KR20190139289A

KR20190139289A - 분석 및 치료 방법과 조성물, 그리고 이의 용도

Info

Publication number: KR20190139289A
Application number: KR1020197034041A
Authority: KR
Inventors: 니콜 제이 모어랜드; 폴 게리 영; 토마스 프로프트
Original assignee: 오클랜드 유니서비시즈 리미티드
Priority date: 2017-04-26
Filing date: 2018-04-26
Publication date: 2019-12-17
Also published as: US20200181207A1; EP3615935A4; WO2018199775A9; WO2018199775A1; CN110785662A; JP2020518575A; JP7358241B2; EP3615935A1; AU2018256755A1; ZA201906907B; CA3061727A1; BR112019022164A2

Abstract

본 발명은, 일반적으로, 스트렙토코커스 피오게네스 감염증, 류머티스성 열 또는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN)을 치료, 검출 및 진단의 보조를 행하기 위한 조성물 및 방법, 및 이를 필요로 하는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발생하는 경향을 평가하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 이러한 방법에서 사용하기 위한, 재조합 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 폴리펩타이드를 포함하는 재조합 폴리펩타이드, 및 이러한 폴리펩타이드를 포함하는 조성물이 또한 제공된다.

Description

분석 및 치료 방법과 조성물, 그리고 이의 용도

본 발명은 일반적으로, 스트렙토코커스 피오게네스 감염증, 류머티스성 열 또는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(poststreptococcal glomerulonephritis: PSGN)을 치료하고, 검출하고, 진단을 보조하기 위한 조성물 및 방법, 그리고 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병하는 경향을 평가하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

그룹 A 스트렙토코커스(GAS, 스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes))는 경증 피부 감염증 및 인두염에서 중증 침습성 질병 및 감염후 면역 후유증, 예를 들어, 류머티스성 열 또는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN)까지의, 다수의 다양한 중증도의 질병을 야기시키거나 이와 관련이 있다. 급성 류머티스성 열 및 관련된 류머티스성 심장병은 개발도상국에서 후천적인 심장병의 주요 원인이다.

스트렙토코커스 혈청학(streptococcal serology)은 이러한 후유증이 원인이 되는 박테리아(causative bacteria)의 진단 배양이 대개 더이상 가능하지 않을 때에 GAS 감염 후 수 주 발생하기 때문에 감염후 면역 후유증의 진단에 대해 중요하다. 일반적으로, 현 임상 실무는 2개의 항원, 즉, 스트렙토라이신-O(SLO) 및 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB)에 대한 항체 역가의 측정을 포함한다. 혈청학적 시험은 각각 항-스트렙토라이신-O(ASO) 및 항-데옥시리보뉴클레아제-B(ADB)로서 지칭된다. ASO 역가는 일반적으로, 혼탁 또는 비탁 검정을 이용하여 측정되며, 값은 일반적으로 밀리리터당 국제 단위(IU/mL)로서 보고된다. ADB 시험은 ASO와는 달리, DNaseB에 대한 기준 혈청이 이용 가능하지 않기 때문에, 덜 표준화된 것이다. ADB 역가는 대개 효소 억제 검정을 이용하여 측정되며, 여기서, 혈청에 의한 DNaseB 활성의 억제는 유색 염료를 사용하여 검출된다.

혼란스럽게도, ASO 및 ADB 항체 반응의 면역동력학(immunokinetics)의 상당한 변동성(variability)이 보고되었으며, GAS 인두염을 앓고 있는 어린이 중 대부분은 감염 후 1년 이상 동안 상승된 ASO 및 ADB 역가(감염전 수준과 비교함)를 나타낸다[1]. 이에 따라, 위양성 진단(false positive diagnosis)의 상당한 위험이 존재한다.

GAS 감염증을 가지거나 최근에 GAS 감염증을 갖는 대상체를 식별하는 더욱 효과적인 방법을 위한, 및 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병하는 경향을 갖는 대상체를 식별하기 위한, 및 류머티스성 열 또는 PSGN의 더욱 효과적인 검출 및 진단을 위한 요구가 존재한다.

본 발명의 목적은 상기 문제를 다루는 것이거나, 류머티스성 열 또는 연쇄상구균 감염후 사구체신염을 검출하고 진단을 돕기 위한, 또는 류머티스성 열 또는 연쇄상구균 감염후 사구체신염이 발병하는 경향을 평가하기 위한 방법 및 조성물을 제공하고/거나, 적어도 대중에게 유용한 선택을 제공하는 것이다.

본 명세서에서 인용된 임의의 특허 또는 특허 출원을 포함하는 모든 참고문헌은 본 명세서에 참고로 포함된다. 임의의 참고문헌이 종래 기술을 구성하는 것으로 인정되지 않는다. 참고문헌의 논의는 이의 저자가 주장하는 내용을 기술하며, 출원인은 인용된 문헌의 정확성 및 관련성을 해결하기 위한 권리를 보유한다. 다수의 종래 기술 공개문이 본 명세서에 언급되어 있지만, 이러한 참고문헌은 임의의 이러한 문헌이 뉴질랜드에서 또는 임의의 다른 국가에서, 당해 분야의 일반적인 지식의 일부를 형성한다는 인정을 구성하지 않는 것으로 명확하게 이해될 것이다.

이러한 목적 및 다른 목적은 본 발명의 하나 이상의 양태에 따라 달성된다.

이에 따라, 일 양태에서, 본 발명은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출(recent exposure)을 검출하는 방법으로서,

하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;

생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단 각각은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 둘 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및

복합물을 검출하는 단계로서, 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 류머티스성 열 또는 급성 연쇄상구균 감염후 사구체신염(acute poststreptococcal glomerulonephritis: APSGN)을 포함하는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN), 또는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성 증가를 검출 또는 진단하는 방법으로서,

i) 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;

ii) 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단 각각은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 둘 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및

iii) 복합물을 검출하는 단계로서, 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 류머티스성 열 또는 APSGN이 발병할 가능성 증가를 나타내거나 대상체에 류머티스성 열 또는 PSGN의 존재에 대한 하나의 기준으로서 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계;

iv) 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 진단 기준을 평가하는 단계로서,

v) 류머티스성 열 또는 APSGN에 대한 하나 이상의 진단 기준과 함께 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가가 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN을 나타내는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하는 방법으로서,

ii) 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단 각각은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 둘 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에서 항원-특이적 항체에 결합하는 단계; 및

iii) 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 대상체에 스트렙토코커스 피오게네스의 존재 또는 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 대상체의 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하는 방법으로서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체는 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 특이적으로 결합하며,

ii) 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 둘 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에서 항원-특이적 항체에 결합하는 단계; 및

iii) 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 생물학적 샘플이 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 항체를 함유하는 것을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

다양한 실시형태에서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 하나 이상의 복합물의 존재를 검출하는 것이다.

이에 따라, 일 실시형태에서, 대상체에서 류머티스성 열 또는 급성 연쇄상구균 감염후 사구체신염(APSGN)을 포함하는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN), 또는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성 증가를 검출하거나 진단하는 방법은

iii) 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 항원:항원-특이적 항체 복합물의 존재는 류머티스성 열 또는 APSGN이 발병할 가능성 증가를 나타내거나, 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN의 존재에 대한 하나의 기준으로서 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계;

v) 류머티스성 열 또는 APSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준과 함께 하나 이상의 항원:항원-특이적 항체 복합물의 존재는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN을 나타내는 단계를 포함한다.

다른 실시형태에서, 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하는 방법은

iii) 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 항원:항원-특이적 항체 복합물의 존재는 대상체에 스트렙토코커스 피오게네스의 존재 또는 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 대상체의 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함한다.

다른 실시형태에서, 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 특이적으로 결합하는 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하는 방법은

iii) 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 항원:항원-특이적 항체 복합물의 존재는 생물학적 샘플이 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 항체를 함유함을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓는 환자를 치료하는 방법으로서,

i) 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계; 및

ii) 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및

iii) 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계로서,

iv) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 존재 또는 임계값을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내고;

v) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 부재와 함께, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준의 존재, 또는 임계값 미만의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양의 검출은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 나타내는 단계; 및

vi) 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN에 대한 치료를 투여하고; 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 갖는 경우에, 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 치료를 투여하거나, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 치료를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓는 환자를 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제로 치료하는 방법으로서,

iv) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 존재, 또는 임계값을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양의 검출은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내고;

v) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 부재와 함께 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준의 존재, 또는 임계값 미만의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양의 검출은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 나타내는 단계; 및

vi) 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 또는 현 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하고; 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 조기(이전) 노출을 갖는 경우에, 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

i) 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;

ii) 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단, 및 스트렙토코커스 피오게네스 DNaseB로부터의 항원의 하나 이상의 집단, 및/또는 스트렙토코커스 피오게네스 SLO로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및

iii) 복합물을 검출하는 단계로서,

a. 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 존재, 또는 임계값을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 양의 검출은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내고,

b. 스트렙토코커스 피오게네스 DNaseB-특이적 복합물 및/또는 스트렙토코커스 피오게네스 SLO-특이적 복합물의 존재, 및 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 부재 또는 임계값 미만의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 양의 검출은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계,

iv) 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하고; 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 갖는 경우에, 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

iii) 복합물을 검출하는 단계로서,

iv) 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN에 대한 치료를 투여하고; 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 갖는 경우에, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 치료를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN을 치료하는 방법으로서,

iv) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 존재, 또는 임계값을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양의 검출은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내고,

vi) 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN에 대한 치료를 투여하고; 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 갖는 경우에, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 치료를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

i) 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 존재, 부재 또는 양을 결정하는 단계; 및

ii) 선택적으로, 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계;

iii) 샘플이 임계값을 초과하는 양의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 포함하는 경우에, 대상체를 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN를 앓는 것으로서 예측하는 단계; 및

iv) 대상체에 최근 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 치료학적 유효량의 항생제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 이를 필요로 하는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN을 치료하는 방법은

i) 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 존재, 부재, 또는 양을 결정하는 단계; 및

ii) 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계;

iii) 샘플이 임계값을 초과하는 양의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 포함하고 대상체가 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 갖는 경우에 대상체를 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN을 앓는 것으로서 예측하는 단계; 및

iv) 대상체에 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 치료학적 유효량의 항생제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

iii) 샘플이 임계값 미만의 양의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 포함하고 대상체가 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 갖는 경우에 대상체를 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓는 것으로서 예측하는 단계; 및

iv) 대상체에 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 치료학적 유효량의 항생제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

다양한 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 존재, 부재 또는 양은 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시킴으로써 결정되며, 여기서, 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있다.

다양한 실시형태에서, 임계값을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 양은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출과 관련이 있거나 이를 시사하는 항체 역가이다.

다양한 실시형태에서, 임계값 미만의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 양은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출과 관련이 있거나 이를 시사하는 항체 역가이다.

다양한 실시형태에서, 임계값은 환자의 입원의 20일 후에 류머티스성 열 또는 PSGN 환자의 집단에서 관찰된 항체 역가의 범위 또는 평균 항체 역가로부터, 이의 입원의 20일 이내의 류머티스성 열 또는 PSGN 환자의 집단에서 관찰된 항체 역가의 범위 또는 평균 항체 역가를 분리시키는 SpnA 특이적 항체의 양이다.

일 실시형태에서, 기준수준, 기준 임계값, 또는 임계값은 정상치의 상한(upper limit of normal; ULN)이며, 매칭되는 건강한 집단의 80번째 백분위수(centile)이다.

일 양태에서, 본 발명은 환자를 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제로 치료하는 방법으로서, 환자는 스트렙토코커스 피오게네스로의 감염증을 앓거나 이러한 감염증에 노출되었으며,

iii) 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스의 존재 또는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계로서,

iv) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 존재, 또는 임계값을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내고;

vi) 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하고; 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 갖는 경우에, 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 환자를 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제로 치료하는 방법은

ii) 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단 및 스트렙토코커스 피오게네스 DNaseB로부터의 항원의 하나 이상의 집단 및/또는 스트렙토코커스 피오게네스 SLO로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및

iii) 복합물을 검출하는 단계로서,

b. 스트렙토코커스 피오게네스 DNaseB-특이적 복합물 및/또는 스트렙토코커스 피오게네스 SLO-특이적 복합물의 존재, 및 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 부재, 또는 임계값 미만의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 양의 검출은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계,

iv) 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하며; 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 갖는 경우에, 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하는 단계를 포함한다.

다양한 실시형태에서, 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN에 대한 치료, 또는 급성 또는 현 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 치료는 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제의 투여, 예를 들어, 치료 요법에 따른 투여이다. 예를 들어, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 투여량 요법(dosage regimen), 또는 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN을 치료하는데 효과적인 투여량 요법은 10일 과정의 하나 이상의 항생제, 예를 들어, 10일 과정의 바이실린을 포함한다. 다른 적합한 치료 요법은 본 명세서에 개시된 특정의 대표적인 예를 포함하는, 본 개시내용의 이점을 갖는 당업자에게 공지될 것이다.

다양한 실시형태에서, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 치료, 또는 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 치료는 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제의 투여, 예를 들어, 치료 요법, 예를 들어, 예방적 치료 요법에 따른 투여이다. 예를 들어, 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 투여량 요법, 또는 류머티스성 열 또는 PSGN을 치료하는데 효과적인 투여량 요법은 하나 이상의 항생제의 월별 투여(monthly administration), 예를 들어, 바이실린의 월별 투여를 포함한다. 다른 적합한 치료 요법은 본 명세서에 개시된 특정의 대표적인 예를 포함하는, 본 개시내용의 이점을 갖는 당업자에게 공지될 것이다.

일례에서, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 치료, 또는 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 치료는 안정(bed rest) 및/또는 입원을 포함한다.

일례에서, 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN에 대한 치료를 투여하는 것은 대상체에 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하는 것을 포함한다.

일례에서, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 치료를 투여하는 것은 대상체에 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하는 것을 포함한다.

일례에서, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 치료를 투여하는 것은 대상체를 입원시키고/시키거나 대상체에게 처방하거나 안정을 취하게 하는 것을 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 항생제로의 치료에 대한 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자의 반응성(responsiveness)을 예측하는 방법으로서,

iii) 샘플이 임계값 미만의 양의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 포함하고 대상체가 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 갖는 경우에 대상체가 항생제로의 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 예측하는 단계; 및

일 양태에서, 본 발명은 항생제로의 치료에 대한 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자의 반응성을 예측하는 방법으로서,

iii) 샘플이 임계값을 초과하는 양의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 포함하는 경우, 및 선택적으로, 대상체가 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 갖는 경우에, 대상체가 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN의 치료에 대해 효과적인 항생제로의 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 예측되는 단계; 및

다른 양태에서, 본 발명은 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자에 대한 치료 요법을 결정하는 방법으로서,

iii) 샘플이 임계값 미만의 양으로 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 포함하고 대상체가 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 갖는 경우에, 대상체가 류머티스성 열 또는 PSGN의 치료를 위한 적합한 치료 요법을 받아야 하는 지를 결정하는 단계; 및

iv) 류머티스성 열 또는 PSGN의 치료를 위해 적합한 치료 요법에 따라 대상체를 치료하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 류머티스성 열 또는 PSGN의 치료는 만성 류머티스성 심장 질병의 치료이다.

일 실시형태에서, 류머티스성 열 또는 PSGN의 치료는 대상체에 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 치료학적 유효량의 항생제, 예를 들어, 예방학적 유효량의 이러한 항생제를 투여하는 것을 포함한다.

일 실시형태에서, 류머티스성 열 또는 PSGN의 치료를 위해 적합한 치료 요법은 항생제의 월별 투여, 예를 들어, 바이실린(벤자틴 벤질페니실린)의 월별 투여이다.

iii) 샘플이 임계값을 초과하는 양으로 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 포함하고 선택적으로, 대상체가 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 갖는 경우에 대상체가 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN의 치료를 위해 적합한 치료 요법을 받아야 하는 지를 결정하는 단계; 및

iv) 선택적으로, 대상체에 치료 요법에 따라 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 치료학적 유효량의 항생제를 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제는 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 투약률(dosage rate)로 투여된다.

일 실시형태에서, 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제는 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증 또는 류머티스성 열 또는 PSGN를 앓고 있는 대상체에 투여되는 것보다 더 큰 투약률로 투여된다.

일 실시형태에서, 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제는 하나 이상의 다른 치료제, 예를 들어, 항-염증제, 예를 들어, 아스피린, 글루코코르티코이드, 예를 들어, 프레드니손, 신경이완제, 예를 들어, 할로페리돌, 양성 수축력제(positive inotropic agent), 예를 들어, 디곡신과 함께, 또는 하나 이상의 다른 치료요법, 예를 들어, 장기 입원, 안정, 등과 함께 투여된다.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스에 노출되지만 최근에 노출되지 않은 환자에서 항생제 투여로부터의 항생제 부작용 또는 후유증의 위험은 투여된 항생제가 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증 또는 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN을 앓고 있는 대상체에 투여된 항생제인 경우보다, 만성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제의 투여 후 더 낮다.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스에 노출되지만, 최근에 노출되지 않은 환자에서 항생제 투여로부터 항생제 부작용 또는 후유증의 위험은, 항생제가 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증 또는 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN를 치료하는데 효과적인 양으로 투여된 경우인 경우보다, 확립된 또는 만성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 양으로 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제의 투여 후에 더 낮다.

일 실시형태에서, 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하는 것은 항생제의 비경구 투여를 포함한다.

다양한 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제는 페니실린, 아목시실린, 옥사실린, 에리트로마이신, 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 세팔로틴, 세폭시틴, 세픽심, 세푸록심, 세포탁심, 세프트라이악손, 반코마이신, 클린다마이신, 리팜피신, 시프로플록사신, 테트라사이클린, 코트리목사졸, 및 클로람페니콜을 포함하는 군으로부터 선택된다.

다양한 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제는 β-락타민, 예를 들어, 페니실린, 아목실린(아목시실린), 세픽심, 세프포독신, 세포탁심, 세프트라이악손, 옥사실린; 마크롤라이드, 예를 들어, 클린다마이신; 스트랩토그라민, 예를 들어, 프리스티나마이신; 케톨라이드, 예를 들어, 텔리트로마이신; 페니콜, 예를 들어, 클로람페니콜; 글리코펩타이드, 예를 들어, 테이코플라닌, 반코마이신; 플루오로퀴놀론, 예를 들어, 레보플록사신; 및 테트라사이클린, 예를 들어, 테트라사이클린을 포함하는 군으로부터 선택된다.

일 실시형태에서, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제는 페니실린, 예를 들어, 페니실린 G 프로카인(예를 들어, 크리스티실린) 및 페니실린 G 벤자틴(예를 들어, 바이실린, 바이실린 L-A)을 포함하는 페니실린 G, 페니실린 VK(예를 들어, 비펜-VK, 베타펜-VK, 로바가실린 VK, 비티드), 에리트로마이신, 예를 들어, E-마이신, Ery-Tab, 에리트로신, 또는 설파다이아진, 예를 들어, 마이크로설폰이다.

일 실시형태에서, 환자가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하는 것은 페니실린 G, 에리트로마이신, 또는 설파다이아진의 비경구 투여, 예를 들어, 페니실린 G, 에리트로마이신, 또는 설파다이아진의 정맥내 또는 근육내 투여를 포함한다. 다른 실시형태에서, 경구 투여는 비경구 투여로 대체된다.

다양한 실시형태에서, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제의 투여는 투여량 요법에 따른 투여이다. 다양한 예에서, 투여량 요법은 예를 들어, 급성 치료 기간에 걸쳐, 부하 용량의 상기 항생제의 투여를 포함한다.

특정 실시형태에서, 급성 치료 기간은 약 5일 내지 약 20일, 예를 들어, 약 8일 내지 약 15일, 또는 약 10일 내지 약 12일이고, 약 10일을 포함한다.

일례에서, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 투여량 요법, 또는 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN을 치료하는데 효과적인 투여량 요법은 10일 과정의 하나 이상의 항생제, 예를 들어, 10일 과정의 바이실린을 포함한다. 예를 들어, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 특정의 예시적인 투여량 요법, 또는 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN를 치료하는데 효과적인 투여량 요법은 하기를 포함한다:

i. 벤자틴 벤질페니실린(바이실린)의 경우: 성인 및 30 kg 이상의 어린이의 경우 단일 용량으로서 약 900 mg, 통상적으로 깊은 IM에 의함, 및 30 kg 이하의 어린이의 경우 단일 용량으로서 약 450 내지 675 mg, 또는 20 kg 이하의 환자의 경우 단일 용량 IM으로서 600,000 IU, 및 20 kg 이상의 환자의 경우 단일 용량 IM으로서 1.2 × 10⁶ IU; 모두는 통상적으로 10일 동안,

ii. 페녹시메틸페니실린의 경우: 125 내지 250 mg 하루에 2회, IM이 가능하지 않은 경우 경구로, 통상적으로, 10일 동안, 또는 10 mg/kg, 500 mg까지, 하루에 2회, 10일 동안;

iii. 에리트로마이신의 경우: 10 mg/kg, 최대 500 mg까지, 하루에 2회, 10일 동안;

iv. 에리트로마이신 에틸 석시네이트의 경우: 40 mg/kg/일, 어린이의 경우 최대 1 g/일까지 2 내지 4회의 나누어진 용량.

다양한 실시형태에서, 확립된 또는 만성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제의 투여는 투여량 요법에 따른 투여이다. 예를 들어, 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 특정의 예시적인 투여량 요법, 또는 류머티스성 열 또는 만성 류머티스성 심장 질병을 포함하는 PSGN을 치료하는데 효과적인 투여량 요법은 하기를 포함한다:

i. 벤자틴 벤질페니실린의 경우: 성인 및 30 kg 이상의 어린이의 경우 약 900 mg, 통상적으로 깊은 IM에 의해, 4주마다, 및 30 kg 이하의 어린이의 경우 약 450 내지 675 mg, 4주 마다, 또는 20 kg 이하의 환자의 경우 600,000 IU 근육내로, 4주 마다, 및 20 kg 이상의 환자의 경우 1.2 × 10⁶ IU 근육내로, 4주 마다;

ii. 페녹시메틸페니실린의 경우: 125 내지 250 mg, 하루에 2회, IM이 가능하지 않은 경우 경구로, 통상적으로, 10일 동안;

iii. 에리트로마이신의 경우: 250 mg, 하루에 2회;

iv. 에리트로마이신 에틸 석시네이트의 경우: 400 mg 하루에 2회.

