KR20200031736A - 땅콩새싹으로부터 추출된 레스베라트롤을 포함하는 조성물 및 레스베라트롤의 추출 방법 - Google Patents

Abstract

본원은 산가수분해를 이용한 땅콩새싹 추출물의 제조방법, 및 이에 의해 제조된 땅콩새싹 추출물을 포함하는 약제학적 조성물 및 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

Description

땅콩새싹으로부터 추출된 레스베라트롤을 포함하는 조성물 및 레스베라트롤의 추출 방법 {COMPOSITION CONTAINING RESVERATROL EXTRACTED FROM PEANUT SPROUT AND METHOD FOR EXTRACTING RESVERATROL}

본원은 산가수분해를 이용한 땅콩새싹 추출물의 제조방법, 및 이에 의해 제조된 땅콩새싹 추출물을 포함하는 약제학적 조성물 및 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

땅콩새싹은 혈중 콜레스테롤을 저하시켜주는 올레인산, 신경 전달물질인 아세틸콜린을 자극하여 기억력을 상승 시켜 주는 레시틴, 체내 지방산의 산화를 억제해 노화와 동맥경화를 억제하는 비타민 E, 알콜대사를 도와주는 나이아신, 그 밖에도 비타민 B1 및 B2도 함유되어 있으며, 땅콩에 비해 지방이 10분의 1에 불과하며 식이섬유가 풍부하게 포함되어 있어 영양 불균형이 심각한 현대인에게 적합한 식품으로 각광받고 있다. 특히 땅콩새싹의 뿌리에는 적포도주에서 심장병 예방에 효과있다고 알려진 '레스베라트롤(Resveratrol)'이 존재하는데, 적포도주 (100 g당 0.0001 - 0.015 mg 함유)에 비해 수십 배에서 수백 배 이상 함유 (0.62 mg - 0.91 mg)되어 있다는 사실이 새롭게 주목받은 바 있다. 레스베라트롤은 폴리페놀의 일종이며 식물이 스트레스를 받을 때 분비되는 피토알렉신으로서 외부의 공격에 방어하기 위한 역할을 하는 물질이고, 땅콩, 포도, 오디, 라스베리, 크렌베리 등의 베리류 등의 식물에서 발견되며 항암 및 강력한 항산화 작용을 하고 혈청 콜레스테롤을 낮춰 주는 등의 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한 레스베라트롤은 피부 미백 및 피부 보호 효과를 가지는 것으로도 알려져 있다.

한편, 뼈는 우리 몸에서 물리적 지지체로서, 몸의 형태와 관절을 유지하고, 중요한 장기를 외부의 충격으로부터 보호하며, 칼슘, 인의 저장소로서 이의 무기질이 몸에서 부족하거나 증가할 때 일정한 농도로 유지시켜 주는 역할을 한다. 또한, 뼈도 다른 장기와 마찬가지로 신진대사가 활발하게 일어나는데, 신체가 성장할 때에는 뼈가 길어지고 굵어지며, 성장이 멈춘 후에는 노후된 뼈가 파골세포에 의해 제거되고, 뼈가 제거된 곳에서 조골세포에 의해 다시 새로운 뼈가 생성되는 반응이 일생 동안 진행된다. 이와 같은 뼈의 제거, 뼈의 흡수, 흡수된 뼈의 재생(remodeling) 등의 균형의 신진대사에 의해 우리 몸의 뼈가 유지된다. 그러나, 파골세포와 조골세포의 형성 속도에 균형이 깨져서 뼈의 재흡수가 뼈의 재생보다 빠르게 되면, 뼈의 증가보다 더 빠른 속도로 뼈 손실이 발생하여, 뼈의 크기가 감소하게 되는데, 이러한 뼈의 신진대사성 질환을 골다공증(osteoporosis)이라 한다. 흔히, 골다공증은 점차적으로 골 조직의 석회가 감소되면서 골밀도가 낮아져 결국 골수강이 넓어지는 상태를 말한다. 골수강이 넓어진 상태가 계속 진행되면 뼈가 약해지면서 작은 충격에도 쉽게 골절 되는 증상이 나타나며, 요통, 견통, 등결림, 관절통 및 무기력 증상이 나타난다. 특히 여성의 경우 30세 이후부터 골 감소가 지속적으로 진행 되며, 폐경기에 이르면 에스트로젠 농도가 급속히 감소하는 호르몬 변화에 의해 골 감소가 급격히 진행된다. 이와 같이 골다공증은 정도에 차이는 있으나 노년층, 특히 폐경기 이후의 여성에게 있어서는 피할 수 없는 증상으로, 선진국에서는 인구가 노령화됨에 따라 골다공증 및 그 치료제에 대한 관심이 점차 증가되고 있다.

