KR20200016836A - 폐암을 예방 및 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 vnp20009-m의 응용 - Google Patents
폐암을 예방 및 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 vnp20009-m의 응용 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20200016836A KR20200016836A KR1020197032449A KR20197032449A KR20200016836A KR 20200016836 A KR20200016836 A KR 20200016836A KR 1020197032449 A KR1020197032449 A KR 1020197032449A KR 20197032449 A KR20197032449 A KR 20197032449A KR 20200016836 A KR20200016836 A KR 20200016836A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- lung cancer
- vnp20009
- plasmid
- genetically engineered
- application
- Prior art date
Links
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 38
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 title claims abstract description 36
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 36
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 33
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 39
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 33
- 108010043135 L-methionine gamma-lyase Proteins 0.000 claims description 26
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 claims description 8
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 6
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 4
- 206010023774 Large cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009546 lung large cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims description 3
- 208000010576 undifferentiated carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010050017 Lung cancer metastatic Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 36
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 15
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 13
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 13
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 7
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 7
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 5
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N Pyridoxal Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IYXXQOGEFHAQGU-GPWRMYTLSA-N [(z)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)amino]azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.C1=CC=C2S\C(=N/N)N(C)C2=C1 IYXXQOGEFHAQGU-GPWRMYTLSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 208000013210 hematogenous Diseases 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 2
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-N 2-oxobutanoic acid Chemical compound CCC(=O)C(O)=O TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010068873 Adenosquamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000005411 L01XE02 - Gefitinib Substances 0.000 description 1
- 239000005551 L01XE03 - Erlotinib Substances 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 201000008395 adenosquamous carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003109 clavicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000020805 dietary restrictions Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 229960001433 erlotinib Drugs 0.000 description 1
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002584 gefitinib Drugs 0.000 description 1
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical compound C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 238000011470 radical surgery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/51—Lyases (4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/42—Salmonella
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
폐암을 예방 및 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 응용을 제공한다.
Description
본 발명은 유전 조작 약물의 기술분야에 속하며, 구체적으로 폐암을 예방 및 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 새로운 응용에 관한 것이다.
암은 이미 인간 사망의 중요한 원인이 되었으며, 2005년부터 2015년까지 암 발병률이 33% 증가하였다. 세계보건기구(WHO)가 발행한 세계 암 보고서 2014는 세계 암 사례가 급격히 증가하여 2012년 1400만 건에서 2025년 1900만 건으로 해마다 점차 증가하여 2035년에 2400만 건에 도달할 것으로 예측했다.
그 중에서, 폐암은 사람들의 건강과 생명을 위협하는 가장 악성인 종양 중 하나이며, 발병률 및 사망률 모두 가장 높고, 2012년 한 해에만 전 세계적으로 거의 160만 명이 폐암으로 사망했다. 중국 암 등록 센터의 2015년 보고서에 따르면 폐암의 발병률 및 사망률이 중국에서도 모두 가장 높다. 중국의 신규 폐암 사례는 70만 건 이상이고, 사망자 수는 60만 명 이상이다. 대부분의 폐암 환자는 비교적 늦게 발견되어, 오직 약물 치료에만 적합하다. 폐암의 전통적인 치료방법은 국소 치료(수술 치료, 방사선 치료 등을 포함함) 및 전신성 치료(전통 화학 요법, 분자 표적 약물 치료 등을 포함함)를 포함한다. 현대 의학 연구가 큰 진보를 하였고, 게피티닙, 엘로티닙 등과 같은 많은 표적 약물이 발명되었고, 폐암이 방사선 요법, 화학 요법 및 수술 치료 방면에서 일부 진전이 있어왔음에도 불구하고, 전반적인 예후는 여전히 좋지 않다. 2015년 통계에 따르면 중국에서 폐암 환자의 5년 생존율은 16.1%에 불과하다. 따라서, 폐암을 치료할 새로운 방법을 찾는 것이 과학자들이 시급히 해결해야 할 문제가 되었다.
종래 기술에 따르면 메티오닌 의존성은 대부분의 종양 세포의 특성이고, 이는 종양 세포에 의한 메티오닌에 대한 과도한 요구에 의해 나타나며, 메티오닌이 제거되었거나 전구체 호모시스테인 치환된 배양 배지에서 배양될 때 세포 증식이 억제되고; 반면 메티오닌의 존재 하에서 세포는 정상적으로 성장할 수 있고, 이는 전립선암, 유방암, 폐암 등 10종 이상의 악성 종양 세포를 포함한다. 그러나, 정상 세포에서는 메티오닌 의존성이 존재하지 않는다. 메티오닌 결핍을 유발하는 방법은 주로 식이에서 메티오닌을 제거하거나 또는 메티오니나제를 사용하여 메티오닌을 분해하는 것을 포함한다. 그렇지만, 단독으로 식이에서 메티오닌 섭취를 제한하는 것은 메티오닌 수준을 낮추는 효과가 제한적이며, 메티오닌 섭취를 장기간 제한하면 신체 영양실조 및 대사 장애를 유발할 수 있다. 식이 제한 메티오닌 섭취와 비교하여, 메티오니나제(methioninase)의 사용은 과도한 대사 문제를 유발하지 않으며 항종양 효과를 가진다.
