JP2007008817A - TNF-α AND NITRIC OXIDE PRODUCTION INHIBITOR - Google Patents

TNF-α AND NITRIC OXIDE PRODUCTION INHIBITOR Download PDF

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Hiroyasu Nakamura
Hisako Takumi
弘康 中村
央子 宅見
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Ezaki Glico Co Ltd
江崎グリコ株式会社
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a TNF-α (tumor necrosis factor-α) production inhibitor or a nitric oxide production inhibitor comprising a specific plant or an extract thereof as an active ingredient.
SOLUTION: The TNF-α production inhibitor and nitric oxide production inhibitor comprise at least one or more species of plant bodies themselves selected from the plant body group consisting of Acanthopanax senticosus harms of the family Araliaceae, Quercus salicina of the family Fagaceae, Cimicifuga racemosa (L.) Nutt. of the family Ranunculaceae, Astilbe thunbergii of the family Saxifragaceae, Centella asiatics of the family Umbelliferae and Nypa fruticans of the family Palmae or an active ingredient obtained from solvent extract solutions of the plant bodies. A food and drink, a feed or a medicine comprises the TNF-α production inhibitor and nitric oxide production inhibitor.
COPYRIGHT: (C)2007,JPO&INPIT

Description

本発明は、特定の植物またはその抽出物を有効成分とするTNF−α産生抑制剤または一酸化窒素産生抑制剤に関するものである。 The present invention relates to TNF-alpha production inhibitor or nitric oxide production inhibitor as an active ingredient a particular plant or its extract.

近年の健康志向から、生活習慣病予防が強調され、最近では食するに安全な植物体から有効成分を抽出等し、その生理機能の研究も盛んに行われている。 Recent health conscious, lifestyle-related disease prevention is emphasized, in recent equal extract the active ingredient from a safe plant to food, research has been actively in its physiology.
TNF−α、すなわち腫瘍壊死因子αは、腫瘍に出血性壊死を起こさせる因子として発見され、現在では、慢性関節リュウマチ、アレルギー疾患、動脈硬化、インスリン抵抗性、各種感染症等、一般的な生活習慣病も含めた多くの病態に関与するとされている。 TNF-alpha, that is, tumor necrosis factor alpha, is found as a factor to cause hemorrhagic necrosis to tumor, at present, rheumatoid arthritis, allergic diseases, arteriosclerosis, insulin resistance, various infectious diseases, etc., common life It has been implicated in many disease states, including the related diseases.
NO、すなわち一酸化窒素は、血管内皮細胞由来弛緩因子として知られ、適量の生成は生体にプラス効果をもたらす反面、過剰産生はそのラジカル作用から生体組織に酸化障害を与え、これに起因して様々な疾病に関与している。 NO, that nitric oxide is known as vascular endothelial cell-derived relaxing factor, while an appropriate amount of generation of a positive effect on the living body, overproduction gives oxidative damage to living tissue from the radical action, due to this We are involved in a variety of diseases. NO生成系の誘導は、感染や炎症性病巣で産生される炎症性サイトカインとして知られているIL-1β、TNF-α、IFN-γなどにより、誘導型NO合成酵素(iNOS)の発現を介してもたらされることが明らかにされている。 Induction of NO production system, via the expression of IL-l [beta] that is known as an inflammatory cytokine produced by infection and inflammatory foci, TNF-alpha, such as by IFN-gamma, inducible NO synthase (iNOS) be brought Te is revealed. iNOSは主に、マクロファージ、血管内皮細胞、血管平滑筋細胞、消化管上皮細胞、気管支上皮細胞、肝細胞、ミクログリア細胞などにより発現され、その結果、過剰に生成するNOは、生体の感染防御反応での主要な炎症性メディエーターとして機能している。 iNOS is mainly macrophages, vascular endothelial cells, vascular smooth muscle cells, gut epithelial cells, bronchial epithelial cells, expressed by hepatocytes, microglial cells, and the like, as a result, NO is excessively generated, the biological infection defense reaction It is acting as a major inflammatory mediators in.
近年の健康志向から、生活習慣病予防が強調され、生活習慣病をもたらすこれらTNF−αやNOの産生を抑制することが期待され、最近では安全な食品原材料からこれらの産生を抑制する研究も盛んに行われている。 From recent years of health-conscious, lifestyle-related disease prevention is emphasized, it is expected to inhibit the production of these TNF-α and NO result in a lifestyle-related disease, also suppresses study these production from safe food raw materials in recent years It has been actively carried out.

