KR20190032534A - C5a 수용체 길항제로서의 시클릭 펩티드 - Google Patents

C5a 수용체 길항제로서의 시클릭 펩티드 Download PDF

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Abstract

본 발명은 시클릭 펩티드 유도체, 의약에서의 그의 용도, 그를 함유하는 조성물, 그의 제조 방법 및 이러한 방법에 사용되는 중간체에 관한 것이다. 보다 특히 본 발명은 R1a, R1b, R2, R3 및 R4가 본 명세서에 정의된 바와 같은 것인 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 시클릭 펩티드 C5a 수용체 길항제 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다. C5a 수용체 길항제는 염증성 장애 및 면역 장애를 포함한, 광범위한 장애의 치료에서 잠재적으로 유용하다.

Description

C5a 수용체 길항제로서의 시클릭 펩티드
본 발명은 시클릭 펩티드 유도체, 의약에서의 그의 용도, 그를 함유하는 조성물, 그의 제조 방법 및 이러한 방법에 사용되는 중간체에 관한 것이다.
보체계는 유기체로부터 미생물 및 손상된 세포를 소거하는 항체 및 식세포의 능력을 증진시키는 (보완하는) 선천성 면역계의 일부이다. 이는 통상적으로 혈액 중에 불활성 상태로 존재하는 단백질의 군 (보체 성분, C)으로 이루어진다. 여러 촉발인자 중 하나에 의해 자극되면, 보체계는 감염에 대한 방어를 돕는 효소 캐스케이드를 개시한다. 그러나, 보체계의 비제어된 활성화 또는 부적절한 조절이 여러 염증성 및 변성 질환과 관련되며; 문헌 [Morgan and Harris (Nature Reviews Drug Discovery 14, 857-877 (2015))]에 그에 대한 검토가 제공되어 있다.
보체계 활성화에는 3가지 경로가 존재한다: 고전, 렉틴 및 대체 경로. 미생물, 항체 또는 세포 성분이 이들 경로를 활성화시켜, C3-컨버타제 및 C5-컨버타제로서 공지된 프로테아제 복합체의 형성을 야기한다. 각각의 경로는 C3-컨버타제가 C3을 단편 C3a 및 C3b로 절단할 때 최종 공통 경로로 수렴된다. 보체계의 개관이 문헌 [Sarma and Ward (Cell Tissue Res. 2011 Jan; 343(1): 227-235)]에 제공되어 있다.
C5a는 보체 캐스케이드에서 C5-컨버타제 효소에 의한 C5의 절단에 의해 생성된다. C5a는 내피에서의 부착 분자의 증가된 발현 및 평활근의 수축을 초래하는 아나필라톡신일 뿐만 아니라, 감염 부위에서의 보체 및 식세포의 축적 또는 항원-제시 세포의 림프절로의 동원을 개시하는 화학주성인자이기도 하다.
C5a는 막 결합 G-단백질 커플링 수용체 (GPCR)인 C5a 수용체 (또한 C5a 수용체 1 (C5AR1) 또는 CD88로서 공지됨)와 상호작용하며, 다수의 염증유발 효과를 촉발한다. C5a는 다형핵 백혈구에 대한 강력한 화학주성인자이므로, 호중구, 호염기구, 호산구 및 단핵구를 염증 및/또는 세포 손상 부위로 이동하게 하고, 실제로 매우 다양한 염증 세포 유형에 대한 공지된 가장 강력한 화학주성 작용제 중 하나이다.
다른 작용들 중에서도 C5a는: 다양한 항박테리아 기능 (예를 들어 식세포작용)을 위해 호중구를 "프라이밍하고" (준비시키고); 과립구로부터의 염증 매개체 (예를 들어 히스타민, TNF-u, IL-I, IL-6, IL-8, 프로스타글란딘 및 류코트리엔)의 방출 및 리소솜 효소 및 다른 세포독성 성분의 방출을 자극하며; 활성화된 산소 라디칼의 발생 및 평활근의 수축을 촉진한다.
C5a 방출은 직접적으로 또는 간접적으로 많은 질환 및 증후군의 원인이 되는 것으로 생각된다. 그 예로는 패혈증, 재관류 손상, 류마티스 관절염 및 포괄적 면역 복합체 연관 질환이 있다. C5a 관련 질환에 대한 개관이 문헌 [Guo and Ward (Annu. Rev. Immunol. 2005. 23:821-52)]에 제공되어 있다.
단 수일에 걸쳐서의 신기능의 상실로서 정의되는, 급성 신장 손상 (AKI)은 흔하면서도 심각한 임상 문제이다 (Seminars in Nephrology, Vol 33, No6, November 2013, pp 543-556). 그의 유병률 추정치는 각기 다르지만, 집중 치료실 (ICU) 환자의 20-50%에 이를 수 있으며, 50% 초과의 사망률과 연관될 수 있다 (Critical Care Research and Practice, Vol 2013 (2013), Article ID 479730, 9 pages). AKI는 기저 신질환에 의해 초래될 수 있거나 또는 신장 손상 때문일 수 있다. 허혈/재관류는 입원 환자에서의 AKI의 흔한 원인이며, 이식, 심장 수술 및 패혈증 후 AKI의 발병에 있어서 주요 인자이다.
지지적 관리에서의 의학적 진보에도 불구하고, AKI는 높은 이환율 및 사망률과 연관된다. 조직 염증은, 심지어 비-면역 손상 예컨대 허혈/재관류 및 독소 후에도 신장 손상의 발병기전에 있어 중추적이고, 보체계의 활성화는 AKI의 결정적 원인이다. 게다가, 손상된 신장 내에서의 보체계 활성화는 신장에 대한 손상을 악화시키는 많은 하류 염증성 사건을 촉발한다. 보체계 활성화는 또한 원위 기관 손상 및 환자 사망에 기여하는 전신 염증성 사건의 이유가 될 수 있다.
보체계의 효과를 조정하는 특정 분자, 예컨대 펩티드성 C5a 조정제가 공지되어 있다. WO99/00406은 C5a 수용체의 시클릭 효능제 및 길항제를 개시하고 있다. WO03/033528은 g-단백질-커플링 수용체 길항제로서의 시클릭 펩티드를 개시하고 있다. WO2005/010030 및 WO2006/074964는 C5a 수용체 길항제를 개시하고 있다.
그러나, 우수한 약물 후보, 특히 병원 환경에서의 정맥내 투여에 적합한 분자인 신규 C5a 수용체 길항제를 제공할 필요성이 계속 존재한다.
바람직한 화합물은 하기 특성 중 하나 이상을 갖는다:
Figure pct00001
안정한 물리적 형태;
Figure pct00002
비경구 투여를 위한 용이한 제제화;
Figure pct00003
정맥내 주입에 적합한 중간 정도의 pH (예를 들어 3 내지 9의 pH)에서의 우수한 열역학적 수용해도, 예컨대 > 5mg/ml, 예를 들어 >25 mg/ml;
Figure pct00004
C5a에 대한 기능적 반응, 예컨대 산화적 버스트 및 CD11b 상향 조절의 강력한 억제, 바람직하게는 본원에 기재된 검정에 따라 < 100 nM, 예를 들어 < 20 nM의 Kb; 및/또는
Figure pct00005
화합물 투여의 중지 시 C5a 수용체 차단이 급속히 중지되도록 하는 짧은 약동학적 반감기, 예컨대 < 2시간, 예를 들어 < 1시간.
본 발명자들은 본 발명에 이르러 신규 시클릭 펩티드 C5a 수용체 길항제를 밝혀내었다.
본 발명의 제1 측면에 따르면 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다:
Figure pct00006
여기서:
R1a는 H, OH, O(CH2)-C(O)OR6, NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6이고;
R1b는 NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6이고;
R2는 1, 2 또는 3개의 질소 원자를 함유하는 5-, 6-, 9- 또는 10-원 헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 1 또는 2개의 R7로 고리 탄소 원자 상에서 임의로 치환되고;
R3은 수소 또는 C1-C4 알킬이고;
R4는
Figure pct00007
에 의해 치환된 C4-C7 시클로알킬이고;
R5는 C1-C4 알킬이고;
R6은 H 또는 C1-C4 알킬이고;
R7은 C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시이다.
본 발명의 이러한 제1 측면의 다수의 실시양태 (E1)가 하기에 기재되어 있으며, 여기서 편의상 E1은 본 발명의 제1 측면과 동일하다.
E1 상기 정의된 바와 같은 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E2 R4가
Figure pct00008
에 의해 치환된 시클로헥실인 실시양태 E1에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E3 R4가
Figure pct00009
인 실시양태 E1 또는 실시양태 E2에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E4 R1a가 OH, O(CH2)-C(O)OR6, NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6이거나; 또는 R1b가 NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6인 실시양태 E1 내지 E3 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E5 R1a가 OH, O(CH2)-C(O)OR6, NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6인 화학식 (Ia)의 실시양태 E1 내지 E4 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E6 R1a가 OH 또는 O(CH2)-C(O)OH인 화학식 (Ia)의 실시양태 E5에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E7 R1a가 OH인 화학식 (Ia)의 실시양태 E6에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E8 R1b가 NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6인 화학식 (Ib)의 실시양태 E1 내지 E4 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E9 R1b가 NH2, NH-C(O)CH3 또는 NH(CH2)-C(O)OH인 실시양태 E8에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E10 R2가 1 또는 2개의 질소 원자를 함유하는 9-원 헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 1 또는 2개의 R7로 고리 탄소 원자 상에서 임의로 치환되는 것인 실시양태 E1 내지 E9 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E11 R2가 하기로부터 선택되는 C-연결된 헤테로아릴이고:
Figure pct00010
여기서 상기 헤테로아릴은 R7로 고리 탄소 원자 상에서 임의로 치환되는 것인
실시양태 E1 내지 E10 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E12 R2가 하기의 C-연결된 헤테로아릴이고:
Figure pct00011
여기서 상기 헤테로아릴은 R7로 고리 탄소 원자 상에서 임의로 치환되는 것인
실시양태 E1 내지 E11 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E13 R2가 하기의 C-연결된 헤테로아릴인 실시양태 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
Figure pct00012
E14 R7이 메틸 또는 메톡시인 실시양태 E1 내지 E12 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E15 R3이 H 또는 메틸인 실시양태 E1 내지 E14 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E16 R3이 H인 실시양태 E1 내지 E15 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
E17 하기로부터 선택되는 실시양태 E1에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
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{[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19S,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-[(카르복시메틸)아미노]-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}아세트산 (실시예 12에 대한 대체 명칭);
N-{(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-(3,5-디듀테로페닐)프로판-2-일}글리신 (실시예 13에 대한 대체 명칭);
{[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-[(카르복시메틸)아미노]-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}아세트산 (실시예 14에 대한 대체 명칭);
N-[(2S)-1-({(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-[(6-메톡시-1H-인돌-3-일)메틸]-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일}아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]글리신 (실시예 15에 대한 대체 명칭);
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인다졸-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신 (실시예 16); 및
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((6-에틸-1H-인돌-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신 (실시예 17).
화학식 (Ia) 및 화학식 (Ib)의 화합물에서:
Figure pct00013
필요한 수의 탄소 원자를 함유하는 알킬 및 알콕시 기는 비분지형 또는 분지형일 수 있다. 알킬의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, i-부틸, sec-부틸 및 t-부틸을 포함한다. 알콕시의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, i-프로폭시, n-부톡시, i-부톡시, sec-부톡시 및 t-부톡시를 포함한다.
Figure pct00014
시클로알킬의 예는 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 및 시클로헵틸을 포함한다.
Figure pct00015
달리 반대로 명시되지 않는 한, 헤테로아릴은 'C-연결된' 또는 'N-연결된' 것일 수 있다. 용어 'C-연결된'은 헤테로아릴이 고리 탄소를 통해 결합된다는 것을 의미한다. 용어 'N-연결된'은 헤테로아릴이 고리 질소를 통해 결합된다는 것을 의미한다.
Figure pct00016
5-, 6-, 9- 및 10-원 헤테로아릴의 구체적 예는 피롤릴, 피라졸릴, 이미다조일, 트리아졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 트리아지닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 인다졸릴, 벤조트리아졸릴, 피롤로[2,3-b]피리딜, 피롤로[2,3-c]피리딜, 피롤로[3,2-c]피리딜, 피롤로[3,2-b]피리딜, 이미다조[4,5-b]피리딜, 이미다조[4,5-c]피리딜, 피라졸로[4,3-d]피리딜, 피라졸로[4,3-c]피리딜, 피라졸로[3,4-c]피리딜, 피라졸로[3,4-b]피리딜, 인돌리지닐, 이미다조[1,2-a]피리딜, 이미다조[1,5-a]피리딜, 피라졸로[1,5-a]피리딜, 피롤로[1,2-b]피리다지닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 신놀리닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 프탈라지닐, 1,6-나프티리디닐, 1,7-나프티리디닐, 1,8-나프티리디닐, 1,5-나프티리디닐, 2,6-나프티리디닐, 2,7-나프티리디닐, 피리도[3,2-d]피리미디닐, 피리도[4,3-d]피리미디닐, 피리도[3,4-d]피리미디닐, 피리도[2,3-d]피리미디닐, 피리도[2,3-d]피라지닐 및 피리도[3,4-b]피라지닐을 포함한다.
문맥에서 화학식 (Ia), 화학식 (Ib), 또는 화학식 (Ia) 및 화학식 (Ib) 둘 다에 대한 구체적 언급이 요구되지 않는 한, 이하에서 화학식 (I)은 화학식 (Ia) 및 (Ib) 둘 다를 집합적으로 지칭하도록 사용된다.
이하에서, 본 발명의 화합물에 대한 모든 언급은, 하기에 더 상세히 논의된 바와 같은, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 또는 다성분 복합체, 또는 화학식 (I)의 화합물의 제약상 허용되는 염의 제약상 허용되는 용매화물 또는 다성분 복합체를 포함한다.
본 발명의 바람직한 화합물은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
적합한 산 부가염은 비-독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 예는 아세테이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 보레이트, 캄실레이트, 시트레이트, 시클라메이트, 에디실레이트, 에실레이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 헥사플루오로포스페이트, 히벤제이트, 히드로클로라이드/클로라이드, 히드로브로마이드/브로마이드, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 나프틸레이트, 2-나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 오로테이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 피로글루타메이트, 사카레이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 탄네이트, 타르트레이트, 토실레이트, 트리플루오로아세테이트 및 크시노포에이트 염을 포함한다.
적합한 염기 염은 비-독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다. 예는 알루미늄, 아르기닌, 벤자틴, 칼슘, 콜린, 디에틸아민, 디올라민, 글리신, 리신, 마그네슘, 메글루민, 올라민, 칼륨, 나트륨, 트로메타민 및 아연 염을 포함한다.
산 및 염기의 헤미염, 예를 들어, 헤미술페이트 및 헤미칼슘 염이 또한 형성될 수 있다.
통상의 기술자는 상기 언급된 염이, 반대이온이 광학 활성인 것들, 예를 들어 d-락테이트 또는 l-리신, 또는 라세미인 것들, 예를 들어 dl-타르트레이트 또는 dl-아르기닌을 포함하는 것으로 인지할 것이다.
적합한 염에 대한 검토를 위해, 문헌 ["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]을 참조한다.
화학식 (I)의 화합물의 제약상 허용되는 염은 하기 3가지 방법 중 하나 이상에 의해 제조될 수 있다:
(i) 화학식 (I)의 화합물을 목적하는 산 또는 염기와 반응시킴으로써;
(ii) 목적하는 산 또는 염기를 사용하여 화학식 (I)의 화합물의 적합한 전구체로부터 산- 또는 염기-불안정성 보호기를 제거함으로써; 또는
(iii) 적절한 산 또는 염기와의 반응에 의해 또는 적합한 이온 교환 칼럼에 의해 화학식 (I)의 화합물의 하나의 염을 또 다른 것으로 전환시킴으로써.
모든 3가지 반응은 전형적으로 용액 중에서 수행된다. 생성된 염은 침전되며 여과에 의해 수집될 수 있거나 또는 용매의 증발에 의해 회수될 수 있다. 생성된 염의 이온화도는 완전 이온화되는 것부터 거의 비-이온화되는 것까지 다양할 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 비용매화 및 용매화된 형태 둘 다로 존재할 수 있다. 용어 '용매화물'은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 1종 이상의 제약상 허용되는 용매 분자, 예를 들어, 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 기재하기 위해 본원에 사용된다. 용어 '수화물'은 상기 용매가 물일 때 이용된다. 본 발명에 따른 제약상 허용되는 용매화물은, 결정화의 용매가 동위원소 치환될 수 있는 것들, 예를 들어 D2O, d6-아세톤 및 d6-DMSO를 포함한다.
유기 수화물에 대해 현재 승인된 분류 체계는 고립 부위, 채널, 또는 금속-이온 배위 수화물을 정의하는 것이며 - 본원에 참조로 포함된 문헌 [Polymorphism in Pharmaceutical Solids by K. R. Morris (Ed. H. G. Brittain, Marcel Dekker, 1995)]을 참조한다. 고립 부위 수화물은 유기 분자를 개재함으로써 물 분자가 서로와의 직접 접촉으로부터 고립된 것들이다. 채널 수화물에서, 물 분자는, 이들이 다른 물 분자 옆에 있는 격자 채널로 놓여 있다. 금속-이온 배위 수화물에서, 물 분자는 금속 이온에 결합된다.
용매 또는 물이 단단히 결합된 경우에, 복합체는 습도와 관계없이 잘 정의된 화학량론을 가질 것이다. 그러나, 채널 용매화물 및 흡습성 화합물에서와 같이, 용매 또는 물이 약하게 결합된 경우에, 물/용매 함량은 습도 및 건조 조건에 따라 달라질 것이다. 이러한 경우에, 비-화학량론이 규준일 것이다.
약물 및 적어도 1종의 다른 성분이 화학량론적 또는 비-화학량론적 양으로 존재하는, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 다성분 복합체 (염 및 용매화물 이외의 것)가 또한 본 발명의 범주 내에 포함된다. 이러한 유형의 복합체는 클라트레이트 (약물-호스트 포접 복합체) 및 공-결정을 포함한다. 후자는 전형적으로 비-공유 상호작용을 통해 함께 결합되어 있는 중성 분자 구성성분의 결정질 복합체로서 정의되지만, 또한 중성 분자와 염과의 복합체일 수도 있다. 공-결정은 용융 결정화에 의해, 용매로부터의 재결정화에 의해, 또는 성분을 함께 물리적으로 분쇄함으로써 제조될 수 있으며 - 본원에 참조로 포함된 문헌 [Chem Commun, 17, 1889-1896, by O. Almarsson and M. J. Zaworotko (2004)]을 참조한다. 다성분 복합체의 일반적 검토를 위해, 본원에 참조로 포함된 문헌 [J Pharm Sci, 64(8), 1269-1288, by Haleblian (August 1975)]을 참조한다.
본 발명의 화합물은 완전 무정형부터 완전 결정질에 이르는 고체 상태의 연속체로 존재할 수 있다. 용어 '무정형'은 물질이 분자 수준에서 장범위 규칙이 결여되고, 온도에 따라, 고체 또는 액체의 물리적 특성을 나타낼 수 있는 상태를 지칭한다. 전형적으로, 이러한 물질은 특유의 X선 회절 패턴을 제공하지 않으며, 고체의 특성을 나타냄에도 불구하고, 보다 공식적으로는 액체로서 기재된다. 가열 시, 고체에서 액체로의 특성 변화가 발생하고, 이는, 전형적으로 2차적인 상태 변화 ('유리 전이')를 특징으로 한다. 용어 '결정질'은 물질이 분자 수준에서 규칙적으로 정렬된 내부 구조를 갖고, 정의된 피크를 갖는 특유의 X선 회절 패턴을 제공하는 고체 상을 지칭한다. 이러한 물질은, 충분히 가열되는 경우에, 또한 액체의 특성을 나타낼 것이만, 고체에서 액체로의 변화가, 전형적으로 1차적인 상 변화 ('융점')를 특징으로 한다.
본 발명의 화합물은 또한 적합한 조건에 적용되는 경우에 준결정 상태 (중간상 또는 액정)로 존재할 수 있다. 준결정 상태는 진성 결정질 상태와 진성 액체 상태 (용융물 또는 용액) 사이의 중간이다. 온도 변화의 결과로서 발생하는 준결정현상은 '열방성'으로서 기재되며, 물 또는 또 다른 용매와 같은 제2 성분의 첨가로부터의 생성물은 '액방성'으로서 기재된다. 액방성 중간상을 형성하는 잠재력을 갖는 화합물은 '친양쪽성'으로서 기재되며, 이온성 (예컨대 -COO-Na+, -COO-K+, 또는 -SO3 -Na+) 또는 비-이온성 (예컨대 -N-N+(CH3)3) 극성 머리기를 보유하는 분자로 이루어진다. 보다 많은 정보를 위해, 본원에 참조로 포함된 문헌 [Crystals and the Polarizing Microscope by N. H. Hartshorne and A. Stuart, 4th Edition (Edward Arnold, 1970)]을 참조한다.
본 발명의 화합물은 전구약물로서 투여될 수 있다. 따라서, 그 자체로는 약리학적 활성이 거의 또는 전혀 없을 수 있는 화학식 (I)의 화합물의 특정 유도체가, 신체 내로 또는 상에 투여 시, 예를 들어 가수분해성 절단에 의해 목적하는 활성을 갖는 화학식 (I)의 화합물로 전환될 수 있다. 이러한 유도체는 '전구약물'이라 지칭된다. 전구약물의 사용에 대한 추가의 정보는 문헌 ['Pro-drugs as Novel Delivery Systems', Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella)] 및 ['Bioreversible Carriers in Drug Design', Pergamon Press, 1987 (ed. E B Roche, American Pharmaceutical Association)]에서 찾아볼 수 있다.
예를 들어 문헌 ["Design of Prodrugs" by H Bundgaard (Elsevier, 1985)]에 기재된 바와 같이, 전구약물은, 예를 들어, 화학식 (I)의 화합물에 존재하는 적절한 관능기를 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 '프로-모이어티'로서 공지된 특정 모이어티로 대체함으로써 제조될 수 있다.
전구약물의 예는 포스페이트 전구약물, 예컨대 디히드로겐 또는 디알킬 (예를 들어 디-tert-부틸) 포스페이트 전구약물을 포함한다. 상기 예에 따른 대체 기의 추가의 예 및 다른 전구약물 유형의 예는 상기 언급된 참고문헌에서 찾아볼 수 있다.
또한, 화학식 (I)의 화합물의 대사물, 즉, 약물의 투여 시 생체내에서 형성되는 화합물이 본 발명의 범주 내에 포함된다. 본 발명에 따른 대사물의 일부 예는, 화학식 (I)의 화합물이 페닐 (Ph) 모이어티를 함유하는 경우에, 그의 페놀 유도체 (-Ph > -PhOH)를 포함한다.
화학식 (Ia) 및 (Ib)는 비대칭 탄소 원자를 함유하며 입체특이적으로 정의된다. 통상의 기술자는 R1a 및 R1b가 각각 NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6)인 경우에, 화학식 (Ia) 및 (Ib)가 에피머의 쌍을 정의하는 것으로 인지할 것이다. 본 발명은 모든 이러한 에피머 및 그의 혼합물을 포함한다.
통상의 기술자는 또한 화학식 (I) 내 1개 이상의 치환기가 1개 이상의 추가의 비대칭 탄소 원자를 도입할 수 있는 것으로 인지할 것이다. 상기 1개 이상의 추가의 비대칭 탄소 원자를 함유하는 본 발명의 화합물은 2종 이상의 입체이성질체로서 존재할 수 있고; 본 발명의 화합물의 모든 이러한 입체이성질체 및 그의 2종 이상의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 포함된다.
개별 거울상이성질체의 제조/단리를 위한 통상적인 기술은 적합한 광학적으로 순수한 전구체로부터의 키랄 합성 또는, 예를 들어, 키랄 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 사용하는 라세미체 (또는 염 또는 유도체의 라세미체)의 분해를 포함한다.
대안적으로, 라세미체 (또는 라세미 전구체)는 적합한 광학 활성 화합물, 예를 들어, 알콜, 또는 화학식 (I)의 화합물이 산성 또는 염기성 모이어티를 함유하는 경우에는, 염기 또는 산 예컨대 1-페닐에틸아민 또는 타르타르산과 반응될 수 있다. 생성된 부분입체이성질체 혼합물은 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 분리될 수 있고, 부분입체이성질체 중 하나 또는 둘 다는 통상의 기술자에게 널리 공지된 수단에 의해 상응하는 순수한 거울상이성질체(들)로 전환될 수 있다.
