KR20190103808A - 고장초 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 고장초 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물이 제공된다.

Description

고장초 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물{AN ANTIMICROBIAL COMPOSITION COMPRISING ZIZANIA LATIFOLIS EXTRACT}

본 발명은 고장초 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부로부터 개체를 보호하는 장벽기능이라는 매우 중요한 역할을 수행한다.

장벽기능은 외부로부터의 다양한 자극(화학물질, 대기오염물질, 건조한 환경, 자외선 등)에 대한 방어와 피부를 통한 체내 수분의 과도한발산을 막는 보호 기능이며, 보호기능은 각질형성세포로 구성된 각질층이 정상적으로 형성되어 있을 경우에만 그 기능을 유지할 수 있다.

피부는 표피와 진피로 이루어져 있고 표피층의 바깥층은 죽은 각질세포(corneocyte), 안층은 살아있는 케라티노사이트(keratinocyte)로 이루어져 있다. 세분하면 기저층(basal layer), 유극층(spinous layer), 과립층(granular layer) 및 각질층(cornified layer)의 네층으로 나누어진다.

케라티노사이트는 표피의 90%를 차지하고 나머지는 멜라닌 세포, T 림프구, 특수 마크로파지(macrophage)인 랑거한스 세포(Langerhans cell), 신경전달물질 분비세포인 머켈 세포(Merkel cell) 등이 존재한다.

케라티노사이트는 표피와 진피 사이의 기저층(basement membrane)에 접한 작은 세포들(즉, 기저세포들)로서, 분화가 시작되면 크기가 커지고 세포질의 형태가 바뀌며 예정된 프로그램에 따라 표피의 윗층으로 이동하면서 사멸한다.

황색포도상구균(Staphylococcus aureus)은 감염을 통해 순한 피부 감염에서부터 심내막염, 골수염, 세균혈증, 패혈증, 및 높은 사망률을 동반하는 다양한 질병들을 유발할 수 있다.

많은 연구 결과에서 아토피 환자의 90%가 피부에 포도상 구균(Staphylococcus aureus)이 집적되어 번식하고 있으며, 아토피 환자의 상피세포에 포도상구균의 감염되어 있음이 보고되고 있다.

그러나 아토피 환자의 상피세포에 포도상구균이 감염 및 번식하는 기전은 명확하지 않다.

아토피성 질환 부모의 소아에서 아토피성 피부염의 빈도가 높아 유전적인 소인이 있는 것으로 추정되고, 아토피성 피부염을 가지고 있는 모체로부터 수유기간이 증가할수록 아토피성 피부염의 발생 빈도도 증가하는 것으로 알려지고 있다.

한편, 고장초(Zizania latifolia)는 벼과에 속하는 여러해살이 풀로 줄 또는 줄풀이라고도 불리우며, 한의학에서는 고혈압, 중풍, 변비, 비만, 동맥경화 등의 효과가 있다고 알려져 있다.

그러나, 아직까지 고장초 추출물을 처리하여 피부염을 개선하고자 한 시도는 이루어진 바 없으며, 본 발명자들은 피부염을 유발하는 황색포도상구균을 효과적으로 억제하는 천연 물질을 개발하기 위해 예의 노력한 결과, 고장초 추출물이 황색포도상구균에 대한 항균활성을 갖는 동시에 항균성 펩타이드의 발현을 촉진함으로써 피부염을 극적으로 개선할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 고장초 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물 및 이의 용도를 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 고장초 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물이 제공된다.