エゾウコギ(本発明のいうエゾウコギとは学名 Acanthopanax Siberian ginseng (scientific name is the Siberian ginseng say the present invention Acanthopanax
senticosus harmsが指す植物と同じ。 senticosus harms the same as the plant pointed to. 別名:五加参)は、中国では刺五加と呼ばれ、血圧調整、強壮、精神安定、リウマチ性関節痛等に用いられる。 Alias: Acanthopanax ginseng), called barbs Acanthopanax in China, blood pressure adjustment, tonic, tranquilizers, used in rheumatic joint pain and the like. また、旧ソ連ではSiberian In addition, in the former Soviet Union Siberian
Ginseng(旧学名“Eleutherococus senticosus Maxim”)と呼ばれ、降圧作用、精腺や副腎皮質機能亢進作用、抗ストレス作用を有することが知られている。 Is referred to as the Ginseng (old scientific name "Eleutherococus senticosus Maxim"), step-down effect, seminal gland and adrenal cortex function enhancing effect, it is known to have an anti-stress effect. エゾウコギには、グリケーション阻害効果(特許文献1)、抗ストレス効果(特許文献2)、パーキンソン病の予防効果(特許文献3)、ストレス性胃潰瘍予防効果(特許文献4)のあることが知られている。 The Acanthopanax, glycation inhibitory effect (Patent Document 1), anti-stress effect (Patent Document 2), prophylactic effect (Patent Document 3) Parkinson's disease, is known to a stress-induced gastric ulcer preventive effect (Patent Document 4) ing.

ウラジロガシの浸出液には、結石形成を抑制する作用や排石促進効果が報告されており、古くから健康茶(排石茶)として飲用されている。 The leachate salicina has been reported to suppress effects or the stone promoting effect stone formation, it is drinking as long from health tea (the stone tea). ウラジロガシにはα−グルコシダーゼ阻害剤(特許文献5)、抗肥満効果(特許文献6)のあることが知られている。 The salicina α- glucosidase inhibitor (Patent Document 5), it is known that a anti-obesity effect (Patent Document 6).

ブラックコホウシュの主成分のシミシフギン(Cimicifugin)は急激なエストロゲンの減少を抑えて、更年期障害の症状を和らげることが知られている。 Black co-Hou Zhu main component of Shimishifugin (Cimicifugin) is to suppress the reduction of rapid estrogen, have been known to relieve the symptoms of menopause. ブラックコホウシュ抽出物の使用については、心臓血管疾患、特にアテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症及び更年期障害の治療及び/又は予防、例えば一過性熱感の予防又は軽減のためのエストロゲン型期間選択性薬剤として開示されている(特許文献7)。 The use of black co boric Gerhard extract, cardiovascular disease, especially atherosclerosis, treatment and / or prevention of osteoporosis and menopause, for example estrogen-type time selection for the hot flashes, prevention or alleviation It is disclosed as sex agent (Patent Document 7). また、ストレス緩和効果(特許文献8)があることも知られている。 It is also known that there is stress relaxation effect (Patent Document 8).

アカショウマは、日本の山地にも自生する多年草で、その根茎を赤升麻とよび、古来より下熱、解毒、消炎等の目的で升麻(キンポウゲ科のサラシナショウマ)の代用品として用いられてきた。 Akashouma is a perennial plant that grows wild in Japan of the mountains, and the rhizome and Akamas hemp, below the ancient times heat, detoxification, have been used as a substitute for squares hemp (Cimicifuga of the buttercup family) for the purpose of anti-inflammatory, etc. It was. 本発明では、赤升麻あるいは紅升麻と称せられるものも包含する。 In the present invention also encompasses what is called a red boxes hemp or Benimasuasa. アカショウマ等のチゲタサシ属に属する植物の根と根茎には、デンプンやタンニンのほかにベルゲニン、アスチルビン、アスチルビン酸等のフラボノイド類が含まれていることが知られており、これらの成分が前述の薬理作用を示すといわれている。 The plant roots and rhizomes belonging to Chigetasashi genus such Akashouma, bergenin in addition to the starch and tannin, astilbin, has been known to contain flavonoids such as astilbin acid, these components are described above pharmacological It is said that shows the effect. アカショウマには肥満抑制効果(特許文献9)、リパーゼ活性阻害効果(特許文献10)、血中脂質改善効果(特許文献11)があることが知られている。 Antiobesity effect on Akashouma (Patent Document 9), lipase activity inhibitory effect (Patent Document 10), it is known that there is a blood lipid improving effect (Patent Document 11).