다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 검출하는 방법으로서,

ii) 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, SpnA 항원-특이적 항체가 생물학적 샘플에 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원의 하나 이상의 집단은 SpnA 항원:SpnA 항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에 존재하는 SpnA 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및

iii) 복합물의 존재 또는 부재를 검출하는 단계,

iv) 선택적으로, 대상체에 대하여 류머티스성 열 또는 PSGN에서 스트렙토코커스 피오게네스의 존재에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계로서,

v) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 존재, 또는 임계값을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내고;

vi) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 부재와 함께 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준의 존재, 또는 임계값 미만의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 나타내는, 상기 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 류머티스성 열 또는 급성 연쇄상구균 감염후 사구체신염(APSGN)을 포함하는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN), 또는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성의 증가를 검출하거나 진단하는 방법으로서,

ii) 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원의 하나 이상의 집단은 SpnA 항원:SpnA 항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 생물학적 샘플에 존재하는 SpnA 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및

iii) 복합물의 존재 또는 부재를 검출하는 단계;

iv) 대상체에 대하여 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계로서,

v) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 존재와 함께 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준의 존재, 또는 임계값을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 양의 검출은 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN의 존재에 대한 하나의 기준으로서 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내고;

vi) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 부재와 함께 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준의 존재, 또는 임계값 미만의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 양은 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN을 시사하거나, 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN의 존재에 대한 하나의 기준으로서 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출, 예를 들어, 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 위험 증가를 나타내는, 상기 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 하나 이상의 다른 진단 기준은 SpnA 이외의 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 항체의 존재 또는 부재이다. 예를 들어, 하나 이상의 다른 진단 기준은 스트렙토코커스 피오게네스 DNaseB에 대해 특이적인 항체, 또는 스트렙토코커스 피오게네스 SLO에 대해 특이적인 항체의 존재 또는 부재이다.

본 명세서에 개시된 임의의 실시형태는 본 명세서에 기술된 임의의 양태에 관한 것일 수 있다. 혼동을 피하기 위하여, 본 명세서에 개시된 임의의 양태, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 임의의 방법이 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 바와 같이, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA) 폴리펩타이드, 예를 들어, 하나 이상의 절단된 SpnA 폴리펩타이드, 또는 SpnA의 하나 이상의 단편을 사용할 것이라는 것은 본 명세서의 개시내용으로부터 명백할 것이다. 예를 들어, 다양한 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 하나 이상의 항원 또는 항원의 하나 이상의 집단은 본 명세서에 기술된 바와 같이, 하나 이상의 SpnA 폴리펩타이드, 예를 들어, 하나 이상의 절단된 SpnA 폴리펩타이드 또는 하나 이상의 SpnA 단편으로서 존재한다.

유사하게, 본 명세서에 개시된 임의의 양태, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 임의의 방법에서 사용될 때, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 DNaseB 항원 또는 폴리펩타이드는 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 바와 같이, 하나 이상의 DNaseB 폴리펩타이드, 예를 들어, DNaseB의 하나 이상의 항원 단편일 것이다. 예를 들어, 다양한 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 DNaseB로부터의 하나 이상의 항원 또는 항원의 하나 이상의 집단은 본 명세서에 기술된 바와 같이, 하나 이상의 DNaseB 폴리펩타이드, 예를 들어, 하나 이상의 DNaseB 단편으로서 존재한다.

마찬가지로, 본 명세서에 개시된 임의의 양태, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 임의의 방법에서 사용될 때, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 SLO 항원 또는 SLO 폴리펩타이드는 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 바와 같이, 하나 이상의 DNaseB 폴리펩타이드, 예를 들어, SLO의 하나 이상의 항원 단편일 것이다. 예를 들어, 다양한 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 SLO로부터의 하나 이상의 항원 또는 항원의 하나 이상의 집단은 본 명세서에 기술된 바와 같이, 하나 이상의 SLO 폴리펩타이드, 예를 들어, 하나 이상의 SLO 단편으로서 존재한다.

일 실시형태에서, 항원:항원-특이적 항체 복합물의 둘 이상의 집단의 존재는 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스의 존재를 시사하거나, 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 대상체의 최근의 노출을 시사하거나, 생물학적 샘플이 둘 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 항체를 함유함을 시사한다.

일 실시형태에서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 각 시험 집단에 대해 확립된 항원의 기준 수준에 대한 증가이다.

일 실시형태에서, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체는 하나 이상의 혈청 항체이다.

일 실시형태에서, 하나 이상의 혈청 항체는 하나 이상의 IgG 항체이다.

일 실시형태에서, 하나 이상의 혈청 항체는 하나 이상의 IgA 항체 또는 하나 이상의 IgM 항체이다.

일 실시형태에서, 하나 이상의 다른 진단 기준은 류머티스성 열 또는 PSGN과 관련된 하나 이상의 임상 증상의 존재 또는 부재이다.

일 실시형태에서, 하나 이상의 임상 증상은 이동 다발관절염, 심장염, 혈뇨, 경계 홍반, 피하 결절, 시데남 무도병, 또는 농피증으로부터 선택된다.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나 이상은 하기 단백질들 중 하나로부터의 항원이다:

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA),

ii) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는

iii) 스트렙토라이신-O(SLO).

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나 이상은 하기 기술된 것으로 이루어진 군으로부터 선택된다:

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는

ii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편, 또는

iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편, 또는

iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는

v) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는

vi) 서열번호 5의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는

vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는

viii) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편, 또는

ix) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편, 또는

x) 상기 i) 내지 ix) 중 둘 이상의 임의의 조합.

일 실시형태에서, 생물학적 샘플은 하기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 각각의 집단과 접촉된다:

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는

iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편,

및

iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는

vi) 서열번호 5의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편,

및

vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는

ix) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편.

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA),

ii) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 및

iii) 스트렙토라이신-O(SLO).

i) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편,

ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 및

iii) 서열번호 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단은 조성물에 존재한다.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 하나 이상은 검출 가능한 표지로 표지되고/되거나, 마이크로입자, 비드, 또는 검출 가능한 작용제에 커플링된다.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 집단 중 하나 이상은 비드 또는 마이크로입자에 공유 결합된다.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 집단 각각은 비드 또는 마이크로입자에 공유 결합되며, 선택적으로, 비드 또는 마이크로입자의 상이한 집단 각각은 서로 구별 가능하다.

일 실시형태에서, 비드는 폴리스타이렌 비드, 자성 비드, 카르복실화된 비드, 작용화된 비드이거나, 마이크로입자는 폴리스타이렌 마이크로입자, 자성 마이크로입자, 카르복실화된 마이크로입자, 또는 작용화된 마이크로입자이다. 다양한 예에서, 비드, 비드 또는 마이크로입자의 둘 이상의 집단을 포함하는 것은 멀티플렉스 검정(multiplexes assay)에서 사용하기에 적합하며, 여기서, 각 집단은 상이한 항원에 접합된다. 다양한 예에서, 비드 또는 마이크로입자는 면역검정, 예를 들어, CBA, 루미넥스 검정(luminex assay), 등에서 사용하기에 적합하다.

일 실시형태에서, 항원:항체 복합물을 검출하는 것은 검출 가능한 표지를 지닌 특이적 결합 파트너에 복합물을 노출시키고, 항원-특이적 항체가 생물학적 샘플에 존재하는 경우에 표지로부터 신호를 검출하는 것을 포함한다.

일 실시형태에서, 특이적 결합 파트너는 항체 또는 이의 단편을 포함한다.

일 실시형태에서, 특이적 결합 파트너는 항-IgG 항체, 항-IgG-PE, 또는 이의 단편이다.

일 실시형태에서, 항원:항체 복합물은 유량계, 면역검정, 예를 들어, 플레이트-기반 면역학적 검정, 전기영동 및/또는 면역블롯, 면역크로마토그래피 스트립, 전자 바이오센서, 공명 바이오센서, 또는 미세유체 장치 또는 센서를 이용하여 검출된다.

일 실시형태에서, 면역검정, 예를 들어, 플레이트 기반 면역검정은 ELISA 또는 루미넥스 검정이다.

일 실시형태에서, 항원:항체 복합물은 루미넥스 검정, 예를 들어, 본 명세서에 예시된 바와 같은 루미넥스 검정에서 검출된다.

일 실시형태에서, 하나 이상의 복합물의 존재 또는 항원 특이적 항체 중 하나 이상은 검출 가능하게 표지된 2차 항체를 사용하여 검출된다.

일 실시형태에서, 검출 가능하게 표지된 2차 항체는 항-IgG-PE이다.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원은 검출 가능하게 표지된다.

일 실시형태에서, 검출 가능한 표지는 형광 발색단이다.

일 실시형태에서, 생물학적 샘플은 포유류 종으로부터 얻어진다.

일 실시형태에서, 생물학적 샘플은 체액 샘플이다.

일 실시형태에서, 대상체는 인간 대상체이다.

다른 양태에서, 본 발명은 단리된, 정제된, 또는 재조합 SpnA 폴리펩타이드에 관한 것으로서, 여기서, 상기 SpnA 폴리펩타이드는, 야생형 SpnA에 대하여,

i) N-말단 절단되거나;

ii) C-말단 절단되거나; 또는

iii) N-말단 절단되고 C-말단 절단된다.

일 실시형태에서, SpnA 폴리펩타이드는

i) 면역원성이거나,

ii) 야생형 SpnA와 면역학적으로 교차-반응성이거나,

iii) 검출 가능하게 표지되거나,

iv) 야생형 SpnA와 비교하여 실온에서 저장할 때 향상된 안정성을 가지거나,

v) 서열번호 8로부터의 10개 이상의 인접한 아미노산을 포함하거나, 또는

vi) 상기 i) 내지 v) 중 둘 이상의 임의의 조합이다.

일 실시형태에서, SpnA 폴리펩타이드는 야생형 SpnA와 비교하여 상승된 평균 Tagg를 가지며, 여기서, Tagg는, 예를 들어, SDS-PAGE 분석에 의해 측정한 경우, 단백질의 50%가 응집되는 온도이다. 예를 들어, SpnA 폴리펩타이드는 SDS-PAGE 분석에 의해 측정한 경우, 적어도 약 50℃의 평균 Tagg, 예컨대, 적어도 약 50℃의 평균 Tagg를 갖는다.

일 실시형태에서, SpnA 폴리펩타이드는 야생형 SpnA 폴리펩타이드와 비교하여 약 35℃ 내지 약 60℃의 온도에서 더 높은 정도의 열안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 폴리펩타이드는 향상된 열안정성, 향상된 면역원성 안정성, 또는 향상된 열안정성과 향상된 면역원성 안정성 둘 모두를 갖는다.

다시 의심의 여지를 없애기 위해, 당업자는 본 명세서에 개시된 임의의 양태, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 임의의 방법이 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 바와 같은 SpnA의 하나 이상의 단편을 포함하는, 하나 이상의 절단된 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA) 폴리펩타이드, 예를 들어, 전술한 하나 이상의 절단된 SpnA 폴리펩타이드를 사용할 것임을 인식할 것이다. 예를 들어, 다양한 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 하나 이상의 항원 또는 항원의 하나 이상의 집단은 본 명세서에 기술된 바와 같이, 하나 이상의 절단된 SpnA 폴리펩타이드, 예를 들어, 하나 이상의 N-말단 절단된 SpnA 폴리펩타이드, 또는 하나 이상의 C-말단 절단된 SpnA 폴리펩타이드, 또는 하나 이상의 SpnA 단편으로서 존재한다.

다른 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기술된 바와 같은 단리된, 정제된, 또는 재조합 SpnA 폴리펩타이드를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

추가의 양태에서, 본 발명은 검출 가능하게 표지된 SpnA, 예컨대, 본 명세서에 기재된 바와 같은 재조합 SpnA 폴리펩타이드를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 검출 가능하게 표지된 SpnA는 본 명세서에 기술된 바와 같은, 절단된 SpnA 폴리펩타이드, 예를 들어, 하나 이상의 N-말단 절단된 SpnA 폴리펩타이드, 또는 하나 이상의 C-말단 절단된 SpnA 폴리펩타이드, 또는 하나 이상의 SpnA 단편이다.

다른 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원 또는 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 하나 이상의 집단, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 바와 같은 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA) 폴리펩타이드를 포함하거나 이러한 것이 결합된 비드 또는 마이크로입자에 관한 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기술된 하나 이상의 비드 또는 마이크로입자를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

더욱 추가의 양태에서, 본 발명은 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN을 검출하거나 진단하기 위한, 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하기 위한, 또는 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하기 위한 키트로서,

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는

iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는

vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는

ix) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편

으로 이루어진 군으로부터 선택된 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 적어도 하나를 포함하는 조성물,

선택적으로, 기준 항체 대조군을 포함하는 적어도 하나의 조성물로서, 항체 대조군은 키트에 존재하는 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나에 대해 특이적인 항체를 포함하는, 상기 기준 항체 대조군을 포함하는 적어도 하나의 조성물,

선택적으로, 하나 이상의 항원을 생물학적 샘플과 접촉하기 위해 유리한 배지를 구성하기 위한 하나 이상의 시약,

선택적으로, 생물학적 샘플에 존재하는 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원 특이적 항체와 하나 이상의 항원 사이에 형성된 복합물을 검출할 수 있는 하나 이상의 시약,

및 사용 설명서를 포함하는, 키트에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 적어도 하나는 비드 또는 마이크로입자에 공유 결합된다.

일 실시형태에서, 조성물은 하기 기술된 것의 집단을 포함한다:

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는

iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편.

일 실시형태에서, 조성물은 하기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 각각의 집단을 포함한다:

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는

및

iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는

및

vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는

본 명세서에 제공된 방법의 다양한 실시형태에서, 방법은 단계 ii) 전에, 본 명세서에 기술된 바와 같은 키트를 제공하는 것을 더 포함한다.

본 명세서에 제공된 방법 또는 키트의 다양한 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 하나 이상은 항스트렙토라이신(ASO), 항히알루로니다제(AHase), 항스트렙토키나제(ASKase), 항니코틴아미드-아데닌 디뉴클레오티다제(항-NAD)를 포함하는 군으로부터 선택된다.

일 실시형태에서, 방법은 비드 또는 마이크로입자의 둘 이상의 집단의 용도 또는 이를 포함하는 조성물 또는 키트를 포함하며, 여기서, 비드 또는 마이크로입자의 각 집단은 상이한 스트렙토코커스 피오게네스 항원을 포함하며, 비드 또는 마이크로입자의 집단 중 적어도 하나는

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는

iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편의 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나의 집단을 포함하며,

여기서, 비드 또는 마이크로입자는, 예를 들어, ELISA, Luminex, 또는 CBA 검정을 포함하는, 유량계, 면역검정 예를 들어, 플레이트-기반 면역학적 검정, 전기영동 및/또는 면역블롯, 면역크로마토그래피 스트립, 전자 바이오센서, 공명 바이오센서, 미세유체 장치 또는 센서에서 사용하기 용이하다.

다양한 실시형태에서, 용도는 본 명세서에 기술된 바와 같은 임의의 방법에서 이루어진다. 예를 들어, 용도는 하기 기술된 것 중 임의의 하나를 포함하지만, 이로 제한되지 않는 용도이다: 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 검출하는 방법, 대상체에서 류머티스성 열 또는 급성 연쇄상구균 감염후 사구체신염(APSGN)을 포함하는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN)을 검출하거나 진단하는 방법, 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성 증가를 검출하거나 진단하는 방법, 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하는 방법, 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하는 방법, 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓는 환자를 치료하는 방법, 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓는 환자를 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제로 치료하는 방법, 스트렙토코커스 피오게네스로의 감염증을 앓고 있거나 이에 노출된 환자를 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제로 치료하는 방법, 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓는 환자의 항생제로의 치료에 대한 반응성을 예측하는 방법, 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓는 환자를 위한 치료 요법을 결정하는 방법, 또는 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 검출하는 방법.

선택적으로, 비드 또는 마이크로입자의 둘 이상의 집단 중 하나 이상은 하기 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나의 집단을 포함한다:

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는

iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는

vi) 서열번호 5의 아미노산 서열으로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는

vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는

다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 검출하기 위한; 대상체에서 류머티스성 열 또는 급성 연쇄상구균 감염후 사구체신염(APSGN)을 포함하는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN)을 검출하거나 진단하기 위한; 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성 증가를 검출하거나 진단하기 위한; 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하기 위한; 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하기 위한; 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한; 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자를 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제로 치료하기 위한; 스트렙토코커스 피오게네스로의 감염증을 앓고 있거나 이에 노출된 환자를 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제를 치료하기 위한; 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자의 항생제로의 치료에 대한 반응성을 예측하기 위한; 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자에 대한 치료 요법을 결정하기 위한; 또는 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 검출하기 위한 것 중 어느 하나를 위한, 단리된, 정제된, 또는 재조합 SpnA 폴리펩타이드, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원 또는 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 하나 이상의 집단, 예를 들어, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA) 폴리펩타이드를 포함하거나 이러한 것이 결합된 비드 또는 마이크로입자, 본 명세서에 기술된 바와 같은 단리된, 정제된 또는 재조합 SpnA 폴리펩타이드를 포함하는 조성물, 검출 가능하게 표지된 SpnA를 포함하는 조성물, 본 명세서에 기술된 바와 같은 하나 이상의 비드 또는 마이크로입자를 포함하는 조성물, 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN을 검출하거나 진단하기 위한 키트, 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하기 위한 키트, 또는 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하기 위한 키트에 관한 것이다.

다양한 실시형태에서, 폴리펩타이드, 비드 또는 마이크로입자, 조성물, 또는 키트는 하기 기술된 것의 군으로부터 선택된 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 적어도 하나이거나, 이를 포함한다:

i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는

ii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편,

iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편,

iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는

vi) 서열번호 5의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는

(vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는

vi) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편.

다양한 실시형태예에서, 대상체 또는 환자는 임계값을 초과하는 항-스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항체의 양 또는 항체 역가를 갖는 대상체이며, 여기서, 상기 임계값을 초과하는 상기 항체의 양 또는 항체 역가는 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 시사한다. 예를 들어, 임계값은 정상치의 상한(ULN)으로서, 이는 매칭되는 건강한 집단의 80번째 백분위수이다.

다른 실시형태에서, 대상체 또는 환자는 임계값 미만의 항-스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항체의 양 또는 항체 역가를 갖는 대상체이며, 여기서, 상기 임계값을 미만의 상기 항체의 양 또는 항체 역가는 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 시사한다. 예를 들어, 임계값은 정상치의 상한(ULN)으로서, 이는 매칭되는 건강한 집단의 80번째 백분위수이다.

i) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;

iii) 복합물을 검출하는 단계로서, 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은 대상체에서 류머티스성 열 또는 급성 연쇄상구균 감염후 사구체신염(APSGN)을 포함하는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN), 또는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성 증가를 검출하거나 진단하는 방법으로서,

iii) 복합물을 검출하는 단계로서, 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 류머티스성 열 또는 APSGN이 발병할 가능성 증가를 나타내거나, 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN의 존재에 대한 하나의 기준으로서 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계;

iv) 대상체에 대한 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 진단 기준을 평가하는 단계로서,

v) 류머티스성 열 또는 APSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준과 함께 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 대상체에서 류머티스성 열 또는 APSGN을 나타내는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 하나 이상의 진단 기준은 류머티스성 열 또는 PSGN과 관련된 하나 이상의 임상 증상의 존재 또는 부재이다.

iii) 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스의 존재 또는 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 대상체의 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하는 방법으로서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 특이적으로 결합하며,

일 실시형태에서, 연쇄상구균 감염후 사구체신염은 급성 연쇄상구균 감염후 사구체신염(APSGN)이다.

다양한 실시형태에서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가이다.

다양한 실시형태에서, 기준 수준, 기준 임계값, 또는 임계값(본 명세서에서 교체 사용 가능하고, 컷-오프(cut-off)로도 지칭됨)은 특정 집단에 대해 결정된다. 일례에서, 제공된 국가에서 최근-발병 류머티스성 열(ARF)의 경우에, 예를 들어 NZ에서 ARF의 경우에, 임계값은 건강한, 잘 매칭된 지원자의 코호트(cohort)를 사용하여 결정된다. 이에 따라 확립된 컷-오프(또는 기준 수준)은 이후에, NZ에서 모든 ARF에 적용된다. 기준 임계값이 국가, 인종집단(ethnic group), 및 인구(population)에 따라 상이할 수 있으며, 이에 따라, 특정 실시형태에서, 상이한 국가 또는 인구 각각이 그 자체의 기준 임계값을 결정하는 것이 인식될 것이다. 일 실시형태에서, 기준 수준, 기준 임계값, 또는 임계값은 정상치의 상한(ULN)으로서, 이는 매칭되는 건강한 집단의 80번째 백분위수이다.

일 실시형태에서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원을 검출하기 위한 기준 임계값은 이의 입원의 20일 내에 류머티스성 열 또는 PSGN 환자의 집단으로부터 얻어진 샘플에서 관찰된 그러한 항체에 대한 평균 역가이다. 예를 들어, 본 명세서에 기술된 방법에서 사용하기 위한 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대한 기준 임계값은 이의 입원의 20일 내에 대상체와 인구통계학적으로 유사한 류머티스성 열 또는 PSGN 환자의 집단으로부터 얻어진 샘플에서 본 명세서에 기술된 방법을 이용하여 관찰된 평균 항원-특이적 항체 역가이다.

일 실시형태에서, 항-SpnA 항체:SpnA 복합물을 검출하기 위한 기준 임계값, 예를 들어, 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 결정하는데 사용하기 위한 SpnA에 대한 기준 임계값은 이의 입원의 20일 내에 류머티스성 열 또는 PSGN 환자의 집단으로부터 얻어진 샘플에서 관찰된 평균 항-SpnA 항체 역가이다. 예를 들어, 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 결정하는데 사용하기 위한 SpnA에 대한 기준 임계값은 이의 입원의 20일 내에 대상체와 인구통계학적으로 유사한 류머티스성 열 또는 PSGN 환자의 집단으로부터 얻어진 샘플에서 본 명세서에 기술된 방법을 이용하여 관찰된 평균 항-SpnA 항체 역가이다.

본 발명의 다른 목적, 양태, 특징 및 장점은 하기 설명으로부터 명백하게 될 것이다. 그러나, 본 발명의 사상 및 범위 내의 다양한 변경 및 수정이 이러한 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백하게 될 것이기 때문에, 본 발명의 바람직한 실시형태를 나타내면서, 상세한 설명 및 특정 실시예가 단지 예시로서 제공되는 것으로 이해되어야 한다.

