KR20190046770A - 유제품과 방법 - Google Patents

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제프리 스티븐스
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버트람 인 퐁
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Abstract

본 발명은, 시알릴올리고당 및 탄수화물과 미네랄을 또한 함유하는 시알릴올리고당 함유 공급원을 제조하는 방법에 관한 것이다. 이 방법은, 공급원이 약 67℃의 온도를 거치게 하는 단계와 (i) 약 35 내지 95℃의 온도에서 내열성 필터로 여과 단계를 거치게 하여 제1 농축액(retentate)과 제1 투과액(permeate)을 생성하거나, 또는 (ii) 원심 분리를 거치게 하여 경량 상과 중량 상을 생성하고, 약 50 내지 70℃의 온도에서 경량 상을 여과시켜 제1 농축액과 제1 투과액을 생성하는, 단계, (b) 제1 투과액을 나노여과, 또는 제1 투과액을 나노여과와 투석여과를 거치게 하여, 제2 농축액과 제2 투과액을 생성하는 단계, 및 (c) 제2 농축액을 농축시켜, 시알릴올리고당 함유 추출물을 생성하는 단계를 포함한다. 또한, 본 발명은, 적어도 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하는 시알릴올리고당 강화 조성물과, 예를 들어, 영양 및 유아용 조제분유에서, 그리고 인지 기능을 유지하거나 향상시키기 위해 이를 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

유제품과 방법
본 발명은, 시알릴올리고당(sialyloligosaccharides), 시알릴올리고당 강화 조성물을 수득하는 방법 및 뇌 기능 또는 발달을 유지하거나 증가시키기 위해 시알릴올리고당을 사용하는 방법에 관한 것이다.
포유동물 우유의 조성은 영아 또는 아동의 정상적인 성장과 발육을 지원하기 위해 특별히 겨냥되었다(International Code of Marketing Breastmilk Substitutes, World Health Organisation, Geneva, 1981).
산모용 조제분유, 유아용 조제분유, 후속 조제분유, 성장용 조제분유, 식이 제품 및 기타 유제품 함유 조성물은 일반적으로 인간 이외의 우유를 사용하여 생산된다. 그러나, 모유의 영양 조성은 인간 이외의 우유의 영양 조성과 일부 점에서 차이가 있다. 암소, 염소 또는 양 우유와 같은 인간 이외의 전유(whole milk)는 모유의 영양 조성에 우유 올리고당의 매우 다른 보완물을 함유한다.
최적의 인지 발달과 성장은 유아 및 아동 발달의 핵심 부분이다. 분명히, 손상된 인지 발달은 삶의 질에 상당한 영향을 미칠 것이다. 또한, 제한된 성장은 장기적인 건강에 해로운 영향을 미치는 것으로 나타났다. 따라서, 인지 발달을 증가시키거나 건강한 성장을 유지하는 것으로 나타난 임의의 약품(agent)은 유아 및 아동에게 폭넓은 이익을 가질 것이다(Bryan et al., (2004). Nutrients for cognitive development in school-aged children. Nutr Rev 62: 295-306).
인지 저하는 감소된 학습 능력, 기억력 및 주의력이 노령자 가운데 널리 퍼져 있는 것을 특징으로 한다. 인식 저하를 예방하거나 또는 지연시키는 임의의 약품은 노령자의 삶의 질에 광범위한 이익을 가질 것이다.
본 발명의 목적은, 시알릴올리고당, 시알릴올리고당 강화 조성물을 수득하는 방법 및 뇌 기능 또는 발달을 유지하거나 증가시키기 위해 시알릴올리고당을 사용하는 방법을 제공하거나, 또는 적어도 대중에게 유용한 선택을 제공하는 것이다.
제1 양상에서, 본 발명은, 액체 공급원이 다음을 포함하는 공정을 거치게 함으로써 시알릴올리고당, 탄수화물 및 미네랄을 포함하는 액체 공급원으로부터 시알릴올리고당을 제조하는 방법을 제공한다:
a) 액체 공급원을 약 67℃의 온도로 가열하는 단계,
b) 열처리된 액체 공급원을
(i) 약 35 내지 약 95℃의 온도에서 내열성 필터로 여과 단계를 거치게 하여 제1 농축액(retentate)과 제1 투과액(permeate)을 생성하거나, 또는
(ii) 원심 분리를 거치게 하여 경량 상(light phase)과 중량 상(heavy phase)을 생성하고, 약 35 내지 약 95℃의 온도에서 내열성 필터로 경량 상을 여과시켜 제1 농축액과 제1 투과액을 생성하는, 단계,
c) 제1 투과액을 나노여과, 또는 나노여과와 투석여과를 거치게 하여, 제2 농축액과 제2 투과액을 생성하는 단계, 및
d) 제2 농축액을 농축시켜, 시알릴올리고당 함유 추출물을 생성하는 단계.
추가 양상에서, 본 발명은, 건조 고형물 기준으로 다음을 포함하는 시알릴올리고당 강화 조성물에 관한 것이다:
● 다음을 포함하는 적어도 약 5 중량%의 총 시알릴올리고당:
○ 총 시알릴올리고당 중 적어도 약 5 중량%의 3'-시알릴락토오스,
○ 총 시알릴올리고당 중 적어도 약 2 중량%의 6'-시알릴락토오스,
○ 총 시알릴올리고당 중 적어도 약 0.01 중량%의 디시알릴락토오스,
○ 총 시알릴올리고당 중 적어도 약 0.01 중량%의 시알릴락토사민,
● 적어도 약 0.5 중량%의 유리 시알산,
● 적어도 약 0.2 중량%의 중성 올리고당,
● 약 25 중량% 미만의 단백질 및 비단백질 질소,
● 시알릴락토오스를 포함하지 않는 약 80 중량% 미만의 당, 및
● 약 5 중량% 미만의 회분(ash).
추가 양상에서, 본 발명은, 약 10:1:0.5 내지 약 1.5:1:0.03 3'-시알릴락토오스 대 6'-시알릴락토오스의 비로 3'-시알릴락토오스, 6'-시알릴락토오스 및 시알릴락토사민을 포함하는, 6개월 미만 연령의 유아에게 영양을 제공하기 위한 조성물에 관한 것이다.
추가 양상에서, 본 발명은, 약 10:1:0.5 내지 약 1.5:1:0.03 3'-시알릴락토오스 대 6'-시알릴락토오스의 비로 3'-시알릴락토오스, 6'-시알릴락토오스 및 시알릴락토사민을 포함하는, 약 6개월 내지 약 12개월 연령의 유아에게 영양을 제공하기 위한 조성물에 관한 것이다.
추가 양상에서, 본 발명은, 약 10:1:0.5 내지 약 1.5:1:0.03 3'-시알릴락토오스 대 6'-시알릴락토오스의 비로 3'-시알릴락토오스, 6'-시알릴락토오스 및 시알릴락토사민을 포함하는, 12개월 이상 연령의 유아에게 영양을 제공하기 위한 조성물에 관한 것이다.
추가 양상에서, 본 발명은, 연령 관련 인지 저하 중 임의의 하나 이상과 관련된 경증 인지 손상, 또는 알츠하이머 병, 혈관 질병, 전측두엽 변성(FTLD), 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅턴병, 조현병과 관련된 인지 손상, 화학 요법으로 유발된 신경병증, 다운 증후군, 코르사코프 병(Korsakoff's disease), 뇌성 마비, 간질, 신경성 허혈, 신경성 재관류 손상, 신경 외상, 신경성 출혈, 신경 감염, 뇌졸중, 독성 물질에 대한 신경 세포의 노출, 연령 관련 정신 장애, 불안 장애, 연령 관련 우울증, 미세 혈관 장애(당뇨병, 저혈압, 뇌졸중 유발성 혈관성 치매, 및 비만증과 같은)와 관련된 치매, 면역계의 장애와 관련된 치매, 중추 신경계(CNS) 장애와 관련된 치매, 저혈압과 관련된 치매, 비만 또는 혈관성 치매와 관련된 치매 중 임의의 하나 이상과 관련된 인지 손상을 치료하는, 유효량의 시알릴올리고당 함유 추출물을 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, "치료하는"은, 예방, 지연 또는 개선하는 것을 포함한다.
다음의 실시예들 중 임의의 하나 이상은 본원에 기술된 양상들 중 임의의 것 또는 이들의 임의의 조합에 관한 것일 수 있다.
바람직하게는, 액체 공급원은 둘 이상의 시알릴올리고당 함유 스트림(stream)의 조합물을 포함한다.
바람직하게는, 액체 공급원은 락토오스 결정화의 부산물, 유제품 투과액, 유장(whey), 유장 투과액, 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 조합물로서 모액을 포함한다.
바람직하게는, 열 처리는 약 67 내지 약 100℃의 온도에서 실행된다.
바람직하게는, 액체 공급원의 열 처리는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20분 동안 실행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
바람직하게는, 액체 공급원의 열 처리는 액체 공급원에 존재하는 미네랄 중 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10%를 침전시키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
바람직하게는, 제1 투과액은, 액체 공급원 내의 미네랄 중 약 96% 미만, 및/또는 액체 공급원 내의 단백질 중 약 20% 미만을 포함한다.
바람직하게는, 제1 농축액은, 액체 공급원 내의 미네랄 중 적어도 약 3%, 및/또는 액체 공급원 내의 단백질 중 적어도 약 80%를 포함한다.
바람직하게는, 여과 단계는 액체 공급원과 비교해서, 제1 투과액 내의 불용성 미네랄과 단백질의 양의 감소를 일으킨다.
바람직하게는, (b)(i)의 여과 단계는 약 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 또는 90℃에서 실행되어 제1 농축액과 제1 투과액을 생성하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
바람직하게는, (b)(i)의 내열성 필터는 세라믹 필터이다.
바람직하게는, (b)(ii)의 여과 단계는 약 55, 60, 65, 또는 약 70℃에서 실행되어 제1 농축액과 제1 투과액을 생성하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
바람직하게는, (b)(ii)의 여과 단계는 내열성 필터를 사용하여 실행된다.
바람직하게는, (b)(ii)의 내열성 필터는 세라믹 필터이다.
바람직하게는, 열 처리된 액체 공급원은 세라믹 필터로 한외여과(ultrafiltration)를 거친다.
바람직하게는, 세라믹 한외여과는 약 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 또는 90℃의 온도에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다. 바람직하게는, 세라믹 한외여과는 약 60℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행된다.
바람직하게는, 적어도 하나의 글리코시드 가수분해효소(hydrolase) 또는 폴리메라아제(polymerase) 효소 반응.
바람직하게는,
a) 제1 투과액,
b) 경량 상,
c) 농축된 제2 농축액, 또는
d) (a) 내지 (c) 중 임의의 둘 이상의 조합물이
효소 반응을 거친다.
바람직하게는, 효소 반응은,
a) 공급원 내의 적어도 하나의 이당류의 분자 크기를 증가시켜 적어도 하나의 올리고당을 생성하거나, 또는
b) 공급원 내의 적어도 하나의 이당류의 분자 크기를 감소시켜 하나 이상의 단당류를 생성한다.
바람직하게는, 효소는 β-갈락토시다아제(galactosidase)를 포함한다.
바람직하게는, 이당류는 락토오스를 포함한다.
바람직하게는, 단당류는 갈락토오스 또는 글루코오스를 포함한다.
바람직하게는, 올리고당은 하나 이상의 갈락토올리고당을 포함한다.
바람직하게는, 경량 상의 여과는 한외여과이다.
바람직하게는, 한외여과는 약 50, 55, 60, 65 또는 70℃의 온도에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다. 바람직하게는, 한외여과는 약 55℃ 내지 약 65℃의 온도에서 수행된다.
바람직하게는, 나노여과는 약 25, 30, 35, 40, 45, 50 또는 55℃의 온도에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다. 바람직하게는, 한외여과는 약 50℃의 온도에서 수행된다.
바람직하게는, 제2 투과액은 가용성 미네랄과 적어도 하나의 단당류 또는 이당류를 포함한다.
바람직하게는, 제2 농축액은,
제1 투과액 내의 미네랄의 약 70% 미만, 또는
제1 투과액 내의 비-시알릴올리고당 당류의 약 50% 미만을 포함한다.
바람직하게는, 제2 농축액은,
● 적어도 약 7 중량%의 시알릴올리고당,
● 적어도 약 0.2 중량%의 중성 올리고당,
● 약 5 중량% 미만의 단백질 및 비단백질 질소,
● 약 80 중량% 미만의 비-시알릴올리고당 당류, 및
● 약 5 중량% 미만의 회분을 포함한다.
바람직하게는, 제2 투과액은,
제1 투과액 내의 미네랄의 적어도 약 30%, 또는
제1 투과액 내의 비-시알릴올리고당 당류의 적어도 약 50%를 포함한다.
바람직하게는, 제2 농축액은 나노여과 또는 역삼투 중 어느 하나를 거쳐서 제3 농축액을 생성한다.
바람직하게는, 농축된 제2 농축액, 또는 제3 농축액은 탈색을 거친다.
바람직하게는, 이 방법은,
시알릴올리고당 함유 추출물을 결정화하여 결정화된 시알릴올리고당 함유 추출물을 제조하는 단계, 및
시알릴올리고당 함유 추출물 또는 결정화된 시알릴올리고당 함유 추출물을 건조시켜 건조된 시알릴올리고당 함유 추출물을 제조하는 단계를 포함한다.
바람직하게는, 시알릴올리고당 함유 추출물은 약 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 중량% 미만의 단백질 및 비단백질 질소를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
바람직하게는, 시알릴올리고당 함유 추출물은 약 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 중량% 미만의 회분을 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
바람직하게는, 시알릴올리고당 함유 추출물은, 건조 고형물 기준으로,
● 적어도 약 7 중량%의 시알릴올리고당,
● 적어도 약 0.2 중량%의 중성 올리고당,
● 약 5 중량% 미만의 단백질 및 비단백질 질소,
● 약 80 중량% 미만의 비-시알릴올리고당 당류, 및
● 약 5 중량% 미만의 회분을 포함한다.
바람직하게는, 시알릴올리고당 함유 추출물은, 건조 고형물 기준으로,
● 적어도 약 5 중량%의 3'-시알릴락토오스, 및
● 적어도 약 2 중량%의 6'-시알릴락토오스를 포함한다.
추가 양상에서, 본 발명은 상기 기술된 방법 중 어느 하나에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물에 관한 것이다.
바람직하게는, 조성물은, 건조 고형물 기준으로, 6'-시알릴락토오스의 양에 비해 더 많은 양의 3'-시알릴락토오스를 포함한다.
바람직하게는, 조성물은, 약 65:1 내지 약 1.5:1, 약 15:1 내지 약 1.5:1, 또는 약 8:1 내지 약 1.5:1의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
추가 양상에서, 본 발명은, 상기 기술된 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물을 포함하는 영양 제제에 관한 것이거나, 또는 상기 기술된 시알릴올리고당 강화 조성물을 포함한다.
바람직하게는, 영양 제제는 유아용 조제분유, 후속 조제분유, 성장용 조제분유, 소아용 조제분유, 모유 강화제, 아동의 식품 또는 음료, 산모용 보충제, 산모용 영양 제제, 발효 식품, UHT 우유, UHT 드링킹 요구르트, 산성화된 우유 음료, UHT 분말, 의약품, 스포츠 영양 제제, 또는 노령 또는 고령 인구를 위한 제제이다.
바람직하게는, 영양 제제는 하나 이상의 유제품 지질, 하나 이상의 갈락토올리고당, 하나 이상의 프로바이오틱스 균주, 하나 이상의 단백질 가수분해물, 락토페린, 유지방 구상 막(MFGM) 제제, 다른 프리바이오틱스, 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 조합물을 포함한다.
바람직하게는, 유제품 지질의 영양 제제는 버터밀크, 고지방 유장 단백질 농축액, 베타-세럼, 버터 세럼, 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 조합물을 포함한다.
바람직하게는, 프로바이오틱 균주는 비피도박테륨 락티스 또는 락토바실러스 람노서스 균주, 또는 비피도박테륨 락티스와 락토바실러스 람노서스의 조합물을 포함한다.
바람직하게는, 비피도박테륨 락티스 균주는 비피도박테륨 락티스 HN019(DR10™)를 포함한다.
