KR20190126103A

KR20190126103A - 아벨루맙을 포함하는 조성물

Info

Publication number: KR20190126103A
Application number: KR1020197028818A
Authority: KR
Inventors: 마리아 그라치아 테를리쩨제; 프란체스카 카발리에르; 안나 알 페쪼티; 엘리오 드 로씨
Original assignee: 메르크 파텐트 게엠베하; 화이자 인코포레이티드
Priority date: 2017-03-06
Filing date: 2018-03-05
Publication date: 2019-11-08
Also published as: MX2019010572A; AU2018232556A1; SG11201907892VA; TW201832782A; JP2020509063A; RU2019130333A; BR112019018384A2; CA3054833A1; IL269120A; CN110691791A; AR111165A1; EP3372615A1; WO2018162430A1; US20200031933A1; EP3592773A1

Abstract

본 발명은 탈아미드화 수준이 상승된 아벨루맙 항체 조성물, 뿐만 아니라 장애, 예컨대, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용이 해가 되는 것인 장애를 치료하기 위해 상기 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

아벨루맙을 포함하는 조성물

본 발명은 탈아미드화 수준이 상승된 아벨루맙 항체 조성물, 뿐만 아니라 장애, 예컨대, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용이 유해한 장애를 치료하기 위해 상기 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

치료 단백질을 대규모로 제조하게 되면, 표적 단백질의 이종성 집단이 생성된다. 제조된 단백질은 다양하게 변형될 수 있고, 이는 특정한 변형 성질에 의존하여, 그의 생물학적 기능 및 안정성에 영향을 줄 수 있다.

아스파라긴 (Asn 또는 N) 잔기의 탈아미드화가 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조되는 치료 단백질에서 발생하는 가장 일반적인 번역 후 변형 중 하나이다. 이 반응에서, Asn 잔기는 숙신이미드 중간체 (Asu)를 통해 대략 3:1의 비율로 이소아스파르테이트 (이소Asp 또는 이소D) 또는 아스파르테이트 (Asp 또는 D)로 전환된다 (도 1).

Asn 잔기의 탈아미드화는 플랭킹 아미노산, 용매 유전 상수 및 용매 점도, 온도, 용액 pH 및 단백질의 고차 구조를 비롯한 다양한 인자에 따라 다른 탈아미드화율을 보인다 (Wakankar and Borchardt, J Pharm Sci. 2006 Nov;95(11):2321-36).

Asn 탈아미드화가 항체의 결합 친화도에 부정적인 영향을 미친다는 다양한 보고가 있었다.

해리스(Harris) 등은 mAb 헤르셉틴(Herceptin)의 경쇄 (LC) CDR1에서 Asn30의 탈아미드화는 상기 항체의 결합능을 70%까지 감소시켰다고 제시하였다 (J Chromatogr B Biomed Sci Appl. 2001 Mar 10;752(2):233-45).

IgG1 mAb의 LC의 CDR1 루프 중의 Asn 잔기 (Asn33)의 탈아미드화는 항원 결합을 40-60%만큼 감소시킨 것으로 제시되었다 (Vlasak et al., Anal Biochem. 2009 Sep 15;392(2):145-54).

인간화 재조합 IgG1 mAb의 또 다른 예에서, 중쇄 (HC) CDR2의 Asn55는 이소Asp 및 Asp로 쉽게 탈아미드화되고, 그 결과, 결합 활성은 14배 감소되는 것으로 나타났다 (Huang et al., Anal Chem. 2005 Mar 1;77(5):1432-9).

또한, IgG1 mAb의 HC CDR2의 Asn55에서 숙신이미드가 형성된 경우에는 효력이 70% 하락한 것으로 보고되었다 (Yan et al., J Pharm Sci. 2009 Oct;98(10):3509-21).

양(Yuang) 등은 IgG2 항체의 LC의 Asn33의 탈아미드화가 효력 상실과 상관관계가 있고, 40℃에서 1개월 동안 항체를 인큐베이션시킨 후에는 효력이 거의 완전히 상실되었다고 보고하였다 (MAbs. 2013 Sep-Oct;5(5):787-94).

탈아미드화가 치료 단백질의 결합 친화도에 미치는 잠재적으로 유해한 효과를 고려해 볼 때, 이러한 번역 후 변형을 최소화하는 것이 요구되어 왔고, 제조 동안 및 제조 후 둘 다에 탈아미드화로부터 단백질을 보호하는 방법이 개발되어 왔다 (Gervais, J Chem Technol Biotechnol 2016;91:569-575).

예를 들어, 카네코(Kaneko) 등은 수확일이 mAb의 탈아미드화된 종의 양에 영향을 미친다고 기술하고 있다 (J Biosci Bioeng. 2010 Mar;109(3):281-7). 상기 연구에서, 상이한 수확일 이후에 이온 교환 (IEX) 크로마토그래피에 의해 mAb의 상이한 변이체를 분리하였다. mAb의 탈아미드화된 형태에 상응하는 피크는 4일째 수확 시 1.06%에서 10일째 수확 시 7.71%로 증가하였다.

상기 데이터는 예컨대, pH 및 온도가 조사된 mAb의 탈아미드화 정도에 영향을 준다고 추가로 제안한, 뎅글(Dengl) 등에 의해 제시된 데이터와도 일치한다 (Pharm Res. 2013 May;30(5):1380-99).

또한, 포유동물 세포 배양 배지 내로 각종의 첨가제를 보충해 주는 것도 탈아미드화된 단백질의 축적을 유의하게 감소시킨다고 보고되었다 (Hossler et al., Biotechnol Prog. 2015 Jul-Aug;31(4):1039-52; Bruehlmann et al., Biotechnol Prog. 2015 May-Jun;31(3):615-29).

제조 후에, 탈아미드화는 적절한 제제 선택을 비롯한, 선택된 보관 조건에 의해 최소화될 수 있다. 클릴랜드(Cleland) 등은 인간 EGFR-2에 대한 인간화 mAb (rhuMAb HER2)의 동결건조된 제제의 탈아미드화는 당-대-단백질의 몰비를 360:1로 선택함으로써 40℃에서 3개월간의 보관 동안 억제될 수 있다고 기술하고 있다 (J Pharm Sci. 2001 Mar;90(3):310-21).

현재 임상 개발 중인 하나의 치료 단백질은 항-PD-L1 항체 아벨루맙 (WO2013079174A1)이다.