본 발명의 다른 양태는 단지 일례로서 그리고 첨부된 도면을 참조로 하여 제공되는 하기 설명으로부터 명백하게 될 것이다.
도 1은 10개의 혈청 샘플에서 SLO(도 1a), DNaseB(도 1b) 및 SpnA(도 1c)에 대한 사이토메트릭 비드 검정(Cytometric Bead Array)에 의해 결정된 싱글플렉스(singleplex)와 멀티플렉스(multiplex) 중간 형광 값(Median Fluorescence Value; MFI) 간의 상관관계를 도시한 산점도(scatter plot)를 나타낸다. 선형 회귀 분석이 수행되었으며, R²는 하기와 같이 결정되었다: SLO=0.999; DNaseB B=0.998; 및 SpnA=0.998;
도 2는 3개의 그룹 A 스트렙토코커스 항원에 대한 정제된 IgG에 대한 ELISA의 결과를 도시한 것이다. 항체는 SLO(A), DNaseB(B) 및 SpnA(C)에 대한 특이성을 갖는 IgG를 야기시키는 친화력 크로마토그래피를 이용하여 IVIG로부터 정제되었다. 오차막대는 표준 편차를 나타낸다.
도 3은 SLO(A), DNaseB(B) 및 SpnA(C)에 대한 사이토메트릭 비드 검정에 의해 결정된 혈청 항체 농도를 도시한 산점도를 나타낸 것이다. 각 항원에 대한 ULN 값이 도시되어 있다(점선). Kruskal-Wallis 일원 분산 분석이 p-값을 결정하기 위해 수행되었다.
도 4는 SLO(A), DNaseB(B)에 대한 상업적으로 입수 가능한 시험과 사이토메트릭 비드 검정 간의 상관관계를 도시한 산점도를 나타낸 것이다. 선형 회귀 분석이 수행되었으며, R²는 SLO=0.968 및 DNaseB B=0.934로서 결정되었다.
도 5는 FCAP 어레이 소프트웨어에 5개 파라미터 로지스틱 포뮬러(logistic formula)로 피팅된 사이토메트릭 비드 검정에 대한 SLO, DNAse B 및 SpnA의 표준 곡선을 나타낸 것이다. SLO(500 ng/ml), DNAse B(500 ng/ml) 및 SpnA(1500 ng/ml)에 대해 특이적인 정제된 IgG는 2배로 희석되었고, 항원-커플링된 비드와 함께 인큐베이션되었다.
도 6은 아미노산 34 내지 571을 포함하는 SLO의 재조합 단편의 아미노산 서열(도 6a)을 도시한 것이며, 무독화된 SLO 유사체의 아미노산 서열은 도 6b에 제시된다. 치환된 아미노산은 강조표시 및 밑줄표시되어 있다.
도 7은 아미노산 43 내지 271을 포함하는, DNaseB의 재조합 단편의 아미노산 서열을 도시한 것이다.
도 8은 아미노산 28 내지 854를 포함하는, SpnA의 재조합 단편의 아미노산 서열을 도시한 것이다.
도 9는 싱글플렉스 루미넥스 검정(각 항원을 개별적으로)과 멀티플렉스 루미넥스 검정을 비교한 3개의 산점도를 나타낸 것이며, 여기서, 3개의 항원 비드는 동일한 부분으로 혼합되고 단일 검정에서 시험 혈청과 함께 인큐베이션되었다. 본 명세서의 실시예 2에 기술되는 바와 같이, 도 9a는 싱글플렉스 루미넥스 검정 및 멀티플렉스 루미넥스 검정에서 SLO에 대한 MFI 간의 상관관계를 나타내는 것이며, 도 9b는 싱글플렉스 루미넥스 검정 및 멀티플렉스 루미넥스 검정에서 DNaseB에 대한 MFI 간의 상관관계를 나타내는 것이며, 도 9c는 싱글플렉스 루미넥스 검정 및 멀티플렉스 루미넥스 검정에서 SpnA에 대한 MFI 간의 상관관계를 나타내는 것이다.
도 10은 SLO(도 10a), 및 DNaseB(도 10b)에 대한 상업적으로 입수 가능한 시험과 루미넥스 검정 간에 상관관계를 도시한 2개의 산점도를 나타낸 것이다. 선형 회귀 분석이 수행되었으며, R²는 SLO=0.933 및 DNaseB B=0.942로서 결정되었다.
도 11은 루미넥스 검정에 의해 결정한 경우에 환자로부터 수집된 혈청에 존재하는 IgG 항체의 수준을 도시한 3개의 그래프를 나타내며, 여기서, 혈청은 입원 후 일 단위로 분리된다. 입원 후 20일 이후에 수집된 혈청과 비교하여 입원 후 20일 이내에 수집된 혈청에서의 항-SLO 항체 농도에서(도 11, 좌측 패널), 또는 이러한 2개의 그룹 간의 항-DNaseB 항체 농도에서(도 11, 중간 패널) 유의미한 차이가 관찰되지 않았다. 이와 대조적으로, 항-SpnA 항체 농도의 유의미한 감소는 본 명세서의 실시예 2에 기술되는 바와 같이, 입원 후 20일 이내에 수집된 혈청(도 11, 우측 패널)과 비교할 때 입원 후 20일 이후에 수집된 혈청에서 관찰되었다.
도 12는 루미넥스 검정에 의해 결정한 경우에 환자로부터 수집된 혈청에 존재하는 IgG 항체의 수준을 도시한 3개의 그래프를 나타내며, 여기서, 혈청은 입원 후 일 단위로 분리된다. 입원 후 20일 이후에 수집된 혈청과 비교하여 입원 후 20일 이내에 수집된 혈청에서의 항-SLO 항체 농도에서(도 12, 좌측 패널), 또는 이러한 2개의 그룹 간의 항-DNaseB 항체 농도에서(도 12, 중간 패널) 유의미한 차이가 관찰되지 않았다. 이와 대조적으로, 항-SpnA 항체 농도의 유의미한 감소는 본 명세서의 실시예 3에 기술되는 바와 같이, 입원 후 20일 이내에 수집된 혈청과 비교할 때 입원 후 20일 이후에 수집된 혈청에서(도 12, 우측 패널) 관찰되었다.
도 13은 실시예 4에 기술되는 바와 같이, 천연 SpnA 및 본 명세서에 개시된 절단된 SpnA 폴리펩타이드의 열안정성의 분석을 도시한 2개의 크로마토그래프를 나타낸다. 도 13A는 실온에서 오일(5일) 동안 최적의 조건(0일) 하에서 저장된, 전장 SpnA 폴리펩타이드의 SDS-PAGE 분석의 크로마토그래프이다. 도 13B는 실온에서 오일(5일) 동안 최적의 조건(0일) 하에서 다시 저장된, 절단된 SpnA 폴리펩타이드의 SDS-PAGE 분석의 크로마토그래프이다.
도 14는 실시예 5에 기술되는 바와 같이, 천연 SpnA 및 본 명세서에 개시된 절단된 SpnA 폴리펩타이드의 열안정성의 분석을 도시한 1개의 크로마토그래프 및 2개의 그래프를 나타낸다. 도 14A는 각 온도에서 접힌 단백질(folded protein)의 백분율의 SDS-PAGE 분석의 크로마토그래프이다. 도 14B는 각 온도에서 각 단백질에 대한 Tagg(단백질의 50%가 응집되는 온도)를 도시한 그래프이다. 도 14C는 각 폴리펩타이드에 대한 평균 Tagg 값의 그래프로서, 이는 천연 SpnA 폴리펩타이드(47.5±0.9℃)에 대해 결정된 것보다 유의미하게 더 높은, 51.0±0.6℃의 절단된 작제물에 대해 결정된 더 높은 평균 Tagg를 도시한다.

본 발명은 일반적으로, 생물학적 샘플에서 GAS-특이적 항체의 존재를 검출하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 이러한 항체의 검출은 하기 개시내용을 읽을 때 당업자에게 명백하게 되는 다른 용도 이외에, 감염후 면역 후유증의 위험 증가를 갖는 대상체를 식별하고 특정 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 대상체를 식별하는데 유용하다.

문맥이 달리 명확하게 요구하지 않는 한, 설명 및 청구범위 전반에 걸쳐, 단어 "포함하다(comprise)", "포함하는(comprising)" 등은 배타적이거나 완전한 의미와는 달리 포괄적인 의미로, 다시 말해서, "포함하지만, 이로 제한되지 않는(including, but not limited to)"의 의미로 해석되어야 한다.

특정 실시형태에서, 본 발명은 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 존재 또는 양을 결정하되, 대조군에서의 상기 항체의 수준에 대한 생물학적 샘플에서의 상기 항체의 상승된 수준은 류머티스성 열 또는 PSGN 또는 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병하는 경향의 증가를 시사하는 것을 포함하는, 류머티스성 열 또는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN)의 진단을 돕거나 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병하는 경향을 평가하는 방법에 관한 것이다.

다른 실시형태에서, 본 발명은 치료 과정 전 또는 동안에 대상체로부터 얻어진 하나 이상의 생물학적 샘플로부터의 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 존재 또는 양을 결정하되, 시간에 따른 대상체로부터 얻어진 샘플에서의 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 수준 감소는 치료가 효과적임을 시사하는 것을 포함하는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN의 효율을 결정하는 방법에 관한 것이다.

다른 실시형태에서, 본 발명은 (a) 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플에서 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 존재 또는 양을 결정하는 단계; (b) 대조군에서 상기 항체의 수준과 생물학적 샘플에서 상기 항체의 수준을 비교하는 단계; 및 (c) 생물학적 샘플에서 상기 항체의 수준이 대조군에서 상기 항체의 수준보다 더 높을 때 치료를 위한 대상체를 선택하는 단계를 포함하는, 류머티스성 열 또는 PSGN의 치료를 위한 대상체를 선택하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 부분적으로, 항원성 성분에 대한 항체의 친화력, 즉, 항원 또는 에피토프를 특이적으로 인지하고 여기에 결합하는 항체의 능력, 및 이러한 특이적 인지 및 결합의 결정에 의존한다. 다시 말해서, 본 발명은 부분적으로, 항체가 특정 에피토프를 인지하고 여기에 결합할 때 형성된 복합물의 검출 또는 식별에 의존한다.

용어 "친화력"은 결합 분자, 즉, 본 발명의 문맥에서, 통상적으로, 면역글로불린 분자의 상보성 결정 영역(complementarity determining region, CDR)과 개별 에피토프의 결합 강도의 척도를 지칭한다. 용어 "결합활성(avidity)"은 면역글로불린의 집단과 항원(들) 간의 복합물의 전체 안정성, 즉, 항원을 갖는 면역글로불린 혼합물의 기능적 결합 강도(functional combining strength)를 지칭한다. 당업자는 결합활성이 특정 에포토프를 갖는 집단에서 개별 면역글로불린 분자의 친화력, 및 또한, 면역글로불린과 항원의 원자가 둘 모두와 관련이 있는 것으로 이해할 것이다. 예를 들어, 2가 단클론성 항체와 고도로 반복하는 에피토프 구조, 예를 들어, 폴리머를 갖는 항원 간의 상호작용은 높은 결합활성 중 하나일 것이다. 항원에 대한 항체의 친화력 또는 결합활성은 본 명세서에 기술된 특정 방법을 포함하는, 당해 분야에 널리 공지된 바와 같은 임의의 적합한 방법을 이용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 항원에 대한 항체의 친화력을 측정하기 위한 일반적인 기술은 ELISA, RIA, 및 표면 플라즈몬 공명을 포함한다. 특정 항체:항원 상호작용의 측정된 친화력은 상이한 조건, 예를 들어, 염 농도, pH, 완충제, 온도 하에서 측정되는 경우에 달라질 수 있다. 이에 따라, 그리고 특히, 비교 데이터가 요망될 때, 친화력 및 다른 항원-결합 파라미터, 예를 들어, K_D, IC₅₀의 측정은 통상적으로, 항체 및 항원의 표준 용액, 표준 완충제, 및 표준 검정 조건으로 이루어진다.

본 명세서에서 교체 가능하게 사용되는 "특이적으로 결합하는" 또는 "특이적으로 인지하는"은 일반적으로, 결합 분자, 예를 들어, 항체가 이의 항원-결합 도메인을 통해 에피토프에 결합하는 것, 및 결합이 항원-결합 도메인과 에피토프 간의 일부 상보성을 수반하는 것을 의미한다. 이에 따라, 항체는 랜덤의 관련되지 않은 에피토프에 결합하는 것보다 더욱 용이하게, 이의 항원-결합 도메인을 통해 그러한 에피토프에 결합하는 경우 에피토프에 "특이적으로 결합한다"고 한다. 이러한 항체는 본 명세서에서 인용된 에피토프 또는 에피토프의 클래스에 "대해 특이적인 항체"로서 지칭될 수 있다. 용어 "특이성"은 본 명세서에서, 특정 항체가 특정 에피토프에 결합하는 상대적 친화력을 정량화하기 위해 사용된다. 예를 들어, 항체 "A"는 항체 "B"보다 제공된 에피토프에 대해 더 높은 특이성을 갖는 것으로 간주될 수 있거나, 항체 "A"는 관련된 에피토프 "y"에 대해 갖는 것보다 더 높은 특이성으로 에피토프 "x"에 결합한다고 할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 "결정하는(determing)"에 대한 언급은 특정 샘플에 존재하는 언급된 물질(예를 들어, 항체, 항원, 또는 바이오마커)의 양을 추정, 정량화, 계산 또는 달리 유도하는 것을 포함한다. 이는, 예를 들어, 검출 가능한 산물의 출현, 예를 들어, 기질 수준의 임의의 검출 가능한 변화 또는 산물의 출현 또는 기질의 소멸 속도의 임의의 변화일 수 있는 종료점 지시(end point indication)를 측정하거나, 본 명세서에 기술된 바와 같은 항원, 바이오마커, 복합물, 또는 다른 시약에 결합된 항체의 양을 측정함으로써 달성될 수 있다.

존재하는 경우에, 용어 "면역학적 결합 특징(immunological binding characteristics)" 또는 다양한 문법적 형태의 항원과 항체의 다른 결합 특징은 항체의 특이성, 친화력, 교차-반응성, 및 다른 결합 특징을 지칭한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "면역원성 안정성", "면역학적 안정성", 및 문법적 균등물은 하나 이상의 면역원성 또는 면역학적 특징의 유지, 예를 들어, 제공된(특이적인을 포함) 면역학적 반응을 야기시키는 능력, 예를 들어, 항체에 의해 결합되거나 항체에 의해 인지하는 능력, 또는 세포-매개 면역학적 반응을 유도하는 능력의 유지를 고려한다. 예를 들어, 특정 항원, 폴리펩타이드, 또는 다른 작용성과 관련하여 사용될 때, 면역원성 안정성 또는 면역학적 안정성은 예를 들어, 항체-특이적 인지의 유지, 예를 들어, 특정 항체에 의해 결합되는 항원, 폴리펩타이드 또는 다른 작용제의 능력을 포함한다. 면역학적 안정성이 또한, 항체의 안정성, 예를 들어, 에피토프를 인지하고 여기에 결합하는 능력의 유지를 지칭할 수 있는 것으로 이해될 것이다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "우선적으로 결합하는"은 예를 들어, 다른 에피토프, 예를 들어, 관련된, 유사한, 상동의 또는 유사 에피토프보다 더욱 용이하게 일어나는, 에피토프에 항체의 결합을 고려한다. 이에 따라, 제공된 에피토프에 "우선적으로 결합하는" 항체는 심지어 이러한 항체가 다른 에피토프와 일부 교차-반응성을 나타낼 수 있는 환경에서도, 다른 에피토프보다 그러한 에피토프에 더 잘 결합할 것이다.

예를 들어, 항체는 제2 에피토프에 대한 항체의 K_D보다 낮은 해리 상수(K_D)를 갖는 제1 에피토프에 결합하는 경우에 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨질 수 있다. 일 실시형태에서, 항체는 제2 에피토프에 대한 항체의 K_D보다 적어도 1 자리수배 낮은 친화력으로 제1 에피토프에 결합하는 경우 제1 항원에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨질 수 있다. 다른 실시형태에서, 항체는 항체는 제2 에피토프에 대한 항체의 K_D보다 적어도 2 자리수배 낮은 친화력으로 제1 에피토프에 결합하는 경우 제1 항원에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨질 수 있다.

다른 예에서, 항체는 제2 에피토프에 대한 항체의 k(on)보다 낮은 결합 속도 상수(on 속도, k(on))로 제1 에피토프에 결합하는 경우에 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨질 수 있다. 일 실시형태에서, 항체는 제2 에피토프에 대한 항체의 k(on)보다 적어도 1 자리수배 큰 결합 속도 상수(on 속도, k(on))로 제1 에피토프에 결합하는 경우에 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨질 수 있다. 다른 실시형태에서, 항체는 제2 에피토프에 대한 항체의 k(on)보다 적어도 2 자리수배 큰 결합 속도 상수(on 속도, k(on))로 제1 에피토프에 결합하는 경우에 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨질 수 있다.

다른 예에서, 항체는 제2 에피토프에 대한 항체의 k(off)보다 낮은 해리 속도 상수(off 속도, k(off))로 제1 에피토프에 결합하는 경우에 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨질 수 있다. 일 실시형태에서, 항체는 제2 에피토프에 대한 항체의 k(off)보다 1 자리수배 낮은 해리 속도 상수(off 속도, k(off))로 제1 에피토프에 결합하는 경우에 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨질 수 있다. 다른 실시형태에서, 항체는 제2 에피토프에 대한 항체의 k(off)보다 2 자리수배 낮은 해리 속도 상수(off 속도, k(off))로 제1 에피토프에 결합하는 경우에 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨질 수 있다.

본 명세서에서 유용한 특정 방법에서, 둘 이상의 항체의 경쟁적 결합은 일반적으로, 에피토프에 하나 이상의 다른 항체의 결합을 억제하는 하나의 항체의 능력을 평가함으로써 평가된다. 특정 실시형태에서, 항체는 그러한 에피토프에, 에피토프에 대한 기준 항체의 결합을 어느 정도 차단하는 정도로 우선적으로 결합하는 경우에 제공된 에피토프에 대한 기준 항체의 결합을 경쟁적으로 억제한다고 한다. 경쟁적 억제는 당해 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 경쟁 ELISA 검정에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로, 항체는 제공된 에피토프에 대한 기준 항체의 결합을 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50% 경쟁적으로 억제한다고 할 수 있다.

본 명세서에 기술된 바와 같은 항체, 또는 항원-결합 단편, 이의 변이체 또는 유도체는 또한, 이의 교차-반응성 측면에서 기술되거나 특정될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "교차-반응성(cross-reactivity)"은 제2 항원을 인지하고 여기에 결합하는, 하나의 항원에 대해 특이적인 항체의 능력을 지칭한다. 일반적으로, 항체 교차-반응성의 관찰은 이러한 교차-반응성을 지지하는 2개(또는 이상)의 상이한 항원성 기질 간의 관련성의 척도로서 얻어진다. 이에 따라, 항체는 이의 형성을 유도하는 것 이외의 에피토프에 결합하는 경우에 교차-반응적이다.

특정 문맥에서, 에피토프가 또한, 교차-반응성인 것으로 언급되거나 기술될 수 있으며, 이에 의해, 둘 이상의 상이한 에피토프가 특정 항체에 의해 인지되고/되거나 이에 의해 결합될 수 있다는 것이 인식될 것이다. 교차-반응성 에피토프는 일반적으로, 유도 또는 본래 에피토프와 동일한 다수의 상보적 구조 특징을 함유한다. 일부 상황에서, 교차-반응성 에피토프는 본래 에피토프보다 더 큰 친화력으로 결합될 수 있다.

진단 목적을 위하여, 낮은 교차-반응성을 갖거나 교차-반응성을 갖지 않는 항체 및 항원이 일반적으로 바람직할 것이라는 것이 인식될 것이다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "폴리펩타이드"는 단일 "폴리펩타이드"뿐만 아니라 복수의 "폴리펩타이드"를 포함하도록 의도되고, 아미드 결합(또한, 펩타이드 결합으로서 알려짐)에 의해 선형으로 연결된 모노머(아미노산)를 포함하는 분자를 지칭한다. 용어 "폴리펩타이드"는 둘 이상의 아미노산의 임의의 사슬 또는 사슬들을 지칭하고, 산물의 특정 길이를 지칭하는 것은 아니다. 이에 따라, 둘 이상의 아미노산의 사슬 또는 사슬들을 지칭하기 위해 사용되는 펩타이드, 다이펩타이드, 트라이펩타이드, 올리고펩타이드, "단백질," "아미노산 사슬" 또는 임의의 다른 용어는 "폴리펩타이드"의 정의 내에 포함되어 있으며, 용어 "폴리펩타이드"는 임의의 이러한 용어 대신에 또는 서로 교환 가능하게 사용될 수 있다.

용어 "폴리펩타이드"는 또한, 비제한적으로, 글리코실화, 아세틸화, 포스포릴화, 아미드화, 공지된 보호/차단 기에 의한 유도체화, 단백질분해 분열, 또는 비천연 발생 아미노산에 의한 개질을 포함하는, 폴리펩타이드의 발현후 개질의 산물을 지칭하도록 의도된다. 폴리펩타이드는 천연 생물학적 공급원으로부터 유래되거나 재조합 기술에 의해 생성될 수 있지만, 명시된 핵산 서열로부터 반드시 번역되는 것은 아니다. 이는 화학적 합성을 포함하는 임의의 방식으로 발생될 수 있다.

본 발명의 폴리펩타이드는 약 3 이상, 5 이상, 10 이상, 20 이상, 25 이상, 50 이상, 75 이상, 100 이상, 200 이상, 500 이상, 1,000 이상, 또는 2,000개 이상의 아미노산의 크기를 가질 수 있다. 폴리펩타이드는 규정된 3차원 구조를 가질 수 있으며, 이러한 것은 반드시 이러한 구조를 갖는 것은 아니다. 용어 당단백질은 아미노산 잔기, 예를 들어, 세린 잔기 또는 아스파라긴 잔기의 산소-함유 또는 질소-함유 측쇄를 통해 단백질에 부착된 적어도 하나의 탄수화물 모이어티에 연결된 단백질을 지칭한다.

"단리된" 폴리펩타이드 또는 단편, 이의 변이체, 또는 유도체는 이의 자연 환경에 존재하지 않는 폴리펩타이드를 의도하는 것이다. 특정 수준의 정제가 요구되는 것은 아니다. 예를 들어, 단리된 폴리펩타이드는 이의 본래 또는 천연 환경으로부터 제거될 수 있다. 숙주 세포에서 발현된 재조합으로 생성된 폴리펩타이드 및 단백질은 임의의 적합한 기술에 의해 분리되거나 분별되거나 일부 또는 실질적으로 정제된 천연 또는 재조합 폴리펩타이드로서 본 발명의 목적을 위해 단리된 것으로 여겨진다.

