/w) PEG, 예를 들어 적어도 95%(w/w) PEG를 포함한다. PEG 기반 모이어티 또는 시약의 나머지 중량 백분율은 바람직하게는 다음 모이어티 및 결합으로부터 선택되는 다른 모이어티이다:
- C1-50 알킬, C2-50 알케닐, C2-50 알키닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 및 테트라리닐; 및
- 다음을 포함하는 군으로부터 선택되는 결합
Figure pct00013
여기서, 점선은 모이어티 또는 시약의 나머지에 대한 부착을 나타내고, -R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
용어 "히알루론산 기반"은 상기 설명된 바와 동일한 방식으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 모이어티 또는 시약과 관련하여 용어 "적어도 X% PEG를 포함하는 PEG 기반"은 상기 모이어티 또는 시약이 적어도 X%(w/w) 에틸렌 글리콜 단위(-CH2CH2O-)를 포함함을 의미하고, 여기서, 에틸렌 글리콜 단위는 블록 방식으로, 또는 교대로 배열될 수 있거나, 또는 모이어티 또는 시약 내에 무작위로 분포될 수 있으며, 바람직하게는 상기 모이어티 또는 시약의 모든 에틸렌 글리콜 단위는 하나의 블록에 존재하고; PEG 기반 모이어티 또는 시약의 나머지 중량 백분율은 바람직하게는 다음 모이어티 및 결합으로부터 선택되는 다른 모이어티이다:
- C1-50 알킬, C2-50 알케닐, C2-50 알키닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 및 테트라리닐; 및
- 다음을 포함하는 군으로부터 선택되는 결합
Figure pct00014
여기서, 점선은 모이어티 또는 시약의 나머지에 대한 부착을 나타내고, -R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
용어 "적어도 X% 히알루론산을 포함하는 히알루론산 기반"은 상기 설명된 바와 동일한 방식으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "하이드로겔"은 소수성 상호작용, 수소 결합, 이온 상호작용 및/또는 공유 화학적 가교결합의 존재로 인해 불용성인 단독중합체 또는 공중합체로 이루어진 친수성 또는 양친매성 중합체 네트워크를 의미한다. 가교결합은 네트워크 구조 및 물리적 통합성을 제공한다.
용어 "개재(중단)된"은 모이어티가 2개의 탄소 원자 사이에 삽입되거나 또는 삽입이 모이어티의 말단 중 하나의 말단에 있는 경우에는 탄소 또는 헤테로 원자와 수소 원자 사이, 바람직하게는 탄소와 수소 원자 사이에 삽입됨을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C1-4 알킬"은 단독으로 또는 조합되어 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하는 경우, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4 알킬의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 t-부틸이다. 분자의 두 모이어티가 C1-4 알킬에 의해 연결되어 있는 경우, 상기 C1-4 알킬기의 예는 -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)-, -C(CH3)2-이다. C1-4 알킬 탄소의 각각의 수소는 선택적으로 상기 정의된 치환체로 대체될 수 있다. 선택적으로, C1-4 알킬은 아래에서 정의되는 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C1-6 알킬"은 단독으로 또는 조합되어 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하는 경우, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6 알킬의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필이다. 분자의 두 모이어티가 C1-6 알킬에 의해 연결되어 있는 경우, 상기 C1-6 알킬기의 예는 -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)-, 및 -C(CH3)2-이다. C1-6 알킬 탄소의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 치환체로 대체될 수 있다. 선택적으로, C1-6 알킬은 아래에서 정의되는 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
따라서, "C1-10 알킬", "C1-20 알킬" 또는 "C1-50 알킬"은 각각 1 내지 10개, 1 내지 20개 또는 1 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 알킬을 의미하고, 여기서 C1-10, C1-20 또는 C1-50 탄소의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 치환체로 대체될 수 있다. 선택적으로, C1-10 또는 C1-50 알킬은 아래에서 정의되는 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C2-6 알케닐"은 단독으로 또는 조합되어 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하는 경우, 그 예는 -CH=CH2, -CH=CH-CH3, -CH2-CH=CH2, -CH=CHCH2-CH3 및 -CH=CH-CH=CH2이다. 분자의 두 모이어티가 C2-6 알케닐 기에 의해 연결되는 경우, 상기 C2-6 알케닐의 예는 -CH=CH-이다. C2-6 알케닐 모이어티의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 치환체로 대체될 수 있다. 선택적으로, C2-6 알케닐은 아래에서 정의되는 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
따라서, 용어 "C2-10 알케닐", "C2-20 알케닐" 또는 "C2-50 알케닐"은 단독으로 또는 조합되어 2 내지 10개, 2 내지 20개 또는 2 내지 50개의 탄소 원자를 갖는, 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 모이어티를 의미한다. C2-10 알케닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알케닐 기의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 치환체로 대체될 수 있다. 선택적으로, C2-10 알케닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알케닐은 아래에서 정의되는 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C2-6 알키닐"은 단독으로 또는 조합되어 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하는 경우, 그 예는 -C≡CH, -CH2-C≡CH, -CH2-CH2-C≡CH 및 -CH2-C≡C-CH3이다. 분자의 두 모이어티가 알키닐 기에 의해 연결되는 경우, 그 예는 -C≡C-이다. C2-6 알키닐 기의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 치환체로 대체될 수 있다. 선택적으로, 하나 이상의 이중 결합(들)이 발생할 수 있다. 선택적으로, C2-6 알키닐은 아래에서 정의되는 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
따라서, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C2-10 알키닐", "C2-20 알키닐" 또는 "C2-50 알키닐"은 단독으로 또는 조합되어 각각 2 내지 10개, 2 내지 20개 또는 2 내지 50개의 탄소 원자를 갖는, 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 모이어티를 의미한다. C2-10 알키닐, C2-20 알키닐 또는 C2-50 알키닐 기의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 치환체로 대체될 수 있다. 선택적으로, 하나 이상의 이중 결합(들)이 발생할 수 있다. 선택적으로, C2-10 알키닐, C2-20 알키닐 또는 C2-50 알키닐은 아래에서 정의되는 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, C1-4 알킬, C1-6 알킬, C1-10 알킬, C1-20 알킬, C1-50 알킬, C2-6 알케닐, C2-10 알케닐, C2-20 알케닐, C2-50 알케닐, C2-6 알키닐, C2-10 알키닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알키닐은 선택적으로 바람직하게는 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다:
Figure pct00015
여기서, 점선은 모이어티 또는 시약의 나머지에 대한 부착을 나타내고, -R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 및 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C3-10 사이클로알킬"은 포화 또는 불포화일 수 있는, 3 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 시클릭 알킬 사슬, 예를 들면 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로노닐 또는 사이클로데실을 의미한다. C3-10 사이클로알킬 탄소기의 각각의 수소 원자는 선택적으로 상기 정의된 치환체로 대체될 수 있다. 용어 "C3-10 사이클로알킬"은 노르보르난 또는 노르보르넨처럼 가교된 비사이클을 포함한다.
용어 "8 내지 30원 카르보폴리사이클릴" 또는 "8 내지 30원 카르보폴리사이클"은 최대 수 이하의 이중 결합(완전 포화, 부분 포화 또는 불포화인 방향족 또는 비방향족 고리)을 포함할 수 있는, 8 내지 30개의 고리 원자를 갖는 2개 이상의 고리의 고리 모이어티를 의미하며, 여기서 2개의 인접한 고리는 적어도 하나의 고리 원자를 공유한다. 바람직하게는, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴은 2개, 3개, 4개 또는 5개의 고리, 보다 바람직하게는 2개, 3개 또는 4개의 고리의 시클릭 모이어티를 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "3 내지 10원 헤테로사이클릴"또는 "3 내지 10원 헤테로사이클"은 최대 수 이하의 이중 결합(완전 포화, 부분 포화 또는 불포화인 방향족 또는 비방향족 고리)을 함유할 수 있는, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는 고리를 의미하고, 여기서, 적어도 하나 내지 최대 4개의 고리 원자는 황(-S(O)-, -S(O)2- 포함), 산소 및 질소(= N(O)- 포함)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로원자로 대체되고, 고리는 탄소 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다. 3 내지 10원 헤테로사이클의 예는 다음을 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다: 아지리딘, 옥시란, 티이란, 아지린, 옥시렌, 티이렌, 아제티딘, 옥세탄, 티에탄, 푸란, 티오펜, 피롤, 피롤린, 이미다졸, 이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 옥사졸, 옥사졸린, 이속사졸, 이속사졸린, 티아졸, 티아졸린, 이소티아졸, 이소티아졸린, 티아디아졸, 티아디아졸린, 테트라하이드로푸란, 테트라하이드로티오펜, 피롤리딘, 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 옥사졸리딘, 이속사졸리딘, 티아졸리딘, 이소티아졸리딘, 티아디아졸리딘, 설폴란, 피란, 디하이드로피란, 테트라하이드로피란, 이미다졸리딘, 피리딘, 피리다진, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 피페리딘, 모르폴린, 테트라졸, 트리아졸, 트리아졸리딘, 테트라졸리딘, 디아제판, 아제핀 및 호모피페라진. 3 내지 10원 헤테로사이클릴 또는 3 내지 10원 헤테로시클릭 기의 각각의 수소 원자는 아래에서 정의되는 치환체로 대체될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "8 내지 11원 헤테로비사이클릴" 또는 "8 내지 11원 헤테로비사이클"은 최대 수 이하의 이중 결합(완전 포화, 부분 포화 또는 불포화인 방향족 또는 비방향족 고리)을 함유할 수 있는, 8 내지 11개의 고리 원자를 갖는 2개의 고리의 헤테로시클릭 모이어티를 의미하며, 여기서 적어도 하나의 고리 원자는 두 고리 모두에 의해 공유되며, 적어도 하나의 고리 원자 내지 최대 6개의 고리 원자는 황(-S(O)-, -S(O)2- 포함), 산소 및 질소(= N(O)- 포함)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로원자로 대체되고, 고리는 탄소 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다. 8 내지 11원 헤테로비사이클의 예는 인돌, 인돌린, 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤즈옥사졸, 벤즈이속사졸, 벤조티아졸, 벤즈이소티아졸, 벤즈이미다졸, 벤즈이미다졸린, 퀴놀린, 퀴나졸린, 디하이드로퀴나졸린, 퀴놀린, 디하이드로퀴놀린, 테트라하이드로퀴놀린, 데카하이드로퀴놀린, 이소퀴놀린, 데카하이드로이소퀴놀린, 테트라하이드로이소퀴놀린, 디하이드로이소퀴놀린, 벤즈아제핀, 퓨린 및 프테리딘이다. 용어 8 내지 11원 헤테로비사이클은 또한 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데칸가 같은 2개의 고리의 스피로 구조 또는 8-아자-비사이클로[3.2.1]옥탄과 같은 가교된 헤테로사이클을 포함한다. 8 내지 11원 헤테로비사이클릴 또는 8 내지 11원 헤테로비사이클 탄소의 각각의 수소 원자는 아래에서 정의되는 치환체로 대체될 수 있다.
이와 유사하게, 용어 "8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴" 또는 "8 내지 30원 헤테로폴리사이클"은 최대 수 이하의 이중 결합(완전 포화, 부분 포화 또는 불포화인 방향족 또는 비방향족 고리)을 함유할 수 있는, 8 내지 30개의 고리 원자, 바람직하게는 3, 4 또는 5개의 고리를 갖는 2개 초과의 고리의 헤테로시클릭 모이어티를 의미하며, 여기서 2개의 인접한 고리는 적어도 하나의 고리 원자를 공유하며, 적어도 하나의 고리 원자 내지 최대 10개의 고리 원자는 황(-S(O)-, -S(O)2- 포함), 산소 및 질소(= N(O)- 포함)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로원자로 대체되고, 고리는 탄소 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다.
구조
Figure pct00016
의 모이어티와 관련하여 "쌍 Rx/Ry는 이들이 부착되는 원자와 함께 연결되어 C3-10 사이클로알킬 또는 3 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성한다"는 구절은 Rx 및 Ry가 다음 구조를 형성함을 의미하는 것으로 이해된다:
Figure pct00017
여기서, R은 C3-10 사이클로알킬 또는 3 내지 10원 헤테로사이클릴이다.
또한, 구조
Figure pct00018
의 모이어티와 관련하여 "쌍 Rx/Ry는 이들이 부착되는 원자와 함께 연결되어 고리 A를 형성한다"는 구절은 Rx 및 Ry가 다음 구조를 형성함을 의미하는 것으로 이해된다:
Figure pct00019
.
본 명세서에서 사용되는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 아이오도를 의미한다. 할로겐은 일반적으로 플루오로 또는 클로로인 것이 바람직하다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "작용기"는 다른 군의 원자와 반응할 수 있는 일군의 원자를 의미한다. 예시적인 작용기는 예를 들어 카르복실산(-(C=O)OH), 1차 또는 2차 아민(-NH2, -NH-), 말레이미드, 티올(-SH), 설폰산(-(O=S=O)OH), 카르보네이트, 카르바메이트(-O(C=O)N<), 하이드록실(-OH), 알데하이드(-(C=O)H), 케톤(-(C=O)-), 히드라진(>N-N<), 이소시아네이트, 이소티오시아네이트, 인산(-O(P=O)OHOH), 포스폰산(-O(P=O)OHH), 할로아세틸, 알킬 할라이드, 아크릴로일, 아릴 플루오라이드, 하이드록실아민, 디설파이드, 설폰아마이드, 황산, 비닐 설폰, 비닐 케톤, 디아조알칸, 옥시란 및 아지리딘이다.
본 발명의 IL-2 접합체가 하나 이상의 산성 또는 염기성 기를 포함하는 경우, 본 발명은 또한 이들의 상응하는 약학적으로 또는 독성학적으로 허용되는 염, 특히 이들의 약학적으로 이용 가능한 염을 포함한다. 따라서, 산성 기를 포함하는 본 발명의 IL-2 접합체는 본 발명에 따라, 예를 들어 알칼리 금속 염, 알칼리 토금속 염 또는 암모늄 염으로서 사용될 수 있다. 이러한 염의 보다 정확한 예는 나트륨 염, 칼륨 염, 칼슘 염, 마그네슘 염 또는 암모니아 또는 유기 아민, 예를 들어 에틸 아민, 에탄올아민, 트리에탄올 아민 또는 아미노산과의 염을 포함한다. 하나 이상의 염기성 기, 즉 양성자화될 수 있는 기를 포함하는 본 발명의 IL-2 접합체가 존재할 수 있고, 무기 또는 유기 산과의 부가 염의 형태로 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 적합한 산의 예는 염화수소, 브롬화수소, 인산, 황산, 질산, 메탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌디설폰산, 옥살산, 아세트산, 타르타르산, 락트산, 살리실산, 벤조산, 포름산, 프로피온산, 피발산, 디에틸아세트산, 말론산, 숙신산, 피멜산, 푸마르산, 말레산, 말산, 설파민산, 페닐프로피온산, 글루콘산, 아스코르브산, 이소니코틴산, 시트르산, 아디프산, 및 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 알려진 다른 산을 포함한다. 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게, 아민기의 알킬화와 같이 염기성 기를 양이온으로 전환하여 양하전 암모늄기 및 염의 적절한 반대 이온을 생성하는 추가의 방법이 알려져 있다. 본 발명의 IL-2 접합체가 산성 및 염기성 기를 동시에 포함하는 경우, 본 발명은 또한 언급된 염 형태에 추가로, 내부 염 또는 베타인(쌍성 이온)을 포함한다. 각각의 염은 예를 들어 용매 또는 분산제에서 이들 프로드러그를 유기 또는 무기 산 또는 염기와 접촉시키거나, 또는 다른 염과의 음이온 교환 또는 양이온 교환에 의해 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 방법에 의해 수득될 수 있다. 본 발명은 또한 낮은 생리적 상용성으로 인해 제약에 사용하기에 직접적으로 적합하지 않지만, 예를 들어 화학 반응을 위한 중간체로서 또는 약학적으로 허용되는 염의 제조를 위한 중간체로서 사용될 수 있는 본 발명의 IL-2 접합체의 모든 염을 포함한다.
용어 "약학적으로 허용되는"은 환자에게 투여될 때 해를 끼치지 않는 물질을 의미하며, 바람직하게는 동물에게 사용하기 위한, 바람직하게는 인간에게 사용하기 위해 EMA(유럽) 및/또는 FDA(미국) 및/또는 기타 국가의 규제 기관과 같은 규제 기관에 의해 승인된 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "부형제"는 치료제, 예컨대, 약물 또는 프로드러그와 함께 투여되는 희석제, 보조제 또는 비히클을 지칭한다. 이러한 약학적 부형제는 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 석유, 동물, 식물 또는 합성 유래의 것을 포함하는 멸균 액체, 예컨대, 물 및 오일일 수 있다. 약학 조성물이 경구 투여될 때, 물이 바람직한 부형제이다. 약학 조성물이 정맥내로 투여될 때, 염수 및 수성 덱스트로스가 바람직한 부형제이다. 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액은 바람직하게는 주사 가능한 용액을 위한 액체 부형제로서 사용된다. 적합한 약학적 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조된 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 원하는 경우, 약학 조성물은 또한 소량의 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 등, 예를 들면, 아세테이트, 석시네이트, 트리스, 카르보네이트, 포스페이트, HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산), MES(2-(N-모르폴리노)에탄설폰산)도 함유할 수 있거나, 또는 세제, 예컨대, 트윈(Tween), 폴록사머, 폴록사민, CHAPS, 이게팔(Igepal), 또는 아미노산, 예를 들면, 글리신, 라이신 또는 히스티딘을 함유할 수 있다. 이들 약학 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐, 산제, 지속 방출 제제 등의 형태를 취할 수 있다. 약학 조성물은 전통적인 결합제 및 부형제, 예컨대, 트리글리세라이드와 함께 좌제로서 제제화될 수 있다. 경구 제제는 표준 부형제, 예컨대, 약학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 환자에게 적절히 투여될 형태를 제공하도록 적합한 양의 부형제와 함께 치료 유효량의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 함유할 것이다. 제제는 투여 방식에 적합해야 한다.
일반적으로, 용어 "포함하다"또는 "포함하는"은 또한 "이루어지다" 또는 "이루어지는"을 포함한다.
비편향된 IL-2 대 비알데스류킨의 비는 1보다 크고, 바람직하게는 2보다 크고, 바람직하게는 3보다 크고, 바람직하게는 4보다 크고, 훨씬 더 바람직하게는 5보다 크다. 특정 실시양태에서, 비편향된 IL-2 대 비알데스류킨의 비는 10보다 크거나, 20보다 크거나, 50보다 크거나, 70보다 크거나, 100보다 크거나 또는 150보다 크다.
편향된 IL-2 모이어티 -D는 다음을 포함하는 IL-2 모이어티, 바람직하게는 알데스류킨이다:
(a) 동일하거나 상이할 수 있는, 변형 모이어티 Mmod의 적어도 하나의 안정한 부착; 또는
(b) 적어도 하나의 아미노산 돌연변이; 또는
(c) 적어도 하나의 결실; 또는
(a), (b) 및 (c)의 임의의 조합.
(a), (b) 및 (c) 하에서 나열된 변형 중 적어도 하나는 -D에 존재하고, 비편향된 IL-2가 편향된 IL-2 모이어티에서 비알데스류킨보다 더 큼을 보장한다. 그러나, IL-2 모이어티는 또한 별개로 보았을 때 비편향된 IL-2가 비알데스류킨보다 더 큼을 보장하지 않는 (a), (b) 및 (c)에 나열된 변형 중 하나 이상을 포함할 수 있음이 이해된다. 이러한 추가의 변형은 예를 들어 -D의 개선된 생산 또는 저장 특성을 제공할 수 있다.
한 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티에 대한 변형 모이어티 Mmod의 적어도 하나의 안정한 부착을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티에 적어도 하나의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티에 적어도 하나의 결실을 포함한다. 다른 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티에 대한 변형 모이어티 Mmod의 적어도 하나의 안정한 부착 및 IL-2 모이어티에 적어도 하나의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티에 대한 변형 모이어티 Mmod의 적어도 하나의 안정한 부착 및 IL-2 모이어티에 적어도 하나의 결실을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티에 적어도 하나의 아미노산 돌연변이 및 적어도 하나의 결실을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티에 대한 변형 모이어티 Mmod의 적어도 하나의 안정한 부착, IL-2 모이어티에 적어도 하나의 아미노산 돌연변이 및 적어도 하나의 결실을 포함한다.
편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티에 대한 변형 모이어티 Mmod의 적어도 하나의 안정한 부착을 포함할 수 있다. Mmod의 부착은 N-말단, C-말단, 아미노산 측쇄 또는 IL-2 모이어티의 내부 부위에서 이루어질 수 있다. 이러한 모이어티 Mmod는 바람직하게는 치환체 또는 중합체 모이어티일 수 있다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 N-말단에서 이루어질 수 있다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 C-말단에서 이루어질 수 있다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 아미노산 측쇄에서 이루어질 수 있다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 내부 부위에서 이루어질 수 있다. 하나 초과의 모이어티 Mmod가 IL-2 모이어티에 부착되는 경우, 부착은 N-말단, C-말단, 아미노산 잔기의 측쇄 및 내부 부위로 이루어지는 군으로부터 선택되는 부착 부위의 임의의 조합에서 이루어질 수 있다.
한 실시양태에서, Mmod는 치환체이다. 바람직하게는, 이러한 치환체는 15 Da 내지 1 kDa 범위의 분자량을 갖는다.
이러한 모이어티 Mmod는 한 실시양태에서 디설파이드 가교 형태로 도입될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 디설파이드 가교는 2개의 시스테인 잔기의 티올기 사이에 형성된다. 이러한 디설파이드 가교는 내부 부위에서의 변형 모이어티의 부착에 대한 한 가지 예이다. 한 실시양태에서, 이러한 시스테인 잔기는 자연 발생 시스테인 잔기일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 시스테인 잔기 중 하나 또는 둘 모두는 자연적으로 발생하지 않지만, IL-2 모이어티, 바람직하게는 서열 번호 2의 IL-2 모이어티에 첨가 또는 삽입되거나, IL-2 모이어티, 바람직하게는 서열 번호 2의 IL-2 모이어티의 자연 발생 아미노산 잔기로 대체되었다.
이러한 디설파이드 가교를 얻는 바람직한 방법은 문헌 [Jones et al. (J. Am. Chem. Soc., 2012, 134 (3), pp 1847-1852)], WO2011/018611, WO2011/018612 및 WO2011/018613에 개시되어 있다.
바람직하게는, 이러한 디설파이드 가교는 IL-2Rα에 대한 결합과 관련된 위치에서 발생한다. 따라서, 바람직하게는, 디설파이드 가교는 알데스류킨에 비해 IL-2Rαβ에 대한 편향된 IL-2 모이어티의 친화성을 감소시킨다.
한 실시양태에서, IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 서열을 갖는 경우, 디설파이드 가교는 C57과 C104 사이에 형성된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod는 중합체 모이어티이다. 이러한 중합체 모이어티는 선형, 분지형 또는 다중 아암 중합체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 중합체는 선형 중합체이다. 또 다른 실시양태에서, 중합체는 분지형 중합체이다. 이러한 분지형 중합체는 바람직하게는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 분지점을 갖는다. 각각의 분기점으로부터, 바람직하게는 2, 3 또는 4개의 중합체 아암이 연장된다. 또 다른 실시양태에서, 중합체는 다중 아암 중합체이다. 이러한 다중 아암 중합체는 바람직하게는 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 중합체 아암을 갖는다.
Mmod가 중합체 모이어티인 경우, 상기 중합체 모이어티는 바람직하게는 0.5 kDa 내지 1000 kDa, 예를 들어 1 kDa 내지 1000 kDa, 보다 바람직하게는 2 kDa 내지 500 kDa, 훨씬 더 바람직하게는 3 kDa 내지 200 kDa, 가장 바람직하게는 5 kDa 내지 120 kDa의 분자량을 갖거나 또는 7 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 0.5 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 1 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 2 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 3 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 4 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 5 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 7.5 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 10 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 15 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 20 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 30 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 40 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 50 kDa의 분자량을 갖는다. 약 또 다른 실시양태에서 이러한 중합체 모이어티는 약 70 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 80 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 90 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 100 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 0.5 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 1 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 2 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 3 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 4 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 5 kDa의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 7.5 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 10 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 15 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 20 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 30 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 40 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 50 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 70 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 80 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 90 kDa의 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 100 kDa의 분자량을 갖는다.
Mmod가 중합체 모이어티인 경우, 이러한 중합체 모이어티는 바람직하게는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포일 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아마이드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아마이드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(아스파르트아마이드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아마이드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸-옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필메타크릴아마이드), 폴리(하이드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락트-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아마이드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(유기포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로스, 카르보메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 기능화된 히알루론산, 알기네이트, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분 및 기타 탄수화물 기반 중합체, 자일란 및 이들의 공중합체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중합체를 포함한다.
한 실시양태에서, Mmod는 PEG 기반 중합체이다.
또 다른 실시양태에서, Mmod는 히알루론산 기반 중합체이다.
또 다른 실시양태에서, Mmod는 펩타이드 또는 단백질 부분을 포함한다. 한 실시양태에서, 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod는 편향된 IL-2에 포함된 IL-2 모이어티와의 번역 융합체일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod는 편향된 IL-2에 포함된 IL-2 모이어티에 화학적으로 접합될 수 있다. 바람직하게는, 상기 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod는 IL-2 또는 IL-2- 모이어티의 단편이 아니다.
펩타이드 또는 단백질 모이어티 형태의 Mmod는 합성 또는 천연 단백질 모이어티 또는 이의 일부 또는 변이체일 수 있다. 예시적인 비-IL-2 모이어티는 알부민; 항체 도메인, 예를 들어 면역글로불린의 Pc 도메인 또는 항원 결합 도메인; CTP 및 CD25를 포함하고, 이들은 각각 자연 발생 형태로 또는 이의 변이체 또는 단편으로 존재한다.
IL-2 모이어티에 융합된 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod는 N-말단 또는 C-말단에 부착될 수 있거나, 또는 IL-2 모이어티의 내부 위치에 삽입될 수 있다. 하나 초과의 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod는 IL-2 모이어티에 번역에 의해 융합되거나 화학적으로 접합되고/되거나 상기 모이어티 내에 삽입될 수 있음이 이해된다. 상기 하나 초과의 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod는 동일하거나 상이한 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단에 번역에 의해 융합되거나 화학적으로 접합된 제1 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod 및 IL-2 모이어티의 C-말단에 번역에 의해 융합되거나 화학적으로 접합된 제2 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod를 가질 수 있다. 또 다른 예에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단에 번역에 의해 융합되거나 화학적으로 접합된 제1 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod 및 IL-2 모이어티의 내부 위치에 번역에 의해 삽입되거나 화학적으로 접합된 제2 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod를 가질 수 있다. 또 다른 예에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티의 C-말단에 번역에 의해 융합되거나 화학적으로 접합된 제1 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod 및 IL-2 모이어티의 내부 위치에 번역에 의해 삽입되거나 화학적으로 접합된 제2 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod를 가질 수 있다. 추가의 또 다른 예에서, 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단에 번역에 의해 융합되거나 화학적으로 접합된 제1 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod, IL-2 모이어티의 C-말단에 번역에 의해 융합되거나 화학적으로 접합된 제2 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod 및 IL-2 모이어티의 내부 위치에 번역에 의해 삽입되거나 화학적으로 접합된 제3 펩타이드 또는 단백질 모이어티 Mmod를 가질 수 있다.
Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 단백질 생성 또는 비-단백질 생성 아미노산 잔기에서 이루어질 수 있다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 단백질 생성 아미노산에서 이루어진다. 이러한 단백질 생성 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인, 메티오닌, 히스티딘, 라이신, 트립토판, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 비-단백질 생성 아미노산에서 이루어진다. 변형 모이어티가 비-단백질 생성 아미노산 잔기에 부착되는 경우, 이러한 비-단백질 생성 아미노산 잔기는 IL-2 모이어티 내에 인위적으로 도입되는 것으로 이해된다. 이러한 비-단백질 생성 아미노산 잔기는 Mmod를 IL-2 모이어티에 접합하기 위해 이용 가능한 작용기를 갖는 임의의 비-단백질 생성 아미노산 잔기일 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 비-단백질 생성 아미노산은 카르보닐; 카르보닐 유도체, 예를 들어 카르보닐 유사, 마킹된(marked) 카르보닐 및 보호된 카르보닐기; 아지드; 옥심; 및 하이드록실아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 작용기를 이의 측쇄에 포함한다.
