KR20190079713A - 항-pd-l1 항체 및 이것의 사용 - Google Patents

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Abstract

항-PD-L1 항체 또는 이것의 단편이 제공된다. 항체 또는 이것의 단편은 PD-L1 단백질의 면역글로불린 C 도메인에 특이적으로 결합한다. 다양한 예에서, 항체 또는 이것의 단편은 서열 번호: 1의 VH CDR1 , 서열 번호: 2의 VH CDR2, 서열 번호: 3의 VH CDR3, 서열 번호: 4의 VL CDR1 , 서열 번호: 5의 VL CDR2, 및 서열 번호: 6의 VL CDR3, 또는 이것들 각각의 변이체를 포함한다. 암 및 감염성 질환과 같은 질환을 치료하고 진단하기 위해 항체 또는 이것의 단편을 사용하는 방법이 또한 제공된다.

Description

항-PD-L1 항체 및 이것의 사용{ANTI-PD-L1 ANTIBODIES AND USES THEREOF}
항-PD-L1 항체 또는 이것의 단편이 제공된다. 항체 또는 이것의 단편은 PD-L1 단백질의 면역글로불린 C 도메인에 특이적으로 결합한다. 다양한 예에서, 항체 또는 이것의 단편은 서열 번호: 1의 VH CDR1 , 서열 번호: 2의 VH CDR2, 서열 번호: 3의 VH CDR3, 서열 번호: 4의 VL CDR1 , 서열 번호: 5의 VL CDR2, 및 서열 번호: 6의 VL CDR3, 또는 이것들 각각의 변이체를 포함한다. 암 및 감염과 같은 질환을 치료하고 진단하기 위해 항체 또는 이것의 단편을 사용하는 방법이 또한 제공된다.
분화 클러스터 274 (CD274) 또는 B7 상동체 1 (B7-H1)로도 알려져 있는 예정된 사멸-리간드 1 (PD-L1)는 임신, 조직 동종 이식, 자가면역 질환 및 다른 질환 상태, 예컨대 간염과 같은 특정 이벤트 중에 면역계를 억제하는데 중요한 역할을 할 것으로 생각되는 40kDa 1형 막관통 단백질이다. PD-1 또는 B7.1로의 PD-L1의 결합은 림프절에서 CD8+ T 세포의 증식을 감소시키는 억제 신호를 전송하고, PD-1이 또한, 림프절에서 외래 항원 특이적 T 세포의 축적을, 유전자 Bcl-2의 하향조절에 의해 추가로 매개되는 아폽토시스(apoptosis)를 통해, 제어할 수 있다는 것을 보완한다.
PD-L1의 상향조절은 암이 숙주 면역계를 회피할 수 있게 하는 것으로 나타났다. 신장 세포 암종에 걸린 환자의 종양 표본의 분석은 PD-L1의 높은 종양 발현이 종양 공격성의 증가 및 사망 위험의 증가와 관련이 있음을 발견하였다. 많은 PD-L1 억제자는 면역-종양학 요법으로서 개발 중에 있으며 임상 시험에서 양호한 결과를 나타내고 있다.
암 치료에 더하여, PD-L1 억제는 또한 감염성 질환의 치료에서 가능성을 보여주었다. 세포 내 감염의 마우스 모델에서, 리스테리아 모노사이토게네스(L. monocytogenes)는 T 세포, NK 세포, 및 대식세포에서 PD-L1 단백질 발현을 유도하였다. PD-L1 차단 (예를 들어, 차단 항체를 사용하여)은 감염된 마우스에서 사망률을 증가시켰다. 차단은 대식세포에 의한 TNFα 및 질소 산화물 생산을 감소시켰고, NK 세포에 의한 그랜자임(granzyme) B 생산을 감소시켰고, 리스테리아 모노사이토게네스 항원-특이적 CD8 T 세포의 증식을 감소시켰다 (CD4 T 세포는 아님). 이 증거는 PD-L1이 세포 내 감염에서 양성 동시자극 분자의 역할을 한다는 것을 제안한다.
본 명세서는 인간 PD-L1 단백질에 대하여 높은 결합 친화도를 갖고 PD-L1 및 그것의 수용체 PD-1 간의 상호작용을 효과적으로 차단할 수 있는 항-PD-L1 항체를 제공한다. 또한 중요하게는, 예로서 이들 항-PD-L1 항체가 T 세포 면역 반응을 촉진하고 종양 성장을 억제한다는 것을 입증한다. PD-L1 단백질의 세포 외 부분의 면역글로불린 V 도메인에 결합하는 공지된 항-PD-L1 항체와는 달리, 이들 항체는 면역글로불린 C 도메인, 특히 아미노산 잔기 Y134, K162, 및 N183에 결합한다. 이들 항-PD-L1 항체는 다양한 유형의 암, 뿐만 아니라 감염의 치료와 같은 치료적 목적으로 유용하고 , 또한 진단적 및 예후적 목적으로도 사용될 수 있다.
본 명세서의 한 구체예는 항-PD-L1 항체 또는 이것의 단편을 제공하는데, 이 항체 또는 이것의 단편은 인간 예정된 사멸-리간드 1 (PD-L1) 단백질의 면역글로불린 C (Ig C) 도메인에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, Ig C 도메인은 아미노산 잔기 133-225로 구성된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 PD-L1 단백질의 아미노산 잔기 Y134, K162, 또는 N183 중 적어도 하나에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 PD-L1 단백질의 아미노산 잔기 Y134, K162, 및 N183 중 적어도 하나에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 PD-L1 단백질의 면역글로불린 V (Ig V) 도메인에 결합하지 않으며, Ig V 도메인은 아미노산 잔기 19-127로 구성된다.
본 명세서의 한 구체예는 항-PD-L1 항체 또는 이것의 단편을 제공하는데, 항체 또는 이것의 단편은 인간 예정된 사멸-리간드 1 (PD-L1) 단백질에 대한 특이성을 갖고 서열 번호: 1의 VH CDR1, 서열 번호: 2의 VH CDR2 , 서열 번호: 3의 VH CDR3 , 서열 번호: 4의 VL CDR1 , 서열 번호: 5의 VL CDR2, 및 서열 번호: 6의 VL CDR3을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, Fc 영역, 또는 이것들의 조합을 더 포함한다. 일부 구체예에서, 경쇄 불변 영역은 카파(kappa) 또는 람다(lambda) 사슬 불변 영역이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 IgG, IgM, IgA, IgE 또는 IgD의 아이소타입이다. 일부 구체예에서, 아이소타입은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다. 제한하는 것이 아니라, 항체 또는 이것의 단편은 키메라 항체, 인간화 항체, 또는 완전한 인간 항체이다. 한 양태에서, 항체 또는 이것의 단편은 인간화 항체이다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은, 카바트 넘버링(Kabat numbering)에 따라, (a) 위치 44의 Ser, (b) 위치 49의 Ala , (c) 위치 53의 Ala , (d) 위치 91의 Ile , (e) 위치 1의 Glu , (f) 위치 37의 Val , (g) 위치 40의 Thr, (h) 위치 53의 Val , (i) 위치 54의 Glu , (j) 위치 77의 Asn , (k) 위치 94의 Arg , 및 (l) 위치 108의 Thr , 및 이것들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 , 카바트 넘버링에 따라, (a) 위치 44의 Ser, (b) 위치 49의 Ala , (c) 위치 53의 Ala , 및/또는 (d) 위치 91의 Ile , 및 이것들의 조합을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은, 카바트 넘버링에 따라, (a) 위치 22의 Ser , (b) 위치 42의 Gln , (c) 위치 43의 Ser , (d) 위치 60의 Asp , 및 (e) 위치 63의 Thr , 및 이것들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
항체 또는 이것의 단편의 비-제한적 예는 서열 번호: 7-26로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열 , 또는 서열 번호: 7-26로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대하여 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 펩타이드를 포함하는 중쇄 가변 영역을 가진 것을 포함한다. 항체 또는 이것의 단편의 비-제한적 예는 서열 번호: 27-33으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열 , 또는 서열 번호: 27-33으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대하여 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 펩타이드를 포함하는 경쇄 가변 영역을 가진 것을 포함한다. 항체 또는 이것의 단편의 비-제한적 예는 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가진 것을 포함한다.
항체 및 이것의 단편의 생물학적으로 동등한 변이체가 또한 기술된다. 일부 구체예에서, 분리된 항체 또는 이것의 단편이 제공되는데, 항체 또는 이것의 단편은 인간 PD-L1 단백질에 대한 특이성을 갖고 (a) 서열 번호: 1, 또는 서열 번호: 1의 자리 1, 2 또는 5에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 1의 변이체의 VH CDR1; (b) 서열 번호: 2, 또는 서열 번호: 2의 자리 7, 8, 14 또는 15에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 2의 변이체의 VH CDR2; (c) 서열 번호: 3, 또는 서열 번호: 3의 자리 1, 2, 3, 4, 5 또는 6에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 3의 변이체의 VH CDR3; (d) 서열 번호: 4, 또는 서열 번호: 4의 자리 3에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 4의 변이체의 VL CDR1; (e) 서열 번호: 5, 또는 서열 번호: 5의 자리 1, 2, 3, 4, 5 또는 6에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 5의 변이체의 VL CDR2 및 (f) 서열 번호: 6, 또는 서열 번호: 6의 자리 11 또는 2에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 6의 변이체의 VL CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 1의 변이체는 서열 번호: 61-67로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 2의 변이체는 서열 번호: 68-77로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 3의 변이체는 서열 번호: 78-90으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 4의 변이체는 서열 번호: 91-92로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 5의 변이체는 서열 번호: 93-105로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 6의 변이체는 서열 번호: 106-111로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은, 카바트 넘버링에 따라, (a) 위치 44의 Ser, (b) 위치 49의 Ala , (c) 위치 53의 Ala , (d) 위치 91의 Ile , (e) 위치 1의 Glu , (f) 위치 37의 Val , (g) 위치 40의 Thr (h) 위치 53의 Val , (i) 위치 54의 Glu , (j) 위치 77의 Asn , (k) 위치 94의 Arg , 및 (l) 위치 108의 Thr , 및 이것들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은, 카바트 넘버링에 따라, (a) 위치 44의 Ser, (b) 위치 49의 Ala , (c) 위치 53의 Ala , 및/또는 (d) 위치 91의 Ile , 및 이것들의 조합을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은, 카바트 넘버링에 따라, (a) 위치 22의 Ser , (b) 위치 42의 Gln , (c) 위치 43의 Ser , (d) 위치 60의 Asp , 및 (e) 위치 63의 Thr , 및 이것들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또한, 일부 구체예에서는, 본 명세서의 항체 또는 이것의 단편 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물이 제공된다. 또한, 일부 구체예에서는, 본 명세서의 항체 또는 이것의 단편을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 분리된 세포가 제공된다.
치료 방법 및 사용이 또한 제공된다. 한 구체예에서, 치료가 필요한 환자에서 암 또는 감염을 치료하는 방법이 제공되며, 본 명세서의 항체 또는 이것의 단편의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 암은 고체 종양이다. 일부 구체예에서, 방광암, 간암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 백혈병, 림프종, 췌장암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 유방암, 요도암, 두경부암, 위장암, 위암, 식도암, 난소암, 신장암, 흑색종, 전립선암 및 갑상선암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 암은 방광암, 간암, 췌장암, 비-소세포 폐암, 유방암, 요도암, 결장직장암, 두경부암, 편평세포암, 머켈 세포(Merkel cell) 암종, 위장암, 위암, 식도암, 난소암, 신장암, 및 소세포 폐암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 방법은 환자에게 제2 암 치료제를 투여하는 단계를 더 포함한다. 일부 구체예에서, 감염은 바이러스 감염, 박테리아 감염, 균류 감염 또는 기생충에 의한 감염이다.
또 다른 구체예에서, 치료가 필요한 환자에서 암 또는 감염을 치료하는 방법이 제공되는데, (a) 시험관 내에서 세포를 본 명세서의 항체 또는 이것의 단편으로 처리하는 단계; 및 (b) 처리된 세포를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은, 단계 (a) 전에, 개체로부터 세포를 분리하는 단계를 더 포함한다. 일부 구체예에서, 세포는 환자로부터 분리된다. 일부 구체예에서, 세포는 환자와 다른 공여체 개체로부터 분리된다. 일부 구체예에서, 세포는 T 세포이며, 이것의 비-제한적 예는 종양-침윤성 T 림프구, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 또는 이것들의 조합을 포함한다.
진단 방법 및 사용이 또한 제공된다. 한 구체예에서, 샘플에서 PD-L1의 발현을 검출하는 방법이 제공되며, 항체 또는 이것의 단편이 PD-L1에 결합하는 조건 하에서 샘플과 항체 또는 이것의 단편을 접촉시키는 단계, 및 샘플에서 PD-L1의 발현을 나타내는 결합을 검출하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 샘플은 종양 세포, 종양 조직, 감염된 조직, 또는 혈액 샘플을 포함한다.
본 명세서의 항체 및 단편은 이중특이적 항체를 제조하는데 사용될 수 있다. 한 구체예에서, 분리된 이중특이적 항체가 제공되며, 본 명세서의 단편 및 면역 세포 상의 분자에 대하여 특이성을 갖는 제2 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 분자는 PD-1, CTLA-4, LAG-3, CD28, CD122, 4-1BB, TIM3, OX-40, OX40L, CD40, CD40L, LIGHT, ICOS, ICOSL, GITR, GITRL, TIGIT, CD27, VISTA, B7H3, B7H4, HEVM 또는 BTLA, CD47 및 CD73으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 단편 및 제2 단편은 각각 Fab 단편, 단일 사슬 가변 단편 (scFv), 또는 단일 도메인 항체로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구체예에서, 이중특이적 항체는 Fc 단편을 더 포함한다.
도 1은 HL1210-3이 높은 친화도로 인간 PD-L1에 결합할 수 있다는 것을 나타낸다.
도 2는 HL1210-3이 인간 PD1으로의 인간 PD-L1의 결합을 효율적으로 억제할 수 있다는 것을 나타낸다.
도 3은 HL1210-3 항체가 포유류 세포에서 발현된 PD-L1 상에서 PD-1의 결합을 매우 효율적으로 억제할 수 있다는 것을 나타낸다.
도 4는 테스트된 항-PD-L1 항체가 인간 T 세포 반응을 촉진할 수 있다는 것을 나타낸다.
도 5는 재조합 PD-L1으로의 HL1210-3의 결합 동역학을 나타낸다.
도 6은 테스트된 모든 인간화 항체가 키메라 항체와 접촉하여 인간 PD-L1으로의 비슷한 결합 효율을 갖는다는 것을 보여준다.
도 7은 테스트된 모든 인간화 항체가 포유류 세포에서 발현된 PD-L1에 매우 효율적으로 결합할 수 있으며, 키메라 항체와 비슷하다는 것을 나타낸다.
도 8은 인간화 항체 Hu1210-41이 더 낮은 친화도로 붉은 털 원숭이 PD-L1에 결합할 수 있으며 래트 및 마우스 PD-L1에는 결합할 수 없다는 것을 나타낸다.
도 9는 Hu1210-41 항체가 B7-DC, B7-1, B7-2, B7-H2, PD-1, CD28, CTLA4, ICOS 및 BTLA가 아니라, B7-H1 (PD-L1)에만 특이적으로 결합할 수 있다는 것을 나타낸다.
도 10은 Hu1210-41이 인간 PD1 및 B7-1으로의 인간 PD-L1의 결합을 효율적으로 억제할 수 있다는 것을 나타낸다.
도 11은 Hu1210-41이 인간 PD1 및 B7-1으로의 인간 PD-L1의 결합을 효율적으로 억제할 수 있다는 것을 도시한다.
도 12는 Hu1210-8, Hu1210-9, Hu1210-16, Hu1210-17, Hu1210-21 및 Hu1210-36 인간화 항체가 혼합 림프구 반응에서 IFNγ 및 IL-2 생산을 독립적으로 촉진할 수 있다는 것을 도시한다.
도 13은 Hu1210-40, Hu1210-41 및 Hu1210-17 인간화 항체가 CMV 리콜(recall) 검정에서 IFNγ 생산을 독립적으로 촉진할 수 있다는 것을 도시한다.
도 14는 Hu1210-31이 HCC827-NSG-이종 이식 모델에서 5mg/kg으로 종양 성장을 30%까지 억제할 수 있다는 것을 나타낸다.
도 15는 Hu1210-41 항체가 HCC827-NSG-이종 이식 모델에서 용량-의존적으로 종양 성장을 억제할 수 있는 한편, 종양 중량이 또한 Hu1210-41 항체에 의해 용량-의존적으로 억제된다는 것을 나타낸다.
도 16은, 각각의 PD-L1 돌연변이에 대하여, 발현의 함수 (대조군 항-PD-L1 mAb 반응성)로서 평균 결합 값을 플롯팅한다.
도 17은 항-PD-L1 Hu1210-41 항체로의 결합에 포함된 잔기 (구체)인 Y134, K162, 및 N183의 자리를 예시한다.
정의
용어 "하나의(a)" 또는 "하나의(an)" 실체물은 상기 실체물 중 하나 이상을 지칭한다; 예를 들어, "하나의 항체"는 하나 이상의 항체를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어 "하나의(a)" (또는 "하나의(an)"), "하나 이상의", 및 "적어도 하나"는 본원에서 교체 가능하게 사용될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "폴리펩타이드"는 단수형 "폴리펩타이드", 뿐만 아니라 복수형 "폴리펩타이드들"을 포함하도록 의도되고, 아미드 결합 (펩타이드 결합으로도 알려져 있음)에 의해 선형으로 결합된 모노머 (아미노산)로 구성된 분자를 지칭한다. 용어 "폴리펩타이드"는 둘 이상의 아미노산의 임의의 사슬 또는 사슬들을 지칭하지만, 생성물의 구체적인 길이를 지칭하는 것은 아니다. 따라서, 펩타이드, 다이펩타이드, 트라이펩타이드, 올리고펩타이드, "단백질", "아미노산 사슬", 또는 둘 이상의 아미노산의 사슬 또는 사슬들을 지칭하도록 사용되는 어떤 다른 용어도 "폴리펩타이드"의 정의 내에 포함되고, 용어 "폴리펩타이드"는 이들 용어 대신에, 또는 이들 용어 중 어느 것과도 교체 가능하게 사용될 수 있다. 따라서, 펩타이드, 다이펩타이드, 트라이펩타이드, 올리고펩타이드, "단백질", "아미노산 사슬", 또는 둘 이상의 아미노산의 사슬 또는 사슬들을 지칭하도록 사용되는 어떤 다른 용어도 "폴리펩타이드"의 정의 내에 포함되고, 용어 "폴리펩타이드"는 이들 용어 대신에, 또는 이들 용어 중 어느 것과도 교체 가능하게 사용될 수 있다. 용어 "폴리펩타이드"는 또한, 제한이 아니라, 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질 가수분해에 의한 절단, 또는 비-자연 발생 아미노산에 의한 변형을 포함하는, 폴리펩타이드의 발현 후 변형의 생성물을 지칭하도록 의도된다. 폴리펩타이드는 천연 생물학적 공급원으로부터 유래되거나 재조합 기술에 의해 생산될 수도 있지만, 반드시 지정된 핵산 서열로부터 번역되어야 하는 것은 아니다. 그것은 화학적 합성을 포함한, 어떤 방식으로도 생성될 수 있다.
용어 "분리된"은 세포, 핵산, 예컨대 DNA 또는 RNA에 관하여 본원에서 사용된 바와 같이 거대분자의 천연 공급원에 존재하는 각각 다른 DNA 또는 RNA로부터 분리된 분자를 지칭한다. 용어 "분리된"은 또한 본원에서 사용된 바와 같이 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 때에는 세포 물질, 바이러스 물질, 또는 배양 배지, 또는 화학적으로 합성될 때에는 화학적 전구물질 또는 기타 화학물질이 실질적으로 없는 핵산 또는 펩타이드를 지칭한다. 더욱이, "분리된 핵산"은 단편으로서 자연 발생하지 않고 자연 상태에서 발견되지 않는 핵산 단편을 포함하는 것을 의미한다. 용어 "분리된"은 또한 본원에서 다른 세포 단백질 또는 조직으로부터 분리된 세포 또는 폴리펩타이드를 지칭하는데 사용된다. 분리된 폴리펩타이드는 정제된 폴리펩타이드 및 재조합 폴리펩타이드 둘 다를 포함하는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "재조합"은 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드와 관련이 있기 때문에 자연적으로는 존재하지 않는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 형태를 의도하며, 이것의 비-제한적 예는 정상적으로는 발생하지 않는 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드를 함께 조합함으로써 생성될 수 있다.
"상동성" 또는 "동일성" 또는 "유사성"은 두 개의 펩타이드 또는 두 개의 핵산 분자 간의 서열 유사성을 지칭한다. 상동성은 비교의 목적을 위해 정렬될 수 있는 각각의 서열에서의 위치를 비교함으로써 결정될 수 있다. 비교된 서열에서의 위치가 같은 염기 또는 아미노산에 의해 점유되는 경우, 분자는 상기 위치에서 상동성이다. 서열 간 상동성의 정도는 서열에 의해 공유되는 일치하거나 상동성인 위치의 수의 함수이다. "무관하거나" 또는 "비-상동성인" 서열은 본 명세서의 서열 중 하나와 40% 미만의 동일성을 공유하지만, 바람직하게는 25% 미만의 동일성을 공유한다.
폴리뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 영역 (또는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 영역)은 또 다른 서열과 특정 퍼센트 (예를 들어, 60　%, 65　%, 70　%, 75　%, 80　%, 85　%, 90　%, 95　%, 98　% 또는 99　%)의 "서열 동일성"을 가지며, 정렬될 때, 두 서열을 비교하는데 있어서 염기 (또는 아미노산)의 퍼센트가 같다는 것을 의미한다. 이 정렬 및 퍼센트 상동성 또는 서열 동일성은 업계에 공지된 소프트웨어 프로그램, 예를 들어, Ausubelet al. eds. (2007) CurrentProtocols in Molecular Biology에서 기술된 것들을 사용하여 결정될 수 있다. 바람직하게는, 기본 매개변수가 정렬에 사용된다. 한 가지 정렬 프로그램은 BLAST이며, 기본 매개변수를 사용한다. 특히, 프로그램은 BLASTN 및 BLASTP이며, 다음의 기본 매개변수를 사용한다: 유전 암호 = 표준; 필터 = 없음; 가닥 = 둘 다; 컷오프(cut off) = 60; 예상치 = 10; 매트릭스 = BLOSUM62; 기술구(Descriptions) = 50개의 서열; 분류 기준 = 높은 점수; 데이터베이스 = 비-다중, GenBank + EMBL + DDBJ + PDB + GenBank CDS 번역 + SwissProtein + SPupdate + PIR. 생물학적으로 동등한 폴리뉴클레오타이드는 상기 언급된 명시된 퍼센트 상동성을 갖고 같거나 유사한 생물학적 활성을 가진 폴리펩타이드를 암호화하는 것들이다.
용어 "동등한 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드"는 핵산 또는 이것의 보체의 뉴클레오타이드 서열과 어느 정도의 상동성, 또는 서열 동일성을 가진 뉴클레오타이드 서열을 가진 핵산을 지칭한다. 이중 가닥 핵산의 상동체는 핵산 또는 이것의 보체와 어느 정도의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 가진 핵산을 포함하도록 의도된다. 한 양태에서, 핵산의 상동체는 핵산 또는 이것의 보체와 혼성체화될 수 있다. 유사하게, "동등한 폴리펩타이드"는 참조 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 어느 정도의 상동성, 또는 서열 동일성을 가진 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 양태에서, 서열 동일성은 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 양태에서, 동등한 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드는 참조 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드와 비교하여 하나, 두 개, 세 개, 네 개 또는 다섯 개의 추가, 결실, 치환 및 이것들의 조합을 갖는다. 일부 양태에서, 동등한 서열은 참조 서열의 활성 (예를 들어, 에피토프-결합) 또는 구조 (예를 들어, 염 다리)를 보유한다.