한편, 본원발명과 관련된 선행기술문헌으로는 발아 땅콩에서 레스베라트롤의 함량을 증가시키는 방법에 관한 대한민국 공개특허 10-2015-0093053호 등이 있으나, 땅콩새싹의 산가수분해 처리방법 내지 이에 의해 수득된 추출물의 골다공증 치료 효과에 대하여는 전혀 알려진 바가 없다.

본원은, 레스베라트롤을 함유하는 것으로 알려진 땅콩새싹을 가수분해 및 추출함으로써, 레스베라트롤을 다량 함유하며 골다공증 치료 효과를 나타낼 수 있는 땅콩새싹 추출물을 제공하고자 하였다. 더욱이, 현재 알려진 대부분의 골다공증 치료제는 조골세포의 분화 및 형성 유도보다 파골세포의 형성 억제를 통해 골다공증 치료 효과를 나타내고 있는바, 조골세포의 분화 및 형성을 주로 유도함으로써 골다공증을 예방, 개선 및 치료할 수 있는 약제학적 조성물 및 건강기능식품 조성물을 제공하고자 하였다.

그러나, 본원이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본원의 제 1 측면은, 알코올, 산 및 물을 포함하는 용매와 땅콩새싹을 혼합하는 단계; 50 내지 100℃의 온도에서 상기 땅콩새싹을 산가수분해하는 단계; 반응물을 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계; 및 유기용매를 이용하여 추출하는 단계를 포함하는, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법에 관한 것이다.

본원의 제 2 측면은, 제 1 측면의 방법에 따라 제조된 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 뼈 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

본원의 제 3 측면은, 제 1 측면의 방법에 따라 제조된 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 뼈 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

상술한 과제 해결 수단은 단지 예시적인 것으로서, 본원발명을 제한하려는 의도로 해석되지 않아야 한다. 상술한 예시적인 구현예 외에도, 도면 및 발명의 상세한 설명에 기재된 추가적인 구현예 및 실시예가 존재할 수 있다.

본원의 방법에 따르면, 땅콩새싹을 산가수분해하고 추출함으로써 레스베라트롤을 다량 함유한 땅콩새싹 추출물을 제조할 수 있다. 이와 같이 제조된 땅콩새싹 추출물은 골다공증과 같은 뼈 질환의 치료 및 예방 효과를 가지며, 파골세포의 억제 효과에 의존한 종래의 골다공증 치료제와 달리 조골세포의 분화 활성도 촉진시켜 골다공증의 예방효과를 더욱 증진시킬 수 있다.

