KR20200105592A - 4-((1h-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-1(2h)-온 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

4-((1h-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-1(2h)-온 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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Abstract

4-((1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-1(2H)-온 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 상기 유도체는 다양한 단백질 키나아제에 대하여 높은 저해활성을 나타내고, 특히, RET (ret proto-oncogene) 효소 저해능이 우수하고, RET 융합유전자를 발현하는 갑상선수질암 세포 및 폐암세포의 증식 억제 효과가 우수한 바, 암, 예를 들어, 갑상선수질암 또는 폐암의 치료에 유용하게 사용될 수 있고, 특히 RET 융합유전자가 발현된 암의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

4-((1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-1(2H)-온 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 {4-((1H-pyrazol-3-yl)amino)phthalazin-1(2H)-one derivatives and pharmaceutical composition for use in preventing or treating cancer containing the same as an active ingredient}
4-((1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-1(2H)-온 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
암의 발생은 화학물질, 방사선, 바이러스를 포함하는 여러 가지 환경적인 요인과 종양 유전자, 종양 억제 유전자, 세포사멸(apoptosis)과 DNA 복구에 관련된 유전자의 변화 등에 관련되어 있는데, 최근 이러한 암의 분자적 메커니즘을 이해함에 따라 새로운 치료법인 표적 항암치료가 가능하게 되었다.
표적 치료제들은 일반적으로 암세포가 특징적으로 가지고 있는 분자를 표적으로 하여 그 효과를 나타낼 수 있도록 만들어지며, 분자적 표적이 되는 것은 암세포의 신호전달경로(signal transduction pathway), 혈관신생(angiogenesis), 세포간질(matrix), 세포주기조절인자(cell cycle regulator), 세포사멸(apoptosis) 등에 관련된 유전자들이다. 현재 치료에서 중요한 표적 치료제로 사용되고 있는 것으로는 티로신 키나아제(tyrosine kinase) 억제제를 비롯한 '신호전달경로 억제제'와 '신생혈관생성 억제제'들이 있다.
티로신 잔기상의 단백질의 인산화(phosphorylation)는 세포내 신호 전달(signal transduction)의 중요 요소이다. 이러한 반응을 촉매할 수 있는 효소를 티로신 키나아제(tyrosine kinase)라고 한다. 많은 수의 트랜스멤브레인 수용체들은 티로신 키나아제 활성을 갖는 도메인을 포함하며, 수용체 티로신 키나아제(RTK)로서 분류된다.
RTK는 세포 성장, 분화, 생존 및 세포 예정사(programmed cell death)와 같이 다양한 과정에서 세포외 신호들을 전달한다. 세포외 리간드와의 결합에 대한 반응으로, RTK는 일반적으로 이량화되어 인산화된 형태의 RTK를 인식하여, 상호반응하는 효과기(effector)를 통한 세포내 신호 전달 및 자동인산화를 유도한다. 이 RTK 패밀리의 많은 멤버가 존재하며, 이 중 하나는 RET 원암유전자(proto oncogene)로서, 이는 120kDa의 단백질 RET(형질감염동안 재배열되는 단백질)을 암호화한다. RET는 신경교 유도성 향신경 인자(GDNF) 패밀리의 성장 인자에 대한 수용체이다. RET에 대한 두개의 리간드가 동정되었다; GDNF 및 뉴트린(NTN). RET는 이의 리간드가 보조 수용체와 결합하고, 이 후 복합체가 RET와 상호작용할 때, 활성화된다(Eng, 1999 Journal Clinical Oncology: 17(1) 380-393).
활성화는 티로신 잔기에서 RET를 인산화시키며, RAS-RAF 및 PI3 키나아제 경로 및 가능한 다른 경로를 통해 세포 성장 및 분화에 대한 신호 전달을 유도한다.
RET를 활성화하는 점 돌연변이(point mutant)는 3개의 연관된 우성 유전된 암 증후군; 다발성 내분비 신생물 유형 2A와 2B(MEN2A 및 MEN2B), 및 가족성 갑상선 수질암(FMTC)을 유발하는 것으로 알려져 있다(Santoro et al.2004 Endocrinology: 145, 5448-5451).
거의 모든 MEN2A의 경우 및 일부 FTMC의 경우에서는, 세포외 및 막근접 시스테인 풍부 도메인(juxtamembrane cysteine-rich domain)에서 시스테인 치환이 일어나는 반면, MEN2B의 95%에서는 키나아제 도메인(M918T)상의 918번 코돈에서 단일 점 돌연변이가 일어난다. 918번 코돈은 촉매 코어(catalytic core)내의 기질 인식 포켓상에 위치하는 것으로 여겨진다. 이 자리에서의 돌연변이는 RET 촉매 도메인의 활성 루프의 구조를 바꿈으로서, RET를 구조적으로 활성화하는 것으로 사료된다. M918T 돌연변이는 산발성 수질암에서도 발견되는데, 이는 진행성 질환의 표현형(phenotype)과 관련 있다. 시험관내 연구에서는 돌연변이가 기질 특이성에 영향을 미쳐, RET가 c-src 및 c-abl과 같은 비-수용체 티로신 키나아제에 의해 선호되는 기질을 인식하고, 인산화함을 보여준다(Eng et al. 1996 JAMA276, 1575-1579; Ponder et al. 1999 Cancer Research59, 1736-1741; Schilling et al. 2001 International Journal of Cancer95, 62-66; Santoro et al. 1995 Science267, 381-383; Zhou et al. 1995 Nature273, 536-539).
RET 유전자상의 돌연변이가 MEN2 패밀리의 대부분에서 동정됨에 따라, 분자 진단 테스트가 가능해지고, 임상 진단 확인을 위해서도 유용할 수 있다. RET 돌연변이 테스트는 폴리머라제(polymerase) 연쇄 반응에 기초한 프로토콜을 이용하여 수행될 수 있는데, 여기서 표적 액손 서열은 직접 시퀀싱(direct sequencing) 또는 제한효소 엔도뉴클라아제 절단(restriction endonuclease digestion)을 위해 증폭된다(Zhong et al. 2006 Clinica Chimica Acta364, 205-208).
RTK 패밀리의 다른 멤버는 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2 (키나아제 삽입 도메인 포함 수용체, KDR(Flk1로도 언급됨)))이다. VEGFR2는 혈관 내피 성장 인자(VEGF)에 대한 수용체이다. VEGF는 정상 혈관형성(angiogenesis)과 질환 관련 혈관형성 모두(Jakeman, et al. 1993 Endocrinology133,848-859; Kolch, et al. 1995 Breast Cancer Research and Treatment36,139-155) 및 혈관 투과성(Connolly, et al. 1989 J. Biol. Chem264,20017-20024)의 중요한 자극제인 것으로 간주된다. 항체와 VEGF의 격리에 의한 VEGF 작용의 길항작용은 종양 성장을 억제할 수 있다(Kim, et al. 1993 Nature362,841-844). VEGF 유전자의 이형 분열은 혈관화 (vascularisation)에 있어서 치명적인 결함을 유발한다(Carmeliet, et al. 1996 Nature 380435-439; Ferrara, et al. 1996 Nature 380439-442).
VEGF의 VEGFR2에 대한 결합은, 수용체 이량화(dimerisation)을 유도하여, 특정 세포내 티로신 잔기의 VEGFR2 자동인산화를 초래한다. 자동인산화는 티로신 키나아제의 촉매 활성을 증가시키고, 포스포리파아제 C-γ와 같은 세포질 신호 전달을 위한 잠재적인 도킹 자리(docking site)를 제공한다. 이 단백질 상호작용은 VEGFR2, 예를 들어, 내피 세포의 증식, 생존 및 이주에 대한 세포 반응을 유도하는데 필수적인 세포내 시그널링을 매개한다(Ryan et al. 2005 British Journal Cancer: 92(Suppl.1) S6-S13).
병리적인 혈관형성에서 VEGF-매개 VEGFR2 시그널링의 중요한 역할에 대한 인식은 VEGFR2 활성화를 억제하기 위한 다양한 선택적인 접근법의 발전으로 이어졌다. 이들은 소분자 ATP-경쟁적인 티로신 키나아제 억제제를 포함하며, 이것은 ATP 결합 억제에 있어서, 자동인산화 및 연속적인 세포내 신호 전달이 일어나지 못하게 한다(Ryan, 2005).
VEGF 수용체 티로신 키나아제의 억제제인 퀴나졸린(quinazoline) 유도체는 국제 특허 공개 공보 WO98/13354호 및 WO01/32651호에 기술되어 있다. WO98/13354호 및 WO01/32651호에서는, 내피 성장 인자 수용체(EGFR) 티로신키나아제에 대해일부 활성을 갖으며, VEGF 수용체 티로신 키나아제에 대한 활성을 갖는 화합물을 개시하고 있다.
VEGFR2 티로신 키나아제 억제제인, 화합물 4-(4-브로모-2-플루오로아닐리노)-6-메톡시-7-(1-메틸피페리딘-4-일메톡시)퀴나졸린이 개시되어 있다(Wedge et al., 2002 Cancer Research62,4645-4655). 이 화합물은 코드 번호 ZD6474 및 일반 상품명 반데타니브(Vandetanib)인, Zactima TM (등록상표)로도 알려져있다. 이하, 상기 화합물을 반데타니브라 한다.
반데타니브는 VEGFR2 티로신 키나아제에 대한 ATP-결합의 강력하고 가역적인 억제제로서 개발되었다. 또한 반데타니브는 또한 EGFR 티로신 키나아제 활성을 억제한다. EGFR 시그널링 경로는, 비정상적인 EGFR 활성이 종양 세포 증식, 생존 및 침입 뿐만 아니라 VEGF가 과발현을 증가시키는 암 진행에 있어서 또한 중요한 인자이다. EGFR 시그널링의 억제는 종양 내피 세포에서의 선별적인 아폽토시스(apoptosis)를 유도하는 것으로 밝혀지고 있다.
2002년, 반데타니브는 리간드 의존성 RET 티로신 키나아제 활성의 강력한 억제제로서, RET의 시그널링과 변형 능력을 억제할 수 있다는 보고가 있었다. 또한 반데타니브는 시험관내에서 RET-의존성 갑상선 종양 세포 성장에 대한 강력한 성장 억제 효과를 가짐이 보고되었다(Carlomagno et al. 2002 Cancer Research: 62, 7284-7290).