본 발명의 키랄 화합물 (및 그의 키랄 전구체)은 0 내지 50 부피%, 전형적으로 2% 내지 20%의 이소프로판올, 및 0 내지 5 부피%의 알킬아민, 전형적으로 0.1%의 디에틸아민을 함유하는 탄화수소, 전형적으로 헵탄 또는 헥산으로 이루어진 이동상을 사용하는 비대칭 수지 상에서의 크로마토그래피, 전형적으로 HPLC를 사용하여, 거울상이성질체적으로 풍부화된 형태로 수득될 수 있다. 용리액의 농축이 풍부화된 혼합물을 제공한다.
미임계 및 초임계 유체를 사용하는 키랄 크로마토그래피가 이용될 수 있다. 본 발명의 일부 실시양태에서 유용한 키랄 크로마토그래피 방법은 공지되어 있으며; 예를 들어, 문헌 [Smith, Roger M., Loughborough University, Loughborough, UK; Chromatographic Science Series (1998), 75 (Supercritical Fluid Chromatography with Packed Columns), pp. 223-249] 및 그에 인용된 참고문헌을 참조한다.
입체이성질체 혼합물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 분리될 수 있으며; 예를 들어, 문헌 ["Stereochemistry of Organic Compounds" by E. L. Eliel and S. H. Wilen (Wiley, New York, 1994]을 참조한다.
구조 이성질체가 낮은 에너지 장벽을 통해 상호전환가능한 경우에, 호변이성질체 이성질현상 ('호변이성질현상') 및 형태 이성질현상이 발생할 수 있다.
호변이성질현상은, 예를 들어, 아미드 기를 함유하는 화학식 (I)의 화합물의 양성자 호변이성질현상 (즉, 아미드-이미드산 호변이성질현상) 또는 방향족 모이어티를 함유하는 화합물의 소위 원자가 호변이성질현상의 형태를 취할 수 있다. 간결성을 위해, 화학식 (I)의 화합물이 본원에서 단일 호변이성질체 형태로 도시되었더라도, 모든 가능한 호변이성질체 형태가 본 발명의 범주 내에 포함된다.
형태 이성질현상은 이성질체가 독점적으로 단일 결합 주위의 회전에 의해 상호전환될 수 있는 입체이성질현상의 형태이다. 이러한 이성질체는 일반적으로 형태 이성질체 또는 이형태체, 및 특히 회전이성질체라 지칭된다. 화학식 (I)의 아미드는 회전이성질체로서 존재할 수 있다. 간결성을 위해, 화학식 (I)의 화합물이 단일 입체 형태로 도시되었더라도, 모든 가능한 이형태체가 본 발명의 범주 내에 포함된다.
본 발명의 범주는 본 발명의 화합물의 모든 결정 형태, 예컨대 그의 라세미체 및 라세미 혼합물 (집성체)을 포함한다. 입체이성질체 집성체는 또한 본원에서 바로 직전에 기재된 통상적인 기술에 의해 분리될 수 있다.
본 발명의 범주는, 동일한 원자 번호를 갖지만, 자연에서 우세한 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 1개 이상의 원자가 대체된, 모든 제약상 허용되는 동위원소-표지된 본 발명의 화합물을 포함한다.
본 발명의 화합물에의 포접을 위해 적합한 동위원소의 예는 하기의 동위원소를 포함한다: 수소, 예컨대 2H 및 3H; 탄소, 예컨대 11C, 13C 및 14C; 질소, 예컨대 13N 및 15N; 및 산소, 예컨대 15O, 17O 및 18O.
특정 동위원소-표지된 본 발명의 화합물, 예를 들어, 방사성 동위원소가 혼입된 것들은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에서 유용하다. 이러한 목적을 위해 방사성 동위원소 삼중수소, 즉 3H, 및 탄소-14, 즉 14C가 혼입의 용이성 및 즉시 사용가능한 검출 수단의 관점에서 특히 유용하다. 보다 무거운 동위원소 예컨대 중수소 (D), 즉 2H로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건으로부터 야기되는 특정의 치료 이점을 제공할 수 있으며, 따라서 일부 상황에서 바람직할 수 있다. 양전자 방출 동위원소, 예컨대 11C, 15O 및 13N으로의 치환은 기질 수용체 점유율을 검사하기 위한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 연구에서 유용할 수 있다.
1개 이상의 H가 D에 의해 대체된 화학식 (I)의 화합물이 특히 관심있다. 본 발명의 한 실시양태에서 화학식 (I)의 페닐 고리는 1개 이상의 D로 치환된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 화학식 (IaD) 또는 화학식 (IbD)의 3,5-디듀테로페닐 화합물을 제공한다:
Figure pct00017
통상의 기술자는 실시양태 E2 내지 E16이 화학식 (Ia) 및 화학식 (Ib)의 화합물에 적용되는 것처럼, 화학식 (IaD) 및 화학식 (IbD)의 화합물에도 적용되는 것으로 인지할 것이다. 화학식 (IaD) 및 화학식 (IbD)의 화합물과 관련하여, 이러한 실시양태는 E2D 내지 E16D라 지칭된다.
따라서 화합물 N-{(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-(3,5-디듀테로페닐)프로판-2-일}글리신은 화학식 (Ia) 및 화학식 (IaD) 둘 다의 실시양태이다.
화학식 (I)의 동위원소-표지된 화합물은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 첨부 실시예 및 제조예에 기재된 것들과 유사한 방법에 의해 이전에 이용된 비-표지된 시약 대신 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 제조될 수 있다.
또한, 이하에 정의된 바와 같은 중간체 화합물, 그의 모든 염, 용매화물 및 복합체 및 화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같은 그의 염의 모든 용매화물 및 복합체가 본 발명의 범주 내에 있다. 본 발명은 상기 언급된 종의 모든 다형체 및 그의 결정 습성을 포함한다.
본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물을 제조하는 경우에, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이러한 목적을 위한 특색의 최상의 조합을 제공하는 중간체의 형태를 상용적으로 선택할 수 있다. 이러한 특색은 중간체 형태의 융점, 용해도, 가공성 및 수율, 및 단리 시 생성물이 정제될 수 있는 그에 따른 용이성을 포함한다.
본 발명의 화합물은 유사한 구조의 화합물의 제조에 대해 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 특히, 본 발명의 화합물은 하기 반응식을 참조하여 기재된 절차에 의해, 또는 실시예에 기재된 구체적 방법에 의해, 또는 이들 중 어느 것이든 그와 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다.
통상의 기술자는 하기 반응식에 제시된 실험 조건이 제시된 변환을 수행하기에 적합한 조건을 예시하는 것이며, 화학식 (I)의 화합물의 제조에 이용되는 정확한 조건을 달리하는 것이 필요하거나 또는 바람직할 수 있는 것으로 인지할 것이다. 추가로, 반응식에 기재된 것과 상이한 순서로 변환을 수행하거나, 또는 변환 중 하나 이상을 변형시켜, 본 발명의 목적하는 화합물을 제공하는 것이 필요하거나 또는 바람직할 수 있는 것으로 인지될 것이다.
추가로, 통상의 기술자는 바람직하지 않은 부반응을 방지하기 위해, 본 발명의 화합물의 합성의 임의의 단계에서 1개 이상의 감수성 기를 보호하는 것이 필요하거나 또는 바람직할 수 있는 것으로 인지할 것이다. 특히, 히드록실, 카르복실 및/또는 아미노 기를 보호하는 것이 필요하거나 또는 바람직할 수 있다. 본 발명의 화합물의 제조에 사용되는 보호기는 통상적인 방식으로 사용될 수 있으며; 예를 들어, 본원에 참조로 포함된 문헌 ['Greene's Protective Groups in Organic Synthesis' by Theodora W Greene and Peter G M Wuts, fifth edition, (John Wiley and Sons, 2014)]에 기재된 것들, 및 특히 각각 챕터 2, 5 및 7을 참조하며, 이들은 또한 이러한 기의 제거 방법도 기재한다.
하기 일반적 방법에서 R1 내지 R4는, 달리 언급되지 않는 한, 화학식 (I)의 화합물에 대해 이전에 정의된 바와 같다. 반응식이 화학식 (Ia)의 화합물의 제조를 기재하지만, 통상의 기술자는, 이들이 화학식 (Ib)의 화합물의 제공에도 마찬가지로 적합한 것으로 인지할 것이다.
화학식 (I)의 화합물은, R3을 함유하는 측쇄 아미노산 기가 마크로고리화 전 순서의 처음에 도입되는지 또는 마크로고리화 후 순서의 끝에 도입되는지의 여부에 따라, 반응식 1 또는 반응식 2에 따라 제조될 수 있다. 반응식 둘 다는 아미노산 오르니틴의 보호된 버전을 사용하는 초기 로딩 단계를 갖는 2-클로로트리틸 클로라이드 (CTC) 수지 기반 고체 상 합성 (SPS) 기술을 사용한다.
제1 공정에 따르면, 화학식 (Ia)의 화합물은 반응식 1에 의해 제조될 수 있다.
반응식 1에 따르면, Nα-플루오레닐메틸옥시카르보닐-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 수지 상에 로딩하고, 이어서 플루오레닐메틸옥시카르보닐 (FMOC) 기를 제거하여 화학식 (V)의 화합물을 제공하며, 이로써 선택적으로 유리 α아미노 기 상에 R3을 함유하는 목적하는 측쇄 아미노산의 후속 도입을 가능하게 하였다. 이어서 알릴옥시카르보닐기의 제거로 유리 δ아미노 기 상의 아미노산 커플링을 가능하게 하였다. FMOC 보호된 아미노산을 사용하는 잘 확립되어 있는 SPS 기술을 사용하는 후속 펩티드 사슬 연장은 1개의 유리 아미노 기를 갖는 화학식 (IVa)의 수지-결합된 헥사펩티드를 제공하였다. 수지로부터의 후속 절단은 1개의 유리 아미노 기 및 1개의 유리 카르복실산 기를 갖는 화학식 (IIIa)의 헥사펩티드를 제공하였으며, 이를 마크로락탐화에 적용하여 화학식 (IIa)의 시클릭 펩티드 프레임워크를 제공하였다. 다양한 산 불안정성 보호기 PG1, PG2, PG3 및 Pbf를 제거하고, 이어서 정제하여 화학식 (Ia)의 최종 시클릭 펩티드를 제공하였다.
반응식 1 - 선형 헥사펩티드의 합성 및 마크로고리화
Figure pct00018
제2 공정에 따르면, 화학식 (Ia)의 화합물은 반응식 2에 의해 제조될 수 있다.
반응식 2에 따르면, Nα-tert-부틸옥시카르보닐-Nδ-플루오레닐메틸옥시카르보닐-L-오르니틴을 수지 상에 로딩하고, 이어서 FMOC 기를 제거하여 (X)의 화합물을 제공하며, 이로써 유리 δ아미노 기 상의 아미노산 커플링을 가능하게 하였다. FMOC 보호된 아미노산을 사용하는 잘 확립되어 있는 SPS 기술을 사용하는 후속 펩티드 사슬 연장은 1개의 유리 아미노 기를 갖는 화학식 (IXa)의 수지-결합된 펜타펩티드를 제공하였다. 수지로부터의 후속 절단은 1개의 유리 아미노 기 및 1개의 유리 카르복실산 기를 갖는 화학식 (VIIIa)의 펜타펩티드를 제공하였으며, 이를 마크로락탐화에 적용하여 화학식 (VIIa)의 시클릭 펩티드 프레임워크를 제공하였다. 오르니틴 잔기로부터의 Nα-tert-부틸옥시카르보닐 기 및 PG2, PG3 및 Pbf를 포함한, 다양한 산 불안정성 보호기를 제거하여 1개의 유리 아미노 기를 갖는 화학식 (VIa)의 시클릭 펜타펩티드를 제공하였다. 유리 아미노 기 상에 측쇄 아미노산을 도입하고, 이어서 정제하여 화학식 (Ia)의 최종 시클릭 펩티드를 제공하였다.
반응식 2 - 선형 펜타펩티드의 합성, 마크로고리화 및 측쇄 아미노산의 도입
Figure pct00019
CTC 수지 및 필요한 아미노산은 상업적으로 입수가능하거나, 문헌으로부터 공지되어 있거나, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법에 의해 용이하게 제조되거나, 또는 본원에 기재된 제조예에 따라 달리 제조될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물을 제조하는 모든 신규 방법, 및 이러한 방법에 이용되는 상응하는 신규 중간체가 본 발명의 추가 측면을 형성한다.
제약 용도로 의도된 본 발명의 화합물은 결정질 또는 무정형 생성물로서 투여될 수 있거나 또는 완전 무정형부터 완전 결정질에 이르는 고체 상태의 연속체로 존재할 수 있다. 이들은 침전, 결정화, 동결 건조, 분무 건조, 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해, 예를 들어, 고체 플러그, 분말, 또는 필름으로서 수득될 수 있다. 마이크로웨이브 또는 고주파 건조가 이러한 목적을 위해 사용될 수 있다.
이들은 단독으로 또는 본 발명의 1종 이상의 다른 화합물과 조합하여 또는 1종 이상의 다른 약물과 조합하여 (또는 그의 임의의 조합물로서) 투여될 수 있다. 일반적으로, 이들은 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제와 회합된 제제로서 투여될 것이다. 용어 '부형제'는, 본 발명의 화합물(들) 이외의 임의의 성분을 기재하기 위해 본원에서 사용된다. 부형제의 선택은 특정한 투여 방식, 용해도 및 안정성에 대한 부형제의 효과, 및 투여 형태의 성질과 같은 인자에 따라 크게 달라질 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 화합물의 전달에 적합한 제약 조성물 및 그의 제조 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 명백할 것이다. 이러한 조성물 및 그의 제조 방법은, 예를 들어, 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences", 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995)]에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 화합물은 비경구로, 즉 혈류 내로, 근육 내로, 또는 내부 기관 내로 직접 투여될 수 있다.
정맥내 투여가, 특히, 본 발명의 화합물을 투여하기 위한 편리한 수단을 나타낸다. 비경구 투여를 위한 다른 적합한 수단은 동맥내, 복강내, 척수강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내 및 피하를 포함한다.
비경구 투여를 위한 적합한 장치는 바늘 (미세바늘 포함) 주사기, 바늘-무함유 주사기 및 주입 기술을 포함한다.
비경구 제제는 전형적으로 부형제 예컨대 염, 탄수화물 및 완충제 (바람직하게는 3 내지 9의 pH까지)를 함유할 수 있는 수성 용액이지만, 일부 적용을 위해서는, 이들은 멸균 비-수성 용액으로서, 또는 적합한 비히클 예컨대 멸균 발열원-무함유 물과 함께 사용될 건조된 형태로서 보다 적합하게 제제화될 수 있다.
예를 들어 동결건조에 의한, 멸균 조건 하에서의 비경구 제제의 제조는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 표준 제약 기술을 사용하여 용이하게 달성될 수 있다.
비경구 용액의 제조에 사용되는 화학식 (I)의 화합물의 용해도는, 용해도-증진제의 혼입과 같은 적절한 제제화 기술을 사용하여 증가될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제는 즉시 및/또는 변형 방출되도록 제제화될 수 있다. 편리하게는 본 발명의 화합물은 즉시 방출을 위해 제제화된다.
변형 방출 제제는 지연형-, 지속형-, 펄스형-, 제어형-, 표적형 및 프로그램형 방출을 포함한다. 따라서 본 발명의 화합물은 활성 화합물의 변형 방출을 제공하는 이식된 데포로서의 투여를 위한 고체, 반고체, 또는 요변성 액체로서 제제화될 수 있다. 이러한 제제의 예는 약물-코팅된 스텐트 및 폴리(dl-락트산-코글리콜산) (PGLA) 마이크로구체를 포함한다.
다른 투여 방식은 경구, 국소, 흡입/비강내, 직장/질내 및 눈/귀 투여를 포함한다. 이들 투여 방식에 적합한 제제는 즉시 및/또는 변형 방출을 포함한다. 변형 방출 제제는 지연형-, 지속형-, 펄스형-, 제어형-, 표적형 및 프로그램형 방출을 포함한다.
본 발명의 화합물은 상기 언급된 투여 방식 중 임의의 것에 사용되도록 그의 용해도, 용해 속도, 맛-차폐성, 생체이용률 및/또는 안정성을 개선시키기 위해, 가용성 거대분자체, 예컨대 시클로덱스트린 및 그의 적합한 유도체 또는 폴리에틸렌 글리콜-함유 중합체와 조합될 수 있다.
약물-시클로덱스트린 복합체는, 예를 들어, 대부분의 투여 형태 및 투여 경로에 일반적으로 유용한 것으로 밝혀졌다. 포접 및 비-포접 복합체 둘 다가 사용될 수 있다. 약물과의 직접 복합체화에 대한 대안으로서, 시클로덱스트린은 보조 첨가제로서, 즉 담체, 희석제 또는 가용화제로서 사용될 수 있다. 이들 목적을 위해 히드록시프로필 베타 시클로덱스트린 및 나트륨 술포부틸에테르 베타 시클로덱스트린을 포함한, 알파-, 베타- 및 감마-시클로덱스트린이 가장 통상적으로 사용되며, 그의 예는 국제 특허 출원 번호 WO 91/11172, WO 94/02518 및 WO 98/55148에서 찾아볼 수 있다.
인간 환자에게의 투여를 위해, 본 발명의 화합물의 총 1일 용량은, 물론, 투여 방식 및 효능에 따라 달라지는, 전형적으로 1mg 내지 10g, 예컨대 60mg 내지 6g, 예를 들어 100mg 내지 1g의 범위에 있다. 예를 들어, 정맥내 투여는 400mg 내지 800mg의 총 1일 용량을 요구할 수 있다. 총 1일 용량은 단일 또는 분할 용량으로 투여될 수 있으며, 의사의 판단으로, 본원에 주어진 전형적인 범위 밖일 수도 있다. 이들 투여량은 약 60kg 내지 70kg의 체중을 갖는 평균 인간 대상체를 기준으로 한다. 의사는 체중이 이러한 범위 밖인 대상체, 예컨대 영아 및 노인에 대한 용량을 용이하게 결정할 수 있을 것이다.
상기 언급된 바와 같이, 본 발명의 화합물은, 이들이 동물에서 약리학적 활성, 즉 C5a 수용체 길항작용을 나타내므로 유용하다. 보다 특히, 본 발명의 화합물은 C5a 수용체 길항제가 지시되는 장애의 치료에서 유용하다. 바람직하게는 동물은 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이다.
본 발명의 추가 측면에서, 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물이 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, C5a 수용체 길항제가 지시되는 장애의 치료에서 사용하기 위한 본 발명의 화합물이 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, C5a 수용체 길항제가 지시되는 장애의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의, 본 발명의 화합물의 용도가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, C5a 수용체 길항제가 지시되는 동물 (바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간)에서의 장애를 치료하는 방법이며, 상기 동물에게 치료 유효량의 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
C5a 수용체 길항제가 지시되는 장애는 염증성 장애 및 면역 장애를 포함한다.
염증성 장애는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 패혈증, 예컨대 급성 신장, 폐, 간, 심장 및 뇌 손상과 연관된 패혈증; 아나필락시스; 이식 거부, 예컨대 신장, 폐, 심장, 간 및 췌장과 연관된 것; 전신 혈관염, 예컨대 항-호중구 세포질 항체 연관 혈관염; 눈 질환, 예컨대 황반 변성 및 포도막염; 폐 질환, 예컨대 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 염증성 장애, 예컨대 COPD 또는 전신 홍반성 루푸스 (SLE)의 급성 악화; 및 신장, 폐, 간, 심장 및 뇌의 허혈 재관류 손상.
면역 장애는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 용혈성 요독성 증후군 (HUS), 예컨대 비정형 HUS (aHUS); 류마티스 관절염; 길랑-바레 증후군; 크론병; 궤양성 결장염; 중증 근무력증; 항-인지질 증후군; 천포창; 유천포창; SLE; IgA 신병증; 및 루푸스 신염.
특히 관심있는 장애는 급성 신장 손상 (AKI), 예컨대 하기에 의해 초래되는 AKI이다:
Figure pct00020
기저 신질환, 예컨대 사구체신염 또는 용혈성 요독성 증후군; 또는
Figure pct00021
약물, 허혈, 감염 또는 신독성 대사물.
C5a 수용체 길항제는 또 다른 약리학적 활성 화합물과, 또는 2종 이상의 다른 약리학적 활성 화합물과 유용하게 조합될 수 있다. 이러한 조합은 환자 순응도, 투여의 용이성 및 상승작용적 활성을 포함한, 상당한 이점의 가능성을 제공한다.
이러한 조합에서, 본 발명의 화합물은 다른 치료제 또는 치료제들과 조합하여 동시에, 순차적으로 또는 별개로 투여될 수 있다.
1종 이상의 추가의 치료제는 하기 작용제 또는 작용제의 유형 중 임의의 것으로부터 선택될 수 있다:
1) TNF-알파 억제제, 예컨대 아달리무맙, 세르톨리주맙 페골, 에타네르셉트, 인플릭시맙 또는 골리무맙;
2) 알칼리성 포스파타제, 예컨대 재조합 알칼리성 포스파타제 (예를 들어 PF-06853082);
3) 톨-유사 수용체 (TLR) 길항제, 예컨대 중화 항체;
4) 염증성 질환 및/또는 자가면역 질환을 치료하기 위한 또 다른 작용제, 예컨대 메토트렉세이트, 레플루노미드, 술파살라진 또는 아자티오프린;
5) 항히스타민 수용체 길항제, 예컨대 H1 수용체 길항제 (예를 들어 디펜히드라민);
6) 포르밀 펩티드 수용체 (FPR) 길항제, 예컨대 FPR-1 수용체 길항제;
7) 또 다른 보체계 억제제, 예컨대 인자 B 억제제, C5a 중화 항체 또는 C5L2 억제제;
8) 케모카인 또는 케모카인 수용체 (CCR) 중화 항체 또는 길항제, 예컨대 CCR2 수용체 길항제 (예를 들어 PF-04136309) 또는 CCR2/5 이중 수용체 길항제, 예컨대 PF-04634817;
9) 하기를 포함한, 키나제 억제제:
a. 야누스 키나제, 예컨대 JAK 1 (예를 들어 PF-04965842), JAK2 또는 JAK3 (예를 들어 토파시티닙 또는 PF-06651600)의 억제제;
b. 티로신 키나제, 예컨대 TYK2의 억제제;
c. p38의 억제제;
d. MAPK의 억제제;
e. Syk의 억제제;
f. IKK2의 억제제; 또는
g. 상기 키나제 중 1종 이상의 억제제, 예컨대 TYK2/JAK1 억제제 (예를 들어 PF-06700841);
h. 인터류킨-1 수용체-연관 키나제 (IRAK)의 억제제, 예컨대 IRAK4의 억제제 (예를 들어 PF-06650833);
i. 브루톤 티로신 키나제 (BTK)의 억제제;
10) 인터류킨 (IL) 억제제 또는 IL 수용체 억제제, 예컨대 IL-1 억제제 (예를 들어 아나킨라), IL-6 억제제 (예를 들어 토실리주맙), IL-12/IL-23 억제제 (예를 들어 우스테키누맙), 또는 IL-33 억제제 (예를 들어 PF-0817024);
11) 인테그린 억제제, 예컨대 나탈리주맙;
12) 비-스테로이드성 항염증 약물 (NSAID), 예컨대 프로피온산 유도체 (예를 들어 알미노프로펜, 베녹사프로펜, 부클록스산, 카프로펜, 펜부펜, 페노프로펜, 플루프로펜, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도프로펜, 케토프로펜, 미로프로펜, 나프록센, 옥사프로진, 피르프로펜, 프라노프로펜, 수프로펜, 티아프로펜산 및 티옥사프로펜).
