KR20180134232A - Cosmetic composition comprising wheat-chaff extract - Google Patents

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Abstract

Provided is a cosmetic composition containing a wheat bark extract as an active ingredient and having a wrinkle-ameliorating and/or skin-whitening function. The inventors of the present invention completed the present invention upon confirming outstanding functionality of wheat bark in terms of collagen synthesis, antioxidation, and whitening effects when the wheat bark conventionally classified as waste materials is extracted and used as the cosmetic composition.

Description

밀 껍질 추출물을 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising wheat-chaff extract}[0001] Cosmetic composition comprising wheat-chaff extract [

본 발명은 밀 껍질의 추출물을 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition comprising an extract of wheat husks and a process for producing the same.

웰빙 소비 트렌드에 힘입어 식물을 이용한 천연물에 대한 관심이 날로 증가하는 추세이지만 식량 작물을 이용하여 곡물을 제외한 부산물을 이용한 천연기능성 물질 개발 및 활용은 전무한 실정이다. 국내외에서는 작물을 수확하고 남은 부산물들을 사료로써 활용하는 방안으로 연구가 일부 진행되고 있으나, 국내에서는 벼 부산물을 이용한 연구에 국한되어 있다.Although interest in natural products using plants has been increasing day by day due to well-being consumption trend, there is no development and utilization of natural functional materials using food crops using by-products except cereals. In Korea and abroad, some researches have been carried out to harvest crops and utilize the remaining byproducts as feeds, but in Korea, they are limited to research using rice byproducts.

밀의 부산물(wheat straw)을 이용한 사료로써의 가치 연구도 일부 보고되어 있으나, 성분분석 등 이론적 기초연구에 머무르고 있으며, 바이오 연료로의 활용에 대한 연구가 진행되고 있으나 타 바이오 연료 작물에 비해서 바이오리파이너리 과정 및 경제성 문제로 주춤하고 있다. 그 밖에 상업적으로도 활용할 수 있는 방법들 또한 다수 보고되고 있는데 합성섬유나 페인트 등에 사용되는 폴리우레탄으로의 전환 (라트비아)이나 종이의 원료가 되는 lactic acid로의 전환 (덴마크) 등의 연구 보고 또는 차 또는 식기 세정제로서 사용한 연구 개발이 있다. 다만 밀을 수확한 후 얻어지는 부산물로부터 식품 또는 화장품 기능성 원료로의 개발 및 활용연구는 거의 전무한 실정이다.Although some studies on the value of wheat straw as a feed have been reported, research on the use of biofuels as a biofuel crop is under way, And economic problems. There are also a number of other commercially available methods, such as the conversion to polyurethane used in synthetic fibers and paints (Latvia) or the conversion to lactic acid, which is a raw material for paper (Denmark) There is research and development used as dishware cleaner. However, there is almost no research on the development and utilization of the byproducts obtained after harvesting wheat as a functional raw material for food or cosmetics.

종래 개발된 항노화 성분의 경우 TGF-β 등과 같은 성장인자의 mimic 펩타이드가 주를 이루고 있다. 다만, 항노화 성분의 주요 투여 대상인 고령자의 경우 MMP의 활성이 비정상적으로 높으며 세포의 기능이 쇠퇴하여 콜라겐 합성을 촉진시키는 메카니즘에 제대로 대응을 하지 못하므로, 콜라겐 생성 촉진 기능을 하는 물질은 고령자에게 적용하는 데 한계가 있다. Conventionally developed anti-aging components are mainly mimic peptides of growth factors such as TGF-β. However, in the elderly, the main target of anti-aging ingredients, the activity of MMP is abnormally high and the function of collagen is not properly responded to the mechanism of promoting collagen synthesis. Therefore, the substance that promotes collagen production is applied to the elderly There is a limit to doing.

MMP 저해제의 경우 화장품 소재뿐 아니라 의약품의 개발 측면에서도 연구가 많이 되어 왔으나 현재까지 특별한 효능을 가진 MMP저해제에 대한 개발 성과가 미미하다. 화장품 소재의 경우 Pentapharm사의 Pepha-TIMP가 이러한 개념으로 사용이 되고 있지만 이는 21.7kDa의 고분자인 재조합 TIMP-2(Tissue Inhibitor of Matrix metalloproteinase-2)로서 인체내에 존재하는 MMP-2의 저해제이며 이러한 고분자는 침투가 되지도 않을 뿐 아니라 고가이며 활성도 뛰어나지 않기 때문에 사용상 문제가 많다. MMP inhibitors have been studied not only for cosmetic materials but also for the development of pharmaceuticals. However, the development of MMP inhibitors with special effects has not been achieved so far. In the case of cosmetic materials, Pepha-TIMP from Pentapharm is used as such a concept, but it is a recombinant TIMP-2 (21.7 kDa), which is an inhibitor of MMP-2 in the human body. It is not infiltrated, it is expensive, and its activity is not excellent, so there are many problems in use.

약물 성분으로 사용되고 있는 레티노익산(Retinoic acid)의 뛰어난 MMP-1저해 능력은 이미 여러 문헌을 통해 발표된 바 있으며 항산화 효과뿐 아니라 강력한 MMP-1의 저해 능력을 가지고 있기 때문에 항주름용으로 사용되고 있는 처방의약품이다. 화장품용 소재로는 의약품인 레티노익산의 사용이 불가능하기 때문에 이의 유도체인 레티놀이나 다른 종류의 레티노이드가 사용이 되고 있지만 이러한 유도체의 MMP-1 저해 능력은 레티노익산에 비해 거의 미비한 수준이며 (1/20) 특히 레티노이드의 불안정성 및 자극성으로 인해 주로 자외선을 받지 않는 나이트 크림 등 사용이 제한적으로 이루어지고 있다.Retinoic acid, which is used as a drug ingredient, has excellent MMP-1 inhibitory ability, which has already been reported through various publications, and has a powerful MMP-1 inhibiting ability as well as an antioxidant effect, It is medicine. Since retinoic acid, which is a drug for cosmetics, can not be used, its derivative, retinol or other types of retinoids are used. However, the MMP-1 inhibitory ability of these derivatives is almost insignificant compared to retinoic acid. ) In particular, because of the instability and irritation of retinoids, the use of night creams that do not receive ultraviolet rays is limited.

따라서 신개념의 소재로서 레티노이드보다 강력한 MMP 저해효과 물질, 그리고 항산화 기능과 복합기능을 가지는 콜라겐합성 촉진물질이면서 인체에 대한 자극성이 없는 소재의 개발이 필요한 실정이다.Therefore, it is necessary to develop a material which is stronger than MMP inhibitory substances and has stimulating properties for collagen synthesis, which has antioxidant and complex functions, but which is not irritating to the human body, as a new concept material than retinoid.

본 발명은 콜라겐 생합성 촉진, 항산화 및 미백 효과가 우수한 기능을 갖는, 밀 껍질 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.An object of the present invention is to provide a cosmetic composition comprising wheat bark extract having a function of promoting collagen biosynthesis, antioxidation and whitening effect.

본 발명의 또 다른 목적은 밀 껍질 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.It is another object of the present invention to provide a method for producing a cosmetic composition comprising wheat bark extract.

본 발명자들은 종래 폐 자원으로 분류되는 밀 껍질을 추출하여 화장료 조성물로 사용하는 경우 콜라겐 합성, 항산화 및 미백 효과 등 기능성이 우수함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention completed the present invention upon confirming that wheat husks classified as waste resources are extracted and used as a cosmetic composition in terms of functionality such as collagen synthesis, antioxidation and whitening effect.

본 발명은 밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 또는 조성물에 관한 것으로서, 콜라겐 생합성 촉진, 항산화 활성 및 미백 활성이 뛰어나다.The present invention relates to a cosmetic composition or composition comprising wheat bark extract as an active ingredient, and is excellent in collagen biosynthesis promotion, antioxidative activity and whitening activity.