혼성체화 반응은 상이한 "엄중도"의 조건 하에서 수행될 수 있다. 일반적으로, 낮은 엄중도 혼성체화 반응은 약 40℃에서 약 10 x SSC 또는 동등한 이온 강도/온도의 용액에서 수행된다. 중간 엄중도 혼성체화는 전형적으로 약 50℃에서 약 6 x SSC에서 수행되고, 높은 엄중도 혼성체화 반응은 일반적으로 약 60℃에서 약 1 x SSC에서 수행된다. 혼성체화 반응은 또한 당업자에게 널리 공지된 "생리학적 조건" 하에서 수행될 수 있다. 생리학적 조건의 비-제한적 예는 세포에서 일반적으로 발견되는 온도, 이온 강도, pH 및 Mg2 + 농도이다.
폴리뉴클레오타이드는 네 개의 뉴클레오타이드 염기의 특정 서열로 구성된다: 아데닌 (A); 시토신 (C); 구아닌 (G); 티민 (T); 및 폴리뉴클레오타이드가 RNA일 때에는 티민 대신에 우라실 (U). 따라서, 용어 "폴리뉴클레오타이드 서열"은 폴리뉴클레오타이드 분자의 알파벳 표현이다. 이 알파벳 표현은 중앙 처리 장치를 가진 컴퓨터의 데이터베이스에 입력되어 기능 유전체학 및 상동성 검색과 같은 생물정보학 용도로 사용될 수 있다. 용어 "다형현상(polymorphism)"은 하나 이상의 형태의 유전자 또는 그 일부의 공존을 지칭한다. 적어도 두 개의 다른 형태, 즉, 두 개의 다른 뉴클레오타이드 서열이 존재하는 유전자의 일부는 "유전자의 다형성 영역"이라고 불린다. 다형성 영역은 단일 뉴클레오타이드일 수 있으며, 이것의 동일성은 다른 대립유전자에서 차이가 있다.
용어 "폴리뉴클레오타이드" 및 "올리고뉴클레오타이드"는 교체 가능하게 사용되고 임의의 길이의 뉴클레오타이드의 폴리머 형태, 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드 또는 이것의 유사체를 지칭한다. 폴리뉴클레오타이드는 임의의 3차원 구조를 가질 수 있고, 공지되어 있든 아니든, 어떠한 기능을 수행할 수도 있다. 다음은 폴리뉴클레오타이드의 비-제한적 예이다: 유전자 또는 유전자 단편 (예를 들어, 프로브, 프라이머, EST 또는 SAGE 태그), 엑손, 인트론, 메신저 RNA (mRNA), 운반 RNA, 리보솜 RNA, 리보자임, cDNA, dsRNA, siRNA, miRNA, 재조합 폴리뉴클레오타이드, 분지형(branched) 폴리뉴클레오타이드, 플라스미드, 벡터, 임의의 서열의 분리된 DNA, 임의의 서열의 분리된 RNA, 핵산 프로브 및 프라이머. 폴리뉴클레오타이드는 메틸화된 뉴클레오타이드 및 뉴클레오타이드 유사체와 같이 변형된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 폴리뉴클레오타이드의 조립 전에 또는 후에 뉴클레오타이드 구조에 대한 변형이 부여될 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열은 비-뉴클레오타이드 구성요소에 의해 중단될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 폴리머화 이후, 예를 들어, 라벨링 구성요소와의 컨쥬게이션에 의해 더 변형될 수 있다. 용어는 또한 이중 가닥 및 단일 가닥 분자 둘 다를 지칭한다. 달리 명시되거나 요구되지 않는 한, 폴리뉴클레오타이드인 본 명세서의 임의의 구체예는 이중 가닥 형태 및 이중 가닥 형태를 구성하는 것으로 공지되거나 또는 예측되는 두 개의 상보적 단일 가닥 형태 각각을 둘 다 포함한다.
용어 "암호화하다"는 폴리뉴클레오타이드에 적용될 때, 고유한 상태에서 또는 당업자에게 널리 공지된 방법에 의해 조작될 때, 폴리펩타이드 및/또는 이것의 단편에 대한 mRNA를 생산하기 위해 전사되고 및/또는 번역될 수 있는 경우, 폴리펩타이드를 "암호화한다"고 언급되는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 안티센스(antisense) 가닥은 이러한 핵산의 보체이고, 암호화 서열은 그것으로부터 추정될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "항체" 또는 "항원-결합 폴리펩타이드"는 항원을 특이적으로 인식하여 이것에 결합하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 복합체를 지칭한다. 항체는 전체 항체 및 이것의 임의의 항원 결합 단편 또는 단일 사슬일 수 있다. 따라서 용어 "항체"는 항원에 결합하는 생물학적 활성을 가진 면역글로불린 분자의 적어도 일부를 포함하는 분자를 함유하는 임의의 단백질 또는 펩타이드를 포함한다. 이러한 것들의 예는 중쇄 또는 경쇄의 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 이것의 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 프레임워크 (FR) 영역, 또는 이것의 임의의 부분, 또는 결합 단백질의 적어도 한 부분을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
용어 "항체 단편" 또는 "항원-결합 단편"은, 본원에서 사용된 바와 같이, F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, Fv, scFv 등과 같은 항체의 일부이다. 구조에 관계없이, 항체 단편은 온전한 항체에 의해 인식되는 같은 항원과 결합한다. 용어 "항체 단편"은 압타머(aptamer), 거울상 압타머(spiegelmer), 및 디아바디를 포함한다. 용어 "항체 단편"은 또한 특이적 항원에 결합하여 복합체를 형성함으로써 항체와 유사한 작용을 하는 임의의 합성 또는 유전적으로 조작된 단백질을 포함한다.
"단일 사슬 가변 단편" 또는 "scFv"는 면역글로불린의 중쇄 (VH) 및 경쇄 (VL)의 가변 영역의 융합 단백질을 지칭한다. 일부 양태에서, 영역은 10개 내지 약 25개의 아미노산의 짧은 링커 펩타이드로 연결되어 있다. 링커는 유연성을 위해 글리신이 풍부할 뿐만 아니라 가용성을 위해 세린 또는 트레오닌이 풍부할 수 있고, VH의 N-말단과 VL의 C-말단, 또는 그 반대를 연결할 수 있다. 이 단백질은 불변 영역의 제거 및 링커의 도입에도 불구하고 원래의 면역글로불린의 특이성을 보유한다. ScFv 분자는 업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 5,892,019에서 기술되어 있다.
용어 항체는 생화학적으로 구별될 수 있는 다양한 분류의 폴리펩타이드를 포함한다. 당업자는 중쇄가 감마(gamma), 뮤(mu), 알파(alpha), 델타(delta), 또는 엡실론(epsilon) (γ, μ, α, δ, ε)으로 분류되며 그것들 중에는 몇몇 하위분류 (예를 들어, γ1-γ4)를 갖는다는 것을 인정할 것이다. 그것은 항체의 "분류"를 각각 IgG, IgM, IgA IgG, 또는 IgE로 결정하는 이 사슬의 특징이다. 면역글로불린 하위분류 (아이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, 등은 널리 특성화되어 기능적 특수성을 부여하는 것으로 알려져 있다. 이 분류 및 아이소타입 각각의 변형된 버젼은 본 명세서의 관점에서 당업자에게 쉽게 구별 가능하며, 따라서, 본 명세서의 범위 내에 있다. 모든 면역글로불린 분류는 분명하게 본 명세서의 범위 내에 있고, 하기 논의는 일반적으로 면역글로불린 분자의 IgG 분류에 관한 것이다. IgG에 관하여, 표준 면역글로불린 분자는 분자량 대략 23,000 달톤의 두 개의 동일한 경쇄 폴리펩타이드, 및 분자량 53,000-70,000의 두 개의 동일한 중쇄 폴리펩타이드를 포함한다. 네 개의 사슬은 전형적으로 "Y" 입체배치에서 이황화 결합에 의해 결합되며 경쇄는 "Y"의 입구에서 시작하여 가변 영역을 통해 계속되는 중쇄를 포함한다.
본 명세서의 항체, 항원-결합 폴리펩타이드, 이것의 변이체, 또는 유도체는 다클론성, 단클론성, 다중특이적, 인간, 인간화, 영장류화, 또는 키메라 항체, 단일 사슬 항체, 에피토프-결합 단편, 예를 들어, Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, Fv, 단일 사슬 Fv (scFv), 단일 사슬 항체, 이황화 결합된 Fv (sdFv), VK 또는 VH 도메인을 포함하는 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 및 항-이디오타입(anti-idiotypic) (항-Id) 항체 (예를 들어, 본원에서 개시된 LIGHT 항체에 대한 항-Id 항체 포함)를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 명세서의 면역글로불린 또는 항체 분자는 면역글로불린 분자의 어떠한 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 분류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위분류일 수 있다.
경쇄는 카파 또는 람다 (K, λ)로 분류된다. 각각의 중쇄 분류는 카파 또는 람다 경쇄와 결합될 수도 있다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄는 서로 공유 결합되고, 두 개의 중쇄의 "꼬리" 부분은 공유 이황화 결합에 의해 또는 면역글로불린이 하이브리도마, B 세포 또는 유전적으로 조작된 숙주 세포에 의해 생성될 때에는 비-공유 결합에 의해 서로 결합된다. 중쇄에서, 아미노산 서열은 Y 입체배치의 포크형(forked) 단부의 N-말단에서부터 각 사슬의 바닥의 C-말단까지 계속된다.
경쇄 및 중쇄 둘 다는 구조적 및 기능적 상동성의 영역으로 나누어진다. 용어 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 사용된다. 이 점에 있어서, 경쇄 (VK) 및 중쇄 (VH) 부분 둘 다의 가변 도메인이 항원 인식 및 특이성을 결정한다는 것을 알 수 있을 것이다. 반대로, 경쇄 (CK) 및 중쇄 (CH1, CH2 또는 CH3)의 불변 도메인은 분비, 경태반 유동성(transplacental mobility), Fc 수용체 결합, 보체 결합, 등과 같은 중요한 생물학적 성질을 부여한다. 관례적으로 불변 영역 도메인이 항체의 항원-결합 부위 또는 아미노-말단으로부터 더 멀어짐에 따라 불변 영역 도메인의 넘버링이 증가한다. N-말단 부분은 가변 영역이고 C-말단 부분은 불변 영역이다; CH3 및 CK 도메인은 실제로 중쇄 및 경쇄의 카르복시-말단을 각각 포함한다.
상기 언급된 바와 같이, 가변 영역은 항체가 항원 상의 에피토프를 선택적으로 인식하여 그것에 특이적으로 결합하게 한다. 즉, 항체의 VK 도메인 및 VH 도메인, 또는 상보성 결정 영역 (CDR)의 서브세트는 3차원 항원-결합 부위를 한정하는 가변 영역을 형성하도록 조합된다. 이 4차 항체 구조는 Y의 각 분지의 단부에 존재하는 항원-결합 부위를 형성한다. 더 구체적으로는, 항원-결합 부위는 각각의 VH 및 VK 사슬 상의 세 개의 CDR (즉 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)에 의해 한정된다. 어떤 경우에는, 예를 들어, 카멜리드(camelid) 종으로부터 유래되거나 카멜리드 면역글로불린을 기반으로 조작된 특정 면역글로불린 분자에서, 완전한 면역글로불린 분자는 단지 중쇄로만 구성될 수 있으며, 경쇄는 없을 수도 있다. 예를 들어, Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993) 참조.
자연 발생 항체에서, 각각의 항원-결합 도메인에 존재하는 여섯 개의 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 항체가 수성 환경에서 3차원 입체배치를 취하는 경우에 항원-결합 도메인을 형성하도록 특이적으로 위치하는, 짧고, 비-인접한 아미노산 서열이다. "프레임워크" 영역이라고 불리는, 항원-결합 도메인의 나머지 아미노산은 더 적은 분자간 가변성을 나타낸다. 프레임워크 영역은 대부분 β-시트 입체구조를 취하고 CDR은 β-시트 구조를 연결하고, 어떤 경우에는 β-시트 구조의 일부를 형성하는 루프(loop)를 형성한다. 따라서, 프레임워크 영역은 사슬 간 비-공유 결합에 의한 상호작용에 의해 올바른 배향으로 CDR을 위치시키는 스캐폴드(scaffold)를 형성하는 작용을 한다. 위치된 CDR에 의해 형성된 항원-결합 도메인은 면역반응성 항원 상의 에피토프에 대하여 상보적인 표면을 한정한다. 이 상보적 표면은 항체의, 그것의 동족 에피토프로의 비-공유 결합을 촉진한다. 각각 CDR 및 프레임워크 영역을 포함하는 아미노산은 정확하게 한정되어 있기 때문에, 당업자에 의해 임의의 주어진 중쇄 또는 경쇄 가변 영역에 대하여 쉽게 확인될 수 있다 ("Sequences of Proteins of Immunological Interest," Kabat, E., et al., U.S. Department of Health and Human Services, (1983); 및 Chothia and Lesk, J. MoI . Biol., 196:901-917 (1987) 참조).
업계 내에서 용어의 둘 이상의 정의가 사용되고 및/또는 수용되는 경우에는, 용어의 정의는 본원에서 사용된 바와 같이 명확하게 반대로 진술되지 않는 한 모든 이러한 의미를 포함하도록 의도된다. 구체적인 예는 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견된 비-인접한 항원 조합 부위를 기술하기 위한 용어 "상보성 결정 영역" ("CDR")의 사용이다. 이 특정 영역은 Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (1983) 및 Chothia et al., J. MoI . Biol. 196:901-917 (1987)에 의해 기술되었으며, 이것들은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. Kabat 및 Chothia에 따른 CDR 정의는 서로 비교될 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 서브세트를 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 그 변이체의 CDR을 지칭하기 위한 정의의 적용은 본원에서 한정되고 사용된 용어의 범위 내에 있도록 의도된다. 각각의 상기 인용된 참고문헌에 의해 한정된 바와 같이 CDR을 포함하는 적절한 아미노산 잔기는 비교를 위해 하기 표에서 제시된다. 특정 CDR을 포함하는 정확한 잔기의 수는 CDR의 서열 및 크기에 따라 달라질 것이다. 당업자는 잔기가 항체의 가변 영역 아미노산 서열이 주어진 특정 CDR을 포함하는지를 일상적으로 결정할 수 있다.
Figure pat00001
Kabat et al.은 또한 어떤 항체에도 적용 가능한 가변 도메인 서열에 대한 넘버링 시스템을 한정하였다. 당업자는 서열 그 자체를 넘어서 임의의 실험 데이터에 의존하지 않고도 "카바트 넘버링"의 이 시스템을 임의의 가변 도메인 서열에 명확하게 할당할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "카바트 넘버링"은 Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest" (1983)에 의해 제시된 넘버링 시스템을 지칭한다.
상기 표에 더하여, 카바트 넘버링 시스템은 다음과 같이 CDR 영역을 기술한다: CDR-H1은 대략 아미노산 31 (즉, 최초 시스테인 잔기 이후 대략 9개의 잔기)에서 시작하여, 대략 5-7개의 아미노산을 포함하고, 다음 트립토판 잔기에서 끝난다. CDR-H2는 CDR-H1의 단부 이후 15번째 잔기에서 시작하여, 대략 16-19개의 아미노산을 포함하고, 다음 아르기닌 또는 리신 잔기에서 끝난다. CDR-H3은 CDR-H2의 단부 이후 대략 33번째 아미노산 잔기에서 시작하여; 3-25개의 아미노산을 포함하고; 서열 W-G-X-G에서 끝나며, X는 임의의 아미노산이다. CDR-L1은 대략 잔기 24에서 (즉, 시스테인 잔기 이후) 시작하여; 대략 10-17개의 잔기를 포함하고; 다음 트립토판 잔기에서 끝난다. CDR-L2는 CDR-L1의 단부 이후 대략 16번째 잔기에서 시작하고 대략 7개의 잔기를 포함한다. CDR-L3은 CDR-L2의 단부 이후 (즉, 시스테인 잔기 다음) 대략 33번째 잔기에서 시작하여; 대략 7-11개의 잔기를 포함하고 서열 F 또는 W-G-X-G에서 끝나며, X는 임의의 아미노산이다.
본원에서 개시된 항체는 조류 및 포유동물을 포함한 임의의 동물 기원일 수도 있다. 바람직하게는, 항체는 인간, 쥐, 당나귀, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 라마, 말, 또는 닭 항체이다. 또 다른 구체예에서, 가변 영역은 기원이 콘드릭토이드(condricthoid) (예를 들어, 상어로부터)일 수도 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "중쇄 불변 영역"은 면역글로불린 중쇄로부터 유래된 아미노산 서열을 포함한다. 중쇄 불변 영역을 포함하는 폴리펩타이드는 CH1 도메인, 힌지 (예를 들어, 상부, 중간, 및/또는 하부 힌지 영역) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 이것의 변이체 또는 단편 중 적어도 하나를 포함한다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용되는 항원-결합 폴리펩타이드는 CH1 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬; CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 일부, CH2 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬; CH1 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬; CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 일부, 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬, 또는 CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬을 포함할 수도 있다. 또 다른 구체예에서, 본 명세서의 폴리펩타이드는 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬을 포함한다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 항체는 CH2 도메인의 적어도 일부 (예를 들어, 모든 CH2 도메인 또는 이것의 일부)가 결여될 수도 있다. 상기 제시된 바와 같이, 중쇄 불변 영역이 자연 발생 면역글로불린 분자와 아미노산 서열이 다르도록 변형될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다.
본원에서 개시된 항체의 중쇄 불변 영역은 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래될 수도 있다. 예를 들어, 폴리펩타이드의 중쇄 불변 영역은 IgGl 분자로부터 유래된 CH1 도메인 및 IgG3 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수도 있다. 또 다른 예에서, 중쇄 불변 영역은 부분적으로는 IgGl 분자로부터 유래되고, 부분적으로는 IgG3 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 중쇄 부분은 부분적으로는 IgGl 분자로부터 유래되고 및 부분적으로는 IgG4 분자로부터 유래된 키메라 힌지를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "경쇄 불변 영역"은 항체 경쇄로부터 유래된 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 경쇄 불변 영역은 불변 카파 도메인 또는 불변 람다 도메인 중 적어도 하나를 포함한다.
"경쇄-중쇄 쌍"은 경쇄의 CL 도메인과 중쇄의 CH1 도메인 사이의 이황화 결합을 통해 다이머를 형성할 수 있는 경쇄 및 중쇄의 컬렉션을 지칭한다.
앞서 언급된 바와 같이, 다양한 면역글로불린 분류의 불변 영역의 서브유닛 구조 및 3차원 입체배치는 널리 공지되어 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "VH 도메인"은 면역글로불린 중쇄의 아미노 말단 가변 도메인을 포함하고 용어 "CH1 도메인"은 면역글로불린 중쇄의 제1 (가장 아미노 말단) 불변 영역 도메인을 포함한다. CH1 도메인은 VH 도메인에 인접하고 면역글로불린 중쇄 분자의 힌지 영역에 대하여 아미노 말단에 있다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "CH2 도메인"은 통상적인 넘버링 계획을 사용하여, 예를 들어, 항체의 대략 잔기 244에서 잔기 360까지 연장된 중쇄 분자의 일부를 포함한다 (잔기 244 내지 360, 카바트 넘버링 시스템; 및 잔기 231-340, EU 넘버링 시스템; Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (1983) 참조). CH2 도메인은 또 다른 도메인과 밀접하게 쌍을 형성하지 않는다는 점에서 독특하다. 오히려, 두 개의 N-결합된 분지형 탄수화물 사슬이 온전한 고유의 IgG 분자의 두 개의 CH2 도메인 사이에 개재된다. 또한 CH3 도메인이 IgG 분자의 CH2 도메인에서 C-말단까지 연장되고 대략 108개의 잔기를 포함한다는 것이 잘 기록되어 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "힌지 영역"은 CH1 도메인을 CH2 도메인에 결합시키는 중쇄 분자의 일부를 포함한다. 이 힌지 영역은 대략 25개의 잔기를 포함하고 유연하며, 따라서 두 개의 N-말단 항원-결합 영역을 독립적으로 이동시킨다. 힌지 영역은 세 개의 별개의 도메인, 상부, 중간, 및 하부 힌지 도메인으로 세분화될 수 있다 (Roux et al., J. Immunol 161:4083 (1998)).
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "이황화 결합"은 두 개의 황 원자 사이에서 형성된 공유 결합을 포함한다. 아미노산 시스테인은 제2 티올 기와 함께 이황화 결합 또는 이황화물 다리를 형성할 수 있는 티올 기를 포함한다. 대부분의 자연 발생 IgG 분자에서, CH1 및 CK 영역은 이황화 결합에 의해 결합되고 두 개의 중쇄는 카바트 넘버링 시스템을 사용하여 239 및 242 (위치 226 또는 229, EU 넘버링 시스템)에 상응하는 위치에서 두 개의 이황화 결합에 의해 결합된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "키메라 항체"는 면역반응성 영역 또는 부위가 제1 종으로부터 얻어지거나 유래되고 불변 영역 (온전하거나, 부분적이거나 또는 본 명세서에 따라 변형될 수도 있다)이 제2 종으로부터 얻어지는 임의의 항체를 의미할 것이다. 특정 구체예에서 표적 결합 영역 또는 부위는 비-인간 공급원 (예를 들어, 마우스 또는 영장류)의 것이고 불변 영역은 인간의 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "퍼센트 인간화"는 인간화 도메인 및 생식세포 계열 도메인 간의 프레임워크 아미노산 차이 (즉, 비-CDR 차이)의 수를 결정하고, 총 아미노산 수에서 상기 수를 뺀 다음, 그것을 총 아미노산 수로 나누고 100을 곱하여 계산된다.
"특이적으로 결합하다" 또는 "~에 대한 특이성을 갖는다"는 일반적으로 항체가 항원-결합 도메인을 통해 에피토프에 결합하고, 결합은 항원-결합 도메인과 에피토프 사이에서 약간의 상보성을 수반한다는 것을 의미한다. 이 정의에 따르면, 항체가 항원-결합 도메인을 통해 무작위의 무관한 에피토프에 결합하는 것보다 더 쉽게 에피토프에 결합할 때 항체는 상기 에피토프에 "특이적으로 결합한다"고 한다. 용어 "특이성"은 본원에서 특정 항체가 특정 에피토프에 결합하는 상대적 친화도를 정량화하는데 사용된다. 예를 들어, 항체 "A"는 항체 "B"보다 주어진 에피토프에 대하여 더 높은 특이성을 갖는 것으로 간주될 수도 있거나, 또는 항체 "A"는 관련된 에피토프 "D"에 대하여 갖는 것보다 더 높은 특이성으로 에피토프 "C"에 결합한다고 할 수도 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 치료적 처치 및 예방적(prophylactic) 또는 예방적(preventative) 조치 둘 다를 지칭하며, 그 목적은 원치않는 생리학적 변화 또는 장애, 예컨대 암의 진행을 예방하거나 둔화시키는 (줄이는) 것이다. 유익하거나 원하는 임상적 결과는, 검출 가능하든 검출 불가능하든, 증상의 완화, 질환의 정도의 감소, 질환의 안정화된 (즉, 악화되지 않는) 상태, 질환 진행의 지연 또는 둔화, 질환 상태의 개선 또는 경감, 및 병의 차도 (일부든 전체적이든)를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. "치료"는 또한 치료를 받지 않은 경우 예상된 생존과 비교하여 연장된 생존을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 것들은 이미 질병 또는 장애에 걸린 것들, 뿐만 아니라 질병 또는 장애에 걸리기 쉬운 것들 또는 질병 또는 장애가 예방되어야 하는 것들을 포함한다.
"대상체" 또는 "개체" 또는 "동물" 또는 "환자" 또는 "포유동물"은 진단, 예후, 또는 요법이 필요한 임의의 대상체, 특히 포유류 대상체를 의미한다. 포유류 대상체는 인간, 가축, 농경용 동물, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완용 동물, 예컨대 개, 고양이, 기니피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 소, 젖소, 등을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "치료가 필요한 환자" 또는 "치료가 필요한 대상체"와 같은 구절은, 예를 들어, 검출, 진단 절차 및/또는 치료에 사용된 본 명세서의 항체 또는 조성물의 투여로부터 이익을 얻는 대상체, 예컨대 포유류 대상체를 포함한다.
