KR20200125842A - 류마티스 관절염의 진단 및 예후 판단에 필요한 정보를 제공하는 방법 및 이 방법에 사용되는 키트 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 IFN-γ, IL-17, TNF-α, IL-12 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제(agent)를 포함하는 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트 및 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 사용되는 키트에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위하여, 또는 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단데 필요한 정보를 제공하기 위하여, IFN-γ, IL-17, TNF-α, IL-12 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 수준을 측정하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 의하면, 종래 미분류 관절염으로 분류되었던 ACPA 음성 류마티스 관절염을 조기에 정확히 진단할 수 있으며, 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 필요한 정보를 제공할 수 있다.
Description
본 발명은 류마티스 관절염의 진단 및 예후 판단에 필요한 정보를 제공하는 방법 및 이 방법에 사용되는 키트에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 ACPA(Anti-Citrullinated Protein Antibody) 음성 류마티스 관절염의 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법, 이 방법에 사용되는 키트, 류마티스 관절염의 치료 예후 판단에 필요한 정보를 제공하는 방법 및 이 방법에 사용되는 키트에 관한 것이다.
관절염 환자는 고령화 사회에서 급격히 늘어가고 있다. 질병 관리 본부의 조사에서 전인구의 약 20% 가량이 여러 종류의 관절염으로 치료를 받고 있다고 한다. 관절염은 발병 원인에 따라 크게 염증성 관절염과 비염증성 관절염으로 나눌 수 있다. 염증성 관절염의 가장 대표적인 질환은 류마티스 관절염(Rheumatoid Arthritis, RA) 이다. 관절염을 일으키는 병인으로 중요한 사이토카인들은 여러 연구자들에 의해 동물 실험과 인체 혈액에서 꾸준히 밝혀져 왔다. RA의 조기진단은 국제적으로 정해진 임상 진단 기준에 따라 진단하고 있지만 아직 관절염 병인과 연관된 사이토카인들과의 연관성은 기초연구에서만 논의 되어왔다.
면역 병인 사이토카인들의 임상 적용은 2000 년대부터 RA 치료에 항 TNF-α 제제를 적용하여 획기적인 치료 효과가 인정되면서 부터이다. 지금까지 다양한 종류의 항 TNF-α 제제가 출시되면서 RA 치료는 새로운 전기를 마련하게 되었다. 항 TNF-α 제제의 뒤를 이어서 항 IL-6 제제와 JAK 신호전달 물질의 조절제들이 출시되면서 면역 병인 사이토카인들의 중요성이 더욱 새롭게 부각 되고 있다.
RA는 ACPA(anti-citrullinated protein antibody) 양성과 ACPA 음성의 크게 두 가지 아형으로 분류되고 있다. 현재의 RA 진단 기준에 따르면 약 94%의 RA 환자 혈청에서 ACPA가 양성반응으로 나타나 전 세계에서 널리 이 검사를 진단에 사용하고 있다. 따라서 현재 일반적으로 흔히 지칭하는 류마티스 관절염은 대부분 ACPA 양성 RA를 말한다. 그러나, 최근에 ACPA 음성 RA 환자에 대한 보고가 나오고 있고 그 유병율이 급격히 증가하고 있다. ACPA 음성 RA 환자는, ACPA 양성 RA 환자와는 달리, 지금까지의 EULAR(유럽 류마티스 학회)나 ACR(미국 류마티스 학회) 진단 기준으로는 RA로 진단으로 되지 않는 새로운 질병으로 인식되고 있다. 특히, ACPA 음성 RA를 진단할 수 있는 마커 항체가 발견되지 않아, 이 질병의 병인은 물론, 그 정확한 빈도와 유병율도 전혀 알려져 있지 않다. 그러므로, 현재 관절염 분류에서 ACPA 음성 RA는 "미분류 관절염"에 속해 있다.
따라서, 특별히 진단 방법이 개발되어 있지 않은 ACPA 음성 RA에 대한 정확한 조기 진단 마커의 개발이 절실한 상황이다.
본 명세서에서 언급된 특허문헌 및 참고문헌은 각각의 문헌이 참조에 의해 개별적이고 명확하게 특정된 것과 동일한 정도로 본 명세서에 참조로 삽입된다.
본 발명자들은 ACPA 음성 류마티스 관절염(RA)를 조기에 정확히 진단할 수 있고, RA 치료 후 예후 판단에 정보를 제공할 수 있는 바이오 마커를 개발하기 위해 연구 노력하였다. 그 결과, 관절염 원인 질병이 밝혀지지 않은 "미분류 관절염" 환자들 중에서 ACPA 음성 RA 발병 초기에 증가하는 "병인 연관 염증성 사이토카인"들을 발견하였고, 이 중 5개의 면역 병인 사이토카인들을 선별하여 이들이 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 RA 진단에 매우 유용하게 사용될 수 있으며, 또한, 상기 사이토카인들이 수준 측정을 통해 RA 치료 후 예후 판단에 정확한 정보를 제공할 수 있음을 임상 실험적으로 입증함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 류마티스 관절염(RA)을 조기에 정확히 진단할 수 있는 키트를 제공하는 것에 있다.