일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 박테리아, 바이러스 또는 곰팡이에 대한 항균 활성을 가질 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli), 녹농균(pseudomonas aeruginosa), 또는 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 항균 활성을 가질 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 하나 이상의 항균제를 더 포함할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 항균제는 아미카신, 젠타마이신, 토브라마이신, 스트렙토마이신, 네틸마이신, 카나마이신, 시프로플록사신, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 로메플록사신, 레보플록사신, 에녹사신, 나프티리딘, 술폰아미드, 폴리믹신, 클로르암페니콜, 네오마이신, 파라모모마이신, 콜리스티메테이트, 박시트라신, 반코마이신, 테트라사이클린, 리팜핀, 시클로세린, 베타-락탐, 세팔로스포린, 암포테리신, 플루코나졸, 플루시토신, 나타마이신, 미코나졸, 케토코나졸, 코르티코스테로이드, 디클로페낙, 플루르비프로펜, 케토롤락, 수프로펜, 코몰린, 로독사미드, 레보카바스틴, 나파졸링, 및 안타졸린으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 조성물을 포함하는 피부염 개선용 화장료 조성물이 제공된다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 조성물을 포함하는 피부염 개선용 외용제 조성물이 제공된다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 조성물을 포함하는 피부염 치료용 약학 조성물이 제공된다.

본 발명에 따르면, 상기 조성물은 인체 안전성이 우수할 뿐만 아니라 피부염을 유발하는 원인균에 대한 항균 효과가 우수하므로 피부염 개선 및 치료를 위한 다양한 용도로서 활용 가능하다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 고장초 추출물을 HaCaT cells에 처리하여 hBD2의 mRNA 발현을 확인한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 고장초 추출물을 HaCaT cells에 처리하여 hBD2 단백질의 발현을 확인한 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 고장초 추출물을 HaCaT cells에 처리하였을 때 세포 내로 감염된 황색포도상구균의 수를 정량한 결과이다.
도 4는 hBD-2의 발현을 막은 후 본 발명의 일 실시예에 따른 고장초 추출물을 HaCaT cells에 처리하였을 때 세포 내로 감염된 황색포도상구균의 수를 정량한 결과이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 고장초 추출물을 HaCaT cells에 처리하였을 때 세포독성을 확인한 그래프이다.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.

어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 구비할 수 있다는 것을 의미한다.

본 명세서에 포함되는 용어를 포함하는 다양한 과학적 사전이 잘 알려져 있고, 당업계에서 이용 가능하다. 본 명세서에 설명된 것과 유사 또는 등가인 임의의 방법 및 물질이 본원의 실행 또는 시험에 사용되는 것으로 발견되나, 몇몇 방법 및 물질이 설명되어 있다. 당업자가 사용하는 맥락에 따라, 다양하게 사용될 수 있기 때문에, 특정 방법학, 프로토콜 및 시약으로 본 발명이 제한되는 것은 아니다.

이하, 첨부한 도면을 참조하여 본 발명을 설명하기로 한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며, 따라서 여기에서 설명하는 실시예로 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 고장초 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물이 제공된다.

상기 “유효성분으로 포함하는”은 항균 효과를 나타낼 수 있는 것으로, 피부의 황색포도상구균의 감염을 억제하는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미할 수 있다.

상기 “고장초(Zizania latifolia)”는 벼과에 속하는 여러해살이 풀로 줄 또는 줄풀이라고도 불리운다. 상기 고장초는 당뇨병, 고혈압, 중풍, 심장병, 변비, 비만, 동맥경화 등 여러 가지 질병에 뛰어난 효과가 있으며, 인체의 면역력을 키우는 데에도 뛰어난 효과가 있다고 알려져 있다.

그러나, 상기 고장초의 효능은 단지 민간에서만 인식되어 왔으며 과학적인 근거는 거의 없는 실정이나, 최근 들어 그 효능과 식품에의 응용에 관심이 증가되고 있으며, 본 발명자들은 상기 고장초 추출물의 우수한 항균 활성을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기 “추출물”은 용매와 추출 원료를 특정 조건 하에서 접촉시킴으로써 추출 원료에 함유된 유효성분이 전이된 용매를 지칭하는 것으로, 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 분리해낸 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다. 예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출한 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다.

상기 추출물은 정제수, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 및 1,3-부틸렌글라이콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출될 수 있고, 상기 알코올은 60 내지 90% 농도(v/v)의 에탄올일 수 있다.

상기 원료에 포함된 유효 성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있으며, 상기 에탄올은 천연 원료의 생리 활성 물질 추출에 있어서 선택성이 뛰어나므로 상기 에탄올 추출에 의해 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있다.