프로그램화된 사멸 1 (PD-1) 수용체 및 PD-1 리간드 1 및 2 (PD-L1, PD-L2)는 면역 조절에서 중요한 역할을 한다. 활성화된 T 세포 상에서 발현되었을 때, PD-1은 기질 세포, 종양 세포, 또는 둘 다에 의해 발현된 PD-L1 및 PD-L2에 의해 활성화됨으로써, T 세포 사멸 및 국재화된 면역 억제를 개시하고, 잠재적으로는 종양 발생 및 성장을 위한 면역 내성 환경을 제공한다 (Dong et al., Nat Med. 1999 Dec;5(12):1365-9; Freeman et al., J Exp Med. 2000 Oct 2;192(7):1027-34; Dong et al., Nat Med. 2002 Aug;8(8):793-800; Topalian et al., Curr Opin Immunol. 2012 Apr;24(2):207-12). 역으로, 상기 상호작용 억제는 비임상 동물 모델에서 국소 T 세포 반응을 증진시킬 수 있고, 항종양 활성을 매개할 수 있다 (Dong et al., Nat Med. 2002 Aug;8(8):793-800; Iwai et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Sep 17;99(19):12293-7). 임상 환경에서, PD-1 - PD-L1 상호작용을 차단하는 항체를 이용하여 치료하였을 때, 진행성 또는 전이성 고형암 환자에서 객관적 반응률은 7% 내지 38%였고, 허용가능한 안전 프로파일을 나타내었다고 보고되었다 (Hamid et al., N Engl J Med. 2013 Jul 11;369(2):134-44; Brahmer et al., N Engl J Med. 2012 Jun 28;366(26):2455-65; Topalian et al., N Engl J Med. 2012 Jun 28;366(26):2443-54; Herbst et al., Nature. 2014 Nov 27;515(7528):563-7). 특히, 대부분의 환자에서 반응은 연장되었고, 1년 이상 지속되었다.

(MSB0010718C로도 공지되어 있는) 아벨루맙은 면역글로불린 (Ig) G1 이소타입의 완전한 인간 모노클로날 항체이다. 아벨루맙은 PD-L1에 선택적으로 결합하고, 그의 PD-1과의 상호작용을 경쟁적으로 차단한다.

T 세포를 표적화하는 항-PD-1 항체와 비교하여, 아벨루맙은 종양 세포를 표적화하고, 그러므로, PD-L1을 차단하는 것은 PD-L2 - PD-1 경로를 무손상 상태 그대로 유지시켜 주변 자가 관용은 촉진시키기 때문에, 자가면역 관련 안전 문제의 위험성은 더 낮은 것과 같이 부작용은 더 적을 것으로 예상된다 (Latchman et al., Nat Immunol. 2001 Mar;2(3):261-8).

아벨루맙은 현재 진료소에서 비소세포 폐암, 요로상피 암종, 중피종, 메르켈 세포 암종, 위암 또는 위식도 접합부 암, 난소암, 및 유방암을 비롯한 다수의 암 유형에서 시험되고 있다.

아벨루맙의 추가의 의학적 용도는 WO2016137985, WO2016181348, WO2016205277, PCT/US2016/053939, 미국 특허 출원 일련 번호 62/423,358에 기술되어 있다.

WO2013079174에는 또한 섹션 2.4에 아벨루맙의 아미노산 서열을 갖는 항체의 인간용 수성 제제도 기술되어 있다. 상기 제제는 10 mg/ml 농도의 항체, 항산화제로서 메티오닌을 포함하고, pH는 5.5이다. 항산화제를 포함하지 않는 아벨루맙 제제는 PCT/EP2016/002040에 기술되어 있다.

본 발명자들은 놀랍게도 아벨루맙 조성물의 탈아미드화 수준과 그의 세포 결합 활성 사이에는 부정적인 상관관계가 없다는 것을 발견하게 되었다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 아벨루맙을 포함하는 조성물로서, 여기서 소정 분율의 아벨루맙 분자가 탈아미드화된 것인 조성물을 제공한다.

추가 측면에서, 본 발명은 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 2% 초과, 4% 초과, 6% 초과, 8% 초과, 10% 초과, 또는 12% 초과인, 아벨루맙을 포함하는 조성물을 제공한다.

추가 측면에서, 본 발명은 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 2-50%, 4-40%, 6-30%, 8-30%, 10-25%, 12-20%, 또는 12-16% 범위 내에 있는 것인, 아벨루맙을 포함하는 조성물을 제공한다.

탈아미드화된 아벨루맙 변이체를 포함하는 본 발명의 조성물의 저분자량 (LMW) 종 함량은 바람직하게는 15% 미만, 10% 미만, 8% 미만, 6% 미만 또는 4% 미만이다. 일부 실시양태에서, LMW 종 함량은 0.1-10%, 2-6% 또는 3-5% 범위이다.

추가로, 탈아미드화된 아벨루맙 변이체를 포함하는 본 발명의 조성물은 바람직하게는 15% 미만, 10% 미만, 8% 미만, 또는 6% 미만의, HC Met255에서 산화된 아벨루맙 변이체를 가진다. 일부 실시양태에서, HC Met255에서 산화된 아벨루맙 변이체의 함량은 0.1-10%, 1-8% 또는 3-6% 범위이다.

일부 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 8-25%의 탈아미드화된 변이체, 0.1-10%의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체, 및 0.1-10%의 LMW 종을 가진다. 다른 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 12-20%의 탈아미드화된 변이체, 1-8%의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체, 및 2-6% LMW 종을 가진다. 추가의 다른 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 12-16%의 탈아미드화된 변이체, 3-6%의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체, 및 3-5% LMW 종을 가진다.

일부 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 8-25%의 탈아미드화된 변이체, 10% 미만의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체 및 10% 미만의 LMW 종을 가진다. 다른 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 8-25%의 탈아미드화된 변이체, 6% 미만의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체 및 6% 미만의 LMW 종을 가진다. 다른 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 12-20%의 탈아미드화된 변이체, 8% 미만의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체 및 6% 미만의 LMW 종을 가진다. 추가의 다른 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 12-16%의 탈아미드화된 변이체, 6% 미만의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체 및 5% 미만의 LMW 종을 가진다.

일부 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 6% 초과의 탈아미드화된 변이체, 10% 미만의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체 및 10% 미만의 LMW 종을 가진다. 다른 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 8% 초과의 탈아미드화된 변이체, 8% 미만의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체 및 6% 미만의 LMW 종을 가진다. 추가의 다른 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 10% 초과의 탈아미드화된 변이체, 6% 미만의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체 및 5% 미만의 LMW 종을 가진다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 아벨루맙 조성물은 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 또는 7.5% 미만의, 비-푸코실화된 아벨루맙 분자를 가진다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 아벨루맙 조성물 중 20% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 또는 3% 미만의 아벨루맙 분자는 5개 이상의 만노스 잔기를 포함하는 고 만노스 N-글리칸을 가진다.

