KR20200029949A

KR20200029949A - 신규 트리아졸로-피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 단백질 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR20200029949A
Application number: KR1020180108585A
Authority: KR
Inventors: 고은화; 최환근; 박진희; 고이경; 이선화; 이선주; 김수헌; 강영모
Original assignee: 재단법인 대구경북첨단의료산업진흥재단; 경북대학교 산학협력단; (주)큐베스트바이오
Priority date: 2018-09-11
Filing date: 2018-09-11
Publication date: 2020-03-19
Also published as: KR102328423B1

Abstract

본 발명은 신규 트리아졸로-피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 단백질 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 JAK 키나아제(야누스 키나아제)에 대한 저해 활성이 우수할 뿐 아니라, 특히 JAK 3 키나아제에 대한 저해 활성이 우수한 바, 이를 유효성분으로 함유하는 JAK 키나아제(야누스 키나아제) 관련 질환, 특히 JAK 3 키나아제 관련 질환, 예를 들어, 복합 면역결핍(SCID), 류마티스 관절염, 골수섬유증, 건선, 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, 1형 당뇨병, 알레르기 질환, 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 백혈병 또는 림프종의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물이 제공될 수 있는, 유용한 효과가 있다.

Description

신규 트리아졸로-피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 단백질 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Novel triazolo-pyrimidine derivatives, preparation method thereof, and pharmaceutical composition for use in preventing or treating protein kinase related disease containg the same as an active ingredient}

본 발명은 신규 트리아졸로-피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 단백질 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

2002년에, Manning 등에 의해 인간 키노미(kinome)에서 518개의 단백질 키나아제 유전자 중 218개의 유전자가 인간 질환의 발생 및 발달과 밀접하게 관련되어 있는 것으로 밝혀졌고, 현재까지 수득된 약물에는 효소를 표적으로 하는 20%의 의약품이 존재하며, 특히, 단백질 키나아제를 표적으로 하는 약물은 임상적 용도에서 특별한 가치가 있다.

단백질 키나아제는 특정 단백질의 인산화를 촉매하고 타이로신 단백질 키나아제(JAK, Src, Abl, EGFR, FGFR, PDGFR 등), 세린/트레오닌 단백질 키나아제(PKC, MAPK, Rho 키나아제 등), 이중특이적 단백질 키나아제(MAPKK) 및 포스파티딜 이노시톨 키나아제(PI3K)를 주로 포함하는 신호전달 과정을 수행하는 세포내 메신저-의존 효소이다. 단백질 키나아제의 인산화/탈인산화 과정은 대사, 세포분화, 세포생존, 세포사멸, 기관형성, 혈관신생 및 면역 반응 등과 같은 다양한 세포에서 여러 생물학적 과정을 조절할 수 있다.

JAK 키나아제(JAK 3, JAK 1, TYK2 및 JAK 2의 4개의 공지된 구성원을 포함하는 JAK라고 약칭하는 야누스 키나아제)는 세포질내 비-수용체 타이로신 단백질 키나아제 상과(superfamily)의 작은 계열이다. JAK 3은 골수 및 림프계에 분포하는 반면에 JAK 1, TYK2 및 JAK 2는 다수의 조직 세포에 광범위하게 분포한다. JAK가 세포 표면의 사이토카인 수용체에 결합하면, 수용체-결합된 JAK가 활성화되고, 이에 따라 수용체가 인산화되어 세포질 신호 변환기 및 전사 활성제인 STAT 단백질(STAT1~4, STAT5a, STAT5b 및 STAT6)에 대한 동원(recruiting) 반응 부위 즉, JAK 인산화 STAT 단백질을 제공한다. 이량체화 후, JAK 인산화 STAT 단백질은 핵으로 전달되어 유전자 발현을 조절한다. 이 경로는 JAK/STAT 신호 전달 경로라고 불린다.

JAK/STAT 신호 전달 경로는 복수의 사이토카인 및 성장 인자 수용체에 의해 자극되는 신호 전달 경로이다. 이들 인자는 인터루킨(IL-2~7, IL-9, IL-10, IL-15, 및 IL-21), 인터페론(IFN-α, IFN-β, 및 IFN-γ), 에리스로포이에틴(EPO), 과립구대식구집락자극인자(GM-CSF), 성장 호르몬(GH), 프로락틴(PRL), 트롬보포이에틴(TPO) 등을 포함하며, 이들은 면역 세포 및 조혈줄기세포의 증식에 관여하고, 면역조절 생물학적 과정에서 중요한 역할을 한다(Ghoreschi K., et al. 2009, Immunol. Rev., 228: 273-287).

JAK 키나아제의 다양한 아형은 다양한 수용체에 의해 활성화되어 뚜렷한 생물학적 기능을 달성할 수 있다.

JAK 1은 gp130 계열의 IL-10, IL-19, IL-20, IL-22, IL-26, IL-28, IFN-α, IFN-γ, IL-6 및 기타 γc-함유 수용체에 결합할 수 있다(Rodig S J., et al. 1998, Cell, 93: 373-383). 마우스 모델에서 JAK 1 유전자의 녹-오프(knock-off) 실험에서 이러한 효소가 전술한 많은 사이토카인 수용체의 생물학적 효과에 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다(Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24). JAK 1은 면역-관련 질환, 염증 및 암 등과 같은 질환에 대한 신규한 표적이다. JAK 1 저해제는 자가 면역 질환, 염증 및 종양(Hornakova T., et al. 2010, Blood, 115:3287-3295), 예컨대 백혈병, 림프종, 흑색종, 관절염, 건선, 크론병, 홍반선 루프스, 후천성 면역결집 증후군, 베체트병(Hou S., et al. 2013, Hum. Genet., 132:1049-1058) 등을 포함하는 질환의 치료/예방에 사용될 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, JAK 2는 EPO, GH, PRL, IL-3, IFN-γ 등을 포함하는 다수의 수용체의 조절 과정에서 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다(Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24; Levy D. E., et al. 2002, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 3: 651-662; O'Shea J. J., et al. 2002, Cell, 109(suppl.):S121-S131). 마우스 모델에서, JAK 2 유전자 녹-오프는 빈혈 동물의 죽음을 초래할 수 있다(Schindler C. et al. 2007, J. Biol. Chem., 282: 20059-20063); 반면 인간에서, JAK 2 유전자의 염기 변이 JAK 2V617F는 진성다혈구증(PV), 본태성혈소판혈증(ET), 특발성 골수 섬유증(IMF) 및 만성 골수성 백혈병(CML) 등을 포함하는 골수증식성 질환의 발병과 밀접한 연관이 있다(Ghoreschi K., et al. 2009, Immunol. Rev., 228: 273-287). 따라서, JAK 2는 이러한 질환의 치료/예방을 위한 정확한 표적이 되어 왔다.

다른 한편, JAK 3은 IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 및 IL-21과 같은 사이토카인-수용체 복합체에서 감마 공통 쇄(γc)에 결합하여 세포 신호를 조절한다. JAK 3 또는 γc 중 어느 하나의 변이는 심각한 복합 면역결핍(SCID)을 유발할 수 있다(Villa A., et al. 1996, Blood, 88:817-823). JAK 3의 비정상적인 활성은 면역계의 정상적인 생물학적 기능 등에 큰 영향을 미치는 T-세포 및 NK 세포의 유의한 감소 및 B-세포의 기능 손실로 나타난다. JAK 3은 이의 기능적 특성 및 특정 조직 분포에 따라 면역계-관련 질환에 대한 유망한 약학 표적이 되어 왔으며, 따라서 이의 저해제는 류마티스 관절염(RA), 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, I형 당뇨병, 건선, 알레르기 질환, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 백혈병, 림프종, 장기 이식 및 기타 질환의 치료/예방에 큰 임상적 가치를 가질 것이다(Papageorgiou A. C., et al. 2004, Trends Pharm. Sci., 2004, 25: 558-562).

TYK2는 JAK 계열의 첫 번째 구성원으로 다수의 수용체, 예컨대 인터페론(IFN), IL-10, IL-6, IL-12, IL-23 및 IL-27에 의해 활성화될 수 있다. 마우스에서, TYK2의 기능 상실은 많은 사이토카인 수용체의 신호 전달 경로의 결핍을 야기할 수 있으며, 이는 추가의 바이러스 감염을 일으키고, 항생제 면역 기능을 저하시켜, 폐 감염의 가능성을 증가시킬 수 있다(Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24). 또한, Larner A.C.의 연구는 TYK2가 유방암의 성장과 전이를 저해하는데 도움이 된다는 것을 증명하였다(Zhang Q., et al. 2011, J. Interferon Cytokine Res., 31:671-677); 또한, 최근에 TYK2가 마우스와 인간의 갈색 지방 조직(BAT)의 분화에 의한 비만 조절을 촉진하여, 비만으로부터 유기체를 보호하거나 역전시킬 수 있다고 발표하였다(Derecka M., et al., 2012, Cell Metab., 16:814-824). 이는 암으로 고통받는 비만 환자들에게 새로운 기회를 제공할 것이다.

2012년 11월에 Pfizer사의 pan-JAK 저해제 젤잔즈(토파시티닙)는 류마티스 관절염 치료를 위한 FDA의 승인을 받았다. 2013년 10월에, 건선 치료를 위한 젤잔즈의 제3상 임상 데이터가 회사에 의해 공개되었다. 엔브렐(에타넬셉트)의 이중-맹검 시험과 비교하여, 이 약은 비-열등성 시험의 요구 사항을 충족시켰다. 그러나, 젤잔즈는 몇가지 부작용이 있다. 예를 들어, 적혈구 및 백혈구의 양이 감소되고 콜레스테롤 수치가 증가할 수 있다. 이는 높은 JAK 2 저해 활성 및 약물의 낮은 선택성과 관련이 있을 수 있다(Zak M., et al. 2012, J. Med. Chem., 55:6176-6193).

따라서, 선택적 JAK 저해제의 연구 및 발견이 높게 요구될 수 있고, 현재, 류마티스 관절염, 크론병, 건선 및 골수섬유증과 같은 면역계-관련 질환의 치료에 사용되는 여러 인상 단계에서 선택적 JAK 3 저해제 VX-509, 선택적 JAK 1 저해제 GLPG0634(Feist E., et al. 2013, Rheumatology, 52:1352-1357) 등이 제시도고 있고, 이외에도 선택적 JAK 저해제 개발을 위한 시도가 있어 왔으나, 아직까지 충분한 약효와 검증을 거친 약물은 제시되지 못하고 있어, 선택적 JAK 저해제에 대한 지속적인 연구와 개발이 요구되고 있다.

이에, 본 발명자들은 JAK 저해 메카니즘을 통한 신규 치료제를 제시하기 위하여 노력하던 중, JAK 저해 효과를 확인하였을 뿐 아니라, 본 발명 화합물이 선택적 JAK 저해제로 사용될 수 있고, 특히 JAK 3에 대한 선택도를 확인하여, JAK 관련 질환, 특히 JAK 3 관련 질환, 예를 들어, 복합 면역결핍(SCID), 류마티스 관절염, 골수섬유증, 건선, 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, 1형 당뇨병, 알레르기 질환, 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 백혈병 및 림프종 등을 포함하지만 이에 한정되지는 않는 면역계-관련 질환의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있음을 규명한 바, 본 발명을 완성하였다.

Ghoreschi K., et al. 2009, Immunol. Rev., 228: 273-287 Rodig S J., et al. 1998, Cell, 93: 373-383 Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24 Hornakova T., et al. 2010, Blood, 115:3287-3295 Hou S., et al. 2013, Hum. Genet., 132:1049-1058 Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24; Levy D. E., et al. 2002, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 3: 651-662; O'Shea J. J., et al. 2002, Cell, 109(suppl.):S121-S131 Schindler C. et al. 2007, J. Biol. Chem., 282: 20059-20063 Ghoreschi K., et al. 2009, Immunol. Rev., 228: 273-287 Villa A., et al. 1996, Blood, 88:817-823 Papageorgiou A. C., et al. 2004, Trends Pharm. Sci., 2004, 25: 558-562 Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24 Zhang Q., et al. 2011, J. Interferon Cytokine Res., 31:671-677 Derecka M., et al., 2012, Cell Metab., 16:814-824 Zak M., et al. 2012, J. Med. Chem., 55:6176-6193 Feist E., et al. 2013, Rheumatology, 52:1352-1357

본 발명의 목적은 신규 JAK 저해 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 특히 JAK 3 선택적 저해 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규 JAK 저해 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 JAK 키나아제(야누스 키나아제) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 특히 JAK 3 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 JAK 키나아제(야누스 키나아제) 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 특히 JAK 3 키나아제 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.

