KR20190111116A - 암의 치료 - Google Patents

Abstract

COH29((N-(4-(3,4-디하이드록시페닐)-5-페닐티아졸-2-일)-3,4-디하이드록시벤즈아미드))를 투여함으로써 피험체에서 암을 치료하는 방법이 특히 본원에 제공된다.

Description

암의 치료

관련 출원에 대한 상호참조

본 출원은 2017년 2월 6일에 출원된 미국 가출원 제62/455,430호 및 2017년 5월 26일에 출원된 미국 가출원 제62/511,747호의 우선권을 주장하며, 이들은 그 전체가 참조로 본원에 포함되어 있다.

2018년 2월 5일에 1,097 바이트로 기계 형식 IBM-PC, MS-윈도우 운영 체제에서 생성된 파일 048440-648001WO.TXT로 기록된 서열 목록은 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 본원에 포함되어 있다.

항대사물질 약물 하이드록시우레아(HU)는 만성 골수성 백혈병, 두경부암 등을 포함하는 다양한 인간 암을 치료하는데 사용되어 왔다(1). 그의 일차 항암 표적은 리보뉴클레오타이드를 그의 상응하는 데옥시 형태로 환원하여 DNA 복제 및 복구를 위한 dNTP를 공급하는 리보뉴클레오타이드 환원효소(RR)이다(3,4). 인간 RR은 hRRM1 및 hRRM2 서브유닛으로 구성된다(3,4). 유전독성 자극 후, DNA 복구를 위한 dNTP를 공급하기 위해 hRRM1 및 p53R2(종양 억제 단백질 p53에 의해 전사활성화된 hRRM2의 동족체)로 구성된 대체 RR 효소가 유도된다(5). 세포 내에서, HU는 자유 라디칼 매개 촉매 작용을 소멸시키는(3) 산화 변환을 통한 자유라디칼 생성을 통해(6) 두 가지 유형의 RR을 억제하는 것으로 알려져 있다(4). 그러나, 약리학적으로, HU 요법은 짧은 생체내 반감기와 문제가 있는 부작용, 특히 골수억제, 및 위장 및 피부과학적 영향을 겪는다(7).

폴리(ADP-리보스) 중합효소-1(PARP1) 및 PARP2 모두는 종양 발달에서 역할을 하는 ADP-리보실 트랜스퍼라아제(ART)이다. PARP1과 같은 PARP 활성을 갖는 ART 구성원은 고도로 보존된 활성 부위 서열을 갖는 보존된 촉매 도메인을 함유한다(12-14). 단일 가닥 DNA 파괴 후, PARP1은 β-NAD+ 기질로부터 ADP-리보스 중합체를 합성하고, 이들을 수용체 단백질(자체 또는 다른 단백질)의 글루타메이트, 리신 또는 아스파테이트 잔기로 옮기고, 이는 이후에 폴리(ADP-리보스) 글리코하이드롤라제(PARG)에 의해 분해된다. 단일 가닥 DNA 파손 복구(single strand DNA break repair, SSBR) 또는 염기 절단 복구(base-excision repair, BER) 동안, PARP1 및 PARP2는 X선 복구 보완 단백질-1(XRCC1)과 상호작용하여 SSBR/BER 인자, DNA 중합효소 β 또는 DNA 리가아제 III을 DNA 손상 부위로 모집한다(12-14). PARP1이 없으면, DNA 복제 동안 단일 가닥 파괴의 계속적인 존재가 복제 분기점 정지(stalled replication fork)를 야기하며, 이의 분리(resolution)는 BRCA1 또는 BRCA2 매개 상동 복구(HR)를 필요로 한다(15,16). BRCA2와 함께 BRCA1은 가족성 유방암의 발병과 연관된 종양 억제 유전자이다(11). BRCA1의 부재하에, 결과적으로 이중 가닥 파괴가 축적되어 세포자멸사를 통해 세포 사멸을 초래한다. BRCA1/2 결함 종양은 PARP1 억제제에 민감할 수 있지만 PARP1 억제제에 대해 획득된 내성으로 고통받을 수 있다. 따라서, 현재 요법과 관련된 부작용 및/또는 획득된 내성을 피하는 BRCA1/2-결함 종양 치료법이 당업계에 필요하다. 따라서, 당업계의 이러한 문제들과 다른 문제들에 대한 해결책이 본원에 제공된다.

일 양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 피험체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 방법은 하기 구조를 갖는 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하며:

,

유효량은 투여일당 적어도 약 50 mg이다.

또 다른 양태에서, 약학적으로 허용되는 부형제 및 하기 구조를 갖는 화합물을 포함하는 약학 조성물로서:

,

화합물은 약 50 mg 내지 약 1000 mg의 양으로 존재하는 것인 약학 조성물이 제공된다.

또 다른 양태에서, 본원에 개시된 약학 조성물을 21일 동안 매일 분배한 후, 7일 동안 약학 조성물을 투여하지 않도록 구성된 분배 장치를 포함하는 키트가 제공된다.

도 1A-1C. BRCA1 상태는 COH29 세포독성 및 항종양 활성에 영향을 미친다: 도 1A: 72시간 동안 COH29와 함께 배양되고 용해된(세포 생존력이 MTT 분석에 의해 평가되었음) wt(야생형) BRCA1(OV90) 또는 돌연변이체 BRCA1(UWB1.289)을 발현하는 난소암 세포에 대한 용량 반응 곡선, 및 도시된 점은 오차 막대가 표시된 3개의 독립적인 실험의 평균을 나타냄; 암컷 NSG 마우스의 유선 지방체(mammary fat pad)에서 HCC1937(도 1B) 및 HCC1937+BRCA1(도 1C) 세포로 확립된 종양 외식편의 성장(마우스를 표시한 바와 같이 COH29 또는 비히클로 처리하였고, 결과는 그룹당 4마리 마우스의 종양 측정값의 평균 ± 표준 오차임).
도 2A-2B. 환자 코호트에서 RRM2 발현과 PARP1과의 상관관계. 유방암(도 2A) 및 난소암(도 2B)에서 임상 결과의 공개 데이터베이스로부터 추출된 RRM2의 발현 및 PARP1의 회귀 플롯.
도 3A-3B. COH29는 BRCA1 결함 인간 유방암 세포에서 PARP1을 억제한다. (도 3A): 돌연변이체 또는 wt BRCA1(각각의 경우 wt = +BRCA1)을 발현하는 유방(HCC1937) 및 난소(UWB1.289) 암 세포주의 동질유전자(isogenic) 쌍에서 PARP1 활성에 대한 COH29의 효과를 물질 및 방법에 기재된 절차를 사용하여 반복 평가하였고; 도 3B: 동종 HCC1937 / HCC1937+BRCA1 세포주에서 PARP1 단백질 발현에 대한 COH29의 효과를 일차 항체로서 항-인간 PARP1 항체를 사용한 웨스턴 블롯 분석에 의해 평가하였다. 로딩 대조군은 β-액틴이다.
도 4A-4B. COH29 및 시스플라틴으로 이중 처리 후 세포 생존가능성에 대한 BRCA1의 효과. 도 4A: MTT 분석에 의해 평가된 24시간 동안 고정된 농도의 COH29(12.5 μM) 및 시스플라틴(12.5, 25, 50 및 100 μM)으로 처리된 HCC1937 및 HCC1937+BRCA1 세포의 생존력(도시된 점은 오차 막대가 표시된 3개의 독립적인 실험의 평균을 나타냄); 도 4B: 5　μM COH29 단독, 4　μM 시스플라틴 단독, 또는 동일한 농도의 2개의 약물의 조합의 존재하에 표시된 세포에서의 24시간 생존력의 막대 그래프(3개의 독립적인 실험의 평균이 나타나 있음).
도 5A-5D. 제브라피쉬 유전독성 분석에서 HU와 비교된 COH29의 효과. 도 5A: 표시된 바와 같이 HU에 노출된 4 dpf(수정후 일)에서의 야생형 제브라피쉬 배아(눈 및 심장 발달에서의 형태학적 변화가 화살촉에 의해 표시됨). 도 5B: 제브라피쉬에 대한 일련의 상이한 농도의 HU의 효과의 막대 그래프(0, 5, 10, 20, 50 mM, n = 50, 3 반복으로 수행됨). 도 5C: 표시된 바와 같이 COH29에 노출된 4 dpf에서의 야생형 제브라피쉬 배아. 도 5D: 제브라피쉬에 대한 일련의 상이한 농도의 COH29의 효과의 막대 그래프(0, 10, 20, 50, 100 μM, n = 46, 3 반복으로 수행됨).
도 6. COH29 처리는 DNA 손상 체크포인트를 활성화시킨다. 웨스턴 블롯에 의해 평가된 wt p53을 발현하는 인간 유방암 세포(MCF-7) 또는 p53에 결함이 있는 인간 유방암 세포(MCF-7 p53-/-), 및 3중 음성 유방암 세포(MDA-MB-468)에서 DNA 손상 체크포인트 단백질에 대한 COH29 처리의 효과.
도 7A-7D. COH29는 BRCA1 야생형 인간 폐암 세포에서 DDR을 활성화시키고 RAD51 발현을 억제한다. 도 7A: DDR 관련 단백질에 대한 COH29의 효과를 웨스턴 블롯 분석에 의해 세포질 및 핵에서 평가하였고, 여기서 세포를 48시간 동안 표시된 용량으로 COH29로 처리하였고, 세포 용해물을 표시된 항체를 사용하여 면역블롯팅하였다(FOXO3 활성은 그의 하류 표적 p27Kip1 및 β-튜불린의 수준에 의해 표시되며, 라민 A/C는 세포질 및 핵 추출물의 분획화 및 로딩 대조군을 나타냄); 도 7B-7D: 핵에서 DDR 관련 단백질, 포스포-ATM(도 7B), γ-H2AX(도 7C), 및 포스포-p53(도 7D) 및 foxo3의 공존에 대한 COH29의 효과를 간접 면역형광 분석에 의해 평가하였다. 각각의 단백질에 대해, 평균 300개의 염색된 세포를 분석하였고, 막대 그래프는 양성 핵(≥5 초점)을 갖는 세포의 백분율(%)을 나타내며, 여기서 생물학적 복제물의 수는 3개이고, 오차 막대는 표준 편차(SD)를 나타내며, P 값(쌍체 t-검정)은 표시된 바와 같다.
도 8A-8B. NHEJ DNA 복구에 대한 COH29 효과. 약물에 세포를 24시간 노출 후 EJ2(도 8A)(대체 NHEJ 경로) 또는 EJ5(도 8B)(NHEJ 경로) 세포의 FACS 분석에 의해 평가된, 나타낸 용량에서 COH29 단독, 또는 시스플라틴과 조합된 COH29의 활성.
도 9A-9B. COH29는 인간 폐암 세포에서 RAD51을 억제한다. 도 9A: RAD51 단백질에 대한 COH29의 효과를 일차 항체로서 항-인간 RAD51 항체를 사용한 간접 면역형광 분석에 의해 평가하였다. 도 9B: RAD51 단백질에 대한 COH29의 효과를 분석을 위해 일차 항체로서 항-인간 RAD51 항체를 사용한 웨스턴 블롯 분석에 의해 평가하였고(로딩 대조군은 β-액틴이었음); A549 폐암 세포를 24시간 동안 지시된 용량의 COH29로 처리하고, COH-29 처리 후 γ-H2AX의 발현 패턴을 또한 도 9A 및 9B에서 유사하게 분석하였다.
도 10은 리보뉴클레오타이드 환원효소(RR)의 M2 서브유닛의 표면 상의 포켓에 결합하는 COH29의 능력을 도시한다.
도 11A-11B는 72시간 독성 분석에서 젬시타빈(KB-Gem)(도 11A) 및 하이드록시우레아(KBHUR)(도 11B) 내성 세포주에서 COH29의 활성을 도시한다. 하이드록시우레아(농도 2-50 mmol/L), 젬시타빈(농도 20-500 μmol/L), 및 COH29(농도 2-250 μmol/L)을 COH29에 대한 하이드록시우레아 내성 또는 젬시타빈 내성 세포의 72시간 생존력의 비교에 기초하여, 각각 KBHUR 및 젬시타빈에 대한 실시간 성장 곡선에 사용하였다.
도 12A-12D는 마우스 이종이식편에서의 COH29의 활성을 도시한다. 암 세포를 이식하고, 종양이 측정될 때까지 피하 부위에서 성장시켰다. 50 및 100 mg/kg의 매일 2회 투여로 경구 COH29로 12일 동안 처리된 백혈병-(MOLT-4) 마우스에 대한 피하 이종이식편 성장 곡선(도 12A) 및 200, 300, 또는 400 mg/kg의 경구 COH29로 7일 동안 처리된 난소암을 갖는 마우스(TOV112D)에 대한 피하 이종이식편 성장 곡선(도 12B)(4마리 동물/그룹에 대한 평균 ± SD가 나타나 있음). 도 12C는 12일 동안 비히클(solutol-15) 또는 100 mg/kg의 경구 COH29로 처리된 마우스의 MOLT-4 종양 이종이식편에서의 RNR의 활성을 도시한다. 도 12D는 MOLT-4 종양 이종이식편으로부터의 종양내 dTNP 풀(pool)에 대한 경구 COH29의 효과를 도시한다.
도 13A-13B는 시험관내에서 HCC1937 BRCA1 결핍 및 HCC1937 BRCA1 야생형 유방암 세포(도 13A) 및 마우스 유선 지방체 동소이식 종양 이종이식편(도 13B)에서의 COH29의 효과를 도시한다.
도 14는 COH29의 임상 프로토콜의 실험 설계 계획을 도시한다. COH29는 21일 동안 용량 수준에 따라 매일 1회 또는 2회 경구 투여된다. PK 샘플링의 시간 과정은 사이클 1의 첫 번째 용량 전에 시작한 다음, 첫 번째 COH29 용량 후 15분, 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간, 8시간, 24시간(즉, 2일에 아침 용량 이전), 및 168시간(즉, 8일에 아침 용량 이전)에 시작한다. 혈액 샘플링은 해당하는 경우 연구 약물 투여 전과 후속 사이클의 1일에 투여 전에 발생하며, 연구 말기에 PBMC PD 연구를 위해 수행된다.
도 15는 COH29에 대한 가속화된 적정 단계 I을 도시한다(용량 제한 독성("DLT")에 기초함).

정의

"환자," "피험체," "이를 필요로 하는 환자," 및 "이를 필요로 하는 피험체"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, COH29 또는 본원에 논의된 바와 같은 다른 항암제와 조합된 COH29의 투여에 의해 치료될 수 있는 질병 또는 병태로부터 고통받고 있거나 이에 걸리기 쉬운 살아있는 유기체를 지칭한다. 구현예에서, 질병 또는 병태는 암이다. 피험체의 비제한적인 예는 인간, 다른 포유동물, 소, 랫트, 마우스, 개, 원숭이, 염소, 양, 젖소, 사슴, 및 다른 비포유동물을 포함한다. 구현예에서, 환자는 인간이다.

본원에 사용된 바와 같이 "암 피험체"는 본원에 기재된 바와 같은 암을 갖는 피험체를 지칭한다. 암 피험체는 본원에 기재된 암 중 적어도 하나를 가질 수 있다. 따라서, 예를 들어, 암 피험체는 "유방암 피험체"(예컨대, 유방암을 갖는 피험체) 또는 "난소암 피험체"(예컨대, 난소암을 갖는 피험체)를 지칭할 수 있다. 암 피험체는 특정 유전자형 또는 표현형 특징(예컨대, 결함 유전자 산물 또는 특정 항암제에 대한 내성)을 나타내는 암을 가질 수 있다. 따라서, 암 피험체는 "BRCA1 결함 피험체"일 수 있고, BRCA1 결함 피험체는 BRCA1 결함 유전자 또는 BRCA1 결함 단백질(예컨대, "BRCA1 결함")을 포함하는 암을 갖는 피험체이다. 구현예에서, "BRCA1 결함 피험체"는 BRCA1 유전자의 비발현(예컨대, 대조군 또는 건강한 피험체에 비해 감소된 발현), 피험체에서 기능적 BRCA1의 부재(예컨대, 대조군 또는 건강한 피험체에 비해 감소된 양) 또는 피험체에서 적어도 부분적으로 암을 직접 또는 간접적으로 유발하는 BRCA1의 감소된 발현을 지칭한다. 구현예에서, BRCA1 결함 피험체는 피험체에서 BRCA1 유전자의 비발현, 기능적 BRCA1의 부재를 나타낸다. 암 피험체는 "PARP1 억제제 내성 피험체"일 수 있고, PARP1 억제제 내성 피험체는 당업계에 공지된 바와 같은 적어도 하나의 PARP1 억제제에 대한 암 내성을 갖는 피험체이다. 암 피험체는 "DNA 손상 항암제 내성 피험체"일 수 있고, 이러한 피험체는 당업계에 공지된 바와 같은 적어도 하나의 DNA 손상 항암제에 대한 암 내성을 갖는다. 암 피험체는 하나를 초과하는 유전자형 또는 표현형 특징을 나타내는 암을 가질 수 있다(예컨대, 유방암 피험체는 BRCA1 결함 및 적어도 하나의 PARP1 억제제에 대한 내성을 갖는 암을 가질 수 있음).

"COH29"는 식(N-(4-(3,4-디하이드록시페닐)-5-페닐티아졸-2-일)-3,4-디하이드록시벤즈아미드)를 갖는 화합물을 지칭한다:

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COH29 및 그의 합성은 미국 특허 제7,956,076호; 제8,372,983호, 및 국제 출원 제PCT/US13/24490호에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 참조로 본원에 포함되어 있다.

COH29는, 예를 들어, 유방암 피험체, 난소암 피험체, BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체를 포함하는 본원에 기재된 암 피험체에게 투여될 수 있다. 투여는 본원에 제시된 바와 같은 치료 유효량일 수 있다.

"BRCA1"은 그의 보통의 일반적인 의미에 따라 사용되며, 동일하거나 유사한 명칭의 단백질 및 이의 기능적 단편 및 동족체를 지칭한다. 용어는 BRCA1의 재조합 또는 자연발생 형태(예컨대, breast cancer 1, early onset; GI No: 1698399), 또는 BRCA1 활성을 유지하는(예컨대, BRCA1과 비교하여 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100% 이내의 활성) 이의 변이체를 포함한다.

"γ-H2AX"는 그의 보통의 일반적인 의미에 따라 사용되며 동일하거나 유사한 명칭의 단백질 및 이의 기능적 단편 및 동족체를 지칭한다. 용어는 γ-H2AX의 임의의 재조합 또는 자연발생 형태(예컨대, γ 히스톤 H2AX; GI No: 4504253), 또는 γ-H2AX 활성을 유지하는 이의 변이체(예컨대, γ-H2AX와 비교하여 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100% 이내의 활성)를 포함한다.

