KR20180088602A - 암에 공통적으로 관련되는 fbp 유전자를 포함하는 바이오마커 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 노화, 비만 및 암에 공통적으로 관련되는 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692) 유전자에 관한 것이며, 보다 구체적으로는 상기 유전자를 이용한 진단키트 등에 관한 것이다.
본 발명에 따른 유전자 및 진단키트는 노화, 비만 및 암의 유발 및 발생에 공통적으로 관여하는 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692) 유전자를 발견하고, 이를 이용하여 노화 진행, 비만 및 암에 관한 분석을 가능하게 하는 바이오마커를 제공하고자 하는 것이다. 결곡 이를 통해 인간, 인간을 제외한 포유류 또는 곤충의 노화 진행 여부, 암 발생 여부 및 비만 발생 여부를 종합적으로 분석하거나 진단할 수 있다.
본 발명에 따른 유전자 및 진단키트는 노화, 비만 및 암의 유발 및 발생에 공통적으로 관여하는 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692) 유전자를 발견하고, 이를 이용하여 노화 진행, 비만 및 암에 관한 분석을 가능하게 하는 바이오마커를 제공하고자 하는 것이다. 결곡 이를 통해 인간, 인간을 제외한 포유류 또는 곤충의 노화 진행 여부, 암 발생 여부 및 비만 발생 여부를 종합적으로 분석하거나 진단할 수 있다.
Description
본 발명은 노화, 비만 및 암에 공통적으로 관련되는 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692) 유전자에 관한 것이며, 보다 구체적으로는 상기 유전자를 이용한 진단키트 등에 관한 것이다.
노화 조절 유전자 관련 연구는 1990년 초반에 시작하여 현재 활발하게 진행되고 있다. 지금까지 밝혀진 노화 조절 유전자들을 기능별로 분류하면 활성 산소 제거 시스템(catalase, superoxide dismutase 등), 인슐린/IGF-1 신호전달계(인슐린, InR, PI3K, Akt, 그리고 Foxo 등을 포함), 유전자 발현 억제 시스템(sirtuins 등), 암 억제 시스템(p53 등), 물질운반 시스템(sodium dicarboxylate cotransporter 등), 텔로미어(telomere) 조절 시스템 등인데, 이런 시스템에 속한 유전자가 노화 조절에 긴밀히 관여하고 있다.
한편, 노화가 진행되면 암 발생도 증가하는데, 흥미롭게도 p53과 같은 암 억제 유전자는 동시에 노화를 조절하기도 한다. 암화에 관련된 것으로 알려진 유전자는 GTPase 활성을 가진 Ras계열의 유전자(Ras, Rac, Rap1, Rala, Rhoa 등), Serine/Threonine 키나제 활성을 가진 Akt 관련 유전자(Akt/PKB, PKC, PKA, RAF 등), hedgehog 관련 유전자, 그리고 protooncogene들인 c-Myc, 등이 있으며, 또한 암을 억제하는 유전자로서 p53와 NFkB 등이 알려져 있다. 특히 HGF와 그 수용체인 HGFR(c-met)은 주로 간암과 관련되어 있다. 또한 암 억제 유전자인 PTEN은 PI3K의 활성을 억제하며 PTEN을 과발현시키면 인슐린/IGF-1 신호전달계의 활성이 줄어들고 수명은 증가하기도 한다. 또한 이들 유전자들은 모두 효모, 선충, 초파리와 생쥐 등의 모델 생물에서 발견된 것이고, 지금까지 암과 노화를 공통적으로 조절하는 기능을 가진 인간의 유전자에 대한 연구는 아직 많이 부족한 실정이다.
또한 노화가 진행되면 비만이 발생하는 경향이 커진다. 노화와 관련된 비만의 원인으로는 운동부족, 성장호르몬(GH) 및 갑상샘호르몬 분비 저하 등을 들 수 있으며, GH의 분비가 감소하면 탄수화물, 지방, 단백질 등을 분해하는 GH의 대사 효과도 감소하여 근육 생성은 줄어들고 지방 축적이 유발된다. GH는 간에서 IGF-1의 분비를 증가시키고 따라서 노화에 따른 GH 분비 감소는 인슐린/IGF-1 신호전달계의 활성에 변화를 일으키며 수명 조절에 관여할 것이다. 예를 들어, 지방 세포에서 인슐린 수용체를 제거한 생쥐(FIRKO mice)의 경우, 과식을 하여도 지방 축적이 나타나지 않는 경우가 있으며 노화 연구 동물 모델인 초파리의 경우도 노화가 진행되면 체내 지방함량이 증가한다. 따라서 비만과 노화도 긴밀하게 연관된 기전임에도 불구하고, 노화와 비만을 공통적으로 조절하는 기능을 가진 인간의 유전자에 대한 연구는 많이 부족한 실정이다.
결국, 이러한 노화, 암 및 비만을 공통적으로 조절하는 유전자를 발견하고, 이 유전자들의 발현을 확인하여 노화, 암 및 비만을 공통적으로 진단하는 것이 가능한 바이오마커, 진단키트 및 스크리닝 방법 등을 개발하기 위한 연구는 현재 많이 부족하다는 문제점이 있다.
한편, 본 발명과 관련된 선행기술문헌으로는 대한민국 공개특허 제10-2012-0021401호(특허문헌 1)이 개시되어 있으며, 이러한 특허문헌 1에는 Atg5 유전자를 과발현하여 향상된 기저 자식작용에 의해 수명이 연장된 형질전환 동물, 및 이의 제조방법에 관한 내용만이 개시되어 있을 뿐 노화, 암 및 비만을 공통적으로 조절하는 유전자를 이용한 바이오마커, 진단키트 및 스크리닝 방법 등에 관하여는 어떠한 개시 또는 암시조차 되어 있지 않다.
본 발명은 상술한 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 서로 밀접하게 연관된 노화, 암 및 비만에 공통적으로 관여하는 유전자를 발견하고, 이를 바이오마커로 이용하여 노화 진행 여부, 비만 여부 및 암 진단을 신속하고 정확하면서 간단히 할 수 있는 바이오마커를 제공하는 것이다.
또한 본 발명은 이를 이용한 키트 및 판별 또는 진단방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 어느 하나의 염기서열을 포함하는 노화 진행 판별용 바이오마커를 제공한다.