바람직하게는, 락토바실러스 람노서스 균주는 락토바실러스 람노서스 HN001(DR20™)을 포함한다.
추가 양상에서, 본 발명은, 뇌 기능 또는 뇌 발달을 유지하거나 증가시키는 방법에 관한 것으로, 이 방법은, (i) 상기 기술된 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물, 또는 (ii) 상기 기술된 영양 제제의 유효량을, 정상적인 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다.
바람직하게는, 시알릴올리고당 함유 추출물은,
a) 시알산의 하나 이상의 구조적인 글리코컨쥬게이트,
b) 유리 시알산, 또는
c) (a)와 (b) 모두를 포함한다.
바람직하게는, 추출물, 조성물 또는 영양 제제는,
a) 지연된 뇌 발달을 예방하고,
b) 신경 세포의 생존력 또는 기능을 유지하며,
c) 인지 발달을 유지하거나 증가시키고,
d) 지연된 인지 발달을 예방하며,
e) 인지 수행을 유지하거나 증가시키고,
f) 인지 저하를 예방하며,
g) 학습, 기억 또는 주의 지속시간을 유지하거나 증가시키고,
h) 학습 능력, 기억 또는 주의 지속시간의 저하를 예방하며,
i) 스트레스에 대처하는 능력을 유지하거나 증가시키고,
j) 신경 세포 부착 분자(NCAM)의 수준을 유지하거나 증가시키며,
k) 뇌 기능의 저하를 예방하고,
l) 뇌에서 강글리오시드의 수준을 유지하거나 증가시키며,
m) 뇌에 대한 혈액, 영양소 또는 산소 흐름을 유지하거나 증가시키고,
n) 스냅스생성(synaptogenesis)을 유지하거나 증가시키며,
o) 소화관/뇌 축의 활동을 유지하거나 증가시키고,
p) 구뇌(old brain)에서 신경발생을 유지하거나 증가시키며,
q) 백질 부피(white matter volume)를 유지하거나 증가시키고, 또는
r) a) 내지 q) 중 임의의 둘 이상의 조합을 위해 투여된다.
바람직하게는, 피험자는 태아, 유아 또는 아동 피험자이다.
바람직하게는, 추출물, 조성물 또는 영양 제제는 태아 피험자에서 뇌 기능 또는 발달을 유지하거나 증가시키기 위해 임신 중에 산모에게 투여된다.
바람직하게는, 추출물, 조성물 또는 영양 제제는 유아 피험자에서 뇌 기능 또는 발달을 유지하거나 증가시키기 위해 모유 수유모에게 투여된다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 글리세로포스포릴콜린(GPC)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 글루타민(Glu)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 미오 이노시톨(Ins)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 Lip09의 감소를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 거대분자(MM)의 감소를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 N-아세틸아스파틸글루탐산(NAAG)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 글루타메이트-글루타민 복합체(Glx)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
추가 양상에서, 본 발명은, 연령 관련 인지 저하, 치매, 알츠하이머 병, 혈관 질병, 전측두엽 변성(FTLD), 루이소체 치매(Dementia with Lewy bodies), 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅턴병, 조현병과 관련된 인지 손상, 화학 요법으로 유발된 신경병증, 다운 증후군, 코르사코프 병, 뇌성 마비, 간질, 신경성 허혈, 신경성 재관류 손상, 신경 외상, 신경성 출혈, 신경 감염, 뇌졸중, 독성 물질에 대한 신경 세포의 노출, 연령 관련 정신 장애, 불안 장애, 연령 관련 우울증, 미세 혈관 장애(당뇨병, 저혈압, 뇌졸중 유발성 혈관성 치매, 및 비만증과 같은)와 관련된 치매, 면역계의 장애와 관련된 치매, 중추 신경계(CNS) 장애와 관련된 치매, 저혈압과 관련된 치매, 비만 또는 혈관성 치매와 관련된 치매 중 임의의 하나 이상과 관련된 경증 인지 손상을 치료하는, 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물, 제33항 내지 제36항 또는 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항의 추출물 또는 조성물, 또는 제37항 내지 제43항 중 어느 한 항의 영향 제제의 유효량을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
추가 양상에서, 본 발명은, 연령 관련 인지 저하, 치매, 알츠하이머 병, 혈관 질병, 전측두엽 변성(FTLD), 루이소체 치매, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅턴병, 조현병과 관련된 인지 손상, 화학 요법으로 유발된 신경병증, 다운 증후군, 코르사코프 병, 뇌성 마비, 간질, 신경성 허혈, 신경성 재관류 손상, 신경 외상, 신경성 출혈, 신경 감염, 뇌졸중, 독성 물질에 대한 신경 세포의 노출, 연령 관련 정신 장애, 불안 장애, 연령 관련 우울증, 미세 혈관 장애(당뇨병, 저혈압, 뇌졸중 유발성 혈관성 치매, 및 비만증과 같은)와 관련된 치매, 면역계의 장애와 관련된 치매, 중추 신경계(CNS) 장애와 관련된 치매, 저혈압과 관련된 치매, 비만 또는 혈관성 치매와 관련된 치매 중 임의의 하나 이상과 관련된 경증 인지 손상을 치료하기 위한, 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물, 제33항 내지 제38항 또는 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항의 조성물, 또는 제37항 내지 제43항 중 어느 한 항의 영향 제제에 관한 것이다.
추가 양상에서, 본 발명은, 연령 관련 인지 저하, 치매, 알츠하이머 병, 혈관 질병, 전측두엽 변성(FTLD), 루이소체 치매, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅턴병, 조현병과 관련된 인지 손상, 화학 요법으로 유발된 신경병증, 다운 증후군, 코르사코프 병, 뇌성 마비, 간질, 신경성 허혈, 신경성 재관류 손상, 신경 외상, 신경성 출혈, 신경 감염, 뇌졸중, 독성 물질에 대한 신경 세포의 노출, 연령 관련 정신 장애, 불안 장애, 연령 관련 우울증, 미세 혈관 장애(당뇨병, 저혈압, 뇌졸중 유발성 혈관성 치매, 및 비만증과 같은)와 관련된 치매, 면역계의 장애와 관련된 치매, 중추 신경계(CNS) 장애와 관련된 치매, 저혈압과 관련된 치매, 비만 또는 혈관성 치매와 관련된 치매 중 임의의 하나 이상과 관련된 경증 인지 손상을 치료하기 위한 제제의 제조에, 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물, 또는 제33항 내지 제36항 또는 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항의 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
본원에 개시된 수의 범위(예를 들어, 1 내지 10)에 대한 참조는, 그 범위 내의 모든 유리수(예를 들어, 1, 1.1, 2, 3, 3.9, 4, 5, 6, 6.5, 7, 8, 9 및 10)와 또한 그 범위 내의 유리수의 임의의 범위(예를 들어, 2 내지 8, 1.5 내지 5.5 및 3.1 내지 4.7)에 대한 참조를 또한 포함하는 것으로 의도된다.
본 발명은 또한 개별적으로 또는 전체적으로 본 출원의 명세서에서 언급되거나 표시된 부분, 요소, 및 특징과, 상기 부분, 요소 또는 특징 중 임의의 둘 이상의 임의의 또는 모든 조합으로 이루어지는 것으로 넓게 언급될 수 있고, 본 발명이 관련된 이 기술분야에서 공지된 등가물을 갖는 특정한 정수가 본원에 언급된 경우, 이러한 공지된 등가물은 개별적으로 기술된 것처럼 본원에 포함되는 것으로 간주된다.
본 명세서에서, 특허 명세서와 기타 문서를 포함하는 외부 정보 소스가 언급된 경우, 이는 일반적으로 본 발명의 특징을 논의하기 위한 맥락을 제공할 목적을 위해서이다. 달리 기재되지 않는 한, 이러한 정보 소스에 대한 언급은, 어떠한 사법권에서도, 이러한 정보 소스가 선행 기술이거나 또는 이 기술분야에서 일반적인 지식의 일부를 형성한다는 허가로서 해석되지 않아야 한다.
본 명세서에서 사용된 "포함하는"이라는 용어는, "적어도 부분적으로 구성되는"을 의미한다. 이 용어를 포함하는 본 명세서의 문장을 해석할 때, 각 문장에서 이 용어 앞에 붙는 특징은 모두 존재할 필요가 있지만 다른 특징도 또한 존재할 수 있다. "포함하다"와 "포함된"과 같은 관련 용어는 같은 방식으로 해석되어야 한다.
본 발명은 이제 단지 예로서 다음의 도면을 참조하여 설명될 것이다:
도 1은 시알릴올리고당 함유 추출물을 제조하는 방법의 공정 흐름도를 도시한다.
도 2는 8-아암 방사형 미로(8-arm radial maze)를 사용하여 3시간 "용이한" 작업을 사용하는 판별 검사의 결과를 보고하는 그래프를 도시한다.
도 3은 8-아암 방사형 미로를 사용하여 3시간 "더 어려운" 작업을 사용하는 판별 검사의 결과를 보고하는 그래프를 도시한다.
도 4는 네 번의 연속 시도 내에서 최대 한 번의 실수의 학습 기준을 사용하는 난이도 작업에 대한 학습 능력 결과를 보고하는 그래프를 도시한다.
도 5는 대조군과 비교하여 두 치료 군에서 전두 피질에서 폴리시아 발현(PolySia expression)을 보고하는 그래프를 도시한다.
본 발명은 유아용 조제분유를 포함하는 영양 제제에 사용하기 위한 시알릴올리고당 강화 추출물을 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 시알릴올리고당 강화 조성물, 이러한 조성물을 포함하는 영양 제제, 및 조성물과 영양 제제의 사용 방법을 또한 제공한다.
본 발명의 조성물과 방법의 다양한 실시예는 불순물이 적은 고농도 시알릴올리고당 조성물의 제조를 포함하지만 이에 제한되지 않는 많은 이점을 갖는다.
1. 소스 재료
본 발명에서 사용하기 위한 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 포유동물의 우유로부터 얻어진다. 시알릴올리고당을 함유한다면 임의의 분획 또는 우유 유도체가 본 발명에서 사용될 수 있는 것으로 이해해야 한다.
일부 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 소, 양, 염소, 돼지, 쥐, 물소, 낙타, 야크, 말, 당나귀, 라마 또는 모유 지방을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 포유동물 우유로부터 유도되고, 소의 우유가 바람직한 공급원이다.
일부 실시예에서, 포유동물 우유 공급원은 본 발명의 공정에서 사용되기 전에 적어도 단백질과 지방을 제거하기 위해 가공처리된다.
예로서, 시알릴올리고당 함유 공급원은 치즈 제조 또는 카제인 제조와 같이 투과액을 생성하는 상류 우유 공정으로부터 생성될 수 있다. 상류 공정의 예는, 치즈 유장, 레닛 (스위트) 유장의 생산, 또는 탈지유 또는 원유의 한외여과를 포함한다. 유장 단백질의 한외여과 후, 단백질은 유장 농축액에 유지되고 유장 투과액은 시알릴올리고당, 락토오스 및 미네랄이 한외여과 막을 통과하기 때문에 시알릴올리고당, 락토오스 및 미네랄을 함유한다.
그 다음에, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원(예를 들어, 상류 유제품 가공으로부터의 투과액)은 하나 이상의 여과 단계에 의해 가공처리될 수 있고, 하나 이상의 농축 단계를 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 전유, 재조합, 분말 또는 신선한 탈지유, 재조합 또는 재구성된 전유 또는 탈지유 분말, 탈지유 농축물, 탈지유 농축액, 농축 우유, 한외여과된 우유 농축액, 초유, 유장(스위트 유장, 락트산 유장, 미네랄 유장, 재구성된 유장 분말 또는 탈단백 유장을 포함), 임의의 우유 가공 흐름으로부터 유도된 조성물, 임의의 우유 가공 흐름의 한외여과 또는 미세여과에 의해 얻어진 투과액로부터 유도된 조성물, 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 조합물을 포함한다.
일 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 하나 이상의 여과 단계 및/또는 농축 단계에 의해 처리되는 상류 유제품 가공처리로부터의 투과액을 포함한다. 일 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 락토오스 결정화의 부산물로 생성된 모액을 포함한다. 락토오스 결정화 후에, 결정화된 락토오스는 남아있는 용액으로부터 분리된다. 남아있는 용액, 모액(탈락토오스 투과액 또는 Delac으로도 알려진)은 락토오스, 시알릴올리고당 및 미네랄을 포함한다.
일 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 하나 이상의 시알릴올리고당 함유 스트림을 포함한다.
다양한 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 락토오스 결정화(탈락토오스 투과액)의 모액, 유제품 투과액, 유장, 유장 투과액, 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 조합물을 포함한다.
다양한 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 적어도 약 0.2, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10 또는 12 중량%의 시알릴올리고당을 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 0.2 내지 약 12, 약 0.2 내지 약 8, 약 0.2 내지 약 6, 약 0.2 내지 약 4, 약 0.5 내지 약 12, 약 0.5 내지 약 10, 약 0.5 내지 약 6, 약 0.5 내지 약 2, 약 1 내지 약 12, 약 1 내지 약 10, 약 1 내지 약 4, 약 2 내지 약 12, 약 2 내지 약 8, 약 2 내지 약 6, 약 4 내지 약 12, 약 4 내지 약 10, 약 4 내지 약 6, 약 6 내지 약 12, 약 6 내지 약 10 또는 약 8 내지 약 12 중량%의 시알릴올리고당).
다양한 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 약 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.25, 0.3, 0.4, 0.5, 0.75, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 2 또는 2.25 중량% 미만의 단백질과 비단백질 질소를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다(예를 들어, 약 0.01 내지 약 2.25, 약 0.01 내지 약 1.5, 약 0.01 내지 약 1.25, 약 0.01 내지 약 0.5, 약 0.01 내지 약 0.3, 약 0.01 내지 약 0.2, 약 0.05 내지 약 2.25, 약 0.05 내지 약 2, 약 0.05 내지 약 1.5, 약 0.05 내지 약 0.75, 약 0.05 내지 약 0.4, 약 0.05 내지 약 0.25, 약 0.1 내지 약 2.25, 약 0.1 내지 약 1.75, 약 0.1 내지 약 1.25, 약 0.1 내지 약 0.75, 약 0.1 내지 약 0.5, 약 0.2 내지 약 2.25, 약 0.2 내지 약 2, 약 0.2 내지 약 0.75, 약 0.2 내지 약 0.5, 약 0.25 내지 약 2.25, 약 0.25 내지 약 2, 약 0.25 내지 약 1.5, 약 0.25 내지 약 1.25, 약 0.25 내지 약 1, 약 0.25 내지 약 0.75, 약 0.3 내지 약 2.25, 약 0.3 내지 약 2, 약 0.3 내지 약 1.5, 약 0.3 내지 약 1, 약 0.3 내지 약 0.75, 약 0.4 내지 약 2.25, 약 0.4 내지 약 2, 약 0.4 내지 약 1, 약 0.4 내지 약 0.75, 약 0.5 내지 약 2.25, 약 0.5 내지 약 2, 약 0.5 내지 약 1.75, 약 0.5 내지 약 1, 약 0.75 내지 약 2.25, 약 0.75 내지 약 2, 약 0.75 내지 약 1.5, 약 1 내지 약 2.25, 약 1 내지 약 1.75, 약 1 내지 1.5, 약 1.25 내지 약 2.25, 약 1.25 내지 약 1.75, 약 1.25 내지 약 1.5, 약 1.5 내지 약 2.25, 약 1.5 내지 약 2, 또는 약 1.75 내지 약 2.25 중량%의 단백질).
다양한 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 약 10, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 또는 적어도 약 75 중량% 미만의 비-시알릴올리고당 당류를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 10 내지 약 75, 약 10 내지 약 70, 약 10 내지 약 65, 약 10 내지 약 60, 약 20 내지 약 75, 약 20 내지 약 70, 약 20 내지 약 65, 약 20 내지 약 60, 약 30 내지 약 75, 약 30 내지 약 70, 약 30 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 40 내지 약 75, 약 40 내지 약 70, 약 40 내지 약 65, 또는 약 40 내지 약 60 중량%의 비-시알릴올리고당 당류).