반데타니브는 RET의 돌연변이된 활성형 대부분 및 야생형 수용체도 억제하였다. 따라서, VEGFR2 및 EGFR 티로신 키나아제의 억제 뿐만 아니라, 반데타니브에 의한 RET 티로신 키나아제의 억제는 RET-의존성 종양 세포 성장을 유도하는 RET 유전자의 돌연변이를 수반하는, 종양 치료에 있어서 추가적인 항종양 효과를 부여할 수도 있다 (Ryan, 2005).
본 발명의 일 목적은 4-((1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-1(2H)-온 유도체를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 4-((1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-1(2H)-온 유도체를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 4-((1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-1(2H)-온 유도체를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명의 일 측면에 따라, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 제공된다:
[화학식 1]
Figure pat00001
(상기 화학식 1에서,
R1은 수소, CN, 비치환된 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알킬 또는 C3-7의 사이클로알킬이고;
R2는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알킬이고;
R3은 수소, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알콕시 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 10 원자의 헤테로아릴이고, 상기 헤테로아릴은 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알킬 및 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고;
A1은 N 또는 CR4이고, 상기 R4는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알콕시이고; 및
A2는 N 또는 CH이다).
본 발명의 다른 측면에 따라, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다.
본 발명의 다른 측면에 따라, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 개선용 건강기능식품이 제공된다.
본 발명의 다른 측면에 따라, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물을 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료 방법이 제공된다.
본 발명의 다른 측면에 따라, 암의 예방 또는 치료에 있어서의, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물의 용도가 제공된다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 다양한 단백질 키나아제에 대하여 높은 저해활성을 나타내고, 특히, RET (ret proto-oncogene) 효소 저해능이 우수하고, RET 융합유전자를 발현하는 갑상선수질암 세포 및 폐암세포의 증식 억제 효과가 우수한 바, 암, 예를 들어, 갑상선수질암 또는 폐암의 치료에 유용하게 사용될 수 있고, 특히 RET 융합유전자가 발현된 암의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
한편, 본 발명의 실시 형태는 여러가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 형태로 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 실시 형태는 당해 기술분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 나아가, 명세서 전체에서 어떤 구성요소를 "포함"한다는 것은 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있다는 것을 의미한다.
본 발명의 일 측면은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure pat00002
(상기 화학식 1에서,
R1은 수소, CN, 비치환된 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알킬 또는 C3-7의 사이클로알킬이고;
R2는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알킬이고;
R3은 수소, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알콕시 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 10 원자의 헤테로아릴이고, 상기 헤테로아릴은 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알킬 및 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고;
A1은 N 또는 CR4이고, 상기 R4는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알콕시이고; 및
A2는 N 또는 CH이다).
상기 화학식 1에서,
R1은 수소, CN, 비치환된 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4알킬 또는 C3-6의 사이클로알킬이고;
R2는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4알킬이고;
R3은 수소, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4알콕시 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 또는 6 원자의 헤테로아릴이고, 상기 헤테로아릴은 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4알킬 및 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고;
A1은 N 또는 CR4이고, 상기 R4는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4알콕시이고; 및
A2는 N 또는 CH일 수 있다.
상기 화학식 1에서,
R1은 수소, CN, 비치환된 또는 F로 하나 이상 치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C1-3알킬 또는 C3-5의 사이클로알킬이고;
R2는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-3알킬이고;
R3은 수소, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-3알콕시, 피라졸릴, 피리디닐, 싸이아졸릴 또는 이속사졸릴이고, 상기 피라졸릴, 피리디닐, 싸이아졸릴 및 이속사졸릴은 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1-3알킬 및 직쇄 또는 분지쇄의 C1-3알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고;
A1은 N 또는 CR4이고, 상기 R4는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1-3알콕시이고; 및
A2는 N 또는 CH일 수 있다.
상기 화학식 1에서,
R1은 수소, CN, 메틸, CF3, 사이클로프로필 또는 사이클로부틸이고;
R2는 수소 또는 메틸이고;
R3은 수소, 메톡시,
Figure pat00003
,
Figure pat00004
,
Figure pat00005
,
Figure pat00006
,
Figure pat00007
또는
Figure pat00008
이고;
A1은 N 또는 CR4이고, 상기 R4는 수소 또는 메톡시이고;
A2는 N 또는 CH일 수 있다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 예로는 하기 화합물 군을 들 수 있다:
<1> (1r,4S)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
<2> (1r,4S)-N-((S)-1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
<3> (1r,4r)-N-벤질-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<4> (1r,4r)-N-(4-메톡시벤질)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<5> (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
<6> (1r,4S)-N-((S)-1-(6-(4- 플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
<7> (1s,4R)-4-(4-((1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
<8> (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(1-옥소-4-((5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
<9> (1s,4R)-4-(4-((5-사이클로프로필-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
<10> (1s,4R)-4-(4-((5-사이클로부틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
<11> (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(3,5-다이메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<12> (1s,4R)-4-(4-((5-사이아노-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<13> (1s,4R)-4-(4-((5-사이아노-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-1-메톡시-N-((S)-1-(6'-메톡시-[2,3'-바이피리딘]-5-일)에틸)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<14> (1s,4R)-1-메톡시-N-((S)-1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<15> 1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(4-(싸이아졸-5-일)벤질)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<16> N-(4-(이속사졸-4-일)벤질)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<17> N-벤질-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<18> 1-메톡시-N-(4-메톡시벤질)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
<19> (S)-N-(1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 2,2,2-트리플루오로아세테이트염;
<20> (S)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 염산염;
<21> (S)-4-(4-((1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드;
<22> (S)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(1-옥소-4-((5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드;
<23> (S)-4-(4-((5-사이클로프로필-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드;
<24> (S)-4-(4-((5-사이클로부틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드.
본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 트리플루오로아세트산, 아세테이트, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜서 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 광학 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.
용어 "수화물(hydrate)"은 비공유적 분자간력(non-covalent intermolecμLar force)에 의해 결합된 화학양론적(stoichiometric) 또는 비화학양론적(non-stoichiometric) 량의 물을 포함하고 있는 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미한다. 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 수화물은 비공유적 분자간 힘으로 결합되는 화학양론적 또는 비화학양론적 양의 물을 포함할 수 있다. 상기 수화물은 1당량 이상, 바람직하게는, 1 당량 내지 5당량의 물을 함유할 수 있다. 이러한 수화물은 물 또는 물을 함유하는 용매로부터 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염을 결정화시켜 제조될 수 있다.
용어 "용매화물(solvate)"은 비공유적 분자간력에 의해 결합된 화학양론적 또는 비화학양론적 양의 용매를 포함하고 있는 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미한다. 그에 관한 바람직한 용매들로는 휘발성, 비독성, 및/또는 인간에게 투여되기에 적합한 용매들이 있다.
용어 "이성질체(isomer)"는 동일한 화학식 또는 분자식을 가지지만 구조적 또는 입체적으로 다른 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미한다. 이러한 이성질체에는 호변이성질체(tautomer) 등의 구조 이성질체와, 비대칭 탄소 중심을 가지는 R 또는 S 이성체, 기하이성질체(트랜스, 시스) 등의 입체 이성질체, 광학 이성질체(enantiomer)가 모두 포함된다. 이들 모든 이성체 및 그것의 혼합물들 역시 본 발명의 범위에 포함된다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 실시예에 나타난 제조방법에 따라 제조할 수 있으나, 이는 일례일 뿐, 이에 한정되는 것은 아니며, 각 제조단계는 당업자에게 널리 알려진 방법을 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 화합물은 AMPK-alpha1, AMPK-alpha2, ARK5, AURKA, AURKB, AURKC, AXL, BLK, BMPR1B, BTK, BUB1, CSF1R, DAPK3, DCAMKL3, DDR1, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR3(G697C), FLT1, FLT3, FLT3(D835H), FLT3(D835V), FLT3(D835Y), FLT3(ITD), FLT3(ITD,D835V), FLT3(ITD,F691L), FLT3(K663Q), FLT3(N841I), FLT3(R834Q), FLT3-autoinhibited, FLT4, GCN2(Kin.Dom.2,S808G), HCK, HPK1, JAK1, JAK2, JAK3, KIT, KIT(A829P), KIT(D816H), KIT(D816V), KIT(L576P), KIT(V559D), KIT(V559D,T670I), KIT(V559D,V654A), LATS1, LCK, LYN, MLK1, MLK2, MLK3, PDGFRA, PDGFRB, PLK4, PRKCQ, PYK2, RET, RET(M918T), RET(V804L), RET(V804M), RIOK3, ROS1, RSK2, RSK3, RSK4, SLK, SNARK, SRC, STK16, TIE1, TNK1, TNK2, TRKA, TRKB, TRKC, TYK2, VEGFR2 및 YES로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질 키나아제에 대하여 저해활성을 나타낼 수 있다.
또한, 상기 화합물은 RET (ret proto-oncogene) 효소 저해 활성을 나타낼 수 있다.
상기 암은 가성점액종, 간내 담도암, 간모세포종, 간암, 갑상선암, 갑상성수질암, 결장암, 고환암, 골수이형성증후군, 교모세포종, 구강암, 구순암, 균상식육종, 급성골수성백혈병, 급성림프구성백혈병, 기저세포암, 난소상피암, 난소생식세포암, 남성유방암, 뇌암, 뇌하수체선종, 다발성골수종, 담낭암, 담도암, 대장암, 만성골수성백혈병, 만성림프구백혈병, 망막모세포종, 맥락막흑색종, 바터팽대부암, 방광암, 복막암, 부갑상선암, 부신암, 비부비동암, 비소세포폐암, 설암, 성상세포종, 소세포폐암, 소아뇌암, 소아림프종, 소아백혈병, 소장암, 수막종, 식도암, 신경교종, 신우암, 신장암, 심장암, 십이지장암, 악성 연부조직 암, 악성골암, 악성림프종, 악성중피종, 악성흑색종, 안암, 외음부암, 요관암, 요도암, 원발부위불명암, 위림프종, 위암, 위유암종, 위장관간질암, 윌름스암, 유방암, 육종, 음경암, 인두암, 임신융모질환, 자궁경부암, 자궁내막암, 자궁육종, 전립선암, 전이성 골암, 전이성뇌암, 종격동암, 직장암, 직장유암종, 질암, 척수암, 청신경초종, 췌장암, 침샘암, 카포시 육종, 파제트병, 편도암, 편평상피세포암, 폐선암, 폐암, 폐편평상피세포암, 피부암, 항문암, 횡문근육종, 후두암, 흉막암, 혈액암, 및 흉선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.