항-PD-L1 항체
본 명세서는 인간 PD-L1 단백질에 대하여 높은 친화도를 갖는 항-PD-L1 항체를 제공한다. 테스트된 항체는 강력한 결합 및 억제 활성을 나타냈고 치료적 및 진단적 사용에 유용하다.
PD-L1 단백질은 40kDa 1형 막관통 단백질이다. 그것의 세포 외 부분은 N-말단 면역글로불린 V (IgV) 도메인 (아미노산 19-127) 및 C-말단 면역글로불린 C (IgC) 도메인 (아미노산 133-225)을 포함한다. PD-1 및 PD-L1은 항체 및 T 세포 수용체의 IgV 도메인과 마찬가지로 IgV 도메인의 보존된 전면 및 측면을 통해 상호작용한다. 놀랄 것도 없이, 현재의 항-PD-L1 항체는 모두 PD-1 및 PD-L1 간의 결합을 붕괴시킬 수 있는 IgV 도메인에 결합한다. 그러므로 본원에서 개시된 다수와 같이, PD-L1 단백질의 IgC 도메인에 결합하는 항체는 여전히 효과적으로, 그리고 아마도 더 많이 PD-L1을 억제하여 더 개선된 치료적 효과로 이어질 수 있다는 것은 본 명세서의 놀랍고 예상치 못한 발견이다.
그러므로, 본 명세서의 한 구체예는 항-PD-L1 항체 또는 이것의 단편을 제공하는데, 이 항체 또는 이것의 단편은 인간 예정된 사멸-리간드 1 (PD-L1) 단백질의 면역글로불린 C (Ig C) 도메인에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, Ig C 도메인은 아미노산 잔기 133-225로 구성되어 있다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 PD-L1 단백질의 아미노산 잔기 Y134, K162, 또는 N183 중 적어도 하나에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 PD-L1 단백질의 아미노산 잔기 Y134, K162, 또는 N183 중 적어도 두 개에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 PD-L1 단백질의 아미노산 잔기 Y134, K162, 및 N183 중 적어도 하나에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 PD-L1 단백질의 면역글로불린 V (Ig V) 도메인에 결합하지 않으며, Ig V 도메인은 아미노산 잔기 19-127로 구성되어 있다.
본 명세서의 한 구체예에 따르면, 서열 번호: 1-6에서 한정된 CDR 영역을 가진 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체가 제공된다.
Figure pat00002
실험예에서 입증된 바와 같이, 이들 CDR 영역을 함유하는 항체는 , 마우스, 인간화 또는 키메라에 관계없이, 강력한 PD-L1 결합 및 억제 활성을 갖는다. 또한 컴퓨터 모델링(modeling)은 CDR 내 특정 잔기가 항체의 성질을 보유하거나 개선하도록 변형될 수 있다는 것을 나타냈다. 이러한 잔기는 "핫 스팟(hot spot)"이라고 불리며 이것들은 표 1에서 밑줄 그어져 있다. 일부 구체예에서, 본 명세서의 항-PD-L1 항체는 표 1에서 나열된 VH 및 VL CDR을 포함하고, 하나, 두 개 또는 세 개의 추가의 변형을 갖는다. 이러한 변형은 아미노산의 추가, 결실 또는 치환일 수 있다.
일부 구체예에서, 변형은 각각의 CDR의 하나 이하의 핫 스팟 위치에서의 치환이다. 일부 구체예에서, 변형은 하나, 두 개 또는 세 개의 이러한 핫 스팟 위치에서의 치환이다. 한 구체예에서, 변형은 핫 스팟 위치 중 하나에서의 치환이다. 일부 구체예에서, 이러한 치환은 보존적 치환이다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기의 패밀리는 업계에서 한정되어 있으며, 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비대전 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함한다. 따라서, 면역글로불린 폴리펩타이드에서 비필수 아미노산 잔기는 바람직하게는 같은 측쇄 패밀리의 또 다른 아미노산 잔기로 대체된다. 또 다른 구체예에서, 일련의 아미노산이 측쇄 패밀리 구성원의 순서 및/또는 조성이 다른, 구조적으로 유사한 열로 대체될 수 있다.
보존적 아미노산 치환의 비-제한적 예는 하기 표에서 제공되며, 0 또는 그 이상의 유사성 점수는 두 개의 아미노산 사이의 보존적 치환을 나타낸다.
Figure pat00003
Figure pat00004
적합하게 치환된 CDR의 구체적인 예는 실시예 11의 서열 번호: 61-111에서 제공된다. 그러므로, 일부 구체예에서는, 본 명세서의 항체가 서열 번호: 1 또는 61-67 중 어느 하나의 VH CDR1을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 명세서의 항체는 서열 번호: 2 또는 68-77 중 어느 하나의 VH CDR2를 포함한다. 일부 구체예에서, 본 명세서의 항체는 서열 번호: 1 또는 78-90 중 어느 하나의 VH CDR3을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 명세서의 항체는 서열 번호: 4 또는 91-92 중 어느 하나의 VL CDR1을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 명세서의 항체는 서열 번호: 5 또는 93-105 중 어느 하나의 VL CDR2를 포함한다. 일부 구체예에서, 본 명세서의 항체는 서열 번호: 6 또는 106-110 중 어느 하나의 VL CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 상기 치환 중 하나 이하, 두 개 이하, 또는 세 개 이하를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 61-67 중 어느 하나의 VH CDR1, 서열 번호: 2의 VH CDR2, 서열 번호: 3의 VH CDR3, 서열 번호: 4의 VL CDR1, 서열 번호: 5의 VL CDR2, 및 서열 번호: 6의 VL CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 서열 번호: 1의 VH CDR1, 서열 번호: 2 또는 서열 번호: 68-77 중 어느 하나의 VH CDR2, 서열 번호: 3의 VH CDR3, 서열 번호: 4의 VL CDR1, 서열 번호: 5의 VL CDR2, 및 서열 번호: 6의 VL CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 서열 번호: 1의 VH CDR1, 서열 번호: 2의 VH CDR2 , 서열 번호: 3 또는 서열 번호: 78-90 중 어느 하나의 VH CDR3 , 서열 번호: 4의 VL CDR1, 서열 번호: 5의 VL CDR2 , 및 서열 번호: 6의 VL CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 서열 번호: 1의 VH CDR1 , 서열 번호: 2의 VH CDR2 , 서열 번호: 3의 VH CDR3, 서열 번호: 4 또는 서열 번호: 91-92 중 어느 하나의 VL CDR1 , 서열 번호: 5의 VL CDR2, 및 서열 번호: 6의 VL CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 서열 번호: 1의 VH CDR1, 서열 번호: 2의 VH CDR2, 서열 번호: 3의 VH CDR3 , 서열 번호: 4의 VL CDR1, 서열 번호: 5 또는 서열 번호: 93-105 중 어느 하나의 VL CDR2 , 및 서열 번호: 6의 VL CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이것의 단편은 서열 번호: 1의 VH CDR1, 서열 번호: 2의 VH CDR2 , 서열 번호: 3의 VH CDR3 , 서열 번호: 4의 VL CDR1 , 서열 번호: 5의 VL CDR2 , 및 서열 번호: 6 또는 서열 번호: 106-111 중 어느 하나의 VL CDR3을 포함한다.
VH의 비-제한적 예는 서열 번호: 7-26 및 113에서 제공되며, 그 중에서 서열 번호: 113은 마우스 VH이고, 서열 번호: 7-26은 인간화 VH이다. 또한, 인간화 VH 중에서, 서열 번호: 9-15, 17-21 및 23-26은 마우스 버젼에 대하여 하나 이상의 역돌연변이(back-mutation)를 포함한다. 유사하게, VL (VK)의 비-제한적 예는 서열 번호: 27-33에서 제공된다. 서열 번호: 28 및 30은 예에서 나타난 바와 같이 원래 유래되고, CDR-이식되고, 인간화된 서열이다. 서열 번호: 29 및 31-33은 역돌연변이된 인간화 VL이다.
역돌연변이는 항-PD-L1 항체의 특정 특성을 보유하는데 유용한 것으로 보인다. 따라서, 일부 구체예에서, 본 명세서의 항-PD-L1 항체, 특히 인간 또는 인간화 항체는 역돌연변이들 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구체예에서, VH 역돌연변이 (즉, 명시된 위치에서 아미노산을 포함함)는 , 카바트 넘버링에 따라, (a) 위치 44의 Ser, (b) 위치 49의 Ala , (c) 위치 53의 Ala , (d) 위치 91의 Ile , (e) 위치 1의 Glu , (f) 위치 37의 Val , (g) 위치 40의 Thr (h) 위치 53의 Val , (i) 위치 54의 Glu , (j) 위치 77의 Asn , (k) 위치 94의 Arg , 및 (l) 위치 108의 Thr, 및 이것들의 조합으로부터 선택된 하나 이상이다. 일부 구체예에서, 역돌연변이는, 카바트 넘버링에 따라, (a) 위치 44의 Ser, (b) 위치 49의 Ala , (c) 위치 53의 Ala , 및/또는 (d) 위치 91의 Ile, 및 이것들의 조합으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, VL 역돌연변이는, 카바트 넘버링에 따라, (a) 위치 22의 Ser , (b) 위치 42의 Gln , (c) 위치 43의 Ser , (d) 위치 60의 Asp , 및 (e) 위치 63의 Thr 및 이것들의 조합으로부터 선택된 하나 이상이다.
일부 구체예에서, 본 명세서의 항-PD-L1 항체는 서열 번호: 7-26의 VH, 서열 번호: 27-33의 VL, 또는 그것들의 각각의 생물학적 등가물을 포함한다. VH 또는 VL의 생물학적 등가물은 지정된 아미노산을 포함하는 한편 전체적으로 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열이다. 서열 번호: 20의 생물학적 등가물은, 예를 들어, 서열 번호: 20에 대하여 전체적으로 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖지만 CDR (서열 번호: 1-6 또는 그것들의 변이체)을 보유하고, 선택적으로 역돌연변이들 중 하나 이상, 또는 모두를 보유하는 VH일 수 있다. 한 구체예에서, VH는 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 갖고 VL은 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 갖는다.
본원에서 개시된 항체가 그것들이 유래된 자연 발생 결합 폴리펩타이드와는 아미노산 서열이 다르도록 변형될 수도 있다는 것은 또한 당업자들에 의해 이해될 것이다. 예를 들어, 지정된 단백질로부터 유래된 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열은 유사할 수도 있으며, 예를 들어, 시작 서열에 대하여 특정 퍼센트 동일성을 갖는데, 예를 들어, 그것은 시작 서열과 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일할 수도 있다.
특정 구체예에서, 항체는 항체와 정상적으로 회합되지 않은 아미노산 또는 하나 이상의 모이어티를 포함한다. 예시적 변형이 하기 더 상세히 기술된다. 예를 들어, 본 명세서의 항체는 플렉시블(flexible) 링커 서열을 포함할 수도 있거나, 또는 기능적 모이어티 (예를 들어, PEG, 약물, 독소, 또는 라벨)를 추가하도록 변형될 수도 있다.
본 명세서의 항체, 이것의 변이체, 또는 유도체는 공유 결합에 의한 부착이 항체가 에피토프에 결합하는 것을 막지 않도록, 즉, 항체로의 어떤 유형의 분자의 공유 부착에 의해 변형된 유도체를 포함한다. 예를 들어, 제한되는 것이 아니라, 항체는, 예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질 가수분해에 의한 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질로의 결합, 등에 의해 변형될 수 있다. 많은 화학적 변형 중 어떤 것도 공지된 기술에 의해 수행될 수 있으며, 특이적 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 튜니카마이신의 대사 합성, 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 추가적으로, 항체는 하나 이상의 비-고전적 아미노산을 함유할 수도 있다.
일부 구체예에서, 항체는 치료제, 프로드러그(prodrug), 펩타이드, 단백질, 효소, 바이러스, 지질, 생물학적 반응 개질제, 의약품, 또는 PEG에 컨쥬게이션될 수도 있다.
항체는 치료제에 컨쥬게이션되거나 융합될 수도 있으며, 이것은 검출 가능한 라벨, 예컨대 방사성 라벨, 면역조절자, 호르몬, 효소, 올리고뉴클레오타이드, 광활성 치료제 또는 진단제, 약물 또는 독소일 수도 있는 세포독성제, 초음파 증강제, 비-방사성 라벨, 이것들의 조합 및 업계에 공지된 다른 이러한 작용제를 포함할 수도 있다.
항체는 그것을 화학 발광 화합물에 커플링시킴으로써 검출 가능하게 라벨링될 수 있다. 화학 발광-태그된 항원-결합 폴리펩타이드의 존재는 화학 반응의 과정 동안에 발생하는 발광의 존재를 검출함으로써 결정된다. 특히 유용한 화학 발광 라벨링 화합물의 예는 루미놀, 아이소루미놀, 써마틱(theromatic) 아크리디늄 에스터, 이미다졸, 아크리디늄 염 및 옥살레이트 에스터이다.
항체는 또한 형광 발광 금속, 예컨대 152Eu, 또는 란탄 계열 중 다른 것들을 사용하여 검출 가능하게 라벨링될 수 있다. 이들 금속은 다이에틸렌트라이아민펜트아세트산 (DTPA) 또는 에틸렌다이아민테트라아세트산 (EDTA)과 같은 금속 킬레이트 기를 사용하여 항체에 부착될 수 있다. 다양한 모이어티를 항체에 컨쥬게이션하기 위한 기술은 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. (1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al., (eds.), Marcel Dekker, Inc., pp. 623- 53 (1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), Academic Press pp. 303-16 (1985), 및 Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol . Rev. (52:119-58 (1982))를 참조하면 된다.
이기능적 분자
PD-L1은 면역 체크포인트(checkpoint) 분자이고 또한 종양 항원이다. 종양 항원 표적화 분자로서, PD-L1에 특이적인 항체 또는 항원-결합 단편은 면역 세포에 특이적인 제2 항원-결합 단편과 조합되어 이중특이적 항체를 생성할 수 있다.
일부 구체예에서, 면역 세포는 T 세포, B 세포, 단핵구, 대식세포, 호중구, 수지상세포, 포식세포, 자연 살해 세포, 호산구, 호염기구, 및 비만 세포로 구성된 군으로부터 선택된다. 표적화될 수 있는 면역 세포 상의 분자는, 예를 들어, CD3, CD16, CD19, CD28, 및 CD64를 포함한다. 다른 예는 PD-1, CTLA-4, LAG-3 (CD223으로도 알려져 있음), CD28, CD122, 4-1BB (CD137로도 알려져 있음), TIM3, OX-40 또는 OX40L, CD40 또는 CD40L, LIGHT, ICOS/ICOSL, GITR/GITRL, TIGIT, CD27, VISTA, B7H3, B7H4, HEVM 또는 BTLA (CD272로도 알려져 있음), 살해 세포 면역글로불린-유사 수용체 (KIR), 및 CD47을 포함한다. 이중특이성의 구체적인 예는, 제한되는 것이 아니라, PD-L1/PD-1, PD-L1/LAG3, PD-L1/TIGIT, 및 PD-L1/CD47을 포함한다.
면역 체크포인트 억제자로서, PD-L1에 특이적인 항체 또는 항원-결합 단편은 종양 항원에 특이적인 제2 항원-결합 단편과 조합되어 이중특이적 항체를 생성할 수 있다. "종양 항원"은 종양 세포에서 생산된 항원성 물질이며, 즉, 그것은 숙주에서 면역 반응을 촉발한다. 종양 항원은 종양 세포를 확인하는데 유용하고 암 치료에서의 사용을 위한 잠재적 후보물질이다. 체내에서 정상적인 단백질은 항원성이 아니다. 하지만, 종양 형성(tumorigenesis) 중에 특정 단백질이 생산되거나 과발현되며 따라서 신체에 "이질적"인 것으로 보인다. 이것은 면역계로부터 잘 격리된 정상 단백질, 일반적으로는 극소량으로 생산되는 단백질, 일반적으로는 발달의 특정 단계에서만 생산되는 단백질, 또는 돌연변이로 인해 구조가 변형된 단백질을 포함할 수도 있다.
많은 종양 항원이 업계에 공지되어 있으며 새로운 종양 항원은 스크리닝(screening)에 의해 쉽게 동정될 수 있다. 종양 항원의 비-제한적 예는 EGFR, Her2, EpCAM, CD20, CD30, CD33, CD47, CD52, CD133, CD73, CEA, gpA33, 뮤신(Mucin), TAG-72, CIX, PSMA, 폴레이트-결합 단백질, GD2, GD3, GM2, VEGF, VEGFR, 인테그린(Integrin), aVb3, a5b1, ERBB2, ERBB3, MET, IGF1R, EPHA3, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP 및 테나신(Tenascin)을 포함한다.
일부 양태에서, 1가 유닛은 상응하는 비-종양 세포와 비교하여 종양 세포에서 과발현되는 단백질에 대하여 특이성을 갖는다. "상응하는 비-종양 세포"는 본원에서 사용된 바와 같이, 종양 세포의 기원과 같은 세포 유형의 비-종양 세포를 지칭한다. 이러한 단백질이 반드시 종양 항원과 다른 것은 아니다. 비-제한적 예는 대부분의 결장, 직장, 유방, 폐, 췌장 및 위장관 암종에서 과발현되는 암배아 항원 (carcinoembryonic 항원; CEA); 유방암, 난소암, 결장암, 폐암, 전립선암 및 자궁암에서 빈번하게 과발현되는 헤레굴린 수용체 (HER-2, neu 또는 c-erbB-2); 유방, 두경부, 비-소세포 폐 및 전립선의 고형 종양을 포함한 다양한 고형 종양에서 고도로 발현되는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR); 아시알로당단백질 수용체; 트랜스페린 수용체; 간세포에서 발현되는 세르핀 효소 복합체 수용체; 췌장관 선암종 세포에서 과발현되는 섬유아세포 성장 인자 수용체 (FGFR); 항-혈관 형성 유전자 요법을 위한 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR); 비뮤신성(nonmucinous) 난소 암종의 90%에서 선택적으로 과발현되는 폴레이트 수용체; 세포 표면 당질층(glycocalyx); 탄수화물 수용체; 및 호흡기 상피 세포로의 유전자 전달에 유용하고 낭포성 섬유증(Cystic Fibrosis)과 같은 폐 질환의 치료에 매력적인 폴리머 면역글로불린 수용체를 포함한다. 이 점에 있어서 이중특이성의 비-제한적 예는 PD-L1/EGFR, PD-L1/Her2, PD-L1/CD33, PD-L1/CD133, PD-L1/CEA 및 PD-L1/VEGF를 포함한다.
상이한 포맷의 이중특이적 항체가 또한 제공된다. 일부 구체예에서, 항-PD-L1 단편 및 제2 단편은 각각 Fab 단편, 단일 사슬 가변 단편 (scFv), 또는 단일-도메인 항체로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구체예에서, 이중특이적 항체는 Fc 단편을 더 포함한다.
단지 항체 또는 항원 결합 단편만을 포함하는 것이 아닌 이기능적 분자가 또한 제공된다. 종양 항원 표적화 분자로서, 본원에서 기술된 것들과 같은, PD-L1에 특이적인 항체 또는 항원-결합 단편은 선택적으로 펩타이드 링커를 통해 면역 사이토카인 또는 리간드와 조합될 수 있다.
결합된 면역 사이토카인 또는 리간드는 IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, GM-CSF, TNF-α, CD40L, OX40L, CD27L, CD30L, 4-1BBL, LIGHT 및 GITRL을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 이러한 이기능적 분자는 면역 체크포인트 차단 효과와 종양 부위 국소 면역 조절을 조합할 수 있다.
항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 항체의 제조 방법
본 명세서는 또한 본 명세서의 항체, 이것의 변이체 또는 유도체를 암호화하는 분리된 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산 분자 (예를 들어, 서열 번호: 34-60, 112, 및 114)를 제공한다. 본 명세서의 폴리뉴클레오타이드는 같은 폴리뉴클레오타이드 분자 또는 별도의 폴리뉴클레오타이드 분자 상에서 항원-결합 폴리펩타이드, 이것의 변이체 또는 유도체의 전체 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 암호화할 수도 있다. 추가적으로, 본 명세서의 폴리뉴클레오타이드는 같은 폴리뉴클레오타이드 분자 또는 별도의 폴리뉴클레오타이드 분자 상에서 항원-결합 폴리펩타이드, 이것의 변이체 또는 유도체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 일부를 암호화할 수도 있다.
항체를 제조하는 방법은 업계에 널리 공지되어 있고 본원에서 기술되어 있다. 특정 구체예에서, 본 명세서의 항원-결합 폴리펩타이드의 가변 및 불변 영역은 둘 다 완전한 인간이다. 완전한 인간 항체는 업계에 기술되어 있는 기술을 사용하여 및 본원에서 기술된 바와 같이 제조될 수 있다. 예를 들어, 특이적 항원에 대한 완전한 인간 항체는 항원 시험에 반응하여 이러한 항체를 생산하도록 변형되었지만, 내인성 유전자좌가 무력화된 트랜스제닉(transgenic) 동물에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 이러한 항체를 제조하는데 사용될 수 있는 예시적 기술은 미국 특허 6,150,584; 6,458,592; 6,420,140에서 기술되어 있으며 이것들은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
특정 구체예에서, 제조된 항체는 치료하고자 하는 동물, 예를 들어, 인간에서 해로운 면역 반응을 유도하지 않을 것이다. 한 구체예에서, 본 명세서의 항원-결합 폴리펩타이드, 이것의 변이체, 또는 유도체는 업계에서 인식되어 있는 기술을 사용하여 그것들의 면역원성을 감소시키도록 변형된다. 예를 들어, 항체는 인간화, 영장류화, 탈면역화될 수 있거나, 또는 키메라 항체가 제조될 수 있다. 이들 유형의 항체는 모체 항체의 항원-결합 성질을 보유하거나 또는 실질적으로 보유하지만, 인간에서 덜 면역원성인 비-인간 항체, 전형적으로 쥐 또는 영장류 항체로부터 유래된다. 이것은 (a) 전체 비-인간 가변 도메인을 인간 불변 영역으로 이식하여 키메라 항체를 생성하는 단계; (b) 중요한 프레임워크 잔기의 체류에 관계없이 비-인간 상보성 결정 영역 (CDR) 중 하나 이상의 적어도 일부를 인간 프레임워크 및 불변 영역으로 이식하는 단계; 또는 (c) 전체 비-인간 가변 도메인을 이식하지만, 표면 잔기의 대체에 의해 인간-유사 섹션으로 그것들을 "클로킹(cloaking)"하는 단계를 포함하는, 다양한 방법에 의해 달성될 수도 있다. 이러한 방법은 Morrison et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 57:6851-6855 (1984); Morrison et al., Adv . Immunol. 44:65-92 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec . Immun. 25:489-498 (1991); Padlan, Molec . Immun. 31:169-217 (1994), 및 미국 특허 번호 5,585,089, 5,693,761, 5,693,762, 및 6,190,370에서 개시되며, 이것들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
항체의 면역원성을 감소시키기 위해 탈면역화가 또한 사용될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "탈면역화"는 T-세포 에피토프를 변형시키기 위한 항체의 변화를 포함한다 (예를 들어, 국제 출원 공개 번호 WO/9852976 A1 및 WO/0034317 A2 참조). 예를 들어, 시작 항체의 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열이 분석되고 상보성 결정 영역 (CDR) 및 서열 내 다른 주요 잔기에 관하여 에피토프의 자리를 나타내는, 각각의 V 영역으로부터 인간 T-세포 에피토프 "맵"이 생성된다. 최종 항체의 활성을 변화시킬 위험이 적은 대안의 아미노산 치환을 확인하기 위해 T-세포 에피토프 맵의 개개의 T-세포 에피토프가 분석된다. 아미노산 치환의 조합을 포함하는 다양한 대안의 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열이 설계되고 그 이후 이들 서열은 다양한 결합 폴리펩타이드로 통합된다. 전형적으로, 12 내지 24개의 변이체 항체가 생성되어 결합 및/또는 기능에 대하여 테스트된다. 그 다음에 변형된 가변 및 인간 불변 영역을 포함한 완전한 중쇄 및 경쇄 유전자는 발현 벡터로 클로닝되고 이후의 플라스미드는 전체 항체 생산을 위해 세포주로 도입된다. 그 다음에 항체가 적절한 생화학적 및 생물학적 검정에서 비교되고, 최적의 변이체가 확인된다.