특정 실시양태에서, 이러한 비-단백질 생성 아미노산은 WO2006/069246A2에 기재된 바와 같은 비-단백질 생성 아미노산이고, 상기 비-단백질 생성 아미노산은 본 명세서에 참고로 포함된다. 특정 실시양태에서, 비-단백질 생성 아미노산은 WO2006/069246A2의 [00265] 내지 [00283]의 화학식 (I), [00284]의 화학식 (XXX), [00285]의 화학식 (XXX-A), [00286]의 화학식 (XXX-B), [00287]의 화학식 (XXXI), [00288]의 화학식 (XXXI-A), [00289]의 화학식 (XXXI-B), [00290]의 화학식 (XXXII), [00291]의 화학식 (XXXII-A), [00292]에서 화학식 (XXXII-B), [00293]의 화학식 (XXXX), [00294]의 화학식 (XXXXI), 잘못 표지된 단락 [0100], 즉 [00294]와 [00295] 사이의 단락의 화학식 (XXXXII), [00295] 및 [00296]의 화학식 (XXXXIII), [00302] 내지 [00305]의 화학식 (XIV), [00306] 및 [00307]의 화학식 (XV), [00310] 내지 [00312]의 화학식 (XI), [00313]의 화학식 (XII), [00314] 및 [00315]의 화학식 (XII), [00316]의 화학식 (XIV), [00317]의 화학식 (XVI), [00318] 및 [00319]의 화학식 (XVI), [00320] 및 [00321]의 화학식 (XVIII), 또는 [00530]의 화학식 (XXIX)에 제시된 바와 같은 구조를 갖고, 상기 비-단백질 생성 아미노산은 본 명세서에 참조로 포함된다.
한 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 라이신 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 K7, K8, K31, K34, K42, K47, K48, K53, K63, K75 및 K96으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 라이신 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 라이신 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 라이신 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 라이신 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11개의 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 라이신 잔기를 포함하는 경우, 11개 초과의 라이신 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 서열 번호 2의 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 라이신 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 라이신 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 라이신 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 라이신 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 4개의 라이신 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 5개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 5개의 라이신 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 6개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 6개의 라이신 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 트레오닌 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 T2, T6, T9, T36, T40, T50, T100, T101, T110, T112, T122, T130 및 T132로 이루어지는 군으로부터 선택되는 트레오닌 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 트레오닌 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 트레오닌 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 트레오닌 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 트레오닌 잔기를 포함하는 경우, 13개 초과의 트레오닌 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 트레오닌 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 트레오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 트레오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 트레오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 4개의 트레오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 5개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 5개의 트레오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 6개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 6개의 트레오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 세린 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 S3, S4, S5, S74, S86, S98, S124, S126 및 S129로 이루어지는 군으로부터 선택되는 세린 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 세린 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 세린 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 세린 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 세린 잔기를 포함하는 경우, 9개 초과의 세린 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 세린 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 세린 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 세린 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 세린 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 4개의 세린 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 5개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 5개의 세린 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 6개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 6개의 세린 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 티로신 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 Y30, Y44 및 Y106으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 티로신 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 티로신 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 티로신 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 1, 2 또는 3개의 티로신 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 티로신 잔기를 포함하는 경우, 3개 초과의 티로신 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 티로신 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 티로신 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 티로신 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 티로신 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 히스티딘 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 H15, H54 및 H78로 이루어지는 군으로부터 선택되는 히스티딘 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 히스티딘 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 히스티딘 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 1, 2 또는 3개의 히스티딘 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 히스티딘 잔기를 포함하는 경우, 3개 초과의 히스티딘 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 히스티딘 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 히스티딘 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 히스티딘 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 히스티딘 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 트립토판 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 위치 W120의 트립토판 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 트립토판 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 트립토판 잔기에서 이루어질 수 있다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 트립토판 잔기를 포함하는 경우, 1개 초과의 트립토판 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 트립토판 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 트립토판 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 아스파르트산 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 D19, D83 및 D108로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아스파르트산 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 아스파르트산 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 아스파르트산 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 1, 2 또는 3개의 아스파르트산 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 아스파르트산 잔기를 포함하는 경우, 3개 초과의 아스파르트산 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 아스파르트산 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 아스파르트산 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 아스파르트산 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 아스파르트산 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
한 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 글루탐산 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 E14, E51, E59, E60, E61, E66, E67, E94, E99, E105, E109 및 E115로 이루어지는 군으로부터 선택되는 글루탐산 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 글루탐산 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 글루탐산 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 글루탐산 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 글루탐산 잔기를 포함하는 경우, 12개 초과의 글루탐산 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 서열 번호 2의 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 글루탐산 잔기가 하나 이상의 변형 모이어티의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 글루탐산 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 글루탐산 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 글루탐산 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 4개의 글루탐산 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 5개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 5개의 글루탐산 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 6개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 6개의 글루탐산 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 아르기닌 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 R37, R80, R82 및 R119로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아르기닌 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 아르기닌 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 아르기닌 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 1, 2, 3 또는 4개의 아르기닌 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 아르기닌 잔기를 포함하는 경우, 4개 초과의 아르기닌 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 아르기닌 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 아르기닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 아르기닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 아르기닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 4개의 아르기닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 시스테인 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 C57 및 C104로 이루어지는 군으로부터 선택되는 시스테인 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 시스테인 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 시스테인 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 1 또는 2개의 시스테인 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 시스테인 잔기를 포함하는 경우, 2개 초과의 시스테인 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 시스테인 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 시스테인 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 시스테인 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 메티오닌 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 M22, M38, M45 및 M103으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 메티오닌 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 메티오닌 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 메티오닌 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 1, 2, 3 또는 4개의 메티오닌 잔기가 하나 이상의 변형 모이어티의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 메티오닌 잔기를 포함하는 경우, 4개 초과의 메티오닌 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 메티오닌 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 메티오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 메티오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 메티오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 4개의 메티오닌 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 글루타민 잔기에서, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 Q10, Q12, Q21, Q56, Q73 및 Q125로 이루어지는 군으로부터 선택되는 글루타민 잔기에서 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2에 비해 하나 이상의 추가의 글루타민 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 이러한 추가의 글루타민 잔기에서 이루어질 수 있다. 서열 번호 2의 글루타민 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 많은 글루타민 잔기를 포함하는 경우, 6개 초과의 글루타민 잔기가 Mmod의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 글루타민 잔기가 Mmod의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 하나의 글루타민 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 2개의 글루타민 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 3개의 글루타민 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 4개의 글루타민 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 5개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 5개의 글루타민 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 동일하거나 상이할 수 있는 6개의 모이어티 Mmod는 서열 번호 2의 6개의 글루타민 잔기 또는 이의 상동체 또는 변이체에 부착된다.
특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 하나 초과의 유형의 아미노산 잔기에, 예를 들어 시스테인 및 리신에 부착된 모이어티 Mmod를 가질 수 있음이 이해된다.
IL-2 모이어티에 대한 Mmod의 부착은 안정적인 공유 결합을 통해 이루어진다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티와 모이어티 Mmod 사이의 결합은 아마이드를 통해 이루어진다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티와 모이어티 Mmod 사이의 결합은 다음 모이어티를 통해 이루어진다.
Figure pct00020
바람직하게는, 적어도 하나의 모이어티 Mmod의 부착은 IL-2Rα에 대한 결합에 관여하는 것으로 알려진 IL-2 모이어티의 아미노산 위치에서 이루어진다. 따라서, 바람직하게는, 적어도 하나의 모이어티 Mmod의 부착은 알데스류킨과 비교하여 IL-2Rαβ에 대한 IL-2 모이어티, 바람직하게는 서열 번호 2의 IL-2 모이어티의 변이체의 실질적으로 감소된 친화성을 초래하고, 즉 편향된 IL-2 모이어티를 생성한다.
바람직하게는, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 K34, R37, M38, T40, F41, K42, F43, Y44, E61 및 L71로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 위치에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 훨씬 더 바람직하게는, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 F41, Y44, E61 및 L71로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 위치에서 또는 이의 상동체 및 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 이들 아미노산 위치의 모든 위치가 Mmod의 직접 결합을 허용할 수 있는 작용기를 포함하는 것은 아니고, 예를 들어 자연 발생 아미노산을 상이한 아미노산으로 대체하거나 특정 화학적 변형을 수행하는 것과 같은 특정 단계가 상기 아미노산 위치에 Mmod를 부착시키기 전에 필요할 수 있음이 이해된다. 따라서, Mmod의 부착은 이들 위치의 자연 발생 아미노산에서 또는 특정 위치에서 자연 발생 아미노산을 대체한 아미노산에서 이루어질 수 있으며, 부착 부위는 단백질 생성 또는 비-단백질 생성 아미노산일 수 있고, 상기 두 실시양태은 모두 위에서 설명된 바와 같다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 K34 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 R37 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 M38 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 T40 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 F41 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 K42 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 F43 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 Y44 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 E61 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다. 특정 실시양태에서, Mmod의 부착은 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 L71 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 이루어진다.
특정 실시양태에서, Mmod는 화학식 (A-1)로 표시된다.
Figure pct00021
여기서,
-FG-는 결합이고;
-SP-는 스페이서 모이어티이고;
-POL은 중합체이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -FG-는
Figure pct00022
이고, 여기서 별표로 표시된 점선은 IL-2 모이어티의 황에 대한 부착을 나타내고, 표시되지 않은 점선은 -SP-에 대한 부착을 나타낸다. 상기 황은 시스테인의 측쇄에 의해 제공되는 황일 수 있다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -FG-는
Figure pct00023
이고, 여기서 별표로 표시된 점선은 IL-2 모이어티의 질소에 대한 부착을 나타내고, 표시되지 않은 점선은 -SP-에 대한 부착을 나타낸다. 상기 질소는 N-말단 아민으로부터의 질소 또는 IL-2 모이어티의 라이신의 측쇄의 질소일 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 질소는 IL-2 모이어티의 N-말단 아민의 질소이다. 특정 실시양태에서, 상기 질소는 IL-2 모이어티의 라이신의 측쇄의 질소이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -FG-는
Figure pct00024
이고, 여기서 별표로 표시된 점선은 IL-2 모이어티의 질소의 황에 대한 부착을 나타내고, 표시되지 않은 점선은 -SP-에 대한 부착을 나타내고, a1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 상기 황은 시스테인의 측쇄에 의해 제공되는 황일 수 있으며, 상기 질소는 N-말단 아민으로부터의 질소 또는 IL-2의 라이신 측쇄의 질소일 수 있다. 특정 실시양태에서, 별표로 표시된 점선은 황에 대한 부착을 나타내며, 상기 황은 시스테인의 측쇄에 의해 제공된다. 특정 실시양태에서, a1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, a1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, a1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, a1은 1이다. 특정 실시양태에서, a1은 2이다. 특정 실시양태에서, a1은 3이다. 특정 실시양태에서, a1은 4이다. 특정 실시양태에서, a1은 5이다. 특정 실시양태에서, a1은 6이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -FG-는
Figure pct00025
이고, 여기서 별표로 표시된 점선은 IL-2 모이어티의 질소의 황에 대한 부착을 나타내고, 표시되지 않은 점선은 -SP-에 대한 부착을 나타내고, a2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, a2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, a2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, a2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, a2는 1이다. 특정 실시양태에서, a2는 2이다. 특정 실시양태에서, a2는 3이다. 특정 실시양태에서, a2는 4이다. 특정 실시양태에서, a2는 5이다. 특정 실시양태에서, a2는 6이다. 상기 황은 시스테인의 측쇄에 의해 제공되는 황일 수 있고, 상기 질소는 N-말단 아민으로부터의 질소 또는 IL-2 모이어티의 라이신의 측쇄의 질소일 수 있다. 특정 실시양태에서, 별표로 표시된 점선은 황에 대한 부착을 나타내며, 상기 황은 시스테인의 측쇄에 의해 제공된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -SP-는 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2N(R10)-, -S(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R10)S(O)2N(R10a)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)-, 및 -OC(O)N(R10)-으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴 및 8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R9로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R9는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR11, -OR11, -C(O)R11, -C(O)N(R11R11a), -S(O)2N(R11R11a), -S(O)N(R11R11a), -S(O)2R11, -S(O)R11, -N(R11)S(O)2N(R11R11b), -SR11, -N(R11R11a), -NO2, -OC(O)R11, -N(R11)C(O)R11a, -N(R11)S(O)2R11a, -N(R11)S(O)R11a, -N(R11)C(O)OR11a, -N(R11)C(O)N(R11aR11b), -OC(O)N(R11R11a), 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R10, -R10a, -R11, -R11a 및 -R11b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -SP-는 C1-20 알킬이고, C1-20 알킬은 하나 이상의 -R9로 선택적으로 치환되고, C1-20 알킬은 -O-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)-, 및 -OC(O)N(R10)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고, 각각의 -R9는 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 -R10 및 -R10a는 독립적으로 -H 및 C1-6으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -SP-는 C1-10 알킬이고, C1-10 알킬은 하나 이상의 -R9로 선택적으로 치환되고, C1-10 알킬은 -O-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)-, 및 -OC(O)N(R10)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고, 각각의 -R9는 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 -R10 및 -R10a는 독립적으로 -H 및 C1-6으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -POL은 PEG 기반 중합체이다. 특정 실시양태에서, -POL은 하기 화학식 (A-1i)로 표시된다.
Figure pct00026
여기서,
점선은 -SP-에 대한 부착을 나타낸다.
m은 0 또는 1이고;
p는 12 내지 22700 범위의 정수이고;
q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 m은 0이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 m은 1이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 23 내지 227000, 예를 들어 45 내지 11300, 또는 69 내지 4540, 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 12이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 23이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 46이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 68이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 90이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 170이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 227이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 680이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 900이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 1130이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 1350이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 1590이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)는 약 1800이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 2045이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 p는 약 2275이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1i)의 q는 6이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -POL은 하기 화학식 (A-1ii)로 표시된다.
Figure pct00027
여기서,
점선은 -SP-에 대한 부착을 나타내고;
FG는 작용기이고;
m은 0 또는 1이고;
p는 12 내지 22700 범위의 정수이고;
q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
화학식 (A-1)의 모이어티 Mmod가 추가의 모이어티, 예를 들어 하나 이상의 모이어티 -L1-L2-Z에 접합되는 경우, 모이어티 -POL이 작용기로 끝나는 것이 유리하다. -POL이 화학식 (A-1ii)인 경우, 이러한 화합물은 시약이고, 상기 하나 이상의 모이어티, 예를 들어 하나 이상의 모이어티 -L1-L2-Z를 상기 시약의 작용기에 접합시킨 후, FG는 더 이상 존재하지 않지만, 하나 이상의 추가의 모이어티의 시약 형태에 존재하는 적절한 작용기와 결합을 형성한 것으로 이해된다.
또한, Mmod에 접합되는 모이어티, 예를 들어 모이어티 -L1-L2-Z에 대한 다른 부착 부위도 가능할 수 있음이 이해된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 m은 0이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 m은 1이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 23 내지 227000, 예를 들어 45 내지 11300, 또는 69 내지 4540, 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 12이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 23이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 46이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 68이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 90이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 170이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 227이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 680이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 900이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 1130이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 1350이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 1590이다. 화학식 (A-1ii)의 p는 약 1800이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 2045이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 p는 약 2275이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1ii)의 q는 6이다.
모이어티 -L1-L2-Z와 같은 추가의 모이어티가 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되는 경우, 모이어티 -POL은 하기 화학식 (A-1iii), (A-1iv), (A-1v) 또는 (A-1vi)으로 표시된다.
Figure pct00028
여기서,
별표로 표시된 점선은 모이어티 -L1-L2-Z와 같은 추가의 모이어티에 대한 부착을 나타내고;
표시되지 않은 점선은 -SP-에 대한 부착을 나타내고;
m, p 및 q는 화학식 (A-1i)에서 정의된 바와 같이로 사용된다.
특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-L2-Z와 같은 추가의 모이어티는 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되어 화학식 (A-1iii)의 -POL 모이어티를 생성한다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-L2-Z와 같은 추가의 모이어티는 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되어 화학식 (A-1iv)의 -POL 모이어티를 생성한다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-L2-Z와 같은 추가의 모이어티는 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되어 화학식 (A-1v)의 -POL 모이어티를 생성한다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-L2-Z와 같은 추가의 모이어티는 화학식 (A-1)의 모이어티 -POL을 통해 Mmod에 접합되어 화학식 (A-1vi)의 -POL 모이어티를 생성한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1)의 -POL은 히알루론산 기반 중합체이다.
특정 실시양태에서, Mmod는 화학식 (A-1a)로 표시된다.
Figure pct00029
여기서,
별표로 표시된 점선은 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기의 측쇄의 황에 대한 부착을 나타내고;
b1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
b2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