다양한 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 약 65:1, 50:1, 40:1, 30:1, 25:1, 20:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1.5:1 또는 1.5:1의 비의 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 65:1 내지 약 1.5:1, 약 65:1 내지 약 1.5:1, 약 65:1 내지 약 3:1, 약 65:1 내지 약 7:1, 약 65:1 내지 약 9:1, 약 65:1 내지 약 13:1, 약 65:1 내지 약 15:1, 약 65:1 내지 약 20:1, 약 50:1 내지 약 1.5:1, 약 50:1 내지 약 1.5:1, 약 50:1 내지 약 3:1, 약 50:1 내지 약 7:1, 약 50:1 내지 약 9:1, 약 50:1 내지 약 13:1, 약 50:1 내지 약 15:1, 약 50:1 내지 약 20:1, 약 40:1 내지 약 1.5:1, 약 40:1 내지 약 1.5:1, 약 40:1 내지 약 3:1, 40:1 내지 약 7:1, 약 40:1 내지 약 9:1, 약 40:1 내지 약 13:1, 약 40:1 내지 약 15:1, 약 40:1 내지 약 20:1, 약 30:1 내지 약 1.5:1, 약 30:1 내지 약 1.5:1, 약 30:1 내지 약 3:1, 약 30:1 내지 약 7:1, 약 30:1 내지 약 9:1, 약 30:1 내지 약 13:1, 약 30:1 내지 약 15:1, 약 30:1 내지 약 20:1, 약 25:1 내지 약 1.5:1, 약 25:1 내지 약 1.5:1, 약 25:1 내지 약 4:1, 약 25:1 내지 약 8:1, 약 25:1 내지 약 10:1, 약 25:1 내지 약 12:1, 약 25:1 내지 약 14:1, 약 25:1 내지 약 20:1, 약 20:1 내지 약 1.5:1, 약 20:1 내지 약 1.5:1, 약 20:1 내지 약 3:1, 약 20:1 내지 약 8:1, 약 20:1 내지 약 11:1, 20:1 내지 약 15:1, 15:1 내지 약 1.5:1, 약 15:1 내지 약 1.5:1, 약 15:1 내지 약 2:1, 약 12:1 내지 약 1.5:1, 약 12:1 내지 약 1.5:1, 약 12:1 내지 약 2:1, 약 10:1 내지 약 1.5:1, 약 10:1 내지 약 1.5:1, 약 10:1 내지 약 2:1, 약 8:1 내지 약 1.5:1, 약 8:1 내지 약 1.5:1, 약 18:1 내지 약 2:1, 약 7:1 내지 약 1.5:1, 약 7:1 내지 약 1.5:1, 약 7:1 내지 약 2:1, 약 6:1 내지 약 1.5:1, 약 6:1 내지 약 1.5:1, 약 6:1 내지 약 2:1, 약 5:1 내지 약 1.5:1, 약 15:1 내지 약 1:1, 약 12:1 내지 약 1:1, 약 10:1 내지 약 1:1, 약 8:1 내지 약 1:1, 약 7:1 내지 약 1:1, 약 6:1 내지 약 1:1, 약 5:1 내지 약 1:1, 약 15:1 내지 약 2:1, 약 12:1 내지 약 2:1, 약 10:1 내지 약 2:1, 약 8:1 내지 약 2:1, 약 7:1 내지 약 2:1, 약 6:1 내지 약 2:1, 약 5:1 내지 약 2:1, 약 15:1 내지 약 3:1, 약 12:1 내지 약 3:1, 약 10:1 내지 약 3:1, 약 8:1 내지 약 3:1, 약 7:1 내지 약 3:1, 약 6:1 내지 약 3:1, 또는 약 5:1 내지 약 3:1).
이들 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원이 모액이면 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스의 비는 약 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1.5:1 또는 1.5:1이고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 15:1 내지 약 1.5:1, 약 12:1 내지 약 1.5:1, 약 10:1 내지 약 1.5:1, 약 8:1 내지 약 1.5:1, 약 7:1 내지 약 1.5:1, 약 6:1 내지 약 1.5:1, 약 5:1 내지 약 1.5:1, 약 15:1 내지 약 1:1, 약 12:1 내지 약 1:1, 약 10:1 내지 약 1:1, 약 8:1 내지 약 1:1, 약 7:1 내지 약 1:1, 약 6:1 내지 약 1:1, 약 5:1 내지 약 1:1, 약 15:1 내지 약 2:1, 약 12:1 내지 약 2:1, 약 10:1 내지 약 2:1, 약 8:1 내지 약 2:1, 약 7:1 내지 약 2:1, 약 6:1 내지 약 2:1, 약 5:1 내지 약 2:1, 약 15:1 내지 약 3:1, 약 12:1 내지 약 3:1, 약 10:1 내지 약 3:1, 약 8:1 내지 약 3:1, 약 7:1 내지 약 3:1, 약 6:1 내지 약 3:1, 또는 약 5:1 내지 약 3:1).
2. 불용성 미네랄과 단백질의 제거
방법의 제1 단계는 시알릴올리고당 함유 공급원으로부터 적어도 불용성 미네랄과 단백질을 제거한다. 일부 실시예에서, 제1 단계는 또한 시알릴올리고당 함유 공급원으로부터 지방을 제거한다.
일 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 적어도 약 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 또는 적어도 약 75℃의 온도로 가열되어, 공급원의 미네랄을 침전시킨다. 온도는 증기 또는 물, 또는 증기와 물 모두를 주입하여 이 단계 동안 제어될 수 있다.
일부 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 적어도 약 30, 60 또는 90초, 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10분의 기간 동안 가열된다. 바람직하게는, 가열 단계는 약 5분 동안 수행된다.
일부 실시예에서, 액체 공급원의 열 처리는 액체 공급원에 존재하는 미네랄의 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10%를 침전시키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 2 내지 약 10, 약 2 내지 약 8, 약 2 내지 약 6, 약 3 내지 약 10, 약 3 내지 약 9, 약 3 내지 약 8, 약 3 내지 약 6, 약 4 내지 약 10, 약 4 내지 약 8, 약 4 내지 약 6%).
다양한 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 액체 공급원은 공급원으로부터 불용성 미네랄을 제거하기 위해 탈염 단계를 거친다.
일 실시예에서, 가열에 의해 생성된 임의의 침전된 미네랄을 포함하는 불용성 미네랄은 원심 분리에 의해 제거된다. 불용성 미네랄을 제거하기 위한 다른 적절한 방법이 이 기술분야의 당업자에게 쉽게 명백할 바와 같이 사용될 수 있다.
일부 실시예에서, 탈염 단계는 또한 시알릴올리고당 함유 액체 공급원으로부터 단백질을 제거한다.
일부 실시예에서, 탈염된 액체 공급원은 아래 기술된 방법 중 임의의 방법을 사용하여 농축된다.
일부 실시예에서, 적어도 단백질을 제거하기 위해 여과가 사용된다. 다른 실시예에서, 여과는 적어도 불용성 미네랄과 단백질을 제거하기 위해 사용된다.
세라믹 여과
다양한 실시예에서, 세라믹 여과는 시알릴올리고당 함유 액체 공급원으로부터 불용성 미네랄과 단백질을 제거하기 위해 사용된다. 세라믹 여과는 여과 투과액에 함유된 락토오스, 올리고당 및 가용성 미네랄로부터 여과 농축액에 보유된 단백질과 불용성 미네랄을 분리한다.
일 실시예에서, 세라믹 여과가 약 35 내지 약 95℃의 온도에서 수행되기 전에 상기 기술한 바와 같이 시알릴올리고당 함유 액체 공급원이 가열되어 공급원의 미네랄을 침전시킨다.
일 실시예에서, 상기 기술된 바와 같이 시알릴올리고당 함유 액체 공급원이 가열되어 공급원의 미네랄을 침전시킨 다음, 원심 분리되고, 그 다음에 약 50 내지 약 70℃의 온도에서 경량 상의 세라믹 여과가 수행된다.
하나의 예시적인 실시예에서, 이 방법은 세라믹 한외여과를 포함한다.
다양한 실시예에서, 이 방법은 산화 알루미늄 또는 산화 지르코늄을 포함하는 세라믹 막을 사용하는 세라믹 여과를 포함한다.
다양한 실시예에서, 세라믹 여과는, 적어도 약 500, 600, 700, 750, 800, 900, 1,000, 1,100, 1,200, 1,250, 1,300, 1,400, 1,500, 1,750, 2,000, 2,500, 5,000, 10,000, 15,000, 20,000, 25,000, 30,000, 50,000, 100,000, 150,000 또는 200,000 Da의 분자량 컷오프를 갖는 막을 사용하여 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다(예를 들어, 약 500 내지 약 200,000, 약 500 내지 약 100,000, 약 500 내지 약 30,000, 약 500 내지 약 10,000, 약 500 내지 약 5,000, 약 500 내지 약 2,500, 약 500 내지 약 2,000, 약 500 내지 약 1,500, 약 750 내지 약 200,000, 약 750 내지 약 100,000, 750 내지 약 30,000, 약 750 내지 약 10,000, 약 750 내지 약 5,000, 약 750 내지 약 2,500, 약 750 내지 약 2,000, 약 750 내지 약 1,500, 약 1,000 내지 약 200,000, 약 1,000 내지 약 100,000, 약 1,000 내지 약 30,000, 약 1,000 내지 약 10,000, 약 1,000 내지 약 5,000, 약 1,000 내지 약 2,500, 약 1,000 내지 약 2,000, 또는 약 1,000 내지 약 1,500 Da).
다양한 실시예에서, 세라믹 여과는, 적어도 약 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.25, 0.4, 0.5, 0.6, 0.75, 0.8, 1, 1.25, 1.4, 1.5, 1.6, 1.75, 1.8, 2, 2.5 or 3 ㎛의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 0.001 내지 약 3, 약 0.001 내지 약 2.5, 약 0.001 내지 약 2, 0.001 내지 약 1.75, 0.001 내지 약 1.5, 약 0.005 내지 약 3, 약 0.005 내지 약 2.5, 약 0.005 내지 약 2, 0.005 내지 약 1.75, 0.005 내지 약 1.5, 약 0.01 내지 약 3, 약 0.01 내지 약 2.5, 약 0.01 내지 약 2, 0.01 내지 약 1.75, 또는 약 0.01 내지 약 1.5 ㎛).
다양한 실시예에서, 세라믹 여과는, 적어도 약 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 95℃의 온도에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 30 내지 약 95, 약 40 내지 약 95, 약 50 내지 약 95, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 90, 약 60 내지 약 90, 약 65 내지 약 90, 약 40 내지 약 85, 약 50 내지 약 85, 약 55 내지 약 85, 약 60 내지 약 90, 약 65 내지 약 90, 약 40 내지 약 80, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 80, 약 60 내지 약 80, 약 65 내지 약 80, 약 40 내지 약 75, 약 50 내지 약 75, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 75, 또는 약 65 내지 약 75℃).
다양한 실시예에서, 세라믹 여과는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 bar의 압력에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 1 내지 약 15, 약 2 내지 약 15, 약 3 내지 약 15, 약 1 내지 약 12, 약 3 내지 약 12, 약 1 내지 약 10, 약 3 내지 약 10, 약 1 내지 약 8, 약 2 내지 약 8, 약 3 내지 약 8, 약 1 내지 약 7, 약 2 내지 약 7, 약 3 내지 약 7, 약 1 내지 약 6, 약 2 내지 약 6, 약 3 내지 약 6, 약 1 내지 약 5, 약 2 내지 약 5, 또는 약 3 내지 약 5 bar).
일 실시예에서, 이 방법은 투석여과와 조합된 세라믹 여과를 포함한다.
기타 여과 방법
다양한 실시예에서, 한외여과 또는 나노여과는 적어도 단백질을 제거하기 위해 사용된다. 여과 농축액에 보유된 단백질을 여과 투과액에 함유된 락토오스 및 가용성 미네랄과 같은 당류로부터 분리하기 위해 여과가 사용될 수 있다.
일부 실시예에서, 한외여과 또는 나노여과는 투석여과와 조합하여 사용된다.
놀랍게도, 고온에서 수행된 한외여과는 하류 가공처리 단계에서 향상된 수득률율을 일으키고, 예를 들어, 나노여과 농축액 및 최종 시알릴올리고당 함유 추출물에서 향상된 시알릴올리고당 수득률을 일으키는 것으로 밝혀졌다. 약 10℃ 내지 약 50℃로 UF 온도를 증가시키는 것은 이 공정에서 시알릴올리고당 수득률을 약 100% 증가시킨다. 약 10℃ 내지 약 65℃로 UF 온도를 증가시키는 것은 시알릴올리고당 수득률을 약 130% 증가시킨다. 약 65℃를 초과하여 UF 온도를 증가시키는 것은 시알릴올리고당 수득률을 증가시키지만 최대 65℃까지 증가되는 것보다 더 작은 증분으로 증가시킬 것이다.
다양한 실시예에서, 한외여과는 적어도 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 또는 90℃의 온도에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 25 내지 약 90, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 90, 약 30 내지 약 85, 약 40 내지 약 85, 약 50 내지 약 85, 약 55 내지 약 85, 약 30 내지 약 80, 약 40 내지 약 80, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 80, 약 30 내지 약 75, 약 40 내지 약 75, 약 50 내지 약 75, 약 55 내지 약 75, 약 30 내지 약 70, 약 40 내지 약 70, 약 50 내지 약 70, 약 55 내지 약 70, 약 30 내지 약 65, 약 65 내지 약 75, 약 50 내지 약 65, 또는 약 55 내지 약 65℃).
한외여과를 위한 적절한 막은 폴리에테르설폰 막을 포함한다. 이 기술분야에서 알려진 다른 한외여과 막은 또한 이 기술분야의 당업자에게 자명할 것과 같이 적합할 수 있다.
다양한 실시예에서, 한외여과는 적어도 약 1,000, 1,500, 2,000, 3,000, 3,500, 4,000, 5,000, 6,000, 7,000, 8,000, 9,000, 10,000, 12,500, 15,000, 17,500, 20,000, 25,000 또는 30,000 Da의 분자량 컷오프를 갖는 막을 사용하여 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 1,000 내지 약 30,000, 약 3,000 내지 약 30,000, 약 5,000 내지 약 30,000, 약 1,000 내지 약 25,000, 약 2,000 내지 약 25,000, 약 3,000 내지 약 25,000, 약 5,000 내지 약 25,000, 약 1,000 내지 약 20,000, 약 2,000 내지 약 20,000, 약 3,000 내지 약 20,000, 약 5,000 내지 약 20,000, 약 10,000 내지 약 20,000, 약 2,000 내지 약 15,000, 약 3,000 내지 약 15,000, 약 5,000 내지 약 15,000, 약 2,000 내지 약 10,000, 약 3,000 내지 약 10,000, 또는 약 5,000 내지 약 10,000 Da).
다양한 실시예에서, 한외여과는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 bar의 압력에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 1 내지 약 15, 약 2 내지 약 15, 약 3 내지 약 15, 약 4 내지 약 15, 약 5 내지 약 15, 약 1 내지 약 12, 약 2 내지 약 10, 약 3 내지 약 10, 약 4 내지 약 10, 약 5 내지 약 10, 약 1 내지 약 8, 약 2 내지 약 8, 약 3 내지 약 8, 약 4 내지 약 8, 약 5 내지 약 8, 약 1 내지 약 7, 약 2 내지 약 7, 약 3 내지 약 7, 약 4 내지 약 7, 약 5 내지 약 7, 약 1 내지 약 6, 약 2 내지 약 6, 약 3 내지 약 6, 약 4 내지 약 6, 약 5 내지 약 6, 약 1 내지 약 5, 약 2 내지 약 5, 약 3 내지 약 5 또는 약 4 내지 약 5 bar).
