KR20200002190A - 항 스핑고신-1-포스페이트 작용제, 이의 생산 방법, 및 이의 용도 - Google Patents

항 스핑고신-1-포스페이트 작용제, 이의 생산 방법, 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 명세서는 본 명세서에 의해 개시되는 내용은 항-S1P 작용제(Anti-sphingosine-1-Phosphate; Anti-S1P agent) 및 이의 생산 방법에 관한 것이다. 본 명세서에 의해 개시되는 내용에 따른 항-S1P 작용제(Anti-sphingosine-1-Phosphate; Anti-S1P agent)는 S1P, S1P 유사체 또는 S1P 유도체에 대한 상보성 결정부를 포함하는 IgG 또는 scFv이다.

Description

항 스핑고신-1-포스페이트 작용제, 이의 생산 방법, 및 이의 용도 {Anti-Sphingosine-1-Phosphate agent, production method, and uses thereof}
본 명세서에 의해 개시되는 내용은 항-S1P 작용제(Anti-sphingosine-1-Phosphate; Anti-S1P agent) 및 이의 생산 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 스핑고신-1-포스페이트 (Sphingosine-1-Phosphate; S1P), S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상에 대한 작용제로서, 상기 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상에 대한 상보성 결정 부위를 가진 폴리펩타이드, 이의 생산 방법 및 이의 용도에 관한 것이다.
스핑고신-1-포스페이트(Sphingosine-1-Phosphate; S1P)는 리소지질 중 스핑고리피드의 일종으로, D-에리트로-스핑고신-1-포스페이트(D-erythro-Sphingosine-1-Phosphate)라고도 한다. S1P는 스핑고-인산화효소에 의한 스핑고신의 인산화로 생성된다. 특히 혈소판에 많이 축적하며, 혈소판의 활성화로 혈중에 방출되는 것으로 알려져 있다.
현재 S1P는 여러 병리생태학적 병태, 특히 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 발생 위험을 진단할 수 있는 마커가 되며, 나아가 S1P를 치료 표적으로 할 수 있다는 연구 결과가 보고되고 있다. 따라서, 다양한 질병의 진단 또는 치료를 위하여 S1P, S1P 유사체 및/또는 S1P 유도체에 대한 선택적 작용제가 필요하다.
본 출원에 의해 개시되는 내용은 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)를 제공한다.
본 출원에 의해 개시되는 내용은 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)의 생산 방법을 제공한다.
본 출원에 의해 개시되는 내용은 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent) 및/또는 이들의 생산 방법의 용도를 제공한다.
본 출원에 의해 개시되는 기술의 일 양태에 따르면, 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)가 제공된다.
상기 새로운 항-S1P 작용제는
스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 항-S1P 작용제로,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하고,
상기 항원 결합 부위는
제1 상보성 결정부 및 제1 프레임워크 영역(frame work region)을 포함하는 중쇄 사슬의 가변부 도메인(variable domain of heavy chain; VH); 및
제 2 상보성 결정부 및 제2 프레임워크 영역을 포함하는 경쇄 사슬의 가변부 도메인(variable domain of light chain; VL); 중 어느 하나 이상을 포함하고,
상기 제1 상보성 결정부는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 중 어느 하나 이상을 포함하고,
상기 제2 상보성 결정부는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 중 어느 하나 이상을 포함하는,
항-S1P 작용제(anti-sphingosine-1-phosphate agent)이다.
본 출원에 의해 개시되는 기술의 다른 양태에 따르면, 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)의 생산 방법이 제공된다.
상기 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)의 생산 방법은
스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 항-S1P 작용제 생산 방법으로,
상기 항-S1P 작용제를 암호화하는 서열번호 27 내지 32번 중 어느 하나 이상의 핵산 서열이 주입된 세포로부터 상기 항-S1P 작용제를 발현시키는 것; 및
상기 발현된 항-S1P 작용제를 정제하는 것; 을 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는,
항-S1P 작용제 생산 방법이다.
본 출원에 의해 개시되는 기술의 또다른 양태에 따르면, 면역 진단 키트가 제공된다.
상기 면역 진단 키트는
플레이트;
대조군; 및
항-S1P 작용제; 를 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는
서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는 스핑고리피드(sphingo-lipid)에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하고,
상기 대조군은 스핑고리피드를 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog)및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는,
면역 진단 키트이다.
본 출원에 의해 개시되는 기술의 또다른 양태에 따르면, 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent) 및/또는 이들의 생산 방법의 용도가 제공된다.
상기 용도에 의하여
항-S1P 작용제의 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 진단용 조성물로,
상기 항-S1P 작용제는
서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 항원은 스핑고리피드를 포함하고.
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는
진단용 조성물이 제공된다.
또한, 상기 용도에 의하여
항-S1P 작용제의 항원에 대한 경쟁적 결합(competitive binding)을 측정하는 것을 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는
서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는 상기 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하고,
상기 항원은 스핑고리피드를 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하고,
상기 항원은 대조군 및 시료 중 어느 하나 이상에 포함되는
면역 진단 방법이 제공된다.
본 명세서에 의해 개시되는 기술에 따르면, 다음과 같은 효과가 발생한다.
첫째, 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)를 제공할 수 있다. 나아가, S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상에 대하여 보다 더 결합력이 증가한 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)를 제공할 수 있다.
둘째, 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)의 생산 방법을 제공할 수 있다. 나아가, 보다 더 생산이 용이한 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)의 생산 방법을 제공할 수 있다.
셋째, S1P에 대한 면역 진단 키트를 제공할 수 있다. 나아가, 보다 더 면역 진단 이용에 용이한 면역 진단 키트를 제공할 수 있다.
넷째, 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent) 및/또는 이들의 생산 방법의 용도를 제공할 수 있다. 나아가, 보다 더 면역 진단 이용에 용이한 새로운 항-S1P 작용제(Anti-S1P agent) 및/또는 이들의 생산 방법의 용도를 제공할 수 있다.
도 1은 일 실시예에 따른 pcIW3.3-heavy chain의 vector map을 나타낸다.
도 2는 일 실시예에 따른 pcIW3.3-kappa chain의 vector map을 나타낸다.
도 3은 일 실시예에 따른 중쇄 사슬의 가변부 도메인의 모식도를 나타낸다.
도 4는 일 실시예에 따른 경쇄 사슬의 가변부 도메인의 모식도를 나타낸다.
도 5는 일 실시예에 따른 항-S1P scFv의 모식도를 나타낸다.
도 6는 일 실시예에 따른 항-S1P IgG의 모식도를 나타낸다.
도 7 및 도 8은 실시예에 따른 면역 진단 키트의 모식도를 나타낸다.
본 명세서에 개시된 내용을 기술하기 위하여, 본 명세서에 개시 여러 용어들이 정의될 것이다. 이러한 용어들에 더하여, 필요한 경우 기타 용어들이 본 명세서 내의 다른 곳에서 정의된다. 본원에서 달리 명확하게 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 업계 용어들은 업계에서 인정되는 의미를 가질 것이다. 상충되는 경우, 본 명세서의 정의에 의해 해석될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 대표적인 용어에 대한 정의는 이하와 같다.
용어 “유사체(analog)”는 특정 유기화합물의 일 구성요소의 하나 이상이 다른 원소(들)로 치환, 부가 또는 삭제된 구조의 화합물을 지칭하는 것으로, 특정 유기화합물과 구조적 유사성이 있는 화합물일 수 있다.
용어 “유도체(derivative)”는 특정 유기화합물을 모체로 하여 작용기의 도입, 산화, 환원, 치환 등 모체 유기화합물의 일부를 변화시켜 얻어지는 화합물을 지칭하는 것으로, 특정 유기화합물과 유사한 화학 구조를 가지는 것일 수 있다.
상기 유도체는 상기 유사체에 포함될 수 있다.
용어 "바이오마커"는 단백질, DNA, RNA 또는 대사물질 등을 이용해 생체 상태를 알아낼 수 있는 지표를 의미한다. 예를 들어, 상기 바이오마커는 질환의 발생, 진행 또는 치료의 효과의 측정을 유용하게 하는 생화학물질일 수 있다. 예를 들어, S1P는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역 및 골질환 중 어느 하나 이상에 대한 바이오마커일 수 있다. 예를 들어, S1P 항체는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역 및 골질환 중 어느 하나 이상에 대한 바이오마커일 수 있다.
용어 “면역 진단(immunodiagnosis)”은 면역학적 기법으로 얻어낸 검사 성적에 따라 생체 상태를 진단하여 생물학적 시료에서 항원의 존재 여부와 정도를 확인하는 것을 의미한다. 면역 진단을 위하여는 당업계에 공지된 방법을 이용할 수 있으며, 예를 들어, 엘라이자(enzyme-linked immunosorbent assay, enzyme-linked immunospecific assay; ELISA), 현장현시검사(point-of-care testing; POCT)등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 공지의 방법을 수행하기 위하여 침강법(precipitation), 응집법(agglutination), 면역형광염색법(immunofluorescence stain), 효소면역측정법(enzyme immunoassay), 방사면역측정법(radioimmunoassay), 화학발광면역측정법(chemi-luminescence immunoassay) 등이 이용될 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다.
용어 “분리” 또는 "정제”는 특정 수득물로부터 하나 이상의 물질을 제거하거나 희석하여 유효 물질을 수득하는 것을 의미한다. 상기 분리 또는 정제 단계 동안 제거 또는 희석될 수 있는 다른 물질의 성분에는 화학적 반응 생성물, 미반응 화학물질, 단백질, 탄수화물, 지질 및 미결합 분자가 포함된다.
용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 25, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.
이러한 용어들에 더하여, 필요한 경우 기타 용어들이 명세서 내의 다른 곳에서 정의된다. 본원에서 달리 명확하게 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 업계 용어들은 업계에서 인식하는 의미를 가질 것이다
이하, 본 명세서에 의해 개시되는 내용을 상세히 설명한다.
본 명세서에 의해 개시되는 일 양태에 따르면, 새로운 항-스핑고리피드 작용제가 제공될 수 있다.
본 명세서에서 "스핑고리피드"는 스핑고이드염기의 백본(backbone)을 포함하며, 지방족 아미노알코올의 집합체를 함유하는 지질군이다. 스핑고지질은 세포 신호전달 및 조절 분자로서 또한 작용하는 세포막의 1차적인 구조적 성분이다. S1P, 디히드로-S1P(DHS1P) 및 스핑고실포스포릴콜린(SPC)의 구조적 골격은 스핑고미엘린으로부터 유래된 스핑고신을 기반으로 한다. 스핑고지질 신호전달 매개물은 세라미드(CER), 스핑고신(SPH) 및 스핑고신-1-포스페이트(S1P)가 포함된다. 상기 스핑고지질은 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역 및 골질환 중 어느 하나 이상에 대한 바이오마커로 활용될 수 있다.
상기 “S1P(Sphingosine-1-Phosphate)”는 상기 스핑고리피드의 일 예시이다. 상기 S1P는 sn-1에 탄화수소쇄, sn-3에 극성 헤드를 가지는 화학 구조로, 구체적으로 하기 화학식 1의 구조를 가진다
[화학식 1]
Figure pat00001
상기 S1P는 세포 내에서 다양한 신호전달에 관여할 수 있다. 상기 S1P를 수반하는 다양한 세포 프로세스의 조절은 특히 뉴런 신호전달, 혈관 긴장도, 상처 치유, 면역 세포 트래피킹(trafficking), 생식, 및 심혈관 기능에 대한 특별한 영향이 있을 수 있다. 이러한 시스템 내의 S1P의 내인성 수준의 변경은 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 및 자가면역 질환을 비롯하여 여러 병리생리학적 병태에 대한 지표가 될 수 있다. 따라서, S1P는 여러 병리생태학적 병태, 특히 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역, 또는 골 관련 질환 발생 위험을 진단할 수 있는 바이오마커가 될 수 있다.
본 명세서에서, 상기 스핑고리피드는 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 “S1P”는 전술하였다. 본 명세서에서, S1P는 예를 들어, HDL-S1P(high-density lipoprotein S1P) 및 LDL-S1P(low-density lipoprotein S1P)로부터 S1P를 포함할 수 있다.
상기 “S1P 유사체(S1P analog)”는 상기 S1P와 화학적 구조가 유사한 화합물을 지칭할 수 있다.
예를 들어, 상기 S1P 유사체는 S1P의 sn-1, sn-2 및 sn-3 중 어느 하나 이상의 탄화수소쇄의 C수 (n)가 2 내지 13중 어느 인 구조의 화합물을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
예를 들어, 상기 S1P 유사체는 S1P의 sn-1, sn-2 및 sn-3 중 어느 하나 이상의 원소가 다른 원소로 치환, 부가 또는 삭제된 구조의 화합물일 수 있다. 예를 들어, 상기 S1P 유사체는 S1P의 sn-1, sn-2 및 sn-3 중 어느 하나 이상의 원소가 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자를 가지는 것을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 S1P유사체는 예를 들어, 하기 화학식 2의 구조를 가진다.
[화학식 2]
Figure pat00002
이때, 상기 n은 2 내지 13의 정수로부터 선택되고;
상기 R1은 H, 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자로부터 선택되고;
상기 R2 및 R3 중 어느 하나 이상은 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자로부터 선택되고;
상기 R4는 인산기, 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자로부터 선택될 수 있다.
상기 “S1P 유도체(S1P derivative)”는 S1P 기본 골격에 sn-1, sn-2 및 sn-3 중 어느 하나 이상이 치환된 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 S1P 유도체는 S1P의 sn-1, sn-2 및 sn-3 중 어느 하나 이상의 원소가 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자를 가지는 것을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 S1P 유사체 또는 상기 S1P 유도체는 S1P 합성 과정에서 도출되는 중간 물질 및 결과 물질을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 “항-S1P 작용제(Anti-S1P agent)”는 상기 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상과 특이적으로 반응하는 물질을 포함할 수 있다. 상기 항-S1P 작용제는 상기 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상에 결합하는 임의의 물질일 수 있다. 상기 항-S1P 작용제는 예를 들어, 항체 또는 항체-유래 분자(antibody-derived molecule) 일 수 있다.