"Rad51"은 그의 보통의 일반적인 의미에 따라 사용되며, 동일하거나 유사한 명칭의 단백질 및 이의 기능적 단편 및 동족체를 지칭한다. 용어는 Rad51의 임의의 재조합 또는 자연발생 형태(예컨대, GI No: 49168602), 또는 Rad51 활성을 유지하는(예컨대, Rad51과 비교하여 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100% 이내의 활성) 이의 변이체를 포함한다.

"PARP1"은 그의 보통의 일반적인 의미에 따라 사용되며, 동일하거나 유사한 명칭의 단백질 및 이의 기능적 단편 및 동족체를 지칭한다. 용어는 PARP1의 임의의 재조합 또는 자연발생 형태(예컨대, 폴리 [ADP-리보스] 중합효소 1; GI No: 156523968), 또는 PARP1 활성을 유지하는(예컨대, PARP1 과 비교하여 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100% 이내의 활성) 이의 변이체를 포함한다. "PARP1 억제제"는 PARP1(NAD⁺ ADP-리보실트랜스퍼라아제 1)의 활성을 억제하는 조성물(예컨대, 화합물, 펩타이드, 단백질, 핵산, 또는 항체)이다.

"PARP1 억제제"는 PARP1의 활성 또는 발현을 억제함으로써 암을 치료하는데 효과적인 조성물(예컨대, 화합물, 폴리펩타이드, 아미노산, 폴리뉴클레오타이드, 핵산, 또는 항체)이다. PARP1 억제제의 비제한적인 예는 올라파립, 벨리파립, 이니파립, 및 니라파립을 포함한다.

"DNA 손상 항암제"는 DNA를 손상시킴으로써 암을 치료하는데 효과적인 조성물(예컨대, 화합물, 폴리펩타이드, 아미노산, 폴리뉴클레오타이드, 핵산, 또는 항체)이다. DNA 손상 항암제는 화학치료제일 수 있다. 구현예에서, DNA 손상제는 조사(예컨대, γ-조사)를 포함한다. DNA 손상 항암제의 상호작용은 직접적(예컨대, DNA 자체에 결합하거나 이와 상호작용하는 것) 또는 간접적(예컨대, DNA와 상호작용하는 다른 분자에 결합하거나 이와 상호작용하는 것)일 수 있다. 본원에서, DNA 손상 항암제는, 예를 들어, 알킬화제(예컨대, 에틸렌이민, 메틸멜라민, 니트로소우레아, 질소 머스타드, 부설판, 사이클로포스파미드, 및 프로카르바진), 항대사물질, 안트라사이클린, 백금계 제제, 탁산, 키나아제 억제제, 히스톤 데아세틸라아제 억제제(HDAC), 토포이소머라아제 억제제, 및 뉴클레오타이드 유사체를 포함한다. 구현예에서, DNA 손상 항암제는 DNA 염기 쌍 사이에 삽입되거나 DNA의 좁은 홈 또는 넓은 홈에서 결합하는 조성물을 포함한다. 구현예에서, DNA 손상 항암제는 토포이소머라아제 I 제제, 캄프토테신, 이리노테칸, 토포테칸, 토포이소머라아제 II 제제, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 아드리아마이신(예컨대, 독소루비신), 에토포시드, 단일 가닥 파괴 제제(예컨대, BCNU(카르무스틴), CCNU(로무스틴), DTIC(다카바진), 사이톡산(사이클로포스파미드), 이포스파미드, 블레오마이신, 및 미토마이신 C이다.

"화학치료제"는 그의 보통의 일반적인 의미에 따라 사용되며, 항신생물 특성 또는 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 능력을 갖는 화학적 조성물 또는 화합물을 지칭한다.

항암 약물 시스플라틴은, 예를 들어, 난소암, 고환암, 생식 세포 종양, 소세포 폐암, 림프종, 두경부암, 및 방광암을 포함하는 다양한 인간 암을 치료하는데 사용되어 왔다. 본원에서, "백금계 화합물" 또는 "백금 함유제"는 유기 및/또는 무기 작용기에 의해 둘러싸인 백금의 중심 원자를 함유하는 중금속 착물을 포함하는 화합물을 지칭한다. 백금계 화합물에는 백금계 약물이 포함된다. 백금계 화합물의 비제한적인 예는, 시스플라틴, 카보플라틴, 네다플라틴, 옥살리플라틴, 사트라플라틴, 트리플라틴, 테트라니트레이트, 이의 약학적으로 허용되는 염, 이의 입체이성질체, 이의 유도체, 이의 유사체, 및 이의 조합을 포함한다. 용어 "시스플라틴"은 미국 특허 제4,177,263호, 제4,584,316호, 제5,648,362호 및 제5,399,694호에 기재된 것과 같은 유도체 및 유사체를 포함하며, 이는 그 전체가 참조로 본원에 포함되어 있다.

시스플라틴 항암 활성은 주로 표적 세포 내의 DNA의 가교로부터 기인하며, 이는 시스플라틴 클로라이드 이온과 친핵성기와의 교환 반응을 필요로 한다. 시스플라틴은 d(GpG) 또는 d(ApG) 서열을 갖는 가닥내 부가물의 형성을 통해 DNA에서 이좌배위자(bidentate) 병변을 유발한다. 시스플라틴은 또한 가닥간 가교를 생성할 수 있고, 이는 DNA 복제를 방해할 수 있다. 병변은 DNA 손상 체크포인트를 활성화시켜, 세포 주기 진행의 정지를 초래한다. 환자에서 이차 종양의 형성은 시스플라틴 요법과 관련된 주요 문제 중 하나에 해당한다. 시스플라틴의 다른 부작용은 신독성, 신경독성, 구역질, 이독성, 골수독성, 및 전해질 불균형을 포함할 수 있다. 시스플라틴 내성은 또한 암 환자에서 발견된다.

용어 "치료하는" 또는 "치료"는, 경감과 같은 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수; 차도; 증상의 감소 또는 부상, 병리 또는 병태가 환자에게 더 견딜 수 있게 만드는 것; 악화 또는 감소율을 늦추는 것; 악화의 최종 지점이 덜 쇠약하도록 만드는 것; 환자의 신체적 또는 정신적 행복을 개선하는 것을 포함하는, 부상, 질병, 병리 또는 병태의 치료 또는 개선의 성공의 임의의 표시를 지칭한다. 증상의 치료 또는 개선은 신체 검사, 신경정신과 검사, 및/또는 정신과 평가의 결과를 포함하는 객관적 또는 주관적 매개변수에 기초할 수 있다. 용어 "치료하는" 및 이의 동사 변화는 부상, 병리, 병태, 또는 질병의 예방을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "암"은 백혈병, 암종 및 육종을 포함하는, 포유동물에서 발견되는 암, 신생물, 악성 또는 양성 종양의 모든 유형을 지칭한다. 예시적인 암은 유방암, 난소암, 결장암, 간암, 신장암 및 췌장암을 포함한다. 추가의 예는 백혈병(예컨대, 급성 골수성 백혈병("AML") 또는 만성 골수성 백혈병("CML")), 뇌의 암, 폐암, 비소세포 폐암, 흑색종, 육종, 및 전립선암, 자궁경부암, 위암, 두경부암, 자궁암, 중피종, 전이성 골암, 수모세포종, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경모세포종, 횡문근육종, 일차 혈소판증가증, 일차 고분자글로불린혈증, 일차 뇌 종양, 악성 췌장 인슐린종, 악성 유암종, 비뇨기 방광암, 전암성 피부 병변, 고환암, 림프종, 갑상선암, 신경모세포종, 식도암, 비뇨생식관암, 악성 고칼슘혈증, 자궁내막암, 부신피질암, 내분비 및 외분비 췌장의 신생물을 포함한다.

용어 "백혈병"은 광범위하게는 혈액 형성 기관의 진행성 악성 질병을 지칭하며, 일반적으로 혈액 및 골수에서 백혈구 및 이들의 전구체의 왜곡된 증식 및 발달을 특징으로 한다. 백혈병은 일반적으로 (1) 질병의 지속시간 및 특성-급성 또는 만성; (2) 관련된 세포의 유형; 골수성(myeloid, myelogenous), 림프성(림프행성), 또는 단핵구성; 및 (3) 혈액에서 비정상적인 세포의 수의 증가 또는 비증가-백혈병 또는 무백혈병(아백혈병)에 기초하여 임상적으로 분류된다. 쥣과 백혈병 모델은 생체내 항백혈병 활성을 예측하는 것으로 널리 받아들여지고 있다. P388 세포 분석에서 양성으로 판정된 화합물은 일반적으로 치료되는 백혈병의 유형에 관계없이 항백혈병 활성의 일부 수준을 나타낼 것으로 여겨진다. 따라서, 본 발명의 개시내용은 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia), 급성 과립구 백혈병(acute granulocytic leukemia), 만성 과립구 백혈병(chronic granulocytic leukemia), 급성 전골수구 백혈병(acute promyelocytic leukemia), 성인 T-세포 백혈병(adult T-cell leukemia), 무백혈성 백혈병(aleukemic leukemia), 백혈구병성 백혈병(leukocythemic leukemia), 호염기구 백혈병(basophylic leukemia), 모 세포 백혈병(blast cell leukemia), 소 백혈병(bovine leukemia), 만성 골수성 백혈병(chronic myelocytic leukemia), 피부 백혈병(leukemia cutis), 배아 백혈병(embryonal leukemia), 호산구성 백혈병(eosinophilic leukemia), 그로스 백혈병(Gross' leukemia), 모양 세포 백혈병(hairy-cell leukemia), 성혈세포성 백혈병(hemoblastic leukemia), 혈구아세포성 백혈병(hemocytoblastic leukemia), 조직구성 백혈병(histiocytic leukemia), 줄기 세포 백혈병(stem cell leukemia), 급성 단핵구성 백혈병(acute monocytic leukemia), 백혈구감소 백혈병(leukopenic leukemia), 림프성 백혈병(lymphatic leukemia), 림프모구 백혈병(lymphoblastic leukemia), 림프구성 백혈병(lymphocytic leukemia), 림프행성 백혈병(lymphogenous leukemia), 림프성 백혈병(lymphoid leukemia), 림프육종 세포 백혈병(lymphosarcoma cell leukemia), 비만 세포 백혈병(mast cell leukemia), 거대핵세포 백혈병(megakaryocytic leukemia), 미세골수아구성 백혈병(micromyeloblastic leukemia), 단핵구성 백혈병(monocytic leukemia), 골수아구 백혈병(myeloblastic leukemia), 골수성 백혈병(myelocytic leukemia), 골수성 과립구 백혈병(myeloid granulocytic leukemia), 골수단핵구성 백혈병(myelomonocytic leukemia), 네겔리 백혈병(Naegeli leukemia), 혈장 세포 백혈병(plasma cell leukemia), 다발성 골수종(multiple myeloma), 형질세포 백혈병(plasmacytic leukemia), 전골수구 백혈병(promyelocytic leukemia), 리이더 세포 백혈병(Rieder cell leukemia), 쉴링 백혈병(Schilling's leukemia), 줄기 세포 백혈병(stem cell leukemia), 아백혈병성 백혈병(subleukemic leukemia), 및 미분화된 세포 백혈병(undifferentiated cell leukemia)을 치료하는 것을 포함하는 백혈병을 치료하는 방법을 포함한다.

용어 "육종"은 일반적으로 배아 결합 조직과 같은 물질로 구성되는 종양을 지칭하며, 이는 일반적으로 원섬유(fibrillar) 또는 동종(homogeneous) 물질에 포매된 밀집된 세포로 구성된다. 항신생물 티올 결합 미토콘드리아 산화제 및 항암제의 조합으로 치료될 수 있는 육종은 연골육종(chondrosarcoma), 섬유육종(fibrosarcoma), 림프육종(lymphosarcoma), 흑색육종(melanosarcoma), 점액육종(myxosarcoma), 골육종(osteosarcoma), 아베메티 육종(Abemethy's sarcoma), 지방질 육종(adipose sarcoma), 지방육종(liposarcoma), 포상 연부 육종(alveolar soft part sarcoma), 법랑아 육종(ameloblastic sarcoma), 포도상형 육종(botryoid sarcoma), 녹색종 육종(chloroma sarcoma), 융모막 암종(chorio carcinoma), 배아 육종(embryonal sarcoma), 윌름 종양 육종(Wilms' tumor sarcoma), 자궁내막 육종(endometrial sarcoma), 간질 육종(stromal sarcoma), 유잉 육종(Ewing's sarcoma), 근막 육종(fascial sarcoma), 섬유아세포성 육종(fibroblastic sarcoma), 거대 세포 육종(giant cell sarcoma), 과립구 육종(granulocytic sarcoma), 호지킨 육종(Hodgkin's sarcoma), 특발성 다발성 색소출혈성 육종(idiopathic multiple pigmented hemorrhagic sarcoma), B 세포의 면역모세포성 육종, 림프종(immunoblastic sarcoma of B cells), T-세포의 면역모세포성 육종, 젠슨 육종(Jensen's sarcoma), 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 쿠퍼 세포 육종(Kupffer cell sarcoma), 혈관육종(angiosarcoma), 백혈구육종(leukosarcoma), 악성 간엽세포종 육종(malignant mesenchymoma sarcoma), 방골성 육종(parosteal sarcoma), 망상적혈구 육종(reticulocytic sarcoma), 라우스 육종(Rous sarcoma), 혈청낭성 육종(serocystic sarcoma), 활막 육종(synovial sarcoma), 및 모세혈관확장성 육종(telangiectaltic sarcoma)을 포함한다.

용어 "흑색종"은 피부 및 기타 기관의 멜라닌 세포계로부터 발생하는 종양을 의미한다. 항신생물 티올 결합 미토콘드리아 항산화제 및 항암제의 조합으로 치료될 수 있는 흑색종은, 예를 들어, 선단 흑자성 흑색종(acral-lentiginous melanoma), 무색소성 흑색종(amelanotic melanoma), 양성 소아 흑색종(benign juvenile melanoma), 클라우드만 흑색종(Cloudman's melanoma), S91 흑색종(S91 melanoma), 하딩-파세이 흑색종(Harding-Passey melanoma), 소아 흑색종(juvenile melanoma), 악성 흑자 흑색종(entigo maligna melanoma), 악성 흑색종(malignant melanoma), 결절성 흑색종(nodular melanoma), 손톱밑 흑색종(subungal melanoma), 및 표재 확장성 흑색종(superficial spreading melanoma)을 포함한다.

용어 "암종"은 주변 조직에 침투하여 전이를 야기하는 경향이 있는 상피 세포로 구성된 악성 신규 성장을 지칭한다. 항신생물 티올 결합 미토콘드리아 산화제 및 항암제의 조합으로 치료될 수 있는 예시적인 암종은, 예를 들어, 선방 암종(acinar carcinoma), 선포 암종(acinous carcinoma), 선낭 암종(adenocystic carcinoma), 선양 낭성 암종(adenoid cystic carcinoma), 선암종(carcinoma adenomatosum), 부신 피질의 암종(carcinoma of adrenal cortex), 폐포성 암종(alveolar carcinoma), 폐포 세포 암종(alveolar cell carcinoma), 기저 세포 암종(basal cell carcinoma), 기저세포성 암종(carcinoma basocellulare), 기저세포양 암종(basaloid carcinoma), 기저편평 세포 암종(basosquamous cell carcinoma), 기관지폐포 암종(bronchioalveolar carcinoma), 기관지 암종(bronchiolar carcinoma), 기관지원성 암종(bronchogenic carcinoma), 대뇌양 암종(cerebriform carcinoma), 담관세포 암종(cholangiocellular carcinoma), 융모성 암종(chorionic carcinoma), 콜로이드 암종(colloid carcinoma), 면포 암종(comedo carcinoma), 자궁체부 암종(corpus carcinoma), 사상형 암종(cribriform carcinoma), 흉부 갑옷 암종(carcinoma en cuirasse), 피부 암종(carcinoma cutaneum), 원주상 암종(cylindrical carcinoma), 원주상 세포 암종(cylindrical cell carcinoma), 유관 암종(duct carcinoma), 듀럼 암종(carcinoma durum), 배아 암종(embryonal carcinoma), 뇌양 암종(encephaloid carcinoma), 유포피 암종(epiermoid carcinoma), 상피 선양 암종(carcinoma epitheliale adenoides), 외방성 암종(exophytic carcinoma), 궤양외 암종(carcinoma ex ulcere), 섬유성 암종(carcinoma fibrosum), 젤라틴성 암종(gelatiniforni carcinoma, gelatinous carcinoma), 거대 세포 암종(giant cell carcinoma, carcinoma gigantocellulare), 샘 암종(glandular carcinoma), 과립막 세포 암종(granulosa cell carcinoma), 털기질 암종(hair-matrix carcinoma), 간세포양 암종(hematoid carcinoma), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma), 허슬 세포 암종(Hurthle cell carcinoma), 초자 암종(hyaline carcinoma), 하이페메프로이드 암종(hypemephroid carcinoma), 영아성 배아 암종(infantile embryonal carcinoma), 제자리 암종(carcinoma in situ), 복막내 암종(intraepidermal carcinoma), 상피내 암종(intraepithelial carcinoma), 크롬페쳐 암종(Krompecher's carcinoma), 컬키츠키-세포 암종(Kulchitzky-cell carcinoma), 거대-세포 암종(large-cell carcinoma), 렌즈모양 암종(lenticular carcinoma, carcinoma lenticulare), 림프상피 암종(lipomatous carcinoma, lymphoepithelial carcinoma), 수양 암종(carcinoma medullare, medullary carcinoma), 멜라닌성 암종(carcinoma medullare), 피부연성 암종(carcinoma molle), 점액 암종(mucinous carcinoma), 무시파룸 암종(carcinoma muciparum), 점액세포 암종(carcinoma mucocellulare), 점액표피양 암종(mucoepidermoid carcinoma), 점막 암종(carcinoma mucosum), 점액 암종(mucous carcinoma), 점액종성 암종(carcinoma myxomatodes), 비인두 암종(nasopharyngeal carcinoma), 귀리 세포 암종(oat cell carcinoma), 화골성 암종(carcinoma ossificans), 유골 암종(osteoid carcinoma), 유두상 암종(papillary carcinoma), 문맥주위 암종(periportal carcinoma), 전침윤 암종(preinvasive carcinoma), 가시 세포 암종(prickle cell carcinoma), 풀모양 암종(pultaceous carcinoma), 신장의 신장 세포 암종(renal cell carcinoma of kidney), 예비 세포 암종(reserve cell carcinoma), 육종성 암종(carcinoma sarcomatodes), 슈나이더 암종(schneiderian carcinoma), 경성 암종(scirrhous carcinoma), 음낭 암종(carcinoma scroti), 반지세포 암종(signet-ring cell carcinoma), 단순 암종(carcinoma simplex), 소세포 암종(small-cell carcinoma), 솔라노이드 암종(solanoid carcinoma), 구상 세포 암종(spheroidal cell carcinoma), 방추 세포 암종(spindle cell carcinoma), 해면질 암종(carcinoma spongiosum), 편평 암종(squamous carcinoma), 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma), 스트링 암종(string carcinoma), 모세혈관확장성 암종(carcinoma telangiectaticum, carcinoma telangiectodes), 이행 세포 암종(transitional cell carcinoma), 결절성 암종(carcinoma tuberosum, tuberous carcinoma), 우췌상 암종(verrucous carcinoma), 및 융모상 암종(carcinoma villosum)을 포함한다.