상기 추출물은 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 추출물은 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획물을 포함할 수 있다.

상기 조성물은 박테리아, 바이러스 또는 곰팡이에 대한 항균 활성을 가질 수 있고, 구체적으로 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli), 녹농균(pseudomonas aeruginosa), 또는 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 항균 활성을 가질 수 있다.

항균성 펩타이드(AMPs)는 작은 분자량을 가진 단백질로 박테리아, 바이러스 및 곰팡이와 같은 병원균에 의한 감염을 예방하는 항균 활성을 갖는다(Ganz T et al., Cwrr . Opin . Immunol . (1994), 6, 584-589).

상기 항균성 펩타이드는 혈관신생, 창상치유 및 화학주성을 유도하는 것으로 보고되고 있으며(Izadpanah A et al., J. Am. Acad . Dermatol . (2005), 52, 381-390), 양전하를 띠면서 친수성 및 소수성 부위를 동시에 가지고 있는 구조적인 특징이 있다.

상기 항균성 펩타이드로 알려진 인간 베타 디펜신 2(Human beta-defensin, HBD-2)의 발현 감소로 인해 포도상구균이 비정상적으로 증식하며, 건선 환자와 비교하여 아토피성 피부염 환자에서 인간 베타 디펜신 2의 발현이 현저히 감소되는 것으로 보고된 바 있다(Ong P. Y. et al., N. Engl . J. Med . (2002), 347, 1151-1160).

베타 디펜신은 각각 약 41-50개의 아미노산으로 이루어져 있으며 인간 혈청에서 11개의 아형이 생화학적으로 동정되었고(Biochemistry and Molecular Biology News, 1-7, 2006), 인간 유전체 프로젝트의 완성 후 총 28개의 인간 베타 디펜신 및 43개의 생쥐 베타 디펜신 유전자가 동정되었다(B.C . Schutte et al., Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 99, 2129-2133, 2002).

HBD-2 및 HBD-4를 포함하는 대부분의 HBDs는 감염과 같은 특정 조건에서만 유도 발현되는 것으로 알려져 있으며(J.M. Schroder et al., Int. J. Biochem. Cell Biol . 31, 645-651, 1999), 상기 베타 디펜신의 발현을 증진시킴으로써 피부에 존재하는 병원균의 활성을 효과적으로 억제할 수 있다.

상기 고장초 추출물은 피부 각질세포(keratinocyte)의 인간 베타 디펜신 2(human beta defensin 2, hBD2)의 발현을 촉진할 수 있고, 상기 인간 베타 디펜신 2는 우수한 항균 활성으로 인해 병원균에 의한 피부 감염을 효과적으로 억제할 수 있다.

상기 인간 베타 디펜신 2는 낮은 농도에서도 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli), 녹농균(pseudomonas aeruginosa), 및 칸디다 알비칸스(Candida albicans)를 사멸시키는 것으로 알려져 있으며(J Harder et al., Nature (1997), 387(6636), 861.), 상기 고장초 추출물은 상기 인간 베타 디펜신 2의 발현을 촉진시켜 다양한 병원균에 의해 유발되는 피부염을 효과적으로 개선할 수 있다.

상기 조성물은 하나 이상의 항균제를 더 포함할 수 있다. 상기 항균제는 아미카신, 젠타마이신, 토브라마이신, 스트렙토마이신, 네틸마이신, 카나마이신, 시프로플록사신, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 로메플록사신, 레보플록사신, 에녹사신, 나프티리딘, 술폰아미드, 폴리믹신, 클로르암페니콜, 네오마이신, 파라모모마이신, 콜리스티메테이트, 박시트라신, 반코마이신, 테트라사이클린, 리팜핀, 시클로세린, 베타-락탐, 세팔로스포린, 암포테리신, 플루코나졸, 플루시토신, 나타마이신, 미코나졸, 케토코나졸, 코르티코스테로이드, 디클로페낙, 플루르비프로펜, 케토롤락, 수프로펜, 코몰린, 로독사미드, 레보카바스틴, 나파졸링, 및 안타졸린으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

기존에 널리 사용되고 있는 일부 항균제는 상기 황색포도상구균 또는 기타 박테리아에 대한 항균 활성을 보유하고 있으나, 과도한 사용으로 인해 내성이 증가하고 있으며 생체 독성으로 인해 그 사용이 제한되므로 사용량을 감소시킬 필요가 있다.