상기 "항체"는 항원과 특이적 결합을 하여 항원-항체 반응을 일으키는 물질일 수 있다.
상기 항체는 예를 들어, 마우스 항체, 키메릭 항체, 인간화 항체 및 인간 항체 중 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 항체는 예를 들어, IgG, IgA, IgM, IgE 및 IgD 중 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 "항체-유래 분자"는 임의의 항체, 면역글로불린, 면역글로불린 유전자로부터 발현된 폴리펩타이드, 일부 변형된 면역글로불린 유전자로부터 발현된 폴리펩타이드, 면역글로불린 유전자로부터 일부 변형되어 발현된 폴리펩타이드, 및 이들의 단편 중 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 항체-유래 분자는 항원 또는 에피토프에 결합할 수 있다. 상기 에피토프는 항체의 일 구조인 파라토프와 상호작용할 수 있는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 단편을 지칭할 수 있다. 상기 면역 모이어티는 임의의 항체 또는 면역글로불린을 포함할 수 있다.
상기 항체-유래 분자는 예를 들어, 마우스 항체-유래 분자, 키메릭 항체-유래 분자, 인간화 항체-유래 분자 및 인간 항체-유래 분자 중 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 항체-유래 분자는 예를 들어, Fab(antigen-binding fragment), F(ab)’2, Monospecific Fab2, Bispecific Fab2, Trispecific Fab2, Monovalent Ig, scFv(single-chain variable fragment), Bispecific Diabody, scFv-Fc(single-chain variable fragment-fragment crystallizable), Minibody, IgNAR(immunoglobulin new antigen receptor), V-NAR(Variable-New Antigen Receptor), hcIgG(heavy chain Immunoglobulin G), 및 VhH(variable domain of heavy chain antibody) 중 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 명세서에 의해 개시되는 일 구현예에 따르면,
스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 항-S1P 작용제로,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog), 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하고,
상기 항원 결합 부위는
제1 상보성 결정부 및 제1 프레임워크 영역을 포함하는 중쇄 사슬의 가변부 도메인(variable domain of heavy chain; VH); 및
제 2 상보성 결정부 및 제2 프레임워크 영역을 포함하는 경쇄 사슬의 가변부 도메인(variable domain of light chain; VL); 중 어느 하나 이상을 포함하고,
상기 제1 상보성 결정부는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 중 어느 하나 이상을 포함하고,
상기 제2 상보성 결정부는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 중 어느 하나 이상을 포함하는,
항-S1P 작용제(anti-sphingosine-1-phosphate agent)가 제공될 수 있다.
본 명세서에서"항원 결합 부위"는 가변부 도메인을 포함하는 항-S1P 작용제의 일 영역일 수 있다.
상기 가변부 도메인은 중쇄 사슬의 가변부 도메인 및 경쇄 사슬의 가변부 도메인 중 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 가변부 도메인 및 경쇄 사슬의 가변부 도메인은 각각 분리된 형태일 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 가변부 도메인 및 경쇄 사슬의 가변부 도메인은 각각 분리된 형태로 페어를 이룰 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 가변부 도메인 및 경쇄 사슬의 가변부 도메인은 연결된 형태일 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 가변부 도메인 및 경쇄 사슬의 가변부 도메인은 링커(Linker)에 의하여 연결된 형태로 페어를 이룰 수 있다. 상기 링커는 폴리펩타이드 또는 PEG(Polyethylene glycol)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 "중쇄 사슬의 가변부 도메인(variable domain of heavy chain; VH)"은 제1 상보성 결정부 및 제1 프레임워크 영역을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 “경쇄 사슬의 가변부 도메인(variable domain of light chain; VL)"은 제2 상보성 결정부 및 제2 프레임워크 영역을 포함할 수 있다.
상기 제1 프레임워크 영역은 FRH1, FRH2, FRH3 및 FRH4 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 제2 프레임워크 영역은 FRL1, FRL2, FRL3 및 FRL4 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 제1 상보성 결정부는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 제2 상보성 결정부는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 프레임워크 영역(frame work region; FR)은 상기 상보성 결정부에 연결된(flanked) 것일 수 있다.
상기 상보성 결정부(Complementarity-determining region; CDR)는 상기 중쇄 사슬의 가변부 도메인 및 상기 경쇄 사슬의 가변부 도메인 중 어느 하나 이상에 포함된 일 영역일 수 있다. 상기 상보성 결정부는 아미노산 배열이 비교적 뚜렷하게 변동하는 영역으로, 초가변 영역 (hypervaiiable region; HV)으로 지칭될 수 있다. 상기 상보성 결정부는 항원-항체 간 결합력(avidity)을 결정하는 주요 영역일 수 있다. 상기 상보성 결정부는 항원-항체 반응에 있어 친화성(affinity)을 결정하는 주요 영역일 수 있다. 상기 상보성 결정부는 항원-항체간 결합 특이성(specificity)을 결정하는 주요 영역일 수 있다.
상기 상보성 결정부는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 중 어느 하나 이상을 포함하는 제1 상보성 결정부; 및
CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 중 어느 하나 이상을 포함하는 상기 제2 상보성 결정부; 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 중 어느 하나 이상을 포함하는 상기 상보성 결정부는 상기 항원 결합 부위를 형성할 수 있다.
상기 프레임워크 영역과 상기 상보성 결정부는 1차 구조상, 서로 어긋매김으로 위치할 수 있다. 예를 들어, 상기 CDRH1은 상기 FRH1 및 상기 FRH2 사이에 존재할 수 있다. 또한 예를 들어, 상기 제1 프레임워크 영역과 상기 제1 상보성 결정부는 FRH1-CDRH1-FRH2-CDRH2-FRH3-CDRH3-FRH4의 1차 구조를 형성할 수 있다. 예를 들어, 상기 제2 프레임워크 영역과 상기 제2 상보성 결정부는 FRL1-CDRL1-FRL2-CDRL2-FRL3-CDRL3-FRL4의 1차 구조를 형성할 수 있다.
상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 중 어느 하나 이상의 상기 상보성 결정부는 항원-항체 특이적 결합 영역일 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 일 실시예에 의하면,
상기 CDRH1은
D, G, N 및 S 중 어느 하나로부터 선택되는 제1 CDRH1 아미노산;
H 또는 Y로부터 선택되는 제2 CDRH1 아미노산;
A, G, S 및 T 중 어느 하나로부터 선택되는 제3 CDRH1 아미노산;
I 또는 M으로부터 선택되는 제4 CDRH1 아미노산; 및
H 인 제5 CDRH1 아미노산; 중 어느 하나 이상의 서열을 포함한다.
예를 들어, 상기 CDRH1은 상기 제1 CDRH1아미노산 내지 상기 제 5 CDRH1아미노산 서열에서 선택되는 1개 서열; 2개 서열의 조합; 3개 서열의 조합; 4개 서열의 조합; 또는 5개 서열의 조합; 을 포함할 수 있다.
상기 CDRH2는
A 인 제1 CDRH2 아미노산;
I인 제2 CDRH2 아미노산;
N, S, T 및 Y 중 어느 하나로부터 선택되는 제3 CDRH2 아미노산;
P인 제4 CDRH2 아미노산;
G, R 및 S 중 어느 하나로부터 선택되는 제5 CDRH2 아미노산;
D, H 및 N 중 어느 하나로부터 선택되는 제6 CDRH2 아미노산;
D 또는 G로부터 선택되는 제7 CDRH2 아미노산;
N 또는 I로부터 선택되는 제8 CDRH2 아미노산;
T 인 제9 CDRH2 아미노산;
K 또는 N으로부터 선택되는 제10 CDRH2 아미노산;
Y인 제11 CDRH2 아미노산;
N인 제12 CDRH2 아미노산;
E인 제13 CDRH2 아미노산;
K 또는 M으로부터 선택되는 제14 CDRH2 아미노산;
F인 제15 CDRH2 아미노산;
K 또는 R으로부터 선택되는 제16 CDRH2 아미노산; 및
G인 제17 CDRH2 아미노산; 중 어느 하나 이상의 서열을 포함한다.
예를 들어, 상기 CDRH2은 상기 제1 CDRH2 아미노산 내지 상기 제 17 CDRH2 아미노산 서열에서 선택되는 1개 서열; 2개 서열의 조합; 3개 서열의 조합; 4개 서열의 조합; 5개 서열의 조합; 6개 서열의 조합; 7개 서열의 조합; 8개 서열의 조합; 9개 서열의 조합; 10개 서열의 조합; 11개 서열의 조합; 12개 서열의 조합; 13개 서열의 조합; 14개 서열의 조합; 15개 서열의 조합; 16개 서열의 조합; 또는 17개 서열의 조합; 을 포함할 수 있다.
상기 CDRH3는
A인 제1 CDRH3 아미노산;
R인 제2 CDRH3 아미노산;
A 또는 G 으로부터 선택되는 제3 CDRH3 아미노산;
A 또는 G 으로부터 선택되는 제4 CDRH3 아미노산;
F 또는 Y로부터 선택되는 제5 CDRH3 아미노산;
Y인 제6 CDRH3 아미노산;
A, G, S 및 T 중 어느 하나로부터 선택되는 제7 CDRH3 아미노산;
S인 제8 CDRH3 아미노산;
S 또는 T로부터 선택되는 제9 CDRH3 아미노산;
I인 제10 CDRH3 아미노산;
W인 제11 CDRH3 아미노산;
F인 제12 CDRH3 아미노산;
D인 제13 CDRH3 아미노산; 및
F 또는 Y로부터 선택되는 제14 CDRH3 아미노산; 중 어느 하나 이상의 서열을 포함한다.
예를 들어, 상기 CDRH3은 상기 제1 CDRH3 아미노산 내지 상기 제 14 CDRH3 아미노산 서열에서 선택되는 1개 서열; 2개 서열의 조합; 3개 서열의 조합; 4개 서열의 조합; 5개 서열의 조합; 6개 서열의 조합; 7개 서열의 조합; 8개 서열의 조합; 9개 서열의 조합; 10개 서열의 조합; 11개 서열의 조합; 12개 서열의 조합; 13개 서열의 조합; 또는 14개 서열의 조합; 을 포함할 수 있다.
상기 CDRL1는
I 또는 L로부터 선택되는 제1 CDRL1 아미노산;
S 또는 T 로부터 선택되는 제2 CDRL1 아미노산;
S 또는 T 로부터 선택되는 제3 CDRL1 아미노산;
S 또는 T 로부터 선택되는 제4 CDRL1 아미노산;
D인 제5 CDRL1 아미노산;
I인 제6 CDRL1 아미노산;
D인 제7 CDRL1 아미노산;
D 또는 N인 제8 CDRL1 아미노산;
D, N 및 Y 중 어느 하나로부터 선택되는 제9 CDRL1 아미노산;
L 또는 M으로부터 선택되는 제10 CDRL1 아미노산; 및
N인 제11 CDRL1 아미노산; 중 어느 하나 이상의 서열을 포함한다.
예를 들어, 상기 CDRL1은 상기 제1 CDRL1 아미노산 내지 상기 제11 CDRL1 아미노산 서열에서 선택되는 1개 서열; 2개 서열의 조합; 3개 서열의 조합; 4개 서열의 조합; 5개 서열의 조합; 6개 서열의 조합; 7개 서열의 조합; 8개 서열의 조합; 9개 서열의 조합; 10개 서열의 조합; 또는 11개 서열의 조합; 을 포함할 수 있다.
상기 CDRL2는
D 또는 E로부터 선택되는 제1 CDRL2 아미노산;
A 또는 G로부터 선택되는 제2 CDRL2 아미노산;
N 또는 S로부터 선택되는 제3 CDRL2 아미노산;
I인 제4 CDRL2 아미노산;
L인 제5 CDRL2 아미노산;
Q 또는 R인 제6 CDRL2 아미노산; 및
P 또는 S인 제7 CDRL2 아미노산; 중 어느 하나 이상의 서열을 포함한다.
예를 들어, 상기 CDRL2은 상기 제1 CDRL2 아미노산 내지 상기 제7 CDRL2 아미노산 서열에서 선택되는 1개 서열; 2개 서열의 조합; 3개 서열의 조합; 4개 서열의 조합; 5개 서열의 조합; 6개 서열의 조합; 또는 7개 서열의 조합; 을 포함할 수 있다.
상기 CDRL3는
L 또는 Q로부터 선택되는 제1 CDRL3 아미노산;
Q인 제2 CDRL3 아미노산;
G 또는 S로부터 선택되는 제3 CDRL3 아미노산;
A, D, S 및 Y 중 어느 하나로부터 선택되는 제4 CDRL3 아미노산;
N 또는 S로부터 선택되는 제5 CDRL3 아미노산;
L인 제6 CDRL3 아미노산;
P인 제7 CDRL3 아미노산;
F인 제8 CDRL3 아미노산; 및
T인 제9 CDRL3 아미노산; 중 어느 하나 이상의 서열을 포함한다.
예를 들어, 상기 CDRL3은 상기 제1 CDRL3 아미노산 내지 상기 제9 CDRL3 아미노산 서열에서 선택되는 1개 서열; 2개 서열의 조합; 3개 서열의 조합; 4개 서열의 조합; 5개 서열의 조합; 6개 서열의 조합; 7개 서열의 조합; 8개 서열의 조합; 또는 9개 서열의 조합; 을 포함할 수 있다.
