KR20180126908A

KR20180126908A - 눈의 광반사(light reflectance)를 증가시키는 방법

Info

Publication number: KR20180126908A
Application number: KR1020170061973A
Authority: KR
Inventors: 김성진; 양지명; 에드워드 택 웨이
Original assignee: 에드워드 택 웨이
Priority date: 2017-05-19
Filing date: 2017-05-19
Publication date: 2018-11-28

Abstract

본 발명은 일반적으로 안와(orbit)에 적용되는 화합물의 분야에 관한 것이다.
더 상세하게는, 본 발명은 어떠한 다이알킬포스포릴알케인(dialkylphosphorylalkane), 본 명세서에 기술된 바와 같은 Dipa-1-7, Dipa-1-8, Dipa-1-9에 관한 것으로서, 본 명세서에서 집합적으로 “다이이소프로필포스포릴알케인(diisopropylphosphorylalkane) 화합물”로 지칭된다. 이들은 눈의 광반사를 증가시키는데 유용하고, 반달연골(meniscus)의 찢어짐 높이에 의해 측정된다.
본 출원인은 면봉(swab) 또는 미리 패키지된 유닛으로 눈꺼풀 마진(eyelid margin) 상을 닦는 것에 의한 Dipa 화합물의 국부적 전달은 눈 표면의 외관을 극적으로 향상시키고, 건조감을 해소시키는 것을 발견하였다.

Description

눈의 광반사(light reflectance)를 증가시키는 방법{Method for Increasing Light Reflectance from the Eyes}

본 발명은 눈에서 빛 반사율을 증가시키는 방법 및 사람의 눈에서 빛 반사율을 증가시키는 조성물에 관한 것이다.

눈은 외부 세계의 정보를 뇌로 보내는 역할을 한다. 눈은 뜨는 그 순간부터 바로 활성화된다. 눈의 생김새가 얼굴을 나타내고, 경계감, 유머 감각, 감정을 전달한다. 눈의 모양은 안와(orbit)에 국소적으로 적용되는 많은 성분에 의해 바뀔 수 있다. 여기에는 상안와피부 (supraorbital skin) (눈썹과 상안목 사이의 피부), 눈꺼풀 모서리 및 속눈썹에 각각 적용된 아이라이너, 아이쉐도우 및 마스카라가 포함된다. 밝고 반짝이는 눈은 기민함, 주의깊음, 그리고 활기찬 인상을 준다. 이것은 눈꺼풀틈새를 넓히고 동공크기를 증가시킴으로써 이루어질 수 있다. 대안으로, "눈빛"의 강도는 눈으로부터 광 반사율을 증가시킴으로써 이뤄질 수 있다. 빛나는 눈은 감정호소력을 향상시키며 드라마와 연기에서 열정을 전달하는데 효율적일 수 있다. 이 출원에서는, 눈으로부터 광 반사율을 증가시키는 방법을 설명하였다.

관련 기술의 설명

펜 라이트가 눈에 비치면 눈의 중심으로부터의 빛 반사의 위치가 관찰되며 이것은 각막 광 반사 테스트 또는 히르쉬베르크(Hirschberg) 검사라고하는 양안의 안구운동 정렬 테스트이다. 각막 반사법을 이용한 고토 (Goto) 등 2 개의 간행물에서 쇼그렌증후군의 건조한 눈을 가진 정상 및 안구 표면에서의 광 반사율을 분석하고, 눈의 "광채"가 반사 된 빛의 양과 상관 관계가 있다는 결론에 이르렀다. 차례로 각막 표면의 평활도, 눈물 막 및 눈물의 양과 상관 관계가 있다. 쇼그렌증후군 건성안 환자에서 빛 반사 강도가 25 % 감소하고 쉬르머(Schirmer) 방법으로 측정 한 눈물 분비는 82 % 감소했다. Goto 등에 의하면 "카사 블랑카" 영화에서 스웨덴 여배우인 잉그리드 버그만을 특별히 언급하면서 아름다움을 위한 눈의 "반짝임(sparkle, 스파클)" 의 중요성에 대해 논평했다. 이 유형의 스파클은 미국의 줄리아 로버츠 (Julia Roberts), 중국의 장쯔이 (Zhang Ziyi) 와 같은 배우들에서도 관찰될 수 있다.

각막 표면의 규칙성이나 눈물의 조성을 바꾸어서 눈의 "스파클"을 조절하는 것은 쉽지 않지만 눈물의 양은 빛의 반사율을 높이기 위해 바뀔 수 있다. 이것은 일반 대중에 의해 인정되는 부분이다. 예를 들어 www.wikihow.com에는 눈을 만드는 법에 대한 16 가지 절차가 나와 있다. 다음과 같은 방법들을 할 수 있다 : 신선한 양파를 자르고, 눈 밑의 치약을 묻히고, 멘톨 크림이나 왁스를 바르거나, 페퍼민트 또는 유칼립투스 제품을 사용하거나, 안약을 사용한다. 눈물을 증가시키는 물리적인 방법은 눈을 문지르고, 깜박이지 않으며, 속눈썹을 당기거나, 하품을 하거나, 빛을 들여다 보는 것이다. 심리적 방법에는 슬픈 상황을 생각하는 것이 포함된다. 이러한 경우, 눈물/울음의 사용은 연극을 위한 것일 수도 있고, 다른 사람의 공감을 얻거나 자신의 무력감을 전달할 수도 있다. 이 사이트에 설명된 방법은 원하는 유형의 눈물흘림을 설명하거나 구별하지 않는다.

본 발명은 이상적으로 눈을 촉촉하게 또는 "안개낀 것 처럼 흐릿"하게 만들고 더 많은 빛을 반사 시킴으로써 눈의 극적인 강도, 생기 또는 아름다움을 증가시키도록 설계하였다. 눈물의 양은 증가하지만 눈꺼풀에서 넘쳐흐르지는 않는다. 과도한 눈물이나 울음은 바람직하지 않다. 기술적 혁신은 정확해야 한다. 이 발명은 세척와 미용을 넘어서기 때문에 "화장품"으로 정의 할 수 없다. 예를 들어, 배우가 화난 악당처럼 보이기를 원한다면 그는 눈을 밝게하기 위해 발명품을 사용할 수 있으며, 더불어 눈을 크게 뜨고 치아 노출을 증가시켜서 열정이 넘치게 보이는 목적을 달성 할 수 있다. 하지만 이 행동은 미용적인 것으로 간주되지 않을 것이다.

본 발명 중 하나의 전형에서, 화학식 1의 1-디알킬포스포알알칸(dialkylphosphoryalkane)[Dapa] 화합물을 포함하는 조성물을 제시한다:

(O=)PR₁R₂R₃

R1, R2의 각각은 이소프로필(isopropyl) 또는 이차-부틸(sec-butyl)이고, R3은 탄소수 6 내지 9의 직쇄 알킬(linear alkyl)기이다.

화학식 1의 화합물은 수용액으로 제형화된다. 상기 조성물은 눈꺼풀 가장자리의 표면에 용액의 유효량이 충분히 잘 전달된다. 전달은 바람직하게는 미리 포장 된 단위 wipe에 의해 이루어진다. 상기 화학식 1의 화합물은 1-디이소프로필포스포릴헵탄(-diisopropylphosphoryl-heptane)[Dipa-1-7], 1-디이소프로필포스포릴옥탄(-diisopropylphosphoryl-octane)[Dipa-1-8] 또는 1-디이소프로필포스포릴노난(1-diisopropylphosphoryl-nonane)[Dipa-1-9]로 표시한다.

바람직한 전형인 Dipa-1-7, Dipa-1-8 및 Dipa-1-9는 눈물의 넘침없이 투약시 자극적이지 않으면서 안구로부터의 광 반사율을 증가시키는 바람직한 효과를 가지므로 선택되었다. 대신에 이 화합물은 눈꺼풀에 경쾌하고 상쾌한 느낌을 주며, 밝고 기민함, 각성 되어있는 인상을 강화한다.