또한, 본 발명의 폴리펩타이드로서, 상기 폴리펩타이드의 단편, 유도체, 유사체, 또는 변이체, 및 이들의 임의의 조합이 포함된다. 본 발명의 항체 또는 항체 폴리펩타이드로 지칭될 때, 용어 "단편," "변이체," "유도체" 및 "유사체"는 상응하는 고유 결합 분자, 항체, 또는 폴리펩타이드의 항원-결합 성질들 중 적어도 일부를 보유하는 임의의 폴리펩타이드를 포함한다. 본 발명의 폴리펩타이드의 단편은 단백질분해 단편, 뿐만 아니라 결실 단편을 포함한다. 폴리펩타이드의 변이체는 전술한 바와 같은 단편, 및 또한, 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 인한 변경된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 변이체는 천연에서 발생하거나 인공적으로 발생일 수 있다. 비-천연 발생 변이체는 당해 분야에 공지된 돌연변이유발 기술을 이용하여 생성될 수 있다. 변종 폴리펩타이드는 보존적 또는 비-보존적 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함할 수 있다. 변종 폴리펩타이드는 또한, 본 명세서에서 "폴리펩타이드 유사체"로서 지칭될 수 있다. 폴리펩타이드의 유도체는 본 명세서에서, 고유 폴리펩타이드 상에서 발견되지 않는 추가적인 특징을 나타내기 위해 변경된 폴리펩타이드로서 고려된다. 예는 융합 단백질, 또는 작용적으로 개질된 폴리펩타이드, 예를 들어, 페그화된 폴리펩타이드, 비드-연결된 폴리펩타이드, 및 하나 이상의 다른 작용제 또는 화합물에 공유 결합된 폴리펩타이드를 포함한다. 일 실시형태에서, 폴리펩타이드의 "유도체"는 측면 반응기의 반응에 의해 화학적으로 유도체화된 하나 이상의 잔기를 갖는 주제 폴리펩타이드를 지칭한다. 또한, "유도체"로서, 20개의 표준 아미노산의 하나 이상의 천연 발생 아미노산 유도체를 함유한 그러한 펩타이드가 포함된다. 예를 들어, 4-하이드록시프롤린은 프롤린으로 치환될 수 있으며; 5-하이드록시라이신은 라이신으로 치환될 수 있으며; 3-메틸히스티딘은 히스티딘으로 치환될 수 있으며; 호모세린은 세린으로 치환될 수 있으며; 오르니틴은 라이신으로 치환될 수 있다.

일 실시형태에서, 특이적으로 식별된 폴리펩타이드의 유사체는, 예를 들어, 10개 이상의 인접한 아미노산의 서열에 대해, 특정된 폴리펩타이드, 예를 들어, 도면에 예시된 아미노산 서열 또는 이의 단편의 서열과 약 70% 서열 동일성을 가질 것이다. 즉, 각 폴리펩타이드의 잔기의 70%는 동일하다. 다른 실시형태에서, 특이적으로 식별된 폴리펩타이드의 유사체는 75% 초과의 동일성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 특이적으로 식별된 폴리펩타이드의 유사체는 80% 초과의 동일성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 특이적으로 식별된 폴리펩타이드의 유사체는 85% 초과의 동일성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 특이적으로 식별된 폴리펩타이드의 유사체는 90% 초과의 동일성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 특이적으로 식별된 폴리펩타이드의 유사체는 95% 초과의 동일성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 특이적으로 식별된 폴리펩타이드의 유사체는 99% 초과의 동일성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 폴리펩타이드의 유사체는 특정된 폴리펩타이드의 서열과 관련하여, 약 20개보다 적은, 예를 들어, 10개 미만의 아미노산 잔기 치환, 개질 또는 결실을 가질 것이다.

다른 실시형태에서, 폴리펩타이드는 70% 초과의 상동성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 폴리펩타이드는 75% 초과의 상동성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 폴리펩타이드는 80% 초과의 상동성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 폴리펩타이드는 85% 초과의 상동성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 폴리펩타이드는 90% 초과의 상동성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 폴리펩타이드는 95% 초과의 상동성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 폴리펩타이드는 99% 초과의 상동성을 가질 것이다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 폴리펩타이드의 유도체 및 유사체는 약 20개 미만, 및 더욱 바람직하게 10개 미만의 아미노산 잔기 치환, 개질 또는 결실을 가질 것이다. 바람직한 치환은 보존된 것으로서 당해 분야에 공지된 것이며, 즉, 치환된 잔기는 물리적 또는 화학적 성질, 예를 들어, 소수성, 크기, 전하 또는 작용기를 공유한다.

또한, 특정 수의 인접한 아미노산 잔기에 대한 특정 정도의 동일성을 갖는 폴리펩타이드의 유사체가 고려된다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 특정된 폴리펩타이드의 유사체는 기준/특정된 서열의 10개 이상의 인접한 아미노산에 대해 90% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, 특정된 폴리펩타이드의 유사체는 기준/특정된 서열의 20개 이상의 인접한 아미노산에 대해 90% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는다.

용어 "폴리뉴클레오타이드"는 단일 핵산뿐만 아니라 복수의 핵산을 포함하도록 의도되고, 예를 들어, 메신저 RNA(mRNA) 또는 플라스미드 DNA(pDNA)를 포함하는 단리된 핵산 분자 또는 작제물을 지칭한다. 폴리뉴클레오타이드는 통상적인 포스포다이에스터 결합 또는 통상적이지 않은 결합(예를 들어, 아미드 결합, 예를 들어, 펩타이드 핵산(PNA)에서 확인됨)을 포함할 수 있다. 용어 "핵산"은 폴리뉴클레오타이드에 존재하는 임의의 하나 이상의 핵산 세그먼트, 예를 들어, DNA 또는 RNA 단편을 지칭한다. "단리된" 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드는 이의 천연 환경으로부터 제거된, 핵산 분자, DNA, 또는 RNA로 의도된다. 예를 들어, 벡터에 함유된 항체 또는 항원을 암호화하는 재조합 폴리뉴클레오타이드는 본 개시내용의 목적을 위해 단리되는 것으로 여겨진다. 단리된 폴리뉴클레오타이드의 다른 예는 이종 숙주 세포 또는 용액 중 정제된 (일부 또는 실질적으로) 폴리뉴클레오타이드에 유지된 재조합 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 단리된 RNA 분자는 본 명세서에 기술된 폴리뉴클레오타이드의 생체내 또는 시험관내 RNA 전사체를 포함한다. 본 명세서에 기술된 단리된 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 합성적으로 생성된 이러한 분자를 더 포함한다. 또한, 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 조절 요소, 예를 들어, 프로모터, 리보솜 결합 사이트, 또는 전사 종결 인자일 수 있거나, 이를 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "샘플"은 대상체 또는 환자로부터 얻어진 임의의 생물학적 물질을 지칭하며, 본 명세서에 기술된 대부분의 실시형태(예를 들어, 방법)에서, 하나 이상의 항체의 존재가 나타날 수 있는 샘플에 대해 선호될 것이라는 것이 인식될 것이다. 일 실시형태에서, 샘플은 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액("CSF"), 또는 소변을 포함할 수 있다. 예를 들어, 샘플은 전혈, 혈장, 혈액 샘플로부터 풍부한 B 세포, 또는 배양된 세포(예를 들어, 대상체로부터의 B 세포)를 포함할 수 있다. 샘플은 또한, 생검 또는 점막 또는 신경 조직을 포함하는 조직 샘플을 포함할 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 샘플은 전체 세포 및/또는 세포의 용해물을 포함할 수 있다. 샘플의 수집 및/또는 제조를 위한 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다.

"대상체" 또는 "개체" 또는 "동물" 또는 "환자" 또는 "포유동물"은 진단, 예후, 예방, 또는 치료가 요망되는, 임의의 대상체, 특히, 포유류 대상체, 예를 들어, 인간 환자를 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 치료적 치료 및 예방적(prophylactic 또는 preventative) 수단 둘 모두를 지칭하며, 여기서, 목적은 요망되지 않는 생리학적 변화 또는 장애, 예를 들어, 류머티스성 열 또는 APSGN의 발병 또는 진행을 예방하거나 늦추는(줄이는) 것이다. 유익하거나 요망되는 임상 결과는 증상의 완화, 질병의 정도의 감소, 질병의 안정화된(즉, 악화되지 않는) 상태, 질병 진행의 지연 또는 둔화, 질병 상태의 완화 또는 경감, 병원체 제거, 및 검출 가능하거나 검출 가능하지 않던지 간에 차도(remission)(부분적으로 또는 전체적으로)를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. "치료"는 또한, 치료를 받지 않은 경우에 예상되는 생존과 비교하여 생존 연장을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 대상체는 이미 질환 또는 장애를 갖는 대상체뿐만 아니라 질환 또는 장애를 갖기 쉬운 대상체 또는 질환 또는 장애의 징후가 예방되어야 하는 대상체를 포함한다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 항원은 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스-특이적 항체를 정성적으로 또는 정량적으로 검출하기 위해 사용된다. 이는 시각적으로 검출 가능한 신호를 제공하는 기술에 의해 달성될 수 있으며, 이는 형광(면역형광), 효소 반응의 색소생산 제품, 침전물의 생산, 화학발광 또는 생체발광 중 임의의 하나일 수 있다. 특정 실시형태는 광학 현미경법, 유세포 분석법, 또는 형광 검출(fluorometric detection)과 함께 형광으로 또는 컬러-표지된 항체를 사용한다. 항체를 검출하기 위해 사용될 수 있는 다른 기술 및 표지는 콜로이드성 금, 방사성 태그, GFP(녹색 형광 단백질), 등, 아비딘/스트렙타빈-바오틴, 자성 비드뿐만 아니라, 물리적 시스템, 예를 들어, 실제 결합에 대해 민감한 나노기술 시스템을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.

항원, 항체 또는 이의 단편은 면역조직화학, 면역형광 또는 면역전자 현미경에서와 같이 조직학 염색(histology staining)에서 뿐만 아니라, 항체 또는 단백질의 인시튜 검출을 위해 사용될 수 있다. 당업자는 임의의 광범위한 조직학적 방법, 예를 들어, 염색 절차가 이러한 인시튜 검출을 달성하기 위해 변경될 수 있다는 것을 용이하게 인식할 것이다.

본 명세서에서 기술된 항체 또는 항원이 표지되고 직접적으로 검출될 수 있는 방법들 중 하나는 이를 효소에 연결시키는 것으로서, 효소 면역검정(EIA)에서 사용된다. 이러한 효소는 또한, 후에 적절한 기질에 노출될 때, 예를 들어, 분광학적, 형광학적 수단에 의해 또는 시각적 수단에 의해 검출될 수 있는 화학적 모이어티를 형성하는 방식으로 기질과 반응할 것이다. 항체 또는 항원을 검출 가능하게 표지하기 위해 사용될 수 있는 효소는 말레에이트 데하이드로게나제, 스타필로코칼 뉴클레아제, 델타-5-스테로이드, 이소머라제, 효모 알코올 데하이드로게나제, 알파-글리세로포스페이트 데하이드로게나제, 트라이오스 포스페이트 이소머라제, 호스래디시 퍼옥시다제, 알칼리 포스파타제, 아스파라기나제, 글루코스 옥시다제, 베타-갈락토시다제, 리보뉴클레아제, 우레아제, 카탈라제, 글루코스-6-포스페이트 데하이드로게나제, 글루코아밀라제 및 아세틸콜린-에스테라제를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 검출은 효소에 대한 발색 기질을 사용하는 비색 방법에 의해 달성될 수 있다. 특정 실시형태에서, 검출은 유사하게 제조된 표준물과 기질의 효소 반응의 정도의 시각적 비교에 의해 달성되며, 이러한 절차는, 예를 들어, 나이트로셀룰로스 또는 플라스틱 지지체, 딥 스트립(dip strip), 등 상에서 구현된 것을 포함하는, 가용성 컬러 제품 및 비-가용성 컬러 제품 둘 모두에 대해 적합하다.

일부 실시형태에서, 항체와 항원의 반응을 검출하는 것은 적절한 경우에, 항원:항체 복합물을 결합하는(항원 또는 더욱 일반적으로 항체와 반응성인) 2차 항체 또는 다른 결합 파트너의 사용에 의해 추가로 도움을 받을 수 있다. 일반적으로, 이러한 2차 항체 또는 리간드는 검출 가능하게 표지되며, 여기서, 2차 항체의 검출은 항원:항체 복합물의 존재를 유추할 수 있다.

특이적 결합 파트너, 예를 들어, 2차 항체는 자주, 샘플이 유도되는 종의 면역글로불린의 보존된 영역에 대해 반응성일 것이다. 본 명세서에서 특히 고려된 예에서, 2차 항체 또는 특이적 결합 파트너는 인간 면역글로불린, 예를 들어, IgG에 대한 친화력을 갖는다. 2차 항체의 선택은 적어도 일부 샘플의 공급원 및 그 안에 존재할 것으로 예상되는 항체의 특성에 의존적일 것이다.

다수의 널리 공지된 검출 방법은 본 명세서에 기술된 방법들의 실무에서 사용하기에 적합하다. 예를 들어, 효소 면역검정, 예를 들어, 면역형광 검정(IFA), 측광 검정, 효소 연결 면역흡착 검정(ELISA), ELISPOT 검정, 및 면역블롯팅은 특이적 항체의 검출을 달성하기 위해 용이하게 구성될 수 있다.

또한 사용될 수 있는 다른 검출 시스템은 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 코완 균주 I로부터 유래된 단백질 A, 그룹 C 스트렙토코커스(예를 들어, 균주 26RP66)로부터의 단백질 G, 또는 바이오틴-아비딘 결합 반응의 사용을 이용하는 시스템의 사용을 기초로 한 검출 시스템을 포함한다.

본 명세서에 기술된 항원 및 항체가 사용될 수 있는 다른 면역효소 검출 방법에는 웨스턴 블롯, 및 도트 블롯이 있으며, 여기서, 시약은 전기영동에 의해 분리되고, 나이트로셀룰로스 막 또는 다른 적합한 지지체로 전달된다. 시험되는 샘플(예를 들어, 혈장)은 이후에, 막과 접촉되며, 형성된 면역 복합물의 존재는 이미 기술된 방법에 의해 검출된다. 이러한 방법에 대한 변형예에서, 정제된 항원은 막 상에 라인 또는 스폿으로 적용되고, 샘플에 존재하는 임의의 항체와 결합할 수 있으며, 형성된 면역 복합물은 본 명세서에 기술된 기술을 이용하여 검출된다.

항체:항원 복합물의 존재는 또한, 응집(agglutination)에 의해 검출될 수 있다. 이러한 방법의 하나의 예시적인 예에서, 본 명세서에 기술된 항원은 균일한 현탁액을 형성하기 위해 예를 들어, 라텍스 입자를 코팅하기 위해 사용된다. 샘플, 예를 들어, 항원을 인식할 수 있는 특정 항체를 함유한 혈청과 혼합될 때, 라텍스 입자는 응집되며, 큰 응집물의 존재는 시각적으로 검출될 수 있다.

항체와 항원의 반응을 검출하는 것은 당해 분야에 공지된 방법에 의해 검출 가능한 모이어티로 표지된 항체 또는 리간드의 사용에 의해 촉진될 수 있다. 이러한 검출 가능한 모이어티는 침전물 또는 컬러 변화의 시각적 검출, 현미경법에 의한 시각적 검출, 또는 분광법 또는 방사선 측정에 의한 자동 검출, 등을 가능하게 한다. 검출 가능함 모이어티의 예는 플루오레세인 및 로다민(형광 현미경법의 경우), 호스래디시 퍼옥시다제 및 알칼리 포스파타제(광학 현미경법 또는 전자 현미경법 및 생화학적 검출의 경우 및 컬러 변화에 의한 생화학적 검출의 경우), 및 바이오틴-스트렙타비딘(광학 또는 전자 현미경법의 경우)을 포함한다. 사용되는 검출 방법 및 모이어티는, 예를 들어, 상기 리스트 또는 당해 분야에 널리 공지된 바와 같은 이러한 선택에 적용되는 표준 기준에 의한 다른 적합한 예로부터 선택될 수 있다.

방사선 동위원소에 의존적인 방법이 일반적으로 이전의 방법보다 덜 선호적으로 보이지만, 항원, 항체 또는 항체 단편의 방사성 표지화에 의한 검출을 달성하는 방사성 검출 방법, 및 방사성면역검정(RIA)의 이용이 이용 가능하다. 방사성 동위원소는 감마/베타 계수기 또는 섬광 계수기를 사용하는 이러한 수단에 의해 또는 방사선 사진법(autoradiography)에 의해 검출될 수 있다.

더욱 자주 이용되는 방법은 검출되는 항체 또는 항원을 비-방사성, 검출 가능한 표지, 예를 들어, 형광 화합물로 표지한다. 형광 표지된 항체 또는 항원이 적절한 파장의 광에 노출될 때, 이의 존재는 이후에, 형광으로 인해 검출될 수 있다. 가장 일반적으로 사용되는 형광 표지화 화합물들 중에는 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리트린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, o-프탈데하이드 및 플루오레사민이 있다.

항체 또는 항원은 또한, 형광 방출 금속, 예를 들어, ¹⁵²E, 또는 란탄 계열의 다른 것을 사용하여 검출 가능하게 표지될 수 있다. 이러한 금속은 다이에틸렌트라이아민 펜타아세트산(ETPA)와 같은 금속 킬레이트화 기를 사용하여 항체 또는 항원에 부착될 수 있다.

항체 또는 항원은 또한, 화학발광 화합물에 이를 커플링시킴으로써 검출 가능하게 표지될 수 있다. 화학발광-태그화된 항체 또는 항원의 존재는 이후에, 화학 반응 동안 일어나는 발광의 존재를 검출함으로써 결정된다. 특히 유용한 화학발광 표지화 화합물의 예에는 루미놀, 이소루미놀, 테로마틱(theromatic) 아크리디늄 에스테르, 이미다졸, 아크리디늄 염 및 옥살레이트 에스테르가 있다.

마찬가지로, 생체발광 화합물은 항체 또는 항원을 표지하기 위해 사용될 수 있다. 생체발광은 일반적으로, 화학발광 반응의 효율을 증가시키는 촉매 단백질의 활성을 통해 생물학적 시스템(biological system)에서 일어난다. 제공된 생체발광 단백질의 존재는 발광의 존재를 검출함으로써 결정된다. 표지 목적을 위한 중요한 생체발광 화합물에는 루시페린, 루시페라제 및 에쿼린이 있다.

딥 스트립 또는 다른 고정된 검정 디바이스를 이용하는 방법을 포함하는, 생물학적 샘플에서 항체를 검출하는 방법의 특정 예는, 예를 들어, 하기 특허에 개시되어 있다: 미국특허 제5,965,356호(단순 헤르페스 바이러스 타입 특이적 혈청검정); 미국특허 제6,114,179호(항원 및/또는 항체의 검출을 위한 방법 및 시험 키트); 미국특허 제6,077,681호(항체의 검출에 의한 운동 신경병증의 진단); 미국특허 제6,057,097호(자가-면역 반응을 포함하는 병인학을 위한 및/또는 염증 질병을 위한 마커); 및 미국특허 제5,552,285호(산화된 DNA 염기에 대한 항체를 위한 면역검정 방법, 조성물 및 키트).

예로서, 미소구체 검정(또한, 유동 비드 검정으로 불림)은, 또한, 생물학적 유체(예를 들어, 대상체로부터의 혈액 또는 혈청 샘플)에서 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 검출하기 위해 사용될 수 있다. Luminex Corporation에 의해 개발된 시스템 및 Becton Dickinson에 의해 개발된 다른 시스템으로 나타내는 바와 같은, 이러한 기술은 하나 또는 여러 분석물을 검출하기 위해 매우 소량, 통상적으로, 20㎕의 샘플을 처리할 수 있다. 이러한 검정의 원리는 특정 양의 적색 염료 및 적외선 염료를 함유한 미소구체에 포획 항체(capture antibody)의 커플링을 기초로 한 것이다. 샘플, 즉, 피코에르트린(phycoerthrin: PE)과 커플링된 2차 검출 항체와 함께 이러한 미소구체의 인큐베이션 후에, 비드는 유세포 측정기로 분석된다. 하나의 레이저는 비드를 검출하며, 제2 레이저는 그러한 비드에 결합된 PE의 세기를 검출한다. 이러한 기술은 멀티플렉스 검정, 스트렙토코커스 뉴모니에(Streptococcus pneumoniae)의 혈청형 분석, 인간 융모성 생식선자극호르몬(hCG) 및 알파-페토단백질(AFP)의 동시 측정, 톡소플라즈마 곤디이(Toxoplasma gondii), 레불라 바이러스(Rubella virus), 시토메갈로바이러스, 및 1형 및 2형 단순 헤르페스 바이러스의 동시 검출에서 시토카인을 포함하는 다수의 생물학적으로 중요한 분자 또는 작용제를 검출하기 위해 사용되었다[Luminex Corp.로부터 입수 가능한 기술 노트(technical note) 참조, 예를 들어, 웹-사이트에 또는 이의 카탈로그를 통함].

특정 실시형태에서, 생물학적 샘플에 존재하는 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체는 미소구체에 커플링된 항원성 단백질에 결합한다. 일부 실시형태에서, 2차 검출 항체(이의 예는 또한 본 명세서에서 특이적 결합 파트너로서 지칭됨)는, 예를 들어, 인간 IgG에 대한 단클론성 항체이다. 다른 실시형태에서, 2차 검출 항체는, 예를 들어, 인간 IgG에 대한 다클론성 항체이다. 이러한 방법에서 사용되는 2차 항체는, 예를 들어, 바이오틴에 커플링되거나 달리 검출 가능하게 표지될 수 있다.

본 명세서에서 고려되는 바와 같이 사용하기에 적합한 면역학적 기술은 예를 들어, 표지된 2차 항체를 포함하는 표지된 항체 또는 항체 단편을 사용하여 항체:항원 복합물의 형성에 의존하는 면역학적 방법을 포함한다. 예시적인 방법은 면역학적-기반 방법, 작용제, 또는 장치, 예를 들어, 면역크로마토그래피 스트립, 형광 면역마이크로입자, 웨스턴 블롯, 항체에 부착된 효소에 의해, 항체로 코팅된 자성 입자에 의해, 표면 플라즈몬 공명에 의해 촉매화된 전기화학적 반응을 기반으로 한 바이오센서, 및 항체에 결합된 분석물이 검출되는 다른 기술 이외에, ELISA 방법, 예를 들어, 간접 ELISA, 경쟁적 ELISA, 샌드위치 ELISA를 포함한다. 이러한 방법을 구현하기 위한 다양한 방법 및 기술이 존재하고, 당업자에게 널리 공지될 것이고, 마이크로유체 기술, 자동화된, 및/또는 고처리량 기술을 포함할 수 있다.

적합한 검정은 정량적 기술, 예를 들어, ELISA, 또는 정성적 기술, 예를 들어, 신속 면역크로마토그래피 검정, 면역블롯, 딥 스트립 등일 수 있다. 대개 정량적 검정으로서 이용되는 검정이 특정 상황에서 정성적으로 이용될 수 있는 것으로 인식되어야 한다.

정성적, 선택적으로, 신속 검정, 예를 들어, 면역크로마토그래피 검정, 특히, 면역크로마토그래피 스트립을 사용하는 검정은 더 많은 복합물 검정 기술이 예를 들어, 개발도상국에서, 또는 추가 평가로부터 유익할 수 있는 대상체를 식별하기 위한 제1선 진단으로서 이용 가능하지 않거나 실용적이지 않는 지역에서 사용하기 특히 적합하다.

