KR20180108136A - 항-gdf15 항체 및 그 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 GDF15 (Growth/differentiation factor 15)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 그 용도에 관한 것이다. 더욱 상세하게, 본 발명은 특정 서열의 중쇄 CDR 및 경쇄 CDR을 포함하는 GDF15에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 GDF15 진단용 조성물, GDF15 진단용 키트, 악액질 치료용 조성물 및 이의 치료방법에 관한 것이다.

Description

항-GDF15 항체 및 그 용도 {Anti-Growth/differentiation factor 15 Antibody and Uses Thereof}
본 발명은 GDF15 (Growth/differentiation factor 15)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 그 용도에 관한 것이다. 더욱 상세하게, 본 발명은 특정 서열의 중쇄 CDR 및 경쇄 CDR을 포함하는 GDF15에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 GDF15 진단용 조성물, GDF15 진단용 키트, 악액질 치료용 조성물 및 이의 치료방법에 관한 것이다.
GDF15 (Growth/differentiation factor 15)는 베타-형질전환 성장 인자 (transforming growth factor-β)군에 속하는 단백질로, 대식세포-억제 사이토카인-1(MIC-1)로 밝혀졌으며, 후에 태반 형질전환 성장 인자, 태반 뼈 형성 단백질, 비-스테로이드성 항염증성 약물-활성화된 유전자-1, 및 전립선-유도 인자로서 규명되었다. GDF-15는 불활성 전구체 단백질로 합성되고, 이황화결합에 의해 동종이량체화되어 세포로부터 환경 내로 분비되는 단백질이다. GDF-15는 N-말단 프로-펩타이드의 단백분해성 절단시, ~28 kDa 이량체성 단백질로서 분비된다.
GDF15 전구체는 COOH-말단 아미노산 서열을 통해 세포외 매트릭스에 공유 결합하고, 따라서 세포의 외부에 존재한다. 완전 처리된 (성숙) 형태의 GDF-15는 가용성이고 혈청에서 보인다. 따라서, 잠재적인 표적 세포가 가용성 GDF-15 리간드에 대한 수용체를 발현한다면, 혈액 순환계에 연결된 신체 내의 임의의 표적 세포에 대해 작용할 수 있다.
다수의 악성 암 (특히, 침습성 뇌암, 흑색종, 폐암, 위장 종양, 결장암, 췌장암, 전립선암 및 유방암의 경우 혈청에서 증가된 레벨로 GDF-15가 발현된다. 마찬가지로, 화학내성은 높은 GDF-15 발현과 상관관계가 있을 수 있고, 높은 GDF-15 발현 레벨과 암의 예후 사이에 상관관계가 역시 보고된 바 있다.
한편, TGF-β 슈퍼패밀리의 구성원인 GDF15을 매개로 다양한 질환에 의해 유발되는 악액질의 매개자임이 보고된 바 있다. 악액질은 암, AIDS, 만성 심부전(또한, 울혈성 심부전으로도 알려짐), 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 만성 신장 질환, 결핵, 패혈증 및 기타 형태의 전신성 염증을 포함하는 다수의 질환에 관련된 약화 대사 증후군이다. 특히, 악액질은 비자발적 체중 소실에 관련된 소모성 장애이고, 전신성 염증 및/또는 급성 염증 반응과 연관될 수도 있다. 근육 질량의 소실 뿐 아니라, 지방 질량의 소실은 종종 악액질의 주요한 임상적 특징이다. 근육 질량의 감소에 의한 근육감소증은 힘의 소실, 넘어지는 경향의 증가 및 자율성의 소실을 포함하는 기능적인 손상을 야기할 수 있다. 호흡 기능 역시 손상될 수 있어서 감소된 폐활량을 나타낼 수 있다. 근육감소증은 대개 노인성 질환이지만, 근육감소증의 발달은 근육의 불용 및 영양부족과 연관될 수도 있고, 악액질과 동시에 일어날 수 있다. 악액질은 전악액질, 악액질 및 불응성 악액질로 명명된 단계를 거쳐 진행될 수 있다.
이러한 기술적 배경하에서, 본 출원의 발명자들은 GDF15에 특이적으로 결합하는 신규 항체를 개발하고, 이러한 항체를 응용하여 GDF15의 발현 여부를 진단 및 GDF15 발현에 의해 유발되는 질환을 치료할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 GDF15에 특이적으로 결합하는 신규 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 이를 포함하는 재조합 발현 벡터 및 이를 포함하는 숙주세포 및 상기 항체의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 GDF15 진단용 조성물 및 GDF15 진단용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 악액질 치료용 조성물 및 이의 치료방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 해결하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1, 4, 7, 9, 12 및 15로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 CDR1; 서열번호 2, 5, 8, 10, 13 및 16으로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 CDR2; 및 서열번호 3, 6, 11, 14 및 17로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 CDR3, 및 서열번호 18, 21, 26 및 31로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 CDR1; 서열번호 19, 22, 24, 27, 29 및 32로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 CDR2; 및 서열번호 20, 23, 25, 28, 30 및 33으로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 CDR3를 포함하는 GDF15 (Growth/differentiation factor 15)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 재조합 발현 벡터로 형질전환된 숙주세포를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 숙주세포를 배양하여 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생성하는 단계; 및 상기 생성된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 회수하여 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 항체의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 GDF15 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 GDF15 진단용 키트를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 악액질 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 악액질의 치료방법을 제공한다.
본 발명의 다른 기술적 특징 및 실시예는 하기 상세한 설명 및 후술하는 청구항에서 보다 명백하게 기술될 것이다.
본 발명에 따른 GDF15에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GDF15에 대한 우수한 친화도 및 결합력을 나타내며, 목적하는 GDF15 발현 여부 진단 및 GDF15 발현에 의한 질환의 치료에 적합하게 사용될 수 있다.
도 1은 GDF15 scFv 항체 선별을 위한 bio-panning 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 GDF15 scFv 항체 선별을 위한 dot-blot 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 GDF15 scFv 항체 선별을 위한 ELISA 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 ELISA 분석법의 재현성 검증 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 GDF15 scFv 항체 발현 여부를 SDS-page 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 GDF15 scFv 항체 민감도 분석 결과를 나타낸 것이다.
본 발명은 일 관점에서, 서열번호 1, 4, 7, 9, 12 및 15로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 CDR1; 서열번호 2, 5, 8, 10, 13 및 16으로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 CDR2; 및 서열번호 3, 6, 11, 14 및 17로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 CDR3, 및 서열번호 18, 21, 26 및 31로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 CDR1; 서열번호 19, 22, 24, 27, 29 및 32로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 CDR2; 및 서열번호 20, 23, 25, 28, 30 및 33으로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 CDR3를 포함하는 GDF15 (Growth/differentiation factor 15)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 관한 것이다.