다양한 실시예에서, 나노여과는 적어도 약 0.1, 0.2, 0.25, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9 또는 1 kDa의 분자량 컷오프를 갖는 막을 사용하여 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 0.1 내지 약 1, 약 0.1 내지 약 0.8, 약 0.1 내지 약 0.5, 약 0.1 내지 약 0.4, 약 0.1 내지 약 0.3, 약 0.1 내지 약 0.25, 약 0.1 내지 약 0.2, 약 0.2 내지 약 1, 약 0.2 내지 약 0.6, 약 0.2 내지 약 0.5, 약 0.2 내지 약 0.3, 약 0.2 내지 약 0.25, 약 0.3 내지 약 1, 약 0.3 내지 약 0.8, 약 0.3 내지 약 0.6, 약 0.3 내지 약 0.5, 약 0.4 내지 약 1, 약 0.4 내지 약 0.6, 약 0.5 내지 약 1, 약 0.5 내지 약 0.8, 약 0.6 내지 약 1, 약 0.6 내지 약 0.7, 약 0.7 내지 약 1 kDa).
다양한 실시예에서, 나노여과는 적어도 약 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 또는 75℃의 온도에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 15 내지 약 75, 약 20 내지 약 75, 약 25 내지 약 75, 약 15 내지 약 70, 약 20 내지 약 70, 약 25 내지 약 70, 약 15 내지 약 65, 약 20 내지 약 65, 약 25 내지 약 65, 약 15 내지 약 60, 약 20 내지 약 60, 약 25 내지 약 60, 약 15 내지 약 55, 약 20 내지 약 55, 또는 약 25 내지 약 55℃).
나노여과에 적합한 막은 폴리아미드-이미드 막 또는 폴리아미드 박막 복합체 막을 포함한다. 적합한 폴리아미드 - 이미드 막은 Synder® NFS, NFX 및 NFW 막을 포함하는 Synder® NF 막을 포함한다. 이 기술분야에서 공지된 다른 나노여과 막은 또한 이 기술분야의 당업자에게 자명한 바와 같이 적합할 수 있다.
다양한 실시예에서, 나노여과는 적어도 약 10, 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400 또는 적어도 약 500 Da의 분자량 컷오프를 갖는 막을 사용하여 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 10 내지 약 500, 약 50 내지 약 500, 약 100 내지 약 500, 약 10 내지 약 400, 약 50 내지 약 400, 약 100 내지 약 400, 약 10 내지 약 300, 약 50 내지 약 300, 약 100 내지 약 300, 약 10 내지 약 250, 약 50 내지 약 250, 또는 약 100 내지 약 250 Da).
다양한 실시예에서, 나노여과는 적어도 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 또는 적어도 약 75 bar의 압력에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 5 내지 약 75, 약 30 내지 약 75, 약 35 내지 약 75, 약 5 내지 약 70, 약 30 내지 약 70, 약 35 내지 약 70, 약 5 내지 약 65, 약 30 내지 약 65, 약 35 내지 약 65, 약 5 내지 약 60, 약 25 내지 약 60, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 60, 약 40 내지 약 60, 약 5 내지 약 55, 약 25 내지 약 55, 약 30 내지 약 55, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 55, 약 5 내지 약 50, 약 25 내지 약 50, 약 30 내지 약 50, 약 35 내지 약 50, 약 40 내지 약 50, 약 5 내지 약 45, 약 25 내지 약 45, 약 30 내지 약 45, 약 35 내지 약 45, 또는 약 40 내지 약 45 bar).
3. 이당류 제거
시알릴올리고당 함유 공급원 재료 내의 시알릴올리고당으로부터 이당류, 특히, 락토오스를 분리하기 위해 다양한 방법이 사용될 수 있다.
3.1 효소 반응
일부 실시예에서, 이 방법은 하나 이상의 이당류의 분자 크기를 증가 또는 감소시켜 하나 이상의 단당류 또는 올리고당을 생성시키는 효소 반응을 포함한다.
반응 생성물은 여과를 거쳐서 효소 반응에 의해 생성된 단량류 또는 올리고당을 제거할 수 있다. 갈락토올리고당과 같은 올리고당을 측정하는 방법은, "AOAC official method of 2001. 02 trans-Galactooligosaccharides (TGOS)," in Selected Food Products, AOAC International, Gaithersburg, Md, USA, 2005."에 의해 제공된다. 이 목적을 위해 설계된 임의의 적합한 방법이 또한 사용될 수 있다. 적절한 여과 조건은 상기 논의되었다. 여과 조건, 예를 들어, 막 공극 크기 또는 분자량 컷오프, 온도 및 압력이, 제거될 단량류 또는 다당류가 농축액에 보유되고 시알릴올리고당이 투과액에 함유되거나, 또는 그 반대가 되도록 선택된다. 시알릴올리고당을 측정하는 방법은, Fong, B. 등의, 2011. Quantification of bovine milk oligosaccharides using liquid chromatography-selected reaction monitoring-mass spectrometry. Journal of agricultural and food chemistry, 59(18), pp.9788-9795에 의해 제공된다.
일 실시예에서, 효소 반응은 이당류의 분자 크기를 증가시켜 하나 이상의 다당류를 생성한다. 다른 실시예에서, 효소 반응은 이당류의 분자 크기를 감소시켜 하나 이상의 단당류를 생성한다.
일 실시예에서, 효소는 β-갈락토시다아제이다. β-갈락토시다아제는 갈락토오스와 다른 당 사이의 β-글리코시드 결합의 가수 분해를 촉매화한다. 효소 반응의 조건은 단량류 및/또는 올리고당을 생산하도록 조작될 수 있다.
β-갈락토시다아제는, 클루이베로마이세스 프라질리스(Kluyveromyces fragilis), 검정곰팡이(Aspergillus niger), 누룩곰팡이(Aspergillus oryzae), 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 클루이베로마이세스 종(Kluyveromyces spp.), 페니실륨 종(Penicillium spp.), 로도토룰라 종(Rhodotorula spp.), 스포로볼로마이세스 싱규래리스(Sporobolomyces singularis), 비피더박테리움 종(Bifidobacterium spp.), 바실루스 종(Bacillus spp.), 바실루스 서큘란스(Bacillus circulans), 대장균(Escherichia coli), 젖산균 내열성세균(Lactobacillus thermophiles), 락토바실루스 종(Lactobacillus spp.), 류코노스톡(Leuconostoc), 시트로보륨 또는 엔테로박터 종(citrovorum or Enterobacter spp.)으로부터 공급될 수 있다.
예를 들어, 이용 가능한 이당류가 과도하게 존재하는 경우, 올리고당을 생성하기 위한 글리코실전이반응(transglycosylation)이 선호될 수 있다. 글리코실전이반응을 촉진하기 위해 효소 반응 전에 농축 단계를 수행하는 것이 필요할 수 있다.
다양한 실시예에서, 적어도 하나의 이당류의 분자 크기를 증가시키기 위한 투입 재료(제1 투과액 또는 탈염된 액체 공급원)는 적어도 약 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% 또는 적어도 약 70%의 이당류, 특히, 락토오스를 포함한다. 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위, 예를 들어, 약 30% 내지 약 70% 또는 약 40% 내지 약 60%가 선택될 수 있다.
이용 가능한 제한된 이당류가 있는 경우, 단당류를 생성하기 위한 가수 분해가 선호될 수 있다. 다양한 실시예에서, 적어도 하나의 이당류의 분자 크기를 감소시키기 위해 효소 반응에 대한 투입 재료(제1 투과액 또는 탈염된 액체 공급원)는 적어도 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 또는 40 중량%의 이당류, 특히, 락토오스를 포함한다. 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위, 예를 들어, 약 5 내지 약 40 또는 약 20 내지 약 30 중량%가 선택될 수 있다.
가수 분해 반응을 위해, 3개의 pH 값: 6.1, 6.3, 및 6.5와 40℃에서 우유 투과액에 대해 이 반응을 수행했다. 단일 효소 첨가 속도가 사용되었다 (36735 NLU/락토오스 1kg). 효소는 Danisco의 GODO-YLN2였다. 반응은 또한 4.28의 pH, 및 두 개의 온도(54 및 58.5℃)에서 락토오스 모액(라토오스 농도 42% w/w) 상에서 수행되었다. 사용된 효소는 Biocatalysts(UK)의 17MDP였다. 우리의 조건 선택은 권장된 조건과 유사했지만, 공정 조건은 효소에 맞도록 수정되었다. 시험된 다른 파라미터에서 결과의 유의한 차이가 발견되지 않았다.
하나의 예시적인 실시예에서, β-갈락토시다아제는 락토오스로부터 갈락토올리고당(GOS)의 생성을 촉매화한다. 반응 생성물은 나노여과를 거쳐서 GOS를 제거할 수 있다. 일 실시예에서, 나노여과는 GOS와 단백질을 제거하기 위해 사용된다.
다른 예시적인 실시예에서, β-갈락토시다아제는 락토오스로부터 갈락토오스와 글루코오스의 생성을 촉매화한다. 반응 생성물은 나노여과를 거쳐서 갈락토오스와 글루코오스를 제거할 수 있다. 일 실시예에서, 나노여과는 갈락토오스, 글루코오스 및 가용성 미네랄을 제거한다.
다양한 실시예에서, 둘 이상의 효소 반응 단계가 수행된다.
예를 들어, 일 실시예에서, 제1 효소 반응 단계는 하나 이상의 단량류를 생성하기 위해 수행된다. 제2 효소 단계는 하나 이상의 올리고당을 생성하기 위해 수행된다.
일 실시예에서, 제1 효소 반응 단계는 세라믹 여과 후에 수행된다. 다른 실시예에서, 제1 효소 반응 단계는 한외여과 전, 탈염 후에 수행된다.
일 실시예에서, 제2 효소 반응 단계는 나노여과 후 및 농축 전에 수행된다.
4. 농축
다양한 실시예에서, 이 방법은 시알릴올리고당을 농축시키는 하나 이상의 단계를 포함한다.
일부 실시예에서, 농축은 물을 제거함으로써 이루어진다. 나노여과, 역삼투 또는 증발과 같은 임의의 농축 공정이 사용될 수 있다. 역삼투와 증발이 모두 사용될 수 있다.
농축을 위한 증발은 임의의 적절한 증발 공정에 의해 실행될 수 있다. 강하막 증발기, 상승막 증발기, 판형 증발기, 또는 다중 효과 증발기와 같은 증발기가 사용될 수 있다.
일부 실시예에서, 나노여과는 역삼투와 함께 사용된다.
일부 실시예에서, 예를 들어, 올리고당을 생성하기 위한 효소 반응 전에, 나노여과, 역삼투 및 증발이 사용된다.
5. 탈색
일 실시예에서, 반응 생성물은 탈색을 거쳐서 변색 및/또는 바람직하지 않은 냄새를 유발하는 불순물을 제거한다. 탈색은 가시 파장 범위 상에서 분광 광도계로 흡광도의 변화를 측정하여 결정될 수 있다.
일 실시예에서, 액체 스트림을 활성탄에 노출시킴으로써 탈색이 수행된다. 후속 여과 단계는 스트림으로부터 활성탄을 제거하기 위해 수행된다. 탈색은 배치 또는 연속 공정으로 수행될 수 있다.
다양한 실시예에서, 탈색은 적어도 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 적어도 약 95℃의 온도에서 수행되고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 유용한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 25 내지 약 95, 약 40 내지 약 95, 약 50 내지 약 95, 또는 약 55 내지 약 95℃).
6. 결정화 및 건조
다양한 실시예에서, 시알릴올리고당 함유 추출물을 제조하기 위해 적어도 하나의 농축 단계가 수행된다.
시알릴올리고당 함유 추출물은 이 기술분야에서 공지된 적합한 방법을 사용하여 건조될 수 있다. 일 실시예에서, 추출물은 건조 전에 결정화를 거친다.
7. 시알릴올리고당 함유 조성물과 추출물
본 발명의 추출물과 조성물은 시알릴올리고당과 중성 올리고당이 강화되고 락토오스, 단백질 및 미네랄과 같은 불순물이 적다.
시알릴올리고당은 적어도 하나의 시알산 부분을 포함하는 올리고당이다. 시알산은 뉴라민산의 N- 또는 O-치환 유도체이다. 포유동물 우유는 유리 시알릴올리고당과 당단백질 및/또는 당지질에 결합된 시알릴올리고당 모두를 포함한다.
다양한 실시예에서, 조성물은 유리 시알산을 함유한다.
다양한 실시예에서, 조성물 또는 추출물은 3'-시알릴락토오스, 6'-시알릴락토오스, 디시알릴락토오스, 시알릴락토사민 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 조합물을 포함한다. 예시적인 실시예에서, 조성물 또는 추출물은 3'-시알릴락토오스, 6'-시알릴락토오스, 디시알릴락토오스 및 시알릴락토사민을 포함한다.
다양한 실시예에서, 추출물 또는 조성물은 전체 고형물 중의 백분율로서 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17, 20, 25, 30, 35 또는 40 중량%의 시알릴올리고당을 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 1 내지 약 40, 약 5 내지 약 40, 약 7 내지 약 40, 약 10 내지 약 40, 약 1 내지 35, 약 5 내지 약 35, 약 7 내지 약 35, 약 10 내지 약 35, 약 1 내지 약 30, 약 5 내지 약 30, 약 7 내지 약 30, 약 10 내지 약 30, 약 1 내지 약 25, 약 5 내지 약 25, 약 7 내지 약 25, 약 10 내지 약 25, 약 1 내지 약 20, 5 내지 약 20, 약 7 내지 약 20, 약 10 내지 약 20, 약 1 내지 약 15, 약 5 내지 약 15, 약 7 내지 약 15 또는 약 10 내지 약 15 중량%의 시알릴올리고당).
다양한 실시예에서, 조성물 또는 추출물은 전체 고형물 중의 백분율로서 적어도 약 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17, 20, 25, 30, 35 또는 40 중량%의 3'-시알릴라토오스를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 1 내지 약 40, 약 5 내지 약 40, 약 7 내지 약 40, 약 10 내지 약 40, 약 1 내지 35, 약 5 내지 약 35, 약 7 내지 약 35, 약 10 내지 약 35, 약 1 내지 약 30, 약 5 내지 약 30, 약 7 내지 약 30, 약 10 내지 약 30, 약 1 내지 약 25, 약 5 내지 약 25, 약 7 내지 약 25, 약 10 내지 약 25, 약 1 내지 약 20, 5 내지 약 20, 약 7 내지 약 20, 약 10 내지 약 20, 약 1 내지 약 15, 약 5 내지 약 15, 약 7 내지 약 15 또는 약 10 내지 약 15 중량%의 3'-시알릴락토오스).
다양한 실시예에서, 조성물 또는 추출물은 전체 고형물 중의 백분율로서 적어도 약 0.1, 0.5, 0.75, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 2, 2.25, 2.5, 2.75, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17 또는 20 중량%의 6'-시알릴락토오스를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 0.1 내지 약 20, 약 0.1 내지 약 15, 약 0.1 내지 약 12, 약 0.1 내지 약 10, 약 0.1 내지 약 8, 약 0.5 내지 약 20, 약 0.5 내지 약 15, 약 0.5 내지 약 12, 약 0.5 내지 약 10, 약 0.5 내지 약 8, 약 1 내지 약 20, 약 1 내지 약 15, 약 1 내지 약 12, 약 1 내지 약 10, 약 1 내지 약 8, 약 1.5 내지 약 20, 약 1.5 내지 약 15, 약 1.5 내지 약 12, 약 1.5 내지 약 10, 약 1.5 내지 약 8, 약 2 내지 약 20, 약 2 내지 약 15, 약 2 내지 약 12, 약 2 내지 약 10, 약 2 내지 약 8, 약 2.5 내지 약 20, 약 2.5 내지 약 15, 약 2.5 내지 약 12, 약 2.5 내지 약 10, 약 2.5 내지 약 8, 약 3 내지 약 20, 약 3 내지 약 15, 약 3 내지 약 12, 약 3 내지 약 10, 또는 약 3 내지 약 8 중량%의 6'-시알릴락토오스).
