KR20190040913A

KR20190040913A - 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20190040913A
Application number: KR1020180120619A
Authority: KR
Inventors: 이진태; 장영아; 김은희; 김명신; 김솔비
Original assignee: 대구한의대학교산학협력단
Priority date: 2017-10-11
Filing date: 2018-10-10
Publication date: 2019-04-19
Also published as: KR102134968B1

Abstract

본 발명은 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 조성물은 멜라닌의 생성을 억제하고 멜라닌 생성의 조절효소인 티로시나아제의 활성을 저해함으로써 피부 미백에 탁월한 효과가 있어 화장품 및 식품분야에서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물{Skin whitening composition comprising node of Lotus Rhizome extract and unripe apple extract}

본 발명은 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

생체 내에 존재하는 멜라닌은 피부의 색상을 변화시키는 주요한 생물학적 색소로서 작용한다. 피부 기저층에는 존재하는 멜라노사이트에서 멜라노좀과 멜라닌이 생성되는데 멜라닌은 멜라노좀이라는 새포에 의해 만들어진다. 피부의 멜라닌 생합성에는 다양한 기전들이 연관되어 있는데 그 중에서도 자외선에 의한 자극으로 p53유전자가 만들어 내는 알파-멜라노사이트-조절호르몬에 의한 조절과, 이 호르몬에 의해 증가된 마이크로프탈미아 연합 전이 요소(MITF)가 멜라노좀 안에 존재하는 타이로시네이즈의 활성화를 촉진하고, 활성화된 타이로시네이즈에 의해 DOPA의 하이드록실레이션 과정이 개시되며, 타이로시네이즈 하위 단백질들인 TRP1과 TRP2에 의해 멜라닌 생합성을 촉진 및 조절하게 된다. 최종 산물인 멜라닌은 표피 세포 안으로 들어가 자외선과 같은 피부 자극 물질로부터 피부세포를 보호하는 역할을 수행하게 된다. 그러나 멜라닌 합성의 과다 촉진은 피부에 과색소 침착과 염증성 침착과 같은 기전을 일으키게 된다.

사람 피부에 있는 멜라민 형성 멜라노사이트가 어떤 이유에서건 균일하게 분포되지 않으면 색소 반점이 생성되어 피부의 주변 영역에 비해 더 밝거나 어두워진다. 이러한 문제점을 해소하기 위하여 적어도 부분적으로 그러한 색소 반점을 균일하게 해주는 미백제가 사용되고 있다. 많은 피부 미백제가 다소 강력한 티로시나아제 억제제를 함유하고 있으며, 이러한 피부 미백제로는 주로 하이드로퀴논, 예를 들면 알부틴과 같은 하이드로퀴논 유도체, 비타민 C, 예를 들어 아스코르빌 팔미테이트와 같은 아스코르브산의 유도체, 코지산, 예를 들어 코지산 디팔미테이트와 같은 코지산 유도체가 특히 상업적으로 유용한 피부 및 모발 미백제로 사용되고 있다.

현재 피부 미백에 대해 알부틴(Arbutin)과 누룩산(Kojic acid)이 효과적으로 알려져 있는 대표적인 물질이다. 그러나 알부틴은 하이드로퀴논(Hydroquinone)기로 인해 멜라노사이트에 대한 독성이 있는 것으로 알려져 있고 누룩산(Kojic acid)의 경우 2.5%의 농도에서 피부염을 유발시키는 것으로 밝혀졌으며(Nakagawa M et, 1995), 1%의 농도에서도 색소접촉 피부염을 발생시킨다는 논문이 발표되었다(Juan Garcia-Gavin et, 2010). 이러한 피부독성과 부작용으로 인해 미백효과를 기대하는 물질들은 사용이 어려운 경우가 많다. 따라서, 최근에는 피부에 자극을 최소화하면서 우수한 미백효과를 기대할 수 있는 연구가 천연물에서 유래한 추출물 또는 정제된 미백물질을 중심으로 이루어지고 있다.