본 발명에서 사용된 용어 "항체"는 항원을 특이적으로 인식하여 특정 항원에 면역학적으로 반응하는 면역글로불린 분자를 포함하는 단백질 분자를 의미하며, GDF15에 특이적으로 결합하는 완전한 항체 형태뿐 아니라, 상기 항체 분자의 항원 결합 단편도 포함된다.
전체 항체(whole antibody)는 경쇄와 중쇄 사이에 이황화 결합(disulfide bond)으로 결합된 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄로 구성되어 있다. 포유류에서는 IgA, IgD, IgE, IgM, IgG, 및 IgG으로 알려진 5개의 항체 아형이 있으며, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 4개의 아형으로 추가로 분류된다.
용어 "항체 절편(antibody fragment)"은 적어도 항원-결합 성능을 유지하는 절편을 가리키며, Fab, F(ab'), F(ab')2, 및 Fv을 포함할 수 있다. Fab는 항원 결합 부위를 가진, 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 영역, 경쇄의 불변 도메인, 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)으로 구성되어 있다. Fab'는 중쇄의 CH1 도메인의 C-말단에 적어도 1개의 시스테인 잔기를 추가로 포함한다는 점에서 Fab과 다르다. F(ab')2는 힌지 부위(hinge region)의 시스테인 잔기 사이의 이황화 결합을 가진 두 개의 Fab' 분자로 구성된다. 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 부위로 구성된 Fv(가변 절편)는 부모 면역글로불린의 원래의 특이성을 포함하는 가장 작은 항체 절편이다. 이황화-안정화된 Fv(Disulfide-stabilized Fv, dsFv)는 이황화 결합을 통하여 경쇄의 가변 부위에 중쇄의 가변 부위를 결합시킴으로써 형성된다. 단쇄 Fv (scFV)는, 중쇄와 경쇄의 각각의 가변부위에서 펩티드 링커에 의하여 공유결합적으로 연결된 Fv이다. 프로테아제(예를 들면, Fab 또는 F(ab')2를 제공하는 파파인(papain) 또는 펩신으로 전체 항체를 프로테아제 처리하여 이들 항체 절편을 얻을 수 있으며, 바람직하게는 유전자 재조합 기술에 의하여 구축할 수 있다.
하나의 실시예에서, 본 발명에 따른 항체는 Fv 형태(예컨대, scFv)이거나, 완전한 항체 형태이다. 또한, 중쇄 불변영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 또는 엡실론(ε) 중의 어느 한 이소타입(isotype)으로부터 선택될 수 있다. 경쇄 불변영역은 카파(κ) 또는 람다(λ) 형일 수 있다.
"중쇄"는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변영역 도메인 VH 및 3 개의 불변영역 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 전체길이 중쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어, "경쇄"는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변영역 도메인 VL 및 불변영역 도메인 CL을 포함하는 전체길이 경쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다.
일반적으로, 면역글로불린은 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄로 구성된 기본 구조 단위를 가진다. 중쇄 각각은 1개의 가변영역 및 3개의 불변 도메인으로 구성되어 있는 반면에 각각의 경쇄는 1개의 가변영역 및 1개의 불변 도메인으로 구성되어 있다. 중쇄 및 경쇄 각각의 가변영역은 3개의 상보성-결정 부위(complementarity-determining regions, 이후, "CDRs"로 칭함) 및 4개의 프레임워크 부위를 포함한다. CDRs은 항체의 에피토프에 결합하기 위하여 기능한다. 각 사슬 상의 CDRs는 N 말단으로부터 시작해서 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 순서대로 배열된다. 이들은 위치한 사슬에 의하여 구별된다.
본 발명에 따른 항체는 예를 들어, 서열번호 1의 CDR1, 서열번호 2의 CDR2 및 서열번호 3의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 18의 CDR1, 서열번호 19의 CDR2 및 서열번호 20의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역;
서열번호 4의 CDR1, 서열번호 5의 CDR2 및 서열번호 6의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 21의 CDR1, 서열번호 22의 CDR2 및 서열번호 23의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역;
서열번호 7의 CDR1, 서열번호 8의 CDR2 및 서열번호 6의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 21의 CDR1, 서열번호 24의 CDR2 및 서열번호 25의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역;
서열번호 9의 CDR1, 서열번호 10의 CDR2 및 서열번호 11의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 26의 CDR1, 서열번호 27의 CDR2 및 서열번호 28의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역;
서열번호 12의 CDR1, 서열번호 13의 CDR2 및 서열번호 14의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 18의 CDR1, 서열번호 29의 CDR2 및 서열번호 30의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역; 또는
서열번호 15의 CDR1, 서열번호 16의 CDR2 및 서열번호 17의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 31의 CDR1, 서열번호 32의 CDR2 및 서열번호 33의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 항체는 서열번호 34 내지 39로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 가변영역 프레임워크 영역 (FR); 및 서열번호 40 내지 46으로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 가변영역 프레임워크 영역 (FR)을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 항체는 서열번호 47 내지 52로 구성된 군에서 선택된 경쇄 가변영역 및 서열번호 53내지 58로 구성된 군에서 선택된 중쇄 가변영역을 포함할 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 항체는 서열번호 47의 경쇄 가변영역 및 서열번호 53의 중쇄 가변영역; 서열번호 48의 경쇄 가변영역 및 서열번호 54의 중쇄 가변영역; 서열번호 49의 경쇄 가변영역 및 서열번호 55의 중쇄 가변영역; 서열번호 50의 경쇄 가변영역 및 서열번호 56의 중쇄 가변영역; 서열번호 51의 경쇄 가변영역 및 서열번호 57의 중쇄 가변영역; 또는 서열번호 52의 경쇄 가변영역 및 서열번호 58의 중쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 전체 항체(whole antibodies) 및 항체 절편을 포함한다. 또한, 키메라 항체(e.g., 인간화된 쥐 항체), 2가 또는 2중 특이성 분자(bispecific molecules)(e.g., 2중 특이성 항체), 다이어바디(diabodies), 트리어바디(triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies)는 본 발명에 사용되는 항체의 범위에 속한다.
여기에 사용된 용어 "모노클로날 항체(monoclonal antibody)"는 실질적으로 동일한 집단의 항체로부터 수득하고, 단일 에피토프에 대한 결합 특이성 및 친화성을 보이는, 균일한 분자 조성을 가진 항체 분자를 가리킨다.