본 발명의 임의의 특정한 측면과 관련하여 기술된, 임의적이고, 적합하며, 바람직한 특색을 비롯한 임의의 특색들은 본 발명의 다른 측면과 관련하여 기술된, 임의적이고, 적합하며, 바람직한 특색을 비롯한 특색일 수 있다.

본 발명을 더욱 잘 이해하기 위해, 및 상기 발명의 실시양태가 어떻게 수행되는지를 제시하기 위해, 이제, 예로서, 하기 개략적 도면을 참조한다:
도 1은 Asn 탈아미드화에 대한 분해 경로를 도시한다 (문헌 [Chelius et al., Anal Chem. 2005 Sep 15;77(18):6004-11]로부터 인용).
도 2는 아벨루맙의 경쇄 (도 2a) 및 중쇄 (도 2b) 단백질 서열을 도시한다.
도 3는 카르복시펩티다제 B로 처리된 블랭크 샘플의 전형적인 IEX 프로파일을 제시한다.
도 4는 카르복시펩티다제 B로 처리된 블랭크 샘플과 오버레이된, 카르복시펩티다제 B로 처리된 아벨루맙 샘플의 전형적인 IEX 프로파일을 제시한다.
도 5는 카르복시펩티다제 B로 처리된 블랭크 샘플과 오버레이된, 50℃에서 4주 동안 인큐베이션되고, 카르복시펩티다제 B로 처리됨에 따라 인공적으로 탈아미드화된 아벨루맙 샘플의 전형적인 IEX 프로파일을 제시한다.
도 6 및 7은 탈아미드화 수준과 아벨루맙의 세포 결합 활성 사이의 상관관계를 제시한다.

아벨루맙은 그의 CDR 영역에 2개의 잠재적인 탈아미드화 부위를 가진다. Asn33은 경쇄 CDR1 서열 TGTSSDVGGYNYVS (서열식별번호(SEQ ID NO): 3) 내부에서 발견되고, Asn55는 경쇄 CDR2 서열 DVSNRPS (서열식별번호: 4) 내부에서 발견된다. 본 발명자들은 탈아미드화가 PD-L1 발현 세포의 세포 표면에 결합하는 아벨루맙에 미치는 영향을 사정하였다. 놀랍게도, 본 발명자들은 아벨루맙의 전체 Asn 탈아미드화 수준이 그의 세포 결합 활성과 부정적인 상관관계는 없다는 것을 발견한 반면, 다수의 선행 기술 보고에서는 CDR 영역 중의 탈아미드화가 결합능에 부정적인 영향을 준다고 밝혀졌다.

이러한 결과와 일관되게, 임상 연구 동안 10-25%의 탈아미드화된 변이체를 갖는 아벨루맙 조성물이 높은 치료 효과를 제시하는 것으로 밝혀졌다.

정의

달리 언급되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위에서 사용된 용어들은 하기에 설명되는 하기의 의미를 가진다.

본원에서 사용되는 바, "아벨루맙"이라는 용어는 완전 인간 항-PD-L1 IgG1 모노클로날 항체 (MSB0010718C로도 공지)를 지칭하고, WO2013079174A1에 항체 A09-246-2로서 기술되어 있다. 본원에서 사용되는 아벨루맙은 그의 번역 후 변형과 관련하여 제한되지 않으며, 이는 상기 분자의 바이오시밀러 버전을 포함한다.

가장 바람직하게는 아벨루맙은 서열식별번호: 1의 경쇄 서열 및 서열식별번호: 2의 중쇄 서열, 바람직하게는 그의 번역 후 변이체를 포함한다. 번역 후 변이체는 예를 들어, 탈아미드화된 변이체 및 중쇄의 C-말단 리신이 절단된 변이체를 포함한다.

"바이오시밀러"라는 용어 (동등 생물의약품으로도 공지)는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 통상의 기술자는 약물 물질이 아벨루맙의 바이오시밀러로 간주되는 때를 쉽게 이해할 것이다. 바이오시밀러는 이미 사용 승인을 받은 또 다른 생물 의약품 (참조 의약품으로도 공지)과 유사한 생물 의약품이다. 승인을 받고자 하는 바이오시밀러인 경우, 의약품은 참조 의약품과 유사하지만, 품질, 안전성 또는 효능면에 있어서 참조 의약품과 어떤 중요한 차이도 없다는 것이 제시되어야 한다. 생물의약품은 분자 복잡도가 높고, 일반적으로 제조 프로세스 변화에 감수성이기 때문에 (예컨대, 그의 제조에서 상이한 세포주가 사용되는 경우), 그리고, 이어서, 후속 제조자는 원 발명자의 분자 클론, 세포 은행, 발효 및 정제 프로세스와 관련된 노하우도, 활성 약물 물질 그 자체도 이용할 수 없는 바 (오직 혁신수용자의 상업화된 약물 제품만 이용가능), 어떤 "바이오시밀러"도 혁신수용자 약물 제품과 정확하게 동일할 수는 없다.

본원에서, "탈아미드화된 변이체"라는 용어는 적어도 하나의 위치에 탈아미드화를 갖는, 아벨루맙의 변이체를 의미한다. 탈아미드화 반응에서, Asn 또는 Gln의 측쇄 잔기로부터 아미드 기가 상실된다. 탈아미드화된 잔기의 전하가 중성에서 음으로 변화하였기 때문에, 탈아미드화 반응의 최종 생성물은 더 낮은 등전점 (pI)을 가진다. Asn 잔기의 탈아미드화가 Gln 잔기의 탈아미드화보다 훨씬 더 일반적이다. 아벨루맙에서 잔기의 탈아미드화에 기인하여 상기 변이체는 비변형 형태의 아벨루맙과 비교하였을 때, 상기 특정한 잔기의 서열에서 차이가 난다. 탈아미드화된 변이체의 비율은 전체 무손상 분자, 즉, 예컨대, LMW 종을 포함하지 않는, 상기 기술된 바와 같은 아벨루맙 대비 변이체의 비율에 관한 것이다.

