KR20190134958A - 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 치료 또는 예방용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명에서 올레아놀릭산(Oleanolic acid)은 기존에는 인수공통전염병의 하나인 톡소포자충증 또는 톡소플라즈마증에 대한 항톡소포자충증 효과가 보고된바 없다.
본 발명에서는 상기 시험물질이 톡소포자충에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가지고 있음이 확인되었으며, 이를 활용한 톡소플라즈마증(톡소포자충증, Toxoplasmosis)의 치료, 개선 또는 예방을 위한 조성물로 사용될 수 있음을 확인하였다.
본 발명은 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방용 약학 조성물, 예방 또는 개선용 건강식품 조성물, 예방 또는 개선용 사료 조성물, 치료, 개선 또는 예방용 동물의약품 조성물 및 예방 또는 개선용 의약외품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 약학 조성물, 건강식품 조성물, 사료 조성물, 동물의약품 조성물 및 의약외품 조성물은 톡소포자충에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가짐으로써 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방용 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 치료 또는 예방용 조성물{A composition for treating or preventing toxoplasmosis comprising Oleanolic acid}

본 발명은 올레아놀릭산(Oleanolic acid)을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(톡소포자충증, Toxoplasmosis)의 치료, 개선 또는 예방용 약학 조성물, 예방 또는 개선용 건강식품 조성물, 예방 또는 개선용 사료 조성물, 치료, 개선 또는 예방용 동물의약품 조성물, 예방 또는 개선용 의약외품 조성물에 관한 것이다.

보다 구체적으로, 단일물질인 올레아놀릭산(Oleanolic acid)이 인수공통전염병인 톡소플라즈마증을 유발하는 기생충인 톡소포자충(Toxoplasma gondii: T. gondii)에 대한 직접적인 생존저해작용 및 살충작용 또는 톡소포자충의 분열증식 및 성장을 억제하는 효과가 있으므로 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방용 약학 조성물, 예방 또는 개선용 건강식품 조성물, 예방 또는 개선용 사료 조성물, 치료, 개선 또는 예방용 동물의약품 조성물 및 예방 또는 개선용 의약외품 조성물로 유용하다.

수백 년 전만 해도 결핵, 독감, 페스트(흑사병), 천연두, 콜레라와 같은 전염성 질병은 어린이와 성인들을 포함하는 전 인류에 급격한 사망을 초래하는 고위험 전염성 질병이었다. 이러한 전염성 질병은 수세기에 걸쳐 전세계 수많은 사람들을 사망시켰으며 현재까지도 일부 전염성 질병의 억제는 어려움에 처해있는 실정이다. 이러한 전염성 질병의 억제를 위한 다양한 연구 중 페니실린의 발견은 항생물질에 의한 전염성 또는 병원성 미생물의 억제 또는 치료, 질병억제 및 건강보건향상과 인간의 수명연장에 큰 변화를 유발시키는 전환점이 되었다. 그렇지만, 여전히 병원성을 띠는 감염성 미생물에 의한 피해는 국가간의 경계를 띄어넘어 경제, 환경, 의학 및 공중보건학적으로 다양한 문제와 질병을 유발시키고 있다.

톡소포자충(톡소플라즈마 곤디, Toxoplasma gondii: T. gondii)는 AIDS 환자, 유아, 면역결핍 또는 면역체계에 장애가 있는 성인 및 환자의 중추신경계에 감염되어 톡소플라즈마증 또는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)을 유발하는 주요한 원인 기생충이다. 톡소플라즈마 곤디 또는 톡소포자충은 동물세포에 비해 매우 작으며 길이 8 ㎛ 및 직경 2㎛인 초승달 모양의 기생 생물체로서 숙주의 세포에서 분열증식 및 생존하며, 동물세포에서 기생하며 살아간다.