상기 아미노산 1글자 코드(amino acid one letter code)는 통상의 기술자에게, 알라닌(Alanine; Ala; A), 아르기닌(Arginine; Arg; R), 아스파라긴(Asparagine; Asn; N), 아스파라트산(Aspartic acid; Asp; D), 시스테인(Cysteine; Cys; C), 글루탐산(Glutamic acid; Glu; E), 글루타민(Glutamine; Gln; Q), 글리신(Glycine; Gly; G), 히스티딘(Histidine; His; H), 이소류신(Isoleucine; Ile; I), 류신(Leucine; Leu; L), 리신(Lysine; Lys; K), 메티오닌(Methionine; Met; M), 페닐알라닌(Phenylalanine; Phe; F), 프롤린(Proline; Pro; P), 세린(Serine; Ser; S), 트레오닌(Threonine; Thr; T), 트립토판(Tryptophan; Trp; W), 타이로신(Tyrosine; Tyr; Y) 또는 발린(Valine; Val; V) 중 어느 하나로 이해될 것이다.
상기 각 아미노산은 IUPAC 지정 유전 암호표(universal genetic code)에 의하여,
알라닌(Alanine; Ala; A)은 GCN 핵산서열;
아르기닌(Arginine; Arg; R)은 MGN, CGY, CGN 및 AGR 중 어느 하나의 핵산서열;
아스파라긴(Asparagine; Asn; N)은 AAY 핵산서열;
아스파라트산(Aspartic acid; Asp; D)은 GAY 핵산서열;
시스테인(Cysteine; Cys; C)은 TGY 핵산서열;
글루탐산(Glutamic acid; Glu; E)은 GAR 핵산서열;
글루타민(Glutamine; Gln; Q)은 CAR 핵산서열;
글리신(Glycine; Gly; G)은 GGN 핵산서열;
히스티딘(Histidine; His; H)은 CAY 핵산서열;
이소류신(Isoleucine; Ile; I)은 ATH 핵산서열;
류신(Leucine; Leu; L)은 YTR, CTY, CTN 및 TTR 중 어느 하나의 핵산서열;
리신(Lysine; Lys; K)은 AAR 핵산서열;
메티오닌(Methionine; Met; M)은 ATG 핵산서열;
페닐알라닌(Phenylalanine; Phe; F)은 TTY 핵산서열;
프롤린(Proline; Pro; P)은 CCN 핵산서열;
세린(Serine; Ser; S)은 TCN 또는 AGY 핵산서열;
트레오닌(Threonine; Thr; T)은 CAN 핵산서열;
트립토판(Tryptophan; Trp; W)은 TGG 핵산서열;
타이로신(Tyrosine; Tyr; Y)은 TAY; 또는
발린(Valine; Val; V)은 GTN; 중 어느 하나이고,
상기 핵산서열의 N은 핵산 A, C, G 및 T 중 어느 하나이고;
상기 핵산서열의 M은 핵산 A 또는 C이고;
상기 핵산서열의 Y는 핵산 C 또는 T이고;
상기 핵산서열의 R은 핵산 A 또는 G이고;
상기 핵산서열의 H는 핵산 A, C 및 T 중 어느 하나; 인 것으로 이해될 것이다.
상기 제1 CDRH1 아미노산은 5'-RRC-3' 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제2 CDRH1 아미노산은 5’-YAT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제3 CDRH1 아미노산은 5’-RST-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제4 CDRH1 아미노산은 5’-ATK-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제5 CDRH1 아미노산은 5’-CAC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제1 CDRH2 아미노산은 5’-GCT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제2 CDRH2 아미노산은 5’-ATT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제3 CDRH2 아미노산은 5’-WMT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제4 CDRH2 아미노산은 5’-CCC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제5 CDRH2 아미노산은 5’-VGT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제6 CDRH2 아미노산은 5’-VAT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제7 CDRH2 아미노산은 5’-GRT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제8 CDRH2 아미노산은 5’-AWT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제9 CDRH2 아미노산은 5’-ACT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제10 CDRH2 아미노산은 5’-AAW-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제11 CDRH2 아미노산은 5’-TAC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제12 CDRH2 아미노산은 5’-AAT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제13 CDRH2 아미노산은 5’-GAG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제14 CDRH2 아미노산은 5’-AWG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제15 CDRH2 아미노산은 5’-TTC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제16 CDRH2 아미노산은 5’-ARG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제17 CDRH2 아미노산은 5’-GGC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제1 CDRH3 아미노산은 5’-GCG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제2 CDRH3 아미노산은 5’-AGA-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제3 CDRH3 아미노산은 5’-GSG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제4 CDRH3 아미노산은 5’-GSG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제5 CDRH3 아미노산은 5’-TWC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제6 CDRH3 아미노산은 5’-TAC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제7 CDRH3 아미노산은 5’-RST-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제8 CDRH3 아미노산은 5’-AGT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제9 CDRH3 아미노산은 5’-AST-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제10 CDRH3 아미노산은 5’-ATC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제11 CDRH3 아미노산은 5’-TGG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제12 CDRH3 아미노산은 5’-TTT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제13 CDRH3 아미노산은 5’-GAC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제14 CDRH3 아미노산은 5’-TWT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제1 CDRL1 아미노산은 5’-MTA-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제2 CDRL1 아미노산은 5’-ASC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제3 CDRL1 아미노산은 5’-ASC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제4 CDRL1 아미노산은 5’-AST-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제5 CDRL1 아미노산은 5’-GAT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제6 CDRL1 아미노산은 5’-ATT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제7 CDRL1 아미노산은 5’-GAT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제8 CDRL1 아미노산은 5’-RAT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제9 CDRL1 아미노산은 5’-DAT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제10 CDRL1 아미노산은 5’-MTG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제11 CDRL1 아미노산은 5’-AAC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제1 CDRL2 아미노산은 5’-GAW-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제2 CDRL2 아미노산은 5’-GSC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제3 CDRL2 아미노산은 5’-ART-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제4 CDRL2 아미노산은 5’-ATT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제5 CDRL2 아미노산은 5’-CTT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제6 CDRL2 아미노산은 5’-CRA-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제7 CDRL2 아미노산은 5’-YCT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제1 CDRL3 아미노산은 5’-CWG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제2 CDRL3 아미노산은 5’-CAG-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제3 CDRL3 아미노산은 5’-RGT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제4 CDRL3 아미노산은 5’-KMT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제5 CDRL3 아미노산은 5’-ARC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제6 CDRL3 아미노산은 5’-TTA-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제7 CDRL3 아미노산은 5’-CCA-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제8 CDRL3 아미노산은 5’-TTC-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 제9 CDRL3 아미노산은 5’-ACT-3’ 핵산서열로부터 발현될 수 있다.
상기 핵산서열은 IUPAC 지정 유전 암호표(universal genetic code)에 의하여,
상기 핵산서열의 N은 핵산 A, C, G 및 T 중 어느 하나이고;
상기 핵산서열의 R은 핵산 A 또는 G이고;
상기 핵산서열의 Y는 핵산 C 또는 T이고;
상기 핵산서열의 S는 핵산 C 또는 G이고;
상기 핵산서열의 K는 핵산 G 또는 T이고;
상기 핵산서열의 W는 핵산 A 또는 T이고;
상기 핵산서열의 M은 핵산 A 또는 C이고;
상기 핵산서열의 D는 핵산 A, G 및 T 중 어느 하나; 인 것으로 이해될 것이다.
본 명세서에 의해 개시되는 다른 실시예에 의하면,
상기 CDRH1은 서열번호 1 내지 3번 중 어느 하나의 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRH2는 서열번호 4 내지 8번 중 어느 하나의 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRH3은 서열번호 9 내지 11번 중 어느 하나의 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRL1은 서열번호 12 내지 15번 중 어느 하나의 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRL2는 서열번호 16 내지 20번 중 어느 하나의 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRL3은 서열번호 21 내지 26번 중 어느 하나의 아미노산 서열일 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는 상기 서열번호 1 내지 26 중 어느 하나 이상으로부터 선택되는 CDR의 일 영역에 의하여, 항원 결합 부위를 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 또다른 실시예에 의하면,
상기 CDRH1은 서열번호 1번 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRH2는 서열번호 5번 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRH3은 서열번호 10번 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRL1은 서열번호 12번 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRL2는 서열번호 18번 아미노산 서열일 수 있다.
상기 CDRL3은 서열번호 21번 아미노산 서열일 수 있다.
일 예로,
상기 항-S1P 작용제는,
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 10번, 서열번호 12번, 서열번호 18번, 및 서열번호 21번 중 어느 하나 이상에서 선택되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는,
상기 서열번호 1번 및 서열번호 5번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번 및 서열번호 10번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번 및 서열번호 12번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번 및 서열번호 10번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번 및 서열번호 12번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 10번 및 서열번호 12번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 10번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 10번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 12번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 12번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열; 및
상기 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열; 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는,
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번 및 서열번호 10번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번 및 서열번호 12번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 10번 및 서열번호 12번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 10번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 10번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 12번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 12번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 10번 및 서열번호 12번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 10번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 10번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 12번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 12번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 10번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 12번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열; 및
상기 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열; 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는,
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 10번 및 서열번호 12번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 10번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 10번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 12번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 12번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 10번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 12번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 10번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 5번, 서열번호 12번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열; 및
상기 서열번호 10번, 서열번호 12번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열; 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는,
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 18번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 10번, 서열번호 12번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 10번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 12번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열;
상기 서열번호 1번, 서열번호 10번, 서열번호 12번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열; 및
상기 서열번호 5번, 서열번호 10번, 서열번호 12번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열; 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는, 상기 서열번호 1번, 서열번호 5번, 서열번호 10번, 서열번호 12번, 서열번호 18번 및 서열번호 21번의 조합인 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 개시하는 다른 구현예에 따르면,
스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region); 및
불변부 도메인(constant region); 을 포함하는
항-S1P 작용제가 제공될 수 있다.
상기 "항원 결합 부위"에 대한 설명은 전술하였다.
상기 불변부 도메인은
중쇄 사슬의 공통 영역(constant region of heavy chain; CH); 및
경쇄 사슬의 공통 영역(constant region of heavy chain; CL); 중 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 공통 영역은 CH1, CH2 및 CH3 중 어느 하나 이상일 수 있다. 예를 들어, 중쇄 사슬의 공통 영역은 CH1 및 CH2 일 수 있다. 또는 예를 들어, 중쇄 사슬의 공통 영역은 CH1, CH2 및 CH3 일 수 있다.
본 명세서에 있어서, 상기 불변부 도메인은 Fc영역을 포함할 수 있다.
상기 Fc 영역(fragment crystallizable region; Fc region)은 항원 결합 부위를 가지지 않는 영역일 수 있다.
상기 Fc영역은 Protein A에 의하여 특이적 결합을 형성하는 영역일 수 있다. 상기 Fc영역과 상기 Protein A의 특이적 결합은 상기 항-S1P 작용제의 분리, 정제 또는 검출에 이용될 수 있다.
상기 Fc영역은 2차 항체에 의하여 특이적 결합을 형성하는 영역일 수 있다. 상기 Fc영역과 상기 2차 항체의 특이적 결합은 상기 항-S1P 작용제의 분리, 정제 또는 검출에 이용될 수 있다.
가변부 도메인; 및 불변부 도메인;을 포함하는 상기 항-S1P 작용제에 있어서,
상기 중쇄 사슬의 가변부 도메인은 상기 중쇄 사슬의 불변부 도메인과 연결되는 구조를 포함할 수 있다.
상기 경쇄 사슬의 가변부 도메인은 상기 경쇄 사슬의 불변부 도메인과 연결되는 구조를 포함할 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 불변부 도메인 및 경쇄 사슬의 불변부 도메인은 각각 분리된 형태일 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 불변부 도메인 및 경쇄 사슬의 불변부 도메인은 각각 분리된 형태로 페어를 이룰 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 불변부 도메인 및 경쇄 사슬의 불변부 도메인은 링커(Linker)에 의하여 페어를 이룰 수 있다. 상기 링커는 폴리펩타이드 또는 PEG(Polyethylene glycol)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 중쇄 사슬의 불변부 도메인과 상기 경쇄 사슬의 불변부 도메인은 화학 결합에 의하여 페어를 이룰 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 불변부 도메인과 상기 경쇄 사슬의 불변부 도메인은 화학 결합에 의하여 페어를 이룰 수 있다. 예를 들어, 상기 화학 결합은 이황화 결합(disulfide linkage)일 수 있다.
상기 중쇄 사슬의 불변부 도메인 및 경쇄 사슬의 불변부 도메인의 연결에 의하여, 각각에 연결된 상기 중쇄 사슬의 가변부 도메인 및 상기 경쇄 사슬의 가변부 도메인이 페어를 이룰 수 있다.
상기 불변부 도메인을 더 포함하는 항-S1P 작용제는 IgG, IgA, IgM, IgE 및 IgD 중 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 개시하는 또다른 구현예에 따르면,
스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region); 및
표지자(reporter); 를 포함하는
항-S1P 작용제가 제공될 수 있다.
본 명세서에서 개시하는 또다른 구현예에 따르면,
스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region);
불변부 도메인(constant region); 및
표지자(reporter); 를 포함하는
항-S1P 작용제가 제공될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 직접적으로 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 간접적으로 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 포함된 링커(Linker)에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 포함된 화학 결합을 형성하는 원자에 연결될 수 있다.
일 예로, 상기 표지자는 항-S1P 작용제의 일 영역에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 불변부도메인에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 Fc 영역에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 가변부도메인에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 프레임워크 영역에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 N-말단에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 C-말단에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 일 펩타이드에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 폴리펩타이드에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 방사성 또는 중(heavy) 동위원소일 수 있는 동위원소 표지; 자성 표지 (예로, 자석 입자); 산화환원반응성 모이어티; 광학성 염료 (예로, 발색단, 금, 은, 유로피움, 퀀텀닷, 형광 단백질); 효소기 (예로, 호스래디쉬 퍼옥시다제, 베타-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼린 포스파타제); 바이오티닐화기; 및 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩타이드 에피토프 (예로, 루이신지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속결합 도메인, 에피토프 태그 등,) 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 단백질을 표지하는 다양한 방법이 기술분야에 공지되어 있으며, 본 발명의 수행에 사용될 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 다른 양태에 따르면, 새로운 항-S1P 작용제의 생산 방법이 제공될 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 일 구현예에 따르면,
스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 항-S1P 작용제 생산 방법으로,
상기 항-S1P 작용제를 암호화하는 서열번호 27 내지 32번 중 어느 하나 이상의 핵산 서열이 주입된 세포로부터 상기 항-S1P 작용제를 발현시키는 것; 및
상기 발현된 항-S1P 작용제를 정제하는 것; 을 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는,
항-S1P 작용제 생산 방법이 제공될 수 있다.