본원에서, "산화된 변이체"라는 용어는 중쇄의 메티오닌 255에서 산화된 아벨루맙의 변이체를 지칭한다. 각 아벨루맙 분자는 2개의 중쇄를 가지며, 산화되지 않거나, 중쇄의 1 또는 2에서 산화될 수 있다. 산화된 변이체의 비율은 전체 HC Met255 잔기 대비 산화된 HC Met255 잔기의 비율을 지칭한다.

본원에서, "저분자량 종"이라는 용어는 무손상 분자보다 분자량이 낮은 것으로 검출된 상기의 모든 아벨루맙 종을 지칭한다.

본원에서, "제약상 허용되는 담체"라는 용어는 활성 성분의 생물학적 활성의 효과를 방해하지 않고, 전형적인 양으로 투여되었을 때, 환자에게 독성을 보이지 않는 하나 이상의 물질을 지칭한다. 상기 담체는 환자에게로의 활성 성분의 적용을 용이하게 하기 위해 첨가된다.

"치료하는" 또는 "치료"라고 언급하는 것은 병태의 확립된 증상을 완화시키는 것 뿐만 아니라 그의 예방도 포함한다. 그러므로, 상태, 장애, 또는 병태의 "치료하는" 또는 "치료"는 (1) 상태, 장애, 또는 병태를 앓을 수 있거나, 또는 그에 취약할 수 있지만, 아직은 상태, 장애, 또는 병태의 임상적 또는 준임상적 증상을 경험하지 않았거나, 또는 그를 보이지 않은 인간에서 상태, 장애, 또는 병태의 임상적 증상의 출현이 발생하는 것을 막거나, 또는 지연시키는 것, (2) 상태, 장애, 또는 병태를 억제시키는 것, 즉, 질환의 발생 또는 질환의 재발 (유지 치료인 경우), 또는 그의 적어도 하나의 임상적 또는 준임상적 증상을 정지, 감소, 또는 지연시키는 것, 또는 (3) 질환을 경감시키거나, 또는 약화시키는 것, 즉, 상태, 장애, 또는 병태 또는 그의 임상적 또는 준임상적 증상 중 적어도 하나를 퇴행시키는 것을 포함한다.

탈아미드화 수준이 상승된 조성물

본 발명은 소정 분율의 아벨루맙 분자가 탈아미드화된 것인 아벨루맙 조성물을 제공한다. 다시 말해, 본 발명의 아벨루맙 조성물의 아벨루맙 분자의 서브세트는 하나 이상의 위치에서, 바람직하게는 적어도 LC Asn33 및/또는 LC Asn55에서 탈아미드화된 것이다. 탈아미드화된 변이체의 양이 증가된 아벨루맙 조성물은 세포 표면 상에서의 PD-L1 결합에서의 증가와 상관관계가 있는 것으로 나타났다.

일부 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 2% 초과, 4% 초과, 6% 초과, 8% 초과, 10% 초과, 또는 12% 초과의 탈아미드화된 변이체를 가진다.

약 10-25% 범위로 탈아미드화된 변이체를 포함하는 아벨루맙 배치는 높은 세포 결합 활성 (비아코어(Biacore) 검정법에서 PD-L에의 높은 결합 친화도로 확인) 뿐만 아니라 아벨루맙의 제안되는 추가의 작용 모드인 높은 ADCC 활성도 제시한 것으로 나타났다. 상기 탈아미드화 범위 내에 있는 다중 배치를 임상 시험에서 시험하였고, 그를 이용한 치료는 안전하고, 효과적인 것으로 밝혀졌다. 이에 따라, 본 발명의 아벨루맙 조성물 중의 탈아미드화된 변이체의 범위는 2-50%, 4-40%, 6-30%, 8-30%, 10-25% 또는 12-20%일 수 있다.

임상 시험에서 사용된 아벨루맙 배치의 LMW 종 함량은 10% 미만이었다. 따라서, 본 발명의 조성물은 바람직하게는 15% 미만, 10% 미만, 8% 미만, 6% 또는 5% 미만의 LMW 종 함량을 가진다. 일부 실시양태에서, LMW 종 함량은 0.1-10%, 2-6% 또는 3-5% 범위이다. 시험된 배치 중 산화된 중쇄 메티오닌 (Met) 255를 포함하는 아벨루맙 변이체의 함량은 10% 미만이었다. 따라서, 본 발명의 조성물은 바람직하게는 15% 미만, 10% 미만, 8% 또는 6% 미만의, HC Met255에서 산화된 아벨루맙 변이체를 가진다. 일부 실시양태에서, HC Met255에서 산화된 아벨루맙 변이체의 함량은 0.1-10%, 1-8% 또는 3-6% 범위이다.

일부 실시양태에서, 아벨루맙 조성물은 8-25%의 탈아미드화된 변이체, 10% 미만의, 중쇄의 Met255에서 산화된 변이체 및 10% 미만의 LMW 종을 가진다. 상기 조성물은 높은 ADCC 수준, 뿐만 아니라 높은 세포 결합 활성을 갖는 것으로 나타났다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 아벨루맙 조성물은 20% 미만, 15% 미만, 10%, 또는 7.5% 미만의, 비-푸코실화된 아벨루맙 분자를 가진다.

본 발명의 조성물은 바람직하게는 그의 제조 후에 환자에게 투여될 때까지 12℃ 미만, 10℃ 미만, 또는 8℃ 미만에서 보관된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 그의 투여 시까지 2-8℃에서 보관된다.

HC Met255 산화 수준을 측정하는데 적합한 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다 (Bertolotti-Ciarlet et al., Mol Immunol. 2009 May;46(8-9):1878-82; Liu et al., Biochemistry. 2008 May 6;47(18):5088-100). 유사하게, 통상의 기술자는 또한 예컨대, 애질런트 프로테인 230 키트(Agilent Protein 230 KIT)와 함께 애질런트에 의한 2100 바이오어낼라이저 시스템(2100 Bioanalyzer System)과 같은 자동화된 SDS-PAGE를 이용하여 LMW 종의 양을 측정하는 방법, 뿐만 아니라 그를 제어하는 방법에 대해서도 잘 알고 있다. 항체의 글리코실화 패턴 측정은 또한 예컨대, 2AB 글리칸 맵핑 UPLC/HPLC와 같은 표준 관행이다.