또한, 상기 암은 RET 융합유전자를 발현하는 암일 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 다양한 단백질 키나아제에 대하여 높은 저해활성을 나타내고(실험예 1 참조), 특히, RET (ret proto-oncogene) 효소 저해능이 우수하고(실험예 2 참조), RET 융합유전자를 발현하는 갑상선수질암 세포 및 폐암세포의 증식 억제 효과가 우수한 바(실험예 3 참조), 암, 예를 들어, 갑상선수질암 또는 폐암의 치료에 유용하게 사용될 수 있고, 특히 RET 융합유전자가 발현된 암의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 상기 약학적 조성물에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 보다 바람직하게는 비경구 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등 이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등 이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.
이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘 등과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염 등과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나, 다른 사용중인 항암제와 병용투여하여 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물을 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은, 암의 예방 또는 치료에 있어서의, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물의 용도를 제공한다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<정제용 중압액체크로마토그래피 (Medium pressure liquid chromatography; MPLC)>
중압액체크로마토그래피는 TELEEDYNE ISCO사의 CombiFlash Rf +UV을 사용하였다.
<분석용 HPLC 조건 ( ACQUITY UPLC H-Class Core System)>
Waters사 제조 UPLC system (ACQUITY UPLC PDA Detector)에 Waters사 제조 mass QDA Detector가 장착된 장비를 사용하였다. 사용 컬럼은 Water사의 ACQUITY UPLC®BEH C18 (1.7　㎛, 2.1X50 mm)였으며 컬럼온도는 30℃에서 진행하였다
이동상 A는 0.1% 포름산이 포함된 물, 이동상 B는 0.1%의 포름산이 포함된 아세토니트릴을 사용하였다
Gradient condition(10-100% B로 3분, 이동속도=0.6ml/min)
<정제용 Prep- LCMS (Preparative-Liquid chromatography mass spectrometry)>
Waters사 제조 Autopurification HPLC system (2767 sample manger, 2545 binary gradient module, 2998 Photodiode Array Detector)에 Waters사 제조 mass QDA Detector가 장착된 장비를 사용하였다. 사용 컬럼은 Water사의 SunFire®Prep C18 OBDTM (5　㎛, 19X50 mm)였으며 컬럼온도는 실온에서 진행하였다.
이동상 A는 0.035% 트리플루오로아세트산이 포함된 물, 이동상 B는 0.035%의 트리플루오로아세트산이 포함된 메탄올을 사용하였다.
Gradient condition(15-100% B로 10분, 이동속도=25ml/min)
<정제용 Prep-150 LC System (Preparative-Liquid chromatography UV spectrometry)>
Waters사 제조 Prep 150 LC system (2545 Quaternary gradient module, 2998 Photodiode Array Detector, Fraction collector Ⅲ)에 Waters사 제조 장비를 사용하였다. 사용 컬럼은 Water사의 XTERRA®Prep RP18 OBDTM (10　㎛, 30X300 mm)였으며 컬럼온도는 실온에서 진행하였다
Gradient condition(3-100% B로 120분, 이동속도=40ml/min)
< 카이랄 화합물 분리용 SFC 조건>
Waters사 제조 80Q Preparative SFC system을 사용하였다. 사용 컬럼은 DAICEL사의 CHIRALPAK® AS (10㎛, 250X30 mm I.D.)였으며 컬럼온도는 실온에서 진행하였다.
이동상으로 CO2, 보조용매로 0.1% 암모니아수가 첨가된 메탄올을 사용하여 130min간 흘려주었다.
사용된 시판 시약은 추가 정제 없이 사용하였다. 본 발명에서 실온이란 20~25℃ 정도의 온도를 말한다. 감압하 농축 또는 용매 증류 제거는, 회전식 증발기(rotary evaporator)를 사용하였다.
< 제조예 1> 벤질 ( 1s,4s )-4- 하이드록시사이클로헥세인 -1- 카복실레이트의 제조
Figure pat00009
단계 1: 벤질 (1s,4s)-4-하이드록시사이클로헥세인-1-카복실레이트의 제조
(1s,4s)-4-하이드록시사이클로헥세인-1-카복실산 (3 g, 20.81 mmol)과 벤질브로마이드 (2.35 ml, 19.77 mmol), K2CO3 (3.45 g, 24.97 mmol)를 DMA (41.6 ml)에 녹인 후 80oC에서 밤새 반응하고, 온도를 실온으로 낮추어 반응을 종료하였다. 반응 혼합물을 소금물 및 에틸아세테이트로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압 농축하여 목적 화합물 벤질 (1s,4s)-4-하이드록시사이클로헥세인-1-카복실레이트 (4.51 g, 93%)를 얻어 정제없이 다음 반응에 사용하였다.
MS (m/z) : 235.2 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.50
< 제조예 2> 메틸 4- 브로모 -1- 메톡시 - 사이클로헥세인카복실레이트의 제조
Figure pat00010
단계 1: 메틸 8-메톡시-1,4-다이옥사피로[4.5]데케인-8-카복시레이트의 제조
1,4-다이옥사피로[4.5]데케인-8-원 (30 g, 192 mmol)를 브로모폼 (388 g, 1.54 mol)에 녹인 후 0oC로 냉각 한 뒤 수산화칼륨 (86 g, 1.54 mol)을 메탄올 (500 ml)에 녹여 반응 혼합물에 4시간 동안 천천히 적가한다. 25oC에서 12시간 교반 한 뒤 반응 혼합물에 물 (500 ml)을 첨가하고 유기용매를 감압 농축 후 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축 후 중압액체크로마토그래피(에틸아세테이트/n-헥산)로 정제하여 목적 화합물 메틸 8-메톡시-1,4-다이옥사피로[4.5]데케인-8-카복시레이트 (28 g, 47%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.97 (t, J = 2.8 Hz, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.27 (s, 3H), 2.05 - 2.00 (m, 4H), 1.88 - 1.80 (m, 2H), 1.67 - 1.63 (m, 2H)
단계 2: 메틸 1-메톡시-4-옥소사이클로헥세인-1-카복시레이트의 제조
상기 제조예 2의 단계 1에서 얻어진 화합물 메틸 8-메톡시-1,4-다이옥사피로[4.5]데케인-8-카복시레이트 (28 g, 121 mmol)를 1,4-다이옥세인 (300 ml)에 녹인 뒤 6N HCl (260 ml, 13 eq)을 첨가하여 상온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 차가운 물을 첨가하고 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축하여 목적 화합물 메틸 1-메톡시-4-옥소사이클로헥세인-1-카복시레이트 (18.6 g, 82%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.73 (s, 3H), 3.30 (s, 3H), 2.57 - 2.46 (m, 2H), 2.30 - 2.21 (m, 4H), 2.13 - 2.05 (m, 2H)
단계 3: 메틸 4-하이드록시-1-메톡시-사이클로헥세인카복실레이트의 제조
상기 제조예 2의 단계 2에서 얻어진 화합물 메틸 1-메톡시-4-옥소사이클로헥세인-1-카복실레이트 (21 g, 112.78 mmol)를 메탄올 (120 ml)에 녹인 후, 0oC에서 NaBH4 (6.40 g, 169.17 mmol)를 20분 동안 천천히 적가하고 30분 동안 교반 한 뒤 암모니아수를 넣어 반응을 종결시켰다. 반응 혼합물을 감압 농축 후, 다이클로로메탄 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압 농축하여 목적 화합물 메틸 4-하이드록시-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복실레이트 (18 g, 85%)를 얻어 정제없이 다음 반응에 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.76 (s, 3H), 3.75 (m, 1H), 3.3 (s, 3H), 2.03-2.07 (m, 2H), 1.74-1.75 (m, 2H), 1.62-1.63 (m, 2H), 1.59-1.60 (m, 2H)
단계 4: 메틸 4-브로모-1-메톡시-사이클로헥세인카복실레이트의 제조
상기 제조예 2의 단계 3에서 얻어진 화합물 메틸 4-하이드록시-1-메톡시-사이클로헥세인카복실레이트 (15 g, 79.69 mmol)와 트리페닐포스핀 (25.08 g, 95.63 mmol)을 다이클로로메탄 (200 mL)에 넣고, 0oC에서 CBr4 (34.36 g, 103.60 mmol)를 천천히 첨가하여, 12시간 동안 반응하였다. 반응 혼합물을 감압 농축 후, 중압액체크로마토그래피(EtOAc/PE)로 정제하여 목적 화합물 메틸 4-브로모-1-메톡시-사이클로헥세인카복실레이트 (16 g, 80%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.63 - 4.51 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.26 - 3.15 (m, 3H), 2.28 - 2.19 (m, 2H), 2.17 - 2.09 (m, 2H), 1.97 - 1.90 (m, 2H), 1.85 (m, 2H)
< 제조예 3> tert -부틸 3-아미노-5- 메틸 -1H- 피라졸 -1- 카복실레이트의 제조
Figure pat00011
5-메틸-1H-피라졸-3-아민 (8.19 ml, 103 mmol)을 THF (515 ml)에 녹인 후 0oC 에서 NaH (2.72 g, 113 mmol)를 천천히 첨가하고 1시간 동안 반응하였다. (Boc)2O (26.3 ml, 113 mmol)를 첨가하고 5시간 동안 반응하였다. 반응 혼합물을 감압 농축 후, 에틸아세테이트 및 중탄산나트륨 수용액으로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축하고 중압액체크로마토그래피(에틸아세테이트/다이클로로메탄)로 정제하여 목적 화합물 tert-부틸 3-아미노-5-메틸-1H-피라졸-1-카복실레이트 (6.18 g, 30%)를 수득하였다.
MS (m/z) : 142.1 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.76
상기 제조예 3과 유사한 방법으로 제조예 4 내지 7을 제조하였으며, 제조예 3 내지 7의 화합물명, 화학구조식 및 UPLC 분석 결과를 하기 표 1에 정리하여 나타내었다.