살모넬라는 인간과 동물의 내장에서 기생하는 그람 음성 및 침습성 세포내 조건적 혐기성 박테리아의 그룹이다. 그 중에서, 공지된 박테리아 균주 VNP20009는 높은 종양 표적화 특성, 안전성 및 항종양 효과를 갖는 벡터이다. VNP20009는 악성 흑색종, 폐암 등의 다양한 마우스 고형 종양 모델에 대해 현저한 종양 성장 억제 효과를 가진다. 미국에서 진행된 2상 I 임상 연구는 VNP20009가 인체에 사용될 수 있고 안전성을 가지지만 항종양 효과는 관찰되지 않았음을 보여주었다.
이를 위해, 본 발명이 해결하고자 하는 기술적 과제는 폐암을 예방 및 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 새로운 응용을 제공하는 것이다.
상기 기술적 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 폐암을 예방 및 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 응용을 개시한다.
더욱이, 상기 폐암은 원발성 폐종양, 폐암 수술 후 재발성 종양 및 폐암 전이성 종양을 포함한다.
더욱이, 상기 폐암은 비소세포폐암, 소세포폐암 등을 포함한다.
상기 비소세포폐암은 상피세포에서 기원하며, 편평세포암종, 선암종, 선평편세포암종, 대세포폐암 또는 미분화 암종을 포함하는 폐암의 주요 유형이다.
편평세포암종은 각종 유형의 폐암 중 가장 일반적인 유형으로, 약 50%를 차지한다. 발병연령은 대부분 50세 이상이고, 남성이 대다수를 차지한다. 대부분의 편평세포암종은 비교적 큰 기관지로에서 기원하며, 종종 중추형 폐암이고, 미분화 암종보다 방사선 요법 및 화학 요법에 대한 민감도가 낮다.
선암종은 기관지 점막 상피에서 기원하며, 소수의 선암종은 큰 기관지의 점액샘에서 기원하고, 선암종은 여성에서 상대적으로 흔하다. 초기 단계에서 일반적으로 명백한 임상 증상은 없다. 선암종이 발견되었을 때 국소 침윤 또는 혈행성 전이가 발생할 수 있다. 선암종은 임상에서 간, 뇌, 뼈 등의 기관으로 전이되기 쉽고, 흉강 삼출을 유발하는 흉막을 수반할 수도 있다. 선암종은 방사선 요법에 대한 민감도가 좋지 않다.
선편평세포암종 및 대세포암종은 악성정도가 비교적 높고, 분화정도가 낮으며, 뇌 전이가 발생하기 쉽고, 치료 효과가 좋지 않고, 예후가 불량하다. 현재, 대세포폐암의 치료는 임상에서 대부분 종합적인 치료를 주로 하고, 단순한 수술 또는 방사선 요법 및 화학 요법의 효과는 좋지 않다.
미분화 암종은 편평세포암종에 다음가는 발병률을 가지며, 남성에서 흔하고, 발병연령이 비교적 이르다. 미분화 암종은 악성도가 높고, 성장이 빠르며, 림프 및 혈행성 광범위한 전이가 비교적 일찍 나타나며, 방사선 요법 및 화학 요법에 비교적 민감하고, 다양한 유형의 폐암에서 최악의 예후를 가진다.
소세포폐암은, 소세포신경내분비암종으로도 알려져 있으며, 폐암 중 악성정도가 가장 높은 유형이다. 이 유형의 폐암은 성장 속도가 빠르고, 비교적 일찍 전이되며, 종종 뇌, 간, 골, 부신 등의 기관으로 전이되고, 생존 기간은 대부분 1년을 넘지 못한다. 수술적 절제 효과가 좋지 않으나, 방사선 요법 및 화학 요법에 민감하며, 그러나 방사선 요법 및 화학 요법 동안에 종종 강한 독성과 부작용 및 합병증을 동반하고, 예후가 비교적 좋지 않다.
바람직하게는, 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 3.5*107 CFU/M2의 최소 유효 투여량을 갖는다.
암을 예방 및 치료하기 위해 사용된 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 다양한 경로를 통해 투여될 수 있으며, 비제한적으로 하기를 포함한다: 경구 투여, 국소 투여, 주사 투여(비제한적으로 정맥, 복막, 피하, 근육, 종양내 투여를 포함함) 등.
본 발명은 또한 메티오니나제 제제의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 응용을 개시한다. 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 비교적 높은 메티오니나제 활성을 가지며 메티오니나제 제제의 제조용으로 사용될 수 있다.