[화학식 1]

(상기 화학식 1에서,

X는 할로젠, 또는 -NR¹R² 이되,

여기서, R¹ 및 R²는 각각 독립적으로, H, 하나 이상의 할로겐으로 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알킬, 하나 이상의 할로겐으로 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알콕시, 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 C_6-10의 아릴, 또는 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)이고,

다시 여기서, 상기 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 아릴, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알킬, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알콕시, 히드록시, 니트로, 시아노, 할로젠, 치환 또는 비치환된 아미노, 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 C_6-10의 아릴, 및 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,

또 다시 여기서, 상기 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 아미노, 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 아릴, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 히드록시, 니트로, 시아노, 할로젠, 하나 이상의 메틸로 치환 또는 비치환된 아미노, 치환 또는 비치환된 C_3-6의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 페닐, 및 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,

다시 여기서, 상기 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 페닐, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 및 할로젠으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고; 및

Y는

이되,

여기서,

는

로 표시되는 고리와

로 표시되는 고리가 융합된, 융합 고리이고,

각각

는 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, 또는 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 치환 또는 비치환된 3 내지 10원의 헤테로사이클로알킬)이고,

는 치환 또는 비치환된 페닐, 또는 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 치환 또는 비치환된 5 내지 6원의 헤테로아릴)이고,

다시 여기서, 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 아릴, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 히드록시, 니트로, 시아노, 하나 이상의 메틸로 치환 또는 비치환된 아미노, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 및 할로젠으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,

R³는 니트로,-NR⁴R⁵, 또는 -NR⁴-(C=O)-R⁵이고,

여기서, R⁴ 및 R⁵는 각각 독립적으로 H, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₅ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₅ 알콕시, 하나 이상의 불포화 결합을 가지는 직쇄 또는 분지쇄의 C_2-10의 알킬이고,

여기서, 상기 불포화 결합은 이중결합 또는 삼중결합이다).

또한, 본 발명은

하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,

화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 4로 표시되는 화합물을 반응시켜, 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);

상기 단계 1에서 제조된 화학식 3으로 표시되는 화합물로부터 화학식 2로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);

상기 단계 2에서 제조된 화학식 2로 표시되는 화합물로부터 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.

[반응식 1]

(상기 반응식 1에서,

X 및 Y는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;

V는 Cl이고;

W가 NHAc 또는 NO₂이고; 및

W'는 NH₂이다).

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 JAK 키나아제(야누스 키나아제) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 JAK 키나아제(야누스 키나아제) 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능성 식품 조성물을 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 JAK 키나아제(야누스 키나아제) 관련 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 단백질 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료에 있어서의, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능성 식품 조성물의 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 JAK 키나아제(야누스 키나아제)에 대한 저해 활성이 우수할 뿐 아니라, 특히 JAK 3 키나아제에 대한 저해 활성이 우수한 바, 이를 유효성분으로 함유하는 JAK 키나아제(야누스 키나아제) 관련 질환, 특히 JAK 3 키나아제 관련 질환, 예를 들어, 복합 면역결핍(SCID), 류마티스 관절염, 골수섬유증, 건선, 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, 1형 당뇨병, 알레르기 질환, 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 백혈병 또는 림프종의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물이 제공될 수 있는, 유용한 효과가 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

[화학식 1]

(상기 화학식 1에서,

X는 할로젠, 또는 -NR¹R² 이되,

Y는

이되,

여기서,

는

로 표시되는 고리와

로 표시되는 고리가 융합된, 융합 고리이고,

각각

R³는 니트로,-NR⁴R⁵, 또는 -NR⁴-(C=O)-R⁵이고,

여기서, 상기 불포화 결합은 이중결합 또는 삼중결합이다).

본 발명의 다른 측면에서,

상기 화학식 1의,

상기 X는 Cl, 또는 -NHR¹ 이고,

여기서, R¹은 H, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 페닐, 또는 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)이고,

다시 여기서, 상기 치환된 페닐, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알킬, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알콕시, 히드록시, 할로젠, 치환 또는 비치환된 아미노, 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 페닐, 및 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,

또 다시 여기서, 상기 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 아미노, 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 페닐, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 히드록시, 할로젠, 하나 이상의 메틸로 치환 또는 비치환된 아미노, 치환 또는 비치환된 C_3-6의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 페닐, 및 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,

다시 여기서, 상기 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 페닐, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 및 할로젠으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되는 것일 수 있다.

나아가, 본 발명의 또 다른 측면에서,

상기 화학식 1의,

상기 Y는

이되,

여기서, n은 0 내지 3의 정수이고,

Q¹, Q², Q³, 및 Q⁴는 각각 독립적으로, CH, N 또는 CR³이고,

R³는 니트로,-NR⁴R⁵, 또는 -NR⁴-(C=O)-R⁵이고,

여기서, 상기 불포화 결합은 이중결합 또는 삼중결합일 수 있다.

또한, 본 발명의 다른 측면에서,

상기 X는, Cl,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

,

, 또는

일 수 있다.

나아가, 본 발명의 또 다른 측면에서,

상기 Y는,

, 또는

일 수 있다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 바람직한 예로는 하기의 화합물들을 들 수 있다:

(1) N-(5-(5-((1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드;

(2) N-(1-(5-((1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(3) N-(5-(5-((5-클로로-1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드;

(4) N-(5-(5-((2-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드;

(5) N-(1-(5-((5-클로로-1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(6) N-(5-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드;

(7) N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(8) (S)-N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(9) (R)-N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(10) (S)-N-(1-(5-((1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(11) (R)-N-(1-(5-((1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(12) (S)-N-(1-(5-((1-(3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(13) (S)-N-(1-(5-((1-(3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(14) (S)-N-(1-(5-(4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(15) (S)-N-(1-(5-((1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(16) (S)-N-(1-(5-((1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(17) N-((S)-1-(5-((1-(피롤리딘-3-일)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4.5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(18) N-((S)-1-(5-((1-(2-히드록시프로필)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(19) N-((S)-1-(5-(1-(3-(디메틸아미노)-2-히드록시프로필)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(20) N-((S)-1-(5-((1-(피페리딘-3-일메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(21) (S)-N-(1-(5-((1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(22) N-((S)-1-(5-((1-모폴린-2-일메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(23) (S)-N-(1-(5-((4-(트리플루오로메틸)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(24) (S)-N-(1-(5-((4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(25) (S)-N-(1-(5-((2-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;

(26) (S)-N-(1-(5-(메틸아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드; 및

(27) (S)-N-(1-(5-클로로-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드.

본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 히드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노히드로겐 포스페이트, 디히드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-히드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

나아가, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 이의 약학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 입체 이성질체, 수화물 등의 형태로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 JAK 키나아제에 대한 저해 활성이 우수하며, 특히 JAK 3 키나아제에 대한 저해 활성이, 타 JAK 패밀리에 대한 저해 활성 대비 우수하고, 일예에서는, JAK 3에 대한 선택적 저해 활성을 갖으며, 타 JAK 패밀리, 예를 들어, JAK 1, JAK 2, 및 TYK2로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상에 대하여서는, 저해 활성이 미비하거나, 또는 없는 것으로 이해될 수 있다.

본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 JAK 키나아제에 대한 저해 활성이 우수한 바, JAK 키나아제 관련 질환을 예방, 호전, 개선, 또는 치료할 수 있는 유용한 효과를 가진다.

일 구체예에서는, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 JAK 3 키나아제에 대하여 선택적인 저해 활성을 나타내고, 이로부터 JAK 3 키나아제 관련 질환을 예방, 호전, 개선, 또는 치료할 수 있는 유용한 효과를 가지며, 동시에 타 JAK 패밀리에 대한 저해 활성이 미비하거나 없는 것으로부터, 종래 비-선택적 JAK 억제제 대비 부작용 문제가 해결되고, 특정 질환, 특히 JAK 3 관련 질환에 대한 보다 집중되고 향상된 약효를 나타낼 수 있는 바, 유용하다. 다만, 이러한 측면에서 이점은 본 발명 화합물이 가지는 일 측면의 예이고, 본 발명 화합물이 모두 상술된 설명에 제한되는 것은 아니고, 상술된 이점 외에 추가적인 이점과 효과를 나타낼 수 있다.

여기서, 상기 JAK 키나아제 관련 질환은, JAK 키나아제의 활성을 저해하여, 또는 발현을 억제하여, 예방, 호전, 개선, 또는 치료될 수 있는 모든 질환을 말하며, 이에 제한되는 것은 아니나, 예를 들어, 현재까지 알려진, JAK 키나아제와 관련된 질환 또는 증후군들, 또는 JAK 키나아제와 관련이 있는 것으로 보고되고 있는 질환들을 모두 포함한다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 JAK 키나아제 관련 질환은, JAK 1, JAK 2, JAK 3, 또는 TYK2 관련 질환인 것으로 이해될 수 있고, 이에 제한되는 것은 아니나,

JAK 1 관련 질환은, 예를 들어, gp130 계열의 IL-10, IL-19, IL-20, IL-22, IL-26, IL-28, IFN-α, IFN-γ, IL-6 및 기타 γc-함유 수용체와 관련된 질환, 면역-관련 질환, 염증 및 암 등과 같은 질환, 예컨대 백혈병, 림프종, 흑색종, 관절염, 건선, 크론병, 홍반선 루프스, 후천성 면역결집 증후군, 베체트병 등일 수 있고,

JAK 2 관련 질환은 EPO, GH, PRL, IL-3, IFN-γ 등을 포함하는 수용체와 관련된 질환, 진성다혈구증(PV), 본태성혈소판혈증(ET), 특발성 골수 섬유증(IMF) 및 만성 골수성 백혈병(CML) 등을 포함하는 골수증식성 질환일 수 있고,

JAK 3 관련 질환은 IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 및 IL-21과 같은 사이토카인-수용체 복합체 관련 질환일 수 있고, JAK 3의 비정상적인 활성은 면역계의 정상적인 생물학적 기능 등에 큰 영향을 미치는 T-세포 및 NK 세포의 유의한 감소 및 B-세포의 기능 손실을 미치는 것으로부터 발병, 또는 진행되는 질환일 수 있고, 예컨데, 복합 면역결핍(SCID), 류마티스 관절염(RA),골수섬유증, 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, I형 당뇨병, 건선, 알레르기 질환, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 백혈병, 림프종, 장기 이식 및 기타 질환일 수 있다. 한편, TYK2 관련 질환은 인터페론(IFN), IL-10, IL-6, IL-12, IL-23 및 IL-27 관련 질환, 예컨데, 폐 감염 등의 염증 질환, 유방암, 등의 암, 갈생지방종 등, 비만과 관계되는 종양 또는 암 질환일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 JAK 3에 대하여 선택적인 저해 활성으로부터, 예를 들어, 적혈구 및 백혈구의 양이 감소되고 콜레스테롤 수치가 증가하는 등의 부작용을 회피할 수 있고, 특히 JAK 2 저해 활성으로부터 야기되는 부작용이 회피되는 이점이 달성될 수 있다.

또한, 본 발명의 또 다른 구체예에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 JAK 패밀리 외에도, AURKA, AURKC, BTK, CSF1R-autoinhibited, EPHB6, FLT3(D835V), TIE1, 및 TTK 키나아제에 대하여서도 우수한 저해 활성을 가진다.

이에, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로, AURKA, AURKC, BTK, CSF1R-autoinhibited, EPHB6, FLT3(D835V), TIE1, 또는 TTK 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다.

