KR20180125354A - 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션 - Google Patents

천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션 Download PDF

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KR20180125354A
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Abstract

본 발명은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물의 유효성분의 생산성을 향상시키는 배양방법과, 균사체 배양액에서 추출한 세포 외 다당체(Exopolysaccharide) 및 베타글루칸을 함유하는 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션에 관한 것이다. 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분을 배양한 균사체 건조물, 농축물, 세포 외 다당체 및 베타글루칸은 배양 단계에서 공기 공급 및 교반을 위한 rpm은 0~500으로 조절하여 배양하는 것을 특징으로 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션에 관한 것이다.
본 발명의 목적은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체 배양액 제조 방법과 그의 추출물 성분에서 추출한 천연물질을 유효성분으로 함유하여 아토피 피부염 개선효과가 높은 연고및 로션을 세계인에게 널리 제공하는 것이다.

Description

천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션{The ointment treating composition containing Natural complex mushroom for improving atopic dematitis}
본 발명은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯과 같은 천연 복합 버섯 성분이 포함된 아토피 피부염 개선 연고 및 로션에 관한 것이며, 더욱 상세하게는 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분에 의해 생산되는 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸을 포함하는 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 균사체 농축물. 이의 건조물 또는 균사체 배양물의 추출물을 유효 성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선 연고 및 로션에 관한 것이다.
아토피 피부염은 유아기 혹은 소아기부터 만성적으로 재발성이 높은 염증성 피부질환으로 소양증과 피부건조증, 습진을 동반한다. 유아기에는 얼굴과 팔다리부터 시작되지만, 성장하면서 특징적으로 팔이나 무릎 부위에 습진의 형태로 나타나게 된다. 성인은 접히는 부위 피부가 두꺼워지는 태선화가 나타나며 유 소아기에 비해 얼굴에 습진이 생기는 경우가 많다. 아토피 피부염은 세계적으로 증가하는 추세이며 유병률이 인구의 20% 라는 보고도 있다.
이는 고도의 산업화가 진행됨에 따라 인스턴트식품의 지나친 섭취, 콘크리트, 주거공간의 변화, 미세먼지, 공업적 요인으로 인해 알레르기 물질이 증가 요인이 크다. 이로 인해 다양한 유전적, 면역학적 이상 증상이 발생하면서 다양한 질병이 유발되고 있다. 그중에서도 아토피와 같은 면역질환을 포함한 피부질환이 늘어가고 있다. 특히 아토피는 피부건조증, 가려움증을 수반하는 만성 피부질환으로 증가하는 추세이다.
아토피 피부염 발병시 환자는 병·의원 및 약국에서 스테로이드의 연고 및 항히스타민제를 이용하여 치료하고 있다. 그러나 스테로이드 내복약 등을 지속적으로 사용할 경우, 색소침착, 탈모, 가려움증, 안면홍조 등의 부작용이 보고 되었다.
이뿐만 아니라 부신피질 기능 부전, 당뇨병, 위염, 우울증, 두통, 골다공증, 혈압상승 등을 유발한다고 알려졌다. 또한, 스테로이드계 연고를 사용할 경우 피부에 피부감염증, 스테로이드 좌창, 스테로이드 피부염, 그 밖에도 뇌하수체 부신피질계 기능 억제 등의 심각한 부작용을 가져오고 있음이 보고 되어 있다.
이와 같은 피부에서의 염증 반응은 미생물의 감염, 호르몬의 과다분비, 피지 성분의 과잉분비 등에 의해서 발생한다. 염증반응은 사이클로 옥시기나아제-2의 작용으로 생성되는 프로스타글랜딘(prostaglandin) E2에 의한 매개반응이 알려져 있다.
천연 물질을 이용한 아토피성 피부염 치료효과가 있는 로션, 에센스, 크림의 화장품 조성물을 개발하기 위하여 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 다양한 효능을 연구하였다. 이는 항염 및 항균활성을 통해 강한 프로스타글랜딘 E2 저해활성 및 항균활성을 모두 보유함을 발견하고, 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분을 유효성분으로 함유하여 피부에 적용시 부작용을 일으키지 않으면서 아토피성 피부염을 치료하는 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 아토피성 피부염을 치료 개선하는 효과가 있는 연고 및 로션을 국민들에게 제공하는 것이다.
지금까지 개발된 아토피 치료제에 관한 종래기술로는, 먼저, 대한민국 등록특허: 제10-1528135호: 백장미 추출물 또는 이로부터 분리된 피로갈롤 화합물을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 약제학적 조성물이 있는데 이는 백장미로부터 피로갈롤물질을 추출하여 아토피를 치료하고자 하였다. 또 다른 기술로는 대한민국등록특허: 제10-1325094호: 새 송이버섯 추출물을 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물이 있는데 이는 새송이 버섯에서 아토피 치료용 유효성분을 추출하는 방법이였다. 또 다른 대한민국 등록특허: 제10-1227758호는 처리된 굴참나무 목재 칩을 용매로 추출한 굴참나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 조성물이 기술된 바 있다. 더불어 공개특허 10-2010-0094868호인 치마 버섯 다당류를 고수율로 대량 제조하기 위한, 개선된 치마 버섯 유래 다당류의 제조 방법 또한 선행기술된 바 있는데 이는 합성 배지를 사용하여 치마 버섯 다당류를 그 물성을 유지하면서도 고수율로 제조할 수 있는 치마 버섯 유래 다당류를 저비용으로 대량 생산하는 데 유용하며, 이렇게 생산된 치마 버섯 다당류는 기능성 비누, 로션 및 스킨 등의 화장품, 피부보호 및 다이어트 식품 등의 개발에 유용하게 활용될 수 있는 다수의 기술이 선행기술로 기술된바 그러나 본원에서처럼 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 배지 조성 및 배양방법으로 개선하여 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸을 포함하는 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 균사체 배양물과 건조물 또는 균사체 배양물의 추출물의 생산성을 향상시켜 산업적으로 신속하고 대량으로 배양하는 방법을 제공하며 효과가 우수한 아토피 치료용 크림을 제공하는 기술은 아직껏 개시되지 않았다.
본 발명의 비특허 문헌으로도 다수의 관련문헌을 엿볼 수 있는데 먼저 천연 염생생물 유래 소재 기반 기능성 바이오 조성물(박태규 동향/연구보고서 건국대학교 2013년)이 이루어진바 있다. 또 다른 문헌으로는 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 버섯의 균사체 액체 배양을 통한 세포 외 다당체 생산 및 항 당뇨 효과(김지은 계명대학교 박사학위논문, 2013) 와 특성을 토대로 진행하였다. 또한, 흰 목이버섯 (Tremella fuciformis)의 균사체 액체배양을 통한 세포 외 다당체를 배양하는 방법(조은재 대구대학교 2007)이 선행되었다. 더불어 버섯 균사체로 발효시킨 복령과 후박의 항산화 및 항암 효과(손미예 경상대학교, 한국전통발효식품연구소, 2207) 논문과 같이 버섯 유효 성분으로 생산되는 고분자 다당체 및 베타-글루칸 등 다양한 기능성 물질이 액체배양을 통한 대량생산으로 식품, 화장품 및 기능성 소재로 활용할 수 있다. 특히, 버섯 균사체 액체배양은 생물전환기술을 최적화함으로써 단시간에 효과적으로 유용물질을 생산할 수 있어서 경제성이 높다. 따라서 식용, 약용을 포함한 다양한 버섯 균사체 배양에 관한 연구 및 다양한 기능성 물질의 생산에 따른 우수한 종균의 선별을 하며, 이를 이용한 생물전환기술의 최적화기술은 산업적으로 매우 유용하다. 이에 본 발명자들은 위와 같은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 액체배양을 생산 최적화 및 기능성 물질들을 개발함으로써 천연 물질을 통한 피부에 자극이 없이 안전하고 효과 있는 아토피 피부염 개선 연고 및 로션 조성물에 관한 것이다.
아토피 피부질환은 환자에게 육체적, 정신적 고통을 안겨 주지만, 현재 스테로이드(Steroid)제, 항히스타민(Histamine)제 등이 부작용이 있는 일시적 치료제뿐이며, 이를 대체 할 수 있는 제제가 필요한 실정이다. 본 발명은 부작용이 없으며, 진피까지 침투하여 염증유발 물질을 제어하여 아토피 피부염을 치료할 수 있는 아토피 크림을 제공하는 것이다
본 발명은 전술한바 대로 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 배지 조성 및 배양방법으로 개선하여 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸을 포함하는 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 균사체 농축액. 이의 건조물 또는 균사체 배양물의 추출물 생산성을 향상시켜 산업적으로 신속하고 대량으로 배양하는 방법을 제공한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분에 의해 생산되는 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸을 포함하며;
상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 균사체 배양물과 균사체 배양물의 농축물. 이의 건조물 및 균사체 배양물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 연고및 로션을 제조하는 것이다.