상기 항균제는 상기 고장초 추출물과 복합적으로 적용됨으로써 그 사용량이 현저히 저감될 수 있으며, 상승 효과로 인해 항균 활성이 현저히 개선될 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 조성물을 포함하는 피부염 개선용 화장료 조성물 또는 피부염 개선용 외용제 조성물이 제공된다.

상기 외용제 또는 화장료 조성물은 통상의 방법에 의해 제형화될 수 있다. 외용제의 제형화에 있어서 Remington's Pharmaceutical Science, Mack PublishingCompany, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 화장료 조성물의 제형화에 있어서 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed., The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다.

구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다.

예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 외용제는, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 외용제 또는 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.

상기 외용제 또는 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다.

상기 외용제 또는 화장료 조성물이 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.

상기 외용제 또는 화장료 조성물이 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.

상기 외용제 또는 화장료 조성물이 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.

상기 외용제 또는 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.

다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 조성물을 포함하는 피부염 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다.

상기 피부염은 다양한 병원균의 감염에 의해 유발될 수 있으며, 특히 많은 연구에서 아토피 환자의 90%가 피부에 포도상구균이 집적되어 번식하고 있으며, 아토피 환자의 상피세포에 포도상구균의 감염되어 있음이 알려져 있다.

상기 “예방”은 병리학적 현상의 발생 빈도 또는 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 예방은 완전할 수 있으며 또는 부분적일 수도 있다. 이 경우에는 개체의 병원균에 의해 발생되는 증상이 상기 조성물을 사용하지 않은 경우와 비교하여 감소하는 현상을 의미할 수 있다.

상기 “치료”는 치료하고자 하는 대상 또는 세포의 천연 과정을 변경시키기 위하여 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하며, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위하여 수행할 수 있다.

목적하는 치료 효과는 질병의 발생 또는 재발을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과를 저하시키거나, 전이를 예방하거나, 질병 진행 속도를 감소시키거나, 질병 상태를 경감 또는 일시적 완화시키거나, 예후를 개선시키는 것을 포함할 수 있다.

상기 조성물은 경구적 전달, 비경구적 전달의 형태로 투여될 수 있다. 상기 조성물은 전신 또는 국소 투여될 수 있으며, 상기 투여는 경구 투여 및 비경구 투여를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 적절한 투여 형태를 제공하도록 적합한 양의 약학적으로 허용되는 비히클 또는 담체와 함께 제형화될 수 있다.

상기 조성물은 약학 조성물의 제조에 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화 하여 사용할 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 사용될 수 있고, 상기 고형제제는 상기 화합물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제, 예컨대, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 또는 젤라틴 등을 혼합하여 조제할 수 있다. 또한, 상기 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 사용될 수 있고, 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 외에 여러 가지 부형제, 예컨대 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 사용될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 사용될 수 있다. 상기 비수성용제, 현탁제는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르가 사용될 수 있다. 상기 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴이 사용될 수 있다.

상기 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양이 대상체에 투여될 수 있다. 상기 “약제학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

상기 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 바람직하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.

제조예 : 고장초 추출물 제조

경상북도 경산시 하양읍에서 건조한 고장초(Zizania latifolia Turcz .)를 삼홍건재 약업사(서울시 동대문구 제기동 89-45 1층)에서 구입하였다.

고장초 5kg을 음지에서 건조하고 세절한 후, 80% 에탄올을 이용하여 실온에서 3일 동안 자기 교반기를 교반하면서 추출하였다.

상기 추출물을 여과하고 40 ℃에서 감압농축기를 이용하여 농축하여 검질 덩어리 454g을 수득하였다.