본 발명은 본원에 기재된 Dipa-1-7, Dipa-1-8 및 Dipa-1-9와 같은 특정 다이알킬포스포릴알칸(dialkylphosphorylalkanes)에 관련되며, 본원에서 집합 적으로 "디이소프로필포스포릴알칸(Dipa)화합물"로 지칭되며, 상기 화합물은 눈물띠 높이로 평가한 눈에서의 빛 반사율을 증가시키는데 용이하다. 신청인은 Dipa 화합물을 면봉 또는 미리 포장 된 단위 와이퍼(wiper)로 눈꺼풀 가장자리에 국소적으로 전달하여, 눈의 외모를 향상시키고 건조감을 완화한다는 것을 발견하였다.

도 1. 은 TRPV1 또는 TRPA1 플라스미드로 형질 감염된 세포에서 Dipa-1-8의 작동제 활성(agonist activity)의 결핍을 보여준다. TRPV1 및 TRPA1에 대한 양성 대조군인 캅사이신 및 겨자유는 각각 활성을 보이지만 Dipa-1-8은 TRPV1 또는 TRPA1 형질 전환 세포에서 활성이 없다. 세로 좌표는 Relative Fluorescence Units [RFU]에서 제공된다. 형질 감염된 세포로의 칼슘 유입을 측정하는 최대 값의 %와 가로축은 시험 화합물의 농도의 대수 (MM)이다. Dipa-1-8은 또한 각각 TRPV1 또는 TRPA1 형질 전환 세포에서 캅사이신 또는 겨자 기름에 대한 길항제 활성이 없다.
도 2는 쇼그렌 증후군을 가진 11 명의 피검자의 눈물띠 높이 (tear meniscus height, mm)를 나타낸 그래프이다. 이 플롯은 닫힌 눈꺼풀 위로 1-디이소프로필포스포릴 노난 (Dipa-1-9)으로 1 개월 동안 최대 4 회 닦아 낸 후 22 안에서 눈물띠 높이이다. 눈물띠 높이는 적용 후 1 주와 1 개월 후에 유의하게 증가하였다 (* P <0.01).

눈물띠 높이 측정

안구 표면은 각막 상피, 윤부, 결막 및 눈꺼풀 마진을 포함한다. 눈물기능단위(Lacrimal Functional Unit , LFU)는 눈물의 흐름을 조절하여 눈의 항상성을 유지하므로 눈물막과 각막의 투명성을 유지한다. LFU는 각막, 결막, 눈물샘 및 메이봄선과 눈물 배출 시스템으로 구성되며 신경 네트워크로 연결된다.

안구 표면에 눈물이 흘러 내리는 것이 눈의 빛 반사 또는 "스파클(sparkle)"의 원인이다. 반사된 이미지는 "Purkinje-Sanson" 이미지라고 하며, 전 각막 표면에서 반사되어 약 97 %의 밝기에 기여하는 PS-1 이미지이다. 안구 표면의 눈물 부피가 증가하면 스파클이 증가한다. 전 각막 부피는 ~ 7μL이므로, 기술적인 목표는 눈물이 넘치지 않는 범위 안에서 눈물의 양을 증가시키는 것이다.

안구 표면의 눈물 부피를 정량화하기 위해서는 정확한 방법이 필요하다. 각막은 눈의 투명한 앞 부분이며 눈물막은 굴절표면이다. 전통적으로 눈물막의 부피는 쉬르머 (Schirmer) 테스트 (눈꺼풀에 여과지를 붙여서 하는 검사)로 측정한다. 이 검사는 침습적이며 다양한 결과를 제공한다. 눈꺼풀의 눈물띠 높이는 눈물 방울의 75-90 %를 포함한다. 플라시도(Placido) 지형 기술의 최근 발명인 각막지형도(Keratograph) 5M (K5M, Oculus Optikgerate GmbH, 독일 Wetzlar)은 눈물 부피의 추정치로서 mm 단위로 눈물띠 높이 (TMH)의 비 침습적 측정을 가능하게 하다. (Tian 외, 안구 건조증 환자의 비 침습적 Keratograph 5M 측정의 재현성 및 재현성, J. Ophthalmology, April 12, 2016. doi : 10.1155 / 2016 / 8013621). 여기에서 우리는 발견의 효능을 평가하는 지표로서 피험자에서 눈물띠 높이의 측정을 사용하였다.

활성 성분 및 전달 시스템의 선택.

Dapa 및 Dipa는 각각 1-디알킬포스포알알칸(dialkylphosphoryalkane) 및 1-디이소프로필포스포릴알칸(diisopropylphosphorylalkane)의 약어이다. 디알킬(dialkyl)기는 이소프로필(isopropyl) 또는 2차-부틸(sec-butyl) 일 수 있다. 분자 내의 제 3 알킬기는 수에 의해 기술되며, 따라서 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10은 각각 부틸(butyl), 펜틸(pentyl), 헥실(hexyl), 헵틸(heptyl), 옥틸(octyl), 노닐(nonyl) 및 데카닐(decanyl) 측쇄에 상응한다 . 이 알칸은 선형 또는 "노르말[n]" 형태이며 포스포릴(phosphoryl)기가 제 3 측쇄의 탄소 사슬의 1 차 또는 "1-" 위치에 부착되어있다. Dipa-5 ~ 7과 Dipa-9 ~ 10의 합성은 이전에 보고된 바 없었지만 Siddall 등이[3 치환 된 포스 핀 옥사이드의 간단한 제조. J. Chemical Engineering Data 10 : 303-305, 1965] 1965 년에 Dipa-1-8의 합성을 보고했다. 유기체 표면[예 : 눈꺼풀 가장자리]에 적용된 Dipa 화합물의 생물학적 활성은 이 발견 이전에 보고된 바가 없다.

눈꺼풀에 유효 성분을 전달하는 시스템은 면이나 다른 흡수성 물질의 뭉치 일 수 있으며 면봉, 패드, 닦개(wipe) 또는 수건으로 사용할 수 있다. 흡수성 물질은 액상의 활성 성분을 함유한다. 흡수 물질은 바람직하게는 액체 용액에 의해 포화된다. 오프로딩된 용액의 양은 국소적 와이핑 (wiping) 후에 흡수 물질의 질량을 측정함으로써 결정된다. 실험에 의하면 40-100 mg의 면 또는 레이온 덩어리가 눈꺼풀 당 200μl의 전달량에 최적인 것으로 나타났다.

한 방법에서, 80 % 비스코스 레이온(viscose rayon) -20 % 폴리에스테르 (~1.5 g)의 매트릭스를 함유하는 wipe를 정제수 2.5 - 4.0 mg/mL에 Dipa-1-7, Dipa1-8 또는 Dipa-1-9의 2.2 mL 용액을 녹여서 포화시킨다. Wipe는 불침투성 상품 내에 포장되고 방사선을 조사하여 멸균한다 (주문 제작 : Procotech, UK). Dipa 화합물은 여러 회사에서 97 % 이상의 순도로 합성된다. 이들 화합물은 또한 저장에서 화학적으로 안정한 것으로 알려져 있다.

개별 패킷은 열고나서 부드럽게 닦아내거나 (눈꺼풀을 두번씩) 또는 눈을 감은 상태에서 눈꺼풀 가장자리를 가볍게 두드려 사용한다. 각 wipe를 하루 3 ~ 4 번 "필요할 때마다" 사용할 수 있다. Wipe는 하루가 끝날 때 버린다. 눈꺼풀은 화장품으로부터 깨끗해야 한다. 그렇지 않으면 화장 성분이 눈 표면에 묻혀 자극을 유발할 수 있다. 눈에 자극이 있는 경우 5 ~ 10 분 동안 따뜻한 물로 눈을 씻으면 자극이 제거된다.

Dapa 화합물의 마이크로그램 양의 눈꺼풀 가장자리에 대한 전달은 눈 표면의 빛 반사율을 증가 시키며, 이것은 각막지형도(Keratograph 5M) 장비를 사용하여 비침습적으로 눈물띠 높이의 증가를 측정할 수 있다. Dipa 화합물에 따라 적용함으로 얻을 수 있는 이점은 대상에서 3 시간 혹은 그 이상 그 효과를 지속할 수 있다. 대상자는 거울을 보면서 눈의 촉촉함과 눈빛 반사의 증가를 감지 할 수 있다. 약물 작용의 시작은 개인마다 다를 수 있지만 일반적으로 증가 된 반사율은 화합물 적용 후 5 ~ 10 분 후에 나타난다. 눈물이 넘치지 않으므로 대상자가 "울고 있는 것"으로 보이지 않는다. 눈꺼풀 가장자리에 대한 이러한 유형의 화학 작용은 이전에 설명된 바가 없다.