또한, 본 발명은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 다양한 배양방법, 즉 초기 및 배양 중의 pH, 공기 주입량, 배양 중에 산소 공급 및 배지 성분의 균일하게 하기 위해 배양물 교반할 수 있는 임펠러(Impeller) 속도에 따라 적정한 용존 산소(D O, Dissolved oxygen)유지 및 배지 성분을 균일한 확산시키며 이의 최적화에 따라 산업적으로 대량 생산할 수 있는 방법을 개시하였고, 이를 통해 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션을 제조하고자 하는 것이다.
본 발명에 따른 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 조성물은 피부 염증유발 세포의 감소를 통해 아토피 피부염을 감소 효과를 통해 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션을 범용적으로 널리 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 배지 조성으로 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분에 의해 생산되는 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸을 포함하는 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 균사체 배양물과 균사체 농축물. 이의 건조물 또는 균사체 배양물의 추출물 제조 시 탄소원, 질소원, 무기염류를 최적화하여 산업적으로 대량 배양할 수 있다.
또한, 초기 및 배양 중의 pH, 공기 주입량, 배양 중에 산소 공급 및 배지 성분의 균일하게 하기 위해 배양물 교반할 수 있는 임펠러 속도에 따라 적정한 용존 산소유지 및 배지 성분을 균일한 확산시키는 방법을 최적화하여 산업적으로 대량 배양할 수 있다.
더불어 배양중에 영양성분을 첨가함으로써 균사체량을 향상시켜 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 건조물의 양, 그리고 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 함량을 증가시킬 수 있다.
본원의 연고 및 로션에 사용되는 균사체를 배양하는 방법으로는 고체 배양법과 액체 배양법을 사용할 수 있는데 고체배양법은 재배시간이 길고, 오염이 발생할 확률이 높고, 배양이 완료된 후 균사체만을 회수하는 작업을 자동화하기가 어렵다는 단점이 있는 반면에 균사체의 액체 배양법은 고체 배양법에 비하여 오염가능성이 작고, 비교적 조밀한 공간에서 짧은 시간 동안에 대량 배양할 수 있다는 장점이 있다.
버섯의 균사체와 유용성분을 포함하는 액체 배양물을 대량으로 단기간에 생산하기 위해서는 배지 성분의 최적화 및 경제성이 있는 원료들의 사용이 요구된다.
버섯의 액체배양을 위한 영양성분으로 옥수수 침지액(Corn steep liquor), 효모 추출물(Yeast extract), 펩톤(Peptone) 등의 부산물 유래 탄소원과 고가의 질소원 등이 사용되고 있다.
대부분의 균류는 진탕 배양 시 펠릿(Pellet) 또는 필라멘트(Filament) 균사를 형성하며, 특히 담자균류들은 다양한 크기의 균사응집체를 형성한다. 상기 균사응집체로 인하여 벽면 생육(Wall growth)이 발생하며, 이로 인해 교반 및 통기에 의한 물질 전달이 어려워져 균사 생육 및 생성물의 생산도 저해된다. 그동안 상기 문제점으로 인해 에어-리프트 발효조(Air-lift fermenter)가 일부 사용하여 왔으나, 현재 산업적인 생산을 위한 대규모 에어-리프트 발효조의 이용은 미흡한 실정이다.
따라서 발효조에서의 배양이 불가피하며, 또한 벽면 생육의 방지수단이 강구되어야 한다. 기존 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분에 대한 배양방법은 에어 리프트(Air lift) 방식의 배양기에서 온도, pH, CO2 농도, 조사되는 빛의 양, 배지 성분에 대한 보고는 있지만, 교반기가 부착되어 있는 생물반응기(Bioreactor)의 적용이 거의 없으며, 특히 최적 배양 조건으로 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체량, 건조물의 양, 그리고 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 함량을 증가시키기 위해 일정 농도 이상의 용존산소량을 유지하는 방법인 교반기의 교반속도, 통기량 등을 이용한 배양 방법은 전무한 상태이다.
따라서, 천연 소재인 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 배양 방법의 최적화를 통해 산업적 생산이 가능한 배양방법을 이용하여 생산을 향상시킬 수 있는 개발 방법이 요구되고 있다.
이에, 본 발명자들은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체 배양액 추출물을 대상으로 예의 연구를 계속한 결과, 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양에 있어 배양조건에 따라 개선되며, 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양액 추출물 성분에서 추출한 베타글루칸과 세포 외 다당체가 아토피 피부염 개선에 탁월한 효과를 갖는 것을 발견함으로써 본 발명을 완성 하였다.
도 1은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 상황버섯 균사체 분말의 한국식품개발연구원(KFRI)에서 수행된 시험성적서를 나타낸 그림이다.
도 2는 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 한국 화학 융합 시험 연구원(KTR)에서 수행된 안정성 검사 테스트 시험성적서를 나타낸 그림이다.
도 3은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 미국 FDA에서 수행된 안정성 검사 테스트 시험성적서를 나타낸 그림이다.
도 4는 종래의 일반 아토피 로션을 확대 촬영한 사진이다.
도 5는 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 본원 아토피 연고를 확대 촬영한 사진이다.
도 6은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 700 L 공기 부양식 배양기에서의 배양과 5,000 L 교반형 생물반응기의 최적 조건에서 배양한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 세포 외 다당체(EPS)의 분자량을 측정한 그래프이다.
도 8은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 균사체 배양물의 건조물 처리량에 따른 SK-MEL-2 세포의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 9는 본원의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 있어 버섯 성분 처리량에 따른 항염증활성을 측정한 그래프이다.
도 10은 본원의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의하여 제조한 연고를 2개월간 사용한 아토피 환자의 손의 사용전과 후의 사진이다.
도 11은 본원의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의하여 제조한 연고를 2개월간 사용한 아토피 환자의 다리의 사용전과 후의 사진이다.
이하 본 발명의 실시 예들을 상세히 설명한다. 본 발명을 설명함에서, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 것이다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어들은 본 발명의 바람직한 실시 예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다.
따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
도 1은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 상황버섯 균사체 분말의 한국식품개발연구원(KFRI)에서 수행된 시험성적서를 나타낸 그림이다.
도 2는 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 한국 화학 융합 시험 연구원(KTR)에서 수행된 안정성 검사 테스트 시험성적서를 나타낸 그림이다.
도 3은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 미국 FDA에서 수행된 안정성 검사 테스트 시험성적서를 나타낸 그림이다.
도 4는 종래의 일반 아토피 로션을 확대 촬영한 사진이고 도 5는 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 본원 아토피 연고를 확대 촬영한 사진이다.
도 6은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 700 L 공기 부양식 배양기에서의 배양과 5,000 L 교반형 생물반응기의 최적 조건에서 배양한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 세포 외 다당체(EPS)의 분자량을 측정한 그래프이다.
도 8은 본 발명의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의한 균사체 배양물의 건조물 처리량에 따른 SK-MEL-2 세포의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 9는 본원의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 있어 버섯 성분 처리량에 따른 항염증활성을 측정한 그래프이다.
도 10은 본원의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의하여 제조한 연고를 2개월간 사용한 아토피 환자의 손의 사용전과 후의 사진이며 도 11은 본원의 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션의 일 실시 예에 의하여 제조한 연고를 2개월간 사용한 아토피 환자의 다리의 사용전과 후의 사진이다.
본 발명은 상기한바 대로 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션에 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분을 함유하는 것을 본원의 특징으로 한다.
본원의 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션은 일정 농도 이상의 용존산소량(Dissolved oxygen)농도하에서 교반 및 통기 변화에 따른 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 액체배양 시 균체사량, 건조물의 양, 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 함량을 향상시키게 된다.
더불어 교반 속도를 조절하여 일정 농도 이상의 용존산소량을 유지하며, 교반
속도에 의해 용존산소량이 조절되지 않을 경우 2단계로 통기를 조절하여 자 발효조(Jar fermenter) 시스템에서 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 효율적으로 균사체와 건조물, 세포 외 다당체 및 베타글루칸을 생산한다.
본 발명은 이처럼 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분에 의해 생산되는 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸을 포함하는 균사체 농축물. 이의 건조물 또는 균사체 배양물의 추출물을 함유하는, 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션을 제공한다.
아토피 피부염 개선용 연고 및 로션으로 제제화되는 경우, 상기 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.05 내지 5중량 %이며, 바람직하게는 0.01 내지 10.0 중량%임이 매우 바람직하다.
과량 첨가에 따른 사용감 저하 및 각종 제형에의 적용 가능성을 고려하여 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸의 함량은 상기 최대치 이하인 것이 바람직하다. 이때, 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸의 함량은 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션에 함유되는 성분들의 함량에 따라 상기 범위 내에서 적절히 조절하는 것이 바람직하다.
본 발명의 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 특별한 제한은 없다.