본 명세서의 항원-결합 폴리펩타이드의 결합 특이성은 면역침강법, 방사면역검정 (RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)과 같은 시험관 내(in vitro) 검정에 의해 결정될 수 있다.
대안으로, 단일 사슬 유닛의 생산에 대하여 기술된 (미국 특허 번호 4,694,778; Bird, Science 242:423-442 (1988); Hustonet al., Proc . Natl . Acad . Sci. USA 55:5879- 5883 (1988); 및 Ward et al., Nature 334:544-554 (1989)) 기술은 본 명세서의 단일 사슬 유닛을 생산하도록 조정될 수 있다. 아미노산 다리를 통해 Fv 영역의 중쇄 및 경쇄 단편을 결합시켜, 단일 사슬 융합 펩타이드를 형성함으로써 단일 사슬 유닛이 형성된다. 대장균(E. coli)에서 기능적 Fv 단편의 조립을 위한 기술이 또한 사용될 수 있다 (Skerra et al., Science 242: 1038-1041 (1988)).
단일 사슬 Fv (scFv) 및 항체를 생산하는데 사용될 수 있는 기술의 예는 미국 특허 번호 4,946,778 및 5,258,498; Hustonet al., Methods in Enzymology 203:46-88 (1991); Shu et al., Proc . Natl . Sci . USA 90:1995-1999 (1993); 및 Skerra et al., Science 240:1038-1040 (1988)에서 기술된 것을 포함한다. 인간에서 항체의 생체 내(in vivo) 사용 및 시험관 내 검출 검정을 포함한 몇몇 사용을 위해, 키메라, 인간화 , 또는 인간 항체를 사용하는 것이 바람직할 수도 있다. 키메라 항체는 항체의 다른 부분이 다른 동물 종으로부터 유래된 분자, 예컨대 쥐 단클론성 항체로부터 유래된 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 가진 항체이다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 업계에 공지되어 있다. 예를 들어, Morrison, Science 229:1202 (1985); Oi et al., BioTechniques 4:214 (1986); Gillies et al., J. Immunol . Methods 125:191-202 (1989); 미국 특허 번호 5,807,715; 4,816,567; 및 4,816397을 참조하고, 이것들은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
인간화 항체는 비-인간 종의 하나 이상의 상보성 결정 영역 (CDR) 및 인간 면역글로불린 분자의 프레임워크 영역을 가진 원하는 항원에 결합하는 비-인간 종 항체로부터 유래된 항체 분자이다. 종종, 인간 프레임워크 영역의 프레임워크 잔기는 항원-결합을 변화시키기 위해, 바람직하게는 개선하기 위해 CDR 공여체 항체의 상응하는 잔기로 치환될 것이다. 이들 프레임워크 치환은 업계에 널리 공지된 방법에 의해, 예를 들어, 항원-결합에 중요한 프레임워크 잔기를 확인하기 위한 CDR 및 프레임워크 잔기의 상호작용의 모델링 및 특정 위치에서 비정상적인 프레임워크 잔기를 확인하기 위한 서열 비교에 의해 확인된다 (예를 들어, Queen et al., 미국 특허 번호 5,585,089; Riechmann et al., Nature 332:323 (1988) 참조, 이것들은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). 항체는, 예를 들어, CDR-이식 (EP 239,400; PCT 공보 WO 91/09967; 미국 특허 번호 5,225,539; 5,530,101; 및 5,585,089), 버니어링(veneering) 또는 리서페이싱(resurfacing) (EP 592,106; EP 519,596; Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991); Studnicka et al., Protein Engineering 7(6):805-814 (1994); Roguska. et al., Proc . Natl . Sci . USA 91:969-973 (1994)), 및 사슬 셔플링(shuffling) (미국 특허 번호 5,565,332, 이것은 그 전문이 참조로 포함됨)을 포함한, 업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 인간화될 수 있다.
완전한 인간 항체가 인간 환자의 치료적 처치에 특히 바람직하다. 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체 라이브러리를 사용하는 파지 디스플레이 방법을 포함한, 업계에 공지된 다양한 방법에 의해 만들어질 수 있다. 또한, 미국 특허 번호 4,444,887 및 4,716,111; 및 PCT 공보 WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735, 및 WO 91/10741을 참고하고; 이것들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
인간 항체는 또한 기능적 내인성 면역글로불린을 발현할 수 없지만, 인간 면역글로불린 유전자를 발현할 수 있는 트랜스제닉 마우스를 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 인간 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자 복합체는 무작위로 또는 상동 재조합에 의해 마우스 배아 줄기 세포로 도입될 수도 있다. 대안으로, 인간 중쇄 및 경쇄 유전자에 더하여 인간 가변 영역, 불변 영역, 및 다양성 영역은 마우스 배아 줄기 세포로 도입될 수도 있다. 마우스 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자는 상동 재조합에 의해 인간 면역글로불린 유전자좌의 도입과는 별도로 또는 이와 동시에 비-기능적이게 될 수도 있다. 특히, JH 영역의 동형접합성 결실은 내인성 항체 생산을 방지한다. 변형된 배아 줄기 세포는 확장되고 배반포로 미량주사되어 키메라 마우스를 생산한다. 그 다음에 키메라 마우스는 인간 항체를 발현하는 동형접합성 자손을 생산하기 위해 교배된다. 트랜스제닉 마우스는 선택된 항원, 예를 들어, 원하는 표적 폴리펩타이드 모두 또는 그 일부로의 정상적인 방식으로 면역화된다. 상기 항원에 대한 단클론성 항체는 통상적인 하이브리도마 기술을 사용하여 면역화된 트랜스제닉 마우스로부터 얻을 수 있다. 트랜스제닉 마우스가 보유하고 있는 인간 면역글로불린 이식유전자는 B-세포 분화 동안에 재배열되고, 그 이후 클래스 전환(class switching) 및 체세포 돌연변이된다. 따라서, 이러한 기술을 사용하여, 치료적으로 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 생산하는 것이 가능하다. 인간 항체를 생산하기 위한 이 기술의 개요에 대해서는, Lonberg and Huszar Int . Rev. Immunol. 73:65-93 (1995)를 참조하면 된다. 인간 항체 및 인간 단클론성 항체를 생산하기 위한 이 기술 및 이러한 항체를 생산하기 위한 프로토콜에 대한 더 상세한 논의를 위해서는, 예를 들어, PCT 공보 WO 98/24893; WO 96/34096; WO 96/33735; 미국 특허 번호 5,413,923; 5,625,126; 5,633,425; 5,569,825; 5,661,016; 5,545,806; 5,814,318; 및 5,939,598을 참조하고, 이것들은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 이에 더하여, Abgenix, Inc. (Freemont, Calif.) 및 GenPharm (San Jose, Calif.)과 같은 회사가 상기 기술된 것과 유사한 기술을 사용하여 선택된 항원에 대한 인간 항체를 제공하기 위해 종사할 수 있다.
선택된 에피토프를 인식하는 완전한 인간 항체는 또한 "유도 선택(guided selection)"로 불리는 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 이 접근법에서 선택된 비-인간 단클론성 항체, 예를 들어, 마우스 항체는 같은 에피토프를 인식하는 완전한 인간 항체의 선택을 유도하는데 사용된다 (Jespers et al., Bio/Technology 72:899-903 (1988). 또한, 미국 특허 번호 5,565,332 참조, 이것은 그 전문이 참조로 포함됨).
또 다른 구체예에서, 원하는 단클론성 항체를 암호화하는 DNA는 통상적인 과정을 사용하여 (예를 들어, 쥐 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용하여) 쉽게 분리되고 시퀀싱될 수 있다. 분리되어 서브클로닝된 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원의 역할을 한다. 분리되면, DNA는 발현 벡터에 배치된 다음, 면역글로불린을 달리 생산하지 않는 원핵 또는 진핵 숙주 세포, 예컨대 대장균 세포, 원숭이 COS 세포, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종(myeloma) 세포로 트랜스펙션될 수도 있다. 더 구체적으로는, 분리된 DNA (본원에서 기술된 바와 같이 합성일 수도 있음)는 본원에 참조로 포함된, 1995년 1월 25일 출원된 Newman et al., 미국 특허 번호 5,658,570에서 기술된 바와 같이 제조 항체를 위해 불변 및 가변 영역 서열을 클로닝하는데 사용될 수도 있다. 근본적으로, 이것은 선택된 세포로부터 RNA의 추출, cDNA로의 전환, 및 Ig 특이적 프라이머를 사용한 PCR에 의한 증폭을 수반한다. 이 목적에 적합한 프라이머는 또한 미국 특허 번호 5,658,570에서 기술되어 있다. 하기 더 상세히 논의되는 바와 같이, 원하는 항체를 발현하는 형질전환된 세포는 면역글로불린의 임상적 및 상업적 공급을 제공하기 위해 비교적 대량으로 성장할 수도 있다.
추가적으로, 일상적인 재조합 DNA 기술을 사용하여, 본 명세서의 항원-결합 폴리펩타이드의 CDR 중 하나 이상이 프레임워크 영역 내에, 예를 들어, 인간 프레임워크 영역으로 삽입되어 비-인간 항체를 인간화할 수도 있다. 프레임워크 영역은 자연 발생 또는 공통 프레임워크 영역, 및 바람직하게는 인간 프레임워크 영역일 수도 있다 (예를 들어, 인간 프레임워크 영역의 목록에 대해서는 Chothia et al., J. Mol . Biol. 278:457-479 (1998) 참조). 바람직하게는, 프레임워크 영역 및 CDR의 조합에 의해 생성된 폴리뉴클레오타이드는 원하는 폴리펩타이드의 적어도 하나의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어, LIGHT를 암호화한다. 바람직하게는, 하나 이상의 아미노산 치환은 프레임워크 영역 내에서 이루어질 수도 있으며, 바람직하게는, 아미노산 치환은 항체의, 그 항원으로의 결합을 개선한다. 추가적으로,
이러한 방법은 하나 이상의 사슬 간 이황화 결합이 결여된 항체 분자를 생성하기 위해 사슬 간 이황화 결합에 참여하는 하나 이상의 가변 영역 시스테인 잔기의 아미노산 치환 또는 결실을 만드는데 사용될 수도 있다. 폴리뉴클레오타이드에 대한 다른 변화는 본 명세서에 및 해당 분야의 기술 범위 내에 포함된다.
이에 더하여, 적절한 생물학적 활성의 인간 항체 분자의 유전자와 함께 적절한 항원 특이성의 마우스 항체 분자의 유전자를 스플라이싱(splicing)함으로써 "키메라 항체"를 생산하기 위해 개발된 기술 (Morrison et al., Proc . Natl . Acad . Sci. USA:851-855 (1984); Neuberger et al., Nature 372:604-608 (1984); Takeda et al., Nature 314:452-454 (1985))이 사용될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 키메라 항체는 다른 부분이 다른 동물 종으로부터 유래된 분자, 예컨대 쥐 단클론성 항체로부터 유래된 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 가진 것이다.
하지만 재조합 항체를 생산하기에 고도로 효율적인 또 다른 수단이 Newman, Biotechnology 10: 1455-1460 (1992)에서 개시된다. 구체적으로, 이 기술은 원숭이 가변 도메인 및 인간 불변 서열을 함유하는 영장류화 항체를 생성한다. 이 참고문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 더욱이, 이 기술은 또한 일반적으로 할당된 미국 특허 번호 5,658,570, 5,693,780 및 5,756,096에서 기술되며, 이것들 각각은 본원에 참조로 포함된다.
대안으로, 항체 생산 세포주는 당업자에게 널리 공지된 기술을 사용하여 선택되고 배양될 수도 있다. 이러한 기술은 다양한 실험 매뉴얼 및 주요 간행물에 기술되어 있다. 이 점에 있어서, 하기 기술된 바와 같이 본 명세서에서 사용에 적합한 기술은 Current Protocols in Immunology, Coligan et al., Eds., Green Publishing Associates and Wiley-Interscience, John Wiley and Sons, New York (1991)에서 기술되며 이것은 증보판을 포함하여, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
추가적으로, 당업자에게 공지된 표준 기술은 본 명세서의 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에서 돌연변이를 도입하는데 사용될 수 있으며, 아미노산 치환을 초래하는 부위-특이적 돌연변이 유발 및 PCR-매개 돌연변이 유발을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 변이체 (유도체 포함)는 참조 가변 중쇄 영역, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, 가변 경쇄 영역, CDR-L1, CDR-L2, 또는 CDR-L3에 관하여 50개 미만의 아미노산 치환, 40개 미만의 아미노산 치환, 30개 미만의 아미노산 치환, 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2개 미만의 아미노산 치환을 암호화한다. 대안으로, 돌연변이는, 예를 들어, 포화 돌연변이 유발에 의해 암호화 서열 모두 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있고, 결과로 생성된 돌연변이는 생물학적 활성에 대하여 스크리닝되어 활성을 보유한 돌연변이를 확인할 수 있다.
암 치료
본원에서 기술된 바와 같이, 본 명세서의 항체, 변이체 또는 유도체는 특정 치료 및 진단 방법에 사용될 수도 있다.
본 명세서는 본원에서 기술된 장애 또는 질병 중 하나 이상을 치료하기 위해 환자, 예컨대 동물, 포유동물, 및 인간에게 본 명세서의 항체를 투여하는 것을 포함하는, 항체-기반 요법에 더 관련되어 있다. 본 명세서의 치료적 화합물은 본 명세서의 항체 (본원에서 기술된 바와 같이 이것의 변이체 및 유도체를 포함함) 및 본 명세서의 항체 (본원에서 기술된 바와 같이 이것의 변이체 및 유도체를 포함함)를 암호화하는 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서의 항체는 또한 암을 치료하거나 억제하는데 사용될 수 있다. PD-L1은 종양 세포에서 과발현될 수 있다. 종양-유래 PD-L1은 면역 세포 상에서 PD-1에 결합하며 이로 인해 항종양 T-세포 면역력을 제한할 수 있다. 소분자 억제자, 또는 쥐 종양 모델에서 PD-L1을 표적화하는 단클론성 항체로의 결과는 표적화된 PD-L1 요법이 종양 성장의 효과적인 제어에 대한 중요한 대안이고 현실적인 접근법임을 나타낸다. 실험예에서 입증된 바와 같이, 항-PD-L1 항체는 후천적 면역 반응 기작을 활성화하였으며, 이것은 암 환자의 생존의 개선으로 이어질 수 있다.
따라서, 일부 구체예에서는, 치료가 필요한 환자에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 한 구체예에서, 방법은 본 명세서의 항체의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 수반한다. 일부 구체예에서, 환자의 암 세포 (예를 들어, 간질 세포) 중 적어도 하나는 PD-L1을 발현하거나, 과발현하거나, 또는 발현하도록 유도된다. PD-L1 발현의 유도는, 예를 들어, 종양 백신 또는 방사선 요법에 의해 실행될 수 있다.
PD-L1 단백질을 발현하는 종양은 방광암, 비-소세포 폐암, 신장암, 유방암, 요도암, 결장직장암, 두경부암, 편평세포암, 머켈 세포 암종, 위장암, 위암, 식도암, 난소암, 신장암, 및 소세포 폐암의 종양을 포함한다. 따라서, 현재 개시되어 있는 항체는 임의의 하나 이상의 이러한 암을 치료하는데 사용될 수 있다.
키메라 항원 수용체 (CAR) T-세포 요법과 같은 세포 요법이 또한 본 명세서에서 제공된다. 본 명세서의 항-PD-L1 항체와 접촉된 (또는 대안으로 본 명세서의 항-PD-L1 항체를 발현하도록 조작된) 적합한 세포가 사용될 수 있다. 이러한 접촉 또는 조작시, 세포는 치료를 필요로 하는 암 환자에게 도입될 수 있다. 암 환자는 본원에서 개시된 유형 중 어느 것의 암에 걸릴 수도 있다. 세포 (예를 들어, T 세포)는 제한되는 것이 아니라, 예를 들어, 종양-침윤성 T 림프구, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 또는 이것들의 조합일 수 있다.
일부 구체예에서, 세포는 암 환자 자체로부터 분리되었다. 일부 구체예에서, 세포는 공여체에 의해 또는 세포 은행으로부터 제공되었다. 세포가 암 환자로부터 분리될 때, 원치않는 면역 반응이 최소화될 수 있다.
본 명세서의 항체 또는 이것의 변이체, 또는 유도체로 치료, 예방, 진단 및/또는 예후될 수도 있는, 증가된 세포 생존률과 관련된 추가적인 질환 또는 질병은 악성 종양 및 관련 장애, 예컨대 백혈병 (급성 백혈병 (예를 들어, 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia), 급성 골수성 백혈병(acute myelocytic leukemia) (골수아구성(myeloblastic), 전골수구성(promyelocytic), 골수성 단핵구성(myelomonocytic), 단핵구성(monocytic), 및 적백혈병(erythroleukemia)) 포함) 및 만성 백혈병 (예를 들어, 만성 골수성 백혈병(chronic myelocytic leukemia) (과립구성 백혈병(granulocytic leukemia)) 및 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia)) 포함), 진성 다혈구증(polycythemia vera), 림프종 (예를 들어, 호지킨 질환(Hodgkin's disease) 및 비-호지킨 질환(non-Hodgkin's disease)), 다발성 골수종(multiple myeloma), 발덴스트롬 거대글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 중쇄 질환, 및 제한되는 것은 아니지만, 육종 및 암종, 예컨대 섬유 육종(fibrosarcoma), 점액 육종(myxosarcoma), 지방 육종(liposarcoma), 연골 육종(chondrosarcoma), 골 육종(osteogenic sarcoma), 척색종(chordoma), 혈관 육종(angiosarcoma), 내피 육종(endotheliosarcoma), 림프관 육종(lymphangiosarcoma), 림프관 내피 육종(lymphangioendotheliosarcoma), 윤활막종(synovioma), 중피종(mesothelioma), 유잉 종양(Ewing's tumor), 평활근 육종(leiomyosarcoma), 횡문근 육종(rhabdomyo sarcoma), 결장 암종, 췌장암, 유방암, 갑상선암, 자궁내막암, 흑색종, 전립선암, 난소암, 전립선암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 선암종, 한선 암종(sweat gland carcinoma), 피지선 암종(sebaceous gland carcinoma), 유두상 암종(papillary carcinoma), 유두상 선암종(papillary adenocarcinoma), 낭선암종(cystadenocarcinoma), 수질 암종(medullary carcinoma), 기관지원성 암종(bronchogenic carcinoma), 신장세포 암종(renal cell carcinoma), 간종양(hepatoma), 담관 암종(bile ductcarcinoma), 융모 암종(choriocarcinoma), 정상피종(seminoma), 배아 암종(embryonal carcinoma), 윌름 종양(Wilm's tumor), 자궁암, 고환 종양, 폐암종, 소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종(glioma), 성상세포종(astrocytoma), 수아세포종(medulloblastoma), 두개인두종(craniopharyngioma), 상의세포종(ependymoma), 송과체종(pinealoma), 혈관아세포종(hemangioblastoma), 청신경종(acoustic neuroma), 핍지교종(oligodendroglioma), 뇌수막종(menangioma), 흑색종, 신경아세포종(neuroblastoma) 및 망막아세포종(retinoblastoma)을 포함하는 고형 종양의 진행, 및/또는 전이를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
조합 요법
추가의 구체예에서, 본 명세서의 조성물은 항신생물제, 항바이러스제, 항세균제 또는 항생제 또는 항진균제와 조합하여 투여된다. 업계에 공지된 이들 작용제 중 어느 것도 본 명세서의 조성물에서 투여될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 명세서의 조성물은 화학치료제와 조합하여 투여된다. 본 명세서의 조성물과 함께 투여될 수도 있는 화학치료제는 항생제 유도체 (예를 들어, 독소루비신, 블레오마이신, 다우노루비신, 및 닥티노마이신); 항에스트로겐제 (예를 들어, 타목시펜); 대사 길항 물질 (예를 들어, 플루오로우라실, 5-FU, 메토트렉세이트, 플록수리딘, 인터페론 알파-2b, 글루탐산, 플리카마이신, 메르캅토퓨린, 및 6-티오구아닌); 세포독성제 (예를 들어, 카르무스틴, BCNU, 로무스틴, CCNU, 시토신 아라비노시드, 사이클로포스파미드, 에스트라무스틴, 하이드록시유레아, 프로카르바진, 미토마이신, 부설판, 시스(cis)-플라틴, 및 빈크리스틴 설페이트); 호르몬 (예를 들어, 메드록시프로게스테론, 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨, 에티닐 에스트라디올, 에스트라디올, 메게스트롤 아세테이트, 메틸테스토스테론, 다이에틸스틸베스트롤 다이포스페이트, 클로로트라이아니센, 및 테스토락톤); 질소 머스타드 유도체 (예를 들어, 메팔렌, 코람부실, 메클로르에타민 (질소 머스타드) 및 티오테파); 스테로이드 및 조합 (예를 들어, 베타메타손 나트륨 포스페이트); 및 기타 (예를 들어, 다이카르바진, 아스파라기나제, 미토탄, 빈크리스틴 설페이트, 빈블라스틴 설페이트, 및 에토포시드)를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
추가의 구체예에서, 본 명세서의 조성물은 사이토카인과 조합하여 투여된다. 본 명세서의 조성물과 함께 투여될 수도 있는 사이토카인은 IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, 항-CD40, CD40L, 및 TNF-α를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
추가의 구체예에서, 본 명세서의 조성물은, 예를 들어, 방사성 요법과 같은 다른 치료 또는 예방 양생법과 조합하여 투여된다.