2종 이상의 제약 조성물로서, 그 중 적어도 1종은 본 발명의 화합물을 함유하는 것인 제약 조성물이 편리하게는 조성물의 공투여에 적합한 키트 형태로 조합될 수 있다는 것이 본 발명의 범주 내에 있다. 따라서 본 발명의 키트는 2종 이상의 별개의 제약 조성물로서, 그 중 적어도 1종은 본 발명의 화합물을 함유하는 것인 제약 조성물, 및 상기 조성물을 별개로 보유하기 위한 수단, 예컨대 용기, 분할된 병, 또는 분할된 호일 패킷을 포함한다. 이러한 키트의 예는 정제, 캡슐 등의 포장에 사용되는 익숙한 블리스터 팩이다. 본 발명의 키트는 상이한 투여 형태, 예를 들어, 경구 및 비경구 투여 형태를 투여하거나, 별개의 조성물을 상이한 투여 간격으로 투여하거나, 또는 별개의 조성물을 서로에 대해 적정하기에 특히 적합하다. 순응도에 도움이 되도록, 키트는 전형적으로 투여에 대한 지침서를 포함하며, 소위 기억 보조물이 제공될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 C5a 수용체 길항제가 지시되는 장애의 치료에서의 동시, 별개 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 본 발명의 화합물을 1종 이상의 추가의 치료 활성제와 함께 포함하는 제약 제품 (예컨대 키트 형태)을 제공한다.
본원에서 치료에 대한 모든 언급은 치유적, 완화적 및 예방적 치료를 포함하는 것으로 인지되어야 한다.
하기 설명에 기재된 비제한적 실시예 및 제조예에서, 및 상기 언급된 반응식에서, 하기 약어, 정의 및 분석 절차가 지칭될 수 있다:
AcOH는 아세트산이고;
APCI는 대기압 화학적 이온화이고;
aq는 수성이고;
boc는 tert-부틸옥시카르보닐이고;
(boc)2O는 디-tert-부틸 디카르보네이트이고;
℃는 섭씨 온도이고;
Cbz-Cl은 카르복시벤질 클로라이드 (또한 벤질 클로로포르메이트로 공지되어 있음)이고;
CDCl3은 듀테로클로로포름이고;
CD3OD는 듀테로메탄올이고;
CTC는 2-클로로트리틸이고;
DBU는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔이고;
DCE는 디클로로에탄이고;
DCM은 디클로로메탄 (또한 메틸렌 클로라이드로 공지되어 있음)이고;
DEA는 디에틸아민이고;
DIPEA는 디이소프로필에틸 아민이고;
DMAP는 디메틸아미노피리딘이고;
DME는 디메톡시에탄이고;
DMF는 N,N-디메틸포름아미드이고;
DMSO는 디메틸술폭시드이고;
d6-DMSO는 듀테로디메틸술폭시드이고;
ESCI는 전기분무 화학적 이온화이고;
ESI는 전기분무 이온화이고;
EtOAc는 에틸 아세테이트이고;
Fmoc (FMOC)는 플루오레닐메틸옥시카르보닐이고;
Fmoc-OSu는 N-(9-플루오레닐메톡시카르보닐옥시)숙신이미드이고;
g는 그램이고;
HCl은 염산이고;
HATU는 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트이고;
HBTU는 O-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸-우로늄-헥사플루오로-포스페이트)이고;
HFIPA는 헥사플루오로이소프로판올이고;
HPLC는 고압 액체 크로마토그래피이고;
i-PrOH는 이소프로판올이고;
L은 리터이고;
LC-MS는 액체 크로마토그래피 질량 분광측정법이고;
M은 몰이고;
MeCN은 아세토니트릴이고;
MeOH는 메탄올이고;
meq는 몰 당량이고;
mg는 밀리그램이고;
MHz는 메가 헤르츠이고;
min은 분이고;
mL은 밀리리터이고;
mmol은 밀리몰이고;
mol은 몰이고;
MTBE는 메틸 3급-부틸 에테르이고;
MS m/z는 질량 스펙트럼 피크이고;
NaHCO3은 탄산수소나트륨이고;
NaOH는 수산화나트륨이고;
NH3 또는 NH4OH는 암모니아 또는 수산화암모늄이고;
NMM은 N-메틸모르폴린이고;
Pbf는 (2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐이고;
PE는 석유 에테르이고;
pH는 수소의 지수이고;
r.t.는 실온이고;
SFC는 초임계 유체 크로마토그래피이고;
SPPS는 고체 상 펩티드 합성이고;
TBAI는 테트라부틸암모늄 아이오다이드이고;
TBME는 tert-부틸 디메틸 에테르이고;
TEA는 트리에틸아민이고;
TFA는 트리플루오로아세트산이고;
THF는 테트라히드로푸란이고;
tR은 체류 시간이고;
μL은 마이크로리터이고;
μmol은 마이크로몰이다.
하기 절차를 하기 실시예와 관련하여 사용하였다.
방법 A: 고체 상 반응의 진행을 모니터링하기 위한 LC-MS 방법
소량의 CTC 수지-결합된 펩티드 (대략 2 내지 5 mg)를 5분 동안 실온에서 DCM 중 20% HFIPA로 처리하였다. 휘발성 물질을 질소의 스트림 하에 증발시키고, 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 여과하고, 워터스 LC-MS에 의해 분석하였다.
LC-MS 조건:
칼럼: 워터스 액퀴티 HSS T3, 2.1 mm x 50 mm, C18, 1.7 μm; 온도: 60℃; 이동상 A: 물 중 0.1% 포름산 (v/v); 이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산 (v/v); 유량 1.25 ml/분.
Figure pct00022
1.5분 실행: 초기 조건: A-95%:B-5%; 0.0-0.1분까지 초기 조건에서 유지; 0.1-1.0분에 걸쳐 A-5%:B-95%로의 선형 경사; 1.0-1.1분까지 A-5%:B-95%에서 유지; 1.1-1.5분까지 초기 조건으로 복귀.
Figure pct00023
3분 실행: 초기 조건: A 95%:B 5%; 0.0분부터 0.1분까지 초기 조건에서 유지, 이어서 0.1분부터 2.6분까지 A 5%:B 95%로의 선형 경사; 2.6분부터 2.95분까지 A 5%:B 95%에서 유지, 이어서 2.95분부터 3.0분까지 초기 조건으로 복귀.
검출기: 워터스 액퀴티 PDA; 200-450 nm 스캔; 1.2 nm 간격
워터스 액퀴티 ELS 검출기; 드리프트 튜브 65℃
워터스 SQ MS (단일 사중극자) 튜닝: ESI-3.5 kV 모세관/APCI (ESCI 모드에서)-0.3 μA 코로나 핀, 30 V 콘, 공급원 150℃, 탈용매화 475℃, 탈용매화 기체 N2 400 L/hr
MS 방법: ESCI (ESI+/-, APCI+/-), 100-2000 m/z 스캔, 0.4초 스캔 시간, 중심법
주입 부피: 5 μl
방법 B: CTC 수지 상에의 Fmoc-보호된 아미노산의 로딩 (1 mmol 미만의 스케일)
SPPS 튜브에서, CTC 수지 (CAS 42074-68-0, 켐임펙스(ChemImpex)로부터 상업적으로 입수가능함, 카탈로그 번호 04250, 1.0-1.7 meq/g, 1.0 당량)를 DMF/DCM의 혼합 용매 (1:10 v/v, 12 ml/mmol의 CTC 수지) 중 선택된 Fmoc-보호된 아미노산 (1.1 당량) 및 DIPEA (6 당량)의 용액과 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 진탕시켰다. 이어서, 무수 메탄올 (16 당량)을 첨가하여 임의의 미반응 CTC 수지를 캡핑하였다. 실온에서 추가로 30분 동안 진탕시킨 후, 수지를 여과하고, DMF (3x10 ml), DCM (3x10 ml), MeOH (3x10 ml), 및 DMF (3x10 ml)로 세척하였다. Fmoc 제거를 위해, 이어서 수지를 진탕 베드 상에서 실온에서 DMF 중 20% v/v 피페리딘 (10 ml)으로 30분 동안 처리하였다. 이어서, 수지를 여과하고, DMF (3x10 ml), DCM (3x10 ml), MeOH (3x10 ml)로 세척하고, 진공 하에 완전히 건조시켜 CTC 수지-결합된 아미노산을 수득하였으며, 이를 임의의 추가 정제 없이 직접 고체 상 합성에 사용하였다. 비-로딩된 CTC 수지와 비교된 중량 증가에 기반하여 수지 로딩률을 추정하였다.
방법 C: 2-클로로트리틸 (CTC) 수지 상에의 Fmoc-보호된 아미노산의 로딩 (1.0 내지 100 mmol 스케일)
오버헤드 기계적 교반기가 장착된 SPPS 용기에서, CTC 수지 (1.0-1.7 meq/g, 1.0 당량)를 DMF/DCM의 혼합 용매 (1:10 v/v, 6.6 ml/mmol의 CTC 수지) 중 선택된 Fmoc-보호된 아미노산 (1.1 당량) 및 DIPEA (6 당량)의 용액과 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 서서히 교반하였다. 무수 메탄올 (16 당량)을 첨가하여 임의의 미반응 CTC 수지를 캡핑하였다. 실온에서 추가로 30분 동안 교반한 후, 용액을 진공 여과에 의해 수지로부터 제거하였다. 수지-결합된 생성물을 DMF (3x200 ml), DCM (3x200 ml), MeOH (3x200 ml), 및 DMF (3x200 ml)로 세척하였다. Fmoc 제거를 위해, 이어서 수지를 DMF 중 20% v/v 피페리딘 (300 ml)으로 실온에서 30분 동안 서서히 교반하면서 처리하였다. 이어서, 수지를 진공 하에 여과하고, DMF (3x200 ml), DCM (3x200 ml), MeOH (3x100 ml)로 세척하고, 진공 하에 완전히 건조시켜 CTC 수지-결합된 아미노산을 수득하였으며, 이를 임의의 추가 정제 없이 직접 고체 상 합성에 사용하였다. 비-로딩된 수지와 비교된 중량 증가에 기반하여 수지 로딩률을 추정하였다.
방법 D: 선형 펜타펩티드 전구체, SPS (1 mmol 미만의 스케일)
CTC 수지-결합된 아미노산 (1.0 당량)을 함유하는 SPPS 튜브에 Fmoc-보호된 아미노산 (1.5 당량), HBTU (1.5 당량), DMF (12 ml) 및 DIPEA (3 당량)를 첨가하였다. SPPS 튜브를 마개를 막고, 진탕 베드 상에서 2시간 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 실온에서 진탕시켰다. 이어서, 반응 용액을 진공 여과에 의해 SPPS 튜브로부터 제거하여 수지-결합된 생성물을 수득하였으며, 이를 DMF (3x10 ml), DCM (3x10 ml), MeOH (3x10 ml) 및 DMF (3x10 ml)로 헹구었다. Fmoc 기의 제거를 위해, 수지를 후속적으로 DMF 중 20% v/v 피페리딘 10 ml로 실온에서 처리하고, 진탕 베드 상에 30분 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 두었다. 수지를 진공 여과하고, DMF (3x12 ml), DCM (3x12 ml) 및 MeOH (3x10 ml)로 헹구고, 진공 하에 건조시켜 유리 말단 아미노 기를 갖는 수지-결합된 펩티드를 수득하였으며, 이를 임의의 추가 정제 없이 다음 아미노산 커플링 반응에 직접 사용하였다.
상기 커플링/탈-Fmoc 절차를, 매회 각각 상이한 아미노산을 사용하여 3회 더 반복하여 유리 말단 아미노 기를 갖는 CTC 수지-결합된 선형 펜타펩티드 서열을 수득하였다.
방법 E: 선형 펜타펩티드 전구체, SPS (1.0 내지 100 mmol 스케일)
소결 필터 디스크 및 오버헤드 교반기가 장착된 500 ml SPPS 용기에 CTC 수지-결합된 아미노산 (1.0 당량, 로딩 방법 C 사용), Fmoc-보호된 아미노산 (1.5 당량), HBTU (1.0 당량), DMF (100 ml) 및 DIPEA (3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 서서히 교반하였다. 이어서, 반응 용액을 진공 여과에 의해 SPPS 용기로부터 제거하고, 수지 생성물을 DMF (3x100 ml), DCM (3x100 ml), MeOH (3x100 ml) 및 DMF (3x100 ml)로 헹구었다. Fmoc 기의 제거를 위해, 수지를 후속적으로 DMF 중 20% v/v 피페리딘 100 ml로 실온에서 처리하고, 30분 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 서서히 교반하였다. 수지를 진공 여과하고, DMF (3x120 ml), DCM (3x120 ml) 및 MeOH (3x100 ml)로 헹구고, 진공 하에 건조시켜 유리 말단 아미노 기를 갖는 수지-결합된 펩티드를 수득하였으며, 이를 임의의 추가 정제 없이 다음 아미노산 커플링 반응에 직접 사용하였다.
상기 커플링/탈-Fmoc 절차를, 매회 각각 상이한 아미노산을 사용하여 3회 더 반복하여 유리 말단 아미노 기를 갖는 CTC 수지-결합된 선형 펜타펩티드 서열을 수득하였다.
방법 F: 선형 헥사펩티드 전구체, SPS (1 mmol 미만의 스케일)
측쇄 아미노산 도입
Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (1.0 당량)을 방법 B를 사용하여 CTC 수지 상에 로딩하였다. SPPS 튜브에서 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 N-보호된 아미노산 (1.2 당량), HBTU (1.2 당량) 및 DMF (12 ml/mmol)와 혼합하고, 진탕 베드 상에서 약 1시간 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 실온에서 진탕시켰다. 수지를 여과하고, DMF (3x10 ml), DCM (3x10 ml) 및 MeOH (3x10 ml)로 세척한 다음, 진공 하에 건조시켰다.
알릴옥시카르보닐 제거
수지-결합된 디펩티드 (1.0 당량)를 자기 교반기가 장착된 둥근 바닥 플라스크로 옮겼다. 질소 분위기 하에, DCM (8-9 ml/mmol), 페닐 실란 (16 당량) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (0.12 당량)을 순차적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 N2 하에 1시간 동안 서서히 교반 (약 50 rpm)한 다음, 수지-결합된 생성물을 여과하고, DCM (3x10 ml), DMF (3x10 ml) 및 MeOH (3x10 ml)로 세척한 다음, 진공 하에 건조시켜 유리 오르니틴 δ-아미노 기를 갖는 수지-결합된 디펩티드를 수득하였다.
아미노산의 추가의 커플링
유리 오르니틴 δ-아미노 기를 갖는 수지-결합된 디펩티드를 SPPS 튜브 내로 옮기고, 이어서 Fmoc-보호된 아미노산 (1.5 당량), HBTU (1.5 당량), DMF (12 ml) 및 DIPEA (3 당량)를 첨가하였다. SPPS 튜브를 마개를 막고, 진탕 베드 상에서 2시간 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 실온에서 진탕시켰다. 이어서, 반응 용액을 진공 여과에 의해 SPPS 튜브로부터 제거하여 수지-결합된 생성물을 수득하였으며, 이를 DMF (3x10 ml), DCM (3x10 ml), MeOH (3x10 ml) 및 DMF (3x10 ml)로 헹구었다. FMOC 제거를 위해, 수지를 후속적으로 DMF 중 20% v/v 피페리딘 10 ml로 실온에서 처리하고, 진탕 베드 상에 30분 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 두었다. 수지를 진공 여과하고, DMF (3x12 ml), DCM (3x12 ml) 및 MeOH (3x10 ml)로 헹구고, 이어서 진공 하에 건조시켜 유리 말단 아미노 기를 갖는 수지-결합된 펩티드를 수득하였으며, 이를 임의의 추가 정제 없이 다음 아미노산 커플링 반응에 직접 사용하였다.
상기 커플링/탈-Fmoc 절차를, 매회 각각 상이한 아미노산을 사용하여 3회 더 반복하여 유리 말단 아미노 기를 갖는 CTC 수지-결합된 선형 헥사펩티드 서열을 수득하였다.
방법 G: 선형 헥사펩티드 전구체, SPS (1.0 내지 100 mmol 스케일)
측쇄 아미노산 도입
Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (1.0 당량)을 방법 C를 사용하여 CTC 수지 상에 로딩하였다. 오버헤드 기계적 교반기가 장착된 SPPS 용기에서, 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 N-보호된 아미노산 (1.3 당량), HBTU (1.3 당량) 및 DMF (6-6.6 ml/mmol의 로딩된 수지)와 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 약 2시간 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 서서히 교반하였다. 수지를 여과하고, DMF (3x200 ml), DCM (3x200 ml) 및 MeOH (3x100 ml)로 세척한 다음, 진공 하에 건조시켰다.
알릴옥시카르보닐 제거
수지-결합된 디펩티드 (1.0 당량)를 함유하는 SPPS 용기에 DCM (8-9 ml/mmol), 페닐 실란 (16 당량) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (0.12 당량)을 순차적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 N2 하에 서서히 교반하였다 (약 50 rpm). 수지-결합된 생성물을 여과하고, DCM (3x200 ml), DMF (3x200 ml) 및 MeOH (3x100 ml)로 세척한 다음, 진공 하에 건조시켜, 유리 오르니틴 δ-아미노 기를 갖는 수지-결합된 디펩티드를 수득하였다.
아미노산의 추가의 커플링
유리 오르니틴 δ-아미노 기를 갖는 수지-결합된 디펩티드를 함유하는 SPPS 용기에 Fmoc-보호된 아미노산 (1.5 당량), HBTU (1.5 당량), DMF (6-7 ml/mmol의 로딩된 수지) 및 DIPEA (3 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 서서히 교반하였다. 이어서, 반응 용액을 진공 여과에 의해 SPPS 용기로부터 제거하여 수지-결합된 생성물을 수득하였으며, 이를 DMF (3x200 ml), DCM (3x200 ml), MeOH (3x100 ml) 및 DMF (3x100 ml)로 헹구었다. FMOC 제거를 위해, 수지를 후속적으로 DMF 중 20% v/v 피페리딘 (8-9 ml/mmol의 로딩된 수지)으로 실온에서 30분 동안 또는 방법 A를 사용하여 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 서서히 교반하면서 처리하였다. 수지를 진공 여과하고, DMF (3x200 ml), DCM (3x200 ml) 및 MeOH (3x100 ml)로 헹구고, 이어서 진공 하에 건조시켜 유리 말단 아미노 기를 갖는 수지-결합된 펩티드를 수득하였으며, 이를 임의의 추가 정제 없이 다음 아미노산 커플링 반응에 직접 사용하였다.
상기 커플링/탈-Fmoc 절차를, 매회 각각 상이한 아미노산을 사용하여 3회 더 반복하여 유리 말단 아미노 기를 갖는 CTC 수지-결합된 선형 헥사펩티드 서열을 수득하였다.
방법 H: CTC 수지로부터의 선형 펩티드의 절단 (1 mmol 미만의 스케일)
수지-결합된 펜타펩티드 또는 헥사펩티드를 실온에서 30분 동안 진탕 베드 상에서 진탕시키면서, SPPS 튜브에서 DCM 중 HFIPA의 용액 (20% v/v, 12 ml/mmol의 로딩된 수지)으로 처리하였다. 수지를 여과하고, 여과물을 수집하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 증발시켜 선형 펜타펩티드 또는 헥사펩티드를 수득하였다.
방법 I: CTC 수지로부터의 선형 펩티드의 절단 (1.0 내지 100 mmol 스케일)
수지-결합된 펜타펩티드 또는 헥사펩티드를 실온에서 30분 동안 서서히 교반하면서, SPPS 용기에서 DCM 중 HFIPA의 용액 (20% v/v, 12 ml/mmol의 기질)으로 처리하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 수집하였다. 수지를 실온에서 추가로 30분 동안 서서히 교반하면서 DCM 중 20% v/v HFIPA의 또 다른 동일한 부피로 처리하고, 다시 여과하였다. 여과물을 합하고, 진공 하에 증발 건조시켜 선형 펜타펩티드 또는 헥사펩티드를 수득하였다.
방법 J: 선형 펜타펩티드 또는 헥사펩티드 전구체의 마크로락탐화 (1 mmol 미만의 스케일)
250 ml 둥근 바닥 플라스크에서, 선형 펜타펩티드 또는 헥사펩티드 고체 (1.0 당량)를 DMF 및 THF (1:10 v/v)의 혼합 용매 중에 용해시켜 0.013 M 농도의 용액을 수득하였다. 교반하면서, HATU (1.05 당량) 및 N-메틸 모르폴린 (3 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15-60분 동안 또는 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 (방법 A) 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 디에틸 에테르 및 에틸 아세테이트 (1:1 v/v)로 희석하고, 0.5 M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켜 시클릭 완전 보호된 펜타펩티드 또는 헥사펩티드를 수득하였다.
방법 K: 선형 펜타펩티드 또는 헥사펩티드 전구체의 마크로락탐화 (1.0 내지 100 mmol 스케일)
3 L 둥근 바닥 플라스크에서, 선형 펜타펩티드 또는 헥사펩티드 고체 (1.0 당량)를 DMF 및 THF (1:10 v/v)의 혼합 용매 중에 용해시켜 0.013 M 농도의 용액을 수득하였다. 이어서, 이 용액을 DMF (6 ml/mmol의 HATU) 중 HATU (1.05 당량) 및 N-메틸 모르폴린 (3 당량)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15-60분 동안 또는 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 (방법 A) 교반하였다. 용매를 증발에 의해 제거하고, 잔류물을 디에틸 에테르 및 에틸 아세테이트 (1:1 v/v, 15 ml/mmol의 기질)로 희석하고, 0.5 M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켜 시클릭 완전 보호된 펜타펩티드 또는 헥사펩티드를 수득하였다.
방법 L: 전반적 탈보호 (1 mmol 미만의 스케일)
완전 보호된 시클릭 펩티드 (1.0 당량)를 HFIPA 중 HCl의 용액 (1 M, HFIPA에 12 M HCl, 30 당량을 첨가함으로써 제조됨) 중에 0℃에서 교반하면서 용해시켰다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 또는 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 (방법 A) 교반하였다. 휘발성 물질을 증발에 의해 제거하고, 잔류물을 MeCN을 사용하여 5회 공증류시켜 과량의 HCl을 제거하였다. 이어서, 잔류물을 물 중에 용해시키고, MTBE로 추출하고, 6 M NaOH의 첨가에 의해 pH 6-7로 중화시켰다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 또는 LC-MS (방법 A)에 의해 인돌-N-카르밤산이 잔류하지 않는 것으로 지시될 때까지 교반되도록 하였다. 이어서, 잔류물을 감압 하에 MeCN을 사용하여 공증발시켜 물을 제거하였다. MeOH를 첨가하고, 용액을 실온에서 약 2시간 동안 정치시켰다. 침전된 NaCl 고체를 여과하였다. 이어서, 여과물을 증발 건조시켜 조질의 완전 탈보호된 시클릭 펩티드를 수득하였다.
방법 M: 전반적 탈보호 (1.0 내지 100 mmol 스케일)
0℃에서 HFIPA (28 ml/mmol의 시클릭 펩티드) 중 완전 보호된 시클릭 펩티드 (1.0 당량)의 용액에 진한 HCl의 용액 (12 M, 30 당량)을 교반하면서 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 또는 LC-MS가 반응의 완결을 지시할 때까지 (방법 A) 교반하였다. 휘발성 물질을 증발에 의해 제거하고, 잔류물을 MeCN을 사용하여 5회 공증류시켜 과량의 HCl을 제거하였다. 이어서, 잔류물을 물 중에 용해시키고, MTBE에 의해 추출하여 임의의 비-극성 불순물을 제거하고, 6 M NaOH의 첨가에 의해 pH 6-7로 중화시켰다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 또는 LC-MS (방법 A)에 의해 인돌-N-카르밤산이 잔류하지 않는 것으로 지시될 때까지 교반되도록 하였다. 이어서, 잔류물을 감압 하에 MeCN을 사용하여 공증발시켜 물을 제거하였다. MeOH를 첨가하고, 용액을 실온에서 약 2시간 동안 정치시켰다. 침전된 NaCl 고체를 여과하였다. 이어서, 여과물을 증발 건조시켜 조질의 완전 탈보호된 시클릭 펩티드를 수득하였다.
방법 N: 완전 탈보호된 시클릭 펜타펩티드 상의 측쇄 아미노산 도입 및 최종 탈보호
완전 탈보호된 시클릭 펜타펩티드 (1.0 당량)를 DMF (37 ml/mmol의 시클릭 펩티드) 중 N-보호된 아미노산 (1.1 당량), HATU (1.1 당량) 및 4-메틸모르폴린 (8 당량)으로 처리하고, 반응물을 실온에서 80분 동안 또는 LC-MS (방법 A)가 반응의 완결을 지시할 때까지 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트로 희석한 다음, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켜 고체 잔류물을 제공하였다. 이 고체를 1시간 동안 실온에서 HFIPA 중 1 M HCl로 처리하여 임의의 추가의 tert-부틸 에스테르 및/또는 Boc 기를 제거함으로써 조질의 최종 탈보호된 시클릭 펩티드를 수득하였다.