약물 작용의 메카니즘은 예시에서 논의 된 바와 같이 눈꺼풀 가장자리에 위치한 신경 종말에 대한 약물 작용에 기인 한 것 같다. 이상적으로 활성 성분의 선택은, 배합하기 쉬워야 하며, 표준 온도 및 압력에서 유효 농도에서 수용성이며, 수용체 선택성이 높아야 하고, 전달하기 쉽고, 용액에서 화학적으로 안정한 작용 시간을 가지며, 냄새 또는 자극성이 없으며, 적절한 안전 여유(safety margin)가 있어야 한다. 효과 또한 국소 전달 후 5 분 이내에 있어야 치료의 수용 및 순응이 높다.

아래에 기술 된 연구에서 볼 수 있듯이, 눈꺼풀에 적용하기위한 "이상적인"후보 물질이 확인하였고, 특히, Dipa-1-7, Dipa-1-8 및 Dipa-1-9로 알려진 개체가 있는 화학식 1의 분자가 포함되었다. 이 약제들의 효능을 알아보기 위해 통제 된 조건 하에서 자원봉사자들의 눈물띠 높이를 측정 하였다.

연구 1

디알킬포스포릴알칸 (dialkylphosphorylalkanes)[예 : 총 탄소수 ≤ 16]은 용매와 같은 분자이다. 이들은 트리알킬포스핀옥사이드(trialkylphosphine oxides)라고도 알려져 있지만, 지금은 디알킬포스포릴알칸(Dapa)이라는 용어가 선호된다. 두 개의 알킬기가 이소프로필 인 경우, Dapa는 Dipa [diisopropylphosphorylalkane]로 축약된다.

Rowsell과 Spring [Phosphine oxides having a physiological cooling effect. US 4,070,496. Jan 24, 1978]은 피부와 점막, 특히 구강, 인후 및 위장관에 생리학적 냉각 효과가 있는 범위의 포스핀옥사이드(phosphine oxides)를 기술하였다. Rowsell과 Spring이 합성한 화합물에는 두 개의 이소프로필 그룹이 없다. Rowsell과 Spring은 트리알킬포스핀옥사이드(trialkylphosphine oxide)의 사용을 국소 약제로 간주 하였지만, 눈빛 반사율을 높이기 위해 또는 눈물흘림 촉진제로서 이러한 화합물의 사용에 관해 이야기 하지 않고 있다. Siddall et al. [Simplified preparation of some trisubstituted phosphine oxides. J. Chemical Engineering Data 10 : 303-305, 1965]은 1-디이소프로필포스포릴옥탄 [Dipa-1-8]의 합성을 보고했다. 이 또는 다른 디이소프로필 포스포릴알칸 화합물의 생체 활성에 대한 보고는 하지않았다.

화학 합성

Dipa 화합물은 하기와 같은 일반적인 방법으로 제조하였다: 이소프로필마그네슘 클로라이드(isopropylmagnesium chloride)(또는 sec-부틸 유도체의 경우에는 2차-부틸마그네슘클로라이드(di-sec-butyl derivatives)) 100 ㎖ (23.7 g, ~ 200 mmol)를 Acro로부터 25% 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran, THF) 용액이 첨가된 상태로 얻은 후, 500 mL 플라스크(젓음 막대 (stir bar) 존재하에)에서 질소 하에 두었다. THF 중 디에틸포스파이트(Diethylphosphite) 용액 (Aldrich로부터, D99234; 8.25 g, 50 mL 중 60.6 mmol)을 적가 하였다. 약 30 분 후, 반응 혼합물이 끓을 때까지 예열되었다. 반응 혼합물을 추가로 30 분 동안 젓은 후, THF 중 적절한 n-알킬요오다이드(alkyl iodide) 용액 (TCI로부터; 20 mL 중 60 mmol)을 적가 하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에 밤새 젓는 상태로 두었다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 분액 깔때기로 옮기고, 아세트산 (~ 10 mL)으로 산성화시키고, 에테르로 2 회 추출하였다. 에테르 층을 물로 씻은 후 증발시켰다 (RotaVap Buchi, 물 온도 40 ℃). 밝은 갈색 오일을 고진공 [0.5 mmHg] 하에서 증류시켰다. 질량분석법에 의해 확인 된 최종 생성물은 무색이거나 약간 담황색이며 120-130 ℃ 범위의 비점을 갖는 투명 액체였다.

Dipa-1-7 또는 Dipa-1-8의 여러 샘플을 기체크로마토그래피 질량분석(GC-MS) (NCE Corporation, Pleasanton, California, USA, www.nceanalytical.com) 상세 분석을 하였다. 분석은 운반 가스로서 헬륨[유속 : 1.6 mL / min]과 주입기 포트를 220 ℃[split ratio 50 : 1, 온도 프로그램 : 100 ~ 240 ℃]로 설정 한 TraceGold TG-624 컬럼이 장착 된 Agilent GC / MS 시스템 6890/5973에서 수행되었다. TIC[총 이온 크로마토그램]은 주 성분이 18 ~ 19 분의 체류 시간을 갖는 것으로 나타났으며, 검출 된 피크는 전체 면적의 97.2 %를 차지했다. 97 내지 99 % 순도의 유사한 결과가 다른 샘플에서도 얻어졌다. 분석 시스템으로 기체 크로마토 그래피[화염 이온화 검출기(Dong Wha Corporation, Seoul, Korea)를 장착]를 사용했을 때, 합성 된 화합물은 크로마토그래피 결과로 97 ~ 99 % 순수한 것으로 밝혀졌다.

하기 화합물은 이러한 방법에 의해 제조되었다. 표 1A 및 표 1B 화합물은 본 발명의 전형들이다.

Table 1A. Chemical structures of diisopropyl-analogs.
Code	Chemical Name	Chemical Structure
Dipa-1-5	1-diisopropylphosphoryl- pentane
Dipa-1-6	1-diisopropylphosphoryl- hexane
Dipa-1-7	1-diisopropylphosphoryl- heptane
Dipa-1-8	1-diisopropylphosphoryl- octane
Dipa-1-9	1-diisopropylphosphoryl- nonane

Table 1B. Chemical structures of di-sec-butyl-analogs.
Code	Chemical Name	Chemical Structure
2-4	1-di-sec-butylphosphoryl- butane
2-5	1-di-sec-butylphosphoryl- pentane
2-6	1-di-sec-butylphosphoryl- hexane
2-7	1-di-sec-butylphosphoryl- heptane
2-8	1-di-sec-butylphosphoryl- octane
3-1	1-diisobutylphosphoryl- pentane
3-2	1-di-sec-butylphosphoryl- 3-methyl-butane

Dapa 화합물은 밀도가 물 [0.7 ~ 0.8 g / cc] 미만인 무색의 액체이다. 이들은 일반적으로 최대 20 mg / mL의 물 또는 식염수에 용해되거나, 탄소 원자 16 개 이상의 화합물에 대해 매우 미세한 방울의 균질한 에멀젼(emulsion)이다. Dapa 화합물을 5 ~ 10 mg / mL의 수용액으로 얼굴 피부에 바르는 경우 자극적이거 창백하게 하지 않는다. 특정 유사체의 경우, 얼굴 피부를 5-20 mg / mL 농도의 용액과 접촉 시키면 특히 안와 주위 피부에 적용 할 때 1 분 이내에 강한 냉각 효과가 나타난다. 상부 소화기와 눈꺼풀 마진과 같은 비 각질화 조직에 효과가 강하다. 눈꺼풀에 도포 한 후의 이들 화합물의 효과는 문헌에서 보고된 바 없다.