톡소포자충(톡소플라즈마 곤디, Toxoplasma gondii)를 구성하는 내부 기관은 단일 원추체, 아피코플라스트, 미토콘드리아, 리보솜, 핵, 골지체, 롭트리, 밀도과립, 및 마이크로넴즈(Micronemes) 등이 있다. 톡소포자충은 타키조이트(tachyzoites), 브라디조이트(bradyzoites) 및 스포로조이트(sporozoites)를 포함하는 세 단계의 감염기를 포함하며 이러한 단계는 톡소포자충의 분열증식 및 성장에 필요한 기생 생활사를 구성한다. 또한 톡소플라즈마 곤디가 전염될 때는 두 단계[시스트(cyst)기 및 오시스트(ooccyst)기]를 거쳐 전파된다. 사람은 모체로부터 태아로의 톡소플라즈마 곤디 전달을 의미하는 태반 감염에 의해 감염될 수 있으며, 톡소플라즈마 곤디에 감염된 조리되지 않은 음식 또는 덜 조리된 음식을 먹거나 날고기등을 통해 감염될 수 있고, 토양이나 물에 존재하는 포자성 오시스트(oocysts) 또는 고양이 배설물을 통해 감염될 수 있다. 타키조이트기는 숙주의 세포내에서 급속하게 분열 증식되어 복제되는 단계를 의미한다. 톡소플라즈마 곤디를 동물세포 (animal cells)에 감염시키면 세포내부에서 톡소플라즈마 곤디가 분열증식(proliferation)하면서 공포(parasitephorous vacuole: PV)를 형성시키며 PVM(parasitophorous vacuole membrane, 공포막) 내에서 분열증식된 톡소플라즈마 곤디는 막(membrane)을 통해 숙주세포로부터 영양분을 획득하여 PVM 안에서 분열 증식하여 분화된다. PVM(parasitophorous vacuole membrane)은 소화되지 않는 액포이며, 영양분을 제공하고, 산성화로부터 톡소포자충을 보호한다.

최근까지 톡소포자충에 관한 연구에 따르면 톡소포자충의 마이코넴즈(miconemes), 롭트리(rhoptries), Apicoplast, Conoid 및 고밀도과립(dense granule)을 포함하는 다양한 미세 기관과 물질들이 톡소포자충의 기생 기능과 밀접하게 연관되어 있다고 보고되었다. 각각의 소기관은 숙주세포(host cells)로의 톡소포자충 침투 과정에서 각 단계 중 서로 다른 기능을 유발하는 관련 단백질을 방출한다. 마이코넴 단백질은 숙주세포에서 톡소플라즈마 곤디의 부착과 관련되어 있고, 롭트리 단백질은 PVM 형성 단계 및 숙주세포와의 상호작용에서 중요한 역할을 하며, 고밀도과립(Dense granule) 단백질은 숙주세포로부터 영양분의 수송기능을 하는 것으로 보고되고 있다.

현재 톡소플라즈마증을 치료하기 위한 상용화된 효과적인 백신은 없으며, 설파다이아진(sulfadiazine), 피리메타마인(pyrimethamine) 등이 항톡소플라즈마증(항톡소포자충증) 제제로 사용되고 있다. 현재까지 효과적이고 만족스러운 약제는 아직 없으며, 항말라리아제인 pyrimethamine과 설파제인 sulfonamide의 병용투여, pyrimethamine에 sulfadiazine 또는 spiramycin을 병용투여함으로서 톡소플라즈마증 치료에 사용되고 있다. 현재는 pyrimethamine-sulfamethoxazole 합제가 시판되고 있지만 임신부에게 pyrimethamine의 투여는 신중한 진단과 처방이 요구된다. 또한, 망막질환이 있을 경우 clindamycin-sulfadiazine 합제가 좋은 진전을 보일 수 있으며, 염증반응을 줄이기 위해 스테로이드(steroid) 제제가 함께 사용될 수 있다. 그러나 최근 상기 약제들이 나타내는 여러가지 독성 및 내성 등으로 부작용이 야기됨에 따라, 다양한 천연자원을 사용하여 톡소포자충의 억제 및 살충에 효과를 야기하는 의약품 개발에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다. 이러한 측면에서 새로운 항톡소포자충(Anti-Toxoplasma gondii) 약물 개발을 위한 연구개발 약물들은 질병치료에는 효과적이고 사람 및 동물에게는 독성이 없거나 미미해야 하며 감염원인 톡소포자충을 강하고 효과적으로 억제하거나 살충해야 한다.