"인간화" 형태의 비-인간 (예: 뮤린) 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는, 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기를 목적하는 특이성, 친화성 및 능력을 보유하고 있는 비-인간 종 (공여자 항체), 예를 들어 마우스, 랫트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 초가변 영역로부터의 잔기로 대체시킨 인간 면역글로불린 (수용자 항체)이다.
"인간 항체(human antibody)"는 CDRs, 프레임워크 부위 등을 포함하여, 인간 면역글로불린의 모든 성분의 아미노산 서열로 전체적으로 구성된 분자이다. 인간 질환의 치료법에서 인간 항체는 적어도 3가지의 잠재적인 장점을 가지고 있다. 첫째, 인간 항체는 인간 면역체계와 보다 바람직하게 상호작용하여 효과적으로 보체의존성 세포독성반응(complement-dependent cytotoxicity, CDC) 또는 항체의존성 세포-매개 세포독성반응(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)에 의한 타겟 세포의 소멸을 매개한다. 둘째, 다른 이점으로는 인간 면역체계가 인간 항체를 외부 물질(exogenic molecule)로 인식하지 않아 인체내 투여시 키메라 항체 또는 인간화 항체의 경우 발생할 수 있는 면역복합체(immune complex) 형성에 의한 부작용 (adverse effect)을 극소화할 수 있다. 셋째, 이러한 면역복합체(immune complex) 형성이 인체 내 투여한 키메라 항체 또는 인간화 항체 제제의 짧은 반감기의 원인이 될 수 있는 반면 인간 항체의 반감기는 보다 소량 또는 적은 투여 빈도로 투여되는 경우에도 인간 면역계에서 자연적으로 발생하는 항체와 유사하다.
본 발명의 항체가 일정한 도메인을 포함할 경우, IgG, IgA, IgD, IgE, IgM 또는 이들의 조합 또는 하이브리드로부터 유래할 수 있다.
여기에 사용된 "조합(combination)"은 동일한 기원의 단쇄 면역글로불린 Fc 절편을 코딩하는 폴리펩티드가 다른 기원의 단쇄 폴리펩티드에 결합되어 다이머 또는 멀티머를 생성하는 것을 의미한다. 이는 다이머 또는 멀티머는 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM의 불변 도메인으로 구성된 군에서 선택된 2개 또는 그 이상의 불변 도메인으로부터 형성될 수 있다는 것을 나타낸다.
여기에 사용된 용어 "하이브리드(hybrid)"는 다른 기원의 2개 또는 그 이상의 중쇄 불변 도메인을 코딩하는 서열이 단쇄 면역글로불린 중쇄 불변 도메인 내에 존재한다는 것을 의미한다. 예를 들면, 도메인 하이브리드는 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM의 CH1, CH2, CH3 및 CH4로 구성된 군에서 선택된 1개 내지 4개의 도메인으로 구성될 수 있다. 또한, 하이브리드의 조합은 IgG 아형(isotype)인 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 중쇄 불변 도메인으로부터 생성될 수 있다. 하이브리드의 조합은 상기에 정의한 바와 같다.
본 발명의 항체 또는 항체 단편은 GDF15를 특이적으로 인식할 수 있는 범위 내에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 항-GDF15 항체의 서열뿐만 아니라, 이의 생물학적 균등물도 포함할 수 있다. 예를 들면, 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성을 보다 더 개선시키기 위하여 항체의 아미노산 서열에 추가적인 변화를 줄 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 잔기의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 이러한 아미노산 변이는 아미노산 곁사슬(side chain) 치환체의 상대적 유사성, 예컨대, 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초하여 이루어진다. 아미노산 곁사슬 치환체의 크기, 모양 및 종류에 대한 분석에 의하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘은 모두 양전하를 띤 염기성(basic) 잔기; 알라닌, 글라이신과 세린은 유사한 작은 크기(small in size)의 아미노산; 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 방향성(aromatic) 곁사슬을 갖는 아미노산으로 분류되는 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 고려 사항에 기초하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘; 알라닌, 글라이신과 세린; 그리고 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 생물학적으로 기능 균등물이라 할 수 있다.
변이를 도입하는 데 있어서, 아미노산의 소수성 인덱스(hydropathic index)가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 소수성과 전하에 따라 소수성 인덱스가 부여되어 있다: 아이소류신(+4.5); 발린(+4.2); 류신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스타인(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글라이신(-0.4); 트레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 타이로신(-1.3); 프롤린(-1.6); 히스티딘 (-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민(-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴 (-3.5); 라이신(-3.9); 및 아르기닌(-4.5).
단백질의 상호적인 생물학적 기능(interactive biological function)을 부여하는 데 있어서 소수성 아미노산 인덱스는 매우 중요하다. 유사한 소수성 인덱스를 가지는 아미노산으로 치환하여야 유사한 생물학적 활성을 보유할 수 있다는 것은 공지된 사실이다. 소수성 인덱스를 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 소수성 인덱스 차이를 나타내는 아미노산 사이에 치환을 한다.
한편, 유사한 친수성 값(hydrophilicity value)을 가지는 아미노산 사이의 치환이 균등한 생물학적 활성을 갖는 단백질을 초래한다는 것도 잘 알려져 있다. 미국 특허 제4,554,101호에 개시된 바와 같이, 다음의 친수성 값이 각각의 아미노산 잔기에 부여되어 있다: 아르기닌(+3.0); 라이신(+3.0); 아스파르테이트(+3.0± 1); 글루타메이트(+3.0±1); 세린(+0.3); 아스파라긴(+0.2); 글루타민(+0.2); 글라이신(0); 트레오닌(-0.4); 프롤린(-0.5±1); 알라닌(-0.5); 히스티딘(-0.5); 시스테인(-1.0); 메티오닌(-1.3); 발린(-1.5); 류신(-1.8); 아이소류신 (-1.8); 타이로신(-2.3); 페닐알라닌(-2.5); 트립토판(-3.4).
분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다(H. Neurath and R.L. Hill (Eds), "The Proteins", Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu 및 Asp/Gly 간의 교환이다.