본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 생합성 촉진용, 항노화용, 항산화용 또는 미백용 화장료 조성물일 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 생합성 촉진, 항노화, 항산화 특성 또는 미백 활성이 뛰어나 기능성 화장품으로의 적용이 용이하다. The cosmetic composition of the present invention may be a cosmetic composition for accelerating collagen biosynthesis, anti-aging, antioxidant or whitening. The cosmetic composition of the present invention is excellent in promoting collagen biosynthesis, anti-aging, antioxidant properties or whitening activity, and is thus easily applicable to functional cosmetics.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 밀의 부산물 즉, 밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하며, 밀은 청정한 환경에서 생육을 할 수 있으므로 무공해 청정 식물이라는 점에서, 추가의 비용을 들이지 않고도 기능성 천연 유기농 화장품의 원료 공급원으로 사용할 수 있다는 장점이 있다.The cosmetic composition according to the present invention contains a by-product of wheat, that is, a wheat bark extract, as an active ingredient. Since the wheat can grow in a clean environment, it is a pollution-free clean plant. Therefore, It can be used as a supply source.

이하, 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명의 일 예는 밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 생합성 촉진용, 항노화용, 항산화용 또는 미백용 화장료 조성물일 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 생합성 촉진, 항노화, 항산화 특성 또는 미백 활성이 뛰어나 기능성 화장품으로의 적용이 용이하다. An example of the present invention provides a cosmetic composition comprising wheat bark extract as an active ingredient. The cosmetic composition of the present invention may be a cosmetic composition for accelerating collagen biosynthesis, anti-aging, antioxidant or whitening. The cosmetic composition of the present invention is excellent in promoting collagen biosynthesis, anti-aging, antioxidant properties or whitening activity, and is thus easily applicable to functional cosmetics.

본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 생합성 촉진, 콜라겐 분해 억제, 및 이에 따른 피부 주름 개선활성이 있어, 이들 용도로 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 분해효소 또는 MMP(matrix metalloproteinase)에 대한 저해 활성이 우수하며, 이에 MMP 활성을 저해하여 주름 개선 또는 피부 노화 방지 활성이 있다. The cosmetic composition of the present invention has an activity of promoting collagen biosynthesis, inhibiting collagen decomposition, and thus improving wrinkles of the skin, and can be used for these purposes. Specifically, the cosmetic composition of the present invention is excellent in inhibitory activity against collagenase or MMP (matrix metalloproteinase), and inhibits the activity of MMP, thereby improving wrinkles or preventing skin aging.

진피 세포 외 조직 중 콜라겐 단백질들은 피부에 강도와 장력을 부여하며 이로 인해 외부의 자극이나 힘으로부터 피부를 보호하는 역할을 하며 진피층의 90%를 차지하고 있어 콜라겐의 감소는 피부 노화와 주름형성에 밀접한 관련이 있다. 콜라겐의 분해는 노화가 진행되면서 분해되기도 하고 자외선 같은 자극에 노출되게 되면 콜라겐 분해효소의 생합성이 증가하면서 콜라겐 합성이 감소되어 주름이 형성된다. 콜라겐 분해효소는 아연-의존적인 세포 내 단백분해 효소로 진피의 세포 외 구조의 성분들을 분해시키거나 재구조화 시킬 수 있는 물질로서 그 중 MMP-1은 진피의 콜라겐에 작용하여 분절시킨다. 따라서 MMP 효소의 합성 양과 활성도의 조절이 주름에 중요한 요인으로 작용하며, 상기 화장료 조성물은 MMP 활성을 저해하여 주름 개선 또는 피부 노화 방지 활성이 있다. Collagen proteins in the dermal extracellular tissues impart strength and tension to the skin, which protects the skin from external stimuli or forces. It accounts for 90% of the dermal layer. Collagen reduction is closely related to skin aging and wrinkle formation . Decomposition of collagen degrades as aging progresses. When exposed to stimuli such as ultraviolet rays, biosynthesis of collagenase increases, collagen synthesis is reduced and wrinkles are formed. Collagenase is a zinc-dependent intracellular protease that breaks down or restructures the extracellular components of the dermis. MMP-1 acts on the collagen of the dermis and breaks it down. Therefore, the regulation of the amount and activity of MMP enzyme synthesis plays an important role in wrinkles, and the cosmetic composition inhibits MMP activity, thereby improving wrinkles or preventing skin aging.

본 발명의 화장료 조성물은 항산화 활성이 우수하여, 항산화 용도로 사용될 수 있다. 구체적으로, 밀 껍질 추출물을 처리하여 DCFDA를 이용한 세포 내 활성산소 농도 변화를 측정한 결과, 종래 강력한 항산화제로 알려진 글루타치온과 유사하거나 더욱 우수한 수준으로 항산화 효과를 내며, 특히 이러한 효과는 밀 종자 추출물 대비 밀 껍질 추출물에서 현저히 우수함을 확인하였다. The cosmetic composition of the present invention is excellent in antioxidant activity and can be used for antioxidant use. Specifically, as a result of measuring changes in intracellular reactive oxygen concentration using DCFDA by treating the wheat bark extract, the antioxidative effect was similar to or superior to that of glutathione, which is conventionally known as a strong antioxidant. In particular, Shell extracts.

예를 들어 아래 수학식 1으로 산출된 글루타치온 10mM의 산화율 100%를 기준으로 상기 밀 껍질 추출물 10μg/ml의 상대 산화율(%)이 30 내지 135%, 바람직하게는 50 내지 120%, 더욱 바람직하게는 60 내지 120% 또는 85 내지 120%일 수 있다. For example, the relative oxidation rate (%) of the wheat bark extract at 10 μg / ml is 30 to 135%, preferably 50 to 120% based on 100% of the oxidation rate of 10 mM glutathione calculated by the following formula 1, 60 to 120% or 85 to 120%.

Figure pat00001
Figure pat00001

예를 들어 상기 상대 산화율은 아래 수학식 2의 식으로 산출될 수 있다. For example, the relative oxidation rate can be calculated by the following equation (2).

Figure pat00002
Figure pat00002

본 발명의 화장료 조성물은 미백 활성이 우수하여, 미백 용도로 사용될 수 있다. 구체적으로, 밀 껍질 추출물을 처리한 흑색종 세포의 흡광도를 측정하여 미백 효과를 확인한 결과, 우수한 수준으로 미백 효과를 낸다는 점을 확인하였다. 예를 들어 멜라노마 세포의 멜라닌 생합성을 저해하는 활성이 있을 수 있으며, 구체적으로 티로시나제 저해 활성을 가질 수 있다.The cosmetic composition of the present invention is excellent in whitening activity and can be used for whitening purposes. Specifically, the wheat bark extract-treated melanoma cells were measured for their absorbance and the whitening effect was confirmed. As a result, it was confirmed that the whitening effect was excellent. For example, the melanoma cell may have an activity of inhibiting melanin biosynthesis, and specifically may have a tyrosinase inhibiting activity.

밀(wheat)은 외떡잎식물 벼목 화본과의 한해살이풀로서, 가을에 파종하고 이른 여름 (6월 초)에 수확하는 재배특성상 제초제 및 기타 농약의 사용 없이도 재배가 가능하다. Wheat is an annual herbaceous plant of the unicorn plant. It can be cultivated without the use of herbicides and other pesticides due to the cultivation characteristics of sowing in autumn and harvesting in early summer (early June).

본 발명에 따른 화장료 조성물은 밀의 부산물 즉, 밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하며, 밀은 청정한 환경에서 생육을 할 수 있으므로 무공해 청정 식물이라는 점에서, 추가의 비용을 들이지 않고도 기능성 천연 유기농 화장품의 원료 공급원으로 사용할 수 있다는 장점이 있다.The cosmetic composition according to the present invention contains a by-product of wheat, that is, a wheat bark extract, as an active ingredient. Since the wheat can grow in a clean environment, it is a pollution-free clean plant. Therefore, It can be used as a supply source.

밀 소수는(spikelet)은 이삭(spike)의 수축(rachis)에 직접 달리며, 성숙된 종자는 일반적으로 겉껍질 (chaff)이라고 하는 바깥껍질 (lemma)과 안껍질(palea)로 싸여있다. 본 발명의 밀 껍질은 겉 껍질 및 안 껍질로 이루어진 군에서 선택된 1 이상일 수 있으며, 바람직하게는 겉 껍질을 사용할 수 있다. 겉 껍질은 수확 후 탈곡 시 쉽게 분리되며 오염되지 않게 수거될 수 있어서 이를 활용한 천연 기능성 물질 개발에 장점이 있다. Spikelets run directly on the spikes' rachis, and mature seeds are usually enclosed by the outer shell (lemma) and the palea (chaff). The wheat husks of the present invention may be at least one selected from the group consisting of crusts and crusts, preferably crusts. The crust is easily separated when it is thawed after harvesting and can be collected so as not to be contaminated, which is advantageous in the development of natural functional materials utilizing this.