이에, 본 발명자는 올레아놀릭산(Oleanolic acid)이 인수공통전염병인 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)을 유발하는 기생충인 톡소포자충(Toxoplasma gondii: T. gondii)에 대한 직접적인 생존저해작용 또는 톡소포자충에 대한 분열증식 및 성장억제 효과가 있을뿐 아니라, 톡소포자충에 감염된 감염세포의 생존을 억제하고 감염세포에서 톡소포자충의 분열증식 및 성장을 억제함으로써 톡소포자충 및 톡소포자충 감염세포에 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 올레아놀릭산(Oleanolic acid)을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 치료, 개선 또는 예방용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 치료, 개선 또는 예방용 동물의약품 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 또 다른 목적은 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 올레아놀릭산(Oleanolic acid)을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 치료, 개선 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어, "Oleanolic acid"는 "Oleanic acid" 또는 ＂CAS Number 508-02-1＂ 또는 IUPAC 명명법으로는 "(4aS,6aR,6aS,6bR,8aR,10S,12aR,14bS)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carboxylic acid" 라고 불리며 실온 또는 냉장(2-8℃)에서 엷은 밝은 노란색(light yellow) 결정 또는 하얀색 결정(white powder)을 나타내며 화학구조식은 C₃₀H₄₈O₃이고 분자량은 456.70 g/mole 이다.

본 발명에서는 올레아놀릭산을 DMSO 또는 에탄올로 녹인 후 배지를 사용하여 농도별로 용액을 제조하고 MTT 측정법(MTT assay)을 사용하여 톡소포자충에 대한 상기 시험물질의 항톡소포자충 효과 또는 활성을 측정하였다.

본 발명의 일실시 예에서 Oleanolic acid가 직접적으로 톡소포자충의 생존율을 억제 또는 감소시키고 있음이 확인됨으로써 올레아놀릭산이 톡소포자충에 대한 항톡소포자충 활성 또는 항톡소포자충 효과를 나타내고 있음이 확인되었다 (도 1 내지 도 2).

본 발명에서는 올레아놀릭산을 DMSO 또는 에탄올로 녹인 후 배지를 사용하여 농도별로 용액을 제조하고 MTT 측정법을 사용하여 톡소포자충에 감염된 톡소포자충 감염세포에 대한 상기 시험물질의 항톡소포자충 활성 또는 항톡소포자충 효과를 측정하였다.

본 발명의 일실시 예에서 Oleanolic acid가 톡소포자충에 감염된 감염세포의 생존율을 효과적으로 억제 또는 감소시키고 있음이 확인되었으며, 올레아놀릭산이 톡소포자충 감염세포에 대한 항톡소포자충 활성 또는 항톡소포자충 효과를 나타내고 있음이 확인되었다. 톡소포자충의 특성상, 톡소포자충이 세포에 침입하여 세포를 감염시키면 톡소포자충의 저항력이 강해지며 감염세포의 저항을 유발시키고 톡소포자충은 세포 내에서 분열 및 증식하여 방출됨으로서 톡소포자충에 감염된 세포는 회복, 재생될 수 없게된다. 본 발명자는 톡소포자충에 감염된 감염세포에 Oleanolic acid를 투여하여 확인한 결과, Oleanolic acid가 톡소포자충에 감염된 세포의 톡소포자충을 선별적으로 사멸시킴으로써 세포내에서 톡소포자충의 분열증식을 억제시키며 감염세포를 효과적으로 사멸시켜 결과적으로 톡소플라즈마증을 치료할 수 있음을 확인하였다 (도 3).

본 발명에서 사용되는 용어, "톡소포자충증"은 "톡소플라즈마증"이라 불리며 원충의 일종인 톡소포자충(Toxoplama gondii, 톡소플라즈마 곤디)의 감염에 의해 일어나는 기생충유래 인수공통 감염성 질병이며, 여성이 임신 중에 톡소포자충에 감염될 경우 유산과 불임을 유발하며 "태반 감염"을 통해 태아에게 기형 및 선천성 톡소포자충증을 일으키는데, 주요 증상으로는 뇌수종(hydrocephalus), 망막맥락막염(retinochoroiditis), 경련(convulsion), 뇌석회화(cerebral calcification), 정신운동지연(psychomotor retardation) 등과 같은 다양한 증상을 유발한다.