진단개체의 노화가 촉진됨에 따라, 상기 바이오마커의 발현량이 감소하는 것을 특징으로 한다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 어느 하나의 염기서열을 포함하는 비만 판별용 바이오마커를 제공한다.
진단개체의 지방이 축적이 증가하여 비만이 증가함에 따라, 상기 바이오마커의 발현량은 감소하는 것을 특징으로 한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 어느 하나의 염기서열을 포함하는 암 진단용 바이오마커를 제공한다.
진단개체의 암 세포 또는 암 조직의 발생이 증가함에 따라 상기 바이오마커의 발현량은 감소하는 것을 특징으로 한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여 상기 노화 진행 판별용 바이오마커; 및 혼성화 용액을 포함하는 노화 진행 판별용 키트를 제공한다.
상기 바이오마커는 용액 상에 분산된 형태로 존재하거나. 기판 상에 고정화된 마이크로어레이 형태로 존재하는 것을 특징으로 한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여 상기 비만 판별용 바이오마커; 및 혼성화 용액을 포함하는 비만 판별용 키트를 제공한다.
상기 바이오마커는 용액 상에 분산된 형태로 존재하거나. 기판 상에 고정화된 마이크로어레이 형태로 존재하는 것을 특징으로 한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여 상기 암 진단용 바이오마커; 및 혼성화 용액을 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다.
상기 바이오마커는 용액 상에 분산된 형태로 존재하거나. 기판 상에 고정화된 마이크로어레이 형태로 존재하는 것을 특징으로 한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여 상기 바이오마커; 및 혼성화 용액;을 포함하는 노화 진행 판별, 비만 판별 및 암 진단을 동시에 검출하는 복합 진단용 키트를 제공한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여 아래 단계를 포함하는 노화 진행 판별방법을 제공한다.
Ⅰ) 진단 개체로부터 RNA를 분리 및 추출하는 단계;
Ⅱ) 상기 분리된 RNA 또는 이로부터 합성된 cDNA와 상기 노화 진행 판별용 키트를 접촉시켜 상기 RNA 또는 cDNA와 바이오마커를 혼성화하는 단계; 및
Ⅲ) 상기 바이오 마커와 RNA 또는 cDNA 사이의 혼성화 정도를 검출하는 단계.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여 아래 단계를 포함하는 비만 판별방법을 제공한다.
Ⅰ) 진단 개체로부터 RNA를 분리 및 추출하는 단계;
Ⅱ) 상기 분리된 RNA 또는 이로부터 합성된 cDNA와 상기 비만 판별용 키트를 접촉시켜 상기 RNA 또는 cDNA와 바이오마커를 혼성화하는 단계; 및
Ⅲ) 상기 바이오 마커와 RNA 또는 cDNA 사이의 혼성화 정도를 검출하는 단계.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여 아래 단계를 포함하는 암 진단방법을 제공한다.
Ⅰ) 진단 개체로부터 RNA를 분리 및 추출하는 단계;
Ⅱ) 상기 분리된 RNA 또는 이로부터 합성된 cDNA와 상기 암 진단용 키트를 접촉시켜 상기 RNA 또는 cDNA와 바이오마커를 혼성화하는 단계; 및
Ⅲ) 상기 바이오 마커와 RNA 또는 cDNA 사이의 혼성화 정도를 검출하는 단계.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여 아래 단계를 포함하는 노화 진행 판별, 비만 증가 판별 및 암 진단을 동시에 검출하는 방법을 제공한다.
Ⅰ) 진단 개체로부터 RNA를 분리 및 추출하는 단계;
Ⅱ) 상기 분리된 RNA 또는 이로부터 합성된 cDNA와 상기 복합 진단용 키트를 접촉시켜 상기 RNA 또는 cDNA와 바이오마커를 혼성화하는 단계; 및
Ⅲ) 상기 바이오 마커와 RNA 또는 cDNA 사이의 혼성화 정도를 검출하는 단계.
본 발명에 따른 유전자 및 진단키트는 노화, 비만 및 암의 유발 및 발생에 공통적으로 관여하는 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692) 유전자를 발견하고, 이를 이용하여 노화 진행, 비만 및 암에 관한 분석을 가능하게 한다. 그리하여 이를 가지고 인간의 노화 진행 여부, 암 발생 여부 및 비만 발생 여부를 종합적으로 분석하거나 진단하는 것이 가능하게 된다.
도 1은 RU486 처리에 대한 Actin-GS-Gal4/+W1118 수명 곡선을 나타낸 그래프이다.
도 2는 Actin-GS-Gal4와 UAS-fbp RNAi를 이용하여 fbp의 발현을 억제시켰을 때 fbp mRNA 양이 감소함을 보여주는 결과이다.
도 3은 fbp의 발현이 감소하면 수명이 짧아지는 것으로 확인된 결과를 보여주는 그래프이다.
도 4는 RU486을 먹인 야생형 초파리의 중성지방 함량 변화를 나타낸 결과이다.
도 5는 RU486을 먹인 Actin-GS-Gal4/+; UAS-fbp RNAi/+ 초파리의 중성지방 함량변화를 나타낸 결과이다.
도 6은 RU486을 먹인 Actin-GS-Gal4/UAS-nls.GFP 초파리의 지방체 조직의 공초점 현미경 사진이다.
도 7은 RU486을 먹인 Actin-GS-Gal4/UAS-fbp RNAi 초파리의 지방체 조직의 지방을 나일레드(Nile red) 염색한 후 찍은 공초점 현미경 사진이다.
도 8은 암 증식 모델 초파리(UAS-Ras85D; c765-Gal4)의 날개 길이의 비교 결과이다.
도 9는 fbp 유전자 발현을 억제한 암 성장 모델 초파리(UAS-Ras85D/+; c765-Gal4/UAS-fbp RNAi)의 날개 길이의 비교 결과이다.
도 10은 fbp 유전자 발현을 억제한 암 증식 모델 초파리(UAS-Ras85D/+; c765-Gal4/UAS-fbp RNAi)의 날개 면적의 비교 결과이다.
도 2는 Actin-GS-Gal4와 UAS-fbp RNAi를 이용하여 fbp의 발현을 억제시켰을 때 fbp mRNA 양이 감소함을 보여주는 결과이다.