본 발명의 Dipa 화합물의 디이소프로필기는 키랄 중심(chiral center)을 갖지 않지만, 디-2차-부틸포스포릴(di-sec-butylphosphoryl) 시리즈의 화합물에서 각각의 2 차 - 부틸기(sec-butyl)는 키랄 중심을 가지며, 각각의 키랄 중심은 독립적으로 (R) 또는 (S) 배열을 갖는다. 결과적으로, Dapa-2-6과 같은 화합물은 다음과 같은 4개의 입체 이성질체를 가질 수 있다: 두 개의 광학 활성 입체 이성질체 (즉, R, R 및 S, S) 및 두 개의 광학적으로 비활성인 메소(meso) 형태 (즉, R, S 및 S, R ). 따로 언급이 없으면 디-2차-부틸포스포릴(di-sec-butylphosphoryl) 화합물에 대한 언급은 4 개의 입체 이성질체 중 어느 하나, 혹은 4 개의 입체 이성체 중 임의의 2 개 이상의 혼합물을 의미한다. Dipa 화합물에 입체 이성질체가 없으면 2차-부틸(sec-butyl) 그룹을 포함하는 분자보다 약물 개발에 유리하다. 왜냐하면 현재의 규정에서는 종종 각 거울상 이성질체가 합성되거나 분리되어 독성학적 활동에 대해 개별적으로 평가되어야하기 때문이다.

디이소프로필과 비교하여 디-2차-부틸(di-sec-butyl) 동족체의 두 번째 장점은 포스핀옥사이드(phosphine oxide)기의 수소결합을 마스킹하는 인접탄소가 탄화수소 사슬에 적어서 수용성이 높다는 것이다.

용어 사용

조성물 : 본 발명의 한 부분은 본원에 기재된 Dapa 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 담체(carrier), 희석제(diluent) 또는 부형제(excipient)를 포함하는 조성물(예를 들어, 약학 조성물)에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 점은 본원에 기재된 바와 같은 Dapa 화합물 및 약학적으로 허용되는 수용액을 혼합하는 것을 포함하는 조성물(예를 들어, 약학 조성물)의 제조 방법에 관한 것이다. 한 전형 예에서, 조성물은 Dapa 화합물을 0.5-20 mg / mL의 농도의 수용액으로 포함한다. 조성물은 적합한 포장 및 / 또는 적합한 용기에 제공 될 수있다. 예를 들어, 상기 조성물은 Dapa를 담는 wipe, 면봉 또는 수건으로 제공될 수 있다. 이러한 wipe는 박리 가능한 수분방지 랩핑으로 둘러싸여 있으며, 자동화 된 장치에 의해 대량 생산 될 수 있으며, 이는 해당 업계에 잘 알려져 있다.

투여 경로 및 복용량 : 본 명세서에서 사용 된 용어 "국소 도포"는 안구 표면 상으로의 전달을 의미한다. Dipa 화합물의 전달은 정제수 또는 등장성 식염수 또는 인산완충 식염수에 용해된 화합물로 가능하다. 액체 용액의 경우, Dipa 화합물의 바람직한 농도는 0.5 내지 5 mg / mL 범위이다. 적용 부위에 전달되는 Dipa 화합물의 바람직한 양은 0.01 내지 5 mg이다.

용량 및 투약 요법은 치료되는 상태의 원하는 결과 및 중증도에 따라 "필요에 따라" 또는 6 시간과 같은 고정 간격으로 할 수 있다. 투여는 치료 과정 동안 연속적으로 또는 간헐적으로(예를 들어, 적절한 간격으로 분할 된 양으로) 1 회 투여로 수행 될 수 있다. 가장 효과적인 수단 및 투여 량을 결정하는 방법은 잘 알려져 있지만, 치료법, 치료 목적, 치료되는 표적 세포(들) 및 치료 대상자에 따라 방법이 다를 수 있다. 치료 의사, 수의사 또는 임상의에 따라 용량 및 치료방식을 결정하여 단일 또는 다중 투여할 수 있다.

눈꺼풀 가장자리에 적용하기 위해, 개인은 닫힌 눈꺼풀 위에 부드럽게 젖은 패드를 닦아내라는 지시를 받는다. 약이 충분히 목표물에 전달되도록하기 위해 개인에게 반복 도포를 가르치거나 "약물보충(topping up)" 하는 것을 교육할 수 있다. 피험자가 기대되는 효과를 익히게 되면, 개인은 원하는 효과를 얻기 위해 필요에 따라 투약량을 조절할 수 있다(예를 들어, 더 많은 액체를 흘려줌으로써). 개인은 1 ~ 2 회의 시험 후에 효과적으로 wiping하는 방법을 배우고 어려움없이 잘하는 것을 관찰했다.

연구 2

눈꺼풀 가장자리에 대한 수용체 표적

일시적 수용체 전위 (transient receptor potential) 또는 "TRP-"이온 채널 수용체 (A1, M8 및 V1 ~ 4)는 생리적인 온도 탐지를 위한 주요 요소라고 일반적으로 생각된다. TRPM8 수용체는 멘톨(menthol) 및 이실린(icilin)과 같은 감각 / 냉각제에 반응하는 수용체다[McKemy et al. dentification of a cold receptor reveals a general role for TRP channels in thermosensation, Nature, 416, 52-58, 2002). TRPM8은 1104- 아미노산 잔기를 갖는 단백질이며, 6 개의 막통과 도메인을 갖는다. 주변 온도를 낮춤으로써 이 수용체를 활성화시키면 세포막 내막의 세공이 개방되고 비특이적 인 양이온이 세포 안으로 들어가게 된다. 감각 뉴런상의 TRPM8 수용체의 탈 분극은 주로 Aδ (및 일부 C) 섬유를 통해 신호를 뇌로 전달할 수 있다.

감각 생리학에서 TRPM8의 역할에 대한 이러한 개념은 체온의 물리적 변화를 탐지하는데 유효할 수 있지만 멘톨(menthol)이나 아이실린(Iicilin)과 같은 화학 물질의 감각 작용에 대한 해석은 더욱 복잡하다. 멘톨은 시험 관내에서 TRPM8뿐만 아니라 보온 및 글리신 전달과 관련된 수용체인 TRPV3를 자극 할 수있다 [Macpherson et al. More than cool: promiscuous relationships of menthol and other sensory compounds, Mol Cell Neurosci 32 : 335-343, 2006 : Sherkheli et al., Supercooling agent icilin blocks a warmth-sensing ion channel TRPV3, Scientific World Journal, 2012: 982725, .2012, Cho et al. TRPA1-like channels enhance glycinergic transmission in medullary dorsal horn neurons. J Neurochem 122:691-701, 2012]. 따라서 멘톨과 이실린은 "난잡한 (promiscuous)"약제라고 불리우며 하나의 수용체에 선택적이지 않다.

Wei는 2009 년 6 월 5 일 (미국 61 / 217,834) 및 2009 년 7 월 6 일 (61 / 270,214)에 제출 된 2 건의 임시 미국 특허 출원에서 건성각결막염 (Sjogren 's syndrome for dry eyes)에 유용한 치료법을 발표했다. 냉각은 눈의 감각적 불편을 해소하기 위한 방법으로 기대되었다. 트리알킬포스핀옥사이드(trialkylphosphine oxides) 및 시클로알킬카르복실산에스테르(cycloalkylcarboxylic acid esters)(예 : CPS-148 및 CPS-030)와 같은 선택된 냉각제를 전달하는데 유용한 눈 wipe와 같은 장치가 기술되었다. TRPM8과 같은 이온 채널 단백질의 작용제가 안구 건조증에 사용될 수 있다고 언급되었다.

눈꺼풀 가장자리의 TRPM8의 확인과 전달 방법

점안액은 안과 전안부 질환 치료에 사용되는 제제의 약 90 %를 차지한다. 점안액의 전달은 전방 안구 위로 튀는 것과 같다. 여기에서 우리는 먼저 하부결막낭에 물에 녹인 Dipa-1-9, 0.1 mg / ml 안액을 50 ㎕ 점안하고, 비히클 대조군 (n = 5)과 효과를 비교하는 실험을 진행하였다. 피험자는 점안 후 5 분, 10 분 및 15 분에 0 (효과 없음)에서 5 (강렬한 효과)의 척도로 불쾌감, 흐릿해짐 및 시원함 감각을 평가하도록 하였다. Dipa-1-9는 이러한 테스트 된 간격에서 현저한 흐려짐을 유발하지 않았고, 5 분 테스트 기간 (1.6 대 0.2)에서는 불편함이 있었지만 10 분 또는 15 분에는 불편함 없었다. 냉각 감각 점수는 5 분 (2.6 vs 0.2)에서 유의하였지만 10 (0.8 vs 0.2) 또는 15 min (0.2 vs 0.2)에서는 냉각이 별로 없었다. 제한된 공간에서 방울이 튀어 나오고 활성 성분이 목표 수용체에 머무르는 시간이 짧기 때문에 점안약이 Dipa-1-9 를 전달하는데 비교적 비효율적인 것처럼 보였다. 또한, 초기 불쾌감은 바람직하지 않다. 안와에 다른 TRPM8 표적이 있는지를 결정하기 위해, 우리는 선택적인 TRPM8-GFP 리포터 마우스 눈을 검사했다.