구체적으로 밀 껍질을 제거한 밀 종자 부분의 추출물의 경우 품종에 상관 없이 활성 산소를 낮추는 효과가 있으며, 이러한 효과는 밀 껍질을 제거한 밀의 종자 추출물의 활성 산소 저해 효과대비 현저하게 우수하다.Specifically, extracts of wheat seeds with wheat husks removed have an effect of lowering free radicals regardless of cultivars, and this effect is remarkably superior to that of wheat husk seed extracts.

본 발명에 적용 가능한 밀은 조품, 조경, 올그루, 금강 및 우리로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 품종일 수 있으나 특별히 품종이 제한되는 것은 아니다.The wheat applicable to the present invention may be at least one kind selected from the group consisting of the raw materials, landscaping, olive, gold, and we, but the variety is not particularly limited.

본 명세서에서 있어서 밀 껍질 추출물은 밀 껍질의 조추출물 또는 밀 껍질의 특정 용매 가용 추출물 또는 분획물을 포함하며, 용액, 농축물 또는 분말상태일 수 있다. 본 발명의 일예에서, 상기 밀 추출물은 밀 껍질을 물, 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 유기 용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물, 또는 상기 조추출물에 물, 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 유기 용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 용매를 가하여 얻어진 용매 가용 추출물일 수 있다. 또한 상기 유기 용매는 디클로로메탄, 디에틸에터, 클로로포름 및 에틸 아세테이트로 이루어진 군에서 선택된 1 이상인 것, 바람직하게는 디클로로메탄 및/또는 에틸아세테이트일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.As used herein, wheat bark extracts may be in the form of solutions, concentrates or powders, including crude extracts of wheat bark or certain solvent-soluble extracts or fractions of wheat bark. In one embodiment of the present invention, the wheat extract is a crude extract obtained by extracting a wheat husk with at least one solvent selected from the group consisting of water, linear or branched alcohols having 1 to 4 carbon atoms, an organic solvent and a mixed solvent thereof, Soluble extract obtained by adding at least one solvent selected from the group consisting of water, a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, an organic solvent and a mixed solvent thereof to the crude extract. The organic solvent may be at least one selected from the group consisting of dichloromethane, diethylether, chloroform and ethyl acetate, preferably dichloromethane and / or ethyl acetate, but is not limited thereto.

밀 껍질 추출물은 통상의 추출 방법을 사용하여 제조될 수 있으며, 예컨대, 냉침 추출, 열수 추출, 초음파 추출, 환류 추출 또는 냉각 추출, 바람직하게는 환류 냉각 추출일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 단계는 1 이상 반복하여 수행될 수 있으며, 2차 이상으로 추출된 추출물 및 각 추출 후 얻어진 여과액을 혼합하여 추출하여 추출효율을 높일 수 있다.The wheat bark extract may be prepared using conventional extraction methods, such as, but not limited to, cold extraction, hot water extraction, ultrasonic extraction, reflux extraction or cooling extraction, preferably reflux cooling extraction. The extraction step may be repeated one or more times, and the extraction efficiency may be enhanced by mixing and extracting the extract extracted with the second or higher order and the filtrate obtained after each extraction.

또한 추출 단계에서 얻어진 추출물을 약 2 내지 10배, 바람직하게는 약 3 내지 7배의 부피의 물로 현탁시킨 후 물, 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 유기 용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 용매를 가하여 용매 가용층을 추출한 후 감압 농축하여 용매 가용 추출물을 제조하는 방법을 추가로 포함하여 불필요한 단백질, 다당류 및 지방산 등의 불순물을 정제할 수 있다.The extract obtained in the extraction step is suspended in water having a volume of about 2 to 10 times, preferably about 3 to 7 times, and then water, a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, an organic solvent and a mixed solvent thereof A method for preparing a solvent-soluble extract by extracting a solvent-soluble layer by adding at least one solvent selected from the group consisting of water, ethanol, and water, and concentrating under reduced pressure, thereby purifying impurities such as unnecessary proteins, polysaccharides and fatty acids.

상기 추출물을 여과 또는 농축하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 농축 단계에 의해 제조되는 농축물은 화장품 또는 의약품 원료로 사용하기에 적합하도록 잔존하는 용매의 함량을 조절하기 위하여 농축물 총량의 약 10 내지 30배, 바람직하게는 15 내지 25배, 보다 바람직하게는 약 20 중량배의 물로 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 3회 공비 농축하고 재차 동량의 물을 가하여 균질하게 현탁시킨 후 살균 및/또는 동결건조시킴으로써 분말상태의 밀 껍질 추출물로서 제조될 수 있다. And then filtering or concentrating the extract. The concentrate produced by the concentration step may be used in an amount of from about 10 to 30 times, preferably from 15 to 25 times, more preferably from about 10 times to about 30 times the total amount of the concentrate for controlling the content of the remaining solvent so as to be suitable for use as a cosmetic or pharmaceutical raw material By concentrating the mixture in an amount of about 20 times by weight with water in an amount of 1 to 5 times, preferably 2 to 3 times, adding the same amount of water again and homogenously suspending it, and then sterilizing and / or lyophilizing it to prepare a powdery wheat bark extract .

본 발명의 화장료 조성물에서 밀 껍질 추출물은 조성물 전체의 고형분 중량을 기준으로 0.0001 내지 80중량%, 바람직하게는 0.001 내지 30중량%로 포함될 수 있다. In the cosmetic composition of the present invention, the wheat bark extract may be contained in an amount of 0.0001 to 80% by weight, preferably 0.001 to 30% by weight, based on the solid content of the whole composition.

본 발명의 화장료 조성물은 유효성분 이외에, 통상의 제품화 또는 제제화에 사용 가능한 모든 종류의 성분, 예컨대 계면활성제, 유화제, 비누산, 용매, 결합제, 희석제, 활택제, 안정제, 항료, 물, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 착색제, 보존제, 항생제, 항산화제, 소포제, 항균제, 효소, 식물 또는 미네랄오일, 지방, 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 보존제, 단백질, 실리콘, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 및 왁스로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 약리학적으로 허용가능한 부형제를 함유할 수 있으며, 그 종류와 함량은 최종 산물의 용도 및 사용 목적에 따라 적절하게 조절할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may contain, in addition to the active ingredient, all kinds of components which can be used for ordinary commercialization or formulation such as surfactant, emulsifier, soap acid, solvent, binder, diluent, lubricant, stabilizer, A preservative, an antioxidant, a defoaming agent, an antimicrobial agent, an enzyme, a plant or mineral oil, a fat, a fluorescent substance, a fungicide, a hygroscopic substance, a humectant, a fragrance, a fragrance carrier, The composition may contain one or more pharmacologically acceptable excipients selected from the group consisting of protein, silicone, solubilizing agent, saccharide derivative, sunscreen agent, vitamin, plant extract and wax, And can be appropriately adjusted depending on the application and purpose of use.

또한, 상기 화장료 조성물은 적용되는 형태에 통상적으로 포함되는 용매를 포함하는 것일 수 있으며, 예컨대, 에탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 1,2,4-부탄트리올, 솔비톨에스테르, 1,2,6-헥산트리올, 벤질알코올, 이소프로판올, 부탄디올, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르, 디메틸이소소르비드, N-메틸-2-피롤리돈, 프로필렌카보네이트, 글리세레스-26, 메틸글루세스-20, 이소세틸미리스테이트, 이소세틸옥타노에이트, 옥틸도데실미리스테이트, 옥틸도데칸올, 이소스테아릴이소스테아레이트, 세틸옥타노에이트 및 네오펜틸글리콜디카프레이트 등 중에서 선택된 1 종 이상을 포함할 수 있다.  본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자라면 제품의 특성에 따라 용매의 종류 및 사용량을 알맞게 선택하여 적용할 수 있다.In addition, the cosmetic composition may contain a solvent ordinarily included in the application form, and examples thereof include ethanol, glycerin, butylene glycol, propylene glycol, polyethylene glycol, 1,2,4-butanetriol, sorbitol ester , 1,2,6-hexanetriol, benzyl alcohol, isopropanol, butanediol, diethylene glycol monoethyl ether, dimethylisosorbide, N-methyl-2-pyrrolidone, propylene carbonate, glycereth- At least one member selected from the group consisting of isosetyl myristate, isocetyl octanoate, octyldodecyl myristate, octyldodecanol, isostearyl diacetate, cetyl octanoate, neopentyl glycol dicaprate, etc. . ≪ / RTI > Those skilled in the art will appreciate that the type and amount of solvent may be suitably selected according to the characteristics of the product.