예를 들어, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 존재 또는 양이 특정 양보다 크거나 이보다 낮은 경우인 지를 나타내는 정성적 검정의 일 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 바와 같은 둘 이상의 항원을 사용하는 정성적 ELISA가 사용된다. 절차는 본 명세서에 기술된 바와 같은 키트, 예를 들어, 조성물, 예를 들어, 완충제 용액 또는 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원을 포함하는 샘플 제조 용액, 선택적으로, 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 항체가 존재하지 않는 음성 대조군, 선택적으로 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체가 존재하는 양성 대조군, 및 ELISA의 성분, 예를 들어, 반응 용기, 다중벽 플레이트, 및 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체와 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원 간에 복합물의 형성을 검출하기 위한 하나 이상의 2차 검출 항체, 및 선택적으로, 복합물을 고정시키고/시키거나 검정의 현상을 위한 하나 이상의 성분들을 함유한 키트로 수행된다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원을 포함하는 조성물은 먼저 반응 용기, 예를 들어, ELISA 플레이트에 용기 상에 하나 이상의 항원을 고정시키는 조건 하에서 도입된다. 다른 실시형태에서, 반응 용기, 예를 들어, ELISA 플레이트에는 그 위에 이미 고정된 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원이 제공된다. 다른 특이적으로 고려되는 예에서, 하나 이상의 2차 검출 항체는 반응 용기 상에 또는 반응 용기 내에 이미 고정되어 있거나 조성물에 제공되고 여기에 검출 항체를 고정시키기 위한 조건 하에서 반응 용기 내에 도입된다. 다양한 대안적인 방법이 존재하며, 이에 의해 분석물-의존 복합물 형성, 포획 및 표지화가 검출 가능한 신호를 제공하며, 이러한 방법이 일반적으로, 검출을 허용하기 위해 항체:항원 복합물의 고정화에 의존적이라는 것이 당업자에 의해 인식될 것이다.

하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 존재가 결정되거나 상기 항체의 양이 특정 임계값보다 높거나 낮은 지를 결정하는 정성적 검정의 다른 실시형태에서, 면역크로마토그래피 스트립이 사용된다. 일례에서, 스트립은 본 명세서에 기술된 바와 같이 둘 이상의 항원을 포함하고, 여기에는 일반적으로 하나 이상의 조성물, 예를 들어, 완충제 용액 또는 샘플 제조 용액, 선택적으로, 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대한 항체가 존재하지 않는 음성 대조군, 선택적으로, 하나 이상의 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체가 존재하는 양성 대조군, 및 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체와 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원 간의 복합물의 형성을 검출하기 위한 특이적 결합 파트너, 및 선택적으로, 검정의 현상을 위한 하나 이상의 성분들이 제공될 것이다. 일례에서, 별개의 면역크로마토그래피 스트립이 음성 대조군으로서 작용하기 위해 제공되는데, 여기서, 스트렙토코커스 피오게네스 항원이 존재하지 않는다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 면역크로마토그래피 스트립은 적어도 2개의 상이한 영역을 가지며, 이들 중 하나는 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원을 포함하며, 선택적으로 다른 하나는 스트렙토코커스 피오게네스 항원을 포함하지 않으며, 선택적으로, 다른 하나는 양성 대조군 영역으로서 작용하기 위해, 하나 이상의 고정된 항체 또는 2차 검출 항체 또는 특이적 결합 파트너에 의해 결합될 수 있는 다른 작용제를 포함한다.

하나의 특정 실시형태에서, 검출은 포획 ELISA를 통해 달성된다. 포획 ELISA(또한, "샌드위치" ELISA로서 공지됨)는 매우 소량(피코그램 내지 마이크로그램)의 물질(예를 들어, 호르몬, 세포 신호전달 화학물질, 감염성 질병 항원 및 시토카인, 및 본 개시내용의 문맥에서, 항체)을 정량화하기 위한 민감한 검정이다. 이러한 타입의 ELISA는 분석될 기질이 너무 묽어서 지지 물질, 예를 들어, 폴리스타이렌 마이크로적정 플레이트(예를 들어, 세포 배양 상청액 중 단백질)에 결합하지 않을 수 있거나, 플라스틱(예를 들어, 유기 소분자)에 잘 결합하지 않을 때 통상적으로 고려된다. 포획 시약(예를 들어, 포획 항원), 샘플, 대조군, 및 검출 항체에 대한 최적의 희석뿐만 아니라 인큐베이션 시간은 일반적으로 경험적으로 결정되고, 광범위한 적정을 필요로 할 수 있다. 이상적으로, 효소-표지된 검출 항체 또는 검출 항원을 사용할 것이다. 그러나, 검출 항체 또는 항원이 표지되지 않은 경우에, 2차 항체는 코팅 항체 또는 항원과 교차-반응하지 않아야 한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "검출 가능한 모이어티", "검출 가능한 표지', 및 문법적 균등물은 직접적으로 또는 간접적으로 모니터링될 수 있는 임의의 원자, 분자 또는 이의 부분, 시약, 또는 작용제, 존재, 부재 또는 수준을 지칭한다. 하나의 예는 방사성 동위원소를 포함한다. 다른 예는 (i) 색 또는 광방출(발광) 반응을 촉매화할 수 있는 효소 및 (ii) 형광 발색단을 포함한다. 검출 가능한 모이어티의 검출은 직접적인 것일 수 있으며, 단, 검출 가능한 모이어티 자체가 예를 들어, 예컨대, 형광 발색단의 경우에 검출 가능하다. 대안적으로, 검출 가능한 모이어티의 검출은 간접적일 수 있다. 후자의 경우에, 자체가 직접적으로 검출 가능한, 검출 가능한 모이어티와 반응하는 제2 모이어티가 통상적으로 사용된다. 검출 가능한 모이어티는, 예를 들어, 공유 결합에 의해 항체 또는 표지된 항원에 내재될 수 있다. 예를 들어, 항체의 불변 영역은 간접 검출 가능한 모이어티로서 역할을 할 수 있으며, 여기에 직접 검출 가능한 모이어티를 갖는 2차 항체가 특이적으로 결합할 수 있다.

이에 따라, 2차 항체는 본 명세서에 기술된 방법에서 항체의 검출을 위한 특히 적합한 수단이다. 이러한 2차 항체 자체는 검출 가능한 모이어티에 접합될 수 있다. 본 발명에 따른 항체가 검출 가능하게 표지될 수 있는 방법들 중 하나는 이를 효소에 연결시키는 것이다. 이러한 효소는 또한, 적절한 기질에 후에 노출될 때, 예를 들어, 분광학적, 형광학적 수단에 의해 또는 시각적 수단에 의해 검출될 수 있는 화학적 모이어티를 형성하는 방식으로 기질과 반응할 것이다. 항체를 검출 가능하제 표지하기 위해 사용될 수 있는 효소는 호스래디스 퍼옥시다제, 알카리 포스파타제, 말레에이트 데하이드로게나제, 스타필로코칼 뉴클레아제, 델타-5-스테로이드 이소머라제, 효모 알코올 데하이드로게나제, 알파-글리세로포스페이트 데하이드로게나제, 티리오스 포스페이트 이소머라제, 아스파라기나제, 글루코스 옥시다제, 베타-갈락토시다제, 리보뉴클레아제, 우레아제, 카탈라제, 글루코스-6-포스페이트 데하이드로게나제, 글루코아밀라제 및 아세틸콜린에스테라제를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.

검출은 효소에 대한 발색 기질을 사용하는, 비색 방법에 의해 달성될 수 있다. 검출은 또한, 유사하게 제조된 표준물과 비교하여 기질의 효소 반응 정도의 시각적 비교에 의해 달성될 수 있다.

시약이 결합된 고체 지지체, 즉, 예를 들어, 적용 가능한 경우, 항원 또는 항체를 이용하는 실시형태(예를 들어, 방법, 검정, 및 키트)에서, 고체 지지체는 임의의 수불용성, 수불현탁성의 고체 지지체이다. 적합한 고체 지지체의 예는 비드, 예를 들어, 폴리스타이렌의 비드, 여과지, 시험관, 딥스트립, 및 마이크로적정 플레이트를 포함한다. 결합된 시약은 공유 결합에 의해 또는 흡착에 의해 고체 지지체에 결합될 수 있다. 고체 지지체 사용의 장점은 고체 및 액체상의 분리를 위해 원심분리 단계가 요구되지 않는다는 것이며, 원심분리는 처리를 용이하게 하기 위해, 특정 실시형태, 예를 들어, 비드-기반 검정에서 이용될 수 있다.

상기에 언급된 고체 지지체는 폴리머, 예를 들어, 폴리스타이렌, 아가로스, 세파로스, 셀룰로스, 유리 비드 및 셀룰로스 또는 다른 폴리머의 자기화 가능한 입자를 포함한다. 고체-지지체는 큰 또는 작은 비드 또는 입자, 튜브, 플레이트, 스트립의 형태, 또는 다른 형태를 가질 수 있다.

고체 지지체로서, 통상적으로, 시험관 또는 마이크로적정 플레이트, 제1 항체 또는 항원, 예를 들어, 검출되는 스트렙토코커스 피오게네스 항체에 대해 특이적인 항원, 또는 이의 임의의 단편 또는 유도체, 예를 들어, 본 명세서에 상세하게 개시된 그러한 항원으로 코팅된 내부 벽이 이용된다.

본 명세서에 기술된 방법들 중 하나 이상을 수행하기 위해 필수적인 하나 이상의 성분을 포함하는 키트의 제공이 또한 고려된다. 키트는 통상적으로, 본 명세서에 기술된 스트렙토코커스 피오게네스 항원들 중 적어도 하나를 포함하는 조성물, 예를 들어, 상기 항원들 중 둘 이상을 포함하는 조성물을 포함할 것이다. 본 개시내용에 따라 방법을 수행하기 위한 다른 성분은 키트에 유용하게 포함될 것이다. 예를 들어, 키트는 하나 이상의 항원을 생물학적 샘플과 접촉시키기 위해 바람직한 배지를 구성하기 위한 하나 이상의 시약을 포함할 수 있다. 키트는 또한, 샘플 수집을 위한 장비, 예를 들어, 면봉, 피펫, 또는 유사한 수집 수단, 및 시약이 접촉되는 하나 이상의 반응 단계를 수행하기 위한 장비, 예를 들어, 플레이트, 시험관, 유리 또는 플라스틱 표면, 웰에, 또는 흡수지의 스트립 상 또는 유사한 수단에 배치된 액체 또는 반고체 배지를 포함하는 인큐베이션 수단을 포함할 수 있다. 다른 키트 성분은 하나 이상의 항원과 생물학적 샘플에 존재하는 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원 특이적 항체 간에 형성된 복합물의 검출을 가능하게 하는 하나 이상의 시약을 포함할 수 있다.

본 명세서에서 고려되는 방법, 검정 및 키트는 특정 실시형태에서, 예를 들어, 고처리량 구현을 포함하는, 다수의 샘플의 신속 조작을 가능하게 하기 위해, 하나 이상의 샘플을 후에 어레이에 배열되는 다른 검정 시약(예를 들어, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원)과 접촉시키는 것을 포함하거나 이를 이용할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "어레이"는 인지-작용제(들), 예를 들어, 둘 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원들의 조합의 "어드레싱된(addressed)" 공간적 배열을 지칭한다. 어레이의 각 "어드레스(address)"는 하나 이상의 인지 작용제를 함유한 사전결정된 특정 공간 영역이다. 예를 들어, 어레이는 각각이 한 세트의 항원을 함유한, 복수의 용기(시험관), 플레이트, 마이크로-플레이트에서의 마이크로-웰일 수 있다. 어레이의 다양한 구현이 고려된다. 일 실시형태에서, 각 어드레스는 유사한 또는 동일한 인지 작용제를 포함하며, 다수의 샘플이 검정되며, 하나의 각 어드레스에 존재한다. 다른 실시형태에서, 각 어드레스는 상이한 인지 작용제 또는 인지 작용제들의 상이한 조합을 포함하며, 단일 샘플의 분취액이 각 어드레스에 도입된다. 다른 실시형태에서, 이러한 방법들의 조합이 취해진다. 어레이는 또한, 별개의 영역(점, 라인, 칼럼)에 공지된 인지 작용제를 보유한 임의의 고체 지지체일 수 있으며, 예를 들어, 여기서, 상이한 인지 작용제는 하나 이상의 상이한 위치에서 상이한 조합으로 배치되거나, 상이한 샘플은 상이한 위치에서 접촉된다. 특정 실시형태에서, 어레이는 내장형의 적절한 대조군, 예를 들어, 샘플이 없는 영역, 항원이 없는 영역, 이들 중 어느 하나도 없는 영역(예를 들어, 용매 및 시약 단독을 가짐), 및 양성 대조군으로서 하나 이상의 항원에 결합된 합성 또는 단리된 항체를 함유한 영역을 포함한다.

예를 들어, 어레이 또는 키트를 위한, 본 명세서에서 유용한 고체 지지체는 통상적으로, 액체상에서 실질적으로 불용성이다. 본 발명의 고체 지지체는 특정 타입의 지지체로 제한되지 않는다. 오히려, 다수의 지지체가 이용 가능하고, 당업자에게 공지되어 있다. 이에 따라, 유용한 고체 지지체는 고체 및 반-고체 매트릭스, 예를 들어, 에어로젤 및 하이드로젤, 수지, 비드, 바이오칩(박막 코팅된 바이오칩을 포함함), 미세유체칩, 실리콘 칩, 다중웰 플레이트(또한, 마이크로역가 플레이트 또는 마이크로플레이트로서 지칭됨), 막, 필터, 전도성 및 비전도성 금속, 유리(현미경 슬라이드를 포함함) 및 자성 지지체를 포함한다. 유용한 고체 지지체의 더욱 특정 예는 실리카겔, 폴리머막, 입자, 유도체화된 플라스틱 필름, 유리 비드, 목화, 플라스틱 비드, 알루미나 겔, 다당류, 예를 들어, 세파로스, 나일론, 라텍스 비드, 자성 비드, 상자성 비드, 초상자성 비드, 전분, 등을 포함한다.

항원

원칙적으로 대상체의 생체 내에서 항체가 발생되는 임의의 스트렙토코커스 피오게네스 항원이 본 명세서에 기술된 방법, 및 특히, 본 명세서에 기술된 멀티플렉스 방법에서 사용될 수 있다는 것이 인식될 것이다. 본 명세서의 실시예에 나타낸 바와 같이, 임상적으로 규명된 항원 DNaseB 및 SLO는 멀티플렉스 CBA 검정에서 사용하기 위한 비드에 가교될 수 있다. 특정 경우에, 그리고, 어떠한 이론으로 한정하고자 하는 것은 아니지만, 출원인은 특정 항원, 예를 들어, SpnA가 본 명세서에 기술된 멀티플렉스 검정에서 이의 포함을 촉진시키기 위해 유용하게 안정화될 수 있다는 것을 규명하였다. SpnA의 경우에, 전장 폴리펩타이드의 절단은, 특히, 본 명세서에 기술된 방법의 구현에서 사용되는 고체 지지체(이러한 경우에, 비드)에 가교되거나 달리 결합될 때, 면역학적 안정성을 개선시켰다.

일 실시형태에서, 둘 이상, 및 특히 고려되는 예에서, 세 개 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원이, 예를 들어, 단일, 멀티플렉스 검정에서 사용된다. 일례에서, 각 항원은 비드 또는 다른 기질에 결합되며, 여기서, 항원-결합된 비드의 각 깁단은 다른 것과 구별 가능하다. 이러한 멀티플렉스 검정의 일례는 본 명세서의 실시예에 제시되며, 여기서, SLO, DNaseB, 및 SpnA 각각은, 항원-표지된 비드의 각 집단이 별도로 식별 가능하며, 결론적으로, 각 항원에 대해 특이적인 항체의 양이 단일 검정에서 결정될 수 있도록, 비드의 상이한 집단에 공유 결합된다.

특정 실시형태에서, 둘 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원은 예를 들어, 샘플과 접촉될 때, 예를 들어, 임의의 요망되는 완충제 또는 담체, 안정화제, 등을 포함하는 단일 조성물에 제공되고, 이에 따라, 멀티플렉스 구현을 위해 특히 적합하다. 일례에서, 적어도 하나의 다른 스트렙토코커스 피오게네스 항원과 함께 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원이 제공되며, 예를 들어, SpnA 및 적어도 하나 다른 스트렙토코커스 피오게네스 항원은 예를 들어, 샘플과 접촉될 때, 단일 조성물에 제공된다. 특이적으로 고려되는 예에서, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원 및 SLO는, 예를 들어, 샘플과 접촉될 때, 예를 들어, 단일 조성물에 제공된다. 다른 특이적으로 고려되는 예에서, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원 및 DNaseB는, 예를 들어, 샘플과 접촉될 때, 예를 들어, 단일 조성물에 제공된다. 다른 특이적으로 고려된 예에서, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원, DNaseB, 및 SLO는, 예를 들어, 샘플과 접촉될 때, 예를 들어, 단일 조성물에 제공된다.

SLO(AAK33267.1)는 분비된, 기공 형성 시토라이신이다. 일 실시형태에서, SLO는 스트렙토코커스 피오게네스 M1 GAS(균주: SF370, 혈청형: M1, 유전자좌 태그: SPy_0167 (NCBI: NP_268546.1))로부터 유래된다. 일례에서, SLO의 재조합 단편, 예를 들어, 아미노산 34-571(도 6a 참조, 서열번호 1)을 포함하는 재조합 폴리펩타이드가 사용된다. 일례에서, 재조합 폴리펩타이드는, 예를 들어, 정제를 돕기 위해 태그화되며, N-말단 또는 C-말단 His 태그가 특히 고려된다. 다른 실시형태에서, '무독화된' SLO 유사체가 사용되며, 여기서, 독성에 기여하는 것으로 결정된 하나 이상의 아미노산은 야생형 SLO와 면역학적으로 교차-반응성인 폴리펩타이드를 야기시키는 아미노산으로 치환되지만, 감소된 독성을 나타낸다(예를 들어, 생산, 취급 또는 억제 제약 또는 요건을 감소시키기 위함). 무독화된 SLO 유사체의 예시적인 예의 아미노산 서열은 도 6b 및 서열번호 2에 제시되어 있다. 무독화된 SLO의 이러한 예에서, 암호화 뉴클레오타이드 서열에서 2개의 포인트 돌연변이는 P427L 및 W535F 치환을 야기시키며, 치환된 아미노산은 도 6a 및 도 6b에 밑줄강조된다.

DNase-B(AAK34710.1)는 DNA를 분해시키는 분비된 효소이다. 일 실시형태에서, DNaseB는 스트렙토코커스 피오게네스 M1 GAS(균주: SF370, 혈청형: M1, 유전자좌 태그: SPy_2043(NCBI: NP_269989.1))로부터 유래된다. 일례에서, DNaseB의 재조합 단편, 예를 들어, 아미노산 43-271(도 7 참조, 서열번호 5)를 포함하는 재조합 폴리펩타이드가 사용된다. 일례에서, 재조합 폴리펩타이드는, 예를 들어, 정제를 돕기 위해 태그화되며, N-말단 또는 C-말단 His 태그가 특히 고려된다.

SpnA(AAK33693.1)는 또한 DNA를 분해시키는 세포벽-고정 효소이다. 일 실시형태에서, SpnA는 스트렙토코커스 피오게네스 M1 GAS(균주: SF370, 혈청형: M1, 유전자좌 태그(gene locus tag): SPy_0747 (NCBI: NP_268972.1))로부터 유래된다. 일례에서, SpnA의 재조합 단편, 예를 들어, 아미노산 28-854(도 8 참조, 서열번호 8)를 포함하는 재조합 폴리펩타이드가 사용된다. 일례에서, 재조합 폴리펩타이드는, 예를 들어, 정제를 돕기 위해 태그화되며, N-말단 또는 C-말단 His 태그가 특히 고려된다.

당업자는 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 바와 같은 방법, 폴리펩타이드, 비드, 조성물 및 키트, 및 특히 본 명세서에 기술된 멀티플렉스 진단 방법 및 조성물과 관련된 실시형태를 포함하는, 본 명세서에 개시된 본 발명이 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN 또는 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 치료를 필요로 하지만 류머티스성 열, PSGN, 또는 지속적인 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 장기적인 예방적 치료를 포함하는 장기적 치료를 필요로 하지 않거나 예를 들어, 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증을 신속하게 식별하기 위해 단지 지속적인 모니터링을 필요로 하는 환자의 정확하고 신속한 진단 및/또는 식별을 제공함을 인지할 것이다.

다양한 실시형태에서, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 바와 같은 방법을 이용할 때, 환자는 스트렙토코커스 피오게네스 또는 최근 스트렙토코커스 피오게네스 감염증을 갖고 있거나 가졌던 것으로서 식별되며, 이러한 환자는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증을 예방하기 위해 또는 류머티스성 열, PSGN, 만성 류머티스성 심장 질병의 하나 이상의 증상을 개선시키기 위해, 또는 질병 상태를 모니터링하기 위해 지속적인 치료, 예를 들어, 예방적 치료를 받을 것이다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 방법을 이용할 때, 환자는 스트렙토코커스 피오게네스 또는 이전 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 사전 노출을 갖고 있거나 가졌던 것으로서 식별되며, 이러한 환자는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증을 예방하기 위해 또는 류머티스성 열, PSGN, 만성 류머티스성 심장 질병의 하나 이상의 증상을 개선시키기 위해, 또는 질병 상태를 모니터링하기 위해 지속적인 치료, 예를 들어, 예방적 치료를 받을 것이다. 예시적인 치료는 이와 관련하여 본 명세서에 기술된 것을 포함한다.

하기 실시예, 서열 리스팅, 및 도면은 본 발명의 이해를 돕기 위해 제공되며, 이의 실제 범위는 첨부된 청구범위에 기술되어 있다. 개질이 본 발명의 사상으로부터 벗어나지 않으면서 기술된 절차에서 이루어질 수 있는 것으로 이해된다.

실시예

실시예 1

본 실시예는 생물학적 샘플에서 GAS-특이적 항체의 존재 및 양을 결정하기 위해 비드-기반 멀티플렉스 검정의 개발을 기술한 것이다.

방법

연구 대상체

이러한 연구에서, 인간 혈청은 4개의 상이한 소스로부터 얻었다. ARF를 갖는 환자는 Jones 기준[3]의 뉴질랜드 변경에 따라 진단되었고, 2004년에서 2006년 사이에 오클랜드의 스타쉽 칠드런 병원(Starship Children's Hospital)(n=8) 및 2012년에서 2015 사이에 해밀톤의 와이카토 병원(Waikato Hospital)(n=8)에 입원해 있는 동안 모집되었다. 6세의 인종적으로 일치하는 건강한 어린이로부터의 혈청은 Children of Scope(CoS) 연구로부터 얻었다. 마지막으로, 혈청은 추가적인 대조군으로서 오클랜드 대학교에서 모집된 20세 이상의 매칭되지 않는, 건강한 지원자로부터 얻었다. 인구 통계는 표 1에 나타나 있다. 모든 참가자는 사전 서면 동의를 제공하였으며, 4개 사이트 각각에 대해 적절한 윤리 위원회 승인을 받았다.

