KR20200073856A - Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum using Weissella cibaria JW15 strain - Google Patents

Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum using Weissella cibaria JW15 strain Download PDF

Info

Publication number
KR20200073856A
KR20200073856A KR1020180162497A KR20180162497A KR20200073856A KR 20200073856 A KR20200073856 A KR 20200073856A KR 1020180162497 A KR1020180162497 A KR 1020180162497A KR 20180162497 A KR20180162497 A KR 20180162497A KR 20200073856 A KR20200073856 A KR 20200073856A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
bellflower
content
strain
platycodin
present
Prior art date
Application number
KR1020180162497A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR102255666B1 (en
Inventor
임푸름
김상범
최애진
황인국
최정숙
Original Assignee
대한민국(농촌진흥청장)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 대한민국(농촌진흥청장) filed Critical 대한민국(농촌진흥청장)
Priority to KR1020180162497A priority Critical patent/KR102255666B1/en
Publication of KR20200073856A publication Critical patent/KR20200073856A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR102255666B1 publication Critical patent/KR102255666B1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
    • A23L19/10—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof of tuberous or like starch containing root crops
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065—Microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

The present invention relates to a method for increasing the platycodin D content of Platycodon grandiflorum. The method includes a step of inoculating Platycodon grandiflorum with a Weissella cibaria JW15 strain deposited under the accession number KACC91811P, and culturing the strain. It has been confirmed that the Platycodon grandiflorum prepared by the method of the present invention is higher in platycodin D content than Platycodon grandiflorum not inoculated with the strain. The platycodin D content of Platycodon grandiflorum can be increased by the method of the present invention, and the Platycodon grandiflorum prepared by the method of the present invention has high industrial applicability.

Description

와이셀라 시바리아(Weissella cibaria) JW15 균주를 이용하여 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법{Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum using Weissella cibaria JW15 strain}Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum using Weissella cibaria JW15 strain

본 발명은 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a method for enhancing the Platycodin D content of bellflower.

도라지(Platycodon grandiflorum)는 초롱꽃과의 쌍떡잎식물로 여러해살이풀이며, 전체에 털이 없고 뿌리는 비대하고, 줄기는 하나 또는 모여서 나며, 전국 각지 산야에서 자생한다. 우리나라에서는 주로 식용으로 많이 쓰였으나, 약리 성분 및 약리학적인 기능을 인정받아 식용 뿐만 아니라 건강기능식품으로서도 소비량이 증가하면서 그 재배면적이 확대되고 있다. 한방에서는 뿌리 또는 주피를 제거하여 길경이라는 약재를 만들 때 사용하는데, 이 약재는 진해 및 거담에 이용되며 추출액은 진정, 해열, 진통, 진해, 거담, 혈당강하, 콜레스테롤 대사개선, 항콜린, 항암 및 위산분비억제 효과가 있다. Platycodon grandiflorum ) is a dicotyledonous plant with perennial flowers, perennial plant, hairless, roots large, and stems gathered together, native to wild mountains all over the country. In Korea, it was mainly used for food, but its cultivation area is expanding as consumption is increased not only for food but also for health functional foods because of its pharmacological and pharmacological functions. In oriental medicine, it is used to make a medicine called Gilkyung by removing the root or skin, and this medicine is used for Jinhae and Geodam, and the extract is sedative, antipyretic, analgesic, Jinhae, Geodam, lowering blood sugar, improving cholesterol metabolism, anticholine, anticancer and stomach acid It has the effect of suppressing secretion.