또한, 상기 화장료 조성물은 경피 투여시의 경피 투과를 강화하기 위한 다양한 물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 라우로켑람 유도체 및 올레인산, 모노올레이트 유도체의 에스테르 유도체, 아다팔렌, 트리티노인, 레틴알데하이드, 타자로틴, 살리실산, 아질라익산, 글라이콜산, 에톡시다이글라이콜, 트윈80, 레시틴 올가노겔 등을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 부가적인 기능을 부여하기 위해, 본 발명의 콜라겐 생합성 촉진, 항산화 또는 미백 효과를 해치지 않는 범위 내에서 공계면활성제, 계면활성제, 비듬 방지제, 각질 연화제, 혈행 촉진제, 세포 활성제, 청량제, 보습제, 항산화제, pH 조절제, 정제수 등의 보조 성분들을 첨가할 수 있으며, 적용되는 형태에 따라서 적절한 향료, 색소, 방부제, 부형제 등의 첨가제를 함유할 수 있다.In addition, the cosmetic composition may contain various substances for enhancing transdermal permeation during transdermal administration. For example, there may be mentioned, for example, laurolactam derivatives and oleic acid, ester derivatives of monooleate derivatives, aderapalene, tritinoin, retinaldehyde, tazotrotin, salicylic acid, azelaic acid, glycolic acid, ethoxydiglycol, 80, lecithin olganogel, and the like. In order to impart additional functions, the cosmetic composition of the present invention may contain a co-surfactant, a surfactant, an anti-dandruff agent, a keratin softener, a blood circulation accelerator, a cell growth inhibitor, An auxiliary agent such as an active agent, a refreshing agent, a moisturizing agent, an antioxidant, a pH adjusting agent and purified water may be added. Depending on the application form, it may contain additives such as suitable fragrance, pigment, preservative and excipient.

본 발명의 조성물은 주름개선용 화장료 조성물일 수 있다. The composition of the present invention may be a cosmetic composition for improving wrinkles.

예를 들어 콜라겐 생합성 촉진 또는 콜라겐 분해 저해 활성이 있을 수 있으며, 구체적으로 프로콜라겐, 베타 액틴 및/또는 colla1 유전자의 발현을 증가시켜 콜라겐 생합성을 촉진시키거나, MMP 합성이 저해되어 콜라겐 분해가 저해될 수 있다. For example, there may be promoted collagen biosynthesis or collagen degradation inhibitory activity, and more specifically, promoting collagen biosynthesis by increasing the expression of procollagen, beta actin and / or colla1 gene, inhibiting collagen degradation by inhibiting MMP synthesis .

또한, 상기 주름 개선 용도는 항산화 효과 개선에 의한 것일 수 있으며, 예를 들어 아래 수학식 1으로 산출된 글루타치온의 산화율 100%를 기준으로 상기 밀 껍질 추출물의 상대 산화율(%)이 30 내지 135%, 바람직하게는 50 내지 120%, 더욱 바람직하게는 60 내지 120%일 수 있다.The wrinkle improving application may be by improving the antioxidant effect. For example, the relative oxidation rate (%) of the wheat bark extract may be 30 to 135% based on 100% of the oxidation rate of glutathione calculated by Equation 1 below, Preferably 50 to 120%, more preferably 60 to 120%.

[수학식 1][Equation 1]

Figure pat00003
Figure pat00003

예를 들어 상기 상대 산화율은 아래 수학식 2의 식으로 산출될 수 있다. For example, the relative oxidation rate can be calculated by the following equation (2).

[수학식 2]&Quot; (2) "

Figure pat00004
Figure pat00004

본 발명의 또 다른 일 예로서, 밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 콜라겐 생합성 촉진제 또는 콜라겐 분해효소 억제제를 제공한다.As another example of the present invention, there is provided a collagen biosynthesis promoter or collagenase inhibitor comprising wheat bark extract as an active ingredient.

예를 들어, 상기 콜라겐 생합성 촉진제는 프로콜라겐, 베타 액틴 및/또는 colla1의 발현 증진제일 수 있으며, 상기 콜라겐 분해 효소 억제제는 예를 들어 MMP(matrix metalloproteinase), 바람직하게는 MMP-3 저해제일 수 있다.For example, the collagen biosynthesis promoter may be an expression promoter of procollagen, beta actin and / or colla1, and the collagenase inhibitor may be, for example, a matrix metalloproteinase (MMP), preferably an MMP-3 inhibitor .

또한 본 발명의 또 다른 일 예로서, 본 발명의 조성물은 밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.As another example of the present invention, the composition of the present invention provides a skin whitening cosmetic composition comprising wheat bark extract as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 일 예로서, 본 발명의 조성물은 밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 멜라노마 세포의 멜라닌 생합성 저해제 또는 티로시나제 저해제를 제공한다..As another example of the present invention, the composition of the present invention provides a melanin biosynthesis inhibitor or tyrosinase inhibitor of Melanoma cells comprising wheat bark extract as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 일 예로서 밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.As another example of the present invention, there is provided a method for producing a cosmetic composition comprising wheat bark extract as an active ingredient.

상기 화장료 조성물에 관한 사항은 이의 제조방법에 동일하게 적용될 수 있다.The matters relating to the above-mentioned cosmetic composition can be similarly applied to the manufacturing method thereof.

예를 들어 상기 제조방법은 밀로부터 밀 껍질을 분리하는 단계; 및 상기 밀 껍질을 물, 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 유기 용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 용매로 추출하는 단계를 포함할 수 있다.For example, the method comprises separating wheat husks from wheat; And extracting the wheat husks with at least one solvent selected from the group consisting of water, linear or branched alcohols having 1 to 4 carbon atoms, organic solvents, and mixed solvents thereof.

상기 밀로부터 밀 껍질을 분리하는 단계는 수확된 밀로부터 밀 종자를 제거하고 밀 껍질만을 분리하는 것을 의미하며, 밀 껍질을 세척하는 단계, 절단하는 단계 또는 여과하는 단계를 추가로 포함하여 처리될 수 있으며, 잘게 절단하거나 이를 분말화하여 사용하거나, 분말을 냉동 건조시킨 후 사용할 수 있다.Separating the wheat husk from the wheat means removing the wheat seeds from the harvested wheat and separating only the wheat husk and can be treated further, including washing, peeling or filtering the wheat husk It can be finely chopped or powdered, or it can be used after freeze-drying the powder.

상기 밀 껍질을 용매로 추출하는 단계에서는 통상적으로 사용되는 모든 추출 방법을 사용할 수 있으며, 예컨대, 냉침 추출, 열수 추출, 초음파 추출, 환류 추출 또는 냉각 추출, 바람직하게는 환류 추출일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 단계는 1 이상 반복하여 수행될 수 있으며, 2차 이상으로 추출된 추출물 및 각 추출 후 얻어진 여과액을 혼합하여 추출하여 추출효율을 높일 수 있다.In the step of extracting the wheat husk with a solvent, any conventional extraction method may be used. For example, it may be a cold extraction, a hot water extraction, an ultrasonic extraction, a reflux extraction or a cooling extraction, It is not. The extraction step may be repeated one or more times, and the extraction efficiency may be enhanced by mixing and extracting the extract extracted with the second or higher order and the filtrate obtained after each extraction.