다른 보고와 마찬가지로 우리는 설치류 각막에서 TRPM8 면역반응성을 확인했다. 예기치 않게, 조밀한 TRPM8 신경 분포가 눈꺼풀 가장자리 특히 속눈썹 머리카락의 밑 부분에서 드러났다. TRPM8 섬유는 결막에서 거의 발견되지 않았다. 윗눈꺼풀과 각막을 둘러싸고있는 감각 섬유는 삼차 신경의 V1 안분지에 있다. 우리는 안구 가장잘의 TRPM8 신호가 눈물 분비를 증가시키기 위해 신경 회로망을 활성화시킬 것이라고 추측했다. Dipa-1-9를 안구 가장자리에 적용하기 위해 처음에는 Dipa-1-9를 거즈로 닦고, 면봉으로 닦고, 마지막으로 미리 포장 된 wipe (Procotech, UK에서 제조 한 맞춤형 제품. 비스코스 레이온-폴리에스테르 매트릭스 및 코발트-60으로 살균)로 닦았다. Dipa-1-9 (그리고 별도의 실험에서, Dipa-1-7과 Dipa-1-8)는 윗눈꺼풀에 외측에서 내측 방향으로 닦아내어 속눈썹에 닿게 하였다. 속눈썹 줄기가 수용액을 눈 주위를 가로 질러 분배하고 수성인 전막(premorneal film)과 합치기 위한 심지 역할을 할 것으로 기대한다. 눈꺼풀 와이퍼(eyelid wiper)라고 불리는 각질화된 상피 쿠션은 안구 표면을 가로 질러 용액을 밀었다. 놀랍게도, 안약 방법과 달리 Dipa-1-9의 닦는 방법은 안락함을 주고 불편한없이 장기간의 안구 표면 전달을 달성하였다.

이 약물 전달 방법이 안구 표면 전체에 균일 한 분포를 허용하는지 확인하기 위한 마커로 1 %의 플루오레세인 용액을 사용하여 닦아내는 방법을 점안법과 비교하고 눈꺼풀 가장자리 및 각막을 세극등현미경으로 검사하였다. 기존의 안약과 비교하여 각막에 형광 염료가 5 % 미만으로 분포되어있는 것으로 추정되었다. 닦아내는 방법은 안구 표면에 약물을 전달하는 일반적인 방법은 아니지만 각막 통각 수용체에 작용하여 자극을 줄 수 있는 약물에 대한 장점이 있는 것으로 보인다. 닦는 방법을 사용하는 피험자는 기존의 안약보다 더 편리하고 사용하기 쉽다고 말했다.

연구 3

활성 성분의 선택

피험자를 통해 피부(각질화) 및 안구테(비각화화)에 대한 냉각제의 감각작용을 대규모 데이터베이스 스크리닝하여 두 종류의 상피 세포에서 명확한 반응 요소가 있음을 발견했다 [Wei. Sensory/cooling agents for skin discomfort. Journal Skin Barrier Research 14 : 5-12, 2012].

시험 화합물은 또한 수용체 분석법으로 평가 하였다: Fluo-8 칼슘 키트 및 형광 이미징 플레이트 판독기(FLIPRTETRA ™) 장치를 사용하여 클로닝 된 hTRPM8 채널(CHO 세포에서 발현 된 사람 TRPM8 유전자에 의해 코딩 됨)을 통함. 시험 화합물의 특이성을 TRPV1 채널 (HEK293 세포에서 발현된 인간 TRPV1 유전자) 및 TRPA1 채널(CHO 세포에서 발현된 인간 TRPA1 유전자)에서 조사하였다. ChanTest Corporation, 14656 Neo Parkway, Cleveland, OH 44128, USA는 이 테스트의 계약자였다.

이상적으로, 눈꺼풀 여백에 전달하기 위해 제형화 된 활성약제성분 (API)은 화학적으로 안정하고 독성이 없어야 하며 안구 표면의 빛반사율을 증가시키는 메커니즘을 활성화하는데 충분히 오래작용하고 유력해야한다. API는 조성물 중에 용해되어 균일하게 분산되어야 하므로 제조 중에 제제는 일정한 농도를 유지하게 된다. 최종 제품은 청결 및 무균 표준도를 충족해야 한다. 제형의 목적상, API는 표준 조건의 온도 및 압력 (STP)에서 액체일 수 있고, 이는 중성 pH 및 / 또는 등장성의 수용액에서 균등하게 용해된다. 정제된 시약 및 미세기공 필터, 가열 또는 조사를 통한 여과를 통해 최종 생성물의 무균성을 최적으로 달성 할 수 있다. 제형을 최적화하기 위해 방부제와 같은 표준 부형제를 첨가 할 수 있지만, 중요한 성분은 바람직하게는 정제수, 등장성 염수 또는 인산 완충액과 같은 수성 매질에 가용성이어야 한다.

개인의 경우, 감지된 감각은 특정 냉각제, 용량, 냉각제를 운반하는데 사용되는 차량, 국소 전달 방법 및 목표 표면의 성질에 따라 결정된다. 출원인은 p-멘탄카르복스아미드(p-menthane carboxamides) 및 이실린과 같은 다양한 화합물을 포함하는 다수의 후보 화합물을 스크리닝 하였다[Wei, 2012 vide supra]. 이 연구는 Dipa 1-7, Dipa 1-8 및 Dipa-1-9가 눈꺼풀 가장자리에 사용하기에 이상적인 성질을 갖는 것으로 확인한다. 이 유사체들은 감각 자극과 빛 반사율의 증가로 인해 눈의 외모를 향상시켜 촉촉하고 강렬한 "인상"을 만들어 낸다.

발탁된 성분 전형들 성공적으로 사용하기위한 핵심 인자는 눈꺼풀 가장자리에 전달하기위한 활성 성분의 수용성이다. 수용성 성분은 표적 전달의 용이성 및 균일성에 이점을 갖는다. 화학 물질이 물에 용해되지 않으면 용제 및 부형제를 제제화해야 한다. 용매나 매트릭스는 눈꺼풀 가장자리에 불쾌감을 주면 안되며, 이는 각막 표면의 근접성과 민감성으로 인해 어려울 수 있다. 화학물질이 반고형 겔 또는 분말로서 투여 될 경우, 활성 성분의 입자크기 분포가 제어 되어야 한다.

TRPM8, TRPA1 및 TRPV1 수용체 분석 결과:

Fluo-8 칼슘 키트와 Fluorescence Imaging Plate Reader (FLIPRTETRA ™) 장비를 사용하여 복제된 hTRPM8 채널(CHO 세포에서 발현 된 사람 TRPM8 유전자에 의해 암호화 됨)에서 시험 화합물의 in vitro 효과를 평가했다.

HEPES-완충 생리 식염수(HBPS) 용액에서 원액을 희석하여 시험 화합물 및 양성 대조군 용액을 제조하였다. 시험 화합물 및 대조군 제제를 폴리프로필렌 또는 글라스-라이닝(glass-lined) 된 384-웰 플레이트에 로딩시키고 FLIPR 기기 (Molecular Devices Corporation, Union City, CA, USA)에 넣었다. 시험 화합물은 결정 당 n = 4 복제로 4 또는 8 농도로 평가하였다. 양성 대조군의 대조 화합물은 잘 알려진 TRPM8 작동제인 L-멘톨이었다. 시험 세포는 인간 TRPM8 cDNA로 안정적으로 형질전환 된 Chinese Hamster Ovary (CHO) 세포였다.