도 3은 fbp의 발현이 감소하면 수명이 짧아지는 것으로 확인된 결과를 보여주는 그래프이다.
도 4는 RU486을 먹인 야생형 초파리의 중성지방 함량 변화를 나타낸 결과이다.
도 5는 RU486을 먹인 Actin-GS-Gal4/+; UAS-fbp RNAi/+ 초파리의 중성지방 함량변화를 나타낸 결과이다.
도 6은 RU486을 먹인 Actin-GS-Gal4/UAS-nls.GFP 초파리의 지방체 조직의 공초점 현미경 사진이다.
도 7은 RU486을 먹인 Actin-GS-Gal4/UAS-fbp RNAi 초파리의 지방체 조직의 지방을 나일레드(Nile red) 염색한 후 찍은 공초점 현미경 사진이다.
도 8은 암 증식 모델 초파리(UAS-Ras85D; c765-Gal4)의 날개 길이의 비교 결과이다.
도 9는 fbp 유전자 발현을 억제한 암 성장 모델 초파리(UAS-Ras85D/+; c765-Gal4/UAS-fbp RNAi)의 날개 길이의 비교 결과이다.
도 10은 fbp 유전자 발현을 억제한 암 증식 모델 초파리(UAS-Ras85D/+; c765-Gal4/UAS-fbp RNAi)의 날개 면적의 비교 결과이다.
이에 본 발명자들은 노화, 비만 및 암에 공통적으로 관여하는 유전자를 발견하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 본 발명에 따른 노화, 비만 및 암에 공통적으로 관여하는 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692) 유전자를 발견하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 인간 또는 인간을 제외한 포유류 또는 곤충의 노화의 진행을 신속하면서 간단히 판별할 수 있는 바이오마커를 제공하려는 데 목적이 있다.
본 발명의 일 측면은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 포함하는 노화 진행 판별용 바이오마커에 관한 것이다.
서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열로 이루어진 유전자, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열은 진단개체의 수명의 표현형인 노화가 촉진됨에 따라 발현량이 감소한다.
따라서, 이러한 특징을 이용하여 상기 염기서열은 진단개체와 동일 종에서의 염기서열의 표준 발현량과 진단 개체에서의 측정된 염기서열의 발현량을 비교하여 노화의 진행 여부를 판별할 수 있는 바이오마커로 활용할 수 있다.
본 명세서에서 노화 진행 판별용 바이오마커란 수명 즉, 노화의 진행 여부를 정성적으로 판별할 수 있는 바이오마커를 의미하는 것이다.
상술한 바와 같이 본 발명에 따른 인간 또는 인간을 제외한 포유류 동물 또는 곤충은 서로 간에 유전적 차이를 가지고 있어, 평균 노화 진행 정도가 전혀 상이하다. 허나 본 발명에서의 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 노화 진행 판별용 바이오 마커로 제공함으로써, 개개의 종에 대해 신속하면서도 정확하고 간단히 진단 개체의 노화 진행을 판별할 수 있다.
상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열은 통상적으로 UAS-GAL4 시스템에 의하여 특정 유전자의 발현을 제어한 초파리 돌연변이체로부터 추출된 것이라면 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 염기서열은 초파리의 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692) 유전자이다.
본 발명에서 초파리를 이용하여 후보 유전자들의 기능을 평가하는데 있어서, 구체적으로 유도성 유전자 스위치(Gene Switch, GS) GAL/UAS 발현 시스템을 이용하였다. GAL4는 원래 효모의 단백질이며 이것을 초파리에 도입하여 발현시킨 GAL4는 RU486(mifepristone)이라는 약물이 존재할 때 Upstream Activating Sequencs(UAS)라는 DNA sequence 위치에 결합하여 UAS 뒤에 존재하는 특정 유전자의 전사를 활성화시키게 되고, RU486이 존재하지 않으면 특정 유전자의 전사는 불활성화 된다. 이를 이용하여 fbp RNAi 활성을 조절하여 fbp 유전자 발현을 제어하고, 이의 기능을 확인하였다.
서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열은 특이적으로 발현이 감소하면 초파리의 노화가 촉진된다.
구체적으로 UAS-GAL4 시스템에 의하여 특정 유전자의 발현을 제어한 초파리 돌연변이체를 RU486에 노출시킨 후, 특정 유전자의 발현이 2 배 이상 감소함에 따라 나타나는 효과를 수 많은 반복실험을 통해 확인하였고, 그 결과 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 포함하는 유전자의 발현이 2 배 이상 감소할 때, 노화가 더 진행되는 것을 확인하였는 바, 상술한 유전자는 인간 또는 인간을 제외한 포유류 또는 곤충의 노화를 판별하는 바이오마커로 사용될 수 있다.
더군다나 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열은 사람의 ADHFE1(alcohol dehydrogenase, iron containing, 1, NP_653251.2 467 aa) 유전자와 상동(homologue) 관계를 가지고 있기 때문에, 본 발명에 따른 바이오마커를 이용하여 곤충뿐만 아니라 사람의 노화 진행 여부도 판별할 수 있다.
상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열은 인트론이 존재하지 않는 cDNA이고, 이러한 cDNA는 게놈 DNA로부터 전사과정을 거쳐 생성된 mRNA를 이용하여 이에 상보적인 DNA로 제조된 것이다.
즉 상기 바이오마커를 이용하면 인간, 인간을 제외한 포유류 및 곤충의 노화 진행을 판별할 수 있으므로, 이를 이용하면 진단개체의 노화 진행을 판별하여 대응하는데 유용할 것으로 기대된다.
본 발명은 인간 또는 인간을 제외한 포유류 또는 곤충의 비만 판별을 신속하면서 간단히 할 수 있도록 하는 바이오마커를 제공하려는 데 목적이 있다.
본 발명의 일 측면은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 포함하는 비만 판별용 바이오마커에 관한 것이다.
서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열로 이루어진 유전자, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열은 진단개체의 비만 여부(구체적으로 중성지방 함량 증가와 지방체 조직에서 지방구의 크기 및 밀도 증가 여부)가 증가함에 따라 발현량이 감소한다.