방법 O: HPLC 정제 방법 1
칼럼: 루나 200x25 mm (C18, 10 μm, 100A) + 제미니 150x30 mm (C18, 5 μm, 110A)
이동상: A 아세토니트릴; B 0.1% TFA 함유 물. 등용매 22% A, 이어서 46분부터 50분까지 24% A로의 구배.
실행 시간: 60분, 이어서 칼럼 세척 (95% A)
검출기: 214/254 nm. 유량: 20 ml/분
로드: 물 중 10% 아세토니트릴 20 ml 중에 용해된 조 물질 1 g.
순수한 시클릭 펩티드를 함유하는 전체 분획을 합하고, 직접 동결건조시켜 시클릭 펩티드를 고체 TFA 염으로서 제공하였다. TFA 염을 수성 중탄산암모늄을 함유하는 이동상을 사용하여 동일한 칼럼을 통해 다시 통과시켜 유리 쯔비터이온 형태를 제공하였다.
이동상: A 아세토니트릴; B 0.01 M NH4HCO3 함유 물. 등용매 28% A, 이어서 30분부터 35분까지 33% A로의 구배.
실행 시간: 60분, 이어서 칼럼 세척 (95% A)
검출기: 220/254 nm. 유량: 20ml/분
로드: 물 중 5% 아세토니트릴 7 ml 중에 용해된 조물질 ~1.1 g
순수한 시클릭 펩티드를 함유하는 전체 분획을 합하고, 직접 동결건조시켜 화학식 (I)의 화합물을 제공하였다.
방법 P: HPLC 정제 방법 2
칼럼: 50 x 250 mm, 선파이어, C18, 5 μm.
이동상: A 아세토니트릴; B 0.1% TFA 함유 물. 등용매 15% A, 이어서 45분부터 60분까지 18% A로의 구배.
실행 시간: 65분, 이어서 칼럼 세척 (95% A)
검출기: 220 nm. 유량: 100 ml/분
로드: 물 중 20% 아세토니트릴 3 ml 중에 용해된 조물질 300 mg.
순수한 시클릭 펩티드를 함유하는 전체 분획을 합하고, 아세토니트릴을 회전 증발에 의해 제거하였다. 잔류하는 고체 펩티드 TFA 염을 물 중에 용해시키고, 포획 칼럼 상에 로딩하였다. 세척 후, 수성 중탄산암모늄을 함유하는 이동상을 사용한 용리로 화학식 (I)의 화합물을 제공하였다.
칼럼: 포라팩 역상.
포획 칼럼 상에 로딩된 물질을 순수한 물에 의해, 여러 층 칼럼 부피로 pH가 중성에 가까워질 때까지 세척하였다. 이어서, 세척 용액의 pH가 대략 8이 될 때까지 칼럼을 중탄산암모늄 용액 (1g/L의 물)으로 세척하였다. 순수한 시클릭 펩티드를 함유하는 전체 분획을 합하고, 아세토니트릴을 회전 증발에 의해 제거하였다. 생성된 시클릭 펩티드 수성 용액을 동결건조시켜 화학식 (I)의 화합물을 제공하였다.
하기 비제한적 실시예 및 제조예에서, 1H 핵 자기 공명 (NMR) 스펙트럼은 모든 경우에 제안된 구조와 일치하였다. 특징적 화학적 이동 (δ)이 주요 피크의 명칭으로서 통상적인 약어를 사용하여, 테트라메틸실란으로부터의 백만분율 (ppm) 다운필드로 제공된다 (예컨대 s = 단일선, br s = 넓은 단일선, d = 이중선, dd = 이중 이중선; td = 삼중 이중선, t는 삼중선이고, q는 사중선이고, m은 다중선임).
하기 실시예와 관련하여, 통상의 기술자는 상이한 화학 명명 규정이 동일한 화합물에 대해 대체 명칭을 제공할 수 있는 것으로 인지할 것이다.
실시예 1
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
Figure pct00024
실시예 1에 대한 대체 화학 명칭은 하기와 같다:
N-[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]글리신.
로딩.
방법 C에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (33.6 g, 76 mmol, 1.5 당량), CTC 수지 (1.7 meq, 30.0 g, 51.1 mmol, 1.0 당량), DIPEA (72 ml, 406 mmol, 8 당량) 및 DMF 및 DCM의 혼합 용매 (1:10 v/v, 330 ml)를 사용하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 서서히 교반하고, MeOH (33 ml)에 첨가에 의해 캡핑하였다. 로딩률은 수지의 중량 증가에 기반하여, 81% 또는 41.3 mmol인 것으로 추정되었다. 이어서, 수지를 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 Fmoc 기를 제거함으로써 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 수득하였다.
측쇄 아미노산 도입.
CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (46.6 g, 41.3 mmol), N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (20.4 g, 53.7 mmol, 1.30 당량), HBTU (21.0 g, 53.7 mmol, 1.30 당량), DIPEA (22.6 ml, 128 mmol, 3.1 당량) 및 DMF (250 ml)를 실온에서 120분 동안 서서히 교반하였으며, 이 때 LC-MS (방법 A)는 반응의 완결을 지시하였다. LC-MS (방법 A, 3분 실행): t R 1.92분, ESI- [M-H] C29H41N3O9 계산치 576.6; 실측치 576.5.
알릴옥시카르보닐 제거.
수지-결합된 디펩티드 (S)-5-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-2-((S)-2-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판아미도)펜탄산 (47.7 g, 34.2 mmol, 1.0 당량)을 DCM (285 ml) 중에 현탁시켰다. 혼합물을 페닐실란 (70 ml, 547 mmol, 16 당량) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (4.74 g, 4.10 mmol, 0.12 당량)과 함께 실온에서 1시간 동안 교반하였으며, 이 때 LC-MS (방법 A)는 반응의 완결을 지시하였다. 수지를 여과하고, 세척하고, 건조시켜 수지-결합된 (S)-5-아미노-2-((S)-2-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판아미도)펜탄산을 수득하였다. LC-MS (방법 A, 3분 실행): t R 1.22분, ESI- [M-H] C25H37N3O7 계산치 491.6; 실측치 492.4.
아미노산의 추가의 커플링 및 수지로부터의 선형 펩티드의 절단.
(3R,6S,9S,15S)-15-((S)-2-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판아미도)-1-((2S,4R)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-일)-6-((1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-인돌-3-일)메틸)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10-테트라옥소-9-(3-(3-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)구아니디노)프로필)-2,5,8,11-테트라아자헥사데칸-16-산 (선형 헥사펩티드)의 제조.
수지-결합된 (S)-5-아미노-2-((S)-2-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판아미도)펜탄산 (28.5 mmol, 1.0 당량)을 순차적으로 Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (33.3 g, 42 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (30.0 g, 57 mmol, 2.0 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (15.2 g, 37 mmol, 1.3 당량), 및 트랜스-3-t-부톡시-N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-L-프롤린 (15.2 g, 37 mmol, 1.3 당량)을 사용하는 방법 G에 기재된 고체 상 커플링 및 Fmoc 제거 절차에 적용하여 수지 상의 상응하는 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 펩티드를 방법 I에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 백색 고체, 33.8 g, 78%로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 8.49 (br s, 1H), 8.38 (br s, 1H), 8.21 - 7.94 (m, 3H), 7.91 (br s, 1H), 7.70 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.42 - 7.16 (m, 5H), 5.17 (td, J=6.7, 13.6 Hz, 2H), 4.76 - 4.48 (m, 2H), 4.47 - 4.25 (m, 1H), 4.25 - 4.13 (m, 2H), 4.07 (br s, 1H), 3.93 (br s, 1H), 3.84 - 3.62 (m, 2H), 3.55 (dd, J=10.9, 18.7 Hz, 3H), 3.36 (br s, 4H), 3.16 (d, J=14.4 Hz, 3H), 3.12 - 2.87 (m, 6H), 2.77 (d, J=12.5 Hz, 1H), 2.45 (s, 2H), 2.02 (s, 2H), 1.97 (br s, 1H), 1.87 - 1.67 (m, 2H), 1.64 (s, 4H), 1.58 (br s, 1H), 1.48 - 1.35 (m, 13H), 1.34 - 1.24 (m, 9H), 1.23 - 1.09 (m, 7H), 1.06 (br s, 1H), 0.98 (d, J=16.0 Hz, 1H), 0.92 - 0.72 (m, 1H). LC-MS (방법 A, 3분 실행): t R 1.96분, ESI- [M-H] C78H116N11O18S 계산치 1525.9; 실측치 1526.4.
마크로락탐화.
tert-부틸-3-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-19-(tert-부톡시)-15-((S)-2-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판아미도)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소-9-(3-(3-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)구아니디노)프로필)이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-6-일)메틸)-1H-인돌-1-카르복실레이트 (시클릭 펩티드)의 제조.
마크로락탐화에 대한 방법 K에 따라, 선형 (3R,6S,9S,15S)-15-((S)-2-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판아미도)-1-((2S,4R)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-일)-6-((1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-인돌-3-일)메틸)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10-테트라옥소-9-(3-(3-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)구아니디노)프로필)-2,5,8,11-테트라아자헥사데칸-16-산 (33.8 g, 22.2 mmol, 1.0 당량)을 실온에서 THF (1400 ml) 및 DMF (175 ml) 중 HATU (9.36 g, 24.4 mmol, 1.1 당량) 및 4-메틸모르폴린 (12.3 ml, 111 mmol, 5.0 당량)과 30분 동안 반응시켰으며, 이 때 LC-MS (방법 A)는 반응의 완결을 지시하였다. 시클릭 펩티드를 회백색 분말, 29.1 g, 87%로서 단리하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS (방법 A): t R 2.44분, ESI+ [M+H] C78H114N11O17S 계산치 1509.9; 실측치 1510.2.
전반적 탈보호.
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신 (실시예 1의 표제 화합물)의 제조
방법 M에 따라, 시클릭 펩티드 tert-부틸 3-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-19-(tert-부톡시)-15-((S)-2-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판아미도)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소-9-(3-(3-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)구아니디노)프로필)이코사히드로피롤로[1,2a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-6-일)메틸)-1H-인돌-1-카르복실레이트 (29.1 g, 19.3 mmol)를 90분 동안 실온에서 HFIPA (529 ml) 중 12 M HCl (48 ml)로 처리하여 백색 분말, 21.1 g을 수득하였으며, 이를 방법 P에 기재된 방법을 사용하는 정제용 HPLC 정제에 적용하여 표제 화합물, 실시예 1을 백색 고체, 7.4 g, 40.7%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.92 (br s, 1H), 9.08 (br s, 1H), 8.59 (br s, 1H), 8.34 (br s, 1H), 7.97 (br s, 1H), 7.95 - 7.81 (m, 2H), 7.69 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.52 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.15 (m, 8H), 7.14 - 6.95 (m, 3H), 6.90 (br s, 1H), 4.64 (d, J=6.6 Hz, 2H), 4.47 (br s, 1H), 4.24 (br s, 2H), 4.06 (br s, 1H), 3.93 (br s, 1H), 3.57 (br s, 1H), 3.45 (br s, 2H), 3.39 - 3.17 (m, 10H), 3.14 - 2.88 (m, 6H), 2.86 - 2.59 (m, 4H), 2.54 - 2.46 (m, 4H), 2.09 (s, 1H), 1.99 (br s, 1H), 1.86 (br s, 2H), 1.62 (br s, 1H), 1.56 - 1.40 (m, 3H), 1.36 (br s, 3H), 1.32 - 1.18 (m, 4H), 1.18 - 0.98 (m, 7H), 0.86 (br s, 3H). HRMS (m/z) [M+H]+ C47H66N11O10 계산치 944.4989, 실측치 944.4987.
실시예 1을 또한 하기 기재된 절차에 따라 제조하였다:
로딩.
방법 C에 따라, Nα-t-부틸옥시카르보닐-Nδ-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-L-오르니틴 (8.73 g, 19.2 mmol, 1.2 당량), DIPEA (18 ml, 13.4 g, 102 mmol, 6.5 당량), 및 CTC-수지 (1.2 meq/g, 13.3 g, 16 mmol, 1.0 당량)를 로딩 단계에서 사용하였다. FMOC 제거 후에, 로딩률은 수지의 중량 증가에 기반하여 3.6 mmol인 것으로 추정되었다.
아미노산의 추가의 커플링 및 수지로부터의 선형 펩티드의 절단.
(3R,6S,9S,15S)-1-((2S,4R)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-일)-6-((1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-인돌-3-일)메틸)-15-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10-테트라옥소-9-(3-(3-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)구아니디노)프로필)-2,5,8,11-테트라아자헥사데칸-16-산 (선형 펜타펩티드)의 제조.
방법 E에 따라, Nα-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-N',N"-비스-t-부틸옥시카르보닐-L-아르기닌 (3.50 g, 5.40 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (2.46 g, 4.68 mmol, 1.3 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (2.15 g, 5.24 mmol, 1.3 당량) 및 트랜스-3-t-부톡시-N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-L-프롤린 (2.19 g, 5.35 mmol, 1.3 당량)을 고체 상 커플링 및 Fmoc 제거 절차 각각에서 순차적으로 사용하여 CTC 수지-결합된 선형 펜타펩티드를 수득하였다. 방법 I에 따라, 선형 펜타펩티드를 수지로부터 절단하여 표제 화합물을 백색 고체, 5.59 g, 정량적 수율 (3.6 mmol 로딩을 기준으로 계산됨)로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 3분 실행): t R 1.71분, ESI- [M-H] C63H95N10O15S 계산치 1264.5, 실측치 1264.1.
마크로락탐화.
tert-부틸-3-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-19-(tert-부톡시)-15-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소-9-(3-(3-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)구아니디노)프로필)이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-6-일)메틸)-1H-인돌-1-카르복실레이트 (시클릭 펩티드)의 제조.
방법 K에 따라, 선형 펜타펩티드 (3R,6S,9S,15S)-1-((2S,4R)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-일)-6-((1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-인돌-3-일)메틸)-15-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10-테트라옥소-9-(3-(3-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)구아니디노)프로필)-2,5,8,11-테트라아자헥사데칸-16-산 (5.48 g, 4.33 mmol)을 THF 및 DMF (10:1 v/v, 330 ml) 중에 용해시키고, 15분 동안 실온에서 HATU (1.91 g, 4.98 mmol, 1.15 당량) 및 4-메틸모르폴린 (2.41 ml, 21.7 mmol, 5 당량)으로 처리하였다. 시클릭 펩티드를 회백색 고체, 5.15 g, 95.3%로서 단리하였다. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 8.55 (br s, 1H), 8.25 (br s, 1H), 8.02 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 1H), 7.27 - 7.20 (m, 1H), 6.90 (br s, 1H), 6.72 (d, J=7.0 Hz, 1H), 4.64 (d, J=5.5 Hz, 1H), 4.49 - 4.36 (m, 2H), 4.25 (br s, 1H), 4.18 - 4.08 (m, 2H), 3.67 - 3.57 (m, 1H), 3.11 - 2.89 (m, 6H), 2.43 (s, 3H), 2.01 (s, 4H), 1.88 (d, J=6.6 Hz, 1H), 1.82 - 1.73 (m, 1H), 1.62 (s, 10H), 1.52 (br s, 3H), 1.40 (s, 9H), 1.36 (br s, 13H), 1.21 - 1.13 (m, 3H), 1.00 (d, J=11.3 Hz, 2H). LC-MS (방법 A, 3분 실행): t R 2.12분, ESI+ [M+H] C63H95N10O14S 계산치 1248.5; 실측치 1248.9.
전반적 탈보호.
1-(3-((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-15-아미노-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-9-일)프로필)구아니딘 (탈보호된 시클릭 펩티드)의 제조
방법 M에 따라, 시클릭 펩티드 tert-부틸 3-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-19-(tert-부톡시)-15-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소-9-(3-(3-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)구아니디노)프로필)이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-6-일)메틸)-1H-인돌-1-카르복실레이트 (5.15 g, 4.11 mmol, 1.0 당량)를 HFIPA (110 ml) 중에 용해시키고, 1시간 동안 실온에서 12 M HCl (10 ml, 12 mmol, 30 당량)로 처리하였다. 과량의 HCl 및 NaCl을 제거하여 탈보호된 시클릭 펩티드를 제공하였으며, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다. LC-MS (방법 A, 3분 실행) t R 0.59분, ESI+[M+H] C36H55N10O7 계산치 739.9; 실측치 739.6.
완전 탈보호된 시클릭 펜타펩티드 상의 측쇄 아미노산 도입, 및 최종 탈보호
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신 (실시예 1의 표제 화합물)의 제조
방법 N에 따라, 시클릭 펜타펩티드 1-(3-((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-15-아미노-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-9-일)프로필)구아니딘 (4.11 mmol, 1.0 당량), N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (1.72 g, 4.52 mmol, 1.10 당량), HATU (1.74 g, 4.52 mmol, 1.10 당량), 4-메틸모르폴린 (4 ml, 33 mmol, 8 당량) 및 DMF (150 ml)를 80분 동안 실온에서 교반하였다. 단리된 오렌지색 점착성 조 잔류물을 실온에서 30분 동안 HFIPA 중 1 M HCl (50 ml)로 처리하였으며, 이 때 LC-MS (방법 A)는 반응의 완결을 지시하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 HFIPA (30 ml) 중에 용해시켰다. 이 HFIPA 용액을 MeCN (100 ml)에 천천히 첨가하여 분홍색 현탁액을 수득하였으며, 이를 증발 건조시키고, 추가로 EtOAc (50 ml x 2)를 사용하여 공증발시켜 갈색 분말, 3.72 g을 수득하였다. 분말을 방법 P를 사용하여 정제하여 표제 화합물, 실시예 1을 백색 고체, 204 mg, 회수율 21.5%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.92 (br s, 1H), 9.08 (br s, 1H), 8.59 (br s, 1H), 8.34 (br s, 1H), 7.97 (br s, 1H), 7.95 - 7.81 (m, 2H), 7.69 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.52 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.15 (m, 8H), 7.14 - 6.95 (m, 3H), 6.90 (br s, 1H), 4.64 (d, J=6.6 Hz, 2H), 4.47 (br s, 1H), 4.24 (br s, 2H), 4.06 (br s, 1H), 3.93 (br s, 1H), 3.57 (br s, 1H), 3.45 (br s, 2H), 3.39 - 3.17 (m, 10H), 3.14 - 2.88 (m, 6H), 2.86 - 2.59 (m, 4H), 2.54 - 2.46 (m, 4H), 2.09 (s, 1H), 1.99 (br s, 1H), 1.86 (br s, 2H), 1.62 (br s, 1H), 1.56 - 1.40 (m, 3H), 1.36 (br s, 3H), 1.32 - 1.18 (m, 4H), 1.18 - 0.98 (m, 7H), 0.86 (br s, 3H). HRMS (m/z) [M+H]+ C47H66N11O10 계산치 944.4989, 실측치 944.4987.
실시예 2
2-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-15-((S)-2-((카르복시메틸)아미노)-3-페닐프로판아미도)-9-(3-구아니디노프로필)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-19-일)옥시)아세트산
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 1.0 g, 1.0 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (1.0 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (973 mg, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (790 mg, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (614 mg, 1.3 당량) 및 (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에톡시)피롤리딘-2-카르복실산 (701 mg, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 커플링 및 Fmoc 제거 절차에 따라 조립하여 수지 상의 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 일반적 절차 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 백색 고체, 775 mg, 79%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 3분 실행) t R 1.97분, ESI+[M+H] C80H118N2O20S 계산치 1585.9; 실측치 1585.8.
선형 헥사펩티드 (775 mg, 0.489 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 백색 고체, 638 mg, 83%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 3분 실행) t R 2.49분, ESI+[M+H] C80H116N11O19S 계산치 1567.9; 실측치 1567.9.
완전 보호된 시클릭 펩티드 (638 mg, 0.407 mmol, 1.0 당량)를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하였으며, 이로써 완전 탈보호된 시클릭 펩티드를 백색 분말, 435 mg으로서 수득하였다. 이 물질을 방법 O를 사용하여 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 2를 백색 고체, 151 mg, 35.8%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 8.61 (d, J=6.5 Hz, 1H), 8.37 (br s, 1H), 7.89 (dd, J=7.8, 17.3 Hz, 1H), 7.49 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.13 (m, 2H), 7.11 - 6.94 (m, 1H), 6.46 (d, J=8.5 Hz, 1H), 5.01 - 4.90 (m, 1H), 4.74 (d, J=9.0 Hz, 1H), 4.54 (br s, 1H), 4.21 (br s, 1H), 4.01 (d, J=6.0 Hz, 1H), 3.80 (br s, 1H), 3.74 - 3.54 (m, 1H), 3.50 (br s, 1H), 3.26 - 3.08 (m, 1H), 3.06 - 2.86 (m, 1H), 2.79 (dd, J=7.5, 14.1 Hz, 1H), 2.70 - 2.57 (m, 1H), 2.07 (s, 1H), 1.87 (d, J=5.5 Hz, 1H), 1.68 (br s, 1H), 1.56 (d, J=17.1 Hz, 1H), 1.38 (br s, 1H), 1.27 (br s, 1H), 1.20 (br s, 1H), 1.16 - 0.92 (m, 1H), 0.87 (d, J=10.5 Hz, 1H), 0.71 (br s, 1H). LC-MS (방법 A, 3분 실행) t R 0.76분, ESI-[M-H] C49H67N11O12 계산치 1001.1; 실측치 1000.7.
실시예 3
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-6-((4-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 1.0 g, 1.0 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.6 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (340 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (585 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판산 (350 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (360 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-카르복실산 (370 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 일반적 절차 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 백색 고체, 670 mg, 80%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.97분, ESI+[M/2+H] C69H108N12O16S 계산치 696.8; 실측치 696.4.
선형 헥사펩티드 (670 mg, 0.48 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 백색 고체, 320 mg, 48%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.98분, ESI+[M/2+H] C69H106N12O15S 계산치 687.9; 실측치 687.4.
조질의 완전 보호된 시클릭 펩티드 (320 mg, 0.23 mmol)를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 3을 백색 솜털모양 고체, 80 mg, 46%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 8.60 (br s, 1H), 8.45 (br s, 2H), 7.70 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.58 (t, J=5.6 Hz, 1H), 7.37 - 7.18 (m, 9H), 7.13 (br s, 3H), 4.64 - 4.53 (m, 2H), 4.50 - 4.38 (m, 3H), 4.38 - 4.23 (m, 2H), 4.23 - 4.02 (m, 3H), 3.88 (d, J=4.5 Hz, 2H), 3.68 (br s, 2H), 3.64 - 3.55 (m, 2H), 3.51 (d, J=14.1 Hz, 6H), 3.38 (br s, 59H), 3.07 (br s, 8H), 2.74 (br s, 2H), 2.50 (d, J=3.5 Hz, 27H), 2.01 - 1.90 (m, 6H), 1.79 (br s, 1H), 1.59 (d, J=3.0 Hz, 3H), 1.47 (br s, 4H), 1.43 - 1.28 (m, 9H), 1.25 (br s, 4H), 1.14 (br s, 2H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.74분, ESI+[M+H] C43H65N12O10 계산치 909.5; 실측치 909.4.
실시예 4
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-6-((5-메톡시-1H-인돌-3-일)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 100 mg, 0.1 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.1 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (57 mg, 0.15 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (98 mg, 0.15 mmol, 1.5 당량), (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(5-메톡시-1H-인돌-3-일)프로판산 (69 mg, 0.15 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (61 mg, 0.15 mmol, 1.5 당량), (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-카르복실산 (62 mg, 0.15 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 황색 오일, 146 mg, 조 수율 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 1.00분, ESI+[M/2+H] C74H111N11O17S 계산치 729.4; 실측치 729.0.
조질의 선형 헥사펩티드 (146 mg, 0.10 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 회백색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 전반적 탈보호 단계에 사용하였다.