FLIPRTETRA ™ 분석을 위해, 세포를 웰 당 약 30,000 개의 세포에서 384-웰 검정벽, 평평한 투명 바닥 마이크로타이터 플레이트(유형 : BD Biocoat Poly-D-Lysine 다중 웰 세포 배양 플레이트)에 도말하였다. 세포를 37 ℃에서 밤새 항온 처리하여 형광 분석에 사용하기에 적합한 융합 단층을 얻었다. 시험 절차는 성장 배지를 제거하고 37 ℃에서 30 분 동안 Fluo-8을 함유 한 HBPS 40 μL를 첨가하는 것이었다. HBPS에 있는 시험 화합물, 비히클(vehicle) 또는 대조 용액 10 μL를 각 웰에 넣고 4 분 동안 분석하였다.

농도 - 반응 데이터는 FLIPR 시스템(MDS-AT)과 함께 제공되고 다음과 같은 형태의 힐 방정식에 맞춘 FLIPR 제어 소프트웨어를 통해 분석되었다.

여기서 "염기(Base)"는 저농도의 시험 화합물에서의 반응이다. "최대(Maxs"는 고농도에서의 최대 응답이다. "xhalf"는 반 최대 활성을 생성하는 시험 화합물의 농도 인 EC50이다; "비율(rate)"은 힐 계수이다. 비선형 최소 제곱합은 단순한 일대일 바인딩 모델을 가정하여 작성되었다. GraphPad Prism 6 소프트웨어를 사용하여 95 % 신뢰 구간을 획득하였다.

시험 된 12 종의 화합물 중에서 모두 TRPM8 수용체에 대한 완전한 효능을 보였다. 즉, 시험 된 농도가 높을수록 칼슘 유입의 ~ 100 % 자극이 있었고, 데이터는 S 자형 용량 - 반응 곡선을 나타냈다. 표 2는 시험 관내 TRPM8 분석에서 디이소프로필포스포릴(Diisopropylphosphoryl) 및 디 -2차-부틸포스포릴알칸(Di-sec-butylphosphoryl alkane) 유사체의 TRPM8 효능을 나타낸다. 동일한 분석에서 단위는 l-menthol 효력과 비교된다. 수는 n- 알킬 측쇄(n-alkyl side-chain) 중 하나의 탄소의 수를 나타낸다 : 즉, 4-5-6-7-8-9는 각각 부틸(butyl), 펜틸(pentyl), 헥실(hexyl), 헵틸(heptyl), 옥틸(octyl) 및 노닐(nonyl)기를 나타낸다.

Table 2. EC₅₀ and relative potency of compounds on TRPM8..
Code*	EC₅₀ μM	95% Confidence Interval	Relative Potency
Menthol	3.8	2.5 to 5.6	1.0
Dipa-1-5	5.6	4.4 to 7.2	0.7
Dipa-1-6	2.4	1.5 to 4.0	1.6
Dipa-1-7	0.7	0.5 to 1.0	5.4
Dipa-1-8	0.7	0.5 to 1.0	5.4
Dipa-1-9	0.9	0.4 to 2.5	4.0
2-4	14.5	7 to 29	0.3
2-5	1.7	1.0 to 2.9	2.2
2-6	0.8	0.5 to 1.3	4.7
2-7	1.1	0.6 to 2.3	3.4
2-8	1.3	0.7 to 2.3	2.9
3-1	24	8 to 76	0.2
3-2	4.2	1.6 to 10.8	0.9

*전체 구조는 표 1A와 표 1B에 나타나 있다.

보다 강력한 화합물 (Dipa 1-7, Dipa 1-8, Dipa 1-9, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8)의 EC50은 95 %의 신뢰 구간을 겹쳐 좁은 범위 내에 있었다. Dipa-1-7 및 Dipa-1-8의 효능은 Dipa-1-5 및 Dipa-1-6의 효능과 유사하고 유의하게 더 컸다. 대조적으로 비교 화합물 3-1 및 3-2의 구조적 변형은 생체 활성 상실을 가져왔다. Dipa-1-10은 나중에 합성되어 King 's College, London, UK의 David Andersson에 의해 시험되었는데, 이는 Dipa-1-9 [표 2의 1.7x 멘톨]보다 2.4 x 적은 활성으로 나타났다.

시험 화합물의 특이성을 조사하기 위해, TRPV1 채널 (HEK293 세포에서 발현 된 인간 TRPV1 유전자) 및 TRPA1 채널 (CHO 세포에서 발현 된 인간 TRPA1 유전자)에 대한 추가 연구가 수행되었다. 시험 세포는 인간의 TRPV1 또는 TRPA1 cDNA로 형질 감염된 Chinese Hamster Ovary (CHO) 세포 또는 Human Embyronic Kidney (HEK) 293 세포였다. 양성 대조 화합물은 캅사이신(capsaicin, 잘 알려진 TRPV1 작동제) 또는 겨자기름(mustard oil, 잘 알려진 TRPA1 작동제)이었다. Dipa-1-7 및 Dipa-1-8은 100μM의 최대 시험 농도에서 TRPA1 채널에 대한 길항제에 대한 임의의 작용제 활성을 나타내지 않았다. Dipa-1-8의 결과들도 2에 나타내었다. 1.

그림. 1은 TRPV1 또는 TRPA1 플라스미드로 형질 감염된 세포에서 Dipa-1-8의 작동제 활성의 결핍을 보여준다. TRPV1 및 TRPA1에 대한 양성 대조인 캅사이신 및 겨자유는 각각 활성을 보이지만, Dipa-1-8은 TRPV1 또는 TRPA1 형질 전환 세포에서 활성을 보이지 않는다. 세로 축은 Relative Fluorescence Units [RFU](transfection 된 세포로의 칼슘 침투를 측정하는 최대 값의 %)이며, 가로축은 시험 화합물의 농도(μM)의 로그값 이다. Dipa-1-8은 또한 각각 TRPV1 또는 TRPA1 형질 전환 세포에서 캅사이신 또는 겨자 기름에 대한 길항제 활성이 없다.

사례 연구 1

수용체 연구는 신체 표면에 대한 감각 효과를 확인하기 위해 인간 피험자에서 추가 테스트를 통해 보완되었다. 이 선별 연구에서 피험자에게 2.0 mL의 마이크로 원심 분리 관(Nova Biostorage Plus, Canonsburg, PA 15317)과 면봉 (Puritan 청교도 큰 면직물 도포 기, 모델 803-PCL) 또는 Unicep Corp.가 제조 한 SwabDose 장치에 포함되어있는 Dapa 화합물 1.5 ~ 1.75 mL을, 혹은 다양한 농도의 시험 물질을 함유 한 Procotech wipe (표 3 참조)을 제공하였다. Dapa 화합물은 증류수 또는 정제 된 USP 물 1 mL 중 용액으로 존재한다. 시험 농도의 범위는 1에서 4 mg / mL이었다. 피검자에게는 눈꺼풀을 부드럽게 닦는 방법에 대한 지침이 주어졌다. 약 0.02 ~ 0.06 mL가 이 방법으로 양안에 전달된다.

Dipa 화합물 1-7, 1-8 및 1-9 (1-diisopropylphosphoryl-heptane, 1-diisopropylphosphoryl-octane and 1-diisopropylphosphoryl-nonane])은 도포 후 눈꺼풀 가장자리와 안구 표면의 냉각 감각을 5 분 동안 유발하였다. 이러한 효과는 한 번 점적 후 적어도 한 시간 동안 지속되었다. 눈 표면이 촉촉하고 편안함을 느낄 수 있었다. Dipa-1-7과 Dipa-1-8의 냉각 감각은 Dipa-1-9보다 강했지만 Dipa-1-9는 동등한 몰용량 투여 시 더 긴 작용 시간을 보였다. Dipa-1-10 및 Dapa-2-8과 같은 다른 아날로그는 상대적으로 비활성 상태였다.

각 분자의 활성 패턴은 수용체에서의 침투, 분포, 위치 및 내인성 활성의 합이다. 가장 좋은 화합물은 자극이나 과도한 눈물자극없이 눈꺼풀에 효과가 있는 화합물이다. 이들 바람직한 양태(embodiments)는 대표적으로 Dipa-1-7, Dipa-1-8 및 Dipa-1-9이이. 전반적인 결과는 표 3에 요약되어 있다.

사례 연구 2

전남 대학교 병원 안과학 교실 안과 검진 센터에서 처음 진단받은 경증 또는 중등도의 안구 건조증 환자 60 명 (18 세 이상) 60 명을 대상으로 무작위 전향적 이중 마스크 연구를 실시했다. 이 연구는 생명윤리위원회의 승인을 받았고 정보에 입각한 동의하에 진행되었다 (이 연구에 대한 전체 설명은 저널 BMC Ophthalmology의 출판물에 있다).