"암 모델 유기체"는 유기체 내에서 암을 나타내는 표현형 또는 암 유발 요소의 활성을 나타내는 유기체(예컨대, 암 세포주)이다. 암 모델 유기체는 본원에 기재된 바와 같은 암의 표현형을 나타낼 수 있다. 따라서, 암 모델 유기체는, 예를 들어, PARP1 억제제에 내성이거나 DNA 손상 항암제에 내성인 BRCA1이 결핍된 암 세포주일 수 있다. 광범위한 유기체가 암 모델 유기체로서 작용할 수 있으며, 예를 들어, 암 세포 및 포유동물 유기체, 예컨대 설치류(예컨대, 마우스 또는 랫트) 및 영장류(예컨대, 인간)를 포함한다. 암 세포주는 생체내 암과 유사한 표현형 또는 유전자형을 나타내는 세포로서 당업자에 의해 널리 이해된다. 본원에 사용된 암 세포주는 동물(예컨대, 마우스) 및 인간으로부터의 세포주를 포함한다.

"항암제"는 그의 통상의 일반적인 의미에 따라 사용되며, 항신생물 특성 또는 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 능력을 갖는 조성물(예컨대, 화합물, 폴리펩타이드, 아미노산, 폴리뉴클레오타이드, 핵산, 또는 항체)을 지칭한다. 일부 구현예에서, 항암제는 화학치료제이다. 일부 구현예에서, 항암제는 암을 치료하는 방법에서 유용성을 갖는 본원에서 확인된 제제이다. 일부 구현예에서, 항암제는 암을 치료하기 위해 FDA 또는 미국 이외의 국가의 유사한 규제 기관에 의해 승인된 제제이다. 항암제는 특정 암 또는 특정 조직에 대해 선택적일 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "투여하는 것"은 피험체에게 경구 투여, 좌제로서의 투여, 국소 접촉, 정맥내, 비경구, 복강내, 근육내, 병변내, 척수내, 비강내 또는 피하 투여, 또는 서방 장치, 예컨대, 미니삼투 펌프의 이식을 의미한다. 투여는 비경구 및 경점막(예컨대, 협측, 설하, 구개, 치은, 비강, 질, 직장, 또는 경피)을 포함하는 임의의 경로에 의한다. 비경구 투여는, 예컨대, 정맥내, 근육내, 동맥내, 피내, 피하, 복강내, 심실내, 및 두개내를 포함한다. 다른 전달 방식은, 비제한적으로, 리포좀 제제, 정맥내 주입, 경피 패치의 사용 등을 포함한다.

"공동 투여하다"는 본원에 기재된 조성물이 하나 이상의 추가 요법의 투여와 동시에, 투여 직전, 또는 투여 직후에 투여되는 것을 의미한다. 예를 들어, COH29는 환자에게 단독으로 투여될 수 있거나 공동 투여될 수 있다. 공동 투여는 화합물을 개별적으로 또는 조합하여(둘 이상의 화합물 또는 제제) 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하는 것을 의미한다. 따라서, 조제물은 또한 필요한 경우 다른 활성 물질과 조합될 수 있다(예컨대, 대사 분해를 감소시키기 위해).

본원에 개시된 조성물은, 도포 스틱, 용액, 현탁액, 유화액, 겔, 크림, 연고, 페이스트, 젤리, 페인트, 분말, 및 에어로졸로 제제화되어 경피로, 국소 경로에 의해 전달될 수 있다. 경구 조제물은 환자가 섭취하기에 적합한 정제, 환제, 분말, 당의정, 캡슐, 액체, 로젠지, 카세제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등을 포함한다. 고형 형태 조제물은 분말, 정제, 환제, 캡슐, 카세제, 좌제, 및 분산가능한 과립을 포함한다. 액체 형태 조제물은 용액, 현탁액, 및 유화액, 예를 들어, 물 또는 물/프로필렌 글리콜 용액을 포함한다. 본 발명의 조성물은 지속 방출 및/또는 편안함을 제공하는 성분을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 성분은 고분자량, 음이온성 점액의태성(mucomimetic) 중합체, 겔화 다당류 및 미분된 약물 담체 기질을 포함한다. 이들 성분은 미국 특허 제4,911,920호; 제5,403,841호; 제5,212,162호; 및 제4,861,760호에 더 상세히 논의되어 있다. 이들 특허의 전체 내용은 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 본원에 포함되어 있다. 본원에 개시된 조성물은 또한 체내에서 서방을 위한 미소구체로서 전달될 수 있다. 예를 들어, 미소구체는 피하로 서서히 방출되는 약물을 함유하는 미소구체의 피내 주사를 통해(Rao, J. Biomater Sci. Polym. Ed. 7:623-645, 1995 참고); 생분해성 및 주사가능한 겔 제제로서(예컨대, Gao Pharm . Res. 12:857-863, 1995 참고); 또는 경구 투여를 위한 미소구체로서(예컨대, Eyles, J. Pharm . Pharmacol . 49:669-674, 1997 참고) 투여될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 조성물의 제제는 세포막과 융합되거나 세포내 이입된 리포솜의 사용에 의해, 즉 세포의 표면 막 단백질 수용체에 결합하여 엔도시토시스를 야기하는 리포솜에 부착된 수용체 리간드를 사용함으로써 전달될 수 있다. 특히 리포솜 표면이 표적 세포에 특이적인 수용체 리간드를 갖거나, 또는 특정 기관에 우선적으로 향하는 경우, 리포솜을 사용함으로써, 본 발명의 조성물을 생체내 표적 세포 내로 전달하는데 집중할 수 있다(예컨대, Al-Muhammed, J. Microencapsul . 13:293-306, 1996; Chonn, Curr . Opin . Biotechnol . 6:698-708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp . Pharm . 46:1576-1587, 1989 참고). 조성물은 또한 나노입자로서 전달될 수 있다.

일부 구현예에서, 둘 이상의 상이한 약학 조성물이 공동 투여된다. 일부 경우, 둘 이상의 상이한 약학 조성물은 동시에 공동 투여된다. 일부 경우, 둘 이상의 상이한 약학 조성물은 투여 사이의 시간 간격 없이 순차적으로 공동 투여된다. 다른 경우, 둘 이상의 상이한 약학 조성물은 간격을 가지고 순차적으로 공통 투여된다. 특정 구현예에서, 둘 이상의 상이한 약제의 공동 투여 사이의 간격은 상이한 약제의 투여 사이에 약 0.25시간, 약 0.5시간, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 12시간, 약 1일, 약 2일, 또는 그 초과일 수 있다.

"유효량"은 화합물이 화합물의 부재에 비해 언급된 목적을 달성하는데(예컨대, 그것이 투여되는 효과를 달성하거나, 질병을 치료하거나, 효소 활성을 감소시키거나, 효소 활성을 증가시키거나, 신호전달 경로를 감소시키거나, 또는 질병 또는 병태의 하나 이상의 증상을 감소시키는데) 충분한 양이다. "치료 유효량"의 예는 질병의 증상 또는 증상들의 치료, 예방, 또는 감소에 기여하는데 충분한 양이며, 이는 "치료 유효량"으로도 지칭될 수 있다. 증상 또는 증상들(및 이 문구의 문법적 등가물)의 "감소"는 증상(들)의 중증도 또는 빈도의 감소, 또는 증상(들)의 제거를 의미한다. 정확한 양은 치료 목적에 따라 달라질 수 있고, 공지된 기술을 사용하여 당업자에 의해 확인될 수 있다(예컨대, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); and Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins 참고).

포유동물에게 투여되는 투여량 및 빈도(단일 또는 다중 용량)는 다양한 인자, 예를 들어, 포유동물이 또 다른 질병을 겪고 있는지 여부, 및 그의 투여 경로; 수용자의 크기, 연령, 성별, 건강, 체중, 체질량 지수, 및 식이; 치료되는 질병의 증상의 성질 및 정도, 동시 치료의 종류, 치료되는 질병으로부터의 합병증 또는 다른 건강 관련 문제에 따라 달라질 수 있다. 다른 치료 요법 또는 제제가 본 발명의 방법 및 화합물과 함께 사용될 수 있다. 확립된 투여량(예컨대, 빈도 및 지속시간)의 조정 및 조작은 당업자의 능력 내에 있다.

본원에 기재된 치료 유효량은 세포 배양 분석으로부터 초기에 결정될 수 있다. 표적 농도는 본원에 기재되거나 당업계에 공지된 방법을 사용하여 측정된 바와 같이, 본원에 기재된 방법을 달성할 수 있는 활성 화합물(들)의 농도일 수 있다.

당업계에 널리 알려진 바와 같이, 인간에 사용하기 위한 치료 유효량은 또한 동물 모델로부터 결정될 수 있다. 예를 들어, 인간을 위한 용량은 동물에서 효과적인 것으로 나타난 농도를 달성하도록 제제화될 수 있다. 인간에서의 투여량은 상기 기재된 바와 같이 화합물 효과를 모니터링하고 투여량을 상향 또는 하향 조정함으로써 조정될 수 있다. 상기 기재된 방법 및 다른 방법에 기초하여 인간에서 최대 효능을 달성하도록 용량을 조정하는 것은 당업자의 능력에 속한다.

투여량은 환자 및 사용되는 화합물의 요건에 따라 달라질 수 있다. 본 개시내용의 맥락에서 환자에게 투여되는 용량은 시간이 경과하면서 환자에서 유익한 치료 반응에 영향을 미치기에 충분해야 한다. 용량의 크기는 또한 임의의 부작용의 존재, 성질 및 정도에 의해 결정될 수 있다. 특정 상황에 대한 적절한 투여량의 결정은 의사의 기술에 속한다. 일반적으로, 치료는 화합물의 최적 용량 미만인 더 작은 투여량으로 시작된다. 이후, 상황하에서 최적 효과에 도달할 때까지 투여량은 소량씩 증가된다. 투여량 및 간격은 치료되는 특정 임상 적응증에 효과적인 투여된 화합물의 수준을 제공하기 위해 개별적으로 조정될 수 있다. 이것은 개체의 질병 상태의 중증도에 적합한 치료 요법을 제공할 수 있다.

본원에 정의된 바와 같이, 단백질-억제제 상호작용과 관련하여 용어 "억제," "억제하다," "억제하는 것" 등은 억제제의 부재하의 단백질의 활성 또는 기능에 비해 단백질의 활성 또는 기능에 부정적으로 영향을 미치는 것(예컨대, 감소시키는 것)을 의미한다. 유전자를 억제하는 것과 관련하여 사용될 때, "억제하는 것"은 억제제의 부재하의 유전자의 활성 또는 발현에 비해 유전자의 활성 또는 발현에 부정적으로 영향을 미치는 것(예컨대, 감소시키는 것)을 의미한다. 일부 구현예에서, 억제는 질병 또는 질병의 증상의 감소를 지칭한다. 일부 구현예에서, 억제는 특정 단백질 또는 핵산 표적의 활성의 감소를 지칭한다. 따라서, 억제는 적어도 부분적으로, 자극을 부분적으로 또는 완전히 차단하는 것, 활성화를 감소, 예방, 또는 지연시키는 것, 또는 신호 전달 또는 효소 활성 또는 단백질의 양을 불활성화, 탈감작화, 또는 하향 조절하는 것을 포함한다.

용어 "상승효과," "상승작용," "상승적," "조합된 상승적 양" 및 "상승적 치료적 효과"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 측정된 효과가 단독 투여된 화합물 각각의 개별 효과의 합보다 큰 경우 조합 투여된 화합물의 측정된 효과를 지칭한다.

용어 "약학 조성물"은 다른 화학적 성분을 함유하는 화합물 COH29의 혼합물을 지칭한다. 일부 경우, 추가의 화학적 성분은 담체, 안정화제, 희석제, 분산제, 현탁제, 증점제, 및/또는 부형제이다. 약학 조성물은 화합물을 유기체에 투여하는 것을 용이하게 한다. 화합물을 투여하는 기술은, 비제한적으로, 정맥내, 경구, 에어로졸, 비경구, 안과, 폐, 및 국소 투여를 포함한다.

용어 "부작용"은 약물 또는 약의 원하는 치료 효과에 추가적으로 발생하는 바람직하지 않은 이차 효과를 지칭한다. 심한 경우, 부작용은 처방된 치료의 불이행을 야기할 수 있다.

용어 "용량 제한 독성(dose limiting toxicity), 또는 DLT"은 환자가 약물 시험 동안 약물 치료를 받으면서 모니터링되는 독성을 지칭하며, 안전성 분석의 부분이다. 그것은 하기 중 어느 것을 지칭한다: 4등급 혈소판감소증(혈소판 수 < 25,000/mm 3); 출혈 또는 수혈의 필요성과 연관된 3등급 혈소판감소증(혈소판 수 25,000 - 50,000/mm 3); 열성 호중구감소증(febrile neutropenia)(NCI CTC에 대하여, 절대 호중구 수(ANC) < 1.0 x 10 9 /L 및 발열 > 38.5℃); 및 조사자에 의해 임상적으로 유의하고 연구 약물과 관련된 것으로 간주되는 임의의 다른 > 3등급 비혈액 독성.

용어 "최대 허용 용량(maximum tolerated dose), 또는 MTD"는 "허용가능한" 수준의 독성을 생성하거나, 또는 초과될 경우, 동물 또는 환자를 "허용가능하지 않는" 독성 위험에 둘 용량을 지칭하며, 이는 최대의 가능한 유익한 항종양 효과를 달성하기 위해 비교적 고용량의 약물이 선택되는 암 및 HIV 치료의 I상 임상 시험의 주된 목적이다. MTD는 또한 치료된 환자 집단 내에서 특정 빈도의 DLT를 생성하는 용량을 지칭할 수 있다.

용어 "인간 등가 용량 또는 인간 등가 농도(HEC)"는 인간에게 투여될 때, 더 적은 용량에 의해 시험 동물에서 생성된 것과 동일한 효과를 생성하는 화학 물질(약물)의 양을 지칭한다.

용어 "객관적 종양 반응"은 항암제의 효능을 평가하기 위한 임상 시험에서 일반적인 종점을 지칭하며, 객관적 반응률(ORR), 진행까지의 시간(TTP), 무질병 생존(DFS), 및 무진행 생존(PFS)과 같은 몇 가지 용어를 포함한다.

용어 "바이오마커"는 개체에서 질병 상태의 중증도 또는 존재의 측정가능한 지표를 지칭한다. 제안된 바이오마커가 검증되면, 그것은 개체에서 질병 위험, 질병의 존재를 진단하거나, 또는 개체에서 질병에 대한 치료를 조정하는데(약물 치료 또는 투여 요법의 선택) 사용될 수 있다. 잠재적인 약물 요법을 평가하는데 있어서, 바이오마커는 생존 또는 비가역적 이환율과 같은 자연 종점에 대한 대용물로서 사용될 수 있다. 치료가 건강 개선과 직접 관련된 바이오마커를 변경하는 경우, 바이오마커는 임상 이점을 평가하기 위한 대용의 종점으로서 작용한다. 주요 사용 분야는 약물 개발 과정이다.

방법

제1 양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 피험체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 방법은 COH29의 유효량을 피험체에게 투여하는 것을 포함한다. 피험체는 본원에 제시된 바와 같은 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 따라서, 구현예에서, 피험체는 BRCA1 결함 피험체이다. 구현예에서, 피험체는 PARP1 억제제 내성 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체 중 적어도 하나이다. 구현예에서, 피험체는 BRCA1 결함 피험체이며, PARP1 억제제 내성 피험체 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체 중 적어도 하나일 수 있다(즉, 암은 BRCA1 결함을 가지며, PARP1 억제제 또는 DNA 손상 항암제 중 적어도 하나에 대해 내성을 가짐). 구현예에서, 암은 젬시타빈 내성 암이다. 구현예에서, 암은 하이드록시우레아 내성 암이다.

구현예에서, 피험체는 유방암 피험체, 난소암 피험체, 결장암 피험체, 간암 피험체, 신장암 피험체, 폐암 피험체, 비소세포 폐암 피험체, 뇌암 피험체, 전립선암 피험체, 췌장암 피험체, 흑색종 피험체, 백혈병 피험체, 또는 육종 피험체이다.

구현예에서, 피험체는 유방암 피험체 또는 난소암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 유방암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 난소암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 결장암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 간암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 신장암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 폐암 피험체 또는 비소세포 폐암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 뇌암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 전립선암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 췌장암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 흑색종 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 백혈병 피험체일 수 있다. 구현예에서, 피험체는 육종 피험체일 수 있다.

암 피험체(예컨대, 유방, 난소, 폐, 전립선, 또는 췌장암 피험체)는 또한 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체, 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체 중 적어도 하나일 수 있다. 따라서 구현예에서, 암 피험체는 BRCA1 결함 피험체이다. 구현예에서, 암 피험체는 PARP1 억제제 내성 피험체이다. 구현예에서, 암 피험체는 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 구현예에서, 암 피험체는 BRCA1 결함 피험체 및 PARP1 억제제 내성 피험체이다. 구현예에서, 암 피험체는 PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 구현예에서, 암 피험체는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다.

따라서, 구현예에서, 피험체는 유방암 또는 난소암을 갖는 BRCA1 결함 피험체이다. BRCA1 결함 피험체는 유방암을 가질 수 있다. BRCA1 결함 피험체는 난소암을 가질 수 있다.

구현예에서, 피험체는 유방암 또는 난소암을 갖는 PARP1 억제제 내성 피험체이다. PARP1 억제제 내성 피험체는 유방암을 가질 수 있다. PARP1 억제제 내성 피험체는 난소암을 가질 수 있다.