도 1은 본원의 일 실시예에 따라 산가수분해된 땅콩새싹 반응물 내의 레스베라트롤의 함량을 확인한 박막크로마토그래피 결과이다.
도 2는 본원의 일 실시예에 따라 제조된 땅콩새싹 추출물의 조골세포 분화유도효과를 확인하기 위한 알리자린 레드 S 염색 결과이다 (1 주차).
도 3은 본원의 일 실시예에 따라 제조된 땅콩새싹 추출물의 조골세포 분화유도효과를 확인하기 위한 알리자린 레드 S 염색 결과를 정량화한 그래프이다 (1 주차).
도 4는 본원의 일 실시예에 따라 제조된 땅콩새싹 추출물의 조골세포 분화유도효과를 확인하기 위한 알리자린 레드 S 염색 결과이다 (2 주차).
도 5는 본원의 일 실시예에 따라 제조된 땅콩새싹 추출물의 조골세포 분화유도효과를 확인하기 위한 알리자린 레드 S 염색 결과를 정량화한 그래프이다 (2 주차).
도 6은 본원의 일 실시예에 따라 제조된 땅콩새싹 추출물의 조골세포 분화유도효과를 확인하기 위한 알리자린 레드 S 염색 결과이다 (3 주차).
도 7은 본원의 일 실시예에 따라 제조된 땅콩새싹 추출물의 조골세포 분화유도효과를 확인하기 위한 알리자린 레드 S 염색 결과를 정량화한 그래프이다 (3 주차).
도 8은 본원의 일 실시예에 따라 에탄올을 이용해 추출된 땅콩새싹 추출물의 파골세포 분화억제효과를 확인하기 위한 TRAP 염색 결과이다.
도 9는 본원의 일 실시예에 따라 에탄올을 이용해 추출된 땅콩새싹 추출물의 파골세포 분화억제효과를 확인하기 위한 TRAP 염색 결과를 정량화한 그래프이다.
도 10은 본원의 일 실시예에 따라 에틸 아세테이트를 이용해 추출된 땅콩새싹 추출물의 파골세포 분화억제효과를 확인하기 위한 TRAP 염색 결과이다.
도 11은 본원의 일 실시예에 따라 에틸 아세테이트를 이용해 추출된 땅콩새싹 추출물의 파골세포 분화억제효과를 확인하기 위한 TRAP 염색 결과를 정량화한 그래프이다.

아래에서는 첨부한 도면을 참조하여 본원이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본원은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 그리고 도면에서 본원을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였다.

본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "약", "실질적으로" 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본원의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "~(하는) 단계" 또는 "~의 단계"는 "~ 를 위한 단계"를 의미하지 않는다.

본원 명세서 전체에서, 마쿠시 형식의 표현에 포함된 "이들의 조합"의 용어는 마쿠시 형식의 표현에 기재된 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 혼합 또는 조합을 의미하는 것으로서, 상기 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 의미한다.

이하, 본원의 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법, 및 땅콩새싹 추출물을 포함하는 약제학적 조성물 및 건강기능식품 조성물에 대하여 구현예 및 실시예와 도면을 참조하여 구체적으로 설명하도록 한다. 그러나, 본원이 이러한 구현예 및 실시예와 도면에 제한되는 것은 아니다.

본원의 제 1 측면은, 알코올, 산 및 물을 포함하는 용매와 땅콩새싹을 혼합하는 단계; 50 내지 100℃의 온도에서 상기 땅콩새싹을 산가수분해하는 단계; 반응물을 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계; 및 유기용매를 이용하여 추출하는 단계를 포함하는, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법을 제공할 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있으며, 산가수분해를 위해 일반적으로 사용될 수 있는 알코올의 종류라면 그 종류나 농도 등에 관계없이 사용될 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 산가수분해는 60 내지 80℃의 온도에서 수행될 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있으며, 바람직하게는 약 70℃의 온도에서 수행될 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 산가수분해는 30 분 내지 6 시간 동안 수행될 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있으며, 예를 들어 1 시간 내지 4 시간 또는 1 시간 30 분 내지 3 시간, 바람직하게는 약 2 시간 동안 수행될 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 알코올, 산 및 물의 부피비는 7:2:1일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 본원발명의 땅콩새싹 추출물을 제조하기 위하여 땅콩새싹과 용매를 혼합하여 70℃의 온도에서 2시간 정도 산가수분해를 수행하고, 원심분리 후 침전물은 버리고 상층액만 수득한 후, 유기용매를 이용해 추출을 수행할 수 있다. 예를 들어, 상기 땅콩새싹을 마쇄한 후 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 산은 황산, 인산, 질산, 염산, 아세트산, 시트르산, 타르타르산, 말산, 아디프산, 푸마르산 및 이들의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있으며, 그 외에도 산가수분해를 위해 일반적으로 사용되는 산 종류로부터 적절히 선택될 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 유기용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올로부터 선택되는 알코올, 상기 알코올과 물의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌글리콜, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있으며, 레스베라트롤을 추출하기 위해 일반적으로 사용될 수 있는 유기용매 중에서 적절히 선택될 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 땅콩새싹은 땅콩으로부터 발아 후 1 일 내지 15 일에 수확한 것일 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있다.