제조예 화학구조 화합물명 MASS UPLC
r. t. (min)
3
Figure pat00012
 tert-부틸 3-아미노-5-메틸-1H-피라졸-1-카복실레이트 142.1 [M+1]+ 1.76
4
Figure pat00013
 tert-부틸 3-아미노-1H-피라졸-1-카복실레이트 128.1 [M+1]+ 1.67
5
Figure pat00014
 tert-부틸 3-아미노-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-카복실레이트 152.1 [M+1]+ 1.55
6
Figure pat00015
 tert-부틸 3-아미노-5-사이클로프로필-1H-피라졸-1-카복실레이트 124.1 [M+1]+ 1.27
7
Figure pat00016
 tert-부틸 3-아미노-5-사이클로부틸-1H-피라졸-1-카복실레이트 138.1 [M+1]+ 1.41
< 제조예 8> 3-아미노-1H- 피라졸 -5- 카보나이트릴의 제조
Figure pat00017
단계 1: 3-나이트로-1H-피라졸-5-카복사마이드의 제조
3-나이트로-1H-피라졸-5-카복시산 (5 g, 31.8 mmol) 을 DMF에 녹인 후 CDI (10.3 g, 63.7 mmol)을 첨가하여 상온에서 30분간 교반하였다. 7M NH3 in MeOH (13.6 ml)을 첨가하고 상온에서 12시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하여 농축 후 잔사를 Ether와 물로 씻어 고체의 목적 화합물 3-나이트로-1H-피라졸-5-카복사마이드 (4.3 g, 87%)를 수득 하였다.
MS (m/z) : 157.05 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 0.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.42 (s, 1H), 8.03 (d, J = 148.3 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 45.7 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H).
단계 2: 3-나이트로-1H-피라졸-5-카보나이트릴의 제조
상기 제조예 8의 단계 1에서 얻어진 3-나이트로-1H-피라졸-5-카복사마이드 (1 g, 6.4 mmol)을 피리딘 (12 ml)에 녹인 후 POCl3 (1.2 ml)를 첨가하고 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물에 넣어 반응을 종결시킨 뒤 다이클로로메탄으로 추출하여 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압 농축하여 고체의 3-나이트로-1H-피라졸-5-카보나이트릴 (0.7 g, 79%)를 수득하였다.
UPLC r. t. (min) : 0.87
단계 3: 3-아미노-1H-피라졸-5-카보나이트릴의 제조
상기 제조예 8의 단계 2에서 얻어진 3-나이트로-1H-피라졸-5-카보나이트릴 (0.7 g, 5 mmol)을 아세트산 (14 ml), 물 (3 ml)에 녹인 후 Zinc powder (1.6 g, 25 mmol)을 첨가하고 상온에서 6시간 교반하였다. 반응 혼합물을 여과한 뒤 여과액에 물과 에틸아세테이트를 첨가하고 암모니아수로 중화시켜 유기층을 추출하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압농축하여 액체의 3-아미노-1H-피라졸-5-카보나이트릴 (80 mg, 14%)를 수득하였다.
MS (m/z) : 109.03 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 0.33
< 제조예 9> (S)-1-(6-(4- 플루오로 -1H- 피라졸 -1-일)피리딘-3-일)에탄-1- 아민 다이염산염의 제조
Figure pat00018
단계 1: 1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-원의 제조
1-(6-클로로피리딘-3-일)에탄-1-원 (34 g, 218 mmol), 탄산칼륨 (90 g, 655 mmol)을 DMF (300 ml)에 녹인 후 4-플루오로-1H-피라졸 (28 g, 228 mmol)을 첨가하여 100oC 에서 16시간 동안 반응하고, 온도를 실온으로 낮추어 반응을 종료하였다. 반응 혼합물을 물 (1 L)에 넣고 여과하여 목적 화합물 1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-원 (37.4 g , 83%)을 수득하였다.
MS (m/z) : 206.1 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.47
단계 2: (R,E)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸리딘)-2-메틸프로페인-2-설핀아마이드의 제조
상기 제조예 9의 단계 1에서 얻어진 화합물 1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-원 (32 g, 155 mmol)과 (R)-(+)-2-메틸-2-프로페인설핀아마이드 (64 g, 530 mmol)를 톨루엔 (640 ml)에 녹인 후 Ti(OEt)4 (213 g, 935 mmol)를 첨가하고 110oC 에서 16시간 동안 반응하고, 온도를 실온으로 낮추어 반응을 종료하였다. 반응혼합물에 물 (80 ml)을 넣고 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축하고 중압액체크로마토그래피(에틸아세테이트/n-헥산)로 정제하여 목적 화합물 (R,E)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸리딘)-2-메틸프로페인-2-설핀아마이드 (31 g, 53 %)를 수득하였다.
MS (m/z) : 309.1 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.55
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.88 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.45-8.43 (dd, J = 4.6, 0.6 Hz, 1H), 8.30-8.28 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 8.03-7.99 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.65-7.64 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 2.81 (s, 3H), 1.35 (s, 9H)
단계 3: (R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-2-메틸프로페인-2-설핀아마이드의 제조
상기 제조예 9의 단계 2에서 얻어진 화합물 (R,E)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸리딘)-2-메틸프로페인-2-설핀아마이드 (31 g, 100 mmol)를 테트라하이드로퓨란 (1 L)에 녹인 후 -78oC로 냉각하고 L-selectride (1 M, 301.58 mL)를 30분 동안 천천히 적가 하였다. -78oC에서 1시간 교반 한 뒤 메탄올과 물을 넣어 반응을 종결시켰다. 그리고 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축하고 중압액체크로마토그래피(에틸아세테이트/n-헥산)로 정제하여 목적 화합물 (R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-2-메틸프로페인-2-설핀아마이드 (24.4 g, 75%)를 수득하였다.
MS (m/z) : 311.2 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.46
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.69-8.68 (dd, J = 4.4, 0.4 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.99-7.96 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.93-7.92 (dd, J = 4.0, 0.4 Hz, 1H), 7.90 - 7.88 (m, 1H), 5.56-5.55 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.57-4.51 (m, 1H), 1.53-1.47 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.11 (s, 9H)
단계 4: (S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-아민 다이염산염의 제조
상기 제조예 9의 단계 3에서 얻어진 화합물 (R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-2-메틸프로페인-2-설핀아마이드 (22.8 g, 73 mmol)를 1,4-다이옥세인 (200 ml), 메탄올 (20 ml)에 녹인 후 4M HCl in 1,4-dioxane (180 ml)을 첨가하여 상온에서 12시간 교반 하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하고 에틸에터 (100 ml)에 적가 후 여과하여 목적 화합물 (S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-아민 다이염산염 (17 g, 67.8 mmol)을 수득하였다.
MS (m/z) : 208.2 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 0.76
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 - 8.69 (m, 4H), 8.61-8.60 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.19-8.17 (m, 1H), 7.97-7.96 (m, 1H), 7.95 (s, 1H), 4.55 (m, 1H), 1.58 (d, J = 6.8 Hz, 3H)
상기 제조예 9과 유사한 방법으로 제조예 10를 제조하였으며, 제조예 9 내지 10의 화합물명, 화학구조식 및 UPLC 분석 결과를 하기 표 2에 정리하여 나타내었다.
제조예 화학구조 화합물명 MASS UPLC
r. t. (min)
9
Figure pat00019
 (S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-아민 다이염산염 208.2 [M+1]+ 0.76
10
Figure pat00020
 (S)-1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-아민 다이염산염 204.2 [M+1]+ 0.89
< 실시예 1> N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염의 제조
Figure pat00021
단계 1: 벤질 (1r,4r)-4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실레이트의 제조
상기 제조예 1의 단계 1에서 얻어진 화합물 벤질 (1s,4s)-4-하이드록시사이클로헥세인-1-카복실레이트 (2.5 g, 10.67 mmol)와 4-클로로프탈라진-1(2H)-온 (2.89 g, 16.01 mmol), 트리페닐포스핀 (5.60 g, 21.34 mmol)을 톨루엔 (35.6 ml)에 녹인 후, DEAD (3.38 ml, 21.34 mmol)를 천천히 첨가하고 12시간 동안 반응하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축하고 중압액체크로마토그래피(에틸아세테이트/n-헥산)로 정제하여 목적 화합물 벤질 (1r,4r)-4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실레이트 (3 g, 71%)를 수득하였다.
MS (m/z) : 397.2 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 2.10
단계 2: 벤질 (1r,4r)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실레이트의 제조
상기 실시예 1의 단계 1에서 얻어진 화합물 벤질 (1r,4r)-4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실레이트 (2.9 g, 7.31 mmol)와 상기 제조예 3의 단계 1에서 얻어진 화합물 tert-부틸 3-아미노-5-메틸-1H-피라졸-1-카복실레이트 (2.88 g, 14.61 mmol), KOAc (2.15 g, 21.92 mmol)를 1,4-다이옥세인 (1.9 ml)에 녹인 후, Pd2(dba)3 (1.0 g, 1.1 mmol)과 t-BuXphos (24.61 mg, 0.06 mmol)를 첨가하여 110oC에서 10시간 동안 반응하고, 온도를 실온으로 낮추어 반응을 종료하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 필터하고 감압 농축 후, 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축 후 중압액체크로마토그래피(에틸아세테이트/헥산)로 정제하여 목적 화합물 벤질 (1r,4r)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실레이트 (2.75 g, 82%)를 수득하였다.
MS (m/z) : 458.3 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 2.04
단계 3: (1r,4r)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실산의 제조
상기 실시예 1의 단계 2에서 얻어진 화합물 벤질 (1r,4r)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실레이트 (2.7 g, 5.90 mmol)를 메탄올 (59.0 ml)에 녹인 후, Pd/C (0.63g, 0.59 mmol), 및 H2가스 (0.012 g, 5.90 mmol)를 첨가하여 3시간 동안 반응하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 여과하여 다이클로로메탄으로 씻어주었다. 여과액을 감압 농축하여 목적 화합물 (1r,4r)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실산 (1.3 g, 60%)을 얻어 정제없이 다음 반응에 사용하였다.