조합 요법이 또한 제공되는데, 이것은 제2 항암제 (화학치료제)와 함께 본 명세서의 항-PD-L1 항체 중 하나 이상의 사용을 포함한다. 화학치료제는 그것들의 작용 메커니즘에 의해, 예를 들어, 다음 군으로 분류될 수 있다:
- 대사 길항 물질/항암제, 예컨대 피리미딘 유사체 플록수리딘, 카페시타빈, 및 시타라빈;
- 퓨린 유사체, 폴레이트 안타고니스트, 및 관련 억제자;
- 천연물, 예컨대 빈카(vinca) 알칼로이드 (빈블라스틴, 빈크리스틴) 및 미소관, 예컨대 탁산 (파클리탁셀, 도세탁셀), 빈블라스틴, 노코다졸, 에포틸론, 비노렐빈 (NAVELBINE®), 및 에피포도필로톡신 (에토포시드, 테니포시드)를 포함하는 항증식제/체세포 분열 방지제;
- DNA 손상제, 예컨대 액티노마이신, 암사크린, 부설판, 카르보플라틴, 클로람부실, 씨스플라틴, 사이클로포스파미드 (CYTOXAN®), 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 아이포스파미드, 멜팔란, 메르클로르에타민, 미토마이신, 미톡산트론, 니트로소유레아, 프로카르바진, 탁솔, 탁소텔, 테니포시드, 에토포시드, 및 트라이에틸렌티오포스포르아미드;
- 항생제, 예컨대 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 안트라사이클린, 미톡산트론, 블레오마이신, 플리카마이신 (미트라마이신), 및 미토마이신;
- 효소, 예컨대 L-아스파라긴을 체계적으로 대사시키고 자체 아스파라긴을 합성할 수 없는 세포를 박탈하는 L-아스파라기나제;
- 항혈소판제;
- 항증식성/체세포 분열 방지성 알킬화제, 예컨대 질소 머스타드 사이클로포스파미드 및 유사체 (멜팔란, 클로람부실, 헥사메틸멜라민, 및 티오테파), 알킬 니트로소유레아 (카르무스틴) 및 유사체, 스트렙토조신, 및 트라이아젠 (다카르바진);
- 항증식성/체세포 분열 방지성 대사 길항 물질, 예컨대 엽산 유사체 (메토트렉세이트);
- 백금 배위 결합 착물 (씨스플라틴, 옥실로플라티님, 및 카르보플라틴), 프로카르바진, 하이드록시유레아, 미토탄, 및 아미노글루테티미드;
- 호르몬, 호르몬 유사체 (에스트로겐, 타목시펜, 고세렐린, 바이칼루타미드, 및 닐루타미드), 및 아로마타제 억제자 (레트로졸 및 아나스트로졸);
- 응고 방지제, 예컨대 헤파린, 합성 헤파린 염, 및 트롬빈의 다른 억제자;
- 섬유소 용해제, 예컨대 조직 플라스미노겐 활성화제, 스트렙토키나제, 유로키나제, 아스피린, 다이피리다몰, 티클로피딘, 및 클로피도그렐;
- 이동 방지제;
- 항분비제 (브레벨딘);
- 면역억제자 타크롤리무스, 시롤리무스, 아자티오프린, 및 마이코페놀레이트;
- 화합물 (TNP-470, 제니스테인) 및 성장 인자 억제자 (혈관 내피 성장 인자 억제자 및 섬유아세포 성장 인자 억제자);
- 안지오텐신 수용체 차단물질, 질소 산화물 공여체;
- 안티센스 올리고뉴클레오타이드;
- 항체, 예컨대 트라스투쥬맙 및 리툭시맙;
- 세포 주기 억제자 및 분화 유도물질, 예컨대 트레티노인;
- 억제자, 토포이소머라제 억제자 (독소루비신, 다우노루비신, 닥티노마이신, 에니포시드, 에피루비신, 에토포시드, 이다루비신, 이리노테칸, 미톡산트론, 토포테칸, 및 이리노테칸), 및 코르티코스테로이드 (코르티손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니손, 및 프레드니솔론);
- 성장 인자 신호 전달 키나제 억제자;
- 기능 장애 유도물질;
- 독소, 예컨대 콜레라(Cholera) 독소, 리신, 슈도모나스(Pseudomonas) 내독소, 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis) 아데닐레이트 사이클라제 독소, 디프테리아(diphtheria) 독소, 및 카스파제 활성화제;
- 및 크로마틴.
화학치료제의 추가의 예는 다음을 포함한다:
- 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 사이클로포스파미드 (CYTOXAN®);
- 알킬 설포네이트, 예컨대 부설판, 임프로설판, 및 피포설판;
- 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 유레도파;
- 알프레타민, 트라이에밀렌멜라민, 트라이에틸렌포스포르아미드, 트라이에틸렌티오포스포르아미드, 및 트라이메밀몰로멜라민을 포함하는, 에밀레루민 및 메밀라멜라민;
- 아세토게닌, 특히 불라타신 및 불라타시논;
- 합성 유사체 토포테칸을 포함하는 캄포토테신;
- 브리오스타틴;
- 칼리스타틴;
- 아도젤레신, 카르젤레신, 및 비젤레신 합성 유사체를 포함한 CC-1065;
- 크립토피신, 특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8;
- 돌라스타틴;
- 합성 유사체 KW-2189 및 CBI-TMI를 포함한 듀오카르마이신;
- 엘레테로빈;
- 판크라티스타틴;
- 사코딕티인;
- 스폰지스타틴;
- 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 사이클로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥시드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 및 우라실 머스타드;
- 니트로소유레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포레무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴;
- 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리체아미신, 특히 칼리체아미신 감마II 및 칼리체아미신 phiI1), 디네미신 A를 포함한 디네미신, 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트, 에스페라미신, 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소 단백질 에네디인 항생제 발색단, 아클라시노마이신, 액티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르니노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (모폴리노-독소루비신, 시아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 아이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, ?라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 튜버시딘, 유베니멕스, 지노스타틴, 및 조루비신;
- 대사 길항 물질, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU);
- 엽산 유사체, 예컨대 데모프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 및 트라이메트렉세이트;
- 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 및 티오구아닌;
- 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자유리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 다이데옥시유리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 및 플록수리딘;
- 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 및 테스토락톤;
- 항-아드레날제, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 및 트릴로스탄;
- 엽산 레플리니셔, 예컨대 프롤린산;
- 트라이코테센, 특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A, 및 안구이딘;
- 탁소이드, 예컨대 파클리탁셀 (탁솔®) 및 도세탁셀 (탁소텔®);
- 백금 유사체, 예컨대 씨스플라틴 및 카보플라틴;
- 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 헤스트라부실; 비산트렌; 에다트랙세이트; 데포파민; 데모콜신; 다이아지큐원; 엘포름틴; 엘리프티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시유레아; 렌티난; 류코보린; 로니다민; 마이탄시노이드, 예컨대 마이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 플루오로피리미딘; 폴리닌산; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; 다당류-K (PSK); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트라이아지큐원; 2,2',2''-트라이큐오로트라이에밀아민; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오페타; 클로람부실; 젬시타빈 (GEMZAR®); 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미트록산트론; 반크리스틴; 비노렐빈 (NAVELBINE®); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 제올로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제자 RFS 2000; 다이플루오로메틸오르니틴 (DFMO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 카페시타빈; FOLFIRI (플루오로우라실, 류코보린, 및 이리노테칸);
- 및 상기 중 어느 것의 약학적으로 허용 가능한 염, 산, 또는 유도체.
또한 항-호르몬제, 예컨대 항-에스트로겐제 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절자 (SERM), 효소 아로마타제의 억제자, 항안드로겐제, 및 종양에서 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는, 상기 중 어느 것의 약학적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체가 "화학치료제"의 정의에 포함된다.
항-에스트로겐제 및 SERM의 예는, 예를 들어, 타목시펜 (NOLVADEX™ 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트라이옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜 (FARESTON®)을 포함한다.
효소 아로마타제의 억제자는 부신에서 에스트로겐 생산을 조절한다. 예는 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트 (MEGACE®), 엑세메스탄, 포르메스탄, 파드로졸, 보로졸 (RIVISOR®), 레트로졸 (FEMARA®), 및 아나스트로졸 (ARIMIDEX®)을 포함한다.
항-안드로겐제는 플루타미드, 닐루타미드, 바이칼루타미드, 류프로드, 및 고세렐린을 포함한다.
화학치료제의 예는 또한, 제한되는 것은 아니지만, 레티노이드 산 및 이것의 유도체, 2-메톡시에스트라디올, ANGIOSTATIN®, ENDOSTATIN®, 수라민, 스쿠알라민, 메탈로프로테이나제-1의 조직 억제자, 메탈로프로테이나제-2의 조직 억제자, 플라스미노겐 활성제 억제자-1, 플라스미노겐 활성제 억제자-2, 연골-유래 억제자, 파클리탁셀 (냅(nab)-파클리탁셀), 혈소판 인자 4, 프로타민 설페이트(클루페인), 설파테드치틴 유도체 (퀸크랩(queencrab) 껍질로부터 제조됨), 황산화 다당류 펩티도글리칸 복합체 (sp-pg), 스타우로스포린, 프롤린 유사체 ((1-아제티딘-2-카르복시산 (LACA))를 포함한 기질 대사의 조절자, 씨스하이드록시프롤린, d,I-3,4-데하이드로프롤린, 티아프롤린, α,α'-다이피리딜, 베타-아미노프로피오니트릴 푸마레이트, 4-프로필-5-(4-피리디닐)-2(3h)-옥사졸론, 메토트렉세이트, 미톡산트론, 헤파린, 인터페론, 2 매크로글로불린-혈청, 메탈로프로테이나제-3의 닭 억제자 (ChIMP-3), 키모스타틴, 베타-사이클로덱스트린 테트라데카설페이트, 에포네마이신, 푸마길린, 금 나트륨 티오말레이트, d-페니실라민, 베타-1-항콜라게나제-혈청, 알파-2-항플라스민, 비산트렌, 로벤자리트 이나트륨, n-2-카르복시페닐-4-클로로안트로닐산 이나트륨 또는 "CCA", 탈리도미드, 혈관형성성 스테로이드, 카르복시아미노이미다졸, 및 메탈로프로테이나제 억제자, 예컨대 BB-94를 포함하는 항-혈관 형성제를 포함한다. 기타 항-혈관 형성제는 항체, 바람직하게는 이들 혈관 형성성 성장 인자, 베타-FGF, 알파-FGF, FGF-5, VEGF 아이소폼, VEGF-C, HGF/SF, 및 Ang-1/Ang-2에 대한 단클론성 항체를 포함한다.
화학치료제의 예는 또한, 제한되는 것은 아니지만, 베타-아미노프로프리오니트릴 (BAPN)과 같은 화합물, 뿐만 아니라 리실 옥시다제의 억제자 및 콜라겐의 비정상적인 침착에 관련된 질환 및 질병의 치료에서 그것의 사용에 관한 미국 특허 번호 4,965,288 (Palfreyman, et al.)에 개시된 화합물 및 다양한 병리학적 섬유증 상태의 치료를 위해 LOX를 억제하는 화합물에 관한 미국 특허 번호 4,997,854 (Kagan et al.)에 개시된 화합물을 포함하는 섬유증 방지제를 포함하고, 이것들은 본원에 참조로 포함된다. 추가의 예시적 억제자는 2-아이소부틸-3-플루오로-, 클로로-, 또는 브로모-알릴아민과 같은 화합물에 관한 미국 특허 번호 4,943,593 (Palfreyman et al.), 2-(1-나프틸옥시메밀)-3-플루오로알릴아민에 관한 미국 특허 번호 5,021,456 (Palfreyman et al.), 5,059,714 (Palfreyman et al.), 5,120,764 (Mccarthy et al.), 5,182,297 (Palfreyman et al.), 5,252,608 (Palfreyman et al.) 및 미국 공개 번호 2004/0248871 (Farjanel et al.)에서 기술되며, 이것들은 본원에 참조로 포함된다.
예시적 섬유증 방지제는 또한 리실 옥시다제의 활성 부분의 카르보닐 기와 반응하는 1차 아민 및, 더 구체적으로는 카르보닐과 결합한 후 공명에 의해 안정화된 생성물, 예컨대 다음 1차 아민들을 생산하는 것들을 포함한다: 에밀렌마민, 히드라진, 페닐히드라진, 및 이것들의 유도체; 세미카르바지드 및 유레아 유도체; 아미노니트릴, 예컨대 BAPN 또는 2-니트로에틸아민; 불포화 또는 포화 할로아민, 예컨대 2-브로모-에틸아민, 2-클로로에틸아민, 2-트라이플루오로에틸아민, 3-브로모프로필아민, 및 p-할로벤질아민; 및 셀레노호모시스테인 락톤.
기타 섬유증 방지제는 세포에 침투하거나 침투하지 않는 구리 킬레이트 시약이다. 예시적 화합물은 리실 옥시다제에 의한 리실 및 하이드록시리실 잔기의 산화성 탈아미노화로부터 비롯된 알데하이드 유도체를 차단하는 간접적 억제자를 포함한다. 예는 티올아민, 특히 D-페니실아민, 및 그것의 유사체, 예컨대 2-아미노-5-메르캅토-5-메틸헥산산, D-2-아미노-3-메틸-3-((2-아세트아미도에틸)디티오)부탄산, p-2-아미노-3-메틸-3-((2-아미노에틸)디티오)부탄산, 나트륨-4-((p-1-디메틸-2-아미노-2-카르복시에틸)디티오)부탄 설퍼레이트, 2-아세트아미도에틸-2-아세트아미도에탄티올 설파네이트, 및 나트륨-4-메르캅토부탄설피네이트 트라이하이드레이트를 포함한다.
화학치료제의 예는 또한, 제한되는 것은 아니지만, 환자를 치료하는데 적합한 치료적 항체를 포함하는 면역치료제를 포함한다. 치료적 항체의 몇몇 예는 심투주맙, 아바고보맙, 아데카투무맙, 아푸투주맙, 알렘투주맙, 알투모맙, 아마툭시맙, 아나투모맙, 아르시투모맙, 바비툭시맙, 벡투모맙, 베바시주맙, 비바투주맙, 블리나투모맙, 브렌툭시맙, 칸투주맙, 카투막소맙, 세툭시맙, 시타투주맙, 식수투무맙, 클리바투주맙, 코나투무맙, 다라투무맙, 드로지투맙, 둘리고투맙, 두시기투맙, 데투모맙, 다세투주맙, 달로투주맙, 에크로멕시맙, 엘로투주맙, 엔시툭시맙, 에르투막소맙, 에타라시주맙, 팔레투주맙, 피클라투주맙, 피기투무맙, 플란보투맙, 푸툭시맙, 가니투맙, 젬투주맙, 기렌툭시맙, 글렘바투무맙, 이브리투모맙, 이고보맙, 임가투주맙, 인다툭시맙, 이노투주맙, 인테투무맙, 이필리무맙, 이라투무맙, 라베투주맙, 렉사투무맙, 린투주맙, 로르보투주맙, 루카투무맙, 마파투무맙, 마투주맙, 밀라투주맙, 민레투모맙, 미투모맙, 목세투모맙, 나르나투맙, 나프투모맙, 네시투무맙, 니모투주맙, 노페투모맙, 오카라투주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 오나르투주맙, 오포르투주맙, 오레고보맙, 파니투무맙, 파르사투주맙, 파트리투맙, 펨투모맙, 페르투주맙, 핀투모맙, 프리투무맙, 라코투모맙, 라드레투맙, 릴로투무맙, 리툭시맙, 로바투무맙, 사투모맙, 시브로투주맙, 실툭시맙, 솔리토맙, 타카투주맙, 타플리투모맙, 테나투모맙, 테프로투무맙, 티가투주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙, 투코투주맙, 유블리툭시맙, 벨투주맙, 보르세투주맙, 보투무맙, 잘루투무맙, CC49, 및 3F8을 포함한다. 리툭시맙은 변연부 림프종, WM, CLL 및 소형 림프구성 림프종을 포함한 무통성 B-세포 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 리툭시맙 및 화학요법제의 조합이 특히 효과적이다.
예시된 치료적 항체는 인듐-111, 이트륨-90, 또는 요오드-131과 같은 방사성 동위원소 입자로 추가로 라벨링되거나 그것들과 조합될 수도 있다.
한 구체예에서, 추가적인 치료제는 질소 머스타드 알킬화제이다. 질소 머스타드 알킬화제의 비제한적 예는 클로람부실을 포함한다.
한 구체예에서, 본원에서 기술된 화합물 및 조성물은 하나 이상의 추가적인 치료제와 함께 사용되거나 그것들과 조합될 수도 있다. 하나 이상의 치료제는 Abl, 활성화된 CDC 키나제 (ACK), 아데노신 A2B 수용체 (A2B), 아폽토시스 신호-조절 키나제 (ASK), 오로라 키나제(Auroa kinase), 브루톤 티로신 키나제 (Bruton's tyrosine kinase; BTK), BET-브로모도메인 (BRD), 예컨대 BRD4, c-Kit, c-Met, CDK-활성화 키나제 (CAK), 칼모듈린-의존성 단백질 키나제 (CaMK), 사이클린-의존성 키나제 (CDK), 카세인 키나제 (CK), 디스코이딘 도메인 수용체 (DDR), 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 초점 접착 키나제 (FAK), Flt-3, FYN, 글리코겐 신타제 키나제 (GSK), HCK, 히스톤 데아세틸라제 (HDAC), IKK, 예컨대 IKKβε, 아이소시트레이트 데하이드로게나제 (IDH), 예컨대 IDH1, 야누스 키나제 (Janus kinase; JAK), KDR, 림프구-특이적 단백질 티로신 키나제 (LCK), 리실 옥시다제 단백질, 리실 옥시다제-유사 단백질 (LOXL), LYN, 기질 메탈로프로테아제 (MMP), MEK, 미토겐-활성화된 단백질 키나제 (MAPK), NEK9, NPM-ALK, p38 키나제, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 포스포릴라제 키나제 (PK), 폴로-유사 키나제 (PLK), 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K), 단백질 키나제 (PK), 예컨대 단백질 키나제 A, B, 및/또는 C, PYK, 비장 티로신 키나제 (SYK), 세린/트레오닌 키나제 TPL2, 세린/트레오닌 키나제 STK, 신호 전달 및 전사 (STAT), SRC, 세린/트레오닌-단백질 키나제 (TBK), 예컨대 TBK1, TIE, 티로신 키나제 (TK), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), YES의 억제자, 또는 이것들의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
ASK 억제자는 ASK1 억제자를 포함한다. ASK1 억제자의 예는 WO 2011/008709 (Gilead Sciences) 및 WO 2013/112741 (Gilead Sciences)에서 기술된 것들을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
BTK 억제자의 예는 이브루티닙, HM71224, ONO-4059, 및 CC-292를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
DDR 억제자는 DDR1 및/또는 DDR2의 억제자를 포함한다. DDR 억제자의 예는 WO 2014/047624 (Gilead Sciences), US 2009/0142345 (Takeda Pharmaceutical), US 2011/0287011 (Oncomed Pharmaceuticals), WO 2013/027802 (Chugai Pharmaceutical), 및 WO 2013/034933 (Imperial Innovations)에서 개시된 것들을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
HDAC 억제자의 예는 프라시노스타트 및 파노비노스타트를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
JAK 억제자는 JAK1, JAK2, 및/또는 JAK3을 억제한다. JAK 억제자의 예는 필고티닙, 룩솔리티닙, 페드라티닙, 토파시티닙, 바리시티닙, 레스타우르티닙, 파크리티닙, XL019, AZD1480, INCB039110, LY2784544, BMS911543, 및 NS018을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
LOXL 억제자는 LOXL1, LOXL2, LOXL3, LOXL4, 및/또는 LOXL5의 억제자를 포함한다. LOXL 억제자의 예는 WO 2009/017833에서 기술된 항체 (Arresto Biosciences)를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
LOXL2 억제자의 예는 WO 2009/017833 (Arresto Biosciences), WO 2009/035791 (Arresto Biosciences), 및 WO 2011/097513 (Gilead Biologics)에서 기술된 항체를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
MMP 억제자는 MMP1 내지 10의 억제자를 포함한다. MMP9 억제자의 예는 마리마스타트 (BB-2516), 시페마스타트 (Ro 32-3555), 및 WO 2012/027721에서 기술된 것 (Gilead Biologics)을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
PI3K 억제자는 PI3Kγ, PI3Kδ, PI3Kβ, PI3Kα, 및/또는 팬(pan)-PI3K의 억제자를 포함한다. PI3K 억제자의 예는 보르트만닌, BKM120, CH5132799, XL756, 및 GDC-0980을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
PI3Kγ 억제자의 예는 ZSTK474, AS252424, LY294002, 및 TG100115를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
PI3Kδ 억제자의 예는 PI3K II, TGR-1202, AMG-319, GSK2269557, X-339, X-414, RP5090, KAR4141, XL499, OXY111A, IPI-145, IPI-443, 및 WO 2005/113556 (ICOS), WO 2013/052699 (Gilead Calistoga), WO 2013/116562 (Gilead Calistoga), WO 2014/100765 (Gilead Calistoga), WO 2014/100767 (Gilead Calistoga), 및 WO 2014/201409에서 기술된 화합물 (Gilead Sciences)을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
PI3Kβ 억제자의 예는 GSK2636771, BAY 10824391, 및 TGX221을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
PI3Kα 억제자의 예는 부파리십, BAY 80-6946, BYL719, PX-866, RG7604, MLN1117, WX-037, AEZA-129, 및 PA799를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
팬-PI3K 억제자의 예는 LY294002, BEZ235, XL147 (SAR245408), 및 GDC-0941을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
SYK 억제자의 예는 타마티닙 (R406), 포스타마티닙 (R788), PRT062607, BAY-61-3606, NVP-QAB 205 AA, R112, R343, 및 미국 특허 번호 8,450,321에서 기술된 것 (Gilead Connecticut)을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
TKI는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 및 섬유아세포 성장 인자 (FGF), 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 및 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)에 대한 수용체를 표적화할 수도 있다. EGFR을 표적화하는 TKI의 예는 제피티닙 및 엘로티닙을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 수니티닙은 FGF, PDGF, 및 VEGF에 대한 수용체를 표적화하는 TKI의 비-제한적 예이다.
본 명세서의 항-PD-L1 항체는 , 일부 구체예에서는, 면역 체크포인트 억제자와 함께 사용될 수 있다. 면역 체크포인트는 면역계에서 신호를 높이거나 (동시-자극 분자) 또는 신호를 낮추는 (동시-억제 분자) 분자이다. 많은 암들은 동시-억제 분자에 대한 아고니스트 또는 동시-자극 분자에 대한 안타고니스트를 통해 T 세포 신호를 억제함으로써 면역계로부터 자신을 보호한다. 면역 체크포인트 아고니스트 또는 안타고니스트는 세포에 의한 이러한 보호 메커니즘을 중단시키도록 도울 수 있다. 면역 체크포인트 아고니스트 또는 안타고니스트는 다음 체크포인트 분자, PD-1, CTLA-4, LAG-3 (CD223으로도 알려져 있음), CD28, CD122, 4-1BB (CD137로도 알려져 있음), TIM3, OX-40/OX40L, CD40/CD40L, LIGHT, ICOS/ICOSL, GITR/GITRL, TIGIT, CD27, VISTA, B7H3, B7H4, HEVM 또는 BTLA (CD272로도 알려져 있음) 중 임의의 하나 이상을 표적화할 수도 있다.
예정된 T 세포 사멸 1 (PD-1)은 T 세포의 표면 상에서 발견되는 막관통 단백질이며, 이것은 종양 세포 상의 예정된 T 세포 사멸 리간드 1 (PD-L1)에 결합될 때, T 세포 활성을 억제하고 T 세포-매개 세포독성을 감소시킨다. 따라서, PD-1 및 PD-L1은 면역 하향조절자 또는 면역 체크포인트 "오프 스위치(off switch)"이다. PD-1 억제자의 예는, 제한되는 것이 아니라, 니볼루맙 (Opdivo) (BMS-936558), 펨브롤리주맙 (Keytruda), 피딜리주맙, AMP-224, MEDI0680 (AMP-514), PDR001, MPDL3280A, MEDI4736, BMS-936559 및 MSB0010718C를 포함한다.
CTLA-4는 면역계를 하향조절하는 단백질 수용체이다. CTLA-4 억제자의 비-제한적 예는 이필리무맙 (Yervoy) (BMS-734016, MDX-010, MDX-101로도 알려져 있음) 및 트레멜리무맙 (구 티실리무맙, CP-675,206)을 포함한다.
림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3)은 Tregs에 대한 작용에 의한 면역 반응, 뿐만 아니라 CD8+ T 세포에 대한 직접적인 효과를 억제하는 작용을 하는, 세포 표면 상의 면역 체크포인트 수용체이다. LAG-3 억제자는, 제한되는 것이 아니라, LAG525 및 BMS-986016을 포함한다.
CD28은 거의 모든 인간 CD4+ T 세포에서 및 모든 CD8 T 세포의 대략 절반에서 구성적으로 발현되고 T 세포 확장을 촉진한다. CD28 억제자의 비-제한적 예는 TGN1412를 포함한다.
CD122는 CD8+ 효과기 T 세포의 증식을 증가시킨다. 비-제한적 예는 NKTR-214를 포함한다.
4-1BB (CD137로도 알려져 있음)는 T-세포 증식에 포함된다. CD137-매개 신호전달은 또한 활성화-유도된 세포 사멸로부터 T 세포, 및 특히, CD8+ T 세포를 보호하는 것으로도 알려져 있다. PF-05082566, 유렐루맙 (BMS-663513) 및 리포칼린은 CD137 억제자의 예이다.
상기 조합 치료들 중 어느 것에 대해서도, 항-PD-L1 항체는 기타 항암제와 동시에 또는 별도로 투여될 수 있다. 별도로 투여될 때, 항-PD-L1 항체는 기타 항암제 이전에 또는 이후에 투여될 수 있다.