한국등록특허 10-0967617호 한국공개특허 10-20097-0026874호

본 발명의 목적은 우절(node of Lotus Rhizome) 추출물 및 미숙사과 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 우절(node of Lotus Rhizome) 추출물 및 미숙사과 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 우절(node of Lotus Rhizome) 추출물 및 미숙사과 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 우절(node of Lotus Rhizome) 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 우절(node of Lotus Rhizome) 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 건강식품 조성물을 제공한다.

나아가 본 발명은 우절(node of Lotus Rhizome) 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 조성물은 멜라닌의 생성을 억제하고 멜라닌 생성의 조절효소인 티로시나아제의 활성을 저해함으로써 피부 미백에 탁월한 효과가 있어 화장품 및 식품분야에서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 α-MSH를 처리한 B16F10 세포에서 멜라노사이트 밖으로 분비된 멜라닌의 양을 측정한 결과이다.
도 2는 도 1은 α-MSH를 처리한 B16F10 세포에서 멜라노사이트 내 존재하는 멜라닌의 양을 측정한 결과이다.
도 3은 α-MSH를 처리한 B16F10 세포에 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 처리한 후 티로시나아제의 mRNA 발현량를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 α-MSH를 처리한 B16F10 세포에 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 처리한 후 MITF의 mRNA 발현량를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 티로시나아제의 저해 활성 효과를 나타낸 것이다(Veh: vehicle).

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

피부 미백용 화장료 조성물

본 발명은 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 수득한 것을 특징으로 바람직하게 우절 추출물의 경우 95% 에탄올로 추출하여 수득한 것일 수 있으며, 미숙사과 추출물은 열수 추출하여 수득한 것일 수 있다.

본 발명의 용어, "미백"이란 피부의 과다 색소 침착을 억제, 저해 또는 완화시키는 것을 말한다. 피부의 과다 색소 침착은 주근깨, 기미, 자외선 노출 후 과다 색소 침착, 염증 후 과다 색소 침착, 노인흑색점, 갈색 반점 또는 검버섯 등을 포함한다.

본 발명의 용어, "유효량"이란 피부의 과다 색소 침착을 억제, 저해 또는 완화시킬 수 있는 화합물의 양을 의미한다. 본 발명의 피부 미백용 조성물에 포함되는 상기 화합물의 유효량은 피부 미백용 조성물이 제품화되는 형태, 상기 화합물이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 상기 피부 미백용 조성물이 피부의 과다 색소 침착에 따른 피부과적 치료를 위한 의약품으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 상기 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함할 수 있을 것이다. 화장품으로 제품화되는 경우에 있어서도 유효성분이 단기간 내에 피부에 머무르게 되는 메이크업 제거제, 세정제 등과 같은 워쉬-오프(wash-off) 타입의 화장품의 경우에는 비교적 높은 농도의 상기 화합물을 포함할 수 있을 것이다. 반면 유효성분이 장기간 동안 피부에 머무르게 되는 화장수, 유액, 크림, 에센스 등의 리브-온(leave-on) 타입의 화장품의 경우에는 워쉬-오프 타입의 화장품에 비해 낮은 농도의 상기 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함해도 무방할 것이다.

본 발명에 따른 피부 미백용 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 가질 수 있으며, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 조성물은 본 발명의 우절 추출물 및 미숙사과 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 피부 미백 활성 성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 피부 미백 활성 성분으로는 코지산 및 이의 유도체, 알부틴, 아스코르브산 및 이의 유도체, 하이드로퀴논 및 이의 유도체, 레조르시놀, 사이클로알카논, 메틸렌디옥시페닐 알칸올, 2,7-디니트로인다졸 또는 덩굴귤 추출물, 쌀 추출물, 감초 추출물과 같은 식물 추출물 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습체, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.

상기와 같이 피부 미백용 화장료 조성물을 의약품 또는 화장품으로 제형화할 경우, 활성 성분에 대한 담체로 작용하는 피부에 적용가능한 공지의 부형제를 포함할 수 있다. 의약품으로의 제형화시에는 [Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA]에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있으며, 화장품으로 제형화시에는 [International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed., The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995]에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있을 것이다. 상기 문헌들은 본 명세서의 일부로서 포함된다.