상기 메티오니나제 제제는 다양한 경로에 의해 투여될 수 있으며, 비제한적으로 하기를 포함한다: 경구 투여, 국소 투여, 주사 투여(비제한적으로 정맥, 복막, 피하, 근육, 종양내 투여를 포함함) 등.
종래 기술에서 알려진 바와 같이, 본 발명의 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 공지된 박테리아 균주이고, VNP20009-M의 성능, 형태 및 제조 방법은 모두 중국 특허 CN105983103A에 기재된 바와 같다.
상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 L-메티오니나제(L-methioninase) 유전자로 클로닝된 약독화 살모넬라 티피뮤리움 VNP20009이다.
더욱이, 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 플라스미드를 함유하는 약독화 살모넬라 티피뮤리움 VNP20009이고, 여기에서, 상기 플라스미드는 L-메티오니나제 유전자로 클로닝된 것이다.
상기 플라스미드는 비제한적으로 pSVSPORT 플라스미드, pTrc99A 플라스미드, pcDNA3.1 플라스미드, pBR322 플라스미드 또는 pET23a 플라스미드를 포함한다.
상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 하기 방법에 의해 제조된다: L-메티오니나제 유전자를 플라스미드 내로 서브클로닝하여 L-메티오니나제 발현 플라스미드를 얻는 단계, 상기 L메티오니나제 발현 플라스미드를 약독화 살모넬라 티피뮤리움 VNP20009 내로 전기충격 형질전환하는 단계, 및 VNP20009-M을 얻는 단계.
가장 바람직하게는, 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 제조 과정에서, pSVSPORT 플라스미드가 선택될 때, L-메티오니나제 유전자가 플라스미드 내로 서브클로닝되어 L-메티오니나제 발현 플라스미드를 얻고, 그 다음에 L메티오니나제 발현 플라스미드는 약독화 살모넬라 티피뮤리움 VNP20009 내로 전기충격 형질전환되어 상기 유전적으로 조작된 박테리아를 얻는다.
여기에서, 상기 전기충격 형질전환 조건은 전압 2,400V, 저항 400Ω, 정전용량 25μF, 방전시간 4ms이다.
본 발명은 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M을 현존하는 것에 기초하여 폐암을 치료하는 데 사용하기 위한 새로운 응용을 개시하고, 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 유효하게 폐암 종양 세포를 죽일 수 있고, 폐암 종양 병변을 제거하며, 원발성폐암, 수술 후 재발성 폐암 및 폐암이 기타 부위까지 전이된 종양세포에 대해 모두 더 나은 살생 효과 및 더 나은 치료 효과를 가질 수 있다; 게다가, 상기 유전적으로 조작된 박테리아는 인체에 대해 명백한 독성 및 부작용을 가지지 않으며, 폐암 치료를 위한 안전하고 효과적인 새로운 방법을 제공한다.
본 발명의 내용을 보다 쉽게 명확히 이해할 수 있도록 하기 위해, 하기에서 본 발명의 구체적인 실시예를 참조하고 도면을 결합하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명할 것이다. 여기에서,
도 1은 플라스미드 pSVSPORT-L-메티오니나제 효소 절단 확인의 1% 아가로즈 겔 전기영동도이고;
도 2는 본 발명에 따른 웨스턴 블롯에 의해 확인된 메티오니나제 발현 결과를 나타낸 도면이고;
도 3은 본 발명에 따른 살모넬라에서 메티오니나제 활성 검출 결과를 나타낸 도면이고;
도 4는 실시예 2에서 환자의 목에 새로 생성된 병변의 상태를 나타내고;
도 5는 실시예 2에서 환자의 종양 덩어리 부위의 생검 세포 도말을 나타내고;
도 6은 실시예 2에서 환자 치료 3주 후 종양 덩어리 상태를 나타내고;
도 7은 실시예 2에서 환자 치료 5주 후 종양 덩어리 상태를 나타내고;
도 8은 실시예 2에서 환자 치료 12주 후 원래 병변 부위의 상태를 나타내고;
도 9는 실시예 2에서 환자 치료 1주 후 종양 덩어리 내부의 세포학적 도말을 나타내고;
도 10은 실시예 2에서 환자 치료 3주 후 종양 덩어리 내부의 세포학적 도말이다.