구현예에서, 피험체는, 비제한적으로, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 아드리아마이신, 미톡산트론, VP16, CPT11, 또는 캄프토테신을 포함하는, 적어도 하나의 DNA 손상 항암제에 대한 내성을 특징으로 하는 암을 갖는 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 구현예에서, 피험체는 유방암, 난소암, 결장암, 간암, 신장암, 폐암, 비소세포 폐암, 뇌암, 전립선암, 췌장암, 흑색종, 백혈병, 또는 육종을 갖는 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 피험체는 유방암을 갖는 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다. 피험체는 난소암을 갖는 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다.

구현예에서, 피험체는 BRCA1 결함 피험체 및 PARP1 억제제 내성 피험체이다. 피험체는 유방암 또는 난소암을 갖는 BRCA1 결함 피험체 및 PARP1 억제제 내성 피험체일 수 있다. 피험체는 유방암을 갖는 BRCA1 결함 피험체 및 PARP1 억제제 내성 피험체일 수 있다. 피험체는 난소암을 갖는 BRCA1 결함 피험체 및 PARP1 억제제 내성 피험체일 수 있다.

구현예에서, 피험체는 BRCA1 결함 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 피험체는 유방암 또는 난소암을 갖는 BRCA1 결함 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다. 피험체는 유방암을 갖는 BRCA1 결함 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다. 피험체는 난소암을 갖는 BRCA1 결함 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다.

구현예에서, 피험체는 PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 피험체는 유방암 또는 난소암을 갖는 PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다. 피험체는 유방암을 갖는 PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다. 피험체는 난소암을 갖는 PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다.

구현예에서, 피험체는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 피험체는 유방암 또는 난소암을 갖는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다. 피험체는 유방암을 갖는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다. 피험체는 난소암을 갖는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다.

구현예에서, 암 피험체는 유방암 피험체이며, BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체, 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체 중 적어도 하나이다. 따라서 구현예에서, 유방암 피험체는 또한 BRCA1 결함 피험체이다. 구현예에서, 유방암 피험체는 또한 PARP1 억제제 내성 피험체이다. 구현예에서, 유방암 피험체는 또한 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 유방암 피험체는 BRCA1 결함 피험체 및 PARP1 억제제 내성 피험체일 수 있다(예컨대, 유방암 피험체는 BRCA1 결함을 갖고 PARP1 억제제에 대해 내성인 암을 가짐). 유방암 피험체는 BRCA1 결함 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다(예컨대, 유방암 피험체는 BRCA1 결함을 갖고 DNA 손상 항암제에 대해 내성인 암을 가짐). 유방암 피험체는 PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제에 대해 내성 피험체일 수 있다(예컨대, 유방암 피험체는 PARP1 억제제 및 DNA 손상 항암제에 대해 내성을 갖는 암을 가짐). 유방암 피험체는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다(예컨대, 유방암 피험체는 BRCA1 결함을 갖고 PARP1 억제제 및 DNA 손상 항암제에 대해 내성인 암을 가짐).

구현예에서, 암 피험체는 난소암 피험체이며, BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체, 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체 중 적어도 하나이다. 따라서 구현예에서, 난소암 피험체는 또한 BRCA1 결함 피험체이다. 구현예에서, 난소암 피험체는 또한 PARP1 억제제 내성 피험체이다. 구현예에서, 난소암 피험체는 또한 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 난소암 피험체는 BRCA1 결함 피험체 및 PARP1 억제제 내성 피험체일 수 있다(예컨대, 난소암 피험체는 BRCA1 결함을 갖고 PARP1 억제제에 대해 내성인 암을 가짐). 난소암 피험체는 BRCA1 결함 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다(예컨대, 난소암 피험체는 BRCA1 결함을 갖고 DNA 손상 항암제에 대해 내성인 암을 가짐). 난소암 피험체는 PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다(예컨대, 난소암 피험체는 PARP1 억제제 및 DNA 손상 항암제에 대해 내성을 갖는 암을 가짐). 난소암 피험체는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있다(예컨대, 난소암 피험체는 BRCA1 결함을 갖고 PARP1 억제제 및 DNA 손상 항암제에 대해 내성인 암을 가짐).

구현예에서, 암 피험체는 유방암 피험체, 난소암 피험체, 결장암 피험체, 간암 피험체, 신장암 피험체, 폐암 피험체, 비소세포 폐암 피험체, 뇌암 피험체, 전립선암 피험체, 췌장암 피험체, 흑색종 피험체, 백혈병 피험체, 또는 육종 피험체이다. 구현예에서, 암 피험체는 유방암 피험체 또는 난소암 피험체이다. 구현예에서, 암 피험체는 유방암 피험체이다. 구현예에서, 암 피험체는 난소암 피험체이다.

피험체는 본원에 기재된 암을 가질 수 있으며, 암은 BRCA1 결함, PARP1 억제제에 대한 내성, 또는 DNA 손상 항암제에 대한 내성 중 적어도 하나를 나타낸다. 암은 유방암, 난소암, 결장암, 간암, 신장암, 폐암, 비소세포 폐암, 뇌암, 전립선 암, 췌장암, 흑색종, 백혈병, 또는 육종일 수 있다. 암은 BRCA1 결함을 갖는 전술한 암 중 하나일 수 있다. 암은 PARP1 억제제에 대해 내성을 갖는 전술한 암 중 하나일 수 있다. 암은 DNA 손상 항암제에 대해 내성을 갖는 전술한 암 중 하나일 수 있다.

구현예에서, 암은 BRCA1 결함을 가지며, PARP1 억제제 또는 DNA 손상 항암제에 대한 내성 중 적어도 하나를 갖는다. 구현예에서, 암은 PARP1 억제제에 대한 내성을 가지며, BRCA1 결함 또는 DNA 손상 항암제에 대한 내성 중 적어도 하나를 갖는다. 구현예에서, 암은 DNA 손상 항암제에 대한 내성을 가지며, BRCA1 결함 또는 PARP1 억제제에 대한 내성 중 적어도 하나를 갖는다.

암은 유방암 또는 난소암일 수 있다. 암은 유방암일 수 있다. 암은 난소암일 수 있다. 암은 결장암일 수 있다. 암은 간암일 수 있다. 암은 신장암일 수 있다. 암은 폐암 또는 비소세포 폐암일 수 있다. 암은 뇌암일 수 있다. 암은 전립선암일 수 있다. 암은 췌장암일 수 있다. 암은 흑색종일 수 있다. 암은 백혈병일 수 있다. 암은 육종일 수 있다.

구현예에서, COH29의 투여는 암 피험체(예컨대, BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체)에서 특정 단백질의 활성 또는 발현을 낮춘다. 억제는 프로테아좀 모집을 통해 단백질의 분해를 유도할 수 있는 표적 단백질에 대한 COH-29의 결합으로부터 비롯될 수 있다. 단백질 수준의 변화는 결국 상응하는 유전자의 발현 패턴을 조절할 수 있다. 구현예에서, COH29는 피험체에서 PARP1, Rad51, 또는 BRCA1의 활성 또는 발현을 억제한다. COH29 처리의 결과로서 상이하게 발현되는 유전자를 확인하기 위해 분석이 수행될 수 있다(예컨대, 마이크로어레이 분석). 따라서, COH29를 투여하는 것은 피험체에서 BRCA1 단백질 활성 또는 발현을 낮출 수 있다. COH29를 투여하는 것은 피험체에서 PARP1 단백질 활성 또는 발현을 낮출 수 있다. COH29를 투여하는 것은 피험체에서 Rad51 단백질 활성 또는 발현을 낮출 수 있다. 피험체는 이의 구현예를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 암 피험체일 수 있다. 구현예에서, 암 피험체는 유방암 피험체, 난소암 피험체, 결장암 피험체, 간암 피험체, 신장암 피험체, 폐암 피험체, 비소세포 폐암 피험체, 뇌암 피험체, 전립선암 피험체, 또는 췌장암 피험체이다. 암 피험체는 유방암 피험체 또는 난소암 피험체일 수 있다.

구현예에서, COH29 처리된 BRCA1 결함 피험체의 RNA 발현 프로파일은 BRCA1+(예컨대, 온전한 BRCA1)인 COH29 처리된 암 피험체의 것과 비교될 수 있다. 따라서 구현예에서, COH29는 BRCA1+인 암 피험체보다 BRCA1 결함 피험체에서 단백질의 활성 또는 발현을 더 큰 정도로 억제한다. 따라서, 구현예에서, COH29는 BRCA1+인 암 피험체보다 BRCA1 결함 피험체에서 PARP1을 더 큰 정도로 억제한다. COH29는 BRCA1+인 암 피험체보다 BRCA1 결함 피험체에서 Rad51을 더 큰 정도로 억제할 수 있다. 구현예에서, COH29는 합성 치사를 통해 BRCA1 결함 피험체를 치료한다. BRCA1 결함 피험체는 이의 구현예를 포함하여 본원에 기재된 바와 같다. 구현예에서, BRCA1 결함 피험체는 또한 유방암 피험체 또는 난소암 피험체이다.

구현예에서, COH29의 투여는 암(예컨대, BRCA1 결함이거나 PARP1 억제제 또는 DNA 손상 항암제 중 어느 하나 또는 모두에 대해 내성인 암)에서 특정 단백질의 활성 또는 발현을 낮춘다. 억제는 프로테아좀 모집을 통해 단백질의 분해를 유도할 수 있는 표적 단백질에 대한 COH-29의 결합을 통해 비롯될 수 있다. 단백질 수준의 변화는 결국 상응하는 유전자의 발현 패턴을 조절할 수 있다. 구현예에서, COH29는 암에서 PARP1, Rad51, 또는 BRCA1의 활성 또는 발현을 억제한다. COH29 처리의 결과로서 상이하게 발현되는 유전자를 확인하기 위해 분석이 수행될 수 있다(예컨대, 마이크로어레이 분석). 따라서, COH29를 투여하는 것은 암에서 BRCA1 단백질 활성 또는 발현을 낮출 수 있다. COH29를 투여하는 것은 암에서 PARP1 단백질 활성 또는 발현을 낮출 수 있다. 암은 이의 구현예를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 암일 수 있다. 구현예에서, 암은 유방암, 난소암, 결장암, 간암, 신장암, 폐암, 비소세포 폐암, 뇌암, 전립선암, 또는 췌장암이다. 암은 유방암 또는 난소암일 수 있다.

구현예에서, COH29로 처리된 BRCA1 결함 암의 RNA 발현 프로파일은 COH29로 처리된 BRCA1+ 암의 것과 비교될 수 있다. 따라서 구현예에서, COH29는 BRCA1+인 암보다 BRCA1 결함인 암에서 단백질의 활성 또는 발현을 더 큰 정도로 억제한다. COH29는 BRCA1+인 암보다 BRCA1 결함인 암에서 PARP1을 더 큰 정도로 억제한다. COH29는 BRCA1+인 암보다 BRCA1 결함인 암에서 Rad51을 더 큰 정도로 억제할 수 있다. 구현예에서, COH29는 합성 치사를 통해 BRCA1 결함인 암을 치료한다. 암은 이의 구현예를 포함하여 본원에 기재된 바와 같은 암일 수 있다. 암은 유방암 또는 난소암일 수 있다.

COH29는 합성 치사를 통해 BRCA1 결함 인간 암에 대해 특이성을 나타낼 수 있다. 따라서, 구현예에서, COH29는 이의 구현예를 포함하여 BRCA1 결함 피험체를 치료한다. 구현예에서, 합성 치사는 BRCA1 결함 암에서 제2 단백질의 억제로부터 야기된다. 제2 단백질은 PARP1일 수 있다. BRCA1 결함을 갖는 암의 발현 프로파일은 BRCA1+ 암 세포와 비교될 수 있다. 구현예에서, COH29는 BRCA1 결함인 암에서 PARP1 활성을 약 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%로 감소시킨다. 따라서 구현예에서, COH29는 BRCA1+ 암 세포보다 BRCA1 결함 암 세포에서 더 큰 효능으로 PARP1 활성을 억제한다. 구현예에서, COH29는 BRCA1 결함인 암에서 PARP1 발현을 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100%로 감소시킨다. 따라서 구현예에서, COH29는 BRCA1+ 암 세포보다 BRCA1 결함 암 세포에서 더 큰 효능으로 PARP1 발현을 억제한다.

COH29의 투여는 피험체에서 DNA 복구를 억제할 수 있다. COH29의 투여는 염기 절단 복구(BER)(예컨대, 예를 들어, 특정 글리코실화제를 사용하여 손상된 염기를 제거함으로써 산화적, 알킬화, 탈아미노화, 및 탈퓨린화/탈피리미딘화 손상으로 인해 발생하는 염기 병변을 교정하는 것에 의한 손상된 DNA의 복구)를 억제할 수 있다. COH29의 투여는 뉴클레오타이드 절단 복구(NER)(예컨대, 짧은 단일 가닥 DNA 절편을 제거함으로써, UV 노출로부터 초래된 손상과 같은 큰 DNA 부가물을 초래하는 DNA 손상을 교정하는 것)를 억제할 수 있다. COH29의 투여는 피험체에서 이중 가닥 DNA 파손 복구를 억제할 수 있다(예컨대, 비상동 말단 결합(NHEJ 경로), 미세상동성 매개 말단 결합(MMEJ) 경로를 사용하여, 또는 상동 재조합(HR)에 의해). COH29의 투여는 피험체에서 염기 절단 복구, 뉴클레오타이드 절단 복구 또는 이중 가닥 DNA 파손 복구를 억제할 수 있다.

구현예에서, COH29의 유전독성 프로파일, 및 따라서 DNA 손상 체크포인트를 활성화시키고 DNA 손상을 유도하는 그의 능력은, 예를 들어, ATM, foxo3, γ-H2AX, p53, 또는 Rad51과 같은 단백질의 조절된 활성 또는 발현을 검출함으로써 평가될 수 있다.

조절은 단백질의 활성 또는 발현의 증가 또는 활성 또는 발현의 감소일 수 있다. 따라서 구현예에서, COH29의 투여는 피험체에서 γ-H2AX 활성 또는 발현을 증가시킨다. 구현예에서, COH29의 투여는 피험체에서 γ-H2AX 활성 또는 발현을 증가시킨다. COH29의 투여는 피험체에서 γ-H2AX 활성 또는 발현을 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 11배, 12배, 13배, 14배, 15배, 16배, 17배, 18배, 19배, 또는 20배 증가시킬 수 있다. 증가된 γ-H2AX 활성 또는 발현은 DNA 손상 체크포인트의 활성화 및 DNA 손상의 유도를 나타낼 수 있다. 구현예에서, COH29의 투여는 이의 구현예를 포함하여 본원에 기재된 바와 같은 암에서 γ-H2AX 활성 또는 발현을 증가시킨다. 구현예에서, COH29의 투여는 이의 구현예를 포함하여 본원에 기재된 바와 같은 암에서 γ-H2AX 활성 또는 발현을 증가시킨다. 구현예에서, COH29의 투여는 삼중 음성 유방암에서 γ-H2AX 활성 또는 발현을 증가시킨다. 따라서, 구현예에서, COH29의 유효량을 투여하는 것은 삼중 음성 유방암을 치료한다.

COH29는 DNA 이중 가닥 파괴(DSB) 복구를 억제할 수 있다. DSB는, 예를 들어, 상동 재조합(HR) 또는 비상동 말단 결합(NHEJ) 경로에 의해 복구될 수 있다. 구현예에서, COH29는 HR을 억제한다. 구현예에서, COH29는 NHEJ 경로를 억제한다. DNA 손상 반응은 예를 들어, BRCA1 및 Rad51과 같은 HR 복구와 관련된 단백질의 단백질 수준을 억제함으로써 연장될 수 있다. 구현예에서, COH29의 투여는 피험체에서 또는 암에서 Rad51 활성 또는 발현을 감소시킨다. 구현예에서, COH29의 투여는 피험체에서 또는 암에서 BRCA1 활성 또는 발현을 감소시킨다. 구현예에서, BRCA1 또는 Rad51의 발현은 피험체에서 또는 암에서 감소된다. 구현예에서, BRCA1 및 Rad51의 발현은 피험체에서 또는 암에서 감소된다.

또 다른 양태에서 암의 치료를 필요로 하는 피험체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 방법은 COH29 및 DNA 손상 항암제를 조합된 상승적 양으로 투여하는 것을 포함한다. 구현예에서, 피험체는 이의 구현예를 포함하여 본원에 기재된 바와 같다. 따라서, 특정 구현예에서, 피험체는 BRCA1 결함 피험체 또는 PARP1 억제제 내성 피험체이다. 피험체는 BRCA1 결함 피험체일 수 있다. 피험체는 PARP1 억제제 내성 피험체일 수 있다.

암은 유방암, 난소암, 결장암, 간암, 신장암, 폐암, 비소세포 폐암, 뇌암, 전립선 암, 췌장암, 흑색종, 백혈병, 또는 육종일 수 있다. 암은 유방암 또는 난소암일 수 있다. 따라서, 구현예에서, 피험체는 유방암 피험체 또는 난소암 피험체이다. 피험체는 유방암 피험체일 수 있다. 피험체는 난소암 피험체일 수 있다. 피험체는 또한 이의 구현예를 포함하여 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 표현형 또는 유전자형을 나타낼 수 있다(예컨대, 유방암 피험체는 또한 BRCA1 결함 피험체 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체일 수 있음). 구현예에서, 피험체는 BRCA1 결함 피험체 및 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다. 피험체는 DNA 손상 항암제에 대한 내성을 갖는 암을 가질 수 있다. 본원의 방법은 COH29의 유효량을 공동 투여함으로써 적어도 하나의 DNA 손상 항암제에 대한 내성을 갖는 암의 치료를 제공할 수 있다.

구현예에서, DNA 손상 항암제는 화학치료제 DNA 손상제이다. DNA 손상 항암제는 알킬화제일 수 있다. DNA 손상 항암제는 이의 구현예를 포함하여 본원에 기재된 바와 같은 항대사물질일 수 있다. DNA 손상 항암제는 안트라사이클린일 수 있다. DNA 손상 항암제는 백금계 제제일 수 있다. DNA 손상 항암제는 탁산일 수 있다. DNA 손상 항암제는 키나아제 억제제일 수 있다. DNA 손상 항암제는 히스톤 데아세틸라아제 억제제일 수 있다. DNA 손상 항암제는 토포이소머라아제 억제제일 수 있다. DNA 손상 항암제는 뉴클레오타이드 유사체일 수 있다. 구현예에서, 암의 억제는 DNA 손상 암 제제 및 COH29의 존재하에 상승적으로 증가된다.