본원의 제 2 측면은, 본원의 제 1 측면의 방법에 따라 제조된 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 뼈 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공할 수 있다.

본원의 제 1 측면과 관련하여 기술된 내용은, 특별한 언급이 없는 한 본원의 제 2 측면에 대해서도 동일하게 적용될 수 있다.

본원발명의 약제학적 조성물은, 약제학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 뼈 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물의 형태로 제조될 수 있다. 이때, 상기 담체는 비자연적인 담체가 될 수 있다. 구체적으로, 상기 약제학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약제학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

상기 본원발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 용어 "약제학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본원발명의 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본원발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본원발명의 약제학적 조성물은 단독으로 투여하거나 또는 공지된 골다공증 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.

본원발명의 약제학적 조성물의 투여량은 사용목적, 질환의 중독도, 환자의 연령, 체중, 성별, 기왕력, 또는 유효성분으로서 사용되는 물질의 종류 등을 고려하여 통상의 기술자가 결정할 수 있다. 예를 들어, 본원발명의 약제학적 조성물은 성인 1인당 약 0.1 ng 내지 약 100 mg/kg, 바람직하게는 1 ng 내지 약 10 mg/kg로 투여할 수 있고, 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본원발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 조골세포의 형성 및 분화를 촉진할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 파골세포의 형성 및 분화를 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 골다공증 질환의 예방 또는 치료용으로 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 경구 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 비내 투여, 폐내 투여 또는 직장내 투여를 위한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

본원의 제 3 측면은, 본원의 제 1 측면의 방법에 따라 제조된 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물을 포함하는, 뼈 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공할 수 있다.

본원의 제 1 측면 및 제 2 측면과 관련하여 기술된 내용은, 특별한 언급이 없는 한 본원의 제 3 측면에 대해서도 동일하게 적용될 수 있다.

땅콩새싹은 예로부터 다양한 식품의 원료로서 사용되어 왔으므로, 상기 땅콩새싹으로부터 추출된 레스베라트롤을 포함하는 땅콩새싹 추출물은 상식할 수 있으면서도 골다공증 개선을 도모할 수 있는 식품의 형태로 제조되어 섭취할 수 있다. 이때, 상기 식품에 포함되는 레스베라트롤의 양은 특별히 이에 제한되지 않으나, 식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 1 중량%로 포함될 수 있다. 식품이 음료인 경우에는 100㎖를 기준으로 1 내지 10g, 바람직하게는 2 내지 7g의 비율로 포함될 수 있다. 또한, 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분이 상기 건강기능식품 조성물에 포함될 수 있다. 예를 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용된다.