본 명세서에서, 상기 항-S1P 작용제를 암호화하는 상기 핵산 서열에 대한 정보는 파지 디스플레이 라이브러리(phage display library) 또는 하이브리도마(Hybridoma)를 스크리닝하여 획득한 것일 수 있다.
상기 파지 디스플레이 라이브러리(phage display library)를 이용하여 상기 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 항-S1P 작용제를 스크리닝할 수 있다.
상기 하이브리도마를 이용하여 상기 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상에 대한 항-S1P 작용제를 생산하는 잡종 세포를 스크리닝 할 수 있다.
상기 하이브리도마를 이용하여 상기 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 항-S1P 작용제를 스크리닝할 수 있다.
본 명세서에서, 상기 "세포"는 원핵생물세포 또는 진핵생물세포 일 수 있다.
상기 원핵생물세포는 대장균 세포일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 진핵생물세포는 균류, 곤충, 식물, 동물 세포일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 균류는 효모(Yeast)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 동물 세포는 CHO세포 또는 인간 세포일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, 상기 "핵산 서열 주입"은
형질전환(transformation);
형질도입(transduction); 및
형질주입(transfection); 중 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 핵산 서열 주입은 리포좀, 플라스미드, 바이러스 벡터, 나노파티클(nanoparticles), 아데노 연관 바이러스(AAV), 렌티바이러스, 아데노바이러스 또는 다른 플라스미드 또는 바이러스 벡터 유형을 사용하여 주입하는 것일 수 있다.
벡터는 바이러스 벡터 또는 재조합 바이러스 벡터일 수 있다.
상기 바이러스는 DNA 바이러스 또는 RNA 바이러스일 수 있다.
이때, 상기 DNA 바이러스는 이중가닥 DNA(dsDNA) 바이러스 또는 단일가닥 DNA(ssDNA) 바이러스 일 수 있다.
이때, 상기 RNA 바이러스는 단일가닥 RNA(ssRNA) 바이러스일 수 있다.
상기 바이러스는 레트로바이러스, 렌티바이러스, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스(AAV), 백시니아바이러스, 폭스바이러스 또는 단순포진 바이러스일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 주입은 전기천공법, 유전자총, 초음파천공법, 자기주입법(magnetofection), 지질-매개 형질감염, 덴드리머, 나노입자, 인산칼슘, 실리카, 실리케이트(오르모실) 또는 이의 조합의 방법으로 대상 세포 내로 전달 또는 도입하는 것일 수 있다.
본 명세서에서, 상기"항-S1P 작용제 발현"은 서열번호 27 내지 32번 중 어느 하나 이상의 핵산 서열이 주입된 세포의 전사, 전사 후 가공, 번역, 및 번역 후 변형 중 어느 하나 이상의 시스템을 이용하여 상기 항-S1P 작용제를 생산 하는 것을 포함할 수 있다.
상기 "정제"는 상기 세포로부터 발현된 상기 항-S1P 작용제를 수득하는 것을 포함한다. 상기 정제는 세포를 용해하여 세포질에 존재하는 상기 항-S1P 작용제를 수득하는 것일 수 있다. 또는 상기 정제는 상기 세포의 배양액으로부터 상기 항-S1P 작용제를 수득하는 것일 수 있다.
상기 정제는 상기 항-S1P 작용제를 보다 순도 높게 수득하기 위하여, 별도의 공정을 부가하는 것을 포함할 수 있다.
상기 별도의 공정은 크로마토그래피법을 이용한 정제일 수 있다.
상기 "정제 방법"은 상기 크로마토그래피법을 이용한 것일 수 있다.
상기 크로마토그래피는 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)일 수 있다.
상기 친화성 크로마토그래피는
단백질 L 친화성 크로마토그래피(Protein L affinity chromatography);
고정화 금속 친화성 크로마토그래피(immobilized metal ion affinity chromatography);
단백질 A 친화성 크로마토그래피(Protein A affinity chromatography); 및
단백질 G 친화성 크로마토그래피(Protein G affinity chromatography); 중 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 크로마토그래피법 외에 다른 공정 단계를 부과할 수 있다.
예를 들어, 원심분리, 초원심분리 또는 필터 여과를 이용한 정제 공정이 상기 크로마토그래피법의 전 또는 후에 부가될 수 있다.
상기 항-S1P 작용제 생산 방법에 의하여 IgG, IgA, IgM, IgE, IgD, Fab(antigen-binding fragment), F(ab)’2, Monospecific Fab2, Bispecific Fab2, Trispecific Fab2, Monovalent Ig, scFv(single-chain variable fragment), Bispecific Diabody, scFv-Fc(single-chain variable fragment-fragment crystallizable), Minibody, IgNAR(immunoglobulin new antigen receptor), V-NAR(Variable-New Antigen Receptor), hcIgG(heavy chain Immunoglobulin G), 및 VhH(variable domain of heavy chain antibody) 중 어느 하나 이상이 제공될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 명세서에 의해 개시되는 다른 구현예에 따르면,
스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region); 및
표지자(reporter); 를 포함하는
항-S1P 작용제 생산 방법이 제공될 수 있다.
상기 항-S1P 작용제를 생산하기 위하여, 공지의 방법을 이용하여 표지자를 부착할 수 있다. 상기 공지의 방법은 일 예로, 상기 항-S1P 작용제에 표지자를 융합하는 방법일 수 있다. 다른 예로, 상기 항-S1P 작용제를 합성 시 표지자를 배지에 추가하는 방법일 수 있다. 또 다른 예로, 상기 항-S1P 작용제에 대한 핵산 서열 및 상기 표지자에 대한 핵산 서열로부터 상기 표지자를 부착한 상기 항-S1P 작용제를 합성하는 방법일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 의해 개시되는 일 실시예에 의하면,
상기 표지자를 암호화하는 핵산 서열인 제1 핵산 서열; 및 상기 항-S1P 작용제를 암호화하는 서열번호 27 내지 32번 중 어느 하나 이상의 핵산 서열인 제2 핵산 서열; 을 포함하는 핵산 서열이 주입된 세포로부터 상기 표지자를 포함하는 항-S1P 작용제를 발현시키고; 및
상기 발현된 표지자를 포함하는 항-S1P 작용제를 정제하는 것; 을 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는,
표지자를 포함하는 항-S1P 작용제 생산 방법이 제공될 수 있다.
상기 표지자을 암호화하는 핵산 서열인 제1 핵산 서열은 상기 항-S1P 작용제를 암호화하는 서열번호 27 내지 32번 중 어느 하나 이상의 핵산 서열인 제2 핵산 서열에 직접적으로 연결될 수 있다.
상기 표지자을 암호화하는 핵산 서열인 제1 핵산 서열은 상기 항-S1P 작용제를 암호화하는 서열번호 27 내지 32번 중 어느 하나 이상의 핵산 서열인 제2 핵산 서열에 간접적으로 연결될 수 있다. 예를 들어, 상기 제1 핵산 서열은 링커(linker)를 매개로 제2 핵산 서열에 연결될 수 있다. 상기 링커는 폴리펩타이드 또는 PEG를 암호화하는 핵산 서열일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 제1 핵산은 서열 산화환원반응성 모이어티; 광학성 염료; 효소기; 바이오티닐화기; 및 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩타이드 에피토프를 암호화하는 핵산 서열을 포함할 수 있다.
상기 1 핵산 서열; 및 상기 제2 핵산 서열; 을 포함하는 핵산 서열의 발현 결과 생산된 상기 표지자를 포함하는 항-S1P 작용제가 생산될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 직접적으로 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 간접적으로 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 포함된 링커(Linker)에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 포함된 화학 결합을 형성하는 원자에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 불변부도메인에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 가변부도메인에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 프레임워크 영역에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 N-말단에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 C-말단에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 일 펩타이드에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 폴리펩타이드에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 산화환원반응성 모이어티; 광학성 염료; 효소기; 바이오티닐화기; 및 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩타이드 에피토프를 포함할 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 다른 실시예에 의하면,
상기 항-S1P 작용제; 및
상기 표지자; 를 연결하는 것을 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는,
표지자를 포함하는 항-S1P 작용제 생산 방법이 제공될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 직접적으로 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 간접적으로 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 포함된 링커(Linker)에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제에 포함된 화학 결합을 형성하는 원자에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 불변부도메인에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 Fc 영역에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 가변부도메인에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 프레임워크 영역에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 N-말단에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 C-말단에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 일 펩타이드에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 항-S1P 작용제의 폴리펩타이드에 연결될 수 있다.
상기 표지자는 방사성 또는 중(heavy) 동위원소일 수 있는 동위원소 표지; 자성 표지 (예로, 자석 입자); 산화환원반응성 모이어티; 광학성 염료 (예로, 발색단, 금, 은, 유로피움, 퀀텀닷, 형광 단백질); 효소기 (예로, 호스래디쉬 퍼옥시다제, 베타-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼린 포스파타제); 바이오티닐화기; 및 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩타이드 에피토프 (예로, 루이신지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속결합 도메인, 에피토프 태그 등,) 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 의해 개시되는 또다른 양태에 따르면, 면역 진단 키트가 제공될 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 일 구현예에 따르면,
플레이트;
대조군; 및
항-S1P 작용제; 를 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는
서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는 스핑고리피드(sphingo-lipid)에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하고,
상기 대조군은 스핑고리피드를 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog)및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는,
면역 진단 키트가 제공될 수 있다.
상기 면역 진단 키트에 있어서,
상기 항-S1P 작용제의
상기 CDRH1은 서열번호 1번;
상기 CDRH2는 서열번호 5번;
상기 CDRH3은 서열번호 10번;
상기 CDRL1은 서열번호 12번;
상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
상기 CDRL3은 서열번호 21번; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
면역 진단 키트일 수 있다.
상기 "플레이트"는 면역 진단 키트를 구성하는 일 요소로써, 항원항체반응이 일어나는 공간을 제공해 주는 것일 수 있다. 상기 플레이트는 항-S1P 작용제 또는 대조군 내 경쟁자 항원과 직접적 또는 간접적으로 접촉하여 고정될 수 있도록 지지체의 역할을 제공해 주는 것일 수 있다. 상기 플레이트는 항-S1P 작용제 또는 대조군이 도포 되는 것일 수 있다. 상기 플레이트는 시료가 도포 되는 것일 수 있다. 상기 플레이트는 폴리스티렌, 폴리프로피렌, 폴리카보네이트, 또는 나일론과 같은 고분자 물질로 구성될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 플레이트는 나이트로 셀룰로우즈, 셀룰로우즈, 셀룰로우즈 아세테이트, 폴리에틸렌 등의 각종 합성 중합체로 구성될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
상기 플레이트는 지지 부재를 더 포함할 수 있다. 상기 지지 부재는 상기 플레이트와 직접적 또는 간접적으로 접촉하여 항-S1P 작용제 또는 대조군 내 경쟁자 항원이 고정될 수 있도록 지지체의 역할을 제공해 주는 것일 수 있다. 상기 지지 부재는 유리, 다당류, 폴리아크릴아미드, 폴리스티렌, 폴리비닐 알코올, 실리콘 또는 단백질 분자로 구성될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 면역 진단 키트는
엘라이자(enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA) 키트 또는 현장현시검사(point-of-care testing; POCT) 키트 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 의해 개시되는 일 실시예에 의하면,
상기 대조군 내 경쟁자는 상기 플레이트의 일 영역에 연결되고; 및
상기 항-S1P 작용제는 표지자가 연결된 것을 포함하는;
면역 진단 키트가 제공될 수 있다.
상기 플레이트의 일 영역에 연결은 직접적 연결 또는 간접적 연결일 수 있다.
예를 들어, 상기 직접적 연결은 상기 플레이트의 일 영역과 상기 대조군 내 경쟁자의 일 영역이 공유결합적으로 연결된 것일 수 있다.
예를 들어, 상기 간접적 연결은 상기 플레이트의 일 영역과 상기 대조군 내 경쟁자의 일 영역이 링커를 매개하여 연결된 것일 수 있다.
상기 표지자는 디바이스 또는 육안에 의하여 검출될 수 있다.
상기 디바이스는 상기 면역 진단 키트 내 표지자로부터 발생하는 신호를 검출할 수 있다.
상기 디바이스는
대조군 내 경쟁자가 연결된 면역 진단용 플레이트;
항-S1P 작용제에 연결된 표지자의 신호를 검출하는 검출부; 및
상기 검출부를 통해 검출된 신호를 분석하여 면역 진단 결과를 판단하는 제어부;
를 포함할 수 있다.
상기 검출부에서 검출하는 상기 신호는 광신호일 수 있다.
상기 면역 진단은 시료 내 바이오마커의 유무 확인 및/또는 정량적 확인일 수 있다. 상기 면역 진단은 시료 내 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상의 유무 확인 및/또는 정량적 확인일 수 있다. 상기 면역 진단은 다양한 병리생태학적 병태 발생 위험도에 대한 진단일 수 있다. 상기 병리생태학적 병태는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 및 골질환 중 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 골질환은 골절 또는 골다공증일 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 다른 실시예에 의하면,
상기 항-S1P 작용제는 상기 플레이트의 일 영역에 연결되고; 및
상기 대조군 내 경쟁자는 표지자가 연결된 것을 포함하는;
면역 진단 키트가 제공될 수 있다.
상기 플레이트의 일 영역에 연결은 직접적 연결 또는 간접적 연결일 수 있다.