본 발명의 다른 목적은 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위하여, 분석 대상의 생물학적 시료(sample)에서 사이토카인의 수준을 측정하는 방법을 제공하는 것에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 사용되는 키트를 제공하는 것에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 필요한 정보를 제공하기 위하여, 분석 대상의 생물학적 시료(sample)에서 사이토카인의 수준을 측정하는 방법을 제공하는 것에 있다.
본 발명의 다른 목적 및 기술적 특징은 이하의 발명의 상세한 설명, 청구의 범위 및 도면에 의해 보다 구체적으로 제시된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 CD4+ T 세포에서 유리되는 인터페론-감마(IFN-r, Interferon-γ), 인터루킨-17(IL-17, Interleukin-17) 및 관절염증으로 생성이 증가하는 TNF-α(Tumor necrosis factor-α), 인터루킨-12(IL-12, Interleukin-12), 및 인터루킨-6(IL-6, Interleukin-6) 등으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제(agent)를 포함하는 미분류 관절염 중에서 ACPA(Anti-Citrullinated Protein Antibody) 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트를 제공한다.
상기 관절염 병인 연관 사이토카인들의 류마티스 관절염 진단 및 예후 판단에 사용될 경우에 우수성은 다음과 같다:
첫째, CRP나 ESR 같이 염증이 발생할 때 만 증가하는 않고, 관절염이 발생하면 지속적으로 증가하고, 둘째, 질병의 활성도(DAS28 같은 지표)와 연관이 깊고, 셋째, 골 관절염환자나 일시적으로 염증이 발생하였다가 사라지는 여러 불명의 원인의 "미분류 관절염" 환자들 보다 통계적으로 의미 있게 혈청에서 증가하고, 넷째, 류마티스 관절염 질병 초기부터 증가하여 질병이 존재하는 한 오랫동안 지속적으로 증가하는 특징이 있고, 다섯째 고감도 다중 사이토카인 검사법(High sensitivity multiplex cytokine assay)으로 검사에서 각 사이토카인 간에 상호방해 작용이 없는 사이토카인들로 선별하였다.
인터페론 감마(IFN-γ)
사람 백혈구를 병원체나 항원으로 자극하면, 바이러스 증식을 억제하는 단백질이 분비되는 현상으로 처음 발견된 CD4+ T 세포와 NK 세포에서 생산되는 사이토카인이다. IFN-γ는 결핵균이나 바이러스, 박테리아 그리고 기생충에 대한 면역 반응에 매우 중요한 물질로 Th1 세포성 면역 반응을 주도하며, 대식세포를 자극하여 특정 유전자 발현을 촉진시키기도 한다. 이런 기능이 염증반응과 자가면역 질환과 관절염을 일으키는 주요 병인으로 작용하고 있다. 지금까지 RA에서 이물질이 증가한다는 사실에는 여러 가지 이론이 있었다. 본 발명자는 이물질이 조기 RA환자 말초혈액 CD4+ T 세포에서 IFN-r 발현유전자가 뚜렷이 증가한다는 사실을 발견하였다.
인터루킨-12(IL-12)
사람 백혈구의 활성화를 조절하는 단백질로 대식 세포에서 생산되며, 주로 림프구에 작용하여 면역 반응과 면역 관용에 중심 역할을 하는 사이토카인이다. 면역조절 림프구를 분화시켜 자가면역 질환을 억제시키는 역할을 하기도 한다. IL-12는 면역 작동세포와 기억세포의 분화를 촉진시켜 면역 반응을 촉진하는 작용도 함께 하고 있는 단백질로 전반적으로 Th1 세포성 면역반응을 주도하는 사이토카인으로 자가면역 병인에 중요한 역할을 담당하고 있다.
인터루킨-6(IL-6)
IL-6는 T 세포와 거식세포(macrophage)에서 면역 반응의 결과로 분비되는 사이토카인이다. 병원체 감염이나 상처, 조직손상의 결과로 염증이 발생하면 이를 제거 / 처리하기 위해 분비된다. TNF-α나 IL-1과의 상호작용으로, 급성 염증 반응 단백질인 CRP의 간세포 합성을 일으킨다. IL-6는 병원체에 반응하여 대식세포에서 분비되어 T 세포와 B 세포를 통해 면역반응을 촉진 시켜 RA를 일으키는 주요 병인으로 작용한다. 여러 염증성 사이토카인의 분비를 촉진하여 질병의 활성도에 따라 급성 혹은 만성 염증 반응을 일으킨다. RA 질병 초기에 이 IL-6가 증가하는 사실이 밝혀진 후 이를 억제하는 항체가 현재 RA 치료제로 사용하고 있다.
TNF-알파(TNF-α)
TNF-α는 대식세포 혹은 단구에서 생산되는 단백질로 암세포를 죽이는 능력으로 처음 발견되었다. 그리고 폐혈증이나 쇼크를 일으킬 때 대식 세포 뿐만 아니라 다른 여러 세포(CD4+ 림프구, NK 세포, 호중구, 비만 세포, 호산구(eosinophils), 및 뉴런)에서도 TNF-α가 만들어 진다. TNF-α는 급성 염증 반응을 일으키기도 하고, 몸 전체 이상 염증반응에서 특히 증가한다. TNF-α의 중요한 역할은 RA 관절에서 염증을 일으키는 핵심 물질로 알려져 현재 항 TNF-a 제제가 RA치료제로 전 세계에서 널리 사용 되고 있다.