구체적인 예로, 상기 식품 조성물을 이용하여 골다공증의 증상을 개선시킬 수 있는 가공식품을 제조할 수 있는데, 예들 들어, 과자, 음료, 주류, 발효식품, 통조림, 우유가공식품, 육류가공식품 또는 국수가공식품의 형태인 식품으로 제조될 수 있다. 이때, 과자는 비스킷, 파이, 케익, 빵, 캔디, 젤리, 껌, 시리얼(곡물푸레이크 등의 식사대용품류 포함) 등을 포함한다. 음료는 음용수, 탄산음료, 기능성 이온음료, 쥬스(예들 들어, 사과, 배, 포도, 알로에, 감귤, 복숭아, 당근, 토마토 쥬스 등), 식혜 등을 포함한다. 주류는 청주, 위스키, 소주, 맥주, 양주, 과실주 등을 포함한다. 발효식품은 간장, 된장, 고추장 등을 포함한다. 통조림은 수산물 통조림(예들 들어, 참치, 고등어, 꽁치, 소라 통조림 등), 축산물 통조림(쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 칠면조 통조림 등), 농산물 통조림(옥수수, 복숭아, 파일애플 통조림 등)을 포함한다. 우유가공식품은 치즈, 버터, 요구르트 등을 포함한다. 육류가공식품은 돈까스, 비프까스, 치킨까스, 소세지. 탕수육, 너겟류, 너비아니 등을 포함한다. 밀봉포장생면 등의 국수를 포함한다. 이 외에도 상기 조성물은 레토르트식품, 스프류 등에 사용될 수 있다.

용어 "건강기능식품(functional food)"이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)와 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료 효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 골다공증의 예방 내지 개선에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.

이하 실시예를 통하여 본원발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며 본원의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.

[실시예]

1. 땅콩새싹 추출물의 제조

천연물질인 땅콩새싹 25 g과 용매 (에탄올:산:물=7:2:1)를 혼합하고, 70℃의 온도에서 2시간 정도 반응시켜 산가수분해를 수행하였다. 이후 원심분리기를 사용하여 침전물은 버리고 상층액만 수득하여 실험에 사용하였으며, 먼저 박막 크로마토그래피 (TLC)를 이용하여 상층액 중의 레스베라트롤의 함량을 확인하였다 (도 1). 그 후 에탄올 및 에틸 아세테이트를 각각 이용한 2 가지 추출법을 이용해 땅콩새싹 추출물을 제조하였다.

2. 땅콩새싹 추출물의 조골세포 분화유도효과 확인

대표적인 조골세포로 알려진 mc3t3-e1 세포에 본 실시예에 의해 제조된 땅콩새싹 추출물을 적용하여 골다공증 예방효과를 확인하였다. 구체적으로, 골광화 작용 (alizarin red s stanining)을 분석하고 cpc 추출을 수행하였다. 골광화 작용은 금속이온과 결합하는 성질이 있는 알리자린 레드 S (alizarin red s) 용액을 이용해 조골세포의 칼슘 침착 정도를 확인하는 실험 방법이며, cpc추출은 칼슘을 녹이는 세틸피리디늄 클로라이드(cetylpiridinium chloride)로 무기물화 측정(mineralization assay) 결과를 정량화한 실험 기법이다. 실험 결과 중 CTL은 아무것도 처리하지 않은 대조군이고, ODM은 골형성 분화 배지(osteogenic differentiation media)를 이용하여 조골세포의 분화를 유도한 대조군이며, 실험군; odm+ 땅콩새싹 추출물을 농도별로 처리한 실험군을 의미한다.

조골세포의 분화의 경우 3주 동안 실험을 진행하였다. 추출은 에탄올 및 에틸 아세테이트 2 종의 유기용매를 이용해 각각 진행하였다. 1 주차 결과는 도 2 (염색 이미지) 및 도 3 (cpc를 이용한 정량화 결과)에 나타나 있다. 1주차 분화 결과, 땅콩새싹 추출물을 6.2 내지 25 ug/ml의 용량으로 사용시 조골세포로의 분화가 증가되는 것을 확인하였다. 2 주차 결과는 도 4 (염색 이미지) 및 도 5 (cpc를 이용한 정량화 결과)에 나타나 있으며, 땅콩새싹 추출물을 6.2 내지 50 ug/ml의 용량으로 사용시 조골세포로의 분화가 증가되는 것을 확인하였다. 3 주차 결과는 도 6 (염색 이미지) 및 도 7 (cpc를 이용한 정량화 결과)에 나타나 있으며, 땅콩새싹 추출물을 25 ug/ml의 용량으로 사용시 조골세포로의 분화가 가장 많이 증가되는 것으로 확인되었다.