예를 들어, 상기 직접적 연결은 상기 플레이트의 일 영역과 상기 항-S1P 작용제의 일 영역이 공유결합적으로 연결된 것일 수 있다.
예를 들어, 상기 간접적 연결은 상기 플레이트의 일 영역과 상기 항-S1P 작용제의 일 영역이 링커를 매개하여 연결된 것일 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는 이의 N-말단 부근에서 상기 플레이트의 일 영역에 연결될 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는 이의 C-말단 부근에서 상기 플레이트의 일 영역에 연결될 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는 이의 중쇄 영역의 가변부 도메인 및/또는 경쇄 영역의 가변부 도메인 외의 추가적인 도메인 부근에서 상기 플레이트의 일 영역에 연결될 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는 이의 중쇄 영역의 불변부 도메인 및/또는 경쇄 영역의 불변부 도메인 부근에서 상기 플레이트의 일 영역에 연결될 수 있다.
상기 항-S1P 작용제는 별도의 링커에 의하여 상기 플레이트의 일 영역에 연결될 수 있다.
상기 항-S1P 작용제가 상기 플레이트의 일 영역에 연결되는 방식은 전술한 방식에 제한되는 것은 아니다.
상기 항-S1P 작용제가 상기 플레이트의 일 영역에 연결되는 일 구현예는 도 7 및 도 8에 도시되어 있다.
상기 표지자는 디바이스 또는 육안에 의하여 검출될 수 있다.
상기 디바이스는 상기 면역 진단 키트 내 표지자로부터 발생하는 신호를 검출할 수 있다.
상기 디바이스는
항-S1P 작용제가 연결된 면역 진단용 플레이트;
대조군 내 경쟁자에 연결된 표지자의 신호를 검출하는 검출부; 및
상기 검출부를 통해 검출된 신호를 분석하여 면역 진단 결과를 판단하는 제어부;
를 포함할 수 있다.
상기 검출부에서 검출하는 상기 신호는 광신호일 수 있다.
상기 면역 진단은 시료 내 바이오마커의 유무 확인 및/또는 정량적 확인일 수 있다. 상기 면역 진단은 시료 내 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상의 유무 확인 및/또는 정량적 확인일 수 있다. 상기 면역 진단은 다양한 병리생태학적 병태 발생 위험도에 대한 진단일 수 있다. 상기 병리생태학적 병태는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 및 골질환 중 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 골질환은 골절 또는 골다공증일 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 또다른 양태에 따르면, 새로운 항-S1P 작용제의 면역 진단 용도가 제공될 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 일 구현예에 따르면,
스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 진단용 조성물로,
상기 항-S1P 작용제는
서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 항원은 스핑고리피드를 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는
진단용 조성물이 제공될 수 있다.
상기 진단용 조성물의 유효 물질인 "항-S1P 작용제"는 전술하였다.
상기 진단용 조성물은 담체(물, 식염수, 에탄올, 글리세롤, 락토스, 수크로스, 인산칼슘, 젤라틴, 덱스트란, 한천, 펙틴, 땅콩유, 참깨유 등), 희석제, 약제학적으로 허용가능한 담체(예를 들어, 무기염, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 인산염, 황산염 등; 및 유기산의 염, 예컨대 아세트산염, 프로피온산염, 말론산염, 벤조산염, 인산완충 식염수), 부형제 및/또는 당업계에 공지된 다른 화합물을 추가로 함유할 수 있다. 추가적으로, 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, pH 완충 물질, 겔 또는 겔화 물질, 향미제, 착색제, 미소구체, 중합체, 현탁제 등을 함유할 수 있다. 추가로, 특히 제형이 재구성가능한 형태라면 하나 이상의 다른 통상적인 성분, 예컨대 보존제, 습윤제, 현탁제, 계면활성제, 항산화제, 고화방지제, 충전제, 킬레이트제, 코팅제, 화학적 안정제 등이 또한 존재할 수 있다. 적합한 예시적 성분은 미정질 셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스 나트륨, 폴리솔베이트 80, 페닐에틸 알코올, 클로로부탄올, 솔브산칼륨, 솔브산, 이산화황, 갈산프로필, 파라벤, 에틸 바닐린, 글리세린, 페놀, 파라클로로페놀, 젤라틴, 알부민 및 이들의 조합을 포함한다.
본 명세서에 의해 개시되는 다른 구현예에 따르면,
상기 진단용 조성물을 이용한 면역 진단 방법이 제공될 수 있다.
일 예로,
항-S1P 작용제 또는 진단용 조성물의 항원에 대한 경쟁적 결합(competitive binding)을 측정하는 것을 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는 상기 진단용 조성물에 포함되고,
상기 항원은 스핑고리피드를 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하고,
상기 항원은 대조군 및 시료 중 어느 하나 이상에 포함되는
면역 진단 방법이 제공될 수 있다.
상기 진단용 조성물을 이용한 면역 진단 방법에서 유효 물질인 “항-S1P 작용제"는 전술하였다.
상기 "시료"는 바이오마커의 유무를 확인하기 위하여 검체로부터 수득한 것일 수 있다. 상기 시료는 생물학적 시료일 수 있다. 상기 생물학적 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액 또는 뇨와 같은 시료 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
상기 바이오마커는 생물학적 시료 내에 포함된 스핑고리피드일 수 있다. 상기 바이오마커는 상기 대조군 내 경쟁자와 대응되는 항원결정기를 가질 수 있다. 상기 시료에 포함된 바이오마커는 대조군 내 포함된 경쟁자와 항-S1P 작용제의 항원 결합 부위를 두고 경쟁하는 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 바이오마커는 생물학적 시료 내에 포함된 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 "대조군"은 경쟁자를 포함할 수 있다. 상기 경쟁자는 상기 시료에 포함된 바이오마커와 대응되는 항원결정기를 가질 수 있다. 상기 경쟁자는 시료에 포함된 바이오마커와 항원 결합 부위를 두고 경쟁하는 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 대조군 내 경쟁자는 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 대조군은 상기 항-S1P 작용제에 대하여, 상기 시료와 경쟁 관계일 수 있다. 상기 대조군 내 포함된 경쟁자는 상기 시료 내 포함된 바이오마커와 상기 항-S1P 작용제의 상보성 결정부에 대하여 경쟁적 결합 관계일 수 있다.
상기 "경쟁적 결합의 측정"은 상기 시료 내 포함된 바이오마커 및 상기 대조군 내 포함된 경쟁자가 상기 항-S1P 작용제의 상보성 결정부에 대한 경쟁적 결합 관계에 있을 시, 바이오마커 및 경쟁자의 상보성 결정부에 대한 결합 정도를 측정하는 것일 수 있다. 상기 경쟁적 결합은 시료 내 포함된 바이오 마커의 양에 따라 상기 대조군 내 포함된 경쟁자의 결합 정도가 결정될 수 있다. 상기 경쟁적 결합은 표지자를 통하여 측정하는 것일 수 있다.
상기 표지자는 상기 항-S1P 작용제에 포함된 것일 수 있다. 또는 상기 표지자는 상기 대조군에 포함된 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 표지자는 상기 대조군 내 경쟁자에 연결된 것일 수 있다.
상기 표지자는 방사성 또는 중(heavy) 동위원소일 수 있는 동위원소 표지; 자성 표지 (예로, 자석 입자); 산화환원반응성 모이어티; 광학성 염료 (예로, 발색단, 금, 은, 유로피움, 퀀텀닷, 형광 단백질); 효소기 (예로, 호스래디쉬 퍼옥시다제, 베타-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼린 포스파타제); 바이오티닐화기; 및 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩타이드 에피토프 (예로, 루이신지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속결합 도메인, 에피토프 태그 등,) 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 개시하는 일 구현예에 따르면, 상기 시료 내 바이오마커의 유무 및 양은 검출 신호의 비로 진단할 수 있다.
일 실시예로,
상기 대조군 및 상기 항-S1P 작용제에 대한 검출 신호는 제1 검출 신호; 및
상기 대조군, 시료 및 상기 항-S1P 작용제에 대한 신호는 제2 검출 신호; 이고,
이 때, 상기 제1 검출 신호에 대한 상기 제2 검출 신호의 비가 1 이면 상기 시료 내 바이오마커가 존재하지 않는 것으로 산출하고; 또는
상기 제1 검출 신호에 대한 상기 제2 검출 신호의 비가 1 미만이면 상기 시료 내 바이오마커가 존재하는 것으로 산출; 할 수 있다.
상기 신호의 비는 하기 수식 1로 나타낼 수 있다.
[수식 1]
Figure pat00003
상기 수식으로부터 값 X가 1이면, 상기 시료 내 바이오마커가 존재하지 않는 것으로 산출되고,
상기 수식으로부터 값 X가 1 미만이면, 상기 시료 내 바이오마커가 존재하는 것으로 산출될 수 있다.
상기 경쟁적 결합의 측정을 위하여,
상기 항-S1P 작용제에 상기 시료 및 상기 대조군 중 어느 하나가 순차적으로 처리될 수 있다.
상기 순차적 처리는, 항-S1P 작용제에 상기 시료 및 상기 대조군 중 어느 하나가 시간적 순서를 가지고 투여되는 것일 수 있다.
또는 상기 순차적 처리는 상기 항-S1P 작용제의 항원 결합 부위에 상기 시료 내 바이오마커 및 상기 대조군 내 경쟁자 중 어느 하나가 시간적 순서를 가지고 접촉되는 것일 수 있다.
상기 순차적 처리를 위하여 상기 시료 내 바이오마커 및 상기 대조군 내 경쟁자는 질량 차이를 유발한 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 대조군 내 상기 경쟁자의 일 영역에 표지자를 연결하여, 시료 내 바이오마커와 질량 차이를 유발한 것일 수 있다. 또는 예를 들어, 상기 대조군 내 상기 경쟁자의 일 영역에 질량 부가를 위한 물질을 연결하여, 시료 내 바이오마커와 질량 차이를 유발한 것일 수 있다. 상기 질량 부가를 위한 물질은 항원-항체 반응에 영향을 미치지 않는 폴리펩타이드, 지질, PEG 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또는 예를 들어, 상기 대조군 내 상기 경쟁자의 일 영역에 표지자를 연결하고, 다른 일 영역에 상기 질량 부가 물질을 연결하여, 시료 내 바이오마커와 질량 차이를 유발한 것일 수 있다.
상기 경쟁적 결합의 측정 결과로부터 상기 시료 내 바이오마커의 발현 수준을 측정할 수 있다.
상기 바이오마커의 발현 수준은 당업계에 공지된 방법을 이용하여 분석할 수 있으며, 예를 들어 웨스턴 블랏, 엘라이자(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS) 및 단백질 칩(protein chip)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 방법을 통해 측정할 수 있다.
상기“바이오마커 발현 수준 측정”이란 다양한 병리생태학적 병태 발생 위험을 예측하기 위하여 생물학적 시료에서 S1P의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, 바람직하게는, 상기 S1P에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 S1P의 양을 확인하는 것일 수 있다. 상기 병리생태학적 병태는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 및 골질환 중 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 골질환은 골절 또는 골다공증일 수 있다.
상기 바이오마커 발현 수준 측정이란 골절 또는 골다공증 발생 위험을 예측하기 위하여 생물학적 시료에서 S1P의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, 바람직하게는, 상기 S1P에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 바이오마커의 양을 확인하는 것일 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 다른 구현예에 따르면,
항-S1P 작용제의 항원에 대한 직접 결합(direct binding)을 측정하는 것을 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는 상기 진단용 조성물에 포함되고,
상기 항원은 스핑고리피드를 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는 포함하고,
상기 항원은 대조군 및 시료 중 어느 하나 이상에 포함되는
면역 진단 방법이 제공될 수 있다.
상기 "시료", "대조군"은 전술하였다.
상기 "직접 결합의 측정"은 상기 시료 내 포함된 바이오마커가 상기 항-S1P 작용제의 상보성 결정부에 대한 결합 여부 및 정도를 측정하는 것일 수 있다. 상기 직접 결합은 시료 내 포함된 바이오 마커의 양에 따라 결합 정도가 결정될 수 있다. 상기 직접 결합의 측정은 표지자를 통하여 측정하는 것일 수 있다.
상기 표지자는 상기 항-S1P 작용제에 포함된 것일 수 있다. 상기 표지자는 전술하였다.
본 명세서에서 개시하는 일 구현예에 따르면, 상기 시료 내 바이오마커의 유무 및 양은 검출 신호의 비로 진단할 수 있다.
일 실시예로,
상기 시료로부터 검출 신호는 제1 검출 신호; 및
상기 시료 및 상기 항-S1P 작용제에 대한 신호는 제2 검출 신호; 이고,
이 때, 상기 제1 검출 신호에 대한 상기 제2 검출 신호가 1 이면 상기 시료 내 바이오마커가 존재하지 않는 것으로 산출하고; 또는
상기 제1 검출 신호에 대한 상기 제2 검출 신호가 1 초과이면 상기 시료 내 바이오마커가 존재하는 것으로 산출;할 수 있다.
상기 신호의 비는 하기 수식 2로 나타낼 수 있다.
[수식 2]
Figure pat00004
상기 수식으로부터 값 Y가 1이면, 상기 시료 내 바이오마커가 존재하지 않는 것으로 산출되고,
상기 수식으로부터 값 Y가 1 초과이면, 상기 시료 내 바이오마커가 존재하는 것으로 산출될 수 있다.
상기 직접 결합의 측정 결과, 시료 내 바이오마커의 발현 여부 및 수준을 측정할 수 있다. 상기 바이오마커의 발현 수준은 전술하였다.
본 명세서에 의해 개시되는 또다른 양태에 따르면, 면역진단키트의 용도가 제공될 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 일 구현예에 따르면,
면역 진단 키트의 플레이트에 대조군 고정;
상기 플레이트에 시료 처리; 및
상기 플레이트에 항-S1P 작용제 처리; 하는 것을 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는
서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는 표지자를 포함하고,
상기 대조군은 스핑고리피드를 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는 포함하는,
면역 진단 방법이 제공될 수 있다.