피부 미백용 건강식품 또는 건강기능식품 조성물

본 발명의 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 건강기능식품 및 건강식품 조성물로 사용하는 경우, 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 우절 추출물 및 미숙사과 추출물물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품 및 건강식품 조성물을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 우절 추출물 및 미숙사과 추출물물의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 및 건강식품 조성물 중의 상기 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 20 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 유지를 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 우절 추출물 및 미숙사과 추출물은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트라이톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실험예 1. 실험재료 및 방법

1.1. 세포배양

B16F10 세포(mouse melanoma cell line)는 한국세포주은행(Korea Cell Line Bank, KCLB, Seoul, Korea) 에서 분양받아 사용하였다. B16F10세포의 배양은 10% fetal bovine serum (FBS; Introgen Therapeutics, USA)과 1% penicillin/streptomycin (HycloneWP, GE Healthcare Life Sciences, USA) 100 U/ml을 첨가한 Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM; Gibco™ Thermo Fisher Scientific, USA) 배지를 사용하였으며, 37℃, 5% CO₂ incubator (Forma™ Thermo Fisher Scientific)에 적응시켜 계대 배양하였다.

1.2. 추출물 제조 및 준비

연근의 마디부분을 분리하여 우절로 표기하고 햇볕이 들지 않는 서늘한 곳에서 48시간 건조하고, 적당한 크기로 파쇄한 후, 95% 에탄올을 용매로 하여 시료중량의 10배 양을 가하여 실온에서 24 h 침지하고 상층액과 침전물을 분리하여 동일한 방법으로 3회 반복 추출하였다.

추출 후 원심분리 및 filter paper(Whatman No.1)로 여과한 다음 rotary vacuum evaporator (HS-10SP; Hahnshin S&T, Korea)를 사용하여 농축한 후 동결기(FD5525; Ilshin BioBase, Korea)로 건조하였다. 건조한 시료는 냉장실에 보관하여 사용하였다.

미숙사과는 2018년 경북 문경시 점촌동에 위치한 애플그린(applegreen)에서 제공받았으며 시료를 세척하여 과도를 이용하여 과육부분을 제외하였고 회수된 과피 300g에 10배 양의 증류수를 첨가하여 85℃에서 3시간 환류냉각 추출하였으며 시료를 원심 분리 및 여과한 다음, rotary vacuum evaporator (HS-10SP; Hahnshin S&T, Korea)를 사용하여 농축한 후 동결기(FD5525; Ilshin BioBase, Korea)로 건조하였다. 최종 시료무게는 26.2g으로 수율은 7.86%이며 시료는 냉장실에 보관하여 사용하였다.

하기 표 1과 같이 우절 추출물 및/또는 미숙 사과 추출물을 준비하였다.

	우절 추출물(μg/㎖)	미숙사과 추출물(μg/㎖)
비교예 1	20	0
비교예 2	0	20
실시예 1	20	5
실시예 2	20	10
실시예 3	20	12
실시예 4	40	25
실시예 5	60	25

1.3. 세포밖 및 세포내 멜라닌 함량 분석(extracellular & intracellular melanin content assay)

세포배양은 phenol red가 없는 배지를 이용하였다. 6-well 플레이트에 2.5 x 10⁵/ml로 각 well 당 2ml씩 분주하여 24시간 동안 플레이트에 안정화 후 대조군(vehicle)을 제외한 실험군에 비교예 1 내지 2, 실시예 1 내지 7을 72시간 동안 처리한 후, PBS로 세척한 후 멜라노사이트 밖으로 분비된 멜라닌(extracellular melanin)은 배지의 색상을 405nm에서 측정하였으며, 멜라노사이트 내에 존재하는 멜라닌(intracellular melanin)은 1N NaOH용액을 이용하여 세포 내 멜라닌을 용출시키고 80℃에서 1시간 동안 멜라닌을 용해시킨 후 ELISA를 이용하여 405nm의 흡광도로 측정하였다.