3. 땅콩새싹 추출물의 파골세포 분화억제효과 확인

파골세포로 분화시킨 Raw 264.7 세포에 본 실시예에 의해 제조된 땅콩새싹 추출물을 적용하여 골다공증 예방효과를 확인하였다. 구체적으로, 세포를 TRAP 염색하고, TRAP 활성을 roc (라운드 모양)의 개수로부터 정량함으로써 파골세포 분화 억제능을 판단하였다. 실험 결과 중 CTL은 파골세포로의 분화를 유도하는 RANKL (Receptor activator of nuclear factor kappa-

ligand)을 처리 하지 않은 대조군이다.

에탄올 및 에틸 아세테이트 2 종의 유기용매를 이용해 각각 추출한 추출물을 사용하여 시험한 결과, 대조군에서는 아무런 변화가 없음을 확인하였으며, RANKL만을 처리한 군에서는 세포가 풍선처럼 부풀어 오르는 것을 확인하여 이들 세포가 파골세포로 분화하였음을 확인하였다. 반면 땅콩새싹 추출물을 농도별로 처리한 결과, 에탄올 (도 8 및 도 9) 및 에틸 아세테이트 (도 10 및 도 11)를 이용해 추출한 실험군 모두에서 12.5 ug/ml 농도에서부터 파골세포로의 분화가 억제되었다.

전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

또한 본 발명에서 용매를 에탄올:산:물=7:2:1 로 믹스한 것을 바람직한 예로 설명하였으나, 용매의 비율은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 8:1:1 또는 6:3:1 과 같이 변형하여 실시할 수도 있다.

본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (15)

1. 알코올, 산 및 물을 포함하는 용매와 땅콩새싹을 혼합하는 단계;
   50 내지 100℃의 온도에서 상기 땅콩새싹을 산가수분해하는 단계;
   반응물을 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계; 및
   유기용매를 이용하여 추출하는 단계
   를 포함하는, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법.
   
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법.
   
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 산가수분해는 60 내지 80℃의 온도에서 수행되는 것인, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법.
   
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 산가수분해는 30 분 내지 6 시간 동안 수행되는 것인, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법.
   
5. 제 1 항에 있어서,
   상기 알코올, 산 및 물의 부피비는 7:2:1 또는 8:1:1 또는 6:3:1 중 적어도 어느 하나인 것인, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법.
   
6. 제 1 항에 있어서, 상기 산은 황산, 인산, 질산, 염산, 아세트산, 시트르산, 타르타르산, 말산, 아디프산, 푸마르산 및 이들의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법.
   
7. 제 1 항에 있어서,
   상기 유기용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올로부터 선택되는 알코올, 상기 알코올과 물의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌글리콜, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법.
   
8. 제 1 항에 있어서, 상기 땅콩새싹은 땅콩으로부터 발아 후 1 일 내지 15 일에 수확한 것인, 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물의 제조방법.
   
9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따라 제조된 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 뼈 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
   
10. 제 9 항에 있어서, 조골세포의 형성 및 분화를 촉진하는, 약제학적 조성물.
    
11. 제 9 항에 있어서, 파골세포의 형성 및 분화를 억제하는, 약제학적 조성물.
    
12. 제 9 항에 있어서, 골다공증 질환의 예방 또는 치료용인, 약제학적 조성물.
    
13. 제 9 항에 있어서, 경구 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 비내 투여, 폐내 투여 또는 직장내 투여를 위한, 약제학적 조성물.
    
14. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따라 제조된 레스베라트롤을 함유하는 땅콩새싹 추출물을 포함하는, 뼈 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
    
15. 제 14 항에 있어서, 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상 및 환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 형태의, 골다공증 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.

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