상기 면역 진단 방법에 있어서,
상기 항-S1P 작용제의
상기 CDRH1은 서열번호 1번;
상기 CDRH2는 서열번호 5번;
상기 CDRH3은 서열번호 10번;
상기 CDRL1은 서열번호 12번;
상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
상기 CDRL3은 서열번호 21번; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
면역 진단 방법일 수 있다.
상기 면역 진단 방법은
엘라이자(enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA) 키트 또는 현장현시검사(point-of-care testing; POCT) 키트 등을 이용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 실시예에 의하면, 상기 면역 진단 방법은 엘라이자 키트에 의할 수 있다.
상기 엘라이자 키트에 의한 상기 면역 진단 방법은 항-S1P 작용제에 연결된 표지자의 검출을 통한 시료 내 바이오마커의 유무 확인 및/또는 정량적 확인을 하는 방법일 수 있다. 상기 엘라이자 키트에 의한 상기 면역 진단은 시료 내 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상의 유무 확인 및/또는 정량적 확인을 하는 방법일 수 있다. 상기 면역 진단은 다양한 병리생태학적 병태 발생 위험도에 대한 진단일 수 있다. 상기 병리생태학적 병태는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 및 골질환 중 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 골질환은 골절 또는 골다공증일 수 있다.
상기 엘라이자 키트에 의한 상기 면역 진단 방법은 상기 항-S1P 작용제에 연결된 표지자의 디바이스 또는 육안에 의한 검출을 포함할 수 있다.
상기 디바이스는 상기 엘라이자 키트 내 표지자로부터 발생하는 신호를 검출할 수 있다.
상기 디바이스는
대조군 내 경쟁자가 연결된 면역 진단용 플레이트;
항-S1P 작용제에 연결된 표지자의 신호를 검출하는 검출부; 및
상기 검출부를 통해 검출된 신호를 분석하여 면역 진단 결과를 판단하는 제어부;
를 포함할 수 있다.
상기 검출부에서 검출하는 상기 신호는 광신호일 수 있다.
다른 실시예에 의하면, 상기 면역 진단 방법은 POCT 키트에 의할 수 있다.
상기 POCT 키트에 의한 상기 면역 진단 방법은 표지자의 검출을 통한 시료 내 바이오마커의 유무 확인 및/또는 정량적 확인을 하는 방법일 수 있다. 상기 POCT 키트에 의한 상기 면역 진단은 시료 내 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상의 유무 확인 및/또는 정량적 확인을 하는 방법일 수 있다. 상기 면역 진단은 다양한 병리생태학적 병태 발생 위험도에 대한 진단일 수 있다. 상기 병리생태학적 병태는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 및 골질환 중 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 골질환은 골절 또는 골다공증일 수 있다.
상기 POCT 키트에 의한 상기 면역 진단 방법은 상기 표지자의 디바이스 또는 육안에 의한 검출을 포함할 수 있다.
상기 디바이스는 상기 POCT 키트 내 표지자로부터 발생하는 신호를 검출할 수 있다.
상기 디바이스는
대조군 내 경쟁자가 고정된 면역 진단용 플레이트;
항-S1P 작용제에 연결된 표지자의 신호를 검출하는 검출부; 및
상기 검출부를 통해 검출된 신호를 분석하여 면역 진단 결과를 판단하는 제어부;
를 포함할 수 있다.
상기 디바이스에서 상기 플레이트는 카트리지일 수 있다. 예를 들어, 상기 플레이트는 POCT 카트리지일 수 있다.
상기 검출부에서 검출하는 상기 신호는 광신호일 수 있다.
본 명세서에 의해 개시되는 다른 구현예에 따르면,
면역 진단 키트의 플레이트에 항-S1P 작용제 고정;
상기 항-S1P 작용제에 시료 처리; 및
상기 항-S1P 작용제에 대조군 처리; 하는 것을 포함하고,
상기 항-S1P 작용제는
서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 대조군은 스핑고리피드를 포함하고,
상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하고,
상기 대조군은 표지자를 포함하는,
면역 진단 방법이 제공될 수 있다.
상기 면역 진단 방법에 있어서,
상기 항-S1P 작용제의
상기 CDRH1은 서열번호 1번;
상기 CDRH2는 서열번호 5번;
상기 CDRH3은 서열번호 10번;
상기 CDRL1은 서열번호 12번;
상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
상기 CDRL3은 서열번호 21번; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
면역 진단 방법일 수 있다.
상기 면역 진단 방법은
엘라이자(enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA) 키트 또는 현장현시검사(point-of-care testing; POCT) 키트 등을 이용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 실시예에 의하면, 상기 면역 진단 방법은 엘라이자 키트에 의할 수 있다.
상기 엘라이자 키트에 의한 상기 면역 진단 방법은 상기 대조군 내 경쟁자에 연결된 표지자의 검출을 통한 시료 내 바이오마커의 유무 확인 및/또는 정량적 확인을 하는 방법일 수 있다. 상기 엘라이자 키트에 의한 상기 면역 진단은 시료 내 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상의 유무 확인 및/또는 정량적 확인을 하는 방법일 수 있다. 상기 면역 진단은 다양한 병리생태학적 병태 발생 위험도에 대한 진단일 수 있다. 상기 병리생태학적 병태는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 및 골질환 중 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 골질환은 골절 또는 골다공증일 수 있다.
상기 엘라이자 키트에 의한 상기 면역 진단 방법은 상기 대조군 내 경쟁자에 연결된 표지자의 디바이스 또는 육안에 의한 검출을 포함할 수 있다.
상기 디바이스는 상기 엘라이자 키트 내 표지자로부터 발생하는 신호를 검출할 수 있다.
상기 디바이스는
항-S1P 작용제가 연결된 면역 진단용 플레이트;
대조군 내 경쟁자에 연결된 표지자의 신호를 검출하는 검출부; 및
상기 검출부를 통해 검출된 신호를 분석하여 면역 진단 결과를 판단하는 제어부;
를 포함할 수 있다.
상기 검출부에서 검출하는 상기 신호는 광신호일 수 있다.
다른 실시예에 의하면, 상기 면역 진단 방법은 POCT 키트에 의할 수 있다.
상기 POCT 키트에 의한 상기 면역 진단 방법은 상기 대조군 내 경쟁자에 연결된 표지자의 검출을 통한 시료 내 바이오마커의 유무 확인 및/또는 정량적 확인을 하는 방법일 수 있다. 상기 POCT 키트에 의한 상기 면역 진단은 시료 내 S1P, S1P 유사체 및 S1P 유도체 중 어느 하나 이상의 유무 확인 및/또는 정량적 확인을 하는 방법일 수 있다. 상기 면역 진단은 다양한 병리생태학적 병태 발생 위험도에 대한 진단일 수 있다. 상기 병리생태학적 병태는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 및 골질환 중 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 골질환은 골절 또는 골다공증일 수 있다.
상기 POCT 키트에 의한 상기 면역 진단 방법은 상기 대조군 내 경쟁자에 연결된 표지자의 디바이스 또는 육안에 의한 검출을 포함할 수 있다.
상기 디바이스는 상기 POCT 키트 내 표지자로부터 발생하는 신호를 검출할 수 있다.
상기 디바이스는
항-S1P 작용제가 고정된 면역 진단용 플레이트;
대조군 내 경쟁자에 연결된 표지자의 신호를 검출하는 검출부; 및
상기 검출부를 통해 검출된 신호를 분석하여 면역 진단 결과를 판단하는 제어부;
를 포함할 수 있다.
상기 디바이스에서 상기 플레이트는 카트리지일 수 있다. 예를 들어, 상기 플레이트는 POCT 카트리지일 수 있다.
상기 검출부에서 검출하는 상기 신호는 광신호일 수 있다.
상기 검출부에서 검출하는 신호에 의하여, 시료 내 바이오마커의 발현 수준을 측정할 수 있다. 예를 들어, 상기 바이오마커는 S1P일 수 있다.
상기 바이오마커 발현 수준 측정은 다양한 병리생태학적 병태 발생 위험을 예측하기 위하여 생물학적 시료에서 S1P의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, 바람직하게는, 상기 S1P에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 S1P의 양을 확인하는 것일 수 있다. 상기 병리생태학적 병태는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 및 골질환 중 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 골질환은 골절 또는 골다공증일 수 있다.
상기 바이오마커 발현 수준 측정은 골절 또는 골다공증 발생 위험을 예측하기 위하여 생물학적 시료에서 S1P의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, 바람직하게는, 상기 S1P에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 S1P의 양을 확인하는 것일 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 명세서을 더욱 상세히 설명하고자 한다.
아래 설명하는 실시예들은 오로지 본 명세서에 의해 개시되는 내용을 예시하기 위한 것으로서, 본 명세서에 의해 개시되는 내용의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
[실시예 1] 파지 디스플레이 라이브러리를 이용한 바이오패닝
실시예 1-1. 항-S1P-작용제 선별
S1P와 특이적으로 결합함이 알려져 있는 후보군 항체의 중쇄 및 경쇄 가변부위 아미노산 서열은 아래와 같으며, CDR에 해당하는 서열(Kabat CDR definition)을 밑줄로 표시하였다.
후보군 항체의 VH서열
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCQSFGYIFIDHTIHWMRQMPGQGLEWMGAISPRHDITKYNEMFRGQVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDTAMYFCARGGFYGSTIWFDFWGQGTMVTVSS(서열번호 33)
후보군 항체의 VL서열
ETTVTQSPSFLSASVGDRVTITCITTTDIDDDMNWFQQEPGKAPKLLISEGNILRPGVPSRFSSSGYGTDFTLTISKLQPEDFATYYCLQSDNLPFTFGQGTKLEIK (서열번호 34)
실시예 1-2 CDR 라이브러리의 제작
상기 후보군 항체의 핵산 서열 정보를 득하여, 이에 대한 변형 CDR 라이브러리를 제작하였다.
구체적으로, 각 CDR의 서열에 무작위적 다양성을 도입하기 위하여 후보군 핵산 서열을 이용한 중합효소 연쇄반응을 수행하였다
후보군 항체의 핵산 서열
gaggtgcagctggtgcagtctggagcagaggtgaaaaagcccggggagtctctgaagatctcctgtcagagttttggatacatctttatcgaccatactattcactggatgcgccagatgcccgggcaaggcctggagtggatgggggctatttctcccagacatgatattactaaatacaatgagatgttcaggggccaggtcaccatctcagccgacaagtccagcagcaccgcctacttgcagtggagcagcctgaaggcctcggacaccgccatgtatttctgtgcgagaggggggttctacggtagtactatctggtttgacttttggggccaagggacaatggtcaccgtctcttcaggtggaggaggtagcggaggtggtggatctggaggtggaggtagtgaaacgacagtgacgcagtctccatccttcctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgcataaccaccactgatattgatgatgatatgaactggttccagcaggaaccagggaaagcccctaagctcctgatctccgaaggcaatattcttcgtcctggggtcccatcaagattcagcagcagtggatatggcacagatttcactctcaccatcagcaaattgcagcctgaagattttgcaacttattactgtttgcagagtgataacttaccattcactttcggccaagggaccaagctggagatcaaa(서열번호 35)
상기 후보군 항체의 scFv 유전자 서열의 5’ 말단과 3’ 말단에 각각 SfiI 제한효소 절단부위(각각 ggcccaggcggcc와 ggccaggccggcc)를 추가하여 합성하고, 그를 PCR로 증폭한 DNA와 pComb3X phagemid vector DNA를 SfiI 제한효소로 절단하고 T4 라이게이즈를 이용하여 라이게이션한 후, DH5α E.coli에 트랜스폼함으로써 pComb3X에 클로닝된 후보군 scFv를 획득하였다.
후보군 scFv가 클로닝된 pComb3X DNA를 주형으로 하여 pC3X-f (표 1)와 (sph-hFR1-b, sph-hFR2-b, sph-sFR3-b, sph-LFR1-b, sph-LFR2-b, sph-LFR3-b) 각각을 프라이머쌍으로 하는 6개의 반응과, pC3X-b와 (sph-H1, sph-H2, sph-H3, sph-L1, sph-L2, sph-L3) 각각을 프라이머쌍으로 하는 6개의 반응을 수행하였다
위의 반응으로부터 얻어진 DNA들을 주형으로 중첩 연장 중합효소 연쇄반응 (overlap extension PCR, OE-PCR)을 수행하였다. 구체적으로 OE-PCR을 위한 주형으로는 위에 나열된 6개씩의 반응산물들을 순서대로 쌍으로 사용하였고, pC3X-short-f와 pC3X-short-b를 프라이머쌍으로 사용하였다.
CDR 라이브러리의 제작에 사용된 올리고뉴클레오타이드 서열.
이름 서열
sph-H1 cag agt ttt gga tac atc ttt atc RRC YAT RST ATK cac tgg atg cgc cag atg
sph-H2 gag tgg atg ggg gct att WMT CCC VGT VAT GRT AWT act aaW tac aat gag aWg ttc aRg ggc cag
sph-H3 c atg tat ttc tgt gcg aga gSg gSg tWc tac RSt agt aSt atc tgg ttt gac tWt tgg ggc
sph-L1 aga gtc acc atc act tgc Mta aSc aSc aSt gat att gat Rat Dat Mtg aac tgg ttc cag cag gaa
sph-L2 t aag ctc ctg atc tcc gaW gSc aRt att ctt cRa Yct ggg gtc cca tca aga t
sph-L3 cct gaa gat ttt gca act tat tac tgt cWg cag Rgt KMt aRc tta cca ttc act ttc ggc
sph-hFR1-b GAT AAA GAT GTA TCC AAA ACT CTG (서열번호 36번)
sph-hFR2-b AAT AGC CCC CAT CCA CTC (서열번호 37번)
sph-hFR3-b C TCT CGC ACA GAA ATA CAT G (서열번호 38번)
sph-LFR1-b GCA AGT GAT GGT GAC TCT (서열번호 39번)
sph-LFR2-b TC GGA GAT CAG GAG CTT A (서열번호 40번)
sph-LFR3-b G ACA GTA ATA AGT TGC AAA ATC TTC AGG (서열번호 41번)
pC3X-f GCA CGA CAG GTT TCC CGA C (서열번호 42번)
pC3X-b AAC CAT CGA TAG CAG CAC CG (서열번호 43번)
pC3X-short-f GCT CAC TCA TTA GGC ACC (서열번호 44번)
pC3X-short-b TAG CGT CAG ACT GTA GCG (서열번호 45번)
상기 표 1에서, R은 (A 또는 G), Y는 (C 또는 T), S는 (C 또는 G), K는 (G 또는 T), W는 (A 또는 T), V는 (A, C, 또는 G), M은 (A 또는 C), D는 (A, G, 또는 T)의 동일비 혼합물을 의미한다. 상기 표 1에서, CDR에 해당하는 부위를 밑줄로 표시함.