b3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 6이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b2는 6이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 23 내지 227000, 예를 들어 45 내지 11300, 또는 69 내지 4540, 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 12이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 23이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 46이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 68이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 90이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 170이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 227이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 680이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 900이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 1130이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 1350이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 1590이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3는 약 1800이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 2045이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 2275이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 12이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 23이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 46이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 68이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 90이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 170이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 227이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1a)의 b1은 2이고, 화학식 (A-1a)의 b2는 3이고, 화학식 (A-1a)의 b3은 약 450이다.
특정 실시양태에서, Mmod는 하기 화학식 (A-1b)로 표시된다.
Figure pct00030
여기서,
별표로 표시된 점선은 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기의 측쇄의 황에 대한 부착을 나타내고;
c1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
c2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
c3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 6이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c2는 6이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 23 내지 227000, 예를 들어 45 내지 11300, 또는 69 내지 4540, 또는 114 내지 2700 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 12이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 23이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 46이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 68이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 90이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 170이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 227이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 680이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 900이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 1130이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 1350이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 1590이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 1800이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 2045이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 2275이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 12이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 23이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 46이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 68이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 90이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 170이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 227이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1b)의 c1은 2이고, 화학식 (A-1b)의 c2는 3이고, 화학식 (A-1b)의 c3은 약 450이다.
특정 실시양태에서, Mmod는 화학식 (A-1c)로 표시된다.
Figure pct00031
여기서,
별표로 표시된 점선은 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기의 측쇄의 황에 대한 부착을 나타내고;
d1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
d2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
d3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 1 내지 8 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 1 내지 6 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 1 내지 4 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 6이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 1 내지 8 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 1 내지 6 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 1 내지 4 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d2는 6이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 23 내지 227000, 예를 들어 45 내지 11300, 또는 69 내지 4540, 114 내지 2700 또는 160 내지 900 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 12이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 23이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 46이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 68이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 90이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 170이다. 화학식 (A-1c)의 실시양태 d3은 약 227이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 680이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 900이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 1130이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 1350이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 1590이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 1800이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 2045이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 2275이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 12이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 23이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 46이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 68이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 90이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 170이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 227이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-1c)의 d1은 2이고, 화학식 (A-1c)의 d2는 3이고, 화학식 (A-1c)의 d3은 약 450이다.
편향된 IL-2 모이어티는 적어도 하나의 아미노산 돌연변이, 예를 들어 1개의 아미노산 돌연변이, 2개의 아미노산 돌연변이, 3개의 아미노산 돌연변이, 4개의 아미노산 돌연변이, 5개의 아미노산 돌연변이, 6개의 아미노산 돌연변이, 7개의 아미노산 돌연변이, 8개의 아미노산 돌연변이, 9개의 아미노산 돌연변이 또는 10개의 아미노산 돌연변이를 포함하는 IL-2 모이어티를 포함할 수 있다. 이러한 아미노산 돌연변이는 바람직하게는 IL-2Rα에 대한 결합에 관여하는 위치에서 발생한다. 따라서, 바람직하게는 적어도 아미노산 돌연변이는 알데스류킨에 비해 IL-2Rαβ에 대한 편향된 IL-2 모이어티의 감소된 친화성을 초래한다.
바람직하게는, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 K34, R37, M38, T40, F41, K42, F43, Y44, E61 및 L71로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 위치에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 훨씬 더 바람직하게는, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 F41, Y44, E61 및 L71로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 위치에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 K34에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 R37에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 M38에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 T40에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 F41에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 K42에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 F43에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 Y44에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 E61에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2에 기초하여 아미노산 위치 L71에서 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생한다.
특정 실시양태에서, 이러한 돌연변이는 자연 발생 아미노산을 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 라이신, 세린, 트레오닌, 트립토판 및 티로신으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기로 대체하는 것이다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 알라닌으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 아르기닌으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 아스파라긴으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 아스파르트산으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 시스테인으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 글루타민으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 글루탐산으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 글리신으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 히스티딘으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 라이신으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 세린으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 트레오닌으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 트립토판으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 티로신으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 이러한 돌연변이는 자연 발생 아미노산을 아르기닌, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 히스티딘, 라이신, 세린, 트레오닌, 트립토판 및 티로신으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기로 대체하는 것이다. 특정 실시양태에서, 이러한 돌연변이는 자연 발생 아미노산을 시스테인, 글루탐산, 라이신, 세린, 트레오닌 및 티로신으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기로 대체하는 것이다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 아미노산은 비-단백질 생성 아미노산으로 대체된다. 이러한 비-단백질 생성 아미노산에 대한 실시양태는 상기 설명된 바와 같다.
한 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티의 IL-2는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 K34A, K34C, K34G, K34S, K34T, K34Q, K34E, K34N, K34D, K34H, K34W, K34Y 및 K34로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34C 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34S 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34T 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34Q 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34E 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34D 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34H 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34W 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34Y 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 K34R 돌연변이를 포함한다.
한 실시양태에서, 편향된 IL-2의 IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 R37A, R37C, R37G, R37S, R37T, R37Q, R37E, R37N, R37D, R37H, R37W, R37Y 및 R37K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37C 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37S 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37T 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37Q 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37E 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37N 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37D 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37H 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37K 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37W 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37Y 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 R37K 돌연변이를 포함한다.
한 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 F41A, F41C, F41G, F41S, F41T, F41Q, F41E, F41N, F41D, F41R, F41K, Y44A, Y44C, Y44G, Y44S, Y44T, Y44Q, Y44E, Y44N, Y44D, Y44R, Y44K, L71C, L71G, L71A, L71S, L71T, L71Q, L71E, L71N, L71D, L71R, 및 L71K로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티의 IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 F41A, F41C, F41G, F41S, F41T, F41Q, F41E, F41N, F41D, F41R, F41H, F41W, F41Y 및 F41K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 F41A, F41C, F41G, F41S, F41T, F41Q, F41E, F41N, F41D, F41R 및 F41K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41A 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41C 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41S 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41T 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41Q 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41E 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41N 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41D 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41R 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41H 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41W 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41Y 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41K 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 Y44A, Y44C, Y44G, Y44S, Y44T, Y44Q, Y44E, Y44N, Y44D, Y44R, Y44H, Y44W 및 Y44K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 Y44A, Y44C, Y44G, Y44S, Y44T, Y44Q, Y44E, Y44N, Y44D, Y44R 및 Y44K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44A 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44C 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44S 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44T 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44Q 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44E 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44N 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44D 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44R 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44H 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44W 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y44K 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 L71G, L71C, L71A, L71S, L71T, L71Q, L71E, L71N, L71D, L71R, L71H, L71W, L71Y 및 L71K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 L71G, L71C, L71A, L71S, L71T, L71Q, L71E, L71N, L71D, L71R 및 L71K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72C 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72A 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72S 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72T 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72Q 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72E 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72N 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72D 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72R 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72H 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72W 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72Y 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 L72K 돌연변이를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 F41A, F41C, F41G, F41S, F41T, F41Q, F41E, F41N, F41D, F41R 및 F41K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이 및 Y44A, Y44C, Y44G, Y44S, Y44T, Y44Q, Y44E, Y44N, Y44D, Y44R 및 Y44K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 추가의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41A 및 Y44A 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41C 돌연변이 및 Y44A 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41A 및 Y44C 돌연변이를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 F41A, F41C, F41G, F41S, F41T, F41Q, F41E, F41N, F41D, F41R 및 F41K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이 및 L71G, L71C, L71A, L71S, L71T, L71Q, L71E, L71N, L71D, L71R 및 L71K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 추가의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F42A 및 L72G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F42C 및 L72G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F42A 및 L72C 돌연변이를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 Y44A, Y44C, Y44G, Y44S, Y44T, Y44Q, Y44E, Y44N, Y44D, Y44R 및 Y44K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이 및 L71G, L71C, L71A, L71S, L71T, L71Q, L71E, L71N, L71D, L71R 및 L71K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 추가의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y45A 및 L72G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y45C 및 L72G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 Y45A 및 L72C 돌연변이를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 F41A, F41C, F41G, F41S, F41T, F41Q, F41E, F41N, F41D, F41R 및 F41K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 돌연변이; Y44A, Y41C, Y44G, Y44S, Y44T, Y44Q, Y44E, Y44N, Y44D, Y44R 및 Y44K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 추가의 아미노산 돌연변이 및 L71G, L71C, L71A, L71S, L71T, L71Q, L71E, L71N, L71D, L71R 및 L71K로 이루어지는 군으로부터 선택되는 추가의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41A, Y44A 및 L71G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41C, Y44A 및 L71G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41A, Y44C 및 L71G 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 F41A, Y44C 및 L71C를 포함한다.
IL-2 모이어티는 추가로 또는 대안적으로 O-글리코실화 부위를 제거하는 아미노산 돌연변이를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 이러한 아미노산 돌연변이는 알데스류킨의 잔기 2에 상응하는 위치에 존재하며, 훨씬 더 바람직하게는 서열 번호 2 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 기초한 T2A, T2G, T2Q, T2E, T2N, T2D, T2R, T2K 및 T2P로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
IL-2 모이어티는 추가로 또는 대안적으로 증가된 발현 또는 안정성과 같은 추가의 이점을 제공할 수 있는 하나 이상의 추가의 아미노산 돌연변이를 포함할 수 있다. 예를 들어, 알데스류킨의 위치 103에 존재하는 메티오닌은 US 5,206,344에 설명된 바와 같이 중성 아미노산, 예를 들어 알라닌으로 대체될 수 있다.
특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 적어도 1개의 아미노산 돌연변이 및 변형 모이어티 Mmod의 적어도 하나의 안정한 부착, 예를 들어 1개의 아미노산 돌연변이 및 1개의 모이어티 Mmod, 1개의 아미노산 돌연변이 및 2개의 모이어티 Mmod, 2개의 아미노산 돌연변이 및 1개의 모이어티 Mmod, 3개의 아미노산 돌연변이 및 1개의 모이어티 Mmod, 1개의 아미노산 돌연변이 및 3개의 모이어티 Mmod를 포함하는 IL-2 모이어티이다. 아미노산 돌연변이 및 모이어티 Mmod의 수는 서로 독립적으로 선택될 수 있고, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 및 15로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있음이 이해된다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이 및 모이어티 Mmod의 수는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 1이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 2이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 3이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 4이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 5이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 6이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 1이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 2이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 3이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 4이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 5이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 6이다. 모이어티 Mmod 및 돌연변이 부위/돌연변이에 대한 실시양태는 상기 설명된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 적어도 하나의 아미노산 돌연변이 및 상기 돌연변이된 아미노산에 부착된 적어도 하나의 모이어티 Mmod를 포함하는 IL-2 모이어티이다. 아미노산 돌연변이 및 모이어티 Mmod의 수는 동일하지 않을 수 있으며, 추가의 모이어티 Mmod는 돌연변이되지 않은 아미노산 잔기에서 IL-2 모이어티에 접합될 수 있고, 적어도 하나의 Mmod가 하나의 돌연변이된 아미노산 잔기에 접합된다면 모든 돌연변이된 아미노산 잔기가 모이어티 Mmod에 접합될 수 있는 것은 아님이 이해된다. 따라서, 아미노산 돌연변이 및 모이어티 Mmod의 수는 서로 독립적으로 선택될 수 있고, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 및 15로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이 및 모이어티 Mmod의 수는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 1이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 2이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 3이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 4이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 5이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이의 수는 6이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 1이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 2이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 3이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 4이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 5이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 Mmod의 수는 6이다. 모이어티 Mmod 및 돌연변이 부위/돌연변이에 대한 실시양태는 상기 설명된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 K34, R37, M38, T40, F41, K42, F43, Y44, E61 및 L71로 이루어지는 군으로부터 선택되는 위치에 적어도 하나의 아미노산 돌연변이를 포함하는 IL-2 모이어티이고, 여기서 자연 발생 아미노산은 시스테인으로 대체되어 돌연변이 K34C, R37C, M38C, T40C, F41C, K42C, F43C, Y44C, E61C, 및 L71C를 생성하고, 적어도 하나의 모이어티 Mmod는 상기 시스테인의 황에 접합된다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 K34C 돌연변이 및 추가로 위치 34에서 라이신을 대체한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 R37C 돌연변이 및 추가로 위치 37에서 아르기닌을 대체 한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 M38C 돌연변이 및 추가로 위치 38에서 메티오닌을 대체한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 T40C 돌연변이 및 추가로 위치 40에서 트레오닌을 대체한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 F41C 돌연변이 및 추가로 위치 41에서 페닐알라닌을 대체한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 K42C 돌연변이 및 추가로 위치 42에서 라이신을 대체한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 F43C 돌연변이 및 추가로 위치 43에서 페닐알라닌을 대체한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 Y44C 돌연변이 및 추가로 위치 44에서 티로신을 대체한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 E61C 돌연변이 및 추가로 위치 61에서 글루탐산을 대체한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 L71C 돌연변이 및 추가로 위치 71에서 라이신을 대체한 시스테인의 황에 접합된 모이어티 Mmod를 포함한다. 특정 실시양태에서, 편향된 IL-2 모이어티는 K34C, R37C, M38C, T40C, F41C, K42C, F43C, Y44C, E61C, 및 L71C로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나의 돌연변이를 포함하고, 여기서 하나의 모이어티 Mmod는 자연 발생 아미노산, 예를 들어 R37C 돌연변이의 경우 위치 37의 아르기닌을 대체한 시스테인의 황에 접합된다.
IL-2 모이어티는 적어도 하나의 결실을 포함할 수 있다(포인트 (c) 참조). 그러한 결실은 바람직하게는 서열 번호 2의 서열을 참조하는 것으로 이해된다. 이러한 결실은 예를 들어 스플라이스 변이체의 형태와 같은 자연 발생 결실일 수 있거나, 또는 인위적으로 도입된 결실일 수 있다. 이러한 자연 발생 스플라이스 변이체 중 하나는 IL-2δ2 돌연변이체이고(문헌 [Tsytsikov et al., JBC 1996, 271(38): 23055-23060] 참조)이며, 여기에서 엑손 2가 제외되고, 서열 번호 1의 서열에 기초하여 아미노산 잔기 N30에서 K49까지의 결실(서열 번호 2의 서열에 기초한 아미노산 잔기 N29 내지 K48의 결실에 상응함)이 발생한다.
바람직하게는, 이러한 결실은 IL-2Rα에 대한 결합과 관련된 위치에서 발생한다. 따라서, 바람직하게는, 적어도 하나의 결실은 알데스류킨에 비해 IL-2Rαβ에 대한 편향된 IL-2 모이어티의 감소된 친화성을 초래한다.