여기서, 상기 AURKA(오로라 키나아제 A) 관련 질환은, 예컨데, 암일 수 있고, 다른 예로, 소세포 폐암, 결장직장암, 위암, 전립선암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 자궁경부암, 두경부암, 식도암, 난소암, 비소세포 폐암, 및 비호지킨 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

여기서, 상기 AURKC(오로라 키나아제 C) 관련 질환은, 예컨데, 암일 수 있고, 다른 예로, 대장암, 간암, 위암, 유방암, 결장암, 골암, 췌장암, 두부 또는 경부암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 전립선암, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종 중추신경계 종양 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

여기서, 상기 BTK(브루톤 티로신 키나아제) 관련 질환은, 염증성 골반 질병, 요도염, 피부 일광화상, 축농증, 폐렴, 뇌염, 뇌수막염, 심근염, 신장염, 퇴행성척수염, 근염, 간염, 위염, 장염, 피부염, 치은염, 충수염, 췌장염, 담낭염, 무감마글로블린혈증, 건선, 알레르기, 크론병, 과민성 대장 증후군, 궤양성 대장염, 쇼그렌병, 이식편 거부 반응, 이식된 기관의 초급성 거부반응(hyperacute rejection of transplated organ), 천식, 알레르기 비염, 만성 폐쇄성 호흡기 질병 (COPD), 자가면역 다선성 질병 (또한 자가면역 다선성 증후군으로서 알려짐), 자가면역 탈모, 악성 빈혈, 사구체신염, 피부근염, 다발성 경화증, 피부경화증, 혈관염, 자가면역 용혈성 및 저혈소판 상태, 구드패스츄어 증후군(Goodpasture's syndrome), 축상동맥경화증, 애디슨 병(Addison's disease), 파킨슨병, 알츠하이머병, 당뇨병, 패혈성 쇼크, 전신 홍반 루푸스(SLE), 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 아동 관절염, 퇴행성관절염, 만성 특발성 혈소판 감소성 자반증(chronic idiopathic thrombocytopenic purpura), 원발성 고분자글로풀린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia), 중증 근무력증, 하시모토 갑상선염, 아토피 피부염, 퇴행성 관절병, 백반증, 자가면역 뇌하수체 기능 저하증, 길랭-바레증후군, 베체트 병, 피부경화증, 균상식육종, 급성 염증성 반응(예를 들어 급성 호흡 곤란 증후군 및 허혈/재관류 손상), 및 그레이브스병으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

여기서, 상기 CSF1R-autoinhibited 관련 질환은, 예컨데, 골다공증, 관절염, 아테롬성동맥경화증 또는 만성 사구체 신장염이거나, 다른 예로, 류마티스성 관절염, 또는 암일 수 있고, 상기 암은, 골수구성 백혈병, 특발성 골수섬유증, 유방암, 자궁경부암, 난소암, 자궁내막암, 전립선암, 간세포암, 다발성 골수종, 폐암, 신장암 및 골암으로 구성된 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.

여기서, 상기 EPHB6 관련 질환은, 예컨데, 암일 수 있고, 상기 암은 전이성 암종, 유방암, 침윤성 유방암, 트리플 네거티브 유방암 (TNBC), 폐암, 흑색종, 전립선 암, 난소 암종, 위암, 대장암, 신경 모세포종, 공격적 신경 모세포종, 등일 수 있다.

여기서, 상기 FLT3(D835V) 관련 질환은, 예컨데, 암일 수 있고, 상기 암은 급성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 골수이형성 증후군, 다발성 골수종, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 비호지킨 림프종, 유방암, 결장직장암, 소세포 폐암종, 두경부암, 교모세포종, 췌장암, 위장관암, 간암, 전립선암, 난소암, 고환암, 자궁내막암, 방광암, 흑색종, 골육종 등일 수 있다.

여기서, 상기 TIE1 관련 질환은, 예컨데, 혈관형성 장애, 또는 암일 수 있고, 이는 전립선 암, 췌장암, 결장암, 폐암, 유방암, 신장암, 간암, 난소암, 등일 수 있다.

여기서, 상기 TTK 관련 질환은, 예컨데, 암일 수 있고, 상기 암은, 유방, 갑상선 유두상 암종, 간세포 암종, 췌장 선암종, 신경교종, 위암, 기관지암, 폐암, 흑색종, 결직장암, 자궁경부암, 자궁내막암, 난소암, 전립선 암, 신경교종, 등일 수 있다.

또한, 본 발명은

하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,

[반응식 1]

(상기 반응식 1에서,

X 및 Y는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;

V는 Cl이고;

W가 NHAc 또는 NO₂이고; 및

W'는 NH₂이다).

이하, 본 발명에 따른 상기 제조방법을 상세히 설명한다.

먼저, 상기 단계 1의 화학식 5로 표시되는 화합물은, 이에 제한되는 것은 아니나, 하기 실시예 1의 단계 1-3을 수행하여 제조될 수 있고, 또는 실시예 7의 단계 1 및 2를 수행하여 제조될 수 있다.

예를 들어, 화학식 5로 표시되는 화합물은, N-(5-아미노-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아세트아미드를 2,4-디클로로-5-니트로피리미딘과 반응시키는 단계 후, 얻어지는 생성물의 NO₂ 치환기를 NH₂ 치환기로 변경하는 단계 후, 이를 다시 이소아밀 니트리트와 반응시켜, 상기 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다.

또는, 예를 들어, 2,4-디클로로피리미딘-5-아민과 4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민(선택적으로 R 또는 S 폼)을 반응시킨 후, 이를 다시 이소아밀 니트리트와 반응시켜, 상기 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다.

한편, 상기 제조예에서 사용되는 용매, 반응 시간, 반응 온도는, 상기 화학식 5로 표시되는 화합물이 제조될 수 있는 조건이라면 특별히 제한되지 않고, 특히 하기 실시예 1 및 실시예 7에서 설명되는 반응 조건을 포함하는 것이되, 이로부터 용이 변경/수정 가능한 정도의 용매, 반응 시간, 반응 온도, 등의 반응 조건은 모두 본 발명에 포함되는 것임을 당 기술분야의 기술자라면 이해할 것이다.

나아가, 본 발명의 반응식 1로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 4로 표시되는 화합물을 반응시켜, 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.

여기서, 상기 단계 1은 화학식 5의 V 치환 위치에 화학식 4의 X로 표시되는 치환기를 도입하는 단계인 것으로 이해될 수 있고, 특별히 제한되지는 않으나, 예를 들어, 실시예 1의 단계 4, 또는 실시예 7의 단계 3과 같이 수행될 수 있고, 본 발명은 이를 포함한다.

예를 들어, 화학식 4로 표시되는 화합물이 아민류의 화합물로서, 다양한 치환체를 가지고 이를 도입시키기 위한 단계로, 화학식 5로 표시되는 화합물과, 화학식 4로 표시되는 화합물에, K₂CO₃, Pd₂(dba)₃, 및 Xphos를 첨가하여 반응시키는 단계로 이해될 수 있다.

여기서, Pd₂(dba)₃,를 대신하여 가능한 팔라듐 촉매로는 트리스(다이벤질리덴아세톤)팔라듐(Pd₂(dba)₃), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(Pd(Ph₃P)₄), 팔라듐 차콜(Pd-C), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐 다이클로라이드 (PdCl₂(PPh₃)₂), [1,1-비스(다이페닐포스피노)페로센]다이클로로팔라듐(PdCl₂(dppf)), 알릴팔라듐 클로라이드 다이머([PdCl(allyl)]₂), 팔라듐 아세테이트(Pd(OAc)₂), 팔라듐 클로라이드(PdCl₂) 등을 사용할 수 있으며, 트리스(다이벤질리덴아세톤)팔라듐(Pd₂(dba)₃)을 사용하는 것이 바람직하다.

나아가, 사용 가능한 반응 용매로는 톨루엔, 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 메틸렌 클로라이드, 다이클로로에탄, 물, 에틸아세테이트, 아세토나이트릴; 아이소프로판올, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 테트라히드로퓨란(THF), 다이옥산, 에틸에테르, 1,2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매; 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있고, sec-부탄올을 사용하는 것이 바람직하다.

반응 후, 반응 혼합물을 여과막으로 여과하고, 유기용매로 세척할 수 있다. 여과액을 농축한 후 얻어진 고체상의 화합물 4를 더 이상의 정제 없이 그 다음 단계에 사용할 수 있다.

이때, 사용 가능한 반응 용매로는 톨루엔, 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 메틸렌 클로라이드, 다이클로로에탄, 물, 에틸아세테이트, 아세토나이트릴; 아이소프로판올, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 테트라히드로퓨란(THF), 다이옥산, 에틸에테르, 1,2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르 용매; 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있고, EtOAc(Ethyl acetate) 및 MeOH(Methanol)을 사용하는 것이 바람직하다.

한편, 반응 조건은, 예를 들어, 약 50 내지 150℃, 또는 약 80℃, 또는 약100℃로 반응 온도를 설정할 수 있고, 2 내지 20시간, 5 내지 15시간, 또는 약 14시간 동안 반응시킬 수 있다.

다만, 상기의 반응 조건으로부터 본 발명 제조방법이 한정되는 것은 아니고, 이로부터 용이 변경/수정 가능한 정도의 용매, 반응 시간, 반응 온도, 등의 반응 조건은 모두 본 발명에 포함되는 것임을 당 기술분야의 기술자라면 이해할 것이다.

나아가, 본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 화학식 3으로 표시되는 화합물로부터 화학식 2로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.

여기서, 단계 2는 화학식 3의 W로 표시되는 치환기를 화학식 2의 W'로 표시되는 치환기로 변환시키는 단계로 이해될 수 있고, 예를 들어, W가 NO₂ 또는 NHAc 이면, W'은 NH₂이다.

여기서, 단계 2의 치환기 변환을 수행하는 것이라면, 특별히 제한되지 않고 본 발명에 포한되는 것으로 이해될 수 있고, 예를 들어, 실시예 1의 단계 5와 같이 수행될 수 있고, 실시예 7의 단계 4와 같이 수행되는 것일 수 있다.

예를 들어, 화학식 3으로 표시되는 화합물을, Fe, NH₄Cl를 첨가하여 반응시켜 화학식 2로 표시되는 화합물을 수득하는 단계일 수 있고, 또는,

예를 들어, 화학식 3으로 표시되는 화합물을, 산과 반응시킨 후, 염기로 ph를 조절하여 생성물을 수득하는 단계일 수 있다.

여기서, 상기 산은 특별히 제한되는 것은 아니나, HCl, TFA(Trifluoroacetic acid) 등을 사용할 수 있고, 상기 염기로는 세슘카보네이트, 소듐 t-부톡사이드, 포타슘 t-부톡사이드, 소듐하이드록사이드, 소듐카보네이트, 포타슘카보네이트, 소듐하이드라이드 등의 무기염기; 또는 N,N-다이아이소프로필에틸아민(DIPEA), 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운테센(DBU), 피리딘, 트리에틸아민 등의 유기염기;가 있으며, 이를 당량 또는 과량, 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있고,

사용 가능한 용매로는, 특별히 제한되지 않고, 톨루엔, 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 메틸렌 클로라이드, 다이클로로에탄, 물, 에틸아세테이트, 아세토나이트릴; 아이소프로판올, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 테트라히드로퓨란(THF), 다이옥산, 에틸에테르, 1,2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르 용매; 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있고, 예를 들어, 에탄올, 또는 THF:MeOH:H₂O 혼합 용매를 사용할 수 있다.

역시, 이 단계에서 반응 조건은, 하기 실시예 1의 단계 5 및 실시예 7의 단계 4에서 설명되는 바를 포함하면서, 이로부터 용이 변경/수정 가능한 정도의 용매, 반응 시간, 반응 온도, 등의 반응 조건은 모두 본 발명에 포함되는 것임을 당 기술분야의 기술자라면 이해할 것이다.

나아가, 본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 화학식 2로 표시되는 화합물로부터 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.

이 단계는 W'로 표시되는 치환 부분을, Y로 표시되는 치환기를 도입하는 단계인 것으로 이해될 수 있고, 화학식 1로 표시되는 화합물이 제조되는 단계의 수행이라면 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어, 실시예 1의 단계 6 및 실시예 7의 단계 5와 같이 수행하는 것일 수 있다.

예를 들어, 화학식 2로 표시되는 화합물에 DIPEA를 첨가하고, 아크릴로일 클로라이드를 첨가하여 수행되는 것일 수 있다.

여기서, 반응 조건은 특별히 제한되지 않고, 용매로는, 톨루엔, 다이메틸아세트아마이드(DMA), 다이메틸포름아마이드(DMF), 다이메틸설폭사이드(DMSO), 메틸렌 클로라이드, 다이클로로에탄, 물, 에틸아세테이트, 아세토나이트릴; 아이소프로판올, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 테트라히드로퓨란(THF), 다이옥산, 에틸에테르, 1,2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르 용매; 등이 가능하며, DMF를 사용하는 것이 바람직하다.

반응 온도는 특별히 제한되지 않고, 예를 들어, -100 내지 -20℃, 또는 약 -60℃에서 수행될 수 있고,

반응 시간은 특별히 제한되지 않고, 수초 내지 1시간, 또는 1분 내지 30분, 또는 약 5분 동안 수행될 수 있다.

역시, 이 단계에서 반응 조건은, 하기 실시예 1의 단계 6 및 실시예 7의 단계 5에서 설명되는 바를 포함하면서, 이로부터 용이 변경/수정 가능한 정도의 용매, 반응 시간, 반응 온도, 등의 반응 조건은 모두 본 발명에 포함되는 것임을 당 기술분야의 기술자라면 이해할 것이다.