인터루킨-17(IL-17)
IL-17은 T 세포에서 CD4 아형중 T 헬퍼 세포에 의해 생산되는 염증 유발 사이토카인이다. IL-17 은 IL-1이나 TNF-α와 함께 상호 작용하여 만성 염증반응을 촉진하여 인체 여러 조직에 병변을 일으킨다. IL-17의 가장 중요한 역할은 RA에서 만성 염증 반응을 매개하고 유도하는 것이다. 또한, 알레르기 반응과 관절내 연골파괴를 일으키는 주요 단백질이다. 본 발명에서 IL-17은 IL-17에 속하는 하위 사이토카인인, IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E 및 IL-17F을 모두 포함하는 의미이다.
본 발명의 가장 큰 기술적 특징은 상기 설명된 5개의 IFN-γ,IL-17 IL-12, IL-6, 및 TNF-α 로 이루어지는 사이토카인들의 말초 혈액 내 증가 양상을 분석하여, 미분류 관절염 환자들 중에서 ACPA(Anti-Citrullinated Protein Antibody) 음성 류마티스 관절염 환자를 조기에 정확히 진단할 수 있다는 사실을 최초로 발견한 것에 있다. 지금까지 어떠한 보고에 의해서도, ACPA 음성 류마티스 관절염과 상기 5가지의 사이토카인의 수준과의 연관성이 규명된 바 없다. ACPA 음성 류마티스 관절염 환자의 진단의 중요성은 지금까지 어떠한 진단 표지자도 밝혀져 있지 않아, ACPA 음성 류마티스 관절염 환자를 진단하기가 어렵다는 점에 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "미분류 관절염"은 염증성 관절염 중에서 관절염의 원인을 알 수 없어 분류가 되지 않는 관절염을 의미한다.
보다 구체적으로, 본 발명에서의 "미분류 관절염"이란 관절염 원인질환들이 아직 밝혀지지 않았으나, 임상적으로 관절염 소견이 최소 4-6주 이상 뚜렷이 관찰되는 경우를 말한다. 관절통이 있는 부위에 초음파 검사로 염증이 확인이 되지만, 간혹 혈액검사에서 급성 혹은 만성 염증 소견이 관찰되기도 한다. 미분류 관절염 환자들의 임상 소견은 매우 다양하여 진단이 어렵고 치료나 예후를 판단하기는 더욱 불가능하다. 때로는 어깨 통증, 회전근개 파열이나 인대염 등으로 내원하거나 허리 뻣뻣함이나 통증 동반으로 말초관절을 침범하는 척추병증(Peripheral arthritis with spondyloarthropathy) 의심으로 여러 병원을 돌아다니게 된다. 특히 여성들은 폐경기 이후 관절통으로 오인하기도 하고, 나이가 60 넘는 미분류 관절염 환자들은 "염증성 퇴행성 관절염" 으로 오진하기도 한다.
지금까지 본 발명자의 면역 사이토카인에 기반한 여러 임상연구 결과를 종합하면, 이런 "미분류 관절염" 환자들 중 상당수가 ACPA 음성 반응을 보이는 류마티스 관절염 환자로 추정되고 있다. 실제로 전체 RA 환자의 약 1/3 정도에 이르는 것으로 보고되고 있으나, 실제는 더 많은 환자들이 있는 것으로 추정된다. ACPA 음성 RA 환자는 그 임상 양상이 매우 다양하고, 류마티스 인자나 ACPA 같은 진단 지표가 없어 질병 초기에 진단이 매우 어렵다. 특히, 조기 RA에서 흔히 보이는 양측 손 관절염 발생과 조조 강직과 전신 피로는 뚜렷하지 않고, 어깨통증, 허리통증(대부분 디스크로 오인), 무릎 및 발목통증이 간혈적 혹은 발작적으로 나타나는 경우가 많아 정확한 진단을 받지 못하고, 질병 초기에 치료시기를 놓쳐, 심각한 정신적, 육체적인 피해를 입거나 직장을 그만두고 병원을 전전 하고 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "ACPA 음성 류마티스 관절염"은 류마티스 관절염의 대표적 표지자 중의 하나인 ACPA (Anti-Citrullinated Protein Antibody)가 음성이면서 임상적으로 류마티스 관절염과 뚜렷이 다른 양상을 보이는 하나의 독립된 관절염을 의미한다. 현재는 ACPA 음성 류마티스 관절염은 미분류 관절염 군으로 속해 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, ACPA 음성 류마티스 관절염 환자의 진단을 위해, 키트를 사용하여 그 수준을 분석하는 사이토카인은 CD4+ T 세포 병인 연관 사이토카인인 IFN-γ 및 IL-17으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 아싱의 사이토카인; 및 관절 염증 연관 사이토카인인 TNF-α, IL-12 및 IL-17으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인이다. 이 두가지 사이토카인 군의 수준을 동시에 분석한다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 키트에서 CD4+ T 세포 병인 연관 사이토카인 군인 IFN-γ 및 IL-17의 군으로부터 선택되는 사이토카인; 및 관절 염증 연관 사이토카인 군인 TNF-α, IL-12 및 IL-17의 군으로부터 선택되는 사이토카인인 최소 2가지 이상의 사이토카인의 수준을 측정한다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에 따르면, ACPA 음성 류마티스 관절염 환자의 진단을 위해, IFN-γ 및 IL-17A 사이토카인과, TNF-α, IL-12 및 IL-6으로 이루어진 군에서 선택된 1종, 또는 2종 또는 3종의 사이토카인의 수준을 동시에 분석하는 것이다.