구현예에서, 치료 방법은 합성 치사에서 적어도 2개의 단백질을 억제하는 것을 포함한다. 단백질 중 적어도 하나는 BRCA1일 수 있다. 단백질 중 적어도 하나는 Rad51일 수 있다. 단백질 중 적어도 하나는 PARP1일 수 있다. 구현예에서, PARP1의 억제는 BRCA1 결함 피험체에 있을 수 있다. 구현예에서, PARP1의 억제는 DNA 손상 항암제 및 COH29의 존재하에 상승적으로 증가된다. DNA 손상 항암제는 젬시타빈, γ-조사, 또는 시스플라틴일 수 있으며, 본원에 제시된 바와 같은 그의 유도체를 포함한다.

DNA 손상 항암제는 시스플라틴일 수 있으며, 본원에 기재된 바와 같은 그의 유도체를 포함한다. 구현예에서, COH29의 투여는 단독으로 투여할 때의 시스플라틴의 세포독성보다 더 큰 수준으로 시스플라틴의 세포독성을 증가시킨다(예컨대, COH29 및 시스플라틴을 조합된 상승적 양으로 함께 투여하는 것). 시스플라틴은 널리 사용되는 화학치료제이며, 이의 항암 활성은 주로 표적 세포에서의 DNA 가교에 기인한다. 따라서, 구현예에서, COH29 및 시스플라틴의 공동 투여는 COH29 또는 시스플라틴이 단독으로 투여될 때의 암 세포의 생존가능성의 감소보다 더 큰 암 세포의 생존가능성의 감소를 초래한다(예컨대, COH29 및 시스플라틴을 조합된 상승적 양으로 함께 투여하는 것).

DNA 손상 항암제는 젬시타빈일 수 있다. 구현예에서, COH29 및 젬시타빈의 공동 투여는 COH29 또는 젬시타빈이 단독으로 투여될 때의 암 세포의 생존가능성의 감소보다 더 큰 암 세포의 생존가능성의 감소를 초래한다(예컨대, COH29 및 시스플라틴을 조합된 상승적 양으로 함께 투여하는 것). DNA 손상 항암제는 γ-조사일 수 있다. 구현예에서, COH29의 투여 및 γ-조사의 처리는 COH29 또는 γ-조사가 단독으로 투여될 때의 암 세포의 생존가능성의 감소보다 더 큰 암 세포의 생존가능성의 감소를 초래한다. COH29는 γ-조사의 처리 전, 동안, 또는 이후에 투여될 수 있다.

또 다른 양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 피험체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 방법은 하기 구조를 갖는 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하며:

,

유효량은 투여일당 적어도 약 50 mg이다.

구현예에서, 유효량은 투여일당 약 10 mg 내지 투여일당 약 2400 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 100 mg 내지 투여일당 약 2400 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 200 mg 내지 투여일당 약 2400 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 100 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 200 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 300 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 400 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 500 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 600 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 700 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 800 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 900 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1000 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1100 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1200 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1300 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1400 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1500 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1600 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1700 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1800 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1900 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 2000 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 2100 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 2200 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 2300 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 2400 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 2500 mg이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 3000이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 3500이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 4000이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 4500이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 5000이다.

구현예에서, 방법은 화합물을 21일 동안 매일 투여한 후 7일 동안 화합물을 투여하지 않는 것을 포함하는 치료 과정을 포함한다. 구현예에서, 치료 과정은 28일마다 반복되었다. 구현예에서, 투여는 하루에 1회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 100 mg 또는 투여일당 약 200 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 2회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 300 mg 또는 투여일당 약 400 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 3회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 600 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 4회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 800 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 5회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1000 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 6회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1200 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 7회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1400 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 8회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1600 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 9회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 1800 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 10회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 2000 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 11회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 2200 mg이다. 구현예에서, 투여는 하루에 12회이다. 구현예에서, 유효량은 투여일당 약 2400 mg이다.

이를 필요로 하는 피험체에서 암을 치료하기 위한 상기 개시된 임의의 양태 또는 이의 구현예와 관련하여, 구현예에서 피험체는 고형 종양 암 피험체이다. 구현예에서, 피험체는 유방암 피험체 또는 난소암 피험체이다. 구현예에서, 피험체는 불응성 고형 종양 암 피험체이다. 구현예에서, 피험체는 유방암 피험체이다. 구현예에서, 유방암 피험체는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체이다.

약학 조성물

또 다른 양태에서, 약학적으로 허용되는 부형제 및 하기 구조를 갖는 화합물:

,

또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는 약학 조성물로서, 화합물은 적어도 약 50 mg의 유효량으로 존재하는 것인 약학 조성물이 제공된다.

일부 구현예에서, 유효량은 약 50 mg 내지 약 2400 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 2000 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 1600 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 1200 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 800 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 600 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 500 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 400 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 300 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 200 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg 내지 약 100 mg이다. 일부 구현예에서, 양은 약 50 mg, 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 600 mg, 약 800 mg, 약 1200 mg, 약 1600 mg, 약 2000 mg, 또는 약 2400 mg이다.

투여

일 양태에서, COH29 제제는 본원에 기재된 질병 또는 병태의 치료에 사용된다. 또한, 이러한 치료를 필요로 하는 피험체에서 본원에 기재된 질병 또는 병태 중 어느 것을 치료하는 방법은 상기 피험체에게 COH29 제제를 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함한다.

일부 경우, COH29에 대한 최대 허용 용량(MTD) 및 최대 반응 용량(MRD)은 확립된 동물 및 인간 실험 프로토콜을 통해서 뿐만 아니라 본원에 기재된 실시예에서 결정된다. 일부 경우, COH29의 독성 및 치료 효능은, 비제한적으로, LD₅₀(집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED₅₀(집단의 50%에서 치료적으로 효과적인 용량)을 결정하기 위한 것을 포함하는, 세포 배양 또는 실험 동물에서의 표준 약학적 절차에 의해 결정된다. 독성 및 치료 효과 사이의 용량 비율은 치료 지수이며, 이는 LD₅₀ 및 ED₅₀ 사이의 비율로서 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 COH29 투여량이 관심 대상이다. 일부 경우, 세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에서 사용하기 위한 투여량의 범위를 공식화하는데 사용된다. COH29의 투여량은 바람직하게는 최소 독성을 갖는 ED₅₀을 포함하는 순환 농도 범위 이내이다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 약 50 mg 내지 약 5000 mg, 약 100 mg 내지 약 2000 mg, 약 200 mg 내지 약 1600 mg, 약 300 mg 내지 약 1200 mg, 약 400 내지 약 800 mg의 COH29, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물의 매일 용량으로 이를 필요로 하는 피험체에게 제공된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 COH29 약학 조성물은 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg, 약 61 mg, 약 62 mg, 약 63 mg, 약 64 mg, 약 65 mg, 약 66 mg, 약 67 mg, 약 68 mg, 약 69 mg, 약 70 mg, 약 71 mg, 약 72 mg, 약 73 mg, 약 74 mg, 약 75 mg, 약 76 mg, 약 77 mg, 약 78 mg, 약 79 mg, 약 80 mg, 약 81 mg, 약 82 mg, 약 83 mg, 약 84 mg, 약 85 mg, 약 86 mg, 약 87 mg, 약 88 mg, 약 89 mg, 약 90 mg, 약 91 mg, 약 92 mg, 약 93 mg, 약 94 mg, 약 95 mg, 약 96 mg, 약 97 mg, 약 98 mg, 약 99 mg, 약 100 mg, 약 101 mg, 약 102 mg, 약 103 mg, 약 104 mg, 약 105 mg, 약 106 mg, 약 107 mg, 약 108 mg, 약 109 mg, 약 110 mg, 약 111 mg, 약 112 mg, 약 113 mg, 약 114 mg, 약 115 mg, 약 116 mg, 약 117 mg, 약 118 mg, 약 119 mg, 약 120 mg, 약 121 mg, 약 122 mg, 약 123 mg, 약 124 mg, 약 125 mg, 약 126 mg, 약 127 mg, 약 128 mg, 약 129 mg, 약 130 mg, 약 131 mg, 약 132 mg, 약 133 mg, 약 134 mg, 약 135 mg, 약 136 mg, 약 137 mg, 약 138 mg, 약 139 mg, 약 140 mg, 약 141 mg, 약 142 mg, 약 143 mg, 약 144 mg, 약 145 mg, 약 146 mg, 약 147 mg, 약 148 mg, 약 149 mg, 약 150 mg, 약 160 mg, 약 170 mg, 약 180 mg, 약 190 mg, 약 200 mg, 약 210 mg, 약 220 mg, 약 230 mg, 약 240 mg, 약 250 mg, 약 260 mg, 약 270 mg, 약 280 mg, 약 290 mg, 약 300 mg, 약 310 mg, 약 320 mg, 약 330 mg, 약 340 mg, 약 350 mg, 약 360 mg, 약 370 mg, 약 380 mg, 약 390 mg, 약 400 mg, 410 mg, 약 420 mg, 약 430 mg, 약 440 mg, 약 450 mg, 약 460 mg, 약 470 mg, 약 480 mg, 약 490 mg, 약 500 mg, 약 510 mg, 약 520 mg, 약 530 mg, 약 540 mg, 약 550 mg, 약 560 mg, 약 570 mg, 약 580 mg, 약 590 mg, 약 600 mg, 약 610 mg, 약 620 mg, 약 630 mg, 약 640 mg, 약 650 mg, 약 660 mg, 약 670 mg, 약 680 mg, 약 690 mg, 약 700 mg, 710 mg, 약 720 mg, 약 730 mg, 약 740 mg, 약 750 mg, 약 760 mg, 약 770 mg, 약 780 mg, 약 790 mg, 약 800 mg, 약 810 mg, 약 820 mg, 약 830 mg, 약 840 mg, 약 850 mg, 약 860 mg, 약 870 mg, 약 880 mg, 약 890 mg, 약 900 mg, 910 mg, 약 920 mg, 약 930 mg, 약 940 mg, 약 950 mg, 약 960 mg, 약 970 mg, 약 980 mg, 약 990 mg, 약 1000 mg, 약 1100 mg, 약 1200 mg, 약 1300 mg, 약 1400 mg, 약 1500 mg, 약 1600 mg, 약 1700 mg, 약 1800 mg, 약 1900 mg, 약 2000 mg, 약 2100 mg, 약 2200 mg, 약 2300 mg, 또는 약 2400 mg의 COH29, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물, 또는 그 안에서 추론가능한 임의의 범위의 매일 용량으로 제공된다. 본원에 기재된 매일 용량은 하위 용량의 수가 매일 용량과 동일한 경우 하루에 1회 또는 하루에 2회, 하루에 3회, 하루에 4회 등으로 제공되는 하위 용량의 형태로 하루에 수회 제공될 수 있다.

일부 구현예에서, 화합물은 하루에 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 100 mg의 화합물은 하루에 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 100 mg의 화합물은 하나의 100 mg 용량으로 하루에 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 200 mg의 화합물은 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 200 mg의 화합물은 약 12시간 떨어져 투여되는 2개의 100 mg 용량으로 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 300 mg의 화합물은 하나의 200 mg 용량 후 약 12시간 이후에 투여되는 100 mg 용량으로 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 200 mg의 화합물은 오전에 투여되고, 100 mg의 화합물은 저녁에 투여된다. 일부 구현예에서, 300 mg의 화합물은 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 400 mg의 화합물은 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 400 mg의 화합물은 약 12시간 떨어져 투여되는 2개의 200 mg 용량으로 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 600 mg의 화합물은 하루에 투여된다. 일부 구현예에서, 600 mg의 화합물은 약 12시간 떨어져 투여되는 2개의 300 mg 용량으로 하루에 투여되다. 구현예에서, 800 mg의 화합물은 약 12시간 떨어져 투여되는 2개의 400 mg 용량으로 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 900 mg의 화합물은 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 1200 mg의 화합물은 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 1200 mg의 화합물은 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 1200 mg의 화합물은 하루에 약 12시간 떨어져 투여되는 2개의 600 mg 용량으로 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 1600 mg의 화합물은 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 1600 mg의 화합물은 약 12시간 떨어져 투여되는 2개의 800 mg 용량으로 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 1800 mg의 화합물은 약 12시간 떨어져 투여되는 2개의 900 mg 용량으로 하루에 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 2400 mg의 화합물은 약 12시간 떨어져 투여되는 2개의 1200 mg 용량으로 하루에 2회 투여된다.

추가의 구현예에서, COH29 약학 조성물에 적절한 일일 투여량은 체중당 약 0.5 mg/kg 내지 약 100.0 mg/kg의 COH29, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 일부 구현예에서, COH29 약학 조성물에 적절한 일일 투여량은 체중당 약 0.75 mg/kg 내지 약 75 mg/kg의 COH29, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 또 다른 구현예에서, COH29 약학 조성물에 적절한 일일 투여량은 체중당 약 1 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 COH29, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다. 또 다른 구현예에서, COH29 약학 조성물에 적절한 일일 투여량은 약 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 10 mg/kg, 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 10 mg/kg, 11 mg/kg, 약 12 mg/kg, 약 13 mg/kg, 약 14 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 16 mg/kg, 약 17 mg/kg, 약 18 mg/kg, 약 19 mg/kg, 약 20 mg/kg, 21 mg/kg, 약 22 mg/kg, 약 23 mg/kg, 약 24 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 26 mg/kg, 약 27 mg/kg, 약 28 mg/kg, 약 29 mg/kg, 약 30 mg/kg, 31 mg/kg, 약 32 mg/kg, 약 33 mg/kg, 약 34 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 36 mg/kg, 약 37 mg/kg, 약 38 mg/kg, 약 39 mg/kg, 약 40 mg/kg, 41 mg/kg, 약 42 mg/kg, 약 43 mg/kg, 약 44 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 46 mg/kg, 약 47 mg/kg, 약 48 mg/kg, 약 49 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 또는 약 100 mg/kg의 COH29, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 COH29 약학 조성물은 COH29에 대해 최대 허용 용량(MTD)으로 제공된다. 다른 구현예에서, 투여되는 COH29 약학 조성물의 양은 최대 허용 용량(MTD)의 약 10% 내지 약 90%, MTD의 약 25% 내지 약 75%, 또는 MTD의 약 50%이다. 일부 다른 구현예에서, 투여되는 COH29 약학 조성물의 양은 COH29에 대한 MTD의 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 초과, 또는 그 안에서 도출될 수 있는 임의의 범위이다.

또 다른 양태에서, 본원에 개시된 약학 조성물을 21일 동안 매일 분배한 후, 7일 동안 약학 조성물을 투여하지 않도록 구성된 분배 장치를 포함하는 키트가 제공된다.

일부 구현예에서, 분배 장치는 하루에 1 내지 6개의 약학 조성물 투여량을 분배하도록 구성된다.

일부 구현예에서, 키트는 상기 약학 조성물을 투여하지 않는 7일 동안 매일 투여하기 위한 7개의 위약 제제 투여 단위를 추가로 포함한다.

실시예

DNA 손상 약물의 효능은 세포 DNA 복구 능력에 의해 크게 영향을 받고 조절된다(9). 실제로, DNA 복구의 소분자 억제제는 전임상 연구에서 종래의 화학요법 약물과 조합되어 왔으며(18), 이는 DNA 복구 기구가 신규한 암 치료를 위한 유망한 표적임을 나타낸다. 또한, PARP 억제제는 임상 시험에서 백금 화학요법과 조합되어 왔다(19, 20). 이러한 보고와 일치하게도, COH29가 특히 BRCA1 결핍 세포에서, 시스플라틴에 대한 세포의 민감성을 향상시킨다는 것이 특히 발견되었다. 이것은 COH29 합성 치사가 HR 결핍 세포에서 NER 또는 BER에 의존적이라는 것을 시사한다. COH29는 몇 가지 DNA 복구 경로(NER, BER, 및 HR)를 방해할 수 있으며, 시스플라틴의 존재 또는 부재하에 BRCA1 결핍 세포에서 관찰된 세포독성에 기여할 수 있다. 따라서, COH29는 강력한 DNA 복구 억제제로서 이용될 수 있다.

모든 세포주를 미국 생물자원센터(Manassas, VA, USA)로부터 획득하였다. 세포를 37℃에서 5% CO₂에서 배지(Sigma)의 ml당 10% 우태아 혈청, 2 mM 글루타민, 및 100 U의 페니실린 및 100 μg의 스트렙토마이신을 갖는 RPMI 1640 배지(Mediatech)에서 유지시켰다. HCC1937+BRCA1 세포를 단리하기 위해, 모 HCC1937 세포를 전장 BRCA1 cDNA를 발현하는 pcDNA3.1 플라스미드로 형질감염시켰다. 안정적인 형질감염 클론을 선택하고, 약물 민감성 분석에 사용하였다. 안정적인 형질감염을 위해, 30-40% 컨플루언스(confluence)의 세포를 제조사의 지침에 따라 FUGENE® 6 형질감염 시약(Roche Molecular Biochemical, Monza, Italy)을 사용하여, 2　mg의 플라스미드 DNA와 함께 밤새 배양하였다. 이후, 세포를 푸로마이신(1 μg/ml)(Invitrogen Life Technologies, La Jolla, CA, USA)에서 선택하였다. 20 내지 30일 후, HCC1937 형질감염으로부터의 생존가능한 푸로마이신 내성 콜로니를 확장시키고 스크리닝하였다. 푸로마이신을 안정적으로 발현하고 성장 잠재력을 유지한 클론을 웨스턴 블롯 분석에 의해 BRCA1 발현을 분석하였다. 푸로마이신 내성 cDNA/형질감염 세포에서 BRCA1 발현의 회복을 웨스턴 블롯 분석에 의해 평가하였다. 이러한 형질감염된 세포는 BRCA1 단백질의 발현 증가를 나타내었고, 이는 단백질 발현의 효과적인 회복을 시사한다.

COH29를 시티 오프 호프(City of Hope)에서 합성 및 정제하였다. γ-H2AX를 셀 시그널링(Cell signaling, Danvers, MA, USA)으로부터 구입하였다. Rad51을 노부스(Novus, Littleton, CO, USA)로부터 구입하였다. 베타-액틴을 밀리포어(Millipore, Billerica, MA, USA)로부터 수득하였다. FOXO3(H-144 및 N-16, 1:1000), 포스포-H2AX 세린-139(γ-H2AX, 1:1,000), 포스포-p53 세린-15(p53-pS15, 1:1,000), Rad51(1: 1000), β-튜불린(1:1000), 라민(Lamin) A/C(1:2000 희석) PARP, 및 항-마우스 및 항-토끼 IgG에 특이적인 항체를 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA)로부터 수득하였다. FOXO3(1:1,000) 및 포스포-ATM 세린-1981(ATM-pS1981, 1:1,000 희석)에 대한 항체를 각각 에피토믹스(Epitomics, Burlingame, CA) 및 밀리포어(Billerica, MA)로부터 수득하였다. p53-pS15에 대한 항체를 셀 시그널링 테크놀로지(Danvers, MA)로부터 구입하였다. 항-p27Kip1 항체를 BD 파민겐(BD PharMingen, San Diego, CA)으로부터 구입하였다. 알렉사(Alexa) 488(녹색) 및 알렉사 594(적색) 접합된 이차 항체를 몰리큘러 프로브즈(Molecular Probes, Eugene, OR)로부터 수득하였다. 항-토끼 IgG(전체 분자)-FITC 항체를 시그마(Sigma, St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였다. 로다민 레드-X™ 염소 항-마우스 IgG를 인비트로젠(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)으로부터 구입하였다.