ゴツコラは、アフリカやインドから東南アジアにかけての広い地域に分布しているセリ科の植物で、インドでは伝統医学であるアーユルヴェーダや民間療法において、皮膚や血管の代謝機能改善及び活性化に有用なハーブとして知られている。 Gotu kola is an umbelliferous plant that is distributed over a wide area of ​​over the Southeast Asia from Africa and India, in Ayurvedic and folk medicine is a traditional medicine in India, useful herbs to metabolic function improvement and activation of skin and blood vessels it is known as. ゴツコラにはグリケーション阻害効果(特許文献1)があることが知られており、また、ゴツコラを組成物とした皮膚老化防止剤及び/又はニキビ改善剤キットが開示されている(特許文献12)。 Glycation inhibitory effect on gotu kola is known to (Patent Document 1) is also the composition and skin anti-aging agents and / or acne improving agent kit is disclosed a gotu kola (Patent Document 12) .

ニッパヤシは、 日本の南西諸島から東南アジア、オーストラリアや太平洋諸島に分布し、湿地やマングローブ林に生育する。 Nipa palm, the Japan of Southeast Asia from the Nansei Islands, distributed in Australia and the Pacific Ocean Islands, growing in swamps and mangrove forests. 花軸液からでる樹液で糖蜜や酒がつくられ、食用されている。 Molasses and wine is made in the sap out of the rachis liquid, are edible.

しかし、エゾウコギ、ウラジロガシ、ブラックコホウシュ、アカショウマ、ゴツコラ、ニッパヤシの植物体やこれらの抽出物にTNF−α産生抑制作用または一酸化窒素産生抑制作用に関する報告はなく、知られている効果に両効果が加わることは生活習慣病予防的にも意義がある。 However, Siberian ginseng, Quercus salicina, black co boric Gerhard, Akashouma, gotu kola, no report on TNF-alpha production inhibitory effect or a nitric oxide production inhibitory effect on the plants and extracts thereof of nipa palm, the known effects both the effect is applied is significant also in lifestyle-related diseases prophylactic.
特開2004−250445号公報、 JP 2004-250445, JP- 特開2004−210728号公報 JP 2004-210728 JP 特開2002−284695号公報 JP 2002-284695 JP 特開2002−003391号公報 JP 2002-003391 JP 特開2004−000164号公報 JP 2004-000164 JP 特開平09−227398号公報 JP 09-227398 discloses 特表2002−506827号公報 JP-T 2002-506827 JP 特開2004−196750号公報 JP 2004-196750 JP 特開2004−091464号公報 JP 2004-091464 JP 特開2003−342185号公報 JP 2003-342185 JP 特開2003−146901号公報 JP 2003-146901 JP 特開2003−306446号公報 JP 2003-306446 JP

人体に対し安全性が高く、容易に入手でき、食経験がある天然植物からTNF−α産生および一酸化窒素産生を抑制できる植物体を見出し、これまでに無かった新規なTNF−α産生抑制剤および一酸化窒素産生抑制剤を提供することである。 High safety to the human body, readily available, found a plant that can suppress the TNF-α production and nitric oxide production from natural plant where there is a food experience, so far not had a novel TNF-α production inhibitor and to provide a nitrogen monoxide production inhibitor.

本発明は、ウコギ科のエゾウコギ、ブナ科のウラジロガシ、キンポウゲ科のブラックコホウシュ、ユキノシタ科のアカショウマ、セリ科のゴツコラ、ヤシ科のニッパヤシからなる植物体群より選ばれる少なくとも一種以上の植物体そのもの、又は植物体の溶媒抽出液からTNF−α産生抑制および一酸化窒素産生を抑制することを最も主要な特徴とする。 The present invention, Acanthopanax of Araliaceae, the Fagaceae salicina, Ranunculaceae black co boric shoe, Akashouma of Saxifragaceae, the family Umbelliferae gotu kola, at least one or more plants selected from the plant group consisting of nipa palm of Palmae itself, or the most important feature to suppress TNF-alpha production inhibitory and nitric oxide production from solvent extract of the plant.

上記植物体は根および根茎、茎、木皮、枝、葉、花、芽等のいずれの部位も使用することができるが、エゾウコギ、ブラックコホウシュ及びアカショウマは、根及び/又は根茎が望ましく、ゴツコラは、花、葉および茎が好ましい。 It said plant roots and rhizomes, stems, bark, branches, leaves, flowers, but can also be used any part of the bud such as Siberian ginseng, black co boric shoe and Akashouma is desirably roots and / or rhizomes, Gotu kola is, flowers, leaves and stems are preferred. ウラジロガシを使用する場合は、特に生葉や枝又はその乾燥物の粗切り物を使用することが好ましく、また、風味を改善するために、乾燥後、焙煎したものを原料として使用してもよい。 When using salicina is preferably used, in particular crude off of leaves and branches or dried product, also to improve the taste, after drying, it may be used those roasted as a raw material . ニッパヤシを粉砕・圧搾して得られた糖汁をそのまま用いても良いが、活性炭・石灰等を用いて糖汁中の不純物を取り除いた後、加熱により煮詰めて固形化した糖を用いてもよい。 Nipa palm may be used as a sugar juice obtained by grinding and squeezing it, after removing the impurities of the sugar juice in using activated carbon, lime, etc., may be used solidified sugar boiled down by heating . さらに、上記の植物体の抽出液を使用する場合は、抽出液をそのまま用いても良いが、吸着樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー等により分画処理を行った抽出物や分画物を用いることもできる。 Furthermore, when using an extract of the plants, the extraction solution may be used as it is, the use of the extract or fraction thereof subjected to fractionation treatment by column chromatography using an adsorption resin It can also be.