탈아미드화 수준을 제어하는 방법은 일반적으로 공지되어 있다. 예를 들어, 제조하는 동안, 치료 단백질의 탈아미드화 수준은 세포 수거일 (Kaneko et al., J Biosci Bioeng. 2010 Mar;109(3):281-7), 세포 배양물 제조 단계 동안의 pH 및 온도 (Dengl et al., Pharm Res. 2013 May;30(5):1380-99) 및 세포 배양 배지 조정 (Hossler et al., Biotechnol Prog. 2015 Jul-Aug;31(4):1039-52; Bruehlmann et al., Biotechnol Prog. 2015 May-Jun;31(3):615-29)에 기초하여 제어될 수 있다. 제조 후에, 탈아미드화는 적절한 온도 및 항체 제제 선택을 비롯한, 적절한 보관 조건을 선택함으로써 제어될 수 있다 (Cleland et al., J Pharm Sci. 2001 Mar;90(3):310-21).

탈아미드화된 변이체의 분율을 검출하고 정량화하는 방법이 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다 (Gervais, J Chem Technol Biotechnol 2016;91:569-575; Vlasak and Ionescu, Curr Pharm Biotechnol. 2008 Dec;9(6):468-81).

전하 관련 변형, 예컨대, 탈아미드화는 일반적으로 이온 교환 (IEX) 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 또는 등전 포커싱 (IEF)을 사용하여 검출되지만, 이는 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 크로마토그래피 및 전기영동 기술을 사용하여 검출될 수도 있다. IEX-HPLC 및 IEF를 사용하여 확인된 산성 변이체가 실제로 관심 단백질의 탈아미드화된 변이체에 상응하는지 여부를 확인하기 위해, 예컨대, 액체 크로마토그래피 커플링된 MS (LC-MS) 및 탠덤 LC-MS/MS와 같이, IEX-HPLC 및 IEF는 질량 분석법 (MS) 기술과 추가로 커플링될 수 있다.

바람직한 이온 교환 크로마토그래피는 약한 양이온 이온 교환 (WCX) 크로마토그래피, 예컨대, 디오넥스 프로팩 WCX-10(Dionex ProPac WCX-10) (이는 또한 WCX-10으로 약칭)이다. WCX-10 칼럼은 친수성, 중성 중합체로 둘러싸여진 10 mm 비-다공성, 용매 상용성 에틸비닐벤젠디비닐벤젠 공중합체 비드로 구성된 정지상을 가진다. 비드의 표면은 카르복실산 잔기와 그라프트되어 있다.

본 발명에 따라, 하기 약한 양이온 이온 교환 크로마토그래피 방법에 의해 탈아미드화된 변이체의 비율을 측정할 수 있다:

먼저, 샘플을 이동상 A (20 mM 트리스-HCl, pH 5±0.1)를 이용하여 아벨루맙 항체 농도가 5 mg/ml가 되도록 희석시킨다. 희석된 샘플을 5% (v/v) 카르복시펩티다제 B로 전처리한다. 수득된 용액을 오토샘플러로 옮겨 놓고, 최대 72시간 동안 5 ± 3℃에서 냉장 보관할 수 있다. 이어서, 상기 샘플에 WCX-HPLC를 적용시킨다. 예를 들어, 하기 표 1의 조건이 적용될 수 있다:

본 방법을 사용하여 수득된 전형적인 크로마토그램은 도 3 내지 5에 제시되어 있다.

산성 피크는 주요 피크 전에 용리된다. 펩티드 맵핑/MS에 의해 확인된 바, Rt = 6.0 min 내지 Rt = 22.0-23.0 min 범위의 산성 피크는 주로 아벨루맙의 탈아미드화된 변이체에 관한 것이다. 피크하 총 면적과 비교 시 상기 피크하 면적의 비율은 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 분율에 상응한다. 통상의 기술자가 쉽게 이해하는 바와 같이, 피크하 총 면적은 블랭크 샘플을 전개시켰을 때 관찰되는 비-단백질 관련 피크를 배제시킨다 (이들 피크는 크로마토그램에서 약 Rt = 1.0 min 내지 약 Rt = 4.0 min에서 용리된다).

상기 내용에 따라, 본 발명은 또한 하기 실시양태를 나타낸다:

1. 아벨루맙을 포함하는 조성물로서, 여기서 산성 종 피크가 조성물의 WCX-HPLC 크로마토그램에서 체류 시간 약 6.0분 내지 체류 시간 약 22.0-23.0분에서 용리되고,

여기서 크로마토그램 샘플이 카르복시펩티다제 B로 전처리되고,

여기서 WCX-HPLC 크로마토그램이 20 mM 트리스-HCl, pH 5±0.1로 이루어진 제1 이동상, 및 20 mM 트리스, 60 mM NaCl, pH 10.1±0.1로 이루어진 제2 이동상을 이용하여 생성되고,

여기서 WCX-HPLC 크로마토그램이 230 nm에서의 검출을 사용하여 생성되는 것인

조성물.

2. 제1항에 있어서, 상기 산성 종 피크의 곡선하 면적이 크로마토그램의 곡선하 총 면적의 2% 초과, 4% 초과, 6% 초과, 8% 초과, 10% 초과 또는 12% 초과인 조성물.

3. 제1항에 있어서, 상기 산성 종 피크의 곡선하 면적이 크로마토그램의 곡선하 총 면적의 2-50%, 4-40%, 6-30%, 8-30%, 10-25% 또는 12-20%인 조성물.

4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 크로마토그래피가 표 1에 상세히 설명된 조건 하에 수행되는 것인 조성물.

5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 크로마토그램의 곡선하 총 면적이 체류 시간 약 6.0분 내지 체류 시간 약 41.0-42.0분에서 용리되는 피크에 상응하는 것인 조성물.

6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, WCX 칼럼의 정지상이 친수성, 중성 중합체로 둘러싸여진 10 mm 비-다공성, 용매 상용성 에틸비닐벤젠디비닐벤젠 공중합체 비드로 구성되며, 여기서 표면은 카르복실산 잔기와 그라프트되어 있는 것인 조성물.

7. 제6항에 있어서, WCX 칼럼이 WCX-10 칼럼인 조성물.

8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이, 상기 산성 종 피크의 양이 상기 범위를 벗어난 것인 아벨루맙을 포함하는 조성물과 비교 시, 세포 표면 상에서의 증가된 PD-L1 결합 활성, 증가된 ADCC 및/또는 증가된 치료 효능 중 어느 하나, 또는 그의 조합을 나타내는 것인 조성물.

9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 10% 미만, 바람직하게는 8% 미만, 보다 바람직하게는 6% 미만의 LMW 종 함량을 갖는 것인 조성물.