상기 사이토카인들의 수준이 정상보다 증가되는 경우 ACPA 음성 류마티스 관절염으로 진단할 수 있다.
본 발명의 상기 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제는 상기 사이토카인에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 키메릭 항체, 리간드, PNA(Peptide nucleic acid), 앱타머(Aptamer), 또는 폴리펩티드이다.
본 발명에서 ACPA 음성 RA 환자 진단에 있어서 사용되는 표현 "사이토카인 수준 분석 또는 측정"은 생물학적 시료에서 상기 사이토카인 단백질의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, 바람직하게는, 상기 사이토카인에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 리간드, PNA(Peptide nucleic acid), 앱타머(Aptamer), 또는 폴리펩타이드를 이용하여 단백질의 양을 형광으로 동시에 측정하여 확인하는 것을 의미한다.
본 발명에서 항체의 항원성은 특정 부위에 결합하는 특이 단백질 분자에 의해 결정된다. 본 발명의 목적상, 항체는 분석 대상 사이토카인 단백질에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다.
단클론 항체는 당업계에 널리 공지된 하이브리도마 방법(hybridoma method)(Kohler 및 Milstein (1976) European Jounral of Immunology 6:511-519 참조), 또는 파지 항체 라이브러리(Clackson et al, Nature, 352:624-628, 1991; Marks et al, J. Mol. Biol., 222:58, 1-597, 1991) 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 상기 방법으로 제조된 항체는 겔 전지영동, 투석, 염 침전, 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 등의 방법을 이용하여 분리, 정제할 수 있다.
또한 본 발명의 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라, 항체 분자의 기능적인 단편을 포함한다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며, Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등이 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 ACPA 음성 RA 진단용 키트는 면역분석(immunoassay)용 키트(kit)이다.
본 발명에서 "면역분석"은 종래에 개발된 다양한 면역분석 또는 면역염색(immunostaining) 프로토콜에 따라 실시될 수 있다. 상기 면역분석 또는 면역염색 포맷은 방사능면역분석, 방사능면역침전, 면역침전, ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay), 단일(single) 또는 다중(multiplex) ELISA, 캡처-ELISA, 억제 또는 경쟁 분석, 샌드위치 분석, 유세포 분석(flow cytometry), 면역형광염색 및 면역친화성 정제를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 면역분석 또는 면역염색의 방법은 Enzyme Immunoassay, E. T. Maggio, ed., CRC Press, Boca Raton, Florida, 1980; Gaastra, W., Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), in Methods in Molecular Biology, Vol. 1, Walker, J.M. ed., Humana Press, NJ, 1984; 및 Ed Harlow and David Lane, Using Antibodies:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999 에 기재되어 있으며, 상기 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 ACPA 음성 RA 진단용 키트는 단백질 마이크로어레이 키트 또는 단일(single) 또는 다중(multiplex)-ELISA 키트이다.
본 발명에서 키트의 종류의 예로는 면역크로마토그래피 스트립 키트, 루미넥스 어세이 키트, 단백질 마이크로어레이(microarray) 키트, 엘라이자(ELISA) 키트, 또는 면역학적 도트 키트 등이 있으나, 상기 예에 의해 본 발명에서 사용 가능한 키트의 종류가 제한되는 것은 아니다.
상기 키트는 엘라이자(ELISA)를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 추가적으로 포함할 수 있다. 엘라이자(ELISA) 키트는 마커 단백질에 대한 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 각 마커 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 대한 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 단클론 항체, 다클론 항체 또는 재조합 항체이다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색단(chromophores), 효소(예: 항체와 컨주게이트됨) 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 방법이 ELISA 방식으로 실시되는 경우, 본 발명의 특정 실시예는 (i) 분석하고자 하는 시료를 고체 기질의 표면에 코팅하는 단계; (ⅱ) 일차 항체로서 분석하고자하는 사이토카인에 대한 항체와 상기 시료를 반응시키는 단계; (ⅲ) 상기 단계 (ⅱ)의 결과물을 효소가 결합된 이차항체와 반응시키는 단계; 및 (ⅳ) 상기 효소의 활성을 측정하는 단계를 포함한다.
상기 고체 기질로 적합한 것은 탄화수소 폴리머(예컨대, 폴리스틸렌 및 폴리프로필렌), 유리, 금속 또는 젤이며, 가장 바람직하게는 마이크로타이터 플레이트이다.