상기 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션을 위해 허용 가능한 원료 또는 첨가제를 사용할 수 있으며, 제조하고자 하는 제형의 제조에 당 업계 기술분야에서 사용 가능한 것으로 공지되어 있는 임의의 원료 또는 첨가제가 이용될 수 있다.
본원은 이와 같이 액상(Liquid phase), 젤(Gel), 겔(Gel) 크림 또는 로션 중 어느 한 형태로 이루어진 아토피 연고 및 로션 조성물에 있어 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯으로 이루어진 천연 복합 버섯 배양물, 이의 건조물과 농축물로 이루어진 세포 외 다당체 및 베타글루칸이 상기 연고 및 로션 조성물에 함유되되; 상기 연고 및 로션 배양법은 고체배양과 액체 종 배양을 거친 후 대량 본 배양하는 단계를 포함하여 완성되게된다.
상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션을 배양한 배양법은 교반형 생물반응기를 사용하되; 상기 세포 외 다당체 및 베타글루칸은 배양 단계에서 공기 공급 및 교반을 위한 rpm은 0~500으로 조절하며 상기 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 배양 단계에서 공기 공급량을 0.01~2 vvm으로 조절하며 본 배양 단계에서 내압을 0.5~1.5kg/cm2으로 조절토록한다.
바람직하게는 상기 본 배양 단계에서 탄소원 첨가시 배양액 1 L 당 탄소원을 0.1 ~ 10% 첨가하여 배양하며 상기 연고 및 로션은 균사체 배양물, 추출물, 농축물, 건조물 중 적어도 하나 또는 하나 이상을 포함하게 된다.
바람직하게는 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션은 균사체 배양물, 추출물, 농축물, 건조물 중 적어도 하나 또는 하나 이상을 포함하되; 상기 연고 및 로션 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 10 중량%가 함유되는 것을 특징으로 한다.
아울러 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체의 세포 외 다당체 및 베타글루칸 제조를 위한 배양에 있어서, 탄소원은 말토오스글루코오스, 락토오스, 전분, 덱스트린, 수크로스, 프럭토스, 갈락토오스, 만노오스, 당분 중에서 선택된 적어도 어느 하나이며 질소원은 대두분, 면실분, 아미노산, 펩톤, 콘 스티프 리쿼 중에서 선택된 적어도 어느 하나가 투입되도록 한다.
한편, 액상 크림 젤, 갤. 제형 중 선택된 어느 하나의 형태로 이루어진 연고 및 로션에 있어서,
상기 상황버섯 균사체, 표고버섯 균사체, 잎새버섯 균사체를 배양한 버섯 균사체 배양물, 농축물, 이의 건조물 중 택일 된 어느 하나의 버섯 균사체 물질이 상기 연고 및 로션에 투입되되;
연고 및 로션의 전체중량 100 wt(%)(중량%) 또는 중량비에 대하여 상기 코코넛 또는 팜유 및 야자 유지분 또는 연고 및 크림을 제조하는 베이스 90.60 중량%를 기반으로 여기에 상황버섯 0,50 wt(%)와 표고버섯 0,50 wt(%)와 잎새버섯 0,50 wt(%)와 더불어 아보카드 오일 0,50 wt(%) 글리세린 2.00W t(%), 포도씨 오일 0,50 wt(%), 살구씨 오일 0,50 wt(%),하수오 1.0 wt(%), 한련초 0,50 wt(%), 여정실 0,50 wt(%)를 투입하며 바람직하게는 여기에 오미자 추출물 0,30 wt(%), 피마자씨 추출물 0,30 wt(%), 쑥 추출물 0,30 wt(%), 석창포 추출물 0,30 wt(%), 고삼
추출물 0,30 wt(%), 은행잎 추출물 0,30 wt(%), 박하잎 추출물 0,30 wt(%), 천궁 추출물 0,30 wt(%)가 상기 연고 및 로션의 제조공정에서 적어도 하나 이상이 상기 연고 및 로션에 모두 투입됨이 더더욱 바람직하다.
더불어 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션은 허브 오일이 상기 연고 및 로션 베이스 100g당 0.1 ㎖∼10㎖ 혼합하고 상기 연고 및 로션은 액체 배양한 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물; 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물의 농축물; 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물의 건조물; 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물의 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 또는 베타글루칸 함량을 증가 시키게된다.
아울러 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물에 투입된 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸은 연고 및 로션 조성물 총 중량% 또는 중량비에 대하여 0.05 내지 5 중량%가 함유되되; 상기 연고 및 로션 100중량 % 에 대하여 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체가 0.01 ~ 10.0 중량%가 함유되며, 여기에 야자, 코코넛, 팜유 오일, 시어 버터, 아보카드유, 올리브유 중 적어도 어느 하나의 오일 80 ~ 95 중량%에 일정량의 원적외선이 방사된 정제 수를 일정량 첨가하여 제조되는 것을 특징으로 한다.
더불어 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체를 배양한 균사체 건조물 및 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 추출물은 연고 및 로션 베이스 총 중량% 또는 중량비에 대하여 0.05 내지 5 중량%가 함유하고 상기 버섯 균사체를 배양한 균사체 건조물 및 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 추출물은 연고 및 로션베이스 총 중량에 대하여 0.05 내지 5 중량% 또는 0.01 내지 10중량 %가 함유되며 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물, 농축물, 이의 건조물 및 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 추출물은 연고 및 로션베이스 총 중량에 대하여 0.05 내지 5 중량%가 함유됨이 바람직하다.
아울러 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물, 농축물, 이의 건조물 및 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 추출물 배양에 있어서, 탄소원은 말토오스글루코오스, 락토오스, 전분, 덱스트린, 수크로스, 프럭토스, 갈락토오스, 만노오스, 당분 중에서 선택된 적어도 어느 하나이며 질소원은 대두분, 면실분, 아미노산, 펩톤, 콘 스티프 리쿼 중에서 선택된 적어도 어느 하나가 상기 연고 및 로션에 투입되게 된다.
이와 같이 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물은 연고 및 로션 전체 중량 % 또는 중량비에 대하여 상황버섯 1중량 %, 표고버섯 0.5중량 % 및 잎새버섯 0.5중량 %가 연고 및 로션 조성물에 투입되며 상기 연고 및 로션에 어성초, 금전초, 차전초, 느릅나무,상엽의 추출물과 더불어 포도씨 오일, 살구씨 오일, 아보카드씨 오일, 피마자씨 오일 중 선택된 적어도 어느 하나 이상의 씨앗 오일이 상기 연고 및 로션에 일정량 혼합되되;
상기 연고 및 로션 조성물 전체 중량%에 대하여 포도씨 오일 0.5중량 %, 살구씨 오일 0.5중량 %, 아보카드씨 오일 0.5중량 % 및 피마자씨 오일 0.5중량 %가 상기 연고 및 로션 조성물에 더 포함하게 된다.
한편, 상기 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션에 대하여 약재 추출물이 투입되되; 상기 약재추출물은 상기 연고 및 로션 조성물 전체 중량%에 대하여 하수오 0.1 ~ 3중량 %, 한련초 0.1 ~ 3 중량%, 여 정실 0.1 ~ 3 중량%, 고삼 추출물 0.1 ~ 3 중량%, 석창포 추출물 0.1 ~ 3 중량%, 다시마추출물 0.1 ~ 3 중량% 및 은행잎 추출물 0.1 ~ 3 중량% 를 더 포함하되; 상기 연고 및 로션 조성물은 하수오,한련초,여정실,금전초의 꽃, 잎 및 줄기의 추출물을 더 포함하게된다.
한편, 코코넛 또는 팜유 유지분으로 이루어지는 연고 및 로션에 있어서 상황버섯 균사체, 표고버섯 균사체, 잎새버섯 균사체를 배양한 버섯 균사체 배양물, 농축물, 이의 건조물 중 택일 된 어느 하나의 버섯 균사체 물질이 상기 연고 및 로션에 투입되되;
상기 연고 및 로션은 코코넛 또는 야자나 팜유 유지분말 100g당 원적외선 수 19g 비율로 혼합하여 고체화 공정과;
글리세린/포도씨 오일/살구씨 오일/아보카드씨 오일 등의 분말에 오미자 추출물, 피마자씨 오일, 쑥 추출물, 석창포 추출물, 고심 추출물, 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯의 복합 균사체 배양물, 한련초 분말, 여정실(광나무열매)분말, 하수오 분말 은행잎 추출물, 박하잎 추출물, 천궁 추출물 원료에 원적외선 수를 넣고 영상 40-50도에서 혼합하는 혼합공정과;
상기 연고 및 로션 조성물을 연합 공정 후 미세분말로 분쇄하는 분쇄 공정과;
여기에 원적외선 수를 투입하여 상기 분쇄 재료들과 교반 공정을 거친 후 완성된 연고 및 로션을 튜브 및 케이스 및 박스포장을 하여 완성하는 것을 특징으로 하게 된다.