상기 검질 덩어리를 정제수에 현탁한 후, 에틸 아세테이트(3L씩 3회)와 물(3 L)첨가하여 분배 추출하였다. 각 층을 감압 농축하여, 에틸 아세테이트 분획물(97g) 및 물 분획물(340g)을 수득하였다.

실험예 1 : hBD2 발현 확인

(1) 인간 피부 케라티노사이트 준비

인간 피부 케라티노사이트(human skin keratinocyte)인 HaCaT cell을 페니실린(100units/mL), 스트렙토마이신(100㎍/mL), 10% FBS(fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium)를 첨가하여 5% 이산화탄소를 포함하는 37℃ 배양기에서 배양하였다. 상기 케라티노사이트를 6 웰 플레이트(well plate)에 2 mL씩 18시간 배양하고, 실험에 사용하였다.

(2) hBD2의 mRNA level 확인

상기 케라티노사이트에 고장초 추출물을 0, 0.1, 1, 10, 100㎍/mL의 농도로 각각 20 μL씩 무혈청 DMEM 배지(serum free-Dulbecco's Modified Eagle Medium, WelGENE, Inc. 한국)에 첨가하였다.

고장초 추출물을 첨가하고 8시간 후 배양액을 제거한 후 DPBS로 2번 washing하였다. 각각의 웰(well) 에 RNA iso(takara) 1mL을 첨가하여 셀을 lysis시킨 후 RNA perp을 진행하였다.

RNA perp이 종료된 후 kit를 이용하여 cDNA를 합성한 후 real-time PCR 기계를 이용하여 hBD2의 발현을 확인하였다.

도 1을 참조하면, hBD2의 발현은 고장초 추출물 첨가에 따라 농도 의존적으로 증가하였으며, 상기 결과는 고장초 추출물이 hBD2의 발현을 촉진시킴으로써 황색포도상구균의 감염을 억제할 수 있음을 시사한다.

(3) hBD2 단백질 수준 확인

상기 케라티노사이트를 96 웰 플레이트(well plate)에 200μL씩 18시간 동안 배양하였다.

고장초 추출물을 0, 0.1, 1, 10, 100㎍/mL의 농도로 각각 2μL씩 무혈청 DMEM 배지(WelGENE, Inc. 한국)에 첨가하였다. 고장초 추출물을 첨가하고 24, 48시간 후 배양액을 수거하여 hBD2 ELISA kit를 통하여 hBD2의 발현을 확인하였다.

도 2를 참조하면, hBD2 단백질의 수준은 고장초 추출물 첨가에 따라 농도 의존적으로 증가하였으며, 상기 결과는 고장초 추출물이 hBD2의 수준을 증가시킴으로써 황색포도상구균의 감염을 억제할 수 있음을 시사한다.

실험예 2 : 케라티노사이트의 황색포도상구균 감염 확인

(1) 시간 경과에 따른 황색포도상구균 감염 확인

배양한 케라티노사이트를 6웰 플레이트(well plate)에 2mL씩 접종하여 18시간 배양하였다 배양액은 항생제(100units/mL 페니실린, 100 μg/mL 스트렙토마이신)가 제거된 상태의 DMEM 배지(WelGENE, Inc. 한국)를 사용하였다.

고장초 추출물을 100 μg/mL의 농도로 처리한 후 24시간, 48시간 동안 배양하였다.

각각의 웰에 황색포도상구균을 1ⅹ10⁶ cells/ml로 접종한 후 6시간 후에 세포배양액을 제거하고 DPBS로 3회 세척한 뒤 항생제와 10% FBS가 들어간 DMEM배지 2mL과 gentamicin을 50㎍/mL 농도로 처리한 후 24시간 배양하였다.

각 웰의 세포 배양액을 제거하고 DPBS로 2회 세척한 후, 하이포토닉 버퍼(hypotonic buffer)를 1mL씩 첨가하고 10분간 쉐이커에 방치하였다.

10분이 지난 후 각 웰마다 파이펫팅(pipetting)을 한 후 튜브에 넣은 후 12,000rpm으로 2분간 원심 분리하여 셀을 침전시켰다.

하이포토닉 버퍼를 제거한 후 DPBS 1mL을 넣어 파이펫팅 한 용액 100μL를 5% 아가로오스가 포함된 BHI 플레이트에(Brain-Heart Infusion agar plate)에 스프레딩(spreading)하였다.

플레이트는 37°C에서 15시간 가량 배양한 후 생성된 콜로니(colony)를 확인하였다.

도 3을 참조하면, 고장초 추출물 처리 후 시간이 경과함에 따라 생성된 콜로니 수는 점차 감소하였으며, 특히 48시간 경과 후 콜로니 수는 50% 이상 감소하였다.

(2) hBD2를 막은 후 황색포도상구균 감염 확인

배양한 케라티노사이트를 6웰 플레이트(well plate)에 2mL씩 접종하여 18시간 동안 배양하였다

배양액은 항생제가 제거된 상태의 DMEM 배지(WelGENE, Inc. 한국)를 사용하였다.

sihBD2를 24시간 동안 transfection시킨 후 고장초 추출물을 100㎍/ml의 농도로 첨가한 후 24시간 배양하였다. 황색포도상구균을 감염은 상기와 동일한 방법으로 수행하였다.

도 4를 참조하면, hBD2의 발현을 블락킹한 세포의 경우 고장초 추출물 처리 후 시간이 경과함에 따라 생성된 콜로니 수의 변화가 거의 나타나지 않았으며, 상기 결과는 고장초 추출물은 hBD2 발현을 촉진시킴으로써 황색포도상구균의 활성을 억제하는 것임을 시사한다.

실험예 3 : 세포독성 평가

배양한 케라티노사이트를 96웰 플레이트(well plate)에 200μL씩 접종하여 18시간 배양하였다.

고장초 추출물을 0, 0.1, 1, 10, 100, 1000, 5000, 10000㎍/mL의 농도로 각각 2 μL씩 DMEM 배지(WelGENE, Inc. 한국)에 첨가하였다.

각 처리군의 세포 배양액을 제거하고, DPBS로 2회 세척한 후, 세포의 증식이나 생존을 측정하는 방법(Western blot analysis)에서 사용되는 WST-1용액을 1/10로 DMEM 배지에 희석하여 200μL씩 첨가하고 1시간 동안 배양하였다.

마이크로플레이트-리더(microplate-reader)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

대조군은 시료(고장초 추출물)를 첨가하지 않은 배지(media)에 케라티노사이트를 배양한 것을 사용하였다.

도 5를 참조하면, 고장초 추출물의 농도를 1000㎍/mL 이하로 하였을 때 세포 독성은 낮은 수준으로 나타났으나, 농도를 증가시킴에 따라 세포 독성이 일부 확인되었으므로 인체에 적용시 농도를 일정 수준 이하로 제어하는 것이 바람직하다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (8)

1. 고장초 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   박테리아, 바이러스 또는 곰팡이에 대한 항균 활성을 가지는 조성물.
3. 제2항에 있어서,
   황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli), 녹농균(pseudomonas aeruginosa), 또는 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 항균 활성을 가지는 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   하나 이상의 항균제를 더 포함하는 조성물.
5. 제4항에 있어서,
   상기 항균제는 아미카신, 젠타마이신, 토브라마이신, 스트렙토마이신, 네틸마이신, 카나마이신, 시프로플록사신, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 로메플록사신, 레보플록사신, 에녹사신, 나프티리딘, 술폰아미드, 폴리믹신, 클로르암페니콜, 네오마이신, 파라모모마이신, 콜리스티메테이트, 박시트라신, 반코마이신, 테트라사이클린, 리팜핀, 시클로세린, 베타-락탐, 세팔로스포린, 암포테리신, 플루코나졸, 플루시토신, 나타마이신, 미코나졸, 케토코나졸, 코르티코스테로이드, 디클로페낙, 플루르비프로펜, 케토롤락, 수프로펜, 코몰린, 로독사미드, 레보카바스틴, 나파졸링, 및 안타졸린으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 피부염 개선용 화장료 조성물.
7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 피부염 개선용 외용제 조성물.
8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 피부염 치료용 약학 조성물.

Images