완전 보호된 시클릭 펩티드를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 4를 백색 고체, 5.9 mg, 6.0%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.80 - 10.72 (m, 1H), 8.52 (d, J=5.5 Hz, 1H), 8.35 (br s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.37 - 7.12 (m, 13H), 7.04 - 6.91 (m, 2H), 6.76 - 6.67 (m, 1H), 4.41 (br s, 5H), 4.10 (br s, 19H), 3.93 (br s, 5H), 3.75 (s, 7H), 3.70 (s, 15H), 3.17 (s, 31H), 1.36 (br s, 3H), 1.31 - 1.17 (m, 5H), 1.15 (br s, 3H), 1.10 (br s, 4H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.61분, ESI+[M+H] C48H68N11O11S 계산치 975.1; 실측치 974.6.
실시예 5
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,20aS)-6-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 200 mg, 0.2 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.2 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (114 mg, 0.3 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (195 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량), (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)프로판산 (159 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (1231 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량) 및 (((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-L-프롤린 (101 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 황색 오일, 271 mg, 조 수율 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.95분, ESI+[M/2+H-Boc] C73H106N12O16S 계산치 678.8; 실측치 678.5.
조질의 선형 헥사펩티드 (271 mg, 0.20 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 회백색 고체, 302 mg으로서 수득하였다. 이 물질을 추가 정제 없이 전반적 탈보호에 사용하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.95분, ESI+[M/2+H] C73H106N12O16S 계산치 719.3; 실측치 718.5.
완전 보호된 시클릭 펩티드 (302 mg, 0.2 mmol)를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 5를 백색 고체, 12.3 mg, 6.6%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 11.44 (s, 1H), 8.53 (d, J=7.5 Hz, 1H), 8.29 - 8.20 (m, 3H), 8.05 - 7.84 (m, 4H), 7.30 - 7.15 (m, 9H), 7.14 - 6.95 (m, 4H), 4.55 (br s, 2H), 4.37 - 3.86 (m, 6H), 3.52 (br s, 7H), 3.35 (br s, 210H), 3.17 (s, 17H), 3.09 (d, J=17.1 Hz, 7H), 3.04 - 2.86 (m, 8H), 2.50 (d, J=3.5 Hz, 254H), 2.33 (br s, 10H), 2.07 (s, 3H), 1.85 (br s, 4H), 1.65 (br s, 3H), 1.52 (br s, 6H), 1.33 (br s, 6H), 1.28 - 1.17 (m, 4H), 1.07 (d, J=10.0 Hz, 7H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.51분, ESI+[M+H] C46H65N12O9 계산치 927.1; 실측치 929.6.
실시예 6
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 200 mg, 0.2 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.2 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (114 mg, 0.3 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (195 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량), (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)프로판산 (159 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (123 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-카르복실산 (123 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 황색 오일, 286 mg, 조 수율 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.97분, ESI+[M/2+H-Boc] C72H108N12O16S 계산치 714.8; 실측치 714.4.
조질의 선형 헥사펩티드 (286 mg, 0.20 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 회백색 고체, 282 mg으로서 수득하였다. 이 물질을 추가 정제 없이 전반적 탈보호에 사용하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 1.00분, ESI+[M/2+H] C77H112N12O17S 계산치 755.9; 실측치 755.5.
완전 보호된 시클릭 펩티드 (282 mg, 0.2 mmol)를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 6을 백색 고체, 7.8 mg, 4.8%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 11.46 (br s, 1H), 8.54 (br s, 1H), 8.33 (br s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.21 - 8.13 (m, 1H), 8.10 - 8.00 (m, 1H), 7.93 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.34 - 7.17 (m, 6H), 7.02 (dd, J=4.3, 7.8 Hz, 2H), 4.59 (br s, 1H), 4.40 (br s, 1H), 4.24 (br s, 2H), 4.09 (br s, 7H), 3.89 (br s, 3H), 3.33 (br s, 189H), 3.17 (s, 23H), 3.07 (d, J=16.1 Hz, 4H), 3.02 - 2.85 (m, 4H), 2.50 (d, J=3.5 Hz, 24H), 2.33 (s, 5H), 2.01 - 1.80 (m, 3H), 1.49 (br s, 4H), 1.32 (br s, 3H), 1.08 (d, J=10.0 Hz, 4H), 0.82 (br s, 1H). LC-MS (방법 A) t R 0.57분, ESI+[M+H] C46H65N12O10 계산치 946.1; 실측치 946.6.
실시예 7
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19S,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-19-아미노-9-(3-구아니디노프로필)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 C에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 3.0 g, 3.0 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (3.0 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (1.71 g, 4.5 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (2.92 g, 4.5 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (1.92 g, 4.5 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (1.80 g, 4.5 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (2.03 g, 4.5 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 G에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 I에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 오일, 4.41 g, 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.90분, ESI+[M/2+H] C74H108N12O17S 계산치 735.9; 실측치 735.1.
선형 헥사펩티드 (4.41 g, 3 mmol, 1.0 당량)를 방법 K에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 황색 고체, 4.35 g, 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.97분, ESI+[M+H] C80H106N11O16S 계산치 1452.8; 실측치 1452.2.
완전 보호된 시클릭 펩티드 (4.35 g, 3 mmol, 1.0 당량)를 방법 M에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 7을 백색 고체, 312 mg, 10%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.90 (s, 1H), 8.50 (br s, 3H), 8.30 (s, 1H), 8.10 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.76 (t, J=5.5 Hz, 1H), 7.51 (d, J=8.0 Hz, 5H), 7.32 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 6H), 7.13 (s, J=4.4 Hz, 1H), 7.05 (t, J=7.5 Hz, 1H), 6.97 (t, J=6.7 Hz, 1H), 4.59 (d, J=6.5 Hz, 1H), 4.49 (br s, 1H), 4.25 (br s, 2H), 4.13 (d, J=7.0 Hz, 2H), 3.97 (br s, 2H), 3.77 (br s, 2H), 3.59 (br s, 3H), 3.43 (br s, 1H), 3.40 - 3.25 (m, 4H), 3.12 - 2.95 (m, 5H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.78 (d, J=6.0 Hz, 1H), 2.50 (d, J=1.5 Hz, 50H), 2.31 (d, J=14.1 Hz, 4H), 1.77 (br s, 2H), 1.61 (br s, 1H), 1.49 (br s, 3H), 1.40 (br s, 5H), 1.21 (br s, 6H), 1.14 (br s, 7H), 0.96 (br s, 2H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.59분, ESI+[M+H] C47H66N12O9 계산치 944.1; 실측치 944.6.
실시예 8
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-19-아미노-9-(3-구아니디노프로필)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 1.0 g, 1.0 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.6 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (342 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (584 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (384 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (360 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (406 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 조 오일, 774 mg, 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.94분, ESI+[M/2+H] C74H108N12O17S 계산치 735.9; 실측치 735.6.
선형 헥사펩티드 (774 mg, 0.6 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.97분, ESI+[M/2+Na] C80H106N11O16S 계산치 749.1; 실측치 749.1.
완전 보호된 시클릭 펩티드를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 8을 백색 고체, 37.6 mg, 6.6%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.91 (br s, 1H), 8.74 (br s, 1H), 8.63 (br s, 1H), 8.32 (s, 2H), 8.02 (br s, 1H), 7.88 (t, J=5.7 Hz, 1H), 7.63 (br s, 2H), 7.51 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.36 - 7.15 (m, 6H), 7.12 - 7.03 (m, 1H), 7.01 - 6.91 (m, 1H), 4.68 (br s, 1H), 4.57 (br s, 1H), 4.23 (br s, 3H), 4.07 (br s, 3H), 3.93 (br s, 4H), 3.80 (br s, 6H), 3.68 (br s, 7H), 3.56 (br s, 7H), 3.39 (br s, 3H), 3.33 (br s, 4H), 3.17 (s, 1H), 3.06 (d, J=15.6 Hz, 3H), 3.00 - 2.85 (m, 3H), 2.79 (br s, 1H), 2.68 (br s, 1H), 2.55 - 2.46 (m, 47H), 2.33 (br s, 2H), 2.02 (br s, 1H), 1.84 (br s, 2H), 1.62 (br s, 1H), 1.51 (br s, 3H), 1.34 (br s, 4H), 1.16 (d, J=12.5 Hz, 4H), 1.06 (br s, 4H), 0.83 (br s, 1H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.97분, ESI+[M/2+H] C47H66N12O9 계산치 472.0; 실측치 472.5.
실시예 9
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-19-아세트아미도-9-(3-구아니디노프로필)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 1.0 g, 1.0 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.6 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (342 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (584 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (384 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (360 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(아세틸아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (406 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 조 오일, 847 mg, 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.86분, ESI+[M+H] C71H103N12O16S 계산치 1412.7; 실측치 1412.5.
선형 헥사펩티드 (847 mg, 0.6 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.93분, ESI+[M+H] C71H101N12O15S 계산치 1394.7; 실측치 1394.8.
완전 보호된 시클릭 펩티드를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 9를 백색 고체, 113 mg, 20%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.91 (br s, 1H), 8.70 (br s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.22 (d, J=6.0 Hz, 2H), 8.01 (d, J=6.5 Hz, 2H), 7.52 - 7.38 (m, 4H), 7.32 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 7H), 7.05 (t, J=7.5 Hz, 1H), 6.97 (t, J=7.3 Hz, 1H), 4.58 - 4.50 (m, 1H), 3.99 (br s, 1H), 3.64 (d, J=8.5 Hz, 5H), 3.53 (br s, 7H), 3.46 (br s, 7H), 3.42 - 3.33 (m, 8H), 3.28 (d, J=13.1 Hz, 5H), 3.21 - 3.07 (m, 6H), 3.04 (br s, 1H), 3.01 - 2.88 (m, 4H), 2.81 - 2.75 (m, 1H), 2.33 (br s, 4H), 2.06 (br s, 1H), 1.87 (d, J=8.5 Hz, 1H), 1.80 (s, 4H), 1.66 (br s, 2H), 1.48 (br s, 4H), 1.33 (br s, 4H), 1.25 (d, J=6.0 Hz, 2H), 1.14 (br s, 3H), 1.12 - 0.95 (m, 7H), 0.82 (br s, 3H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.76분, ESI+[M+H] C49H69N12O10 계산치 986.1; 실측치 986.4.
실시예 10
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19S,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-19-아세트아미도-9-(3-구아니디노프로필)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 1.0 g, 1.0 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.6 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (342 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (584 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (384 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (360 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(아세틸아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (406 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드 중간체를 조 오일, 847 mg, 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.86분, ESI+[M+H] C71H103N12O16S 계산치 1412.7; 실측치 1412.5.
선형 헥사펩티드 (847 mg, 0.6 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.93분, ESI+[M+H] C71H101N12O15S 계산치 1394.7; 실측치 1394.8.
완전 보호된 시클릭 펩티드를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 10을 백색 고체, 130 mg, 30%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.88 (s, 1H), 8.61 (br s, 1H), 8.37 (br s, 1H), 8.16 (br s, 1H), 8.07 (d, J=6.5 Hz, 1H), 7.52 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.39 - 7.13 (m, 10H), 7.12 - 6.94 (m, 2H), 4.56 (br s, 1H), 4.41 (t, J=7.5 Hz, 1H), 4.29 - 3.98 (m, 5H), 3.93 (br s, 3H), 3.57 (br s, 8H), 3.46 (br s, 7H), 3.39 (d, J=5.5 Hz, 7H), 3.25 (d, J=15.6 Hz, 4H), 3.20 - 3.04 (m, 6H), 3.04 - 2.85 (m, 3H), 2.77 (dd, J=7.8, 14.3 Hz, 2H), 2.67 (br s, 1H), 2.27 (br s, 1H), 1.87 (br s, 1H), 1.80 (s, 3H), 1.69 (br s, 1H), 1.52 (br s, 2H), 1.46 (br s, 2H), 1.34 (br s, 3H), 1.23 (br s, 2H), 1.12 (br s, 5H), 0.94 (br s, 1H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.76분, ESI+[M+H] C49H69N12O10 계산치 986.1; 실측치 986.5.
실시예 11
N-((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)-N-메틸글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 300 mg, 0.3 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.3 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-메틸-L-페닐알라닌 (132 mg, 0.45 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (292 mg, 0.45 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (237 mg, 0.45 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (184 mg, 0.45 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-카르복실산 (184 mg, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지 상의 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 백색 고체, 402 mg, 조 수율 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.81분, ESI+[M+H] C80H118N2O20S 계산치 1341.7; 실측치 1341.2.
선형 헥사펩티드 (402 mg, 0.3 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 백색 고체, 194 mg, 조 수율 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.85분, ESI+[M+H] C69H99N11O13S 계산치 1323.6; 실측치 1323.5.
조질의 완전 보호된 시클릭 펩티드 (194 mg, 0.3 mmol, 1.0 당량)를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하였으며, 이로써 완전 탈보호된 시클릭 펩티드를 백색 분말, 287 mg으로서 수득하였다. 이 분말을 방법 O를 사용하여 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 11을 백색 고체, 14.9 mg, 5.2%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.86 (s, 1H), 8.48 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.17 (br s, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.53 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.35 - 7.12 (m, 1H), 7.05 (t, J=7.0 Hz, 1H), 6.96 (t, J=7.5 Hz, 1H), 4.56 - 4.47 (m, 1H), 4.39 (br s, 1H), 4.26 (br s, 1H), 4.13 - 3.95 (m, 1H), 3.77 - 3.47 (m, 1H), 3.35 (br s, 46H), 3.20 - 2.91 (m, 2H), 2.89 - 2.60 (m, 1H), 2.52 - 2.48 (m, 40H), 2.36 - 2.30 (m, 1H), 2.24 (s, 1H), 1.97 (d, J=7.0 Hz, 1H), 1.85 (br s, 1H), 1.68 - 1.31 (m, 1H), 1.30 - 1.06 (m, 1H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.51분, ESI+[M+H] C48H68N11O10 계산치 959.1; 실측치 959.6.
실시예 12
((3R,6S,9S,15S,19S,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-15-((S)-2-((카르복시메틸)아미노)-3-페닐프로판아미도)-9-(3-구아니디노프로필)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-19-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 200 mg, 0.2 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.2 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (114 mg, 0.3 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (195 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (128 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (123 mg, 0.30 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (70 mg, 0.15 mmol, 0.75 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 황색 오일, 297 mg, 조 수율 100%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A) t R 0.93분, ESI+[M/2+H] C75H110N12O17S 계산치 742.9; 실측치 742.5.
조질의 선형 헥사펩티드 (297 mg, 0.20 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 황색 고체, 293 mg으로서 수득하였다. 이 물질을 추가 정제 없이 전반적 탈보호에 사용하였다. LC-MS (방법 A) t R 1.01분, ESI+[M/2+H] C75H108N12O16S 계산치 733.9; 실측치 734.3.
완전 보호된 시클릭 펩티드 (293 mg, 0.2 mmol)를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 12를 백색 고체, 11.3 mg, 5.7%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.83 (s, 1H), 9.78 (br s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.23 - 8.05 (m, 2H), 7.75 (br s, 1H), 7.59 (br s, 1H), 7.48 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.26 - 7.13 (m, 10H), 7.10 - 7.01 (m, 3H), 6.96 (t, J=7.3 Hz, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.43 (br s, 1H), 4.31 - 4.10 (m, 5H), 4.06 - 3.88 (m, 3H), 3.59 (br s, 9H), 3.06 (d, J=16.1 Hz, 22H), 2.91 - 2.73 (m, 10H), 2.67 (br s, 9H), 1.40 (br s, 12H), 1.27 - 1.11 (m, 13H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.50분, ESI+[M+H] C49H68N12O11 계산치 1002.1; 실측치 1001.6.
실시예 13
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-(3,5-디듀테로페닐)프로판-2-일)글리신
Figure pct00025
방법 N에 따라, 시클릭 펜타펩티드 1-(3-((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-15-아미노-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-9-일)프로필)구아니딘 (200 mg, 0.27 mmol, 1.0 당량)을 HATU (162 mg, 0.43 mmol, 1.57 당량) 및 DIPEA (283 μL, 1.6 mmol, 6 당량)의 존재 하에 (S)-2-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)프로판산 (218 mg, 0.4 mmol, 1.5 당량)과 반응시켜 헥사펩티드 tert-부틸 N-((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-3-(((1s,4S)-4-(l1-옥시다닐)시클로헥실)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-(l1-옥시다닐)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)-1-옥소프로판-2-일)-N-(tert-부톡시카르보닐)글리시네이트를 황색 고체, 320 mg, 94% 조 수율로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.87분, ESI+[M+H] C56H79Br2N11O12 계산치 1259.1; 실측치 1258.7.
이러한 조 헥사펩티드 (80 mg, 0.064 mmol)를, HFIPA (3 ml)를 사용하며 12 M HCl (0.27 ml, 3.2 mmol, 50 당량)로 ~20℃에서 1시간 동안 처리하는 방법 N에 기재된 탈보호 조건에 적용하여 조질의 탈보호된 생성물 화합물 ((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)-1-옥소프로판-2-일)글리신을 황색 고체 (100 mg, 100% 조 수율)로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.68분, ESI+[M+H] C47H64Br2N11O10 계산치 1102.9; 실측치 1103.1.
조질의 탈보호된 헥사펩티드 (200 mg, 0.182 mmol, 1.0 당량)를 10% Pd/C (19.3 mg, 0.182 mg, 1.0 당량) 및 MeOH를 함유하는 15 ml 파르 병에 넣었다. 반응 용기를 닫고, 진공/N2 퍼징에 의해 10회 탈기시키고, 이어서 3사이클의 진공/D2 퍼징을 수행하고, 그 후에 파르 병에 D2 기체를 15 psi까지 충전시키고, 18℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용기를 D2 기체로 재충전하고, 실온에서 추가로 16시간 동안 교반되도록 하였다. 이어서, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 증발 건조시켜 황색 오일을 수득하였으며, 이를 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 13을 백색 고체, 36.7 mg, 21.4%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.91 (br s, 1H), 8.58 (br s, 1H), 8.45 (br s, 1H), 8.37 - 8.27 (m, 1H), 8.10 - 7.85 (m, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.32 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 7.12 - 6.91 (m, 2H), 4.69 - 4.55 (m, 1H), 4.61 (d, J=7.5 Hz, 4H), 4.42 (br s, 1H), 4.22 (br s, 2H), 4.08 (br s, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.91 (br s, 5H), 3.39 (br s, 71H), 3.13 - 2.86 (m, 3H), 2.78 (s, 1H), 2.67 (s, 1H), 2.52 - 2.49 (m, 97H), 2.05 - 1.80 (m, 1H), 1.70 - 1.44 (m, 1H), 1.50 (br s, 3H), 1.08 (d, J=10.5 Hz, 4H), 1.42 - 0.92 (m, 5H). HRMS (m/z) [M+H]+ C47H64D2N11O10 계산치 946.5114, 실측치 946.5095.
실시예 14
((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인돌-3-일)메틸)-15-((S)-2-((카르복시메틸)아미노)-3-페닐프로판아미도)-9-(3-구아니디노프로필)-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-19-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 400 mg, 0.4 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.4 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (230 mg, 0.6 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (390 mg, 0.60 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1-(tert-부톡시카르보닐)-L-트립토판 (260 mg, 0.60 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (252 mg, 0.60 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (135 mg, 0.24 mmol, 0.60 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 고체로서 수득하였으며, 이를 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.96분, ESI+[(M-tBu)/2+H] C75H110N12O17S 계산치 714.1; 실측치 714.5.
선형 헥사펩티드 (0.40 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 황색 고체, 586 mg으로서 수득하였다. 이 물질을 후속 전반적 탈보호에 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 1.06분, ESI+[(M-tBu-tBu-Boc)/2+H] C75H108N12O16S 계산치 627.9; 실측치 627.5.
완전 보호된 시클릭 펩티드 (293 mg, 0.2 mmol)를 방법 M에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 14를 백색 고체, 38.9 mg, 19.4%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.86 (br s, 1H), 9.99 (br s, 1H), 8.62 (br s, 1H), 8.37 (br s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.88 (d, J=6.5 Hz, 1H), 7.49 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.28 - 7.18 (m, 3H), 7.09 - 6.95 (m, 1H), 6.58 (br s, 1H), 4.74 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.56 (br s, 1H), 4.23 (br s, 1H), 4.12 (br s, 1H), 4.04 (br s, 1H), 3.83 (br s, 3H), 3.34 (br s, 6H), 3.25 - 2.94 (m, 7H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.81 (d, J=8.0 Hz, 1H), 2.67 (br s, 1H), 2.50 (br s, 52H), 2.33 (s, 1H), 2.07 (br s, 1H), 1.93 - 1.71 (m, 1H), 1.64 (br s, 1H), 1.53 (br s, 1H), 1.29 (br s, 2H), 1.21 (br s, 1H), 1.14 (br s, 1H), 1.00 (d, J=19.6 Hz, 2H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.78분, ESI+[M+H] C49H68N12O11 계산치 1002.1; 실측치 1002.3.
실시예 15
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-6-((6-메톡시-1H-인돌-3-일)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 400 mg, 0.4 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.4 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (230 mg, 0.6 mmol, 1.5 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (390 mg, 0.60 mmol, 1.5 당량), (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(6-메톡시-1H-인돌-3-일)프로판산 (276 mg, 0.60 mmol, 1.5 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (252 mg, 0.60 mmol, 1.5 당량) 및 (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-카르복실산 (246 mg, 0.6 mmol, 1.50 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 선형 헥사펩티드를 고체로서 수득하였으며, 이를 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.96분, ESI+[M+H] C74H109N11O17S 계산치 1457.8; 실측치 1457.5.
선형 헥사펩티드 (0.20 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 황색 고체, 288 mg으로서 수득하였다. 이 물질을 후속 전반적 탈보호에 추가 정제 없이 사용하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.99분, ESI+[(M-tBu-tBu-Boc)/2+H] C74H107N11O16S 계산치 613.9; 실측치 613.8.
완전 보호된 시클릭 펩티드 (293 mg, 0.2 mmol)를 방법 M에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 15를 백색 고체, 4.5 mg, 2.3%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.75 (d, J=13.1 Hz, 1H), 8.53 (br s, 3H), 8.41 (s, 5H), 8.23 - 7.80 (m, 6H), 7.53 - 7.33 (m, 14H), 7.29 - 7.16 (m, 21H), 7.09 - 6.97 (m, 2H), 6.82 (d, J=8.5 Hz, 1H), 6.63 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.75 (s, 6H), 4.60 (br s, 8H), 4.41 (br s, 8H), 4.29 - 3.99 (m, 23H), 3.83 - 3.71 (m, 20H), 3.68 (br s, 17H), 3.17 (s, 21H), 3.12 - 2.84 (m, 4H), 2.52 - 2.48 (m, 163H), 2.41 - 2.31 (m, 30H), 2.07 - 1.77 (m, 6H), 1.52 (br s, 14H), 1.36 (br s, 17H), 1.24 (br s, 15H), 1.19 - 1.05 (m, 26H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.51분, ESI+[M+H] C48H67N11O11 계산치 975.1; 실측치 975.5.
실시예 16
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인다졸-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 600 mg, 0.6 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.6 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (227 mg, 0.60 mmol, 1.0 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (571 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-인다졸-3-일)프로판산 (317 mg, 0.60 mmol, 1.0 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (122 mg, 0.300 mmol, 0.5 당량), (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-카르복실산 (369 mg, 0.90 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 조질의 선형 헥사펩티드 중간체를 수득하였으며, 이를 역상 플래쉬 크로마토그래피 (구형 20*45 mm 칼럼 (C18,100 A, 26 g), 구배: 아세토니트릴/물 10% (5분)부터 90% (10분 내), 이어서 100% MeCN (6분 내), 35 mL/분)에 의해 정제하여 목적하는 선형 펩티드를 백색 고체, 100 mg, 수율 10%로서 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.926분, ESI+[M/2+H] C77H116N12O18S 계산치 764.4; 실측치 765.0.
조질의 선형 헥사펩티드 (90 mg, 0.059 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 완전 보호된 시클릭 펩티드를 회백색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 전반적 탈보호에 사용하였다.
조질의 완전 보호된 시클릭 펩티드를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 쯔비터이온 형태의 표제 화합물, 실시예 16을 백색 고체, 20.7 mg, 35%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 13.25 - 12.93 (m, 1H), 9.19 - 8.33 (m, 1H), 7.71 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.62 - 7.38 (m, 1H), 7.34 - 7.14 (m, 1H), 7.11 - 6.98 (m, 1H), 4.58 (br. s., 1H), 4.10 (d, J=3.0 Hz, 1H), 3.83 (br. s., 1H), 3.74 - 3.51 (m, 1H), 3.47 (br. s., 1H), 3.39 - 3.32 (m, 17H), 3.05 - 2.85 (m, 1H), 2.82 - 2.59 (m, 1H), 2.54 - 2.49 (m, 13H), 1.63 - 1.44 (m, 1H), 1.39 (br. s., 1H), 1.25 (br. s., 1H), 1.20 - 1.00 (m, 1H), 0.89 (br. s., 1H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.63분, ESI+[M+H] C46H65N12O10 계산치 946.1; 실측치 946.6.