감염의 치료
실험예에서 입증된 바와 같이, 본 명세서의 항체는 면역 반응을 활성화시킬 수 있으며 이것은 감염을 치료하는데 유용할 수 있다.
감염은 질환-유발 물질에 의한 유기체의 신체 조직 침입, 그것들의 증식, 및 이 유기체들 및 그것들이 생산하는 독소에 대한 숙주 조직의 반응이다. 감염은 바이러스, 바이로이드(viroid), 프리온(prion), 박테리아, 선충, 예컨대 기생 회충 및 요충, 절지동물, 예컨대 참진드기(tick), 좀진드기(mite), 벼룩, 및 이, 균류, 예컨대 백선(ringworm), 및 기타 대형 기생충, 예컨대 촌충 및 기타 연충과 같은 감염원에 의해 유발될 수 있다. 한 양태에서, 감염원은 박테리아, 예컨대 그람 음성 박테리아 (Gram negative bacterium)이다. . 한 양태에서, 감염원은 바이러스, 예컨대 DNA 바이러스, RNA 바이러스, 및 역전사 바이러스이다. 바이러스의 비-제한적 예는 아데노바이러스, 콕사키바이러스, 엡스테인-바(Epstein-Barr) 바이러스, A형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, 1형 단순 헤르페스 바이러스, 2형 단순 헤르페스 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 8형 인간 헤르페스 바이러스, HIV, 인플루엔자 바이러스, 홍역 바이러스, 볼거리 바이러스, 인간 유두종 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 폴리오바이러스, 광견병 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 풍진 바이러스, 수두-대상포진 바이러스(Varicella-zoster virus)를 포함한다.
본 명세서의 항체는 또한 미생물 및 면역 세포를 표적화하여 미생물을 제거함으로써 미생물에 의해 유발된 감염성 질환을 치료하거나, 또는 미생물을 사멸시키는데 유용할 수 있다. 한 양태에서, 미생물은 RNA 및 DNA 바이러스를 포함한 바이러스, 그람 양성박테리아(Gram positive bacterium), 그람 음성 박테리아, 원생동물문 또는 균류이다. 감염성 질환 및 관련 미생물의 비-제한적 예는 하기 표 4에서 제공된다.
감염성 질환 및 관련 미생물 공급원
감염성 질환 미생물 공급원
아시네토박터(Acinetobacter) 감염 아시네토박터 바우만니이(Acinetobacter baumannii)
방선균증(Actinomycosis) 액티노미세스 이스라엘리(Actinomyces israelii), 액티노미세스 제렌세리애(Actinomyces gerencseriae) 및 프로피오니박테리움 프로피오니쿠스(Propionibacterium propionicus)
아프리카 수면병 (아프리카 편모충증(African trypanosomiasis)) 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei)
AIDS (후천적 면역결핍 증후군) HIV (인간 면역결핍 바이러스)
아메바증(Amebiasis) 이질 아메바(Entamoeba histolytica)
아나플라스마증(Anaplasmosis) 아나플라스마 속(Anaplasma genus)
탄저병(Anthrax) 탄저균(Bacillus anthracis)
용혈성 아카노박테리아균(Arcanobacterium haemolyticum) 감염 용혈성 아카노박테리아균
아르헨티나 출혈열(Argentine hemorrhagic fever) 후닌바이러스(Junin virus)
회충증(Ascariasis) 회충(Ascaris lumbricoides)
아스페르길루스증(Aspergillosis) 아스페르길루스 속(Aspergillus genus)
아스트로바이러스 감염 아스트로비리대 과(Astroviridae family)
바베스열원충증(Babesiosis) 바베시아 속(Babesia genus)
바실루스 세레우스(Bacillus cereus) 감염 바실루스 세레우스
세균성 폐렴 여러 박테리아
세균성 질염 (BV) 여러 박테리아
박테로이데스(Bacteroides) 감염 박테로이데스 속
발란티디움증(Balantidiasis) 대장 발란티디움(Balantidium coli)
베이리사스카리스(Baylisascaris) 감염 베이리사스카리스 속(Baylisascaris genus)
BK 바이러스 감염 BK 바이러스
흑색사모증(Black piedra) 피에드라이아 호르테(Piedraia hortae)
블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis) 감염 블라스토시스티스 호미니스
분아균증(Blastomycosis) 블라스토미세스 더마티티디스(Blastomyces dermatitidis)
볼리비아 출혈열(Bolivian hemorrhagic fever) 마추포 바이러스(Machupo virus)
보렐리아(Borrelia) 감염 보렐리아 속(Borrelia genus)
보툴리누스 중독증(Botulism) (및 영아 보툴리누스 중독증) 클로스트리듐 보툴리눔(Clostridium botulinum)
브라질 출혈열(Brazilian hemorrhagic fever) 사비아(Sabia)
브루셀라병(Brucellosis) 브루셀라 속(Brucella genus)
부르크홀데리아(Burkholderia) 감염 보통 부르크홀데리아 세파시아(Burkholderia cepacia) 및 기타 부르크홀데리아 종(Burkholderia species)
부룰리 궤양(Buruliulcer) 미코박테리움 울세란스(Mycobacterium ulcerans)
칼리시바이러스 감염 (노로바이러스 및 사포바이러스) 칼리시비리대 과(Caliciviridae family)
캄필로박테리아증(Campylobacteriosis) 캄필로박터 속(Campylobacter genus)
칸디다증(Candidiasis) (모닐리아증(Moniliasis); 아구창(Thrush)) 보통 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 및 기타 칸디다 종(Candida species)
고양이 할큄병(Cat-scratch disease) 바르토넬라 헨셀레(Bartonella henselae)
봉와직염(Cellulitis) 보통 A군 스트렙토코쿠스(Streptococcus) 및 스타필로코쿠스(Staphylococcus)
샤가스 병(Chagas Disease) (아메리카 트리파노소마증(American trypanosomiasis)) 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi)
무른 궤양(Chancroid) 헤모필루스 듀크레이(Haemophilus ducreyi)
수두(Chickenpox) 수두 대상포진 바이러스 (VZV)
클라미디아병(Chlamydia) 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis)
클라미도필라 뉴모니에(Chlamydophila pneumoniae) 감염 클라미도필라 뉴모니에
콜레라 비브리오 콜레레(Vibrio cholerae)
흑색사상균종(ChromoBlastomycosis) 보통 폰세카에아 페드로소이(Fonsecaea pedrosoi)
간흡충증(Clonorchiasis) 간흡충(Clonorchis sinensis)
클로스트리듐 디피실레(Clostridium difficile) 감염 클로스트리듐 디피실레
콕시디오이드진균증(Coccidioidomycosis) 콕시디오이데스 이미티스(Coccidioides immitis) 및 콕시디오이데스 포사다시(Coccidioides posadasii)
콜로라도 진드기 열 (Colorado tick fever; CTF) 콜로라도 진드기 열 바이러스 (CTFV)
일반적인 감기 (급성 바이러스성 비인두염(Acute viral rhinopharyngitis); 급성 코리자(Acute coryza)) 보통 리노바이러스 및 코로나바이러스
크로이츠펠트-야콥 병 (Creutzfeldt-Jakob disease; CJD) CJD 프리온
크림-콩고 출혈열 (Crimean-Congo hemorrhagic fever; CCHF) 크림-콩고 출혈열 바이러스
크립토코쿠스증(Cryptococcosis) 크립토코쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans)
크립토스포리디움증(Cryptosporidiosis) 크립토스포리디움 속(Cryptosporidium genus)
피부 유충 이행증 (Cutaneous larva migrans; CLM) 보통 안사일로스토마 브라질리엔스(Ancylostoma braziliense); 다수의 기타 기생충
원포자충증(Cyclosporiasis) 사이클로스포라 카이에타넨시스(Cyclospora cayetanensis)
낭미충증(Cysticercosis) 유구조충(Taenia solium)
사이토메갈로바이러스 감염 사이토메갈로바이러스
뎅기열(Dengue fever) 뎅기 바이러스(Dengue virus) (DEN-1, DEN-2, DEN-3 및 DEN-4) - 플라비바이러스
이핵아메바증(Dientamoebiasis) 디엔트아메바 프래길리스(Dientamoeba fragilis)
디프테리아(diphtheria) 코리네박테리움 디프테리에(Corynebacterium diphtheriae)
열두조충증(Diphyllobothriasis) 열두조충(Diphyllobothrium)
메디나충증(Dracunculiasis) 메디나선충(Dracunculus medinensis)
에볼라 출혈열(Ebola hemorrhagic fever) 에볼라바이러스 (EBOV)
포충증(Echinococcosis) 에치노코쿠스 속(Echinococcus genus)
엘리키아증(Ehrlichiosis) 엘리키아 속(Ehrlichia genus)
요충증(Enterobiasis) (요충 감염) 엔테로비우스 버미큘라리스(Enterobius vermicularis)
장내구균 감염 장내구균 속(Enterococcus genus)
엔테로바이러스 감염 엔테로바이러스 속(Enterovirus genus)
발진 티푸스(Epidemic typhus) 리케챠 프로바제키(Rickettsia prowazekii)
전염성 홍반(Erythema infectiosum) (제5 병) 파르보바이러스 B19
돌 발진(Exanthem subitum) (제6 병) 인간 헤르페스 바이러스6 (HHV-6) 및 인간 헤르페스 바이러스 7 (HHV-7)
비대흡충증(Fasciolopsiasis) 비대흡충(Fasciolopsis buski)
간질증(Fasciolosis) 간충(Fasciola hepatica) 및 거대 간충(Fasciola gigantica)
치명적 가족성 불면증 (Fatal familial insomnia; FFI) FFI 프리온
필라리아병(Filariasis) 필라리오이데아 상과(Filarioidea superfamily)
클로스트리듐 페르프린젠스(Clostridium perfringens)에 의한 식중독 클로스트리듐 페르프린젠스
자유 생활 아메바 감염 다수
푸소박테리움 감염 푸소박테리움 속(Fusobacterium genus)
가스 괴저병(Gas gangrene) (클로스트리디아성 근괴사(Clostridial myonecrosis)) 보통 클로스트리듐 페르프린젠스; 기타 클로스트리듐 종(Clostridium species)
지오트리쿰증(Geotrichosis) 지오트리쿰 칸디둠(Geotrichum candidum)
게르스트만-스트로이슬러-샤인커 증후군 (Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome ;GSS) GSS 프리온
편모충증(Giardiasis) 지아르디아 인테스티날리스(Giardia intestinalis)
마비저(Glanders) 부르크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei)
악구충증(Gnathostomiasis) 유극악구충(Gnathostoma spinigerum) 및 강극악구충(Gnathostoma hispidum)
임질(Gonorrhea) 임균(Neisseria gonorrhoeae)
서혜부 육아종(Granuloma inguinale) (도노반증(Donovanosis)) 클레브시엘라 그래뉼로마티스(Klebsiella granulomatis)
A군 연쇄상구균 감염 스트렙토코쿠스 피오게네스(Streptococcus pyogenes)
B군 연쇄상구균 감염 스트렙토코쿠스 아갈락티에(Streptococcus agalactiae)
헤모필루스 인플루엔제(Haemophilus influenzae) 감염 헤모필루스 인플루엔제
수족구병 (HFMD) 엔테로바이러스, 주로 콕사키 A 바이러스 및 엔테로바이러스 71 (EV71)
한타바이러스 폐 증후군(HPS) 신 놈브레 바이러스(Sin Nombre virus)
헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 감염 헬리코박터 파일로리
용혈성-요독 증후군(Hemolytic-uremic syndrome; HUS) 대장균(Escherichia coli) O157:H7, 0111 및 0104:H4
신증후성 출혈열 (Hemorrhagic fever with renal syndrome; HFRS) 분야비리대 과(Bunyaviridae family)
간염 A A형 간염 바이러스
간염 B B형 간염 바이러스
간염 C C형 간염 바이러스
간염 D D형 간염 바이러스
간염 E E형 간염 바이러스
단순 포진(Herpes simplex) 단순 헤르페스 바이러스 1 및 2 (HSV-1 및 HSV-2)
히스토플라스마증(Histoplasmosis) 히스토플라스마 캡슐라툼(Histoplasma capsulatum)
구충(Hookworm) 감염 십이지장충(Ancylostoma duodenale) 및 아메리카 구충(Necator americanus)
인간 보카바이러스 감염 인간 보카바이러스 (HBoV)
인간 엘리키아증(ewingii Ehrlichiosis) 엘리키아 유잉기(Ehrlichia ewingii)
인간 과립구성 아나플라스마증 (Human granulocytic anaplasmosis ;HGA) 아나플라스마 파고사이토필룸(Anaplasma phagocytophilum)
인간 메타뉴모바이러스 감염 인간 메타뉴모바이러스 (hMPV)
인간 엘리키아증(단핵구성 Ehrlichiosis) 엘리키아 샤펜시스(Ehrlichia chaffeensis)
인간 유두종 바이러스 (HPV) 감염 인간 유두종 바이러스 (HPV)
인간 파라인플루엔자 바이러스 감염 인간 파라인플루엔자 바이러스 (HPIV)
왜소조충증(Hymenolepiasis) 왜소조충(Hymenolepis nana) 및 축소조충(Hymenolepis diminuta)
엡스테인-바 바이러스 전염성 단핵증 (Mono) 엡스테인-바 바이러스 (EBV)
인플루엔자 (flu) 오르토믹소비리대 과(Orthomyxoviridae family)
포자충증(Isosporiasis) 사람등포자충(Isospora belli)
카와사키 병(Kawasaki disease) 미공지; 증거는 그것이 전염성임을 지지한다
각막염(Keratitis) 다수
킨젤라 킹게(Kingella kingae) 감염 킨젤라 킹게
쿠루(Kuru) 쿠루 프리온
라사열(Lassa fever) 라사 바이러스
레지오넬라증(Legionellosis) (재향군인병(Legionnaires' disease)) 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila)
레지오넬라증 (Pontiac fever) 레지오넬라 뉴모필라
리슈만편모충증(Leishmaniasis) 리슈마니아 속(Leishmania genus)
한센병(Leprosy) 나균(Mycobacterium leprae) 및 나종균(Mycobacterium lepromatosis)
렙토스피라증(Leptospirosis) 렙토스피라 속(Leptospira genus)
선회병(Listeriosis) 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes)
라임병(Lyme disease) (라임 보렐리아증(Lyme borreliosis)) 보통 보렐리아 부르그도르페리(borrelia burgdorferi) 및 기타 보렐리아 종
필라리아병(Lymphatic Filariasis) (상피병(Elephantiasis)) 사상충(Wuchereria bancrofti) 및 말레이 사상충(Brugia malayi)
림프구성 맥락 수막염(Lymphocytic choriomeningitis) 림프구성 맥락 수막염 바이러스 (LCMV)
말라리아(Malaria) 플라스모디움 속(Plasmodium genus)
마르부르크 출혈열 (Marburg hemorrhagic fever; MHF) 마르부르크 바이러스
홍역 홍역 바이러스
유비저(Melioidosis) (휘트모어병(Whitmore's disease)) 부르크홀데리아 슈도말레이(Burkholderia pseudomallei)
뇌수막염(Meningitis) 다수
수막구균성 질환(Meningococcal disease) 수막구균(Neisseria meningitidis)
요코가와흡충증(Metagonimiasis) 보통 메타고니무스 요코가와이(Metagonimus yokogawai)
미포자충증(Microsporidiosis) 마이크로스포리디아 문(Microsporidia phylum)
무사마귀(Molluscum contagiosum; MC) 무사마귀 바이러스 (MCV)
볼거리 볼거리 바이러스
발진열(Murine typhus) (발진 티푸스) 리케챠 타이피(Rickettsia typhi)
마이코플라스마 폐렴(Mycoplasma pneumonia) 마이코플라스마 뉴모니에(Mycoplasma pneumoniae)
진균종(Mycetoma) 박테리아 (방선균균종(Actinomycetoma)) 및 균류 (곰팡이종(Eumycetoma))의 많은 종
구더기증(Myiasis) 기생성 쌍시류 파리 유충
신생아 결막염(Neonatal conjunctivitis) (신생아 안염(Ophthalmia neonatorum)) 가장 흔하게는 클라미디아 트라초마티스 및 임균
(신규) 변종 크로이츠펠트-야콥 병 (vCJD, nvCJD) vCJD 프리온
노카르디아증(Nocardiosis) 보통 노카르디아 아스테로이데스(Nocardia asteroides) 및 기타 노카르디아 종(Nocardia species)
회선사상충증(Onchocerciasis) (사상충증(River blindness)) 회선사상충(Onchocerca volvulus)
파라콕시디오이데스 진균증(Paracoccidioidomycosis) (남미 분아균증(South American Blastomycosis)) 파라콕시디오이데스 브라실리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis)
폐흡충증(Paragonimiasis) 보통 폐흡충(Paragonimus westermani) 및 기타 폐흡충 종(Paragonimus species)
파스퇴렐라 감염증(Pasteurellosis) 파스퇴렐라 속(Pasteurella genus)
두슬증(Pediculosis capitis) (머릿니(Head lice)) 머릿니(Pediculus humanus uscapitis)
구슬증(Pediculosis corporis) (몸니(Body lice)) 옷이(Pediculus humanus corporis)
음모슬증(Pediculosis pubis) (사면발이(Pubic lice), 사면발이(Crab lice)) 프티루스 푸비스(Phthirus pubis)
골반염(Pelvic inflammatory disease; PID) 다수
페르투시스 (백일해(Whooping cough)) 보르데텔라 페르투시스
흑사병(Plague) 예르시니아 페스티스(Yersinia pestis)
폐렴구균 감염 폐렴 연쇄상구균(Streptococcus pneumoniae)
주폐포자충 폐렴(Pneumocystis pneumonia; PCP) 뉴모시스티스 이로베시(Pneumocystis jirovecii)
폐렴 다수
소아마비(Poliomyelitis) 폴리오바이러스
프레보텔라(Prevotella) 감염 프레보텔라 속(Prevotella genus)
원발성 아메바 수막뇌염(Primary amoebic meningoencephalitis; PAM) 보통 파울러 자유 아메바(Naegleria fowleri)
진행성 다초점 백색질 뇌증(Progressive multifocal leukoencephalopathy) JC 바이러스
앵무새병(Psittacosis) 클라미도필라 시타시(Chlamydophila psittaci)
Q 열 콕시엘라 부르네티(Coxiella burnetii)
광견병 광견병 바이러스
서교증(Rat-bite fever) 스트렙토바실러스 모닐리포르미스(Streptobacillus moniliformis) 및 스피릴룸 미누스(Spirillum minus)
호흡기 세포융합 바이러스 감염 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)
리노스포리듐증(Rhinosporidiosis) 리노스포리듐 세베리(Rhinosporidium seeberi)
리노바이러스 감염 리노바이러스
리케챠 감염 리케챠 속(Rickettsia genus)
리케챠 두창(Rickettsial pox) 리케챠 아카리(Rickettsia akari)
리프트 계곡열(Rift Valley fever; RVF) 리프트 계곡열 바이러스
로키산 홍반열(Rocky mountain spotted fever; RMSF) 리케챠 리케치(Rickettsia rickettsii)
로타바이러스 감염 로타바이러스
풍진 풍진 바이러스
살모넬라증(Salmonellosis) 살모넬라 속(Salmonella genus)
SARS (중증 급성 호흡기 증후군) SARS 코로나바이러스
옴(Scabies) 옴 진드기(Sarcoptes scabiei)
주혈흡충증(Schistosomiasis) 주혈흡충 속(Schistosoma genus)
패혈증(Sepsis) 다수
시겔라증(Shigellosis) (세균성 적리(Bacillary dysentery)) 시겔라 속(Shigella genus)
대상포진(Shingles) (대상포진(Herpes zoster)) 수두 대상포진 바이러스 (VZV)
천연두(Smallpox) (두창(Variola)) 대두창(Variola major) 또는 소두창(Variola minor)
스포로트릭스증(Sporotrichosis) 스포로트릭스 셴키(Sporothrix schenckii)
포도상구균 식중독(Staphylococcal food poisoning) 포도상구균 속(Staphylococcus genus)
포도상구균 감염 포도상구균 속
분선충증(Strongyloidiasis) 분선충(Strongyloides stercoralis)
매독(Syphilis) 트레포네마 팔리둠(Treponema pallidum)
조충증(Taeniasis) 조충 속(Taenia genus)
파상풍(Tetanus) (개구불능(Lockjaw)) 파상풍균(Clostridium tetani)
백선성모창(Tinea barbae) (모창(Barber's itch)) 보통 트리코피톤 속(Trichophyton genus)
두부 백선(Tinea capitis) (두피 백선) 보통 트리코피톤 톤수란스(Trichophyton tonsurans)
체부 백선(Tinea corporis) (몸 백선) 보통 트리코피톤 속
샅백선(Tinea cruris) (샅진균증(Jock itch)) 보통 에피더모피톤 플로코숨(Epidermophyton floccosum), 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum), 및 트리코피톤 멘타그로피테스(Trichophyton mentagrophytes)
수부 백선(Tinea manuum) (손 백선) 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum)
흑색백선증(Tinea nigra) 보통 호르테 베르네키(Hortaea werneckii)
족부 백선(Tinea pedis) (무좀(Athlete's foot)) 보통 트리코피톤 속
조갑 백선(Tinea unguium) (손발톱 진균증(Onychomycosis)) 보통 트리코피톤 속
어루러기(Tinea versicolor) (어루러기(Pityriasis versicolor)) 말라세지아 속(Malassezia genus)
개회충증(Toxocariasis) (유충 안구 이행증(Ocular Larva Migrans; OLM)) 개 회충(Toxocara canis) 또는 고양이 회충(Toxocara cati)
개회충증 (유충 내장 이행증(Visceral Larva Migrans; VLM)) 개 회충 또는 고양이 회충
톡소플라스마증(Toxoplasmosis) 톡소플라스마원충(Toxoplasma gondii)
선모충증(Trichinellosis) 선모충(Trichinella spiralis)
편모충증(Trichomoniasis) 질편모충(Trichomonas vaginalis)
편충증(Trichuriasis) (편충 감염) 트리추리스 트리치우라(Trichuris trichiura)
결핵(Tuberculosis) 보통 결핵균(Mycobacterium tuberculosis)
야토병(Tularemia) 야토병균(Francisella tularensis)
유레아플라스마 유레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum) 감염 유레아플라스마 유레아리티쿰
베네수엘라 말 뇌염(Venezuelan equine encephalitis) 베네수엘라 말 뇌염 바이러스
베네수엘라 출혈열(Venezuelan hemorrhagic fever) 구아나리토 바이러스(Guanarito virus)
바이러스성 폐렴(Viral pneumonia) 다수의 바이러스
웨스트 나일 열(West Nile Fever) 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus)
백색 사모(White piedra) (백색 윤선(Tinea blanca)) 트리코스포론 베이젤리(Trichosporon beigelii)
예르시니아 슈도튜보쿨로시스(Yersinia pseudotuberculosis) 감염 예르시니아 슈도튜보쿨로시스
예르시니아증(Yersiniosis) 예르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)
황열병(Yellow fever) 황열병 바이러스
접합진균증(Zygomycosis) 털곰팡이 목(Mucorales order) (털곰팡이증(Mucormycosis)) 및 엔토모프토랄레스 목(Entomophthorales order) (엔토모프토라미코스증(Entomophthoramycosis))
임의의 특정 환자에 대한 구체적인 투약량 및 치료 양생법은 사용된 특정 항체, 이것의 변이체 또는 유도체, 환자의 나이, 체중, 일반적인 건강상태, 성별, 및 식단, 및 투여 시기, 배설률, 약물 조합, 및 치료되는 특정 질환의 심각도를 포함한 다양한 요인에 따라 달라질 것이다. 의료 종사자에 의한 이러한 요인의 판단은 해당 기술 분야의 범위 내에 있다. 양은 또한 치료하고자 하는 개개의 환자, 투여 경로, 제형의 유형, 사용된 화합물의 특성, 질환의 심각도, 및 원하는 효과에 따라 다를 것이다. 사용된 양은 업계에 널리 공지된 약리학적 및 약물동역학적 원칙에 의해 결정될 수 있다.