有効成分としての溶媒抽出物の調製方法は、どのような方法でもよく、どのような精製段階のものでも使用可能である。 Effective process for the preparation of a solvent extract as component may be any method, it can be used be of any purification step. 一般に、濃厚な抽出物を調製するには、植物体を乾燥させ、これを粉砕・粉末化し、これを含水溶媒で抽出し、その後に有機溶媒を除去することで得ることができる。 In general, to prepare a concentrated extract, dried plant, which was ground and triturated, which was extracted with aqueous solvent, it can be obtained by subsequently removing the organic solvent. また水分を除いて、抽出成分を乾燥粉末化してもよい。 Also, except the water, the extracted components may be dried powdered.
植物体の乾燥方法や粉砕・粉末化方法は、どのような方法でもよく、乾燥方法には自然乾燥、熱風乾燥、真空乾燥等が、粉砕・粉末化方法には食品用に用いられる一般的な粉砕機を用いればよい。 Drying method and pulverizing and powdering process plants may be in any way, naturally the drying process drying, hot air drying, vacuum drying or the like, the grinding and powdering methods generalization used for food it may be used as a pulverizer.
有機溶媒には、エタノール、アセトン、ヘキサン等が挙げられる。 The organic solvent, ethanol, acetone, hexane, and the like. 特に、食品製造に用いることができ、かつ水に溶けやすいエタノール、アセトンが好ましく、またこれらを組み合わせて用いてもよい。 In particular, it can be used for food production, and ethanol easily dissolved in water, acetone is preferred, or may be used in combination.
抽出は、還流抽出法などで行えばよく、加熱温度と時間はどの様な条件でも問題なく、例えば80℃の加熱で、2時間還流抽出すればよい。 Extraction may be performed at such a reflux extraction method, without problems in any such conditions the heating temperature and time, for example at a 80 ° C. heating may be reflux extraction for 2 hours. 有機溶媒を除去するには真空濃縮法などが挙げられる。 To remove the organic solvent and the like vacuum concentration method.
また抽出物を、乾燥粉末化するにはデキストリンなどの粉末化基材と共に粉末化してもよい。 The extract, in dried powdered may be powdered with powdered substrates such as dextrin. この発明に用いられるα−1,4−グルカン以外の賦型剤としては、カゼインソーダ、ホエー、ゼラチン、乳類、卵白等の蛋白質、庶糖、乳糖等の少糖類、アラビアガム等の多糖類、澱粉またはその分解物などがあり、これらを単独または組み合わせて用いても何ら問題はない。 The excipients other than the alpha-1,4-glucan used in the present invention, sodium caseinate, whey, gelatin, milk acids, proteins such as egg white, sucrose, oligosaccharides such as lactose, polysaccharides such as gum arabic, include starch or its degradation products, there is no problem with singly or in combination.

また、本粉末食品には、この発明の効果を阻害しない限りにおいて、一般の食品製造に用いられる周知の乳化剤、酸化防止剤などを適宜配合してよいのは勿論である。 Moreover, the present powder food, as long as it does not inhibit the effect of the present invention, generally food manufacture used known emulsifiers, for an antioxidant may be suitably incorporated as a matter of course.

本発明のTNF−α産生抑制剤および一酸化窒素産生抑制剤は、飲食用、飼料用または医薬用として用いることができる。 TNF-alpha production inhibitors and nitric oxide production inhibitor of the present invention can be used for food, as feed or pharmaceutical.

本発明は、ウコギ科のエゾウコギ、ブナ科のウラジロガシ、キンポウゲ科のブラックコホウシュ、ユキノシタ科のアカショウマ、セリ科のゴツコラ、ヤシ科のニッパヤシからなる植物体群より選ばれる少なくとも一種以上の植物体そのもの、又は植物体の溶媒抽出液からTNF−α産生抑制剤および一酸化窒素産生抑制剤を提供するものである。 The present invention, Acanthopanax of Araliaceae, the Fagaceae salicina, Ranunculaceae black co boric shoe, Akashouma of Saxifragaceae, the family Umbelliferae gotu kola, at least one or more plants selected from the plant group consisting of nipa palm of Palmae itself, or is intended to provide a TNF-alpha production inhibitors and nitric oxide production inhibitor from a solvent extract of a plant.