도 1은 플라스미드 pSVSPORT-L-메티오니나제 효소 절단 확인의 1% 아가로즈 겔 전기영동도이고;
도 2는 본 발명에 따른 웨스턴 블롯에 의해 확인된 메티오니나제 발현 결과를 나타낸 도면이고;
도 3은 본 발명에 따른 살모넬라에서 메티오니나제 활성 검출 결과를 나타낸 도면이고;
도 4는 실시예 2에서 환자의 목에 새로 생성된 병변의 상태를 나타내고;
도 5는 실시예 2에서 환자의 종양 덩어리 부위의 생검 세포 도말을 나타내고;
도 6은 실시예 2에서 환자 치료 3주 후 종양 덩어리 상태를 나타내고;
도 7은 실시예 2에서 환자 치료 5주 후 종양 덩어리 상태를 나타내고;
도 8은 실시예 2에서 환자 치료 12주 후 원래 병변 부위의 상태를 나타내고;
도 9는 실시예 2에서 환자 치료 1주 후 종양 덩어리 내부의 세포학적 도말을 나타내고;
도 10은 실시예 2에서 환자 치료 3주 후 종양 덩어리 내부의 세포학적 도말이다.
실시예 1: 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 제조
본 발명의 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 제조 방법 및 과정은 중국 특허 CN105983103A의 실시예에 기재된 바와 같다.
(1) L-메티오니나제 유전자를 발현하는 플라스미드의 제조
먼저 L-메티오니나제(GenBank: L43133.1) 유전자를 합성하여 pUC57 플라스미드(GenScript)로 서브클로닝 한 다음, KpnI 및 HinIII 효소 절단 위치를 통해 pSVSPORT 플라스미드(invitrogen)로 서브클로닝하여 pSVSPORT-L-메티오니나제 발현 플라스미드를 얻었다. 구체적인 제조 과정은 다음과 같다:
pSVSPORT 플라스미드를 KpnI 및 HindIII 이중 효소 절단에 적용했다. 효소 절단 시스템은: 2μg 플라스미드 DNA, 3μL 10x완충액, 1.5μL KpnI 효소, 1.5μL HindIII 효소에 ddH2O를 첨가하여 30μL 부피까지 보충하여 채웠다. 웜 바스(warm bath)를 37 ℃에서 3시간 동안 수행하였다. 그리고 효소 절단 시스템을 1% 아가로스 겔에서 전기영동을 통해 분리하여 4.1kb 크기의 DNA 밴드를 얻었고, 겔 회수 및 정제 키트로 DNA를 정제하였다.
전체-게놈 합성을 통해 L-메티오니나제 암호화 영역의 DNA 단편을 수득하고, pUC57 플라스미드(GenScript)로 서브클로닝하고, KpnI 및 HindIII 이중 효소 절단에 적용했다. 효소 절단 시스템은: 3μg 플라스미드 DNA, 3μL 10x완충액, 1.5μL KpnI 효소, 1.5μL HindIII 효소에 ddH2O를 첨가하여 30 \μL 부피까지 보충하여 채웠다. 웜 바스를 37℃에서 3시간 동안 수행하였다. 그리고 효소 절단 시스템을 1% 아가로스 겔에서 전기영동을 통해 분리하여 1.2kb 크기의 DNA 밴드를 얻었고, 겔 회수 및 정제 키트로 DNA를 정제하였다.
pSVSPORT(KpnI/HinIII) 및 L-메티오니나제 암호화 영역의 DNA 단편(KpnI/HindIII)을 결찰하고, 결찰 반응 동안 2μL 벡터, 6μL 삽입 단편 및 1μL T4DNA 리가아제를 첨가하고, 웜 바스를 16℃에서 16시간 동안 수행하였다.
결찰 산물을 대장균 DH5α(Takara)의 수용성 세포(competent cell) 내로 형질전환시켰다. 50μL의 DH5α 수용성 세포의 한 개 튜브를 얼음에 두고, 얼음이 녹은 후, 5μL의 상기 결찰 산물을 DH5α 수용성 세포에 첨가하고, 가볍게 플립핑(flipping)하고 균일하게 혼합하고, 얼음에서 30분 동안 인큐베이션하고; 42℃에서 60초 동안 열 쇼크를 수행하고, 2분 동안 얼음에 두었고; 500μL의 비-내성 LB 액체 배지를 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 진탕 배양한 후, 암피실린 함유 내성 LB 배양 배지 플레이트에 도포하고 밤새 배양하였다.
클론이 자란 후, 단일 클론 균락을 3 mL의 암피실린 함유 LB 배양액에 접종하고, 37℃에서 16시간 동안 진탕 배양하고, 플라스미드 DNA를 추출하고, KpnI 및 HinIII 효소 절단으로 동정하였다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 양성 클론에서 4.1kb 및 1.2kb의 2개의 DNA 밴드를 얻을 수 있었다. 추가 시퀀싱에 의해 양성 클론의 서열이 완전히 정확하다는 것을 확인하였다.