10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, HC Met255에서 산화된 아벨루맙 변이체의 비율이 10% 미만, 바람직하게는 8% 미만, 보다 바람직하게는 6% 미만인 조성물.

11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 산성 종 피크의 곡선하 면적이 크로마토그램의 곡선하 총 면적의 8-25%이고,

조성물이 0.1-10% 범위 내의 LMW 종 함량을 가지고;

HC Met255에서 산화된 아벨루맙 변이체의 비율이 0.1-10% 범위 내에 있는 것인

조성물.

12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 20% 미만, 바람직하게는 15% 미만, 보다 바람직하게는 10% 미만, 가장 바람직하게는 7.5% 미만의 아벨루맙 분자가 비-푸코실화된 것인 조성물.

13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 20% 미만, 바람직하게는 10% 미만, 보다 바람직하게는 5% 미만, 가장 바람직하게는 3% 미만의 아벨루맙 분자가 5개 이상의 만노스 잔기를 포함하는 고 만노스 N-글리칸을 갖는 것인 조성물.

14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 조성물을 제조 후에 환자에게 투여할 때까지 12℃ 미만, 바람직하게는 10℃ 미만, 보다 바람직하게는 8℃ 미만에서 보관하는 것인, 보관 방법.

또한, 특정 부위의 탈아미드화의 양을 정량적으로 측정할 수 있고, 이로써, 조성물 중 탈아미드화된 변이체의 최소 분율을 측정할 수 있다. 단일 잔기의 탈아미드화는 예를 들어, 펩티드 맵핑/MS에 의해 정량화할 수 있다. 특히 탈아미드화되기 쉬운 아스파라긴 부위로는 LC Asn33, LC Asn173/174, HC Asn318 및 HC Asn387/392/393을 포함한다.

펩티드 맵핑/MS에 기초하여, CDR 영역의 LC Asn33, 및 가능하게는 LC Asn55도 탈아미드화되기 쉬운 것으로 나타났다. 그러므로, 두 잔기는 전체 탈아미드화 수준과 세포 결합 활성 사이에 관찰되는 상관관계의 원인이 될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 하기 실시양태를 나타낸다:

1. 아벨루맙을 포함하는 조성물로서, 여기서 소정 분율의 아벨루맙 분자가 경쇄의 Asn33에서 탈아미드화된 것인 조성물.

2. 제1항에 있어서, 경쇄의 Asn33에서 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 0.5% 초과, 1% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 또는 4% 초과인 조성물.

3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 경쇄의 Asn33에서 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 0.1-20% 범위 내에, 0.5-15% 범위 내에, 1-10% 범위 내에, 2-8% 범위 내에, 또는 3-7% 범위 내에 있는 것인 조성물.

4. 아벨루맙을 포함하는 조성물로서, 여기서 소정 분율의 아벨루맙 분자가 경쇄의 Asn55에서 탈아미드화된 것인 조성물.

5. 제4항에 있어서, 경쇄의 Asn55에서 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 0.01% 초과, 0.05%, 또는 0.075% 초과인 조성물.

6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 경쇄의 Asn55에서 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 0.01-2% 범위 내에, 0.05-1% 범위 내에, 또는 0.075-0.5% 범위 내에 있는 것인 조성물.

7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 소정 분율의 아벨루맙 분자가 경쇄의 Asn33에서 탈아미드화된 것이고, 소정 분율의 아벨루맙 분자가 경쇄의 Asn55에서 탈아미드화된 것인 조성물.

8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이, 경쇄 Asn33 탈아미드화를 포함하는 아벨루맙 변이체의 양이 상기 범위를 벗어난 것인 아벨루맙을 포함하는 조성물과 비교 시, 세포 표면 상에서의 증가된 PD-L1 결합 활성, 증가된 ADCC 및/또는 증가된 치료 효능 중 어느 하나, 또는 그의 조합을 나타내는 것인 조성물.

11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄의 Asn33에서 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 1-10% 범위 내에 있고,

조성물이 0.1-10% 범위 내의 LMW 종 함량을 가지고;

조성물.

14. 중쇄 서열로서 서열식별번호: 2 및 경쇄 서열로서 서열식별번호: 1을 포함하며, 여기서 서열식별번호: 1의 Asn33 및/또는 Asn55가 탈아미드화된 것인 항체.

15. 제14항에 있어서, 서열식별번호: 1의 Asn33 및/또는 Asn55가 아스파르테이트 또는 이소아스파르테이트로 전환된 것인 항체.

16. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 조성물, 또는 제14항 또는 제15항의 항체를 포함하는 조성물을 제조 후에 환자에게 투여할 때까지 12℃ 미만, 바람직하게는 10℃ 미만, 보다 바람직하게는 8℃ 미만에서 보관하는 것인, 보관 방법.

탈아미드화된 조성물의 용도 및 치료 방법

본 발명의 아벨루맙 조성물은 PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용이 유해한 장애를 치료하는데 적합하다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 상기 기술된 바와 같은 아벨루맙 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.

한 실시양태에서, 치료하고자 하는 암은 비소세포 폐암, 요로상피 암종, 방광암, 중피종, 메르켈 세포 암종, 위암 또는 위식도 접합부 암, 난소암, 유방암, 흉선종, 위 선암종, 부신피질 암종, 두경부 편평 세포 암종, 신세포 암종, 흑색종, 및/또는 전형적 호지킨 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 수송을 위한 아벨루맙 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다:

(a) 아벨루맙을 포함하는 복수의 조성물을 제조하는 단계;

(b) 아벨루맙을 포함하는 조성물을 시험하여 본 발명의 조성물에 상응하는 조성물을 확인하는 단계; 및

(c) 본 발명의 조성물을 수송을 위한 멸균 용기 내로 도입하는 단계.

수송을 위한 멸균 용기는 바이알, 시린지, 앰플, 및 백으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 조성물을 제조 후에 환자에게 투여할 때까지 12℃ 미만, 바람직하게는 10℃ 미만, 보다 바람직하게는 8℃ 미만에서 보관하는 것인, 보관 방법에 관한 것이다.

탈아미드화된 조성물을 포함하는 제약 제제

본 발명은 또한 상기 탈아미드화된 아벨루맙 조성물을 포함하는 제약 제제를 제공한다. 상기 제제는 바람직하게는 제약상 허용되는 담체를 또한 포함한다.

적합하게, 제약 제제는 액체 제제 또는 재구성된 액체 제제이다. 다른 실시양태에서, 제약 제제는 동결건조된 생성물로서 존재한다.