상기 이차항체에 결합된 효소는 발색반응, 형광반응, 발광반응 또는 적외선 반응을 촉매하는 효소를 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 예를 들어, 알칼린 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 호오스 래디쉬퍼옥시다아제, 루시퍼라아제 및 사이토크롬 P450을 포함한다. 상기 이차항체에 결합하는 효소로서 알카라인 포스파타아제가 이용되는 경우에는, 기질로서 브로모클로로인돌일 포스페이트(BCIP), 니트로 블루 테트라졸리움(NBT), 나프톨-ASB1-포스페이트(naphthol-AS-B1-phosphate) 및 ECF(enhanced chemifluorescence)와 같은 발색반응 기질이 이용되고, 호스 래디쉬 퍼옥시다아제가 이용되는 경우에는 클로로나프톨, 아미노에틸카바졸, 디아미노벤지딘, D-루시페린, 루시게닌(비스-N-메틸아크리디늄 니트레이트), 레소루핀 벤질 에테르, 루미놀, 암플렉스 레드 시약 (10-아세틸-3,7-디하이드록시페녹사진), HYR (p-phenylenediamine-HCl and pyrocatechol), TMB (tetramethylbenzidine), ABTS (2,2'-Azine-di[3-ethylbenzthiazoline sulfonate]), o-페닐렌디아민(OPD) 및 나프톨/파이로닌, 글루코스 옥시다아제와 t-NBT (nitroblue tetrazolium) 및 m-PMS(phenzaine methosulfate)와 같은 기질이 이용될 수 있다.
본 발명의 상술한 키트는 다양한 생물학적 시료에서 상기 사이토카인의 수준을 측정한다.
상기 생물학적 시료는 조직(tissue), 전혈, 혈청, 혈장, 체액, 소변, 세포, 세포 파쇄물 또는 세포 배양의 상등액일 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 보다 바람직하게는 상기 생물학적 시료는 전혈, 혈청 또는 혈장일 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 미분류 관절염 중에서 ACPA(anti-citrullinated protein antibody) 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위하여, 분석 대상의 생물학적 시료(sample)에서의 사이토카인의 수준을 측정하는 방법으로서, 상기 사이토카인은 IFN-γ,IL-17, TNF-α, IL-12, 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 미분류 관절염 중에서 ACPA(anti-citrullinated protein antibody) 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위하여, 분석 대상의 생물학적 시료(sample)에서의 사이토카인의 수준을 측정하는 방법에서, CD4+ T 세포 병인 연관 사이토카인인 IFN-γ 및 IL-17으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인; 및 관절 염증 연관 사이토카인인 TNF-α, IL-12, 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 수준을 분석한다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 측정한 사이토카인들의 수준이 정상인 보다 증가한 경우, 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 류마티스 관절염으로 진단할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 사이토카인 중에서 CD4+ T 세포 사이토카인 군인 IFN-γ 및 IL-17의 2종의 사이토카인의 수준을 동시에 측정한다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 사이토카인 중에서 염증성 사이토카인(Inflammatory cytokine)군인 TNF-α, IL-12, 및 IL-6의 3종의 사이토카인 수준을 동시에 측정한다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, IFN-γ 및 IL-17의 2종의 사이토카인의 수준과, TNF-α, IL-12, 및 IL-6의 3종의 이루어지는 군에서 선택되는 1종, 2종, 또는 3종의 사이토카인 수준을 동시에 측정한다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, IFN-γ, IL-17, TNF-α, IL-12, 및 IL-6의 5종의 사이토카인을 동시에 측정한다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 사이토카인의 수준의 측정은 항원-항체 반응 방식으로 실시된다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 사이토카인의 수준의 측정은 항원-항체 반응 방식으로 실시될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 생물학적 시료는 조직(tissue), 전혈, 혈청, 혈장, 체액, 소변, 세포, 세포 파쇄물 또는 세포 배양의 상등액일 수 있으며, 바람직하게는 전혈, 혈청, 또는 혈장일 수 있다.
본 발명에서 상기 측정된 사이토카인의 수준이 정상수준 보다 더 증가되어 있으면, 분석 대상은 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 류마티스 관절염 환자로 진단할 수 있다.
본 발명에서, 분석 대상은 ACPA 양성으로 진단되지 않은 환자로서 미분류 관절염으로 의심되는 환자일 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, IFN-γ, IL-12, IL-6, TNF-α 및 IL-17로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제(agent)를 포함하는 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 사용되는 키트를 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단은, 류마티스 관절염의 치료 결과의 평가를 포함한다.
본 발명의 일 구현에에 따르면, 상기 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에서, 상기 류마티스 관절염은 ACPA(anti-citrullinated protein antibody) 양성 또는 음성 류마티스 관절염이다.
본 발명의 일 구현에에 따르면, 상기 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에서, 상기 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제는 상기 사이토카인에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 키메릭 항체, 리간드, PNA(Peptide nucleic acid), 앱타머(Aptamer), 또는 폴리펩티드이다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 필요한 정보를 제공하기 위하여, 분석 대상의 생물학적 시료(sample)에서의 사이토카인의 수준을 측정하는 방법으로서, IFN-γ,IL-17, TNF-α, IL-12, 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명에서 상기 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단은, 류마티스 관절염의 치료 결과의 평가를 포함한다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에서, 상기 류마티스 관절염은 ACPA(anti-citrullinated protein antibody) 양성 또는 ACPA 음성 류마티스 관절염이다.
본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 상기 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에서, 상기 사이토카인의 수준의 측정은 항원-항체 반응 방식으로 실시된다.