본 발명의 다른 구체예에서, 상기 JAK 키나아제 관련 질환은, 특히 JAK 3 키나아제 관련 질환일 수 있다. 본 발명의화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 JAK 3 키나아제에 대하여 선택적인 저해 활성을 나타내고, 이로부터 JAK 3 키나아제 관련 질환을 예방, 호전, 개선, 또는 치료할 수 있는 유용한 효과를 가지며, 동시에 타 JAK 패밀리에 대한 저해 활성이 미비하거나 없는 것으로부터, 종래 비-선택적 JAK 억제제 대비 부작용 문제가 해결되고, 특정 질환, 특히 JAK 3 관련 질환에 대한 보다 집중되고 향상된 약효를 나타낼 수 있는 바, 유용하다. 다만, 이러한 측면에서 이점은 본 발명 화합물이 가지는 일 측면의 예이고, 본 발명 화합물이 모두 상술된 설명에 제한되는 것은 아니고, 상술된 이점 외에 추가적인 이점과 효과를 나타낼 수 있다.

나아가, 상기의 JAK 키나아제와 관련한 설명과는 무관하게, 본 발명 명세서에서 화학식 1로 표시되는 화합물로부터 실험적으로 보이는 암 세포주에 대한 증식 억제 활성 등을 근거하여,

본 발명의 일 측면에서, 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다.

여기서, 상기 암은 통성작인 의미로서의 암이며, 특별히 제한되지 않으나, 상기 암은 가성점액종, 간내 담도암, 간모세포종, 간암, 갑상선암, 결장암, 고환암, 골수이형성증후군, 교모세포종, 구강암, 구순암, 균상식육종, 급성골수성백혈병, 급성림프구성백혈병, 기저세포암, 난소상피암, 난소생식세포암, 남성유방암, 뇌암, 뇌하수체선종, 다발성골수종, 담낭암, 담도암, 대장암, 만성골수성백혈병, 만성림프구백혈병, 망막모세포종, 맥락막흑색종, 미만성거대B세포림프종, 바터팽대부암, 방광암, 복막암, 부갑상선암, 부신암, 비부비동암, 비소세포폐암, 비호지킨림프종, 설암, 성상세포종, 소세포폐암, 소아뇌암, 소아림프종, 소아백혈병, 소장암, 수막종, 식도암, 신경교종, 신경모세포종, 신우암, 신장암, 심장암, 십이지장암, 악성 연부조직 암, 악성골암, 악성림프종, 악성중피종, 악성흑색종, 안암, 외음부암, 요관암, 요도암, 원발부위불명암, 위림프종, 위암, 위유암종, 위장관간질암, 윌름스암, 유방암, 육종, 음경암, 인두암, 임신융모질환, 자궁경부암, 자궁내막암, 자궁육종, 전립선암, 전이성 골암, 전이성뇌암, 종격동암, 직장암, 직장유암종, 질암, 척수암, 청신경초종, 췌장암, 침샘암, 카포시 육종, 파제트병, 편도암, 편평상피세포암, 폐선암, 폐암, 폐편평상피세포암, 피부암, 항문암, 횡문근육종, 후두암, 흉막암, 및 흉선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘 등과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염 등과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.

이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 Kg인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.1-1000 mg/일이며, 바람직하게는 1-500 mg/일이며, 또한 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.

상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다.

다른 한편, 건강기능 식품 조성물에 있어서, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1-90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 g당 일반적으로 약 1-20 g, 바람직하게는 약 5-12 g이다.

나아가, 상기 외에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

여기서, 상기 JAK 키나아제 관련 질환은 본원에서 상술하여 설명되는 바와 같은 질환을 모두 포함한다.

상기 치료학적 유효량은 투여 방법에 따라, 체내로 투여시 대상(subject)의 증상 또는 상태를 개선시킬 수 있을 정도의 양을 말한다. 또한 상기 양은 투여하는 대상의 체중, 나이, 성별, 상태, 가족력에 따라 상이할 수 있고, 본 발명에서 상기 치료 방법은 이처럼 대상별로 상이한 조건에 따라 다른 양의 투여량을 정할 수 있다.

상기 "유효한 양"은 JAK 키나아제 관련 질환 또는 장애를 치료하는데 유용한 양, 또는 암을 치료하는데 최소한의 유효한 양 이상을 의마한다. 다른 구체예에서, 화합물의 "유효한 양"은 암의 증식을 억제할 수 있는 최소한의 양 이상을 말한다.

본 발명의 방법에 따른 화합물 및 조성물은 질환을 치료하는데 유효한 임의의 양 및 임의의 투여 경로를 사용하여 투여될 수 있다. 필요한 정확한 양은 대상체의 종, 연령, 및 일반적인 병태, 감염의 중증도, 특정한 제제, 그것의 투여 방식, 등에 따라 대상별로 변할 것이다. 본 발명의 화합물은 복용량의 투여 용이성 및 균일성에 대해 투약량 단위 형태로 빈번하게 제형화된다. 표현 "투약량 단위 형태"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이 치료될 대상에 적절한 제제의 물리적으로 별개의 단위를 의미한다. 그러나, 본 발명의 화합물 및 조성물의 총 일일 사용량이 건전한 의료 판단의 범위 내에 주치의에 의해 결정될 것으로 이해될 것이다. 임의의 특정한 대상 또는 유기체에 대한 특정 유효한 투여 수준은 하기를 포함하는 다양한 요인에 의존할 것이다.

용어 "대상"은, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 동물, 예를 들면 포유동물, 예컨대 인간을 의미한다.

본 발명의 약학적 조성물은 치료될 감염의 중증도에 따라 인간 및 다른 동물에게 경구로, 직장으로, 비경구로, 낭내로, 질내로, 복강내로, 국소로 (분말, 연고, 로션, 고약, 또는 드롭스에 의해서), 구강으로, 경구 또는 비강 스프레이로서, 등으로 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 원하는 치료 효과를 얻기 위해 약 0.01 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 예를 들면 약 1 mg/kg 내지 약 25 mg/대상체 체중 kg / 1일, 1회 이상 /1일의 복용량 수준으로 경구로 또는 비경구로 투여될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

하기 실시예 화합물에 있어서,

제조된 화합물의 분석 및 정제 조건은 다음과 같다.

<분석 및 정제 조건>

HPLC 분석 조건 (A)

기기명: Shimadzu

컬럼: YMC-pack pro C18, 150x4.6mm I.D., 5 μm, 40℃

이동상: 5% ->100% 아세토니트릴/H₂O + 0.1% TFA,

분석시간 : 9분, 유속 : 1ml/min

UV detector: 254nm

HPLC 분석 조건 (B)

기기명: Thermo Scientific Ultimate 3000RSLC

컬럼: Kinetex® 2.6 μM Biphenyl 100Å, 100x2.1mm

이동상: 5% ->100% 아세토니트릴/H₂O + 0.1% TFA,

분석시간 : 4.5분, 유속 : 1.2ml/min

UV detector: 254nm

LC-MS 분석 조건

기기명: Shimadzu LCMS-2020

컬럼: ACE Excel2 C18, 75x2.1 mm

이동상: 아세토니트릴/H₂O + 0.1% TFA

유속 : 1mL/min

UV detector: 254nm

MPLC 정제 조건

기기명: CombiFlash®Rf+

UV detector: 254nm

Prep-HPLC 정제 조건

기기명: Gilson GX-281, 321 pump, UV/VIS-155

컬럼: Luna® 10 μM C18 (2) 100Å, 250x21.2 mm

이동상: 아세토니트릴/ 0.1% TFA H₂O

유속 : 15mL/min

UV detector: 254nm

1NH NMR

기기명: Brucler Avance (400 MHz)

< 실시예 1> N-(5-(5-((1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드의 제조

단계 1: N-(5-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)아미노)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아세트 아미드의 제조

N-(5-아미노-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아세트아미드 (1.0 당량)을 THF (0.2 M)에 상온에서 녹인 후, -78 ℃로 냉각하였다. THF (0.2 M)에 녹여 있는 2,4-디클로로-5-니트로피리미딘 (1.0 당량)을 첨가하고 15분 동안 교반하였다. 그 반응물에 물과 염수를 넣은 후, EtOAc로 유기물을 추출하였다(x3). 모아진 유기층은 MgSO₄를 이용해 남은 물을 제거하고 농축하였다. 황색 고체의 목적 화합물은 추가 정제 없이 다음 반응에 사용되었다. (수율 100%)

단계 2: N-(5-((5-아미노-2-클로로피리미딘-4-일)아미노)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아세트아미드의 제조

상기 1단계에서 제조한 화합물 (1.0 당량)을 0.1 M THF:MeOH:H2O (1.0 : 0.5 : 1.0) 용액에 녹인 후, Fe (5.0 당량)과 NH₄Cl (5..0 당량)을 넣고 100 ℃에서 1시간 동안 환류시켰다. 그 반응물을 상온으로 식힌 후, 셀라이트로 여과하고 EtOAc와 MeOH로 씻어주었다. 얻어진 여과액을 농축한 후, MPLC (MeOH:CH2Cl₂)를 통해 정제하였고 갈색 고체의 목적 화합물을 수득하였다. (수율: 72%)

단계 3: N-(5-(5-클로로-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아세트아미드의 제조

상기 단계 2에서 제조한 화합물 (1.0 당량)을 DMF (0.1 M)에 첨가하여 녹인 후, 이소아밀 니트라이트 (1.2 당량)를 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 16시간 동안 교반한 후, 70 ℃로 온도를 높여 30분 동안 교반하였다. 그 반응 혼합물의 용매를 제거하여 얻어진 농축액을 MPLC (EtOAc:Hex)를 통해 정제하였고 황색 고체의 목적 화합물을 수득하였다. (수율: 37%)

단계 4: N-(5-(5-((1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리딘-3- 일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아세트아미드의 제조

상기 단계 3에서 제조한 화합물 (1.0 당량), 1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-아민 (1.0 당량)과 K₂CO₃ (5.0 당량)를 sec-BuOH (0.1 M)에 첨가하여 녹인 후, 1분 동안 초음파 처리하여 가스를 제거하였다. 반응 혼합물에 Pd₂(dba)₃ (0.1 당량) 및 Xphos (0.1 당량)를 100 ℃에서 첨가한 후, 14시간 동안 반응 시켰다. 반응 후, 반응 혼합물을 셀라이트로 여과하고, EtOAc와 MeOH로 씻어주었다. 얻어진 여과액을 농축한 후, MPLC (EtOAc:Hex)를 통해 정제하였고 갈색 고체의 목적 화합물을 수득하였다. (수율: 81%)

단계 5: 3-(5-아미노-1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌-1-일)-N-(1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)-3H-[1,2,3 ]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-5-아민의 제조

상기 단계 4에서 제조한 화합물 (1.0 당량)을 EtOH (0.05 M)에 첨가하여 녹인 후, 4N HCl (in dioxane, 40 당량)을 상온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 90 ℃에서 4시간 동안 반응 시켰다. 반응 후, 용매를 감압하여 제거하였다. 물을 붓고 4N NaOH을 이용하여 pH=8이 되도록 pH를 조절한 후, EtOAc를 이용하여 유기물질을 추출하였다(x3). 모아진 유기층은 MgSO₄를 이용해 남은 물을 제거하고 농축하였다. 얻어진 농축액을 MPLC (MeOH:CH₂Cl₂)를 통해 정제하였고 갈색 고체의 목적 화합물을 수득하였다. (수율: 68%)

단계 6: N-(5-(5-((1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드의 제조

상기 단계 5에서 제조한 화합물 (1.0 당량)을 DMF (0.02 M)에 첨가하여 녹인 후, DIPEA (4.0 당량)을 상온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 -60 ℃로 냉각한 후, 아크릴로일 클로라이드 (2.0 당량)를 첨가하고 5분 동안 반응 시켰다. 반응 혼합물은 prep-HPLC를 통해 정제하였고 황색 고체의 목적 화합물을 수득하였다. (수율: 30%)

Yield: 30 %; HPLC(A) r.t.: 5.83 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆,) δ 9.53 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.43 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.62-6.54 (m, 2H), 6.29-6.24 (m, 2H), 5.78 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.21 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.62 (br, 2H), 3.27 (m, 1H), 3.22 (s, 3H), 2.88-2.78 (m, 2H), 2.51 (br, 1H), 2.32 (br, 1H), 2.11-2.08 (m, 1H), 1.96-1.90 (m, 1H) ; 460[M+H]⁺

<실시예 2> N-(1-(5-((1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

하기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 하기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 56 %; HPLC(A) r.t.: 5.77 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ 7.74-7.72 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.22 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.6 H, 1H), 6.65-6.59 (m, 2H), 6.44 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.19 (br, 2H), 3.68 (t, J = 4.2 Hz, 2H), 3.24 (s, 3H), 3.20-3.11 (m, 3H), 2.89-2.84 (m, 2H); 446[M+H]⁺

<실시예 3> N-(5-(5-((5-클로로-1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 1의 단계 4에서 사용한, 1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-아민을 대신하여, 5-클로로-1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 1과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 73 %; HPLC(A) r.t.: 6.17 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆) δ 9.49 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.60-6.53 (m, 2H), 6.25 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 6.08 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.68 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.20 (s, 4H), 2.75 (brs, 2H), 2.42 (brs, 1H), 2.072.05 (m, 1H), 1.90 (brs, 1H) ; 494[M+H]⁺