(2) 플라스미드를 함유하는 VNP20009 박테리아 및 L-메티오니나제 유전자로 클로닝된 플라스미드를 함유하는 VNP20009 박테리아의 제조
pSVSPORT 및 pSVSPORT-L-메티오니나제 발현 플라스미드를 각각 VNP20009 박테리아 균주(YS1646, ATCC No.202165)로 전기충격 형질전환하고, 각각 VNP20009-V 및 VNP20009-M으로 명명하였다. 구체적인 제조 과정은 다음과 같다:
수용성 박테리아 VNP20009를 얼음에 두고, 얼음이 녹은 후 미리 냉각시킨 전기 회전 컵으로 옮기고, 여기에 2μL 플라스미드를 첨가하고, 가볍게 플립핑하고 균일하게 혼합하고, 얼음에서 1분 동안 인큐베이션을 수행하였다. 전기 회전 컵을 전기 회전 기구에 넣고, 조건을 전압 2400V, 저항 400 Ω, 정전용량 25μF 및 방전시간 4ms로 설정하였다. 전기 충격 후 즉시 1mL SOC 배양 배지를 첨가하고, 부드럽게 균일하게 혼합하였다. 37℃에서 1시간 동안 진탕 배양하고; 피펫을 사용하여 박테리아를 침전시키고 골고루 불어낸 후, 암피실린 함유 내성 LB-O 배양 배지 플레이트에 도포하였다. 그리고 플레이트를 37℃ 인큐베이터에 넣고 16시간 동안 배양하였다. VNP20009-V 및 VNP20009-M을 LB-O로 배양한 후, 플라스미드를 추출하고, 효소 절단에 의해 정확함을 확인하였다.
1x108의 살모넬라에서 단백질 용해물을 사용하여 단백질을 추출하고, 10% SDS-PAGE 전기영동을 수행하고, 안정된 압력 하에 아이스 바스에서 PVDF 막으로 전기충격 형질전환을 수행하였고, 상온에서 BSA로 1시간 동안 차단한 후, TBST로 5분씩 3회 헹구고, 래빗 항-L-메티오니나제 항체를 첨가하고(1:1000), 4℃에서 밤새 인큐베이션 하였다. TBST로 3회, 매회마다 5분씩 헹구고, HRP-표지된 항-래빗 2차 항체(1:1000)를 첨가하고, 상온에서 1시간 동안 인큐베이션 하고, TBST로 3회, 매회마다 5분씩 헹구고, ECL 화학발광법으로 현상하였다. 결과는 도 2에 나타낸 바와 같이, 분자량 약 43kD에서 특이 밴드가 관찰되었고, 이는 VNP20009 및 VNP20009-V와 비교하여 VNP20009-M에서 L-메티오니나제의 발현량이 현저히 증가하였다는 것을 설명한다.
L-메티오닌 및 피리독살을 각각 VNP20009-V 및 VNP20009-M 균체와 혼합하였다. 37℃에서 10분 동안 인큐베이션을 수행한 후, 50% 트리클로로아세트산으로 종결시키고, 원심분리하여 상등액을 얻은 다음, 3-메틸-2-벤조티아졸리논 하이드라존 하이드로클로라이드 하이드레이트 (MBTH)와 충분히 혼합하였다. 50℃에서 30분 동안 인큐베이션을 수행한 후, 320nm에서 흡광도를 측정하고, 분당 1μmol의 α-케토부티르산을 촉매 전환하기 위해 사용된 효소의 양을 1 효소 활성 단위로 정의하였다. 결과는(도 3에 나타낸 바와 같이) 살모넬라 VNP20009-M의 메티오니나제 활성이 VNP20009-V의 활성보다 10배 높다는 것을 나타낸다.
이로부터 알 수 있듯이, 상기 제조된 유전적으로 조작된 살모넬라 VNP20009-M은 비교적 높은 메티오니나제 활성을 가지며, 메티오니나제 제제의 제조를 위해 사용될 수 있다.
실시예 2: 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 항종양 효과
1) 과거 병력 및 진단
73세의 임상 남성 환자가 흉강경 오른쪽 폐 아래엽 편평세포암종 근치 수술을 받고 5개월 후에 목에 새로운 종양 덩어리가 발견되었다(도 4에 나타낸 바와 같음). 목에 병변 종양 덩어리의 크기는 약 8 cm×9 cm로 측정되었다. 종양 덩어리 부위 생검은 세포 도말에 의해 암 세포로 확인되었고(도 5에 나타낸 바와 같음), 게다가 골 ECT는 다수의 골 대사 활성을 나타내었고, 흉부 CT 검사 보고서는 흉골 파괴와 종양 덩어리 형성이 동반되는 것을 나타내었다.
환자의 과거 치료 및 관련 검사에 따르면, 환자는 오른쪽 폐 아래엽 편평세포암종 수술 후 재발 및 전이로 진단되었으나, 임상에서는 이미 표준 치료 방안이 없었다.