본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 상기 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에서, 상기 생물학적 시료는 조직(tissue), 전혈, 혈청, 혈장, 체액, 소변, 세포, 세포 파쇄물 또는 세포 배양의 상등액일 수 있으며, 보다 바람직하게는 상기 생물학적 시료는 전혈, 혈청 또는 혈장일 수 있다.
본 발명에서 상기 사이토카인의 수준이 정상인의 수준 만큼 낮아진 경우, 류마티스 관절염의 치료 후 예후가 좋은 것으로 또는 치료 결과가 좋은 것으로 판단할 수 있다.
본 발명에서 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 사용되는 키트 및 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 필요한 정보를 제공하기 위해 사이토카인의 수준을 측정하는 방법에서, 상술한 본 발명의 다른 일 양태인 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트 및 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위해 사이토카인의 수준을 측정하는 방법과 서로 공통되고 동일한 내용은, 본 명세서에서 중복하여 다시 기재하지 않는다.
본 발명의 특징 및 이점은 다음과 같다:
(i) 본 발명은 CD4+ T 세포 병인 연관 사이토카인 군인 IFN-γ와 IL-17A, 그리고 관절 염증 연관 사이토카인 군인 TNF-α, IL-12, 및 IL-6에서 각 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제(agent)를 포함하는 미분류 관절염 중에서 ACPA(Anti-Citrullinated Protein Antibody) 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트에 관한 것이다.
(ⅱ) 본 발명은 미분류 관절염 중에서 ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위하여, CD4+ T 세포 사이토카인군인 IFN-γ, 와 IL-17A 중 하나 이상의 증가와, 염증성 사이토카인 군 인 IL-12, IL-6 및 TNF-α 중에서 하나 이상 증가 유무를 측정하는 방법에 관한 것이다.
(ⅲ) 본 발명에 의하면, 종래 미분류 관절염으로 분류되었던 ACPA 음성 류마티스 관절염 혈청에서 이 두 군의 사이토카인 증가 유무를 확인하여 조기에 ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단할 수 있다.
(ⅳ) 본 발명은 CD4+ T 세포 병인 연관 사이토카인 군인 IFN-γ와 IL-17A, 그리고 관절 염증 연관 사이토카인 군인 TNF-α, IL-12, 및 IL-6 에서 각 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제(agent)를 포함하는, 류마티스 관절염의 치료 전 후 질병 활성도를 판단하는 데 사용되는 키트에 관한 것이다.
(ⅴ) 본 발명은 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 필요한 정보를 제공하기 위하여, 분석 대상의 생물학적 시료에서의 사이토카인의 수준을 측정하는 방법으로서, 상기 사이토카인은 IFN-γ, IL-12, IL-6, TNF-α 및 IL-17으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상인, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법에 관한 것이다.
(ⅵ) 본 발명의 방법에 의하면, 혈액 내 사이토카인의 수준을 측정함으로써 류마티스 관절염의 조기 진단과 미분류 관절염과의 감별 진단, 그리고 치료 후 예후 판단에 필요한 정확한 정보를 제공할 수 있다.
도 1는 류마티스 관절염(RA) 초기에 IFN-γ 및 IL-17가 뚜렷하게 증가함을 보여주는 그래프이다.
도 2은 조기 ACPA 양성 류마티스 관절염 (eRA) 환자 치료 전 후 5개의 사이토카인, IFN-γ, IL-17, IL-12, TNF-α, 및 IL-6의 혈청에서의 수준 변화를 보여주는 그래프이다.
도 3은 미분류 관절염 환자들 중 임상적으로 ACPA 음성 RA 선별 기준에 합당한 환자 85명을 선별하여 고감도 다중 사이토카인 검사를 실시한 결과, 임상적 ACPA 음성 RA 환자(n=29명)에서 미분류 관절염의 대표적인 골 관절염 환자 보다 측정한 5개의 사이토카인의 수준이 모두 의미 있게 증가하였음을 보여준다.
도 4은 류마티스 관절염(ACPA 음성 RA 및 ACPA 양성 RA 포함) 환자를 치료한 후, 골관절염 환자 및 정상인과 비교하여, 류마티스 관절염 환자 혈청에서 5개 사이토카인(IFN-γ, IL-17, IL-12, TNF-α, IL-6)의 농도가 감소됨을 보여주는 결과이다.
도 5는 류마티스 관절염(ACPA 음성 RA 및 ACPA 양성 RA 포함) 환자 치료 전과 후 질병 활성도, DAS28(ESR)에 따른 혈청에서의 5개 사이토카인(IFN-γ, IL-17, IL-12, TNF-α, IL-6)의 농도 변화를 보여준다.
도 6은 ACPA 음성 RA 환자 치료 전 후 혈청에서 사이토카인 IFN-γ, IL-17, IL-12, TNF-α, 및 IL-6의 농도 변화를 보여준다.
도 7은 본 발명에서 관절염 환자의 진단 및 치료 평가를 과정을 보여주는 개략도이다.
도 2은 조기 ACPA 양성 류마티스 관절염 (eRA) 환자 치료 전 후 5개의 사이토카인, IFN-γ, IL-17, IL-12, TNF-α, 및 IL-6의 혈청에서의 수준 변화를 보여주는 그래프이다.