또한, 후천적으로 톡소포자충에 감염되면 림프선병증(lymphadenopathy), 발열, 두통, 근육통, 비종대와 홍반성 발진, 심근염 또는 뇌수막염 증상, 비정형 폐렴(atypical pneumonia) 등의 증상이 나타나기도 한다.

톡소포자충은 대한민국을 포함하여 종숙주인 고양이 또는 고양이과의 야생동물이 서식하는 곳이면 전세계 어디에서나 발견되며, 사람과 애완동물 및 가축을 포함한 모든 포유류와 조류 및 기타 동물들이 중간숙주 역할을 하는 것으로 알려져 있으며, 미국의 경우 6천만명 이상의 사람이 감염되어 있는 것으로 알려져 있다.

또한 "톡소플라즈마증"은 톡소포자충에 의한 감염 때문에 발생하는 질환으로 톡소인포자충이 인체에 감염될 경우 근육조직에 기생하며 근육 이외에도 림프선, 뇌, 신경, 위장관, 생식기, 안구 등 대부분의 조직이나 장기에 침입해 기생하며 다양한 증상을 일으킬 수 있다.

톡소플라즈마증은 톡소포자충에 감염된 장기에 따라서 그 증상이 다양하게 나타나며 톡소포자충이 조직내에 기생하며 만성화 증상을 유발한다. 톡소포자충은 숙주의 영양분을 이용해 서서히 증식하며 다양한 기관으로 전이하여 염증을 유발할 수 있다. 사람이 톡소포자충에 감염되면 조직내에서 면역세포와의 염증반응에 의해 아주 느린 속도로 몸의 정상조직이 파괴되며 그 주위에 육아종(Granuloma, 덩어리로 된 혹)이 발생될 수 있다.

본 발명의 실시예에서 확인한 바와 같이, 본 발명의 Oleanolic acid는 톡소포자충의 생존을 저해하고 억제함으로써 톡소포자충 감염에 의해 유발되는 톡소플라즈마증의 예방, 개선 및 치료 활성을 갖는바, 본 발명의 조성물을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 예방, 개선 또는 치료용 약학 조성물로 제공될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어, "예방"은 본 발명에 따른 Oleanolic acid를 포함하는 조성물의 섭취 또는 투여로 톡소플라즈마증의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다.

본 발명에서 사용되는 용어, "치료"는 본 발명에 따른 Oleanolic acid를 포함하는 조성물의 섭취 또는 투여로 상기 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 말한다.

본 발명에서 사용되는 용어, "개선"이란 Oleanolic acid를 유효성분으로 포함하는 조성물을 섭취 또는 투여함으로서 상기 질환의 발병 또는 증상을 완화시키거나 톡소포자충의 생존을 저해하고 성장 및 분열증식을 억제 또는 감소시킴으로써 톡소플라즈마증의 증상을 완화시키는 효과를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 ＂항톡소포자충 효과" 또는 "항톡소포자충 활성＂이란 톡소포자충에 저항하는 효능, 보다 상세하게는 약제나 생리활성물질 또는 알려진 화학물질에 의한 톡소포자충의 생존저해작용을 의미하는 것으로서 본 발명의 목적상 상기 톡소포자충의 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 의미한다.

본 발명에서 상기 약학적 조성물의 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방 효과는 톡소포자충의 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성를 가짐으로써 달성되는 것일 수 있다. 본 발명의 일실시 예에서는 MTT 측정법을 통하여 올레아놀릭산이 톡소포자충의 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가지고 있음을 확인함으로써 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방 효과를 달성할 수 있음을 확인하였다(도 1 내지 도 3).

본 발명의 올레아놀릭산은 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 화학적 합성에 의해 얻어지는 합성물질 또는 식물 또는 자연물에서 유래되는 물질일 수 있다. 올레아놀릭산은 업계에 공지된 일반적인 합성방법, 동물, 식물 또는 자연물에서 유래되는 추출방법이나 분리방법 또는 정제방법을 이용하여 얻어질 수 있다. 또한, 상기 추출방법이나 분리방법은 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 유기용매 추출, 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 증기 환류 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출, 진공농축 또는 동결건조, 초원심분리 등의 방법을 사용할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 다음과 같다.