2) 치료 방안
희석된 VNP20009-M을 종양 부위의 다수 지점에 균등하게 주입하였으며, 제1 회차에 6*107 cfu (약 3.5*107 cfu/m2)의 VNP20009-M이 제공되었다. 1주 간격 후에, 제2 회차 투여를 계속하여 진행하고, 약물의 총량은 9*107 cfu (약 5*107 cfu/m2)로 증가시켰다. 마찬가지로 종양내 주사를 채용하여, 고르게 다수 지점 약물 주사가 수행되었다. 1주 간격 후에, 제2 회차와 같은 방법 및 용량으로 제3 회차 투여를 진행하였다. 10일 간격 후에, 제4 회차 투여를 진행하였고, 약물 농도는 6*107 cfu/m2로 증가시켰고, 종양내 투여하였다. 10일 간격 후에, 제4 회차와 동일한 방법 및 용량으로 제5 회차 투여가 계속해서 진행되었다. 구체적인 시행 방안은 하기 표 1에 나타내었다.
[표 1] 치료 시행 방안
3) 효능
3.1 병변 크기의 변화
치료 전에 목에 병변 종양 덩어리의 크기는 약 8 cm×9 cm로 측정되었다(도 4와 같음). 치료 후 3주 후, 종양 덩어리는 상당히 축소되었다(도 6에 나타낸 바와 같음). 치료 5주 후(5 회차 치료의 종료), 종양 덩어리는 대체로 사라졌다(도 7에 나타낸 바와 같음). 치료 후 12주에, 목 쇄골 부위에 이상 변화, 즉, 원래 병변 부위가 없었다(도 8에 나타낸 바와 같음).
3.2 종양 덩어리 내부의 변화
치료 전에, 종양 덩어리의 내부는 낭포성 구조이고, 세포학적 도말 분석에 의해 비교적 중증의 비정상적 형태의 세포, 즉, 종양 세포가 발견되었다(도 5에 나타낸 바와 같음).
치료 후 1주일(1회 치료), 종양 덩어리는 상당히 부드러워졌고(도 9에 나타낸 바와 같음), 세포학적 도말에 의해 다량의 호중구와 소량의 종양 세포를 함유하는 것이 발견되었다. 치료 후 10일(2회 치료), 약 40ml의 삼출액이 추출되었고; 치료 후 2주(2회 치료), 종양 덩어리의 내부는 더욱 액화되었으며, 약 90ml의 삼출액이 추출되었고; 치료 후 3주(3회 치료), 종양은 이미 축소되었고(도 10에 나타낸 바와 같음), 약 45 ml의 삼출액이 계속적으로 추출되었고, 세포학적 도말에 의해 다량의 염증 세포 및 극소량의 종양 세포를 함유하는 것이 발견되었으며, 염증 세포가 종양 세포의 주변부를 둘러싼 것이 관찰되었다. 치료 후 1개월(4회 치료), 종양은 더욱 축소되었고, 추출된 삼출액은 20 ml 정도로 감소하였다. 5차 치료가 종료된 후, 삼출액은 검출되지 않았으며 종양 덩어리는 제거되었다.
상기 결과는 본 발명의 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 종양 병변 내부로의 주사가 국소 염증 세포 침윤을 유도할 수 있고, 더 나아가 종양 세포를 죽이는 작용을 할 수 있음을 설명한다.
3.3 부작용
매회 치료 날에, 주사 후 9-10시간에, 환자는 38℃ 정도의 열이 있었고, 물리적 냉각에 의해 정상 체온을 회복할 수 있었다. 그 날, 때때로 10분 정도의 메스꺼움 및 구토가 동반되었다. 그 외에는 다른 이상 느낌은 없었다. 치료 기간 동안, 간 및 신장 기능의 다양한 지표를 검사하였고, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다. 결과는 환자의 간 및 신장 기능의 다양한 지표가 모두 정상 범위에 있음을 보여주었다. 상기 결과는 VNP20009-M이 인체에 명백한 독성이 없음을 설명한다.
[표 2] 환자의 다양한 검측 지표의 결과
상기 데이터는 본 발명의 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M이 폐암 치료를 위해 사용되고, 유효하게 폐 편평상피 암 세포를 죽일 수 있고, 종양 병변을 제거하며, 인체에 명백한 독성 및 부작용을 나타내지 않음을 증명한다.
상술한 실시예는 단지 예를 명확히 설명하기 위한 것이며, 실시예로 한정하려는 것이 아님이 자명하다. 본 기술분야의 통상의 기술자는 상술한 설명에 기초하여 기타 다른 형식의 변화 또는 수정을 할 수 있다. 여기에서 모든 실시방식을 소진할 필요가 없고 방법도 없다. 그리고 이로부터 도출된 명백하고 쉬운 변화 또는 수정은 여전히 본 발명에 의해 생성된 보호 범위 내에 있다.
Claims (10)
- 폐암을 예방 및 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 응용.
- 제1항에 있어서, 상기 폐암은 원발성 폐종양, 폐암 수술 후 재발성 종양 및 폐암 전이성 종양을 포함하는 것을 특징으로 하는 응용.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 폐암은 비소세포폐암 및 소세포폐암을 포함하는 것을 특징으로 하는 응용.