상술한 생물학적 균등 활성을 갖는 변이를 고려한다면, 본 발명의 항체 또는 이를 코딩하는 뉴클레오티드 분자는 서열번호에 기재된 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 최소 61%의 상동성, 보다 바람직하게는 70% 이상의 상동성, 80% 이상의 상동성, 90% 이상의 상동성, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다. 서열비교를 위한 얼라인먼트 방법은 당업계에 공지되어 있다. NCBI Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)은 NBCI 등에서 접근 가능하며, 인터넷 상에서 blastp, blasm, blastx, tblastn 및 tblastx와 같은 서열 분석 프로그램과 연동되어 이용할 수 있다. BLSAT는 www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/에서 접속 가능하다. 이 프로그램을 이용한 서열 상동성 비교 방법은 www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/blast_ help.html에서 확인할 수 있다.
본 발명은 다른 관점에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 분리하여 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 재조합적으로 생산할 수 있다. 폴리뉴클레오티드(polynucleotide)를 분리하고, 이를 복제(replication) 가능한 벡터 내로 삽입하여 추가로 클로닝하거나 (DNA의 증폭) 또는 추가로 발현시킨다. 이를 바탕으로, 본 발명은 또 다른 관점에서 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터에 관한 것이다.
"뉴클레오티드"는 DNA(gDNA 및 cDNA) 및 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 가지며, 뉴클레오티드에서 기본 구성단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다. 본 발명의 중쇄 및 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 서열은 변형될 수 있다. 상기 변형은 뉴클레오타이드의 추가, 결실, 또는 비보존적 치환 또는 보존적 치환을 포함한다.
하나의 실시예에서, 본 발명은 서열번호 59 내지 64로 구성된 군에서 선택된 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 서열번호 65 내지 70으로 구성된 군에서 선택된 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 항체는 서열번호 59의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 65의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열번호 60의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 66의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열번호 61의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 67의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열번호 62의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 68의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열번호 63의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 69의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 또는 서열번호 64의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 70의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
본 발명은 상기 뉴클레오타이드 서열에 대하여 실질적인 동일성을 나타내는 뉴클레오타이드 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 실질적인 동일성은 본 발명의 뉴클레오타이드 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인 된 서열을 분석한 경우에, 최소 70% 이상의 상동성, 80% 이상의 상동성, 90% 이상의 상동성, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다.
상기 항체를 암호화하는 DNA는 통상적인 과정을 사용하여 (예를 들어, 항체의 중쇄와 경쇄를 암호화하는 DNA와 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 용이하게 분리 또는 합성한다. 많은 벡터가 입수 가능하고, 벡터 성분에는 일반적으로, 아래에 열거한 것들 중의 하나 이상이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다: 1) 신호 서열(sigal sequence, signal peptide) 2) 복제 기점(replication origin) 3) 하나 이상의 마커 유전자 4) 증강인자 요소(enhancer elements) 5) 프로모터, 및 전사 종결 서열(transcription termination sequences).
본 명세서에서 사용되는 용어, "벡터"는 숙주세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단으로 플라스미드 벡터; 코스미드 벡터; 박테리오파지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터(AAV, adeno-associated virus vector) 같은 바이러스 벡터 등을 포함한다. 상기 벡터에서 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 프로모터와 작동적으로 연결되어 있다.
"작동적으로 연결(operably linked)"은 폴리뉴클레오티드 발현조절서열(예: 프로모터, 시그널 서열, 또는 전사조절인자 결합 위치의 어레이)과 다른 폴리뉴클레오티드 서열 사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 의해 상기 조절서열은 상기 다른 폴리뉴클레오티드 서열의 전사(transcription 및/또는 해독(translation)을 조절하게 된다.
원핵세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터 (예컨대, tac 프로모터, lac 프로모터, lacUV5 프로모터, lpp 프로모터, pLλ 프로모터, pRλ프로모터, rac5 프로모터, amp 프로모터, recA 프로모터, SP6 프로모터, trp 프로모터 및 T7 프로모터 등), 해독의 개시(initiation of translation)를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결(translation termination) 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 또한, 예를 들어, 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 포유동물 세포의 지놈으로부터 유래된 프로모터 (예: 메탈로티오닌 프로모터, β-액틴 프로모터, 사람 헤로글로빈 프로모터 및 사람 근육 크레아틴 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터 (예: 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40프로모터, 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, HSV의 tk 프로모터, 마우스 유방종양 바이러스(MMTV) 프로모터, HIV의 LTR 프로모터, 몰로니 바이러스의 프로모터엡스타인바 바이러스(EBV)의 프로모터, 로우스 사코마 바이러스(RSV)의 프로모터 및 EF 1 alpha 프로모터 및 이들의 변이체가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.
경우에 따라서, 벡터는 그로부터 발현되는 항체의 정제를 용이하게 하기 위하여 다른 서열과 융합될 수도 있다. 융합되는 서열은, 예컨대 글루타티온 S-트랜스퍼라제(Pharmacia, USA), 말토스 결합 단백질(NEB, USA), FLAG(IBI, USA) 및 6x His(hexahistidine; Quiagen, USA) 등이 있다.
상기 벡터는 선택표지로서 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함하며, 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 게네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 언급된 벡터로 형질전환된 재조합 숙주세포에 관한 것이다. 본 발명의 항체를 생성시키기 위해 사용된 세포는 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵생물 세포일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
에스케리치아 콜라이(Escherichia coli), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 및 바실러스 튜린겐시스(Bacillus thuringensis)와 같은 바실러스 속 균주, 스트렙토마이세스(Streptomyces), 슈도모나스(Pseudomonas)(예를 들면, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida)), 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis) 및 스타필로코쿠스(Staphylococcus) (예를 들면, 스타필로코쿠스 카르노수스(Staphylocus carnosus))와 같은 원핵 숙주세포를 이용할 수 있다.
다만, 동물 세포에 대한 관심이 가장 크며, 유용한 숙주 세포주의 예는 COS-7, BHK, CHO, CHOK1, DXB-11, DG-44, CHO/-DHFR, CV1, COS-7, HEK293, BHK, TM4, VERO, HELA, MDCK, BRL 3A, W138, Hep G2, SK-Hep, MMT, TRI, MRC 5, FS4, 3T3, RIN, A549, PC12, K562, PER.C6, SP2/0, NS-0, U20S, 또는 HT1080일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 재조합 숙주세포를 배양하여 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생성하는 단계; 및 상기 생성된 항체를 회수하여 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 제조방법에 관한 것이다.
상기 세포는 각종 배지에서 배양할 수 있다. 시판용 배지 중 제한 없이 배양 배지로서 사용할 수 있다. 당업자에게 공지되어 있는 기타 모든 필수 보충물이 적당한 농도로 포함될 수도 있다. 배양 조건, 예를 들어 온도, pH 등이 발현을 위해 선별된 숙주 세포와 함께 이미 사용되고 있고, 이는 당업자에게 명백할 것이다.