본 발명의 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 덱스트로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있으며 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 아미노산제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있으며 상기 예에 의해 제조 가능한 형태가 제한 되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 서방형제제, 설하정, 현탁제, 내용액제, 유제, 주사제, 주정제, 경피흡수제, 점막흡수제, 구강붕해제, 패치제, 필름제, 도포제, 첩부제, 흡입제, 시럽제, 에멀젼, 겔제, 연고제, 점안제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 동결건조제제, 좌제 또는 에어로졸로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 상기 예에 의해 제조 가능한 제형의 형태가 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 그 투여용량에 특별한 제약은 없고, 체내 흡수도, 체중, 환자의 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 유효량 범위를 고려하여 제조하도록 하며, 이렇게 제형화된 단위 투여형 제제는 필요에 따라 전문가의 판단과 개인의 요구에 따라 전문화된 투약법을 사용하거나 일정 시간의 간격으로 수회 투여, 섭취할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물을 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 사용하거나 다른 의약품 성분 또는 다른 치료제와 함께 병용되어 사용될 수 있으며 단일 또는 다중으로 사용될 수 있다. 유효성분의 함량은 유효량 범위를 고려하여 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있고, 사용 목적(예방, 개선 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며 이에 제한되는 것은 아니다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라증마증의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다. 상기 건강식품 조성물은 바람직하게는 올레아놀릭산이 톡소포자충에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가짐으로써 달성되는 것일 수 있으며, 이에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명의 조성물을 식품의 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 건강식품 또는 그 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용목적에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 본 발명의 식품 조성물은 혼합량에 큰 제한은 없다.

본 발명의 식품의 종류에는 특별한 제한은 없으며 상기 조성물을 첨가할 수 있는 건강식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 쥬스, 드링크제, 알코올성 음료 및 비타민 복합제 등이 있고 통상적인 의미에서의 건강식품과 건강기능성식품 등을 모두 포함할 수 있다. 또한 동물을 위한 사료로 이용되는 식품을 포함할 수 있으며, 상기 예에 의해 제조 가능한 식품의 형태가 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 건강식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일음료, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 본 발명의 조성물을 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나 과립화, 정제화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있으나, 상기 예에 의해 제조 가능한 형태가 제한되는 것은 아니다.

또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다. 상기 사료 조성물은 바람직하게는 올레아놀릭산이 톡소포자충에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가짐으로써 달성되는 것일 수 있으며, 이에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명의 조성물을 사료 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 사료 성분과 함께 혼합하여 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용목적에 따라 적합하게 결정될 수 있으며 본 발명의 사료 조성물은 혼합량에 큰 제한은 없다.

본 발명의 사료의 종류에는 특별한 제한은 없으며 상기 조성물은 보조 성분으로 아미노산, 무기염류, 비타민, 항산화, 미생물 제제 등과 같은 각종 보조제 및 분쇄 또는 파쇄된 밀, 보리, 옥수수 등의 식물성 단백질사료, 혈분, 육분, 생선분 등의 동물성 단백질 사료, 동물성 지방 및 식물성 지방과 같은 주성분 이외에도 영양 보충제, 성장 촉진제, 소화 흡수 촉진제, 질병 예방제와 함께 사용될 수 있다.

상기 사료의 투여 형태, 방법 및 제형은 다양하게 할 수 있으며, 상기 예에 의해 제조 가능한 형태가 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 사료 조성물은 포유류, 가금류, 어류 및 갑각류를 포함하는 다수의 동물식이 즉, 사료에 적용할 수 있다. 상업용 가축으로 중요한 소, 돼지, 말, 사슴, 염소 등의 가축을 포함하는 포유류, 코끼리, 낙타, 기린, 원숭이 등의 동물원 동물, 개, 고양이 등의 애완동물에게 사용할 수 있으며, 닭, 오리, 거위, 비둘기 등의 가금류 및 붕어, 잉어, 송어, 숭어, 새우와 같은 상업적으로 사육되는 어류 및 갑각류에 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않는다.