- 제3항에 있어서, 상기 비소세포폐암은 편평세포암종, 선암종, 선편평세포암종, 대세포폐암 또는 미분화 암종을 포함하는 것을 특징으로 하는 응용.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 3.5*107 CFU/M2의 최소 유효 투여량을 갖는 것을 특징으로 하는 응용.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M의 투여 방식은 경구 투여, 국소 투여 및 주사 투여를 포함하는 것을 특징으로 하는 응용.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 L-메티오니나제 유전자로 클로닝된 약독화 살모넬라 티피뮤리움 VNP20009인 것을 특징으로 하는 응용.
- 제7항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 플라스미드를 함유하는 약독화 살모넬라 티피뮤리움 VNP2009이고, 상기 플라스미드는 L-메티오니나제 유전자로 클로닝된 것을 특징으로 하는 응용.
- 제8항에 있어서, 상기 플라스미드는 pSVSPORT 플라스미드, pTrc99A 플라스미드, pcDNA3.1 플라스미드, pBR322 플라스미드 또는 pET23a 플라스미드를 포함하는 것을 특징으로 하는 응용.
- 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전적으로 조작된 박테리아 VNP20009-M은 하기 방법에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 응용: L-메티오니나제 유전자를 플라스미드 내로 서브클로닝하여 L-메티오니나제 발현 플라스미드를 얻는 단계, 상기 L메티오니나제 발현 플라스미드를 약독화 살모넬라 티피뮤리움 VNP20009 내로 전기충격 형질전환하는 단계, 및 VNP20009-M을 얻는 단계.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710213446.6 | 2017-04-01 | ||
| CN201710213446.6A CN106913883A (zh) | 2017-04-01 | 2017-04-01 | 基因工程菌vnp20009‑m在制备预防和治疗肺癌药物中的应用 |
| PCT/CN2018/081115 WO2018177374A1 (zh) | 2017-04-01 | 2018-03-29 | 基因工程菌vnp20009-m在制备预防和治疗肺癌药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20200016836A true KR20200016836A (ko) | 2020-02-17 |
Family
ID=59567274
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020197032449A KR20200016836A (ko) | 2017-04-01 | 2018-03-29 | 폐암을 예방 및 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 vnp20009-m의 응용 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11771721B2 (ko) |
| EP (1) | EP3586877A4 (ko) |
| JP (1) | JP6973737B2 (ko) |
| KR (1) | KR20200016836A (ko) |
| CN (1) | CN106913883A (ko) |
| AU (1) | AU2018241656B2 (ko) |
| CA (1) | CA3056292C (ko) |
| WO (1) | WO2018177374A1 (ko) |
| ZA (1) | ZA201906222B (ko) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106913883A (zh) | 2017-04-01 | 2017-07-04 | 广州华津医药科技有限公司 | 基因工程菌vnp20009‑m在制备预防和治疗肺癌药物中的应用 |
| CN112190717B (zh) * | 2020-10-16 | 2023-12-15 | 广州华津医药科技有限公司 | 减毒鼠伤寒沙门氏菌及其基因工程菌在制备治疗急性白血病的药物上的应用 |
| CN112245573A (zh) * | 2020-10-16 | 2021-01-22 | 广东工业大学 | 减毒鼠伤寒沙门氏菌的基因工程菌在制备治疗癌症的药物上的应用 |
| CN114712403B (zh) * | 2022-03-27 | 2024-05-17 | 江苏靶标生物医药研究所有限公司 | 一种减毒沙门氏菌在制备治疗肺癌胸腔积液药物中的应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103146626B (zh) * | 2013-02-28 | 2014-12-31 | 南京华贞生物医药科技有限公司 | 一种治疗乳腺癌的基因工程菌及其构建方法和应用 |
| CN103961721B (zh) * | 2014-04-30 | 2018-10-23 | 广州华津医药科技有限公司 | 减毒鼠伤寒沙门氏菌及其基因工程菌在制备治疗前列腺癌的药物上的应用 |
| CN105983103A (zh) | 2015-03-17 | 2016-10-05 | 广州华津医药科技有限公司 | 基因工程菌vnp20009-m在制备预防和治疗癌症转移的药物上的应用 |
| CN106474489B (zh) * | 2015-08-31 | 2019-08-16 | 广州华津医药科技有限公司 | 减毒鼠伤寒沙门氏菌基因工程菌在制备治疗肝癌药物上的应用 |
| CN106913883A (zh) | 2017-04-01 | 2017-07-04 | 广州华津医药科技有限公司 | 基因工程菌vnp20009‑m在制备预防和治疗肺癌药物中的应用 |
-
2017
- 2017-04-01 CN CN201710213446.6A patent/CN106913883A/zh active Pending
-
2018
- 2018-03-29 KR KR1020197032449A patent/KR20200016836A/ko not_active IP Right Cessation
- 2018-03-29 AU AU2018241656A patent/AU2018241656B2/en active Active
- 2018-03-29 CA CA3056292A patent/CA3056292C/en active Active
- 2018-03-29 JP JP2019569533A patent/JP6973737B2/ja active Active
- 2018-03-29 US US16/497,820 patent/US11771721B2/en active Active
- 2018-03-29 WO PCT/CN2018/081115 patent/WO2018177374A1/zh unknown
- 2018-03-29 EP EP18777423.7A patent/EP3586877A4/en active Pending
-
2019
- 2019-09-19 ZA ZA2019/06222A patent/ZA201906222B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3586877A1 (en) | 2020-01-01 |