따라서, 이러한 특징을 이용하여 상기 염기서열은 진단개체와 동일 종에서의 염기서열의 표준 발현량과 진단 개체에서의 측정된 염기서열의 발현량을 비교하여 비만 증가 여부를 판별할 수 있는 바이오마커로 활용할 수 있다.
본 명세서에서 비만 판별용 바이오마커란 비만의 증가 여부(구체적으로 중성지방 함량 증가와 지방체 조직에서 지방구의 크기 및 밀도 증가 여부)를 정성적으로 판별할 수 있는 바이오마커를 의미하는 것이다.
상술한 바와 같이 본 발명에 따른 인간 또는 인간을 제외한 포유류 동물 또는 곤충은 서로 간에 유전적 차이를 가지고 있기 때문에, 비만에 있어서도 차이가 있다 할 것이다. 허나 본 발명에서의 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 비만 판별용 바이오 마커로 제공함으로써, 개개의 종에 대해 신속하면서도 정확하고 간단히 진단 개체의 비만 여부를 판별할 수 있다.
상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열은 통상적으로 UAS-GAL4 시스템에 의하여 특정 유전자의 발현을 제어한 초파리 돌연변이체로부터 추출된 것이라면 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 염기서열은 초파리의 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692) 유전자이다.
본 발명에서 초파리를 이용하여 후보 유전자들의 기능을 평가하는데 있어서, 구체적으로 유도성 유전자 스위치(Gene Switch, GS) GAL/UAS 발현 시스템을 이용하였다. GAL4는 원래 효모의 단백질이며 이것을 초파리에 도입하여 발현시킨 GAL4는 RU486(mifepristone)이라는 약물이 존재할 때 Upstream Activating Sequencs(UAS)라는 DNA sequence 위치에 결합하여 UAS 뒤에 존재하는 특정 유전자의 전사를 활성화시키게 되고, RU486이 존재하지 않으면 특정 유전자의 전사는 불활성화 된다. 이를 이용하여 fbp RNAi 활성을 조절하여 fbp 유전자 발현을 제어하고, 이의 기능을 확인하였다.
상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열은 초파리의 중성지방 함량과 지방체 조직에서 지방구의 크기 및 밀도가 크게 증가됨에 따라 특이적으로 발현이 감소한다.
구체적으로 UAS-GAL4 시스템에 의하여 특정 유전자의 발현을 제어한 초파리 돌연변이체를 RU486에 노출시킨 후, 특정 유전자의 발현이 2 배 이상 감소함에 따라 나타나는 효과를 수 많은 반복실험을 통해 확인하였고, 그 결과 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 포함하는 유전자의 발현이 2 배 이상 감소할 때, 비만이 증가하는 것을 확인하였는 바, 상술한 유전자는 인간 또는 인간을 제외한 포유류 또는 곤충의 비만을 판별하는 바이오마커로 사용될 수 있다.
더군다나 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열은 사람의 ADHFE1(alcohol dehydrogenase, iron containing, 1, NP_653251.2 467 aa) 유전자와 상동(homologue) 관계를 가지고 있기 때문에, 본 발명에 따른 바이오마커를 이용하여 곤충뿐만 아니라 사람의 비만 여부도 판별할 수 있다.
상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열은 인트론이 존재하지 않는 cDNA이고, 이러한 cDNA는 게놈 DNA로부터 전사과정을 거쳐 생성된 mRNA를 이용하여 이에 상보적인 DNA로 제조된 것이다.
즉 상기 바이오마커를 이용하면 인간, 인간을 제외한 포유류 및 곤충의 중성지방 함량과 지방체 조직에서 지방구의 크기 및 밀도를 판별할 수 있으므로, 이를 이용하면 진단개체의 비만 증가를 판별하여 대응하는데 유용할 것으로 기대된다.
본 발명은 인간 또는 인간을 제외한 포유류 또는 곤충의 암 진단을 신속하면서 간단히 할 수 있도록 하는 바이오마커를 제공하려는 데 목적이 있다.
본 발명의 일 측면은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 포함하는 암 진단용 바이오마커에 관한 것이다.
서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열로 이루어진 유전자, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열은 진단개체의 암 발생 또는 증식(구체적으로 암 성장 모델 초파리의 표현형의 증가 여부)이 증가함에 따라 발현량이 감소한다.
따라서, 이러한 특징을 이용하여 상기 염기서열은 진단개체와 동일 종에서의 염기서열의 표준 발현량과 진단 개체에서의 측정된 염기서열의 발현량을 비교하여 암 발생 또는 증식 여부를 판별할 수 있는 바이오마커로 활용할 수 있다.
본 명세서에서 암 진단용 바이오마커란 암 세포 및 조직의 증식 또는 성장 여부를 정성적으로 판별할 수 있는 바이오마커를 의미하는 것이다.
상술한 바와 같이 본 발명에 따른 인간 또는 인간을 제외한 포유류 동물 또는 곤충은 서로 간에 유전적 차이를 가지고 있기 때문에, 암 발생도 전혀 상이하다. 허나 본 발명에서의 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 암 진단용 바이오 마커로 제공함으로써, 개개의 종에 대해 신속하면서도 정확하고 간단히 진단 개체의 암 발생 또는 성장 여부를 판별할 수 있다.
상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열은 통상적으로 UAS-GAL4 시스템에 의하여 특정 유전자의 발현을 제어한 초파리 돌연변이체로부터 추출된 것이라면 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 염기서열은 초파리의 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692) 유전자이다.
본 발명에서 초파리를 이용하여 후보 유전자들의 기능을 평가하는데 있어서, 구체적으로 유도성 유전자 스위치(Gene Switch, GS) GAL/UAS 발현 시스템을 이용하였다. GAL4는 원래 효모의 단백질이며 이것을 초파리에 도입하여 발현시킨 GAL4는 RU486(mifepristone)이라는 약물이 존재할 때 Upstream Activating Sequencs(UAS)라는 DNA sequence 위치에 결합하여 UAS 뒤에 존재하는 특정 유전자의 전사를 활성화시키게 되고, RU486이 존재하지 않으면 특정 유전자의 전사는 불활성화 된다. 이를 이용하여 fbp RNAi 활성을 조절하여 fbp 유전자 발현을 제어하고, 이의 기능을 확인하였다.