또한 추출 단계에서 얻어진 추출물을 약 2 내지 10배, 바람직하게는 약 3 내지 7배의 부피의 물로 현탁시킨 후 물, 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 유기 용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 용매를 가하여 용매 가용층을 추출한 후 감압 농축하여 용매 가용 추출물을 제조하는 방법을 추가로 포함하여 불필요한 단백질, 다당류 및 지방산 등의 불순물을 정제할 수 있다.The extract obtained in the extraction step is suspended in water having a volume of about 2 to 10 times, preferably about 3 to 7 times, and then water, a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, an organic solvent and a mixed solvent thereof A method for preparing a solvent-soluble extract by extracting a solvent-soluble layer by adding at least one solvent selected from the group consisting of water, ethanol, and water, and concentrating under reduced pressure, thereby purifying impurities such as unnecessary proteins, polysaccharides and fatty acids.

추출물을 여과 또는 농축하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 농축 단계에 의해 제조되는 농축물은 의약품 원료로 사용하기에 적합하도록 잔존하는 용매의 함량을 조절하기 위하여 농축물 총량의 약 10 내지 30배, 바람직하게는 15 내지 25배, 보다 바람직하게는 약 20 중량배의 물로 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 3회 공비 농축하고 재차 동량의 물을 가하여 균질하게 현탁시킨 후 살균 및/또는 동결건조시킴으로써 분말상태의 밀껍질 추출물로서 제조될 수 있다. The step of filtering or concentrating the extract may further comprise the step of: The concentrate produced by the concentration step may be used in an amount of about 10 to 30 times, preferably 15 to 25 times, more preferably about 20 times, By concentrating the mixture with water in a weight ratio of from 1 to 5 times, preferably from 2 to 3 times, adding the same amount of water again and homogenously suspending the mixture, and then sterilizing and / or lyophilizing the mixture to obtain a powdery wheat bark extract.

본 발명은 밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물로서, 콜라겐 생합성 촉진, 항산화 활성 및/또는 미백 활성이 우수하여 기능성 화장품으로서 유용하게 사용될 수 있다.The present invention is a cosmetic composition comprising wheat bark extract as an active ingredient, and is useful as functional cosmetics because of its excellent collagen biosynthesis promotion, antioxidative activity and / or whitening activity.

도 1a는 HS68 세포에서의 밀 껍질 추출물 세포독성 실험을 나타낸 결과이다.
도 1b는 Hacat 세포에서의 밀 껍질 추출물 세포독성 실험을 나타낸 결과이다.
도 2는 품종 별 밀 껍질 추출물 처리에 따른 프로콜라겐 1의 합성 결과를 베타 액틴 양으로 보정하여 나타낸 것이다.
도 3은 품종 및 농도 별 밀 껍질 추출물 처리에 따른 항산화 효과를 나타낸 결과이다.
도 4는 품종 별 밀 껍질 추출물 처리에 따른 미백 효과를 나타낸 결과이다.
도 5a는 품종 별 밀 껍질 추출물 처리에 따른 세포 산화율을 측정한 결과이다.
도 5b는 품종 별 밀 종자 추출물 처리에 따른 세포 산화율을 측정한 결과이다.
도 6는 쥐의 흑색종 세포에 품종 별 밀 껍질 추출물 처리한 시료 및 이의 흡광도 측정 결과이다.
FIG. 1A shows the cytotoxicity test of wheat bark extract in HS68 cells.
FIG. 1B shows the cytotoxicity test of wheat bark extract in Hacat cells.
FIG. 2 shows the results of the synthesis of procollagen 1 according to the wheat bark extract treatment of each cultivar, corrected with the amount of beta actin.
FIG. 3 shows the antioxidative effects of wheat bark extract according to the type and concentration.
Fig. 4 shows the whitening effect of wheat bark extract according to the cultivars.
FIG. 5A is a result of measurement of cell oxidation rate according to the wheat bark extract treatment of each kind.
FIG. 5b shows the result of measurement of cell oxidation rate according to the wheat seed extract treatment by breed.
FIG. 6 shows the result of measurement of wheat bark extract-treated samples and their absorbance of the melanoma cells of the rats.

하기 예시적인 실시예를 들어 본 발명을 더욱 자세히 설명할 것이나, 본 발명의 보호범위가 하기 실시예로 한정되는 의도는 아니다. The present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, the scope of protection of the present invention is not intended to be limited to the following examples.

실시예Example 1. 밀 껍질 추출물 제조 1. Preparation of wheat bark extract

조품, 조경, 올그루, 금강의 껍질 각각의 10g, 20g, 및 40g에 80% 에탄올 물 혼합 용매 1L에 가하여 환류냉각 추출하였다. 3시간 동안 추출한 뒤 감압 여과하고 회전진공농축기로 용매를 제거시킨 다음 4℃에 보관하면서 실험에 사용하였다. 10 g, 20 g, and 40 g of each of the raw materials, landscaping, algae, and gold husks were added to 1 L of an 80% ethanol water mixed solvent, followed by reflux cooling extraction. After 3 hours of extraction, the mixture was filtered under reduced pressure, and the solvent was removed using a rotary vacuum concentrator.

실시예Example 2. 밀2. Wheat 종자 및  Seeds and 녹체Green body 추출물 제조 Extract preparation

조품, 조경, 올그루, 금강의 종자 각각의 10g, 20g, 및 40g와, 금강의 녹체 10g 및 20g에 80% 에탄올 물 혼합 용매 1L에 가하여 환류냉각 추출하였다. 3시간 동안 추출한 뒤 감압 여과하고 회전진공농축기로 용매를 제거시킨 다음 4℃에 보관하면서 실험에 사용하였다. 10 g, 20 g, and 40 g of the seeds of each of the raw materials, landscape, algae, and gold were added to 1 g of 80% ethanol water mixed solvent in 10 g and 20 g of the green body of the steel and subjected to reflux cooling. After 3 hours of extraction, the mixture was filtered under reduced pressure, and the solvent was removed using a rotary vacuum concentrator.

실시예Example 3. 안전성 평가 3. Safety evaluation

실시예 1에서 제조한 밀 껍질 추출물 시료의 안정성을 평가하기 위하여 세포 독성 실험을 실시하였다. HaCaT (Human keratinocyte, KCB, Korea) 및 H s-68 (Human skin fibroblast, ATCC, USA)를1.5*104cells/well의 농도로 96 웰 플레이트에 분주하여 37℃의 온도 및 5% CO2의 조건에서 24시간 배양하였다. 시료를 희석한 10% FBS가 포함된 DMEM 배지200μl를 배양배지와 교체한 후 24시간 동안 추가 배양하였다. 이후 MTT 키트(CellTiter 96, Promega)를 각 well에 20μl씩 가해준 후, 3시간 후에 마이크로플레이트 판독기(Microplate reader, Bioteck)을 이용하여 이용하여 490nm에서 흡광도를 측정, 아래의 수학식 1으로 세포 생존률(%)으로 환산하였다.To evaluate the stability of the wheat bark extract prepared in Example 1, a cytotoxicity experiment was conducted. Cells were seeded in 96-well plates at a concentration of 1.5 x 104 cells / well and cultured at 37 ° C and 5% CO 2 at 24 ° C for 24 h. Time. 200 μl of the DMEM medium containing 10% FBS diluted with the sample was replaced with the culture medium, followed by further incubation for 24 hours. 20 μl of MTT kit (CellTiter 96, Promega) was added to each well. After 3 hours, the absorbance was measured at 490 nm using a microplate reader (Bioteck), and the cell viability (%).

[수학식 1][Equation 1]

세포 생존률(%)=SS/SC×100Cell survival rate (%) = S S / S C 100

(SS:시료를 처리한 군의 흡광도, SC:시료를 처리하지 않은 군의 흡광도)(S S : absorbance of the group treated with the sample, S C : absorbance of the group not treated with the sample)

상기 결과를 도 1a 및 도 1b에 나타내었으며, MTT 분석 결과, 모든 시료에서 20ppm까지 세포 생존률의 감소가 보이지 않으므로 밀 껍질 추출물이 유효 농도 이내에서 안전한 원료임을 확인하였다.The results are shown in FIGS. 1A and 1B. As a result of MTT analysis, the cell survival rate was not reduced to 20 ppm in all the samples. Therefore, the wheat bark extract was found to be a safe raw material within the effective concentration.