이처럼 본 발명의 일 실시 예에 따르면, 본 발명의 조성물에서 상기 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸의 함량은 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.05 내지 5중량 % 또는 0.1 내지 10 중량%가 바람직하며 아무 문제없이 가능하다.
본 발명자들은 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션의 본원 핵심물질인 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물의 대량생산을 위한 액체배양법을 확립하기 위하여, 균사체의 최적화된 배지 조성 및 배양조건을 결정하였다.
본 발명의 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체의 대량 생산방법은 버섯 성분으로부터 균사체를 얻는 단계, 균사체를 액체 배양하는 단계, 액체 배양된 버섯 성분 균사체를 생물반응기를 이용하여 배양시키는 단계를 포함한다.
(1) 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분으로부터 액체 배양용 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 얻는 단계.
상기의 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분을 PDA(Potato dextrose agar) 배지(Culture medium 100 플라스틱 배양 구. Difco, Becton Dickinson and Company)에서 7~11일 정치 배양하였다.
그런 다음 500 배플(Baffle])이 있는 삼각 플라스크에 PDB(Potato dextrose broth) 배지(Difco) 200 를 조성한 후, PDA 배양 균주 1개를 넣고 7~11일간 진탕 배양하였다. 이때 접종 원으로 투입될 균사체의 양은 배양할 용액의 양을 기준으로 0.3%(w/v) 정도인 것이 바람직하다.
(2) 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 액체 배양하는 단계.
상기 (1) 단계에 의해 얻은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 액체 배양용 배양액에 접종하여 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 액체 배양하여 얻을 수 있다.
액체 배양용 배양액은 물에 탄소원, 질소원, 비타민, 무기물을 포함하도록 하여 pH가 4.06.5로 조정할 수 있다. 그런 다음 pH가 조절된 배양액에 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 배양액 부피 대비 0.1∼10％으로 배양액에 첨가하고, 20∼25℃에서 7∼11일 동안 액체 배양할 수 있다.
상기에서 탄소원은 말토오스(Maltose), 글루코오스(Glucose), 락토오스(Lactose), 전분(Starch), 덱스트린(Dextrin), 수크로스(Sucrose), 프럭토스(Fructose), 갈락토오스(Galactose), 만노오스(Mannose), 당분(Oligosaccharide) 중에서 선택된 적어도 어느 하나 이상을 사용할 수 있다.
상기에서 질소원은 대두분, 면실분, 아미노산(Amino acid), 펩톤(Peptone),
콘 스티프 리쿼 중에서 선택된 적어도 어느 하나 이상을 사용할 수 있다.
상기 무기물은 일인산칼륨(KH2PO4), 이인산칼륨(K2HPO4), 탄산칼슘(CaCO3), 염화칼슘(CaCl2), 황산 마그네슘(MgSO4), 염화나트륨(NaCl), 황산 망간 (Mn SO4)중에서 선택된 적어도 어느 하나 이상을 사용할 수 있다.
본 발명은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 액체 배양하기 위한 다양한 구성성분의 배양액을 제조하여 사용할 수 있으며 바람직한 하나의 일 실시한 예로서, 상기 배지는, 0.2~5% 포도당, 0.2~1% 펩톤, 0.05~0.25% 일인산 칼륨(KH2PO4), 0.02~0.1% 황산 마그네슘(MgSO4) 및 물을 포함할 수 있다. 바람직하게는 포도당 3 중량%, 펩톤 0.5 중량%, 일인산칼륨(KH2PO4) 0.1 중량%, 황산 마그네슘(MgSO4) 0.05 중량%가 바람직하다.
(3) 생물반응기를 이용해 액체 배양된 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 배양시키는 단계.
상기 (2) 단계에 의해 액체 배양된 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체는 생물반응기 내의 배양액에 접종하고 배양하여 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물을 제조할 수 도 있다.
그리고 생물반응기 내부의 배양액은 정제 수에 탄소원, 효모추출물, 질소원, 비타민, 무기물을 포함하도록 하여 pH가 4.0~6.5으로 조정할 수 있다.
그런 다음 액체 배양된 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 배양액 부피 대비 0.1∼10％으로 생물반응기 내의 배양액에 접종한 후, 0.02∼2 vvm(Volume of air added to liquid volume per minute)의 공기를 생물반응기 내부로 공급하여 20∼25℃의 온도에서 7∼11일 동안 배양하여 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물을 제조할 수 있다.
상기 생물반응기 내부의 배양액에서, 탄소원은 말토오스, 글루코오스, 락토오스, 전분, 덱스트린, 수크로스, 프럭토스, 갈락토오스, 만노오스 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있다.
상기 생물반응기 내부의 배양액에서, 질소원은 대두분, 면실분, 아미노산, 펩톤, CSL, 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있다.
상기에서 무기물은 일인산칼륨(KH2PO4), 이인산칼륨(K2HPO4), 탄산칼슘(CaCO3), 염화칼슘(CaCl2), 황산 마그네슘(MgSO4), 염화나트륨(NaCl), 황산 망간 (MnSO4)중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있다.
본 발명은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 액체 배양하기 위한 다양한 구성성분의 배양액을 제조하여 사용할 수 있다.
바람직한 하나의 일 실시 예로서, 상기 배지는, 0.2~5% 포도당, 0.2~1% 펩톤, 0.05~0.25% 일인산칼륨(KH2PO4), 0.02~0.1% 황산 마그네슘(MgSO4) 및 물을 포함할 수 있다. 바람직하게는 포도당 3 중량%, 펩톤 0.5 중량%, 일인산칼륨(KH2PO4) 0.1 중량%, 황산마그네슘(MgSO4) 0.05 중량% 이다.
본 발명에서 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체의 대량 배양용 생물반응기로는 본원 관련 분야에서 통상적으로 사용하며, 공기를 주입할 수 있는 생물반응기라면 어떠한 것이라도 사용할 수 있다. 본 발명에서 이러한 생물반응기의 일례로서 순환형(기포 통기형) 공기 부양식 생물반응기, 풍선형 공기 부양식 생물반응기, 칼럼형 공기부양식 생물반응기, 교반식 생물반응기 중에서 선택된 어느 하나를 사용할 수 있다.
한편, 본 발명은 상기에서 언급한 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체를 대량으로 생산하는 방법에 의해 얻은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물. 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물의 추출물 혹은 건조물을 포함한다.
(4) 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물로부터 건조물, 추출물, 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸을 제조하는 단계.
본 발명의 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물로부터 얻을 수 있다.
바람직하게는, 상기 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸은 (a) 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분을 액체 배지에서 배양하여 균사체 배양물을 제조하는 단계, (b) 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체 및 배양물을 건조해 분말 화하는 단계, 및 (c) 균사체 배양물 분말을 용매로 추출하여 이로부터 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸을 수득하는 단계를 거쳐 제조할 수 있다.
상기 (b) 단계에서는 상기 (a) 단계에서 제조된 균사체 배양물을 진공건조 또는 동결건조시켜 분말화 할 수 있다. 상기의 건조는 유효물질의 소멸을 방지하기 위해 40℃ 이하의 온도, 보다 구체적으로는 30℃ 이하의 온도에서 48 내지 96시간 동안 수행되는 것이 바람직하다. 그리고 (b) 단계에서의 건조는 증발온도를 상대적으로 높게 설정하는 진공건조기보다 진공 동결 건조기를 사용하는 것이 유효물질 함량 변화가 최소화됨이 바람직하다.
본 발명의 균사체 배양물의 추출물은, 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 균사체 배양물을 당 업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 용매를 사용하여, 통상적으로 이용되는 열수추출, 실온추출, 가온 추출, 초음파추출, 초 임계추출 등의 방법으로 제조될 수 있다.
이때 각 원료 유기농 식물을 추출 용매를 사용하여 각각 추출한 후 혼합하여 사용하는 것이 바람직하다.
구체적으로는 물, 탄소 수 1 내지 6의 글리콜, 탄소 수 1 내지 4의 무수 또는 함수 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 1,3-부틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매를 사용하여 추출한다.
더욱 바람직하게는 35 내지 45%(v/v) 1,3-부틸렌 글리콜을 추출 용매로 사용하여 추출한다. 이때 추출 용매의 사용량은 원료 중량의 10 내지 30배 부피량이며, 보다 바람직하게는 20 배이다.
추출온도와 시간은 추출하고자 하는 시료의 양에 따라 달라질 수 있으며 40 내지 100℃에서 3 내지 100시간 동안 가열하여 추출하거나, 50 내지 70℃에서 1일 내지 5일간 실시하는 것이 바람직하며 추출결과물을 여과 또는 정제하는 과정을 거칠 수 있다.
또한, 본 발명의 균사체 배양물의 추출물은 감압 증류, 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
상기 (c) 단계에서는 (b) 단계에서 얻은 균사체 배양물 건조물을 용매로 추출한 후 본 발명에 따른 조성물의 유효성분인 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸을 분리, 제조한다.