다양한 실시예에서, 추출물 또는 조성물은 전체 고형물 중의 백분율로서 적어도 약 0.001, 0.005, 0.01, 0.02, 0.025, 0.03, 0.04, 0.05, 0.075, 0.1, 0.2, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 2 중량%의 디시알릴락토오스를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 0.001 내지 약 2, 약 0.001 내지 약 1, 약 0.005 내지 약 1.5, 약 0.005 내지 약 1, 약 0.01 내지 약 2, 약 0.01 내지 약 1.5, 약 0.01 내지 약 1.25, 약 0.01 내지 약 1, 약 0.01 내지 약 0.75, 약 0.02 내지 약 2, 약 0.02 내지 약 1.5, 약 0.02 내지 약 1.25, 약 0.02 내지 약 1, 약 0.02 내지 약 0.75, 약 0.03 내지 약 2, 약 0.03 내지 약 1.5, 약 0.03 내지 약 1.25, 약 0.03 내지 약 1, 약 0.03 내지 약 0.75, 약 0.05 내지 약 2, 약 0.05 내지 약 1.5, 약 0.05 내지 약 1.25, 약 0.05 내지 약 1, 또는 적어도 약 0.05 내지 약 0.75 중량%의 디시알릴락토오스).
다양한 실시예에서, 추출물 또는 조성물은 전체 고형물 중의 백분율로서 적어도 약 0.001, 0.005, 0.01, 0.02, 0.025, 0.03, 0.04, 0.05, 0.075, 0.1, 0.2, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 또는 적어도 약 2 중량%의 시알릴락토사민을 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 0.001 내지 약 2, 약 0.001 내지 약 1, 약 0.005 내지 약 1.5, 약 0.005 내지 약 1, 약 0.01 내지 약 2, 약 0.01 내지 약 1.5, 약 0.01 내지 약 1.25, 약 0.01 내지 약 1, 약 0.01 내지 약 0.75, 약 0.02 내지 약 2, 약 0.02 내지 약 1.5, 약 0.02 내지 약 1.25, 약 0.02 내지 약 1, 약 0.02 내지 약 0.75, 약 0.03 내지 약 2, 약 0.03 내지 약 1.5, 약 0.03 내지 약 1.25, 약 0.03 내지 약 1, 약 0.03 내지 약 0.75, 약 0.05 내지 약 2, 약 0.05 내지 약 1.5, 약 0.05 내지 약 1.25, 약 0.05 내지 약 1, 또는 적어도 약 0.05 내지 약 0.75 중량%의 시알릴락토사민).
다양한 실시예에서, 추출물 또는 조성물은, 건조 고형물 기준으로, 6'-시알릴락토오스의 양에 비해 더 많은 양의 3'-시알릴락토오스를 포함한다.
다양한 실시예에서, 추출물 또는 조성물은 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1 또는 1:2의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 10:1 내지 약 1:1, 약 8:1 내지 약 1:1, 약 7:1 내지 약 1:1, 약 6:1 내지 약 1:1, 약 5:1 내지 약 1:1, 약 15:1 내지 약 2:1, 약 12:1 내지 약 2:1, 약 10:1 내지 약 2:1, 약 8:1 내지 약 2:1, 약 7:1 내지 약 2:1, 약 6:1 내지 약 2:1, 약 5:1 내지 약 2:1, 약 15:1 내지 약 3:1, 약 12:1 내지 약 3:1, 약 10:1 내지 약 3:1, 약 8:1 내지 약 3:1, 약 7:1 내지 약 3:1, 약 6:1 내지 약 3:1, 또는 약 5:1 내지 약 3:1).
다양한 실시예에서, 조성물 또는 추출물은, 유지방 구상 막(MFGM), 시알산 함유 단백질 및 강글리오시드를 포함하는 다른 시알산 함유 화합물을 추가로 포함한다.
본원에 사용된 "시알산 함유 화합물"이라는 용어는, 지질과 같은 화합물 및 결합된 시알산을 함유하는 단백질을 포함한다. 본원에 기술된 조성물 또는 추출물에 존재하는 시알산 함유 화합물의 예는, 단백질과 강글리오시드를 포함한다. 유지방 구상 막은 본원에 기술된 조성물과 추출물에 존재하는 시알산 함유 화합물의 공급원의 일례이다.
다양한 실시예에서, 조성물 또는 추출물은 전체 고형물 중의 백분율로서 적어도 약 0.5%의 다른 시알산 함유 화합물을 포함한다.
조성물과 추출물은 중성 올리고당을 추가로 포함한다. 일부 실시예에서, 조성물 또는 추출물은 첨가된 중성 올리고당을 포함한다.
중성 올리고당은 전하를 갖지 않는 올리고당이다. 본 발명의 조성물에 존재하는 중성 올리고당은, 갈락토올리고당, 프룩토올리고당, N-아세틸락토사민, N-아세틸갈락토사미닐글루코오스, N-아세틸갈락토사미닐락토오스, 이소글로보트리오스, 3'-갈락토실락토오스, 4'-갈락토실락토오스, 6'-갈락토실락토오스, novo-락토-N-펜타오스-I, 락토-N-네오테트라오스, 및 락토-N-네오헥사오스를 포함한다. 프룩토올리고당은, Cuany, Denis, Thierry Benet, and Sean Austin. 2010 Journal of AOAC International　93(10) p202-212에 기술된 것과 같은 방법에 의해 검출될 수 있다.
일부 실시예에서, 조성물은 첨가된 중성 올리고당을 함유한다.
다양한 실시예에서, 추출물 또는 조성물은 적어도 약 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17, 20, 25 또는 30 중량%의 중성 올리고당을 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 0.01 내지 약 30, 약 0.01 내지 약 20, 약 0.01 내지 약 15, 약 0.01 내지 약 10, 약 0.01 내지 약 6, 0.01 내지 약 2, 약 0.01 내지 약 0.5, 약 0.05 내지 약 30, 약 0.05 내지 약 25, 약 0.05 내지 약 20, 약 0.05 내지 약 15, 약 0.05 내지 약 10, 약 0.1 내지 약 30, 약 0.1 내지 약 25, 약 0.1 내지 약 20, 약 0.1 내지 약 15, 약 0.1 내지 약 10, 약 0.2 내지 약 30, 약 0.2 내지 약 25, 약 0.2 내지 약 20, 약 0.2 내지 약 15, 약 0.2 내지 약 10, 약 0.25 내지 약 30, 약 0.25 내지 약 25, 약 0.25 내지 약 20, 약 0.25 내지 약 15, 약 0.25 내지 약 10, 약 0.5 내지 약 30, 약 0.5 내지 약 25, 약 0.5 내지 약 20, 약 0.5 내지 약 15, 약 0.5 내지 약 10, 약 1 내지 약 30, 약 1 내지 약 25, 약 1 내지 약 20, 약 1 내지 약 15, 약 1 내지 약 10, 약 2 내지 약 30, 약 2 내지 약 25, 약 2 내지 약 20, 약 2 내지 약 15, 약 2 내지 약 10, 약 5 내지 약 30, 약 5 내지 약 25, 약 5 내지 약 20, 약 5 내지 약 15, 약 10 내지 약 30, 약 10 내지 약 25, 또는 약 10 내지 약 20 중량%의 중성 올리고당).
다양한 실시예에서, 추출물 또는 조성물은 약 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1 중량% 미만의 단백질과 비단백질 질소를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 1 내지 약 20, 약 1 내지 약 15, 약 1 내지 약 10, 약 1 내지 약 8, 약 1 내지 약 6, 약 1 내지 약 5, 약 2 내지 약 20, 약 2 내지 약 16, 약 2 내지 약 11, 약 2 내지 약 9, 약 2 내지 약 8, 약 2 내지 약 7, 약 3 내지 약 20, 약 3 내지 약 15, 약 3 내지 약 13, 약 3 내지 약 9, 약 3 내지 약 8, 약 3 내지 약 6, 약 4 내지 약 20, 약 4 내지 약 15, 약 4 내지 약 10, 약 4 내지 약 9, 약 4 내지 약 8, 약 4 내지 약 7, 약 5 내지 약 2,0 5 내지 약 16, 약 5 내지 약 10, 약 5 내지 약 8, 약 5 내지 약 7, 약 6 내지 약 20, 약 6 내지 약 17, 약 6 내지 약 11, 약 6 내지 약 10, 약 6 내지 약 9, 약 7 내지 약 20, 약 7 내지 약 15, 약 7 내지 약 10, 약 8 내지 약 20, 약 8 내지 약 17, 약 8 내지 약 12, 약 9 내지 약 20, 약 9 내지 약 15, 약 10 내지 약 20, 약 10 내지 약 16, 약 11 내지 약 20 11 내지 약 16, 약 12 내지 약 20, 약 12 내지 약 17, 약 13 내지 약 20, 약 13 내지 약 16, 약 14 내지 약 20, 약 14 내지 약 18 또는 약 15 내지 약 20 중량%의 단백질과 비단백질 질소).
본원에 사용된 바와 같이, "비-시알릴올리고당 당류"라는 용어는, 시알릴올리고당을 제외한 조성물 내의 모든 당을 가리킨다. 비-시알릴올리고당 당류는, 이당류(특히, 락토오스), 단당류(글루코오스와 갈락토오스를 포함) 및 기타 올리고당(중성 올리고당과 산성 올리고당을 포함)을 포함한다.
다양한 실시예에서, 추출물 또는 조성물은 약 85, 84, 83, 82, 81, 80, 79, 78, 77, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 또는 30 중량% 미만의 비-시알릴올리고당 당류를 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 30 내지 약 85, 약 30 내지 약 80, 약 30 내지 약 75, 약 40 내지 약 85, 약 40 내지 약 80, 약 40 내지 약 75, 약 50 내지 약 85, 약 50 내지 약 80, 약 50 내지 약 75, 약 50 내지 약 70, 약 55 내지 약 85, 약 55 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 55 내지 약 70, 약 60 내지 약 85, 약 60 내지 약 80, 약 60 내지 약 75, 약 60 내지 약 70, 약 65 내지 약 85, 약 65 내지 약 80, 약 65 내지 약 75, 약 65 내지 약 70, 약 70 내지 약 85, 약 70 내지 약 80, 또는 약 70 내지 약 75 중량%의 비-시알릴올리고당 당류).
다양한 실시예에서, 추출물 또는 조성물은 약 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 약 1 중량% 미만의 회분을 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 0 내지 약 15, 약 0 내지 약 12, 약 0 내지 약 10, 약 0 내지 약 7, 약 0 내지 약 5, 1 내지 약 15, 약 1 내지 약 12, 약 1 내지 약 10, 약 1 내지 약 7, 약 1 내지 약 5, 약 2 내지 약 15, 약 2 내지 약 12, 약 2 내지 약 10, 약 2 내지 약 7, 약 3 내지 약 15, 약 3 내지 약 12, 약 3 내지 약 10, 약 3 내지 약 7, 약 4 내지 약 15, 약 4 내지 약 12, 약 4 내지 약 10, 약 4 내지 약 7, 약 5 내지 약 15, 약 5 내지 약 12, 또는 약 5 내지 약 10 중량%의 회분).
8. 영양 제제
본 발명의 추출물과 조성물은, 산모용 조제분유, 유아용 조제분유, 후속 조제분유, 성장용 조제분유, 소아용 조제분유, 모유 강화제, 아동의 식품 또는 음료, 산모용 보충제, 산모용 영양 제제, 발효 식품, UHT 우유, UHT 드링킹 요구르트, 산성화된 우유 음료, UHT 분말, 의약품, 스포츠 영양 제제, 또는 노령 또는 고령 인구를 위한 제제를 포함하는 영양 제제에 사용하는 데 적합하다.
본 명세서에서 사용된 "산모용 조제분유"라는 용어는, 임산부가 임신 중에 섭취하는 조성물을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 "유아용 조제분유"라는 용어는, 0일 내지 6개월의 유아를 위한 조성물을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 "후속 조제분유"라는 용어는, 6개월 내지 1세의 유아를 위한 조성물을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 "성장용 조제분유"라는 용어는, 1세 이상의 유아와 아동을 위한 조성물을 의미한다. 성장용 조제분유는 성장용 우유 분말 또는 GUMP를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 "소아용 조제분유"라는 용어는, 태어나서 일정 나이의 아동을 위한 조성물을 의미한다.
이 기술분야의 당업자에 의해 상이한 조성에 대한 연령 범위는: "유아용 조제분유", "후속 조제분유", "성장용 조제분유", 및 "소아용 조제분유"가 개인의 발달에 따라 아동마다 달라질 수 있음이 이해될 것이다. 이들 제품은 농축액 또는 바로 마실 수 있는 액체로서 액체 형태이거나 또는 분말 농축물로 제공될 수 있다.
다양한 실시예에서, 영양 제제는 적어도 약 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 2, 3, 4 또는 5%의 시알릴올리고당 함유 추출물 또는 조성물을 포함하고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다 (예를 들어, 약 0005 내지 약 5, 약 0.005 내지 약 3, 약 0.005 내지 약 1, 약 0.005 내지 약 0.5, 약 0.005 내지 약 0.05, 약 0.01 내지 약 5, 약 0.01 내지 약 3, 약 0.01 내지 약 1, 약 0.01 내지 약 0.5, 약 0.01 내지 약 0.1, 약 0.05 내지 약 5, 약 0.05 내지 약 4, 약 0.05 내지 약 1, 약 0.05 내지 약 0.1, 약 0.1 내지 약 5, 약 0.1 내지 약 4, 약 0.1 내지 약 1, 약 0.1 내지 약 0.5, 약 0.5 내지 약 5, 약 0.5 내지 약 3, 약 0.5 내지 약 1, 약 1 내지 약 5, 약 1 내지 약 4, 약 1 내지 약 3, 약 2 내지 약 5, 약 2 내지 약 4, 약 3 내지 약 5%의 시알릴올리고당 함유 추출물 또는 조성물).
다양한 실시예에서, 영양 제제는 중량/부피 기준으로 적어도 약 0.005%의 총 시알릴올리고당을 포함한다.
8.1 유아 및 아동용 조제분유
다양한 실시예에서, 유아용 조제분유는 중량/중량 고형물 기준으로 적어도 약 0.17%의 총 시알릴올리고당을 포함한다.
다양한 실시예에서, 후속 조제분유는 중량/중량 고형물 기준으로 적어도 약 0.19%의 총 시알릴올리고당을 포함한다.
다양한 실시예에서, 성장용 조제분유는 중량/중량 고형물 기준으로 적어도 약 0.19%의 총 시알릴올리고당을 포함한다.
다양한 실시예에서, 산모용 조제분유는 중량/중량 고형물 기준으로 적어도 약 0.15%의 총 시알릴올리고당을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 유아용 조제분유는 0일 내지 6개월 연령의 유아용 영양 제제를 나타내고, "후속 조제분유"는 6개월 내지 1세 연령의 유아용 영양 제제를 나타내며, "성장용 조제분유"는 12개월 이상 연령의 유아용 영양 제제를 나타낸다. 산모용 조제분유는 임신 또는 모유 수유를 시도하는 여성을 위한 것이다.
본원에 기술된 시알릴올리고당 추출물과 조성물을 포함하는 영양 제제는 이 기술분야에 공지된 제제에 혼입될 수 있다. 적합한 제제와 성분은 이 기술분야의 당업자에게 명백할 것이다.
일 실시예에서, 추출물 또는 조성물은, 예를 들어, 3'-시알릴락토오스와 관련하여 더 인간화된 우유를 기초로 하는 영양을 전달한다. "더 인간화된(More humanised)"이라는 것은, 추출물 또는 조성물이, 예를 들어, 3'-시알릴락토오스와 관련하여 공급원 재료의 변형되지 않거나 또는 가공처리되지 않은 형태보다 인간 모유에 조성적으로 또는 기능적으로 더 유사함을 의미한다.
추출물 또는 조성물의 증가된 인간화의 일례는, 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스의 비를 통해 분만 후 3~4개월이 넘는 유아와 관련이 있다.
본 출원은, 유아 및 아동을 위한 시알릴올리고당의 보충제와 농도가 다른 연령 및 발달 단계에서 달라진다는 결론을 내렸다. 특히, 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스의 비는 유아 또는 아동 발달에 따라 달라진다.
일 실시예에서, 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스의 최적의 비는 특정 연령 그룹 또는 발달 단계에서 유아 또는 아동에게 특별히 맞추어진 조성물로 투여될 수 있다.
일 실시예에서, 조성물은 4 ~ 6개월 이상 연령의 유아에게 6'-시알릴락토오스보다 더 많은 양의 3'-시알릴락토오스를 제공한다.
다른 실시예에서, 조성물은, 약 10:1 내지 약 1.5:1의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하는 3개월 미만 연령의 유아에게 영양을 제공한다. 일 실시예에서, 조성물은 유아용 조제분유이다.