도 3은 미분류 관절염 환자들 중 임상적으로 ACPA 음성 RA 선별 기준에 합당한 환자 85명을 선별하여 고감도 다중 사이토카인 검사를 실시한 결과, 임상적 ACPA 음성 RA 환자(n=29명)에서 미분류 관절염의 대표적인 골 관절염 환자 보다 측정한 5개의 사이토카인의 수준이 모두 의미 있게 증가하였음을 보여준다.
도 4은 류마티스 관절염(ACPA 음성 RA 및 ACPA 양성 RA 포함) 환자를 치료한 후, 골관절염 환자 및 정상인과 비교하여, 류마티스 관절염 환자 혈청에서 5개 사이토카인(IFN-γ, IL-17, IL-12, TNF-α, IL-6)의 농도가 감소됨을 보여주는 결과이다.
도 5는 류마티스 관절염(ACPA 음성 RA 및 ACPA 양성 RA 포함) 환자 치료 전과 후 질병 활성도, DAS28(ESR)에 따른 혈청에서의 5개 사이토카인(IFN-γ, IL-17, IL-12, TNF-α, IL-6)의 농도 변화를 보여준다.
도 6은 ACPA 음성 RA 환자 치료 전 후 혈청에서 사이토카인 IFN-γ, IL-17, IL-12, TNF-α, 및 IL-6의 농도 변화를 보여준다.
도 7은 본 발명에서 관절염 환자의 진단 및 치료 평가를 과정을 보여주는 개략도이다.
실시예
실시예 1 : RA 환자에서 혈청 사이토카인 농도 조사
RA 환자에서 5개의 사이토카인인, 인터페론 감마(IFN-γ),인터루킨-17(Interleukin 17, IL-17) 그리고 인터루킨-12(Interleukin12, IL-12), 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6), 및 TNF-alpha(α), 및 들의 혈청 농도를 조사하였다.
상기 사이토카인들의 혈청 농도는 MILLIPLEX(Millipore cor) Human High Sensitivity Cytokine panel을 사용하여, 제조사 제공된 지시서에 따라 96웰 플레이트에서 사이토카인 다중 분석을 수행하였다. 구체적으로 다음과 같이 수행하였다. 150-μL 분석 버퍼로 10분간 플레이트를 적시고, 나머지는 버렸다. 키트에서 제공된 혈청 매트릭스에서 표준물질과 대조군을 재구성하였다. 50μL의 표준물질과 대조군을 적절한 웰에 첨가하였다. 샘플 웰에 25μL의 샘플과 25μL의 분석 버퍼를 첨가하였다. 모든 웰에 25μL의 비드(bead)를 첨가하고, 4℃에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 비드를 3회 세척하고, 50μL의 비오티닐화된 검출 항체 칵테일을 첨가한 후 상온에서 1시간 인큐베이션하였다. 50μL의 스트렙타비딘-피코에리트린을 첨가하고 상온에서 30분가 추가 인큐베이션하였다. 비드를 3회 세척하고 150μL이 sheath fluid를 가하고, Luminexㄾ instrument을 이용하여 형광을 측정하였다.
상기와 같이 측정 결과, RA 질병 초기에, 특히 IFN-γ 및 IL-17이 뚜렷이 증가함을 확인하였다(도 1 참조).
특히, RA 혈청에서 이러한 사이토카인들의 증가는 혈청 CRP 수준이 정상 수치(0.5 mg/dl 이하)일 때에도 지속적으로 증가하는 경향이 관찰되었다. 특히, 조기 관절염일 때 더욱 증가하는 경향을 보였다(도 2 참조)
실시예 2 : ACPA 음성 RA 환자에서 혈청 사이토카인 농도 조사
5개의 사이토카인의 혈중 농도의 증가를 ACPA 양성 RA 환자 뿐만 아니라, 임상적으로 선별된 ACPA 음성 RA 환자에게서 측정한 결과, ACPA 음성 RA 환자에게서도 혈청에서의 사이토카인의 농도가 증가함을 확인하였다(도 3 참조).
실시예 3 : 골 관절염 환자와 ACPA 음성 RA 환자에게서 혈중 사이토카인 수준의 비교
"미분류 관절염"환자들 중 임상적으로 ACPA 음성 RA 선별 기준에 합당한 환자 85명을 선별하여 고감도 다중 사이토카인 검사를 실시하였다. 그 결과 임상적 ACPA 음성 RA 환자(n=29명)에서 골 관절염 환자 보다 5개의 사이토카인(IFN-γ, IL-17, IL-12, TNF-α, IL-6)의 수준이 모두 의미 있게 증가하였음을 확인하였다.(하기 표 1 참조)
상기와 같은 실험 결과는 고감도 다중 사이토카인 검사로 미분류 관절염 환자 중 ACPA 음성 RA를 선별할 수 있는 근거를 제공하고 있다. 고감도 다중 사이토카인 검사로 지금까지 임상적 소견 이외는 거의 불가능하였던 ACPA 음성 RA를 발병 초기에 혈액 검사로 미리 예측할 수 있음을 보여주고 있다.