飲食用としては、どの様な形態でもよく、焼き菓子、ガム、錠菓、スープ、粉末スープ、飲料、粉末飲料、ゼリー、デザート類、キャンデー、キャラメル、アイスクリーム等の冷菓などの飲食品などが挙げられる。 As for eating and drinking, it may be any kind of form, baked goods, gum, tablet candy, soup, powder soup, drinks, powdered drinks, jellies, desserts, candy, caramel, food products such as frozen desserts such as ice cream, etc. and the like.
飼料用としては、どの様な形態でもよく、固形、ペースト、液剤飼料などが挙げられる。 The feed may be any kind of form, a solid, a paste, such as liquid feed and the like.
医薬用としては、どの様な形態でもよく、錠剤、カプセル、顆粒、液剤などが挙げられる。 The pharmaceutical may be any such forms are tablets, capsules, granules, etc. solutions and the like.

(抽出液の調製) (Preparation of extract)
エゾウコギの根及び根茎、ウラジロガシの葉及び枝、ブラックコホウシュの根及び茎、アカショウマの根、ゴツコラの根以外の地上部を使用し、原料となる各植物の乾燥粉末50mgから抽出液1mLを調製した。 Roots and rhizomes of Acanthopanax, leaves and branches salicina, black co boric Gerhard roots and stems, roots Akashouma, using ground portion other than the root of gotu kola, extracts 1mL from a dry powder 50mg of each plant as a raw material It was prepared.

ニッパヤシ由来の糖2gを3mlの蒸留水に溶解した溶液をSep-Pak Plus18 (Waters製)に通した。 Sugar 2g from nipa palm through the solution in distilled water 3ml to Sep-Pak Plus18 (manufactured by Waters). 次に3mlの50%エタノール溶液を通し、ニッパヤシ50%エタノール溶液抽出物を、最後に、3mlのエタノールを通し、ニッパヤシエタノール抽出物を得た。 Then through a 50% ethanol solution of 3 ml, the nipa palm 50% ethanol solution extract, finally, through the ethanol 3 ml, to obtain a nipper palm ethanol extract. これら抽出物を遠心エバポレーターで1mlに濃縮し、これをDMEM培地で10倍に希釈し、以下の試験に用いた。 These extracts were concentrated to 1ml with a centrifugal evaporator, which was diluted 10-fold with DMEM medium was used in the following test.

さらに、ODSカラムクロマトグラフィーを利用し、水とアセトニトリルの濃度勾配によりニッパヤシ由来の糖を分画した。 Furthermore, utilizing ODS column chromatography, it was fractionated sugar from nipa palm min with a gradient of water and acetonitrile. 流速毎分0.5mlで、分画開始時のアセトニトリル濃度は20%とし、分画開始30分にアセトニトリル濃度が50%になるように直線的にアセトニトリルの濃度を上昇させた。 At a flow rate per minute 0.5 ml acetonitrile concentration at the start fraction was 20% acetonitrile concentration was increased linearly to the concentration of acetonitrile such that the 50% fraction after 30 minutes. 約14分のピークを精製し、凍結乾燥させた。 Purification of the peak at about 14 minutes and lyophilized.