실시예Example 4.  4. 프로콜라겐Procollagen 합성 효과 평가 Evaluation of synthesis effect

4.1 프로콜라겐 및 베타 액틴 발현량 분석4.1 Analysis of the amount of procollagen and beta actin expression

인간 피부 섬유아세포인 HS58을 1*106 cells/well의 농도로 6 웰 플레이트에 분주한 뒤, 세포의 수가 70 내지 80%로 증가할 때까지 37℃의 온도 및 5% CO2의 조건에서 24시간 배양하였다. PBS로 세포 세척 후 UV 조사기(BoTeck, Korea)로 UV-A 및 UV-B를 60초 동안 조사하였다. 실시예 1에서 제조된 20μg/ml 시료를 무혈청 배지를 배양배지와 교체한 후 24시간 동안 추가 배양한다. 배지 제거 후 PBS로 세포를 세척하여 뒤 SDS sample buffer (120mM Tris-HCl(pH 6.8), 20% Glycerol, 4% SDS, 28.8mM 2-mercaptoethanol, 0.01% bromophenol blue)를 100μl씩 가하여 세포를 터트린 뒤 수거하여 105℃의 온도에서 10분간 끓여 단백질을 변성시켰다. 변성시킨 샘플 20μl을 10% SDS-PAGE 전기영동을 걸어 나이트로셀룰로스막(nitrocellulose membrane)에 단백질을 이동(transfer)시킨 후 TBST 버퍼에 용해시킨 5% 스킴밀크에서 30분 동안 배양한 뒤, 베타 액틴(Santa cruze Biotechnology, CA) 과 프로콜라겐1(Santa cruze Biotechnology, CA) 항체를 5% 스킴밀크 TBST 배지에 1:500으로 희석해 4에서 하룻밤 동안 쉐이킹하며 배양시켰다. TBST로 10분씩 3번 세척한 후 HRP-conjigated 된 2차 항체를 5% 스킴밀크 TBST 버퍼에 1:2000으로 희석한 용액에 2시간 동안 배양하였다. TBST로 10분씩 3번 멤브레인을 세척한 뒤 Novex ECL Chemiluminescent Substrate Reagent Kit 시약(Invitrogen, USA)을 뿌려 암실에서 3분간 반응시킨 후, 감광 필름에 현상시켰다. The human skin fibroblast HS58 was dispensed into 6-well plates at a concentration of 1 * 10 6 cells / well, and cultured at 37 ° C and 5% CO 2 until the number of cells increased to 70-80% Time. After washing the cells with PBS, UV-A and UV-B were irradiated for 60 seconds with a UV irradiator (BoTeck, Korea). The 20 μg / ml sample prepared in Example 1 is replaced with the culture medium for the serum-free medium, followed by further incubation for 24 hours. After removing the medium, the cells were washed with PBS and 100 μl of SDS sample buffer (120 mM Tris-HCl (pH 6.8), 20% Glycerol, 4% SDS, 28.8 mM 2-mercaptoethanol, 0.01% bromophenol blue) Collected and boiled at a temperature of 105 DEG C for 10 minutes to denature the protein. 20 μl of the denatured sample was subjected to 10% SDS-PAGE electrophoresis, the protein was transferred to a nitrocellulose membrane and then cultured in a 5% skim milk dissolved in TBST buffer for 30 minutes. Then, (Santa Cruze Biotechnology, CA) and Procollagen 1 (Santa Cruze Biotechnology, CA) antibody were diluted 1: 500 in 5% skim milk TBST medium and shaken overnight at 4 ° C. After washing three times for 10 min with TBST, the HRP-conjugated secondary antibody was incubated in a 1: 2000 dilution of 5% skim milk TBST buffer for 2 h. The membranes were washed three times for 10 minutes each with TBST, and incubated in a dark room for 3 minutes with a Novex ECL Chemiluminescent Substrate Reagent Kit reagent (Invitrogen, USA).

프로콜라겐1의 양을 베타 액틴 양으로 보정하여 베타 액틴과 프로콜라겐1의 현상 결과를 image J로 분석한 그래프를 도 2에 나타내었다. 모든 품종의 밀 껌질 추출물에서 유의적으로 프로콜라겐 1이 합성되어 프로콜라겐 생합성이 촉진된 것을 확인하였으며, 특히 조경, 올그루 및 금강 품종에서 프로콜라겐 생합성 촉진 효과가 더욱 우수함을 확인하였다.FIG. 2 shows a graph in which the amount of procollagen 1 was corrected to the amount of beta actin and the result of development of beta actin and procollagen 1 was analyzed by image J. FIG. It was confirmed that procollagen 1 was synthesized significantly in wheat gum extract of all varieties, and promoted the production of procollagen biosynthesis. Especially, it was confirmed that promoting effect of procollagen biosynthesis is better in landscaping, olive and kumquat cultivars.

4.2 COL1A1 발현량 분석4.2 Analysis of expression of COL1A1

콜라겐 유전자로 알려진 col1a1 유전자의 발현량을 측정하였다. The expression level of the col1a1 gene, which is known as the collagen gene, was measured.

구체적으로, 인간 피부 섬유아세포인 Hs68 (human skin fibroblast)를 2.2 x 106 cells 농도로 100 파이 cell culture dish에 분주한 후 70~80% 정도 자랄 때까지 37℃, 5% CO2의 조건에서 72 시간 배양하였다. 각 dish에 Phosphate buffer saline(PBS) 10ml를 가해 세포를 세척한 후 UV 조사기(BoTeck, Korea)로 UV-A와 UV-B를 60초간 쪼여주었다. 이후 시료를 희석한 무혈청 배지를 배양배지와 교체한 후 24시간 동안 추가배양 하였다.Specifically, 72 hours under the conditions of the human skin fibroblast in Hs68 (human skin fibroblast) to 2.2 x 10 after the frequency division to 6 cells concentration of 100 pi cell culture dish in 70 ~ 37 ℃ until grow approximately 80%, 5% CO2 Lt; / RTI > Each dish was washed with 10 ml of phosphate buffer saline (PBS), and the cells were washed with UV-A and UV-B for 60 seconds with a UV-irradiator (BoTeck, Korea). Subsequently, the serum-free medium diluted with the sample was replaced with the culture medium and further cultured for 24 hours.

24시간 후 배지를 제거하고 RNA extraction kit 인 hybrid-RTM(GeneAll Biotechnology, Korea)를 이용하여 RNA를 분리한 후, iScript TM cDNA Synthesis Kit(BIO-RAD, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA에 Col1a1, GAPDH의 primer 각각 1μL (0.5 μg/μL), DEPC-Water와 함께 iQTM SYBER® Green Supermix (BIO-RAD, USA)를 섞어준 뒤 CFX96TM Real-Time System(BIO-RAD, USA)를 이용하여 RT-PCR 을 3회 반복 실시하였다. Col1a1 의 mRNA 발현량을 GAPDH의 mRNA 발현량으로 보정하여 정량 PCR을 수행하고 그 결과를 도 4에 나타내었다.After 24 hours, the medium was removed and the RNA was isolated using hybrid-RTM (GeneAll Biotechnology, Korea), an RNA extraction kit, and cDNA was synthesized using iScript ™ cDNA Synthesis Kit (BIO-RAD, USA). 1 μL (0.5 μg / μL) of each of Col1a1 and GAPDH primers and iQTM SYBER® Green Supermix (BIO-RAD, USA) with DEPC-Water were added to the synthesized cDNA, followed by CFX96 ™ Real-Time System ) Was used to perform RT-PCR three times. The amount of mRNA expression of Col1a1 was corrected by the expression amount of GAPDH mRNA, and quantitative PCR was performed. The results are shown in Fig.