MS (m/z) : 368.3 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.56
단계 4: N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염의 제조
상기 실시예 1의 단계 3에서 얻어진 화합물 (1r,4r)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실산 (100 mg, 0.27 mmol)과 상기 제조예 4의 단계 4에서 얻어진 화합물 (S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-아민 다이염산염 (83 mg, 0.41 mmol), DIPEA (190 μl, 1.09 mmol)를 DMA (907 μl)에 녹인 후, HATU (124 mg, 0.33 mmol)를 첨가하고 1시간 동안 반응하였다. 반응 혼합물을 감압 농축 후, 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축 후 초임계유체크로마토그래피로 정제하여 목적 화합물 N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염(102 mg, 64%)을 수득하였다. 그리고 수득한 화합물을 1M 염산 에틸에테르 수용액을 이용하여 염산염으로 만들었다.
MS (m/z) : 556.4 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.81
상기 실시예 1과 유사한 방법으로 실시예 2 내지 4를 제조하였으며, 실시예 1 내지 4의 화합물명, 화학구조식 및 UPLC 분석 결과를 하기 표 3에 정리하여 나타내었다.
실시예 화학구조 화합물명 MASS UPLC
r. t. (min)
1
Figure pat00022
 (1r,4S)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염 556.4 [M+1]+ 1.81
2
Figure pat00023
 (1r,4S)-N-((S)-1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염 552.5 [M+1]+ 1.44
3
Figure pat00024
 (1r,4r)-N-벤질-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 456.23
4
Figure pat00025
 (1r,4r)-N-(4-메톡시벤질)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 486.24
< 실시예 5> (S)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염의 제조
Figure pat00026
단계 1: 메틸 4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2-일)-1-메톡시-사이클로헥세인카복실레이트의 제조
상기 제조예 2의 단계 4에서 얻어진 화합물 메틸 4-브로모-1-메톡시-사이클로헥세인카복실레이트 (16.63 g, 66.3 mmol)와 4-클로로프탈라진-1(2H)-온 (9.1 g, 50.38 mmol)를 DMF (100 mL)에 녹인 후, K2CO3 (20.8 g, 151.16 mmol)를 첨가하여 85°C에서 48시간 동안 반응하고, 온도를 실온으로 낮추어 반응을 종료하였다. 반응 혼합물을 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축하고 중압액체크로마토그래피(에틸아세테이트/PE)로 정제하여 목적 화합물 메틸 4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2-일)-1-메톡시-사이클로헥세인카복실레이트 (7 g, 22%)를 수득하였다.
MS (m/z) : 351.2 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.72
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.36 - 8.30 (m, 1H), 8.08 - 7.95 (m, 3H), 4.95 - 4.85 (m, 1H), 3.71 - 3.68 (m, 3H), 3.21 - 3.17 (m, 3H), 2.15 - 2.07 (m, 2H), 2.02 - 1.90 (m, 2H), 1.86 - 1.76 (m, 2H), 1.73 - 1.64 (m, 2H)
단계 2: 메틸 1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실레이트
상기 실시예 5의 단계 1에서 얻어진 화합물 메틸 4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-1메톡시사이클로헥세인-1-카복실레이트 (1.4 g, 3.99 mmol)와 상기 제조예 3의 단계 1 화합물 tert-부틸 3-아미노-5-메틸-1H-피라졸-1-카복실레이트 (1.181 g, 5.99 mmol), KOAc (1.18 g, 11.97 mmol)를 톨루엔 (40 ml)에 녹인 후, Pd2(dba)3 (0.548 g, 0.60 mmol)와 t-BuXPhos (0.51 g, 1.20 mmol)를 첨가하여 100oC에서 12시간 동안 반응하고, 온도를 실온으로 낮추어 반응을 종료하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 필터하고 감압 농축 후, 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축 후 중압액체크로마토그래피(에틸아세테이트/헥산)로 정제하여 목적 화합물 메틸 1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실레이트 (1.2 g, 73%)를 수득하였다.
MS (m/z) : 412.3 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.31
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.93 (s, 1H), 9.20 (br s, 1H), 8.46 (br, 1H), 8.29 (dd, J = 1.2, 7.8 Hz, 1H), 7.95 - 7.80 (m, 2H), 6.48 (s, 1H), 5.10 - 4.78 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 2.37 - 2.08 (m, 7H), 1.87 - 1.73 (m, 2H), 1.58 (m, 2H)
단계 3: 1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실산의 제조
상기 실시예 5의 단계 2에서 얻어진 화합물 메틸 1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실레이트 (1 g, 2.43 mmol)를 테트라하이드로퓨란 (6 ml)와 메탄올 (2 ml)에 녹인 후 6M 수산화나트륨 수용액 (4.05 ml, 24.30 mmol)을 첨가하여 70oC에서 1시간 동안 반응하고, 온도를 실온으로 낮추어 반응을 종료하였다. 1M 염산 수용액으로 pH 4-5로 맞추고, 이때 생성된 고체를 여과하여 건조 후 목적 화합물 1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실산 (0.43 g, 45%)을 얻어 정제없이 다음 반응에 사용하였다.
MS (m/z) : 398.3 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.17
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.32 (s, 1H), 8.49 - 8.39 (m, 1H), 8.29 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.95 - 7.79 (m, 2H), 6.49 (s, 1H), 5.02 - 4.87 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.09 (br, 2H), 1.85 - 1.72 (m, 2H), 1.57 (m, 2H)
단계 4: (S)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염의 제조
상기 실시예 5의 단계 3에서 얻어진 화합물 1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복실산 (40 mg, 0.10 mmol)과 상기 제조예 9의 단계 4에서 얻어진 화합물 (S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-아민 다이염산염 (36.5 mg, 0.13 mmol), DIPEA (70.3 μl, 0.40 mmol)를 DMF (1.0 ml)에 녹인 후 HATU (45.9 mg, 0.12 mmol)를 첨가하여 1시간 동안 반응하였다. 반응 혼합물을 감압 농축 후, 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축 후 초임계유체크로마토그래피로 정제하여 목적 화합물 (1s,4S)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 (6 mg, 9.6%), (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 (39 mg, 62%)를 수득하였다. 그리고 수득한 화합물을 1M 염산 에틸에테르 수용액을 이용하여 염산염으로 만들었다.
MS (m/z) : 586.4 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.45
상기 실시예 5과 유사한 방법으로 실시예 6 내지 18를 제조하였으며, 실시예 5 내지 18의 화합물명, 화학구조식 및 UPLC 분석 결과를 하기 표 4에 정리하여 나타내었다.
실시예 화학구조 화합물명 MASS UPLC
r. t. (min)
5
Figure pat00027
 (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염 586.4 [M+1]+ 1.45
6
Figure pat00028
 (1r,4S)-N-((S)-1-(6-(4- 플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염 586.4 [M+1]+ 1.45
7
Figure pat00029
 (1s,4R)-4-(4-((1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염 572.4 [M+1]+ 1.45
8
Figure pat00030
 (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(1-옥소-4-((5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염 640.5 [M+1]+ 1.70
9
Figure pat00031
 (1s,4R)-4-(4-((5-사이클로프로필-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염 612.5 [M+1]+ 1.55
10
Figure pat00032
 (1s,4R)-4-(4-((5-사이클로부틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염 626.5 [M+1]+ 1.61
11
Figure pat00033
 (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(3,5-다이메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 595.30
12
Figure pat00034
 (1s,4R)-4-(4-((5-사이아노-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 596.24
13
Figure pat00035
 (1s,4R)-4-(4-((5-사이아노-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-1-메톡시-N-((S)-1-(6'-메톡시-[2,3'-바이피리딘]-5-일)에틸)사이클로헥세인-1-카복사마이드 619.27
14
Figure pat00036
 (1s,4R)-1-메톡시-N-((S)-1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 581.29
15
Figure pat00037
 1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(4-(싸이아졸-5-일)벤질)사이클로헥세인-1-카복사마이드 569.22
16
Figure pat00038
 N-(4-(이속사졸-4-일)벤질)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 553.24
17
Figure pat00039
 N-벤질-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 486.24
18
Figure pat00040
 1-메톡시-N-(4-메톡시벤질)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 516.25
< 실시예 19> (S)-N-(1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 2,2,2-트리플루오로아세테이트염의 제조
Figure pat00041
단계 1: tert-부틸 4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복실레이트의 제조
tert-부틸 4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트 (0.9 g, 4.47 mmol)와 4-클로로프탈라진-1(2H)-온 (1.2 g, 6.71 mmol), 트리페닐포스핀 (1.76 g, 6.71 mmol)을 톨루엔 (15 ml)에 녹인 후, DEAD (1.1 ml, 6.71 mmol)를 천천히 첨가하고 12시간 동안 반응하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축하고 중압액체크로마토그래피(에틸아세테이트/n-헥산)로 정제하여 목적 화합물 벤질 tert-부틸 4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복실레이트 (1.5 g, 92%)를 수득하였다.
MS (m/z) : 264.1 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.97
단계 2: 4-클로로-2-(피페리딘-4-일)프탈라진-1(2H)-온 염산염의 제조
상기 실시예 19의 단계 1에서 얻어진 화합물 벤질 tert-부틸 4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복실레이트 (1.5 g, 4.12 mmol)를 1,4-다이옥세인 (14 ml)에 녹인 후, 4M HCl in 1,4-dioxane (5.15 ml, 20.61 mmol)을 첨가하여 2시간 동안 반응하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 목적 화합물 4-클로로-2-(피페리딘-4-일)프탈라진-1(2H)-온 염산염 (1.1 g, 90%)을 얻어 정제없이 다음 반응에 사용하였다.
MS (m/z) : 264.1 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.21
단계 3: (S)-4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드의 제조
상기 제조예 9의 단계 4에서 얻어진 화합물 (S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에탄-1-아민 다이염산염 (183 mg, 0.67 mmol)과 피리딘 (216 μl, 2.67 mmol), CDI (130 mg, 0.80 mmol)를 DMF (1.3 ml)에 넣고 30분 동안 반응하였다. 상기 실시예 19의 단계 2에서 얻어진 화합물 4-클로로-2-(피페리딘-4-일)프탈라진-1(2H)-온 (200mg, 0.67 mmol)을 첨가하여 50oC로 2시간 동안 반응하였다. 반응 혼합물을 에틸아세테이트 및 소금물로 추출하여 유기층을 합하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후 감압하여 농축 후 중압액체크로마토그래피 (메탄올/다이클로로메탄)로 정제하여 목적 화합물 (S)-4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드 (230 mg, 70%)를 수득하였다.