도라지는 당질, 칼슘과 철분 등이 풍부하게 들어있는 알칼리성 식품으로 사포닌(saponin)을 주요 약리 성분으로 한다. 도라지에 함유된 사포닌으로는 플라티코디제닌(platycodigenin)을 비당체(aglycon)로 하는 플라티코딘(platycodin) A, C, D, D2, D3, 플라티코디제닌 산(platycodigenic acid) A1 내지 A5, C, 폴리갈라식산(polygalacic acid), 폴리갈라신(polygalacin) D, D2, 플라티코디제닌, 플라티코디젠-3-O-β-D-글루코피라노시드 등이 있다. 상기 사포닌 성분은 진해, 거담작용, 중추신경억제작용(진정, 진통, 해열), 혈관을 확장하여 혈압을 낮추는 항 콜린작용, 혈당강하, 콜레스테롤 대사 개선, 항콜린, 항암, 위산분비억제, 항궤양, 배농 등의 활성이 알려져 있고, 화농성 종기, 천식 및 폐결핵의 거담제로서 늑막염 등에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다(Kawashima K et al., 1972, Chem. Pharm. Bull. 20: 755-758, Kato H et al., 1973, Jpn. J. Pharmacol. 23: 709-716).Bellflower is an alkaline food rich in carbohydrates, calcium and iron, and has saponin as its main pharmacological component. Saponins contained in bellflower include platycodins A, C, D, D2, D3, and platicodigenic acids A1 to A5, in which platycodigenin is aglycon. , C, polygalacic acid, polygalacin D, D2, platicodigenin, platicodigen-3-O-β-D-glucopyranoside, and the like. The saponin component is antitussive, expectorant, central nervous suppression (calm, analgesic, antipyretic), anti-cholinergic action that lowers blood pressure by expanding blood vessels, lowering blood sugar, improving cholesterol metabolism, anticholinergic, anticancer, gastric acid secretion inhibition, antiulcer Activity such as drainage is known, and it is known to have an effect on pleurisy as an expectorant for purulent boils, asthma and pulmonary tuberculosis (Kawashima K et al ., 1972, Chem. Pharm. Bull. 20: 755-758, Kato H et. al ., 1973, Jpn. J. Pharmacol. 23: 709-716).

특히, 플라티코딘 D는 항염증, 항비만, 항아토피 등 다양한 효과가 있는 것으로 보고되어 있고, 관련하여 대한민국 등록특허 제10-1516063호는 플라티코딘 D가 함유된 도라지 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습용 화장료 조성물을 개시하고 있다. 플라티코딘 D를 척수에 투여하면 GABA알파, GABA베타, NMDA 및 non-NMDA 수용체에 의해 통증에 대한 감수성이 현저하게 낮아지며(Choi SS et al., 2002, Planta Med. 68: 794-798), 단백질 키나제 C가 활성화된 랫트의 복막대식세포에서 프로스타글란딘 E2의 합성을 억제한다는 보고가 있다(Ida Y et al., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 2209-2212). In particular, Platycodin D has been reported to have various effects such as anti-inflammatory, anti-obesity, and anti-atopy, and Korean Patent No. 10-1516063 related to it includes the bellflower extract containing Platycodin D as an active ingredient. Disclosed is a cosmetic composition for moisturizing skin. Platicodine D administration to the spinal cord significantly reduces susceptibility to pain by GABAalpha, GABAbeta, NMDA and non-NMDA receptors (Choi SS et al ., 2002, Planta Med. 68: 794-798), It has been reported that protein kinase C inhibits the synthesis of prostaglandin E2 in peritoneal macrophages of activated rats (Ida Y et al ., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 2209-2212).

한편, 중국에서는 도라지의 지표성분을 플라티코딘 D로 하여 그 함량이 건조품 기준으로 0.1% 이상일 것으로 설정하여 관리하고 있으나, 대한민국 또는 일본의 경우 생약재로서 도라지에 대한 정량 설정 기준이 없고, 대한민국 국산 도라지의 플라티코딘 D 함량 범위는 약 0.020 내지 0.096%인 것으로 보고된 바 있다(Dea Seok Yoo et al., 2011, Food Chemistry 129(2): 645-651). 따라서, 다양한 약리 활성을 갖는 플라티코딘 D의 함량을 도라지에서 증진시키는 방법을 개발하여 국산 도라지의 경쟁력을 강화하고 산업적 활용을 확대하는 방안이 필요하다.On the other hand, in China, the index component of bellflower is platinum-D, and its content is set to be 0.1% or more based on dry products.However, in Korea or Japan, there is no quantitative setting standard for bellflower as a medicinal herb, and Korean bellflower It has been reported that the range of platinum cod D content is about 0.020 to 0.096% (Dea Seok Yoo et al., 2011, Food Chemistry 129(2): 645-651). Therefore, it is necessary to develop a method to enhance the content of Platycodin D having various pharmacological activities in bellflowers to strengthen the competitiveness of domestic bellflowers and expand industrial utilization.

본 발명의 목적은 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법 및 플라티코딘 D 함량이 증진된 도라지를 제공하는 것이다. It is an object of the present invention to provide a method for enhancing the platinum content of bellflower and a bellflower enhanced platinum content.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 기탁번호 KACC91811P로 기탁된 와이셀라 시바리아(Weissella cibaria) JW15 균주를 도라지에 접종하고 배양하는 단계를 포함하는 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention is a Weissella deposited with accession number KACC91811P ( Weissella cibaria ) provides a method for enhancing the platicoidin D content of bellflower, comprising inoculating and culturing JW15 strain in bellflower.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 플라티코딘 D 함량이 증진된 도라지를 제공한다. In addition, the present invention provides a bellflower with enhanced platinum-D content produced by the above method.