실시예 17
((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((6-에틸-1H-인돌-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신
방법 B에 따라, Nα-Fmoc-Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴을 2-클로로트리틸 수지 (CTC 수지, 1.0 meq, 600 mg, 0.6 mmol) 상에 로딩하고, 후속적으로 DMF 중 피페리딘 (20% v/v)으로 처리하여 CTC 수지-결합된 Nδ-알릴옥시카르보닐-L-오르니틴 (0.6 mmol)을 수득하였다.
후속적으로 헥사펩티드 선형 서열을, 순차적으로 N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌 (227 mg, 0.60 mmol, 1.0 당량), Nα-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-Nω-((2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-일)술포닐)-L-아르기닌 (571 mg, 0.9 mmol, 1.5 당량), (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(1-(tert-부톡시카르보닐)-6-에틸-1H-인돌-3-일)프로판산 (333 mg, 0.60 mmol, 1.0 당량), N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌 (409 mg, 0.90 mmol, 1.5 당량), (2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시)피롤리딘-2-카르복실산 (369 mg, 0.90 mmol, 1.5 당량)을 사용하여 방법 F에 기재된 절차에 따라 조립하여 수지-결합된 선형 헥사펩티드를 수득하였다. 이러한 수지-결합된 생성물을 방법 H에 기재된 절단 조건에 적용하여 조질의 선형 헥사펩티드 중간체, 470 mg, 조 수율 50%를 수득하였다. LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.96분, ESI+[M/2+H] C80H121N11O18S 계산치 777.9; 실측치 778.3.
조질의 선형 헥사펩티드 (470 mg, 0.302 mmol, 1.0 당량)를 방법 J에 기재된 마크로락탐화 조건에 적용하여 조질의 완전 보호된 시클릭 펩티드를 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 역상 플래쉬 크로마토그래피 (구형 20*45 mm 칼럼 (C18, 100 A, 26 g), 구배: 아세토니트릴/물 10% (5분)부터 90% (10분 내), 이어서 100% MeCN (6분 내), 35 mL/분)에 의해 정제하여 시클릭 펩티드를 백색 고체, 195 mg, 수율 42%로서 수득하였다.
정제된 완전 보호된 시클릭 펩티드를 방법 L에 기재된 전반적 탈보호 조건에 적용하고, 이어서 방법 O를 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 쯔비터이온 형태의 표제 화합물, 실시예 17을 백색 고체, 23.8 mg, 19%로서 수득하였다. 1H NMR (400MHz, d6-DMSO) δ 10.91 - 10.63 (m, 1H), 8.97 (br. s., 1H), 8.69 - 8.22 (m, 1H), 8.10 - 7.78 (m, 1H), 7.74 - 7.34 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 7.11 (d, J=11.5 Hz, 1H), 3.55 (br. s., 1H), 3.37 (br. s., 20H), 3.08 (br. s., 1H), 3.04 - 2.90 (m, 1H), 2.80 - 2.72 (m, 1H), 2.70 - 2.58 (m, 1H), 2.54 - 2.49 (m, 13H), 1.85 (br. s., 1H), 1.60 (br. s., 1H), 1.51 (br. s., 1H), 1.47 - 1.29 (m, 1H), 1.29 - 1.01 (m, 3H). LC-MS (방법 A, 1.5분 실행) t R 0.63분, ESI+[M+H] C49H69N11O10 계산치 972.5.1; 실측치 973.1.
제조예 1
N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌
Figure pct00026
단계 1
(R)-메틸 2-아미노-3-(4-히드록시페닐)프로파노에이트의 제조
교반 막대가 장착된 2000 ml 둥근 바닥 플라스크에 (R)-3-(4-히드록시페닐) 알라닌 (150.0 g, 828 mmol, 1.00 당량), 이어서 메탄올 (1000 ml)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 빙수조에서 냉각시켰다. 현탁액에 SOCl2 (148 g, 1240 mmol, 1.50 당량)를 적가하였다. 용액을 10℃로 가온한 다음, 85℃에서 12시간 동안 환류시켰다. 생성된 용액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 130 g을 고체로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 임의의 추가 정제 없이 취하였다.
단계 2
(R)-메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-히드록시페닐)프로파노에이트의 제조
3 L 둥근 바닥 플라스크에 조 (R)-메틸 2-아미노-3-(4-히드록시페닐)프로파노에이트 (202 g, 871.8 mmol, 1.00 당량), 트리에틸아민 (221 g, 2.2 mol, 2.50 당량) 및 DCM (1 L)을 첨가하여 슬러리를 제공하였다. 슬러리를 빙조에서 냉각시키고, DCM (1 L) 중 (Boc)2O (209 g, 959 mmol, 1.10 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가 후, 생성된 무색 용액을 10℃로 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 혼합물에 물 (1.5 L)을 첨가하고, 이어서 pH 3이 달성될 때까지 진한 HCl을 천천히 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, 묽은 HCl (0.2 mol/L, 1.5 L) 및 염수 (1.5 L x2)로 세척하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하였다. 조 생성물에 DCM (400 ml) 및 PE (2 L)를 첨가하여 백색 현탁액을 제공하였다. 현탁액을 10℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 여과하였다. 생성된 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 210 g을 고체로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 임의의 추가 정제 없이 취하였다.
단계 3
(2R)-메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-히드록시시클로헥실)프로파노에이트 (시스 및 트랜스 이성질체의 혼합물)의 제조
2개의 2 L 수소화 용기 각각에 (R)-메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-히드록시페닐)프로파노에이트 약 105 g (355 mmol, 1.00 당량), 이어서 메탄올 (3 L) 및 Rh/C (36 g, 0.05 당량, 습윤 탄소 상 5%)를 첨가하였다. 흑색 현탁액을 진공 하에 배기시키고, H2 (3x)로 재충전하였다. 생성된 반응 혼합물을 50 psi의 수소 압력에서 24시간 동안 50℃에서 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 합하고, 감압 하에 조 오일 (~220 g)이 될 때까지 농축시켰다. 조 생성물을 EtOAc (200 ml) 및 PE (1 L) 중에 현탁시키고, 10℃에서 30분 동안 교반한 다음, 여과하였다. 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 84 g을 고체로서 제공하였다. 고체는 시클로헥실 기에 대한 시스 및 트랜스 이성질체 둘 다의 혼합물이었으며, 이는 단계 7에 기재된 바와 같은 목적하는 시스 이성질체의 최종 단리까지 후속 단계를 거쳤다.
단계 4
(2R)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-히드록시시클로헥실)프로판산 (시스 및 트랜스 이성질체의 혼합물)의 제조
2 L 둥근 바닥 플라스크에 (2R)-메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-히드록시시클로헥실)프로파노에이트 (84 g, 278.7 mmol, 1.0 당량), THF (500 ml), 물 (500 ml) 및 LiOH-H2O (23.4 g, 557 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 용액을 10℃에서 2시간 동안 교반하였다. 대부분의 THF를 감압 하에 제거하고, 묽은 수성 1 M HCl을 첨가하여 잔류물을 pH ~5로 산성화시켰다. 혼합물을 DCM (800 ml) 및 EtOAc (500 ml x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 80 g을 백색 고체로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 5
(2R)-2-아미노-3-(4-히드록시시클로헥실)프로판산 (시스 및 트랜스 이성질체의 혼합물)의 제조
2 L 둥근 바닥 플라스크에 (2R)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-히드록시시클로헥실)프로판산 (80.0 g, 278.40 mmol, 1.0 당량), 이어서 EtOAc (500 ml)를 첨가하였다. 15℃에서 현탁액에 EtOAc 중 HCl의 용액 (~4 M, 500 ml, 2 mol, 7.18 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 62 g을 백색 고체로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다.
단계 6
(2R)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(4-히드록시시클로헥실)프로판산 (시스 및 트랜스 이성질체의 혼합물)의 제조
2 L 둥근 바닥 플라스크에 (2R)-2-아미노-3-(4-히드록시시클로헥실)프로판산 (62.0 g, 277.11 mmol, 1.0 당량), H2O 500 ml 및 디옥산 500 ml, 이어서 Na2CO3 (88.1 g, 831 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 현탁액을 15℃에서 10분 동안 교반한 다음, 빙수조에 넣었다. 빙조 내의 반응 혼합물에 고체 Fmoc-OSu (93.5 g, 277 mmol, 1.0 당량)를 여러 부분으로 첨가하였다. 30분 후, 빙조를 제거하고, 혼합물을 90분 동안 교반하였다. 혼합물을 물 500 ml로 희석하고, 포화 수성 시트르산 용액을 첨가하여 pH 4로 조정하였다. 혼합물을 DCM (800 ml x2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 500 ml로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용액을 여과하고, 황색 오일로서 N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌으로도 공지된 표제 화합물 120 g이 될 때까지 농축시켰다.
단계 7
N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(시스-4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌의 단리
단계 6으로부터의 N-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-3-(4-히드록시시클로헥실)-D-알라닌의 시스 및 트랜스 이성질체의 혼합물 (120 g)로부터 표제 화합물의 단리를 250ml/분의 유량으로, 40% 아세토니트릴에서 시작하여 27분에 걸쳐 60% 아세토니트릴로 증가하는 물 중 아세토니트릴의 용리액과 함께, 페노메넥스 C18 250 x 80 mm x 10μm 칼럼을 사용하여 정제용 HPLC에 의해 달성하였다. 이 절차에 따라 표제 화합물 62 g을 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.79-7.77 (d, 2H), 7.69-7.59 (m, 2H), 7.44-7.33 (m, 2H), 7.32-7.28 (m, 2H), 4.42-4.30 (m, 2H), 4.24-4.20 (m, 1.9 H), 4.03-3.98 (m, 0.1 H), 3.89-3.86 (m, 1H), 1.78-1.39 (m, 11H); LCMS: MS = 432.0 (M+Na). HPLC 체류 시간 = 4.31분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0x50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 100% MeCN으로의 구배 (5분); 100% MeCN에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분.
제조예 2
N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌
Figure pct00027
단계 1
(S)-벤질 2-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸아미노)-3-페닐프로파노에이트의 제조.
3 L 둥근 바닥 플라스크에 벤질 L-페닐알라니네이트 히드로클로라이드 (200.0 g, 609.3 mmol, 1.00 당량), DMF (2.0 L), 및 K2CO3 (168.0 g, 1220 mmol, 2.00 당량)을 첨가하였다. 슬러리를 20℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 순수 tert-부틸 2-브로모아세테이트 (131.0 g, 670 mmol, 1.10 당량)를 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 50℃로 가열하고, 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 20℃로 냉각시키고, EtOAc (4.0 L)로 희석한 다음, 생성된 혼합물을 물 (6.0 L x 3)로 세척하고, 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 회백색 고체를 제공하였다. 고체를 실리카-겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액: 석유 에테르/에틸 아세테이트 100/0에서 0/100으로)를 통해 정제하여 회백색 고체를 제공하였다. 고체에 PE (1.5 L)를 첨가하고, 생성된 백색 현탁액을 실온에서 1시간 동안 격렬히 교반한 다음, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 114 g을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS: m/z 391.9 (M+Na+). HPLC 체류 시간: 4.03분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0x50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 100% MeCN으로의 구배 (5분); 100% MeCN에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분.
단계 2
(S)-벤질 2-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로파노에이트의 제조.
1 L 둥근 바닥 플라스크에 (S)-벤질 2-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸아미노)-3-페닐프로파노에이트 (20.0 g, 54.1 mmol, 1.00 당량) 및 (Boc)2O (118 g, 541 mmol, 10.0 당량)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 70℃로 가열하였다. 반응물에 고체 DMAP (19.8 g, 162 mmol, 3.00 당량)를 조심스럽게 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 10분 동안 교반하였다. 추가의 (Boc)2O (177 g, 809 mmol, 15.0 당량)를 2시간의 기간에 걸쳐 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 조 혼합물을 동일한 방식으로 제조된 조 (S)-벤질 2-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로파노에이트의 제2 배치와 합하였다. 합한 배치를 실리카-겔 칼럼 크로마토그래피 (용리액: 석유 에테르/에틸 아세테이트 100/0에서 100/5로)에 의해 정제하여 표제 화합물 15.5 g을 오일로서 제공하였다. LCMS: m/z 492.3 (M+Na+). HPLC 체류 시간 = 5.83분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0x50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 100% MeCN으로의 구배 (5분); 100% MeCN에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분. 광학 회전: -69.248, MeOH 중, c = 0.133 g/ml.
단계 3
N-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-N-(tert-부톡시카르보닐)-L-페닐알라닌의 제조
(S)-벤질 2-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로파노에이트 (17.8 g, 37.9 mmol, 1.00 당량)를 THF (150 ml) 및 MeOH (150 ml)의 용매 혼합물에 첨가하였다. 반응물에 건조 Pd/C (2.02 g, 10% w.t., 1.90 mmol, 0.05 당량)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 진공 하에 배기시키고, H2 (3x)로 재충전한 다음, 50 Psi의 수소 압력 하에 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 12.7 g을 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34-7.24 (m, 3H), 7.16-7.11 (m, 2H), 4.19-4.14 (d, 0.75H), 3.86-3.81 (m, 0.5H), 3.68-3.64 (m, 0.73H), 3.39-3.19 (m, 2H), 2.88-2.83 (d, 0.27H), 2.58-2.53 (d, 0.75H), 1.53-1.50 (m, 8H), 1.45-1.43 (m, 10H). HPLC 체류 시간 = 4.87분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0x50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 100% MeCN으로의 구배 (5분); 100% MeCN에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분. SFC 키랄 칼럼 체류 시간 = 2.21분. 칼럼: 키랄셀 OD-3 150x4.6mm I.D., 3um; 이동상: A: 초임계 CO2; B: 에탄올 (0.05% DEA); 구배: B 5%에서 40%로 (5분) 및 40% (2.5분), 이어서 B 5% (2.5분)에서 유지; 유량: 2.5 ml/분; 칼럼 온도: 35℃.
제조예 3
(S)-2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐아미노)-3-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판산
Figure pct00028
단계 1
(S)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판산의 제조
50 ml 둥근 바닥 플라스크에 (S)-tert-부틸 2-옥소옥세탄-3-일카르바메이트 (1870 mg, 9.99 mmol, 1.0 당량), 4-메틸-1H-피라졸 (984 mg, 12 mmol, 1.2 당량) 및 MeCN (30 ml)을 첨가하였다. 생성된 용액을 50℃로 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 감압 하에 담황색 잔류물이 될 때까지 농축시켰다. 잔류물을 뜨거운 MeOH (5 ml) 중에 용해시켰다. 반응물을 냉각시킨 후, 용액으로부터 백색 고체가 침전되었다. 생성된 모액에 물 (1 ml x 3)을 첨가하여 더 많은 고체를 침전시켰다. 모든 고체를 합하여 표제 화합물 1.8 g을 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 2
(S)-2-아미노-3-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판산 히드로클로라이드의 제조 (S)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판산 (1.8 g, 6.57 mmol, 1.0 당량) 및 1,4-디옥산 (30.0 ml)의 혼합물에 1,4-디옥산 중 HCl의 포화 용액 (10.0 ml)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 1.1 g을 오일로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 3
(S)-2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐아미노)-3-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판산의 제조.
(S)-2-아미노-3-(4-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판산 히드로클로라이드 (1100 mg, 6.57 mmol, 1.0 당량), 디옥산 (20 ml), 물 (5 ml) 및 Na2CO3 (1040 mg, 9.86 mmol, 1.5 당량)의 혼합물을 빙조에서 냉각시키고, 순수 Fmoc-O-Su (2220 mg, 6.57 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃로 가온하고, 1시간 동안 더 교반하였다. 혼합물을 물 (60 ml)로 희석하고, 아세트산을 첨가하여 pH ~4로 산성화시키고, DCM (50 ml x 3)으로 추출하였다. 합한 DCM 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 회백색 고체 1.5 g을 수득하였다. 고체를 정제용 HPLC (칼럼: 페노메넥스 시너지 맥스-RP 250*80 10u; 이동상: 물 (0.2% FA) 중 35% MeCN에서 물 (0.2% FA) 중 65% MeCN으로; 유량: 80 ml/분; 파장: 220 nm)에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 1.0 g을 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.80-7.78 (d, 2H), 7.62-7.60 (d, 2H), 7.45-7.31 (m, 5H), 6.96 (s, 1H), 5.71-5.70 (d, 1H), 4.74-4.38 (m, 5H), 4.26-4.22 (dd, 1H), 2.0 (s, 1H);
LCMS: m/z 392.2 (M+H+)
제조예 4
(2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(아세틸아미노)피롤리딘-2-카르복실산
Figure pct00029
단계 1
(2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아미노피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 히드로클로라이드의 제조
(2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (1.00 g, 2.210 mmol, 1.00 당량)을 MeOH (40 ml) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 빙조에 넣고, 이어서 순수 SOCl2 (526 mg, 4.42 mmol, 2.00 당량)를 적가하였다. 첨가 후, 생성된 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 890 mg을 고체로서 제공하였다. 조 물질을 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에 취하였다.
단계 2
(2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아세트아미도피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 제조
DCM (80 ml) 중 조 (2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아미노피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 히드로클로라이드 (890 mg, 2.21 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Na2CO3 (702 mg, 6.63 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반한 다음, 빙조에 넣었다. 빙조 내의 반응물에 순수 아세틸 클로라이드 (347 mg, 4.42 mmol, 2.00 당량)를 적가하고, 혼합물을 빙조에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 10℃로 가온하였다. 반응 혼합물을 10℃에서 2시간 동안 교반하였다. 추가의 순수 아세틸 클로라이드 (200 mg)를 첨가하고, 반응 혼합물을 10℃에서 추가로 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물 (100 ml)을 첨가하고, 이어서 혼합물을 진탕시키고, 분리하였다. 유기 상을 염수 (100 ml)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 900 mg을 황색빛 오일로서 제공하였다. 조 생성물을 다음 단계에 추가 정제 없이 취하였다.
단계 3
(2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(아세틸아미노)피롤리딘-2-카르복실산의 제조
100 ml 둥근 바닥 플라스크에 i-PrOH (21 ml), 물 (9 ml) 및 무수 CaCl2 (2660 mg, 24 mmol, 10.9 당량)를 첨가하였다. 반응물을 10℃에서 10분 동안 교반하였다. 제2의 100 ml 둥근 바닥 플라스크에 (2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸-4-아세트아미도피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (900 mg, 2.20 mmol, 1.0 당량)를 첨가하고, 제1 둥근 바닥 플라스크에서 제조된 i-PrOH/H2O 중 0.8 M CaCl2의 용액 (27 ml)을 이어서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물에 고체 NaOH (123 mg, 3.08 mmol, 1.4 당량)를 첨가하였다. 현탁액을 10℃에서 46시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 시트르산을 첨가하여 pH ~5로 조정하고, 이어서 물 (50 ml) 및 DCM (100 ml)을 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, 염수 (50 ml)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물 1.2 g을 오일로서 제공하였다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 600 mg을 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.37-8.35 (d, 0.6H), 7.82-7.79 (m, 2H), 7.65-7.61 (m, 2H), 7.42-7.38 (m, 2H), 7.34-7.30 (m, 2H), 4.48-4.17 (m, 5H), 3.78-3.73 (m, 1H), 3.42-3.37 (m, 1H), 2.32-2.23 (m, 2H), 1.95-1.94 (d, 3H). HPLC 체류 시간 = 3.95분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μM, 3.0*50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분.
SFC 키랄 칼럼 체류 시간 = 3.98분. 칼럼: 키랄팩 AS-3 150x4.6mm I.D., 3um; 이동상: A: CO2 B: 에탄올 (0.05% DEA); 구배: B 5%에서 40%로 (5.5분) 및 40% (3분), 이어서 B 5% (1.5분)에서 유지; 유량: 2.5 ml/분; 칼럼 온도: 40℃.
제조예 5
(2S,4S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(아세틸아미노)피롤리딘-2-카르복실산.
Figure pct00030
단계 1
(2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아미노피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 히드로클로라이드의 제조
(2S,4S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (2.00 g, 4.420 mmol, 1.00 당량)을 MeOH (60 ml) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 빙조에 넣었다. 이에 이어서 순수 SOCl2 (1.05 g, 8.84 mmol, 2.00 당량)를 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 1.7 g을 고체로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 2
(2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아세트아미도피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 제조
DCM (80 ml) 중 (2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아미노피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 히드로클로라이드 (1000 mg, 2.48 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Na2CO3 (789 mg, 7.45 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 빙조에 넣고, 5분 동안 교반한 후에, 순수 아세틸 클로라이드 (390 mg, 4.96 mmol, 2.00 당량)를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 빙조에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 10℃로 가온하고, 17시간 동안 교반하였다. 반응물에 물 (100 ml)을 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, 염수 (100 ml)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 1.0 g을 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 3
(2S,4S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(아세틸아미노)피롤리딘-2-카르복실산의 제조.
제1의 100 ml 둥근 바닥 플라스크에 i-PrOH (21 ml), 물 (9 ml) 및 무수 CaCl2 (2660 mg, 24 mmol, 10.9 당량)를 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 10분 동안 교반하였다. 제2의 100 ml 둥근 바닥 플라스크에 (2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아세트아미도피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (1010 mg, 2.47 mmol, 1.0 당량)를 첨가하고, 제1 둥근 바닥 플라스크에서 제조된 i-PrOH/H2O 중 0.8 M CaCl2 용액 (27 ml)을 이어서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물에 고체 NaOH (138 mg, 3.46 mmol, 1.4 당량)를 첨가하고, 현탁액을 10℃에서 22시간 동안 교반하였다. 포화 수성 시트르산 용액을 첨가하여 혼합물을 pH ~5로 조정한 다음, 대부분의 iPrOH를 감압 하에 제거하였다. 수성 잔류물에 물 (50 ml) 및 DCM (100 ml)을 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, 염수 (50 ml)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 조 오일이 될 때까지 감압 하에 농축시켰다. 조 오일을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 380 mg을 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.81-7.78 (dd, 2H), 7.65-7.60 (m, 2H), 7.41-7.37 (m, 2H), 7.34-7.29 (m, 2H), 4.41-4.16 (m, 5H), 3.87-3.75 (m, 1H), 3.35-3.26 (m, 1H), 2.67-2.54 (m, 1H), 2.07-1.92 (m, 4H). HPLC 체류 시간 = 4.01분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μM, 3.0*50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분. SFC 키랄 칼럼 체류 시간 = 3.04분. 칼럼: 키랄셀 OJ-H 150x4.6mm I.D., 5μm; 이동상: A: 초임계 CO2; B: 에탄올 (0.05% DEA); 구배: B 5%에서 40%로 (5.5분) 및 40% (3분), 이어서 B 5% (1.5분)에서 유지; 유량: 2.5 ml/분; 칼럼 온도: 40℃.
제조예 6
(2S,4S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산
Figure pct00031
단계 1
(2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아미노피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 히드로클로라이드의 제조.
빙조에서 MeOH (15 ml) 중 (2S,4S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (500 mg, 1.10 mmol, 1.00 당량)의 교반된 반응 혼합물에 순수 SOCl2 (263 mg, 2.21 mmol, 2.00 당량)를 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 70℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 445 mg을 고체로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 2
(2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸아미노)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 제조.