상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열은 초파리의 중성지방 함량과 지방체 조직에서 지방구의 크기 및 밀도가 크게 증가됨에 따라 특이적으로 발현이 감소한다.
구체적으로 UAS-GAL4 시스템에 의하여 특정 유전자의 발현을 제어한 초파리 돌연변이체를 RU486에 노출시킨 후, 특정 유전자의 발현이 2 배 이상 감소함에 따라 나타나는 효과(암과 관련된 PI3K 발현 억제를 통해 날개 길이와 면적 감소)를 수 많은 반복실험을 통해 확인하였고, 그 결과 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 포함하는 유전자의 발현이 2 배 이상 감소할 때, 암이 증가하는 것을 확인하였는 바, 상술한 유전자는 인간 또는 인간을 제외한 포유류 또는 곤충의 암 발생 여부를 진단하는 바이오마커로 사용될 수 있다.
더군다나 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열은 사람의 ADHFE1(alcohol dehydrogenase, iron containing, 1, NP_653251.2 467 aa) 유전자와 상동(homologue) 관계를 가지고 있기 때문에, 본 발명에 따른 바이오마커를 이용하여 곤충뿐만 아니라 사람의 암 발생 또는 증식 여부도 진단할 수 있다.
상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열은 인트론이 존재하지 않는 cDNA이고, 이러한 cDNA는 게놈 DNA로부터 전사과정을 거쳐 생성된 mRNA를 이용하여 이에 상보적인 DNA로 제조된 것이다.
*즉 상기 바이오마커를 이용하면 인간, 인간을 제외한 포유류 및 곤충의 암 발생 및 증식 여부를 판별할 수 있으므로, 이를 이용하면 진단개체의 암 여부를 진단하여 대응하는데 유용할 것으로 기대된다.
아울러, 본 발명에 따른 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 포함하는 바이오마커는 전술한 바와 같이 노화 판별, 비만 판별 및 암 진단을 각각 검출할 수 있지만, 동시에 노화 진행 여부, 비만 증가 여부 및 암 발생 여부를 검출할 수도 있다.
앞서 설명한 바와 같이 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열의 발현이 감소함에 따라 UAS-GAl4 시스템을 이용해 특정 유전자 발현을 줄인 초파리 돌연변이체의 노화가 더 진행되고, 중성지방과 지방체 조직에서의 지방구 밀도 및 크기가 증가하며, 암 발생이 감소하는 것을 근거로 하여, 진단개체와 동일 종에서의 바이오마커의 표준 발현량과 진단 개체에서의 측정된 바이오마커 발현량을 비교하여 노화 진행 여부, 비만 증가 여부 및 암 발생 여부를 동시에 검출할 수도 있는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에서 상기 바이오마커로는 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열의 mRNA뿐만 아니라. 이로 표시되는 염기서열로 코딩되는 어느 하나 이상의 단백질일 수도 있는데, 상기 단백질은 서열번호 5 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열일 수 있다.
상기 서열번호 5 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열로 표시되는 단백질 역시, 정상 대조군(진단개체와 동일한 종의 표준 발현량)과 비교하여 단백질 양의 증가 또는 감소로 노화, 비만 및 암 중에서 선택되는 어느 하나 이상을 판별 및 진단할 수 있다.
상기 단백질을 이용한 키트는 ELISA(Enzyme linked immunosorbent assay)용 키트를 포함할 수 있고, 상기 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 진단개체의 세포조직, 세포, 뇨, 혈액, 혈청 및 혈장 중에서 선택되는 생물학적 시료와 접촉시키는 단계를 통해, 항원-항체 복합체를 정량 검출할 수 있다.
상기 검출 결과를 진단개체에서의 표준 단백질 발현량과 비교하여 상기 진단개체의 노화, 비만 및 암 중에서 선택되는 어느 하나 이상을 판별 및 진단할 수 있다.
단백질 발현량을 측정하는 분석방법으로는 웨스턴 블랏, ELISA(Enzyme linked immunosorbent assay), RIA(Radioimmunoassay), 방사면역 확산법(Radioimmunodiffusion), 오크털로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로켓 면역전기영동, 조직면역염색, 면역침전분석(Immunoprecipitation), 보체고정분석(Complement fixation assay), FACS, 단백질 칩 등이 있으며, 기재된 방법으로 제한되는 것은 아니다.
위와 같은 분석방법을 통하여 진단개체와 동일한 종에서의 표준 항원-항체 복합체의 형성량과 진단개체의 항원-항체 복합체의 형성량을 비교할 수 있고, 상기 아미노산 서열 2로 표시되는 단백질의 유의한 발현량 증가 여부를 판단하여 노화 진행, 비만 증가 및 암 발생 중에서 어느 하나 이상을 판별 또는 진단할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 바이오마커 및 혼성화 용액을 포함하는 노화 진행 판별용 키트에 관한 것이다.
상기 바이오마커는 전술한 바와 같고, 용액 상에 보관되어 있거나, 기판 상에 상기 바이오마커가 높은 밀도로 고정화되어 있을 수 있다. 다시 말해 상기 바이오마커는 각각 일정한 영역에 고정화되어 있는 마이크로어레이 형태일 수 있다. 상기 마이크로어레이는 당업계에 잘 알려져 있다.
상기 키트는 용액 상에 분산되어 있거나, 상기 기판 상에 고정된 상기 바이오마커와 진단개체로부터 추출한 mRNA 또는 cDNA를 혼성화함으로써, 동일한 서열의 mRNA 또는 cDNA가 발현되고 있는지를 확인할 수 있다.
따라서 상기 키트에 사용되는 바이오마커는 이의 염기서열에서 한 가닥을 떼어내는 과정이 필요하다.
상기 바이오마커가 기판상에 고정된 마이크로어레이 형태일 경우, 상기 기판은 혼성화 특성을 보유하고, 혼성화의 배경 수준이 낮게 유지되는 조건 하에서 바이오마커가 커플링될 수 있는 임의의 기판을 말한다. 통상적으로 상기 기판은 미세역가(microtiter) 플레이트, 막(예를 들면 나일론 또는 니트로셀룰로오스) 또는 미세구(비드) 또는 칩일 수 있다.