한 실시양태에서, -D는 IL-2 모이어티, 바람직하게는 서열 번호 2의 서열을 갖는 IL-2 모이어티를 포함하고, 이것은 시스테인 잔기를 도입하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하고, 추가로 상기 시스테인 돌연변이에 부착된 변형 모이어티 Mmod를 포함한다. 바람직하게는, 시스테인 돌연변이는 K34C, R37C, M38C, T40C, F41C, K42C, F43C, Y44C, E61C 및 L71C를 포함하는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 K34C 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 R37C 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 M38C 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 T40C 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 F41C 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 K42C 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 F43C 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 Y44C 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 E61C 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, 시스테인 돌연변이는 L71C 돌연변이이다.
한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 문헌 [Levin et al. (Nature, 2012, 484: 529-535)]에 기재된 바와 같은 수퍼카인이다. 바람직하게는, 이러한 IL-2 모이어티는 상기 기재된 변형에 추가로 또는 대안적으로 아미노산 잔기 Q73, L79, R80, L84, I85 및 I91의 적어도 하나의 돌연변이에서 포함하고, 특히 Q73H, L79F, R80D, L84V, I85V 및 I91F로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 모이어티는 상기 기재된 변형에 추가로 또는 대안적으로 Q73H, L79F, R80D, L84V, I85V 및 I91F 돌연변이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-2 모이어티는 상기 기재된 변형에 추가로 또는 대안적으로 L79F, R80D, L84V, I85V 및 I91F 돌연변이를 포함한다. IL-2 모이어티이 수퍼카인을 기반으로 하는 경우, 상응하는 편향된 IL-2는 알데스류킨보다 더 높은 IL-2Rβ에 대한 친화성을 갖는다.
본 발명의 IL-2 접합체는 적어도 하나의 공유적으로 및 가역적으로 부착된 중합체 모이어티 및/또는 치환된 지방산 모이어티 -Z를 포함한다.
놀랍게도, 상기 적어도 하나의 공유적으로 및 가역적으로 부착된 중합체 모이어티 및/또는 치환된 지방산 모이어티의 첨가가 편향된 IL-2 모이어티의 순환 반감기를 추가로 연장할 수 있는 반면, 이의 가역적 부착은 적어도 하나의 공유적으로 및 가역적으로 부착된 중합체 모이어티 또는 치환된 지방산 모이어티의 절단 후에 IL-2Rβ에 대한 충분한 친화성을 보장하는 것으로 밝혀졌다.
한 실시양태에서, 본 발명의 IL-2 접합체는 치환된 지방산 또는 중합체 모이어티인 하나의 모이어티 -Z를 포함한다. 한 실시양태에서, -Z는 치환된 지방산이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 중합체 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 IL-2 접합체는 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 -Z를 포함한다. 한 실시양태에서, 2개의 모이어티 -Z는 동일하거나 상이할 수 있는 치환된 지방산이다. 또 다른 실시양태에서, 2개의 모이어티 -Z는 동일하거나 상이할 수 있는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, 1개의 모이어티 -Z는 치환된 지방산이고, 다른 모이어티 -Z는 중합체 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 IL-2 접합체는 동일하거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 -Z를 포함한다. 한 실시양태에서, 모든 3개의 모이어티 -Z는 동일하거나 상이할 수 있는 치환된 지방산이다. 또 다른 실시양태에서, 3개의 모든 모이어티 -Z는 동일하거나 상이할 수 있는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, 1개 또는 2개의 모이어티 -Z는 치환된 지방산이고, 나머지 모이어티/모이어티들 -Z는 중합체 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 IL-2 접합체는 동일하거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 -Z를 포함한다. 한 실시양태에서, 4개의 모이어티 -Z 모두는 동일하거나 상이할 수 있는 치환된 지방산이다. 다른 실시양태에서, 4개의 모든 모이어티 -Z는 동일하거나 상이할 수 있는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, 1, 2 또는 3개의 모이어티 -Z는 치환된 지방산이고, 나머지 모이어티/모이어티들 -Z는 중합체 모이어티이다.
-Z가 치환된 지방산 모이어티인 경우, 이것은 바람직하게는 본 명세서에 참고로 포함된 WO 2005/027978 A2 및 WO 2014/060512 A1에 개시된 치환된 지방산 모이어티이다.
-Z가 중합체 모이어티인 경우, 상기 중합체 모이어티는 바람직하게는 1 kDa 내지 1000 kDa, 보다 바람직하게는 2 kDa 내지 500 kDa, 훨씬 더 바람직하게는 3 kDa 내지 200 kDa, 훨씬 더 바람직하게는 5 kDa 내지 120 kDa, 훨씬 더 바람직하게는 10 kDa 내지 100 kDa, 가장 바람직하게는 15 kDa 내지 80 kDa 범위의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서, -Z는 약 2 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 5 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 분자량이 약 10 kDa인 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 15 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 20 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 30 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 40 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 50 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 60 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 70 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 80 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 90 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 100 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 2 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 5 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 10 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 15 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 20 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 30 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 40 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 50 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 60 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 70 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 80 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 90 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 약 100 kDa의 분자량을 갖는 중합체 모이어티이다.
-Z가 중합체 모이어티인 경우, 상기 중합체 모이어티는 바람직하게는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포일 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아마이드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아마이드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(아스파르트아마이드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아마이드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸-옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필메타크릴아마이드), 폴리(하이드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락트-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아마이드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(유기포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로스, 카르보메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 기능화된 히알루론산, 알기네이트, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분 및 기타 탄수화물 기반 중합체, 자일란 및 이들의 공중합체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중합체를 포함한다.
한 실시양태에서, -Z는 펩타이드 또는 단백질 모이어티이다. 바람직하게는, 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티는 IL-2 모이어티 또는 이의 단편이 아니다. 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티 -Z는 -L1-L2-를 통해 -D에 화학적으로 접합될 수 있거나 또는 가역적 링커 모이어티 -L1-을 통해 -D에 번역에 의해 융합될 수 있으며, 이 경우 -L1-은 펩타이드 또는 단백질 모이어티이고, -L2-는 바람직하게는 화학적 결합이다. 한 실시양태에서, 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티 -Z는 -L1-L2-를 통해 -D에 화학적으로 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 펩타이드 또는 단백질 모이어티 -Z는 가역적 링커 모이어티 -L1-을 통해 -D에 번역에 의해 융합되고, 이 경우 -L1-은 펩타이드 또는 단백질 모이어티이고, -L2-는 바람직하게는 화학적 결합이다. 이러한 펩타이드 또는 단백질 가역적 링커 모이어티 -L1-은 효소적 또는 비-효소적 방식으로 분해될 수 있다. 효소 분해를 촉진하기 위해, -L1-은 프로테아제 인식 부위를 포함할 수 있다.
-Z가 펩타이드 또는 단백질 모이어티인 경우, 이것은 바람직하게는 본 명세서에 참고로 포함되는 US 2012/0035101 A1에 기재된 융모성 성선 자극 호르몬의 카르복실-말단 펩타이드를 포함하는 모이어티; 알부민 모이어티; 랜덤 코일 단백질 모이어티 및 Fc 융합 단백질 모이어티로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, -Z는 랜덤 코일 펩타이드 또는 단백질 모이어티를 포함한다.
바람직하게는, 상기 랜덤 코일 펩타이드 또는 단백질 모이어티는 적어도 25개의 아미노산 잔기 및 최대 2000개의 아미노산을 포함한다. 훨씬 더 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 펩타이드 또는 단백질 모이어티는 적어도 30개의 아미노산 잔기 및 최대 1500개의 아미노산 잔기를 포함한다. 훨씬 더 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 펩타이드 또는 단백질 모이어티는 적어도 50개의 아미노산 잔기 및 최대 500개의 아미노산 잔기를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, -Z는 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하며, 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 95%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 98%, 가장 바람직하게는 적어도 99%는 알라닌 및 프롤린으로부터 선택된다. 훨씬 더 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티의 아미노산 잔기의 총수의 적어도 10% 내지 75% 미만, 바람직하게는 65% 미만이 프롤린 잔기이다. 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함되는 WO 2011/144756 A1에 기재된 바와 같다. 훨씬 더 바람직하게는, -Z는 본 명세서에 참고로 포함되는 WO2011/144756에 기재된 바와 같은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 10, 서열 번호 1l, 서열 번호 12, 서열 번호 13, 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 16, 서열 번호 17, 서열 번호 51 및 서열 번호 61로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 모이어티를 포함한다. 알라닌 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질을 포함하는 모이어티는 "PA" 또는 "PA 모이어티"로 지칭될 것이다.
따라서, 한 실시양태에서, -Z는 PA 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, -Z는 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하며, 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 95%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 98%, 가장 바람직하게는 적어도 99%는 알라닌, 세린 및 프롤린으로부터 선택된다. 훨씬 더 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티의 아미노산 잔기의 총수의 적어도 4% 내지 40% 미만이 프롤린 잔기이다. 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함되는 WO 2008/155134 A1에 기재된 바와 같다. 훨씬 더 바람직하게는, -Z는 본 명세서에 참고로 포함되는 WO 2008/155134 A1에 기재된 바와 같은 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 32, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 46, 서열 번호 50, 서열 번호 52, 서열 번호 54 및 서열 번호 56으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 모이어티를 포함한다. 알라닌, 세린 및 프롤린을 포함하는 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하는 모이어티는 "PAS" 또는 "PAS 모이어티"로 지칭될 것이다.
따라서, 한 실시양태에서, -Z는 PAS 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, -Z는 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하며, 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 95%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 98%, 가장 바람직하게는 적어도 99%는 알라닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타메이트 및 프롤린으로부터 선택된다. 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함되는 WO 2010/091122 A1에 기재된 바와 같다. 훨씬 더 바람직하게는, -Z는 본 명세서에 참고로 포함되는 WO 2010/091122 A1에 기재된 바와 같은 서열 번호 182, 서열 번호 183, 서열 번호 184, 서열 번호 185, 서열 번호 186, 서열 번호 187, 서열 번호 188, 서열 번호 189, 서열 번호 190, 서열 번호 191, 서열 번호 192, 서열 번호 193, 서열 번호 194, 서열 번호 195, 서열 번호 196, 서열 번호 197, 서열 번호 198, 서열 번호 199, 서열 번호 200, 서열 번호 201, 서열 번호 202, 서열 번호 203, 서열 번호 204, 서열 번호 205, 서열 번호 206, 서열 번호 207, 서열 번호 208, 서열 번호 209, 서열 번호 210, 서열 번호 211, 서열 번호 212, 서열 번호 213, 서열 번호 214, 서열 번호 215, 서열 번호 216, 서열 번호 217, 서열 번호 218, 서열 번호 219, 서열 번호 220, 서열 번호 221, 서열 번호 759, 서열 번호 760, 서열 번호 761, 서열 번호 762, 서열 번호 763, 서열 번호 764, 서열 번호 765, 서열 번호 766, 서열 번호 767, 서열 번호 768, 서열 번호 769, 서열 번호 770, 서열 번호 771, 서열 번호 772, 서열 번호 773, 서열 번호 774, 서열 번호 775, 서열 번호 776, 서열 번호 777, 서열 번호 778, 서열 번호 779, 서열 번호 1715, 서열 번호 1716, 서열 번호 1718, 서열 번호 1719, 서열 번호 1720, 서열 번호 1721 및 서열 번호 1722로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 모이어티를 포함한다. 알라닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타메이트 및 프롤린을 포함하는 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하는 모이어티는 WO 2010/091122 A1에서의 그에 대한 지정에 따라 "XTEN" 또는 "XTEN 모이어티"로 지칭 될 것이다.
따라서, 한 실시양태에서, -Z는 XTEN 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, -Z는 히알루론산 기반 중합체이다.
또 다른 실시양태에서, -Z는 선형, 분지형 또는 다중 아암 PEG 기반 모이어티와 같은 PEG 기반 모이어티이다. 한 실시양태에서, -Z는 분지형 PEG 기반 모이어티이다. 바람직하게는, 이러한 분지형 PEG 기반 모이어티 -Z는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 분지점을 갖는 분지형 PEG 기반 모이어티이다. 바람직하게는, -Z는 1, 2 또는 3개의 분지점을 갖는 분지된 PEG 기반 모이어티이다. 한 실시양태에서, -Z는 하나의 분지점을 갖는 분지된 PEG 기반 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 2개의 분지점을 갖는 분지된 PEG 기반 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, -Z는 3개의 분지점을 갖는 분지된 PEG 기반 모이어티이다.
각각의 분지점은 바람직하게는 -N<, -CH< 및 >C<로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, -Z는 하기 화학식 (A)의 모이어티를 포함한다.
Figure pct00032
여기서,
-BP1<, -BP2<, -BP3<는 서로 독립적으로 -N< 및 -C(R8)<로 이루어지는 군으로부터 선택되며;
R8은 H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 40% PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG 기반 사슬이고;
-C1-, -C2-는 서로 독립적으로 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2N(R10)-, -S(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R10)S(O)2N(R10a)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)-, 및 -OC(O)N(R10)-으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴 및 8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R9로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R9는 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR11, -OR11, -C(O)R11, -C(O)N(R11R11a), -S(O)2N(R11R11a), -S(O)N(R11R11a), -S(O)2R11, -S(O)R11, -N(R11)S(O)2N(R11R11b), -SR11, -N(R11R11a), -NO2, -OC(O)R11, -N(R11)C(O)R11a, -N(R11)S(O)2R11a, -N(R11)S(O)R11a, -N(R11)C(O)OR11a, -N(R11)C(O)N(R11aR11b), -OC(O)N(R11R11a), 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R10, -R10a, -R11, -R11a 및 -R11b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
특정 실시양태에서, -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 50%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG 기반 사슬이다. 특정 실시양태에서, -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 60%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG 기반 사슬이다. 특정 실시양태에서, -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 70%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG 기반 사슬이다. 특정 실시양태에서, -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 80%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG 기반 사슬이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 모이어티 P1, P2, P3 및 P4의 분자량은 서로 독립적으로 5 내지 30 kDa, 예를 들어 5 내지 25 kDa 또는 8 내지 20 kDa 범위이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 약 5 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 약 7 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 약 10 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 약 12 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 약 15 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 약 20 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 약 25 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 약 30 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 7 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 10 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 12 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 15 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 20 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 25 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 P1, P2, P3 또는 P4의 분자량은 30 kDa일 수 있다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 P1, P2, P3 및 P4는 동일한 구조를 갖는다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 BP1은 -N<이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 BP2 및 BP2는 동일한 구조를 갖는다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 BP2 및 BP2는 둘 모두 -CH<이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 C1 및 C2는 동일한 구조를 갖는다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 C1 및 C2는 -O-, -C(O)N(R10)- 및 3 내지 10원 헤테로사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 중단된 C1-50 알킬이고, 여기서 3 내지 10원 헤테로사이클릴은 적어도 하나의 옥소(=O)로 치환된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 C1 및 C2는 화학식 (A-a)로 표시된다.
Figure pct00033
여기서,
별표로 표시된 점선은 BP1에 대한 부착을 나타내고;
표시되지 않은 점선은 각각 BP2 또는 BP3에 대한 부착을 나타내고;
q1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
q2는 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
q3은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
q4는 1, 2 및 3으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 4, 5, 6, 7, 및 8로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 5, 6 및 7로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 7이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 8이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 1, 2 및 3으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 5이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 2, 3 및 4로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 7이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 8이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q4는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q4는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q4는 3이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 P1, P2, P3 및 P4는 서로 독립적으로 화학식 (A-b)로 표시된다.
Figure pct00034
여기서,
점선은 -Z의 나머지 부분에 대한 부착을 나타내고;
m은 0 또는 1이고;
p는 70 내지 900 범위의 정수이고;
q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 m은 0이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 m은 1이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 115 내지 680 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 115 내지 560 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 185 내지 450 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 4이다. 화학식 (Ab)의 실시양태 q는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 6이다.
특정 실시양태에서, -Z는 하기 화학식 (A-c)의 모이어티를 포함한다:
Figure pct00035
여기서,
p1, p2, p3, p4는 서로 독립적으로 70 내지 900 범위의 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 115 내지 680 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 115 내지 560 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 185 내지 450 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 220 내지 240 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 115 내지 680 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 115 내지 560 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 185 내지 450 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 220 내지 240 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 115 내지 680 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 115 내지 560 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 185 내지 450 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 220 내지 240 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 115 내지 680 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 115 내지 560 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 185 내지 450 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 220 내지 240 범위의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1, p2, p3 및 p4은 동일하다. 특정 실시양태에서, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240 범위이다.
한 실시양태에서, -Z는 본 명세서에 참고로 포함되는 WO 2012/02047 A1에 개시된 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서, -Z는 본 명세서에 본 명세서에 참고로 포함된 WO 2013/024048 A1에 개시된 모이어티이다.
특정 실시양태에서, -Z는 수불용성이다. 특정 실시양태에서, -Z는 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, 상기 하이드로겔은 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포일 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아마이드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아마이드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(아스파르트아마이드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아마이드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(알킬렌 글리콜), 예를 들어 폴리(에틸렌 글리콜) 및 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸-옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필메타크릴아마이드), 폴리(하이드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락트-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아마이드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(유기포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로스, 카르보메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 기능화된 히알루론산, 알기네이트, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분 및 기타 탄수화물 기반 중합체, 자일란 및 이들의 공중합체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중합체를 포함한다.
특정 실시양태에서, -Z는 폴리(알킬렌 글리콜) 기반 또는 히알루론산 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, -Z는 폴리(프로필렌 글리콜) 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, -Z는 PEG 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, -Z는 본 명세서에 참고로 포함되는 WO2011/012715A1 또는 WO2014/056926A1에 개시된 바와 같은 PEG 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, -Z는 히알루론산 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, -Z는 본 명세서에 참고로 포함되는 WO2018/175788A1에 개시된 바와 같은 히알루론산 기반 하이드로겔이다.
모이어티 -L1-은 IL-2 모이어티를 통해, 특히 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기를 통해, 또는 -D에 존재하는 변형 모이어티 Mmod를 통해 -D에 부착될 수 있다. 한 실시양태에서, -L1-은 IL-2 모이어티를 통해, 특히 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기를 통해 -D에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, -L1-은 -D에 존재하는 변형 모이어티 Mmod를 통해 -D에 부착된다. 하나 이상의 모이어티 -L1-은 모이어티 Mmod에 부착될 수 있는 것으로 이해된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 IL-2 접합체에 존재하는 모든 모이어티 -L1-은 -D의 아미노산 잔기에 부착된다.