본 발명은 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법에 관한 것으로, 구체적으로 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 도라지에 접종하고 배양한 결과, 균주를 접종하지 않은 도라지보다 플라티코딘 D 함량이 높음을 확인하였다. 본 발명의 방법을 통해 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시킬 수 있는 바, 본 발명의 방법으로 제조된 도라지는 산업적 활용도가 뛰어나다. The present invention relates to a method for enhancing the Platycodine D content of bellflower, specifically, as a result of inoculating and cultured the Wasella Sibaria JW15 strain on Bellflower, the Platycodine D content is higher than that of the bellflower not inoculated with the strain. Confirmed. Through the method of the present invention, the platinum content of bellflower can be enhanced, and the bellflower produced by the method of the present invention has excellent industrial utilization.

도 1은 와이셀라 시바리아(Weissella cibaria) JW15 균주를 배양하고 도라지에 접종하는 2가지 방법을 나타낸 도이다.
도 2는 균주를 접종하지 않은 도라지의 추출물(비교예 1)의 HPLC 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 도라지의 열수 추출물을 제조한 후, 열수 추출물에 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 접종하고 배양한 배양액(실시예 2-1)의 HPLC 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 도라지에 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 접종하고 배양한 후, 배양액을 열수 추출한 추출물(실시예 2-2)의 HPLC 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 균주를 접종하지 않은 도라지(비교예 1) 및 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 접종하고 배양한 도라지(실시예 2-1 및 실시예 2-2)의 플라티코딘 D의 함량을 나타낸 도이다.
도 6은 균주를 접종하지 않은 도라지(비교예 1) 및 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 접종하고 배양한 도라지(실시예 2-1 및 실시예 2-2)의 플라티코딘 D의 증가율을 나타낸 도이다. 1 is a diagram showing two methods of culturing Weissella cibaria JW15 strain and inoculating bellflower.
2 is a view showing the results of HPLC analysis of the extract (Comparative Example 1) of the bellflower not inoculated with the strain.
3 is a view showing the results of HPLC analysis of a culture solution (Example 2-1) inoculated with Wasilla Cibaria JW15 strain to a hot water extract after preparing a hot water extract of bellflower.
4 is a diagram showing the results of HPLC analysis of an extract (Example 2-2) of hot water extracted from a culture medium after inoculating and cultivating a bellflower Wasella Sibaria JW15 strain.
Figure 5 is a diagram showing the content of Platycodin D of the bellflower (Example 2-1 and Example 2-2) inoculated and cultured with the strains of the bellflower (Comparative Example 1) and the Wasella Sibaria JW15 strain. to be.
Figure 6 is a diagram showing the increase rate of Platycodin D of the bellflower (Example 2-1 and Example 2-2) inoculated and inoculated with the strains of the bellflower (Comparative Example 1) and the Isella Sibaria JW15 strain. to be.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 기탁번호 KACC91811P로 기탁된 와이셀라 시바리아(Weissella cibaria) JW15 균주를 도라지에 접종하고 배양하는 단계를 포함하는 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법을 제공한다. The present invention provides a method for enhancing the Platycodine D content of bellflower, comprising inoculating and culturing a Weissella cibaria JW15 strain deposited with accession number KACC91811P in bellflower.

상기 배양은 25 내지 50℃의 온도에서 10 내지 40시간 동안 수행될 수 있다. 구체적으로, 상기 배양은 25 내지 45℃, 30 내지 50℃, 30 내지 45℃, 30 내지 40℃, 35 내지 45℃, 또는 35 내지 40℃의 온도에서 수행될 수 있다. 또한, 상기 배양은 10 내지 35시간, 15 내지 40시간, 15 내지 35시간, 20 내지 35시간, 15 내지 30시간 또는 20 내지 30시간 동안 수행될 수 있다. 상기 배양 온도 또는 상기 배양 시간 조건을 벗어난 범위에서는 도라지의 플라티코딘 D 함량이 증진되지 않을 수 있다. 본 발명의 실시예에 의하면, 상기 배양은 37℃의 온도에서 24시간 동안 수행될 수 있다. The culture may be performed at a temperature of 25 to 50°C for 10 to 40 hours. Specifically, the culture may be carried out at a temperature of 25 to 45 ℃, 30 to 50 ℃, 30 to 45 ℃, 30 to 40 ℃, 35 to 45 ℃, or 35 to 40 ℃. In addition, the culture may be performed for 10 to 35 hours, 15 to 40 hours, 15 to 35 hours, 20 to 35 hours, 15 to 30 hours, or 20 to 30 hours. In the range outside the culture temperature or the culture time condition, the Platycodine D content of bellflower may not be enhanced. According to an embodiment of the present invention, the culture may be performed for 24 hours at a temperature of 37 ℃.