상기 표 1로부터 번역된 CDR 부위의 아미노산 서열의 다양성은 표 2와 같다.
CDR 부위의 아미노산 서열 다양성
CDR 아미노산 서열 다양성
H1 (DGNS)-(HY)-(AGST)-(IM)-H
H2 A-I-(NSTY)-P-(GRS)-(DHN)-(DG)-(NI)-T-(KN)-Y-N-E-(KM)-F-(KR)-G
H3 A-R-(AG)-(AG)-(FY)-Y-((AGST)-S-(ST)-I-W-F-D-(FY)
L1 (IL)-(ST)-(ST)-(ST)-D-I-D-(DN)-(DNY)-(LM)-N
L2 (DE)-(AG)-(NS)-I-L-(QR)-(PS)
L3 (LQ)-Q-(GS)-((ADSY)-(NS)-L-P-F-T
상기 CDR 다양성의 설계는 인간 항체의 해당 위치에서 높은 빈도로 발견되는 아미노산들이 무작위적으로 조합되도록 이루어졌다.
변형된 CDR을 가지는 라이브러리를 만들기 위한 PCR 전략
주형 프라이머 1 프라이머 2 생성물 번호
후보군 scFv - pComb3X pC3X-f sph-hFR1-b 1
sph-hFR2-b 2
sph-hFR3-b 3
sph-LFR1-b 4
sph-LFR2-b 5
sph-LFR3-b 6
sph-H1 pC3X-b 7
sph-H2 8
sph-H3 9
sph-L1 10
sph-L2 11
sph-L3 12
1+7 pC3X-short-f pC3X-short-b 13
2+8 14
3+9 15
4+10 16
5+11 17
6+12 18
상기 표 3의 생성물 13 내지 18의 DNA를 SfiI 제한효소로 절단하고, 이를 역시 SfiI 제한효소로 절단된 pComb3X 벡터에 라이게이션한 후 TG1 E.coli electrocompetent cell에 전기충격법으로 트랜스폼하여 각 CDR이 무작위적으로 다양화된 6개의 항체 라이브러리를 제작하였다.
실시예 1-3 CDR 라이브러리를 이용한 항-S1P-작용제 선별
각 CDR 라이브러리를 파지 표면에 항체가 디스플레이된 형태로 구출(rescue)한 후, 시험관 표면에 흡착된 S1P-BSA 항원에 대하여 1회 패닝하였다. 구체적으로, 항체 유전자가 트랜스폼된 TG1 E.coli를 배양한 후 보조 파지(helper phage)를 넣고 밤새 배양하면 항체가 표면에 디스플레이된 파지 라이브러리를 배양액으로부터 얻을 수 있다. 이 라이브러리를 내부 표면에 S1P-BSA 항원이 흡착된 면역시험관에 가하여 항원과의 결합을 유도하고, 세척 후 결합이 유지되고 있는 파지-항체를 100 mM 삼에틸아민(triethylamine)으로 높은 pH에서 용출하여 다시 TG1 E.coli를 감염시키는 데 사용하였다.
파지-항체에 감염된 E.coli는 pComb3X 벡터에 존재하는 베타-락타메이즈 유전자에 의하여 암피실린 항생제에 대하여 내성을 가지므로, 암피실린을 함유한 아가로즈 배지에서 콜로니를 형성한다. 이 콜로니들을 96웰 플레이트에서 개별 배양하고 여기에 IPTG를 가하여 항체유전자의 발현을 유도하면, scFv 항체를 얻을 수 있다.
위와 같이 패닝으로부터 얻어진 항체와 S1P-BSA 항원과의 결합을 ELISA 분석법으로 확인하고, 결합력이 확인된 클론의 DNA 서열을 분석하였다.
1차 선별된 CDR 서열을 중합효소연쇄반응으로 증폭하고, 이를 다시 OE-PCR로 조합하여 6개의 CDR들이 모두 다양화된 항체 라이브러리를 다시 위와 유사한 방법으로 제작하고 S1P-BSA 항원에 대하여 패닝하였다.
패닝으로부터 얻어진 클론들을 다시 ELISA로 스크리닝하여 S1P-BSA와 결합하는 27개의 항체를 2차 선별하였으며, 이들의 서열을 분석하여 표 4의 결과를 얻었다.
패닝으로부터 얻어진 클론들의 CDR 서열 및 ELISA 신호 강도.
clone No. CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3 ELISA signal
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후보군 scFv DHTIH(서열번호 1) AISPRHDITKYNEMFRG
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(서열번호 21)
[실시예 2] 항-S1P scFv 생산 및 정제
상기 실시예 1로부터 선별된 CDR 핵산 서열을 scFv의 형태로 E.coli 에서 생산하여 정제하였다.
구체적으로, 패닝으로부터 얻어진, scFv 유전자를 함유하는 E.coli 클론을 암피실린이 포함된 SB 배지 (3% [w/v] tryptone, 2% [w/v] yeast extract, 1% [w/v] MOPS, pH 7.0) 20 mL에 교반배양 (37oC, 200 rpm) 하였다. 600 nm 파장에서의 흡광도 (OD600)가 0.7~0.8이 되었을 때 IPTG를 1 mM 농도가 되도록 첨가하고 30oC에서 16시간 배양하였다. 배양된 E.coli를 원심분리하여 배양액을 제거하고, E.coli에 0.6 mL의 1x TES (20% [w/v] sucrose, 1 mM EDTA, 10 mM Tris, pH 8.0)에 분산하였다. 분산된 E.coli에 0.2x TES 0.9 mL을 첨가하여 잘 혼합한 후 얼음에서 30분간 냉각 방치하고, 이를 원심분리하여 scFv를 포함하는 상층액 (페리플라즘 추출액)을 획득하였다.
페리플라즘 추출액에 MgSO4를 5 mM 농도로 첨가하고, 50 μL의 Ni-NTA agarose beads 를 넣어서 30분간 상온에서 회전시키면서 scFv를 결합시켰다. 이를 원심분리하여 상층액을 제거하고, Ni-NTA agarose beads를 PBS-5 mM imidazole (pH 7.4) 용액 1 mL로 2회 세척하였다. 마지막으로 PBS-200 mM imidazole (pH 7.4) 용액 0.1 mL을 이용하여 scFv를 Ni-NTA agarose beads로부터 용출하였다.
[실시예 3] 항-S1P IgG 생산 및 정제
상기 실시예 1로부터 선별된 CDR 핵산 서열을 human IgG1의 형태로 클로닝하고 이를 동물세포주에서 생산하여 정제하였다.
구체적으로, 상기 실시예 1로부터 선별된 항-S1P scFv의 VH와 VL을 PCR로 증폭하였다. VH의 증폭을 위해서는 5'-ttctccagcgcttattccgaggtgcagctggtgcag-3'(서열번호 46번)과 5'-cttggtgctagctgaagagacggtgaccat-3'(서열번호 47번) 프라이머쌍을, VL의 증폭을 위해서는 5'-ttctccagcgcttattccgaaacgacagtgacgcag-3'(서열번호 48번)과 5'-tattacgtacgtttgatctccagcttggtc-3'(서열번호 49번) 프라이머쌍을 사용하였다. 증폭된 VH 유전자는 AfeI/NheI 제한효소로 절단하고 VL 유전자는 AfeI/BsiWI 제한효소로 절단하였으며. 이를 동일한 효소로 절단한 pcIW3.3-heavy 및 pcIW3.3-kappa 발현벡터에 각각 클로닝하였다 (도 1 및 도 2).
상기 발현벡터에 클로닝된 항-S1P IgG 유전자를 ExpiCHO(tm) (Invitrogen) 세포주에 트랜스펙션하고 10일간 배양 후, 배양액으로부터 항-S1P IgG 항체를 protein A affinity chromatography로 정제하였다.
이상과 같이 실시예들이 비록 한정된 실시예와 도면에 의해 설명되었으나, 해당 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기의 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 예를 들어, 설명된 기술들이 설명된 방법과 다른 순서로 수행되거나, 다른 구성요소 또는 균등물에 의하여 대치되거나 치환되더라도 적절한 결과가 달성될 수 있다. 그러므로, 다른 구현들, 다른 실시예들 및 특허청구범위와 균등한 것들도 후술하는 특허청구범위의 범위에 속한다.
<110> sejong biomed <120> Anti-Sphingosine-1-Phosphate agent, production method, and uses thereof <130> CP18-129 <160> 49 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 1 Asp His Thr Ile His 1 5 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 2 Ser His Thr Ile His 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 3 Gly Tyr Thr Ile His 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 4 Ala Ile Ser Pro Arg His Asp Ile Thr Lys Tyr Asn Glu Met Phe Arg 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 5 Ala Ile Asn Pro Ser Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 6 Ala Ile Ser Pro Gly His Gly Ile Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Arg 1 5 10 15 Gly <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 7 Ala Ile Asn Pro Ser Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Arg 1 5 10 15 Gly <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 8 Ala Ile Ser Pro Gly His Gly Ile Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 9 Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Ser Thr Ile Trp Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 10 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 10 Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Gly Ser Thr Ile Trp Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 11 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 11 Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ala Ser Ser Ile Trp Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 12 Ile Thr Thr Thr Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn 1 5 10 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 13 Leu Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp Leu Asn 1 5 10 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 14 Leu Thr Thr Thr Asp Ile Asp Asp Asp Leu Asn 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 15 Leu Thr Thr Thr Asp Ile Asp Asn Asp Met Asn 1 5 10 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 16 Glu Gly Asn Ile Leu Arg Pro 1 5 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 17 Glu Arg Asn Ile Leu Arg Pro 1 5 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 18 Glu Gly Ser Ile Leu Arg Pro 1 5 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 19 Glu Gly Asn Ile Pro Arg Pro 1 5 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 20 Gln Arg Leu Ile Leu Pro Pro 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 21 Leu Gln Ser Asp Asn Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 22 Leu Gln Ser Asp Ser Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 23 Leu His Ser Asp Asn Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 24 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 24 Arg Arg Val Ile Ala Tyr His Ser 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 25 Leu His Ser Asp Ser Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 26 Leu His Ser Asp Ser Leu Pro Ile Thr 1 5 <210> 27 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 27 rrcyatrsta tkcac 15 <210> 28 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 28 gctattwmtc ccvgtvatgr tawtactaaw tacaatgaga wgttcarggg c 51 <210> 29 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 29 gcgagagsgg sgtwctacrs tagtastatc tggtttgact wt 42 <210> 30 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 30 mtaascasca stgatattga tratdatmtg aac 33 <210> 31 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 31 gawgscarta ttcttcrayc t 21 <210> 32 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 32 cwgcagrgtk mtarcttacc attcact 27 <210> 33 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 33 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Gln Ser Phe Gly Tyr Ile Phe Ile Asp His 20 25 30 Thr Ile His Trp Met Arg Gln Met Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Ile Ser Pro Arg His Asp Ile Thr Lys Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Arg Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Phe Tyr Gly Ser Thr Ile Trp Phe Asp Phe Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 34 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 34 Glu Thr Thr Val Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ile Thr Thr Thr Asp Ile Asp Asp Asp 20 25 30 Met Asn Trp Phe Gln Gln Glu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Glu Gly Asn Ile Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Lys Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Asp Asn Leu Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 35 <211> 729 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric <400> 35 gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60 tcctgtcaga gttttggata catctttatc gaccatacta ttcactggat gcgccagatg 120 cccgggcaag gcctggagtg gatgggggct atttctccca gacatgatat tactaaatac 180 aatgagatgt tcaggggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccagcag caccgcctac 240 ttgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt atttctgtgc gagagggggg 300 ttctacggta gtactatctg gtttgacttt tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360 tcaggtggag gaggtagcgg aggtggtgga tctggaggtg gaggtagtga aacgacagtg 420 acgcagtctc catccttcct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgcata 480 accaccactg atattgatga tgatatgaac tggttccagc aggaaccagg gaaagcccct 540 aagctcctga tctccgaagg caatattctt cgtcctgggg tcccatcaag attcagcagc 600 agtggatatg gcacagattt cactctcacc atcagcaaat tgcagcctga agattttgca 660 acttattact gtttgcagag tgataactta ccattcactt tcggccaagg gaccaagctg 720 gagatcaaa 729 <210> 36 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 36 gataaagatg tatccaaaac tctg 24 <210> 37 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 37 aatagccccc atccactc 18 <210> 38 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 38 ctctcgcaca gaaatacatg 20 <210> 39 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 39 gcaagtgatg gtgactct 18 <210> 40 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 40 tcggagatca ggagctta 18 <210> 41 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 41 gacagtaata agttgcaaaa tcttcagg 28 <210> 42 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 42 gcacgacagg tttcccgac 19 <210> 43 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 43 aaccatcgat agcagcaccg 20 <210> 44 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 44 gctcactcat taggcacc 18 <210> 45 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 45 tagcgtcaga ctgtagcg 18 <210> 46 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 46 ttctccagcg cttattccga ggtgcagctg gtgcag 36 <210> 47 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 47 cttggtgcta gctgaagaga cggtgaccat 30 <210> 48 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 48 ttctccagcg cttattccga aacgacagtg acgcag 36 <210> 49 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 49 tattacgtac gtttgatctc cagcttggtc 30

Claims (46)

  1. 스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 항-S1P 작용제로,
    상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하고,
    상기 항원 결합 부위는
    제1 상보성 결정부 및 제1 프레임워크 영역(frame work region)을 포함하는 중쇄 사슬의 가변부 도메인(variable domain of heavy chain; VH); 및
    제 2 상보성 결정부 및 제2 프레임워크 영역을 포함하는 경쇄 사슬의 가변부 도메인(variable domain of light chain; VL); 중 어느 하나 이상을 포함하고,
    상기 제1 상보성 결정부는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 중 어느 하나 이상을 포함하고,
    상기 제2 상보성 결정부는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 중 어느 하나 이상을 포함하는,
    항-S1P 작용제(anti-sphingosine-1-phosphate agent).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 항-S1P 작용제는
    서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
    서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
    서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
    서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
    서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
    서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
    항-S1P 작용제.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
    항-S1P 작용제.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 의 아미노산 서열을 포함하는
    항-S1P 작용제.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 CDRH1은 서열번호 27번;
    상기 CDRH2는 서열번호 28번;
    상기 CDRH3은 서열번호 29번;
    상기 CDRL1은 서열번호 30번;
    상기 CDRL2는 서열번호 31번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 32번; 중 어느 하나의 핵산 서열로부터 발현되는 것을 포함하고,
    상기 서열번호 내 R은 A 또는 G, Y는 C 또는 T, S는 C 또는 G, K는 G 또는 T, W는 A 또는 T, V는 A, C, 또는 G, M은 A 또는 C, 및 D는 A, G, 또는 T인 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative)는
    하기 화학식 1에서 선택되는 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제
    [화학식 1]
    Figure pat00005
    .