-L1-이 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기에 부착된 경우, 그러한 아미노산 잔기는 -D의 단백질 생성 또는 비-단백질 생성 아미노산 잔기일 수 있다. 한 실시양태에서, -L1-은 비-단백질 생성 아미노산 잔기, 바람직하게는 상기 설명된 바와 같은 비-단백질 생성 아미노산에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, -L1-의 부착은 단백질 생성 아미노산 잔기에 대해 이루어진다. 단백질 생성 아미노산 잔기에서 부착이 발생하는 경우, 상기 단백질 생성 아미노산 잔기는 특정 실시양태에서 시스테인, 메티오닌, 히스티딘, 라이신, 트립토판, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 이러한 단백질 생성 아미노산 잔기는 시스테인, 히스티딘, 라이신, 트립토판, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루탐산 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, -L1-은 -D의 시스테인 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 C57 및 C104로 이루어지는 군으로부터 선택되는 시스테인 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 시스테인 잔기를 포함하는 경우, 자연적으로 발생하거나 첨가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 상기 시스테인 잔기에서도 부착이 발생할 수 있다. 서열 번호 2의 시스테인 잔기 중 1개 또는 2개는 각각 1개 또는 2개의 모이어티 -Z를 -D에 부착시키기 위해 사용될 수 있는 것으로 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 시스테인 잔기를 갖는 경우, -Z의 부착을 위해 2개 초과의 시스테인 잔기가 사용될 수 있고, 즉 상기 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 시스테인 잔기가 -Z의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -Z가 하나의 시스테인 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -Z가 2개의 시스테인 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 -D의 히스티딘 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 H15, H54 및 H78로 이루어지는 군으로부터 선택되는 히스티딘 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 히스티딘 잔기를 포함하는 경우, 자연적으로 발생하거나 또는 추가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 이러한 히스티딘 잔기에서도 부착이 발생할 수 있다. 서열 번호 2의 히스티딘 잔기 중 1, 2 또는 3개는 각각 1, 2 또는 3개의 모이어티 -L1-를 부착시키기 위해 사용될 수 있는 것으로 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 히스티딘 잔기를 갖는 경우, -D에 대한 -L1-의 부착을 위해 3개 초과의 히스티딘 잔기가 사용될 수 있고, 즉 상기 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 히스티딘 잔기가 -L1-의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -L1-이 하나의 히스티딘 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 2개의 히스티딘 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 3개의 히스티딘 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 라이신 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 K7, K8, K31, K34, K42, K47, K48, K53, K63, K75 또는 K96으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 라이신 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 라이신 잔기를 포함하는 경우, 자연적으로 발생하거나 또는 추가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 이러한 라이신 잔기에서도 부착이 발생할 수 있다. 서열 번호 2의 라이신 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11개가 각각 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11개의 모이어티 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 동족체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 라이신 잔기를 갖는 경우, 11개 초과의 라이신 잔기가 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 라이신 잔기가 -L1-의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -L1-이 하나의 라이신 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 2개의 라이신 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 3개의 라이신 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 4개의 모이어티 -L1-이 4개의 라이신 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 5개의 모이어티 -L1-이 5개의 라이신 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 6개의 모이어티 -L1-이 6개의 라이신 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 트립토판 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 위치 W120의 트립토판 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 트립토판 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 자연적으로 발생하거나 첨가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 상기 트립토판 잔기에서도 발생할 수 있다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 트립토판 잔기를 갖는 경우, 하나 초과의 트립토판 잔기가 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 트립토판 잔기가 -L1-의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 1개의 모이어티 -L1-이 하나의 트립토판 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 세린 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 S3, S4, S5, S74, S86, S98, S124, S126 및 S129로 이루어지는 군으로부터 선택되는 세린 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 세린 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 자연적으로 발생하거나 첨가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 상기 세린 잔기에서도 발생할 수 있다. 서열 번호 2의 세린 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개가 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 동족체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 세린 잔기를 갖는 경우, 9개 초과의 세린 잔기가 -D에 대한 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 세린 잔기가 -L1-의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -L1-이 하나의 세린 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 2개의 세린 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 3개의 세린 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 4개의 모이어티 -L1-이 4개의 세린 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 5개의 모이어티 -L1-이 5개의 세린 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 6개의 모이어티 -L1-이 6개의 세린 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 트레오닌 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 T2, T6, T9, T36, T40, T50, T100, T102, T110, T112, T122, T130으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 트레오닌 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 트레오닌 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 자연적으로 발생하거나 첨가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 상기 트레오닌 잔기에서도 발생할 수 있다. 서열 번호 2의 트레오닌 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개가 각각 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 모이어티 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 동족체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 트레오닌 잔기를 갖는 경우, 13개 초과의 트레오닌 잔기가 -D에 대한 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 트레오닌 잔기가 -L1-의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -L1-이 하나의 트레오닌 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 2개의 트레오닌 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 3개의 트레오닌 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 4개의 모이어티 -L1-이 4개의 트레오닌 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 5개의 모이어티 -L1-이 5개의 트레오닌 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 6개의 모이어티 -L1-이 6개의 트레오닌 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 티로신 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 Y30, Y44 및 Y106으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 티로신 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 티로신 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 자연적으로 발생하거나 첨가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 상기 티로신 잔기에서도 발생할 수 있다. 서열 번호 2의 티로신 잔기 중 1, 2 또는 3개가 각각 1, 2 또는 3개의 모이어티 -L1-을 -D에 부착시키기 위해 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 동족체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 티로신 잔기를 갖는 경우, 3개 초과의 티로신 잔기가 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 티로신 잔기가 -D에 대한 -L1-의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -L1-이 하나의 티로신 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 2개의 티로신 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 3개의 티로신 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 아스파르트산 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 D19, D83 및 D108로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아스파르트산 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 아스파르트산 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 자연적으로 발생하거나 첨가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 상기 아스파르트산 잔기에서도 발생할 수 있다. 서열 번호 2의 아스파르트산 잔기 중 1, 2 또는 3개가 각각 1, 2 또는 3개의 모이어티 -L1-의 부착에 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 동족체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 아스파르트산 잔기를 갖는 경우, 3개 초과의 아스파르트산 잔기가 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 아스파르트산 잔기가 -D에 대한 -L1-의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -L1-이 하나의 아스파르트산 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 2개의 아스파르트산 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 3개의 아스파르트산 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 글루탐산 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 E14, E51, E59, E60, E61, E66, E67, E94, E99, E105, E109 및 E115로 이루어지는 군으로부터 선택되는 글루탐산 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 글루탐산 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 자연적으로 발생하거나 첨가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 상기 글루탐산 잔기에서도 발생할 수 있다. 서열 번호 2의 글루탐산 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개가 각각 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 모이어티 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 동족체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 글루탐산 잔기를 갖는 경우, 12개 초과의 글루탐산 잔기가 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 글루탐산 잔기가 -L1-의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -L1-이 하나의 글루탐산 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 2개의 글루탐산 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 3개의 글루탐산 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 4개의 모이어티 -L1-이 4개의 글루탐산 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 5개의 모이어티 -L1-이 5개의 글루탐산 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 6개의 모이어티 -L1-이 6개의 글루탐산 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 아르기닌 잔기, 예를 들어 서열 번호 2에 기초하여 R37, R80, R82 및 R119로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아르기닌 잔기에 또는 서열 번호 2의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에 부착된다. IL-2의 상동체 또는 변이체가 서열 번호 2와 비교하여 하나 이상의 추가의 아르기닌 잔기를 포함하는 경우, 부착은 또한 자연적으로 발생하거나 첨가, 삽입 또는 돌연변이의 결과일 수 있는 상기 아르기닌 잔기에서도 발생할 수 있다. 서열 번호 2의 아르기닌 잔기 중 1, 2, 3 또는 4개가 1, 2, 3 또는 4개의 모이어티 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있음이 이해된다. IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 동족체 또는 변이체이고 서열 번호 2의 IL-2 모이어티보다 더 많은 아르기닌 잔기를 갖는 경우, 4개 초과의 아르기닌 잔기가 -L1-의 부착을 위해 사용될 수 있고, 즉, 이러한 상동체 또는 변이체에 존재하는 최대 수 이하의 아르기닌 잔기가 -L1-의 부착에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -L1-이 하나의 아르기닌 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 2개의 아르기닌 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 3개의 아르기닌 잔기에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 4개의 모이어티 -L1-이 4개의 아르기닌 잔기에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, 적어도 하나의 모이어티 -L1-은 -D의 아미노산 잔기에 부착되고, 나머지 모이어티/모이어티들 -L1-은 -D에 존재하는 변형 모이어티에 부착된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 IL-2 접합체에 존재하는 모든 모이어티 -L1-은 -D에 존재하는 변형 모이어티에 부착된다. 한 실시양태에서, 하나의 모이어티 -L1-이 -D의 하나의 변형 모이어티에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 하나의 변형 모이어티, 즉 동일한 변형 모이어티에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 하나의 변형 모이어티에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 4개의 모이어티 -L1-이 하나의 변형 모이어티에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 5개의 모이어티 -L1-이 하나의 변형 모이어티에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 6개의 모이어티 -L1-이 하나의 변형 모이어티에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 2개의 모이어티 -L1-이 2개의 변형 모이어티, 즉 변형 모이어티당 하나의 모이어티 -L1-에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 3개의 모이어티 -L1-이 3개의 변형 모이어티, 즉 변형 모이어티당 하나의 모이어티 -L1-에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 4개의 모이어티 -L1-이 4개의 변형 모이어티에 부착되고, 즉 하나의 모이어티 -L1-이 변형 모이어티당 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 5개의 모이어티 -L1-이 5개의 변형 모이어티, 즉 변형 모이어티당 하나의 모이어티에 부착된다. 또 다른 실시양태에서, 총 6개의 모이어티 -L1-이 6개의 변형 모이어티에 부착되고 , 즉 하나의 -L1-이 변형 모이어티당 부착된다.
한 실시양태에서, -L1-은 WO 2009/095479 A2에 개시된 구조를 갖는다. 따라서, 한 실시양태에서, 모이어티 -L1-은 하기 화학식 (II)로 표시된다:
Figure pct00036
여기서, 점선은 아마이드 결합을 형성함으로써 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
-X-는 -C(R4R4a)-; -N(R4)-; -O-; -C(R4R4a)-C(R5R5a)-; -C(R5R5a)-C(R4R4a)-; -C(R4R4a)-N(R6)-; -N(R6)-C(R4R4a)-; -C(R4R4a)-O-; -O-C(R4R4a)-; 또는 -C(R7R7a)-이고;
X1은 C; 또는 S(O)이고;
-X2-는 -C(R8R8a)-; 또는 -C(R8R8a)-C(R9R9a)-이고;
=X3은 =O; =S; 또는 =N-CN이고;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R4, -R4a, -R5, -R5a, -R6, -R8, -R8a, -R9, -R9a는 독립적으로 -H; 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R3, -R3a는 독립적으로 -H; 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기서 -R3, -R3a 중 어느 하나 또는 둘 모두가 -H가 아닌 경우에 이들은 이들이 SP3-혼성화된(hybridized) 탄소 원자를 통해 부착되는 N에 연결되고;
-R7은 -N(R10R10a); 또는 -NR10-(C=O)-R11이고;
-R7a, -R10, -R10a, -R11은 서로 독립적으로 -H; 및 C1-6 알킬이고;
선택적으로, 쌍 -R1a/-R4a, -R1a/-R5a, -R1a/-R7a, -R4a/-R5a, -R8a/-R9a 중 하나 이상의 쌍은 화학적 결합을 형성하고;
선택적으로, 쌍 -R1/-R1a, -R2/-R2a, -R4/-R4a, -R5/-R5a, -R8/-R8a, -R9/-R9a 중 하나 이상의 쌍은 이들이 부착되는 원자와 함께 연결되어 C3-10 사이클로알킬 또는 3 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성하고;
선택적으로, 쌍 -R1/-R4, -R1/-R5, -R1/-R6, -R1/-R7a, -R4/-R5, -R4/-R6, -R8/-R9, -R2/-R3 중 하나 이상의 쌍은 이들이 부착되는 원자와 함께 연결되어 고리 A를 형성하고;
선택적으로, R3/R3a는 이들이 부착되는 질소 원자와 함께 연결되어 3 내지 10원 헤테로사이클을 형성하고;
A는 페닐; 나프틸; 인데닐; 인다닐; 테트라리닐; C3-10 사이클로알킬; 3 내지 10원 헤테로사이클릴; 및 8 원 내지 11원 헤테로비사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-L1-은 적어도 하나의 -L2-Z로 치환되고, 여기서 -L1-은 화학식 (II)에서 별표로 표시된 수소가 -L2-Z 또는 치환체로 대체되지 않는 한, 선택적으로 추가로 치환된다.
바람직하게는, 화학식 (II)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
한 실시양태에서, 화학식 (II)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
화학식 (II)의 -R3/-R3a가 이들이 부착되는 질소 원자와 함께 연결되어 3 내지 10원 헤테로사이클을 형성하는 경우, 질소에 직접 부착된 원자가 SP3-혼성화된 탄소 원자인 상기 3 내지 10원 헤테로사이클만이 형성될 수 있는 것으로 이해된다. 즉, 이들이 부착되는 질소 원자와 함께 -R3/-R3a에 의해 형성된 상기 3 내지 10원 헤테로사이클은 다음 구조를 갖는다:
Figure pct00037
여기서,
점선은 -L1-의 나머지 부분에 대한 부착을 나타내고;
고리는 적어도 하나의 질소를 포함하는 3 내지 10개의 원자를 포함하고;
R# 및 R##는 SP3-혼성화된 탄소 원자를 나타낸다.
3 내지 10원 헤테로사이클이 추가로 치환될 수 있음이 또한 이해된다.
이들이 부착되는 질소 원자와 함께 화학식 (II)의 -R3/-R3a에 의해 형성된 적합한 3 내지 10원 헤테로사이클의 예시적인 실시양태는 다음과 같다:
Figure pct00038
여기서,
점선은 분자의 나머지 부분에 대한 부착을 나타내고;
-R은 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
화학식 (II)의 -L1-은 선택적으로 추가로 치환될 수 있다. 일반적으로, 절단 원리가 영향을 받지 않는 한, 임의의 치환체를 사용할 수 있고, 즉, 화학식 (II)에서 별표로 표시된 수소가 대체되지 않고, 화학식 (II)의 모이어티
Figure pct00039
의 질소는 1차, 2차 또는 3차 아민의 일부로 남아있고, 즉 -R3 및 -R3a는 서로 독립적으로 -H이거나 또는 SP3-혼성화된 탄소 원자를 통해 -N<에 연결된다.
한 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R1 또는 -R1a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R2 또는 -R2a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R3 또는 -R3a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R4는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R5 또는 -R5a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R6은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R7 또는 -R7a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R8 또는 -R8a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R9 또는 -R9a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 WO2016/020373A1에 개시된 바와 같은 구조를 갖는다. 따라서, 또 다른 실시양태에서, 모이어티 -L1-은 화학식 (III)으로 표시된다:
Figure pct00040
여기서,
점선은 각각 아마이드 또는 에스테르 결합을 형성함으로써 -D의 1차 또는 2차 아민 또는 하이드록실에 대한 부착을 나타내고;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R3 및 -R3a는 서로 독립적으로 -H, -C(R8R8aR8b), -C(=O)R8, -C≡N, -C(=NR8)R8a, -CR8(=CR8aR8b), -C≡R8 및 -T로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R4, -R5 및 -R5a는 서로 독립적으로 -H, -C(R9R9aR9b) 및 -T로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
a1 및 a2는 서로 독립적으로 0 또는 1이고;
각각의 -R6, -R6a, -R7, -R7a, -R8, -R8a, -R8b, -R9, -R9a, -R9b는 서로 독립적으로 -H, 할로겐, -CN, -COOR10, -OR10, -C(O)R10, -C(O)N(R10R10a), -S(O)2N(R10R10a), -S(O)N(R10R10a), -S(O)2R10, -S(O)R10, -N(R10)S(O)2N(R10aR10b), -SR10, -N(R10R10a), -NO2, -OC(O)R10, -N(R10)C(O)R10a, -N(R10)S(O)2R10a, -N(R10)S(O)R10a, -N(R10)C(O)OR10a, -N(R10)C(O)N(R10aR10b), -OC(O)N(R10R10a), -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서 -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 선택적으로 치환되고, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R12)-, -S(O)2N(R12)-, -S(O)N(R12)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R12)S(O)2N(R12a)-, -S-, -N(R12)-, -OC(OR12)(R12a)-, -N(R12)C(O)N(R12a)-, 및 -OC(O)N(R12)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
각각의 -R10, -R10a, -R10b는 서로 독립적으로 -H, -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서 -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 선택적으로 치환되고, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R12)-, -S(O)2N(R12)-, -S(O)N(R12)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R12)S(O)2N(R12a)-, -S-, -N(R12)-, -OC(OR12)(R12a)-, -N(R12)C(O)N(R12a)-, 및 -OC(O)N(R12)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 및 8 내지 11원 헤테로비사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R11은 서로 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR13, -OR13, -C(O)R13, -C(O)N(R13R13a), -S(O)2N(R13R13a), -S(O)N(R13R13a), -S(O)2R13, -S(O)R13, -N(R13)S(O)2N(R13aR13b), -SR13, -N(R13R13a), -NO2, -OC(O)R13, -N(R13)C(O)R13a, -N(R13)S(O)2R13a, -N(R13)S(O)R13a, -N(R13)C(O)OR13a, -N(R13)C(O)N(R13aR13b), -OC(O)N(R13R13a), 및 C1-6 알킬로부터 선택되고, 여기서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -R12, -R12a, -R13, -R13a, -R13b는 서로 독립적으로 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
선택적으로, 쌍 -R1/-R1a, -R2/-R2a, -R3/-R3a, -R6/-R6a, -R7/-R7a 중 하나 이상의 쌍은 이들이 부착되는 원자와 함께 연결되어 C3-10 사이클로알킬 또는 3 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성하고;
선택적으로, 쌍 -R1/-R2, -R1/-R3, -R1/-R4, -R1/-R5, -R1/-R6, -R1/-R7, -R2/-R3, -R2/-R4, -R2/-R5, -R2/-R6, -R2/-R7, -R3/-R4, -R3/-R5, -R3/-R6, -R3/-R7, -R4/-R5, -R4/-R6, -R4/-R7, -R5/-R6, -R5/-R7, -R6/-R7 중 하나 이상의 쌍은 이들이 부착되는 원자와 함께 연결되어 고리 A를 형성하고;
A는 페닐; 나프틸; 인데닐; 인다닐; 테트라리닐; C3-10 사이클로알킬; 3 내지 10원 헤테로사이클릴; 및 8 내지 11원 헤테로비사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-L1-은 적어도 하나의 -L2-Z로 치환되고, 여기서 -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
화학식 (III)의 -L1-의 선택적인 추가의 치환체는 바람직하게는 상기 설명된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식 (III)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
한 실시양태에서, 화학식 (III)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 본 명세서에 참고로 포함되는 EP1536334B1, WO2009/009712A1, WO2008/034122A1, WO2009/143412A2, WO2011/082368A2, 및 US8618124B2에 개시된 구조를 갖는다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 본 명세서에 참고로 포함되는 US8946405B2 및 US8754190B2에 개시된 구조를 갖는다. 따라서, 또 다른 실시양태에서, -L1-은 하기 화학식 (IV)로 표시된다:
Figure pct00041
여기서,
점선은 -OH, -SH 및 -NH2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 -D의 작용기를 통한 -D에 대한 부착을 나타내고;
m은 0 또는 1이고;
-R1 및 -R2 중 적어도 하나 또는 둘 모두는 서로 독립적으로 -CN, -NO2, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알키닐, -C(O)R3, -S(O)R3, -S(O)2R3, 및 -SR4로 이루어지는 군으로부터 선택되고,
-R1 및 -R2 중 단지 하나는 -H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴알킬 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R3은 -H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR9 및 -N(R9)2로 이루어지는 군으로부터 선택되고 ;
-R4는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 독립적으로 -H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐알킬, 선택적으로 치환된 알키닐알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R9는 -H 및 선택적으로 치환된 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Y-는 부재하고, -X-는 -O- 또는 -S-이거나; 또는
-Y-는 -N(Q)CH2-이고 -X-는 -O-이고;
Q는 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
선택적으로, -R1 및 -R2는 연결되어 3 내지 8원 고리를 형성할 수 있으며;
선택적으로, 두 -R9는 이들이 부착되는 질소와 함께 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
여기서, -L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
단지 화학식 (IV)의 맥락에서 사용되는 용어는 다음과 같은 의미를 갖는다:
본 명세서에서 사용되는 용어 "알킬"은 1 내지 8개의 탄소, 또는 일부 실시양태에서 1 내지 6개 또는 1 내지 4개의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소 기를 포함한다.
용어 "알콕시"는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 사이클로프로폭시, 사이클로부톡시 등을 비롯하여, 산소에 결합된 알킬기를 포함한다.
용어 "알케닐"은 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 비-방향족 불포화 탄화수소를 포함한다.
용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 비-방향족 불포화 탄화수소를 포함한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라세닐과 같은 기를 비롯하여, 6 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함한다. 용어 "헤테로아릴"은 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 등을 비롯하여, 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3 내지 15개의 탄소, 바람직하게는 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3 내지 7개의 탄소를 포함하는 방향족 고리를 포함한다.
일부 예에서, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 알킬렌 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 커플링될 수 있다. 이러한 상황에서, 치환체는 알케닐알킬, 알키닐알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬로 지칭될 것이며, 이것은 알킬렌 모이어티가 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티와, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴이 커플링된 분자 사이에 존재함을 나타낸다.
용어 "할로겐"은 브로모, 플루오로, 클로로 및 아이오도를 포함한다.
용어 "헤테로시클릭 고리"는 3 내지 7개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 4 내지 8원 방향족 또는 비-방향족 고리를 지칭한다. 그 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리딘 및 테트라하이드로푸라닐뿐만 아니라, 상기 용어 "헤테로아릴"에 대해 제공된 예시적인 기이다.
고리 시스템이 선택적으로 치환될 때, 적합한 치환체는 알킬, 알케닐, 알키닐, 또는 각각 선택적으로 추가로 치환된 추가의 고리로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 상기 치환체를 포함하는 임의의 기 상의 임의의 치환체는 할로, 니트로, 시아노, -OR, -SR, -NR2, -OCOR, -NRCOR, -COOR, -CONR2, -SOR, -S02R, -SONR2, -S02NR2를 포함하고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴이거나, 2개의 R기가 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다.
바람직하게는, 화학식 (IV)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 본 명세서에 참고로 포함되는 WO2013/036857A1에 개시된 구조를 갖는다. 따라서, 또 다른 실시양태에서 -L1-은 하기 화학식 (V)로 표시된다:
Figure pct00042
여기서,
점선은 -D의 아민 작용기를 통한 -D에 대한 부착을 나타내고;
-R1은 선택적으로 치환된 C1-6 선형, 분지형 또는 시클릭 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 선택적으로 치환된 헤테로아릴; 알콕시; 및 -NR5 2로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R2는 -H, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R3은 -H, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R4는 -H, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 서로 독립적으로 -H, 선택적으로 치환된 C1-6 알킬; 선택적으로 치환된 아릴; 및 선택적으로 치환된 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되거나; 또는 2개의 -R5는 함께 사이클로알킬 또는 사이클로헤테로알킬일 수 있고;
여기서, -L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
단지 화학식 (V)의 맥락에서 사용되는 용어는 다음과 같은 의미를 갖는다:
"알킬", "알케닐" 및 "알키닐"은 1-8개의 탄소 또는 1-6개의 탄소 또는 1-4개의 탄소의 선형, 분지형 또는 시클릭 탄화수소 기를 포함하며, 여기서 알킬은 포화 탄화수소이고, 알케닐은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고, 알키닐은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함한다. 달리 명시하지 않는 한, 이들은 1-6 C를 포함한다.