항체, 변이체의 투여 방법은 피내, 근육 내, 복강 내, 정맥 내, 피하, 비강 내, 경막 외, 및 경구 경로를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 항원-결합 폴리펩타이드 또는 조성물은 임의의 편리한 경로로, 예를 들어, 주입 또는 볼루스(bolus) 주사에 의해, 상피 또는 점막 피부 라이닝(lining) (예를 들어, 구강 점막, 직장 및 장 점막, 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수도 있고 기타 생물학적 활성제와 함께 투여될 수도 있다. 따라서, 본 명세서의 항원-결합 폴리펩타이드를 함유하는 약학적 조성물은 경구로, 직장으로, 비경구로, 지주막 수조 내로(intracistemally), 질 내로, 복강 내로, 국부적으로 (분말, 연고, 안약 또는 경피성 패치에 의해), 볼로, 또는 경구 또는 비강 스프레이로서 투여될 수도 있다.
용어 "비경구"는 본원에서 사용된 바와 같이 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 흉골 내, 피하 및 관절 내 주사 및 주입을 포함하는 투여 방식을 지칭한다.
투여는 전신 또는 국소적일 수 있다. 이에 더하여, 본 명세서의 항체를, 심실 내 및 척추강 내 주사를 포함한, 임의의 적합한 경로에 의해 중추신경계로 도입하는 것이 바람직할 수도 있다; 심실 내 주사는, 예를 들어, 레저버(reservoir), 예컨대 Ommaya 레저버에 부착된 심실 내 카테터(catheter)에 의해 촉진될 수도 있다. 폐 투여는 또한, 예를 들어, 흡입기 또는 분무기, 및 에어로졸화제가 들어있는 제형의 사용에 의해 이용될 수 있다.
본 명세서의 항체 폴리펩타이드 또는 조성물을 치료가 필요한 지역에 국소적으로 투여하는 것이 바람직할 수도 있다; 이것은, 제한되는 것은 아니지만, 예를 들어, 수술 중 국소적 주입에 의해, 예로서, 수술 후 상처 드레싱(dressing)을 동반한, 국부적 도포에 의해, 주사에 의해, 카테터에 의해, 좌제에 의해, 또는 이식에 의해 달성될 수도 있으며, 상기 이식은 다공성, 비-다공성, 또는 막, 예컨대 실라스틱(sialastic) 막, 또는 섬유를 포함한, 젤라틴 재료로 이루어진다. 바람직하게는, 본 명세서의 항체를 포함한 단백질을 투여할 때, 단백질이 흡수되지 않는 재료를 사용하도록 주의를 기울여야 한다.
또 다른 구체예에서, 항체 또는 조성물은 소포, 특히 리포솜에서 전달될 수 있다 (Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327 참조; 일반적으로 같은 내용 참조).
또 다른 구체예에서, 항원-결합 폴리펩타이드 또는 조성물은 제어된 방출 시스템에서 전달될 수 있다. 한 구체예에서는, 펌프가 사용될 수도 있다 (Sefton, 1987, CRC Crit . Ref. Biomed . Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl . J. Med. 321:574 참조). 또 다른 구체예에서는, 폴리머 재료가 사용될 수 있다 (Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, J., 1983, Macromol. Sci . Rev. Macromol . Chem. 23:61 참조; 또한 Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105 참조). 또 다른 구체예에서, 제어된 방출 시스템은 치료 표적, 즉, 뇌에 근처에 배치될 수 있으며, 따라서 전신 용량의 일부만을 필요로 한다 (예를 들어, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984) 참조). 다른 제어된 방출 시스템은 Langer에 의한 리뷰에서 논의된다 (1990, Science 249:1527-1533).
본 명세서의 조성물이 단백질을 암호화하는 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 특정 구체예에서, 핵산은 그것을 적절한 핵산 발현 벡터의 일부로서 구성하여 그것이 세포 내에 있도록 투여함으로써, 예를 들어, 레트로바이러스 벡터의 사용에 의해 (미국 특허 번호 4,980,286 참조), 또는 직접적인 주사에 의해, 또는 극미립자 폭발(microparticle bombardment) (예를 들어, 유전자 총(gene gun); Biolistic, Dupont)의 사용에 의해, 또는 지질 또는 세포-표면 수용체 또는 트랜스펙션제로 코팅함으로써, 또는 핵으로 들어가는 것으로 알려져 있는 호메오박스(homeobox)-유사 펩타이드에 결합된 핵산을 투여함으로써 (예를 들어, Joliot et al., 1991, Proc . Natl . Acad . Sci. USA 88:1864-1868 참조), 등에 의해 투여되어 생체 내에서 암호화된 단백질의 발현을 촉진할 수 있다. 대안으로, 핵산은 세포 내로 도입되어 상동 재조합에 의해 발현용 숙주 세포 DNA 내에 포함될 수 있다.
염증성, 면역성 또는 악성 질환, 장애 또는 질병의 치료, 억제 및 예방에 효과적인 본 명세서의 항체의 양은 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다. 이에 더하여, 시험관 내 검정은 최적의 투약량의 범위를 확인하는 것을 돕기 위해 선택적으로 이용될 수도 있다. 제형에 이용하고자 하는 정확한 용량은 또한 투여 경로, 및 질환, 장애 또는 질병의 심각도에 따라 달라질 것이고, 의사의 판단 및 각 환자의 상황에 따라서 결정되어야 한다. 유효량은 시험관 내 또는 동물 모델 테스트 시스템으로부터 유래된 용량-반응 곡선으로부터 추정될 수도 있다.
일반적인 명제로서, 환자에게 투여되는, 본 명세서의 항원-결합 폴리펩타이드의 투약량은 전형적으로 환자 체중의 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg, 환자 체중의 0.1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 또는 환자 체중의 1 mg/kg 내지 10 mg/kg이다. 일반적으로, 인간 항체는 외래 폴리펩타이드에 대한 면역 반응으로 인해 다른 종의 항체보다 인간의 신체 내에서 더 긴 반감기를 갖는다. 따라서, 인간 항체의 더 낮은 투약량 및 덜 빈번한 투여가 종종 가능하다. 또한, 본 명세서의 항체의 투약량 및 투여 빈도는, 예를 들어, 지질화와 같은 변형에 의해 항체의 흡수 및 조직 침투 (예를 들어, 뇌로)를 향상시킴으로써 감소될 수도 있다.
본 명세서의 항체, 이것의 변이체, 또는 유도체의 투여를 포함한, 감염성 또는 악성 질환, 질병 또는 장애의 치료 방법은 전형적으로, 인간에 사용하기 전에, 원하는 치료적 또는 예방적 활성에 대하여, 시험관 내 테스트된 다음, 허용 가능한 동물 모델에서 생체 내 테스트된다. 트랜스제닉 동물을 포함한 적합한 동물 모델은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에서 기술된 항원-결합 폴리펩타이드의 치료적 유용성을 입증하기 위한 시험관 내 검정은 세포주 또는 환자 조직 샘플에 대한 항원-결합 폴리펩타이드의 효과를 포함한다. 세포주 및/또는 조직 샘플에 대한 항원-결합 폴리펩타이드의 효과는 당업자에게 공지된 기술, 예컨대 본원의 다른 곳에서 개시된 검정을 활용하여 결정될 수 있다. 본 명세서에 따르면, 특정 항원-결합 폴리펩타이드의 투여가 지시되는지를 결정하는데 사용될 수 있는 시험관 내 검정은 환자 조직 샘플이 배양물에서 성장하고, 화합물에 노출되거나 그렇지 않으면 화합물이 투여되는 시험관 내 세포 배양 검정을 포함하고, 조직 샘플에 대한 이러한 화합물의 효과가 관찰된다.
다양한 전달 시스템, 예를 들어, 리포솜, 극미립자, 미소캡슐, 화합물을 발현할 수 있는 재조합 세포에서의 캡슐화, 수용체-매개 세포 내 섭취(endocytosis) (예를 들어, Wu and Wu, 1987, J. Biol . Chem. 262:4429-4432 참조), 레트로바이러스 또는 다른 벡터의 일부로서 핵산의 구성, 등이 공지되어 있으며 본 명세서의 항체 또는 본 명세서의 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 투여하는데 사용될 수 있다.
진단 방법
PD-L1의 과발현은 특정 종양 샘플에서 관찰되며, PD-L1-과발현 세포를 가진 환자는 본 명세서의 항-PD-L1 항체로의 처리에 반응성일 가능성이 크다. 따라서, 본 명세서의 항체는 또한 진단적 및 예후적 목적으로 사용될 수 있다.
바람직하게는 세포를 포함하는 샘플은 환자로부터 얻을 수 있으며, 이 환자는 암 환자 또는 진단이 필요한 환자일 수 있다. 세포는 종양 조직 또는 종양 블록, 혈액 샘플, 소변 샘플 또는 환자의 어떠한 샘플의 세포일 수도 있다. 샘플의 선택적 전처리시, 샘플은 항체가 샘플에 잠재적으로 존재하는 PD-L1 단백질과 상호작용하는 조건 하에서 본 명세서의 항체와 함께 인큐베이션될 수 있다. ELISA와 같은 방법이 사용될 수 있으며, 샘플에서 PD-L1 단백질의 존재를 검출하기 위해 항-PD-L1 항체를 이용한다.
샘플에서 PD-L1 단백질의 존재 (선택적으로는 양 또는 농도와 함께)는 환자가 항체로의 처리에 적합하다는 지표로서, 또는 환자가 암 치료에 반응하였다는 (반응하지 않았다는) 지표로서 암의 진단에 사용될 수 있다. 예후적 방법에 대하여, 치료의 진행을 나타내기 위해 암 치료를 시작할 때, 특정 단계에서 1회, 2회 또는 그 이상 검출이 실행될 수 있다.
조성물
본 명세서는 또한 약학적 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 항체의 유효량, 및 허용 가능한 담체를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 제2 항암제 (예를 들어, 면역 체크포인트 억제자)를 더 포함한다.
특정 구체예에서, 용어 "약학적으로 허용 가능한"은 동물, 및 더 구체적으로는 인간에서의 사용에 대하여 연방 정부 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인정되는 약전에 나열되었음을 의미한다. 또한, "약학적으로 허용 가능한 담체"는 일반적으로 비-독성 고체, 반고체 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 물질 또는 임의의 유형의 제형 보조제일 것이다.
용어 "담체"는 치료제가 함께 투여되는 희석제, 보조제, 부형제, 또는 비히클(vehicle)를 지칭한다. 이러한 약학적 담체는 멸균 액체, 예컨대 물 및 오일일 수 있으며, 석유계, 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 오일, 예컨대 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참깨 오일 등을 포함한다. 물은 약학적 조성물이 정맥 내로 투여될 때 바람직한 담체이다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이, 특히 주사용액에 대하여, 액체 담체로서 이용될 수도 있다. 적합한 약학적 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔(silica gel), 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크(talc), 나트륨 클로라이드, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 조성물은 또한, 필요한 경우, 소량의 습윤제 또는 에멀젼화제, 또는 pH 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트를 함유할 수 있다. 항세균제, 예컨대 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 나트륨 바이설파이트; 킬레이트 시약, 예컨대 에틸렌다이아민테트라아세트산; 및 장성 조정제, 예컨대 나트륨 클로라이드 또는 덱스트로스가 또한 구상된다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 알약, 캡슐, 분말, 지효성 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 조성물은 좌제로서 전통적인 바인더(binder) 및 담체, 예컨대 트리글리세리드로 제형화될 수 있다. 경구용 제형은 표준 담체, 예컨대 약학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 마그네슘 카보네이트, 등을 포함할 수 있다. 적합한 약학적 담체의 예는 Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin에 기술되어 있으며, 본원에 참조로 포함된다. 이러한 조성물은 환자에게 적절한 투여 형태를 제공하기 위해 적합한 양의 담체와 함께, 바람직하게는 정제된 형태로, 항원-결합 폴리펩타이드의 치료적 유효량을 함유할 것이다. 제형은 투여 방식에 맞춰야 한다. 모 조제물은 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 앰플, 1회용 주사기 또는 다회수 용량 바이알에 봉입될 수 있다.
한 구체예에서, 조성물은 인간에게로의 정맥 내 투여에 적합한 약학적 조성물로서 일상적인 과정에 따라 제형화된다. 전형적으로, 정맥 내 투여용 조성물은 멸균 등장성 수성 버퍼 중의 용액이다. 필요한 경우, 조성물은 또한 가용화제 및 주사 부위에서의 통증을 완화하기 위한 국소 마취제, 예컨대 리그노카인을 포함할 수도 있다. 일반적으로, 성분은 활성제의 양을 표시하는 밀봉된 용기, 예컨대 앰플 또는 사세(sachette) 내 단위 투약 형태로, 예를 들어, 동결건조된 분말 또는 무수 농축액으로서 별도로 공급되거나 함께 혼합된다. 조성물이 주입에 의해 투여되는 경우, 그것은 멸균 약학적 등급 물 또는 식염수를 함유한 주입 병으로 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 투여 전에 성분이 혼합될 수 있도록 멸균 주사용수 또는 식염수의 앰플이 제공될 수 있다.
본 명세서의 화합물은 중성 또는 염 형태로 제형화될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염은 음이온으로 형성된 것들, 예컨대 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 등으로부터 유래된 것들, 및 양이온으로 형성된 것들, 예컨대 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화 제2 철, 아이소프로필아민, 트라이에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인, 등으로부터 유래된 것들을 포함한다.
실시예
실시예 1: 인간 PD-L1에 대한 인간 단클론성 항체의 생성
하이브리도마 기술을 사용하여 항-인간-PD-L1 마우스 단클론성 항체를 생성하였다.
항원: 인간 PDL1-Fc 단백질 및 인간 PD-L1을 고도로 발현하는 CHOK1 세포주 (PDL1-CHOK1 세포주).
면역화: 인간 PD-L1에 대한 마우스 단클론성 항체를 생성하기 위해, 6-8주령 암컷 BALB/c 마우스를 먼저 1.5 Х 107개의 PDL1-CHOK1 세포로 면역화하였다. 최초 면역화 이후 제14 일 및 제33 일에, 면역화된 마우스를 각각 1.5 Х 107개의 PDL1-CHOK1 세포로 재면역화하였다. PD-L1 단백질에 결합하는 항체를 생산하는 마우스를 선택하기 위해서, 면역화된 마우스의 혈청을 ELISA로 테스트하였다. 간략히 말하면, 미세역가 플레이트를 PBS 중 1 μg/ml, 100 μl/웰의 인간 PD-L1 단백질로 실온 (RT)에서 밤새도록 코팅한 다음, 100 μl/웰의 5% BSA로 블로킹하였다. 면역화된 마우스의 혈장의 희석액을 각 웰에 추가하고 RT에서 1-2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS/Tween으로 세척한 다음 홀스 래디쉬 퍼옥시다제 (HRP)와 컨쥬게이션된 항-마우스 IgG 항체와 함께 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 플레이트를 ABTS 기질로 현상하였고 분광광도계로 OD 405nm에서 분석하였다. 충분한 역가의 항-PDL1 IgG를 가진 마우스를 면역화 후 제54 일에 50ug 인간 PDL1-Fc 단백질로 부스팅하였다(boost). 결과로 생긴 마우스를 융합에 사용하였다. 하이브리도마 상층액을 항-PD-L1 IgG에 대하여 ELISA로 테스트하였다.
추가의 분석을 위해 하이브리도마 클론 HL1210-3, HL1207-3, HL1207-9 및 HL1120-3을 선택하였다. HL1210-3의 가변 영역의 아미노산 및 폴리뉴클레오타이드 서열이 하기 표 5에서 제공된다.
Figure pat00005
실시예 2: 인간 PD -L1에 대한 HL1210-3 마우스 단클론성 항체의 결합 활성
하이브리도마 클론 HL1210-3의 결합 활성을 평가하기 위해서, 이 클론의 정제된 mAb를 ELISA 테스트하였다. 간략히 말하면, 미세역가 플레이트를 PBS 중 0.1 μg/ml , 100 μl/웰의 인간 PD-L1-Fc 단백질로 4℃에서 밤새도록 코팅한 다음, 100 μl/웰의 5% BSA로 블로킹하였다. 0.2 μg/ml에서 시작하여 HL1210-3 항체의 3배 희석액을 각 웰에 추가하였고 RT에서 1-2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS/Tween으로 세척한 다음 홀스 래디쉬 퍼옥시다제 (HRP)와 컨쥬게이션된 염소-항-마우스 IgG 항체와 함께 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 플레이트를 TMB 기질로 현상하였고 분광광도계로 OD 450-630nm에서 분석하였다. 도 1에서 도시된 바와 같이, HL1210-3은 인간 PD-L1에 높은 활성으로 결합할 수 있다 (EC50=5.539ng/ml).
실시예 3: HL1210-3 마우스 mAb는 수용체 PD-1로의 인간 PD-L1 결합을 차단하였다
재조합 인간 PD-L1을 사용한 수용체 차단 검정
재조합 인간 PD-L1이 그 수용체 PD-1에 결합하는 것에 대한 HL1210-3 마우스 mAb의 차단 효과를 평가하기 위해서, ELISA 기반 수용체 차단 검정을 이용하였다. 간략히 말하면, 미세역가 플레이트를 PBS 중 1 μg/ml , 100 μl/웰의 인간 PD-L1-Fc 단백질로 4℃에서 밤새도록 코팅한 다음, 100 μl/웰의 5% BSA로 블로킹하였다. 50μl 비오틴-라벨링된 인간 PD-1-Fc 단백질 및 2μg/ml에서 시작하여 HL1210-3 항체의 3배 희석액 50μl를 각 웰에 추가하였고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS/Tween으로 세척한 다음 스트렙타비딘-HRP와 함께 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 플레이트를 TMB 기질로 현상하였고 분광광도계로 OD 450-630nm에서 분석하였다. 도 2에서 도시된 바와 같이, HL1210-3은 IC50=0.7835nM에서 인간 PD1으로의 인간 PD-L1의 결합을 효율적으로 억제할 수 있다.
인간 PD-L1을 발현하는 포유류 세포를 사용한 수용체 차단 검정
포유류 세포에서 발현되는 PD-L1이 그 수용체 PD-1에 결합하는 것에 대한 HL1210-3 마우스의 차단 효과를 평가하기 위해서, FACS-기반 수용체 차단 검정을 사용하였다. 간략히 말하면, PDL1-CHOK1 세포를 먼저 20 μg/ml에서 시작하여 3배 희석된 HL1210-3 마우스 mAb와 함께 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. FACS 버퍼 (2% FBS가 들어있는 PBS)에 의한 세척 후, 비오틴-라벨링된 huPD-1을 각 웰에 추가하였고 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 그 다음에, FACS 버퍼로 2회 세척 후 0.5시간 동안 스트렙타비딘-PE를 각 웰에 추가하였다. PE의 평균 형광 강도 (MFI)를 FACSAriaIII에 의해 평가하였다. 도 3에서 도시된 바와 같이, HL1210-3 항체는 포유류 세포에서 발현되는 PD-L1에서 PD-1의 결합을 2.56nM의 IC50에서 고도로 효율적으로 억제할 수 있으며 최고 억제율은 92.6%이다.
Figure pat00006
실시예 4: HL1210-3 마우스 mAb는 인간 T 세포 면역 반응을 촉진하였다
HL1210-3 마우스 mAb의 효과를 평가하기 위해서, 인간 T 세포의 반응을 혼합된 림프구 반응 설정에서 평가하였다. 인간 DC를 GM-CSF 및 IL-4의 존재 하에서 7일 동안 CD14+ 단핵구로부터 분화시켰다. 그 다음에 또 다른 공여체로부터 분리된 CD4+ T 세포를 DC 및 항-PD-L1 차단 항체의 단계 희석액과 함께 공동-배양하였다. 접종 후 제5 일에, 배양 상층액을 IFNγ 생산에 대하여 검정하였다. 결과는 HL1210-3 항체가 용량-의존적으로 IFNγ 생산을 촉진할 수 있다는 것을 나타내며, 항-PD-L1 항체가 인간 T 세포 반응을 촉진할 수 있다는 것을 제안한다 (도 4).
실시예 5: HL1210-3 마우스 mAb의 결합 친화도
재조합 PD-L1 단백질 (인간 PD-L1-his taq)로의 HL1210-3 항체의 결합을 캡쳐 방법을 사용하여 BIACORE™으로 테스트하였다. HL1210-3 마우스 mAb를 CM5 칩 상에서 코팅된 항-마우스 Fc 항체를 사용하여 캡쳐하였다. 인간 PD-L1-his taq 단백질의 단계 희석액을 캡쳐된 항체 위로 3분 동안 25 μg/ml의 유속으로 주사하였다. 항원을 900s 동안 해리시켰다. 모든 실험을 Biacore T200에서 수행하였다. 데이터 분석을 Biacore T200 평가 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. 결과는 하기 도 5 및 표 6에서 도시된다.
Figure pat00007
실시예 6: HL1210-3 마우스 mAb의 인간화
mAb HL1210-3 가변 영역 유전자를 이용하여 인간화 MAb를 생성하였다. 이 공정의 제1 단계에서, 전반적으로 가장 잘 일치하는 인간 생식세포 계열 Ig 유전자 서열을 찾기 위해서 MAb HL1210-3의 VH 및 VK의 아미노산 서열을 인간 Ig 유전자 서열의 이용 가능한 데이터베이스와 비교하였다. 경쇄에 대하여, 가장 밀접한 인간 매치는 O18/Jk2 및 KV1-39*01/KJ2*04 유전자였고, 중쇄에 대해서는 가장 밀접한 인간 매치는 VH3-21 유전자였다. 밀접한 일치로 인해 VH3-11, VH3-23, VH3-7*01 및 VH3-48 유전자를 또한 선택하였다.
그 다음에 HL1210-3 경쇄의 CDR1 (서열 번호:4), 2 (서열 번호:5) 및 3 (서열 번호:6)이 O18/Jk2 및 KV1-39*01/KJ2*04 유전자의 프레임워크 서열로 이식되고, HL1210-3 VH의 CDR1 (서열 번호:1), 2 (서열 번호:2), 및 3 (서열 번호:3) 서열이 VH3-21, VH3-11, VH3-23, VH3-48 또는 VH3-7*01 유전자의 프레임워크 서열로 이식된 인간화 가변 도메인 서열을 설계하였다. 그 다음에 마우스 아미노산을 인간 아미노산으로 대체하는 것이 결합 및/또는 CDR 입체구조에 영향을 미칠 수 있는 임의의 프레임워크 위치가 존재하는지를 결정하기 위한 3D 모델을 생성하였다. 경쇄의 경우에는, 프레임워크에서 22S, 43S, 60D, 63T 및 42Q를 확인하였다 (카바트 넘버링, 표 7 참조). 중쇄의 경우에는, 프레임워크에서 1E, 37V, 40T, 44S, 49A, 77N, 91I, 94R 및 108T가 역돌연변이에 포함되었다.
인간화 항체 중 일부의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열이 하기 표 8에서 나열된다.
Figure pat00009
Figure pat00010
Figure pat00011
Figure pat00012
Figure pat00013
인간화 VH 및 VK 유전자를 합성으로 생산한 다음 각각 인간 감마 1 및 인간 카파 불변 도메인을 함유하는 벡터로 클로닝하였다. 인간 VH 및 인간 VL의 쌍 형성(pairing)은 40개의 인간화 항체를 생성하였다 (표 9 참조).