(TNFα産生抑制測定法) (TNFα production inhibitory assay)
10%非働化ウシ胎児血清、100U/mlペニシリンおよび100U/mlストレプトマイシンを含むDMEM培地で培養したマウスマクロファージ由来細胞RAW264.7を96穴培養プレートに2×105/cellでまき、37度、5%CO 2インキュベーターにて約1時間培養した。 10% inactivated fetal calf serum, plated with 100 U / ml penicillin and 100 U / ml streptomycin 2 × 105 / cell mouse macrophage-derived cells RAW264.7, which were cultured in DMEM medium in 96-well culture plates containing 37 degrees, 5% for about 1 hour incubation at CO 2 incubator. 続いて、各植物の希釈液、または比較対照としてDMEM培地のみを添加後、細菌の細胞壁に存在する内毒素であるリポポリサッカライドを含む溶液を加え、37度、5%CO 2インキュベーターで6時間培養した。 Then, after addition of DMEM medium alone as a diluent or a control, of each plant, it was added containing lipopolysaccharide is endotoxin present in the bacterial cell wall, 37 degrees, 6 hours in a 5% CO 2 incubator and cultured. 一方、10%の馬血清を含むMEM培地で、37度、5%CO 2インキュベーターにて培養したTNF−α感受性を有するマウス線維芽細胞L929を96wellプレートに2×104 cell On the other hand, in MEM medium containing 10% horse serum, 37 °, 2 × mouse fibroblast L929 having a TNF-alpha sensitive cultured in 5% CO 2 incubator 96well plate 104 cell
/wellでまき、24時間37度、5%CO 2インキュベーターで培養した。 / seeded at well, 24 hours 37 °, and cultured in a 5% CO 2 incubator. 培養後のRAW264.7の培地をL929のプレートに添加後、アクチノマイシンD(最終濃度1μg/ml)を添加し、37度、5%CO 2インキュベーターにて24時間培養した。 After addition of medium RAW264.7 after culturing the plates L929, were added actinomycin D (final concentration 1 [mu] g / ml), 37 °, and 24 hours of culture at 5% CO 2 incubator. WST−8法により、L929の生細胞数を測定し、比較対照の生細胞数を100とした場合の相対比を求めた。 The WST-8 method measures the number of living cells L929, were determined relative proportion where the number of viable cells compared control was taken as 100. なお、WST−8法は、高感度水溶性ホルマザンを生成する新規テトラゾリウム塩WST−8(2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)- 5-(2,4-disulfophenyl)-2H- tetrazolium, monosodium salt)を発色基質として用いる方法である。 Incidentally, WST-8 method, novel tetrazolium salt WST-8 to generate highly-sensitive water-soluble formazan (2- (2-methoxy-4-nitrophenyl) -3- (4-nitrophenyl) - 5- (2,4- disulfophenyl) -2H- tetrazolium, a method of using the monosodium salt) as the chromogenic substrate. WST-8は細胞内脱水素酵素により還元され、水溶性のホルマザンを生成するので、このホルマザンの 450 nmの吸光度を測定することにより、生細胞数を容易に計測することができる方法として知られている。 WST-8 is reduced by intracellular dehydrogenase, because it produces a water-soluble formazan, by measuring the absorbance at 450 nm of the formazan, is known as a method capable of easily measuring the number of viable cells ing.

(一酸化窒素産生抑制測定法) (Nitric oxide production inhibition assay)
10%非働化ウシ胎児血清、100U/mlペニシリンおよび100U/mlストレプトマイシンを添加したDMEM培地で、37度、5%CO 2インキュベーターでRAW264.7を培養し、コンフルエントになった細胞を用いた。 10% inactivated fetal bovine serum, in DMEM medium supplemented with 100 U / ml penicillin and 100 U / ml streptomycin, 37 degrees, and cultured RAW264.7 in 5% CO 2 incubator using cells became confluent. 96穴培養プレートで、2×105/cellずつRAW264.7をまき、37度、5%CO 2インキュベーターにて約1時間培養した。 In 96-well culture plates, were seeded 2 × 105 / cell by RAW264.7, 37 degrees, and about 1 hour incubation at 5% CO 2 incubator. 続いて、各植物の希釈液、または比較対照としてDMEM培地のみを添加後、リポポリサッカライド溶液を加え、37度、5%CO 2インキュベーターで16〜24時間培養した。 Then, after addition of DMEM medium alone as a diluent or a control, of each plant, lipopolysaccharide was added at 37 °, and 16 to 24 hours at 5% CO 2 incubator. 一酸化窒素産生量は、Griess法により、540nmの吸光度を測定し、比較対照の一酸化窒素量を100とした場合の相対比を求めた。 Nitric oxide production amount by Griess method, by measuring the absorbance at 540 nm, was determined relative proportion where the nitric oxide content of comparison was 100. なお、Griess法は、Griess試薬(1%スルファニルアミド、0.1% Incidentally, Griess method, Griess reagent (1% sulfanilamide, 0.1%
ナフチルエチレンジアミンジクロライド、2.5% 燐酸)を用い、一酸化窒素の代謝物である亜硝酸イオンが本試薬と発生して生成するピンク色のアゾ化合物の吸光度を測定する方法で,一酸化窒素の生成量を推測するもっとも簡便な方法として知られている。 Naphthylethylenediamine dichloride, with 2.5% phosphoric acid), nitrite ion, a metabolite of nitric oxide in a method of measuring the absorbance of the pink azo compound produced is generated with this reagent, nitric oxide it is known as the most simple method to estimate the amount.

図1に示したように、エゾウコギ、ウラジロガシ、ブラックコホウシュ、アカショウマ、ゴツコラ各抽出物には、比較対照よりもTNF-α産生を抑制する効果があることが確認された。 As shown in FIG. 1, Acanthopanax, Quercus salicina, black co boric Gerhard, Akashouma, the Gotu kola each extract, it was confirmed that an effect of suppressing TNF-alpha production than comparative control.