다양한 실시예에서, 조성물은, 약 10:1 내지 약 1.5:1의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하는 6개월 미만 연령의 유아에게 영양을 제공하기 위한 조성물이다. 일 실시예에서, 조성물은 유아용 조제분유이다.
다양한 실시예에서, 조성물은, 약 10:1 내지 약 1.5:1의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하는 약 6개월 내지 약 12개월 연령의 유아에게 영양을 제공하기 위한 조성물이다. 일 실시예에서, 조성물은 후속 조제분유이다.
다양한 실시예에서, 조성물은, 약 10:1 내지 약 1:2의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하는 12개월 이상의 연령의 유아에게 영양을 제공하기 위한 조성물이다. 다양한 실시예에서, 조성물은 성장용 조제분유 또는 소아용 조제분유이다.
소아용 조제분유는 아래 예에 의하여 제공된다.
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Figure pct00002
9. 뇌 기능 또는 발달의 유지하거나 증가
본원에 기술된 영양 제제, 시알릴올리고당 함유 추출물 또는 조성물은 정상 피험자의 뇌 기능 또는 발달을 유지하거나 증가시키기 위해 투여될 수 있다.
제제 또는 조성물의 투여로부터 이익을 얻을 수 있는 피험자는, 신생아, 유아, 걸음마하는 유아, 아동, 임산부, 모유 수유모, 성인, 운동선수, 다른 운동선수 또는 노령자를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "정상 피험자"라는 용어는, 손상된 뇌 기능 또는 발달과 관련된 질병 또는 상태를 겪지 않은 피험자를 나타낸다.
"유효량"은 치료, 예방 효과를 제공하는 데 필요한 양이다. 동물과 인간에 대한 투여량의 상호 관계(신체 표면 1 제곱미터당 1 밀리그램을 기준)는 Freireich 등(1966)에 기술되어 있다. 신체 표면적은 피험자의 신장과 체중으로부터 대략 결정될 수 있다. 예를 들어, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardley, New York, 1970, 537을 참고한다. 유효 투여량은 또한 이 기술분야의 당업자에 의해 인식되는 바와 같이 투여 경로, 담체 사용 등에 따라 달라진다.
본원에 사용되는 바와 같이, "뇌 기능 또는 발달을 유지하다" 또는 "뇌 기능 또는 발달을 유지하는 것"이라는 용어는 상호 교환 가능하게 사용되고, 일반적으로 뇌 기능의 저하를 예방하거나 또는 유지하는 것, 정상적인 뇌 발달을 유지하거나 또는 뇌 발달의 지연을 예방하는 것을 가리킨다. 이들 용어는, 지연된 뇌 발달을 예방하는 것, 신경 세포의 생존력 또는 기능을 유지하는 것, 인지 발달을 유지하는 것, 지연된 인지 발달을 예방하는 것, 인지 수행을 유지하는 것, 인지 저하를 예방하는 것, 학습 능력, 기억 또는 주의 지속시간의 저하를 유지하거나 예방하는 것, 스트레스에 대처하는 피험자의 능력을 유지하는 것, 뇌에서 강글리오시드의 수준을 유지하는 것, 뇌에서 단백질 결합 시알산의 수준을 유지하는 것 {예를 들어, 신경 세포 부착 분자(NCAM)}, 뇌에 대한 혈액, 영양 또는 산소 흐름을 유지하는 것, 시냅스 생성을 유지하는 것, 소화관/뇌 축의 활성을 유지하는 것, 또는 신경발생을 유지하는 것을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "뇌 건강 또는 발달을 증가시킨다" 또는 "뇌 건강과 발달을 증가시키는 것"이라는 용어는 본원에서 상호 교환 가능하게 사용되고, 일반적으로 뇌 기능을 향상시키거나 개선하는 것 및 뇌 발달을 진전시키는 것을 가리킨다. 이들 용어는, 인지 발달 또는 성능을 증가시키는 것, 학습, 기억 또는 주의 지속시간을 증가시키는 것, 스트레스에 대처하는 피험자의 능력을 증가시키는 것, 뇌에서 강글리오시드의 수준을 증가시키는 것, 뇌에서 단백질 결합 시알산의 수준을 증가시키는 것 {예를 들어, 신경 세포 부착 분자(NCAM)}, 뇌에 대한 혈액, 영양 또는 산소 흐름을 증가시키는 것, 시냅스 생성을 증가시키는 것, 소화관/뇌 축의 활성을 증가시키는 것, 또는 신경발생을 증가시키는 것을 포함한다.
최적의 인지 발달은 유아 및 아동 발달의 핵심 부분이다. 그러므로, 인지 발달을 증가시키는 것으로 보이는 모든 약품은 유아와 아동들에게 폭넓은 이익을 가질 것이다.
인지 발달을 평가하는 매우 다양한 방법이 이 기술분야의 당업자에게 잘 알려져 있다. 평가될 인지의 성질, 피험자의 특징 또는 정체성(종, 연령, 건강 또는 행복과 같지만 이에 제한되지 않는), 또는 적용될 수 있는 다른 요인에 따라 특정한 방법이 바람직할 수 있음이 명백할 것이다. 예를 들어, 인간이 아닌 피험자에서 인지 발달을 평가하기에 유용한 방법론은, 예 1에 기술된 바와 같이, 수중 미로 시험(Morris Water Maze Test)과 신규 물체 인식 작업 시험(Novel Object Recognition Task Test)을 포함한다. 인간 피험자에서 인지 발달을 평가하기에 유용한 방법론의 예는 표 1에 요약된 도구를 포함한다.
표 1 - 인간 발달을 평가하기 위한 방법의 예
[표 1]
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일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 글리세로포스포릴콜린(GPC)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 글루타민(Glu)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 미오 이노시톨(Ins)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 Lip09의 감소를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 거대분자(MM)의 감소를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 N-아세틸아스파틸글루탐산(NAAG)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
일 실시예에서, 개인에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것은 그 개인의 뇌에서 적어도 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50%의 글루타메이트-글루타민 복합체(Glx)의 증가를 일으키고, 이들 값들 중 임의의 값 사이에서 적절한 범위가 선택될 수 있다.
10. 인지 질병
일 실시예에서, 본 발명의 추출물 또는 조성물은 인지 저하를 증상으로 포함하는 질병을 치료 또는 개선하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 추출물 또는 조성물의 사용은 인지 저하의 속도를 늦추거나, 환자의 인지를 유지하거나, 또는 그 환자의 인지 능력을 향상시킬 수 있다. 질병의 증상으로 인지 저하를 포함하는 질병의 예는, 알츠하이머 병, 파킨슨 병, 헌팅턴 병 또는 치매를 포함한다.
따라서, 일 실시예에서, 본 발명은, 연령 관련 인지 저하, 치매, 알츠하이머 병, 혈관 질병, 전측두엽 변성(FTLD), 루이소체 치매, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅턴병, 조현병과 관련된 인지 손상, 화학 요법으로 유발된 신경병증, 다운 증후군, 코르사코프 병, 뇌성 마비, 간질, 신경성 허혈, 신경성 재관류 손상, 신경 외상, 신경성 출혈, 신경 감염, 뇌졸중, 독성 물질에 대한 신경 세포의 노출, 연령 관련 정신 장애, 불안 장애, 연령 관련 우울증, 미세 혈관 장애(당뇨병, 저혈압, 뇌졸중 유발성 혈관성 치매, 및 비만증과 같은)와 관련된 치매, 면역계의 장애와 관련된 치매, 중추 신경계(CNS) 장애와 관련된 치매, 저혈압과 관련된 치매, 비만 또는 혈관성 치매와 관련된 치매, 유아기에 발병하는 심각한 발달 지연(N-아세틸뉴라민산을 코딩하는 유전자를 갖는 돌연변이와 관련된) 또는 테를 두른 공포를 수반하는 원위 근육병증(DMRV) 중 임의의 하나 이상과 관련된 인지 저하의 치료 또는 예방에, 생성된 시알릴올리고당 함유 추출물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 상술한 추출물 또는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
실시예 1
시알릴올리고당 함유 추출물은 네 가지 다른 방법을 사용하여 제조된다. 시알릴올리고당, 단백질, 비단백질 질소, 락토오스 및 회분 함량이 결정된다.
1. 방법 A
락토오스 결정화로부터 모액을 포함하는 시알릴올리고당 함유 재료가 제공된다.
공급원 재료는 67℃보다 높은 온도에서 적어도 2분 동안 가열되어 모액 내의 미네랄을 침전시킨다. 불용성 미네랄과 일부 단백질은 원심 분리에 의해 제거된다.
탈염된 공급원 재료는 β-갈락토시다제와 효소 반응 단계를 거쳐서 락토오스를 갈락토오스와 글루코오스로 분해한다.
한외여과는 3 ~ 20 kDa의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 50 내지 70℃, 2 ~ 10 bar에서 수행되어 단백질을 제거한다.
당류, 가용성 미네랄 및 시알릴올리고당을 포함하는 한외여과 투과액은 100 ~ 250 Da의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 25 ~ 55℃, 30 ~ 50 bar에서 수행된 나노여과/투석여과를 거쳐서 갈락토오스, 글루코오스 및 가용성 미네랄을 제거한다.
시알릴올리고당 강화 나노여과 농축액은 증발을 거쳐서 농축된 농축액을 생성한다. 선택적으로, 증발 전에 역삼투 및/또는 나노여과가 수행된다.
선택적으로, 제2 효소 반응은 β-갈락토시다아제를 사용하여 수행되어 글루코오스와 갈락토오스를 생성하거나 또는 GOS를 생성한다.
농축된 농축액 또는 효소 생성물은 탈색 및 선택적으로 여과를 거쳐서 시알릴올리고당 강화 액체 추출물을 생성한다.
액체 추출물은 선택적으로 건조되어 건조 추출물을 생성한다. 선택적으로, 액체 추출물은 건조 전에 결정화된다.
2. 방법 B
락토오스 결정화로부터 모액을 포함하는 시알릴올리고당 함유 재료가 제공된다.
공급원 재료는 67℃보다 높은 온도에서 적어도 2분 동안 가열되어 모액 내의 미네랄을 침전시킨다. 불용성 미네랄과 일부 단백질은 원심 분리에 의해 제거된다.
탈염된 공급원 재료는 3 ~ 20 kDa의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 50 ~ 70℃, 2 ~ 10 bar에서 수행된 한외여과를 거쳐서 단백질을 제거한다.
당류, 가용성 미네랄 및 시알릴올리고당을 포함하는 한외여과 투과액은 100 ~ 250 Da의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 25 ~ 55℃, 30 ~ 50 bar에서 수행된 나노여과/투석여과를 거쳐서 작은 당과 가용성 미네랄을 제거한다.
시알릴올리고당 강화 나노여과 농축액은 증발을 거쳐서 농축된 농축액을 생성한다. 선택적으로, 증발 전에 역삼투 및/또는 나노여과가 수행된다.
효소 반응은 β-갈락토시다아제를 사용하여 수행되어 글루코오스와 갈락토오스를 생성하거나 또는 GOS를 생성한다.
효소 생성물은 탈색과 여과를 거쳐서 시알릴올리고당 강화 액체 추출물을 생성한다.
액체 추출물은 선택적으로 건조되어 건조 추출물을 생성한다. 선택적으로, 액체 추출물은 건조 전에 결정화된다.
3. 방법 C
락토오스 결정화로부터 모액을 포함하는 시알릴올리고당 함유 재료가 제공된다.
공급원 재료는 67℃보다 높은 온도에서 적어도 2분 동안 가열되어 모액 내의 미네랄을 침전시킨다.
공급원 재료는 300 Da 내지 2㎛의 공극 크기/MWCO를 갖는 막을 사용하여 50℃ 내지 90℃, 1 ~ 6 bar에서 수행된 세라믹 여과를 거쳐서 불용성 미네랄과 단백질을 제거한다.
탈염된, 단백질 제거 재료는 β-갈락토시다제와 효소 반응 단계를 거쳐서 락토오스를 갈락토오스와 글루코오스로 분해한다.
재료는 100 ~ 250 Da의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 25 ~ 55℃, 30 ~ 50 bar에서 수행된 나노여과/투석여과를 거쳐서 갈락토오스, 글루코오스 및 가용성 미네랄을 제거한다.
시알릴올리고당 강화 나노여과 농축액은 증발을 거쳐서 농축된 농축액을 생성한다. 선택적으로, 증발 전에 역삼투 및/또는 나노여과가 수행된다.
선택적으로, 제2 효소 반응은 β-갈락토시다아제를 사용하여 수행되어 글루코오스와 갈락토오스를 생성하거나 또는 GOS를 생성한다.
농축된 농축액 또는 효소 생성물은 탈색 및 선택적으로 여과를 거쳐서 시알릴올리고당 강화 액체 추출물을 생성한다.
액체 추출물은 선택적으로 건조되어 건조 추출물을 생성한다. 선택적으로, 액체 추출물은 건조 전에 결정화된다.
4. 방법 D
락토오스 결정화로부터 모액을 포함하는 시알릴올리고당 함유 재료가 제공된다.
공급원 재료는 67℃보다 높은 온도에서 적어도 2분 동안 가열되어 모액 내의 미네랄을 침전시킨다.
공급원 재료는 300 Da 내지 2㎛의 공극 크기/MWCO를 갖는 막을 사용하여 50 ~ 90℃, 1 ~ 6 bar에서 수행된 세라믹 여과를 거쳐서 불용성 미네랄과 단백질을 제거한다.
탈염된, 단백질 제거 재료는 100 ~ 250 Da의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 25 ~ 55℃, 30 ~ 50 bar에서 수행된 나노여과/투석여과를 거쳐서 당과 가용성 미네랄을 제거한다.
시알릴올리고당 강화 나노여과 농축액은 증발을 거쳐서 농축된 농축액을 생성한다. 선택적으로, 증발 전에 역삼투 및/또는 나노여과가 수행된다.
제2 효소 반응은 β-갈락토시다아제를 사용하여 수행되어 글루코오스와 갈락토오스를 생성하거나 또는 GOS를 생성한다.
효소 생성물은 탈색 및 선택적으로 여과를 거쳐서 시알릴올리고당 강화 액체 추출물을 생성한다.
액체 추출물은 선택적으로 건조되어 건조 추출물을 생성한다. 선택적으로, 액체 추출물은 건조 전에 결정화된다.
5. 결과
방법 A ~ D에 의해 생성된 시알릴올리고당 강화 추출물의 조성은 표 1에 기술된다.
표 1: 방법 A ~ D에 의해 생성된 시알릴올리고당 함유 추출물의 조성
[표 1]
Figure pct00004
실시예 2
인지에 대한 시알릴올리고당 강화 조성물의 효과를 측정하기 위해 동물 모델(새끼 돼지)이 사용되었다.
1. 동물 모델
새끼 돼지의 뇌 구조와 기능은 인간 조산아의 것과 아주 비슷하다 (Pond, et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 2000. 223(1): p. 102-8; Moughan, et al., World Rev. Nutr. Diet, 1992. 67: p. 40-113).
인간과 비슷한 갓난 새끼 돼지는 덜 발육되고 그것의 체중은 그것의 성숙한 체중에 비해 상대적으로 작다. 이러한 이유 때문에, 갓난 새끼 돼지와 저체중아는 모두 분만 후 발달 결손에 취약하다. 부당 경량아(small for gestational age, SGA)(0.7~1.0 kg BW)로 태어난 자연 분만된 새끼 돼지는 공간 학습 결손 및 백질의 비정상적인 발달을 갖는 것으로 보고되었다 (Radlowski et al., PLoS One, 2014. 9(3): p. e91951). 새끼 돼지는 SGA 관련 인지 결손 및 잠재적인 개입을 조사하는 데 사용될 수 있는 다루기 용이한 번역 모델(translational model)이다. 또한, 새끼 돼지의 소화계는 인간 유아와 비슷한 생리학 및 해부학적 구조를 공유하고, 비교 가능한 영양 요건을 갖는다.
2. 시험 설계
3일된 가축용 수컷 새끼 돼지(n=48)는 3개의 그룹 중 하나의 그룹으로 무작위 분류되고(n=16/그룹) 3 내지 37일 연령의 상이한 시알릴올리고당을 포함하는 조제분유가 수유되었다. 시험 그룹은 표 2에 기술되어 있다.