60 명의 피험자를 대상으로 한 첫 번째 실험에서 용매 대조군(vehicle, 증류수)을 1 군(n = 30)에, 증류수에 2mg / mL로 용해 된 TRPM8 작용제 Dipa-1-9를 2군 (n = 30)에 투여했다. 시험 용액을 실온에서 보관하고 흡수성면 거즈(0.4cm 직사각형 (50mm x 60mm), CS-being, Daisan Cotton, Japan)를 사용하여 눈꺼풀 피부와 가장자리에 국소 도포 하였다. 면봉을 사용하여 적재 용액 0.5 mL를 거즈에 적신 후 닫힌 눈꺼풀에 두 번 wiping 하였다. 거즈에서 나온 적재량은 닦기 전과 후에 무게를 측정하여 6.5mg 또는 6.5μL 인 것으로 나타났다. DIPA-1-9 용액의 경우 이는 양안 합쳐서 13 μg의 DIPA-1-9에 해당한다. 이 전달 방법은 닫힌 눈꺼풀의 가장자리를 겨냥하고 속눈썹을 점액으로 사용하여 점액-피부 접합부, 결막 및 각막 전면부에 용액을 분배한다. 이 닦는 방법을 사용하면 각막 표면에 점안액을 볼루스(bolus)로 전달하는 것을 피할 수 있다.

표 3. 바람직한 사용 예시의 요약 (Procotech Unit Eye Wipes *)
Active	mg/mL	촉촉함	눈물띠높이	사용자 의견
Dipa- 1-7	4	+++	+++	15-25 세에서 바람직함, 공부, 활력, 밤에 깨어있기 위한 각성제. 적용시 닦아내는 데 약간의 따가움이 발생할 수 있다. 눈빛의 반사율이 높아져 저녁 시간에 사교, 열정을 즐기기 위해 좋다. 일부 피험자의 경우 반복적으로 사용하면 과도한 눈물이 생긴다.
Dipa- 1-7	2	++	++	25-45 세의 연령에 이상적이며, 인지능력 향상 효과는 적지만 디지털 화면 앞에서 작업 능률을 향상시키고 사무원 및 콘택트렌즈 착용자의 눈이 건조해지는 것을 완화하는데 사용된다.
Dipa- 1-8	4	+++	++	15-40 세의 연령대에 이상적으로, 눈의 미용 향상에 탁월하며, 눈물띠 높이[tear meniscus height, TMH]를 최적으로 증가시켜 눈 표면을 Ingrid Bergman과 같은 "빛나는" 모습으로 만든다. 눈은 더 열정적이고, 경계심 있고, 활기차고, 매력적으로 보인다. 눈물이 넘치지 않으며, 적어도 몇 시간 동안 효과가 지속된다.
Dipa- 1-9	4	+	+	45 세 이상의 노인 안구 건조증에 이상적이다. 냉각, 상쾌 그리고 감각향상은 동등한 복용량에서 Dipa-1-7보다 덜 강하다. 쇼그렌 증후군에 효과적이고 오래작동한다. 눈물띠 높이가 적지만 유의하게 증가한다. 자극감은 관찰되지 않았다.
Procotech, UK에 의해 제작된, Viscose rayon-polyester matrix를 사용하고 코발트 -60으로 멸균한다. 와이프(wipe)의 외부 치수는 6 x 8cm입니다.

이 초기 연구에서, Dipa-1-9 및 그 유사체는 유의한 위험없이 안구 파라미터의 변화를 조사할 수 있다. 눈빛의 반사율은 눈에 대한 강렬한 인상을 주는 눈의 기능과는 독립적인 변수이다. 그렇기 때문에 Dipa 유사체에 대한 눈빛의 반사율을 보다 자세하게 연구했다.

따라서, 5 분마다 냉각 감각, 10 분마다 눈물막파괴시간(TBUT), 20 분마다 쉬르머(Schirmer) 점수, 30 분마다 각막상피병증(keratoepitheliopathy) 점수를 총 1 시간 동안 평가했다. 또한, 눈의 건조한 정도를 묻는 설문지를 사용하여 약물을 적용하기 전과 적용한 1 시간 후 건성안 증상의 변화를 평가했다. 냉각감각 및 건성안의 증상은 우안에서, 그 외 검사들은 좌안에서 시행 하였다. 모든 검사는 무작위 배정의 결과를 알지 못했던 한 명의 연구자가 수행하였다. 연구의 실내 온도는 25 ℃로 유지되었다. 냉각 감각은 0 (증상 없음) ~ 10 (최대 강도)의 VAS 점수를 사용하여 피험자에 의해 기록되었다. 안구 건조증의 중증도는 0에서 4까지의 점수로 다음과 같이 점수를 평가하였다. 0, 증상 없음; 1, 경미한 증상; 2, 중등도 증상; 3, 심한 증상; 4, 매우 심한 증상. 눈물막파괴시간 및 기초눈물분비 (0.5 % 프로파라카인 적용 후 쉬르머 점수) 또한 평가하였다.

두 번째 실험에서, 대조용매(vehicle) 또는 DIPA-1-9를 Swabdose ™(Unicep Corporation, Sandpoint, ID)라고 불리는 단위 애플리케이터에 배치 된 1 mL 용액으로 제조 하였다. 이 애플리케이터는 74.6 mm 폴리스티렌 핸들에 부착 된 6.35 mm면의 팁이 있는 폴리프로필렌 용기에 단독으로 포장된다. 깨끗한 조건에서 현장에서 USP 정제수(위약) 또는 DIPA-1-9 시료(USP 정제수 중 2 mg / mL)를 준비하고 자동화 된 장비로 포장했다. 각 피험자는 2 주간의 연구 기간 동안 14 Swabdoses를 제공 받았다. 피실험자들은 하루 6 시간마다 14 일 동안 닫힌 눈꺼풀의 가장자리에 면봉 팁을 도포하도록 지시 받았다. 애플리케이터를 미리 정량하고 피험자는 매일 같은 애플리케이터에 사용하였으며, 사용이 끝나면 보관은 비닐 봉지에 보관하라고 지시 받았다. 애플리케이터를 수집하고, 무게를 측정 후 도포 전 무게와 비교하였다. 눈물막파괴시간, 기초눈물분비 및 각막상피병증 점수에 의해 평가 된 각막 염색을 그 후 1 주 및 2 주 째에 분석하였다. 눈물막파괴시간, 기초눈물분비 및 각막상피병증 점수의 경우 우안의 결과만 데이터 분석하였다.

각 환자 방문시 3 가지 설문지를 사용하여 안구 건조증에 대한 치료 효과를 분석하였다. 첫째, 안구건조증 증상은 1에서 10까지의 시각통증척도(VAS) 점수를 사용하여 평가했다. 다음으로 안구표면질환지수(ocular surfice disease index, OSDI) 설문지를 사용하여 증상을 평가했다. 설문지는 0에서 4까지 등급이 매겨진 12 개의 질문으로 이루어져있다. = "시간 없음"및 4 = "항상") [48]. 전체 점수는 다음 방정식을 사용하여 (0-100) 계산되었다. (25x (응답 된 질문 점수 / 응답 한 질문 수의 합)). 참가자들은 컴퓨터시각증후군(computer vision syndrome, CVS)와 관련된 5 가지 증상을 평가하였다. 피로, 타는듯한 느낌, 건조함, 흐린 시력 및 시력 저하의 증상을 0에서 6까지 등급화 하였으며(0 = "증상 없음", 6 = "매우 심각한 증상"), 두 군의 평균누적점수를 평가하였다.

Dipa-1-9는 도포 후 5 분 이내에 안구 냉각 지수의 VAS 점수를 증가 시켰고 평균 46 ±2 분 동안 지속되었다. Dipa-1-9 치료는 모든 시점에서 대조용매보다 높았으며 명확한 효과가 있었다. 상쾌하고 시원한 감각을 보고하였다. 어떤 환자도 대조용매나 Dipa-1-9의 국소 적용 후 안구 통증이나 자극을 보고하지 않았다. Dipa-1-9 도포 이후의 건조한 눈 증상 점수는 기준선과 비교하여 크게 호전되었으며, 대조군에서는 보이지 않았다. 정밀평가된 증상 중 하나는 Dipa-1-9 이후에 개선된 "시력 둔함"이었다. 기초 눈물 분비는 Dipa-1-9 후 20 분, 40 분, 60 분에 유의하게 증가하였으나, 대조군에서는 유의하지 않았다.