Figure pat00014
실시예 7: 인간화 PD-L1 항체의 항원 결합 성질
재조합 인간 PD- L1에 대한 결합 성질
항원 결합 활성을 평가하기 위해서, 인간화 항체를 ELISA 테스트하였다. 간략히 말하면, 미세역가 플레이트를 PBS 중 0.1 μg/ml, 100μl/웰의 인간 PD-L1-Fc 단백질로 4℃에서 밤새도록 코팅한 다음, 100μl/웰의 5% BSA로 블로킹하였다. 10 μg/ml에서 시작하여 인간화 항체의 5배 희석액을 각 웰에 추가하였고 RT에서 1-2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS/Tween으로 세척한 다음 홀스 래디쉬 퍼옥시다제 (HRP)와 컨쥬게이션된 염소-항-마우스 IgG 항체와 함께 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 플레이트를 TMB 기질로 현상하였고 분광광도계로 OD 450-630nm에서 분석하였다. 도 6에서 도시된 바와 같이, 모든 인간화 항체는 키메라 항체와 접촉하여 인간 PD-L1에 대하여 비슷한 결합 효능을 나타낸다.
포유류에서 발현된 인간 PD- L1에 대한 결합 성질
항원 결합 성질을 평가하기 위해서, 인간화 항체를 포유류에서 발현된 PD-L1으로의 결합에 대하여 FACS로 분석하였다. 간략히 말하면, PDL1-CHOK1 세포를 먼저 2μg/ml에서 시작하여 5배 희석된 인간화 항체와 함께 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. FACS 버퍼 (2% FBS가 들어있는 PBS)로 세척 후, alexa 488-항-인간 IgG 항체를 각 웰에 추가하였고 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. Alexa 488의 MFI를 FACSAriaIII로 평가하였다. 도 7에서 도시된 바와 같이, 모든 인간화 항체는 포유류 세포에서 발현된 PD-L1에 고도로 효율적으로 결합할 수 있으며, 이는 키메라 항체와 비슷하였다.
인간화 항체의 결합 동역학을 조사하기 위해서, 이 실시예에서는 Octet Red 96을 사용하여 친화도 순위 결정을 수행하였다. 표 10에서 나타난 바와 같이, hu1210-3, hu1210-8, hu1210-9, hu1210-14, hu1210-17, hu1210-1 및 Hu1210-22가 더 양호한 친화도를 나타내며, 이는 키메라 항체와 비슷하다.
Figure pat00015
Biacore ®에 의한 인간화 항체의 전체 동역학적 친화도
재조합 PD-L1 단백질 (인간 PD-L1-his taq)로의 인간화 항체의 결합을 캡쳐 방법을 사용하여 BIACORE™으로 테스트하였다. HL1210-3 마우스 mAb를 CM5 칩 상에서 코팅된 항-마우스 Fc 항체를 사용하여 캡쳐하였다. 인간 PD-L1-his taq 단백질의 단계 희석액을 캡쳐된 항체 위로 3분 동안 25 μg/ml의 유속으로 주사하였다. 항원을 900s 동안 해리시켰다. 모든 실험을 Biacore T200에서 수행하였다. 데이터 분석을 Biacore T200 평가 소프트웨어를 사용하여 수행하였고 하기 표 11에서 나타난다.
Figure pat00016
종간 활성
huPD-L1, 마우스 PD-L1, 래트 PD-L1, 붉은 털 원숭이 PD-L1로의 인간화 항체의 결합을 평가하기 위해서, 항체에 ELISA 테스트를 수행하였다. 간략히 말하면, 미세역가 플레이트를 PBS 중 1 μg/ml, 100μl/웰의 인간 , 마우스, 래트 및 붉은 털 원숭이 PD-L1-Fc 단백질로 4℃에서 밤새도록 코팅한 다음, 100μl/웰의 5% BSA로 블로킹하였다. 1 μg/ml에서 시작하여 인간화 항체의 3배 희석액을 각 웰에 추가하였고 RT에서 1-2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS/Tween로 세척한 다음 홀스 래디쉬 퍼옥시다제 (HRP)와 컨쥬게이션된 염소-항-마우스 IgG 항체와 함께 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 플레이트를 TMB 기질로 현상하였고 분광광도계로 OD 450-630nm에서 분석하였다. Hu1210-41 항체는 더 낮은 친화도로 붉은 털 원숭이 PD-L1에 결합할 수 있지만 래트 및 마우스 PD-L1에는 결합할 수 없다 (도 8).
Figure pat00017
패밀리 구성원 특이성
인간 B7 패밀리 및 기타 면역 체크포인트로의 인간화 항-PD-L1 항체의 결합을 평가하기 위해서, 항체를 B7-H1 (PD-L1), B7-DC, B7-1, B7-2, B7-H2, PD-1, CD28, CTLA4, ICOS 및 BTLA로의 결합에 대하여 ELISA로 평가하였다. 도 9에서 도시된 바와 같이, Hu1210-41 항체는 B7-H1 (PD-L1)에만 특이적으로 결합할 수 있다.
실시예 8: 인간화 항체는 PD- 1에 대한 인간 PD -L1의 활성을 차단하였다
세포 기반 수용체 차단 검정
포유류 세포에서 발현된 인간 PD-L1이 그 수용체 PD-1에 결합하는 것에 대한 인간화 항체의 차단 효과를 평가하기 위해서, FACS-기반 수용체 차단 검정을 이용하였다. 간략히 말하면, PDL1-CHOK1 세포를 먼저 20 μg/ml에서 시작하여 3배 희석된 HL1210-3 마우스 mAb와 함께 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. FACS 버퍼 (2% FBS가 들어있는 PBS)로 세척 후, 비오틴-라벨링된 huPD-1을 각 웰에 추가하였고 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 그 다음에, 스트렙타비딘-PE를 FACS 버퍼로 2회 세척 후 0.5시간 동안 각 웰에 추가하였다. PE의 평균 형광 강도 (MFI)를 FACSAriaIII로 평가하였다.
Figure pat00018
하기 표 12에서 나타난 바와 같이, Hu1210-3, Hu1210-9, Hu1210-8, Hu1210-14, Hu1210-17, Hu1210-19 및 Hu1210-22 항체는 PD-1으로의 PD-L1의 결합을 차단하는 것에 대하여 키메라 항체와 비슷한 효능을 나타낸다.
Figure pat00019
재조합 인간 PD-L1을 사용한 수용체 차단 검정
인간 PD-L1에 대하여 두 개의 수용체, 즉, PD-1 및 B7-1이 존재한다. 이들 두 개의 단백질에 대한 인간화 PD-L1 항체의 차단 성질을 조사하기 위해서, 본원에서는 단백질 기반 수용체 차단 검정을 이용하였다. 간략히 말하면, 미세역가 플레이트를 PBS 중 1 μg/ml, 100μl/웰의 인간 PD-L1-Fc 단백질로 4℃에서 밤새도록 코팅한 다음, 200μl/웰의 5% BSA로 37℃에서 2시간 동안 블로킹하였다. 50μl 비오틴-라벨링된 인간 PD-1-Fc 또는 B7-1 단백질 및 100nM에서 시작하여 PD-L1 항체의 5배 희석액 50μl를 각 웰에 추가하였고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS/Tween로 세척한 다음 스트렙타비딘-HRP와 함께 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 플레이트를 TMB 기질로 현상하였고 분광광도계로 OD 450nm에서 분석하였다. 도 10 및 11에서 도시된 바와 같이, Hu1210-41은 인간 PD1 및 B7-1로의 인간 PD-L1의 결합을 효율적으로 억제할 수 있다.
실시예 9: 인간화 항체는 인간 T 세포 면역 반응을 촉진하였다.
혼합된 림프구 반응 검정
인간화 항체의 시험관 내 기능을 평가하기 위해서, 인간 T 세포의 반응을 혼합된 림프구 반응 설정에서 평가하였다. 인간 DC를 GM-CSF 및 IL-4의 존재 하에서 7일 동안 CD14+ 단핵구로부터 분화시켰다. 그 다음에 또 다른 공여체로부터 분리된 CD4+ T 세포를 DC 및 항-PD-L1 차단 항체의 단계 희석액과 함께 공동-배양하였다. 접종 후 제5 일에, 배양 상층액을 IL-2 및 IFNγ 생산에 대하여 검정하였다. 결과는 Hu1210-8, Hu1210-9, Hu1210-16 및 Hu1210-17 항체가 용량-의존적으로 IL-2 및 IFNγ 생산을 촉진할 수 있다는 것을 나타내며, 항-PD-L1 항체는 인간 T 세포 반응을 촉진할 수 있다는 것을 제안한다.
CMV 리콜 검정
인간화 항체의 시험관 내 기능을 평가하기 위해서, 인간 T 세포의 반응을 CMV 리콜 검정에서 평가하였다. 인간 PBMC를 단계 희석된 인간화 항체의 존재 하에서 1 μg/ml CMV 항원으로 자극하였다. 도 12 및 13에서 도시된 바와 같이, Hu1210-40, Hu1210-41 및 Hu1210-17은 용량 독립적으로 IFNγ 생산을 촉진할 수 있다.
실시예 10: 항-PD-L1 mAb에 의한 종양 성장 억제
인간 폐 선암종 세포주 HCC827의 세포를 NOD scid 감마 (NSG) 마우스로 이식할 것이다. NSG 마우스는 NOD scid 감마가 결핍되어 있으며 인간 종양 세포 및 PBMC 이식에 대하여 이상적인 수령체가 되는 가장 면역결핍된 마우스이다. 이식 후 제10 일에, 인간 PBMC를 종양을 가지고 있는 마우스로 이식할 것이다. 이식 후 대략 20일에, 종양 부피가 100-150mm3에 도달하면, PD-L1 항체를 격일마다 5 mg/kg로 마우스에 투여할 것이다. 격일마다 항체 투여와 함께 종양 부피를 관찰할 것이다. 도 14에서 도시된 바와 같이, Hu1210-31은 5mg/kg에서 종양 성장을 30%만큼 억제할 수 있다. Hu1210-41 항체는 용량-의존적으로 종양 성장을 억제할 수 있는 한편, 종량 중량 또한 Hu1210-41 항체에 의해 용량-의존적으로 억제되었다 (도 15).
실시예 11. 인간화 항체의 추가의 변화 및 최적화의 컴퓨터 시뮬레이션
CDR 영역 또는 프레임워크 영역 내 특정 아미노산 잔기가 항체의 활성 및/또는 안정성을 추가로 개선하거나 보유하도록 변경될 수 있다는 것을 고려하였다. 변이체를 구조적, 입체배치적 및 기능적 성질에 관하여, 컴퓨터 도구 (VectorNTI, www.ebi.ac.uk/tools/msa/clustalo/에서 이용 가능함)로 테스트하였고, (CDR 영역 내에서) 조짐이 보이는 것들을 하기 표에서 나열하였다.
Figure pat00020
Figure pat00021
Figure pat00022
Figure pat00023
Figure pat00024
Figure pat00025
밑줄: 핫 스팟 돌연변이 잔기 및 그 대체물
실시예 12: PD-L1 에피토프의 확인
이 연구를 수행하여 본 명세서의 항체로의 PD-L1의 결합에 포함되는 아미노산 잔기를 확인하였다.
PD-L1의 알라닌-스캔 라이브러리를 구성하였다. 간략히 말하면, PD-L1의 217개의 돌연변이 클론을 Integral Molecular의 단백질 조작 플랫폼 상에서 생성하였다. PD-L1 돌연변이 라이브러리에서 각 변이체로의 Hu1210-41 Fab의 결합을 고처리량 유동 세포 분석법에 의해 이중으로 결정하였다. 각각의 미가공 데이터 포인트에서 배경 형광을 빼고 PD-L1 야생형 (WT)과의 반응성에 대하여 표준화하였다. 각각의 PD-L1 변이체에 대하여, 평균 결합 값을 발현의 함수로서 플롯팅하였다 (대조군 항-PD-L1 mAb 반응성). 예비 중요 클론 (십자가 표시된 원)을 확인하기 위해서는, , 대조군 MAb로의 >70% WT 결합 및 Hu1210-41 Fab로의 <30% WT 반응성의 임계값 (점선)을 적용하였다 (도 16). PDL1의 Y134, K162, 및 N183을 Hu1210-41 결합에 필요한 잔기로 확인하였다. Hu1210-41 Fab와의 N183A 클론의 낮은 반응성은 그것이 Hu1210-41 결합에 대한 주요 강력한 기여자이며, Y134 및 K162에 의한 기여가 더 낮다는 것을 제안한다.
중요 잔기 (구형)를 3D PD-L1 구조에서 확인하였고 (PDB ID# 5JDR, Zhang et al., 2017), 도 17에서 예시하였다. 그러므로, 이들 잔기, Y134, K162, 및 N183은 본 명세서의 다양한 구체예의 항체로의 결합의 원인이 되는 PD-L1의 에피토프를 구성한다.
This different 에피토프 of HHHHHuuuuu1210-41, surprisingly,likely contributes to the excellent activities of HHHHHuuuuu1210-41.
Y134, K162, 및 N183이 모두 PD-L1 단백질의 IgC 도메인 내에 위치한다는 것은 흥미로운 일이다. PD-1 및 PD-L1 둘 다의 세포 외 부분은 IgV 도메인 및 IgC 도메인을 갖는다. PD-L1이 IgV 도메인 간의 결합을 통해 PD-1에 결합한다는 것은 흔히 알려져 있다. 하지만, 이러한 통상적인 항체와는 달리, Hu1210-41은 IgC 도메인에 결합하며, 이것은 PD-1/PD-L1 결합을 억제하는데 효과적지 못할 것으로 예상된다. 놀랍게도, Hu1210-41의 이 다른 에피토프는 Hu1210-41의 훌륭한 활성에 유사하게 기여한다.
* * *
본 명세서는 기술된 특정 구체예에 의해 범위가 제한되어서는 안되며, 이것은 본 명세서의 개개의 양태의 단일 예시로서 의도되고, 기능적으로 동등한 임의의 조성물 또는 방법은 본 명세서의 범위 내에 있다. 본 명세서의 사상 또는 범위로부터 벗어나지 않으면서 본 명세서의 방법 및 조성물에서 다양한 변형 및 변화가 이루어질 수 있다는 것은 당업자에게 분명할 것이다. 따라서, 본 명세서는 본 명세서의 변형 및 변화가 첨부된 청구항 및 그 동등물의 범위 내에 있는 한 그것들을 커버하도록 의도된다.
본 명세서에서 언급된 모든 간행물 및 특허 출원은 각각의 개개의 간행물 또는 특허 출원이 참조로 구체적으로 및 개별적으로 포함되도록 나타난 바와 같은 정도로 본원에 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> I-MAB <120> ANTI-PD-L1 ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> 54LW-250266-WO2 <140> PCT/CN17/088033 <141> 2017-06-13 <150> 201610414226.5 <151> 2016-06-13 <150> PCT/CN17/072566 <151> 2017-01-25 <160> 115 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Thr Ile Ser Asp Gly Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 Glu Phe Gly Lys Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala Val Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 Gln Gln His Tyr Thr Thr 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<400> 21 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Asp Val Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Phe Gly Lys Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 22 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 22 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu 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110 Gly Cys Cys Ala Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala 115 120 125 Gly Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys 130 135 140 Gly Cys Ala Ala Cys Cys Ala Thr Thr Ala Gly Thr Gly Ala Thr Gly 145 150 155 160 Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Thr Ala Cys Ala Thr Cys Thr Ala 165 170 175 Cys Thr Ala Thr Thr Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Thr Gly Thr Gly 180 185 190 Ala Ala Gly Gly Gly Gly Cys Gly Ala Thr Thr Thr Ala Cys Cys Ala 195 200 205 Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Cys Ala Ala Thr Gly Cys 210 215 220 Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Cys Thr Gly Thr Ala Cys 225 230 235 240 Cys Thr Gly Cys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly Thr Cys 245 250 255 Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys 260 265 270 Gly Gly Cys Cys Thr Thr Gly Thr Ala Thr Ala Thr Thr Thr Gly Thr 275 280 285 Gly Cys Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Thr Thr Thr Gly Gly Thr Ala 290 295 300 Ala Gly Cys Gly Cys Thr Ala Thr Gly Cys Thr Thr Thr Gly Gly Ala 305 310 315 320 Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Ala Ala Gly Gly Ala 325 330 335 Ala Cys Cys Thr Cys Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Thr 340 345 350 Cys Cys Thr Cys Ala 355 <210> 113 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 113 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Ile Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Phe Gly Lys Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr 115 <210> 114 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 114 Gly Ala Cys Ala Thr Thr Gly Thr Gly Ala Thr Gly Ala Cys Cys Cys 1 5 10 15 Ala Gly Thr Cys Thr Cys Ala Cys Ala Ala Ala Thr Thr Cys Ala Thr 20 25 30 Gly Thr Cys Cys Ala Cys Ala Thr Cys Gly Gly Thr Ala Gly Gly Ala 35 40 45 Gly Ala Cys Ala Gly Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys Thr 50 55 60 Cys Cys Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly Cys Cys Ala Gly Thr Cys Ala 65 70 75 80 Gly Gly Ala Thr Gly Thr Gly Ala Cys Thr Cys Cys Thr Gly Cys Thr 85 90 95 Gly Thr Cys Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Ala Cys 100 105 110 Ala Gly Ala Ala Gly Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala Ala Thr Cys 115 120 125 Thr Cys Cys Thr Ala Ala Ala Cys Thr Ala Cys Thr Gly Ala Thr Thr 130 135 140 Thr Ala Cys Thr Cys Cys Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Cys Cys Cys 145 150 155 160 Gly Gly Thr Ala Cys Ala Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Cys Cys Cys 165 170 175 Thr Gly Ala Thr Cys Gly Cys Thr Thr Cys Ala Cys Thr Gly Gly Cys 180 185 190 Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Gly Gly 195 200 205 Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys Thr Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr 210 215 220 Cys Ala Gly Cys Ala Gly Thr Gly Thr Gly Cys Ala Gly Gly Cys Thr 225 230 235 240 Gly Ala Ala Gly Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Thr Thr 245 250 255 Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala Cys Ala 260 265 270 Thr Thr Ala Thr Ala Cys Thr Ala Cys Thr Cys Cys Gly Cys Thr Cys 275 280 285 Ala Cys Gly Thr Thr Cys Gly Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala 290 295 300 Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Cys Thr Gly Ala Ala 305 310 315 320 Ala <210> 115 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 115 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105

Claims (28)

  1. 인간 예정된 사멸-리간드 1 (PD-L1) 단백질의 면역글로불린 C (Ig C) 도메인에 특이적으로 결합할 수 있으며, Ig C 도메인은 아미노산 잔기 133-225로 구성된, 분리된 항체 또는 이것의 단편.
  2. 제1 항에 있어서, PD-L1 단백질의 아미노산 잔기 Y134, K162, 또는 N183 중 적어도 하나에 결합할 수 있는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  3. 제1 항에 있어서, PD-L1 단백질의 아미노산 잔기 Y134, K162, 및 N183에 결합할 수 있는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  4. 제1 항에 있어서, PD-L1 단백질의 면역글로불린 V (Ig V) 도메인에 결합하지 않으며, Ig V 도메인은 아미노산 잔기 19-127으로 구성된 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  5. 인간 PD-L1 단백질에 대하여 특이성을 갖고 다음을 포함하는 분리된 항체 또는 이것의 단편:
    (a) 서열 번호: 1, 또는 서열 번호: 1의 자리 1, 2 또는 5에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 1의 변이체의 VH CDR1;
    (b) 서열 번호: 2, 또는 서열 번호: 2의 자리 7, 8, 14 또는 15에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가지거나 카바트 넘버링(Kabat numbering)에 따라 D52E, G53A 또는 G53V로부터 선택된 치환을 가진 서열 번호: 2의 변이체의 VH CDR2;
    (c) 서열 번호: 3, 또는 서열 번호: 3의 자리 1, 2, 3, 4, 5 또는 6에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 3의 변이체의 VH CDR3;
    (d) 서열 번호: 4, 또는 서열 번호: 4의 자리 3에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 4의 변이체의 VL CDR1;
    (e) 서열 번호: 5, 또는 서열 번호: 5의 자리 1, 2, 3, 4, 5 또는 6에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 5의 변이체의 VL CDR2; 및
    (f) 서열 번호: 6, 또는 서열 번호: 6의 자리 11 또는 2에서 단일 치환, 결실 또는 삽입을 가진 서열 번호: 6의 변이체의 VL CDR3.
  6. 제5 항에 있어서, 서열 번호: 1의 변이체는 서열 번호: 61-67로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  7. 제5 항에 있어서, 서열 번호: 2의 변이체는 D52E, G53A 또는 G53V 로부터 선택된 단일 아미노산 치환을 가지거나 서열 번호: 68-77로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  8. 제5 항에 있어서, 서열 번호: 3의 변이체는 서열 번호: 78-90으로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  9. 제5 항에 있어서, 서열 번호: 4의 변이체는 서열 번호: 91-92로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  10. 제5 항에 있어서, 서열 번호: 5의 변이체는 서열 번호: 93-105로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  11. 제5 항에 있어서, 서열 번호: 6의 변이체는 서열 번호: 106-111로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  12. 제5 항 내지 제11 항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, Fc 영역, 또는 이것들의 조합을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  13. 제5 항 내지 제11 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이것의 단편은 인간화 항체인 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  14. 제13 항에 있어서, 카바트 넘버링에 따라,
    (a) 위치 44에서 Ser,
    (b) 위치 49에서 Ala ,
    (c) 위치 91에서 Ile ,
    (d) 위치 1에서 Glu ,
    (e) 위치 37에서 Val ,
    (f) 위치 40에서 Thr ,
    (g) 위치 77에서 Asn ,
    (h) 위치 94에서 Arg , 및
    (i) 위치 108에서 Thr , 및 이것들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  15. 제13 항에 있어서, 카바트 넘버링에 따라,
    (a) 위치 22에서 Ser ,
    (b) 위치 42에서 Gln ,
    (c) 위치 43에서 Ser ,
    (d) 위치 60에서 Asp , 및
    (e) 위치 63에서 Thr , 및 이것들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 이것의 단편.
  16. 제1 항 내지 제15 항 중 어느 한 항의 단편 및 면역 세포 상의 분자에 대하여 특이성을 갖는 제2 항원-결합 단편을 포함하는, 분리된 이중특이적 항체.
  17. 제16 항에 있어서, 분자는 PD-1, CTLA-4, LAG-3, CD28, CD122, 4-1BB, TIM3, OX-40, OX40L, CD40, CD40L, LIGHT, ICOS, ICOSL, GITR, GITRL, TIGIT, CD27, VISTA, B7H3, B7H4, HEVM, BTLA, KIR, 및 CD47로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 이중특이적 항체.
  18. 제16 항에 있어서, 단편 및 제2 단편은 각각 Fab 단편, 단일 사슬 가변 단편 (scFv), 또는 단일-도메인 항체로부터 독립적으로 선택되는 것을 특징으로 하는 이중특이적 항체.
  19. 제16 항에 있어서, Fc 단편을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 이중특이적 항체.
  20. 제1 항 내지 제19 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이것의 단편을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드.
  21. 제1 항 내지 제19 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이것의 단편을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 분리된 세포.
  22. 치료가 필요한 환자에서 암 또는 감염을 치료하는 방법에 사용하기 위한 조성물로서, 제1 항 내지 제19 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이것의 단편을 포함하는 조성물.
  23. 제22 항에 있어서, 암은 고형 종양인 것을 특징으로 하는 조성물.
  24. 제22 항에 있어서, 암은 방광암, 간암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 백혈병, 림프종, 췌장암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 유방암, 요도암, 두경부암, 위장암, 위암, 식도암, 난소암, 신장암, 흑색종, 전립선암 및 갑상선암으로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 조성물.
  25. 제22 항에 있어서, 제2 암 치료제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  26. 제22 항에 있어서, 감염은 바이러스 감염, 박테리아 감염, 균류 감염 또는 기생충에 의한 감염인 것을 특징으로 하는 조성물.
  27. 샘플에서 PD-L1의 발현을 검출하는 방법으로서, 제1 항 내지 제19 항 중 어느 한 항의 항체 또는 이것의 단편이 PD-L1에 결합하는 조건 하에서 샘플과 상기 항체 또는 이것의 단편을 접촉시키는 단계, 및 샘플에서 PD-L1의 발현을 나타내는 결합을 검출하는 단계를 포함하는 방법.
  28. 제27 항에 있어서, 샘플은 종양 세포, 종양 조직, 감염된 조직, 또는 혈액 샘플을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
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