DMF (20 ml) 중 (2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아미노피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 히드로클로라이드 (295 mg, 0.73 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 Na2CO3 (233 mg, 2.20 mmol, 3.00 당량)을 첨가하고, 반응물을 10℃에서 5분 동안 교반하였다. DMF (4 ml) 중 tert-부틸 브로모아세테이트 (143 mg, 0.732 mmol, 1.00 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 10℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물에 추가의 tert-부틸 브로모아세테이트 (143 mg, 0.732 mmol, 1.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 추가로 17시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (120 ml)로 희석하고, 후속적으로 물 (100 ml x 2) 및 염수 (100 ml)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 오일 450 mg을 제공하였다. 오일을 오일 (상기 기재된 방식으로 제조됨)의 제2 배치 (54 mg)와 합하였다. 합한 배치를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 240 mg을 오일로서 제공하였다. HPLC 체류 시간 = 4.16분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0x50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% ACN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분. LCMS: m/z 481.1 (M+H+)
단계 3
(2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸-2-메틸-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 제조
디옥산 (10 ml) 및 물 (10 ml) 중 (2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸-2-메틸-4-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸아미노)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (240 mg, 0.499 mmol, 1.00 당량) 및 Na2CO3 (159 mg, 1.50 mmol, 3.00 당량)의 용액을 10℃에서 10분 동안 교반한 다음, 빙수조에 넣었다. 빙수조 내의 반응물에 순수 (Boc)2O (436 mg, 2.00 mmol, 4.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙조에서 약 30분 동안 교반한 다음, 빙수조를 제거하였다. 반응물을 10℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물에 EtOAc (80 ml) 및 물 (80 ml)을 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 480 mg을 오일로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 4
(2S,4S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산의 제조
제1의 100 ml 둥근 바닥 플라스크에 i-PrOH (7 ml), 물 (3 ml) 및 무수 CaCl2 (888 mg, 8 mmol, 9.68 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10℃에서 10분 동안 교반하였다. 또 다른 100 ml 둥근 바닥 플라스크에 (2S,4S)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸-2-메틸-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (480 mg, 0.83 mmol, 1.0 당량)를 첨가한 다음, 제1 둥근 바닥 플라스크에서 제조된 i-PrOH/물 중 ~0.8 M CaCl2의 수성 혼합물 5 ml, 이어서 NaOH (46.3 mg, 1.16 mmol, 1.4 당량)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 10℃에서 17시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 추가의 NaOH (50 mg)를 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 추가로 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 포화 시트르산 용액을 첨가하여 pH ~4로 조정하고, 이어서 물 (30 ml)을 첨가하였다. 반응물을 EtOAc (30 ml x 2)로 추출하고, 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황색 오일 200 mg을 제공하였다. 조 오일을 플래쉬 크로마토그래피를 통해 정제하여 고체 200 mg을 제공하였다. 고체를 정제용 HPLC (칼럼: 아겔라 듀라쉘 C18 150x25 mm, 5μm; 용리액: 물 중 60% 아세토니트릴; 구배: 11분에 걸쳐 물 중 아세토니트릴 60%에서 80%로; 유량: 35 ml/분)에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 75 mg을 고체로서 제공하였다. HPLC 체류 시간 = 5.18분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0x50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분. SFC 키랄 칼럼 체류 시간 = 3.76분. 칼럼: 키랄셀 OD-3 100x4.6mm I.D., 3um; 이동상: A: 초임계 CO2; B: 에탄올 (0.05% DEA); 구배: B 5%에서 40%로 (4.5분) 및 40% (2.5분), 이어서 B 5% (1분)에서 유지. 유량: 2.8 ml/분; 칼럼 온도: 40℃.
제조예 7
(2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산
Figure pct00032
단계 1
(2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아미노피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 히드로클로라이드의 제조.
(2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (500 mg, 1.10 mmol, 1.00 당량)을 MeOH (20 ml) 중에 용해시키고, 빙수조에 넣었다. 반응 혼합물에 순수 SOCl2 (263 mg, 2.21 mmol, 2.00 당량)를 적가하고, 혼합물을 70℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 30℃로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 445 mg을 고체로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 2
(2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸아미노)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 제조.
DMF (30 ml) 중 (2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-메틸 4-아미노피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 히드로클로라이드 (445 mg, 1.10 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Na2CO3 (351 mg, 3.31 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 현탁액을 10℃에서 5분 동안 교반하였다. DMF (4 ml) 중 tert-부틸 브로모아세테이트 (215 mg, 1.10 mmol, 1.00 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 10℃에서 5시간 동안 교반하였다. 추가의 순수 tert-부틸 브로모아세테이트 (215 mg, 1.10 mmol, 1.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 추가로 17시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (180 ml)로 희석하고, 물 (180 ml x 2) 및 염수 (100 ml)로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 무색 오일을 제공하였다. 오일을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 305 mg을 오일로서 제공하였다.
단계 3
(2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸-2-메틸-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 제조.
(2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸-2-메틸-4-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸아미노)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (305 mg, 0.635 mmol, 1.00 당량) 및 Na2CO3 (202 mg, 1.90 mmol, 3.00 당량)을 디옥산 (15 ml) 및 물 (15 ml)의 혼합물 중에 용해시켰다. 혼합물을 10℃에서 10분 동안 교반한 다음, 빙수조에 넣었다. 빙수조 내의 반응물에 순수 (Boc)2O (554 mg, 2.54 mmol, 4.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙수조에서 30분 동안 교반한 다음, 빙수조를 제거하였다. 혼합물을 10℃로 가온하고, 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 EtOAc (100 ml) 및 H2O (100 ml)를 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 730 mg을 오일로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 4
(2S,4R)-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산의 제조.
100 ml 둥근 바닥 플라스크에 i-PrOH (14 ml), 물 (6 ml) 및 무수 CaCl2 (1780 mg, 16 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 10℃에서 10분 동안 교반하였다. 제2의 100 ml 둥근 바닥 플라스크에 (2S,4R)-1-(9H-플루오렌-9-일)메틸-2-메틸-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (730 mg, 1.26 mmol, 1.0 당량)를 첨가한 다음, 제1 둥근 바닥 플라스크로부터의 i-PrOH/물 중 ~0.8 M CaCl2 용액 10 ml, 이어서 고체 NaOH (70.4 mg, 1.76 mmol, 1.4 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10℃에서 41시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 NaOH (80 mg)를 더 첨가하고, 혼합물을 추가로 72시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 50℃로 가열하고, 이 온도에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물에 추가의 NaOH (100 mg)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 추가로 6시간 동안 교반하였다. 수성 포화 시트르산을 첨가하여 반응 혼합물을 pH ~4로 조정하고, 이어서 물 (10 ml)을 첨가하였다. 혼합물을 EtOAc (30 ml x 2)로 추출하고, 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 150 mg을 오일로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 5
(2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산의 제조.
디옥산 (20 ml) 중 (2S,4R)-4-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)피롤리딘-2-카르복실산 (150 mg, 0.436 mmol, 1.00 당량) 및 Na2CO3 (200 mg, 1.89 mmol, 4.33 당량)의 현탁액을 10℃에서 10분 동안 교반한 다음, 빙수조에 넣었다. 빙수조 내의 반응물에 순수 Fmoc-OSu (250 mg, 0.741 mmol, 1.70 당량)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙수조에서 30분 동안 교반한 다음, 빙수조를 제거하였다. 혼합물을 10℃로 가온하고, 17시간 동안 교반하였다. 수성 포화 시트르산을 첨가하여 혼합물을 pH ~4로 조정하고, 이어서 EtOAc (50 ml) 및 물 (50 ml)을 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 오일 450 mg을 제공하였다. 오일을 정제용 HPLC (칼럼: 아겔라 듀라쉘 C18 150x25 mm, 5μm; 용리액: 물 중 50% 아세토니트릴; 구배: 12분에 걸쳐 물 중 아세토니트릴 50%에서 80%로; 유량: 25 ml/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 140 mg을 고체로서 제공하였다. LCMS: MS = 589.1 (M+Na). HPLC 체류 시간 = 5.41분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0x50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분. SFC 키랄 칼럼 체류 시간 = 3.48분. 칼럼: 키랄셀 OD-3 100x4.6mm I.D., 3μm; 이동상: A: 초임계 CO2; B: 에탄올 (0.05% DEA); 구배: B 5%에서 40%로 (4.5분) 및 40% (2.5분), 이어서 B 5% (1분)에서 유지. 유량: 2.8 ml/분; 칼럼 온도: 40℃.
제조예 8
(S)-2-((2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)프로판산
Figure pct00033
단계 1
메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)아크릴레이트의 제조
5,5-디브로모벤즈알데히드 (15.0 g, 56.837 mmol, 1.0 당량)를 DCM (50 ml) 중에 용해시키고, 반응물을 진공 및 N2 퍼징에 의해 탈기시켰다. 혼합물에 DBU (10.4 g, 68.2 mmol, 1.2 당량)를 천천히 첨가하고, 반응물을 빙수조에 넣었다. 제2 플라스크에서 N-(tert-부톡시카르보닐)-2-포스포노글리신 트리메틸 에스테르 (16.9 g, 56.8 mmol, 1.0 당량)를 DCM (50 ml) 중에 용해시키고, 이 혼합물을 시린지를 통해 1시간의 기간에 걸쳐 빙수조 내의 반응 혼합물에 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 빙수조에서 30분 동안 교반하였다. 빙수조를 제거하고, 혼합물을 교반하면서 16시간 동안 약 20℃로 가온하였다. 반응 혼합물을 물 (500 ml)로 희석하고, 시트르산 (20% w.t)을 첨가하여 pH ~4로 산성화시켰다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 고체 30 g을 제공하였다. 고체 물질을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 7.6 g을 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58-7.55 (m, 3H), 7.10 (s, 1H), 6.50 (br, s, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.42 (br, s, 9H). HPLC 체류 시간 = 5.23분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0x50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분. LCMS: MS = 457.9 (M+Na)
단계 2
(S)-메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)프로파노에이트의 제조
250 ml 파르 병에 메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)아크릴레이트 (6.0 g, 13.79 mmol, 1.0 당량) 및 (-)-1,2-비스[(2R,5R)-2,5-디에틸포스폴라노]벤젠(1,5-시클로옥타디엔)로듐(I) 트리플루오로메탄술포네이트 (100 mg), 이어서 MeOH (100 ml)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 진공 및 N2 퍼징에 의해 10회 탈기시켰다. 이어서, 반응물을 H2 기체로 다시 충전하고, 진공에 의해 탈기시키고, 퍼징하고, H2 기체로 3회 재충전하였다. 이어서, 반응물을 50 psi의 압력까지 H2 기체로 충전하고, 교반하면서 50℃로 24시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 6.0 g을 오일로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 추가 정제 없이 취하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.56-7.55 (t, 3H), 7.22 (bs, 2H), 5.05-5.03 (d, 1H), 4.55-4.53 (dd, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.13-3.08 (m, 1H), 2.99-2.94 (m, 1H), 1.44 (s, 9H).
단계 3
(S)-메틸 2-아미노-3-(3,5-디브로모페닐)프로파노에이트 히드로클로라이드의 제조
(S)-메틸 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)프로파노에이트 (4.73 g, 10.8 mmol, 1.0 당량)를 EtOAc (20 ml) 중에 용해시키고, EtOAc 중 HCl의 4 M 용액 25 ml를 첨가하였다. 생성된 용액을 15℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 4.0 g을 고체로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.68 (bs, 3H), 7.77-7.76 (t, 1H), 7.55-7.54 (d, 2H), 4.39-4.36 (t, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.17-3.15 (d, 2H)
단계 4
(S)-메틸 2-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)프로파노에이트의 제조
(S)-메틸 2-아미노-3-(3,5-디브로모페닐)프로파노에이트 히드로클로라이드 (4.0 g, 11.0 mmol, 1.0 당량)를 DMF (60 ml) 중에 용해시키고, DIPEA (8.76 ml, 42.8 mmol, 4.0 당량)를 첨가하고, 이어서 순수 tert-부틸 브로모아세테이트 (2.51 g, 12.9mmol, 1.2 당량)를 적가하였다. 생성된 용액을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 추가의 tert-부틸 브로모아세테이트 (2.09 g, 10.7 mmol, 1.0 당량)를 반응 혼합물에 적가하였다. 생성된 용액을 15℃에서 추가로 24시간 동안 교반하였다. 혼합물에 물 (150 ml)을 첨가하고, 용액을 EtOAc (100 ml x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 ml x2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 4.0 g을 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54-7.53 (t, 1H), 7.30-7.29 (d, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.54-3.50 (t, 1H), 3.32-3.22 (q, 2H), 2.96-2.86 (m, 2H), 1.45 (s, 9H)
단계 5
(S)-메틸 2-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)프로파노에이트의 제조.
(S)-메틸 2-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)프로파노에이트 (3.0 g, 6.65 mmol, 1.0 당량)를 DCM (50 ml) 중에 용해시키고, (Boc)2O (4.35 g, 19.9 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 40℃로 가열하고, 이어서 순수 DMAP (1.62 g, 13.3 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 추가의 (Boc)2O (39.2 g, 40.0 mmol, 27.0 당량)를 반응물에 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 조 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 3.2 g을 오일로서 제공하였다.
단계 6
(S)-2-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)프로판산의 제조.
(S)-메틸 2-((2-tert-부톡시-2-옥소에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3,5-디브로모페닐)프로파노에이트 (3.2 g, 5.81 mmol, 1.0 당량)를 THF (30 ml) 및 물 (30 ml)의 혼합물 중에 용해시켰다. 반응물에 순수 LiOH-H2O (536 mg, 12.8 mmol, 2.2 당량)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 15℃에서 40분 동안 교반하였다. 수성 시트르산 (5% wt)을 첨가하여 반응물을 pH ~4로 산성화시키고, 감압 하에 농축시켜 대부분의 유기 용매를 제거하였다. 생성된 잔류물을 물 (100 ml)로 희석하고, EtOAc (100 ml x2)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 오일 3.4 g을 제공하였다. 오일을 상기 프로토콜에 따라 제조된 오일의 제2 배치 1.2 g과 합하였다. 합한 배치를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 2.94 g을 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.84 (bs, 1H), 7.67-7.64 (m, 1H), 7.51-7.47 (m, 2H), 4.79-4.75 (m, 0.6H), 4.65-4.61 (m, 0.5H), 3.84-3.70 (m, 2H), 3.19-3.11 (m, 1H), 3.04-2.97 (m, 1H), 1.37-1.29 (m, 18H). HPLC 체류 시간 = 5.50분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0x50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분. 광학 회전: -49.518, MeOH 중, c = 1.4 g/100 ml
제조예 9
(2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(2-tert-부톡시-2-옥소에톡시)피롤리딘-2-카르복실산
Figure pct00034
단계 1
(2S,4R)-1-(벤질옥시카르보닐)-4-히드록시피롤리딘-2-카르복실산의 제조.
3 L 플라스크에 (2S,4R)-4-히드록시피롤리딘-2-카르복실산 (87.0 g, 663.46 mmol, 1.0 당량), 물 (1500 ml), Na2CO3 (141.0 g, 1330 mmol, 2.0 당량) 및 NaHCO3 (55.7 g, 663 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 아세톤 (250 ml)을 용액에 첨가한 다음, 이를 빙수조에서 냉각시켰다. 혼합물에 Cbz-Cl (141.0 g, 829 mmol, 1.25 당량)을 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 22℃로 서서히 가온하고, 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MTBE (600 ml x 2)로 세척하였다. pH ~2가 달성될 때까지 수성 상에 수성 1 N HCl을 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (1 L x 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 190 g을 오일로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 추가 정제 없이 취하였다. LCMS: MS = 287.8 (M+H).
단계 2
(2S,4R)-디벤질 4-히드록시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 제조
3 L 둥근 바닥 플라스크에 (2S,4R)-1-(벤질옥시카르보닐)-4-히드록시피롤리딘-2-카르복실산 (190.0 g, 716 mmol, 1.0 당량), DMF (2.0 L) 및 Cs2CO3 (117 g, 358 mmol, 0.5 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙수조에서 냉각시키고, 벤질 브로마이드 (172 g, 1000 mmol, 1.4 당량)를 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 생성된 현탁액을 22℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (5 L) 및 EtOAc (5 L)로 희석하였다. 수성 층을 제거하고, 유기 층을 염수 (2 x 3L)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 250 g을 오일로서 제공하였으며, 이를 다음 단계에 정제 없이 사용하였다. LCMS: MS = 377.9 (M+23).
단계 3
(2S,4R)-디벤질 4-(2-tert-부톡시-2-옥소에톡시)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 제조.
질소 기체 분위기 하에 3 L 둥근 바닥 플라스크에 건조 THF (1 L) 및 NaH (14.3 g, 미네랄 오일 중 60% w.t., 359 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물에 테트라부틸암모늄 아이오다이드 (8.83 g, 23.9 mmol, 0.1 당량), 이어서 tert-부틸 브로모아세테이트 (187 g, 957 mmol, 4.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 22℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. THF (300 ml) 중 (2S,4R)-디벤질 4-히드록시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (85.0 g, 239 mmol, 1.0 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가 후, 현탁액을 22℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물에 포화 수성 NH4Cl 용액 (100 ml)을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (150 ml x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 황색 오일 160 g을 제공하였다. 오일을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 60.0 g을 투명한 오일로서 제공하였다. LCMS: MS: 492.2 (M+Na).
단계 4
(2S,4R)-4-(2-tert-부톡시-2-옥소에톡시)피롤리딘-2-카르복실산의 제조.
자기 교반기가 장착된 2 L 수소화 용기에 (2S,4R)-디벤질 4-(2-tert-부톡시-2-옥소에톡시)피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (40.0 g, 85.192 mmol, 1.0 당량), 에탄올 (500 ml), EtOAc (500 ml) 및 Pd/C (5.44 g, 습윤 탄소 상 10%)를 첨가하였다. 생성된 흑색 현탁액을 진공 하에 배기시키고, H2 (3x)로 재충전하였다. 용기를 50 psi의 수소 분위기까지 가압하고, 22℃에서 14시간 동안 교반하였다. 흑색 현탁액을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 백색 고체 20 g을 제공하였으며, 이를 다음 단계에 추가 정제 없이 취하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.38-4.36 (m, 1H), 4.22-4.17 (m, 1H), 4.13-4.04 (m, 2H), 3.50-3.39 (m, 2H), 2.61-2.56 (m, 1H), 2.11-2.03 (m, 1H), 1.49 (s, 9H)
단계 5
(2S,4R)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-4-(2-tert-부톡시-2-옥소에톡시)피롤리딘-2-카르복실산의 제조
1 L 둥근 바닥 플라스크에 (2S,4R)-4-(2-tert-부톡시-2-옥소에톡시)피롤리딘-2-카르복실산 (15 g, 61.16 mmol, 1.0 당량), DCM (500 ml) 및 DIPEA (23.7 g, 183 mmol, 3.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 빙수조에서 냉각시켰다. 이어서, 빙수조 내의 반응물에 Fmoc-OSu (20.6 g, 61.2 mmol, 1.0 당량)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 빙수조에서 30분 동안 교반하였다. 빙수조를 제거하고, 혼합물을 22℃로 가온하고, 이 온도에서 4시간 동안 유지하였다. 물 (200 ml)을 첨가한 다음, 반응물을 EtOAc (300 ml x 3)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 감압 하에 농축시켜 황색 오일 55 g을 제공하였다. 오일을 정제용 HPLC (칼럼: 페노메넥스 시너지 맥스-RP 250 x 50mm x10 μm; 이동상: 물 중 40% MeCN (0.225% FA)에서 물 중 70% MeCN (0.225% FA)으로; 유량: 30 ml/분; 파장: 220 nm)에 의해 정제하여 표제 화합물 23 g을 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.77-7.75 (d, 1.2 H), 7.71-7.69 (d, 0.8H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.42-7.25 (m, 4H), 4.56-4.52 (t, 0.68H), 4.47-4.32 (m, 2.4H), 4.28-4.11 (m, 2H), 4.01-3.92 (m, 2H), 3.79-3.58 (m, 2H), 2.55-2.50 (m, 0.39H), 2.45-2.39 (m, 0.65H), 2.32-2.26 (m, 0.65H), 2.19-2.12 (m, 0.38H), 1.49-1.47 (d, 9H). HPLC 체류 시간 = 4.66분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μM, 3.0*50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 ml/분. SFC 키랄 칼럼 체류 시간 = 3.18분. 칼럼: 키랄팩 AD-3 100x4.6mm I.D., 3um; 이동상: A: CO2 B: 에탄올 (0.05% DEA); 구배: B 5%에서 40%로 (4.5분) 및 40% (2.5분), 이어서 B 5% (1분)에서 유지. 유량: 2.8 ml/분; 칼럼 온도: 40℃.
제조예 10
(S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-인다졸-3-일)프로판산
Figure pct00035
단계 1
메틸 2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(6-브로모-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-3-일)아크릴레이트의 제조
100 mL 둥근 바닥 플라스크에서, (±)-메틸 2-벤질옥시카르보닐아미노-2-(디메톡시포스피닐) 아세테이트 (1.2 g, 3.6 mmol)를 DCM (15 mL) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 진공 및 N2 기체 퍼징 하에 조심스럽게 탈기시켰다. 반응물에 DBU (591 mg, 3.9 mmol)를 천천히 첨가하고, 혼합물을 빙수조를 사용하여 5℃로 냉각시켰다. 제2 플라스크에서, 6-브로모-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-3-카르브알데히드 (1.0 g, 3.2 mmol)를 DCM (15 mL) 중에 용해시킨 다음, 이 용액을 5℃에서 반응 혼합물에 시린지를 통해 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 5℃에서 30분 동안 교반하였다. 빙수조를 제거하고, 혼합물을 실온 (~25℃)으로 가온되도록 하고, 추가로 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 조 생성물을 역상 칼럼 상에서 MeCN/H2O의 용매 혼합물 (0/100%에서 100/0%로의 구배)을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 목적하는 생성물을 함유하는 순수한 분획을 수집하고, 이들을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 1.18 g을 고체로서 제공하였다. LCMS: MS = 515.9 (M+H)
상기 반응을 하기 양의 출발 물질 및 시약을 사용하여 반복하였다: (±)-메틸 2-벤질옥시카르보닐아미노-2-(디메톡시포스피닐) 아세테이트 (3.5 g, 10.7 mmol, 1.1 당량), DCM (100 mL), DBU (1.8 g, 11.7 mmol) 및 6-브로모-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-3-카르브알데히드 (6517-1) (3.0 g, 9.7 mmol). 정제 후, 표제 화합물 0.94 g을 고체로서 수득하였다. 2개의 배치 (1.18 g + 0.94 g)를 합하여 표제 화합물 총 2.12 g을 제공하였다.
단계 2
메틸 (2S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(6-브로모-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-3-일)프로파노에이트의 제조
250 mL 파르 병에 메틸 2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(6-브로모-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-3-일)아크릴레이트 (2.12 g, 4.12 mmol) 및 (+)-1,2-비스((2S,5S)-2,5-디에틸포스폴라노)벤젠(1,5-시클로옥타디엔)로듐(1) 테트라플루오로보레이트 (150 mg, 0.23 mmol), 이어서 용매 MeOH (50 mL) 및 THF (50 mL)의 혼합물을 첨가하였다. 용매는 사용 직전에, N2 기체를 20분 동안 시린지에 의해 용매를 통해 통과시킴으로써 처리하였다. 이어서, 생성된 반응 혼합물을 진공 및 N2 기체 퍼징에 의해 10회 탈기시켰다. 이어서, 용기를 H2로 다시 충전한 다음, 탈기시키고, 퍼징하고, 3회 재충전하였다. 이어서, 용기를 H2 기체로 50 psi까지 가압하고, 50℃에서 22시간 동안 교반하였다. 혼합물을 30℃로 냉각시킨 다음, 감압 하에 농축시켜 조 표제 화합물 2.13 g을 오일로서 제공하였다. LCMS: MS = 538.1 (M+Na). HPLC 체류 시간 = 5.26분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0*50 mm. 이동상: 구배: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분), 이어서 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 mL/분.
단계 3
메틸 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)프로파노에이트의 제조
둥근 바닥 플라스크에서, 조 메틸 (2S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(6-브로모-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-3-일)프로파노에이트 (2.13 g, 4.13 mmol)를 MeOH (50 mL) 중에 용해시키고, HCl의 용액 (MeOH 중 4.0 M, 50 mL)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 표제 화합물 1.9 g을 검으로서 제공하였다. LCMS: MS = 432.1 (M+1). HPLC 체류 시간 = 4.60분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0*50 mm. 이동상: 구배: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 mL/분.