상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 회수는 예를 들어 원심 분리 또는 한외여과(ultrafiltration)에 의해 불순물을 제거하고, 그 결과물을 예를 들어 친화(affinity) 크로마토그래피 등을 이용하여 정제할 수 있다. 추가의 기타 정제 기술 예를 들어 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호 작용(hydrophobic interation) 크로마토그래피, 히드록시아파타이트(Hydroxyapatite, HA) 크로마토그래피 등이 사용될 수 있다.
본 발명은 다른 관점에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 GDF15 진단용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 항체를 통해 샘플 중 GDF15 발현 여부를 특이적으로 진단할 수 있다.
본 발명에 따른 "진단(diagnosis)"은 병리적 상태의 존재 또는 성질의 평가를 가리킨다. 본 발명의 목적과 관련하여 진단은 GDF15의 발현 여부를 결정하는 것이다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 GDF15 진단용 키트에 관한 것이다.
본 발명의 키트는 GDF15 마커를 선택적으로 인식하는 항체를 포함한다. 분석법에 적합한 하나 또는 그 이상의 조성물, 용액, 또는 기기 뿐만 아니라, 포함할 수 있다.
키트는 매트릭스, 적절한 버퍼 용액, 컬러링 효소 (coloring enzyme) 또는 형광물질로 라벨링된 2차 항체, 항체의 면역학적 검출을 위한 칼라링 기질 등을 포함할 수 있다. 상기 매트릭스에 대해서는, 니트로셀룰로오스 멤브레인, 폴리비닐수지로 제조된 96웰 플레이트, 폴리스티렌수지로 제조된 96웰 플레이트, 및 슬라이드 글라스가 사용될 수 있다. 컬러링 효소에 대해서는 퍼옥시다아제 및 염기성 포스파타제가 사용될 수 있다. 형광물질에 대해서는 FITC 및 RITC가 사용될 수 있으며, 컬러링 기질 용액에 대해서는 ABTS (2,2'-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)), OPD (o-phenylenediamine), 또는 TMB (tetramethyl benzidine)이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물 또는 키트를 적용 가능한 샘플은 예를 들어 세포, 조직, 생검, 파라핀조직, 혈액, 혈청, 혈장, 미세침 흡인검체, 소변 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
진단방법과 관련하여, 정상 대조군과 샘플 중 GDF15의 발현 정도를 비교함으로써 진단할 수 있다. 단백질 레벨을 측정하는 분석법으로는 웨스턴 블로팅(Western blotting), ELISA, 방사성면역측정법(radioimmunoassay), 방사성면역확산법(radialimmunodiffusion), 오크터로니 면역확산법(Ouchterlony immunodiffusion), 로켓면역전기영동법(rocket immunoelectrophoresis), 이뮤노히스토스테이닝(immunohistostaining), 면역침강반응 분석법(immunoprecipitation assay), 보체 고정 분석법(complement fixation assay), FACS 및 단백질 칩 분석법(protein chip assay)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
형성된 항원-항체 복합체의 양에 대하여 정상 컨트롤과 샘플 중 검출 결과를 비교하고, 단백질의 발현 정도에 있어서 상당하게 증가한 것을 평가함으로써 진단한다.
여기에 사용된 "항원-항체 복합체(antigen-antibody complexes)"는 특이적인 항체에 GDF15 단백질의 생성물이 결합하는 것을 가리킨다. 검출 라벨의 신호 강도를 측정함으로써 형성된 항원-항체 복합체의 양을 정량적으로 결정할 수 있다.
상기 검출 라벨은 효소, 형광물질, 리간드, 발광물질, 마이크로입자, 레독스 분자 및 방사선 동위원소로 구성된 군에서 선택될 수 있으나, 본 발명은 상기 실례에 한정되는 것은 아니다. 검출 라벨로 사용 가능한 효소의 예로는 β-글루쿠로니다아제(β-glucuronidase), β-D-글루코시다아제(β-D-glucosidase), β-D-갈락토시다아제(β-D-galactosidase), 유라제(urase), 퍼옥시다아제(peroxidase) 또는 염기성 포스파타아제(alkaline phosphatase), 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterase), 글루코즈 옥시다아제(glucose oxidase), 헥소키나아제(hexokinase) 및 GDPase, RNase, 글루코즈 옥시다아제(glucose oxidase) 및 루시페라아제(luciferase), 포스포프룩토키나아제(phosphofrutokinase), 포스포에놀피루브산 카르복실화효소(phosphoenolpyruvate carboxylase), 아스파르트산 아미노기전달효소(aspartate aminotransferase), 포스포에놀피루브산 탈탄산효소(phosphenolpyruvate decarboxylase) 및 β-락타마아제(β-latamase)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 형광물질의 예로는 플루오레세인(fluorescein), 이소티오시아네이트(isothiocyanate), 로다민(rhodamine), 피코에리트린(phycoerythrin), 피코시아닌(phycocyanin), 알로피코시아닌(allophycocyanin), 오프타알데히드(ophthaldehyde) 및 플루오레사민(fluorescamine)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 리간드의 예로는 비오틴 유도체를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 발광물질은 아크리디늄에스테르(acridinium esters), 루시페린(luciferin) 및 루시페라아제(luciferase)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 마이크로 입자의 예로는 금콜로이드(colloidal gold) 및 유색 라텍스(colored latex)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 레독스 분자의 예로는 페로센(ferrocene), 광전하 발생체(ruthenium complexes), 비올로겐(viologen), 퀴논(quinone), Ti 이온, Cs 이온, 디아미드(diimide), 1,4-벤조퀴논(1,4-benzoquinone), 하이드로퀴논(hydroquinone), K4W(CN)8, [Os(bpy)3]2+, [RU(bpy)3]2+, 및 [MO(CN)8]4-을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 방사성 동위원소는 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 90Y, 125I, 131I 및 186Re를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
바람직하게, 단백질 발현 정도는 ELISA에 의하여 측정된다. ELISA의 예로는 고상 지지체 상에 고정화된 항원을 인식하는 라벨링된 항체를 이용하는 직접 ELISA, 고상 지지체 상에 고정화된 항원과 복합체를 형성하는 캡쳐 항체를 인식하는 라벨링된 항체를 이용하는 간접 ELISA, 고상 지지체 상에 고정화된 항원-항체 복합체의 항원을 인식하는 다른 라벨링된 항체를 이용하는 직접 샌드위치 ELISA, 및 고상 지지체 상에 고정화된 항원-항체 복합체의 항원을 인식하는 다른 라벨링된 항체를 반응시키고, 다른 라벨링된 항체를 인식하는 2차 라벨링된 항체를 사용하는 간접 샌드위치 ELISA를 포함한다. 더욱 바람직하게, 단백질 발현 정도는 샌드위치 ELISA에 의해 검출되는데, 시료가 고상 지지체 상에 고정화된 항체와 반응하고, 제조된 항원-항체 복합체는 항원에 특이적인 라벨링된 항체를 첨가한 다음 효소발색(enzymatic color development)하거나, 항원-항체 복합체의 항원을 인식하는 항체에 특이적인 2차 라벨링된 항체를 첨가한 다음 효소발색하여 검출된다.