<실시예 4> N-(5-(5-((2-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 1의 단계 4에서 사용한, 1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-아민을 대신하여, 2-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)벤젠아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 1과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 16 %; HPLC(A) r.t.: 5.15 min ; Purity: 99 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆) δ ; 540[M+H]⁺

<실시예 5> N-(1-(5-((5-클로로-1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

하기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 5-클로로-1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 하기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 28 %; HPLC(A) r.t.: 6.11 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ 7.69 (s, 1H), 7.62 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.62-6.50 (m, 2H), 6.40 (d, J = 16.9 Hz, 1H), 5.82 (d, J =10.1 Hz, 1H), 4.32 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.76 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.32 (s, 4H), 3.13-3.05 (m, 2H), 2.85-2.75 (m, 2H) ; 480[M+H]⁺

<실시예 6> N-(5-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 1의 단계 4에서 사용한, 1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-아민을 대신하여, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 1과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 50 %; HPLC(A) r.t.: 5.40 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆) δ 9.53 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.43 (d, J = 7.7 Hz, 1H),. 7.07 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.62-6.56 (m, 2H), 6.30-6.26 (m, 1H) 6.27 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.10 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.70 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.35 (br, 1H), 2.90-2.83 (m, 2H), 2.47-2.43 (m, 1H), 2.34-2.30 (m, 1H), 2.11-2.08 (m, 1H), 1.967-1.91 (m, 1H); 446[M+H]⁺

<실시예 7> N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

하기 실시예 8의 단계 1에서 사용한, (S)-4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민을 대신하여, 4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민을 사용한 점을 제외하고, 하기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 49 %; HPLC(A) r.t.: 5.35 min ; Purity: 100 %;

¹H NM, R (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆) δ 9.67 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.43 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.13 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.64-6.57 (m, 2H), 6.28 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.05 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.29-3.22 (m, 2H), 3.09-3.03 (m, 1H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.79-2.77 (m, 1H) ; 432[M+H]⁺

<실시예 8> (S)-N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

단계 1: (S)-2-클로로-N4-(4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-일)피리미딘-4,5-디아민의 제조

2,4-디클로로피리미딘-5-아민 (1.2 당량)와 (S)-4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민 (1.0 당량)을 sec-BuOH (0.2 M)에 상온에서 녹인 후, 120 ℃에서 14시간 동안 교반하였다. 그 반응물을 농축하여 얻어진 갈색 고체의 목적 화합물은 추가 정제 없이 다음 반응에 사용되었다. (수율 100%)

단계 2: (S)-5-클로로-3-(4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-일)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘의 제조

상기 단계 1에서 제조한 화합물 (1.0 당량)을 DMF (0.2 M)에 첨가하여 녹인 후, 이소아밀 니트라이트 (1.5 당량)를 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 3시간 동안 교반한 후, 50 ℃로 온도를 높여 30분 동안 교반하였다. 그 반응 혼합물의 용매를 제거하여 얻어진 농축액을 MPLC (MeOH:CH₂Cl₂)를 통해 정제하였고 황색 고체의 목적 화합물을 수득하였다. (수율: 48%)

단계 3: (S)-2-(4-((3-(4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-일)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘 -5-일)아미노)-1H-피라졸-1-일)에탄-1-올의 제조

상기 단계 2에서 제조한 화합물 (1.0 당량), 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올 (1.0 당량)과 K₂CO₃ (5.0 당량)를 sec-BuOH (0.1 M)에 첨가하여 녹인 후, 1분 동안 초음파 처리하여 가스를 제거하였다. 반응 혼합물에 Pd₂(dba)₃ (0.1 당량) 및 Xphos (0.1 당량)를 80 ℃에서 첨가한 후, 14시간 동안 반응 시켰다. 반응 후, 반응 혼합물을 셀라이트로 여과하고, EtOAc와 MeOH로 씻어주었다. 얻어진 여과액을 농축한 후, MPLC (MeOH:CH₂Cl₂)를 통해 정제하여, 황색 고체의 목적 화합물을 수득하였다. (수율: 25%)

단계 4: (S)-2-(4-((3-(4-아미노-2,3-디히드로-1H-인덴-1-일)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-5-일)아미노)-1H-피라졸-1-일)에탄-1-올의 제조

상기 단계 3에서 제조한 화합물 (1.0 당량)을 0.1 M THF:MeOH:H₂O (1.0 : 0.5 : 1.0) 용액에 녹인 후, Fe (5.0 당량)과 NH₄Cl (5..0 당량)을 넣고 100 ℃에서 1 시간 동안 환류시켰다. 그 반응물을 상온으로 식힌 후, 셀라이트로 여과하고 EtOAc와 MeOH로 씻어주었다. 얻어진 여과액을 농축한 후, MPLC (MEOH:DCM)를 통해 정제하였고 갈색 고체의 목적 화합물을 수득하였다. (수율: 67%)

단계 5: (S)-N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 단계 4에서 제조한 화합물 (1.0 당량)을 DMF (0.02 M)에 첨가하여 녹인 후, DIPEA (4.0 당량)을 상온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 -60 ℃로 냉각한 후, 아크릴로일 클로라이드 (2.0 당량)를 첨가하고 5분 동안 반응시켰다. 반응 혼합물은 prep-HPLC를 통해 정제하여 황색 고체의 목적 화합물을 수득하였다. (수율: 40%)

Yield: 40 %; HPLC(A) r.t.: 5.30 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆) δ 9.68 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.13 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.64-6.57 (m, 2H), 6.28 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.05 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.10-3.02 (m, 3H), 2.80-2.76 (m, 1H), 2.69-2.65 (m, 1H) ; 432[M+H]⁺

<실시예 9> (R)-N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 1에서 사용한, (S)-4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민을 대신하여, (R)-4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 13 %; HPLC(A) r.t.: 5.30 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ ; 432[M+H]⁺

<실시예 10> (S)-N-(1-(5-((1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 35 %; HPLC(A) r.t.: 6.34 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆) δ 9.72 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.43 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.14 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.82 (d, J =7.5 Hz, 1H), 6.65-6.58 (m, 2H), 6.29 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.09-5.03 (m, 2H), 3.26-3.24 (m, 2H), 3.16-3.03 (m, 1H), 2.81-2.77 (m, 1H), 2.75-2.66 (m, 1H) ; 470[M+H]⁺

<실시예 11> (R)-N-(1-(5-((1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 1에서 사용한, (S)-4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민을 대신하여, (R)-4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민을 사용하고, 상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 53 %; HPLC(A) r.t.: 6.34 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆) δ 9.72 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.73 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.15 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.65-6.58 (m, 2H), 6.29 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.10-5.04 (m, 2H), 3.27-3.22 (m, 2H), 3.11-3.03 (m, 1H), 2.82-2.75 (m, 1H), 2.72-2.63 (m, 1H) ; 470[M+H]⁺

<실시예 12> (S)-N-(1-(5-((1-(3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-((3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 25 %; HPLC(A) r.t.: 4.67 min ; Purity: 80 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ ; 472[M+H]⁺

<실시예 13> (R)-N-(1-(5-((1-(3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 1에서 사용한, (S)-4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민을 대신하여, (R)-4-니트로-2,3-디히드로-1H-인덴-1-아민을 사용하고, 상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-((3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 38 %; HPLC(A) r.t.: 4.64 min ; Purity: 99 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ ; 472[M+H]⁺

<실시예 14> (S)-N-(1-(5-(4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 4-(4-메틸피페라진-1-일)벤젠아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 31 %; HPLC(A) r.t.: 4.87 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄) δ 9.12 (s, 1H), 7.87 (d, J=7.68 Hz, 1H), 7.41 (d, J=8.88 Hz, 2H), 7.22-7.18 (m, 1H), 6.90-6.87 (m, 3H), 6.67-6.55 (m, 2H), 6.46-6.41 (m, 1H), 5.87-5.85 (m, 1H), 3.81-3.68 (m, 2H), 3.66-3.55 (m, 2H), 3.39-3.21 (m, 5H), 3.20-3.10 (m, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.93-2.81 (m, 1H), 2.83-2.69 (m, 1H); 496[M+H]⁺

<실시예 15> (S)-N-(1-(5-((1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 5 %; HPLC(A) r.t.: 5.68 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄) δ 9.14 (s, 1H), 7.90-7.83 (m, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.29-7.15 (m, 1H), 6.88 (d, J=7.6 Hz, 1H), 6.66-6.59 (m, 2H), 6.47-6.43(m, 1H), 5.86-5.83 (m, 1H), 5.55-5.42 (m, 1H), 5.06-4.94 (m, 4H), 3.45-3.32 (m, 1H), 3.17-3.09 (m, 1H), 2.87-2.79 (m, 2H); 444[M+H]⁺

<실시예 16> (S)-N-(1-(5-((1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 39 %; HPLC(A) r.t.: 4.62 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄) δ 9.15 (s, 1H), 7.80-7.72 (m, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.23 (t, 1H), 6.90 (d, J=7.56 Hz, 1H), 6.71-6.53 (m, 2H), 6.45-6.41(m, 1H), 5.86-5.83 (m, 1H), 4.53-4.44 (m, 2H), 3.65-3.61 (m, 2H), 3.40-3.30 (m, 1H), 3.17-3.09 (m, 1H), 2.95 (s, 6H), 2.87-2.74 (m, 2H); 459[M+H]⁺

<실시예 17> N-((S)-1-(5-((1-(피롤리딘-3-일)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4.5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(피롤리딘-3-일)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 20 %; HPLC(A) r.t.: 4.66 min ; Purity: 99 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄) δ 9.14 (s, 1H), 7.91-7.75 (m, 1H), 7.70-7.46 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 1H), 7.70-6.82 (m, 1H), 6.75-6.59 (m, 2H), 6.52-6.42 (m, 1H), 5.92-5.82 (m, 1H), 5.15-5.04 (m, 1H), 3.72-3.44 (m, 4H), 3.17-3.11 (m, 1H), 2.89-2.81 (m, 1H), 2.74-2.66 (m, 1H), 2.57-2.53 (m, 1H), 2.52-2.42 (m 1H), 2.40-2.18 (m, 1H); 457[M+H]⁺

<실시예 18> N-((S)-1-(5-((1-(2-히드록시프로필)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)프로판-2-올을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 21 %; HPLC(A) r.t.: 5.47 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ 9.04 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.58 (s, J = 7.8 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.14 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.54-6.47 (m, 2H), 6.36 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.10-3.83 (m, 3H), 3.35-3.25 (m, 1H), 3.09-3.01 (m, 1H), 2.79-2.72 (m, 2H), 1.07(s, 3H); 446[M+H]⁺

<실시예 19> N-((S)-1-(5-(1-(3-(디메틸아미노)-2-히드록시프로필)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)-3-(디메틸아미노)프로판-2-올을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 3 %; HPLC(A) r.t.: 4.55 min ; Purity: 97 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ 9.08 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.16 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.57-6.50 (m, 2H), 6.38 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.11-4.00 (m, 2H), 3.12-3.00 (m, 3H), 2.92-2.66 (m, 4H), 1.22 (s, 6H); 489[M+H]⁺

<실시예 20> N-((S)-1-(5-((1-(피페리딘-3-일메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(피페리딘-3-일메틸)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 34 %; HPLC(A) r.t.: 4.69 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ 9.04 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.13 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.79 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.55-6.49 (m, 2H), 6.36 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.03-3.86 (m, 2H), 3.28-3.24 (m, 1H), 3.08-2.99 (m, 2H), 2.83-2.64 (m, 4H), 2.23-2.18 (m, 1H), 1.94-1.91 (m, 1H), 1.84-1.80 (m, 2H), 1.65-1.61 (m, 2H); 485[M+H]⁺

<실시예 21> (S)-N-(1-(5-((1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 40 %; HPLC(A) r.t.: 4.63 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ 9.04 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.14 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.55-6.49 (m, 2H), 6.37 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.39-4.21 (m, 1H), 3.47-3.44 (m, 2H), 3.15-2.98 (m, 4H), 2.76-2.65 (m, 2H), 2.19-2.11 (m, 4H); 471[M+H]⁺

<실시예 22> N-((S)-1-(5-((1-모폴린-2-일메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 1-(모폴린-2-일메틸)-1H-피라졸-4-아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 23 %; HPLC(A) r.t.: 4.62 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ 9.05 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.47 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.56-6.50 (m, 2H), 6.37 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.18-4.11 (m, 2H), 3.95-3.92 (m, 2H), 3.70-3.62 (m, 1H), 3.13-2.96 (m, 4H), 2.81-2.67 (m, 2H); 462[M+H]⁺