세포 외 다당체를 얻기 위해 건조 분말 1~10g에 증류수 100㎖를 첨가하여 잘 현탁한 후, 10,000 rpm으로 20분 동안 원심분리하여 이의 상등액에 그 양의 2 ~ 4배에 해당하는 95% 이상의 순도를 갖는 용매를 첨가하고 2 ~ 6℃의 냉장고에 넣어 12 ~ 18시간 정치시킬 수 있다.
상기의 정치 물을 10,000 rpm으로 20분 동안 원심분리한 후, 침전물을 회수 및 동결건조하여 조(Crude) 세포 외 다당체를 제조할 수 있다.
상기 세포 외 다당체는 40 ~ 60 중량%의 당과 30 ~ 40 중량%의 단백질, 40 ~ 50 중량%의 당과 32 ~ 38 중량%의 단백질, 또는 43 ~ 47 중량%의 당과 33 ~ 36 중량%의 단백질을 포함할 수 있고, 보다 구체적으로는 약 45 중량%의 당과 약 34 중량%의 단백질을 더 포함할 수도 있다.
베타-글루칸은 건조 분말 10g에 증류수 50㎖를 가하여 현탁시킨 다음 실온에서 20% 탄산나트륨(Sodium carbonate)을 이용하여 pH를 10.0으로 조정한 후 10시간 정도를 방치하여 분말 시료가 충분히 연화되도록 한다. 이 연화된 시료액에 고온에 안정한 알파아밀레이즈(α-amylase)를 가하여 60℃의 항온수조 내에서 2시간 동안 교반하여 효소처리를 한 후 실온으로 냉각한다. 이 액을 pH 5로 맞춘 다음 아밀로글루코시데이즈(Amyloglucosidase)로 60℃의 항온수조에서 2시간 동안 교반을 한다.
그 다음 효소를 불활성화시키기 위해서 pH를 4.5로 맞춘 후, 5℃의 항온수조에서 30분간 교반한 후 냉각한다. 냉각한 추출액을 원심분리(30 Min, ×8000 rpm)하여 상등액만을 취한 후 40℃의 온도에서 감압 농축하게 되고 이 농축액에 4배량의 에탄올을 가하여 4시간 정도 방치한 다음 원심분리하여 침전물을 얻는다. 이 침전물을 다시 물에 용해한 후 pH를 4.5로 맞춘 다음, 아밀로글루코시데이즈(Amyloglucosidase)로 58℃에서 2시간 동안 효소를 재처리한다. 처리 후 95℃에서 30분 동안 효소를 불활성 시킨 다음 냉각하고 원심분리하여 상등액을 취한 후 에탄올로 재침전시켜 조(Crude) 베타-글루칸(β-glucan)을 제조할 수 있다.
이하 본 발명의 내용을 실시 예 및 시험 예를 통하여 구체적으로 설명한다.
그러나 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예의 배지 조성 및 배양조건으로 초기 내압에 따른 배양액 속에 포함되어 있는 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 균사체량, 건조물의 양, 그리고 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 함량을 측정하였다. 배양기 교반 속도는 상기 실시예에서 가장 유리한 조건으로 조사된 rpm 200으로 수행하였으며, 공기 공급량은 상기 실시예에서 가장 유리한 조건인 0.2 vvm으로 하여 내압을 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1, 1.5 kg/cm2으로 배양 초기부터 완료시점까지 유지하면서 배양하였다.
내압에 따른 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 균사체 배양.
내압
(kg/cm2)		 생육
정체기
(일)		 균사체량
(g/L)		 건조물의 양
(g/L)		 세포 외 다당체 함량
(mg/g Powder)		 베타글루칸 함량
(mg/g Powder)
0.05 10 8.5 28.9 4.95 28.1
0.1 10 8.6 28.5 4.88 29.1
0.2 10 8.5 29.1 4.89 28.7
0.5 10 8.4 30.1 4.91 29.2
1 10 8.5 29.5 4.94 29.4
1.5 10 8.6 29.9 4.92 29.3
그 결과, 위 표 1에서 보는 바와 같이 교반형 생물반응기의 내압이 증가하거나 감소하더라도 배양 성에 거의 영향이 없었다. 따라서 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 균사체 배양에 있어 내압은 거의 영향이 없음을 알 수 있었다.
용존산소량 조절에 따른 배양.
상기 실시예 등에서 나타난 것과 같이 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 배양에 있어 중요한 요소로 교반형 생물반응기 배양 시 공기 공급량 혹은 내압보다는 rpm에 의한 영향이 높음을 알 수 있었다.
따라서 rpm에 의한 영향으로 나타나는 것으로 대표적인 것은 균사체에 대한 전단 응력(Shear strees)과 배양액에 대한 용존산소량이 있다.
전단 응력 측면에서는 rpm이 증가함에 따라 균사체의 모양에는 큰 변화를 나타내지 않았기 때문에 영향이 클 것으로 추정되는 용존 산소량에 따른 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 배양 시 균사체 농도, 건조물의 농도, 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 함량을 조사하였다.
초기 배양 조건은 rpm 50, 공기 공급량 0.2 vvm, 내압 0.5kg/cm2이며, 실험에 적용되는 용존산소량은 0, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 70%로 수행하였다. 배양이 진행됨에 따라 목적으로 하는 용존산소량에 도달되었을 때부터 1차적으로 rpm을 조절하였으며, 목적으로 하는 용존 산소량이 유지되지 않을 경우 공기 공급량과 내압을 조절하여 일정하게 유지하였다.
내압에 따른 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 균사체 배양.
DO
(%)		 생육정체기
(일)		 균사체량
(g/L)		 건조물의 양
(g/L)		 세포 외 다당체 함량
(mg/g Powder)		 베타글루칸 함량
(mg/g Powder)
No control 4 4.3 12.6 2.13 13.3
5 10 12.6 39.1 6.91 40.2
10 11 12.7 40.2 7.15 39.7
20 12 15.2 45.3 8.22 46.1
30 11 13.6 41.1 7.45 42.3
40 11 13.2 41.3 7.27 40.9
50 9 8.9 30.2 5.23 31.1
70 7 6.3 25.4 4.11 23.2
그 결과, 위 표 2에서 보는 바와 같이 균체 성장 측면에서 용존산소량 40%까지는 약간의 차이만 보일 뿐 큰 차이를 나타내지 않았으나, 배양에 따른 균사체량, 건조물의 양, 그리고 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 함량은 현저히 상승하였다.
그리고 용존 산소량 20% 유지 시에는 생육정체기는 12일, 균사체량은 15.2g/L, 건조물의 양은 45.3g/L, 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체와 베타글루칸의 함량은 각각 8.22 mg/g Powder와 46.1mg/g Powder로 조사되었다.
용존산소량을 고려하지 않은 경우보다 50% 이상 배양 성이 향상되었다.
따라서 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 배양에 있어 일정농도의 용존산소량을 유지하기 위해 rpm, 공기 공급량, 내압을 조절하는 것이 유리함을 알 수 있었다.
배양중 영양성분 첨가에 의한 배양.
아울러 생물반응기를 이용하여 균사체를 배양할 경우 유용물질의 생산성을 높이기 위해 배양 중에 영양성분을 첨가하기 때문에 균체 성장 및 유용물질의 생산성에 영향을 주는 질소원과 탄소원을 첨가하여 수행하였다.
그 결과 질소원의 첨가는 균체 성장에는 유리하였지만, 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 및 베타글루칸 함량은 감소하였다.
따라서 유용물질의 생산성을 높이는 방법인 탄소원의 첨가를 수행하였으며, 상기 실시예에서 나와 있는 조건에 따라 초기 조건 및 배지 조성과 배양중에 유지되는 용존 산소량을 20% 이상으로 하여 배양을 12일까지 수행하였다.
첨가되는 탄소원 종류에 따른 배양.
배양중에 첨가되는 탄소원으로 포도당(Glucose), 과당(Fructose), 만노오스(Mannose), 탄소원(Sucrose), 엿당(Maltose), 전분(Soluble starch)을 배양 5일 차에 배양액 부피에 대해 3%가 되도록 일시 첨가하였으며, 전분은 20%, 나머지 탄소원은 70%로 조제되었다.
배양중에 첨가되는 탄소원 종류에 따른 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 균사체 배양.
탄소원 균사체량
(g/L)		 건조물의 양
(g/L)		 세포 외 다당체 함량
(mg/g Powder)		 베타글루칸 함량
(mg/g Powder)
포도당
(Glucose)		 17.7 52.1 9.12 50.9
과당
(Fructose)		 16.4 51.9 8.30 50.7
만노오스
(Mannose)		 18.1 55.2 9.25 54.8
탄소원
(Sucrose)		 18.0 57.1 9.51 59.2
엿당
(Maltose)		 16.7 49.7 8.66 47.3
전분
(Starch)		 15.2 45.8 8.18 44.9
그 결과, 위 표 3에서 보는 바와 같이 전체적으로 탄소원을 첨가할 경우 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 배양에 의한 배양 성이 향상되었다.