MS (m/z) : 492.3 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.67
단계 4: (S)-N-(1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 2,2,2-트리플루오로아세테이트염의 제조
상기 실시예 19의 단계 3에서 얻어진 화합물 (S)-4-(4-클로로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드 (230 mg, 0.47 mmol)와 상기 제조예 3의 단계 1에서 얻어진 화합물 tert-부틸 3-아미노-5-메틸-1H-피라졸-1-카복실레이트 (184 mg, 0.94 mmol), KOAc (138 mg, 1.40 mmol)를 톨루엔 (2.3 ml)에 녹인 후, Pd2(dba)3 (64.2 mg, 0.07 mmol)와 t-BuXPhos (59.6 mg, 0.14 mmol)를 첨가하여 100oC에서 2시간 동안 반응하고, 온도를 실온으로 낮추어 반응을 종료하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 여과하고, 여과액을 감압하여 농축 후 Prep-LCMS로 정제하여 목적 화합물 (S)-N-(1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 2,2,2-트리플루오로아세테이트염 (91 mg, 30%)을 수득하였다.
MS (m/z) : 553.4 [M+1]+, UPLC r. t. (min) : 1.71
상기 실시예 19와 유사한 방법으로 실시예 20 내지 24을 제조하였으며, 실시예 19 내지 24의 화합물명, 화학구조식 및 UPLC 분석 결과를 하기 표 5에 정리하여 나타내었다.
실시예 화학구조 화합물명 MASS UPLC
r. t. (min)
19
Figure pat00042
 (S)-N-(1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 2,2,2-트리플루오로아세테이트염 553.4 [M+1]+ 1.71
20
Figure pat00043
 (S)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 염산염 557.4 [M+1]+ 1.72
21
Figure pat00044
 (S)-4-(4-((1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드 542.23
22
Figure pat00045
 (S)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(1-옥소-4-((5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 610.22
23
Figure pat00046
 (S)-4-(4-((5-사이클로프로필-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드 582.26
24
Figure pat00047
 (S)-4-(4-((5-사이클로부틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드 596.28
< 실험예 1> 본 발명에 따른 화합물의 다양한 키나아제 저해 활성 평가
본 발명에 따른 화합물의 보다 많은 효소에 대한 저해활성을 평가하기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다.
구체적으로, 본 발명의 실시예 화합물 중, 선별된 실시예 5에 대하여, DiscovreX 사에 의뢰하여 효소 (kinase) 선택성을 측정하기로 하고, scanMAXTM Kinase 분석용 패널을 사용하여 실험을 진행하였다.
이때, 효소에 처리되는 약물의 농도는 DMSO에 1 μM로 하였고, 하기 식 1과 같은 방법으로 조절 백분율 (% control)을 정하였고, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.
[식 1]
(실시예 화합물 - 양성 대조군)/(음성 대조군- 양성 대조군) x 100
여기서, 상기 양성 대조군은 0%의 조절 백분율을 나타내는 화합물을 말하며, 음성 대조군은 DMSO로 100%의 조절 백분율을 나타낸다. 또한, 본 발명의 효소 선택성은 각각의 효소에 대하여 조절 백분율이 < 35% (즉 35% 미만)이면 해당 효소에 대하여 활성을 갖는 것으로 판단하였다.
실시예 5
AAK1 84
ABL1(E255K)-phosphorylated 62
ABL1(F317I)-nonphosphorylated 100
ABL1(F317I)-phosphorylated 69
ABL1(F317L)-nonphosphorylated 100
ABL1(F317L)-phosphorylated 98
ABL1(H396P)-nonphosphorylated 42
ABL1(H396P)-phosphorylated 87
ABL1(M351T)-phosphorylated 98
ABL1(Q252H)-nonphosphorylated 58
ABL1(Q252H)-phosphorylated 74
ABL1(T315I)-nonphosphorylated 70
ABL1(T315I)-phosphorylated 42
ABL1(Y253F)-phosphorylated 65
ABL1-nonphosphorylated 85
ABL1-phosphorylated 67
ABL2 100
ACVR1 100
ACVR1B 98
ACVR2A 100
ACVR2B 100
ACVRL1 100
ADCK3 100
ADCK4 98
AKT1 100
AKT2 93
AKT3 100
ALK 54
ALK(C1156Y) 95
ALK(L1196M) 100
AMPK-alpha1 21
AMPK-alpha2 14
ANKK1 75
ARK5 15
ASK1 100
ASK2 100
AURKA 9
AURKB 33
AURKC 13
AXL 15
BIKE 40
BLK 5.3
BMPR1A 100
BMPR1B 25
BMPR2 100
BMX 79
BRAF 82
BRAF(V600E) 83
BRK 100
BRSK1 100
BRSK2 80
BTK 28
BUB1 31
CAMK1 74
CAMK1B 100
CAMK1D 80
CAMK1G 100
CAMK2A 98
CAMK2B 99
CAMK2D 100
CAMK2G 97
CAMK4 100
CAMKK1 95
CAMKK2 94
CASK 100
CDC2L1 99
CDC2L2 98
CDC2L5 85
CDK11 100
CDK2 99
CDK3 100
CDK4 100
CDK4-cyclinD1 67
CDK4-cyclinD3 96
CDK5 100
CDK7 62
CDK8 100
CDK9 100
CDKL1 79
CDKL2 65
CDKL3 94
CDKL5 100
CHEK1 100
CHEK2 82
CIT 95
CLK1 91
CLK2 80
CLK3 100
CLK4 87
CSF1R 2.1
CSF1R-autoinhibited 100
CSK 76
CSNK1A1 83
CSNK1A1L 100
CSNK1D 95
CSNK1E 66
CSNK1G1 100
CSNK1G2 96
CSNK1G3 100
CSNK2A1 95
CSNK2A2 65
CTK 92
DAPK1 40
DAPK2 67
DAPK3 30
DCAMKL1 93
DCAMKL2 100
DCAMKL3 23
DDR1 32
DDR2 58
DLK 100
DMPK 100
DMPK2 91
DRAK1 100
DRAK2 70
DYRK1A 85
DYRK1B 100
DYRK2 89
EGFR 100
EGFR(E746-A750del) 82
EGFR(G719C) 100
EGFR(G719S) 96
EGFR(L747-E749del, A750P) 100
EGFR(L747-S752del, P753S) 57
EGFR(L747-T751del,Sins) 100
EGFR(L858R) 100
EGFR(L858R,T790M) 92
EGFR(L861Q) 87
EGFR(S752-I759del) 86
EGFR(T790M) 69
EIF2AK1 100
EPHA1 78
EPHA2 100
EPHA3 91
EPHA4 82
EPHA5 98
EPHA6 86
EPHA7 75
EPHA8 96
EPHB1 95
EPHB2 94
EPHB3 100
EPHB4 100
EPHB6 37
ERBB2 95
ERBB3 87
ERBB4 100
ERK1 100
ERK2 100
ERK3 91
ERK4 100
ERK5 100
ERK8 96
ERN1 50
FAK 53
FER 76
FES 100
FGFR1 0.9
FGFR2 2.8
FGFR3 4.3
FGFR3(G697C) 4.3
FGFR4 37
FGR 55
FLT1 1.6
FLT3 2.9
FLT3(D835H) 1.9
FLT3(D835V) 3.1
FLT3(D835Y) 0.75
FLT3(ITD) 0.35
FLT3(ITD,D835V) 0
FLT3(ITD,F691L) 0
FLT3(K663Q) 1.1
FLT3(N841I) 0
FLT3(R834Q) 3.8
FLT3-autoinhibited 22
FLT4 0
FRK 100
FYN 50
GAK 100
GCN2(Kin.Dom.2,S808G) 28
GRK1 61
GRK2 100
GRK3 100
GRK4 77
GRK7 64
GSK3A 85
GSK3B 82
HASPIN 100
HCK 18
HIPK1 90
HIPK2 100
HIPK3 100
HIPK4 100
HPK1 25
HUNK 100
ICK 100
IGF1R 100
IKK-alpha 96
IKK-beta 81
IKK-epsilon 43
INSR 80
INSRR 97
IRAK1 79
IRAK3 74
IRAK4 88
ITK 70
JAK1(JH1domain-catalytic) 4.2
JAK1(JH2domain-pseudokinase) 66
JAK2(JH1domain-catalytic) 0
JAK3(JH1domain-catalytic) 0
JNK1 77
JNK2 100
JNK3 100
KIT 1.1
KIT(A829P) 0
KIT(D816H) 0
KIT(D816V) 0.3
KIT(L576P) 0.85
KIT(V559D) 0.25
KIT(V559D,T670I) 3.5
KIT(V559D,V654A) 33
KIT-autoinhibited 61
LATS1 12
LATS2 75
LCK 8.3
LIMK1 67
LIMK2 55
LKB1 100
LOK 57
LRRK2 62
LRRK2(G2019S) 65
LTK 70
LYN 35
LZK 98
MAK 96
MAP3K1 100
MAP3K15 90
MAP3K2 51
MAP3K3 71
MAP3K4 100
MAP4K2 61
MAP4K3 49
MAP4K4 100
MAP4K5 89
MAPKAPK2 100
MAPKAPK5 57
MARK1 67
MARK2 100
MARK3 73
MARK4 54
MAST1 83
MEK1 65
MEK2 50
MEK3 53
MEK4 97
MEK5 42
MEK6 72
MELK 47
MERTK 62
MET 100
MET(M1250T) 100
MET(Y1235D) 72
MINK 41
MKK7 92
MKNK1 83
MKNK2 100
MLCK 100
MLK1 15
MLK2 23
MLK3 4.2
MRCKA 92
MRCKB 100
MST1 65
MST1R 99
MST2 98
MST3 41
MST4 86
MTOR 95
MUSK 100
MYLK 100
MYLK2 100
MYLK4 93
MYO3A 76
MYO3B 98
NDR1 79
NDR2 99
NEK1 95
NEK10 57
NEK11 100