또한, 단백질의 발현 정도는 바람직하게 하나 또는 그 이상의 항체를 상기 암 마커에 사용하는 웨스턴 블로팅에 의하여 측정된다. 총 단백질은 시료로부터 단리되고, 전기영동하여 사이즈 별로 분리하고, 니트로셀룰로오스 멤브레인 상으로 이동시킨 다음, 항체와 반응시킨다. 유전자 발현에 의하여 생성되는 단백질의 양은 라벨링된 항체를 사용하여 생성된 항원-항체 복합체의 양을 측정함으로써 결정하여 진단한다. mRNA 또는 단백질 정도는 마커 단백질의 양에 있어서 절대적인(예를 들면, ㎍/㎖) 또는 상대적인(예를 들면, 신호의 상대적인 강도) 차로 나타낼 수 있다.
본 발명은 더욱이, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 악액질 치료용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 약제학적 유효량으로 환자에 투여하는 단계를 포함하는 악액질 치료방법에 관한 것이다.
본 발명의 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 내피 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여 및 직장 내 투여 등으로 투여할 수 있다.
경구 투여시, 단백질 또는 펩타이드는 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한, 약제학적 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 0.0001-100 ㎎/㎏이다. 본 명세서에서 용어 "약제학적 유효량"은 악액질을 예방 또는 치료하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이 때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 좌제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다.
임의의 항암제, 예를 들면 시스플라스틴은 악액질, 근육감소증, 근육 소모, 뼈 소모 또는 비자발적인 체중 소실과 같이 부작용을 가진다. 따라서, 본 발명은 악액질, 근육감소증 또는 근육 소모 뼈 소모 또는 비자발적인 체중의 소실의 중증도, 빈도 또는 발생을 예방하거나 최소화하거나 낮추면서 암을 치료하기 위한 조성물 또는 암 치료방법을 포함할 수 있다.
하나 이상의 항암제와 조합하여 본 발명의 항-GDF-15 항체의 유효량을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구현예들에서, 본 발명은 악액질, 근육감소증 또는 근육 소모 뼈 소모 또는 비자발적 체중 소실의 중증도, 빈도 또는 발생을 예방하거나 최소화하거나 낮추면서 암을 치료하는 방법을 포함하되, 방법은 악액질, 근육감소증 또는 근육 소모, 뼈 소모 또는 비자발적인 체중의 소실의 중증도, 빈도 또는 발생을 유발하거나 증가시키는 것으로 알려진 하나 이상의 항암제와 조합하여 본 발명의 항-GDF-15 항체의 유효량을 포함하는 약학적 조성물을 환자에 투여하는 단계를 포함한다.
이하, 실시예를 참조하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하고자 한다. 이러한 실시예는 예시의 목적일 뿐 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것이 아님은 당업자에 자명하다.
실시예 1: GDF15 scFv 항체 선별
1. bio-panning 시행
7.6 * 109의 다양성을 가지는 OPAL library를 이용하여 bio-panning을 수행하였다. bio-panning 횟수는 총 3회를 시행하였으며, input phage의 size는 4*1012cfu/ml ≥ phage를 이용하였다. Epoxy bead에 4 μg의 GDF15 항원을 고정시키고 항원이 고정된 epoxy bead에 input phage를 반응시켰다. GDF15 항원과 반응한 phage를 elution하여 output titer를 측정하였다. 매 횟수마다 input과 output titer를 측정하여 bio-panning의 정보를 획득하고 정상적으로 시행되고 있는지를 확인하였다. 그 결과, input phage는 매 횟수마다 4*1012cfu/ml ≥의 phage를 사용하였고, output은 1차 - 1.5 * 106, 2차 - 2.4 * 108, 3차 - 3.3 * 109 cfu/ml으로 bio-panning이 진행될수록 증폭되는 것을 알 수 있었다 (도 1). 따라서, bio-panning이 정상적으로 진행되었음을 확인하였다.
2. GDF15　scFv 항체의 Dot-blot 분석
앞서 3차 bio-panning에 의해 증폭된 phage를 이용하여 항체를 발현시켰다. 3차 bio-panning에서 나온 phage를 ER2738 E.coli cell에 감염시키고 LB-carbenicillin agar plate에 streaking 후 생성된 colony를 picking하여 IPTG induction하였다. ER2738 E.coli cell에 발현된 scFv 항체를 1X TES lysis buffer를 통해 얻었다. IPTG에 의해 scFv 항체가 발현되었는지를 dot-blot 분석을 통해 확인하였다. ER2738 E.coli cell의 lysate를 PVDF membrane에 흡착시키고 이를 HRP conjugated anti-HA 항체를 이용하여 분석하였다. 아래 그림을 보면, 약 97 %의 GDF15 scFv 항체 발현률을 확인할 수 있었다 (도 2). 따라서, 대부분의 colony에서 항체가 정상적으로 발현이 되고 있음을 확인하였다.
3. ELISA 분석
dot-blot 분석을 통하여 대부분의 colony에서 항체가 정상적으로 발현되는 것을 확인했으므로 ELISA 분석법을 이용하여 단백질 상에서의 항원-항체 반응을 통하여 고민감도, 고특이성 항체의 선별이 필요하다. 먼저, 15ng의 GDF15 항원을 96well ELISA plate에 고정시키고 IPTG에 의해 발현된 ER2738 E.coli cell lysate를 처리하였다. 1:1000으로 희석한 HRP conjugated anti-HA 항체를 이용하여 항원에 결합된 scFv 항체를 측정하였다. 도 3을 보면, 총 96개의 항체를 분석하였고, OD 1을 positive guideline, 0.1을 negative guideline으로 임의로 정하여 9종의 positive clone을 임의로 선정하였다.