실시예Example 5. 콜라겐 분해 억제활성 평가 ( 5. Assessment of collagen degradation inhibitory activity MMP활성MMP activity ))

인간 피부 섬유아세포인 Hs68 (human skin fibroblast)를 1*106cells/well의 농도로 6 well plate에 분주한 후 70~80% 정도 자랄 때까지 37℃, 5% CO2의 조건에서 24 시간 동안 배양하고, 각 well plate에 Phosphate buffer saline(PBS) 1㎖씩을 넣어 세포 세척 한 후, 실시예 1에서 제조된 시료로서, 조품, 조경, 올그루, 금강 및 우리 품종의 밀 껍질 추출물 20μg/ml 시료를 희석한 무혈청배지를 배양배지와 교체한 후 48시간(MMP-3)동안 추가 배양하였다. 상기 배지를 제거 후 RNA extraction kit을 이용하여 RNA 를 분리한 후, cDNA를 합성하고 mRNA 발현량을 측정하기 위하여 합성된 cDNA로 RT-PCR을 실시하였다. 사용한 GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase), MMP-3의 프라이머 서열을 아래 표에 나타내었다.Human skin fibroblast (Hs68), a human skin fibroblast, was added to a 6-well plate at a concentration of 1 × 10 6 cells / well and cultured at 37 ° C and 5% CO 2 for 24 hours And 1 ml of phosphate buffer saline (PBS) was added to each well plate to wash the cells. As a sample prepared in Example 1, a 20 μg / ml sample of wheat bark extract of the raw material, landscape, algae, Diluted serum-free medium was replaced with culture medium and further incubated for 48 hours (MMP-3). After removing the medium, RNA was isolated using an RNA extraction kit. Then, RT-PCR was performed on the synthesized cDNA to synthesize cDNA and measure mRNA expression level. The primer sequences of GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) and MMP-3 used are shown in the table below.

서열번호SEQ ID NO: 명칭designation 서열order 1One GAPDH 정방향 프라이머GAPDH forward primer 5'-CAA AAG GGT CAT CAT CTC TG-3'5'-CAA AAG GGT CAT CAT CTC TG-3 ' 22 GAPDH 역방향 프라이머GAPDH reverse primer 5'-CCT GCT TCA CCA CCT TCT TG-3'5'-CCT GCT TCA CCA CCT TCT TG-3 ' 33 MMP-3 정방향 프라이머MMP-3 forward primer 5’-GGT TCC GCC TGT CTC AAG AT-3’5'-GGT TCC GCC TGT CTC AAG AT-3 ' 44 MMP-3 역방향 프라이머MMP-3 reverse primer 5’-GGT TCT GGA GGG ACA CCT TC-3'5'-GGT TCT GGA GGG ACA CCT TC-3 '

상기 프라이머를 각각 1μL (0.5μg/μL)씩 가하고 합성된 cDNA에 DEPC-Water와 함께 PCR-premix tube에 첨가하여 정량 PCR을 수행하였다. real-time PCR system (Mx3000P, Stratagene, Tokyo, Japan) using SYBR PreMix ExTaq (Takara Bio, Shiga, Japan) 1 μL (0.5 μg / μL) of each primer was added to the PCR-premix tube together with DEPC-Water, and quantitative PCR was performed. Real-time PCR system (Mx3000P, Stratagene, Tokyo, Japan) using SYBR PreMix ExTaq (Takara Bio, Shiga, Japan)

그 결과를 도 4에 나타내었으며, 모든 품종의 밀 껍질 추출물에서 유의적으로 MMP3 합성이 저해되는 것을 확인하였다.The results are shown in FIG. 4, and it was confirmed that the wheat bark extract of all varieties significantly inhibited the synthesis of MMP3.

실시예Example 6. 항산화 효과 평가 6. Evaluation of antioxidant effect

실시예 1 및 2에서 제조된 밀 껍질 추출물 시료의 항산화 효과를 평가하기 위하여 DCFDA 어세이를 실시하였다. Hacat 세포를 1.5*105cells/well 농도로 96 웰 플레이트에 분주한 뒤 37℃의 온도 및 5% CO2의 조건에서 24시간 동안 배양하였다. PBS로 세포 세척 후 10% FBS 포함된 DMEM 배지에 실시예 1에서 제조된 10μg/ml 또는 20μg/ml 시료를 배양배지와 교체한 후 24시간 동안 추가 배양하였다. 배지 제거 후 PBS로 세포를 세척하고 DCFDA를 PBS 배지에 20μM로 희석하여 45분간 배양하였다. PBS로 세포를 세척해준 뒤, H2O2를 500uM로 PBS에 희석한 배지에 시약을 100μl씩 가해 30분 동안 추가배양 하였다. 이후 마이크로플레이트 판독기(Microplate reader, Tecan)을 이용하여 이용하여 Excitation: 485/20, Emission: 528/20 조건에서 형광을 측정하였다. 측정된 값은 아래의 수학식 1로 계산된 산화율(%)으로 환산하고, 음성 대조군인 글루타치온 10mM의 산화율을 100%로 하는 경우의 밀 추출물 10μg/ml의 상대 산화율(%)를 아래 수학식 2로 산출하였다.DCFDA assays were conducted to evaluate the antioxidative effects of the wheat bark extract samples prepared in Examples 1 and 2. Hacat cells were seeded in 96-well plates at a concentration of 1.5 * 10 5 cells / well and cultured at 37 ° C and 5% CO 2 for 24 hours. After washing the cells with PBS, the 10 .mu.g / ml or 20 .mu.g / ml sample prepared in Example 1 was replaced with the culture medium and further cultured for 24 hours in DMEM medium containing 10% FBS. Cells were washed with PBS and DCFDA was diluted to 20 μM in PBS medium for 45 min. After washing the cells with PBS, 100 μl of the reagent was added to the medium diluted with PBS to 500 uM in PBS, followed by further incubation for 30 minutes. Then, fluorescence was measured using a microplate reader (Tecan) under Excitation: 485/20, Emission: 528/20. The measured value was converted to the oxidation rate (%) calculated by the following equation (1), and the relative oxidation rate (%) of the wheat extract at 10 占 퐂 / ml when the oxidation rate of glutathione 10 mM as the negative control group was 100% Respectively.

[수학식 1][Equation 1]

Figure pat00005
Figure pat00005

[수학식 2]&Quot; (2) "

Figure pat00006
Figure pat00006

상기 세포 산화율 측정한 결과로서 밀 껍질 시료에 대한 결과를 도 5a 및 표 2에, 밀 종자 시료에 대한 결과를 도 5b 및 표 3에 나타내었으며, 모든 품종의 시료에서 음성 대조군인 글루타치온과 비슷하거나 더욱 우수한 수준으로 항산화 효과가 있을 뿐 아니라 밀의 종자 부분 대비 밀 껍질 부분에 항산화 효과가 현저히 우수함을 확인하였다. 구체적으로 밀의 종자 추출물의 경우, 40μg/mL까지의 농도에서도 항산화 효과를 대조군의 80% 수준 이하로 낮추지 못한 반면, 밀 껍질의 경우 20μg/mL의 농도에서 활성 산소를 대조군의 60% 또는 80% 수준 이하까지 낮춘 것을 확인하였다. 이는 종자 부분과 밀 껍질 부분의 활성이 차이가 있음을 의미하고, 밀 껍질 부분의 유효성의 차이를 보여준다고 할 수 있다. As a result of the measurement of the cell oxidation rate, the results for the wheat bark sample are shown in Figs. 5A and 2, the results for the wheat seed sample are shown in Figs. 5B and 3, and in the samples of all varieties, It was confirmed that the antioxidative effect was superior to the seed part of the wheat and the wheat bark part of the wheat. Specifically, the seed extract of wheat did not lower the antioxidative effect to below 80% of the control group even at the concentration of 40 μg / mL, whereas at the concentration of 20 μg / mL of wheat husk, 60% or 80% of the control group Respectively. This means that there is a difference in activity between the seed part and the wheat bark part and shows the difference in effectiveness of wheat bark part.