면역형광 실험을 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다(21,22). 구체적으로, A549 세포를 유리 커버슬립 상에서 성장시켰다. 24 또는 48시간 동안 COH29(1 또는 10 μM)로 처리한 후, 세포를 4% 파라포름알데히드로 10분 동안 고정시키고, 트리톤™ X-100(0.5%)으로 투과시켰다. 커버슬립을 인산 완충 식염수(PBS)로 세척하고, PBS 함유 2% 소 혈청 알부민(BSA)으로 차단하고, FOXO3 또는 ATM-pS1981 또는 γ-H2AX 또는 p53-pS15(1:50-1:200 희석)에 특이적인 항체와 함께 배양한 후에 알렉사 488 접합된 항-토끼 또는 항-마우스(1:200), 알렉사 594 접합된 항-염소(1:100) 이차 항체(Molecular Probes)와 함께 배양하였다. 세포를 4',6-디아미디노-2-페닐인돌(DAPI; Sigma)과 함께 배양하여 핵을 염색시켰다. 특이적 염색을 시각화하고, 이미지를 라이카(Leica) SP2 AOBS 공초점 레이저 스캐닝 현미경으로 캡처하였다. 초점-양성 세포를 측정하기 위해, ~300 세포를 공초점 현미경에 의해 무작위로 캡처하여 사용하였다. 초점-양성 세포를 고려하는 백분율을 적어도 5개의 초점을 함유하는 세포로부터 계산하였다. 제시된 각각의 오차 막대는 표준 편차의 평균이다.

하위세포 분획화를 위해, 세포를 트립신 처리하고, 차가운 PBS 용액으로 2회 세척하였다. 1,200g에서 5분 동안 원심분리 후, 세포를 5분 동안 얼음 위에서 프로테아제 억제제(펩스타틴, 류펩틴, 및 아프로티닌 각각 5 μg/ml) 및 포스파타아제 억제제가 보충된, 0.2% NONIDET™ P-40(NP-40)을 함유하는 완충제(50 mM HEPES, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA)에서 배양하였다. 1,000g에서 5분 동안 원심분리 후, 상층액을 수집하고(즉, 세포질 분획), 펠렛을 동일한 완충제로 2회 세척하였다. 세척된 샘플을 핵 분획을 위한 0.5% NP-40을 함유하는 분획화 완충제로 얼음 위에서 40분 동안 추출하였다. 모든 샘플을 초음파 처리하고, 16,000g에서 15분 동안 원심분리하여 정화하였다. 모든 분획의 단백질 농도를 바이오라드(Bio-Rad) 단백질 분석(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)으로 결정하였다. 면역블롯팅을 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다(21,22). 간략하게, 동량의 끓인 단백질 샘플을 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(PAGE)에 적용하고, 니트로셀룰로오스 막(Bio-Rad Laboratories) 위로 옮겼다. 막을 0.05% 트윈 20을 함유하는 트리스 완충 식염수(TBST) 중의 3% BSA에서 1시간 동안 차단시키고, 1% BSA를 함유하는 TBST에 희석된 일차 항체(1:500 또는 1:1000)와 함께 1시간 동안 배양하였다. TBST로 2회 세척 후, 막을 실온에서 호스래디쉬 퍼옥시다아제 접합된 이차 항체(1:3000 희석)와 함께 1시간 동안 배양하였다. 면역블롯을 West-Q 화학발광 키트(GenDEPOT, Barker, TX)를 이용하여 필름 상에 시각화하였다.

MTT와 함께 배양하고 생존가능한 세포에 의해 형성된 MTT 포르마잔을 560 nm의 파장에서 마이크로플레이트 리더로 모니터링함으로써 MTT 세포독성 분석을 수행하였고; 생존율을 하기 식을 사용하여 결정하였다: (A_시험　-　A_블랭크)/(A_대조군 - A_블랭크) x 100%. 세포독성을 반자동 형광 기반 디지털 이미징 현미경 시스템(DIMSCAN)을 사용하여 96-웰 플레이트에서 결정하였다. DIMSCAN은 디지털 이미징 현미경을 사용하여 FDA(플루오레세인 디아세테이트; Alfa Aesar, Ward Hill, MA)를 선택적으로 축적하는 생존가능한 세포를 정량화한다. DIMSCAN은 디지털 임계값 설정에 의한 배경 형광의 제거 및 에오신 Y(Mallinckrodt Baker, Center Valley, PA) 퀀칭 후 웰당 총 형광(생존가능한 세포의 수에 비례함)을 정량화함으로써 4 로그 동적 범위에서 세포독성을 측정할 수 있다. 세포를 세포주 성장 속도에 따라 웰당 2,000 내지 5,000 세포로 100 μL의 완전 배지에서 96-웰 플레이트 내로 시딩하였다. 밤새 배양 후, 시험 화합물을 50 μL의 배양 배지에서 다양한 농도로 각 웰에 첨가하였다. 37℃에서 96시간 동안 약물과 함께 배양 후, FDA(최종 농도: 10 mg/mL) 및 에오신 Y[최종 농도: 0.1%(w/v)]를 각 웰에 첨가하고, 세포를 37℃에서 추가 20분 동안 배양하였다. 이후, 웰당 총 형광을 DIMSCAN을 사용하여 측정하였고, 결과를 처리된 웰에서의 형광 대 처리되지 않은 웰에서의 형광의 비율(생존 분획)로서 표현하였따.

동소이식 ( orthotopic ) 종양 모델. 마우스에서의 실험을 시티 오프 호프의 IACUC에 의해 승인된 프로토콜 하에서 수행하였다. HCC1937 및 HCC1937+BRCA1 세포는 느리게 성장하는 종양을 형성하기 때문에, 이들을 MATRIGEL™(Becton-Dickinson Biosciences)을 사용하여 이식하였다. 종양을 확립하기 위해, 50% MATRIGEL™을 함유하는 200 μL 무혈청 배지 중의 4 x 10⁶ 세포를 한 쌍의 8주령 암컷 NSG 마우스의 사타구니 영역 주위의 유선 지방체에 주사하였다. 초기 종양이 13　mm 직경에 도달하면, 이들을 절개하고, 3　mm 조각으로 다진 다음, 실험 마우스의 유선 지방체의 사타구니 영역에 이식하였다. 종양을 28일 기간 동안 측정하였고, 각 시점에 대해, 스투던트 t-검정을 사용하여 30% 솔루톨(solutol) 중의 400 mg/kg COH29 및 상응하는 비히클 대조군의 매일 위관영양법 사이의 통계학적 유의성을 결정하였다. 0.05미만의 p 값(2 측면)은 통계학적 유의성을 나타내는 것으로 간주되었다.

EJ2 세포를 생성하여 GFP의 형광 강도의 모니터링을 통해 Alt-NHEJ를 평가하였고, EJ5 세포를 사용하여 이전에 기재된 바와 같이(23) NJEJ를 결정하였다. 세포를 6-웰 플레이트에 시딩하고, 24시간 동안 상이한 농도의 COH29 또는 시스플라틴으로 처리하였다. 이후, 세포를 트립신 처리하고, 세척하고, 유세포 분석법에 의해 분석하였다.

항-인간 BRCA1 siRNA 발현 플라스미드의 구축을 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다(24). 따라서, 이전에 공개된 항-인간 BRCA1 siRNA 서열을 이용하였다(5'-UCACAGUGUCCUUUAUGUA-3" [서열번호:1] 및 5'-UACAUAAAGGACACUGUGA-3' [서열번호:2]). 각각의 경우에, siRNA를 코딩하는 어닐링된 올리고뉴클레오타이드 이합체를 발현 벡터 psiRNA-hH1zeo(InvivoGen, San Diego, CA, USA) 내로 서브클로닝하여 RNA 중합효소 III 의존적 H1 RNA 프로모터의 제어 하에 발현시켰다. 세포를 전기천공을 통해 등몰 농도의 표시된 플라스미드로 형질감염시켰다.

총 RNA를 RNEASY® 마이크로 키트(Qiagen Inc.)를 사용하여 단리하였다. 게놈 DNA 오염을 DNAse I 처리로 제거하였다. 단리된 RNA의 완전성(integrity)을 1% 아가로스 겔(SeaKem, FMC, Rockland, ME, USA)을 통한 전기영동을 통해 또는 애질런트(Agilent) 2100 생물분석기(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 이용하여 조사하였다. RNA 농도(A₂₆₀/A₂₈₀ 비율)를 UV 분광광도법에 의해 결정하였다. cDNA를 MMLV 역전사효소 및 프라이머로서 랜덤 헥사머(Invitrogen)를 사용하여 총 RNA로부터 제조하였다. 유전자 발현을 실시간 PCR을 통해 cDNA 샘플을 사용하여 정량화하였다. BRCA1에 대한 프라이머를 어플라이드 바이오시스템즈(APPLIED BIOSYSTEMS®, Foster City, CA, USA)로부터 구입하였다. 18S 및 β-액틴에 대한 추가의 프라이머 및 프로브를 실시간 PCR 요건에 맞도록 어플라이드 바이오시스템즈® 지침(PRIMER EXPRESS® 소프트웨어; PPLIED BIOSYSTEMS®)에 따라 설계하였다. 프라이머의 서열은 AGGAATTGCGGGAGGAAAATGGGT(서열번호:3) 및 GCCCCCTGAAGATCTTTCTGTCCT(서열번호:4)였다.

PARP1 활성을 제조사의 프로토콜에 따라 PARP1 화학발광 분석 키트(BPS Bioscience, San Diego)를 사용하여 결정하였다. 간략하게, 리보실화 반응을 25℃에서 1시간 동안 시험 억제제, 양성 대조군, 기질 대조군 및 블랭크 반응을 사용하여 PARP 분석 완충제에서 활성화된 DNA로 수행하였다. 검출을 발광측정기에서 화학발광 기질 A 및 B 판독으로 스트렙타비딘-HRP에 의해 수행하였다. 제브라피쉬(Danio rerio)를 타이페이 의학 대학교의 제브라피쉬 핵심 시설로부터 수득하였고, 14시간 광/10시간 암 주기로 28℃에 유지시켰다. 배아를 28℃에서 배양하고, 상이한 발달 단계를 기재된 바와 같이 결정하였다(25). 야생형 배아를 20 hpf에 상이한 농도의 HU(0, 5, 10, 20, 50 mM) 또는 COH29(0, 10, 20, 50, 100 μM)로 처리하여 돌연변이유발 효과를 평가하였다. 15개의 배아를 웰 조건당 처리하였다. 처리된 배아를 2, 3, 4, 5 및 6 dpf에 관찰하였다. 6 dpf에, 발달 이상을 나타내는 피쉬의 백분율 및 생존율을 결정하였다. 배아를 올림푸스 IX70-FLA 역 형광 현미경을 사용하여 관찰하였다. 이미지를 SPOT 디지털 카메라 시스템(Diagnostic Instruments, Sterling Heights, Michigan, USA)을 사용하여 촬영하고, ImageJ 소프트웨어로 조립하였다(26).

마이크로어레이 샘플을 PARTEK® GENOMICS SUITE^TM(버전 6.6; Partek, Inc.)를 사용하여 RMA 정규화하고(27), 유전자가 적어도 1.2배 변화 및 위발견율(FDR) < 0.05를 나타내면 상이하게 발현되는 것으로 정의하였다. FDR 값을 선형 대조 p-값을 갖는 ANOVA의 분포로부터 Benjamini 및 Hochberg(28)의 방법을 사용하여 계산하였다. 유전자 온톨로지(GO)(29) 강화(enrichment) 분석을 PARTEK® GENOMICS SUITE^TM을 사용하여 수행하였고, GO 카테고리를 피셔의 정확한 검정 p-값 < 0.05로 유의한 것으로 정의하였다.

RRM2-PARP1 상관관계 분석을 Ivshina 등 연구(30)에 기초하여 어피메트릭스(AFFYMETRIX®) U133 A&B(GSE4922)를 사용하여 289 파라핀 포매된 유방암 종양 샘플의 유전자 발현 프로파일링로부터 결정하였다. 통계학적 분석을 바이오컨덕터 R 패키지(Bioconductor R package, 64 bit, v 3.0.2)를 사용하여 수행하였다(31). 상관관계 분석을 스피어만(Spearman) 순위 상관관계를 사용하여 수행하였다. P<0.05 및 r>0.5의 수준을 통계학적으로 유의한 것으로 간주하였다.

SV40 복제 원점을 함유하는 pSVO+ 플라스미드의 시험관내 복제를 이전에 공개된 것(26)을 변형하여 수행하였다. 최종 25 μL 반응 부피는 30 mM HEPES(pH = 7.2), 7 mM MgCl₂, 0.5 mM DTT, 5 μCi[α-³²P]-dCTP, 1 μM dCTP, 100 μM 각각의 dTTP, dCTP, 및 dGTP, 200 μM 각각의 CTP, UTP, 및 GTP, 4 mM ATP, 40 mM of 포스포크레아틴, 50 μg의 크레아틴 포스포키나아제, 50 ng의 pSVO+, 0.1 - 1.0 μg T Ag(적정 분석에 의해 결정된 최적 농도), 및 최적 양의 HeLa 추출물(적정 분석에 의해 결정됨)(Chimerx; Milwaukee, WI)을 함유하였다. DNA 복제 억제를 정량화하기 위해, HeLa 추출물을 반응 시작 전에 30분 동안 증가하는 농도의 COH29와 함께 배양하였다. HeLa-화합물 혼합물을 나머지 SV40 DNA 복제 성분에 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 배양하고, 와트만(WHATMAN®) DE81 필터에 스팟팅하고, 100 mM 피로인산나트륨(pH 7.4) 및 300 mM 포름산암모늄(pH 7.4)으로 세척한 다음, 건조시켰다. 이후, 새롭게 합성된 딸(daughter) DNA 가닥 내로 혼입된 방사성표지된 물질의 양을 액체 섬광 계수에 의해 결정하였다.

임의의 특정 이론에 구속되지 않으면서, COH29 항암 활성은 DNA 복제를 위한 데옥시리보뉴클레오타이드의 생합성을 위한 효소인 인간 리보뉴클레오타이드 환원효소(hRR)의 억제로부터 적어도 일부 유래될 수 있다. 또한, 염기 절단 복구 복합체의 성분으로서, 리보뉴클레오타이드 환원효소 역시 DNA 복구에 관여한다. 결과적으로, 구현예에서, COH29는 복구 복합체의 몇 개의 추가 성분을 표적화하는 것으로 본원에서 발견되었다. 또한, 구현예에서, BRCA1 결함 인간 유방 또는 난소암 세포는 야생형 BRCA1 대응물보다 COH29에 대해 더 민감하다. 구현예에서, COH29는 BRCA1 돌연변이체 세포에서 시스플라틴과 같은 DNA 가교 약물과 상승효과를 나타낸다. 구현예에서, COH29는, 임의의 특정 이론에 구속되지 않고, 상동 재조합(HR) 경로에 의해 이중 가닥 파괴(DSB)의 복구에 관여하는 RAD51을 억제하는 것으로 본원에서 발견되었다. 구현예에서, COH29는 다수의 DNA 복구 경로를 표적화하며, 유전적 배경(돌연변이)으로 인한 백업 DNA 복구를 잠재적으로 조절한다. 구현예에서, COH29는 PARP 억제제(예컨대, PARP1 억제제)에 대한 획득된 내성을 극복할 수 있다. 약리학적으로, 그리고 임의의 특정 이론에 구속되지 않으면서, COH29는 젬시타빈 내성 인간 암 세포 증식을 억제하고, 시스플라틴 또는 γ-조사와 상승작용을 하는 것으로 본원에서 발견되었다.

COH29는, 임의의 특정 이론에 의해 구속되지 않으면서, hRRM1/hRRM2 계면에 위치한 hRRM2 서브유닛 상의 구조적으로 보존된 리간드 결합 포켓을 점유하는 방향족으로 치환된 티아졸 화합물이다(도 10). 구현예에서, 이 포켓에 대한 결합은 hRRM1/hRRM2 조립체를 억제하여, RR 활성을 효과적으로 억제한다. 시험관내 COH29는 다수의 인간 암 세포주에서 활성이며, 대부분의 경우 10 μM 미만의 IC₅₀으로 매우 강력한 것으로 나타났다. COH29는 NCI-60 세포주 패널에서 광범위한 활성을 갖는 것으로 나타났으며, 예를 들어, 인간 난소암 세포주를 포함하는 다수의 인간 유방암 세포주는 COH29에 민감하다(6). 유방 및 난소암은 일반적인 집단보다 돌연변이체 BRCA1 유전자의 보유자에서 더 큰 빈도로 발생한다(32). 따라서, 본원에서는, BRCA1에 결함이 있는 인간 암 세포가 COH29에 대해 더 큰 민감성을 입증하였는지 여부를 조사하였다. 실제로, 도　1A에 나타낸 바와 같이, 동형접합 2594delC 돌연변이로 인한 절단된 BRCA1 단백질을 발현하는 UWB1.289 난소암 세포주(33)는 야생형 BRCA1을 발현하는 OV90 인간 난소암 세포주(IC₅₀: 31.57±3.35 μM)보다 COH29에 더 민감하였다(IC₅₀: 12.30±1.15 μM).