특히, 만노오스 혹은 탄소원을 첨가할 경우 높은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 균사체량, 건조물의 양, 그리고 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 함량이 증가하였다.
따라서 배양중에 탄소원을 첨가할 경우 균사체 및 여러 유용물질의 생산성이 향상되며 만노오스와 탄소원을 첨가할 경우 더욱 향상됨을 알 수 있었다.
항균 및 항진균 효과 실험.
항균 및 항진균 효과 실험을 위한 방법으로 상기 실시예 2의 건조물을 시험 균주가 포함되어 있는 균체액에 첨가하여 항균력과 항진균력을 조사하였다. 실시예 3에서 제조된 유효성분의 분말 상태 시료 4.0 g을 96g의 정제 수에 녹인 후에 조제액으로 사용하였으며, 항균력에 사용한 시험 균주는 Staphylococcus aureus subsp . aureus ATCC 6538이며 항진균력에 사용한 시험 균주는 Candida albicans ATCC 11006와 Trichophyton rubrum ATCC 28188이였다.
시험 방법은 항균력에 사용하기 위한 시험 균주를 액체배지(Nutrient broth)에 37℃에서 24시간 배양하여 배양된 균체를 생리 식염수로 희석하여 시험 균주 희석액(1×107 CFU/㎖)을 만든다. 시험 균주 희석액 0.5 ㎖에 0.5 ㎖의 실시예 2의 조제액을 첨가하였다. 1분, 5분, 10분 후에 현탁액 0.2 ㎖를 Nutrient 아가 평판배지에 도말하여 37℃에서 48시간 배양한 후 콜로니를 계수하여 살균력을 관찰하였다.
항 진균력에 사용한 시험 균주로 효모인 Candida albicans ATCC 11006의 생육은 YPD 액체배지에 25℃에서 48시간 배양하여 배양된 균체를 생리 식염수 희석하여 시험 균주 희석액(1×107 CFU/㎖)을 만든다. 시험 균주 희석액 0.5 ㎖에 0.5 ㎖의 실시예 3의 조제액을 첨가하였다.
1분, 5분, 10분 후에 현탁액 0.2 ㎖를 YPD 아가 평판배지에 도말하여 25℃에서 48시간 배양한 후 콜로니를 계수하여 살균력을 관찰하였다. 항 진균력에 사용한 시험 균주로 곰팡이인 Trichophyton rubrum ATCC 28188의 생육은 Sabourauds 액체배지에 25℃에서 72시간 배양하여 5㎖에 현탁하고, 원심분리(3,500 rpm) 하여 포자를 회수하였다. 회수된 포자를 멸균된 증류수와 트윈 20(Tween 20) 을 첨가하여 약 1×106 cell/㎖이 되도록 조정된 포자용액 0.5 ㎖에 실시예 2의 조제액 0.5 ㎖를 혼합하여, 1분, 5분, 10분 후에 현탁액 0.2 ㎖를 Sabourauds 아가 평판배지에 도말하여 25℃에서 96시간 배양한 후 콜로니를 계수하여 살균력을 관찰하였다. 대조 구로는 식염수를 사용하였다.
항균력 실험 결과.
항균력 실험 결과/균주 균체 수(CFU/㎖)
1분 5분 10분
식염수 7.5 106 3.5 106 2.8 106
Staphylococcus aureus subsp . aureus ATCC 6538 1.5 105 2.7 103 100 이하
효모에 대한 항진균력 실험 결과.
효모에 대한 항진균력 실험 결과/균주 균체 수(CFU/㎖)
1분 5분 10분
식염수 7.5 106 3.5 106 2.8 106
Candida albicans ATCC 11006 2.5 105 3.4 102 100 이하
곰팡이에 대한 항진균력 실험 결과.
곰팡이에 대한 항진균력 실험 결과/균주 균체 수(CFU/㎖)
1분 5분 10분
식염수 5.2 105 5.1 105 4.9 105
Trichophyton rubrum ATCC 28188 1.5 105 2.7 104 2.1 102
상기 표 4~6 에서 보는 바와 같이, 식염수를 사용한 대조 구에서는 균체 수가 약간의 감소를 제외하고는 일정하게 나타났으나, 실시예 3의 조제액을 첨가한 경우에는 모든 시험 균주에서 균체 수가 감소하였다. 따라서 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물의 경우 항균 및 항진균의 효과가 탁월함을 알 수 있었다.
디스크 확산(Paper disk diffusion)법에 의한 항균 또는 항진균 활성 조사.
상기 실시예에서 제조된 유효성분의 분말 상태 시료 5.0 g을 95g의 정제 수에 녹인 후에 사용하였으며, 배양 후 디스크 주위에 생성된 저해환의 반경(mm)의 크기로 항균력을 측정하였다.
항균 및 항진균 활성은 그람 양성균, 그람 음성균 및 진균, 구체적으로 그람 양성균(Staphylococcus aureus subsp . aureus ATCC 6538, Propionibacterium acnes ATCC 6919) 과 그람 음성균(Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9017) 을 포함한 세균 5종, 효모(Candida albicans ATCC 11006, Saccharomyces cerevisiae KCTC 17299) 2종 및 곰팡이(Microsporum audouinii ATCC 12332, Trichophyton rubrum ATCC 28188) 2종을 대상으로 조사하였다.
항균 활성 측정을 위한 감수성 세균은 Nutrient 아가(Beef extract 3g, Peptone 5g, agar 15g) 평판배지, 감수성 곰팡이는 Sabourauds 아가(Peptone 10g, Glucose 40g, agar 20g) 평판배지, 감수성 효모는 YPD 아가(Yeast extract 10g, Peptone 20g, Dextrose 20 g, agar 15 g) 평판배지에 1 106 cfu/ml로 도말하였다.
상기 디스크 확산법은 감수성 균주가 도말 된 평판배지 위에 8mm 지름의 paper disk(ADVANTEC, Toyo Roshi Kaisha, Ltd., Japan)를 놓고 저항균 물질을 30㎕씩 일정하게 가하는 방법으로 수행하였다. 상기 디스크 확산법에 의한 항균 실험은, 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes ATCC 6919)는 혐기적 조건인 CO2 배양기에서 배양한 것을 제외하고 나머지 세균은 호기적 조건에서 37에서 12시간 동안 배양하였다.
항진균 실험(효모와 곰팡이)의 경우 25에서 24시간 내지 72시간 동안 배양하여 분리 균주가 생산하는 항균물질에 의한 감수성 균주의 생육저지환 생성 여부를 관찰하는 방법으로 수행하였다. 그 결과는 도 7~10에 나타내었다.
그람음성균에 대한 항균활성 결과 1.

그람음성균에 대한 항균활성 결과/
균주		 항균력(mm)
실시예 2
(건조물)		 실시예 3
(세포 외 다당체)		 실시예 4
(베타-글루칸)
Bacillus subtilis ATCC 6633 1.3 1.6 1.7
Escherichia coli ATCC 8739 0.8 0.3 0.9
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9017 1.2 0.5 1.5
그람 음성균에 대한 항균활성 결과 2.
그람양성균에 대한 항균활성 결과/균주 항균력(mm)
실시예 2
(건조물)		 실시예 3
(세포 외 다당체)		 실시예 4
(베타-글루칸)
Staphylococcus aureus subsp. aureus
ATCC 6538		 1.8 2.2 2.1
Propionibacterium acnes ATCC 6919 0.3 0.1 0.5
상기 표 12과 표 13에서 보는 바와 같이, 모두 그람음성균인 Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9017에 대해 높은 저해 활성을 나타내었고, 또한 그람양성균인 Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 6538, Propionibacterium acnes ATCC 6919에 대해서도 그람 음성균에 대한 항균 활성과 비교하여 높은 저해 활성을 나타내었다.
진균류에 대한 항진균 활성 결과.
진균류에 대한 항진균 활성 결과/균주 항균력(mm)
실시예 2
(건조물)		 실시예 3
(세포 외 다당체)		 실시예 4
(베타-글루칸)
Candida albicans ATCC 11006 0.7 0.8 1.1
Saccharomyces cerevisiae
KCTC 17299		 0.5 0.7 1.0
Microsporum audouinii
ATCC 12332		 0.3 0.7 1.1
Trichophyton rubrum ATCC 28188 0.6 1.1 1.7
상기 표 9를 참조하면, 효모에 대해 실험에서는 상황버섯, 표고버잎새버섯 균사체 배양물 배양물의 건조물, 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 배양물로부터 제조된 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸은 Candida albicans ATCC 11006, Saccharomyces cerevisiae KCTC 17299에 대해 생육 저해활성을 나타내었다. 무좀의 원인균인 Microsporum audouinii ATCC 12332, Trichophyton rubrum ATCC 28188에 대해서도 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 배양물의 건조물로부터 제조된 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸은 생육 저해활성을 나타내었다.