상기 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 도라지 1 g당 6×107 내지 6×109 CFU로 접종할 수 있다. 구체적으로, 도라지 1 g당 9×107 내지 6×109 CFU, 6×107 내지 3×109 CFU, 9×107 내지 3×109 CFU, 3×108 내지 3×109 CFU, 9×107 내지 9×108 CFU 또는 3×108 내지 9×108 CFU로 접종할 수 있다. 상기 균 접종수를 벗어난 범위에서는 도라지의 플라티코딘 D 함량이 증진되지 않을 수 있다. 본 발명의 실시예에 의하면, 상기 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 도라지 1 g 당 6.6625×108 CFU로 접종할 수 있다. The Wisella sivaria JW15 strain may be inoculated with 6×10 7 to 6×10 9 CFU per 1 g of bellflower. Specifically, 9×10 7 to 6×10 9 CFU per 1 g of bellflower, 6×10 7 to 3×10 9 CFU, 9×10 7 to 3×10 9 CFU, 3×10 8 to 3×10 9 CFU , 9×10 7 to 9×10 8 CFU or 3×10 8 to 9×10 8 CFU. In the range outside the number of inoculations, the Platycodin D content of bellflower may not be enhanced. According to an embodiment of the present invention, the Wisella sivaria JW15 strain can be inoculated at 6.6625×10 8 CFU per 1 g of bellflower.

상기 도라지는 통도라지, 세절된 도라지, 도라지 분말 또는 도라지 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. The bellflower may be a whole bellflower, a finely cut bellflower, a bellflower powder or a bellflower extract, but is not limited thereto.

상기 도라지 추출물은 도라지에 추출용매를 가하여 제조될 수 있다. 추출용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물일 수 있다. 본 발명의 실시예에 의하면, 상기 추출용매는 물일 수 있다. 상기 추출용매는 추출에 사용되는 도라지 건조중량 1 g 당 5 내지 50 mL, 5 내지 40 mL, 5 내지 30 mL, 10 내지 30 mL, 15 내지 30 mL 또는 15 내지 25 mL 의 양으로 첨가될 수 있다. 본 발명의 실시예에 의하면, 상기 추출용매는 도라지 건조중량 1 g당 20 mL의 양으로 첨가될 수 있다. The bellflower extract may be prepared by adding an extraction solvent to the bellflower. The extraction solvent may be water, alcohol or a mixture thereof. According to an embodiment of the present invention, the extraction solvent may be water. The extraction solvent may be added in an amount of 5 to 50 mL, 5 to 40 mL, 5 to 30 mL, 10 to 30 mL, 15 to 30 mL, or 15 to 25 mL per 1 g of bellflower dry weight used for extraction. . According to an embodiment of the present invention, the extraction solvent may be added in an amount of 20 mL per 1 g of bellflower dry weight.

상기 도라지 추출물은 진탕추출, Soxhlet 추출, 환류추출 또는 초음파추출 방법에 의해 제조될 수 있다. 이때, 추출 온도는 80 내지 120℃, 90 내지 110℃, 95 내지 110℃, 90 내지 105℃, 또는 95 내지 105℃일 수 있다. 또한, 추출 시간은 1 내지 10시간, 2 내지 8시간, 3 내지 7시간, 3 내지 6시간, 4 내지 7시간 또는 4 내지 6시간일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면, 추출 온도는 100℃, 추출 시간은 5시간일 수 있다. The bellflower extract may be prepared by shaking extraction, Soxhlet extraction, reflux extraction or ultrasonic extraction. At this time, the extraction temperature may be 80 to 120°C, 90 to 110°C, 95 to 110°C, 90 to 105°C, or 95 to 105°C. In addition, the extraction time may be 1 to 10 hours, 2 to 8 hours, 3 to 7 hours, 3 to 6 hours, 4 to 7 hours, or 4 to 6 hours. According to an embodiment of the present invention, the extraction temperature may be 100°C, and the extraction time may be 5 hours.

상기 추출방법은 감압농축 및 건조하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있다. 또한, 상기 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조일 수 있고, 구체적으로는 동결건조일 수 있다.The extraction method may further include the step of concentration under reduced pressure and drying. The reduced pressure concentrator may use a vacuum reduced pressure concentrator or a vacuum rotary evaporator. In addition, the drying may be vacuum drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, and specifically, freeze drying.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 플라티코딘 D 함량이 증진된 도라지를 제공한다. In addition, the present invention provides a bellflower with enhanced platinum-D content produced by the above method.