<실시예 23> (S)-N-(1-(5-((4-(트리플루오로메틸)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 4-(트리플루오로메틸)벤젠아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 16 %; HPLC(A) r.t.: 7.31 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆) δ 10.63 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 7.88 (d, J=8.04 Hz, 1H), 7.81 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.59 (d, J=8.68 Hz, 2H), 7.18 (t, 1H), 6.83 (d, J=7.56 Hz, 1H), 6.70-6.63 (m, 2H), 6.33-6.29 (m, 1H), 5.81-5.78 (m, 1H), 3.30-3.22 (m, 1H), 3.16-3.07 (m, 1H), 2.98-2.82 (m, 1H), 2.69-2.53 (m, 1H); 466[M+H]⁺

<실시예 24> (S)-N-(1-(5-((4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 4-(2,2,2-트리플루오로에틸)벤젠아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 18 %; HPLC(A) r.t.: 7.13 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, DMSO-d₆) δ 10.30 (s, 1H), 9.69 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 7.85 (d, J=8.04 Hz, 1H), 7.64 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.23 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.18 (t, 1H), 6.84 (d, J=7.52 Hz, 1H), 6.70-6.57 (m, 2H), 6.33-6.29 (m, 1H), 5.81-5.78 (m, 1H), 3.54-3.46 (m, 2H), 3.29-3.21 (m, 1H), 3.13-3.07 (m, 1H), 2.84-2.67 (m, 1H), 2.65-2.58 (m, 1H); 480[M+H]⁺

<실시예 25> (S)-N-(1-(5-((2-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 2-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)벤젠아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 16 %; HPLC(A) r.t.: 5.06 min ; Purity: 100 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄) δ 9.14 (s, 1H), 7.89 (d, J=7.68 Hz, 1H), 7.73 (d, J=8.84 Hz, 1H), 7.22 (t, 1H), 6.90 (d, J=7.6 Hz, 1H), 6.69 (d, J=2.48 Hz, 1H), 6.65-6.58 (m, 2H), 6.46-6.42 (m, 2H), 5.88 (d, J=10.12 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.89-3.78 (m, 2H), 3.75-3.62 (m, 2H), 3.45-3.24 (m, 2H), 3.23-3.15 (m, 2H), 3.14-2.98 (m, 2H), 2.99 (s, 3H), 2.97-2.84 (m, 1H), 2.82-2.75 (m, 1H); 526[M+H]⁺

<실시예 26> (S)-N-(1-(5-(메틸아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3에서 사용한, 2-(4-아미노-1H-피라졸-1-일)에탄올을 대신하여, 메탄아민을 사용한 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 26 %; HPLC(B) r.t.: 5.7 min ; Purity: 95 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d₄,) δ 9.49 (s, NH), 7.60 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 7.52 Hz, 1H), 6.55 (q, J = 10.12 Hz, 1H), 6.46 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.14-3.06 (m, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.83-2.27 (m, 2H); 336[M+H]⁺

<실시예 27> (S)-N-(1-(5-클로로-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드의 제조

상기 실시예 8의 단계 3을 수행하지 않은 점을 제외하고, 상기 실시예 8과 같이 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.

Yield: 22.4 %; HPLC(B) r.t.: 6.33 min ; Purity: 97 %;

¹H NMR (400 MHz, TFA salt, MeOD-d ₄,) δ 9.49 (s, NH), 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.78 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 7.56 Hz, 1H), 6.66 (t, J = 6.74 Hz, 1H), 6.57 (q, J = 10.18 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.15-3.11 (m, 2H), 2.92-2.82 (m, 2H); 341[M+H]⁺

상기 실시예 1-27에서 제조한 화합물의 화학 구조식을 하기 표 1에 나타내었다.

실시예	화학 구조식	실시예	화학 구조식
1		15
2		16
3		17
4		18
5		19
6		20
7		21
8		22
9		23
10		24
11		25
12		26
13		27
14

<실험예 1> JAK 1, JAK 2, JAK 3, TYK2 키나아제 저해 활성 평가

본 발명에 따른 화합물의 JAK 1, JAK 2, JAK 3, TYK2 키나아제에 대한 저해 활성을 평가하기 위하여 LanthaScreen Kinase assay 실험을 수행하였다.

보다 상세하게 384-웰 플레이트에 최종농도 533ng/ml 재조합 JAK 1 키나아제(Promega PV4774), 7.7μmol/L ATP (Promega PV3227), 100nM GFP-STAT1 (Promega PV5211)를 키나아제 반응 버퍼 (50mM HEPES pH7.5, 0.01% BRIJ-35, 10 mM MgCl₂, 1mM EGTA)에 첨가하여 혼합하였다. 본 발명에 따른 각각의 화합물 최종 농도를 10uM, 3.33uM, 1.11uM, 370nM, 123nM, 41nM, 13.7nM, 4.57nM , 1.52nM 그리고 0.5nM로 첨가한 후, 23℃ 인큐베이터에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응이 종료된 후, 동량의 4nM LanthaScreen^TMTb-anti-pSTAT1 (pTyr701)(Promega PV4844), 20mm EDTA (Promega P2825)를 TR-FRET 용액에 첨가하여 30분 동안 반응시키고, 탐지(detection) 용액을 첨가하여 상온에서 30분 동안 더 반응시킨 후, 마이크로플레이트 효소결합면역흡착검사 판독기(microplate ELISA reader; Bio-Tek)를 이용하여 TRF/TR-FRET Dual PMT를 사용하여 TR-FRET 값을 측정하여 키나아제의 IC₅₀ 값을 산출하였다.

JAK 2의 경우는 384-웰 플레이트에 최종농도 150ng/ml 재조합 JAK 2 키나아제(Promega PV4210), 1μmol/L ATP (Promega PV3227), 100nM GFP-STAT1 (Promega PV5211)를 키나아제 반응 버퍼 (50mM HEPES pH7.5, 0.01% BRIJ-35, 10 mM MgCl₂, 1mM EGTA)에 첨가하여 혼합한 후, JAK 1의 실험방법과 같이 수행하였다.

JAK 3의 경우는 384-웰 플레이트에 최종농도 180ng/ml 재조합 JAK 3 키나아제(Promega PV3855), 1μmol/L ATP (Promega PV3227), 100nM GFP-STAT1 (Promega PV5211)를 키나아제 반응 버퍼 (50mM HEPES pH7.5, 0.01% BRIJ-35, 10 mM MgCl₂, 1mM EGTA)에 첨가하여 혼합한 후, JAK 1의 실험방법과 같이 수행하였다.

TYK2의 경우는 384-웰 플레이트에 최종농도 300ng/ml 재조합 TYK2 키나아제(Promega PV4790), 1μmol/L ATP (Promega PV3227), 100nM GFP-STAT1 (Promega PV5211)를 키나아제 반응 버퍼 (50mM HEPES pH7.5, 0.01% BRIJ-35, 10 mM MgCl₂, 1mM EGTA)에 첨가하여 혼합한 후, JAK 1의 실험방법과 같이 수행하였다.

하기 표 2 및 표 3에 실시예 화합물의 JAK 1, JAK 2, JAK 3 및 TYK2에 대한 저해 활성도를 정리하여 나타내었다. 측정된 키나아제의 IC₅₀값을 10nM 미만인 경우 A등급, 10 - 100nM인 경우 B등급 100nM 초과인 경우 C등급으로 분류하여 나타내었다.

실시예	JAK 3 (IC50, uM)
1	B
2	A
3	C
4	C
5	B
6	A
7	A
8	A
9	A
10	A
11	B
12	C
13	C
14	A
15	A
16	A
17	A
18	A
19	A
20	A
21	A
22	A
23	C
24	C
25	B
26	B
27	C

실시예	JAK 1 (IC50, uM)	JAK 2 (IC50, uM)	JAK 3 (IC50, uM)	TYK2 (IC50, uM)
1	C	C	B	C
2	C	C	A	C
5	C	C	B	C
6	C	C	A	C
7	C	C	A	C
8	C	C	A	C
9	C	C	A	C
10	C	C	A	C
11	C	C	B	C

표 3을 살펴보면, 본 발명 화합물은 JAK 1, JAK 2, TYK2 대비 JAK 3에 보다 현저한 저해 활성이 확인되는 바, 본 발명 화합물은 JAK 3 선택적 저해 화합물임을 알 수 있다.

또한, 표 2를 살펴보면, 본 발명에 따른 화합물은 모두 JAK 3 에 대하여 우수한 저해 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있다.

따라서, 본 발명 화합물은 JAK 1, JAK 2, TYK2, 또는 JAK 3 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 제공될 수 있고, 특히 JAK 3 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 제공될 수 있다.

또한, 본 발명 화합물은 특히 JAK 3 선택적 저해제로서, 종래 비선택적 저해제가 가지는 부작용 문제, 낮은 약효의 문제 등을 해소할 수 있어, 개선된 치료 약물로서 제공될 수 있음을 알 수 있다.

<실험예 2> 키나아제 저해 활성 평가

본 발명에 따른 화합물의 보다 많은 효소에 대한 저해 활성을 평가하기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다.

구체적으로, 본 별명의 실시예 화합물 중, 선별된 실시예 1에 대하여, DiscoverX 사에 의뢰하여 효소(kinase) 선택성을 측정하기로 하고, scanMAX^TM Kinase 분석용 패널을 사용하여 실험을 진행하였다.

이때, 효소에 처리되는 약물의 농도는 DMSO에 1 uM로 하였고, 다음 식 1과 같은 방법으로 조절 백분율(% control)을 정하였고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

[식 1]

(실시예 화합물 - 양성 대조군)/(음성 대조군 - 양성대조군) × 100

여기서, 상기 양성 대조군은 0%의 조절 백분율을 나타내는 화합물을 말하며, 음성 대조군은 DMSO로 100%의 조절 백분율을 나타낸다. 또한, 본 발명의 효소 선택성은 각각의 효소에 대하여 조절 백분율이 < 35%(즉, 35% 미만)이면 해당 효소에 대하여 활성을 갖는 것으로 판단하였다.