항원 제조

본 연구에서 사용되는 재조합 항원 모두를 N 말단 신호 서열 없이 이의 성숙 형태로 제조하였다. 64.4 kDa의 분자량(아미노산 34-571, 서열번호 1)및 N-말단 His₆-tag를 갖는 SLO를 Fitzgerald Industries International로부터 구매하였다. 유전자 암호화 DNase B를 Topo 클로닝 방법을 이용하여 pET101/D TOPO(Life Technologies) 내에 클로닝을 위해 하기 프라이머를 이용하여 S. 피오게네스 SF370(ATCC 700294) 게놈 DNA로부터 증폭하였다: 순방향, 5' CACCATGCGACAAACACAGGTCTCAAATGATGTTG-3'[서열번호 3] 및 역방향, 5' TTTCTGAGTAGGTGTACCGTTATGGTAGTTAATGG-3'[서열번호 4]. 생성된 벡터는 DNaseB(아미노산 43-271, 본 명세서에서 [서열번호 5]로서 나타낸 아미노산 서열)를 암호화하고, 이후에, 29 kDa의 전체 분자량을 위해 C-말단 His₆-tag를 암호화한다. 단백질을 암피실린 및 0.1% 글루코스가 보충된 Lennox 브로쓰(LB) 배지에서 37℃에서 3시간 동안 1mM IPTG 유도와 함께 에셔리키아 콜라이드(Escherichia coli) BL21 λDE3 세포에서 발현시켰다. SpnA를 KasI 및 XhoI 제한 효소 사이트(밑줄강조됨)를 함유한 프라이머를 갖는 S. 피오게네스 SF370 게놈 DNA로부터 증폭하였다: 순방향, 5' AAAGGCGCCCGCCAAAATTTGACTTATGCCAA-3'[서열번호 6] 및 역방향, 5' AAACTCGAGCTATTTGGAAAATGATAATTGAAGTAACA-3'[서열번호 7]. 생성된 spnA 앰플리콘(암호화 SpnA 아미노산 28-854, [서열번호 8])을 N 말단 His₆-tag를 암호화하는 pProExHta 벡터에 클로닝하고 E. coli BL21 λDE3 세포로 형질전환시켰다. 단백질 발현을 LB 함유 암피실린에서 18℃에서 16시간 동안 0.3mM IPTG로 유도하였다. rDNaseB 및 rSpnA 둘 모두를 표준 Ni² ⁺-NTA 친화력 크로마토그래피를 이용하여 E. coli 세포 용해물로부터 정제하였다. His₆-tag를 재조합 담배 에치 바이러스 프로테아제(1:100의 rTEV 대 재조합 단백질의 비)를 이용하여 rSpnA로부터 분열시켜 85 kDa 단백질을 수득하였다. 모든 항원의 순도를 SDS-PAGE에 의해 확인하였다.

항원 특이적 IgG의 정제

SLO, DNaseB 및 SpnA에 대해 특이적인 IgG를 풀링된 인간 면역글로불린(정맥내 면역글로불린, IVIG(Intragam^® P))로부터 정제하였다. AminoLink^® Coupling 키트(Thermo Scientific)를 이용하여 이의 1차 아민을 통해 항원을 아가로스에 공유 결합시킴으로써 GAS 항원 각각에 대한 친화력 칼럼을 발생시켰다. 5 ml IVIG 용액을 포스페이트 완충된 염수(PBS)(pH 7.4)로 4배 희석시키고, 항체를 결합시키기 위해 수지 위로 통과시켰다. 결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 수지를 PBS로 4회 세척하였다. 결합된 항체를 0.2M 글리신-HCl 완충제(pH 2.5 내지 3.0)를 사용하여 용리시키고, 바로 1M 트리스 완충제(pH 9)로 중화시켰다. 추적 IgA를 Melon 스핀 칼럼(Thermo Scientific)을 이용하여 제거하고, 생성된 항원-특이적 IgG를 원심분리 필터(Merck Millipore)를 이용하여 원심분리하였다. 용리된 IgG가 항원에 대해 특이적임을 확인하기 위해, 이를 단리시키고, 효소-연결 면역흡착 검정(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay; ELISA)을 수행하였다. 플레이트를 항원으로 5 ㎍/ml로 코팅하고, 실온(RT)에서 1시간 동안 0.1% Tween-20 및 5% 탈지 분유(PBST-5% 우유)가 보충된 PBS로 블로킹하였다. 정제된 IgG를 실온에서 1시간 동안 첨가하였으며, 결합을 이전에 공개된 [4]로서 항-인간 호스래디시 퍼옥사이드(HRP) 2차 항체(1:3000; Santa Cruz Biotechnology)를 사용하여 검출하였다.

사이토메트릭 비드 검정

제조업체 설명서(Becton, Dickinson and Company)에 따라 항원 각각을 아민-대-설프하이드릴 가교제, 설포-SMCC를 사용하여 기능성 비드에 커플링시켰다. 간단하게, 25mM 다이티오트레이톨(DTT)을 첨가하여 컬러-코딩된 7.5㎛ 폴리스타이렌 비드를 접합을 위해 제조하였다. 44 ㎍/ml 설포-SMCC 용액을 첨가하여 타깃 항원(90 ㎍)을 개질시키고, 반응되지 않은 단백질을 Bio-Rad 스핀 칼럼(Biorad)을 이용하여 제거하였다. 개질된 단백질 및 기능성 비드를 이후에 혼합하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 이후에, N-에틸말레이미드(44 ㎍/ml)를 첨가하고, 추가 15분 동안 인큐베이션하였다. 세척된, 접합된 비드를 광으로부터 보호된 4℃에서 저장하였다. 유세포측정기 상의 2개의 검출기(FL3 및 FL4)를 이용하여 독특한 위치에서 형광을 보장하기 위해 상이한 비율의 형광 발색단(APCy7 및 APC)을 함유한 기능성 비드에 항원을 접합하였다. 하기와 같이 항원들 간에 최대 분리를 보장하기 위해 비드 위치를 선택하였다: rSLO, 위치 E4; rDNaseB, 위치 A4; 및 rSpnA, 위치 A9.

사이토메트릭 비드 검정(CBA) 실험을 위한 인큐베이션을 96-웰 U-바닥 플레이트에서 이중으로 수행하였다. 실온에서 1시간 동안 검정 희석액 중 1:10,000으로 희석된 혈청 샘플과 함께 rSLO-, rDNaseB 및 rSpnA-코팅된 비드를 별도로 인큐베이션하여 싱글플렉스 검정을 수행하였다. 혈청 항체 결합을 검출하기 위해 R-피코에리트린-접합된 당나귀 항-인간 IgG Fcγ-특이적 항체(Jackson ImmunoResearch)를 실온에서 2시간 동안 1:100의 농도로 첨가하였다. 각 반응에 대한 중간 형광 강도(MFI)를 유세포측정기(BD Accuri C6) 상에서 판독하였다. rSLO-, rDNaseB- 및 rSpnA-커플링된 비드가 1:10,000로 희석된 혈청 샘플을 첨가하기 전에 동일한 비율로 혼합된 것을 제외하고 동일한 프로토콜에 따라 멀티플렉스 비드 검정을 수행하였다. 1:30 희석의 당나귀 항-인간 IgG Fcγ-특이적 항체를 검출을 위한 멀티플렉스 검정에서 사용하였다.

공지된 출발 농도의 SLO-, DNaseB- 및 SpnA-특이적 항체를 하나의 튜브에서 혼합하고, 2배 희석 시리즈를 수행함으로써 각 항원에 대해 7-점 표준 곡선을 생성시켰다. SLO 및 DNaseB에 대해 500 ng/ml의 출발 농도를 이용하였으며, SpnA에 대해 1500 ng/ml를 이용하였다. 비드를 1시간 동안 희석된 표준물 각각과 함께 인큐베이션하고, 이후에, 전술한 바와 같이, 당나귀 항-인간 IgG Fcγ-특이적 2차 항체로 검출하였다. MFI 값을 농도(㎍/ml)로 변환시키고, Flow Cytometric Analysis Program(FCAP) Array 소프트웨어, 버전 3(BD)을 이용하여 각 항원에 대한 표준 곡선을 생성시키기 위해 5-파라미터 로지스틱 회귀 방정식을 이용하였다. 연구 대상체 혈청을 각 항원에 대한 7-점 표준 곡선과 함께 멀티플렉스 검정으로 실행할 때, MFI를 FCAP Array 소프트웨어를 이용하여 농도(㎍/ml)로 변환시켰다. 각 항원에 대한 검출 하한치는 표준 곡선 상의 최저 농도로서 규정되었으며, 여기서 MFI는 이전에 공개된 [5] 바와 같이 블랭크(여기서, 블랭크는 비드 플러스 2차임)보다 3 표준 편차 더 크다.

데이터 분석 및 통계학

CoS 혈청 샘플 각각에 대해 결정된 항체 농도의 순위를 매기고 Microsoft Excel(version 15.24)에서 80번째 백분위수를 결정함으로써 각 항원에 대한 정상치의 상한(ULN) 값을 계산하였다. 통계학적 분석 및 그래프를 GraphPad Prism(version 7a)을 이용하여 준비하였다. 모든 상관관계를 선형 회귀를 이용하여 분석하였다.

상업적 검정을 이용한 ASO 및 ADB 역가

ASO 역가 및 ADB 역가 둘 모두를 Labtests Pathology(뉴질랜드 오클랜드 소재)에서 결정하였다. ASO 역가(IU/mL)를 SPAplus 분석기(The Binding Site, 미국 캘리포니아 소재) 상에서 인간 항 스트렙토라이신-O 키트를 이용하여 비탁 기술에 의해 측정하였다. ADB 역가(U/mL)를 효소 억제 검정(bioMerieux, Marcy l'Etoile, France)에 의해 측정하였다. 이러한 검정은 100 U/ml 미만의 낮은 역가에 대한 부정확한 수치를 제공하며, 50 U/mL의 중간 역가값은 이러한 범위에 속하는 샘플에 대해 추정되었다.

결과

비드 커플링 및 멀티플렉스 검정

이러한 연구에서의 분석을 위해 GAS 항원-커플링된 비드를 생성시키기 위해, 3개의 항원 각각의 고도로 정제된 제조물을 E. coli에서 재조합적으로 형성하였다. 분비된 단백질(SLO 및 DNaseB)을 이의 N-말단 신호 서열 없이 발현시켰으며, SpnA를 N-말단 신호 서열이 없고 단백질 안정성 개선을 위해 소르타제 모티프의 업스트림의 K854에서 절단되게 발현시켰다. 3개의 단백질 각각을 독특한 위치에서 형광을 나타내는 기능성 CBA 비드에 커플링하였다: rSLO(위치 E4), rDNaseB(위치 A4) 및 rSpnA(위치 A9). 2-컬러 형광 플롯 상에 최대 분리를 보장하기 위해 비드 위치를 선택하였다. 검정의 선형 범위 및 포화점을 결정하기 위해 다양한 혈청 희석 및 농도의 항-IgG 검출 시약을 시험하였다. 이러한 시행 착오 공정은 모두 3개의 항원에 대한 선형 범위에 있는 것으로서 1:10,000 혈청 희석을 확인하였다.

3개의 항원에 대한 역가가 동시에 측정될 수 있는 지를 평가하기 위해, 싱글플렉스 검정의 결과를 멀티플렉스 검정과 비교하였다. 싱글플렉스 검정을 수행하였으며, 여기서, 각 비드를 1:10,000으로 희석된 10명의 참가자로부터의 혈청과 함께 인큐베이션하였다. 이러한 10개의 혈청은 이전 ELISA가 CBA 검정에서 양호한 MFI 확산을 보장하는, 낮은 범위에서 높은 범위까지 순위가 매겨진 3개의 항원에 대한 이러한 참가자의 반응성을 나타낸 바와 같이 선택된 ARF 및 대조 샘플의 혼합물이었다(도 1). 이러한 동일한 10개의 혈청을 이후에, 멀티플렉스 검정에서 시험하였으며, 여기서, 3개의 항원 비드를 동일한 부분으로 혼합하고, 단일 검정 웰에서 시험 혈청과 함께 인큐베이션하였다. 이러한 멀티플렉스 검정에서 MFI는 도 1에 도시된 바와 같이 각 항원에 대하여 싱글플렉스 MFI와 매우 강한 상관관계를 나타내었다(R² 값: SLO=0.999; DNaseB B=0.998; 및 SpnA=0.998). 이는, 비드 간의 간섭 또는 IgG 교차-반응성이 존재하지 않으며, 3개의 스트렙토코커스 항원을 포함하는 멀티플렉스 검정의 실행 가능성을 입증한다는 것을 나타낸다.

멀티플렉스 CBA 검정의 표준화 및 정밀도

항원-커플링된 비드에 결합하는 항체의 농도를 결정하고 검정 실행 간에 비교하기 위해 3개의 항원 각각에 대한 표준 곡선을 생성시켰다. SLO, DNaseB 및 SpnA에 대해 특이적인 IgG를 친화력 크로마토그래피에 의해 IVIG로부터 정제하였다. 정제된 항체의 특이성을 ELISA에 의해 확인하였다. 도 2에 도시된 바와 같이, SLO-, DNaseB- 및 SpnA-특이적 항체는 단지, 이의 상응하는 항원에 대한 반응성을 나타내었고, 다른 2개의 항원과의 검출 가능한 반응성을 나타내지 않았다. 정제된 IgG를 사용하여 각 항원에 대한 7-포인트 표준 곡선을 생성시켰다. 공지된 농도의 정제된 IgG를 항-SLO 및 항-DNase B에 대해 500 ng/ml의 출발 농도로 및 항-SpnA에 대해 1500 ng/ml의 출발 농도로 2배 희석시켰다. 이러한 희석된 표준물을 멀티플렉스 포맷에서 항원-커플링된 비드와 함께 인큐베이션하였으며, 표준 곡선을 5-파라미터 로지스틱 식을 이용하여 피팅하였다. 표준 곡선의 예는 도 5에 도시되어 있다. 표준 곡선은 이러한 항원에 대한 기준 표준물로서 친화력 정제된, 다클론성 항체의 사용을 나타내는 적어도 98%의 피팅 정확도로 고도로 재현 가능하였다.

정제된 항체 표준물을 사용하여 CBA 검정에서 3개의 항원에 대한 검출 하한치를 결정하였다: 항-SLO, 1 ng/mL; 항-DNaseB, 0.1 ng/mL; 및 항-SpnA 0.1 ng/mL. 멀티플렉스 검정에 대한 변동 계수(CV)를 상기 싱글플렉스/멀티플렉스 비교에서 이용되는 동일한 10개의 혈청을 사용하여 평가하였다. 이러한 10개의 혈청에 대한 IgG의 농도를 IgG 표준 곡선이 도입된 검정에서 측정하였으며, 평균 검정간 및 검정내 CV는 항원 각각에 대하여 각각 4% 미만 및 15% 미만이었다(표 2). 이러한 CV는 멀티플렉스 비드-기반 검정이 양호한 정밀도를 가지고 반복 가능함을 나타낸다. 표준 곡선 및 검정 시험 결과 둘 모두의 재현성은 이러한 시약이 항원-커플링된 비드의 향후 배치의 커플링 효율 및 무결성을 체크하기 위해 사용될 수 있음을 의미한다.

ARF 환자 혈청에서 항체 역가 측정

임상 스트렙토코커스 혈청학에서 SpnA 항원 및 비드-기반 기술의 유용성을 평가하기 위해, 멀티플렉스 검정을 모든 연구 대상체에서 수행하였다(표 1). SLO, DNaseB 및 SpnA에 대해 특이적인 IgG의 농도는 1일째에, 단일 실험자에 의해 수행된 하나의 실험에서 모두 47명의 참가자에 대해 결정될 수 있다. 도 3에 도시된 바와 같이, ARF 샘플에서 평균 항체 역가는 3개의 항원 각각에 대한 건강한 어린이 및 건강한 성인 대조군 둘 모두에서 평균 역가보다 유의미하게 더 높았다. 이전 연구[6]에서의 관찰한 바에 따르면, ASO 및 ADB에 대한 역가는 더 높았고, 표 3에서 더 큰 신뢰 구간에 의해 예시된 바와 같이 건강한 성인에서보다 건강한 어린이에서 더욱 펼쳐지게 나타났다. 특히, 건강한 어린이에서 SpnA에 대한 역가는 건강한 성인에서 역가와 유사하고, 건강한 어린이 그룹에서 ASO 및 ADB에 대한 역가와 비교하여 더 좁은 신뢰 구간을 갖는다(표 1). 이는 SpnA에 대한 백그라운드 역가가 건강한 개체에서 낮다는 이전 관찰을 지지한다[2].

ARF 진단을 위한 이전 GAS 노출을 검출하는 항원의 능력을 ULN 값을 사용하여 평가하였다. ULN, 또는 80번째 백분위수를 건강한 어린이 그룹으로부터 SLO, DNaseB 및 SpnA에 대해 각각 644, 360 및 170 ㎍/ml로서 계산하였다. SpnA에 대한 낮은 ULN은 SLO 및 DNaseB와 비교하여 건강한 어린이에서 나타난 감소된 역가를 반영한다. 도 3에서 점선으로 나타낸, 이러한 실험적으로 결정된 컷-오프를 이후에, 각 항원의 민감성을 결정하기 위해 ARF 샘플에 적용하였다. 이는 관찰된 역가가 ULN보다 높은 지의 여부를 기초로 하여 검출된 실제 양의 수이다. DNaseB는 16개의 ARF 샘플로부터 단지 9개를 검출하는 최소 민감성을 나타내었다(56.25%). SLO는 16개의 ARF 샘플로부터 12개를 검출함으로써 중간 정도의 민감성을 나타내었다(75%). SpnA는 16개의 ARF 샘플로부터 14개를 검출하는 가장 높은 민감성을 나타내었다(87.5%).

기존 혈청학적 시험과 비교

멀티플렉스 CBA 검정을 기존의 상업적으로 입수 가능한 방법과 비교하기 위하여, 충분한 부피가 입수 가능한 20명의 첨가자로부터의 혈청을 상업적 실험실에서 ASO 및 ADB 시험으로 처리하였다. ASO를 널리 이용되는 비탁 기술을 이용하여 측정하였으며, 국제 단위(IU/mL)의 정확한 값을 얻었다. 이와 대조적으로, ADB 역가를 역가 범위(100, 200, 300, 400, 600, 800, 1200 및 약 1600)를 제공하는 효소 억제 검정을 이용하여 측정하였다. 도 4a에 도시된 바와 같이, CBA 검정 및 상업적으로 입수 가능한 비탁 기술에서 결정된 ASO IgG의 농도 간에 우수한 상관관계가 존재하였다(R²=0.968). 도 4b에 도시된 바와 같이, 또한, CBA 검정 및 상업적으로 입수 가능한 효소 억제 검정에서 결정된 ADB IgG의 농도 간에 양호한 상관관계가 존재하였다(R²=0.934).

그러나, ADB 효소 억제 검정의 정밀도의 부족이 또한 도면에 예시되어 있다. 3개의 샘플은 효소 억제 검정에서 '1200'으로서 분류되었으며, 본 CBA 검정에서 측정된 항-DNaseB IgG의 농도는 각각 1508, 1070 및 914 ㎍/ml이었다(박스표시된 데이터 포인트).

논의

본 실시예는 GAS 혈청학에 대한 멀티플렉스 비드-기반 검정의 제조, 및 건강한 및 ARF 대상체로부터의 샘플의 범위에서 항체 농도를 결정하는데 이러한 분석의 사용을 나타낸다. 유용하게, 본 실시예는, 3개의 스트렙토코커스 피오게네스 항원이 매우 작은 샘플 부피(1㎕ 이하)를 사용하여, 상당한 교차-반응성을 갖지 않으면서, 스트렙토코커스 피오게네스-특이적 항체의 별개의 집단의 존재를 식별하기 위해, 단일 멀티플렉스 검정과 조합하여 사용될 수 있음을 나타낸다.

본 명세서에 제시된 멀티플렉스 검정은 특히 기존 DNaseB 검정과 달리, 항원:항체 복합물 각각에 대해 정량적으로 이용될 수 있다. 또한, 개선된 민감성/특이성이 부분적으로, 건강한 대상체에서 더 낮은 백그라운드를 갖는 SpnA의 포함으로 인해, 및 부분적으로, 특히 멀티플렉스 구현에 의해 부정적으로 영향을 받지 않는, 개선된 민감성으로 인해 예상된다.

실시예 2

이러한 실시예는 생물학적 샘플에서 GAS-특이적 항체의 존재 및 양을 결정하기 위해 루미넥스 플랫폼을 이용하여 비드-기반 멀티플렉스 검정의 개발을 기술한 것이다.

방법

연구 대상체

본 연구에서, 인간 혈청을 상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 얻었다. 다시, 모든 참가자는 서면 동의서를 제공하였으며, 적절한 윤리 위원회 승인을 받았다.

혈청 제조

혈청 샘플을 수집하고, 분석을 위해 1:15,000으로 희석하였다. IVIG 기준물을 사용 전에 1:60,000으로 희석하였다.

루미넥스 비드 제조 및 검정

항원 각각을 제조업체 설명서(Luminex Corporation)에 따라, 아민-대-카르복실 가교제를 사용하여 xMAP 미소구체에 결합하였다. 3개의 상이한 항원:비드 비율을 접합을 위해 시험하였으며, 12.5 ㎍ 항원으로 접합된 비드를 추가 분석을 위해 선택하였다.

3개의 잘 분리된 비드 위치를 선택하였으며, DNAseB는 비드 위치 030에 있으며, SLO는 비드 위치 072에 있으며, SpnA는 비드 위치 078에 있다. 접합된 비드를 멀티플렉스 반응을 위해 1:30 희석의 항-인간 IgG 2차 항체과 함께 인큐베이션하였다.

루미넥스 검정을 제조업체 설명서에 따라, Magpix^TM 시스템(Merck) 상에서 수행하였다.

결과

싱글플렉스 및 멀티플렉스 검정

3개의 항원에 대한 역가가 동시에 측정될 수 있는 지의 여부를 평가하기 위하여, 싱글플렉스 검정의 결과를 멀티플렉스 검정과 비교하였다. 싱글플렉스 검정을 수행하였으며, 여기서, 각 비드를 첨가자로부터의 혈청과 함께 인큐베이션하였으며, 이후에, 동일한 혈청을 멀티플렉스 검정에서 시험하였으며, 여기서, 3개의 항원 비드를 동일한 부분으로 혼합하고, 단일 검정 웰에서 시험 혈청과 함께 인큐베이션하였다. 이러한 멀티플렉스 검정에서 MFI는 도 9에 도시된 바와 같이, 각 항원에 대해 싱글플렉스 MFI와 매우 강력한 상관관계를 나타내었으며, R² 값은 하기와 같다: SLO=0.999(도 9a); DNaseB B=0.999(도 9b); 및 SpnA=0.999(도 9c). 이는, 비드 간에 간섭 또는 IgG 교차-반응성이 존재하지 않았음을 시시하고, 3개의 스트렙토코커스 항원을 포함하는 멀티플렉스 루미넥스-기반 검정의 실행가능성을 나타낸다.