제약 제제 중 아벨루맙 항체의 농도는 적어도 1 mg/ml, 적어도 5 mg/ml, 적어도 10 mg/ml, 적어도 20 mg/ml, 적어도 50 mg/ml 또는 적어도 100 mg/ml일 수 있다. 일부 실시양태에서, 아벨루맙 항체의 농도는 1 mg/ml 내지 100 mg/ml, 5 mg/ml 내지 50 mg/ml, 10 mg/ml 내지 30 mg/ml 또는 15 mg/ml 내지 25 mg/ml이다. 바람직하게는 아벨루맙 항체의 농도는 약 20 mg/ml이다.

한 실시양태에서, 본 발명의 탈아미드화된 조성물은 51 mg/ml D-만닛톨, 0.6 mg/ml 빙초산 (100%), 0.3 mg/ml 수산화나트륨 및 0.5 mg/ml 폴리소르베이트 20 중에서 제제화된 20 mg/ml 아벨루맙 항체를 함유한다.

제약 제제는 컨테이너, 예컨대, 바이알에 패키징될 수 있다.

탈아미드화된 조성물을 포함하는 키트

본 발명은 바람직하게는 탈아미드화된 아벨루맙 조성물의 제제로 충전된 컨테이너에 탈아미드화된 아벨루맙 조성물을 포함하는 키트를 추가로 제공한다.

상기 키트는 적합하게 탈아미드화된 아벨루맙 조성물의 사용 지침서를 포함한다. 추가로, 키트는 추가의 치료 시약, 예컨대, 다른 항체 또는 소분자 항암 약물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 탈아미드화된 아벨루맙 조성물은 시클로포스파미드, 젬시타빈(Gemcitabine), 스티무백스(Stimuvax), 또는 FOLFOX 화학요법의 코어 성분과 함께 키트에 포함될 수 있다.

실시예

실시예 1: 아벨루맙 조성물 중 탈아미드화된 변이체를 정량화하는 방법

50 μL의 아벨루맙 샘플 (20 mg/mL 아벨루맙 항체, 51 mg/mL D-만닛톨, 0.6 mg/mL 빙초산, 0.3 mg/mL NaOH, 0.5 mg/mL 폴리소르베이트 20으로 이루어진 수성 제제)을 150 μL 이동상 A (20 mM 트리스-HCl, pH 5±0.1)로 희석하였다. 10 μL의 카르복시펩티다제 B (np카르복시x펩티다제 B(npCarboxyxpeptidase B), 주문 코드 2500, ASA 스페지알렌자임 게엠베하(ASA Spezialenzyme GmbH))를 첨가하고, 냉장 오토샘플러 (5℃ ± 3℃)로 옮겨 놓았다.

50 μL의 전처리된 샘플을 하기 표 1에 기술된 조건 하에 IEX-HPLC 내로 주입하였다.

피크하 총 면적과 비교 시, 탈아미드화된 변이체에 상응하는 피크 (Rt = 6.0 min 내지 Rt = 22.0-23.0 min)의 피크하 면적에 기초하여 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 분율을 산출하였다.

실시예 2: 아벨루맙의 세포 결합 활성을 정량화하는 방법

재조합 HEK-293 (hPD-L1) 세포주 상에서 과다발현된 인간 PD-L1 수용체에 결합할 수 있는 아벨루맙의 능력을 측정할 수 있는 세포 기반 검정법을 통해 아벨루맙의 생물학적 활성을 평가하였다. 이를 위해, 시험하고자 하는 아벨루맙 조성물의 아벨루맙 항체를 와동시키면서 실온에서 30분 동안 단백질 A 코팅된 96 웰 플레이트에 결합할 수 있도록 하였다. 이어서, 항-PD-L1 항체 코팅된 플레이트의 웰당 50,000개의 HEK-293 (hPD-L1) 세포를 첨가하고, 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 항-PD-L1 항체에 결합할 수 있도록 하였다. 비결합 세포를 세척하여 제거하고, ATP라이트 1스텝(ATPlite 1step) (퍼킨 엘머(Perkin Elmer))에 의해 각 웰 중의 결합된 세포의 존재를 확인하였다. 이어서, 1초당 계수를 Log 변환된 항-PDL-1 항체 농도에 대해 플로팅하고, 4PL (S자형 용량 반응 곡선)에 의해 피팅하였다. 각 데이터 세트에 대해, 최대 가능 PDL-1 결합능의 50%로 결합할 수 있는 항-PDL-1 항체의 농도 (EC50)를 산출한다. 샘플의 생물학적 활성을 참조 물질 대비 활성 %로 표시하고, 효력비를 백분율로 표현한 식 (즉, 표준 및 미지 제제의 동등효력 용량의 EC50 비)이다. 효력은 3회의 독립 검정법으로부터 얻은 평균 결과로 발표된다.

실시예 3: 인공적으로 탈아미드화된 아벨루맙 샘플의 생물학적 활성

탈아미드화 수준이 상이한 아벨루맙 샘플의 생물학적 활성을 시험하였다. 샘플을 가혹 조건 (50℃에서 인큐베이션) 또는 가속 조건 (25℃에서 인큐베이션) 하에 처리하여 샘플을 인공적으로 탈아미드화시켰다. 비처리 샘플을 참조 물질로서 사용하였다.

이어서, 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율을 실시예 1에 개요된 방법에 따라 측정하였고, 생물학적 활성 수준을 실시예 2에 개요된 방법에 따라 측정하였다.

결과는 하기와 같았다:

탈아미드화된 변이체의 비율을 세포 결합 활성에 대해 플로팅하였고, 그들 사이에는 0.0014인 P 값으로 유의한 상관관계가 존재하였다 (도 6).

실시예 4: 인공적으로 탈아미드화된 아벨루맙 샘플의 생물학적 활성

또한, 또 다른 실험 세트에서 탈아미드화 수준이 상이한 아벨루맙 샘플의 생물학적 활성을 시험하였다. 샘플을 가속 조건 (25℃에서 인큐베이션) 하에 처리하여 샘플을 인공적으로 탈아미드화시켰다. 비처리 샘플을 참조 물질로서 사용하였다.

결과는 하기와 같았다:

탈아미드화된 변이체의 비율을 세포 결합 활성에 대해 플로팅하였고, 그들 사이에는 0.0220인 P 값으로 유의한 상관관계가 존재하였다 (도 7).