막에 적용 또는 고정 전에, 상기 바이오마커를 변형시켜 고정화하거나 혼성화 효율을 개선할 수 있다. 상기 변형은 단독중합체 테일링(homopolymer tailing), 지방족기, NH2기, SH기 및 카르복실기와 같은 상이한 반응성 작용기와의 커플링 또는 바이오틴, 합텐 또는 단백질과의 커플링을 포함할 수 있다.
이때 "혼성화"란 핵산의 2 개의 상보적 가닥이 조합하여 이중가닥 분자(혼성체)를 형성하는 과정을 의미하는 것이다.
상기 혼성화 용액은 상기 바이오마커와 진단개체로부터 추출한 mRNA 또는 cDNA가 혼성화할 수 있게 하는 완충액으로서, 당업계에 공지된 용액을 이용할 수 있다.
상기 키트에는 상기 바이오마커와 혼성화한 진단개체의 핵산을 검출할 수 있는 검출기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 검출기는 스캐너, 분광광도계(spectrophotometer), 액체섬광계수기(liquid scintillation counter) 등을 이용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 키트는 최적의 반응 수행 조건을 기재한 사용자 설명서를 추가로 포함할 수 있다.
상기 키트는 진단개체와 동일 종에서의 바이오마커의 표준 발현량과 진단 개체에서의 측정된 바이오마커 발현량을 비교하여 노화 진행 여부를 정성적으로 검출할 수 있는데, 구체적으로 상기 키트를 통해 동일 종에서의 바이오마커의 표준 발현량과 진단개체에서 측정된 바이오마커 발현량을 비교하였을 때, 상기 진단개체에서의 발현량이 감소하였다면, 상기 진단개체는 동일 종에서의 평균 노화보다 노화가 더 진행된 상태임을 정확하고 신속하게 판별할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 바이오마커 및 혼성화 용액을 포함하는 비만 판별용 키트에 관한 것이다.
상기 바이오마커는 전술한 바와 같고, 용액 상에 보관되어 있거나, 기판 상에 상기 바이오마커가 높은 밀도로 고정화되어 있을 수 있다. 다시 말해 상기 바이오마커는 각각 일정한 영역에 고정화되어 있는 마이크로어레이 형태일 수 있다. 상기 마이크로어레이는 당업계에 잘 알려져 있다.
상기 키트는 용액 상에 분산되어 있거나, 상기 기판 상에 고정된 상기 바이오마커와 진단개체로부터 추출한 mRNA 또는 cDNA를 혼성화함으로써, 동일한 서열의 mRNA 또는 cDNA가 발현되고 있는지를 확인할 수 있다.
따라서 상기 키트에 사용되는 바이오마커는 이의 염기서열에서 한 가닥을 떼어내는 과정이 필요하다.
상기 바이오마커가 기판상에 고정된 마이크로어레이 형태일 경우, 상기 기판은 혼성화 특성을 보유하고, 혼성화의 배경 수준이 낮게 유지되는 조건 하에서 바이오마커가 커플링될 수 있는 임의의 기판을 말한다. 통상적으로 상기 기판은 미세역가(microtiter) 플레이트, 막(예를 들면 나일론 또는 니트로셀룰로오스) 또는 미세구(비드) 또는 칩일 수 있다.
막에 적용 또는 고정 전에, 상기 바이오마커를 변형시켜 고정화하거나 혼성화 효율을 개선할 수 있다. 상기 변형은 단독중합체 테일링(homopolymer tailing), 지방족기, NH2기, SH기 및 카르복실기와 같은 상이한 반응성 작용기와의 커플링 또는 바이오틴, 합텐 또는 단백질과의 커플링을 포함할 수 있다.
이때 "혼성화"란 핵산의 2 개의 상보적 가닥이 조합하여 이중가닥 분자(혼성체)를 형성하는 과정을 의미하는 것이다.
상기 혼성화 용액은 상기 바이오마커와 진단개체로부터 추출한 mRNA 또는 cDNA가 혼성화할 수 있게 하는 완충액으로서, 당업계에 공지된 용액을 이용할 수 있다.
상기 키트에는 상기 바이오마커와 혼성화한 진단개체의 핵산을 검출할 수 있는 검출기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 검출기는 스캐너, 분광광도계(spectrophotometer), 액체섬광계수기(liquid scintillation counter) 등을 이용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 키트는 최적의 반응 수행 조건을 기재한 사용자 설명서를 추가로 포함할 수 있다.
상기 키트는 진단개체와 동일 종에서의 바이오마커의 표준 발현량과 진단 개체에서의 측정된 바이오마커 발현량을 비교하여 비만 여부를 정성적으로 검출할 수 있는데, 구체적으로 상기 키트를 통해 동일 종에서의 바이오마커의 표준 발현량과 진단개체에서 측정된 바이오마커 발현량을 비교하였을 때, 상기 진단개체에서의 발현량이 감소하였다면, 상기 진단개체는 동일 종에서의 평균 중성지방 함량 및 지방구 크기와 밀도 보다 증가한 상태임을 정확하고 신속하게 판별할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 바이오마커 및 혼성화 용액을 포함하는 암 진단용 키트에 관한 것이다.
상기 바이오마커는 전술한 바와 같고, 용액 상에 보관되어 있거나, 기판 상에 상기 바이오마커가 높은 밀도로 고정화되어 있을 수 있다. 다시 말해 상기 바이오마커는 각각 일정한 영역에 고정화되어 있는 마이크로어레이 형태일 수 있다. 상기 마이크로어레이는 당업계에 잘 알려져 있다.
상기 키트는 용액 상에 분산되어 있거나, 상기 기판 상에 고정된 상기 바이오마커와 진단개체로부터 추출한 mRNA 또는 cDNA를 혼성화함으로써, 동일한 서열의 mRNA 또는 cDNA가 발현되고 있는지를 확인할 수 있다.
따라서 상기 키트에 사용되는 바이오마커는 이의 염기서열에서 한 가닥을 떼어내는 과정이 필요하다.
상기 바이오마커가 기판상에 고정된 마이크로어레이 형태일 경우, 상기 기판은 혼성화 특성을 보유하고, 혼성화의 배경 수준이 낮게 유지되는 조건 하에서 바이오마커가 커플링될 수 있는 임의의 기판을 말한다. 통상적으로 상기 기판은 미세역가(microtiter) 플레이트, 막(예를 들면 나일론 또는 니트로셀룰로오스) 또는 미세구(비드) 또는 칩일 수 있다.