상기 방법으로 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 방법은 기탁번호 KACC91811P로 기탁된 와이셀라 시바리아(Weissella cibaria) JW15 균주를 도라지에 접종하고 배양하는 단계를 포함하는 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법일 수 있다. The above-described method may have the characteristics as described above. In one embodiment of the present invention, the method is a method for enhancing Platycodine D content of bellflower, comprising inoculating and culturing a Weissella cibaria JW15 strain deposited with the accession number KACC91811P in bellflower. Can.

상기 배양은 25 내지 50℃의 온도에서 10 내지 40시간 동안 수행될 수 있다. 상기 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 도라지 1 g당 6×107 내지 6×109 CFU로 접종할 수 있다. The culture may be performed at a temperature of 25 to 50°C for 10 to 40 hours. The Wisella sivaria JW15 strain may be inoculated with 6×10 7 to 6×10 9 CFU per 1 g of bellflower.

상기 도라지는 통도라지, 세절된 도라지, 도라지 분말 또는 도라지 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 도라지 추출물은 도라지에 추출용매를 가하여 제조될 수 있다. 추출용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물일 수 있다. 본 발명의 실시예에 의하면, 상기 추출용매는 물일 수 있다.The bellflower may be a whole bellflower, a finely cut bellflower, a bellflower powder or a bellflower extract, but is not limited thereto. The bellflower extract may be prepared by adding an extraction solvent to the bellflower. The extraction solvent may be water, alcohol or a mixture thereof. According to an embodiment of the present invention, the extraction solvent may be water.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 열수 추출한 도라지에 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 접종하고 배양한 배양액(실시예 2-1)과 도라지에 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 접종하고 배양한 배양액을 열수 추출한 추출물(실시예 2-2)은 균주를 접종하지 않은 도라지(비교예 1)보다 플라티코딘 D 함량이 높음을 확인하였다. 구체적으로, 비교예 1과 비교하여 실시예 2-1은 169.54%, 실시예 2-2는 165.97% 증가함을 확인하였다 (도 2 내지 도 6 참조). In a specific embodiment of the present invention, the present inventors inoculated and cultured inoculated with Wasilla Sibaria JW15 strain on hot water extracted bellflower (Example 2-1) and cultured with inoculated and cultured Wasella Sibaria JW15 strain in Bellflower It was confirmed that the hot water extracted extract (Example 2-2) had a higher platicodine D content than the bellflower (Comparative Example 1) that did not inoculate the strain. Specifically, as compared with Comparative Example 1, it was confirmed that Example 2-1 increased by 169.54% and Example 2-2 increased by 165.97% (see FIGS. 2 to 6 ).

따라서, 본 발명의 방법은 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증시키는 방법으로 유용하게 사용될 수 있다. Therefore, the method of the present invention can be usefully used as a method of increasing the platinum content of bellflower.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are only to illustrate the present invention, the content of the present invention is not limited by the following examples.

<< 실시예Example 1> 1> 와이셀라Weissela 시바리아Sibaria (( WeissellaWeissella cibariacibaria ) JW15 균주의 대량 배양 ) Mass culture of JW15 strain

기탁번호 KACC91811P로 기탁된 와이셀라 시바리아(Weissella cibaria) JW15 균주를 분양받아 계대배양하고 이를 1,600 mL MRS 배지에 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양액을 4℃에서 3,000 rpm으로 5분 동안 원심분리(High-Speed Refrigerated Centrifuge, himac CR21GⅡ, HITACHI)하여 펠렛 100 mL을 수득하고, 수득한 펠렛 1 mL을 취하고 단계 희석하여 균수를 측정하였다. 와이셀라 시바리아 JW15 균주 배양액 내 균수는 53.3×107 CFU/mL이다. Weissella deposited with accession number KACC91811P cibaria ) JW15 strain was pre-populated and subcultured, and inoculated in 1,600 mL MRS medium and cultured at 37° C. for 24 hours. The culture solution was centrifuged at 4° C. at 3,000 rpm for 5 minutes (High-Speed Refrigerated Centrifuge, himac CR21GII, HITACHI) to obtain 100 mL of pellets, 1 mL of the obtained pellets were taken and diluted in steps to measure the number of bacteria. The number of bacteria in the culture medium of the Isella Sibaria JW15 strain is 53.3×10 7 CFU/mL.