상기 실험결과에서 세균, 효모, 그리고 곰팡이에 대해 생육저해에 대한 활성은 베타-글루칸, 건조물, 세포 외 다당체 순으로 높게 나타났다.
상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물로 이루어진 연고 및 로션의 임상시험.
상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물로 이루어진 연고 및 로션에 대한 효과를 보기 위해 실시예 3에서 수득한 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 배양액, 농축액, 건조물, 세포 외 다당체, 베타글루칸 중 하나 이상의 함량이 0.1 ~ 10% 함유할 수 있으나 바람직하게는 0.1 ~ 5% 함유된 연고 및 로션 조성물을 만들었다.
이의 조성물은 다음과 같이 제조하였으나 이에 한정하지 않는다. 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 조성물로 이루어진 연고 및 로션의 효과를 확인하기 위해 연고 기제를 제조하여 아토피가 심한 10대 미만과 10대 각 10명씩 20명을 대상으로 하였으며, 1일 2회 아침, 저녁으로 1개월간 지속적으로 환부에 도포하도록 하여 효능 평가를 시행하였다.
<연고 및 로션 조성물>
상기 제조한 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물에 정제 수, 에탄올, 허브 추출물, 글리세린, 씨드 오일로 연고를 제조하였으나 조성물은 이에 한정하지 않는다.
상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물을 함유한 연고 및 로션 조성물 평가 결과.
물질별
함유 연고 및 로션 		가려움증 보습 염증개선 전체적 만족도
배양물 ++ ++ + ++
건조물 ++ ++ + +++
농축물 +++ +++ ++ +++
세포 외 다당체 베타글루칸 ++ + + ++
대조구 ++ ++ ++ ++
(+++ : 매우 좋음, ++ : 좋음, + : 개선효과, - : 변화없음)
아토피 피부염에 대한 효과를 보기 위해 실시예 3에서 수득한 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양액, 농축액, 건조물, 세포 외 다당체, 베타글루칸 중 하나 이상의 함량이 1~4% 함유하고 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분, 당귀, 백선피, 자초 및 한방제품 들을 첨가하여, 연고를 상온에서 서서히 식히면서 굳혀 본 발명에 따른 연고를 제조하였다.
상당수의 환자가 3일 후부터 가려움증 증상이 완화되기 시작하였고, 증상의 완화가 나타나는 시기나 완화 정도가 개인에 따라 차이는 있었으나 전반적으로 점차 증상이 개선되었다.
구체적인 임상례.
1) 연령, 성별 및 직업: 10대, 여, 학생
사용 기간 : 상기 실시예에서 제조된 농축액을 1일 2회 2개월간 아토피 피부염 부위에 바르게 하였다. 표10에 나타낸 바와 같이 상기 임상 대상자는 아토피 피부염 부위에 바르기 시작한 날부터 14일이 지나면서 효과가 나타나기 시작하여, 2개월 후에는 80% 이상이 아토피 피부염증이 감소하는 현상을 볼 수가 있었다.
2) 연령, 성별 및 직업: 10대, 남, 학생
사용 기간 : 상기 실시예에서 제조된 농축액을 1일 2회 2개월간 아토피 피부염 부위에 바르게 하였다. 도 11에 나타낸 바와 같이 상기 임상 대상자는 아토피 피부염 부위에 바르기 시작한 날부터 10일이 지나면서 효과가 나타나기 시작하여, 2개월 후에는 80% 이상이 아토피 피부염증이 감소하는 현상을 볼 수가 있었다.
본원은 전술한바 대로 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션에 있어 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물, 이의 건조물과 농축물, 천연 복합 성분으로부터 추출한 세포 외 다당체 및 베타글루칸이 상기 제품에 함유된 것을 본원의 구성으로 한다.
상기 표 10으로부터 본 발명은 시중에서 유통되고 있는 연고 및 로션 조성물 대비 항균효과가 우수하고, 이에 따른 개선 효과가 높은 제품을 제공할 수 있음을 알 수 있다.
본원은 이처럼 버섯 균사체를 주요성분으로 하는 천연 연고 및 로션의 제조방법으로 시중에서 유통되고 있는 일반적인 연고 및 로션 치료제에 비하여 효과가 우수하고 부작용이 적으며 가려움증제거와 보습에 높은 효과를 나타냄을 여러 실시 예에서 알 수 있었다.
본원은 전술한 바와 같이 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물 균사체의 액체배양은 생물 전환기술을 최적화함으로써 단시간에 효과적으로 유용물질을 생산할 수 있어서 경제성이 높다.
따라서 식품, 화장품, 바이오산업을 포함한 다양한 버섯 균사체 배양에 관한 연구, 특히 차별화된 다양한 기능성 물질의 생산 등이 우수한 종균의 선별 및 이를 이용한 생물전환기술의 최적화기술은 산업적으로 매우 유용하다는 것이다.
더불어 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 배양법은 고체배양과 액체 종 배양을 거친 후 대량 본 배양하는 단계를 포함하여 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분을 배양한 배양법은 교반형 생물반응기를 사용하게된다.
그리고 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 배양물, 이의 건조물 또는 농축물 및 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분으로부터 추출한 세포 외 다당체 및 베타글루칸이 상기 연고 및 로션에 함유되되. 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분을 배양한 균사체 건조물 및 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분으로부터 추출한 세포 외 다당체 및 베타글루칸은 배양 단계에서 공기 공급 및 교반을 위한 rpm은 0~500으로 조절하도록 한다.
더불어 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분을 배양한 균사체 건조물 및 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분으로부터 추출한 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 배양 단계에서 공기 공급량을 0.01~10vvm으로 조절하며 본 배양 단계에서 내압을 0.5~1.5kg/cm2으로 조절하며 상기 본 배양 단계에서 배양 중 탄소원을 첨가하며 배양 단계에서 탄소원 첨가시 배양액 1 L 당 탄소원을 0.1 ~ 10% 첨가하여 배양한다.
더불어 상기 아토피 피부염 연고 및 로션은 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 균사체 배양물, 추출물, 농축물, 건조물 중 적어도 하나 또는 하나 이상을 포함하는 구성을 갖는다.
또한, 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 치료용 연고 및 로션은 액체 배양한 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물. 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물의 농축산물. 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물의 건조물. 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물의 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 또는 베타글루칸 함량을 증가시키게 한다.
더불어 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분의 균사체 배양물, 추출물, 농축물, 건조물 중 적어도 하나 또는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 아토피 피부염 개선 연고 및 로션은 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 10중량 %가 함유되며 바람직하게는 0.05~ 5중량 % 가 함유되는 것을 구성으로 하며 본원에서는 수치에 대한 한계나 제어를 본원에서는 받지 않음을 밝혀둔다.
아울러 상기 연고 및 로션은 항균, 항진균, 항염증 및 가려움증을 완화 시키는 아토피 피부염 개선의 효과를 갖고 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 배양물, 이의 건조물 또는 농축물 및 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분으로부터 추출한 세포 외 다당체 및 베타글루칸 제조를 위한 배양에서, 탄소원은 말토오스글루코오스, 락토오스, 전분, 덱스트린, 수크로스, 프럭토스, 갈락토오스, 만노오스, 당분 중에서 선택된 적어도 어느 하나이며 질소원은 대두분, 면실분, 아미노산, 펩톤, 콘 스티프 리쿼 중에서 선택된 적어도 어느 하나가 투입되는 구성을 갖는다.
본원은 이처럼 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 치료제의 제조방법으로 시중에서 유통되고 있는 일반적인 아토피 치료제에 비하여 우수하고 효과가 우수하고 부작용이 적으며 피부 개선에 대해서 높은 효과를 나타냄을 여러 실시 예에서 알 수 있었다.
이상 설명한 본 발명은 본 발명이 속한 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의하여 다양한 변형이나 응용이 가능하며, 본 발명에 따른 기술적 사상의 범위는 아래의 특허청구범위에 의하여 정해져야 할 것이다.
본원은 특히, 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분 균사체의 액체배양은 생물 전환기술을 최적화함으로써 단시간에 효과적으로 유용물질을 생산할 수 있어서 경제성이 높다. 따라서 식품, 화장품, 바이오산업을 포함한 다양한 버섯 균사체 배양에 관한 연구, 특히 차별화된 다양한 기능성 물질의 생산 등이 우수한 종균의 선별 및 이를 이용한 생물전환기술의 최적화기술은 산업적으로 매우 유용하다는 것이다.
본 발명자들은 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 성분을 아토피 피부염 개선용 연고 및 로션에 함유시켜, 피부염증 및 가려움증을 개선에 유용한 유효 물질로서 이용할 수 있다.