본 명세서에서 설명된 구체적인 실시예는 본 발명의 바람직한 구현예 또는 예시를 대표하는 의미이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 한정되지는 않는다. 본 발명의 변형과 다른 용도가 본 명세서 특허 청구범위에 기재된 발명의 범위로부터 벗어나지 않는다는 것은 당업자에게 명백하다.
Claims (22)
- IFN-γ, IL-17, TNF-α, IL-12, 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제(agent)를 포함하는 미분류 관절염 중에서 ACPA(Anti-citrullinated protein antibody) 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트.
- 제 1 항에 있어서, 상기 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제는 상기 사이토카인에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 키메릭 항체, 리간드, PNA(Peptide nucleic acid), 앱타머(Aptamer), 또는 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는, ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 진단용 키트는 면역분석(immunoassay)용 키트(kit)인 것을 특징으로 하는, ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 키트는 단백질 마이크로어레이 키트 또는 ELISA 키트인 것을 특징으로 하는, ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트.
- 제 1 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IFN-r 및 IL-17인 것을 특징으로 하는, ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트.
- 제 1 항에 있어서, 상기 사이토카인은 TNF-α, IL-12, 및 IL-6인 것을 특징으로 하는, ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트.
- 제 1 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IFN-γ 및 IL-17으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 사이토카인; 및 TNF-α, IL-12, 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인인 것을 특징으로 하는, ACPA 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 사용되는 키트.
- 미분류 관절염 중에서 ACPA(anti-citrullinated protein antibody) 음성 류마티스 관절염을 진단하는데 필요한 정보를 제공하기 위하여, 분석 대상의 생물학적 시료(sample)에서의 사이토카인의 수준을 측정하는 방법으로서, 상기 사이토카인은 IFN-γ,IL-17, TNF-α, IL-12, 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- 제 8 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IFN-γ 및 IL-17인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- 제 8 항에 있어서, 상기 사이토카인은, TNF-α, IL-12, 및 IL-6인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- 제 8 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IFN-γ 및 IL-17으로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 사이토카인; 및 TNF-α, IL-12, 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- 제 8 항에 있어서, 상기 사이토카인의 수준의 측정은 항원-항체 반응 방식으로 실시되는 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- 제 8 항에 있어서, 상기 생물학적 시료는 조직(tissue), 전혈, 혈청, 혈장, 체액, 소변, 세포, 세포 파쇄물 또는 세포 배양의 상등액인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- IFN-γ, IL-17, TNF-α, IL-12, 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제(agent)를 포함하는 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 사용되는 키트.
- 제 14 항에 있어서, 상기 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단은, 류마티스 관절염의 치료 결과의 평가를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키트.
- 제 14 항에 있어서, 상기 류마티스 관절염은 ACPA(anti-citrullinated protein antibody) 양성 또는 음성 류마티스 관절염인 것을 특징으로 하는, 키트.
- 제 14 항에 있어서, 상기 사이토카인의 수준을 분석할 수 있는 제제는 상기 사이토카인에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 키메릭 항체, 리간드, PNA(Peptide nucleic acid), 앱타머(Aptamer), 또는 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는, 키트.
- 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단에 필요한 정보를 제공하기 위하여, 분석 대상의 생물학적 시료(sample)에서의 사이토카인의 수준을 측정하는 방법으로서, IFN-γ, IL-17, TNF-α, IL-12, 및 IL-6으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- 제 18 항에 있어서, 상기 류마티스 관절염의 치료 후 예후 판단은, 류마티스 관절염의 치료 결과의 평가를 포함하는 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- 제 18 항에 있어서, 상기 류마티스 관절염은 ACPA(anti-citrullinated protein antibody) 양성 또는 음성 류마티스 관절염인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- 제 18 항에 있어서, 상기 사이토카인의 수준의 측정은 항원-항체 반응 방식으로 실시되는 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
- 제 18 항에 있어서, 상기 생물학적 시료는 조직(tissue), 전혈, 혈청, 혈장, 체액, 소변, 세포, 세포 파쇄물 또는 세포 배양의 상등액인 것을 특징으로 하는, 사이토카인의 수준을 측정하는 방법.
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|---|---|---|---|---|
| CN114594266A (zh) * | 2022-03-02 | 2022-06-07 | 安徽中医药大学第一附属医院(安徽省中医院) | M1联合m2型巨噬细胞因子作为生物标志物在类风湿关节炎诊断和治疗监测中的用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20140093901A (ko) | 2013-01-18 | 2014-07-29 | 서울대학교산학협력단 | 류마티스 관절염 진단용 바이오마커 |
| KR101614758B1 (ko) | 2014-07-09 | 2016-04-22 | 한국과학기술연구원 | 류마티스관절염과 골관절염의 감별 진단을 위한 대사체 |
-
2019
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Patent Citations (2)
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| CN114594266A (zh) * | 2022-03-02 | 2022-06-07 | 安徽中医药大学第一附属医院(安徽省中医院) | M1联合m2型巨噬细胞因子作为生物标志物在类风湿关节炎诊断和治疗监测中的用途 |
| CN114594266B (zh) * | 2022-03-02 | 2022-12-27 | 安徽中医药大学第一附属医院(安徽省中医院) | M1联合m2型巨噬细胞因子作为生物标志物在类风湿关节炎诊断和治疗监测中的用途 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
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