| JP6973737B2 (ja) | 2021-12-01 |
| EP3586877A4 (en) | 2020-04-15 |
| CA3056292A1 (en) | 2018-10-04 |
| JP2020509093A (ja) | 2020-03-26 |
| WO2018177374A1 (zh) | 2018-10-04 |
| AU2018241656A1 (en) | 2019-10-10 |
| ZA201906222B (en) | 2021-03-31 |
| US11771721B2 (en) | 2023-10-03 |
| CA3056292C (en) | 2023-01-24 |
| CN106913883A (zh) | 2017-07-04 |
| US20200023019A1 (en) | 2020-01-23 |
| AU2018241656B2 (en) | 2020-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20200016836A (ko) | 폐암을 예방 및 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 vnp20009-m의 응용 | |
| US11318172B2 (en) | Use of genetically engineered bacterium of attenuated Salmonella typhimurium in for treating liver cancer | |
| Xie et al. | Enhanced antitumor activity by combining an adenovirus harboring ING4 with cisplatin for hepatocarcinoma cells | |
| US9816083B2 (en) | Genetically engineered bacterium for treatment of breast cancer, method for constructing the bacterium, and applications thereof | |
| EP3272363A1 (en) | Use of gene engineering bacteria vpn 20009-m in preparation of medicaments for preventing and treating cancer metastasis | |
| US20200261514A1 (en) | Therapeutic and prophylactic treatment for colorectal cancer | |
| Han et al. | RBM23 Drives Hepatocellular Carcinoma by Activating NF‐κB Signaling Pathway | |
| KR102344837B1 (ko) | 악성 육종을 치료하기 위한 약물의 제조에서 유전적으로 조작된 박테리아 vnp20009-m의 응용 | |
| Cha et al. | Effect of perioperative treatment with a hypoxia-inducible factor-1-alpha inhibitor in an orthotopic surgical mouse model of thyroid cancer | |
| Furjelová et al. | Carbonic anhydrase IX: a promising diagnostic and prognostic biomarker in breast carcinoma | |
| CN112138163B (zh) | PPARG激活子联合SIRPα抗体在制备肿瘤免疫药物中的应用 | |
| CN104721838B (zh) | Yap抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN113564175A (zh) | 一种具有己糖激酶2抑制活性的基因、蛋白、载体、慢病毒及应用 | |
| CN110840868B (zh) | 一种溴己新在制备抗癌药物中的应用 | |
| Li et al. | Relationship between clinicopathological features and HIF-2α in gastric adenocarcinoma | |
| US9439934B1 (en) | Application of an attenuated salmonella typhimurium, its genetically engineered bacterium in preparing drugs for the treatment of prostate cancer | |
| Bao et al. | Overexpression of CAMK 2 N 1 indicates good prognosis for glioma and regulates androgen receptor-associated cell proliferation and apoptosis | |
| CN114767869B (zh) | 一种去甲泽拉木醛和src抑制剂的联合用药物 | |
| CN113827731B (zh) | Vegf抑制剂和pd-1单克隆抗体在制备用于抑制卵巢癌的药盒中的用途 | |
| CN115317613B (zh) | 治疗5-氟尿嘧啶耐药结直肠癌的药物 | |
| CN114344469A (zh) | 一种长链非编码rna在胃癌热化疗中的应用 | |
| Gao et al. | Current Insights of H. PyloriInfection on Gastric Cancer | |
| CN101555469B (zh) | 含有ndrg2基因的高效重组腺病毒及其药物用途 | |
| CN115671142A (zh) | 丁酸梭菌在结直肠癌辅助治疗上的应用 | |
| CN117883565A (zh) | 沙美特罗和pd-1抗体联用在制备治疗黑色素瘤的药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| AMND | Amendment | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| X601 | Decision of rejection after re-examination | ||
| J201 | Request for trial against refusal decision | ||
| J301 | Trial decision |
Free format text: TRIAL NUMBER: 2021101002425; TRIAL DECISION FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL REQUESTED 20210917 Effective date: 20221117 |
|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| S601 | Decision to reject again after remand of revocation | ||
| S601 | Decision to reject again after remand of revocation | ||
| J201 | Request for trial against refusal decision |