멀티플렉스 루미넥스 검정에 대한 변동 계수(CV)를 상기 싱글플렉스/멀티플렉스 비교에서 이용되는 동일한 10개의 혈청을 사용하여 평가하였다. 이러한 10개의 혈청에 대한 IgG의 농도를 IgG 표준 곡선을 도입하는 검정에서 측정하였으며, 항원 각각에 대한 평균 검정간 및 검정내 CV는 각각 2% 미만, 및 11% 미만이었다(표 3).

[표 3]

이러한 CV는, 멀티플렉스 루미넥스-기반 검정이 양호한 정밀도를 가지고 반복 가능함을 나타낸다. 표준 곡선 및 검정 시험 결과 둘 모두의 재현성은, 이러한 시약이 또한 항원-커플링된 비드의 향후 배치의 커플링 효율 및 무결성을 체크하기 위해 이용될 수 있음을 의미한다.

기존 혈액학적 시험과 비교

루미넥스 검정을 기존의 상업적으로 입수 가능한 방법과 비교하기 위하여, 충분한 부피가 입수 가능한 61명의 참가자로부터의 혈청을 ASO 및 ADB 시험으로 수행하였다. ASO를 널리 이용되는 비탁 기술을 이용하여 상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 측정하였으며, 국제 단위(IU/mL)의 정확한 값을 얻었다. ADB 역가를 역가 범위(100, 200, 300, 400, 600, 800, 1200 및 약 1600)를 제공하는 효소 억제 검정을 이용하여 측정하였다(다시 상기 실시예 1에 기술된 바와 같음). 도 10a에 도시된 바와 같이, 상업적으로 이용 가능한 비탁 기술에서 결정된 ASO IgG의 농도와 루미넥스 검정에 의해 결정된 항-SLO 항체 역가 간에 양호한 상관관계가 존재하였다(R²=0.933). 도 10b에 도시된 바와 같이, 상업적으로 이용 가능한 효소 억제 검정에서 결정된 ADB IgG의 농도와 루미넥스 검정에 의해 결정된 항-DNaseB 항체 역가 간에 양호한 상관관계가 존재하였다(R²=0.942).

ARF에서 면역동력학

ARF로 진단된 환자로부터의 혈청(RFRF 연구)을 입원으로부터 일별로 계층화하였다. 도 11에서 용이하게 알 수 있는 바와 같이, 항-SpnA IgG의 수준은 20일 이내에 수집된 혈청(n=19)에서의 수준과 비교하여 입원 후 20일 이후에 수집된 혈청(n=17)에서 유의미하게 감소되었으며, 이는 항-SLO 항체 또는 항-DNaseB 항체보다 더 짧은 반감기를 시사한다.

이는 또한, SpnA가 스트렙토코카 혈청학에 대한 유리한 면역동력학을 가짐을 시사하며, 이는 진단 분석에서, 특히, 멀티플렉스 검정, 예를 들어, 본 명세서에 기술되고 예시된 검정에서, 이의 사용을 지지한다. 본 명세서에 개시된 본 발명에 의해 가능한 분석이 스트렙토코커스 피오게네스에 최근에 노출되었지만 수반되는 비용 및 위험과 함께 종종 수 년 동안 연장되는, 장기간의 항생제 치료가 필요하지 않고 피할 수 있는 환자의 신속 식별 및 치료를 허용한다는 것이 인식될 것이다.

실시예 3

본 실시예는 생물학적 샘플에서 GAS-특이적 항체의 존재, 양, 및 면역동력학을 결정하기 위해 루미넥스 플랫폼을 이용하여 비드-기반 멀티플렉스 검정의 추가 평가를 기술한 것이다.

방법

연구 대상체

본 연구에서, 인간 혈청을 상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 얻었다. 다시, 모든 참가자는 서면 동의서를 제공하였으며, 적절한 윤리위원회 승인을 받았다.

혈청 제조

급성 류머티스성 열을 갖는 환자로부터의 혈청 샘플을 일별로 그룹화하였으며, 혈액 샘플을 획득하였다: 입원일로부터 20일 이내; 입원하고 20일 이후. 혈청 샘플을 분석을 위해 1:15,000으로 희석하였다. IVIG 기준물을 사용 전에 1:60,000으로 희석하였다.

루미넥스 비드 제조 및 검정

검정에서 사용하기 위한 항원:xMAP 미소구체 각각을 실시예 2에서 기술된 바와 같이 제조하였다. 루미넥스 검정을 제조업체 설명서에 따라 Magpix^TM 시스템(Merck) 상에서 수행하였다.

SLO, DnaseB 및 SpnA에 대한 혈청 항체 역가의 비교를 트라이플렉스 루미넥스 검정을 이용하여 결정하였다. 통계학적 분석을 GraphPad Prism 7.0 소프트웨어를 이용하여 수행하였다.

결과

ARF에서 면역동력학

ARF(RFRF 연구)로 진단된 환자로부터의 혈청을 입원 후 며칠 계층화하였다. 이러한 분석의 결과는 하기 표 4 및 도 12에 나타나 있다.

이러한 그룹 간에 SLO 및 DnaseB에 대한 항체 역가의 유의미한 차이가 존재하지 않는다. 그러나, 도 12에서 용이하게 알 수 있는 바와 같이, 항-SpnA IgG의 수준은 입원하고 20일 이내에 수집된 혈청(n=48)에서의 수준과 비교하여 입원하고 20일 이후에 수집된 혈청(n=37)에서 유의미하게 감소되었으며, 이는 상기 실시예 2에 제시된 결과와 일치한다. 이는 항-SpnA 항체가 항-SLO 항체 또는 항-DNaseB 항체보다 더 짧은 반감기를 갖는다는 결과를 지지한다.

이는 또한, SpnA가 스트렙토코커스 혈청학에 대한 유리한 면역동력학을 가짐을 시사하며, 이는 진단 분석(특히, 멀티플렉스 검정, 예를 들어, 본 명세서에 기술되고 예시된 검정), 치료 평가, 및 치료 요법에서 이의 사용을 지지한다.

실시예 4

본 실시예는 진단 검정에서, 예를 들어, 비드-기반 멀티플렉스 검정, 예를 들어, 루미넥스 플랫폼에서, 또는 딥스트립/딥스틱 검정 상에서(특히, 콜드 사슬 저장소가 실제적이거나 이용 가능하지 않은 상황에서) 사용에 대한 적합성에 대한 평가의 일부로서 SpnA 열안정성의 특징분석을 기술한 것이다.

방법

전장 SpnA(aa28-877) 및 C-말단 절단된 SpnA(aa28-854, 서열번호 8)의 실온에서의 안정성을 결정하였다. 간단하게, 각 단백질의 분취액을 실온에서 5일 동안 저장하였다. 단백질을 SDS-PAGE를 이용하여 시각화하고, 실온에서 임의의 시간 길이 동안 저장하지 않은(0일) 단백질과 비교하였다.

결과

온전한 SpnA는 대략 85 kDa에서의 대역으로서 전장 및 C-말단 절단된 폴리펩타이드 둘 모두에 대해 제시된다. 그러나, 전장 작제물은 5일 인큐베이션 후 대략 85 kDa 대역의 양의 현저한 감소에 의해 나타낸 바와 같이 실온에서 덜 안정적이다(도 13A). 이와 대조적으로, 도 13B에 도시된 바와 같이, 실온에서 5일 인큐베이션 후에 절단된 SpnA에 대한 대략 85 kDa의 단백질 양의 최소 변화가 존재한다.

이러한 데이터는 전장, 천연 SpnA 폴리펩타이드와 비교하여, 실온에서 저장될 때 절단된 SpnA 폴리펩타이드의 더 큰 안정성을 명확하게 나타낸다. 이러한 결과는 진단 검정, 치료 평가 및 치료 요법, 특히, 시약의 장기간 저장 또는 통상적인 단백질-기반 조성물에 대해 최적이 아닌 조건(예를 들어, 실온에서 또는 콜드 체인의 부재 하)에서의 저장의 환경에서 이의 사용을 지지한다.

실시예 5

방법

SpnA 안정성을 공개된 프로토콜에 따라 열 용융을 이용하여 측정하였다[Moreau, M. J. J., Morin, I. & Schaeffer, P. M. Mol. BioSyst. 6, 1285-1292 (2010)]. 간단하게, 단백질을 동일한 완충제에서 도 14A에 도시된 온도에서 5분 동안 인큐베이션함으로써 본래 SpnA 작제물(aa28-877)의 열적 안정성을 절단된 작제물(aa28-854)과 비교하였다.

이후에, 단백질 응집체를 제거하기 위해 냉각 및 원심분리 단계를 수행하였다. 접힌 단백질 백분율을 SDS-PAGE에 의해 결정하였으며, 열적 응집 프로파일로부터의 Tagg 값(단백질의 50%가 응집되는 온도)를 GraphPad Prism 7.0 소프트웨어를 이용하여 계산하였다.

결과

SDS-PAGE에 의해 평가된 바와 같은 각 온도에서의 접힌 단백질의 백분율은 도 14A의 크로마토그래프에 도시되어 있다. 각 온도에서 각 단백질에 대한 Tagg(단백질의 50%가 응집되는 온도)를 플롯팅하였으며(도 14B), 이는 이러한 2개의 단백질의 용융 곡선에서의 차이를 명확하게 나타낸다. 3회의 반복 실험에 걸친, 절단된 작제물에 대한 평균 Tagg 값, 51.0±0.6℃는 도 13c에서 명확하게 알 수 있는 바와 같이, 47.5±0.9℃(p < 0.05)인, 본래 작제물보다 유의미하게 더 높았다.

이는, 진단 검정, 치료 평가 및 치료 요법, 특히, 시약의 장기간 저장 또는 통상적인 단백질-기반 조성물에 대해 최적이 아닌 조건, 예를 들어, 콜드 체인의 부재 하에서의 저장의 환경에서 이의 사용을 지지하는, 절단된 SpnA 폴리펩타이드의 더 큰 열안정성을 명확하게 나타낸다.

간행물

상기 및 하기에 인용된 모든 출원, 특허 및 공개문의 전체 개시내용은 임의의 경우에, 본 명세서에 참고로 포함된다.

본 명세서에서 임의의 종래 기술에 대한 언급은 종래 기술이 세계에서 임의의 국가에서 시도 분야에서 일반적인 지식의 일부를 형성하는 지식 또는 임의의 형태의 제안이 아니고 이러한 것으로서 받아들여지지 않아야 한다.

본 발명은 또한, 본 출원의 명세서에서 지칭되거나 명시된 부분, 구성요소 및 특징을 개별적으로 또는 총괄적으로, 상기 부분, 구성요소 또는 특징 중 둘 이상의 임의의 또는 모든 조합으로 이루어진다고 할 수 있다.

상기 설명에서, 공지된 균등물을 갖는 정수 또는 성분이 언급되는 경우에, 그러한 정수는 개별적으로 기술된 바와 같이 본 명세서에 도입된다.

본 명세서에 기술된 본 발명의 바람직한 실시형태에 대한 다양한 변경 및 수정이 당업자에게 명백하게 될 것이라는 것이 주지되어야 한다. 이러한 변경 및 수정은 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 이의 수반되는 장점을 감소시키지 않으면서 이루어질 수 있다. 이에 따라, 이러한 변경 및 수정이 본 발명 내에 포함되는 것으로 의도된다.

본 발명은 또한, 광범위하게는, 본 출원의 명세서에서 지칭되거나 명시된 부분, 구성요소 및 특징을 개별적으로 또는 총괄적으로, 상기 부분, 구성요소 또는 특징 중 둘 이상의 임의의 또는 모든 조합으로 이루어진다고 할 수 있다.

본 발명의 양태는 단일 일례로서 기술된 것이며, 이의 범위를 벗어나지 않으면서 변경 및 부가가 이루어질 수 있다는 것이 인식되어야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Auckland Uniservices Limited <120> Analytical and therapeutic methods and compositions, and uses thereof <130> WO2018199775 <140> PCT/NZ2018/050057 <141> 2018-04-26 <150> NZ 731324 <151> 2017-04-26 <150> NZ 736448 <151> 2017-10-16 <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 540 <212> PRT <213> Streptococcus pyogenes <400> 1 Glu Ser Asn Lys Gln Asn Thr Ala Ser Thr Glu Thr Thr Thr Thr Asn 1 5 10 15 Glu Gln Pro Lys Pro Glu Ser Ser Glu Leu Thr Thr Glu Lys Ala Gly 20 25 30 Gln Lys Thr Asp Asp Met Leu Asn Ser Asn Asp Met Ile Lys Leu Ala 35 40 45 Pro Lys Glu Met Pro Leu Glu Ser Ala Glu Lys Glu Glu Lys Lys Ser 50 55 60 Glu Asp Lys Lys Lys Ser Glu Glu Asp His Thr Glu Glu Ile Asn Asp 65 70 75 80 Lys Ile Tyr Ser Leu Asn Tyr Asn Glu Leu Glu Val Leu Ala Lys Asn 85 90 95 Gly Glu Thr Ile Glu Asn Phe Val Pro Lys Glu Gly Val Lys Lys Ala 100 105 110 Asp Lys Phe Ile Val Ile Glu Arg Lys Lys Lys Asn Ile Asn Thr Thr 115 120 125 Pro Val Asp Ile Ser Ile Ile Asp Ser Val Thr Asp Arg Thr Tyr Pro 130 135 140 Ala Ala Leu Gln Leu Ala Asn Lys Gly Phe Thr Glu Asn Lys Pro Asp 145 150 155 160 Ala Val Val Thr Lys Arg Asn Pro Gln Lys Ile His Ile Asp Leu Pro 165 170 175 Gly Met Gly Asp Lys Ala Thr Val Glu Val Asn Asp Pro Thr Tyr Ala 180 185 190 Asn Val Ser Thr Ala Ile Asp Asn Leu Val Asn Gln Trp His Asp Asn 195 200 205 Tyr Ser Gly Gly Asn Thr Leu Pro Ala Arg Thr Gln Tyr Thr Glu Ser 210 215 220 Met Val Tyr Ser Lys Ser Gln Ile Glu Ala Ala Leu Asn Val Asn Ser 225 230 235 240 Lys Ile Leu Asp Gly Thr Leu Gly Ile Asp Phe Lys Ser Ile Ser Lys 245 250 255 Gly Glu Lys Lys Val Met Ile Ala Ala Tyr Lys Gln Ile Phe Tyr Thr 260 265 270 Val Ser Ala Asn Leu Pro Asn Asn Pro Ala Asp Val Phe Asp Lys Ser 275 280 285 Val Thr Phe Lys Glu Leu Gln Arg Lys Gly Val Ser Asn Glu Ala Pro 290 295 300 Pro Leu Phe Val Ser Asn Val Ala Tyr Gly Arg Thr Val Phe Val Lys 305 310 315 320 Leu Glu Thr Ser Ser Lys Ser Asn Asp Val Glu Ala Ala Phe Ser Ala 325 330 335 Ala Leu Lys Gly Thr Asp Val Lys Thr Asn Gly Lys Tyr Ser Asp Ile 340 345 350 Leu Glu Asn Ser Ser Phe Thr Ala Val Val Leu Gly Gly Asp Ala Ala 355 360 365 Glu His Asn Lys Val Val Thr Lys Asp Phe Asp Val Ile Arg Asn Val 370 375 380 Ile Lys Asp Asn Ala Thr Phe Ser Arg Lys Asn Pro Ala Tyr Pro Ile 385 390 395 400 Ser Tyr Thr Ser Val Phe Leu Lys Asn Asn Lys Ile Ala Gly Val Asn 405 410 415 Asn Arg Thr Glu Tyr Val Glu Thr Thr Ser Thr Glu Tyr Thr Ser Gly 420 425 430 Lys Ile Asn Leu Ser His Gln Gly Ala Tyr Val Ala Gln Tyr Glu Ile 435 440 445 Leu Trp Asp Glu Ile Asn Tyr Asp Asp Lys Gly Lys Glu Val Ile Thr 450 455 460 Lys Arg Arg Trp Asp Asn Asn Trp Tyr Ser Lys Thr Ser Pro Phe Ser 465 470 475 480 Thr Val Ile Pro Leu Gly Ala Asn Ser Arg Asn Ile Arg Ile Met Ala 485 490 495 Arg Glu Cys Thr Gly Leu Ala Trp Glu Trp Trp Arg Lys Val Ile Asp 500 505 510 Glu Arg Asp Val Lys Leu Ser Lys Glu Ile Asn Val Asn Ile Ser Gly 515 520 525 Ser Thr Leu Ser Pro Tyr Gly Ser Ile Thr Tyr Lys 530 535 540 <210> 2 <211> 540 <212> PRT <213> Streptococcus pyogenes <400> 2 Glu Ser Asn Lys Gln Asn Thr Ala Ser Thr Glu Thr Thr Thr Thr Asn 1 5 10 15 Glu Gln Pro Lys Pro Glu Ser Ser Glu Leu Thr Thr Glu Lys Ala Gly 20 25 30 Gln Lys Thr Asp Asp Met Leu Asn Ser Asn Asp Met Ile Lys Leu Ala 35 40 45 Pro Lys Glu Met Pro Leu Glu Ser Ala Glu Lys Glu Glu Lys Lys Ser 50 55 60 Glu Asp Lys Lys Lys Ser Glu Glu Asp His Thr Glu Glu Ile Asn Asp 65 70 75 80 Lys Ile Tyr Ser Leu Asn Tyr Asn Glu Leu Glu Val Leu Ala Lys Asn 85 90 95 Gly Glu Thr Ile Glu Asn Phe Val Pro Lys Glu Gly Val Lys Lys Ala 100 105 110 Asp Lys Phe Ile Val Ile Glu Arg Lys Lys Lys Asn Ile Asn Thr Thr 115 120 125 Pro Val Asp Ile Ser Ile Ile Asp Ser Val Thr Asp Arg Thr Tyr Pro 130 135 140 Ala Ala Leu Gln Leu Ala Asn Lys Gly Phe Thr Glu Asn Lys Pro Asp 145 150 155 160 Ala Val Val Thr Lys Arg Asn Pro Gln Lys Ile His Ile Asp Leu Pro 165 170 175 Gly Met Gly Asp Lys Ala Thr Val Glu Val Asn Asp Pro Thr Tyr Ala 180 185 190 Asn Val Ser Thr Ala Ile Asp Asn Leu Val Asn Gln Trp His Asp Asn 195 200 205 Tyr Ser Gly Gly Asn Thr Leu Pro Ala Arg Thr Gln Tyr Thr Glu Ser 210 215 220 Met Val Tyr Ser Lys Ser Gln Ile Glu Ala Ala Leu Asn Val Asn Ser 225 230 235 240 Lys Ile Leu Asp Gly Thr Leu Gly Ile Asp Phe Lys Ser Ile Ser Lys 245 250 255 Gly Glu Lys Lys Val Met Ile Ala Ala Tyr Lys Gln Ile Phe Tyr Thr 260 265 270 Val Ser Ala Asn Leu Pro Asn Asn Pro Ala Asp Val Phe Asp Lys Ser 275 280 285 Val Thr Phe Lys Glu Leu Gln Arg Lys Gly Val Ser Asn Glu Ala Pro 290 295 300 Pro Leu Phe Val Ser Asn Val Ala Tyr Gly Arg Thr Val Phe Val Lys 305 310 315 320 Leu Glu Thr Ser Ser Lys Ser Asn Asp Val Glu Ala Ala Phe Ser Ala 325 330 335 Ala Leu Lys Gly Thr Asp Val Lys Thr Asn Gly Lys Tyr Ser Asp Ile 340 345 350 Leu Glu Asn Ser Ser Phe Thr Ala Val Val Leu Gly Gly Asp Ala Ala 355 360 365 Glu His Asn Lys Val Val Thr Lys Asp Phe Asp Val Ile Arg Asn Val 370 375 380 Ile Lys Asp Asn Ala Thr Phe Ser Arg Lys Asn Leu Ala Tyr Pro Ile 385 390 395 400 Ser Tyr Thr Ser Val Phe Leu Lys Asn Asn Lys Ile Ala Gly Val Asn 405 410 415 Asn Arg Thr Glu Tyr Val Glu Thr Thr Ser Thr Glu Tyr Thr Ser Gly 420 425 430 Lys Ile Asn Leu Ser His Gln Gly Ala Tyr Val Ala Gln Tyr Glu Ile 435 440 445 Leu Trp Asp Glu Ile Asn Tyr Asp Asp Lys Gly Lys Glu Val Ile Thr 450 455 460 Lys Arg Arg Trp Asp Asn Asn Trp Tyr Ser Lys Thr Ser Pro Phe Ser 465 470 475 480 Thr Val Ile Pro Leu Gly Ala Asn Ser Arg Asn Ile Arg Ile Met Ala 485 490 495 Arg Glu Cys Thr Gly Leu Ala Phe Glu Trp Trp Arg Lys Val Ile Asp 500 505 510 Glu Arg Asp Val Lys Leu Ser Lys Glu Ile Asn Val Asn Ile Ser Gly 515 520 525 Ser Thr Leu Ser Pro Tyr Gly Ser Ile Thr Tyr Lys 530 535 540 <210> 3 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic - oligonucleotide synthesized in laboratory <400> 3 caccatgcga caaacacagg tctcaaatga tgttg 35 <210> 4 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic - oligonucleotide synthesized in laboratory <400> 4 tttctgagta ggtgtaccgt tatggtagtt aatgg 35 <210> 5 <211> 229 <212> PRT <213> Streptococcus pyogenes <400> 5 Arg Gln Thr Gln Val Ser Asn Asp Val Val Leu Asn Asp Gly Ala Ser 1 5 10 15 Lys Tyr Leu Asn Glu Ala Leu Ala Trp Thr Phe Asn Asp Ser Pro Asn 20 25 30 Tyr Tyr Lys Thr Leu Gly Thr Ser Gln Ile Thr Pro Ala Leu Phe Pro 35 40 45 Lys Ala Gly Asp Ile Leu Tyr Ser Lys Leu Asp Glu Leu Gly Arg Thr 50 55 60 Arg Thr Ala Arg Gly Thr Leu Thr Tyr Ala Asn Val Glu Gly Ser Tyr 65 70 75 80 Gly Val Arg Gln Ser Phe Gly Lys Asn Gln Asn Pro Ala Gly Trp Thr 85 90 95 Gly Asn Pro Asn His Val Lys Tyr Lys Ile Glu Trp Leu Asn Gly Leu 100 105 110 Ser Tyr Val Gly Asp Phe Trp Asn Arg Ser His Leu Ile Ala Asp Ser 115 120 125 Leu Gly Gly Asp Ala Leu Arg Val Asn Ala Val Thr Gly Thr Arg Thr 130 135 140 Gln Asn Val Gly Gly Arg Asp Gln Lys Gly Gly Met Arg Tyr Thr Glu 145 150 155 160 Gln Arg Ala Gln Glu Trp Leu Glu Ala Asn Arg Asp Gly Tyr Leu Tyr 165 170 175 Tyr Glu Ala Ala Pro Ile Tyr Asn Ala Asp Glu Leu Ile Pro Arg Ala 180 185 190 Val Val Val Ser Met Gln Ser Ser Asp Asn Thr Ile Asn Glu Lys Val 195 200 205 Leu Val Tyr Asn Thr Ala Asn Gly Tyr Thr Ile Asn Tyr His Asn Gly 210 215 220 Thr Pro Thr Gln Lys 225 <210> 6 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic - oligonucleotide synthesized in laboratory <400> 6 aaaggcgccc gccaaaattt gacttatgcc aa 32 <210> 7 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic - oligonucleotide synthesized in laboratory <400> 7 aaactcgagc tatttggaaa atgataattg aagtaaca 38 <210> 8 <211> 827 <212> PRT <213> Streptococcus pyogenes <400> 8 Arg Gln Asn Leu Thr Tyr Ala Asn Glu Ile Val Thr Gln Arg Pro Lys 1 5 10 15 Arg Glu Ser Val Ile Ser Asp Lys Ser Asn Phe Pro Val Ile Ser Pro 20 25 30 Tyr Leu Ala Ser Val Asp Phe Gly Glu Arg Lys Thr Pro Leu Pro Thr 35 40 45 Pro Asp Lys Gly Val Lys Val Thr Thr Glu Gln Ser Ile Ala Gln Val 50 55 60 Arg Lys Gly Pro Glu Glu Arg Pro Tyr Thr Val Thr Gly Lys Ile Thr 65 70 75 80 Ser Val Ile Asn Gly Trp Gly Gly Tyr Gly Phe Tyr Ile Gln Asp Ser 85 90 95 Glu Gly Ile Gly Leu Tyr Val Tyr Pro Gln Lys Asp Leu Gly Tyr Ser 100 105 110 Lys Gly Asp Ile Val Gln Leu Thr Gly Thr Leu Thr Arg Phe Lys Gly 115 120 125 Asp Leu Gln Leu Gln Gln Val Thr Ala His Lys Lys Leu Glu Leu Ser 130 135 140 Phe Pro Thr Ser Val Lys Glu Ala Val Ile Ser Glu Leu Glu Thr Thr 145 150 155 160 Thr Pro Ser Thr Leu Val Lys Leu Ser His Val Thr Val Gly Glu Leu 165 170 175 Ser Thr Asp Gln Tyr Asn Asn Thr Ser Phe Leu Val Arg Asp Asp Ser 180 185 190 Gly Lys Ser Ile Val Val His Ile Asp His Arg Thr Gly Val Lys Gly 195 200 205 Ala Asp Val Val Thr Lys Ile Ser Gln Gly Asp Leu Ile Asn Leu Thr 210 215 220 Ala Ile Leu Ser Ile Val Asp Gly Gln Leu Gln Leu Arg Pro Phe Ser 225 230 235 240 Leu Glu Gln Leu Glu Val Val Lys Lys Val Thr Ser Ser Asn Ser Asp 245 250 255 Ala Ser Ser Arg Asn Ile Val Lys Ile Gly Glu Ile Gln Gly Ala Ser 260 265 270 His Thr Ser Pro Leu Leu Lys Lys Ala Val Thr Val Glu Gln Val Val 275 280 285 Val Thr Tyr Leu Asp Asp Ser Thr His Phe Tyr Val Gln Asp Leu Asn 290 295 300 Gly Asp Gly Asp Leu Ala Thr Ser Asp Gly Ile Arg Val Phe Ala Lys 305 310 315 320 Asn Ala Lys Val Gln Val Gly Asp Val Leu Thr Ile Ser Gly Glu Val 325 330 335 Glu Glu Phe Phe Gly Arg Gly Tyr Glu Glu Arg Lys Gln Thr Asp Leu 340 345 350 Thr Ile Thr Gln Ile Val Ala Lys Ala Val Thr Lys Thr Gly Thr Ala 355 360 365 Gln Val Pro Ser Pro Leu Val Leu Gly Lys Asp Arg Ile Ala Pro Ala 370 375 380 Asn Ile Ile Asp Asn Asp Gly Leu Arg Val Phe Asp Pro Glu Glu Asp 385 390 395 400 Ala Ile Asp Tyr Trp Glu Ser Met Glu Gly Met Leu Val Ala Val Asp 405 410 415 Asp Ala Lys Ile Leu Gly Pro Met Lys Asn Lys Glu Ile Tyr Val Leu 420 425 430 Pro Gly Ser Ser Thr Arg Pro Leu Asn Asn Ser Gly Gly Val Leu Leu 435 440 445 Pro Ala Asn Ser Tyr Asn Thr Asp Val Ile Pro Val Leu Phe Lys Lys 450 455 460 Gly Lys Gln Ile Ile Lys Ala Gly Asp Ser Tyr Lys Gly Arg Leu Ala 465 470 475 480 Gly Pro Val Ser Tyr Ser Tyr Gly Asn Tyr Lys Val Phe Val Asp Asp 485 490 495 Ser Lys Asn Met Pro Ser Leu Met Asp Gly His Leu Lys Pro Glu Lys 500 505 510 Thr Asn Leu Gln Lys Asp Leu Ser Lys Leu Ser Ile Ala Ser Tyr Asn 515 520 525 Ile Glu Asn Phe Ser Ala Asn Pro Ser Ser Thr Lys Asp Glu Lys Val 530 535 540 Lys Arg Ile Ala Glu Ser Phe Ile His Asp Leu Asn Ala Pro Asp Ile 545 550 555 560 Ile Gly Leu Ile Glu Val Gln Asp Asn Asn Gly Pro Thr Asp Asp Gly 565 570 575 Thr Thr Asp Ala Thr Gln Ser Ala Gln Arg Leu Ile Asp Ala Ile Lys 580 585 590 Lys Leu Gly Gly Pro Thr Tyr Arg Tyr Val Asp Ile Ala Pro Glu Asn 595 600 605 Asn Val Asp Gly Gly Gln Pro Gly Gly Asn Ile Arg Thr Gly Phe Leu 610 615 620 Tyr Gln Pro Glu Arg Val Ser Leu Ser Asp Lys Pro Lys Gly Gly Ala 625 630 635 640 Arg Asp Ala Leu Thr Trp Val Asn Gly Glu Leu Asn Leu Ser Val Gly 645 650 655 Arg Ile Asp Pro Thr Asn Ala Ala Trp Lys Asp Val Arg Lys Ser Leu 660 665 670 Ala Ala Glu Phe Ile Phe Gln Gly Arg Lys Val Val Val Val Ala Asn 675 680 685 His Leu Asn Ser Lys Arg Gly Asp Asn Ala Leu Tyr Gly Cys Val Gln 690 695 700 Pro Val Thr Phe Lys Ser Glu Gln Arg Arg His Val Leu Ala Asn Met 705 710 715 720 Leu Ala Gln Phe Ala Lys Glu Gly Ala Lys His Gln Ala Asn Ile Val 725 730 735 Met Leu Gly Asp Phe Asn Asp Phe Glu Phe Thr Lys Thr Ile Gln Leu 740 745 750 Ile Glu Glu Gly Asp Met Val Asn Leu Val Ser Arg His Asp Ile Ser 755 760 765 Asp Arg Tyr Ser Tyr Phe His Gln Gly Asn Asn Gln Thr Leu Asp Asn 770 775 780 Ile Leu Val Ser Arg His Leu Leu Asp His Tyr Glu Phe Asp Met Val 785 790 795 800 His Val Asn Ser Pro Phe Met Glu Ala His Gly Arg Ala Ser Asp His 805 810 815 Asp Pro Leu Leu Leu Gln Leu Ser Phe Ser Lys 820 825