Claims (13)

  1. 액상, 젤, 겔, 크림, 제형, 로션 중 선택된 어느 한 형태로 이루어진 아토피 연고 및 로션 조성물에 있어 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 천연 복합 버섯 배양물, 이의 건조물과 농축물로 이루어진 세포 외 다당체 및 베타글루칸이 상기 연고 및 로션 조성물에 함유되되; 상기 연고 및 로션 배양법은 고체배양과 액체 종 배양을 거친 후 대량 본 배양하는 단계를 포함하여 완성되는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  2. 청구항 제1항 또는 2항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션을 배양한 배양법은 교반형 생물반응기를 사용하되; 상기 세포 외 다당체 및 베타글루칸은 배양 단계에서 공기 공급 및 교반을 위한 rpm은 0~500으로 조절하며 상기 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 배양 단계에서 공기 공급량을 0.01~2 vvm으로 조절하며 본 배양 단계에서 내압을 0.5~1.5kg/cm2으로 조절하는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  3. 청구항 제1항 내지 2항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 본 배양 단계에서 탄소원 첨가시 배양액 1 L 당 탄소원을 0.1 ~ 10% 첨가하여 배양하며 상기 연고 및 로션은 균사체 배양물, 추출물, 농축물, 건조물 중 적어도 하나 또는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  4. 청구항 제1항 또는 3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션은 균사체 배양물, 추출물, 농축물, 건조물 중 적어도 하나 또는 하나 이상을 포함하되; 상기 연고 및 로션 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 10 중량%가 함유되는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  5. 청구항 제1항 또는 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체의 세포 외 다당체 및 베타글루칸 제조를 위한 배양에 있어서, 탄소원은 말토오스글루코오스, 락토오스, 전분, 덱스트린, 수크로스, 프럭토스, 갈락토오스, 만노오스, 당분 중에서 선택된 적어도 어느 하나이며 질소원은 대두분, 면실분, 아미노산, 펩톤, 콘 스티프 리쿼 중에서 선택된 적어도 어느 하나가 투입되는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  6. 액상 크림 젤, 갤. 제형 중 선택된 어느 하나의 형태로 이루어진 연고 및 로션에 있어서, 상황버섯 균사체, 표고버섯 균사체, 잎새버섯 균사체를 배양한 버섯 균사체 배양물, 농축물, 이의 건조물 중 택일 된 어느 하나의 버섯 균사체 물질이 상기 연고 및 로션에 투입되되;
    연고 및 로션의 전체중량 100W t(%)(중량%) 또는 중량비에 대하여 상기 코코넛 또는 팜유 및 야자 유지분 또는 연고 및 크림을 제조하는 베이스 90.60 중량%를 기반으로 여기에 상황버섯 0,50 wt(%)와 표고버섯 0,50 wt(%)와 잎새버섯 0,50 wt(%)와 더불어 아보카드 오일 0,50 wt(%) 글리세린 2.00W t(%), 포도씨 오일 0,50 wt(%), 살구씨 오일 0,50 wt(%),하수오 1.0 wt(%), 한련초 0,50 wt(%), 여정실 0,50 wt(%)를 투입하며
    여기에 오미자 추출물 0,30 wt(%), 피마자씨 추출물 0,30 wt(%), 쑥 추출물 0,30 wt(%), 석창포 추출물 0,30 wt(%), 고삼추출물 0,30 wt(%), 은행잎 추출물 0,30 wt(%), 박하잎 추출물 0,30 wt(%), 천궁 추출물 0,30 wt(%)가 상기 연고 및 로션의 제조공정에서 적어도 하나 이상이 투입된 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  7. 청구항 제6항에 있어서,
    상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션은 허브 오일이 상기 연고 및 로션 베이스 100g당 0.1 ㎖∼10㎖ 혼합하고 상기 연고 및 로션은 액체 배양한 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물; 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물의 농축물; 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물의 건조물; 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물의 건조물에 포함되어 있는 세포 외 다당체 또는 베타글루칸 함량을 증가시키는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  8. 청구항 제7항에 있어서,
    상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물에 투입된 세포 외 다당체 또는 베타-글루칸은 연고 및 로션 조성물 총 중량% 또는 중량비에 대하여 0.05 내지 5 중량%가 함유되되; 상기 연고 및 로션 100중량 % 에 대하여 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체가 0.01 ~ 10.0 중량%가 함유되며, 여기에 야자, 코코넛, 팜유 오일, 시어 버터, 아보카드유, 올리브유 중 적어도 어느 하나의 오일 80 ~ 95 중량%에 일정량의 원적외선이 방사된 정제 수를 일정량 첨가하여 제조되는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  9. 청구항 제8항에 있어서,
    상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체를 배양한 균사체 건조물 및 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 추출물은 연고 및 로션 베이스 총 중량% 또는 중량비에 대하여 0.05 내지 5 중량%가 함유하고 상기 버섯 균사체를 배양한 균사체 건조물 및 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 추출물은 연고 및 로션베이스 총 중량에 대하여 0.05 내지 5 중량% 또는 0.01 내지 10중량 %가 함유되며 상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물, 농축물, 이의 건조물 및 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 추출물은 연고 및 로션베이스 총 중량에 대하여 0.05 내지 5 중량%가 함유되는 것을 특징으로 하는 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물로 이루어진 연고 및 로션.
  10. 청구항 제1항 또는 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물, 농축물, 이의 건조물 및 세포 외 다당체 및 베타글루칸의 추출물 배양에 있어서, 탄소원은 말토오스글루코오스, 락토오스, 전분, 덱스트린, 수크로스, 프럭토스, 갈락토오스, 만노오스, 당분 중에서 선택된 적어도 어느 하나이며 질소원은 대두분, 면실분, 아미노산, 펩톤, 콘 스티프 리쿼 중에서 선택된 적어도 어느 하나가 상기 연고 및 로션에 투입되는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  11. 청구항 제10항에 있어서,
    상기 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물은 연고 및 로션 전체 중량 % 또는 중량비에 대하여 상황버섯 1중량 %, 표고버섯 0.5중량 % 및 잎새버섯 0.5중량 %가 연고 및 로션 조성물에 투입되며 상기 연고 및 로션에 어성초, 금전초, 차전초, 느릅나무,상엽의 추출물과 더불어 포도씨 오일, 살구씨 오일, 아보카드씨 오일, 피마자씨 오일 중 선택된 적어도 어느 하나 이상의 씨앗 오일이 상기 연고 및 로션에 일정량 혼합되되;
    상기 연고 및 로션 조성물 전체 중량%에 대하여 포도씨 오일 0.5중량 %, 살구씨 오일 0.5중량 %, 아보카드씨 오일 0.5중량 % 및 피마자씨 오일 0.5중량 %가 상기 연고 및 로션 조성물에 더 포함하는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
  12. 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션에 대하여 약재 추출물이 투입되되; 상기 약재추출물은 상기 연고 및 로션 조성물 전체 중량%에 대하여 하수오 0.1 ~ 3중량 %, 한련초 0.1 ~ 3 중량%, 여 정실 0.1 ~ 3 중량%, 고삼 추출물 0.1 ~ 3 중량%, 석창포 추출물 0.1 ~ 3 중량%, 다시마추출물 0.1 ~ 3 중량% 및 은행잎 추출물 0.1 ~ 3 중량% 를 더 포함하되; 상기 연고 및 로션 조성물은 하수오,한련초,여정실,금전초의 꽃, 잎 및 줄기의 추출물을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯 균사체 배양물로 이루어진 연고 및 로션.
  13. 코코넛 또는 팜유 유지분으로 이루어지는 연고 및 로션에 있어서 상황버섯 균사체, 표고버섯 균사체, 잎새버섯 균사체를 배양한 버섯 균사체 배양물, 농축물, 이의 건조물 중 택일 된 어느 하나의 버섯 균사체 물질이 상기 연고및 로션에 투입되되;
    상기 연고 및 로션은 코코넛 또는 야자나 팜유 유지분말 100g당 원적외선 수 19g 비율로 혼합하여 고체화 공정과;
    글리세린/포도씨 오일/살구씨 오일/아보카드씨 오일 등의 분말에 오미자 추출물, 피마자씨 오일, 쑥 추출물, 석창포 추출물, 고심 추출물, 상황버섯, 표고버섯, 잎새버섯의 복합 균사체 배양물, 한련초 분말, 여정실(광나무열매)분말, 하수오 분말 은행잎 추출물, 박하잎 추출물, 천궁 추출물 원료에 원적외선 수를 넣고 영상 40-50도에서 혼합하는 혼합공정과;
    상기 연고 및 로션 조성물을 연합 공정 후 미세분말로 분쇄하는 분쇄 공정과;
    여기에 원적외선 수를 투입하여 상기 분쇄 재료들과 교반 공정을 거친 후 완성된 연고 및 로션을 튜브 및 케이스 및 박스포장을 하여 완성하는 것을 특징으로 하는 천연 복합 버섯 성분이 함유된 아토피 개선 연고 및 로션.
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