<< 실시예Example 2> 2> 와이셀라Weissela 시바리아Sibaria JW15 균주로 배양한 도라지의 제조 Preparation of bellflower cultured with JW15 strain

실시예 1에서 배양한 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 도라지 시료에 접종하였다 (도 1). The wasella inoculated with the Wasella sivaria JW15 culture cultured in Example 1 was inoculated in a bellflower sample (FIG. 1).

<2-1> 도라지를 <2-1> Bellflower 열수Hydrothermal 추출한 후 JW15 균주로 배양 After extraction, culture with JW15 strain

도라지 20 g에 3차 증류수 400 mL를 가하고 100℃에서 5시간 동안 초음파를 가해 열수 추출하였다. 열수 추출한 도라지 추출물에 실시예 1에서 배양한 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 25 mL(13.325×107 CFU)를 접종하고, 37℃ 수조에서 80~95 rpm으로 24시간 동안 배양했다. 배양이 완료된 배양액은 감압 여과하여 부산물을 제거하고 여액만을 동결건조하였다. 400 mL of tertiary distilled water was added to 20 g of bellflower and hot water was extracted by adding ultrasonic waves at 100° C. for 5 hours. Inoculated with 25 mL (13.325×10 7 CFU) of Wasilla sivaria JW15 strain cultured in Example 1 to the bellflower extract extracted with hot water, and cultured in a 37° C. water tank at 80-95 rpm for 24 hours. After the culture was completed, the culture solution was filtered under reduced pressure to remove by-products, and only the filtrate was lyophilized.

<2-2> 도라지를 JW15 균주로 배양 후 <2-2> After culturing bellflower with JW15 strain 열수Hydrothermal 추출 extraction

도라지 시료 20 g에 실시예 1에서 배양한 Weissella cibaria JW15 균주 25 mL(13.325×107 CFU)를 접종하고, 3차 증류수 400 mL를 가하고 37℃ 수조에서 80~95 rpm으로 24시간 동안 배양하였다. 배양이 완료된 배양액을 100℃에서 6~8시간 동안 초음파를 가해 열수 추출하였다. 열수 추출물은 감압 여과하여 부산물을 제거하고 여액만을 동결건조하였다. To 20 g of bellflower sample, 25 mL (13.325×10 7 CFU) of Weissella cibaria JW15 strain cultured in Example 1 was inoculated, 400 mL of tertiary distilled water was added, and cultured at 37° C. water tank at 80-95 rpm for 24 hours. After the culture was completed, hot water was extracted by adding ultrasonic waves at 100° C. for 6 to 8 hours. The hot water extract was filtered under reduced pressure to remove by-products, and only the filtrate was lyophilized.

<< 비교예Comparative example 1> 도라지의 1> bellflower 열수Hydrothermal 추출물 제조 Extract preparation

도라지 20 g에 3차 증류수 400 mL를 가하고 100℃에서 5시간 동안 초음파를 가해 열수 추출하였다. 열수 추출물은 감압 여과하여 부산물을 제거하고 여액만을 동결건조하였다. 400 mL of tertiary distilled water was added to 20 g of bellflower and hot water was extracted by adding ultrasonic waves at 100° C. for 5 hours. The hot water extract was filtered under reduced pressure to remove by-products, and only the filtrate was lyophilized.

<실험예 1> 와이셀라 시바리아 JW15 균주로 배양한 도라지의 플라티코딘 D 함량 변화 확인<Experimental Example 1> Confirmation of changes in Platycodine D content of bellflower cultured with a Wasella Sibaria JW15 strain

와이셀라 시바리아 JW15 균주를 접종한 도라지의 플라티코딘 D 함량 변화를 HPLC 분석을 통해 확인하였다. Changes in the Platycodin D content of bellflower inoculated with the Isella Sibaria JW15 strain were confirmed by HPLC analysis.