図2に示したように、エゾウコギ、ウラジロガシ、ブラックコホウシュ、アカショウマ、ゴツコラ抽出物には、比較対照よりも一酸化窒素産生を抑制する効果があることが確認された。 As shown in FIG. 2, Siberian ginseng, Quercus salicina, black co boric Gerhard, Akashouma, the gotu kola extract, it was confirmed that an effect of suppressing nitric oxide production than comparative control.

図3に示したように、ニッパヤシ50%エタノール溶液抽出物及びニッパヤシエタノール溶液抽出物には、比較対照よりもTNF-α産生を抑制する効果があることが確認された。 As shown in FIG. 3, the nipa palm 50% ethanol solution extract and nippers palm ethanol extract, it was confirmed that an effect of suppressing TNF-alpha production than comparative control.

図4に示したように、ニッパヤシ50%エタノール溶液抽出物及びニッパヤシエタノール溶液抽出物には、比較対照よりも一酸化窒素産生を抑制する効果があることが確認された。 As shown in FIG. 4, the nipa palm 50% ethanol solution extract and nippers palm ethanol extract, it was confirmed that an effect of suppressing nitric oxide production than comparative control.

図5に示したように、ニッパヤシ由来の糖より得られた画分には、濃度依存的にTNF-α産生を抑制する効果があることが確認された。 As shown in FIG. 5, the image obtained from sugar from nipa palm fraction, that there is a concentration-dependent manner the effect of suppressing the TNF-alpha production was confirmed.

図6に示したように、ニッパヤシ由来の糖より得られた画分には、濃度依存的に一酸化窒素産生を抑制する効果があることが確認された。 As shown in FIG. 6, the fractions obtained from sugars derived nipa palm, that has an effect of suppressing a concentration-dependent manner nitric oxide production was confirmed.

図7に示したように、ODSカラムクロマトグラフィーを利用し、水とアセトニトリルの濃度勾配によりニッパヤシ由来の糖を分画した結果を示した。 As shown in FIG. 7, utilizing ODS column chromatography, showing the results of fractionating a sugar from nipa palm min with a gradient of water and acetonitrile. 流速毎分0.5mlで、分画開始時のアセトニトリル濃度は20%とし、分画開始30分にアセトニトリル濃度が50%になるように直線的にアセトニトリルの濃度を上昇させた。 At a flow rate per minute 0.5 ml acetonitrile concentration at the start fraction was 20% acetonitrile concentration was increased linearly to the concentration of acetonitrile such that the 50% fraction after 30 minutes. 約14分のピークを精製した。 The peak at about 14 minutes was purified.

本発明は、飲食用、飼料用または医薬用のTNF The present invention is, for food, TNF of feed or pharmaceutical
-α産生抑制剤および一酸化窒素産生抑制剤を提供するものである。 -α production inhibitor and is intended to provide a nitrogen monoxide production inhibitor.