    이때, 상기 화학식 1에서, n은 2 내지 13의 정수로부터 선택되고;
    R은 H, 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자로부터 선택됨
  7. 제1항에 있어서,
    항-S1P 작용제는
    Fab(antigen-binding fragment);
    F(ab)'2;
    Monospecific Fab2;
    Bispecific Fab2;
    Trispecific Fab2;
    Monovalent Ig;
    scFv(single-chain variable fragment);
    Bispecific Diabody;
    scFv-Fc(single-chain variable fragment-fragment crystallizable);
    Minibody;
    IgNAR(immunoglobulin new antigen receptor)
    V-NAR(Variable-New Antigen Receptor);
    hcIgG(heavy chain Immunoglobulin G);
    VhH(variable domain of heavy chain antibody);
    scFv(single-chain variable fragment); 및
    IgG(Immunoglobulin G);
    중 어느 하나 이상에 포함되는 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제.
  8. 제1항에 있어서,
    항-S1P 작용제는
    scFv(single-chain variable fragment); 및
    IgG(Immunoglobulin G);
    중 어느 하나 이상에 포함되는 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제.
  9. 제7항에 있어서,
    상기 IgG는
    중쇄 사슬의 공통 영역(constant region of heavy chain; CH); 및
    경쇄 사슬의 공통 영역(constant region of heavy chain; CL); 을 더 포함하고,
    상기 중쇄 사슬의 공통 영역은 CH1, CH2 및 CH3 중 어느 하나 이상인,
    항-S1P 작용제.
  10. 스핑고리피드(sphingo-lipid) 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 항-S1P 작용제 생산 방법으로,
    상기 항-S1P 작용제를 암호화하는 서열번호 27 내지 32번 중 어느 하나 이상의 핵산 서열이 주입된 세포로부터 상기 항-S1P 작용제를 발현시키는 것; 및
    상기 발현된 항-S1P 작용제를 정제하는 것; 을 포함하고,
    상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는,
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 핵산 서열이 주입된 세포는
    형질전환(transformation);
    형질도입(transduction); 및
    형질주입(transfection); 중 어느 하나 이상에 의하여 주입된 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  12. 제10항에 있어서,
    상기 세포는 원핵생물세포 또는 진핵생물세포인 것을 특징으로하는
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 원핵생물세포는 대장균 세포인 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  14. 제12항에 있어서,
    상기 진핵생물세포는 동물세포인 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 동물세포는 인간세포인 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  16. 제10항에 있어서,
    상기 정제는 크로마토그래피를 이용하는 것을 포함하는
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  17. 제16항에 있어서
    상기 크로마토그래피는
    단백질 L 친화성 크로마토그래피(Protein L affinity chromatography);
    고정화 금속 친화성 크로마토그래피(immobilized metal ion affinity chromatography);
    단백질 A 친화성 크로마토그래피(Protein A affinity chromatography); 및
    단백질 G 친화성 크로마토그래피(Protein G affinity chromatography); 중 어느 하나 이상인
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  18. 제10항에 있어서,
    상기 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative)는
    하기 화학식 1에서 선택되는 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제 생산 방법
    [화학식 1]
    Figure pat00006
    .
    이때, 상기 화학식 1에서, n은 2 내지 13의 정수로부터 선택되고;
    R은 H, 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자로부터 선택됨
  19. 제10항에 있어서,
    항-S1P 작용제는
    Fab(antigen-binding fragment);
    F(ab)'2;
    Monospecific Fab2;
    Bispecific Fab2;
    Trispecific Fab2;
    Monovalent Ig;
    scFv(single-chain variable fragment);
    Bispecific Diabody;
    scFv-Fc(single-chain variable fragment-fragment crystallizable);
    Minibody;
    IgNAR(immunoglobulin new antigen receptor)
    V-NAR(Variable-New Antigen Receptor);
    hcIgG(heavy chain Immunoglobulin G);
    VhH(variable domain of heavy chain antibody);
    scFv(single-chain variable fragment); 및
    IgG(Immunoglobulin G);
    중 어느 하나 이상에 포함되는 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  20. 제10항에 있어서,
    항-S1P 작용제는
    scFv(single-chain variable fragment); 및
    IgG(Immunoglobulin G);
    중 어느 하나 이상에 포함되는 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  21. 제10항에 있어서,
    표지자를 더 포함하는 것을 특징으로 하는
    항-S1P 작용제 생산 방법.
  22. 플레이트;
    대조군; 및
    항-S1P 작용제; 를 포함하고,
    상기 항-S1P 작용제는
    서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
    서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
    서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
    서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
    서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
    서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 항-S1P 작용제는 스핑고리피드(sphingo-lipid)에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하고,
    상기 대조군은 스핑고리피드를 포함하고,
    상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog)및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는,
    면역 진단 키트.
  23. 제22항에 있어서,
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
    면역 진단 키트.
  24. 제22항에 있어서,
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 의 아미노산 서열을 포함하는
    면역 진단 키트.
  25. 제22항에 있어서
    상기 대조군은 상기 플레이트의 일 영역에 연결되고; 및
    상기 항-S1P 작용제 및 2차 항체 중 어느 하나 이상은 표지자가 연결된 것; 을 포함하는
    면역 진단 키트.
  26. 제22항에 있어서
    상기 항-S1P 작용제는 상기 플레이트의 일 영역에 연결되고; 및
    상기 대조군은 표지자가 연결된 것; 을 포함하는
    면역 진단 키트.
  27. 제22항에 있어서
    상기 면역 진단 키트는
    엘라이자(enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA) 키트; 및
    현장현시검사(point-of-care testing; POCT) 키트; 중 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는
    면역 진단 키트.
  28. 제22항에 있어서,
    상기 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative)는
    하기 화학식 1에서 선택되는 것을 특징으로 하는
    면역 진단 키트
    [화학식 1]
    Figure pat00007
    .
    이때, 상기 화학식 1에서, n은 2 내지 13의 정수로부터 선택되고;
    R은 H, 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자로부터 선택됨
  29. 항-S1P 작용제의 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하는 진단용 조성물로,
    상기 항-S1P 작용제는
    서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
    서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
    서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
    서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
    서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
    서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 항원은 스핑고리피드를 포함하고.
    상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는
    진단용 조성물.
  30. 제29항에 있어서,
    상기 항-S1P 작용제의
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
    진단용 조성물.
  31. 제29항에 있어서,
    상기 항-S1P 작용제의
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 의 아미노산 서열을 포함하는
    진단용 조성물.
  32. 항-S1P 작용제의 항원에 대한 경쟁적 결합(competitive binding)을 측정하는 것을 포함하고,
    상기 항-S1P 작용제는
    서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
    서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
    서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
    서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
    서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
    서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 항-S1P 작용제는 상기 항원에 대한 항원 결합 부위(Antigen Binding Region)를 포함하고,
    상기 항원은 스핑고리피드를 포함하고,
    상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하고,
    상기 항원은 대조군 및 시료 중 어느 하나 이상에 포함되는
    면역 진단 방법.
  33. 제32항에 있어서,
    상기 항-S1P 작용제의
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
    면역 진단 방법.
  34. 제32항에 있어서,
    상기 항-S1P 작용제의
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 의 아미노산 서열을 포함하는
    면역 진단 방법.
  35. 제32항에 있어서
    상기 항-S1P 작용제에 상기 시료 및 상기 대조군 중 어느 하나 이상을 순차적으로 처리 하는 것을 포함하는,
    면역 진단 방법.
  36. 제32항에 있어서
    상기 경쟁적 결합의 측정은 표지자에 의하고
    상기 표지자는 상기 대조군, 상기 항-S1P 작용제, 및 2차 항체 중 어느 하나 이상에 포함되고,
    상기 표지자는 방사성동위원소, 표지자 효소(reporter enzyme) 및 형광 단백질(Fluorescent Protein) 중 어느 하나 이상을 포함하는
    면역 진단 방법.
  37. 제32항에 있어서
    상기 대조군 및 상기 항-S1P 작용제에 대한 검출 신호는 제1 검출 신호; 및
    상기 대조군, 시료 및 상기 항-S1P 작용제에 대한 신호는 제2 검출 신호; 이고,
    이 때, 상기 제1 검출 신호에 대한 상기 제2 검출 신호가 1 이면 상기 시료 내 바이오마커가 존재하지 않는 것으로 산출하고; 또는
    상기 제1 검출 신호에 대한 상기 제2 검출 신호의 비가 1 미만이면 상기 시료 내 바이오마커가 존재하는 것으로 산출하는; 것을 포함하는
    면역 진단 방법.
  38. 제32항에 있어서
    상기 시료 내 항원은 바이오마커이고,
    상기 바이오마커는 암, 염증, 혈관신생, 심장 질환, 천식, 자가면역질환 및 골질환 중 어느 하나 이상에 대한 마커인 것을 특징으로 하는
    면역 진단 방법.
  39. 제32항에 있어서,
    상기 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative)는
    하기 화학식 1에서 선택되는 것을 특징으로 하는
    면역 진단 방법
    [화학식 1]
    Figure pat00008
    .
    이때, 상기 화학식 1에서, n은 2 내지 13의 정수로부터 선택되고;
    R은 H, 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자로부터 선택됨
  40. 면역 진단 키트의 플레이트에 대조군 고정;
    상기 플레이트에 시료 처리; 및
    상기 플레이트에 항-S1P 작용제 처리; 하는 것을 포함하고,
    상기 항-S1P 작용제는
    서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
    서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
    서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
    서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
    서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
    서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 항-S1P 작용제는 표지자를 포함하고,
    상기 대조군은 스핑고리피드를 포함하고,
    상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하는 포함하는,
    면역 진단 방법.
  41. 제40항에 있어서,
    상기 항-S1P 작용제의
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
    면역 진단 방법.
  42. 제40항에 있어서,
    상기 항-S1P 작용제의
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 의 아미노산 서열을 포함하는
    면역 진단 방법.
  43. 면역 진단 키트의 플레이트에 항-S1P 작용제 고정;
    상기 항-S1P 작용제에 시료 처리; 및
    상기 항-S1P 작용제에 대조군 처리; 하는 것을 포함하고,
    상기 항-S1P 작용제는
    서열번호 1 내지 3번에서 선택되는 CDRH1;
    서열번호 4 내지 8번에서 선택되는 CDRH2;
    서열번호 9 내지 11번에서 선택되는 CDRH3;
    서열번호 12 내지 15번에서 선택되는 CDRL1;
    서열번호 16 내지 20번에서 선택되는 CDRL2; 및
    서열번호 21 내지 26번에서 선택되는 CDRL3; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 대조군은 스핑고리피드를 포함하고,
    상기 스핑고리피드는 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative) 중 어느 하나 이상을 포함하고,
    상기 대조군은 표지자를 포함하는,
    면역 진단 방법.
  44. 제43항에 있어서,
    상기 항-S1P 작용제의
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는
    면역 진단 방법.
  45. 제43항에 있어서,
    상기 항-S1P 작용제의
    상기 CDRH1은 서열번호 1번;
    상기 CDRH2는 서열번호 5번;
    상기 CDRH3은 서열번호 10번;
    상기 CDRL1은 서열번호 12번;
    상기 CDRL2는 서열번호 18번; 및
    상기 CDRL3은 서열번호 21번; 의 아미노산 서열을 포함하는
    면역 진단 방법.
  46. 제40항 또는 제43항에 있어서,
    상기 S1P(sphingosine-1-phosphate), S1P 유사체(S1P analog) 및 S1P 유도체(S1P derivative)는
    하기 화학식 1에서 선택되는 것을 특징으로 하는
    면역 진단 방법
    [화학식 1]
    Figure pat00009
    .
    이때, 상기 화학식 1에서, n은 2 내지 13의 정수로부터 선택되고;
    R은 H, 설프히드릴기, 카르복실산기, 시아노기, 에스테르, 하이드록시기, 알켄, 알킨, 산 클로라이드기, 아민기, 알콕시아민기 또는 할로겐 원자로부터 선택됨






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