새끼 돼지는 12시간 명(08:00-20:00)과 암(20:00-08:00) 주기로 온도 조절된 방에서 펜당 2마리씩 수용되었다.
180g의 SL 강화 우유 분말(또는 대조를 위한 플레인 우유 분말)이 850mL의 온수와 혼합되어 제제를 형성하였다. 그 다음에, 새끼 돼지는 처음 2주 동안은 285mL의 조제분유/kg/일, 및 나머지 주 동안에는 230mL의 조제분유/kg/일을 8:00h, 13:00h, 18:00h 및 22:30h에 받았고, 최종 수유시 추가 50mL의 조제분유/kg/일이 공급되었다.
표 2: 시험 그룹
[표 2]
Figure pct00005
체중, 우유 섭취량 및 새끼 돼지의 건강 상태는 매일 평가되었다. 적혈구(RBC)에서 코르티솔과 시알릴올리고당 수준을 측정하기 위해 안락사 때에 혈액 샘플이 채취되었다.
3. 뇌 샘플 채취
38 ~ 39일의 연령에, 새끼 돼지는 MRS 스캔을 위해 2 ~ 3.5% 이소플루란의 마취로부터 회복되지 못하고 레타바브(lethabarb)로 주사하여 안락사되었다. 뇌의 다른 영역에서 조직 샘플을 채취되고 -80℃에서 저장되었다. 이전에 기술된 방법을 사용하여 이들 샘플에 대해 분석이 수행되었다 (참고: Chen, et al. Molecular Neurobiology 2015.　52(1): p. 256-269; Chen et al., Br. J. Nutr., 2014. 111(2): p. 332-41; Wang et al., Am. J. Clin. Nutr., 2007. 85(2): p. 561-9).
4. 판별 검사
4.1 방법
8-아암 방사형 미로를 사용하여 '용이한' 작업(작업 1)과 더 '어려운' 작업(작업 2)의 두 개의 시험이 수행되었다.
양쪽 작업에 대해, 하나의 아암에는 접근 가능한 우유가 제공되고 나머지 7개의 아암에는 접근 불가능한 우유가 제공되어, 모든 아암은 후각 학습을 막기 위해 동일한 냄새를 갖는다.
양쪽 작업에 대해, 세 개의 검은 점으로 이루어진 시각적 단서는 아암에 접근 가능한 우유를 갖는 문에 놓인다.
작업 1에 대해, 하나의 검은색 점의 시각적 단서는 접근 불가능한 우유를 갖는 나머지 7개의 문 위에 놓였다. 작업 2에 대해, 두 개의 검은 점을 갖는 시각적 단서가 나머지 7개의 문 위에 놓였다.
각 작업에 대한 40번의 시험은 23일에 시작하여 10일 동안 수행되었다. 각각의 새끼 돼지는 개별적으로 8-아암 방사형 미로 안으로 도입되었다.
학습 능력의 평가는 시각적 단서를 성공적으로 학습하기 위해 취해진 시도의 횟수를 기초로 측정되었다. 학습은 각 시험 동안 접근 가능한 우유 아암을 찾을 때 실수와 성공의 횟수를 사용하여 정량화되었다. 새끼 돼지가 들어오거나 잘못된 문을 통해 그 전체 머리를 넣을 때마다 실수가 등록되었다. 새끼 돼지가 올바른 문에 들어올 때 성공이 등록되었다. 시각적 단서를 학습한 기준은 세 번의 연속 시도에서 최대 한 번의 실수이다. 학습과 기억 시험 동안 오버헤드 비디오 카메라가 계속해서 녹화하고 훈련된 관찰자가 결과를 수동으로 녹화한다. 모든 시험은 시도 그룹에 블라인드 처리된 훈련된 직원에 의해 수행된다. 결과는 비디오 자료의 독립적인 분석에 의해 확증되었다.
스트레스를 줄이고 새끼 돼지가 시험 프로토콜과 익숙해지도록, 동일한 펜의 2마리의 새끼 돼지는 학습 기간의 시작에 미로에 들어가도록 허용되었다.
4.2 결과
그룹 사이에 5분의 단기 기억 시험에서는 유의한 차이가 없었다. 도 3에 도시된 바와 같이, 그룹 3의 새끼 돼지가 3시간 장기 기억 시험에서 더 잘 수행하였다.
도 4에 도시된 바와 같이, 3 그룹 새끼 돼지는 Cox 회귀 분석을 사용하여 P<0.05인 네 번 연속 시도에서 한 번 이하의 실수라는 기준을 기초로 난이도 작업에서 더욱 잘 수행하였다.
5. 자기 공명 분광기(MRS)를 사용하는 뇌의 구조 및 대사 평가
5.1 방법
국소적 대뇌 대사를 평가하기 위해 양성자 자기 공명 분광법(1H-MRS)이 수행되었다. 생체 내 MRI는 출생 후 새끼 돼지 뇌의 형태학적 이미징을 가능하게 하는 강력한 도구이다.
간략히, 동물은 RF 송신과 수신 모두를 위해 15-채널 RF 코일을 사용하는 3T MR 스캐너(Siemens Skyra, 에르랑겐)의 우측 측면 위치에 놓였다. 전신마취기(Anaesthesia Machine)(MPI, 미국)를 사용하여 전체 MRI 스캐닝 과정 동안 2 ~ 3.5% 이소플루란으로 마취가 유지되었다. 복셀(voxel) 크기는 전두엽 회색질 및 백질에서 15×14×20 mm3이었다 (좌측에서 우측으로 15 mm, 상부에서 하부로 14 mm, 전방에서 후방으로 20 mm)(도 1). 국소화된 단일 복셀 스핀 에코 포인트 분해 분광법(PRESS) 시퀀스를 사용하여 MRS가 수행되었다. 이 PRESS 시퀀스는, 90°-γ1-180°-(γ2+γ3)-180°-γ4-SE, γ1=γ2 및 γ3=γ4의 형태를 갖는 세 개의 슬라이스 선택성 RF 펄스를 갖는다. 이 PRESS 시퀀스에서 SE의 TE는 γ1+γ2+γ3+γ4와 동일하다. 이 연구에서, TR은 2000 ms였고, 세 개의 TE: 35 ms(도 1b), 135 ms(도 1c) 및 270 ms(도 1d)가 사용되었다.
대뇌 백질, 피질 회색질 및 선조체(striatum)와 같은 기저 구조의 절대 부피를 정량화하기 위해, 3D 부피 MRI를 사용하여 대뇌 발달이 평가되었다.
뇌의 미세구조 조직화와 발달을 평가하기 위해 확산 강조 영상(Diffusion weighted-imaging, DWI)과 확산 텐서 영상(diffusion-tensor imaging, DTI)이 수행되었다.
대뇌 발달의 변화는 3.0 테슬라(Tesla) 스캐너(Siemens)를 사용하는 생체 내 MR 기술을 사용하여 평가되었다. 분석 방법은, 전뇌 템플릿, 조직 특이성 확률 맵, 및 해부학적 라벨링 맵(Gan 등의, Magn Reson Imaging 32.10 (2014): 1396-1402에서 보고된)을 사용하는 H1-MR 분광법(국소성 대뇌 대사)과 함께, 3D 부피 MRI(거대구조 평가), 확산 강조 영상, 및 확산 텐서 영상(미세구조 평가)을 포함했다.
5.2 결과
3 그룹은 글루타메이트(Glu), 미오-이노시톨(Ins), 및 글루타메이트 + 글루타민(Glx)의 절대 레벨의 상당한 증가를 나타내었다. 또한, 전두엽 Ins, N-아세틸아스파테이트(NAA), 총 NAA, 총 콜린(Tcho), 총 글루타티온(Glth), 포스포릴콜린(PCh), 및 총 백질 부피 또는 전뇌 부피 사이에 유의적 양의 상관관계가 있었다 (P<0.01).
글루타메이트는 뇌의 주요 흥분성 신경 전달 물질이고, 학습과 기억의 정두엽 해마 메커니즘에서 중요한 역할을 한다. 연구에 의하면, 빠른 학습자는 느린 학습자와 비교해서 조절된 글루타메이트의 초기 피크를 특징으로 한다 (Stanlet J et al., Functional dynamics of hippocampal glutamate during associative learning assessed with in vivo 1H functional magnetic resonance spectroscopy. 2017 Neuroimage 153: 1: 189-197).
미오-이노시톨은 학습과 기억을 포함하는 뇌 발달의 역할에 관련되었다. 우울증을 가진 환자에서는 해마와 편도체에서 비정상적으로 낮은 미오-이노시톨과 글루타메이트 수치가 검출되었다. 중앙 전두전엽 피질과 편도체에서 글루타메이트 수치는 실행 기능 및 기억 기능을 갖는 해마에서의 기능과 유의한 상관관계를 갖는다 (Shirayama Y et al., Myo-inositol, Glutamate, and Glutamine in the Prefrontal cortex, Hippocampus and amygdala in major depression 2017 Biological Psychiatry: Cognitive Neuroscience and Neuroimaging 2; 2: 196-204). 해마 절대 미오-이노시톨의 크게 감소된 농도는 정신병의 위험이 높은 환자에게서 감지되었다 (Bakker et al., Hippocampal myo-inositol and glutamate concentrations are predictive of positive symptom severity in ultra-high risk for psychosis. 2013 European Neuropschoparmacology 23; 2: page S448).
증가된 GPC(알파 글리세릴포스포릴콜린)에 대한 경향이 또한 입증되었다. GPC는 신경보호에 관련되었고 {Plangar et al, Journal of Neuro-Oncology (2014) 119:2: 253-261}, 인지 기능장애를 갖는 환자에서 이익이 제공되었으며 {Scapicchio P.(2013) International Journal of Neuroscience 123; 7}, 인지 수행을 향상시키고 인지 저하를 늦추기 위한 기능 식품으로서 희망을 보여주었다 (DeFina P et al., (2013) Journal of Aging Research).
표 2. 상이한 그룹, A. TE 35, B. TE 135 및 TE 270에서 대사 산물의 평균(SE) 절대 농도
[표 2]
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
표 2에서 상기 도시된 상당한 차이(P<0.05)는 다중 비교를 위해 본페로니(Bonferroni) 조절된 일반적인 선형 모델(일변수 ANOVA)을 기초로 한다.
따라서, 시알릴올리고당은 새끼 돼지의 신경 발달을 최적화하기 위해 필요한 많은 중요 뇌 대사산물과 신경 전달 물질을 변경시킬 수 있다.
6. 정량적인 생화학적 분석
6.1 방법
폴리시알산(polySia)의 수준이 측정되었다. 폴리시알산은 미발달된 뇌에서 시공간적으로 신경 세포 부착 분자(NCAM)를 수정하는 시알산의 고유한 중합체이고, 세포 이동, 신경 성장, 축삭 유도, 시냅스 가소성, 및 정상적인 신경 회로 및 신경 발생의 발달에 관여된다. 폴리시알산 발현은, 신경 가소성, 신경 연결의 리모델링, 또는 신경 생성이 진행되는 후각 벌브, 해마, 부뇌실 구역, 시상(thalamus), 전두전엽 피질, 및 편도체에서 발견된다. 폴리시알산은 신경영양 인자(BDNF), 성장 인자(FGF2), 및 신경 전달 물질(도파민)과 같은 다양한 신경학적으로 활성인 분자를 조절하여 이들의 관여된 신호전달(signaling)을 조절할 수 있다.
면역 형광법(Immunofluorescence)은 생화학적 분석을 실행하기 위해 사용되었다. 새끼 돼지의 해마와 전두엽 피질로부터 8㎛ 두께의 연속적인 관상 절편이 동결 마이크로톰(freezing microtome)을 사용하여 준비되었다. 뇌 절편은 얼음으로 냉각된 4% 파라포름알데히드에서 15분 동안 고정되고, 인산염 완충 식염수(PBS)로 헹구어지며, 0.3% Triton X-100으로 30분 동안 투과된 다음, PBS 중의 0.3% 염소 세럼으로 블로킹되었다 (RT). 그 다음에, 절편은, polySia-NCAM의 폴리시알산 부분을 검출하는 데 특이성이 있는 일차 항체(1:200; MAB5324, Millipore, 미국)로 밤새(4℃) 배양되었다. PBS로 세척한 후, 절편은 1시간 동안 실온에서 Alexa Fluor 488-컨쥬게이티드 이차 항체(1:200; 115-545-075, Jackson ImmunoResearch, 미국)로 배양되었다. 모든 절편은 DAPI(H-1200, VECTOR laboratories, 미국)로 대비염색되었다. 공초점 현미경(confocal microscope)을 사용하여 영상이 얻어지고 분석되었다.
이전 방법(Chen 2014, Zhu 2015)에 따라 polySia-NCAM 발현 수준 및 기타 문제 마커를 분석하기 위해 웨스턴 블롯(Western blot)이 사용되었다. 일차 항체(anti-polySia-NCAM 항체, MAB5324, Millipore)의 희석은 1:1000이었고, GAPDH는 각 겔 위에 실린 단백질의 양에 대한 대조군으로 사용되었고 0.05 ㎍/mL으로 항 GAPDH mAb(MAB5718, R&D System, 미국)를 사용하여 검출되었다. 이차 항체(anti-mouse lgG, A4416, Sigma-Aldrich, 미국)는 1:10000의 희석으로 사용되었다. 단백질 밴드의 정량화는 Image Analyses Software(Quantity One, Bio-Rad, 미국)를 사용하여 막을 스캐닝함으로써 실행되었다. 모든 막 위에서 밴드의 밀도는 불포화 조건 하에서 결정되었다.
6.2 결과
웨스턴 블롯 방법을 사용하는 그룹 사이에서 해마의 polySia-NCAM 발현에 유의한 차이가 없었다. 그러나, 대조군과 비교하여, 두 개의 치료 그룹에서 전두엽 피질에 상당히 더 큰 폴리시알산의 발현이 있었다 (P<0.001, 일방 ANOVA, 도 4).