BRCA1 발현만이 상이한 동일한 유전적 배경을 갖는 유방암 세포에서 COH29의 효과를 평가하여 돌연변이체 BRCA1이 세포독성을 증가시킨 정도를 결정하였다. 먼저, BRCA1 발현을 침묵시키는 효과를 조사하였다. HCC1937은 절단된 BRCA1 단백질의 내인성 발현을 초래하는 삽입 돌연변이에 대해 동형접합성인 인간 유방암 세포이며(34), HCC1937+BRCA1은 인간 야생형 BRCA1 단백질을 발현하는 안정한 형질감염 클론이다. BRCA1 발현을 이들 세포에서 RNA 간섭에 의해 억제하였다. 10　μM COH29로 72시간 처리 후, 대조군 siRNA로 형질감염된 HCC1937+BRCA1 세포의 72%가 생존하였다. 대조적으로, BRCA1 siRNA로 형질감염된 세포의 53%만이 생존하였다. COH29 세포독성에 대한 야생형 BRCA1 발현을 복원시키는 효과를 HCC1937 및 HCC1937+BRCA1 세포를 비교함으로써 조사하였다. 72시간 동안 다양한 용량의 COH29로 처리된 경우, 야생형 BRCA1을 발현하는 세포는 BRCA1 돌연변이체 HCC1937 세포(IC₅₀: 7.25±0.64 μM)보다 COH29에 훨씬 덜 민감하였다(IC₅₀: 35.01±3.63 μM). 실시간 역전사효소 중합효소 연쇄 반응(RT-PCR)은 HCC1937+BRCA1 세포가 HCC1937보다 ~2.5배 더 높은 수준의 BRCA1을 발현한다는 것을 보여주었다.

COH29에 대한 BRCA1 결핍 세포의 민감도를 동소이식 종양 외식편 모델에서 추가로 확인하였다. 마우스 유선 지방체에 이식된 HCC1937 종양의 성장은 비히클과 비교하여 400 mg/kg COH29의 매일 경구 투여에 의해 유의하게(p = 0.0007) 억제되었다(도 1B). 대조적으로, 동종 HCC1937+BRCA1 세포로 확립된 종양은 비히클 대조군보다 COH29 처리된 마우스에서 유의하게 작지 않았다(p = 0.1577; 도 1C).

난소암 세포에서 COH29 처리에 대한 반응에 미치는 BRCA1 돌연변이의 영향을 또한 조사하였다. UWB1.289+BRCA1은 인간 야생형 BRCA1 유전자를 발현하는 난소암 세포의 안정한 형질감염 클론이며, UWB1.289는 네오마이신 내성 유전자를 발현하는 대조군 플라스미드로 형질감염된 모 세포이다. 이들 세포를 72시간 동안 다양한 용량의 COH29로 처리하였다. 야생형 BRCA1을 발현하는 세포는 COH29에 덜 민감하였다(IC₅₀: UWB1.289+BRCA1 및 UWB1.289의 경우 각각 23.52±2.38 μM 및 12.30±1.15 μM). RT-PCR 분석은 UWB1.289+BRCA1 세포가 UWB1.289보다 ~3.08배 더 높은 수준의 BRCA1을 발현한다는 것을 보여주었다. 이들 결과는 COH29가 BRCA1에 결함이 있는 인간 암 세포에서 더 큰 치사율을 유도할 수 있음을 시사한다. COH29에 대한 추가의 약리학적 데이터가 표 1 및 2에 제공된다. COH29가 젬시타빈, 하이드록시우레아 또는 시스플라틴에 내성인 다양한 인간 암 세포의 성장을 억제한다는 발견이 특히 중요하다(표 1 및 도 11A(KB-Gem) 및 11B(KBHUR)).

COH29는 림프종(MOLT-4)(도 12A) 및 난소(TOV112D)(도 12B) 마우스 이종이식편 종양을 억제하였다. 종양 리보뉴클레오타이드 환원효소 활성은 또한 종양내 dNTF 풀의 상응하는 감소로 감소되었다(도 12C 및 12D). COH29는 HCC1937 BRCA1 야생형 유방암 세포보다 시험관내에서 HCC1937 BRCA1 결핍 유방암 세포에서(도 13A) 그리고 마우스 유선 지방체 동소이식 종양 이식편에서(도 13B) 유의하게 더 효과적인 것으로 나타났다.

COH29가 BRCA1-돌연변이체 인간 암 세포를 우선적으로 용해시키는 기전을 확인하기 위해, 전장 게놈 마이크로어레이(genome-wide microarray) 분석을 어피메트릭스® 유전자칩® 마이크로어레이 플랫폼을 사용하여 수행하여 COH29 처리에 의해 영향을 받은 유전자 발현 프로파일 및 경로를 확인하였다. COH29 처리된 BRCA1이 결여된 HCC1937 유방암 세포의 RNA 발현 프로파일을 COH29 처리된 HCC1937+BRCA1 세포의 RNA 발현 프로파일과 비교하였다. HCC1937-COH29 및 HCC1937+BRCA1-COH29 세포 모두는 DNA 복구 유전자에 대해 유전자 온톨로지(GO) 강화를 나타내었고(표 1a; 0.0046 - 0.0069 범위의 p-값), 이는 COH29가 DNA 복구 경로를 방해한다는 것을 시사한다. 예를 들어, DNA 복구와 관련된 DNA 결찰(ligation)은 표현형 효과와 관련될 수 있는 HCC1937 세포에서 더 강하게 강화된다. BRCA1 야생형 세포에서, COH29는 DNA 손상 신호전달을 유도하였고, BRCA1 및 Rad51 발현을 억제하였으며, 이는 COH29가 상동 재조합(HR) 경로를 억제하여 COH29 활성화된 DDR(DNA 손상 반응)에 의해 유도된 이중 가닥 파괴(DSB)를 유지할 수 있음을 시사한다.

표 1: COH29 및 다양한 항신생물 처리의 효과의 비교

표 1a. COH29 처리에 의해 하향조절된 유전자의 유전자 온톨로지 강화

유방 및 난소암 환자 코호트에서 공개적으로 이용가능한 유전자 발현 연구를 조사하여 RRM2 및 PARP1 사이의 유전자 발현 상관관계를 확인하였다. 상관관계는 유방암 코호트의 Ivshina 등(30) 연구(n = 289, P = 0, r = 0.56; 도 2A)뿐만 아니라 난소암 코호트의 Anglesio 등(35)으로부터의 연구에서의 RRM2 및 PARP1 유전자 발현 상관관계 분석(n = 90, p = 0, r = 0.62; 도 2B)에서 RRM2 및 PARP1 사이에서 상관관계가 관찰되었다. 선택된 환자 코호트에서의 미래의 유전자형-표현형 상관관계는 전통적인 유방 및 난소 화학요법과 조합된 COH29를 이용한 표적화된 치료에 대한 위험 프로파일을 결정하는데 도움을 줄 수 있다.

COH29가 BRCA1-돌연변이체 인간 암 세포를 우선적으로 용해시키는 기전을 표적 단백질을 확인하는 시도에 의해 탐구하였다. 표적 단백질(들)의 발현 프로파일은 COH29와의 상호작용을 통해 영향을 받을 수 있다. 예를 들어, 표적 단백질에 대한 COH-29의 결합은 프로테아좀 모집을 통해 그의 분해를 유도할 수 있다. 단백질 수준의 변화는 결국 상응하는 유전자의 발현 패턴을 변화시킬 수 있다. 마이크로어레이 분석을 수행하여 COH29 처리의 결과로서 상이하게 발현되는 유전자를 확인하였다. COH29 처리된 BRCA1이 결여된 HCC1937 유방암 세포의 RNA 발현 프로파일을 COH29 처리된 HCC1937+BRCA1 세포의 RNA 발현 프로파일과 비교하였다. 상이하게 발현된 유전자의 클러스터링이 도 2A-2B에 나타나 있다.

COH29가 hPARP1을 억제하였는지 여부를 결정하기 위해, 4시간, 8시간 또는 24시간 동안 COH29로 처리되거나 처리되지 않은 세포의 용해물에서 PARP1 활성을 조사하였다. BRCA1이 결여된 인간 유방암 HCC1937 세포에서 24시간 COH29 배양은 PARP1 활성을 41.08% 감소시킨 반면(처리되지 않은 경우 726177 cps 대 COH29 처리된 경우 427851 cps), 유사하게 처리된 BRCA1을 함유하는 HCC1937+BRCA1 세포에서는 12.66% 감소하였다(처리되지 않은 경우 2336878 cps 대 COH29 처리된 경우 2041097 cps)(도 3A).

COH29에 의한 PARP1의 억제는 UWB1.289 인간 난소암 주에서 더 극적이었다(도 3A). PARP1 활성은 8시간 COH29 처리 후 BRCA1이 결여된 UWB1.289 세포에서 31.79% 감소한 반면(처리되지 않은 경우 113559 cps 대 COH29 처리된 경우 774611), 유사하게 처리된 야생형 BRCA1을 발현하는 UWB1.289+BRCA1 세포에서 46.31% 증가하였다(처리되지 않은 경우 145769 cps 대 COH29 처리된 경우 2129944 cps). 종합하면, 이것은 COH29가 BRCA1 결함 인간 암 세포에서 더 큰 효능으로 PARP1을 억제한다는 것을 나타낸다.

PARP1 단백질 수준에 대한 COH29의 영향을 또한 조사하였다. 24시간 동안 COH29로 처리하는 것은 HCC1937 BRCA1 결함 유방암 세포에서 PARP1 단백질을 약화시켰고, HCC1937-BRCA1 야생형 세포에서 적은 정도로 PARP1 단백질을 약화시켰다(도 3B). 4시간 COH29 처리의 경우 감소가 거의 관찰되지 않았다. 대조적으로, 4시간 동안 ABT-888 처리는 그들의 BRCA1 상태에 관계없이 HCC1937 세포에서 PARP1의 유의한 감소를 초래하였다(도　3B).

BRCA1-돌연변이체 세포 배경에서 PARP1 억제를 통해 달성된 합성 치사는 DNA 손상 약물의 세포독성을 증대시킬 수 있다(18). COH29에 의한 PARP1의 억제가 BRCA1 결함 인간 암 세포에서 시스플라틴의 세포독성을 향상시키는지 여부를 조사하였다. 시스플라틴은 널리 사용되는 화학치료제로서 그의 항암 활성은 주로 표적 세포에서의 DNA 가교에 기인한다. 야생형 BRCA1을 발현하는 인간 유방암 주 HCC1937(HCC1937+) 또는 대조군 형질감염(HCC1937) 세포의 안정한 형질감염체를 24시간 동안 COH29 및 시스플라틴으로 동시에 처리하였다. 2개의 약물로 처리 후 HCC1937+BRCA1 세포와 비교할 때 HCC1937 세포에서 생존가능성의 유의한 감소가 발생하였다(도 4A). 동시에 수행된 대조군 실험은 COH29 단독 또는 시스플라틴 단독을 이용한 단일 처리가 2개의 세포주에 대해 덜 유사한 수준의 영향을 야기한다는 것을 보여주었다(도 4B; 또한 표 3 참고). 추가의 상승효과가 COH29 및 젬시타빈 또는 γ-조사 사이에서 관찰되었다(표 2).

표 2: COH29와 다양한 항신생물 처리와의 상승효과

RR 억제 약물 하이드록시우레아는 유전독성인 것으로 알려져 있다(36, 37). 유사한 결과가 COH29에 대해 예상되는데, 그것이 또한 RR을 억제하기 때문이다. 인간 세포에서, 이러한 손상은 세포 주기 진행을 중단시키기 위해 DNA 손상 체크포인트를 활성화시켜 복구를 위한 시간을 준다. 임의의 특정 이론에 의해 구속되지 않으면서, DNA 손상에 의해 개시된 신호전달은 초기에 '운동 실조증(ataxia-telangiectsia) 돌연변이된'(ATM) 및 'ATM 및 Rad 3 관련된'(ATR)에 의해 매개된다. Chk1 및 Chk2는 신호전달 사건에 대한 하류 키나아제를 나타내며, 이는 Cdc25 포스파타아제를 인산화한다. Cdc25의 억제는 결국 Cdk/사이클린 복합체를 억제하여, 세포 주기 정지를 초래한다(39). DNA 손상 체크포인트에 대한 COH29 처리의 효과를 평가하기 위해, p53 상태가 상이한 2개의 세포주를 사용하였다. 야생형 p53을 함유하는 MCF7 세포의 COH29 처리는 ATM의 인산화에 의해 입증된 바와 같이 DNA 손상 체크포인트를 활성화시켰다(도 6 좌측 패널). 하류 키나아제 CHK1 및 CHK2가 또한 인산화되었다. p53이 결여된 MCF7 세포(MCF-7 p53-/-)에서, 이들 단백질은 또한 COH29 처리 후 유사하게 변형되었다(도 6 중앙 패널). DNA 손상 후, ATM 또는 ATR은 γ-H2AX를 인산화시켜 복구 단백질을 손상된 DNA의 부위로 모집한다(39). γ-H2AX 수준의 증가가 두 세포주에서 COH29 처리 후 발생하였다. 따라서, COH29 처리는 p53 독립적 방식으로 DNA 손상 체크포인트를 활성화시킨다. 마지막으로, 프로게스테론 수용체, 에스트로겐 수용체 및 Her2 수용체의 감소된 수준을 발현하는 '삼중 음성' 인간 유방암 세포에서 COH29의 영향을 조사하였다(33). MDA-MB-468 세포를 COH29로 처리한 경우, 상기 키나아제에 대한 유사한 활성화 프로파일이 관찰되었다(도 6, 우측 패널).

BRCA1 야생형 세포에서 COH29의 효과를 추가로 평가하였다. 도 7A에 나타낸 바와 같이, COH29는 또한 핵에서 γ-H2AX, 포스포-p53, 및 포스포-ATM의 축적을 유도하였다. 또한, 핵에서 foxo3 및 그의 표적 단백질 p27의 유도가 COH29 처리된 세포에서 관찰되었다(도 7A). 또한, γ-H2AX, 포스포-p53, 및 포스포-ATM은 공초점 면역형광 현미경법에 의해 핵에서 foxo3과 공존하는 것으로 나타났다(도 7B, 7C, 및 7D). 이들 결과는 COH29가 BRCA1 야생형 NSCLC A549 세포에서 DNA 손상을 또한 유도한다는 것을 나타낸다. DNA 이중 가닥 파괴(DSB)는 상동 재조합(HR) 또는 비상동 말단 결합(NHEJ) 경로에 의해 복구될 수 있다. DSB DNA 복구에서 COH29의 역할을 추가로 설명하기 위해, COH29는 세포에서 GFP 기반 염색체 리포터 EJ5-GFP에 의해 NHEJ 복구 효율에 거의 영향을 미치지 않는 것으로 결정되었다(도 8A-8B). 그러나, HR 복구를 담당하는 중요 단백질 Rad51의 발현에 대한 COH29의 효과는 웨스턴 분석에 의해 BRCA1 야생형 NSCLC A549 세포의 핵에서 하향조절되었다(도 7A). 또한, COH29는 세포에서 DSB 마커 γ-H2AX의 축적과 함께, BRCA1 및 Rad51 초점 형성의 단백질 수준을 억제하였고(도 9A 및 9B), 이는 COH29가 BRCA1 야생형 A549 세포에서 HR 경로의 하향조절에 의해 DNA 손상 반응(DDR) 유도된 DSB를 연장시킬 수 있음을 시사한다.

COH29의 유전독성을 평가하기 위해, 야생형 제브라피쉬 배아를 1 내지 7 dpf(수정후 일)에 다양한 용량의 COH29(0-100 μM)으로 처리하였고, 발달 결함을 유발하는 것으로 알려진 HU(0-50 mM)로 유사하게 처리된 배아와 비교하였다. 예상한 바와 같이, HU는 4 dpf에 눈 및 심장에서 결함을 유발하였고(도 5A), 돌연변이체 배아의 수의 용량 의존적 증가를 초래하였다(도 5B). 대조적으로, 발달 결함(도 5C) 또는 생존력의 감소(도 5D)는 COH29의 존재하에 관찰되지 않았다.

본원에서, COH29는 시험관내 및 생체내 연구 모두에서 BRCA1 야생형 세포주보다 BRCA1-결핍에서 더 활성인 것으로 관찰되었다. BRCA1은 DNA 손상에 대한 세포 반응의 매개자 중 하나이다. 따라서, 본원에서 수행된 COH29 처리된 BRCA1 결핍 및 BRCA1 야생형 세포의 상이한 유전자 발현 분석은 추가의 억제된 단백질로서 PARP1을 확인하였다. COH29는 DNA 손상제인 시스플라틴의 활성을 증가시켰다. COH29는 p53 독립적 방식으로 DNA 손상 체크포인트를 활성화시키고, 상기 핵 Rad51은 하향조절된다.

인간 세포에서, 시스플라틴에 의해 형성될 수 있는 가교와 같은 DNA에 대한 손상은 정상적으로 BER 경로를 통해 복구된다. RR이 복구에 필요한 dNTP를 제공하므로, 효소는 S 단계 동안 발생하는 BER에 밀접하게 관련된다. G1 단계에서, p53-유도성 서브유닛 p53R2는 BER를 위한 dNTP를 제공한다. COH29에 의한 RR의 억제는 생체내에서 dNTP 고갈을 유발하는 것으로 보고되었다(6).

HR 복합체 단백질 Rad51의 억제를 나타내는 본 발명자들의 데이터에 의해 제시된 바와 같이, COH29는 이중 가닥 DNA 파손 복구에 영향을 미칠 수 있다. 이것은 COH29가 세포내에서 Rad51 단백질의 수준의 약화를 유발한다는 관찰에 의해 표시된다(도 7A). DNA 손상에 반응하여, RAD51은 시토졸에서 핵으로 이동하여 ssDNA 상에 핵섬유(nucleofilament)를 형성하며, 이는 HR 경로를 촉진하는 중요한 단계이다(45,46). 처리되지 않은 세포에서, 대부분의 Rad51은 시토졸에서 발현된다(도 7B, 상부 패널). COH29에 대한 노출에 반응하여 극적으로 감소된 Rad51과 함께 핵에서 유의하게 증가된 γ-H2AX 발현은 Rad51이 COH29 유도된 DSB에서 역할을 할 수 있음을 시사한다. Rad51에 대한 COH29의 이러한 효과는 복제 분기점(replication fork)을 정지시키는 것으로 알려진 HU에 대해 문서화된 것과 유사하며(47), COH29가 HU보다 20배 더 강력하고(6), 눈에 띄게 유전독성이 아니라는 중요한 차이가 있다(도 5A-5D).

또한, COH29는 또한 또 다른 중요한 HR 성분인 BRCA1을 억제하였다. PARP의 억제는 E2F4 및 p130에 의해 매개된 BRCA1 및 RAD51 발현을 하향조절하는 것으로 보고되었다(48). HR DNA 복구 기구를 방해하는 억제제를 개발하는 것(51)은 매력적으로 되었는데, 상승된 Rad51 발현이 많은 유형의 암에서 관찰되어 왔고, 불량한 예후 및 약물 내성과 상관관계가 있기 때문이다(52,53). Rad51 발현 수준을 상향조절하는 것에 의한 HR 능력의 증가가 PARP 억제제에 대한 암 세포의 내성을 유발할 수 있음이 보고되었다(54). BRCA1 결함 세포에서도, 53BP1의 손실은 부분적인 HR 복구를 허용하고 PARP 억제제에 대한 획득된 내성을 매개할 수 있다(55). COH29에 의해 유도된 그의 발현 수준을 하향조절함으로써 Rad51 기능을 불활성화시키는 것은 암에 대한 잠재적 요법으로서 작용할 수 있다. 본 발명자들의 데이터는 COH29가 세포에서 BER, NER, 및 HR 복구 경로를 방해할 수 있음을 보여주며, 이는 COH29가 유전적 배경 또는 PARP 억제제에 대한 내성에서 비롯되는 백업 DNA 복구를 표적화할 수 있음을 시사한다.