	실시예 1
AAK1	99.0
ABL1(E255K)-phosphorylated	54.0
ABL1(F317I)-nonphosphorylated	95.0
ABL1(F317I)-phosphorylated	80.0
ABL1(F317L)-nonphosphorylated	98.0
ABL1(F317L)-phosphorylated	90.0
ABL1(H396P)-nonphosphorylated	41.0
ABL1(H396P)-phosphorylated	74.0
ABL1(M351T)-phosphorylated	66.0
ABL1(Q252H)-nonphosphorylated	47.0
ABL1(Q252H)-phosphorylated	73.0
ABL1(T315I)-nonphosphorylated	47.0
ABL1(T315I)-phosphorylated	53.0
ABL1(Y253F)-phosphorylated	72.0
ABL1-nonphosphorylated	73.0
ABL1-phosphorylated	81.0
ABL2	86.0
ACVR1	100.0
ACVR1B	100.0
ACVR2A	100.0
ACVR2B	96.0
ACVRL1	93.0
ADCK3	100.0
ADCK4	100.0
AKT1	100.0
AKT2	92.0
AKT3	100.0
ALK	78.0
ALK(C1156Y)	56.0
ALK(L1196M)	55.0
AMPK-alpha1	85.0
AMPK-alpha2	84.0
ANKK1	69.0
ARK5	100.0
ASK1	84.0
ASK2	89.0
AURKA	29.0
AURKB	40.0
AURKC	22.0
AXL	95.0
BIKE	89.0
BLK	66.0
BMPR1A	100.0
BMPR1B	80.0
BMPR2	91.0
BMX	38.0
BRAF	74.0
BRAF(V600E)	68.0
BRK	98.0
BRSK1	100.0
BRSK2	93.0
BTK	25.0
BUB1	98.0
CAMK1	82.0
CAMK1B	81.0
CAMK1D	89.0
CAMK1G	97.0
CAMK2A	98.0
CAMK2B	99.0
CAMK2D	99.0
CAMK2G	98.0
CAMK4	90.0
CAMKK1	69.0
CAMKK2	89.0
CASK	95.0
CDC2L1	100.0
CDC2L2	99.0
CDC2L5	95.0
CDK11	100.0
CDK2	80.0
CDK3	94.0
CDK4	79.0
CDK4-cyclinD1	71.0
CDK4-cyclinD3	60.0
CDK5	85.0
CDK7	71.0
CDK8	100.0
CDK9	98.0
CDKL1	90.0
CDKL2	95.0
CDKL3	100.0
CDKL5	81.0
CHEK1	97.0
CHEK2	71.0
CIT	100.0
CLK1	80.0
CLK2	91.0
CLK3	89.0
CLK4	97.0
CSF1R	44.0
CSF1R-autoinhibited	12.0
CSK	90.0
CSNK1A1	85.0
CSNK1A1L	97.0
CSNK1D	100.0
CSNK1E	93.0
CSNK1G1	100.0
CSNK1G2	100.0
CSNK1G3	83.0
CSNK2A1	100.0
CSNK2A2	76.0
CTK	79.0
DAPK1	91.0
DAPK2	97.0
DAPK3	82.0
DCAMKL1	84.0
DCAMKL2	100.0
DCAMKL3	93.0
DDR1	92.0
DDR2	81.0
DLK	79.0
DMPK	99.0
DMPK2	100.0
DRAK1	98.0
DRAK2	95.0
DYRK1A	85.0
DYRK1B	100.0
DYRK2	67.0
EGFR	92.0
EGFR(E746-A750del)	87.0
EGFR(G719C)	94.0
EGFR(G719S)	88.0
EGFR(L747-E749del, A750P)	88.0
EGFR(L747-S752del, P753S)	85.0
EGFR(L747-T751del,Sins)	92.0
EGFR(L858R)	98.0
EGFR(L858R,T790M)	84.0
EGFR(L861Q)	94.0
EGFR(S752-I759del)	93.0
EGFR(T790M)	79.0
EIF2AK1	95.0
EPHA1	99.0
EPHA2	100.0
EPHA3	94.0
EPHA4	93.0
EPHA5	82.0
EPHA6	100.0
EPHA7	98.0
EPHA8	98.0
EPHB1	100.0
EPHB2	91.0
EPHB3	100.0
EPHB4	100.0
EPHB6	8.6
ERBB2	72.0
ERBB3	77.0
ERBB4	100.0
ERK1	82.0
ERK2	90.0
ERK3	98.0
ERK4	100.0
ERK5	100.0
ERK8	77.0
ERN1	84.0
FAK	98.0
FER	96.0
FES	100.0
FGFR1	56.0
FGFR2	72.0
FGFR3	77.0
FGFR3(G697C)	66.0
FGFR4	92.0
FGR	97.0
FLT1	43.0
FLT3	59.0
FLT3(D835H)	37.0
FLT3(D835V)	21.0
FLT3(D835Y)	78.0
FLT3(ITD)	79.0
FLT3(ITD,D835V)	69.0
FLT3(ITD,F691L)	46.0
FLT3(K663Q)	61.0
FLT3(N841I)	46.0
FLT3(R834Q)	74.0
FLT3-autoinhibited	66.0
FLT4	60.0
FRK	92.0
FYN	100.0
GAK	84.0
GCN2(Kin.Dom.2,S808G)	88.0
GRK1	86.0
GRK2	74.0
GRK3	84.0
GRK4	76.0
GRK7	86.0
GSK3A	52.0
GSK3B	66.0
HASPIN	73.0
HCK	83.0
HIPK1	94.0
HIPK2	81.0
HIPK3	75.0
HIPK4	95.0
HPK1	79.0
HUNK	95.0
ICK	67.0
IGF1R	96.0
IKK-alpha	88.0
IKK-beta	86.0
IKK-epsilon	74.0
INSR	89.0
INSRR	85.0
IRAK1	62.0
IRAK3	81.0
IRAK4	73.0
ITK	89.0
JAK 1(JH1domain-catalytic)	100.0
JAK 1(JH2domain-pseudokinase)	60.0
JAK 2(JH1domain-catalytic)	22.0
JAK 3(JH1domain-catalytic)	0.0
JNK1	69.0
JNK2	82.0
JNK3	80.0
KIT	77.0
KIT(A829P)	64.0
KIT(D816H)	78.0
KIT(D816V)	87.0
KIT(L576P)	60.0
KIT(V559D)	61.0
KIT(V559D,T670I)	93.0
KIT(V559D,V654A)	92.0
KIT-autoinhibited	59.0
LATS1	100.0
LATS2	92.0
LCK	89.0
LIMK1	59.0
LIMK2	86.0
LKB1	91.0
LOK	81.0
LRRK2	41.0
LRRK2(G2019S)	56.0
LTK	68.0
LYN	96.0
LZK	72.0
MAK	60.0
MAP3K1	90.0
MAP3K15	80.0
MAP3K2	70.0
MAP3K3	96.0
MAP3K4	100.0
MAP4K2	86.0
MAP4K3	94.0
MAP4K4	94.0
MAP4K5	76.0
MAPKAPK2	90.0
MAPKAPK5	75.0
MARK1	90.0
MARK2	100.0
MARK3	82.0
MARK4	91.0
MAST1	85.0
MEK1	77.0
MEK2	88.0
MEK3	65.0
MEK4	93.0
MEK5	72.0
MEK6	95.0
MELK	75.0
MERTK	100.0
MET	38.0
MET(M1250T)	58.0
MET(Y1235D)	71.0
MINK	70.0
MKK7	62.0
MKNK1	73.0
MKNK2	87.0
MLCK	88.0
MLK1	81.0
MLK2	61.0
MLK3	65.0
MRCKA	100.0
MRCKB	97.0
MST1	89.0
MST1R	51.0
MST2	84.0
MST3	100.0
MST4	65.0
MTOR	90.0
MUSK	92.0
MYLK	82.0
MYLK2	92.0
MYLK4	95.0
MYO3A	98.0
MYO3B	94.0
NDR1	77.0
NDR2	100.0
NEK1	100.0
NEK10	98.0
NEK11	80.0
NEK2	93.0
NEK3	83.0
NEK4	70.0
NEK5	94.0
NEK6	92.0
NEK7	95.0
NEK9	99.0
NIK	89.0
NIM1	85.0
NLK	100.0
OSR1	100.0
p38-alpha	85.0
p38-beta	95.0
p38-delta	79.0
p38-gamma	52.0
PAK1	98.0
PAK2	93.0
PAK3	87.0
PAK4	83.0
PAK6	92.0
PAK7	98.0
PCTK1	81.0
PCTK2	100.0
PCTK3	95.0
PDGFRA	63.0
PDGFRB	64.0
PDPK1	93.0
PFCDPK1(P.falciparum)	64.0
PFPK5(P.falciparum)	84.0
PFTAIRE2	94.0
PFTK1	96.0
PHKG1	100.0
PHKG2	91.0
PIK3C2B	100.0
PIK3C2G	58.0
PIK3CA	95.0
PIK3CA(C420R)	100.0
PIK3CA(E542K)	74.0
PIK3CA(E545A)	89.0
PIK3CA(E545K)	76.0
PIK3CA(H1047L)	48.0
PIK3CA(H1047Y)	77.0
PIK3CA(I800L)	48.0
PIK3CA(M1043I)	97.0
PIK3CA(Q546K)	70.0
PIK3CB	46.0
PIK3CD	95.0
PIK3CG	86.0
PIK4CB	88.0
PIKFYVE	73.0
PIM1	60.0
PIM2	100.0
PIM3	78.0
PIP5K1A	93.0
PIP5K1C	54.0
PIP5K2B	100.0
PIP5K2C	75.0
PKAC-alpha	92.0
PKAC-beta	92.0
PKMYT1	95.0
PKN1	98.0
PKN2	97.0
PKNB(M.tuberculosis)	90.0
PLK1	87.0
PLK2	70.0
PLK3	71.0
PLK4	38.0
PRKCD	92.0
PRKCE	74.0
PRKCH	98.0
PRKCI	76.0
PRKCQ	60.0
PRKD1	86.0
PRKD2	100.0
PRKD3	100.0
PRKG1	100.0
PRKG2	88.0
PRKR	81.0
PRKX	99.0
PRP4	100.0
PYK2	100.0
QSK	73.0
RAF1	85.0
RET	92.0
RET(M918T)	94.0
RET(V804L)	97.0
RET(V804M)	100.0
RIOK1	95.0
RIOK2	94.0
RIOK3	91.0
RIPK1	100.0
RIPK2	94.0
RIPK4	83.0
RIPK5	63.0
ROCK1	85.0
ROCK2	87.0
ROS1	47.0
RPS6KA4(Kin.Dom.1-N-terminal)	94.0
RPS6KA4(Kin.Dom.2-C-terminal)	81.0
RPS6KA5(Kin.Dom.1-N-terminal)	90.0
RPS6KA5(Kin.Dom.2-C-terminal)	100.0
RSK1(Kin.Dom.1-N-terminal)	79.0
RSK1(Kin.Dom.2-C-terminal)	98.0
RSK2(Kin.Dom.1-N-terminal)	62.0
RSK2(Kin.Dom.2-C-terminal)	78.0
RSK3(Kin.Dom.1-N-terminal)	78.0
RSK3(Kin.Dom.2-C-terminal)	89.0
RSK4(Kin.Dom.1-N-terminal)	75.0
RSK4(Kin.Dom.2-C-terminal)	100.0
S6K1	84.0
SBK1	65.0
SGK	75.0
SgK110	96.0
SGK2	81.0
SGK3	76.0
SIK	84.0
SIK2	51.0
SLK	38.0
SNARK	55.0
SNRK	100.0
SRC	83.0
SRMS	79.0
SRPK1	92.0
SRPK2	93.0
SRPK3	81.0
STK16	32.0
STK33	100.0
STK35	96.0
STK36	94.0
STK39	83.0
SYK	89.0
TAK1	79.0
TAOK1	50.0
TAOK2	83.0
TAOK3	66.0
TBK1	68.0
TEC	47.0
TESK1	99.0
TGFBR1	97.0
TGFBR2	96.0
TIE1	33.0
TIE2	76.0
TLK1	94.0
TLK2	100.0
TNIK	95.0
TNK1	99.0
TNK2	100.0
TNNI3K	86.0
TRKA	69.0
TRKB	81.0
TRKC	79.0
TRPM6	70.0
TSSK1B	92.0
TSSK3	69.0
TTK	22.0
TXK	79.0
TYK2(JH1domain-catalytic)	33.0
TYK2(JH2domain-pseudokinase)	36.0
TYRO3	97.0
ULK1	86.0
ULK2	82.0
ULK3	81.0
VEGFR2	35.0
VPS34	100.0
VRK2	69.0
WEE1	100.0
WEE2	100.0
WNK1	78.0
WNK2	100.0
WNK3	85.0
WNK4	81.0
YANK1	89.0
YANK2	100.0
YANK3	98.0
YES	100.0
YSK1	100.0
YSK4	52.0
ZAK	89.0
ZAP70	74.0

표 4를 살펴보면, 본 발명에 따른 화합물은 AURKA, AURKC, BTK, CSF1R-autoinhibited, EPHB6, FLT3(D835V), JAK 2(JH1domain-catalytic), JAK 3(JH1domain-catalytic), TIE1, TTK, TYK2(JH1domain-catalytic) 키나아제에 대하여 조절 백분율 35% 보다 작은 값을 가지는 것을 알 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 화합물을 유효성분으로 함유하는, AURKA, AURKC, BTK, CSF1R-autoinhibited, EPHB6, FLT3(D835V), JAK 2(JH1domain-catalytic), JAK 3(JH1domain-catalytic), TIE1, TTK, TYK2(JH1domain-catalytic) 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공될 수 있다.

<실험예 3> Ba/F3 세포 활성 평가

본 발명에 따른 실시예 화합물의 키나아제 저해효과를 평가하기 위하여 BaF3 (JAK 1, JAK 2, JAK 3, TYK2) 세포주에서 CCK 분석을 수행하였다.

보다 상세하게, BaF3 (JAK 1, JAK 2, JAK 3, TYK2)(abm)는 96- 웰 플레이트에 1 Х 10⁴/90 μl/웰이 되도록 심은 뒤, 3배수로 연속 희석된 9가지 농도(0.015 - 100 μM)의 화합물 및 DMSO 대조군이 포함된 배양액을 10 μl/웰씩 첨가하여 최종농도가 0 - 10 μM이 되도록 한 뒤 37℃ CO₂ 배양기에서 72시간 동안 배양하였다. 72시간 후, 화합물을 처리한 플레이트를 꺼내어, Cell Counting Kit-8 (Dojindo Molecular Technologies, Inc) 용액을 10μl/웰 처리 후, 잘 섞어 준다. 37℃ CO₂ 인큐베이터에서 2시간 동안 배양하여, 마이크로플레이트 판독기로 450nm에서의 흡광도를 측정한다. 데이터는 비히클 기준 처리된 세포에 비례하여 백분율로 나타내었고 GraphPad Prism 5.0(GraphPad software Inc., San Diego)을 이용하여 GI₅₀ 값을 산출하였고, 그 결과를 표 5에 나타내었다.

표 5에 있어서, A 는 0.5 μM 이하이고, B 는 0.5 μM 초과 내지 5 μM 이하이고, 및 C 는 5 μM 초과 내지 100μM 이하를 나타낸다.