エゾウコギ、ウラジロガシ、ブラックコホウシュ、アカショウマ、ゴツコラ各抽出物のTNF-α産生抑制作用を調べた結果を示した。 Acanthopanax showed salicina, black co boric Gerhard, Akashouma, the results of examining the TNF-alpha production inhibitory effects of gotu kola each extract. リポポリサッカライド添加時の比較対照のTNF-α産生量を100%とした。 The TNF-alpha production of lipopolysaccharide comparison during loading control was taken as 100%. (実施例1)。 (Example 1). エゾウコギ、ウラジロガシ、ブラックコホウシュ、アカショウマ、ゴツコラ各抽出物の一酸化窒素産生抑制作用を調べた結果を示した。 Acanthopanax showed salicina, black co boric Gerhard, Akashouma, the results of examining the nitric oxide production inhibitory effect of gotu kola each extract. リポポリサッカライド添加時の比較対照の一酸化窒素産生量を100%とした。 Lipopolysaccharide nitric oxide production level of comparison when added as 100%. (実施例2)。 (Example 2). ニッパヤシ50%エタノール溶液抽出物及びニッパヤシエタノール溶液抽出物のTNF-α産生抑制作用を調べた結果を示した。 It shows the results of examining the TNF-alpha production inhibitory effects of nipa palm 50% ethanol solution extract and nippers palm ethanol extract. リポポリサッカライド添加時の比較対照のTNF-α産生量を100%とした。 The TNF-alpha production of lipopolysaccharide comparison during loading control was taken as 100%. (実施例3)。 (Example 3). ニッパヤシ50%エタノール溶液抽出物及びニッパヤシエタノール溶液抽出物の一酸化窒素産生抑制作用を調べた結果を示した。 Nipa palm showed 50% ethanol solution extract and nippers palm ethanol extract results of examining the nitric oxide production inhibitory effect. リポポリサッカライド添加時の比較対照の一酸化窒素産生量を100%とした。 Lipopolysaccharide nitric oxide production level of comparison when added as 100%. (実施例4)。 (Example 4). ニッパヤシ由来の糖より得られた画分のTNF-α産生抑制作用を調べた結果を示した。 It shows the results of examining the TNF-alpha production inhibitory activity of the resulting fractions from sugars derived nipa palm. リポポリサッカライド添加時の比較対照のTNF-α産生量を100%とした(実施例5)。 The TNF-alpha production of lipopolysaccharide comparison during loading control was 100% (Example 5). ニッパヤシ由来の糖より得られた画分の一酸化窒素産生抑制作用を調べた結果を示した。 Nipa palm shows the results of examining the fractions nitric oxide production inhibitory effect obtained from sugars derived. リポポリサッカライド添加時の比較対照の一酸化窒素産生量を100%とした。 Lipopolysaccharide nitric oxide production level of comparison when added as 100%. (実施例6)。 (Example 6). ODSカラムクロマトグラフィーを利用し、水とアセトニトリルの濃度勾配によりニッパヤシ由来の糖由来の物質を精製した結果を示した。 Utilizing ODS column chromatography, it shows the results of purification of the material from the sugar from nipa palm with a gradient of water and acetonitrile. 流速毎分0.5mlで、分画開始時のアセトニトリル濃度は20%とし、分画開始30分にアセトニトリル濃度画50%になるように直線的にアセトニトリルの濃度を上昇させた。 At a flow rate per minute 0.5 ml, concentration of acetonitrile at the beginning fraction was 20%, and linearly with increasing concentrations of acetonitrile such that the concentration of acetonitrile picture 50% fraction after 30 minutes. 約14分のピークを精製した。 The peak at about 14 minutes was purified.

Claims (4)

  1. ウコギ科のエゾウコギ(Acanthopanax senticosus harms)、ブナ科のウラジロガシ(Quercus salicina)、キンポウゲ科のブラックコホウシュ(Cimicifuga racemosa(L.)Nutt.)、ユキノシタ科のアカショウマ(Astilbe thunbergii)、セリ科のゴツコラ(Centella asiatics)、ヤシ科のニッパヤシ(Nypa fruticans)からなる植物体群より選ばれる少なくとも一種以上の植物体そのもの、又は植物体の溶媒抽出液から得られる有効成分を含有することを特徴とするTNF−α産生抑制剤。 Araliaceae of Acanthopanax (Acanthopanax senticosus harms), beech family salicina (Quercus salicina), Ranunculaceae of black co-Hou Pradesh (Cimicifuga racemosa (L.) Nutt.), Akashouma of Saxifragaceae (Astilbe thunbergii), gotu kola of Umbelliferae (Centella asiatics), TNF, characterized by containing the nipa palm (Nypa fruticans) at least one or more of the plant itself selected from plants group consisting of, or active ingredients obtained from the solvent extract of a plant of the palm family -α production inhibitor.
  2. ウコギ科のエゾウコギ(Acanthopanax senticosus harms)、ブナ科のウラジロガシ(Quercus salicina)、キンポウゲ科のブラックコホウシュ(Cimicifuga racemosa(L.)Nutt.)、ユキノシタ科のアカショウマ(Astilbe thunbergii)、セリ科のゴツコラ(Centella asiatics)、ヤシ科のニッパヤシ(Nypa fruticans)からなる植物体群より選ばれる少なくとも一種以上の植物体そのもの、又は植物体の溶媒抽出液から得られる有効成分を含有することを特徴とする一酸化窒素産生抑制剤。 Araliaceae of Acanthopanax (Acanthopanax senticosus harms), beech family salicina (Quercus salicina), Ranunculaceae of black co-Hou Pradesh (Cimicifuga racemosa (L.) Nutt.), Akashouma of Saxifragaceae (Astilbe thunbergii), gotu kola of Umbelliferae (Centella asiatics), one which is characterized by containing the nipa palm (Nypa fruticans) at least one or more of the plant itself selected from plants group consisting of, or active ingredients obtained from the solvent extract of a plant of the palm family Nitric oxide production inhibitor.
  3. 飲食用、飼料用または医薬用であることを特徴とする請求項1記載のTNF−α産生抑制剤。 For food, TNF-alpha production inhibitor according to claim 1, characterized in that it is a feed or pharmaceutical.
  4. 飲食用、飼料用または医薬用であることを特徴とする請求項2記載の一酸化窒素産生抑制剤。 For food, nitrogen monoxide production inhibiting agent of claim 2, wherein the a feed or pharmaceutical.
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