실시예 2 및 비교예 1에서 수득한 동결건조된 도라지 추출물을 분말화하고, 분말 0.2 g을 70% 에탄올 2 mL에 녹였다. 용해된 시료에 70% 에탄올 용매를 넣고 3,000 rpm으로 5분 동안 원심분리하고, 0.22 ㎛ 필터를 이용하여 상층액을 여과하였다. HPLC 기기(Waters e2695)을 이용하여 여액의 플라티코딘 D 함량을 측정하였다. 컬럼은 Kintex XB-C18 (4.6×250mm, 5 ㎛)을 이용하였고, 컬럼의 온도 25℃로 설정하였다. 이동상은 하기 표 1의 조건대로 이용하였고, 0.8 mL/min 유속으로 20 ㎕ 주입하였다. 검출기는 204 nm의 UV 검출기를 이용하였다. HPLC 결과를 바탕으로 플라티코딘 D에 해당되는 피크의 Area 값을 산출하여 플라티코딘 D의 함량을 나타내었다 (표 2, 도 2 내지 도 6). 증가율은 대조군인 비교예 1의 값과 비교하여 증가된 비율을 나타낸 것이다. The lyophilized bellflower extract obtained in Example 2 and Comparative Example 1 was powdered, and 0.2 g of powder was dissolved in 2 mL of 70% ethanol. 70% ethanol solvent was added to the dissolved sample and centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes, and the supernatant was filtered using a 0.22 μm filter. The platinum filtrate D content of the filtrate was measured using an HPLC instrument (Waters e2695). As the column, Kintex XB-C18 (4.6×250 mm, 5 μm) was used, and the temperature of the column was set to 25°C. The mobile phase was used as the conditions in Table 1 below, and 20 μl was injected at a flow rate of 0.8 mL/min. As the detector, a UV detector of 204 nm was used. Based on the HPLC results, the area value of the peak corresponding to platinum-D was calculated to indicate the content of platinum-D (Table 2, FIGS. 2 to 6). The increase rate shows an increased rate compared to the value of Comparative Example 1, which is a control group.

시간(분)Hour (minute) 용매menstruum 아세토니트릴(%)Acetonitrile (%) 물(%)water(%) 00 1010 9090 55 1010 9090 2525 2222 7878 5050 2828 7272 6565 3535 6565 7070 6060 4040 7676 9595 55 8383 9595 55 8989 5050 5050 9494 1010 9090 105105 1010 9090

플라티코딘 DPlatycodin D 함량 (㎍/mL)Content (㎍/mL) 증가율(%)Growth rate (%) 비교예 1Comparative Example 1 1.18011.1801 100.00 100.00 실시예 2-1Example 2-1 2.00082.0008 169.54 169.54 실시예 2-2Example 2-2 1.95861.9586 165.97 165.97

그 결과, 균주를 접종하지 않은 도라지(비교예 1)보다 와이셀라 시바리아 JW15 균주로 접종한 도라지(실시예 2-1 및 실시예 2-2)에서 플라티코딘 D 함량이 높았으며, 구체적으로 비교예 1과 비교하여 실시예 2-1의 도라지는 169.54%, 실시예 2-2의 도라지는 165.97%만큼 플라티코딘 D의 함량이 증가한 것으로 나타났다 (표 2, 도 2 내지 도 6). As a result, the Platycodin D content was higher in the bellflower (Example 2-1 and Example 2-2) inoculated with the Wasella Sibaria JW15 strain than the bellflower (Comparative Example 1) that was not inoculated with the strain, specifically Compared to Comparative Example 1, the bellflower of Example 2-1 was found to have increased the content of platicodine D by 169.54% and the bellflower of Example 2-2 by 165.97% (Table 2, Figures 2 to 6).

Claims (6)

기탁번호 KACC91811P로 기탁된 와이셀라 시바리아(Weissella cibaria) JW15 균주를 도라지에 접종하고 배양하는 단계를 포함하는 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법.
A method of enhancing Platycodine D content of bellflower comprising inoculating and culturing a Weissella cibaria JW15 strain deposited with accession number KACC91811P in bellflower.
제1항에 있어서,
상기 배양은 25 내지 50℃의 온도에서 10 내지 40시간 동안 수행되는, 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법.
According to claim 1,
The culture is carried out at a temperature of 25 to 50 ℃ for 10 to 40 hours, a method of enhancing the Platycodin D content of bellflower.
제1항에 있어서,
상기 와이셀라 시바리아 JW15 균주를 도라지 1 g당 6×107 내지 6×109 CFU로 접종하는, 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법.
According to claim 1,
Method for enhancing the Platycodin D content of bellflower, inoculating the Wisella sibaria JW15 strain with 6×10 7 to 6×10 9 CFU per 1 g of bellflower.
제1항에 있어서,
상기 도라지는 통도라지, 세절된 도라지, 도라지 분말 또는 도라지 추출물인, 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법.
According to claim 1,
The bellflower is a whole bellflower, a shredded bellflower, a bellflower powder or a bellflower extract, a method of enhancing the platinum content of bellflower.
제4항에 있어서,
상기 도라지 추출물은 도라지에 물을 추출 용매로 가하여 추출된 것인, 도라지의 플라티코딘 D 함량을 증진시키는 방법.
According to claim 4,
The bellflower extract is extracted by adding water to the bellflower as an extraction solvent, a method of enhancing the platinum content of bellflower.
제1항의 방법으로 제조된 플라티코딘 D 함량이 증진된 도라지.
A bellflower with enhanced platinum-D content produced by the method of claim 1.
KR1020180162497A 2018-12-14 2018-12-14 Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum using Weissella cibaria JW15 strain KR102255666B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180162497A KR102255666B1 (en) 2018-12-14 2018-12-14 Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum using Weissella cibaria JW15 strain