시료sample 농도density 산화율(%)Oxidation rate (%) 글루타치온 대비
상대 산화율(%)
Contrast to glutathione
Relative oxidation rate (%)
대조군Control group -- 100100 글루타치온Glutathione 10mM10 mM 66.9766.97 100100 조품 껍질Scarf 10μg/ml10 μg / ml 70.4270.42 91.4991.49 조품 껍질Scarf 20μg/ml20 μg / ml 53.8553.85 69.9769.97 조경 껍질Landscape shell 10μg/ml10 μg / ml 69.6169.61 90.4390.43 조경 껍질Landscape shell 20μg/ml20 μg / ml 66.0566.05 85.8285.82 올그루 껍질Peach shell 10μg/ml10 μg / ml 75.1775.17 97.6697.66 올그루 껍질Peach shell 20μg/ml20 μg / ml 73.1673.16 95.0595.05 금강 껍질Pebbles 10μg/ml10 μg / ml 88.4088.40 114.85114.85 금강 껍질Pebbles 20μg/ml20 μg / ml 77.7877.78 101.06101.06

시료sample 농도density 산화율(%)Oxidation rate (%) 글루타치온 대비
상대 산화율(%)
Contrast to glutathione
Relative oxidation rate (%)
대조군Control group -- 100100 글루타치온Glutathione 10mM10 mM 59.8559.85 100100 조품 종자Seed seed 10 μg/ml10 μg / ml 97.0297.02 162.10162.10 조품 종자Seed seed 20 μg/ml20 μg / ml 86.4386.43 144.41144.41 조품 종자Seed seed 40 μg/ml40 μg / ml 81.3781.37 135.96135.96 조경종자Landscape seed 10 μg/ml10 μg / ml 123.47123.47 206.29206.29 조경 종자Landscape seed 20 μg/ml20 μg / ml 113.74113.74 190.04190.04 조경 종자Landscape seed 40 μg/ml40 μg / ml 114.77114.77 191.77191.77 올그루 종자Seed Seeds 10 μg/ml10 μg / ml 114.51114.51 191.33191.33 올그루 종자Seed Seeds 20 μg/ml20 μg / ml 113.16113.16 189.08189.08 올그루 종자Seed Seeds 40 μg/ml40 μg / ml 106.83106.83 178.49178.49 금강 종자Geumgang Seed 10 μg/ml10 μg / ml 103.63103.63 173.14173.14 금강 종자Geumgang Seed 20 μg/ml20 μg / ml 89.5589.55 149.62149.62 금강 종자Geumgang Seed 40 μg/ml40 μg / ml 85.6385.63 143.08143.08 우리 종자Our seed 10 μg/ml10 μg / ml 93.0293.02 155.42155.42 우리 종자Our seed 20 μg/ml20 μg / ml 89.6089.60 149.71149.71 우리 종자Our seed 40 μg/ml40 μg / ml 81.3481.34 135.91135.91

실시예Example 7. 미백 효과 평가 7. Evaluation of whitening effect

쥐의 흑색종 세포인 B16-F10 세포를 1*106cells/well 농도로 96 웰 플레이트에 분주한 뒤, 세포의 수가 70~80% 정도 증가할 때까지 37℃의 온도 및 5% CO2의 조건에서 24시간 동안 배양하였다. PBS로 세포 세척 후, 10% FBS 포함된DMEM 배지에 실시예 1에서 제조된 20μg/ml 시료를 희석하여 배양배지와 교체한 후 3일간 추가 배양하였다. PBS로 세포를 세척한 이후 0.25% 트립신-EDTA 200μl를 가하고 3분간 배양기에서 배양하였다. 이후 PBS 1ml를 가해 세포를 탈착시켜 1.5ml e-tube에 옮긴 뒤 12000rpm, 4℃의 온도에서 3분간 세포 펠렛만을 남기고 상층액을 제거했다. 세포 용해 완충액(Lysis buffer) (25 mM Tris-HCl pH 7.6, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA,1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS ) 100μl를 가해준 뒤 4 ℃의 온도에서 30분간 배양하였다. 이후 4 ℃의 온도 및 13000rpm 에서 30분 원심분리하여 세포 펠렛과 상층액을 분리했다.B16-F10 cells, the melanoma cells of the rats, were divided into 96-well plates at a concentration of 1 * 10 6 cells / well and incubated at 37 ° C and 5% CO 2 until the number of cells increased by 70-80% For 24 hours. After washing the cells with PBS, the 20 μg / ml sample prepared in Example 1 was diluted with DMEM medium containing 10% FBS, replaced with the culture medium, and further cultured for 3 days. After washing the cells with PBS, 200 μl of 0.25% trypsin-EDTA was added and cultured in an incubator for 3 minutes. Then, the cells were desorbed by adding 1 ml of PBS, transferred to a 1.5 ml e-tube, and then the supernatant was removed at 12,000 rpm at 4 ° C for 3 minutes, leaving only the cell pellet. 100 μl of a lysis buffer (25 mM Tris-HCl pH 7.6, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS) And cultured for 30 minutes. Then, the cell pellet and the supernatant were separated by centrifugation at a temperature of 4 캜 and at 13000 rpm for 30 minutes.

상층액은 BSA stnadard를 이용하여 595nm에서 단백질 정량하였다. 세포 펠렛은 60℃ 온도의 오븐에서 건조 후 20% DMSO, 2N NaOH 200μl를 넣고 잘 녹여준 뒤 405nm에서 흡광도를 측정하였다. The supernatant was quantitated at 595 nm using BSA stnadard. The cell pellet was dried in an oven at a temperature of 60 ° C, and dissolved in 200 μl of 20% DMSO and 2N NaOH. The absorbance was measured at 405 nm.

그 결과를 도 6에 나타내었으며, 모든 품종의 밀 껍질 추출물에서 미백 효과가 우수함을 확인하였고, 특히 금강이 20ppm으로 처리했을 때 가장 뛰어난 미백 효과가 있음을 확인하였다.The results are shown in FIG. 6, and it was confirmed that whitening effect was excellent in wheat bark extract of all varieties. In particular, it was confirmed that whitening effect was most excellent when 20 ppm of kumquat was treated.

<110> Dongduk Womens's University Industry-Academy Collaboration Foundation <120> Cosmetic composition comprising wheat-chaff extract <130> DPP20170751KR <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH forward primer <400> 1 caaaagggtc atcatctctg 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH reverse primer <400> 2 cctgcttcac caccttcttg 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-3 forward primer <400> 3 ggttccgcct gtctcaagat 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-3 reverse primer <400> 4 ggttctggag ggacaccttc 20 <110> Dongduk Womens's University Industry-Academy Collaboration Foundation <120> Cosmetic composition comprising wheat-chaff extract <130> DPP20170751KR <160> 4 <170> KoPatentin 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH forward primer <400> 1 caaaagggtc atcatctctg 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH reverse primer <400> 2 cctgcttcac caccttcttg 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-3 forward primer <400> 3 ggttccgcct gtctcaagat 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-3 reverse primer <400> 4 ggttctggag ggacaccttc 20

Claims (9)

밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.A cosmetic composition comprising wheat bark extract as an active ingredient. 제1항에 있어서, 상기 밀 껍질은 겉 껍질(chaff) 및 안 껍질(palea)로 이루어진 군에서 선택된 1 이상인, 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the wheat husk is at least one selected from the group consisting of chaff and palea. 제1항에 있어서, 상기 밀 껍질 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 유기 용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 용매로 추출된 것인, 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the wheat bark extract is extracted with at least one solvent selected from the group consisting of water, a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, an organic solvent, and a mixed solvent thereof. 제3항에 있어서, 상기 용매는 에탄올 수용액인, 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 3, wherein the solvent is an aqueous solution of ethanol. 제1항에 있어서, 아래 수학식 1으로 산출된 글루타치온의 산화율 100%를 기준으로 상기 밀 껍질 추출물의 상대 산화율(%)이 30 내지 135%인, 화장료 조성물:
[수학식 1]
Figure pat00007
The cosmetic composition according to claim 1, wherein a relative oxidation rate (%) of the wheat bark extract is 30 to 135% based on 100% of an oxidation rate of glutathione calculated by the following formula (1)
[Equation 1]
Figure pat00007
제1항에 있어서, 상기 조성물은 주름개선용인, 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the composition is for improving wrinkles. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐 생합성 촉진 또는 콜라겐 분해효소 저해 활성이 있는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the composition has collagen biosynthesis promotion activity or collagenase inhibitory activity. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 미백용인, 화장료 조성물. The cosmetic composition according to claim 1, wherein the composition is for skin whitening. 밀로부터 밀 껍질을 분리하는 단계; 및
상기 밀 껍질을 물, 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 유기 용매 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 용매로 추출하는 단계를 포함하는,
밀 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물의 제조방법.
Separating the wheat husks from the wheat; And
Extracting the wheat husks with at least one solvent selected from the group consisting of water, linear or branched alcohols having 1 to 4 carbon atoms, organic solvents, and mixed solvents thereof.
A method for producing a cosmetic composition comprising wheat bark extract as an active ingredient.
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