4. 재현성 확인
ELISA 분석법에 의하여 얻은 결과가 재현성이 있는지 여부에 관하여 검증하였다. 우선 앞서 시행한 ELISA 분석법과 동일한 방법으로 실험을 하였으며, 이를 3반복 하여 재현성 검증을 실시하였다. 그 결과, R 값이 0.919, 0.942, 0.968으로 재현성이 확인되었다 (도 4).
실시예 2: GDF15 scFv 항체 서열분석
dot-blot과 ELISA 분석을 통하여 선별된 9종의 positive clone에 대하여 sequencing 분석을 통해 개별적 clone을 선별하였다. 앞서 선별한 9개의 positive clone중에 중복되는 clone이 존재할 가능성이 있기 때문에 sequencing 분석이 필요하였다. sequencing 결과, 9종의 positive clone중에 6종이 개별적인 clone임을 확인하였다.
표 1. GDF15 scFv 항체 sequence
Figure pat00001
실시예 3: 선별된 GDF15 scFv 항체 정제 및 민감도 분석
1. GDF15 scFv 항체 정제
앞서 선별된 6종의 scFv 항체를 정제하였다. 6종의 clone이 transformation 되어 있는 ER2738 E.coli cell을 500 ml의 SB media에 배양시킨 후 1X TES buffer를 이용하여 cell lysis시켰다. cell lysate를 1 ml Ni bead에 반응시키고 imidazole을 이용하여 elution하였다. 아래 그림을 보면, clone마다 발현률의 차이는 있으나 모든 clone이 항체로 발현이 되는 것을 확인할 수 있었다. 특히, D5와 F5 clone이 발현이 잘되는 것을 확인하였다 (도 5).
2. 정제된 GDF15 scFv 항체의 민감도 분석
정제된 GDF15 scFv 항체 중에 발현률이 좋은 D5와 F5를 이용하여 민감도 분석을 시행하였다. 민감도 분석은 ELISA 분석법을 이용하였다. 우선 여러 농도의 GDF15 항원을 ELISA plate에 부착시킨 후 GDF15 scFv 항체를 처리하였다. 분석은 1:1000으로 희석한 HRP conjugated anti-HA 항체를 이용하여 분석하였다. 도 6에 따르면, D5와 F5의 증가 패턴의 차이는 있으나 두 항체 모두 10 ng/ml의 LOD값을 구할 수 있었다.
구체적 구성을 참조하여 본 발명을 상세하게 기재하였으나, 이러한 기재는 바람직한 구현예에 관한 것이고, 발명의 범위를 제한하지 않음은 당업자에 자명한 것이다. 이에, 본 발명의 실질적 범위는 출원된 청구항 및 그 등가물에 의해 정의된다 할 것이다.
<110> Scripps Korea Antibody Institut <120> Anti-Growth-differentiation factor 15 Antibody and Uses Thereof <130> 034 <160> 70 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C5 CDRL1 <400> 1 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ala Val Asn 1 5 10 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C5 CDRL2 <400> 2 Ala Asp Ser Asn 1 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C5 CDRL3 <400> 3 Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly 1 5 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E6 CDRL1 <400> 4 Ser Ser Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E6 CDRL2 <400> 5 Ser Asp Ser His 1 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E6 CDRL3 <400> 6 Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Gly 1 5 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E7 CDRL1 <400> 7 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val 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Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ile Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 56 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F5 VH <400> 56 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ala Ala Arg Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F8 VH <400> 57 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Arg Val Asn Met Gly Thr His Ser Lys Ser Tyr Ser Asp 100 105 110 Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 58 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H10 VH <400> 58 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Trp Ile Ser Tyr Asp Ser Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Gly Ile Lys Thr Arg Thr Asn Asn Ala Tyr Tyr Ala Asn 100 105 110 Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 59 <211> 329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C5 VL <400> 59 agtctgtgct gactcagcca ccctcagcgt ctgggacccc cgggcagagg gtcaccatct 60 cttgtagtgg ctcttcatct aatattggca gtaatgctgt caactggtac cagcagctcc 120 caggaacggc ccccaaactc ctcatctatg ctgatagtaa tcggccaagc ggggtccctg 180 accgattctc tggctccaag tctggcacct cagcctccct ggccatcagt gggctccggt 240 ccgaggatga ggctgattat tactgtggtt cttgggatta tagcctgagt ggttatgtct 300 tcggcggagg taccaagctg acggtccta 329 <210> 60 <211> 329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> D5 VL <400> 60 agtctgtgct gactcagcca ccctcagcgt ctgggacccc cgggcagagg gtcaccatct 60 cttgtagtag ctcttcatct aatattggca gtaattatgt ctcctggtac cagcagctcc 120 caggaacggc tcccaaactc ctcatctatt ctgatagtca tcggccaagc ggggtccctg 180 accgattctc tggctccaag tctggcacct cagcctccct ggccatcagt gggctccggt 240 ccgaggatga ggctgattat tactgtggta cttgggattc tagcctgagt ggttatgtct 300 tcggcggagg caccaagctg acggtccta 329 <210> 61 <211> 329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> E7 VL <400> 61 agtctgtgct gactcagcca ccctcagcgt ctgggacccc cgggcagagg gtcaccatct 60 cttgtagtgg ctcttcatct aatattggca gtaattatgt cacctggtac cagcagctcc 120 caggaacggc ccccaaactc ctcatctatg atagtagtca gcggccaagc ggggtccctg 180 accgattctc tggctccaag tctggcacct cagcctccct ggccatcagt gggctccggt 240 ccgaggatga ggctgattat tactgtggta cttgggattc tagcctgagt ggttatgtct 300 tcggcggagg caccaagctg acggtccta 329 <210> 62 <211> 329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> F5 VL <400> 62 agtctgtgct gactcagcca ccctcagcgc ctgggacccc cgggcagagg gtcaccatct 60 cttgtagtgg ctcttcatct aatattggca gtaattatgt ctcctggtac cagcagctcc 120 caggaacggc ccccaaactc ctcatctatt ctgatagtca gcggccaagc ggggtccctg 180 accgattctc tggctccaag tctggcacct cagcctccct ggccatcagt gggctccggt 240 ccgaggatga ggctgattat tactgtgctt cttgggattc tagcctgagt ggttatgtct 300 tcggcggagg caccaagctg acggtccta 329 <210> 63 <211> 329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> F8 VL <400> 63 agtctgtgct gactcagcca ccctcagcgt ctgggacccc cgggcagagg gtcaccatct 60 cttgtactgg ctcttcatct aatattggca ataattatgt ctcctggtac cagcagctcc 120 caggaacggc ccccaaactc ctcatctatt ataatagtca tcggccaagc ggggtccctg 180 accgattctc tggctccaag tctggcacct cagcctccct ggccatcagt gggctccggt 240 ccgaggatga ggctgattat tactgtggtt cttgggatta tagcctgagt gcttatgtct 300 tcggcggagg cactaagctg acggtccta 329 <210> 64 <211> 329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> H10 VL <400> 64 agtctgtgct gactcagcca ccctcagcgt ctgggacccc cgggcagagg gtcaccatct 60 cttgtagtgg ctcttcatct aatattggca gtaatgatgt cacctggtac cagcagctcc 120 caggaacggc ccccaaactc ctcatctatg atgatagtca tcggccaagc ggggtccctg 180 accgattctc tggctccaag tctggcacct cagcctccct ggccatcagt gggctccggt 240 ccgaggatga ggctgattat tactgtggtt cttgggatta tagcctgaat gcttatgtct 