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180162497A KR102255666B1 (en) 2018-12-14 2018-12-14 Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum using Weissella cibaria JW15 strain

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20200073856A true KR20200073856A (en) 2020-06-24
KR102255666B1 KR102255666B1 (en) 2021-05-25

Family

ID=71407616

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020180162497A KR102255666B1 (en) 2018-12-14 2018-12-14 Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum using Weissella cibaria JW15 strain

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102255666B1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130011013A (en) * 2011-07-20 2013-01-30 주식회사 바이오랜드 Manufacturing methods of fermentation bellflower increased aneffective ingredient
KR20140096753A (en) * 2013-01-29 2014-08-06 연세대학교 원주산학협력단 Skin moisturizing composition comprising Platycodin grandiflorum containing platycodin D
KR20150031922A (en) * 2013-09-17 2015-03-25 충북대학교 산학협력단 Novel Weissella cibaria JW15 strain and use the same

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130011013A (en) * 2011-07-20 2013-01-30 주식회사 바이오랜드 Manufacturing methods of fermentation bellflower increased aneffective ingredient
KR20140096753A (en) * 2013-01-29 2014-08-06 연세대학교 원주산학협력단 Skin moisturizing composition comprising Platycodin grandiflorum containing platycodin D
KR20150031922A (en) * 2013-09-17 2015-03-25 충북대학교 산학협력단 Novel Weissella cibaria JW15 strain and use the same

Also Published As

Publication number Publication date
KR102255666B1 (en) 2021-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102304498B1 (en) Composition for anti-transmissible gastroenteritis virus (tgev) and pharmaceutical composition including the same
KR102056300B1 (en) Composition for improving cognitive or memory functions comprising Aster glehni extract
KR20180110939A (en) Composition for preventing hair loss and promoting hair growth comprising plant extract
KR100707345B1 (en) Steamed bellflower
US20190000905A1 (en) Gynostemma pentaphyllum fermented extracts comprising Saponins as an active functional food ingredient and preparation method thereof
KR101845297B1 (en) Manufacturing method of Syrup using Eutteumbaek Platycodon and Syrup using Eutteumbaek Platycodon manufactured by the same
KR101794006B1 (en) Anti inflammatory comprising plant extract
KR100587398B1 (en) Composition comprising the extract of Cucurbita spe. or purified extract isolated therefrom having Anti-adipogenic and Anti-obesity activity
JP2007008817A (en) TNF-alpha AND NITRIC OXIDE PRODUCTION INHIBITOR
KR102040502B1 (en) Manufacturing methods of Platycodon grandiflorum increased platycodin D
CN107137438A (en) The purposes of wax-cakes bait plant anti-mycobacterium tuberculosis
KR102169156B1 (en) Method for increasing platycodin E content in Platycodon grandiflorum using Aspergillus shirousamii
KR102255666B1 (en) Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum using Weissella cibaria JW15 strain
CN103535475B (en) One cures kudzu root tea and preparation method thereof
KR100643735B1 (en) Fermented Wine made from Fruit of Araliaceous Shrubs, and Method for producing Thereof
CN105532350B (en) A kind of preparation method of hainan holly leaf ginkgo biloba extract compound tea
KR20190111592A (en) Food Composition Comprising Polygonum Cuspidatum and Noble Preparation Method thereof
KR101510673B1 (en) Composition inhibiting enterobacteria activity during saponin metabolism of ginseng
KR101513973B1 (en) Composition of Natural Preservatives Containing Herbal Medicine Mixture and Preparing the same
KR102121937B1 (en) Method for increasing platycodin D content in Platycodon grandiflorum
KR101851153B1 (en) Manufacturing method of fermented rhemannia glutinosa and fermented rhemannia glutinosa manufactured by same method
CN107736449A (en) A kind of preparation method of the fort tea of Poria cocos six
KR102595524B1 (en) Platycodon grandiflorum fermented product comprising platycodon grandiflorum and rice grain syrup and method for preparing thereof
EP2586451B1 (en) Composition for preventing and/or alleviating hangover comprising extracts of Sophora flavescens
KR102209249B1 (en) Manufacturing method of wood-cultivated ginseng

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant