KR20190081963A - 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제 - Google Patents
조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 조영제를 제공할 수 있다. 이를 위해, 본 발명에 따른 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 조영제는 혈관 내피세포에 특이적으로 부착하는 특징을 가지는 목표 결합형 물질과 조영물질을 포함할 수 있다.
이때, 상기 목표 결합형 물질은 압타머, 항체, 펩타이드, 효소 및 리셉터로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 바이오리셉터이고, 상기 조영물질은 방사능 조영물질이거나, MRI 또는 초음파 영상의 대조도를 개선하는 물질일 수 있다.
이때, 상기 목표 결합형 물질은 압타머, 항체, 펩타이드, 효소 및 리셉터로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 바이오리셉터이고, 상기 조영물질은 방사능 조영물질이거나, MRI 또는 초음파 영상의 대조도를 개선하는 물질일 수 있다.
Description
본 발명은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 조영제에 관한 것이다. 자세하게, 본 발명은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질; 조영물질; 및 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질과 상기 조영물질을 연결하는 링커;를 포함하는 조영제용 고분자 복합체에 관한 것이다.
혈관 조영검사는 조영제를 주입하여 생체 내 혈관을 X선, 컴퓨터 단층촬영(CT, Computed Tomography), 자기공명영상(MRI, Magnetic Resonance Imaging), 양전자 단층촬영(PET, Positron Emission Tomography) 등을 통하여 보는 검사이다.
혈관 내에 주입된 조영제는 흐르는 혈류에 섞여 혈관을 따라 몸을 순환하게 되며, 그 혈관의 종류로는 동맥, 정맥, 모세혈관 등이 있다. 이러한 조영제는 MRI촬영이나 X선을 이용한 CT촬영, X레이 촬영시에 조직이나 혈관을 볼 수 있게 한다.
이렇게 순환된 조영제는 대부분 신장에서 걸러져 소변으로 배출된다.
그러나, 혈관 조영을 통한 영상 내지 이미지와 같은 정보는 조영제가 혈관 내에 주입된 동안에만 혈관 상태를 확인할 수 있다는 문제점이 있다. 조영제를 투여하는 시간동안에는 조영제를 이용한 혈관 관찰이 가능한 반면, 조영제 투여가 끝난 직후 부터는 본래의 혈류로 인하여 조영제가 바로 소실됨에 따라 관찰 가능한 시간은 3초 이내로, 혈관을 관찰하기 어려운 문제점이 있었다.
혈관 조영술이나 혈관 중재술 시행 중 기록된 영상이나 이미지를 통한 혈관 상태에 관한 정보가 부족한 경우 추가적인 영상이나 이미지가 필요하기 때문에 혈관 내에 조영제를 다시 주입해야 한다는 문제점이 있다. 특히, 혈관에 관한 시술 중에 혈관 상태를 평가하기 위해서는 반복적인 조영제의 사용이 불가피하다는 문제점이 있었다. 이와 같이, 조영제의 재투입이 반복될수록 불필요한 비용이 소모될 뿐만 아니라, 조영제의 과다 사용에 따른 부작용이 증가하게 된다.
조영제의 사용량 증가에 따른 부작용 증가는 의료에서도 큰 문제점으로 알려져 있다. 특히, 혈관 조영술에 사용되는 조영제의 평균 사용량은 컴퓨터 단층촬영(CT)을 위한 조영술에 사용되는 조영제의 평균 사용량보다 크다. 이에 따라, 혈관 조영술은 조영제에 의한 합병증 발생 위험이 상대적으로 높다는 문제점이 있다.
예를 들어, 조영제에 의한 신병증(CIN, Contrast-Induced Nephropathy)은 전체 시술환자의 0 내지 13%에서 발생하며, 당뇨, 고혈압, 심부전, 간경변 환자, 65세 이상의 고령의 환자 등과 같은 고위험군에서는 75% 이상이 합병증을 나타낸다.
이러한 조영제에 의한 부작용에 대한 특별한 치료방법은 없으며, 수액의 공급 등의 보존적인 치료만이 시행되는 실정이다. 이러한 문제를 해결하기 위해서는 조영제의 최소 투여로도 효과적으로 혈관을 관찰할 수 있는 새로운 조영제가 요구된다.
따라서, 최소한의 조영제 사용을 위해 혈관 내 조영제의 1회 투여시간 동안 필요한 영상 정보를 최대한 획득하는 것이 중요한 과제이다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로, 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 고분자 복합체 및 이를 이용한 조영제를 제공할 수 있다.
이를 위해, 본 발명에 따른 조영제용 생체적합성 고분자 복합체는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질, 조영물질, 및 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질과 상기 조영물질을 연결하는 링커를 포함할 수 있다.
자세하게, 본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체는 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질 및 상기 조영물질이 에폭사이드 합성반응, 아민 에폭사이드 반응, 카보닐-아민 축합반응, 클로로아세틱에시드와 EDC/NHS 반응, EDC/sulf-NHS 반응 및 컨쥬게이션 반응 중 적어도 하나의 반응에 의해서 연결됨에 따라, 합성될 수 있다. 이에 따라, 상기 링커는 이민(imine), 에스테르(ester), 아마이드(amide), 펩티드 결합 중 적어도 하나의 결합을 포함할 수 있다.
이때, 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질은 압타머, 항체, 펩타이드, 효소 및 리셉터로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상이고, 상기 조영물질은 방사능 조영물질이거나, MRI 또는 초음파 영상의 대조도를 개선하는 물질일 수 있다.
본 발명에 따른 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 조영제용 고분자 복합체는 혈관 내피세포에 3초 이상 결합할 수 있다.
즉, 본 발명에 따른 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 조영제용 고분자 복합체는 혈관 내피세포에 수분 내지 수일 결합함으로써, 혈관 내 조영제의 지속시간을 증가시킬 수 있다. 이에 따라, 본 발명에 따른 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 조영제는 영상 내지 이미지를 획득하기 위한 조영제의 반복 투여를 방지 및 최소화 할 수 있다.
본 발명은 혈관 조영술 또는 혈관 중재술을 비롯한 혈관 조영검사에 있어서, 조영제의 사용량을 감소시킬 수 있을 뿐만 아니라, 조영제에 의한 합병증을 줄일 수 있다.
도 1은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 조영제의 개략도이다.
도 2는 Cell-SELEX 방법을 이용한 압타머 발굴의 모식도이다.
도 3은 비교예에 따른 조영제의 조영원리와 효과를 설명하기 위한 개략도이다.
도 4는 실시예에 따른 조영제의 조영원리와 효과를 설명하기 위한 개략도이다.
도 5는 비교예 및 실시예에 따른 조영제를 사용한 혈관 조영술의 순서를 나타내는 순서도이다.
도 6은 비교예 및 실시예에 따른 조영제를 사용한 혈관 중재술의 순서를 나타내는 순서도이다.
도 7 및 도 8은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 목표 결합형 물질을 확인하기 위한 PCR 분석 결과를 나타내는 사진이다.
도 2는 Cell-SELEX 방법을 이용한 압타머 발굴의 모식도이다.
도 3은 비교예에 따른 조영제의 조영원리와 효과를 설명하기 위한 개략도이다.
도 4는 실시예에 따른 조영제의 조영원리와 효과를 설명하기 위한 개략도이다.
도 5는 비교예 및 실시예에 따른 조영제를 사용한 혈관 조영술의 순서를 나타내는 순서도이다.
도 6은 비교예 및 실시예에 따른 조영제를 사용한 혈관 중재술의 순서를 나타내는 순서도이다.
도 7 및 도 8은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 목표 결합형 물질을 확인하기 위한 PCR 분석 결과를 나타내는 사진이다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 구체적으로 설명한다.
본 발명자들은 혈관 내 조영제의 체류시간을 증가시킴으로써 조영제의 사용량을 줄일 수 있는 조영제를 개발하기 위하여 연구를 거듭한 결과, 혈관 내피세포에 특이적으로 결합할 수 있는 목표 결합성 물질과 조영물질을 연결할 경우, 상기와 같은 목적을 달성할 수 있음을 알아내고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 조영제를 제공하기 위한 것이다. 본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질; 조영물질; 및 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질과 상기 조영물질을 연결하는 링커;을 포함할 수 있다. 이에 따라, 상기 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체를 포함하는 조영제는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합할 수 있다.
도 1을 참조하면, 본 발명은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)과 조영물질(200)을 포함하고, 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)과 상기 조영물질(200)은 링커(300)에 의해서 연결될 수 있다.
먼저, 목표 물질에 특이적으로 부착하는 특징을 가지는 목표 결합형 물질에 대하여 설명한다. 여기에서, 목표 물질은 혈관 내피세포이고, 목표 결합형 물질은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질을 의미할 수 있다.
본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제에 포함되는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)은 혈관 내피세포에 특이적으로 부착시키기 위한 것이다. 본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)이 혈관 내피세포에 특이적으로 결합할 수 있으므로, 혈관 내피세포의 조영효과를 일정시간 유지할 수 있다.
여기에서, 일정시간이란 3초 이상의 시간으로서, 3초 이상의 수초 내지 수일에 포함되는 다양한 범위의 시간을 의미하는 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)과 혈관 내피세포의 특이적인 결합이 유지되는 시간은 2분 내지 7일일 수 있다. 예를 들어, 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)과 혈관 내피세포의 특이적인 결합이 유지되는 시간은 2분 내지 8일일 수 있다. 예를 들어, 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)과 혈관 내피세포의 특이적인 결합이 유지되는 시간은 2분 내지 10일일 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제는 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)에 포함된 뉴클레오티드가 생체 내에 존재하는 DNA 가수분해효소나 상보적인 단일 뉴클레오티드 서열에 의해서 분해되기 전까지 혈관 정보를 전달할 수 있다.
본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제에 포함되는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)은 혈관 내피세포에 특이적으로 부착될 수 있는 특정의 염기서열을 포함할 수 있다. 이에 따라, 본 발명에 따른 조영제에 포함되는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)은 혈관 내피세포와 결합하는 자리(110)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 조영제에 포함되는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)은 혈관 내피세포와 결합하는 자리(110)를 포함할 수 있다. 여기에서의 “결합”은 목표 결합형 물질이 혈관 내피세포에 부착될 수 있다는 것을 의미하는 것으로, 목표 물질과 결합 친화성을 가지거나 결합 활성을 가지는 것을 의미할 수 있다. 이와 같은 결합 활성 및 결합 친화성은 해리 상수와 같이 공지된 다양한 방법으로 측정될 수 있다. 예를 들어, 서로 다른 분자가 낮은 해리 상수를 가지는 경우에는 강한 결합 및 강한 친화성을 나타낼 수 있다. 한편, 여기에서의 “특이적”이라는 것은 다른 세포나 염기서열보다 특이적인 세포 및/또는 특이적인 염기서열에서 압타머와 같은 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질이 더 자주, 더 빨리, 더 긴 지속시간 및/또는 더 큰 친화력으로 반응 내지 결합하는 것을 의미할 수 있다.
상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)은 SELEX 방법을 통해 찾은 염기서열을 가지며, 압타머, 항체, 펩타이드, 효소 및 리셉터로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 바이오리셉터일 수 있다. 여기에서, “바이오리셉터”는 압타머, 항체, 펩타이드, 효소 및 리셉터로 제한되는 것은 아니며, 목표 물질에 부착 내지 결합할 수 있는 다양한 형태의 물질일 수 있음은 물론이다.
바람직하게, 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)은 압타머일 수 있다. 압타머는 생체 적용에 안정성이 높을 수 있다. 또한, 압타머의 임상적 안정성이 확인된 경우에는, 혈관 내피세포에 특이성이 높은 압타머와 조영물질을 결합함으로써 조영제를 개발할 수 있다. 이러한 혈관 내피세포에 특이성이 높은 압타머를 포함하는 조영제는 기존의 조영제와 투여방식이나 조영물질에 차이가 없으면서도 혈관 관측시간을 증가시킬 수 있다는 점에서, 기존 조영제의 대체가 용이할 수 있다.
본 발명에서 "압타머 (aptamer)"는 혈관 내피세포에 대한 결합 활성을 갖는 핵산 분자를 말한다. 본 발명의 압타머는, RNA, DNA, 변형 핵산 또는 이들의 혼합물 등의 직쇄상 또는 환상의 형태의 핵산일 수 있으며, 구체적으로는 단일가닥 DNA (ssDNA) 또는 단일가닥 RNA (ssRNA) 형태일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 압타머는 혈관 내피세포의 표면에 특이적으로 결합할 수 있다. 전형적인 압타머는 크기가 10 내지 25 kDa (30 내지 75개의 뉴클레오티드)이며, 나노몰 이하 (sub-nanomolar)의 친화성으로 그 표적에 결합할 수 있다. 압타머는 결합 상호작용 (예컨대, 수소 결합, 정전기적 상보성, 소수성 접촉, 입체적 배지 (steric exclusion)) 또는 항체-항원 복합체에서의 특이성을 통하여 선택된 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. 즉, 압타머는 염기서열이 만들 수 있는 특이적인 3차원적 구조에 의해 표적물질에 특이적으로 결합이 가능하다. 여기에서, “압타머”는 G-quadruplex, hairpin 구조 등의 2차, 3차 구조를 모두 포함하는 것일 수 있다.
상기 표적물질은 세포, 아미노산, 약물, 단백질, 그 외 고분자 물질일 수 있다.
상기 압타머는 구체적으로 혈관 내피세포와 특이적으로 결합할 수 있는 염기 서열, 및 이와 상보적인 염기 서열 중 어느 하나의 염기 서열을 가지는 것일 수 있다. 혈관 조영을 통한 시술 내지 진단의 목적에 따라, 실시예에서 요구되는 압타머 및 혈관 내피세포와의 특이적 결합시간이 달라질 수 있다. 일례로, 혈관 내피세포와 특이적으로 결합할 수 있는 염기 서열은 혈관 내피세포와의 특이적 결합을 1시간 이상 지속할 수 있는 것일 수 있다. 또는, 혈관 내피세포와 특이적으로 결합할 수 있는 염기 서열은 혈관 내피세포와의 특이적 결합을 6시간 이상 지속할 수 있는 것일 수 있다. 또는, 혈관 내피세포와 특이적으로 결합할 수 있는 염기 서열은 혈관 내피세포와의 특이적 결합을 12시간 이상 지속할 수 있는 것일 수 있다. 실질적으로 MLL1에 대한 결합 활성을 가지는 압타머라면 본 발명의 범위에 포함될 수 있다. 또는, 혈관 내피세포와 특이적으로 결합할 수 있는 염기 서열은 혈관 내피세포와의 특이적 결합을 24시간 이상 지속할 수 있는 것일 수 있다.
또한, 상기 상동성을 가지는 서열에서 일부 서열이 결실, 변형, 치환 또는 부가된 염기서열을 가지는 압타머가 실질적으로 동일하거나 상응하는 생물학적 활성을 가지는 경우도 역시 본 발명의 범주에 포함됨은 자명하다.
상기에서 용어 "상동성"은 주어진 아미노산 서열 또는 염기 서열과 일치하는 정도를 의미하며 백분율로 표시될 수 있다. 본 발명에서는, 주어진 아미노산 서열 또는 염기 서열과 동일하거나 유사한 활성을 가지는 그의 상동성 서열이 "% 상동성"으로 표시된다. 예를 들면, 점수 (score), 동일성 (identity) 및 유사도 (similarity) 등의 매개 변수 (parameter)들을 계산하는 표준 소프트웨어, 구체적으로 BLAST 2.0을 이용하거나, 정의된 엄격한조건하에서 써던 혼성화 실험에 의해 서열을 비교함으로써 확인할 수 있으며, 정의되는 적절한 혼성화 조건은 해당 기술 범위 내이고, 당업자에게 잘 알려진 방법 (예컨대, J. Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory press, Cold Spring Harbor, New York, 1989; F.M. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York)으로 결정될 수 있다. 상기에서 용어 “엄격한 조건”이란 폴리뉴클레오티드 간의 특이적 혼성화를 가능하게 하는 조건을 의미한다. 예를 들어, 이러한 조건은 문헌 (예컨대, J. Sambrook et al., 상동)에 구체적으로 기재되어 있다.
한편, 상기 압타머를 이용하는 경우 압타머 잔기의 화학적 변형을 통해 안정성 및 물성을 변화시킬 수 있으며, 이러한 방식은 당업계에서 통상적으로 수행되는 것으로, 이 역시 본 발명의 범위에 포함되는 것은 자명하다.
본 발명의 압타머는 50 내지 100개의 염기쌍(base pair)를 포함할 수 있다. 이에 따라, 화학합성 및 대량 생산이 보다 용이하고, 생체내 안정성도 높을 수 있다.
본 발명의 압타머에 포함되는 각 뉴클레오티드는 각각, 동일 또는 상이하여, 리보오스(예, 피리미딘 뉴클레오티드의 리보오스)의 2'부위에서 히드록실기를 포함하는 뉴클레오티드(즉, 미치환인 뉴클레오티드)이거나, 또는 리보오스의 2'부위에서, 히드록실기가, 임의의 원자 또는 기로 치환되어 있는 뉴클레오티드일 수 있다. 이러한 임의의 원자 또는 기로서는, 예컨대 수소원자, 불소원자 또는 -O- 알킬기(예, -O-Me기), -O-아실기(예, -O-CHO기), 아미노기(예, -NH2기)로 치환되어 있는 뉴클레오티드를 들 수 있다. 본 발명의 압타머는 또한 적어도 1종(예, 1,2, 3 또는 4종)의 뉴클레오티드가, 리보오스의 2'부위에서, 히드록실기, 또는 전술한 임의의 원자 또는 기, 예컨대 수소원자, 불소원자, 히드록실기 및 -O-Me기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 2종(예, 2, 3 또 는 4종)의 기를 포함하는 뉴클레오티드일 수 있다. 본 발명의 압타머는 또한, 모든 뉴클레오티드가, 리보오스의 2'부위에서, 히드록실기, 또는 전술한 임의의 원자 또는 기, 예컨대 수소원자, 불소원자, 히드록실기 및 -0-Me기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 동일한 기를 포함하는 뉴클레오티드일 수 있다.
본 발명의 압타머는, 혈관 내피세포에 대한 결합성, 안정성 등을 높이기 위해, 각 뉴클레오티드의 당 잔기가 변형된 것을 포함할 수 있다. 이러한 당 잔기의 변형은, 당업계의 공지된 방법에 의해 행해질 수 있다.
또는, 본 발명의 압타머는 혈관 내피세포에 대한 결합성 등을 높이기 위해 핵산 염기가 변형된 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 핵산 염기는 화학적인 치환반응을 통해 변형된 것일 수 있다. 또는, 본 발명의 압타머는 캡핑과 같은 3' 및/또는 5'의 변형을 포함할 수 있다.
본 발명의 압타머는, 인산기의 마이너스 전하를 이용한 이온결합, 리보오스를 이용한 소수결합 및 수소결합, 핵산염기를 이용한 수소결합이나 스태킹(stacking) 결합 등 다양한 결합 양식에 의해 표적 물질과 결합할 수 있다. 구성 뉴클레오티드의 수만큼 존재하는 인산기의 마이너스 전하를 이용한 이온결합은 강하게, 단백질의 표면에 존재하는 리신이나 아르기닌의 플러스 전하와 결합할 수 있다. 이 때문에, 표적 물질과의 직접적인 결합에 관련되어 있지 않은 핵산염기는 치환될 수 있다. 특히, 스템 구조의 부분은 이미 염기쌍이 만들어져 있고, 또한 이중 나선 구조의 내측을 향하고 있기 때문에, 핵산 염기는, 표적 물질과 직접 결합하기 어려울 수 있다. 따라서, 염기쌍을 다른 염기쌍으로 치환하여도 압타머의 활성은 감소하지 않을 수 있다. 루프 구조 등 염기쌍을 만들지 않은 구조에서도, 핵산 염기가 표적 분자와의 직접적인 결합에 관여하지 않는 경우에는, 염기의 치환이 가능할 수 있음은 물론이다.
또한, 압타머는 화학 합성이 가능하기 때문에 개변이 용이하다. 압타머는 mfold 프로그램을 이용하여 2차 구조를 쉽게 예측할 수 있으며 보다 정확한 입체 구조 분석을 위해서는 X선 해석이나 NMR 해석이 필요하다. 이러한 구조분석과 여러 압타머 시퀀스상에서 나타나는 동일 시퀀스 영역(conserved region) 분석을 바탕으로, 특정 염기가 치환 또는 결손된 압타머 연구 (truncation study)를 통해 어떤 뉴클레오티드를 치환 또는 결손하는 것이 가능한지, 또한 어디에 새로운 뉴클레오티드를 삽입 가능한지 어느 정도 예측할 수 있다. 이러한 연구를 통해 보다 안정적이고 혈관 내피세포에 특이적인 압타머를 개발할 수 있으며 압타머의 전체 염기서열 중 결합과 관련된 중요한 부위(binding motif)를 찾아낼 수 있다. 예측된 새로운 서열의 압타머는 용이하게 화학 합성할 수 있고, 그 압타머가 활성을 유지하고 있는지의 여부를 기존의 분석계에 의해 확인할 수 있다. 얻어진 압타머의 혈관 내피세포와의 결합에 중요한 부분이, 상기와 같은 시행착오를 반복함으로써 특정할 수 있는 경우, 그 서열의 양단에 새로운 서열을 부가하여도, 대부분의 경우 활성은 변화하지 않을 수 있다. 이와과 같이, 상기 압타머는 고도로 설계 또는 변형이 가능하다는 점에서 장점을 가진다.
압타머는 항체와 비슷한 수준의 친화력(단백질 결합시, Kd = 1 pM ~ 1 nM)을 갖고 있으면서도 항체가 가지고 있는 진단 및 치료 기술의 한계를 극복할 수 있는 다양한 장점을 가진다. 항체는 세포 등과 같은 생물학적 시스템을 통해서 생산되기 때문에 고비용이 요구되며 생산기간이 길기 때문에 생산성이 낮고, 배양과정에 따라 항체의 성질이 달라질 수 있다는 문제를 가진다. 반면, 압타머는 화학적인 합성을 통해 생체 외에서 생산되기 때문에 생산 시간이 짧으며 저비용으로 생산이 용이할 뿐만 아니라, 거의 균일한 품질을 유지할 수 있다. 또한, 압타머 기반의 의약품은 항체 기반의 의약품보다 면역 거부반응을 거의 일으키지 않는다는 장점이 있다.
여기에서, 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)이 목표 물질에 특이적으로 결합하기 위한 특정의 염기서열을 찾기 위한 방법은 Cell SELEX, GO SELEX 등의 SELEX 방법일 수 있다. 일례로, 혈관 내피세포에 특이적으로 결합할 수 있는 압타머를 확인하기 위해서 SELEX 방법을 사용할 수 있다. 다만, 실시예가 열거된 방법으로 제한되는 것은 아니며, 목표 물질에 특이적으로 결합할 수 있는 염기서열을 찾기 위한 방법이면, 고전적인 SELEX의 문제점을 보완하기 위해 개선된 다양한 SELEX 법, SELEX 법을 대체할 수 있는 다양한 방법을 포함할 수 있음은 물론이다.
SELEX는 1990년 Larry Gold 박사에 의해서 고안된 것으로, 그 후 Colorado의 SomaLogic 회사를 중심으로 저분자, 고분자 및 금속이온을 표적으로 한 압타머의 개발이 활발히 진행되고 있다.
SELEX법으로는 라운드수를 늘리거나, 경합 물질을 사용함으로써, 혈관 내피세포에 대하여 보다 결합력이 강한 압타머를 선별할 수 있다.
압타머는 암과 같은 특정 질병의 발병이나 질환을 예측하기 위한 진단을 위한 용도나, 특정 질병의 발병이나 질환을 치료하기 위한 용도로 활발히 개발되고 있다.
그러나, 영상의학 분야에서 압타머를 이용한 조영제에 대한 연구는 저조한 실정이다.
한국 등록특허 제 10-1405440호는 압타머를 유효성분으로 포함하는 종양성 질환부위의 영상화용 조성물을 개시하고 있으나, 이는 압타머의 특이적 결합을 종양성 질환 발명부위의 영상화에 활용하는 것이다.
본 발명과 같이, 압타머가 혈관 내피세포와 특이적으로 결합할 수 있는 특징을 이용하여 혈관 내 조영제의 체류 시간을 증가시키기 위한 목적으로 한 연구는 보고된 바 없다.
실시예의 압타머가 포함된 조영제는 혈관 내에 체류시간이 증가할 수 있고, 이를 통해 1회 조영제 투여 후 반복적인 혈관 이미지나 영상의 확인 내지 실시간 혈관 이미지나 영상의 확인이 가능하다는 장점을 가진다.
본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제에 포함되는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)은 혈관 내피세포와 결합하는 자리(110)를 포함하기 때문에, 조영제를 사용한 혈관의 관측시간을 증가시킬 수 있다. 이에 따라, 혈관 조영술이나 혈관 중재술 등을 위한 혈관 조영검사에 있어서, 기록된 영상이나 이미지를 통한 혈관 상태에 관한 정보가 부족하여 추가적인 영상이나 이미지가 필요한 경우에도 혈관 내에 조영제를 재투여하지 않을 수 있다.
즉, 본 발명에 따른 조영제는 1회 투여시간 동안 영상 내지 이미지와 같은 정보의 1차 획득 및 영상 내지 이미지와 같은 정보의 추가 회차 획득이 모두 가능할 수 있다. 따라서, 본 발명은 조영제 재투입을 방지 및 최소화할 수 있어, 불필요한 비용을 저감할 수 있을 뿐만 아니라, 조영제의 과다 사용에 따른 신병증 등의 부작용을 감소시킬 수 있다.
다음으로, 본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제에 포함되는 조영물질(200)에 대하여 설명한다.
본 발명에서 용어, "조영제"란 신체 장기의 상태파악 및 질병의 진단을 목적으로 하여 혈관이나 조직 등이 보다 잘 보이도록 인위적으로 대조도의 차를 만들어 영상으로 나타내기 위해서 사용되는 제제를 말한다. 조영제는 연구 대상 표면의 가시도 및 대조도를 증가시킴으로써, 질환 또는 손상의 존재 여부 및 그 정도를 결정할 수 있다.
조영제로 사용되기 위해서는 생체 내에서 생체적합성이 우수해야 하고, 생체 내의 안정성이 우수한 것이 요구된다. 또한, 본 발명의 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제는 생분해성을 가질 수 있다.
본 발명의 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)과 조영물질(200)이 결합된 조영제는 생체 독성이 없는 생체적합성 물질이므로 혈관 내피세포에 결합하더라도 안전할 수 있고, 혈관 조영검사 이후에는 생체 내의 DNA 가수분해효소에 의하여 혈관 내피세포로부터 분리될 수 있는 생분해성을 가지므로, 목적이후 신체에서 제거되어야 하는 조영제에 적용 및 사용하기에 적합할 수 있다.
본 발명의 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제가 적용될 수 있는 구현예로, X-선 영상화기술, 컴퓨터 단층촬영 (CT, Computer Tomography), 자기공명영상(MRI, Magnetic Resonance Imaging), 양전자방출단층촬영(PET, Positron Emission Tomography), 초음파 촬영을 비롯한 핵 영상화 등을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제에 포함되는 조영물질(200)은 X-ray, CT, PET, MRI, 초음파를 이용하여 혈관이나 질환부위의 영상을 확보하기 위한 것이다. 즉, 상기 조영물질(200)은 X-ray, CT, PET, MRI 및 초음파 중 적어도 하나의 영상진단을 위한 조영제에 포함되는 물질일 수 있다.
본 발명에 따른 X-ray, CT, PET 용 조영제에 포함되는 조영물질(200)은 방사능 물질을 포함할 수 있다.
X-ray, CT용 조영제에 포함되는 조영물질(200)은 요오드 기반의 화합물이 광범위하게 사용되고 있다.
상기 요오드 기반의 화합물은 요오드를 포함하는 방향족 화합물을 의미할 수 있다. 요도드는 밀도가 커서 X-선에 대한 흡수 정도가 크므로 우수한 조영 증강 효과를 낼 수 있다.
구체적으로, 상기 요오드 기반의 화합물은 이오메프롤(Iomeprol), 이오프로마이드, 이오파미돌, 이오펜톨 (Iopentol), 이오트롤란 (Iotrolan), 이오헥솔 (Iohexol), 이오베르솔 (Ioversol), 이옥실란(Ioxilan), 이오딕사놀 (Iodixanol) 및 이오비트리돌 (Iobitridol)으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 이와 같은 요오드 기반의 화합물은 적어도 하나의 아미노기(-NH-, -NH2) 및 적어도 하나의 하이드록시기(-OH)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 요오드 기반의 화합물은 1 내지 2개의 아미노기(-NH-, -NH2) 및 1 내지 10개의 하이드록시기(-OH)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 요오드 기반의 화합물은 1 내지 6개의 아미노기(-NH-, -NH2) 및 1 내지 9개의 하이드록시기(-OH)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 요오드 기반의 화합물은 1 내지 9개의 아미노기(-NH-, -NH2) 및 1 내지 10개의 하이드록시기(-OH)를 포함할 수 있다. 즉, 상기 요오드 기반의 화합물은 친수성기를 포함하는 수성 조영물질일 수 있다. 또한, 상기 요오드 기반의 화합물의 적어도 하나의 아미노기(-NH-, -NH2) 및/또는 적어도 하나의 하이드록시기(-OH)는 링커와 연결될 수 있는 관능기일 수 있다.
또는, 상기 요오드 기반의 화합물은 요오드, 요오드화수소, 요오드화나트륨, 요오드화칼륨, 메틸요오드, 요오드화세슘, 요오드산칼륨, 과요오드산나트륨, 요오드화칼슘, 요오드화구리 및 포비돈요오드로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있다.
PET용 조영제에 포함되는 조영물질(200)은 F-18-FDG(Fluorodeoxy glucose), F-18-FLT(Fluorothymidine), F-18-FP-CIT(Fluoropropyl carbomethoxy-3b-(4-iodophenyltropane)), C-11-Methionine, C-11-Acetate, C-11-PIB(Pittsburgh compound B), N-13-Ammonia, Rb-82일 수 있다.
상기 조영물질(200)은 방사선 동위원소, 플루오로포어, 양자점 (quantum dot), 또는 자성입자, 예를 들어 상자성입자 (super paramagnetic particles) 또는 초상자성입자 (ultrasuper paramagnetic particles) 등일 수 있으며, 실시예는 이에 제한되지 않고, 공지된 다양한 종류의 조영물질일 수 있음은 물론이다.
본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제에 포함되는 조영물질(200)은 방사능에 민감한 물질을 포함할 수 있으며, X-ray, CT, PET 등의 이미지 대조도를 개선할 수 있다.
본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제에 포함되는 조영물질(200)은 MRI 측정을 위한 조영물질을 포함할 수 있으며, MRI 이미지 대조도를 개선할 수 있다.
본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제에 포함되는 조영물질(200)은 초음파 측정을 위한 조영물질을 포함할 수 있으며, 초음파 이미지 대조도를 개선할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제는 이미지의 강도를 조절할 수 있다.
다음으로, 본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제에 포함되는 상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)과 상기 조영물질(200)을 연결하는 링커(300)에 대하여 설명한다.
본 발명은 혈관 내피세포에 특이적으로 부착할 수 있는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)을 링커(300)에 의하여 조영물질(200)과 연결할 수 있다.
상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100) 및 상기 조영물질(200)은 에폭사이드 합성반응, 아민 에폭사이드 반응, 카보닐-아민 축합반응, 클로로아세틱에시드와 EDC/NHS 반응, EDC/sulf-NHS 반응 및 컨쥬게이션 반응 중 적어도 하나의 반응에 의해서 연결될 수 있다. 이에 따라, 상기 링커(300)는 에폭사이드, 아민 에폭사이드, 카보닐-아민 축합체, 클로로아세틱에시드와 EDC/NHS 반응에 의한 생성물, EDC/sulf-NHS 반응 및 컨쥬게이션 반응에 의한 생성물 및 이의 유도체를 포함할 수 있다. 여기에서, 상기 링커(300)는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)과 조영물질(200)을 연결할 수 있고, 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100) 내의 혈관 내피세포와 결합하는 자리(110)에 손상 내지 특이성을 상실할 정도의 변형이 가해지지 않는 것이면 특정의 합성에 의한 것으로 제한되지 않고, 다양한 관능기를 가질 수 있음은 물론이다.
상기 링커는 이민(imine), 에스테르(ester), 아마이드(amide), 펩티드 결합 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
상기 조영물질이 상기 요도드 기반의 화합물인 경우에는, 이에 포함되는 아미노기 및 하이드록시기가 링커로 연결되기 위하여 부분적으로 또는 전체적으로 변형될 수 있다.
예를 들어, 상기 요도드 기반의 화합물에 포함되는 아미노기의 적어도 하나는 질소를 포함하는 다른 작용기, 또는 질소의 단일결합이 이중결합으로 변화될 수 있다. 일례로, 상기 요도드 기반의 화합물에 포함되는 아미노기의 적어도 하나는 이민이나 아마이드와 같이 변형됨에 따라, 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질과 연결될 수 있다.
예를 들어, 상기 요도드 기반의 화합물에 포함되는 하이드록시기의 적어도 하나는 에스테르 등의 산소를 포함하는 다른 작용기, 또는 산소의 단일결합이 이중결합으로 변화될 수 있다. 일례로, 상기 요도드 기반의 화합물에 포함되는 하이드록시기의 적어도 하나는 에스테르로 변형됨에 따라, 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질과 연결될 수 있다.
상기 요도드 기반의 화합물은 Carbonyl-amine condensation reaction 을 통하여 링커를 형성하여 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질에 연결될 수 있고, 이때 링커는 이민 작용기를 포함할 수 있다. 자세하게, 이민에 의해서 연결되는 링커의 개수는 1~6개일 수 있다.
상기 요도드 기반의 화합물은 EDC/NHS coupling 을 통하여 링커를 형성하여 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질에 연결될 수 있고, 이때 링커는 에스테르 작용기를 포함할 수 있다. 자세하게, 에스테르에 의해서 연결되는 링커의 개수는 1~9개일 수 있다.
상기 요도드 기반의 화합물은 EDC/NHS coupling 을 통하여 링커를 형성하여 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질에 연결될 수 있고, 이때 링커는 아미드 작용기(또는, 펩티드 결합)를 포함할 수 있다. 자세하게, 아미드 작용기에 의해서 연결되는 링커의 개수는 1~9개 일 수 있다.
본 발명에 따른 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체 및 이를 포함하는 조영제는 기존의 조영물질(200)을 활용하는 동시에 조영물질(200)에 혈관 내피세포에 특이적으로 부착할 수 있는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질(100)을 링커(300)에 의하여 연결함에 따라, 조영물질의 혈관 내 체류시간이 짧은 문제를 방지할 수 있다.
이하, 실시예 및 비교예를 통해서 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
실시예에 따른 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 조영제는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 압타머를 발굴하여 조영물질에 연결함으로써 제조될 수 있다.
제조예
(단계 1) 목표 물질인 혈관 내피세포를 배양할 수 있다. 이때, 배양방법은 통상적인 세포배양법을 이용하였으나 압타머 발굴에 바로 이용될 수 있도록 세포 개수를 2X106개로 맞춰서 subculture를 진행할 수 있다. 샘플을 회수할 때는 HBSS를 이용할 수 있다.
(단계 2) Cell SELEX를 진행하여 혈관 내피세포에 특이적인 압타머를 발굴할 수 있다.
(단계 3) 압타머 서열의 길이는 DNA 서열이 40개, 50개인 것을 따로 합성하여 단계 1의 회수한 샘플에 함께 넣어줄 수 있다.
(단계 4) 결합하지 않은 압타머를 제거한 후에 열, 삼투압을 이용하여 결합한 압타머와 세포를 분리 후에 사전실험에서 선별한 Primer 및 다양한 효소를 넣고 압타머 서열을 증폭시킨다.(PCR)
(단계 5) 증폭된 서열을 정제한 후에 DNA gel electrophoresis 후 목표특이적 압타머 발굴을 이미지상으로 확인한다.(1R)
(단계 6) 위의 과정을 24R까지 거친 후 전혈(Whole blood) 혹은 혈관내피세포를 제외한 다른 세포와 반응을 통해 전혈에 부착되지 않는 서열을 추출한다.
17R부터 24R까지 거친 후 40NT와 50NT에서의 PCR 분석 결과는 도 7 및 도 8에 도시하였다.
(단계 7) 위의 과정을 마친 서열에 대하여 해당 서열을 분석하기위해 Cloning 진행한다. Cloning 과정은 압타머 서열을 PCR extraction kit로 분리 정제 후 plasmid와 함께 Ecoil 고체배지에 배양한 후에 single colony를 +Amp 액체배지에 옮겨서 preparation 후에 서열 분석 진행한다.
(단계 8) 밝혀진 서열을 대량 생산한 후에 압타머 서열 끝에 형광단을 결합시켜서 목표에 잘 결합하는지 또 Binding affinity가 얼마인지 확인한다.
(단계 9) 발굴된 압타머는 조영물질과 Epoxide synthesis, amine epoxide reaction, Carbonyl-amine condensation reaction, 클로로아세틱에시드와 EDC/NHS, EDC/sulf-NHS reaction를 이용하여 연결한다.
(단계 10) 압타머-조영제 complex의 working condition과 real sample에 작동여부를 확인한다.
이후, 선택적으로 생체 세포에 테스트를 진행할 수 있다. 여기에서, “생체” 란 인간 또는 비인간을 대상으로 하는 것이며, 비인간은 인간이 아닌 영장류, 설치류, 개, 조류 등일 수 있으며 이에 한정되지 아니한다.
본 발명에 따른 조영제에 포함되는 압타머는 혈관 내피세포에 강한 결합 및/또는 강한 친화성을 가지는 염기서열을 포함할 수 있다. 이에 따라, 조영제의 1회 투여로 혈관 조영검사 또는 혈관 조영검사를 통반한 침습적 시술시에 실시간 혈관 정보를 획득할 수 있다. 이로써, 생체내 조영제 투여 횟수를 줄일 수 있으며, 신장 관련 합병증 발생을 방지할 수 있다.
실시예
새로운 압타머의 발굴 방법은 다음과 같다.
SELEX를 통해 새로운 압타머를 선별하는 과정을 살펴보면, 먼저 (i) DNA 합성 및 in vitro transcription 방법 (RNA인 경우) 을 이용하여 다양한 형태를 가지는 핵산 라이브러리를 만들고 표적물질과만 결합하는 염기서열을 증폭하기 위해 표적물질 내에 있는 염기서열에는 결합하지 않는 PRC용도의 Primer를 찾는다. (ii) 항체가 여러 종류의 항원과 결합하는 것처럼 핵산 구조체 라이브러리 안에 있는 다양한 핵산 구조체들 (압타머 후보 분자들)은 다양한 표적물질과 결합할 수 있는 능력을 가지고 있고 따라서 다음 과정으로 원하는 표적분자와 결합할 수 있는 핵산 구조체만을 선별하는 과정을 거치게 된다. (iii) Affinity chromatography 와 같은 방법을 통해 결합하지 않은 핵산 구조체는 제거되고(washing) 표적분자에 결합하는 것만을 선택적으로 얻을 수 있게 된다. (iv) 마지막으로 표적분자로부터 핵산 구조체를 분리(elution)하게 되고 그 핵산을 증폭시킨 후 얻은 핵산 구조체를 이용하여 다시 이 과정들을 5~15번 정도 더 반복함으로써 매우 우수한 결합력과 특이성을 보이는 압타머를 발굴할 수 있다.
한편, 도 2를 참조하면, Cell-SELEX 를 통해 새로운 압타머를 선별할 수 있다. Cell-SELEX 과정은 고순도의 단백질 정제과정 없이 세포 표면에 존재하는 단백질과 결합하는 cell-to-Aptamer 방식으로 직접 특이적 압타머를 발굴하는 방법이다. 이 방법의 장점은 세포 내에서 원형 그대로의 구조를 갖고 있는 표적 단백질과 직접 결합할 수 있는 압타머를 발굴할 수 있다는 장점이 있다.
압타머의 발굴 과정은 프라이머 및 라이브러리 → 세포 라인들(양성 및 음성) → 세포 배양 유지 → 결합 서열의 용출 → PCR 절차 → 단일가닥 DNA의 준비 → 음성 선택 → 선택 진행 상태 모니터링 → 선택 종료의 순으로 진행될 수 있다.
본 발명은 Positive Selection 을 우선 시행 후 Negative Selection을 시행하여 서열을 발굴하였다. 발굴된 상기 압타머는 40 개 혹은 50 개의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 자세하게, 혈관 내피세포와의 결합 특성이 우수한 것으로 관찰된 상기 압타머는 40 개 혹은 50 개의 뉴클레오티드를 포함하는 것으로 확인되었다.
혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 발굴된 압타머에 조영물질이 결합된 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 발굴된 압타머 및 조영물질 복합체를 포함하는 조영제는 X-ray 촬영 등을 위해 사용될 수 있다.
혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 발굴된 압타머에 조영물질이 결합된 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 발굴된 압타머 및 조영물질 복합체는 조영제에 소정의 양으로 포함될 수 있다. 여기에서 소정의 양이란, 조영제 전체가 100 부피% 또는 100 질량%라고 할 때, 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 발굴된 압타머 및 조영물질 복합체가 100 부피% 또는 100 질량% 미만일 수 있음을 의미한다. 즉, 조영제 전체에는 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 발굴된 압타머 및 조영물질 복합체 이외의 추가 구성 물질이 포함될 수 있음은 물론이다.
도 4를 참조하면, 실시예에 따른 조영제는 혈관 내피세포에 2분 이상의 시간 동안 부착될 수 있으므로, 조영제를 이용한 혈관 관측시간이 증가될 수 있다.
도 5를 참조하면, 실시예에 따른 조영제를 이용한 혈관 조영술은 혈관 관측시간이 3초 초과 내지 7일(5초 이상 내지 수일, 2분 내지 7일)이기 때문에, 실시간으로 획득된 이미지를 관측하여 혈관 데이터가 불충분한 경우에는 별도의 조영제 투여 없이 X-ray 각도를 다시 설정한 후에 이미지를 저장 및 획득할 수 있다.
도 6을 참조하면, 실시예에 따른 조영제를 이용한 혈관 중재술은 혈관 관측시간이 3초 초과 내지 7일(5초 이상 내지 수일, 2분 내지 7일) 이기 때문에, 실시간으로 획득된 이미지를 관측하여 혈관 데이터가 불충분한 경우에는 별도의 조영제 투여없이, 실시간으로 모니터링을 통한 시술이 가능할 수 있다.
비교예
비교예는 기존의 혈관 조영검사에 사용되는 일반적인 조영물질을 혈관 내 투여한 경우이다.
도 3을 참조하면, 비교예에 따른 조영제는 혈관 내피세포에 부착되지 않고 혈류와 함께 이동하기 때문에, 3초 이내로 혈관을 관측해야 한다.
도 5를 참조하면, 비교예에 따른 혈관 조영술은 혈관 관측시간이 3초 이내이기 때문에, 기록된 이미지를 관측하여 혈관 데이터가 불충분한 경우에는 별도의 조영제 투여가 요구된다.
도 6을 참조하면, 비교예에 따른 혈관 중재술은 혈관 관측시간이 3초 이내이기 때문에, 블라인드 시술이 이루어지는 제한성을 가지며, 추가적인 이미지가 필요한 경우에는 조영제의 재주입이 요구된다.
본 발명의 조영제는 추가적으로 수성 완충액, 주사용 멸균수, 킬레이트화제, 및 pH 조정제 등을 더 포함하여 조영제 조성물을 제조할 수 있다.
본 발명의 조영제를 포함하는 주사제는 기타 필요한 약제학적으로 허용 가능한 등장화제, 보존제 등을 가하여 제조할 수 있음은 물론이다.
이상에서 실시예를 중심으로 설명하였으나 이는 단지 예시일 뿐 본 발명을 한정하는 것이 아니며, 본 발명이 속하는 분야의 통상의 지식을 가진 당업자라면 본 실시예의 본질적인 특성을 벗어나지 않는 범위에서 다양한 변경 및 응용이 가능함을 알 수 있을 것이다. 예를 들어, 실시예에 구체적으로 나타난 각 구성요소는 변형하여 실시할 수 있는 것이다. 또한, 이러한 변형과 응용에 관계된 차이점들은 첨부된 청구 범위에서 규정하는 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다. 따라서, 본 발명의 기술적 범위는 명세서의 상세한 설명에 기재된 내용으로 한정되는 것이 아니라 특허 청구의 범위에 의해 정해져야만 할 것이다.
Claims (8)
- 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질;
조영물질; 및
상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질과 상기 조영물질을 연결하는 링커;을 포함하는 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체. - 제 1항에 있어서,
상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질은 압타머, 항체, 펩타이드, 효소 및 리셉터로 이루어진 군에서 선택되는 것을 포함하는 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체. - 제 1항에 있어서,
상기 링커는 이민(imine), 에스테르(ester), 아미드(amide), 펩티드 결합 중 적어도 하나를 포함하는 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체. - 제 1항에 있어서,
상기 조영물질은 이오메프롤, 이오프로마이드, 이오파미돌, 이오펜톨, 이오트롤란, 이오헥솔, 이오베르솔, 이옥실란, 이오딕사놀 및 이오비트리돌으로 이루어진 군에서 선택되는 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체. - 제 1항에 있어서,
상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질은 혈관 내피세포의 표면에 3초 이상 결합할 수 있는 것인 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체. - 제 1항에 있어서,
상기 혈관 내피세포에 특이적으로 결합하는 물질은 뉴클레오티드를 포함하는 것인 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체. - 제 1항에 있어서,
상기 조영물질은 X-ray, CT, PET, MRI 및 초음파 중 적어도 하나의 영상을 획득하기 위한 것인 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체. - 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조영제용 생체 적합성 고분자 복합체를 포함하는 조영제.
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