실시예 5: 인공적으로 탈아미드화된 아벨루맙 샘플의 생물학적 활성

pH 9의 중탄산암모늄 용액으로 완충제를 교환한 후, 아벨루맙 샘플을 실온에서 4일 동안 보관하여 아벨루맙 샘플을 인공적으로 탈아미드화시켰다. 비처리 샘플을 참조 물질로서 사용하였다.

결과는 하기와 같았다:

실시예 6: 아벨루맙 탈아미드화 돌연변이체의 생물학적 활성

각 부위의 탈아미드화를 모방하기 위해 아벨루맙 경쇄의 33번 또는 55번 위치의 아스파라긴을 아스파르테이트로 돌연변시켰다다. 발현된 단백질의 생물학적 활성을 실시예 2에 개요된 방법에 따라 측정하였다. 비-돌연변이된 아벨루맙을 참조 물질로서 사용하였다.

결과는 하기와 같았다:

SEQUENCE LISTING <110> Merck Patent GmbH <120> COMPOSITION COMPRISING AVELUMAB <130> P 17/042 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> from human Fab library <220> <221> CHAIN <222> (1)..(216) <223> A09-246-2 complete light chain <220> <221> CHAIN <222> (1)..(22) <223> A09-246-2 light chain framework region 1 <220> <221> CHAIN <222> (1)..(110) <223> A09-246-2 light chain variable region <220> <221> BINDING <222> (23)..(36) <223> A09-246-2 light chain complementarity determining region 1 <220> <221> CHAIN <222> (37)..(51) <223> A09-246-2 light chain framework region 2 <220> <221> BINDING <222> (52)..(58) <223> A09-246-2 light chain complementarity determining region 2 <220> <221> CHAIN <222> (59)..(90) <223> A09-246-2 light chain framework region 3 <220> <221> BINDING <222> (91)..(100) <223> A09-246-2 light chain complementarity determining region 3 <220> <221> CHAIN <222> (101)..(110) <223> A09-246-2 light chain framework region 4 <220> <221> CHAIN <222> (111)..(216) <223> A09-246-2 light chain constant domain <400> 1 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 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Claims

아벨루맙을 포함하는 조성물로서, 여기서 소정 분율의 아벨루맙 분자가 탈아미드화된 것인 조성물.
제1항에 있어서, 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 6% 초과, 바람직하게는 8% 초과인 조성물.
제2항에 있어서, 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 6-30% 범위 내에, 바람직하게는 8-25% 범위 내에 있는 것인 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이, 탈아미드화된 변이체의 양이 상기 범위를 벗어난 것인 아벨루맙을 포함하는 조성물과 비교 시, 세포 표면 상에서의 증가된 PD-L1 결합 활성, 증가된 ADCC 및/또는 증가된 치료 효능 중 어느 하나, 또는 그의 조합을 나타내는 것인 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 10% 미만, 바람직하게는 8% 미만, 보다 바람직하게는 6% 미만의 LMW 종 함량을 갖는 것인 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, HC Met255에서 산화된 아벨루맙 변이체의 비율이 10% 미만, 바람직하게는 8% 미만, 보다 바람직하게는 6% 미만인 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 탈아미드화된 아벨루맙 변이체의 비율이 8-25% 범위 내에 있고,
조성물이 0.1-10% 범위 내의 LMW 종 함량을 가지고;
HC Met255에서 산화된 아벨루맙 변이체의 비율이 0.1-10% 범위 내에 있는 것인
조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 20% 미만, 바람직하게는 15% 미만, 보다 바람직하게는 10% 미만, 가장 바람직하게는 7.5% 미만의 아벨루맙 분자가 비-푸코실화된 것인 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 20% 미만, 바람직하게는 10% 미만, 보다 바람직하게는 5% 미만, 가장 바람직하게는 3% 미만의 아벨루맙 분자가 5개 이상의 만노스 잔기를 포함하는 고 만노스 N-글리칸을 갖는 것인 조성물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 조성물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용이 유해한 장애의 치료에서 사용하기 위한 조성물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 암 치료에서 사용하기 위한 조성물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법.
제12항 또는 제13항에 있어서, 암이 비소세포 폐암, 요로상피 암종, 방광암, 중피종, 메르켈 세포 암종, 위암 또는 위식도 접합부 암, 난소암, 유방암, 흉선종, 위 선암종, 부신피질 암종, 두경부 편평 세포 암종, 신세포 암종, 흑색종, 및/또는 전형적 호지킨 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 사용하기 위한 조성물 또는 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 조성물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
제15항에 따른 제약 조성물 및 사용 지침서를 포함하는 키트.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 조성물, 제15항에 따른 제약 조성물, 또는 제16항에 따른 키트를 제조 후에 환자에게 투여할 때까지 12℃ 미만, 바람직하게는 10℃ 미만, 보다 바람직하게는 8℃ 미만에서 보관하는 것인, 보관 방법.
하기 단계를 포함하는, 수송을 위한 아벨루맙 조성물을 제조하는 방법:
(a) 아벨루맙을 포함하는 복수의 조성물을 제조하는 단계;
(b) 아벨루맙을 포함하는 조성물을 시험하여 6% 초과, 바람직하게는 8% 초과의 아벨루맙이 탈아미드화된 것인 조성물을 확인하는 단계; 및
(c) 6% 초과, 바람직하게는 8% 초과의 아벨루맙이 탈아미드화된 것으로 확인된 조성물을 수송을 위한 멸균 용기 내로 도입하는 단계.
하기 단계를 포함하는, 수송을 위한 아벨루맙 조성물을 제조하는 방법:
(a) 아벨루맙을 포함하는 복수의 조성물을 제조하는 단계;
(b) 아벨루맙을 포함하는 조성물을 시험하여 6-30%, 바람직하게는 8-25%의 아벨루맙이 탈아미드화된 것인 조성물을 확인하는 단계; 및
(c) 6-30%, 바람직하게는 8-25%의 아벨루맙이 탈아미드화된 것으로 확인된 조성물을 수송을 위한 멸균 용기 내로 도입하는 단계.
제18항 또는 제19항에 있어서, 멸균 용기가 바이알, 시린지, 앰플, 및 백으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
중쇄 서열로서 서열식별번호: 2 및 경쇄 서열로서 서열식별번호: 1을 포함하며, 여기서 서열식별번호: 1의 Asn33 및/또는 Asn55가 탈아미드화된 것인 항체.
제21항에 있어서, 중쇄 서열로서 서열식별번호: 2 및 경쇄 서열로서 서열식별번호: 1로 이루어지며, 여기서 서열식별번호: 1의 Asn33 및/또는 Asn55가 탈아미드화된 것인 항체.