NEK2 100
NEK3 51
NEK4 100
NEK5 98
NEK6 84
NEK7 77
NEK9 67
NIK 100
NIM1 100
NLK 77
OSR1 100
p38-alpha 96
p38-beta 99
p38-delta 99
p38-gamma 82
PAK1 99
PAK2 74
PAK3 40
PAK4 51
PAK6 68
PAK7 93
PCTK1 100
PCTK2 95
PCTK3 92
PDGFRA 3.6
PDGFRB 0
PDPK1 100
PFCDPK1(P.falciparum) 92
PFPK5(P.falciparum) 99
PFTAIRE2 100
PFTK1 100
PHKG1 100
PHKG2 93
PIK3C2B 96
PIK3C2G 71
PIK3CA 100
PIK3CA(C420R) 96
PIK3CA(E542K) 77
PIK3CA(E545A) 63
PIK3CA(E545K) 76
PIK3CA(H1047L) 82
PIK3CA(H1047Y) 97
PIK3CA(I800L) 100
PIK3CA(M1043I) 89
PIK3CA(Q546K) 64
PIK3CB 99
PIK3CD 60
PIK3CG 95
PIK4CB 84
PIKFYVE 100
PIM1 77
PIM2 100
PIM3 92
PIP5K1A 40
PIP5K1C 66
PIP5K2B 90
PIP5K2C 78
PKAC-alpha 100
PKAC-beta 100
PKMYT1 100
PKN1 86
PKN2 99
PKNB(M.tuberculosis) 71
PLK1 91
PLK2 74
PLK3 73
PLK4 3
PRKCD 91
PRKCE 97
PRKCH 100
PRKCI 65
PRKCQ 23
PRKD1 99
PRKD2 100
PRKD3 100
PRKG1 97
PRKG2 98
PRKR 49
PRKX 100
PRP4 83
PYK2 27
QSK 100
RAF1 100
RET 0
RET(M918T) 0.1
RET(V804L) 0
RET(V804M) 0
RIOK1 43
RIOK2 100
RIOK3 24
RIPK1 100
RIPK2 100
RIPK4 96
RIPK5 76
ROCK1 100
ROCK2 100
ROS1 22
RPS6KA4(Kin.Dom.1-N-terminal) 94
RPS6KA4(Kin.Dom.2-C-terminal) 65
RPS6KA5(Kin.Dom.1-N-terminal) 97
RPS6KA5(Kin.Dom.2-C-terminal) 100
RSK1(Kin.Dom.1-N-terminal) 40
RSK1(Kin.Dom.2-C-terminal) 100
RSK2(Kin.Dom.1-N-terminal) 18
RSK2(Kin.Dom.2-C-terminal) 82
RSK3(Kin.Dom.1-N-terminal) 1.8
RSK3(Kin.Dom.2-C-terminal) 0
RSK4(Kin.Dom.1-N-terminal) 35
RSK4(Kin.Dom.2-C-terminal) 49
S6K1 69
SBK1 100
SGK 59
SgK110 42
SGK2 94
SGK3 69
SIK 96
SIK2 100
SLK 4.1
SNARK 14
SNRK 100
SRC 2.4
SRMS 48
SRPK1 66
SRPK2 100
SRPK3 67
STK16 29
STK33 100
STK35 59
STK36 100
STK39 90
SYK 56
TAK1 60
TAOK1 71
TAOK2 63
TAOK3 70
TBK1 65
TEC 78
TESK1 86
TGFBR1 98
TGFBR2 100
TIE1 26
TIE2 55
TLK1 99
TLK2 80
TNIK 78
TNK1 18
TNK2 8.2
TNNI3K 65
TRKA 2.9
TRKB 17
TRKC 17
TRPM6 100
TSSK1B 78
TSSK3 100
TTK 69
TXK 81
TYK2(JH1domain-catalytic) 5.7
TYK2(JH2domain-pseudokinase) 100
TYRO3 77
ULK1 100
ULK2 96
ULK3 49
VEGFR2 4.3
VPS34 77
VRK2 85
WEE1 100
WEE2 100
WNK1 67
WNK2 96
WNK3 62
WNK4 99
YANK1 100
YANK2 91
YANK3 90
YES 26
YSK1 42
YSK4 48
ZAK 61
ZAP70 71
상기 표 6에서 확인할 수 있듯이, 본 발명에 따른 화합물은 AMPK-alpha1, AMPK-alpha2, ARK5, AURKA, AURKB, AURKC, AXL, BLK, BMPR1B, BTK, BUB1, CSF1R, DAPK3, DCAMKL3, DDR1, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR3(G697C), FLT1, FLT3, FLT3(D835H), FLT3(D835V), FLT3(D835Y), FLT3(ITD), FLT3(ITD,D835V), FLT3(ITD,F691L), FLT3(K663Q), FLT3(N841I), FLT3(R834Q), FLT3-autoinhibited, FLT4, GCN2(Kin.Dom.2,S808G), HCK, HPK1, JAK1, JAK2, JAK3, KIT, KIT(A829P), KIT(D816H), KIT(D816V), KIT(L576P), KIT(V559D), KIT(V559D,T670I), KIT(V559D,V654A), LATS1, LCK, LYN, MLK1, MLK2, MLK3, PDGFRA, PDGFRB, PLK4, PRKCQ, PYK2, RET, RET(M918T), RET(V804L), RET(V804M), RIOK3, ROS1, RSK2, RSK3, RSK4, SLK, SNARK, SRC, STK16, TIE1, TNK1, TNK2, TRKA, TRKB, TRKC, TYK2, VEGFR2 또는 YES 키나아제에 대하여 조절 백분율 35%보다 작은 값을 가지는 것을 알 수 있다. 이는 본 발명에 따른 화합물이 상기 나열된 효소에 대하여 억제 활성을 갖고 있음을 나타내는 것이며, 이로부터 상기 나열된 효소와 관련된 질환에 사용시 유용한 효과가 있음을 암시하는 것이다.
따라서, 본 발명에 따른 유도체 화합물은 따른 AMPK-alpha1, AMPK-alpha2, ARK5, AURKA, AURKB, AURKC, AXL, BLK, BMPR1B, BTK, BUB1, CSF1R, DAPK3, DCAMKL3, DDR1, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR3(G697C), FLT1, FLT3, FLT3(D835H), FLT3(D835V), FLT3(D835Y), FLT3(ITD), FLT3(ITD,D835V), FLT3(ITD,F691L), FLT3(K663Q), FLT3(N841I), FLT3(R834Q), FLT3-autoinhibited, FLT4, GCN2(Kin.Dom.2,S808G), HCK, HPK1, JAK1, JAK2, JAK3, KIT, KIT(A829P), KIT(D816H), KIT(D816V), KIT(L576P), KIT(V559D), KIT(V559D,T670I), KIT(V559D,V654A), LATS1, LCK, LYN, MLK1, MLK2, MLK3, PDGFRA, PDGFRB, PLK4, PRKCQ, PYK2, RET, RET(M918T), RET(V804L), RET(V804M), RIOK3, ROS1, RSK2, RSK3, RSK4, SLK, SNARK, SRC, STK16, TIE1, TNK1, TNK2, TRKA, TRKB, TRKC, TYK2, VEGFR2 또는 YES 관련 질환의 치료 또는 예방용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
< 실험예 2> RET (ret proto - oncogene ) 효소 저해능 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 RET (ret proto-oncogene) 효소에 저해 활성을 평가하기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다.
실시예 화합물을 정제된 human RET (658-end, signalchem)효소와 반응하여 하기와 같은 방법으로 효소 저해능을 평가하였다. 반응버퍼는 40 mM Tris-Hcl pH 7.4, 20 mM MgCl2, 0.5mg/mL BSA, 및 50uM DTT 조성을 사용하였으며 모든 시험물은 반응버퍼상에서 반응을 수행하였다. 시험시 human RET (658-end, 0.8ng)효소와 정제된 ATP(10uM), 특이적인 기질용액을 25℃상에서 1시간 반응시킨 후 효소활성은 in vitro ADP-GloTM kinase assay (promega)을 이용하여 확인하였다. 2:2:1 비율로 of 효소활성반응액과 ADP-Glo 반응액, 효소능 detection 용액을 반응시켜서 Luminescence를 측정하였다. 화합물을 처리하지 않은 용매대조군 효소활성의 형광도를 기준으로 각 화합물들의 처리 농도에 따른 효소활성 저해 정도를 산출하였으며, 이때 효소활성 저해를 50% 억제하는 각 화합물의 농도를 IC50(nM) 값으로 결정하였다. 각 화합물의 IC50는 3개씩의 데이터 세트로 결정하였고 프리즘(버전 7.01, 그래프패드) 소프트웨어를 이용하여 구하였다. 그 결과를 아래 표 7에 나타내었다.
< 실험예 3> RET 융합유전자를 발현하는 갑상선수질암 및 폐암세포 증식 억제활성 평가
본 발명에 따른 화합물의 RET 융합유전자를 발현하는 갑상성 수질암 세포 및 폐암세포 증식에 대한 억제활성을 평가하기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다.
RET 융합 유전자를 발현하는 폐암세포주 중에 LC-2/ad 세포는 RPMI:F12 (1:1) (Invitrogen)에 10% FBS (HyClone)을 넣은 후배양하고, 갑상선 수질암 세포주인 TT 세포는 10% FBS를 첨가한 F-12 (Invitrogen)를 사용한다. Ba/F3 세포는 10% FBS와 5 ng/ml IL-3 (R&D Systems)을 넣은 RPMI-1640를 사용한다. 형질도입된 Ba/F3 세포는 같은 배지에 1 ug/ml puromycin (Invitrogen)을 추가하여 배양한다. 세포는 화합물을 처리하기 24 시간 전에, 3000-5000 개 세포를 white clear bottom 96 well plate (Corning)의 well마다 분주해 놓는다. 화합물은 다이메틸설폭사이드에 희석시켜 (3 배씩 희석, 총 12개 농도) 최종농도가 0.3 nM - 50 uM이 되도록, 0.5 ul씩 주입하였다. 살아있는 세포의 측정은 화합물 처리후 72 시간 뒤에 CellTiter-Glo luminescent cell-viability reagent (Promega)를 사용하여 상온에서 10분 보관한 후에, 판독기 (SynergyNeo, Biotek)를 이용하여 발광강도를 측정하였다. 각 시험은 세번씩 반복하였다. 결과값은 대조군과 비교한 세포성장비율 (%)로 산출하였다. GraphPad Prism version 5.0 프로그램을 사용하여 그래프를 그리고 IC50 값을 계산하였다. 하기 표 7에 LC-2/ad, Ba/F3 naive, Ba/F3 KIF5B-RET, Ba/F3 KIF5B-RET V804M 세포에 대한 각 실험화합물의 성장저해활성을 측정한 결과를 나타내었다.