Claims (61)

  1. 시알릴올리고당, 탄수화물 및 미네랄을 포함하는 액체 공급원(liquid source)으로부터 시알릴올리고당을 제조하는 방법에 있어서,
    상기 액체 공급원이,
    a) 상기 액체 공급원을 약 67℃의 온도로 가열하는 단계,
    b) 열처리된 액체 공급원을
    (i) 약 35 내지 약 95℃의 온도에서 내열성 필터로 여과 단계를 거치게 하여 제1 농축액(retentate)과 제1 투과액(permeate)을 생성하거나, 또는
    (ii) 원심 분리를 거치게 하여 경량 상(light phase)과 중량 상(heavy phase)을 생성하고, 상기 경량 상을 약 50 내지 약 70℃의 온도에서 여과시켜 제1 농축액과 제1 투과액을 생성하는, 단계,
    c) 상기 제1 투과액을 나노여과, 또는 나노여과와 투석여과를 거치게 하여, 제2 농축액과 제2 투과액을 생성하는 단계, 및
    d) 상기 제2 농축액을 농축시켜, 시알릴올리고당 함유 추출물을 생성하는 단계를
    포함하는 공정을 거치게 함으로써, 시알릴올리고당, 탄수화물 및 미네랄을 포함하는 액체 공급원으로부터 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    (b)(i)의 상기 여과 단계는 약 50 내지 약 90℃에서 실행되어 제1 농축액과 제1 투과액을 생성하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    (b)(i)의 상기 여과 단계는 약 50 내지 약 70℃에서 실행되어 제1 농축액과 제1 투과액을 생성하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 내열성 필터는 세라믹 필터인, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    (b)(ii)의 상기 여과 단계는 약 55 내지 약 70℃에서 실행되어 제1 농축액과 제1 투과액을 생성하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    (b)(ii)의 상기 여과 단계는 약 60 내지 약 70℃에서 실행되어 제1 농축액과 제1 투과액을 생성하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    (b)(ii)의 상기 여과 단계는 내열성 필터를 사용하여 실행되는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 내열성 필터는 세라믹 필터인, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 액체 공급원은 둘 이상의 시알릴올리고당 함유 스트림(stream)의 조합물을 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 액체 공급원은 락토오스 결정화의 부산물, 유제품 투과액, 유장(whey), 유장 투과액, 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 조합물로서 모액을 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  11. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 열 처리는 약 67 내지 약 100℃의 온도에서 실행되는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  12. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 액체 공급원의 상기 열 처리는 약 2 내지 약 20분 동안 실행되는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  13. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 액체 공급원의 상기 열 처리는 상기 액체 공급원에 존재하는 미네랄 중 약 2% 내지 약 10%를 침전시키는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  14. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 투과액은, 상기 액체 공급원 내의 미네랄 중 약 96% 미만, 및/또는 상기 액체 공급원 내의 단백질 중 약 20% 미만을 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 농축액은, 상기 액체 공급원 내의 미네랄 중 적어도 약 3%, 및/또는 상기 액체 공급원 내의 단백질 중 적어도 약 80%를 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  16. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 여과 단계는, 상기 액체 공급원과 비교해서, 상기 제1 투과액 내의 불용성 미네랄과 단백질의 양의 감소를 일으키는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  17. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 내열성 필터는 세라믹 필터인, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  18. 제18항에 있어서,
    상기 열 처리된 액체 공급원은 세라믹 필터로 한외여과(ultrafiltration)를 거치는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  19. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 하나의 글리코시드 가수분해효소(hydrolase) 또는 폴리메라아제(polymerase) 효소 반응을 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  20. 제20항에 있어서,
    a) 상기 내열성 필터로부터의 상기 여과 단계의 상기 제1 투과액,
    b) 상기 경량 상,
    c) 상기 농축된 제2 농축액, 또는
    d) (a) 내지 (c) 중 임의의 둘 이상의 조합물은
    효소 반응을 거치는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  21. 제20항 또는 제21항에 있어서,
    상기 효소 반응은,
    ● 상기 공급원 내의 적어도 하나의 이당류의 분자 크기를 증가시켜 적어도 하나의 올리고당을 생성하거나, 또는
    ● 상기 공급원 내의 적어도 하나의 이당류의 분자 크기를 감소시켜 하나 이상의 단당류를 생성하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  22. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 β-갈락토시다아제(galactosidase)를 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  23. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 이당류는 락토오스를 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  24. 제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단당류는 갈락토오스 또는 글루코오스를 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  25. 제20항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 올리고당은 하나 이상의 갈락토올리고당을 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  26. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 경량 상의 여과는 한외여과인, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  27. 제27항에 있어서,
    상기 한외여과는 약 50℃ 내지 약 70℃, 바람직하게는, 약 55℃ 내지 약 65℃의 온도에서 수행되는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  28. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 나노여과는 약 25℃ 내지 약 55℃, 바람직하게는 약 50℃의 온도에서 수행되는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  29. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제2 투과액은 가용성 미네랄과 적어도 하나의 단당류 또는 이당류를 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  30. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제2 농축액은,
    상기 제1 투과액 내의 미네랄의 약 70% 미만, 또는
    상기 제1 투과액 내의 비-시알릴올리고당 당류의 약 50% 미만을 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  31. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제2 농축액은,
    a) 적어도 약 7 중량%의 시알릴올리고당,
    b) 적어도 약 0.2 중량%의 중성 올리고당,
    c) 약 5 중량% 미만의 단백질 및 비단백질 질소,
    d) 약 80 중량% 미만의 비-시알릴올리고당 당류, 및
    e) 약 5 중량% 미만의 회분을
    포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  32. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제2 투과액은,
    상기 제1 투과액 내의 미네랄의 적어도 약 30%, 또는
    상기 제1 투과액 내의 비-시알릴올리고당 당류의 적어도 약 50%를
    포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  33. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제2 농축액은 나노여과 또는 역삼투 중 어느 하나를 거쳐서 제3 농축액을 생성하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  34. 제34항에 있어서,
    상기 농축된 제2 농축액, 또는 상기 제3 농축액은 탈색을 거치는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  35. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    ● 상기 시알릴올리고당 함유 추출물을 결정화하여 결정화된 시알릴올리고당 함유 추출물을 제조하는 단계, 및
    ● 상기 시알릴올리고당 함유 추출물 또는 결정화된 시알릴올리고당 함유 추출물을 건조시켜 건조된 시알릴올리고당 함유 추출물을 제조하는 단계를
    더 포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  36. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 시알릴올리고당 함유 추출물은, 건조 고형물 기준으로,
    ● 적어도 약 7 중량%의 시알릴올리고당,
    ● 적어도 약 0.2 중량%의 중성 올리고당,
    ● 약 5 중량% 미만의 단백질 및 비단백질 질소,
    ● 약 80 중량% 미만의 비-시알릴올리고당 당류, 및
    ● 약 5 중량% 미만의 회분을
    포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  37. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 시알릴올리고당 함유 추출물은, 건조 고형물 기준으로,
    ● 적어도 약 5 중량%의 3'-시알릴락토오스, 및
    ● 적어도 약 2 중량%의 6'-시알릴락토오스를
    포함하는, 시알릴올리고당을 제조하는 방법.
  38. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생성된 시알릴올리고당 함유 추출물.
  39. 시알릴올리고당 강화 조성물(sialyloligosaccharide-enriched composition)에 있어서,
    건조 고형물 기준으로,
    ● 다음을 포함하는 적어도 약 5 중량%의 총 시알릴올리고당:
    i) 총 시알릴올리고당 중 적어도 약 5 중량%의 3'-시알릴락토오스,
    ii) 총 시알릴올리고당 중 적어도 약 2 중량%의 6'-시알릴락토오스,
    iii) 총 시알릴올리고당 중 적어도 약 0.01 중량%의 디시알릴락토오스,
    iv) 총 시알릴올리고당 중 적어도 약 0.01 중량%의 시알릴락토사민,
    ● 적어도 약 0.5 중량%의 유리 시알산,
    ● 적어도 약 0.2 중량%의 중성 올리고당,
    ● 약 25 중량% 미만의 단백질 및 비단백질 질소,
    ● 시알릴락토오스를 포함하지 않는 약 80 중량% 미만의 당, 및
    ● 약 5 중량% 미만의 회분(ash)을
    포함하는, 시알릴올리고당 강화 조성물.
  40. 제40항에 있어서,
    건조 고형물 기준으로, 6'-시알릴락토오스의 양에 비해 더 많은 양의 3'-시알릴락토오스를 포함하는, 시알릴올리고당 강화 조성물.
  41. 제40항 또는 제41항에 있어서,
    약 65:1 내지 약 1.5:1, 약 15:1 내지 약 1.5:1, 또는 약 8:1 내지 약 1.5:1의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하는, 시알릴올리고당 강화 조성물.
  42. 영양 제제(nutritional formulation)에 있어서,
    제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물, 또는 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항의 시알릴올리고당 강화 조성물을 포함하는, 영양 제제.
  43. 제43항에 있어서,
    상기 영양 제제는, 유아용 조제분유, 후속 조제분유, 성장용 조제분유, 소아용 조제분유, 모유 강화제, 아동의 식품 또는 음료, 산모용 보충제, 산모용 영양 제제, 발효 식품, UHT 우유, UHT 드링킹 요구르트, 산성화된 우유 음료, UHT 분말, 의료 식품, 스포츠 영양 제제, 또는 노령 또는 고령 인구를 위한 제제인, 영양 제제.
  44. 제43항 또는 제44항에 있어서,
    하나 이상의 유제품 지질, 하나 이상의 갈락토올리고당, 하나 이상의 프로바이오틱 균주, 하나 이상의 단백질 가수분해물, 락토페린, 유지방 구상 막(MFGM) 제제, 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 조합물을 더 포함하는, 영양 제제.
  45. 제45항에 있어서,
    상기 유제품 지질은, 버터밀크, 고지방 유장 단백질 농축액, 베타-세럼, 버터 세럼, 또는 이들 중 임의의 둘 이상의 조합물을 포함하는, 영양 제제.
  46. 제45항 또는 제46항에 있어서,
    상기 프로바이오틱 균주는, 비피도박테륨 락티스 또는 락토바실러스 람노서스 균주, 또는 비피도박테륨 락티스와 락토바실러스 람노서스의 조합물을 포함하는, 영양 제제.
  47. 제47항에 있어서,
    상기 비피도박테륨 락티스 균주는 비피도박테륨 락티스 HN019(DR10™)를 포함하는, 영양 제제.
  48. 제47항에 있어서,
    상기 락토바실러스 람노서스 균주는 락토바실러스 람노서스 HN001(DR20™)을 포함하는, 영양 제제.
  49. 6개월 미만 연령의 유아에게 영양을 제공하기 위한 조성물에 있어서,
    10:1 내지 약 1.5:1의 3'-시알릴락토오스 대 6'-시알릴락토오스의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하는, 조성물.
  50. 약 6개월 내지 약 12개월 연령의 유아에게 영양을 제공하기 위한 조성물에 있어서,
    약 10:1 내지 약 1.5:1의 시알릴락토오스 대 6'-시알릴락토오스의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하는, 조성물.
  51. 12개월 이상 연령의 유아에게 영양을 제공하기 위한 조성물에 있어서,
    약 10:1 내지 약 1.5:1의 시알릴락토오스 대 6'-시알릴락토오스의 비로 3'-시알릴락토오스와 6'-시알릴락토오스를 포함하는, 조성물.
  52. 뇌 기능 또는 뇌 발달을 유지하거나 증가시키는 데 사용하기 위한, 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조되거나, 또는 제40항 내지 제42항 또는 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 청구된 시알릴올리고당 함유 추출물 또는 조성물, 또는 제43항 내지 제49항 중 어느 한 항의 영양 제제.
  53. 뇌 기능 또는 뇌 발달을 유지하거나 증가시키는 비치료적 방법에 있어서,
    제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물, 제40항 내지 제42항 또는 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항의 조성물, 또는 제43항 내지 제49항 중 어느 한 항의 영양 제제의 유효량을, 그렇지 않으면 건강한 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는, 비치료적 방법.
  54. 제54항에 있어서,
    상기 시알릴올리고당 함유 추출물은,
    a) 시알산의 하나 이상의 구조적인 글리코컨쥬게이트,
    b) 유리 시알산, 또는
    c) (a)와 (b) 모두를
    포함하는, 비치료적 방법.
  55. 제54항 또는 제55항에 있어서,
    상기 추출물, 조성물 또는 영양 제제는,
    a) 지연된 뇌 발달을 치료 또는 예방하고,
    b) 신경 세포의 생존력 또는 기능을 유지하며,
    c) 인지 발달을 유지하거나 증가시키고,
    d) 지연된 인지 발달을 예방하며,
    e) 인지 수행을 유지하거나 증가시키고,
    f) 인지 저하를 예방하며,
    g) 학습, 기억 또는 주의 지속시간을 유지하거나 증가시키고,
    h) 학습 능력, 기억 또는 주의 지속시간의 저하를 예방하며,
    i) 스트레스에 대처하는 능력을 유지하거나 증가시키고,
    j) 뇌 기능의 저하를 예방하며,
    k) 뇌에서 강글리오시드의 수준을 유지하거나 증가시키고,
    l) 신경 세포 부착 분자(NCAM)의 수준을 유지하거나 증가시키며,
    m) 뇌에 대한 혈액, 영양소 또는 산소 흐름을 유지하거나 증가시키고,
    n) 스냅스생성(synaptogenesis)을 유지하거나 증가시키며,
    o) 소화관/뇌 축의 활동을 유지하거나 증가시키고,
    p) 구뇌(old brain)에서 신경발생을 유지하거나 증가시키며,
    q) 백질 부피(white matter volume)를 유지하거나 증가시키고, 또는
    r) a) 내지 q) 중 임의의 둘 이상의 조합을 위해 투여되는, 비치료적 방법.
  56. 제54항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 피험자는 태아, 유아 또는 아동 피험자인, 비치료적 방법.
  57. 제54항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 추출물, 조성물 또는 영양 제제는 태아 피험자에서 뇌 기능 또는 발달을 유지하거나 증가시키기 위해 임신 중에 산모에게 투여되는, 비치료적 방법.
  58. 제54항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 추출물, 조성물 또는 영양 제제는 유아 피험자에서 뇌 기능 또는 발달을 유지하거나 증가시키기 위해 모유 수유모에게 투여되는, 비치료적 방법.
  59. 연령 관련 인지 저하, 치매, 알츠하이머 병, 혈관 질병, 전측두엽 변성(FTLD), 루이소체 치매(Dementia with Lewy bodies), 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅턴병, 조현병과 관련된 인지 손상, 화학 요법으로 유발된 신경병증, 다운 증후군, 코르사코프 병, 뇌성 마비, 간질, 신경성 허혈, 신경성 재관류 손상, 신경 외상, 신경성 출혈, 신경 감염, 뇌졸중, 독성 물질에 대한 신경 세포의 노출, 연령 관련 정신 장애, 불안 장애, 연령 관련 우울증, 미세 혈관 장애(당뇨병, 저혈압, 뇌졸중 유발성 혈관성 치매, 및 비만증과 같은)와 관련된 치매, 면역계의 장애와 관련된 치매, 중추 신경계(CNS) 장애와 관련된 치매, 저혈압과 관련된 치매, 비만 또는 혈관성 치매와 관련된 치매 중 임의의 하나 이상과 관련된 경증 인지 손상을 치료하는 방법에 있어서,
    제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물, 제33항 내지 제36항 또는 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항의 추출물 또는 조성물, 또는 제37항 내지 제43항 중 어느 한 항의 영향 제제의 유효량을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는, 경증 인지 손상을 치료하는 방법.
  60. 연령 관련 인지 저하, 치매, 알츠하이머 병, 혈관 질병, 전측두엽 변성(FTLD), 루이소체 치매, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅턴병, 조현병과 관련된 인지 손상, 화학 요법으로 유발된 신경병증, 다운 증후군, 코르사코프 병, 뇌성 마비, 간질, 신경성 허혈, 신경성 재관류 손상, 신경 외상, 신경성 출혈, 신경 감염, 뇌졸중, 독성 물질에 대한 신경 세포의 노출, 연령 관련 정신 장애, 불안 장애, 연령 관련 우울증, 미세 혈관 장애(당뇨병, 저혈압, 뇌졸중 유발성 혈관성 치매, 및 비만증과 같은)와 관련된 치매, 면역계의 장애와 관련된 치매, 중추 신경계(CNS) 장애와 관련된 치매, 저혈압과 관련된 치매, 비만 또는 혈관성 치매와 관련된 치매, 유아기에 발병하는 심각한 발달 지연(N-아세틸뉴라민산을 인코딩하는 유전자에 의한 돌연변이와 관련된) 및 테를 두른 공포(rimmed vacuole)를 수반하는 원위 근육병증(DMRV) 중 임의의 하나 이상과 관련된 경증 인지 손상을 치료하기 위한, 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물, 제40항 내지 제42항 또는 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항의 조성물, 또는 제43항 내지 제49항 중 어느 한 항의 영향 제제.
  61. 연령 관련 인지 저하, 치매, 알츠하이머 병, 혈관 질병, 전측두엽 변성(FTLD), 루이소체 치매, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅턴병, 조현병과 관련된 인지 손상, 화학 요법으로 유발된 신경병증, 다운 증후군, 코르사코프 병, 뇌성 마비, 간질, 신경성 허혈, 신경성 재관류 손상, 신경 외상, 신경성 출혈, 신경 감염, 뇌졸중, 독성 물질에 대한 신경 세포의 노출, 연령 관련 정신 장애, 불안 장애, 연령 관련 우울증, 미세 혈관 장애(당뇨병, 저혈압, 뇌졸중 유발성 혈관성 치매, 및 비만증과 같은)와 관련된 치매, 면역계의 장애와 관련된 치매, 중추 신경계(CNS) 장애와 관련된 치매, 저혈압과 관련된 치매, 비만 또는 혈관성 치매와 관련된 치매 또는 유아기에 발병하는 심각한 발달 지연(N-아세틸뉴라민산을 인코딩하는 유전자에 의한 돌연변이와 관련된) 및 테를 두른 공포를 수반하는 원위 근육병증(DMRV) 중 임의의 하나 이상과 관련된 경증 인지 손상을 치료하기 위한 제제의 제조에서의, 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 시알릴올리고당 함유 추출물, 또는 제33항 내지 제36항 또는 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
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