"아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라센과 같은 기를 비롯하여, 6 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함한다. "헤테로아릴"은 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 등을 비롯하여, 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3 내지 15개의 탄소, 바람직하게는 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3 내지 7개의 탄소를 포함하는 방향족 고리를 포함한다.
용어 "치환된"은 하나 이상의 수소 원자 대신에 하나 이상의 치환체를 포함하는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 기를 의미한다. 치환체는 일반적으로 F, Cl, Br 및 I를 포함하는 할로겐; 선형, 분지형 및 시클릭을 포함하는 저급 알킬; 플루오로알킬, 클로로알킬, 브로모알킬 및 아이오도알킬을 포함하는 저급 할로알킬; OH; 선형, 분지형 및 시클릭을 포함하는 저급 알콕시; SH; 선형, 분지형 및 시클릭을 포함하는 저급 알킬티오; 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노; 알킬실릴, 알콕시실릴 및 아릴실릴을 포함하는 실릴; 니트로; 시아노; 카르보닐; 카르복실산, 카르복실산 에스테르, 카르복실산 아마이드, 아미노카르보닐; 아미노아실; 카르바메이트; 우레아; 티오카르바메이트; 티오우레아; 케톤; 설폰; 설폰아마이드; 페닐, 나프틸 및 안트라세닐을 포함하는 아릴; 피롤, 이미다졸, 푸란, 티오펜, 옥사졸, 티아졸, 이속사졸, 이소티아졸, 티아디아졸, 트리아졸, 옥사디아졸 및 테트라졸을 포함하는 5원 헤테로아릴, 피리딘, 피리미딘 및 피라진을 포함하는 6원 헤테로아릴, 및 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤즈옥사졸, 벤즈이미다졸, 인돌, 벤조티아졸, 벤즈이속사졸 및 벤즈이소티아졸을 포함하는 융합된 헤테로아릴을 포함하는 헤테로아릴로부터 선택될 수 있다.
바람직하게는, 화학식 (V)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 US7585837B2에 개시된 바와 같은 구조를 가지며, 이는 본 명세서에 참고로 포함된다. 따라서, 또 다른 실시양태에서 -L1-은 하기 화학식 (VI)으로 표시된다:
Figure pct00043
여기서,
점선은 -D의 아민 작용기를 통한 -D에 대한 부착을 나타내고;
R1 및 R2는 수소, 알킬, 알콕시, 알콕시알킬, 아릴, 알크아릴, 아르알킬, 할로겐, 니트로, -SO3H, -SO2NHR5, 아미노, 암모늄, 카르복실, PO3H2, 및 OPO3H2로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R3, R4 및 R5는 수소, 알킬 및 아릴로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
여기서, -L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
화학식 (VI)에 적합한 치환체는 알킬(예를 들어, C1-6 알킬), 알케닐(예를 들어, C2-6 알케닐), 알키닐(예를 들어, C2-6 알키닐), 아릴(예를 들어, 페닐), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로아릴(예를 들어, 방향족 4 내지 7원 헤테로사이클) 또는 할로겐 모이어티이다.
단지 화학식 (VI)의 맥락에서 사용되는 용어는 다음과 같은 의미를 갖는다:
용어 "알킬", "알콕시", "알콕시알킬", "아릴", "알크아릴" 및 "아르알킬"은 1-8개, 바람직하게는 1-4개의 탄소 원자의 알킬 라디칼, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필 및 부틸, 및 6-10개의 탄소 원자의 아릴 라디칼, 예를 들어 페닐 및 나프틸을 의미한다. 용어 "할로겐"은 브로모, 플루오로, 클로로 및 아이오도를 포함한다.
바람직하게는, 화학식 (VI)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 본 명세서에 참고로 포함되는 WO2002/089789A1에 개시된 구조를 갖는다. 따라서, 또 다른 실시양태에서, -L1-은 하기 화학식 (VII)로 표시된다:
Figure pct00044
여기서,
점선은 -D의 아민 작용기를 통한 -D에 대한 부착을 나타내고;
L1은 이작용성 연결기이고,
Y1 및 Y2는 독립적으로 O, S 또는 NR7이고;
R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C3-12 분지형 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-6 치환된 알킬, C3-8 치환된 사이클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬, C1-6 헤테로알킬, 치환된 C1-6 헤테로알킬, C1-6 알콕시, 페녹시, 및 C1-6 헤테로알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
Ar은 화학식 (VII)에 포함될 때 다중 치환된 방향족 탄화수소 또는 다중 치환된 헤테로시클릭 기를 형성하는 모이어티이고;
X는 화학 결합 또는 표적 세포로 능동적으로 수송되는 모이어티, 소수성 모이어티 또는 이들의 조합이고,
y는 0 또는 1이고;
여기서, -L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
단지 화학식 (VII)의 맥락에서 사용되는 용어는 다음과 같은 의미를 갖는다:
용어 "알킬"은 예를 들어 알콕시, C3-8 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬 등 을 포함하는 직쇄, 분지형, 치환된 C1-12 알킬을 포함하는 것으로 이해된다.
용어 "치환된"은 작용기 또는 화합물 내에 함유된 하나 이상의 원자를 하나 이상의 상이한 원자로 대체하거나 추가하는 것을 포함하는 것으로 이해된다.
치환된 알킬은 카르복시알킬, 아미노알킬, 디알킬아미노, 하이드록시알킬 및 머캅토알킬을 포함하고; 치환된 사이클로알킬은 4-클로로사이클로헥실과 같은 모이어티를 포함하고; 아릴은 나프틸과 같은 모이어티를 포함하고; 치환된 아릴은 3-브로모-페닐과 같은 모이어티를 포함하고; 아르알킬은 톨루일과 같은 모이어티를 포함하고; 헤테로알킬은 에틸티오펜과 같은 모이어티를 포함하고; 치환된 헤테로알킬은 3-메톡시티오폰과 같은 모이어티를 포함하고; 알콕시는 메톡시와 같은 모이어티를 포함하고; 페녹시는 3-니트로페녹시와 같은 모이어티를 포함한다. 할로-는 플루오로, 클로로, 아이오도 및 브로모를 포함하는 것으로 이해된다.
바람직하게는, 화학식 (VII)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 하기 화학식 (VIII)의 하위 구조를 포함한다:
Figure pct00045
여기서,
별표로 표시된 점선은 아마이드 결합을 형성함으로써 -D의 질소에 부착함을 나타내고;
표시되지 않은 점선은 -L1-의 나머지 부분에 대한 부착을 나타내고;
여기서, -L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
바람직하게는, 화학식 (VIII)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
한 실시양태에서, 화학식 (VIII)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 하기 화학식 (IX)의 하위 구조를 포함한다:
Figure pct00046
여기서,
별표로 표시된 점선은 카르바메이트 결합을 형성함으로써 -D의 질소에 부착함을 나타내고;
표시되지 않은 점선은 -L1-의 나머지 부분에 대한 부착을 나타내고;
여기서, -L1-은 -L2-Z로 치환되고, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
바람직하게는, 화학식 (IX)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z로 치환된다.
한 실시양태에서, 화학식 (IX)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
한 실시양태에서, -L1-은 하기 화학식 (IX-a)로 표시된다:
Figure pct00047
여기서,
별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고, 표시되지 않은 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
=Y1은 =O 및 =S로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Y2-는 -O- 및 -S-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Y3-은 -O- 및 -S-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Y4-는 -O-, -NR5- 및 -C(R6R6a)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
=Y5는 =O 및 =S로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R3, -R5, -R6, -R6a는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-W-는 C3-10 사이클로알킬, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단된 C1-20 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Nu는 -N(R7R7a), -N(R7OH), -N(R7)-N(R7aR7b), -S(R7), -COOH,
Figure pct00048
로 이루어지는 군으로부터 선택되는 친핵체이고;
-Ar-은
Figure pct00049
로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
여기서,
점선은 -L1-의 나머지 부분에 대한 부착을 나타내고;
-Z1-은 -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Z2-는 -N(R7)-이고;
-R7, -R7a, -R7b는 서로 독립적으로 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되며;
여기서, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
한 실시양태에서, 화학식 (IX-a)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 하기 화학식 (IX-b)로 표시된다:
Figure pct00050
여기서,
별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고, 표시되지 않은 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
=Y1은 =O 및 =S로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Y2-는 -O- 및 -S-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Y3-은 -O- 및 -S-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Y4-는 -O-, -NR5- 및 -C(R6R6a)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
=Y5는 =O 및 =S로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R2, -R3, -R5, -R6, -R6a는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-W-는 C3-10 사이클로알킬, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단된 C1-20 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Nu는 -N(R7R7a), -N(R7OH), -N(R7)-N(R7aR7b), -S(R7), -COOH,
Figure pct00051
로 이루어지는 군으로부터 선택되는 친핵체이고;
-Ar-은
Figure pct00052
로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
여기서,
점선은 -L1-의 나머지 부분에 대한 부착을 나타내고;
-Z1-은 -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
-Z2-는 -N(R7)-이고;
-R7, -R7a, -R7b는 서로 독립적으로 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되며;
여기서, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
한 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 =Y1은 =O이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Y2-는 -O-이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Y3-은 -O-이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Y4-는 -NR5-이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 =Y5는 =O이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 n은 0 또는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 n은 0이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 n은 1이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H, 메틸 및 에틸로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H, 메틸 및 에틸로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H이다.
바람직한 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R4는 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R4는 메틸 및 에틸로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 메틸 및 에틸로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 메틸이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 -H, 메틸 및 에틸로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 둘 모두 -H이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 Ar은 페닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 Ar은
Figure pct00053
이다.
여기서, 점선은 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 모이어티의 나머지 부분에 대한 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 C3-10 사이클로알킬, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-에 의해 선택적으로 중단된 C1-20 알킬이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 C3-10 사이클로알킬, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-에 의해 선택적으로 중단된 C1-10 알킬이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 C3-10 사이클로알킬, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-에 의해 선택적으로 중단된 C1-6 알킬이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는
Figure pct00054
이다.
여기서, 점선은 각각 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 모이어티의 나머지 부분에 대한 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Nu는 -N(R7R7a)이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 서로 독립적으로 메틸 또는 에틸로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 둘 모두 메틸이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 하기 화학식 (IX-c)로 표시된다:
Figure pct00055
여기서,
별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
표시되지 않은 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 5이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 하기 화학식 (IX-d)로 표시된다:
Figure pct00056
여기서,
별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고; 표시되지 않은 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타낸다.
모이어티 -L1-은 가역적이라면 임의의 유형의 결합을 통해 -D에 연결될 수 있다. 바람직하게는, -L1-은 아마이드, 에스테르, 카르바메이트, 아세탈, 아미날, 이민, 옥심, 히드라존, 디설파이드 및 아실구아니딘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 결합을 통해 -D에 연결된다. 훨씬 더 바람직하게는, -L1-은 아마이드, 에스테르, 카르바메이트 및 아실구아니딘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 결합을 통해 -D에 연결된다. 이러한 결합은 그 자체로 가역적이지 않을 수 있지만, 가역성은 -L1-에 존재하는 특정 군의 원자 또는 모이어티의 효과일 수 있음이 이해된다.
한 실시양태에서, -L1-은 에스테르 결합을 통해 -D에 연결된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 카르바메이트 결합을 통해 -D에 연결된다.
또 다른 실시양태에서, -L1-은 아실구아니딘을 통해 -D에 연결된다.
바람직한 실시양태에서, -L1-은 아마이드 결합을 통해 -D에 연결된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 -D의 라이신 잔기의 측쇄의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 -D의 라이신 잔기의 측쇄의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결되고, -D와 -L1- 사이에 형성된 결합은 카르바메이트이다. 이러한 라이신 잔기에 대한 실시양태는 상기 설명한 바와 같다.
한 실시양태에서, -L2-는 화학적 결합이다.
또 다른 실시양태에서, -L2-는 스페이서 모이어티이다.
특정 실시양태에서, -L2-는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기서, -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)-, 및 -OC(O)N(Ry3)-으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
-Ry1 및 -Ry1a는 서로 독립적으로 -H, -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)-, 및 -OC(O)N(Ry4)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴 및 8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고;
각각의 -Ry2는 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a), 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 치환되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L2-는 -T-, -C(O)0-, -O-, -C(O)-, -C(O)(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, -T-, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-,-N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)-, 및 -OC(O)N(Ry3)-으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
-Ry1 및 -Ry1a는 서로 독립적으로 -H, -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서 C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, 여기서 C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)-, 및 -OC(O)N(Ry4)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴 및 8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고;
-Ry2는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5,-S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a), 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 서로 독립적으로 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L2-는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)-, 및 -OC(O)N(Ry3)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
-Ry1 및 -Ry1a는 독립적으로 -H, -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴 및 8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
각각의 -Ry2는 독립적으로 할로겐, 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 서로 독립적으로 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L2-는 -O-, -T- 및 -C(O)N(Ry1)-로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단된 C1-20 알킬 사슬이고; 여기서, C1-20 알킬 사슬은 -OH-, -T- 및 -C(O)N(Ry6Ry6a)로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 치환되고, -Ry1, -Ry6, -Ry6a는 독립적으로 H 및 C1-4 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴 및 8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, -L2-는 14 g/mol 내지 750 g/mol 범위의 분자량을 갖는다.
특정 실시양태에서, -L2-는 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 모이어티를 포함한다:
Figure pct00057
Figure pct00058
여기서,
점선은 각각 -L1-, -L2-의 나머지 부분 또는 -Z에 대한 부착을 나타내고;
-R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, -L2-는 하기 화학식 (IX-e)로 표시된다:
Figure pct00059
여기서,
별표로 표시된 점선은 -L1-에 대한 부착을 나타내고;
표시되지 않은 점선은 -Z에 대한 부착을 나타내고;
s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 7이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 8이다.
특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-L2-는 하기 화학식 (IX-f)로 표시된다:
Figure pct00060
여기서,
별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
표시되지 않은 점선은 -Z에 대한 부착을 나타내고;
s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다.
따라서, 화학식 (IX-f)의 화합물에서 형성된 모이어티 -L1- 및 -D 사이의 결합은 카르바메이트이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 5이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 7이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 8이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 3이고, 화학식 (IX-f)의 s2는 3이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 IL-2 접합체는 화학식 (Ia)로 표시되는 것이다. 한 실시양태에서, x는 1이다. 또 다른 실시양태에서, x는 2이다. 또 다른 실시양태에서, x는 3이다. 또 다른 실시양태에서, x는 4이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 IL-2 접합체는 화학식 (Ib)로 표시되는 것이다. 한 실시양태에서, y는 2이다. 또 다른 실시양태에서, y는 3이다. 또 다른 실시양태에서, y는 4이다.
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학 조성물이다.
바람직하게는, 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 pH 3 내지 pH 8 범위의 pH를 갖는다.
한 실시양태에서, 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학 조성물은 액체 제제이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학 조성물은 건조 제제이다.
상기 액체 또는 건조 약학 조성물은 적어도 하나의 부형제를 포함한다. 비경구 제제에 사용되는 부형제는 예를 들어 완충제, 등장성 조절제, 보존제, 안정화제, 흡착 방지제, 산화 보호제, 증점제/점도 향상제 또는 기타 보조제로 분류될 수 있다. 그러나, 어떤 경우에는, 하나의 부형제가 이중 또는 삼중 기능을 가질 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 적어도 하나의 부형제는 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택된다:
(i) 완충제: pH를 원하는 범위 내에서 유지하기 위한 생리학적으로 허용되는 완충제, 예컨대, 인산나트륨, 중탄산염, 석시네이트, 히스티딘, 시트레이트 및 아세테이트, 설페이트, 니트레이트, 클로라이드, 피루베이트; 제산제, 예컨대, Mg(OH)2 또는 ZnCO3도 사용될 수 있음;
(ii) 등장성 조절제: 주사 데포에서의 삼투압 차이로 인한 세포 손상으로부터 발생할 수 있는 통증을 최소화하기 위한 것이고; 글리세린 및 염화나트륨이 예이며; 유효 농도는 혈청에 대한 285-315 mOsmol/kg의 가정된 오스몰농도를 이용함으로써 삼투압 측정에 의해 결정될 수 있음;
(iii) 보존제 및/또는 항미생물제: 다회용량 비경구 제제는 주사시에 환자가 감염될 위험을 최소화하기에 충분한 농도의 보존제의 첨가를 필요로 하고, 상응하는 규제 요건은 확립되어 있고; 전형적인 보존제는 m-크레졸, 페놀, 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 부틸파라벤, 클로로부탄올, 벤질 알코올, 페닐질산수은, 티메로살, 소르브산, 소르브산칼륨, 벤조산, 클로로크레졸 및 염화벤즈알코늄을 포함함;
(iv) 안정화제: 안정화는 단백질 안정화 힘의 강화, 변성된 상태의 불안정화, 또는 부형제의 단백질에 대한 직접적인 결합에 의해 달성되고; 안정화제는 아미노산, 예컨대, 알라닌, 아르기닌, 아스파르트산, 글리신, 히스티딘, 라이신, 프롤린, 당, 예컨대, 글루코스, 수크로스, 트레할로스, 폴리올, 예컨대, 글리세롤, 만니톨, 소르비톨, 염, 예컨대, 인산칼륨, 황산나트륨, 킬레이팅제, 예컨대, EDTA, 헥사포스페이트, 리간드, 예컨대, 2가 금속 이온(아연, 칼슘 등), 다른 염 또는 유기 분자, 예컨대, 페놀계 유도체일 수 있고; 추가로, 올리고머 또는 중합체, 예컨대, 사이클로덱스트린, 덱스트란, 덴드리머, PEG 또는 PVP 또는 프로타민 또는 HSA가 사용될 수 있음;
(v) 흡착 방지제: 주로 이온성 또는 비이온성 계면활성제 또는 다른 단백질 또는 가용성 중합체, 예를 들면, 폴록사머(Pluronic F-68), PEG 도데실 에테르(Brij 35), 폴리소르베이트 20 및 80, 덱스트란, 폴리에틸렌 글리콜, PEG-폴리히스티딘, BSA 및 HSA, 및 젤라틴이 제제의 용기의 내부 표면에 경쟁적으로 코팅되거나 흡착되는 데 사용되고; 부형제의 선택된 농도 및 유형은 피하고자 하는 효과에 의해 좌우되지만, 전형적으로는 계면활성제의 단일층이 CMC 값 바로 위의 수준으로 계면에서 형성됨;
(vi) 산화 방지제: 항산화제, 예컨대, 아스코르브산, 엑토인, 메티오닌, 글루타티온, 모노티오글리세롤, 모린, 폴리에틸렌이민(PEI), 프로필 갈레이트 및 비타민 E; 킬레이팅제, 예컨대, 시트르산, EDTA, 헥사포스페이트 및 티오글리콜산도 사용될 수 있음;
(vii) 증점제 또는 점도 향상제: 바이알 및 주사기 내에서의 입자의 침전을 지연시키고, 입자의 혼합 및 재현탁을 용이하게 하고 현탁액을 주사하기에 더 용이하게 만들기 위해(즉, 주사기 플런저에 가해지는 힘을 낮추기 위해) 사용되고; 적합한 증점제 또는 점도 향상제는 예를 들면, 카르보머 증점제, 예컨대, 카보폴(Carbopol) 940, 카보폴 울트레즈(Ultrez) 10, 셀룰로스 유도체, 예컨대, 하이드록시프로필메틸셀룰로스(하이프로멜로스, HPMC) 또는 디에틸아미노에틸 셀룰로스(DEAE 또는 DEAE-C), 콜로이드성 규산마그네슘(Veegum) 또는 규산나트륨, 하이드록시아파타이트 겔, 인산삼칼슘 겔, 잔탄, 카라기난, 예컨대, 사티아(Satia) 검 UTC30, 지방족 폴리(하이드록시산), 예컨대, 폴리(D,L- 또는 L-락트산)(PLA) 및 폴리(글리콜산)(PGA) 및 이들의 공중합체(PLGA), D,L-락타이드, 글리콜라이드 및 카프로락톤의 삼원중합체, 폴록사머, 폴리(옥시에틸렌)-폴리(옥시프로필렌)-폴리(옥시에틸렌)의 삼중 블록(예를 들면, Pluronic®)을 구성하는 친수성 폴리(옥시에틸렌) 블록 및 소수성 폴리(옥시프로필렌) 블록, 폴리에테르에스테르 공중합체, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜 테레프탈레이트/폴리부틸렌 테레프탈레이트 공중합체, 수크로스 아세테이트 이소부티레이트(SAIB), 덱스트란 또는 이의 유도체, 덱스트란과 PEG의 조합물, 폴리디메틸실록산, 콜라겐, 키토산, 폴리비닐 알코올(PVA) 및 유도체, 폴리알킬이미드, 폴리(아크릴아마이드-코-디알릴디메틸 암모늄(DADMA)), 폴리비닐피롤리돈(PVP), 글리코스아미노글리칸(GAG), 예컨대, 데르마탄 설페이트, 콘드로이틴 설페이트, 케라탄 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 히알루로난, 소수성 A-블록, 예컨대, 폴리락타이드(PLA) 또는 폴리(락타이드-코-글리콜라이드)(PLGA) 및 친수성 B-블록, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리비닐 피롤리돈으로 구성된 ABA 삼중 블록 또는 AB 블록 공중합체이고; 이러한 블록 공중합체뿐만 아니라 상기 언급된 폴록사머도 가역적 열 겔화 거동(투여를 용이하게 하기 위해 실온에서 유체 상태, 및 주사 후 체온에서 졸-겔 전이 온도보다 더 높은 겔 상태)을 나타낼 수 있음;
(viii) 분산제 또는 확산제: 결합 조직의 세포간 공간에서 발견되는 폴리사카라이드인 히알루론산과 같은, 그러나, 이것으로 한정되지 않는, 간질 공간 내의 세포외 매트릭스의 성분의 가수분해를 통해 결합 조직의 투과성을 변형시킴; 히알루로니다제와 같은, 그러나, 이것으로 한정되지 않는 분산제는 세포외 매트릭스의 점도를 일시적으로 감소시키고 주사된 약물의 확산을 촉진함; 및
(ix) 다른 보조제: 예컨대, 습윤화제, 점도 조절제, 항생제, 히알루로니다제; 산 및 염기, 예컨대, 염산 및 수산화나트륨은 제조 동안 pH를 조절하기 위해 필요한 보조제임.
본 발명의 또 다른 측면은 의약으로서 사용하기 위한, IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물이다.
본 발명의 또 다른 측면은 IL-2로 치료될 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한, IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물이다.
바람직하게는, 상기 질환은 암이다. 훨씬 더 바람직하게는, 상기 질환은 육종, 척색종, 결장암, 직장암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평세포암, 기저세포암, 선암종, 땀샘암, 피지샘암, 유두암, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질암, 기관지원성 암, 신세포암, 간세포암, 담관암, 융모막 암종, 정상피종, 배아암, 윌름스(Wilms) 종양, 자궁경부암, 고환암, 위암, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 신세포 암종, 요로상피암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관 모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경 모세포종, 망막 모세포종, 비-호지킨(Hodgkin) 림프종, 피부 T 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병 및 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 흑색종, 신장세포 암종, 요로상피암, 유방암, 결장직장암, 위암 및 육종으로 이루어지는 군에서 선택되는 질환이 훨씬 더 바람직하다.
바람직한 유형의 육종은 섬유육종, 점액육종, 평활근육종, 지방육종, 연골육종, 골형성 육종, 혈관육종, 내피육종, 위장관 기질 종양, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 활막 육종, 중피종, 유잉(Ewing) 육종, 평활근육종 및 횡문근 육종을 포함한다.
한 실시양태에서, IL-2로 치료될 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 추가의 약물의 투여 전에, 상기 투여와 동시에 또는 상기 투여 후에 환자에게 투여되고, 여기서 하나 이상의 추가의 약물은 바람직하게는 PD-1 억제제; PD-L1 억제제; CTLA-4 억제제; 암 백신, 예를 들어 종양 세포 백신, 항원 백신, 수지상 세포 백신, 벡터 기반 백신; TLR(Toll-유사 수용체 아고니스트)2, TLR3, TLR2/4, TLR4, TLR5, TLR7/8 및 TLR9를 표적으로 하는 아고니스트를 포함하는 TLR; 및 면역 활성화 수용체를 아고나이징하는 약제, 예를 들어 41BB(CD137), 0X40, ICOS, CD40, CD28, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, LLA1, CD16, CD64, CD32A 및 CD3으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, IL-2로 치료될 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 추가의 약물의 투여 전에, 상기 투여와 동시에 또는 상기 투여 후에 환자에게 투여되고, 여기서 하나 이상의 추가의 약물은 바람직하게는 PD-1 억제제; PD-L1 억제제; CTLA-4 억제제; 암 백신, 예를 들어 종양 세포 백신, 항원 백신, 수지상 세포 백신, 벡터 기반 백신; 및 TLR2, TLR3, TLR2/4, TLR4, TLR5, TLR7/8 및 TLR9를 표적으로 하는 아고니스트를 포함하는 TLR로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 하나 이상의 추가의 약물과 함께 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 것은 1회 시행될 수 있거나, 다수회 반복될 수 있다.
한 실시양태에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙이다. 또 다른 실시양태에서, PD-1 억제제는 니볼루맙이다.
한 실시양태에서, PD-L1 억제제는 아테졸리주맙이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L1 억제제는 아벨루맙이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L1 억제제는 두르발루맙이다.
한 실시양태에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙이다. 또 다른 실시양태에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙이다.
또 다른 실시양태에서, IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 CAR-T 요법 전에, 상기 요법과 동시에 또는 상기 요법 후에 환자에게 투여된다. CAR-T 요법과 조합하여 상기 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 것은 1회 시행될 수 있거나, 다수회 반복될 수 있다.
바람직하게는, 치료에 사용하기 위한 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 포유동물 환자, 바람직하게는 인간 환자에게 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면은 IL-2로 치료될 수 있는 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물의 용도이다.
바람직하게는, 상기 질환은 암이다. 훨씬 더 바람직하게는, 상기 질환은 육종, 척색종, 결장암, 직장암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평세포암, 기저세포암, 선암종, 땀샘암, 피지샘암, 유두암, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질암, 기관지원성 암, 신세포암, 간세포암, 담관암, 융모막 암종, 정상피종, 배아암, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환암, 위암, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 신세포 암종, 요로상피암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관 모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경 모세포종, 망막 모세포종, 비-호지킨 림프종, 피부 T 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병 및 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 흑색종, 신장세포 암종, 요로상피암, 유방암, 결장직장암, 위암 및 육종으로 이루어지는 군에서 선택되는 질환이 훨씬 더 바람직하다.