Claims

류머티스성 열(rheumatic fever) 또는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(poststreptococcal glomerulonephritis: PSGN)을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법으로서,
i) 스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes)에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계; 및
ii) 상기 생물학적 샘플을, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단(population)과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계로서,
iv) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 존재, 또는 임계값(threshold value)을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양의 검출이 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출(recent exposure)을 나타내고;
v) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 부재와 함께, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준의 존재, 또는 임계값 미만의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원-특이적 복합물의 양의 검출이 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출(prior exposure)을 나타내는, 상기 하나 이상의 다른 진단 기준을 평가하는 단계; 및
vi) 상기 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN에 대한 치료를 투여하고; 상기 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 갖는 경우에, 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 치료를 투여하거나, 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 치료를 투여하는 단계를 포함하는, 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법.
스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제로 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법으로서,
i) 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;
ii) 상기 생물학적 샘플을, 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단, 스트렙토코커스 피오게네스 DNaseB로부터의 항원의 하나 이상의 집단, 및/또는 스트렙토코커스 피오게네스 SLO로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 상기 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 복합물을 검출하는 단계로서,
a. 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 존재, 또는 임계값을 초과하는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 양의 검출은 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내고,
b. 스트렙토코커스 피오게네스 DNaseB-특이적 복합물 및/또는 스트렙토코커스 피오게네스 SLO-특이적 복합물의 존재, 및 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 부재 또는 임계값 미만의 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA-특이적 복합물의 양의 검출은 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계,
iv) 상기 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 갖는 경우에, 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하고; 상기 대상체가 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 사전 노출을 갖는 경우에, 규명된 또는 후속 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제를 투여하는 단계를 포함하는, 스트렙토코커스 피오게네스에 대해 효과적인 항생제로 류머티스성 열 또는 PSGN을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 최근-발병 류머티스성 열 또는 급성 PSGN에 대한 치료, 또는 최근 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대한 치료가 급성 치료 기간에 걸쳐 부하 용량(loading dose)의 상기 항생제의 투여를 포함하는 치료 요법에 따라 급성 스트렙토코커스 피오게네스 감염증에 대해 효과적인 항생제의 투여인, 방법.
제3항에 있어서, 상기 급성 치료 기간은 약 5일 내지 약 20일, 예를 들어, 약 8일 내지 약 15일, 또는 약 10일 내지 약 12일인, 방법.
제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항생제는 바이실린(bicillin)인, 방법.
대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 검출하는 방법으로서,
i) 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;
ii) 상기 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단 각각은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 둘 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 복합물을 검출하는 단계로서, 임계값 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는, 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 검출하는 방법.
대상체에서 류머티스성 열 또는 급성 연쇄상구균 감염후 사구체신염(acute poststreptococcal glomerulonephritis: APSGN)을 포함하는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN)을, 또는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성의 증가를 검출하거나 진단하는 방법으로서,
i) 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;
ii) 상기 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단 각각은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 둘 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 복합물을 검출하는 단계로서, 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출의 증가는 류머티스성 열 또는 APSGN이 발병할 가능성의 증가를 나타내거나, 상기 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN의 존재에 대한 하나의 기준으로서 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계;
iv) 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 진단 기준을 평가하는 단계로서,
v) 류머티스성 열 또는 APSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준과 함께 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출의 증가는 상기 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN을 나타내는, 상기 하나 이상의 진단 기준을 평가하는 단계를 포함하는, 대상체에서 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN)을, 또는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성의 증가를 검출하거나 진단하는 방법.
대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하는 방법으로서,
i) 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;
ii) 상기 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단 각각은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 둘 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에서 항원-특이적 항체에 결합하는, 상기 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스의 존재 또는 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 상기 대상체의 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는 방법.
생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하는 방법으로서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체는 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 특이적으로 결합하며,
i) 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;
ii) 상기 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단 각각은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 둘 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에서 항원-특이적 항체에 결합하는 단계; 및
iii) 상기 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 상기 생물학적 샘플이 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 항체를 함유함을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 복합물의 검출 증가가 각 시험 집단에 대해 확립된 상기 항원의 기준 수준(reference level)에 대한 증가인, 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 상기 하나 이상의 항체는 하나 이상의 혈청 항체인, 방법.
제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 혈청 항체는 하나 이상의 IgG 항체인, 방법.
제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 혈청 항체는 하나 이상의 IgA 항체 또는 하나 이상의 IgM 항체인, 방법.
제1항 또는 제7항에 있어서, 상기 하나 이상의 진단 기준은 류머티스성 열 또는 PSGN과 관련된 하나 이상의 임상 증상의 존재 또는 부재인, 방법.
제14항에 있어서, 상기 하나 이상의 임상 증상은 이동 다발관절염(migratory polyarthritis), 심장염(carditis), 혈뇨(hematuria), 경계 홍반(erythema marginatum), 피하 결절(subcutaneous nodule), 시데남 무도병(Seydenham's Chorea), 또는 농피증(pyoderma)으로부터 선택되는, 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나 이상이 하기 단백질:
i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA),
ii) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는
iii) 스트렙토라이신-O(SLO)
중 하나로부터의 항원인, 방법.
제1항 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나 이상이,
i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는
ii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편, 또는
iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편, 또는
iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는
v) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는
vi) 서열번호 5의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는
vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는
viii) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편, 또는
ix) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편, 또는
x) 상기 i) 내지 ix) 중 둘 이상의 임의의 조합
으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제17항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 하기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 각각의 집단과 접촉되는, 방법:
i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는
ii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편, 또는
iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편,
및
iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는
v) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는
vi) 서열번호 5의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편,
및
vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는
viii) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편, 또는
ix) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편.
제17항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 하기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 각각의 집단과 접촉되는, 방법:
i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA),
ii) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 및
iii) 스트렙토라이신-O(SLO).
제17항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 하기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 각각의 집단과 접촉되는, 방법:
i) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편,
ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 및
iii) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 둘 이상의 집단이 조성물에 존재하는, 방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나 이상이 검출 가능한 표지로 표지되고/되거나 마이크로입자, 비드, 또는 검출 가능한 작용제에 커플링되는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 집단 중 하나 이상이 비드에 또는 마이크로입자에 공유 결합되는, 방법.
제23항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 집단 각각이 비드에 또는 마이크로입자에 공유 결합되며, 선택적으로, 상기 비드 또는 마이크로입자의 상이한 집단 각각이 서로 구별 가능한, 방법.
제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비드는 폴리스타이렌 비드, 자성 비드, 카르복실화된 비드, 작용화된 비드이거나, 상기 마이크로입자는 폴리스타이렌 마이크로입자, 자성 마이크로입자, 카르복실화된 마이크로입자, 또는 작용화된 마이크로입자인, 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원:항체 복합물을 검출하는 것이 검출 가능한 표지를 지닌 특이적 결합 파트너(specific binding partner)에 상기 복합물을 노출시키고 상기 항원-특이적 항체가 상기 생물학적 샘플에 존재하는 경우에 상기 표지로부터의 신호를 검출하는 것을 포함하는, 방법.
제26항에 있어서, 상기 특이적 결합 파트너는 항체 또는 이의 단편을 포함하는, 방법.
제27항에 있어서, 상기 특이적 결합 파트너는 항-IgG 항체, 항-IgG-PE, 또는 이들의 단편인, 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원:항체 복합물은 유량계(flow instrument), 플레이트-기반 면역학적 검정, 전기영동 및/또는 면역블롯, 면역크로마토그래피 스트립, 전자 바이오센서, 공명 바이오센서, 또는 미세유체 장치 또는 센서를 이용하여 검출되는, 방법.
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 검출은 ELISA 또는 루미넥스 검정(luminex assay)에 의해 수행되거나, 제24항에 있어서, 상기 면역학적 검정이 ELISA 또는 루미넥스 검정인, 방법.
제30항에 있어서, 상기 하나 이상의 복합물 또는 상기 항원 특이적 항체 중 하나 이상의 존재가 검출 가능하게 표지된 2차 항체를 사용하여 검출되는, 방법.
제31항에 있어서, 상기 검출 가능하게 표지된 2차 항체는 항-IgG-PE인, 방법.
제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원은 검출 가능하게 표지되는, 방법.
제33항에 있어서, 상기 검출 가능한 표지는 형광 발색단인, 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 포유류 종으로부터 획득되는, 방법.
제35항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 체액 샘플인, 방법.
제35항 또는 제36항에 있어서, 상기 대상체는 인간 대상체인, 방법.
단리된, 정제된, 또는 재조합 SpnA 폴리펩타이드로서, 상기 SpnA 폴리펩타이드는, 야생형 SpnA에 대해,
i) N-말단 절단되거나;
ii) C-말단 절단되거나; 또는
iii) N-말단 절단되고 C-말단 절단되는, 단리된, 정제된, 또는 재조합 SpnA 폴리펩타이드.
제38항에 있어서, 상기 SpnA 폴리펩타이드는,
i) 면역원성이거나,
ii) 야생형 SpnA와 면역학적으로 교차-반응성이거나,
iii) 검출 가능하게 표지되거나,
iv) 야생형 SpnA와 비교하여 실온에서 저장될 때 향상된 안정성을 가지거나,
v) 서열번호 8로부터의 10개 이상의 인접한 아미노산을 포함하거나, 또는
vi) 상기 i) 내지 v)의 둘 이상의 임의의 조합인, 단리된, 정제된, 또는 재조합 SpnA 폴리펩타이드.
제38항 또는 제39항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 향상된 열안정성, 향상된 면역원성 안정성, 또는 향상된 열안정성과 향상된 면역원성 안정성 둘 모두를 갖는, 단리된, 정제된, 또는 재조합 SpnA 폴리펩타이드.
제38항 내지 제40항 중 어느 한 항의 단리된, 정제된, 또는 재조합 SpnA 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.
검출 가능하게 표지된 SpnA를 포함하는 조성물.
대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN을 검출하거나 진단하기 위한, 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하기 위한, 또는 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하기 위한 키트로서,
i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는
ii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편, 또는
iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편, 또는
iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는
v) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는
vi) 서열번호 5의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는
vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는
viii) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편, 또는
ix) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편
으로 이루어진 군으로부터 선택된 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 적어도 하나를 포함하는 조성물,
선택적으로, 기준 항체 대조군을 포함하는 적어도 하나의 조성물로서, 상기 항체 대조군은 상기 키트에 존재하는 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나에 대해 특이적인 항체를 포함하는, 상기 기준 항체 대조군을 포함하는 적어도 하나의 조성물,
선택적으로, 상기 하나 이상의 항원을 생물학적 샘플과 접촉시키기 위해 유리한 배지를 구성하기 위한 하나 이상의 시약,
선택적으로, 상기 하나 이상의 항원과 생물학적 샘플에 존재하는 하나 이상의 스트렙토코커스 피오게네스 항원 특이적 항체 간에 형성된 복합물을 검출할 수 있는 하나 이상의 시약,
및 사용 설명서를 포함하는 키트.
제43항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 적어도 하나가 비드 또는 마이크로입자에 공유 결합된 키트.
제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 조성물은,
i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는
ii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편, 또는
iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편
의 집단을 포함하는 키트.
제45항에 있어서, 상기 조성물이 하기 스트렙토코커스 피오게네스 항원의 각각의 집단을 포함하는 키트:
i) 스트렙토코커스 피오게네스 뉴클레아제 A(SpnA), 또는
ii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편, 또는
iii) 서열번호 8의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SpnA의 항원 단편,
및
iv) 데옥시리보뉴클레아제-B(DNaseB), 또는
v) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편, 또는
vi) 서열번호 5의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 DNaseB의 항원 단편,
및
vii) 스트렙토라이신-O(SLO), 또는
viii) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편, 또는
ix) 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열로부터의 적어도 10개의 인접한 아미노산을 포함하거나, 이를 필수적으로 포함하거나, 이로 이루어진 SLO의 항원 단편.
제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 ii) 전에 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에서 청구된 바와 같은 키트를 제공하는 단계를 더 포함하는, 방법.
제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원 중 하나 이상이 항스트렙토라이신(ASO), 항히알루로니다제(AHase), 항스트렙토키나제(ASKase), 항니코틴아미드-아데닌 디뉴클레오티다제(항-NAD)를 포함하는 군으로부터 선택되는, 방법 또는 키트.
대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 검출하는 방법으로서,
i) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;
ii) 상기 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 복합물을 검출하는 단계로서, 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출의 증가는 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는, 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 검출하는 방법.
대상체에서 류머티스성 열 또는 급성 연쇄상구균 감염후 사구체신염(APSGN)을 포함하는 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN)을, 또는 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성 증가를 검출하거나 진단하는 방법으로서,
i) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 이를 함유하는 것으로 의심되는 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;
ii) 상기 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 복합물을 검출하는 단계로서, 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 류머티스성 열 또는 APSGN이 발병할 가능성의 증가를 나타내거나, 상기 대상체에서 류머티스성 열 또는 PSGN의 존재를 위한 하나의 기준으로서 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계;
iv) 상기 대상체에 대해 류머티스성 열 또는 PSGN에 대한 하나 이상의 진단 기준을 평가하는 단계로서,
v) 류머티스성 열 또는 APSGN에 대한 하나 이상의 다른 진단 기준과 함께 임계값을 초과하는 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 상기 대상체에서 류머티스성 열 또는 APSGN을 나타내는, 상기 하나 이상의 진단 기준을 평가하는 단계를 포함하는, 대상체에서 연쇄상구균 감염후 사구체신염(PSGN)을, 또는 류머티스성 열 또는 PSGN이 발병할 가능성 증가를 검출하거나 진단하는 방법.
제50항에 있어서, 상기 하나 이상의 진단 기준은 류머티스성 열 또는 PSGN과 관련된 하나 이상의 임상 증상의 존재 또는 부재인, 방법.
제51항에 있어서, 상기 하나 이상의 임상 증상은 이동 다발관절염, 심장염, 혈뇨, 경계 홍반, 피하 결절, 시데남 무도병 또는 농피증으로부터 선택되는, 방법.
대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하는 방법으로서,
i) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;
ii) 상기 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 상기 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스의 존재 또는 스트렙토코커스 피오게네스에 대한 상기 대상체의 최근의 노출을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는, 대상체에서 스트렙토코커스 피오게네스 감염증의 존재를 검출하는 방법.
생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하는 방법으로서, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체는 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 특이적으로 결합하며,
i) 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA에 대해 특이적인 하나 이상의 항체를 함유할 수 있거나 함유하는 것으로 의심되는 대상체로부터 생물학적 샘플을 제공하는 단계;
ii) 상기 생물학적 샘플을 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA로부터의 항원의 하나 이상의 집단과 접촉시키는 단계로서, 상기 생물학적 샘플에 항원-특이적 항체가 존재하는 경우에, 상기 스트렙토코커스 피오게네스 SpnA 항원의 하나 이상의 집단은 항원:항원-특이적 항체 복합물의 하나 이상의 집단을 형성하기 위해 상기 생물학적 샘플에 존재하는 항원-특이적 항체에 결합할 수 있는, 상기 접촉시키는 단계; 및
iii) 상기 복합물을 검출하는 단계로서, 하나 이상의 복합물의 검출 증가는 상기 생물학적 샘플이 상기 스트렙토코커스 피오게네스 항원에 대해 특이적인 항체를 함유함을 나타내는, 상기 복합물을 검출하는 단계를 포함하는, 생물학적 샘플에서 스트렙토코커스 피오게네스 항원-특이적 항체를 검출하는 방법.