막에 적용 또는 고정 전에, 상기 바이오마커를 변형시켜 고정화하거나 혼성화 효율을 개선할 수 있다. 상기 변형은 단독중합체 테일링(homopolymer tailing), 지방족기, NH2기, SH기 및 카르복실기와 같은 상이한 반응성 작용기와의 커플링 또는 바이오틴, 합텐 또는 단백질과의 커플링을 포함할 수 있다.
이때 "혼성화"란 핵산의 2 개의 상보적 가닥이 조합하여 이중가닥 분자(혼성체)를 형성하는 과정을 의미하는 것이다.
상기 혼성화 용액은 상기 바이오마커와 진단개체로부터 추출한 mRNA 또는 cDNA가 혼성화할 수 있게 하는 완충액으로서, 당업계에 공지된 용액을 이용할 수 있다.
상기 키트에는 상기 바이오마커와 혼성화한 진단개체의 핵산을 검출할 수 있는 검출기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 검출기는 스캐너, 분광광도계(spectrophotometer), 액체섬광계수기(liquid scintillation counter) 등을 이용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 키트는 최적의 반응 수행 조건을 기재한 사용자 설명서를 추가로 포함할 수 있다.
상기 키트는 진단개체와 동일 종에서의 바이오마커의 표준 발현량과 진단 개체에서의 측정된 바이오마커 발현량을 비교하여 비만 여부를 정성적으로 검출할 수 있는데, 구체적으로 상기 키트를 통해 동일 종에서의 바이오마커의 표준 발현량과 진단개체에서 측정된 바이오마커 발현량을 비교하였을 때, 상기 진단개체에서의 발현량이 감소하였다면, 상기 진단개체는 동일 종과는 달리 암이 발생 또는 성장하였음을 정확하고 신속하게 진단할 수 있다.
아울러, 본 발명에 따른 키트는 전술한 바와 같이 노화 진행 판별, 비만 판별 및 암 진단에 각각 이용할 수 있지만, 노화 진행 여부, 비만 증가 여부 및 암 발생 여부를 동시에 검출하는 복합 진단용 키트로도 사용할 수 있다.
앞서 설명한 바와 같이 상기 복합 진단용 키트는 상기 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염기서열을 포함하는 바이오마커와 혼성화용액을 포함하고, 상기 바이오마커의 발현이 감소함에 따라 UAS-GAl4 시스템을 이용해 특정 유전자 발현을 제어한 초파리 돌연변이체의 노화가 더 진행되고, 중성지방과 지방체 조직에서의 지방구 밀도 및 크기가 증가하며, 암 발생이 감소하는 것을 근거로 하여, 진단개체와 동일 종에서의 바이오마커의 표준 발현량과 진단 개체에서의 측정된 바이오마커 발현량을 비교하여 노화 진행 여부, 비만 증가 여부 및 암 발생 여부를 동시에 검출할 수 있는, 복합 진단용 키트로 사용이 가능하다는 장점을 갖는다.
본 발명의 또 다른 측면은 하기 단계들을 포함하는 노화 진행 판별방법에 관한 것이다.
Ⅰ) 진단 개체로부터 RNA를 분리 및 추출하는 단계;
Ⅱ) 상기 분리된 RNA 또는 이로부터 합성된 cDNA와 상기 노화 진행 판별용 키트를 접촉시켜 상기 RNA 또는 cDNA와 바이오마커를 혼성화하는 단계; 및
Ⅲ) 상기 바이오 마커와 RNA 또는 cDNA 사이의 혼성화 정도를 검출하는 단계;를 포함한다.
상기 진단개체로부터 RNA를 분리하는 방법은 당업계에 주지된 방법을 이용할 수 있다.
구체적으로 상기 진단개체로부터 분리된 세포를 이용하여 생체 외에서 상기 분리된 진단개체의 세포로부터 RNA를 분리하는 단계일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 cDNA는, 상기 분리된 RNA를 주형으로 하여 합성된 제1 가닥 cDNA를 사용할 수도 있다. 상기 제1 가닥 cDNA를 합성하는 방법은 당업계에 통상적으로 이용되는 방법을 이용할 수 있으며, 예를 들면 역전사효소, RNase 블록 리보뉴클레아제 저해제 등을 이용하여 합성할 수 있다. 역전사 효소의 예는 다양한 소스로부터 기원한 역전사 효소, 예를 들면, 조류 골수아세포증바이러스-유래역전사 효소(avian myeloblastosis virus-derived virus reverse transcriptase(AMV RTase)), 마우스 백혈병 바이러스-유래된 역전사 효소(murine leukemia virus-derived virus reverse transcriptase(MMLV RTase) 및 라우스-관련 바이러스 2 역전사효소 (Rous-associated virus 2 reverse transcriptase(RAV-2 RTase)를 포함한다.
바람직하게는, 상기 cDNA는 검출가능한 표지물질로 표지될 수 있다. 상기 표지물질은 형광, 인광 또는 방사성을 발하는 물질일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 상기 표지 물질은 Cy5 또는 Cy3 이다. 제1가닥 cDNA 합성시 프라이머의 5'-말단에 Cy5 또는 Cy3를 표지하여 합성을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 또한, 방사성 물질을 이용한 표지는 제1가닥 cDNA 합성시 32P 또는 35S 등과 같은 방사성 동위원소를 반응액에 첨가하면 합성 산물이 합성되면서 방사성이 합성 산물에 혼입되어 합성 산물이 방사성으로 표지될 수 있다.
상기 혼성화 정도를 검출하는 단계는 모세관 전기영동, 겔 전기영동, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행될 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따르면 상기 노화 진행 판별방법은 상기 검출 결과를 해당 진단개체의 표준과 비교하여 진단개체의 노화 진행 여부를 판별하는 단계를 더 포함할 수 있다.
다른 한편으로 상기 노화 진행 판별 방법은 상기 진단개체의 노화 진행 판별에 필요한 정보를 제공하기 위한 것으로, 상기 진단개체로부터 분리된 세포를 이용하여 생체 외에서 상기 분리된 진단개체의 세포로부터 RNA를 분리하고, 여기에 상기 서열번호 1 내지 4로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열의 발현을 검출할 수 있는 프로브 또는 서열번호 5 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열의 발현을 검출할 수 있는 항체를 첨가함으로써, 상기 서열번호 1 내지 4로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열을 포함하는 유전자 또는 서열번호 5 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 검출하는 것일 수 있다.