합성 치사 또는 다른 수단을 통해 DNA 손상 약물의 효능을 증가시키는 것은 생체내에서 DNA 복구 능력을 억제함으로써 이들 약물의 돌연변이유발 잠재성을 증가시킬 위험이 있다. dsB 복구 경로의 경우, POLD1의 불활성화(상기 참고)가 결장직장 선종 및 암종을 유발하는 것으로 나타났다(49). RAD51의 다형성은 특정 인간 암 유형의 발병과 관련된다(50). 그럼에도 불구하고, 본원의 데이터는 COH29 처리가 HU와 달리 제브라피쉬의 배아 발달 동안 가시적인 형태학적 기형을 만드는 것 같지 않다는 것을 나타내었다. 본원에 기재된 진전은 인간 암을 치료하기 위한 현재의 전략의 추가적인 개선으로 이어질 수 있다. 다양한 인간 유방암 세포에 대한 COH-29의 효과가 표 3에 나타나 있다.

표 3. 유방암 세포주에 대한 COH29 , 시스플라틴 , 및 파클리탁셀의 효과.

임상 연구

첫 인간 I상, 단일 부위, 용량 상승, 안정성 연구. COH29에 대한 실험 설계 계획이 도 14에 나타나 있다.

포함 기준: (1) 표준 요법에 불응성이거나 이를 위한 표준 요법이 존재하지 않는 진행된, 조직학적으로 확인된 고형 종양을 갖는 18세 이상의 남성 및 여성 환자; (2) 환자는 측정가능하거나 평가가능한 질병을 가지고 있어야 함; (3) 환자가 골수의 ≤ 30%를 포함하는 이전 방사선 요법을 받은 경우 들어올 수 있음; (4) 환자는 등록 전 ≥4주 동안 임상적으로 안정한 치료된 뇌 전이의 이력을 가지고 등록될 수 있음; (5) ≤ 2의 ECOG 성능 상태; (6) 치료하는 임상의사 평가에 의해 결정된 바와 같이 12주가 넘는 기대 수명; 및 (7) 표준 실험실 평가에 따른 적절한 장기 기능.

배제 기준: (1) 환자는 연구 치료 개시 전에 4주 이상 동안 이전 화학요법 또는 방사선을 받지 않아야 함; (2) 알약을 삼킬 수 없거나 삼키지 않으려는 환자; (3) 지난 3개월 이내에 심근 경색을 포함하는 활동성 심장 질병, 증상이 있는 관상 동맥 질환 또는 심장 차단, 또는 제어되지 않는 울혈성 심부전; 및 (4) 임신 중이거나 활발히 수유중인 여성.

인간에서 최대 안전 시작 용량은 FDA 지침 및 다음 단계에 기초하여 계산된다: 단계 1 - 부작용 수준이 관찰되지 않음(NOAEL)을 결정한다; 단계 2 - 인간 등가 용량 계산(HED); 단계 3 - 가장 적절한 종으로부터 HED의 선택; 및 단계 4 - 안전성 인자를 적용(표준은 10으로 나눔). 신체 표면적에 기초한 동물 용량의 인간 등가 용량으로의 전환이 하기 표 4에 나타나 있다.

표 4. 동물 용량의 인간 등가 용량으로의 전환

전임상 독성학

FDA에 의해 권고된 2종 동물 독성학 연구에서 독성 우려가 관찰되지 않았다. 파일럿 연구에서, 종양 이종이식편의 성장을 억제하는 것으로 관찰된 최저 용량은 IL2-rg(KO)/NOD-Scid 마우스에서 매일 경구 투여에 의해 50　mg/kg이었다. 용량이 10 또는 21일에 독성을 나타내지 않은 10x에 동등한 용량에서 랫트 및 개에서의 독성 연구. 이들 결과가 하기 표 5에 나타나 있다.

표 5. 랫트 및 개에서의 COH29 독성 연구

임상 연구에 사용된 용량 수준이 하기 표 6에 나타나 있다. 매일 280 mg의 용량은 랫트에서 250 mg/kg/일 NOAEL(더 민감한 종) 대 개에서 84 mg/kg/일의 HED의 약 10분의 1이다.

표 6. COH29 용량 수준

가속화된 적정 단계 I 설계가 도 15에 나타나 있다. 2개의 중등도 독성 또는 1개의 용량 제한 독성(DLT)이 발생하면, 환자내 용량 상승이 허용되고 설계가 표준 3 + 3으로 되돌아간다.

DLT 정의와 관련하여, ≥3 등급 비혈액학적 독성은 하기 설명으로 용량 제한으로 간주될 것이고: 3등급 설사는 그것이 치료에 불응성이고 24시간 이내에 1등급 이하로 교정될 수 없는 경우에만 용량 제한으로 간주될 것이다. 혈성 설사 또는 4등급 설사는 용량 제한일 것이고; 3등급 구역질 및 구토는 그것이 구토방지 요법에 불응성이고 24시간 이내에 1등급 이하로 교정될 수 없는 경우에만 용량 제한으로 간주될 것이며; IV 액으로 24시간 이내에 1등급 이하로 교정되지 않는, 크레아틴의 3등급 상승은 용량 제한으로 간주될 것이다. 크레아틴의 모든 4등급 상승은 용량 제한일 것이고; 24시간 이내에 1등급 또는 기준선으로 교정될 수 없는 3등급 전해질 독성은 용량 제한으로 간주될 것이다. 종양 통증은 그것이 진통제를 이용한 최적 치료에 불응성이지 않는 한 용량 제한으로 간주되지 않을 것이다. 4등급과 관련하여, 다음이 고려될 것이다: 4등급 혈소판감소증; 5일 이상 지속되는 4등급 호중구감소증 또는 열성 호중구감소증; 4등급 용혈; 미해결 독성의 결과로서 > 2주 치료 지연; 및 임의의 정도의 빈혈, 5일 이상 지속되는 4등급 호중구감소증의 부재하에 백혈구감소증, 또는 림프구감소증은 용량 제한으로 간주되지 않을 것이다.

최대 용량 수준은 동물 연구에서 달성된 가장 높은 수준에 상응하는 2400 mg/일(용량 수준 8)로 제한된다. 투여가 동물 독성학 연구에서 관찰된 최대 수준인 5000 hr·ng/mL의 AUC를 초과하지 않는다는 것을 보장하기 위해 PK 모니터링을 수행하였다. 용량 수준이 밝혀지면 환자내 용량 상승이 허용된다.

첫 번째 환자는 용량 수준 1(매일 2회 100 mg)에 등록되었고, 임의의 DLT 없이 치료되었다. 두 번째 환자는 용량 수준 3(매일 2회 200 mg)에 등록되었고, 2등급 피부 발진의 중등도 독성을 가지고 있었다. 세 번째 환자는 용량 수준 5(매일 2회 400 mg)에 등록되었고, 임의의 DLT 없이 치료되었다. 네 번째 환자는 용량 수준 7(매일 2회 800 mg)에 등록되었고, 2등급 설사의 중등도 독성을 가지고 있었다. 시험은 이제 표준 3+3 용량 상승 설계로 전환된다. 다섯 번째 환자는 용량 수준 7에 등록되었다. 여섯 번째 환자는 용량 수준 7에서 스크리닝 중이다. 현재까지 FDA에 의해 설정된 AUC 안전성 임계값을 초과하지 않는 사이클 1에서 모든 환자에 대해 실시간 PK 모니터링을 수행하였다.

환자는 28일 주기의 21일 동안 매일 2회 경구 COH29를 받는다. 용량 수준은 투여일당 200 내지 2400 mg의 범위이다. 가속화된 용량 결정 단계 동안 용량 수준의 생략을 허용하는(용량 배가) 시몬(Simon)의 가속화된 적정 설계를 이용하여 용량 상승을 계속한다. PD 평가는 세포자멸사 정도를 결정하기 위한 혈장 CK18 수준의 측정, RNR 억제를 평가하기 위한 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 dNTP 풀 수준의 평가, 뿐만 아니라 PARP 억제를 평가하기 위한 PBMC에서 PAR 발현의 측정을 포함한다. 이중 색상 면역조직화학을 사용한 종양 RRM2 발현의 정량은 COH29에 대한 항종양 반응의 예측 바이오마커로서 탐구된다.

넘버링된 구현예

1. 암의 치료를 필요로 하는 피험체에서 암을 치료하는 방법으로서, 하기 구조를 갖는 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하고,

,

상기 유효량은 투여일당 적어도 약 50 mg인 것인 방법.

2. 제1 구현예에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 50 mg 내지 투여일당 약 2400 mg인 것인 방법.

3. 제1 또는 제2 구현예에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 100 mg 내지 투여일당 약 2400 mg인 것인 방법.

4. 제1 내지 제3 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 200 mg 내지 투여일당 약 2400 mg인 것인 방법.

5. 제1 내지 제3 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 100 mg인 것인 방법.

6. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 200 mg인 것인 방법.

7. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 300 mg인 것인 방법.

8. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 400 mg인 것인 방법.

9. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 500 mg인 것인 방법.

10. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 600 mg인 것인 방법.

11. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 700 mg인 것인 방법.

12. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 800 mg인 것인 방법.

13. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 900 mg인 것인 방법.

14. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1000 mg인 것인 방법.

15. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1100 mg인 것인 방법.

16. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1200 mg인 것인 방법.

17. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1300 mg인 것인 방법.

18. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1400 mg인 것인 방법.

19. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1500 mg인 것인 방법.

20. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1600 mg인 것인 방법.

21. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1700 mg인 것인 방법.

22. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1800 mg인 것인 방법.

23. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1900 mg인 것인 방법.

24. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 2000 mg인 것인 방법.

25. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 2100 mg인 것인 방법.

26. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 2200 mg인 것인 방법.

27. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 2300 mg인 것인 방법.

28. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 2400 mg인 것인 방법.

29. 제1 내지 제4 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 2500 mg인 것인 방법.

30. 제1 내지 제29 구현예 중 어느 하나에 있어서, 방법은 상기 화합물을 21일 동안 매일 투여한 후, 7일 동안 상기 화합물을 투여하지 않는 것을 포함하는 치료 과정을 포함하는 것인 방법.

31. 제1 내지 제30 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 치료 과정은 28일마다 반복되는 것인 방법.

32. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 1회인 것인 방법.

33. 제32 구현예에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 100 mg 또는 투여일당 약 200 mg인 것인 방법.

34. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 2회인 것인 방법.

35. 제34 구현예에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 300 mg 또는 투여일당 약 400 mg인 것인 방법.

36. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 3회인 것인 방법.

37. 제35 구현예에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 600 mg인 것인 방법.

38. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 4회인 것인 방법.

39. 제38 구현예에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 800 mg인 것인 방법.

40. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 5회인 것인 방법.

41. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 6회인 것인 방법.

42. 제41 구현예에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1200 mg인 것인 방법.

43. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 7회인 것인 방법.

44. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 8회인 것인 방법.

45. 제44 구현예에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 1600 mg인 것인 방법.

46. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 9회인 것인 방법.

47. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 10회인 것인 방법.

48. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 11회인 것인 방법.

49. 제1 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 하루에 12회인 것인 방법.

50. 제49 구현예에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 2400 mg인 것인 방법.

51. 제1 내지 제50 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 피험체는 고형 종양 암 피험체인 것인 방법.

52. 제1 내지 제51 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 피험체는 유방암 피험체 또는 난소암 피험체인 것인 방법.

53. 제1 내지 제52 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 피험체는 불응성 고형 종양 암 피험체인 것인 방법.

54. 제51 또는 제53 구현예에 있어서, 상기 피험체는 유방암 피험체인 것인 방법.

55. 제54 구현예에 있어서, 상기 유방암 피험체는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체인 것인 방법.

56. 제1 내지 제55 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 DNA 복구를 억제하는 것인 방법.

57. 제1 내지 제55 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 염기 절단 복구(BER), 뉴클레오타이드 절단 복구(NER) 또는 이중 가닥 DNA 파손 복구를 억제하는 것인 방법.

58. 제1 내지 제55 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 γ-H2AX 단백질 활성 또는 발현을 증가시키는 것인 방법.

59. 제1 내지 제55 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 Rad51 단백질 활성 또는 발현을 낮추는 것인 방법.

60. 제1 내지 제55 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 BRCA1 단백질 활성 또는 발현을 낮추는 것인 방법.

61. 제1 내지 제55 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 PARP1 단백질 활성 또는 발현을 낮추는 것인 방법.

62. 약학적으로 허용되는 부형제 및 하기 구조를 갖는 화합물을 포함하는 약학 조성물로서:

,

상기 화합물은 적어도 약 50 mg의 양으로 존재하는 것인 약학 조성물.

63. 제62 구현예에 있어서, 상기 유효량은 약 50 mg 내지 약 1000 mg인 것인 약학 조성물.

64. 제62 또는 제63 구현예에 있어서, 상기 양은 약 50 mg 내지 약 500 mg인 것인 약학 조성물.

65. 제62 내지 제64 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 양은 약 50 mg 내지 약 400 mg인 것인 약학 조성물.

66. 제62 내지 제65 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 양은 약 50 mg 내지 약 300 mg인 것인 약학 조성물.

67. 제62 내지 제66 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 양은 약 50 mg 내지 약 200 mg인 것인 약학 조성물.

68. 제62 내지 제67 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 양은 약 100 mg 내지 약 200 mg인 것인 약학 조성물.

69. 제62 내지 제68 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 양은 약 50 mg, 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 또는 약 500 mg인 것인 약학 조성물.

70. 제62 내지 제69 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 약학 조성물은 경구 약학 조성물인 것인 약학 조성물.

71. 제62 내지 제70 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 경구 약학 조성물은 정제 또는 캡슐인 것인 약학 조성물.

72. 제62 내지 제71 구현예 중 어느 하나의 약학 조성물을 21일 동안 매일 분배한 후, 7일 동안 상기 약학 조성물을 투여하지 않도록 구성된 분배 장치를 포함하는 키트.

73. 제72 구현예에 있어서, 상기 분배 장치는 하루에 1 내지 6개의 약학 조성물 투여량을 분배하도록 구성되는 것인 키트.

74. 제72 또는 제73 구현예에 있어서, 상기 키트는 상기 약학 조성물을 투여하지 않는 7일 동안 매일 투여를 위해 7개의 위약 제제 투여량 단위를 추가로 포함하는 것인 키트.

75. 제1 내지 제50 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 피험체는 혈액학적 암 피험체인 것인 방법.

76. 제1 내지 제50 및 제75 구현예 중 어느 하나에 있어서, 상기 피험체는 백혈병 암 피험체인 것인 방법.

SEQUENCE LISTING <110> City of Hope Chao, Joseph Horne, David Frankel, Paul <120> Treatment of Cancer <130> 048440-648001WO <150> 62/455,430 <151> 2017-02-06 <150> 62/511,747 <151> 2017-05-26 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polynucleotide <400> 1 ucacaguguc cuuuaugua 19 <210> 2 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polynucleotide <400> 2 uacauaaagg acacuguga 19 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polynucleotide <400> 3 aggaattgcg ggaggaaaat gggt 24 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polynucleotide <400> 4 gccccctgaa gatctttctg tcct 24

Claims (21)

1. 암의 치료를 필요로 하는 피험체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 하기 구조를 갖는 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 상기 유효량은 투여일당 적어도 약 50 mg인 것인 치료 방법.
   

   
2. 제1항에 있어서, 상기 유효량은 투여일당 약 50 mg 내지 투여일당 약 2400 mg인 것인 치료 방법.
3. 제1항에 있어서, 21일 동안 매일 상기 화합물을 투여한 후, 7일 동안 상기 화합물을 투여하지 않는 것을 포함하는 치료 과정을 포함하는 것인 치료 방법.
4. 제3항에 있어서, 상기 치료 과정은 28일마다 반복되는 것인 치료 방법.
5. 제1항에 있어서, 상기 투여는 하루에 1회인 것인 치료 방법.
6. 제1항에 있어서, 상기 피험체는 고형 종양 암 피험체인 것인 치료 방법.
7. 제6항에 있어서, 상기 피험체는 유방암 피험체 또는 난소암 피험체인 것인 치료 방법.
8. 제1항에 있어서, 상기 피험체는 불응성 고형 종양 암 피험체인 것인 치료 방법.
9. 제6항에 있어서, 상기 피험체는 유방암 피험체인 것인 치료 방법.
10. 제9항에 있어서, 상기 유방암 피험체는 BRCA1 결함 피험체, PARP1 억제제 내성 피험체 또는 DNA 손상 항암제 내성 피험체인 것인 치료 방법.
11. 제1항에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 DNA 복구를 억제하는 것인 치료 방법.
12. 제1항에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 염기 절단 복구(BER), 뉴클레오타이드 절단 복구(NER) 또는 이중 가닥 DNA 파손(break) 복구를 억제하는 것인 치료 방법.
13. 제1항에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 γ-H2AX 단백질 활성 또는 발현을 증가시키는 것인 치료 방법.
14. 제1항에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 Rad51 단백질 활성 또는 발현을 낮추는 것인 치료 방법.
15. 제1항에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 BRCA1 단백질 활성 또는 발현을 낮추는 것인 치료 방법.
16. 제1항에 있어서, 상기 투여는 상기 피험체에서 PARP1 단백질 활성 또는 발현을 낮추는 것인 치료 방법.
17. 약학적으로 허용되는 부형제 및 하기 구조를 갖는 화합물을 포함하는 약학 조성물로서, 상기 화합물은 적어도 약 50 mg의 양으로 존재하는 것인 약학 조성물.
    

    
18. 제17항에 있어서, 상기 유효량은 약 50 mg 내지 약 1000 mg인 것인 약학 조성물.
19. 제17항의 약학 조성물을 21일 동안 매일 분배한 후, 7일 동안 상기 약학 조성물을 투여하지 않도록 구성된 분배 장치를 포함하는 키트.
20. 제1항에 있어서, 상기 피험체는 혈액학적 암(hematological cancer) 피험체인 것인 치료 방법.
21. 제20항에 있어서, 상기 피험체는 백혈병 암 피험체인 것인 치료 방법.

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