300 tcggcggagg caccaagctg gcgatccta 329 <210> 65 <211> 382 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C5 VH <400> 65 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc gattattata tgagctgggt ccgcctggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcctgg atctatcatg gtggtggtga tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac gcggccgtgt attactgtgc gagacatatt 300 ggtcctgcga attatgcgaa gtattcttat gctgatgcta tggacgtctg gggccagggt 360 acactggtca ccgtgagctc ag 382 <210> 66 <211> 349 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> E6 VH <400> 66 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacaga ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc gattatgcta tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctctcatg atgatggtag taaatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagggcct 300 ttggcgttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcag 349 <210> 67 <211> 349 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> E7 VH <400> 67 gaggtgcagc tgttggagtc cgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc gattatgcta tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctctcatg atggtagtag taaatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggtcct 300 attaatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcag 349 <210> 68 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> F5 VH <400> 68 aggtgcagct gttggagtct gggggaggct tggtacagcc tggggggtcc ctgagactct 60 cctgtgcagc ctctggattc acctttagcg gttattctat gagctgggtc cgccaggctc 120 cagggaaggg gctggagtgg gtctcatcga tctcttatga tggtagtagt aaatattacg 180 ctgattctgt aaaaggtcgg ttcaccatct ccagagacaa ttccaagaac acgctgtatc 240 tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggccgtgta ttactgtgcg aaagctgctc 300 gggagttcga ctactggggc cagggtacac tggtcaccgt gagctcag 348 <210> 69 <211> 382 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> F8 VH <400> 69 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc gattattata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg gtggtggtag tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagatatcgt 300 gttaatatgg ggacgcattc gaagtcttat tctgatgcta tggacgtctg gggccagggt 360 acactggtca ccgtgagctc ag 382 <210> 70 <211> 382 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> H10 VH <400> 70 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatgg atctcttatg atagtagtag taaatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagatatggt 300 attaagactc ggacgaataa tgcttattat gctaatgcta tggacgtctg gggccagggt 360 acactggtca ccgtgagctc ag 382

Claims (13)

  1. 서열번호 1, 4, 7, 9, 12 및 15로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 CDR1;
    서열번호 2, 5, 8, 10, 13 및 16으로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 CDR2; 및
    서열번호 3, 6, 11, 14 및 17로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 CDR3, 및
    서열번호 18, 21, 26 및 31로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 CDR1;
    서열번호 19, 22, 24, 27, 29 및 32로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 CDR2; 및
    서열번호 20, 23, 25, 28, 30 및 33으로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 CDR3를 포함하는 GDF15 (Growth/differentiation factor 15)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서,
    서열번호 1의 CDR1, 서열번호 2의 CDR2 및 서열번호 3의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 18의 CDR1, 서열번호 19의 CDR2 및 서열번호 20의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역;
    서열번호 4의 CDR1, 서열번호 5의 CDR2 및 서열번호 6의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 21의 CDR1, 서열번호 22의 CDR2 및 서열번호 23의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역;
    서열번호 7의 CDR1, 서열번호 8의 CDR2 및 서열번호 6의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 21의 CDR1, 서열번호 24의 CDR2 및 서열번호 25의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역;
    서열번호 9의 CDR1, 서열번호 10의 CDR2 및 서열번호 11의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 26의 CDR1, 서열번호 27의 CDR2 및 서열번호 28의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역;
    서열번호 12의 CDR1, 서열번호 13의 CDR2 및 서열번호 14의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 18의 CDR1, 서열번호 29의 CDR2 및 서열번호 30의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역; 또는
    서열번호 15의 CDR1, 서열번호 16의 CDR2 및 서열번호 17의 CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역 및 서열번호 31의 CDR1, 서열번호 32의 CDR2 및 서열번호 33의 CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 제1항에 있어서,
    서열번호 34 내지 39로 구성된 군에서 선택되는 경쇄 가변영역 프레임워크 영역 (FR); 및 서열번호 40 내지 46으로 구성된 군에서 선택되는 중쇄 가변영역 프레임워크 영역 (FR)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제1항에 있어서,
    서열번호 47 내지 52로 구성된 군에서 선택된 경쇄 가변영역 및 서열번호 53내지 58로 구성된 군에서 선택된 중쇄 가변영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제1항에 있어서,
    서열번호 47의 경쇄 가변영역 및 서열번호 53의 중쇄 가변영역;
    서열번호 48의 경쇄 가변영역 및 서열번호 54의 중쇄 가변영역;
    서열번호 49의 경쇄 가변영역 및 서열번호 55의 중쇄 가변영역;
    서열번호 50의 경쇄 가변영역 및 서열번호 56의 중쇄 가변영역;
    서열번호 51의 경쇄 가변영역 및 서열번호 57의 중쇄 가변영역; 또는
    서열번호 52의 경쇄 가변영역 및 서열번호 58의 중쇄 가변영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  7. 제6항에 있어서, 서열번호 59 내지 64로 구성된 군에서 선택된 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 서열번호 65 내지 70으로 구성된 군에서 선택된 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  8. 제6항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터.
  9. 제8항의 발현 벡터로 형질전환된 재조합 숙주세포.
  10. 제9항의 재조합 숙주세포를 배양하여 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생성하는 단계 및 상기 생성된 항체를 회수하여 분리 또는 정제하는 단계를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조방법.
  11. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 GDF15 발현 진단용 조성물.
  12. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 GDF15 발현 진단용 키트.
  13. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 악액질 예방 또는 치료용 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2023217068A1 (zh) * 2022-05-09 2023-11-16 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别gdf15的抗体及其应用

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