40 명의 환자(그룹당 20 명)가 2 주 과정을 마쳤다. 이 연구에서 사용 된 애플리케이터는 대조군에서 80 ±5 mg (첫째 주) 83 ±4 mg (둘째 주), Dipa- 1-9 군에서는 77 ±7 mg (첫째 주) 81 ±4 mg (둘째 주)이었다. 권장 사용량은 하루에 4번 이었으므로 애플리케이터를 사용할 때마다 오프로드되는 평균 볼륨은 약 20 μL의 물 또는 40 μg의 Dipa-1-9 (2 mg / mL 용액의 경우)이다. 기초눈물분비는 Dipa-1-9 군에서 1 주 및 2 주에 대조군과 비교했을 때 유의하게 증가하였다. 컴퓨터 시각 증후군 형태의 증상은 Dipa-1-9 투여 후 1 주와 2 주 모두 유의하게 호전되었다. 안구 통증, 자극 또는 불쾌감과 같은 심각한 부작용은 2 주간 연구 동안 두 그룹에서 보고되지 않았다.

사례 연구 3

쇼그렌증후군 환자 11 명에서 Dipa-1-9의 효과를 조사했다. 헨리크 쇼그렌의 이름을 딴 이 증후군은 1933 년에 처음으로 기술되었으며, 주로 타액과 눈물샘 분비물이 감소하여 입안이 건조하고 눈이 건조 해지는 자가면역질환이다. 환자들은 평균 58 세의 여성으로 미국-유럽 총회(American-European Consensus Group)(Vitali et al. Classification criteria for Sjogren’syndrome: a revised version of the European criteria proposed by the American-European Consensus Group. Ann Rheum Dis. 2002;61:554-558)과 미국류마티스학회(American College of Rheumatology)(Shiboski et al. American College of Rheumatology classification criteria for Sjogren’syndrome: a data- driven, expert consensus approach in the Sjogren’International Co laborative Clinical Alliance cohort. Arthritis Care Res. 2012;64:475-487)의 쇼그렌 증후군 진단 기준을 만족하였다. 이 환자들은 3 개월 이상 양안의 안구 증상이 있었고, 옥스포드 등급이 2 이상, 쉬르머 I (Schirmer I) 검사가 ≤10 mm / 5 분, 눈물막파괴시간이 ≤ 5 초였다.

Dipa-1-9는 증류수에 녹여서 1.5 mg / mL의 농도로 거즈 패드에 적용하였다. Dipa-1-9 투약 요법은 6 시간 간격으로 매일 4 회 실시되었다. 총 실험 기간은 1 개월이었다. 각막지형도 Keratograph 5M을 사용하여 눈꺼풀의 중심으로부터 눈물띠 높이 (mm)와 눈물막파괴시간(비침습성)을 측정하였다. 1 인당 3 회의 측정이 이루어졌고 평균값이 데이터 분석에 사용되었다 (Tian et al. Repeatability and Reproducibility of Noninvasive Keratograph 5M Measurements in Patients with Dry Eye Disease (2016), doi:10.1155/2016/8013621). 안구표면질환지수 (OSDI) 및 통증 민감도에 대한 표준화 된 설문지(Li et al. Understanding ocular discomfort and dryness using the Pain Sensitivity Questionnaire, PLoS One , 1-14, 2016)를 환자들에게 제공하였다. 연구 1 주일 이내에 눈물띠 높이가 유의하게 증가하였고 (P<0.01, Mann-Whitney U test) 이 효과는 1 개월까지 지속되었다. 이 결과는 그림 2와 같다.

그림 2는 쇼그렌증후군 11 명의 피검자의 눈물띠 높이(mm)를 나타낸 그래프이다. 이 플롯은 폐쇄 눈꺼풀 위로 1-디이소프로필포스포릴노난 (diisopropylphosphorylnonane)(Dipa-1-9)으로 1 개월 동안 최대 4 회 적용한 후 22 안에서의 눈물띠 높이다. 눈물띠 높이는 적용 후 1 주와 1 개월 후에 유의하게 증가하였다 (* P <0.01).

요약하면, 새로운 종류의 화합물이 정상 눈의 빛 반사율을 높이고 쇼그렌 증후군 환자의 눈물띠 높이를 높인다는 것이 확인되었다. 눈물의 양이 잘 조절되고 눈꺼풀을 넘치지 않는다. 효과는 눈에 "스파클"을 추가하고 눈의 밝기와 강도를 높이는 것이다. 소개한 물질들은 수용액 형태의 활성물질상태로 포장되어 닫힌 눈꺼풀 위로 바람직하게 닦을 수 있다. 이 발견은 눈꺼풀 화장, 아이라이너, 마스카라 또는 콘택트렌즈의 사용 대신 눈의 외모를 향상시키는 새로운 기술이기도 한다.

참고 문헌

이 발견이 속한 예술의 발견 및 최신 기술을 보다 완전하게 기술하고 공개하기 위해 다수의 간행물이 본 명세서에 인용 되어있다. 이들 간행물 각각은 본원에 전체적으로 참고 문헌으로서 포함된다.

Claims

인간의 눈빛 반사율을 증가시키기위한 조성물:
화합물을 함유하고 거기에 투여 될 때 인간 눈빛 반사율을 증가시키는데 효과적인 양으로 존재하는 1- 다이이소프로필포스포릴헵탄(diisopropylphosphorylheptane), 1- 다이이소프로필포스포릴옥탄(diisopropylphosphoryloctane) 및 1- 아이소프로필 포스포릴노난(diisopropylphosphorylnonane )으로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물
청구항 1에 있어, 화합물이 1- 디이소프로필포스포릴헵탄(diisopropylphosphorylheptane)인 조성물
청구항 1에 있어, 화합물이 1- 디이소프로필포스포릴옥탄(diisopropylphosphoryloctane)인 조성물
청구항 1에 있어, 화합물이 1- 디이소프로필포스포릴노난(diisopropylphosphorylnonane)인 조성물
청구항 1 내지 청구항 항 항 중 어느 한 항의 조성물 및 약학 적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제.
청구항 1에 있어, 수용액이 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 물 또는 등장성 염수를 포함하는 희석제인 조성물.
청구항 6에 있어 수용액이 면봉, wipe, 패드 또는 타월로 눈에 투여되는 조성물
청구항 1에 있어 유효량의 화합물이 0.1 내지 5 mg / mL의 농도로 용액 중에 존재하는 조성물.
청구항 1에 있어 빛 반사율이 눈물띠 높이로서 측정 가능한 조성물.
쇼그렌 증후군을 가진 피험자에서 눈물 분비를 증가시키기위한 조성물로서, 하기 화합물로부터 선택된 화합물을 함유하는 수용액을 포함하는 조성물:
청구항 10에 있어, 상기 조성물은 눈꺼풀 피부에 국소 적용되도록 적응되는 조성물.
청구항 10에 있어, 상기 조성물은 와이프 상에 흡착 된 용액으로서 제제화되는 조성물.
인간 눈의 눈물 분비의 증가를 제어하는 방법:
화합물을 함유하는 수용액을 투여하고, 투여시 사람의 눈빛 반사율을 증가시키는데 효과적인 양으로 존재하며, 상기 화합물은 1-디이소프로필포스포릴헵탄(diisopropylphosphorylheptane), 1- 디이소프로필포스포릴옥탄(diisopropylphosphoryloctane) 및 1- 디이소프로필포스포릴노난(diisopropylphosphorylnonane)으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 수용액은 관리하는 것은 면봉, wiping, 패드 또는 수건으로 수행된다.
제 11항에 있어, 상기 유효량은 인간의 눈빛 반사율을 증가 시키는데 효과적인 방법.
제 11항에 있어, 유효량의 화합물이 0.1 내지 5 mg / mL의 농도로 용액 중에 존재하는 방법.
제 13 항에 있어, 수용액이 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 물 또는 등장 성 염수를 포함하는 희석제인 방법.