또한, 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방용 동물의약품 조성물에 관한 것이다. 즉, 본 발명의 조성물은 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방을 목적으로 동물의약품 조성물로 사용될 수 있다.

상기 조성물은 바람직하게는 올레아놀릭산이 톡소포자충에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가짐으로써 달성되는 것일 수 있으며, 이에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명의 조성물을 동물의약품 조성물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 사용하거나 다른 의약품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있으며 이에 제한되는 것은 아니다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강, 개선 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

또한, 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물에 관한 것이다. 즉, 본 발명의 조성물은 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선을 위한 의약외품 조성물에 첨가될 수 있다.

상기 조성물은 바람직하게는 올레아놀릭산이 톡소포자충에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가짐으로써 달성되는 것일 수 있으며, 이에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명의 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있으며 이에 제한되는 것은 아니다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강, 또는 개선)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 본 발명의 의약외품 조성물의 종류에는 제한은 없으나 바람직하게는 소독 청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 스프레이, 핸드워시, 연고제, 도포제, 크림제, 카타플라스마제, 가습기 충진제, 화장품, 샴푸, 코팅제, 세정제, 여성 청결제, 위생패드, 생리대, 콘돔, 밴드, 필터 충진제, 위생용기, 위생봉투 또는 마스크 등의 의약외품 제조에 사용될 수 있으며, 상기 예에 의해 제조 가능한 형태가 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 약학 조성물, 건강식품 조성물, 사료 조성물, 동물의약품 조성물 또는 의약외품 조성물은 톡소포자충에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가짐으로써 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방용으로 유용하게 사용할 수 있으며 다양한 용도로 이용될 수 있다.

도 1은 올레아놀릭산을 MTT 측정법에 적용하여 톡소포자충에 대한 상기 시험물질의 각 농도별 항톡소포자충 활성을 측정한 결과를 나타낸다. 또한 "+" 는 톡소포자충에 대한 상기 시험물질의 항톡소포자충 활성을 나타낸다.
도 2는 톡소포자충에 상기 시험물질을 각 농도별로 투여한 후 MTT 측정법을 통하여 톡소포자충에 대한 상기 시험물질의 각 농도별 항톡소포자충 효과 또는 활성을 측정한 결과를 나타낸다.
도 3는 톡소포자충에 감염된 톡소포자충 감염세포에 상기 시험물질을 각 농도별로 투여한 후 MTT 측정법에 적용하여 톡소포자충 감염세포에 대한 상기 시험물질의 각 농도별 항톡소포자충 효과를 측정한 결과를 나타낸다.

이하, 본 발명을 실시 예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시 예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 한정되는 것은 아니다.

: 재료

RPMI 1640 media와 FBS(Fetal Bovine Serum, 소혈청)는 Gibco(USA)에서 구입하였으며 Oleanolic acid, Sulfadiazine, MTT powder(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide; Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue)와 DMSO(Dimethyl Sulfoxide)는 시그마 알드리치 주식회사(Sigma-Aldrich Co. LLC, St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Ethanol과 96 well plate는 (주)동인바이오텍에서 구입하였다. 다른 화학제제, 시약, 소모품 등은 (주)동인바이오텍, (주)다윈바이오, BD KOREA, 머크 화학 주식회사(독일) 및 시그마 알드리치 주식회사(미국)에서 구입하였다.

: 톡소포자충 및 세포 배양

톡소포자충(Toxoplasma gondii, Toxoplasma gondii RH strain)은 ATCC(미국)에서 구입하였으며 Hela 세포는 서울대학교 한국세포주 은행에서 구입하여 배양한 후 사용하였고 톡소포자충은 BALB/c 마우스의 복강에서 증식시킨 후 채취하여 사용하였다. Hela 세포는 37℃, 공기 중 5% CO₂ 조건에서 10% FBS, 100 unit/mL 페니실린 및 100 μM 스트렙토마이신이 첨가된 RPMI 1640 배지에서 배양되었다. Hela 세포는 1: 5의 비율(세포: 톡소포자충=1:5)로 톡소포자충으로 감염시켜 시험에 사용하였다.