바람직한 유형의 육종은 섬유육종, 점액육종, 평활근육종, 지방육종, 연골육종, 골형성 육종, 혈관육종, 내피육종, 위장관 기질 종양, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 활막 육종, 중피종, 유잉 육종, 평활근육종 및 횡문근 육종을 포함한다.
한 실시양태에서, 의약은 하나 이상의 추가의 약물의 투여 전에, 상기 투여와 동시에 또는 상기 투여 후에 환자에게 투여되고, 여기서 하나 이상의 추가의 약물은 바람직하게는 PD-1 억제제; PD-L1 억제제; CTLA-4 억제제; 암 백신, 예를 들어 종양 세포 백신, 항원 백신, 수지상 세포 백신, 벡터 기반 백신; TLR2, TLR3, TLR2/4, TLR4, TLR5, TLR7/8 및 TLR9를 표적으로 하는 아고니스트를 포함하는 TLR; 및 면역 활성화 수용체를 아고나이징하는 약제, 예를 들어 41BB(CD137), 0X40, ICOS, CD40, CD28, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, LLA1, CD16, CD64, CD32A 및 CD3으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 하나 이상의 추가의 약물과 함께 상기 의약을 투여하는 것은 1회 시행될 수 있거나, 다수회 반복될 수 있다. 한 실시양태에서, 의약은 하나 이상의 추가의 약물의 투여 전에, 상기 투여와 동시에 또는 상기 투여 후에 환자에게 투여되고, 여기서 하나 이상의 추가의 약물은 바람직하게는 PD-1 억제제; PD-L1 억제제; CTLA-4 억제제; 암 백신, 예를 들어 종양 세포 백신, 항원 백신, 수지상 세포 백신, 벡터 기반 백신; 및 TLR2, TLR3, TLR2/4, TLR4, TLR5, TLR7/8 및 TLR9를 표적으로 하는 아고니스트를 포함하는 TLR로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 하나 이상의 추가의 약물과 함께 상기 의약을 투여하는 것은 1회 시행될 수 있거나, 다수회 반복될 수 있다.
한 실시양태에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙이다. 또 다른 실시양태에서, PD-1 억제제는 니볼루맙이다.
한 실시양태에서, PD-L1 억제제는 아테졸리주맙이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L1 억제제는 아벨루맙이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L1 억제제는 두르발루맙이다.
한 실시양태에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙이다. 또 다른 실시양태에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙이다.
또 다른 실시양태에서, 의약은 CAR-T 요법 전에, 상기 요법과 동시에 또는 상기 요법 후에 환자에게 투여된다. CAR-T 요법과 조합하여 상기 의약을 투여하는 것은 1회 시행될 수 있거나, 다수회 반복될 수 있다.
바람직하게는, 의약은 포유동물 환자, 보다 바람직하게는 인간 환자에게 투여된다.
본 발명의 추가의 측면은 IL-2로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물 환자, 바람직하게는 인간 환자에서 상기 질환을 치료, 제어, 지연 또는 예방하는 방법으로서, 이 방법은 치료 유효량의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
바람직하게는, IL-2로 치료할 수 있는 하나 이상의 질환은 암이다. 훨씬 더 바람직하게는, 상기 질환은 육종, 척색종, 결장암, 직장암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평세포암, 기저세포암, 선암종, 땀샘암, 피지샘암, 유두암, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질암, 기관지원성 암, 신세포암, 간세포암, 담관암, 융모막 암종, 정상피종, 배아암, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환암, 위암, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 신세포 암종, 요로상피암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관 모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경 모세포종, 망막 모세포종, 비-호지킨 림프종, 피부 T 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병 및 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 흑색종, 신장세포 암종, 요로상피암, 유방암, 결장직장암, 위암 및 육종으로 이루어지는 군에서 선택되는 질환이 훨씬 더 바람직하다.
바람직한 유형의 육종은 섬유육종, 점액육종, 평활근육종, 지방육종, 연골육종, 골형성 육종, 혈관육종, 내피육종, 위장관 기질 종양, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 활막 육종, 중피종, 유잉 육종, 평활근육종 및 횡문근 육종을 포함한다.
한 실시양태에서, IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 추가의 약물의 투여 전에, 상기 투여와 동시에 또는 상기 투여 후에 환자에게 투여되고, 여기서 하나 이상의 추가의 약물은 바람직하게는 PD-1 억제제; PD-L1 억제제; CTLA-4 억제제; 암 백신, 예를 들어 종양 세포 백신, 항원 백신, 수지상 세포 백신, 벡터 기반 백신; TLR2, TLR3, TLR2/4, TLR4, TLR5, TLR7/8 및 TLR9를 표적으로 하는 아고니스트를 포함하는 TLR; 및 면역 활성화 수용체를 아고나이징하는 약제, 예를 들어 41BB(CD137), 0X40, ICOS, CD40, CD28, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, LLA1, CD16, CD64, CD32A 및 CD3으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 하나 이상의 추가의 약물과 함께 상기 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 것은 1회 시행될 수 있거나, 다수회 반복될 수 있다. 한 실시양태에서, IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 추가의 약물의 투여 전에, 상기 투여와 동시에 또는 상기 투여 후에 환자에게 투여되고, 여기서 하나 이상의 추가의 약물은 바람직하게는 PD-1 억제제; PD-L1 억제제; CTLA-4 억제제; 암 백신, 예를 들어 종양 세포 백신, 항원 백신, 수지상 세포 백신, 벡터 기반 백신; 및 TLR2, TLR3, TLR2/4, TLR4, TLR5, TLR7/8 및 TLR9를 표적으로 하는 아고니스트를 포함하는 TLR로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 하나 이상의 추가의 약물과 함께 상기 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 것은 1회 시행될 수 있거나, 다수회 반복될 수 있다.
한 실시양태에서, PD-1 억제제는 펨브롤리주맙이다. 또 다른 실시양태에서, PD-1 억제제는 니볼루맙이다.
한 실시양태에서, PD-L1 억제제는 아테졸리주맙이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L1 억제제는 아벨루맙이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L1 억제제는 두르발루맙이다.
한 실시양태에서, CTLA-4 억제제는 이필리무맙이다. 또 다른 실시양태에서, CTLA-4 억제제는 트레멜리무맙이다.
또 다른 실시양태에서, IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 CAR-T 요법 전에, 상기 요법과 동시에 또는 상기 요법 후에 환자에게 투여된다. CAR-T 요법과 조합하여 상기 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 것은 1회 시행될 수 있거나, 다수회 반복될 수 있다.
본 발명의 추가의 측면은 IL-2 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 방법이며, 여기서 상기 방법은 IL-2 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 약학 조성물을 국소, 장 또는 비경구 투여를 통해 및 관절내, 관절 주위, 피내, 피하, 근육내, 정맥내, 골내, 복강내, 척추강내, 피막내, 안와내, 유리체내, 고실내, 방광내, 심장내, 경기관, 표피하, 피막하, 지주막하, 척수내, 심실내, 흉골내 주사 및 주입, 뇌 조직 또는 뇌액으로의 본 발명 등의 전달을 가능하게 하는 이식된 장치(예를 들면, 옴마야 리저버(Ommaya Reservoir))를 통한 뇌로의 직접적인 전달, 직접적인 뇌실내 주사 또는 주입, 뇌 또는 뇌 관련 영역 내로의 주사 또는 주입, 맥락막하 공간 내로의 주사, 안구 후방 주사 및 바람직하게는 피하 주사를 통한 안구 점적을 포함하는 외용, 주사 또는 주입의 방법에 의해 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 피하 주사를 통해 IL-2로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료에 사용하기 위한 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 약학 조성물에 관한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 피하 주사를 통해 IL-2로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료에 사용하기 위한 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 본 발명의 약학 조성물에 관한 것이다.
물질
0.7 kDa PEG 말레이미드(MeO-dPEG(12)-mal, 말레이미딜-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사 헵타트리아콘탄-37-일)프로판아마이드, CAS 724722-89-8)은 독일 마르크트레드위츠 소재의 이리스 바이오테크 게엠베하(Iris Biotech GmbH)에서 구입하였다. 2 kDa PEG-말레이미드(Sunbright ME-020-MA, CAS 883993-35-9), 5 kDa PEG-말레이미드(Sunbright ME-050MA, CAS 883993-35-9), 10 kDa PEG-말레이미드(Sunbright ME-100MA, CAS 883993-35-9) 및 20 kDa PEG-말레이 미드(Sunbright ME-200MA0B, CAS 883993-35-9)는 벨기에 그로벤동크 소재의 엔오에프 유럽 엔.브이.(NOF Europe N.V.)에서 구입하였다.
10 kDa PEG 아민(Sunbright ME-100EA, CAS 80506-64-5)은 벨기에 그로벤동크 소재의 엔오에프 유럽 엔.브이.에서 구입할 수 있다.
재조합 인간 IL-2(알데스류킨, 카탈로그 # AF-200-02)는 미국 뉴저지주 로키 힐 소재의 페프로테크(Peprotech)에서 구입하였다.
미생물 트랜스글루타미나제(카탈로그 # T001) 및 MTG 차단제(카탈로그 # C102)는 독일 다름슈타트 소재의 제디라 게엠베하(Zedira GmbH)에서 구입하였다.
10 kDa Mal-PEG-NH2(카탈로그 # PHB-943)는 예를 들어 미국 노스캐롤라이나주 채펠 힐 소재의 크리에이티브 페그웍스(Creative PEGWorks)에서 구입할 수 있다.
실시예 1: IL-2 변이체의 제조
IL-2 변이체(뮤테인)는 단백질의 발현이 이. 콜라이(E. coli)에서 수행된 후, 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 알려진 표준 정제 전략에 의해 외부 공급자로부터 맞춤 제작되고 공급되었다. 다음 단백질이 제조되었다.
Figure pct00061
Figure pct00062
실시예 2: 0.7 kDa PEG-IL-2 뮤테인 접합체 2의 제조
50 mM 아세트산(pH 3)에서 제제화된 0.2 mg/mL의 약 2 mL의 IL-2 뮤테인 1a를 UV(A280)에 의해 결정된 바와 같이 0.85 mg/mL의 농도로 0.47 mL의 최종 부피로 원심분리 필터를 통해 농축하였다. 접합은 다음과 같이 대략 pH 7.5에서 수행되었다. 50 mM 아세트산(pH 3) 내의 0.385 mg 1a(0.85 mg/mL의 0.455 mL)를 물 내에서 0.36 vol. eq. (164 μL)의 0.5 M 인산나트륨, pH 8, 16 μL의 37 mM 아세트산, 132 mM 인산나트륨, pH 7 및 3 mol eq.(5 μL)의 15.1 mM 말레이미딜-N-(2,5,8,11,14,17,20, 23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)프로판아마이드와 혼합하였다. 용액을 조심스럽게 흔들어 주위 온도에서 15분 동안 그대로 두었다. 1a의 각각의 단일 접합체로의 정량적 전환은 MS를 통해 확인되었다. 접합체는 이동상으로서 10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.4 및 0.75 mL/min의 유속을 사용하는 Akta 시스템에 연결된 지이 헬쓰케어 수퍼덱스(GE Healthcare Superdex) 200 인크리즈(Increase) 10/300 GL(24 mL 부피) 컬럼을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 통해 반응 혼합물로부터 분리되었다. 주로 접합체를 함유하는 하나의 분획을 원심분리 필터를 사용하여 농축하여 SEC에 의해 결정된 바와 같이 0.22 mg/mL의 단백질 함량 및 79%의 대략적인 순도를 갖는 0.45 mL의 단백질 용액으로서 2를 최종적으로 얻었다.
실시예 3: 2 kDa PEG-IL-2 뮤테인 접합체 3의 제조
50 mM 아세트산(pH 3)에서 제제화된 0.2 mg/mL의 약 2 mL의 IL-2 뮤테인 1a를 A280에 의해 결정된 바와 같이 1.16 mg/mL의 농도로 0.34 mL의 최종 부피로 원심분리 필터를 통해 농축하였다. 접합은 다음과 같이 대략 pH 7에서 수행되었다. 50 mM 아세트산(pH 3) 내의 0.38 mg 1a(1.16 mg/mL의 0.33 mL)를 물 내에서 0.36 vol. eq. (118 μL)의 0.5 M 인산나트륨, pH 8 및 20 mol eq.(20 μL)의 24.8 mM 2 kDa PEG-Mal과 혼합하였다. 용액을 조심스럽게 흔들고, 주위 온도에서 15분 동안 인큐베이팅하였다. 21.8 mg/mL의 하이드로겔 함량 및 3 μmol/mL의 티올 함량(2 kDa PEG 말레이 미드에 대해 5 mol eq.의 티올에 해당함)을 갖는, WO2014056923의 실시예 29, 페이지 159에 기재된 바와 같은 0.82 mL의 티올 관능화된 하이드로겔 현탁액을 PE 프릿이 장착된 2 mL PP 반응기로 옮겼다. 반응 혼합물을 반응 용기로 옮기고, 과량의 PEG-말레이미드가 하이드로겔에 결합할 수 있도록 부드럽게 교반하면서 주위 온도에서 30분 동안 인큐베이팅하였다. 단백질 함유 용액을 배출하고, 단백질 접합체는 이동상으로서 10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.4 및 0.75 mL/min의 유속을 사용하는 Akta 시스템에 연결된 지이 헬쓰케어 수퍼덱스 200 인크리즈 10/300 GL(24 mL 부피) 컬럼을 사용하여 접합 혼합물로부터 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 통해 분리되었다. 접합체 함유 분획을 원심분리 필터를 사용하여 농축하여 SEC에 따라 0.27 mg/mL의 단백질 농도 및 78%의 순도를 갖는 0.37 mL의 2 kDa PEG IL-2 뮤테인 접합체 3을 얻었다.
실시예 4: 5 kDa PEG-IL-2 뮤테인 접합체 4의 제조
50 mM 아세트산(pH 3)에서 제제화된 0.2 mg/mL의 약 2 mL의 IL-2 뮤테인 1a를 A280에 의해 결정된 바와 같이 1.01 mg/mL의 농도로 0.36 mL의 최종 부피로 원심분리 필터를 통해 농축하였다. 접합은 다음과 같이 대략 pH 7.5에서 수행되었다. 50 mM 아세트산(pH 3) 내의 0.35 mg의 단백질(1.01 mg/mL의 0.35 mL)를 물 내에서 0.36 vol. eq. (125 μL)의 0.5 M 인산나트륨, pH 8 및 3 mol eq.(9.8 μL, 활성 보정됨)의 7.49 mM 5 kDa PEG-말레이미드와 혼합하였다. 용액을 조심스럽게 흔들고, 주위 온도에서 15분 동안 인큐베이팅하였다. 과량의 PEG-말레이미드를 켄칭하기 위해, 1a(10 μL)에 대해 6 mol eq.의 물 내의 13.8 mM L-시스테인을 접합 혼합물에 첨가하였다. 용액을 조심스럽게 흔들고, 주위 온도에서 2.5시간 동안 인큐베이팅하였다. 접합체는 이동상으로서 10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.4 및 0.75 mL/min의 유속을 사용하는 Akta 시스템에 연결된 지이 헬쓰케어 수퍼덱스 200 인크리즈 10/300 GL(24 mL 부피) 컬럼을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 통해 접합 혼합물로부터 분리되었다. 주로 접합체를 함유하는 분획을 모으고, 원심분리 필터를 사용하여 농축하여 0.30 mg/mL의 단백질 농도를 갖는 0.42 mL의 5 kDa PEG IL-2 뮤테인 접합체 4를 얻었다. 분리된 접합체의 분석은 SEC 및 RP-HPLC를 통해 수행되었다. 불순물의 정량적 감소는 RP-HPLC에서 볼 수 있듯이 정제 단계에서 달성할 수 없었다. 접합체 4의 대략적인 순도는 215 nm에서 SEC 분석에 따라 68%로 결정되었다.
실시예 5: 10 kDa PEG-IL-2 뮤테인 접합체 5의 제조
50 mM 아세트산(pH 3)에서 제제화된 0.2 mg/mL의 약 2 mL의 IL-2 뮤테인 1a를 A280에 의해 결정된 바와 같이 1.03 mg/mL의 농도로 0.35 mL의 최종 부피로 원심분리 필터를 통해 농축하였다. 접합은 다음과 같이 대략 pH 7.5에서 수행되었다. 50 mM 아세트산(pH 3) 내의 0.34 mg의 단백질(1.03 mg/mL의 0.33 mL)를 물 내에서 0.36 vol. eq. (120 μL)의 0.5 M 인산나트륨, pH 8 및 3 mol eq.(5 μL)의 13.54 mM 10 kDa PEG-말레이미드와 혼합하였다. 용액을 조심스럽게 흔들고, 주위 온도에서 15분 동안 인큐베이팅하였다. 접합체는 이동상으로서 10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.4 및 0.75 mL/min의 유속을 사용하는 Akta 시스템에 연결된 지이 헬쓰케어 수퍼덱스 200 인크리즈 10/300 GL(24 mL 부피) 컬럼을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 통해 접합 혼합물로부터 분리되었다. 주로 접합체를 함유하는 분획을 모으고, 원심분리 필터를 사용하여 농축하여 0.22 mg/mL의 단백질 농도를 갖는 0.55 mL의 10 kDa PEG IL-2 뮤테인 접합체 5를 얻었다. 분리된 접합체의 분석은 SEC 및 RP-HPLC를 통해 수행되었다. 불순물의 정량적 감소는 정제 단계에서 달성할 수 없었다. 접합체 5의 대략적인 순도는 215 nm에서 SEC 분석에 따라 57%로 결정되었고, 과량의 PEG-Mal이 주요 불순물이었다.
실시예 6: 20 kDa PEG-IL-2 뮤테인 접합체 6의 제조
50 mM 아세트산(pH 3)에서 제제화된 0.2 mg/mL의 약 2 mL의 IL-2 뮤테인 1a를 A280에 의해 결정된 바와 같이 1.11 mg/mL의 농도로 0.33 mL의 최종 부피로 원심분리 필터를 통해 농축하였다. 접합은 다음과 같이 대략 pH 7.5에서 수행되었다. 50 mM 아세트산(pH 3) 내의 0.35 mg의 단백질(1.11 mg/mL의 0.32 mL)를 물 내에서 0.36 vol. eq. (115 μL)의 0.5 M 인산나트륨, pH 8, 6 μL의 37 mM 아세트산, 132 mM 인산나트륨, pH 7 및 3 mol eq.(10 μL)의 6.96 mM 20 kDa PEG-말레이미드와 혼합하였다. 용액을 조심스럽게 흔들고, 주위 온도에서 15분 동안 인큐베이팅하였다. 접합체는 이동상으로서 10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.4 및 0.75 mL/min의 유속을 사용하는 Akta 시스템에 연결된 지이 헬쓰케어 수퍼덱스 200 인크리즈 10/300 GL(24 mL 부피) 컬럼을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 통해 접합 혼합물로부터 분리되었다. 주로 접합체를 함유하는 분획을 모으고, 원심분리 필터를 사용하여 농축하여 0.18 mg/mL의 단백질 농도를 갖는 0.67 mL의 20 kDa PEG IL-2 뮤테인 접합체 6을 얻었다. 분리된 접합체의 분석은 SEC 및 RP-HPLC를 통해 수행되었다. 불순물의 정량적 감소는 정제 단계에서 달성할 수 없었다. 접합체 6의 대략적인 순도는 215 nm에서 RP-HPLC 분석에 따라 44%로 결정되었고, 과량의 PEG-Mal이 주요 불순물이었다.
실시예 7: 5 kDa PEG-IL-2 뮤테인 접합체 7의 제조
50 mM 아세트산(pH 3)에서 제제화된 0.66 mg/mL의 1.1 mL의 IL-2 뮤테인 1c를 0.15 vol. eq. (165 μL)의 0.5 M 인산나트륨, pH 8 및 141 μL의 0.6 M 하이드록실아민 하이드로클로라이드, 0.5 M 인산나트륨, pH 6.4과 혼합하였다. 생성된 반응 혼합물을 25℃에서 밤새 인큐베이팅하였다. 용액을 A280에 의해 결정된 바와 같이 0.99 mg/mL의 농도로 0.67 mL의 최종 부피로 원심분리 필터를 통해 농축하였다. 접합은 다음과 같이 수행되었다. 58 mM 인산나트륨, 약 57 mM 하이드록실아민 하이드로클로라이드, 39 mM 아세트산, pH 6.5 내의 0.65 mg의 단백질(0.99 mg/mL의 0.66 mL)를 물 내에서 6 mol eq. (320 μL)의 81 mM 5 kDa PEG-말레이미드와 혼합하였다. 생성되는 반응 혼합물을 주위 온도에서 2.25시간 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 원심분리 필터를 사용하여 37 mM 아세트산, 132 mM 포스페이트, pH 7로 완충제 교환을 수행하여 0.75 mL의 최종 부피를 얻었다. 물 내의 1.5 mol eq. (90 μL)의 81 mM 5 kDa PEG-말레이미드를 반응 용액에 첨가한 다음, 3.5시간 후에 물 내의 3 mol eq. (160 μL)의 81 mM 5 kDa PEG-말레이미드를 첨가하였다. 생성되는 반응 혼합물을 주위 온도에서 밤새 인큐베이팅하였다. 접합체는 이동상으로서 10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.4 및 0.75 mL/min의 유속을 사용하는 Akta 시스템에 연결된 지이 헬쓰케어 수퍼덱스 75 인크리즈 10/300 GL(24 mL 부피) 컬럼을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 통해 접합 혼합물로부터 분리되었다. 주로 접합체를 함유하는 분획을 모으고, 원심분리 필터를 사용하여 농축하여 0.25 mg/mL의 0.45 mL의 5 kDa PEG IL-2 뮤테인 7을 얻었다. 분리된 접합체의 분석은 SEC 및 RP-HPLC를 통해 수행되었다. 불순물의 정량적 감소는 정제 단계에서 달성할 수 없었고, 따라서 불순물의 샘플 내의 존재에 의해 SEC에 따라 측정한 접합체 7의 대략적인 순도는 60%이었다.
실시예 8: 10 kDa PEG-IL-2 뮤테인 접합체 8의 제조
50 mM 아세트산(pH 3)에서 제제화된 0.66 mg/mL의 1.1 mL의 IL-2 뮤테인 1c를 0.15 vol. eq. (165 μL)의 0.5 M 인산나트륨, pH 8 및 141 μL의 0.5 M 하이드록실아민 하이드로클로라이드, 0.5 M 인산나트륨, pH 7과 혼합하였다. 생성된 반응 혼합물을 25℃에서 밤새 인큐베이팅하였다. 용액을 A280에 의해 결정된 바와 같이 1.42 mg/mL의 농도로 0.48 mL의 최종 부피로 원심분리 필터를 통해 농축하였다. 접합은 다음과 같이 수행되었다. 64 mM 인산나트륨, 약 50 mM 하이드록실아민 하이드로클로라이드, 39 mM 아세트산, pH 6.5-7.0 내의 0.678 mg의 단백질(1.42 mg/mL의 0.48 mL)를 물 내에서 3 mol eq. (18 μL)의 7.42 mM 10 kDa PEG-말레이미드와 혼합하였다. 생성되는 반응 혼합물을 조심스럽게 흔들고, 주위 온도에서 15분 동안 인큐베이팅하였다. 물 내의 추가의 3 mol eq. (17.9 μL)의 7.42 mM PEG-말레이미드를 접합 혼합물에 첨가한 후, 주위 온도에서 15분 동안 인큐베이팅하였다. 접합체는 이동상으로서 10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.4 및 0.75 mL/min의 유속을 사용하는 Akta 시스템에 연결된 지이 헬쓰케어 수퍼덱스 200 인크리즈 10/300 GL(24 mL 부피) 컬럼을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 통해 접합 혼합물로부터 분리되었다. 모은 분획을 RP-HPLC에 의해 분석하고, 접합체 함유 분획을 모으고, 원심분리 필터를 사용하여 농축하여 0.50 mg/mL의 0.57 mL의 10 kDa PEG IL-2 뮤테인 8을 얻었다. 분리된 접합체의 분석은 SEC 및 RP-HPLC를 통해 수행되었다. 출발 물질로부터 불순물의 감소는 정제 단계에서 정량적으로 달성할 수 없었고, RP-HPLC에 의해 제시되는 바와 같이 불순물이 접합체 샘플에 존재하였다. 접합체 8의 대략적인 순도는 280 nm에서 RP-HPLC에 의해 27로 결정되었고, 과량의 PEG-Mal이 주요 불순물이었다.
실시예 9: PEG IL-2 뮤테인 접합체의 SPR 분석
알데스류킨 및 편향된 IL-2 화합물의 결합 동역학은 IL-2 수용체 서브유닛의 고정된 세포외 도메인과 함께 비아코어(Biacore) 기기(T200, GE Healthcare)를 사용하여 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분광법을 사용하여 평가되었다. 간단히 설명하면, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, GE Healthcare)은 공급업체의 지침에 따라 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드(EDC) 및 N-하이드록시석신이미드(NHS)로 활성화되었다. 또한, 공급업체의 지침(GE Healthcare, 주문 번호 BR-1008-39)에 따라 모노클로날 마우스 항-인간 IgG(Fc) 항체의 고정을 수행하였다.
IL-2Rα에 대한 결합 동역학의 결정을 위해, 다음 칩 제조를 사용하였다: 인간 IL-2 수용체 알파, Fc-태그(Symansis, 뉴질랜드 소재)를 HBS-EP 실행 완충제(GE Healthcare, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)에서 약 0.67 μg/mL로 희석하고, 60초 동안 10 μL/min의 유속으로 고정하여 80-100 반응 단위(RU)를 달성하였다.
IL-2Rβ에 대한 결합 동역학의 결정을 위해, 다음 칩 제조를 사용하였다: 인간 IL-2 수용체 베타, Fc-Tag(Symansis, 뉴질랜드 소재)를 FIBS-EP 실행 완충제(GE Healthcare, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)에 약 0.80 μg/mL로 희석하고, 60초 동안 10 μL/min의 유속으로 고정하여 140-180 반응 단위(RU)를 달성하였다.
IL-2Rαβ 복합체에 대한 결합 동역학의 결정을 위해, 다음 칩 제조를 사용하였다: 인간 IL-2 수용체 알파, Fc-태그(Symansis, 뉴질랜드 소재) 및 인간 IL-2 수용체 베타, Fc-Tag(Symansis, 뉴질랜드 소재)를 혼합하고, HBS-EP 실행 완충제(GE Healthcare, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)에서 약 1.33 μg/mL로 희석하고, 60초 동안 10 μL/min의 유속으로 고정하여 360-440 반응 단위(RU)를 달성하였다.
세 가지 수용체 서브유닛 설정 모두에 대한 동역학 측정을 위해, 알데스류킨 또는 편향된 IL-2 화합물을 다중 사이클 동역학으로 분석하고, 25℃에서 HBS-EP 실행 완충제에 적어도 5가지의 상이한 농도로 주입하였다(30 μL/min 유속, 120초 접촉 시간, 600초 해리 시간). 이중 참조 데이터(참조 유동 셀 및 완충제 단독 샘플에서 차감한 데이터)는 가능한 경우 1:1 결합 모델 또는 정상 상태 분석(Biacore T200 평가 소프트웨어, 버전 3.1)을 통해 동역학적으로 분석하여 KD를 결정하고, 가능한 경우에는 ka 및 kd를 결정하였다. 각각의 사이클 후의 재생은 30 μL/min의 유속으로 30초 동안 3 M MgCl2를 사용하여 수행되었다.
얻어진 데이터는 표 1에 요약되어 있다.
표 1: IL-2 수용체 서브유닛에 대한 SPR 결합 데이터의 요약.
Figure pct00063
실시예 10: 편향 비의 계산
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "편향된 IL-2"는 IL-2Rαβ에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD 의 비가 IL-2Rαβ에 대한 알데스류킨의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD의 비보다 더 큰 변형된 IL-2를 지칭한다. 이것은 다음 공식으로 설명된다:
Figure pct00064
여기서,
Figure pct00065
"KD IL-2Rαβ에 대한 편향된 IL-2"는 IL-2Rαβ에 대한 편향된 IL-2의 KD이고,
"KD IL-2Rβ에 대한 편향된 IL-2"는 IL-2Rβ에 대한 편향된 IL-2의 KD이고,
"KD IL-2Rαβ에 대한 알데스류킨"은 IL-2Rαβ에 대한 알데스류킨의 KD이고,
"KD IL-2Rβ에 대한 알데스류킨"은 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD이다.
상기 언급된 공식을 사용하여, 다음 비를 계산하고, 표 2에 요약하였다.
표 2: 상이한 IL-2 뮤테인 접합체에 대한 비편향된 IL-2 대 비알데스류킨
Figure pct00066
실시예 11: 10 kDa PEG-IL-2 접합체 9의 제조
재조합 인간 IL-2는 Akta 시스템에 연결된 HiTrap 탈염 컬럼을 사용하여 0.2 M Tris/HCl, pH 7.5로 완충제를 교환하였다. 이어서, IL-2는 문헌 [Sato et al., Bioconjugate Chem 2001, 12(5), 701-710]에 기재된 절차를 기초로 하여 미생물 트랜스글루타미나제(MTG)를 사용하여 효소에 의해 PEG화되었다. 5 μM 농도의 IL-2를 0.2 M Tris/HCl(pH 7.5) 내에서 1.25 mM 농도의 10 kDa PEG 아민(10 kDa 메톡시-PEG-(CH2)2-NH2) 및 0.2 단위/mL 농도의 MTG의 존재 하에 25℃에서 12시간 동안 인큐베이팅하였다. 10 kDa PEG IL-2 접합체 (9)는 이동상으로서 10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.4 및 0.75 mL/min의 유속을 사용하는 Akta 시스템에 연결된 지이 헬쓰케어 수퍼덱스 200 인크리즈 10/300 GL 컬럼을 사용하여 반응 혼합물로부터 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제되었다.
실시예 12: 10 kDa PEG-IL-2 접합체 10의 제조
재조합 인간 IL-2(50 mM 아세트산, pH 3.0 내의 2.7 mg/mL)를 140 mM HEPES, 300 mM NaCl, 6 mM 나트륨 EDTA, 0.1% 트윈 20, pH 8.2의 1 부피 당량과 혼합하여, 70 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM 나트륨 EDTA, 0.05% 트윈 20, 25 mm AcOH, pH 7.4 내의 1.35 mg/mL의 IL-2를 생성하였다. IL-2는 미생물 트랜스글루타미나제(MTG)를 사용하여 효소에 의해 PEG화되었다. 이를 위해, 0.1 mg/mL 농도의 IL-2를 70 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM 나트륨 EDTA, 0.05% 트윈 20, 25mm AcOH, pH 7.4 내에서 1 mM 10 kDa PEG 아민(10 kDa 메톡시-PEG-(CH2)2-NH2) 및 1 U/mL MTG의 존재 하에 37℃에서 4시간 동안 인큐베이팅하였다. 그 후, MTG 차단제를 0.5 mM의 최종 농도로 첨가하고, 반응 혼합물을 추가로 30분 동안 인큐베이팅하였다. 10 kDa PEG IL-2 접합체 (10)는 이동상으로서 10 mM HEPES, 150 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.4 및 0.75 mL/min의 유속을 사용하는 Akta 시스템에 연결된 지이 헬쓰케어 수퍼덱스 200 인크리즈 10/300 GL 컬럼을 사용하여 반응 혼합물로부터 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제되었다.
실시예 13: 편향된 IL-2 뮤테인 중합체 프로드러그 11의 제조
PEG IL-2 뮤테인은 100 mM 붕산나트륨(pH 9)로 완충제를 교환하고, 약 2.5 mg/mL IL-2 eq.의 농도로 농축되었다. IL-2 뮤테인의 양에 비해 5배 몰 과량의 40 kDa mPEG-링커 시약(국제 특허 공개 WO 2016079114의 실시예 2에 설명된 바와 같음)은 접합 반응을 위해 사용되는 단백질 용액과 비교하여 동일한 부피의 물에 용해되었다. 단백질 용액(2.5 mg/mL IL-2 eq.) 및 40 kDa mPEG-링커 용액(32 g/L)을 혼합하고, 14-l6℃에서 2시간 동안 인큐베이팅하였다. 편향된 IL-2 뮤테인 중합체 프로드러그 11은 CIEX를 통해 분리하고, SEC를 통해 분석하였다.
실시예 14: 신규 접합체 12의 제조
40 kDa mPEG-링커 시약(국제 특허 공개 WO 2016079114의 실시예 2에 설명됨)을 물에 용해시켜 32 g/L의 용액을 생성하였다. 10 kDa Mal-PEG-NH2를 0.1 M 인산나트륨, 6 mM 나트륨 EDTA, pH 7.4에 용해시켜 최종 농도가 1 mM이 되도록 하였다. 두 용액을 1:1의 부피비로 혼합하고, 주위 온도에서 2시간 동안 인큐베이팅하였다. 그 후, 50 mM 인산나트륨, 3 mM 나트륨 EDTA, pH 7.4 내의 2 mg/mL 농도의 IL-2 뮤테인 1a 용액의 0.5 부피 당량(40 kDa MPEG-링커 시약과 10 kDa의 Mal-PEG-NH2의 반응 혼합물의 부피에 대한)을 반응 혼합물에 첨가하고, 주위 온도에서 1시간 동안 인큐베이팅하였다. 40+10 kDa PEG IL-2 뮤테인 접합체 12는 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 반응 혼합물로부터 분리하고, 크기 배제 크로마토그래피에 의해 분석하였다.
약어
A280 280 nm의 파장에서의 흡수
AcOH 아세트산
CIEX 양이온 교환
이. 콜라이 에셔리키아 콜라이(Escherichia coli)
EDC N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 하이드로클로
라이드
EDTA 에틸렌디아민테트라아세트산
eq. 당량
HBS-EP 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, pH
7.4
HEPES 4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산
IL-2 인터류킨-2
IL-2R 인터류킨-2 수용체
Mal 말레이미드
mol.eq. 분자 당량
mPEG 메톡시 PEG
MS 질량 분석법
MTG 미생물 트랜스글루타미나제
NaCl 염화나트륨
NHS N-하이드록시석신이미드
PEG 폴리(에틸렌글리콜)
PTFE 폴리테트라플루오로에틸렌
PyBOP 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포
스페이트
RP-HPLC 역상 고성능 액체 크로마토그래피
SEC 크기 배제 크로마토그래피
SPR 표면 플라즈몬 공명
트윈 20 폴리에틸렌 글리콜 소르비탄 모노라우레이트
SEQUENCE LISTING <110> Ascendis Pharma A/S <120> IL-2 Conjugates <130> CPX71637PC <160> 6 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 2 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> aldesleukin <400> 2 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130 <210> 3 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> aldesleukin mutein <400> 3 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Cys Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130 <210> 4 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> aldesleukin mutein <400> 4 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Cys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130 <210> 5 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> aldesleukin mutein <400> 5 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Cys Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130 <210> 6 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> aldesleukin mutein <400> 6 Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu 1 5 10 15 Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn 20 25 30 Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys 35 40 45 Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Cys Leu Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg 65 70 75 80 Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys 85 90 95 Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr 100 105 110 Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile 115 120 125 Ser Thr Leu Thr 130