단계 4
tert-부틸 (S)-3-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-브로모-1H-인다졸-1-카르복실레이트의 제조
DCM (100 mL) 중 조 메틸 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(6-브로모-1H-인다졸-3-일)프로파노에이트 (1.9 g, 4.4 mmol)의 용액을 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 DMAP (1.01 g, 8.2 mmol) 및 (Boc)2O (1.80 g, 8.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 25℃에서 18시간 동안 교반하였다. 물 (100 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 이어서 pH ~4가 달성될 때까지 10% 시트르산의 수성 용액을 천천히 첨가하였다. 이어서, 유기 상을 분리하고, 염수 (100 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 오일을 제공하였다. 조 오일을 실리카-겔 칼럼 (40 g) 상에서 EtOAc 및 석유 에테르의 조합 (0/100%에서 25/75%로의 구배)을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 수집하고, 농축시켜 고체를 제공하였으며, 이를 역상 정제용 스케일 HPLC를 사용하여 추가로 정제하였다. (칼럼: 페노메넥스 제미니 C18 250*50 10u; 이동상: 물 (0.05% 수산화암모늄을 함유함) 중 50% MeCN에서 물 (0.05% 수산화암모늄을 함유함) 중 75% MeCN으로; 유량: 120 ml/분; 파장: 220 nm). 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켜 대부분의 MeCN을 제거한 다음, 동결건조시켜 표제 화합물 1.26 g을 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.33 (s, 1 H), 7.47 (d, 8.0 Hz, 1H), 7.38-7.30 (m, 6H), 5.80 (d, 8.0 Hz, 1H), 5.14-5.06 (m, 2H), 4.86-4.81 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.57-3.46 (m, 2H), 1.69 (s, 9H). HPLC 체류 시간 = 5.25분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0*50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 mL/분. SFC 키랄 칼럼 체류 시간 = 2.88분. 칼럼: 키랄팩 AS-3 150x4.6mm I.D., 3um; 이동상: A: CO2 B: 에탄올 (0.05% DEA); 구배: B 5%에서 40%로 (5.5분) 및 40% (3분), 이어서 B 5% (1.5분)에서 유지. 유량: 2.5 mL/분; 칼럼 온도: 40℃.
단계 5
tert-부틸 (S)-3-(2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)-1H-인다졸-1-카르복실레이트의 제조
250 mL 파르 병에 트리에틸아민 (1 mL) 및 MeOH (20 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-브로모-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (950 mg, 1.78 mmol)의 용액을 첨가하였다. 이어서, 용액에 건조 Pd/C (570 mg, 0.54 mmol)를 첨가하고, 생성된 현탁액을 진공 및 N2 기체로 다시 충전하여 3회 탈기시켰다. 이어서, 이를 진공 및 H2 기체로 다시 충전하여 3회 탈기시켰다. 생성된 혼합물을 진공 하에 탈기시키고, 20 psi의 압력에 도달할 때까지 H2 기체로 다시 충전하고, 이어서 반응 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 규조토 필터를 통해 통과시키고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 표제 화합물 570 mg을 검으로서 제공하였다. LCMS: MS = 263.1 (M-56+1)
단계 6
tert-부틸 (S)-3-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-1H-인다졸-1-카르복실레이트의 제조
250 mL 둥근 바닥 플라스크에 DCM (15 mL) 중 조 tert-부틸 (S)-3-(2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (570 mg, 1.8 mmol)의 용액 및 트리에틸아민 (570 mg, 5.64 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 용액을 빙수조를 사용하여 0℃로 냉각시켰다. 반응물에 Fmoc-OSu (634mg, 1.88mmol)를 여러 부분으로 첨가하고 (5분 이내에), 이어서 혼합물을 빙조에서 30분 동안 교반하였다. 빙수조를 제거하고, 혼합물을 실온 (25℃)으로 가온되도록 한 다음, 이 온도에서 약 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 검 1.1 g을 제공하였다. 조 검의 정제를 C-18 칼럼 (120 g) 상에서 MeCN/H2O 용매 혼합물 (0-70%로의 구배)을 이용하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 수행하였다. 목적하는 생성물을 갖는 분획을 합하고, 농축시켜 표제 화합물 550 mg을 고체로서 제공하였다. LCMS: MS = 564.1 (M+23)
단계 7
(S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(1-(tert-부톡시카르보닐)-1H-인다졸-3-일)프로판산의 제조
100 mL 둥근 바닥 플라스크에 i-PrOH (10 mL), H2O (10 mL) 및 무수 CaCl2 (1.6g, 14.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온 (28℃)에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물에 tert-부틸 (S)-3-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.74 mmol, 1.0 당량), 이어서 NaOH (89 mg, 2.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온 (28℃)에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, pH ~6에 도달할 때까지 반응물에 포름산을 첨가하였다. 조 반응 혼합물을 C-18 칼럼 (120 g) 상에서 MeCN/H2O 용매 혼합물 (0/100%에서 80/20%로의 구배)로 용리시켜 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 동결건조에 의해 농축시켜 표제 화합물 350 mg을 고체로서 제공하였다. 반응을 하기 양의 출발 물질 및 시약을 사용하여 반복하였다: tert-부틸 (S)-3-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-1H-인다졸-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.37 mmol), CaCl2 (820 mg, 7.4 mmol), NaOH (44 mg, 1.1 mmol), i-PrOH (10 mL) 및 H2O (10 mL)로 표제 화합물 200 mg을 고체로서 제공하였다. 정제 후, 2개의 배치 (350 mg + 200 mg)를 합하여 표제 화합물 총 550 mg을 제공하였다. HPLC 체류 시간 = 5.24분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0*50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 mL/분. LCMS: MS = 528.3 (M+H).
제조예 11
(S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(1-(tert-부톡시카르보닐)-6-에틸-1H-인돌-3-일)프로판산
Figure pct00036
단계 1
tert-부틸-6-브로모-3-포르밀-1H-인돌-1-카르복실레이트의 제조
250 mL 둥근 바닥 플라스크에 DCM (150 mL) 중 6-브로모-1H-인돌-3-카르브알데히드 (9.5 g, 42.4 mmol)의 용액, 이어서 DMAP (6.7 g, 55.1 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물에 Boc2O (13.9 g, 63.6 mmol)를 10분에 걸쳐 여러 부분으로 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온 (25℃)에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (200 mL)으로 희석하고, 10% 시트르산의 수성 용액 (200 mL x 2), 물 (200 mL x 2), 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 13.0 g을 고체로서 제공하였다. LCMS: MS = 223.6 (M - 100)
단계 2
tert-부틸 3-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-일)-6-브로모-1H-인돌-1-카르복실레이트의 제조
500 mL 둥근 바닥 플라스크에 (±)-메틸 2-벤질옥시카르보닐아미노-2-(디메톡시포스피닐) 아세테이트 (14.6 g, 44.1 mmol), DCM (150 mL) 및 DBU (7.3 g, 48.1 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 빙수조를 사용하여 0℃로 냉각시켰다. 제2 플라스크에서 tert-부틸-6-브로모-3-포르밀-1H-인돌-1-카르복실레이트 (13.0 g, 40.1 mmol)를 DCM (150 mL) 중에 용해시키고, 이어서 이 용액을 시린지를 통해 0℃에서 반응 혼합물에 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 빙수조를 제거하고, 혼합물을 실온 (15℃)으로 가온되도록 하고, 반응물을 이 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM (100 mL)으로 희석하고, 수성 5% 시트르산 (200 mL), 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 칼럼 120 g 상에서 석유 에테르/EtOAc 용매 혼합물 (100/10%에서 80/20%로의 구배)을 이용하여 플래쉬 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 16 g을 고체로서 제공하였다. LCMS: MS = 551.1 (M+23)
단계 3
tert-부틸 (S)-3-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-브로모-1H-인돌-1-카르복실레이트의 제조
250 mL 파르 병에 tert-부틸 3-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-일)-6-브로모-1H-인돌-1-카르복실레이트 (6.5 g, 12.3 mmol) 및 (+)-1,2-비스((2S,5S)-2,5-디에틸포스폴라노)벤젠(1,5-시클로옥타디엔)로듐(1) 테트라플루오로보레이트 (250 mg, 0.38 mmol), 이어서 MeOH (100 mL - MeOH를 20분 동안 시린지에 의해 용매를 통해 N2 기체를 버블링함로써 전처리하였음)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 진공 및 N2 기체 퍼징에 의해 6회 탈기시켰다. 이어서, 용기를 H2로 다시 충전한 다음, 탈기시키고, 퍼징하고, 3회 재충전하였다. 이어서, 용기를 H2 기체로 50 psi까지 가압하고, 50℃에서 4일 동안 교반하였다. 혼합물을 28℃로 냉각시킨 다음, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 조 생성물을 C-18 칼럼 상에서 MeCN/H2O 용매 혼합물 (100/0%에서 0/100%로의 구배)을 이용하여 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 목적하는 생성물을 갖는 분획을 합하고, 동결건조시켜 표제 화합물 5.1 g을 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.31 (s, 1H), 7.39-7.26 (m, 8H), 5.37 (d, 8.0 Hz, 1H), 5.15-5.07 (m, 2H), 4.73-4.69 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.27-3.15 (m, 2H), 1.66 (s, 9H). LCMS: MS = 554.4 (M+23)
단계 4
tert-부틸 (S)-3-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-에틸-1H-인돌-1-카르복실레이트의 제조
100 mL 둥근 바닥 플라스크에서, tert-부틸-(S)-3-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-브로모-1H-인돌-1-카르복실레이트 (1.8 g, 3.4 mmol)를 무수 디옥산 (40 mL) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 진공 및 N2 기체로 다시 충전하여 3회 탈기시켰다. 이어서, 반응물에 톨루엔 중 Et2Zn의 1 M 용액 (6.8 mL, 6.8 mmol), 이어서 Pd(dppf)Cl2 (124 mg, 0.17 mmol)를 적가하였다. 생성된 반응 혼합물을 진공 및 N2 기체로 다시 충전하여 3회 탈기시킨 다음, 100℃로 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시킨 다음, 포화 수성 NH4Cl 용액 (100 mL)으로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (3 x 80 mL)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 석유 에테르/EtOAc 용매 혼합물 (100/0%에서 70/30%로의 구배)을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 표제 화합물 1.5 g을 오일로서 제공하였다. LCMS: MS = 503.2 (M+23)
단계 5
tert-부틸 (S)-3-(2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-에틸-1H-인돌-1-카르복실레이트의 제조
100 mL 둥근 바닥 플라스크에 트리에틸아민 (0.9 mL) 및 MeOH (30 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-에틸-1H-인돌-1-카르복실레이트 (1.6 g, 3.3 mmol)의 용액을 첨가하였다. 이어서, 혼합물에 건조 10%wt Pd/C (709 mg, 0.7 mmol)를 첨가하였다. 생성된 현탁액 혼합물을 진공 및 N2 기체로 다시 충전하여 3회 탈기시켰다. 이어서, 이를 진공 및 H2 기체로 다시 충전하여 3회 탈기시켰다. 생성된 혼합물을 진공 하에 탈기시키고, H2 기체의 풍선을 이용하여 H2 기체로 다시 충전하였다. 혼합물을 28℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 규조토 필터를 통해 통과시키고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 표제 화합물 1.1 g을 오일로서 제공하였다. LCMS: MS = 346.8
단계 6
tert-부틸 (S)-3-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-에틸-1H-인돌-1-카르복실레이트의 제조
조 tert-부틸 (S)-3-(2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-에틸-1H-인돌-1-카르복실레이트 (1.1 g, 3.2 mmol)를 함유하는 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 디옥산 (30 mL) 및 물 (10 mL)을 첨가하였다. 생성된 용액에 Na2CO3 (1.7 g, 15.9 mmol)을 첨가하고, 이어서 혼합물을 빙수조를 사용하여 0℃로 냉각시켰다. 반응물에 Fmoc-OSu (2.7 g, 7.9 mmol)를 5분에 걸쳐 여러 부분으로 첨가한 다음, 빙수조를 제거하였다. 이어서, 반응물을 실온 (28℃)에서 약 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고, EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 80 g 상에서 석유 에테르/EtOAc 용매 혼합물 (100/0%에서 90/0%로의 구배)을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 조 오일 2.0 g을 제공하였다. 이어서, 오일을 C-18 칼럼 (120 g) 상에서 MeCN/H2O 용매 혼합물 (100/0%에서 80/20%로의 구배)을 이용하여 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 목적하는 생성물을 갖는 분획을 합하고, 농축시켜 표제 화합물 1.0 g을 오일로서 제공하였다. LCMS: MS = 591.3 (M+23)
단계 7
(S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(1-(tert-부톡시카르보닐)-6-에틸-1H-인돌-3-일)프로판산의 제조
100 mL 둥근 바닥 플라스크에 i-PrOH (35 mL), H2O (15 mL) 및 무수 CaCl2 (4.4 g, 40.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온 (28℃)에서 10분 동안 교반하였다. 제2의 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 tert-부틸 (S)-3-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-에틸-1H-인돌-1-카르복실레이트 (900 mg, 1.6 mmol), 제1 둥근 바닥 플라스크로부터의 반응 혼합물, 이어서 NaOH (89 mg, 2.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온 (28℃)에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (~100 mL)로 희석하고, EtOAc (2 x ~100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 잔류물을 제공하였다. 이어서, 상기 반응을 하기 양의 시약을 사용하여 반복하였다: tert-부틸 (S)-3-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)-6-에틸-1H-인돌-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.18 mmol), CaCl2 (888 mg, 8.0 mmol), NaOH (9.9 mg, 0.25 mmol), i-PrOH (7 mL) 및 H2O (3 mL). 합한 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 40 g 상에서 DCM/MeOH 용매 혼합물 (100/0%에서 90/0%로의 구배)을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 850 mg을 오일로서 제공하였다. 오일을 정제용 SFC에 의해 정제하여 표제 화합물 670 mg을 오일로서 제공하였다. 오일을 C-18 칼럼 (120 g) 상에서 MeCN/H2O 용매 혼합물 (100/0%에서 0/100%로의 구배)로 용리시켜 역상 HPLC에 의해 추가로 정제하였다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 동결건조에 의해 농축시켜 표제 화합물 350 mg을 고체로서 제공하였다. LCMS: MS = 577.2 (M+23). HPLC 체류 시간 = 5.51분. 칼럼: 얼티메이트 XB-C18, 3μm, 3.0*50 mm. 이동상: 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN에서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN으로 (1분); 이어서 물 (0.1% TFA) 중 5% MeCN에서 100% MeCN (0.1% TFA)으로 (5분); 100% MeCN (0.1% TFA)에서 유지 (2분); 8.01분에 물 (0.1% TFA) 중 1.0% MeCN으로 복귀 및 2분 유지. 유량: 1.2 mL/분.
하기 검정에서, 약어 및 정의는 하기와 같이 지칭될 수 있다:
APC는 알로피코시아닌이고;
BSA는 소 혈청 알부민이고;
DMSO는 디메틸 술폭시드이고;
EDTA는 에틸렌디아민테트라아세트산이고;
FBS는 태아 소 혈청이고;
HBSS는 행크 평형 염 용액이고;
HTS는 고처리량 스크린이고;
HWB는 인간 전혈이고;
MF는 평균 형광이고;
PBS는 포스페이트-완충 염수이고;
K2EDTA는 에틸렌디아민테트라아세트산 이칼륨 염이고;
TNF-α는 종양 괴사 인자-알파이고;
C5a는 보체 성분 5a이고;
HEPES는 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산이다.
생물학적 검정
HWB - 산화적 버스트 검정
산화적 버스트 활성의 억제를 TNF-α로 프라이밍되며 C5a로 자극된 HWB에서 결정하였다. 이어서, C5a-유도된 산화적 버스트 반응 (반응성 산소 종의 생성)을 루미놀의 존재 하에 화학발광 신호로서 검출하였다.
검정 당일에, 건강한 비-투약 지원자로부터 HWB를 수집하여, 3.8% 시트르산나트륨을 함유하는 튜브에 넣고 (HWB 중 최종 시트르산나트륨 농도는 0.38%임), 사용할 때까지 37℃ 수조에 저장하였다 (60분 이내).
검정을 시작하기 위해, TNF-α를 1.0 nM의 최종 농도로 HWB에 첨가하고, 이 HWB/TNF-α 믹스 68 μL를 384-웰 백색 옵티플레이트 (검정 플레이트)의 각각의 웰로 옮겼다. 이어서, 다양한 농도의 시험 작용제 4.0 μL를 검정 플레이트에 첨가하고, 상하 흡인에 의해 서서히 2회 혼합하였다. 이어서, 검정 플레이트를 써모쉐이커 (지터버그(JITTERBUG)-4) 상에 놓고, 37℃에서 인큐베이션하였다 (진탕 없이). 60분 후, 루미놀 (시그마(Sigma)) 중에 준비된 C5a (컴플리먼트 테크놀로지(Complement Technology))를 검정 플레이트에 첨가하고, 상하 흡인에 의해 서서히 2회 혼합하였다. 이어서, 플레이트를 뷰럭스(ViewLux) 1430 마이크로플레이트 이미저 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer))에 넣었다. 5분 후, 뷰럭스를 사용하여 루미놀-증강 전혈 화학발광을 측정함으로써 산화적 버스트 활성을 결정하였다. 최종 검정 조건은 1.5 mM HEPES pH 7.5, 0.015% BSA, 15% HBSS, 0.85 ng/mL TNFα, 1.0 mM 루미놀, C5a 20 nM, 76.5% HWB, 0.15% DMSO 및 다양한 농도의 시험 작용제였다.
이어서, 각각의 검정 플레이트 내에 함유된 양성 (즉, C5a 유도된 산화적 버스트의 완전 억제) 및 음성 (즉, 전혀 억제되지 않은 C5a 유도된 산화적 버스트) 대조군 웰에 의해 발생된 신호의 양에 기초하여, 그에 대해 상대적으로, 시험 작용제의 각각의 농도에서의 퍼센트 (%) 효과를 계산하였다. 시험 작용제에 대한 농도 및 % 효과 값을 플롯팅하고, 50% 효과를 위해 요구되는 시험 작용제의 농도 (IC50)를 4-파라미터 로지스틱 용량 반응 방정식 (BioBook; IDBS)을 사용하여 결정하였다. 이어서, 문헌 [Leff and Dougal (TIPS 1993 14:110-112)]에 기재된 방정식을 사용하여 Kb (nM)를 계산하였다 (BioBook; IDBS).
HWB - CD11b 발현 검정
건강한 비-투약 지원자로부터 HWB를 수집하여, 항응고제로서 K2EDTA를 함유하는 BD 바큐테이너(Vacutainer)® 혈액 수집 튜브에 넣었다. HWB를 96-웰, 딥-웰, V-바닥 플레이트에 분취하여 넣고 (85 μL/웰), 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 시험 화합물 (5 μL/웰)을 HWB에 첨가하고, 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. APC (BD 바이오사이언시스(BD Biosciences))와 접합된 항-인간 CD11b 항체를 HWB에 첨가하고 (5 μL/웰), 추가로 30분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 이어서, HWB를 37℃에서 30분 동안 인간 C5a (최종 1 nM)로 시험접종하였다. 샘플을 따뜻한 1X 용해/고정 완충제 (BD 바이오사이언시스)로 처리하여 활성화를 종결시키고, 추가로 20분 동안 37℃에서 인큐베이션하여 적혈구를 용해시켰다. 검정 플레이트를 300 x g에서 5분 동안 원심분리하고, 상청액을 흡인하고, 세포를 0.5% FBS를 함유하는 PBS로 1회 세척하였다. 세척된 세포를 0.5% FBS를 함유하는 PBS 중에 재현탁시키고, HTS 플레이트 로더가 장착된 LSR포르테사 (BD 바이오사이언시스)를 사용하여 유동 세포측정 분석에 적용하였다. FACSDiva 버전 6.2 (BD 바이오사이언시스)를 사용하는 CD11b 염색의 MF 분석을 위해 과립구 집단을 게이팅하였다. 11개의 화합물 농도로부터의 데이터 (각각의 농도에서 단독으로)를 하기 식에 기초하여 대조군에 대한 백분율로서 정규화하였다:
대조군에 대한 % = 100 x (A-B)/(C-B)
여기서 A는 시험 화합물 및 C5a를 함유하는 웰로부터의 MF이고, B는 C5a가 없는 웰로부터의 MF (비자극 샘플로부터의 배경 MF)이고, C는 C5a만을 함유하는 웰로부터의 MF (최대 MF)이다. 억제 곡선 및 IC50 값 (50% 억제를 발생시키는 시험 화합물 농도)을 Prism 버전 5 소프트웨어 (그래프패드(GraphPad))를 사용하여 결정하였다. 또한, HWB를 11개의 상이한 농도의 C5a로 자극하여 반응성 곡선을 그리고, Prism 버전 5 소프트웨어를 사용하여 EC50 값 (반수-최대 반응을 제공하는 C5a의 농도) 및 곡선 기울기를 얻었다. 이어서, 문헌 [Leff and Dougal (TIPS 1993 14:110-112)]에 기재된 방정식을 사용하여 Kb (nM)를 계산하였다.
표 1 - 실시예 1 내지 15
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
D: 실시예 13은 실시예 1의 "3,5-디듀테로페닐" 유도체임
NT = 시험되지 않음
n = 수행된 검정의 수

Claims (20)

  1. 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00040

    여기서:
    R1a는 H, OH, O(CH2)-C(O)OR6, NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6이고;
    R1b는 NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6이고;
    R2는 1, 2 또는 3개의 질소 원자를 함유하는 5-, 6-, 9- 또는 10-원 헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 1 또는 2개의 R7로 고리 탄소 원자 상에서 임의로 치환되고;
    R3은 수소 또는 C1-C4 알킬이고;
    R4는
    Figure pct00041
    이고;
    R5는 C1-C4 알킬이고;
    R6은 H 또는 C1-C4 알킬이고;
    R7은 C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시이다.
  2. 제1항에 있어서, R1a가 OH, O(CH2)-C(O)OR6, NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6이거나; 또는 R1b가 NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R1a가 OH 또는 O(CH2)-C(O)OR6인 화학식 (Ia)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제3항에 있어서, R1a가 OH인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, R1b가 NH2, NH-C(O)R5 또는 NH(CH2)-C(O)OR6인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 1 또는 2개의 질소 원자를 함유하는 9-원 헤테로아릴이고, 여기서 헤테로아릴은 1 또는 2개의 R7로 고리 탄소 원자 상에서 임의로 치환되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 하기로부터 선택되는 헤테로아릴이고:
    Figure pct00042

    여기서 상기 헤테로아릴은 R7로 고리 탄소 원자 상에서 임의로 치환되는 것인
    화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 하기의 헤테로아릴이고:
    Figure pct00043

    상기 헤테로아릴은 R7로 고리 탄소 원자 상에서 임의로 치환되는 것인
    화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R7이 메틸 또는 메톡시인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 H인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  11. 제1항에 있어서, 하기로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    N-[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]글리신;
    N-[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-(카르복시메톡시)-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]글리신;
    N-[(2S)-1-({(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-[(4-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일}아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]글리신;
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    N-[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-19-(아세틸아미노)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]글리신;
    N-[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19S,20aS)-19-(아세틸아미노)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]글리신;
    N-[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]-N-메틸글리신;
    {[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19S,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-[(카르복시메틸)아미노]-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}아세트산;
    N-{(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-(3,5-디듀테로페닐)프로판-2-일}글리신;
    {[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-[(카르복시메틸)아미노]-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}아세트산;
    N-[(2S)-1-({(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-[(6-메톡시-1H-인돌-3-일)메틸]-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일}아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]글리신;
    ((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((1H-인다졸-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신; 및
    ((S)-1-(((3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-6-((6-에틸-1H-인돌-3-일)메틸)-9-(3-구아니디노프로필)-19-히드록시-3-(((1s,4S)-4-히드록시시클로헥실)메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)글리신.
  12. 제1항에 있어서, 하기의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    N-[(2S)-1-{[(3R,6S,9S,15S,19R,20aS)-9-(3-카르밤이미드아미도프로필)-19-히드록시-3-[(시스-4-히드록시시클로헥실)메틸]-6-(1H-인돌-3-일메틸)-1,4,7,10,16-펜타옥소이코사히드로피롤로[1,2-a][1,4,7,10,13]펜타아자시클로옥타데신-15-일]아미노}-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]글리신.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 1종 이상의 추가의 치료제를 포함하는 제약 조성물.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  16. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, C5a 길항제가 지시되는 장애의 치료에서 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  17. 제16항에 있어서, C5a 길항제가 지시되는 장애가 급성 신장 손상 (AKI)인 화합물.
  18. C5a 길항제가 지시되는 장애의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.
  19. C5a 길항제가 지시되는 인간 또는 동물에서의 장애를 치료하는 방법이며, 상기 인간 또는 동물에게 치료 유효량의 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  20. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 또 다른 약리학적 활성 화합물 또는 2종 이상의 다른 약리학적 활성 화합물과 조합되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
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