: MTT assay 측정법

(1) 톡소포자충에 대한 항톡소포자충 효과 측정

톡소포자충에 대한 상기 시험물질의 직접적인 항톡소포자충 효과 또는 활성 측정은 다음과 같다. 먼저 톡소포자충을 BALB/c 마우스의 복강에서 증식시킨 후 톡소포자충을 채취하고 24 well plate에 톡소포자충(1 × 10⁷/well)을 접종, 배양한 후 올레아놀릭산을 농도별(37.5~600.0 ㎍/mL)로 투여하고 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 24시간동안 배양하였으며, 약물 대조군으로 Sulfadiazine을 투여한 실험군도 함께 배양하여 상기 시험물질의 효과를 비교하였다.

시험물질 투여 24시간 후 "(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide or Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue)" 용액을 첨가하고 24 well palte를 호일로 차광한 후 37℃, 공기 중 5% CO₂ 조건에서 3시간 배양 하였다. 배양 후 DMSO를 첨가하였으며 실온에서 20분간 혼합(Shaking)하고 용액을 96 well plate로 이전한 후 ELISA Reader(Microplate Reader)로 570nm에서 측정하여 톡소포자충에 대한 상기 시험물질의 항톡소포자충 효과 또는 활성을 확인하였다 (도 1 내지 도 2).

(2) 톡소포자충 감염세포에 대한 효과 측정

: Hela cells(1 × 10⁵)는 24 well plate에서 37℃, 공기 중 5% CO₂ 조건에서 배양되었으며 24시간 후, 세포에 톡소포자충을 감염시키고 올레아놀릭산을 농도별로 투여하였다. 24시간 후 "(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide or Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue)" 용액을 첨가하고 24 well palte를 호일로 차광한 후 37℃, 공기 중 5% CO₂ 조건하에서 3시간 배양 하였다. 배양 후 DMSO를 첨가하여 형성된 Formazan을 용해시키고 실온에서 20분간 혼합(Shaking)하고 용액을 96 well plate로 이전한 후 ELISA Reader(Microplate Reader) 측정기로 570nm에서 측정하여 톡소포자충 감염세포에 대한 상기 시험물질의 항톡소포자충 효과를 확인하였다(도 3). 톡소포자충 감염세포의 증식률(Proliferation Rate:PR)은 (OD 실험군/OD 대조군) × 100%로 계산하였다.

그 결과, MTT 측정법에 의한 항톡소포자충 효과를 통하여 시험물질인 올레아놀릭산이 농도의존적으로 톡소포자충에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 나타내고 있음이 확인 되었다 (도 1 내지 3). 또한 올레아놀릭산이 직접적으로 톡소포자충의 생존저해작용을 유발할 뿐만 아니라 톡소포자충 감염세포의 생존을 효과적으로 저해하고 사멸시킴으로써 항톡소포자충 효과를 나타내고 있음이 확인되었다.

이러한 결과는 올레아놀릭산이 톡소포자충에 대한 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가짐으로써 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방을 위한 항톡소포자충용 조성물로서 이용 가능하며 유용하게 사용될 수 있음을 의미한다.

상술한 바와 같이 본 발명에 대한 상기 시험물질의 측정결과는 도 1 내지 도 3에 나타내었다.

본 발명에 따른 약학 조성물, 건강식품 조성물, 사료 조성물, 동물의약품 조성물 및 의약외품 조성물은 톡소포자충에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가짐으로써 톡소플라즈마증의 치료, 개선 또는 예방용으로 유용하게 사용할 수 있으며 다양한 용도로 이용될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 산업적으로 제약업, 식품업, 농수산업 및 제조업의 산업분야에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1에서 "+"는 톡소포자충에 대한 상기 시험물질의 항톡소포자충 활성 또는 효과를 나타낸다.

Claims (6)

1. 올레아놀릭산(Oleanolic acid)을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 치료, 개선 또는 예방용 약학 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 톡소포자충(Toxoplasma gondii)에 대한 생존저해작용 또는 분열증식 억제 및 성장저해작용을 나태내는 항톡소포자충 효과 또는 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
   
3. 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.
   
4. 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 사료 조성물.
   
5. 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 치료, 개선 또는 예방용 동물의약품 조성물.
   
6. 올레아놀릭산을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.

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