1.4. 세포 내 티로시나아제 활성 분석(intercellular tyrosinase activity assay)

세포배양은 동일하게 진행하였으며, 72시간 경과 후 PBS로 세척 후 1% Triton X-100 용액을 이용하여 4℃에서 10분 동안 인큐베이션을 진행한 후 12,000x g 로 20분 동안 원심분리하여 상층액(supernatant)만을 분리시키고, Bradford assay를 이용하여 단백질을 정량한 후 동일한 양의 세포 단백질과 1mM의 L-DOPA(2mg/ml)와 혼합한 후 ELISA를 이용하여 475nm에서 티로시나아제 활성을 측정하였다.

1.5. 총 RNA 분리 및 cDNA 합성

총 RNA의 분리는 Trizol(ambion)을 사용하였고, 6-well 플레이트에 1ml의 Trizol을 분주하고, 200 μl의 Chlorofrom 용액을 넣은 후 10초 동안 voltexing 하였다. 4℃에서 5분 동안 반응시킨 후 12,000 x g 로 15분 동안 원심분리하였다. 이후, 상층액(supernatant)을 분리하고 상층액과 동일한 양의 Isoprophanol을 넣은 후 2분 동안 반응시킨 후 12000 x g 로 20분 동안 원심분리하였다. 상층액을 제거한 후에는 500μl의 70% ethanol 을 넣은 후 7,000 x g로 10분 동안 세척하고 건조시킨 후, DEPC-treated water(ambion)을 이용하여 RNA을 녹여주었다. RT-PCR에는 2 μg의 RNA를 사용하였고, cDNA 합성은 Applied biosystem의 프로토콜(P/N:4368814)을 사용하였다.

1.6. 정량 PCR(quantitative PCR; qPCR)

qPCR에 사용된 프라이머는 Integrated DNA technologies사에 주문하여 사용하였으며, 프라이머 서열은 다음과 같다: MITF sense: 5'-CATCATCAGCCTGGAATCAA-3', antisense: 5'-TCAAGTTTCCAGAGACGGGT-3'; 및 티로시나아제 sense: 5'-TCTTCACCATGCTTTTGTGG-3', antisense: 5'-ATAGGTGCATTGGCTTCTGG-3'. 최종 부피 0.1 μg/μl의 RNA에서 합성된 cDNA는 DEPC-treated water에 1/10로 희석시킨 후 사용하였으며, 프라이머는 20nM, cDNA는 60ng을 2x sybr green mixer(Elpis)와 섞은 후, 최종 부피 20 μl로 qPCR을 수행하였고, PCR 조건은 다음과 같다: 95℃, 10분; 95℃, 0.25분, 60℃ 1분, 40cycle. Melt curve는 65℃에서 95℃까지 0.05초 마다 0.5℃씩 상승시켜 확인하였다.

실험예 2. 멜라닌의 생성 억제 결과

우절 추출물 및 미숙사과 추출물에 의한 멜라닌의 합성 억제 효능을 알아보기 위해, B1610F10 세포에 α-MSH를 1시간 전처리 후 비교예 1 내지 2, 실시예 1 내지 5의 농도로 처리된 세포를 72시간 동안 배양하고, 세포내에 존재하는 멜라닌 양과 배지로 분비된 멜라닌의 양을 분석하였다. 용출된 멜라닌은 405nm의 흡광도로 측정하여 Sigma plot을 이용하여 그래프로 나타내었고, 3회 반복 실험을 통한 통계치를 계산하였다.

그 결과, 도 1 및 2에서와 같이 세포내에 존재하는 멜라닌 양과 배지로 분비된 멜라닌의 양을 분석한 결과, 농도의존적으로 멜라닌의 양이 감소하는 것을 확인하였으며, 우절 추출물 또는 미숙 사과 추출물 단독 처리하는 경우(비교예 1 또는 2)보다 혼합 처리(실시예1 내지 5)할 경우 멜라닌의 양이 현저하게 감소하는 것을 확인하였다.