Claims (33)

  1. 하기 화학식 (Ia) 또는 (Ib)의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00067

    Figure pct00068

    여기서,
    -D는 편향된 IL-2 모이어티이고, 상기 편향된 IL-2 모이어티는 IL-2 모이어티를 포함하고, 편향된 IL-2 모이어티에 대해, IL-2Rαβ에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD 의 비가, IL-2Rαβ에 대한 알데스류킨의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 알데스류킨의 KD의 비보다 더 크고;
    -L1-은 -D에 공유적 및 가역적으로 부착된 링커 모이어티이고;
    -L2-는 화학 결합이거나 스페이서 모이어티이고;
    -Z는 중합체 모이어티 또는 치환된 지방산 모이어티이고;
    x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
    y는 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다.
  2. 제1항에 있어서, 편향된 IL-2 모이어티 -D가
    (a) 동일하거나 상이할 수 있는, 변형 모이어티 Mmod의 적어도 하나의 안정한 부착; 또는
    (b) 적어도 하나의 아미노산 돌연변이; 또는
    (c) 적어도 하나의 결실; 또는
    (a), (b) 및 (c)의 임의의 조합
    을 포함하는 IL-2 모이어티인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, IL-2 모이어티가 서열 번호 2에 기초하여 위치 K34, R37, M38, T40, F41, K42, F43, Y44, E61 또는 L71에 적어도 하나의 아미노산 돌연변이를 포함하는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 모이어티가 서열 번호 2에 기초하여 K34C, R37C, M38C, T40C, F41C, K42C, F43C, Y44C, E61C, 및 L71C로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 돌연변이를 포함하는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 서열을 갖고 R37C 돌연변이를 포함하는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 모이어티가 변형 모이어티 Mmod의 적어도 하나의 안정한 부착 및 적어도 하나의 아미노산 돌연변이의 조합을 포함하는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  7. 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 모이어티 Mmod가 시스테인에 부착되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  8. 제2항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 모이어티가 서열 번호 2의 서열을 갖고 R37C 돌연변이를 포함하며, 모이어티 Mmod가 위치 R37C에서 시스테인의 황에 접합되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 접합체가, x가 1인 화학식 (Ia)로 표시되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  10. 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod가 중합체 모이어티인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  11. 제2항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod가 하기 화학식 (A-1)로 표시되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00069

    여기서,
    -FG-는 결합이고;
    -SP-는 스페이서 모이어티이고;
    -POL은 중합체이다.
  12. 제2항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, Mmod가 하기 화학식 (A-1a)로 표시되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00070

    여기서,
    별표로 표시된 점선은 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기의 측쇄의 황에 대한 부착을 나타내고;
    b1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
    b2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이고;
    b3은 12 내지 22700 범위의 정수이다.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, -Z가 중합체 모이어티인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, -Z가 하기 화학식 (A)의 모이어티를 포함하는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00071

    여기서,
    -BP1<, -BP2<, -BP3<는 서로 독립적으로 -N< 및 -C(R8)<로 이루어지는 군으로부터 선택되며;
    R8은 H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    -P1, -P2, -P3, -P4는 서로 독립적으로 적어도 40% PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG 기반 사슬이고;
    -C1-, -C2-는 서로 독립적으로 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2N(R10)-, -S(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R10)S(O)2N(R10a)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)-, 및 -OC(O)N(R10)-으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
    각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴 및 8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R9는 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR11, -OR11, -C(O)R11, -C(O)N(R11R11a), -S(O)2N(R11R11a), -S(O)N(R11R11a), -S(O)2R11, -S(O)R11, -N(R11)S(O)2N(R11R11b), -SR11, -N(R11R11a), -NO2, -OC(O)R11, -N(R11)C(O)R11a, -N(R11)S(O)2R11a, -N(R11)S(O)R11a, -N(R11)C(O)OR11a, -N(R11)C(O)N(R11aR11b), -OC(O)N(R11R11a), 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R10, R10a, R11, R11a 및 R11b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된다.
  15. 제14항에 있어서, 화학식 (A)의 C1 및 C2가 하기 화학식 (A-a)로 표시되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00072

    여기서,
    별표로 표시된 점선은 BP1에 대한 부착을 나타내고;
    표시되지 않은 점선은 각각 BP2 또는 BP3에 대한 부착을 나타내고;
    q1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    q2는 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    q3은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    q4는 1, 2 및 3으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 화학식 (A)의 P1, P2, P3 및 P4가 서로 독립적으로 하기 화학식 (A-b)로 표시되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00073

    여기서,
    점선은 -Z의 나머지 부분에 대한 부착을 나타내고;
    m은 0 또는 1이고;
    p는 70 내지 900 범위의 정수이고;
    q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (A)의 BP1이 -N<인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (A)의 BP2 및 BP2 둘 모두가 -CH<인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, -Z가 하기 화학식 (A-c)의 모이어티를 포함하는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00074

    여기서,
    p1, p2, p3, p4는 서로 독립적으로 70 내지 900 범위의 정수이다.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, -L1-이 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기에 부착되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, -L1-이 시스테인, 메티오닌, 히스티딘, 라이신, 트립토판, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민 및 아르기닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기에 부착되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, -L1-이 서열 번호 2에 기초하여 K7, K8, K31, K34, K42, K47, K48, K53, K63, K75 및 K96으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 라이신 잔기에 부착되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, -L1-이 하기 화학식 (IX-a)로 표시되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00075

    여기서,
    별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고, 표시되지 않은 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
    n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    =Y1은 =O 및 =S로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    -Y2-는 -O- 및 -S-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    -Y3-, -Y5-는 서로 독립적으로 -O- 및 -S-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    -Y4-는 -O-, -NR5- 및 -C(R6R6a)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    -R3, -R5, -R6, -R6a는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    -R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    -W-는 C3-10 사이클로알킬, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단된 C1-20 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    -Nu는 -N(R7R7a), -N(R7OH), -N(R7)-N(R7aR7b), -S(R7), -COOH,
    Figure pct00076

    로 이루어지는 군으로부터 선택되는 친핵체이고;
    -Ar-은
    Figure pct00077

    로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    여기서,
    점선은 -L1-의 나머지 부분에 대한 부착을 나타내고;
    -Z1-은 -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    -Z2-는 -N(R7)-이고;
    -R7, -R7a, -R7b는 서로 독립적으로 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되며;
    여기서, -L1-은 선택적으로 추가로 치환된다.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, -L1-이 하기 화학식 (IX-c)로 표시되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00078

    여기서,
    별표로 표시된 점선은 -D의 질소에 대한 부착을 나타내고;
    표시되지 않은 점선은 -L2-Z에 대한 부착을 나타내고;
    s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-가 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기서, -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)-, 및 -OC(O)N(Ry3)-으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
    -Ry1 및 -Ry1a는 서로 독립적으로 -H, -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)-, 및 -OC(O)N(Ry4)-로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단되고;
    각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴 및 8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 선택적으로 치환되고;
    각각의 -Ry2는 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a), 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서, C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 치환되고;
    각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-가 -O-, -T- 및 -C(O)N(Ry1)-로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 중단된 C1-20 알킬 사슬이고; 여기서, C1-20 알킬 사슬은 -OH-, -T- 및 -C(O)N(Ry6Ry6a)로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 치환되고, -Ry1, -Ry6, -Ry6a는 독립적으로 H 및 C1-4 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 여기서 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3 내지 10원 헤테로사이클릴, 8 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8 내지 30원 카르보폴리사이클릴 및 8 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-가 하기 화학식 (IX-e)로 표시되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00079

    여기서,
    별표로 표시된 점선은 -L1-에 대한 부착을 나타내고;
    표시되지 않은 점선은 -Z에 대한 부착을 나타내고;
    s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 정수이다.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  29. 의약으로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 제28항의 약학 조성물.
  30. IL-2로 치료될 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 제28항의 약학 조성물.
  31. 제30항에 있어서, IL-2로 치료될 수 있는 질환이 육종, 척색종, 결장암, 직장암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평세포암, 기저세포암, 선암종, 땀샘암, 피지샘암, 유두암, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질암, 기관지원성 암, 신세포암, 간세포암, 담관암, 융모막 암종, 정상피종, 배아암, 윌름스(Wilms) 종양, 자궁경부암, 고환암, 위암, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 신세포 암종, 요로상피암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관 모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경 모세포종, 망막 모세포종, 비-호지킨(Hodgkin) 림프종, 피부 T 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병 및 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 약학 조성물.
  32. IL-2로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물 환자, 바람직하게는 인간 환자에서 상기 질환을 치료, 제어, 지연 또는 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 제28항의 약학 조성물을 이를 필요로 하는 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  33. 제32항에 있어서, 질환이 육종, 척색종, 결장암, 직장암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평세포암, 기저세포암, 선암종, 땀샘암, 피지샘암, 유두암, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질암, 기관지원성 암, 신세포암, 간세포암, 담관암, 융모막 암종, 정상피종, 배아암, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환암, 위암, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 신세포 암종, 요로상피암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관 모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경 모세포종, 망막 모세포종, 비-호지킨 림프종, 피부 T 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병 및 백혈병으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
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