실시예	JAK 1 (IC₅₀, uM)	JAK 2 (IC₅₀, uM)	JAK 3 (IC₅₀, uM)	TYK2 (IC₅₀, uM)
8	C	C	A	C
9	C	C	A	-
10	C	C	A	C
14	-	-	A	-
15	-	-	A	-
16	-	-	A	-

표 5를 살펴보면, 본 발명 화합물은 Ba/F3 세포주에서도 우수한 저해 활성을 확인할 수 있으며, 특히 JAK 1, JAK 2, TYK2 대비 JAK 3에 보다 현저한 저해 활성이 확인되는 바, 본 발명 화합물은 JAK 3 선택적 저해 화합물임을 알 수 있다.

<실험예 4> HT-2 세포의 증식 저해효과 평가

인간 피브로넥틴(fibronectin) 5 ㎍/㎖를 96웰(well) 플레이트에 100 ㎕/well로 넣은 후 37℃에서 2시간동안 코팅하였다. 200 ㎕ 용량의 RPMI+10% FBS (Fetal Bovine Serum)배지에 200U (5 x 10⁵U/ml) 인터루킨-2 (IL-2)와 1.5만개의 HT-2 세포(마우스 IL-2 의존적 림프 T 세포주), 0.08-10 uM의 야누스 카이네이즈-3(Janus kinase 3; JAK 3) 표적 저분자 저해제를 섞어 피브로넥틴이 코팅된 웰에 분주하였다. 이를 Incucyte 배양기 (Incucyte S3)로 72시간 동안 세포증식을 실시간 관찰하여, GI₅₀ 값을 산출하였고, 그 결과를 표 6에 나타내었다.

표 6에 있어서, A 는 0.1 μM 이하이고, B 는 0.1 μM 초과 내지 1 μM 이하이고, 및 C 는 1 μM 초과 내지 100μM 이하를 나타낸다.

실시예	HT-2 (GI₅₀, uM)
8	B
10	B
14	B
15	B
16	B
18	B
19	C
26	C
27	C

<실험예 5> TF-1 세포의 증식 저해효과 평가

인간 피브로넥틴(fibronectin) 5 ㎍/㎖를 96웰(well) 플레이트에 100 ㎕/well로 넣은 후 37℃에서 2시간 동안 코팅하였다. 200 ㎕ 용량의 RPMI+10% FBS (Fetal Bovine Serum) 배지에 10ng/ml 재조합 인간 과립구 -대식세포 콜로니-자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (rh GM-CSF))와 1.5만개의 TF-1 세포(인간 GM-CSF 의존적 적혈구 세포주), 0.08-10 uM의 JAK 3 표적 저분자 저해제를 섞어 피브로넥틴이 코팅된 웰에 분주하였다. 이를 Incucyte 배양기 (Incucyte S3)로 72시간 동안 세포증식을 실시간 관찰하여, GI₅₀ 값을 산출하였고, 대조군(PF-06651600 및 tofacitinib, baricitinib)과 비교하여 상대적인 TF-1 세포의 증식 저해 정도(%)를 분석하였고, 그 결과를 표 7에 나타내었다.

표 7에 있어서, A 는 0.1 μM 이하이고, B 는 0.1 μM 초과 내지 1 μM 이하이고, 및 C 는 1 μM 초과 내지 100μM 이하를 나타낸다.

실시예	TF-1 (GI₅₀, uM)	TF-1 (% ingibition)
8	C	-
10	C	-
15	-	<10%
16	-	<10%
18	-	<5%
19	-	<5%

<실험예 6> STAT5 인산화 저해 분석

20만개의 HT-2 세포를 RPMI 배지에 3시간 동안 37℃에서 영양분 고갈하였다. 대조군에는 10mM DMSO를 처리하고 실험군에는 농도별로 JAK 3 표적 저분자 저해제를 1시간 동안 처리하였다. 이후 200U (5 x 10⁵U/ml) IL-2를 다시 1시간동안 처리 후 4℃에서 20분간 4% 고정액 (4% paraformaldehyde (PFA))으로 고정시켰다. 4℃에서 5분간 0.05% triton X-100가 포함된 PBS로 세포막을 투과시킨 후 0.1% BSA를 함유하는 PBS로 2회 세척하였다. 인산화된 STAT5의 검출을 위해 항 포스포-STAT5 항체-PE 및 항 총-STAT5 항체-PE를 30분간 부착시킨 후 유세포 분석기 (Novocyte)를 사용하여 분석하였고, 그 결과를 표 8에 나타냈다.

표 8에 있어서, A 는 0.1 μM 이하이고, B 는 0.1 μM 초과 내지 1 μM 이하이고, 및 C 는 1 μM 초과 내지 100μM 이하를 나타낸다.

실시예	pSTAT5 (IC₅₀, uM)
8	B
15	A
16	B
18	A
19	A

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
[화학식 1]

(상기 화학식 1에서,
X는 할로젠, 또는 -NR¹R² 이되,
여기서, R¹ 및 R²는 각각 독립적으로, H, 하나 이상의 할로겐으로 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알킬, 하나 이상의 할로겐으로 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알콕시, 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 C_6-10의 아릴, 또는 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)이고,
다시 여기서, 상기 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 아릴, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알킬, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알콕시, 히드록시, 니트로, 시아노, 할로젠, 치환 또는 비치환된 아미노, 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 C_6-10의 아릴, 및 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,
또 다시 여기서, 상기 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 아미노, 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 아릴, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 히드록시, 니트로, 시아노, 할로젠, 하나 이상의 메틸로 치환 또는 비치환된 아미노, 치환 또는 비치환된 C_3-6의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 페닐, 및 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,
다시 여기서, 상기 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 페닐, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 및 할로젠으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고; 및

Y는
이되,
여기서,
는
로 표시되는 고리와
로 표시되는 고리가 융합된, 융합 고리이고,
각각
는 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, 또는 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 치환 또는 비치환된 3 내지 10원의 헤테로사이클로알킬)이고,

는 치환 또는 비치환된 페닐, 또는 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 치환 또는 비치환된 5 내지 6원의 헤테로아릴)이고,
다시 여기서, 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 아릴, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 히드록시, 니트로, 시아노, 하나 이상의 메틸로 치환 또는 비치환된 아미노, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 및 할로젠으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,
R³는 니트로,-NR⁴R⁵, 또는 -NR⁴-(C=O)-R⁵이고,
여기서, R⁴ 및 R⁵는 각각 독립적으로 H, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₅ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₅ 알콕시, 하나 이상의 불포화 결합을 가지는 직쇄 또는 분지쇄의 C_2-10의 알킬이고,
여기서, 상기 불포화 결합은 이중결합 또는 삼중결합이다).
제1항에 있어서,
상기 X는 Cl, 또는 -NHR¹ 이고,
여기서, R¹은 H, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 페닐, 또는 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)이고,
다시 여기서, 상기 치환된 페닐, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알킬, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₁₀ 알콕시, 히드록시, 할로젠, 치환 또는 비치환된 아미노, 치환 또는 비치환된 C_3-10의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 10원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 페닐, 및 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,
또 다시 여기서, 상기 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 아미노, 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 페닐, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 히드록시, 할로젠, 하나 이상의 메틸로 치환 또는 비치환된 아미노, 치환 또는 비치환된 C_3-6의 사이클로알킬, (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로사이클로알킬), 치환 또는 비치환된 페닐, 및 (N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원의 치환 또는 비치환된 헤테로아릴)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고,
다시 여기서, 상기 치환된 사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 페닐, 및 치환된 헤테로아릴은 각각, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₃ 알콕시, 및 할로젠으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되는 것을 특징으로 하는,
화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
Y는
이되,
여기서, n은 0 내지 3의 정수이고,
Q¹, Q², Q³, 및 Q⁴는 각각 독립적으로, CH, N 또는 CR³이고,
R³는 니트로,-NR⁴R⁵, 또는 -NR⁴-(C=O)-R⁵이고,
여기서, R⁴ 및 R⁵는 각각 독립적으로 H, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₅ 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C₁-C₅ 알콕시, 하나 이상의 불포화 결합을 가지는 직쇄 또는 분지쇄의 C_2-10의 알킬이고,
여기서, 상기 불포화 결합은 이중결합 또는 삼중결합인 것을 특징으로 하는,
화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
상기 X는, Cl,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
, 또는
이고; 및

상기 Y는,
, 또는
인 것을 특징으로 하는,
화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
(1) N-(5-(5-((1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드;
(2) N-(1-(5-((1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(3) N-(5-(5-((5-클로로-1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드;
(4) N-(5-(5-((2-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드;
(5) N-(1-(5-((5-클로로-1-(2-메톡시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(6) N-(5-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-1-일)아크릴아미드;
(7) N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(8) (S)-N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(9) (R)-N-(1-(5-((1-(2-히드록시에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(10) (S)-N-(1-(5-((1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(11) (R)-N-(1-(5-((1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(12) (S)-N-(1-(5-((1-(3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(13) (S)-N-(1-(5-((1-(3-메틸옥세탄-3-일)메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(14) (S)-N-(1-(5-(4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(15) (S)-N-(1-(5-((1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(16) (S)-N-(1-(5-((1-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(17) N-((S)-1-(5-((1-(피롤리딘-3-일)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4.5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(18) N-((S)-1-(5-((1-(2-히드록시프로필)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(19) N-((S)-1-(5-(1-(3-(디메틸아미노)-2-히드록시프로필)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(20) N-((S)-1-(5-((1-(피페리딘-3-일메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(21) (S)-N-(1-(5-((1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(22) N-((S)-1-(5-((1-모폴린-2-일메틸)-1H-피라졸-4-일)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(23) (S)-N-(1-(5-((4-(트리플루오로메틸)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(24) (S)-N-(1-(5-((4-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(25) (S)-N-(1-(5-((2-메톡시-4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드;
(26) (S)-N-(1-(5-(메틸아미노)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드; 및
(27) (S)-N-(1-(5-클로로-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-인덴-4-일)아크릴아미드.
하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 5로 표시되는 화합물과 화학식 4로 표시되는 화합물을 반응시켜, 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조된 화학식 3으로 표시되는 화합물로부터 화학식 2로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);
상기 단계 2에서 제조된 화학식 2로 표시되는 화합물로부터 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법:
[반응식 1]

(상기 반응식 1에서,
X 및 Y는 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같고;
V는 Cl이고;
W가 NHAc 또는 NO₂이고; 및
W'는 NH₂이다).
제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는, AURKA, AURKC, BTK, CSF1R-autoinhibited, EPHB6, FLT3(D835V), JAK 1, JAK 2, JAK 3, TIE1, TTK, 또는 TYK2 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제7항에 있어서,
상기 약학적 조성물은, JAK 3 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제8항에 있어서,
상기 JAK 3 키나아제 관련 질환은, 복합 면역결핍(SCID), 류마티스 관절염, 골수섬유증, 건선, 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, 1형 당뇨병, 알레르기 질환, 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 백혈병 또는 림프종인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제1항의 화학식 1로 표시도는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는, 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제10항에 있어서,
상기 암은, 가성점액종, 간내 담도암, 간모세포종, 간암, 갑상선암, 결장암, 고환암, 골수이형성증후군, 교모세포종, 구강암, 구순암, 균상식육종, 급성골수성백혈병, 급성림프구성백혈병, 기저세포암, 난소상피암, 난소생식세포암, 남성유방암, 뇌암, 뇌하수체선종, 다발성골수종, 담낭암, 담도암, 대장암, 만성골수성백혈병, 만성림프구백혈병, 망막모세포종, 맥락막흑색종, 미만성거대B세포림프종, 바터팽대부암, 방광암, 복막암, 부갑상선암, 부신암, 비부비동암, 비소세포폐암, 비호지킨림프종, 설암, 성상세포종, 소세포폐암, 소아뇌암, 소아림프종, 소아백혈병, 소장암, 수막종, 식도암, 신경교종, 신경모세포종, 신우암, 신장암, 심장암, 십이지장암, 악성 연부조직 암, 악성골암, 악성림프종, 악성중피종, 악성흑색종, 안암, 외음부암, 요관암, 요도암, 원발부위불명암, 위림프종, 위암, 위유암종, 위장관간질암, 윌름스암, 유방암, 육종, 음경암, 인두암, 임신융모질환, 자궁경부암, 자궁내막암, 자궁육종, 전립선암, 전이성 골암, 전이성뇌암, 종격동암, 직장암, 직장유암종, 질암, 척수암, 청신경초종, 췌장암, 침샘암, 카포시 육종, 파제트병, 편도암, 편평상피세포암, 폐선암, 폐암, 폐편평상피세포암, 피부암, 항문암, 횡문근육종, 후두암, 흉막암, 및 흉선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.