따라서, 우절 추출물 또는 미숙 사과 추출물 단독으로 사용하는 경우보다 혼합하여 사용할 경우 멜라닌의 합성을 억제하는 효능이 있어 미백에 탁월한 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 3. 멜라닌 생성 인자의 mRNA 발현량 및 단백질 발현량 분석

α-MSH를 처리한 B16F10 세포에 비교예 1 내지 2, 실시예 1 내지 5의 농도로 처리한 후, 총 RNA를 추출하고, cDNA를 합성하여 SYBR green qRT-PCR을 이용하여 MITF, 티로시나아제의 mRNA 발현량을 분석하였다. 이 때, α-MSH를 처리하지 않은 대조군의 총 RNA 를 1로 하여 실험군에서의 mRNA 변화를 상대적으로 비교하여 그래프로 나타내었고, 실험은 3회 반복하여 수치화하였다.

그 결과, 도 3 및 4에서와 같이 α-MSH를 처리한 세포에서와 비교할 때, 우절 추출물 또는 미숙 사과 추출물을 단독 처리하는 경우(비교예 1 또는 2)보다 혼합 처리(실시예 1 내지 5)할 경우 MITF, 티로시나아제의 mRNA 발현량이 현저하게 감소하는 것을 확인하였다.

실험예 4. 티로시나아제 활성 분석

티로시나아제는 멜라닌 생산을 조절하는 효소로서, 우절 추출물 및 미숙사과 추출물에 의한 티로시나아제 활성 억제 효과를 알아보기 위한 실험을 수행하였다. 실험군은 α-MSH을 1시간 처리하고 비교예 1 내지 2, 실시예 1 내지 5의 농도로 처리한 후 48시간 동안 배양하였다. 이후, 세포로부터 전체단백질을 분리하였다. 분리된 각 단백질 샘플에 L-DOPA를 처리하고, ELISA를 이용하여 475nm의 흡광도에서 티로시나아제의 활성을 측정하였다.

그 결과, 도 5에서와 같이, 우절 추출물 또는 미숙 사과 추출물을 단독으로 사용하는 경우보다 혼합하여 사용할 경우 티로시나아제의 효소활성이 현저히 감소되는 것을 확인하였다.

티로시나아제 효소에 의해 L-DOPA 물질이 산화되는 것을 분석한 실험이며, 상기 결과로 인해 티로시나아제 효소에 의한 멜라닌 합성을 설명하는 것으로써, 우절 추출물 및 미숙사과 추출물을 혼합하여 사용하는 경우 세포 내 티로시나아제의 억제 또는 저해함으로써 멜라닌 생산을 저해하여 미백에 효과가 있음을 확인하였다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

우절(node of Lotus Rhizome) 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 우절 추출물 및 미숙사과 추출물은 멜라닌의 생성 억제 및 티로시나아제의 저해 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 우절 추출물 100 중량부를 기준으로 미숙사과 추출물이 20 내지 60 중량부로 포함된 것을 특징으로 하는 조성물.
제3항에 있어서,
상기 조성물은 우절 추출물 100 중량부를 기준으로 미숙사과 추출물이 40 내지 70 중량부로 포함된 것을 특징으로 하는 조성물.
제4항에 있어서,
상기 조성물은 우절 추출물 100 중량부를 기준으로 미숙사과 추출물이 45 내지 65 중량부로 포함된 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 미숙사과 추출물은 미숙사과의 과피로부터 추출한 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크 로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어진 그룹에서 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조된 것을 특징으로 하는 조성물.
우절(node of Lotus Rhizome) 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 건강식품 조성물.
제9항에 있어서,
상기 건강식품은 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제에서 선택되는 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
우절(node of Lotus Rhizome) 추출물 및 미숙사과 추출물을 포함하는 피부 미백용 건강기능식품 조성물.
제11항에 있어서,
상기 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 형태의 식품인 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.