실시예 Enzyme assay (IC50, nM) Cell assay (GI50, nM)
RET
(wild)		 RET
(V804M)		 CCDC6-RET Ba/F3
(naive)		 LC-2/ad KIF5B KIF5B
(V804M)
1 10.1 1.16 0.82 5009 42
2 33.3 5.11 6.07 2426 53
5 7.6 1.65 1.02 1680 7.7 92 324
6 918 386
7 26.5 50.6
8 828 387
9 66.5 8.5
10 79.3 15.3
19 91.7 559
20 819 770
상기 표 7에 나타난 바와 같이, 본 발명의 실시예 화합물은 RET (ret proto-oncogene) 효소 저해능이 우수하고,
RET 융합유전자를 발현하는 갑상선 수질암 세포주 및 폐암세포주의 증식을 우수하게 저해하고 있는 것을 확인할 수 있다.
특히, RET 야생형보다 RET 융합유전자에 대하여 선택적으로 우수한 저해 활성을 나타내는 바, 본 발명의 화합물은 RET 융합유전자에 대하여 특이적으로 저해활성을 나타내는 것을 알 수 있다.
따라서 본 발명에 따른 화합물은 상기 실험에서 확인한 바와 같이, 암세포 증식을 억제할 수 있어, 암질환 예를 들어 갑상선수질암과 폐암의 예방 및 치료를 위한 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
<제제예 1> 산제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 2g
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<제제예 2> 정제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<제제예 3> 캡슐제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제제예 4> 주사제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎
만니톨 180 ㎎
Na2HPO4ㆍ2H2O 26 ㎎
증류수 2974 ㎎
통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.
<제제예 5> 연고제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 5 g
세틸팔미테이트 20 g
세탄올 40 g
스테아릴알콜 40 g
미리스탄이소프로필 80 g
폴리솔베이트 60 g
파라옥시안식향산 프로필 1 g
파라옥시안식향산 메틸 1 g
인산 및 정제수 적량
통상적인 연고제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 연고제를 제조하였다.
<제제예 6> 건강기능식품의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 500mg
비타민 A 아세테이트 70mg
비타민 E 1.0mg
비타민 B2 0.15mg
비타민 B6 0.5mg
비타민 B12 0.2mg
비타민 C 10mg
비오틴 10mg
니코틴산아미드 1.7mg
엽산 50mg
판토텐산 칼슘 0.5mg
황산제1철 1.75mg
산화아연 0.82mg
탄산마그네슘 25.3mg
제1인산칼륨 15mg
제2인산칼슘 55mg
구연산칼륨 90mg
탄산칼슘 100mg
염화마그네슘 24.8mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
<제제예 7> 건강기능음료의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 500mg
구연산 1000mg
올리고당 100g
매실농축액 2g
타우린 1g
정제수를 가하여 전체 900ml
통상의 건강 기능 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 기능 음료 조성물 제조에 사용하였다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (10)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure pat00048

    (상기 화학식 1에서,
    R1은 수소, CN, 비치환된 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C1-6알킬 또는 C3-7의 사이클로알킬이고;
    R2는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알킬이고;
    R3은 수소, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알콕시 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 10 원자의 헤테로아릴이고, 상기 헤테로아릴은 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알킬 및 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고;

    A1은 N 또는 CR4이고, 상기 R4는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 6알콕시이고; 및
    A2는 N 또는 CH이다).
  2. 제1항에 있어서,
    R1은 수소, CN, 비치환된 또는 할로겐으로 하나 이상 치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C1-4알킬 또는 C3-6의 사이클로알킬이고;
    R2는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알킬이고;
    R3은 수소, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알콕시 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 또는 6 원자의 헤테로아릴이고, 상기 헤테로아릴은 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알킬 및 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고;

    A1은 N 또는 CR4이고, 상기 R4는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 4알콕시이고; 및
    A2는 N 또는 CH인 것
    을 특징으로 하는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 제1항에 있어서,
    R1은 수소, CN, 비치환된 또는 F로 하나 이상 치환된 직쇄 또는 분지쇄의 C1-3알킬 또는 C3-5의 사이클로알킬이고;
    R2는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 3알킬이고;
    R3은 수소, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 3알콕시, 피라졸릴, 피리디닐, 싸이아졸릴 또는 이속사졸릴이고, 상기 피라졸릴, 피리디닐, 싸이아졸릴 및 이속사졸릴은 할로겐, 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 3알킬 및 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 3알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고;

    A1은 N 또는 CR4이고, 상기 R4는 수소 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C1- 3알콕시이고; 및
    A2는 N 또는 CH인 것
    을 특징으로 하는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 제1항에 있어서,
    R1은 수소, CN, 메틸, CF3, 사이클로프로필 또는 사이클로부틸이고;
    R2는 수소 또는 메틸이고;
    R3은 수소, 메톡시,
    Figure pat00049
    ,
    Figure pat00050
    ,
    Figure pat00051
    ,
    Figure pat00052
    ,
    Figure pat00053
    또는
    Figure pat00054
    이고;

    A1은 N 또는 CR4이고, 상기 R4는 수소 또는 메톡시이고;
    A2는 N 또는 CH인 것
    을 특징으로 하는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것인, 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    <1> (1r,4S)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
    <2> (1r,4S)-N-((S)-1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
    <3> (1r,4r)-N-벤질-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <4> (1r,4r)-N-(4-메톡시벤질)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <5> (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
    <6> (1r,4S)-N-((S)-1-(6-(4- 플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
    <7> (1s,4R)-4-(4-((1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
    <8> (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(1-옥소-4-((5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
    <9> (1s,4R)-4-(4-((5-사이클로프로필-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
    <10> (1s,4R)-4-(4-((5-사이클로부틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드 염산염;
    <11> (1s,4R)-N-((S)-1-(6-(3,5-다이메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <12> (1s,4R)-4-(4-((5-사이아노-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-((S)-1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-1-메톡시사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <13> (1s,4R)-4-(4-((5-사이아노-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-1-메톡시-N-((S)-1-(6'-메톡시-[2,3'-바이피리딘]-5-일)에틸)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <14> (1s,4R)-1-메톡시-N-((S)-1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <15> 1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(4-(싸이아졸-5-일)벤질)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <16> N-(4-(이속사졸-4-일)벤질)-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <17> N-벤질-1-메톡시-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <18> 1-메톡시-N-(4-메톡시벤질)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)사이클로헥세인-1-카복사마이드;
    <19> (S)-N-(1-(6-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 2,2,2-트리플루오로아세테이트염;
    <20> (S)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(4-((5-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드 염산염;
    <21> (S)-4-(4-((1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드;
    <22> (S)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)-4-(1-옥소-4-((5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-3-일)아미노)프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-1-카복사마이드;
    <23> (S)-4-(4-((5-사이클로프로필-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드; 및
    <24> (S)-4-(4-((5-사이클로부틸-1H-피라졸-3-일)아미노)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)-N-(1-(6-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)피리딘-3-일)에틸)피페리딘-1-카복사마이드.
  6. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 화합물은 AMPK-alpha1, AMPK-alpha2, ARK5, AURKA, AURKB, AURKC, AXL, BLK, BMPR1B, BTK, BUB1, CSF1R, DAPK3, DCAMKL3, DDR1, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR3(G697C), FLT1, FLT3, FLT3(D835H), FLT3(D835V), FLT3(D835Y), FLT3(ITD), FLT3(ITD,D835V), FLT3(ITD,F691L), FLT3(K663Q), FLT3(N841I), FLT3(R834Q), FLT3-autoinhibited, FLT4, GCN2(Kin.Dom.2,S808G), HCK, HPK1, JAK1, JAK2, JAK3, KIT, KIT(A829P), KIT(D816H), KIT(D816V), KIT(L576P), KIT(V559D), KIT(V559D,T670I), KIT(V559D,V654A), LATS1, LCK, LYN, MLK1, MLK2, MLK3, PDGFRA, PDGFRB, PLK4, PRKCQ, PYK2, RET, RET(M918T), RET(V804L), RET(V804M), RIOK3, ROS1, RSK2, RSK3, RSK4, SLK, SNARK, SRC, STK16, TIE1, TNK1, TNK2, TRKA, TRKB, TRKC, TYK2, VEGFR2 및 YES로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질 키나아제에 대하여 저해활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  8. 제6항에 있어서,
    상기 화합물은 RET (ret proto-oncogene) 효소 저해 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  9. 제6항에 있어서,
    상기 암은 가성점액종, 간내 담도암, 간모세포종, 간암, 갑상선암, 갑상성수질암, 결장암, 고환암, 골수이형성증후군, 교모세포종, 구강암, 구순암, 균상식육종, 급성골수성백혈병, 급성림프구성백혈병, 기저세포암, 난소상피암, 난소생식세포암, 남성유방암, 뇌암, 뇌하수체선종, 다발성골수종, 담낭암, 담도암, 대장암, 만성골수성백혈병, 만성림프구백혈병, 망막모세포종, 맥락막흑색종, 바터팽대부암, 방광암, 복막암, 부갑상선암, 부신암, 비부비동암, 비소세포폐암, 설암, 성상세포종, 소세포폐암, 소아뇌암, 소아림프종, 소아백혈병, 소장암, 수막종, 식도암, 신경교종, 신우암, 신장암, 심장암, 십이지장암, 악성 연부조직 암, 악성골암, 악성림프종, 악성중피종, 악성흑색종, 안암, 외음부암, 요관암, 요도암, 원발부위불명암, 위림프종, 위암, 위유암종, 위장관간질암, 윌름스암, 유방암, 육종, 음경암, 인두암, 임신융모질환, 자궁경부암, 자궁내막암, 자궁육종, 전립선암, 전이성 골암, 전이성뇌암, 종격동암, 직장암, 직장유암종, 질암, 척수암, 청신경초종, 췌장암, 침샘암, 카포시 육종, 파제트병, 편도암, 편평상피세포암, 폐선암, 폐암, 폐편평상피세포암, 피부암, 항문암, 횡문근육종, 후두암, 흉막암, 혈액암, 및 흉선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 암인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  10. 제6항에 있어서,
    상기 암은 RET 융합유전자를 발현하는 암인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
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