상기 과정을 통해 검출된 유전자와 단백질 발현량을 해당 진단개체의 표준과 비교하여 진단개체의 노화 진행 여부를 판별하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 진단개체는 인간 또는 인간을 제외한 포유류 또는 곤충인 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 하기 단계들을 포함하는 비만 판별방법에 관한 것이다.
Ⅰ) 진단 개체로부터 RNA를 분리 및 추출하는 단계;
Ⅱ) 상기 분리된 RNA 또는 이로부터 합성된 cDNA와 상기 비만 판별용 키트를 접촉시켜 상기 RNA 또는 cDNA와 바이오마커를 혼성화하는 단계; 및
Ⅲ) 상기 바이오 마커와 RNA 또는 cDNA 사이의 혼성화 정도를 검출하는 단계;를 포함한다.
상기 진단개체로부터 RNA를 분리하는 방법은 당업계에 주지된 방법을 이용할 수 있다.
구체적으로 상기 진단개체로부터 분리된 세포를 이용하여 생체 외에서 상기 분리된 진단개체의 세포로부터 RNA를 분리하는 단계일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 cDNA는, 상기 분리된 RNA를 주형으로 하여 합성된 제1 가닥 cDNA를 사용할 수도 있다. 상기 제1 가닥 cDNA를 합성하는 방법은 당업계에 통상적으로 이용되는 방법을 이용할 수 있으며, 예를 들면 역전사효소, RNase 블록 리보뉴클레아제 저해제 등을 이용하여 합성할 수 있다. 역전사 효소의 예는 다양한 소스로부터 기원한 역전사 효소, 예를 들면, 조류 골수아세포증바이러스-유래역전사 효소(avian myeloblastosis virus-derived virus reverse transcriptase(AMV RTase)), 마우스 백혈병 바이러스-유래된 역전사 효소(murine leukemia virus-derived virus reverse transcriptase(MMLV RTase) 및 라우스-관련 바이러스 2 역전사효소 (Rous-associated virus 2 reverse transcriptase(RAV-2 RTase)를 포함한다.
바람직하게는, 상기 cDNA는 검출가능한 표지물질로 표지될 수 있다. 상기 표지물질은 형광, 인광 또는 방사성을 발하는 물질일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 상기 표지 물질은 Cy5 또는 Cy3 이다. 제1가닥 cDNA 합성시 프라이머의 5'-말단에 Cy5 또는 Cy3를 표지하여 합성을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 또한, 방사성 물질을 이용한 표지는 제1가닥 cDNA 합성시 32P 또는 35S 등과 같은 방사성 동위원소를 반응액에 첨가하면 합성 산물이 합성되면서 방사성이 합성 산물에 혼입되어 합성 산물이 방사성으로 표지될 수 있다.
상기 혼성화 정도를 검출하는 단계는 모세관 전기영동, 겔 전기영동, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행될 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따르면 상기 비만 판별방법은 상기 검출 결과를 해당 진단개체의 표준과 비교하여 진단개체의 중성지방 함량의 증가, 지방체 조식에서의 지방구 크기 및 밀도 증가 여부를 통해 비만을 판별하는 단계를 더 포함할 수 있다.
다른 한편으로 상기 비만 판별 방법은 상기 진단개체의 비만 판별에 필요한 정보를 제공하기 위한 것으로, 상기 진단개체로부터 분리된 세포를 이용하여 생체 외에서 상기 분리된 진단개체의 세포로부터 RNA를 분리하고, 여기에 상기 서열번호 1 내지 4로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열의 발현을 검출할 수 있는 프로브 또는 서열번호 5 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열의 발현을 검출할 수 있는 항체를 첨가함으로써, 상기 서열번호 1 내지 4로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열을 포함하는 유전자 또는 서열번호 5 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 검출하는 것일 수 있다.
상기 과정을 통해 검출된 유전자와 단백질 발현량을 해당 진단개체의 표준과 비교하여 진단개체의 비만 증가(중성지방 함량 증가와 지방체 조직에서 지방구의 크기 및 밀도 증가 여부) 여부를 판별하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 진단개체는 인간 또는 인간을 제외한 포유류 또는 곤충인 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 하기 단계들을 포함하는 암 진단방법에 관한 것이다.
Ⅰ) 진단 개체로부터 RNA를 분리 및 추출하는 단계;
Ⅱ) 상기 분리된 RNA 또는 이로부터 합성된 cDNA와 상기 암 진단용 키트를 접촉시켜 상기 RNA 또는 cDNA와 바이오마커를 혼성화하는 단계; 및
Ⅲ) 상기 바이오 마커와 RNA 또는 cDNA 사이의 혼성화 정도를 검출하는 단계;를 포함한다.
상기 진단개체로부터 RNA를 분리하는 방법은 당업계에 주지된 방법을 이용할 수 있다.
구체적으로 상기 진단개체로부터 분리된 세포를 이용하여 생체 외에서 상기 분리된 진단개체의 세포로부터 RNA를 분리하는 단계일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 cDNA는, 상기 분리된 RNA를 주형으로 하여 합성된 제1 가닥 cDNA를 사용할 수도 있다. 상기 제1 가닥 cDNA를 합성하는 방법은 당업계에 통상적으로 이용되는 방법을 이용할 수 있으며, 예를 들면 역전사효소, RNase 블록 리보뉴클레아제 저해제 등을 이용하여 합성할 수 있다. 역전사 효소의 예는 다양한 소스로부터 기원한 역전사 효소, 예를 들면, 조류 골수아세포증바이러스-유래역전사 효소(avian myeloblastosis virus-derived virus reverse transcriptase(AMV RTase)), 마우스 백혈병 바이러스-유래된 역전사 효소(murine leukemia virus-derived virus reverse transcriptase(MMLV RTase) 및 라우스-관련 바이러스 2 역전사효소 (Rous-associated virus 2 reverse transcriptase(RAV-2 RTase)를 포함한다.
바람직하게는, 상기 cDNA는 검출가능한 표지물질로 표지될 수 있다. 상기 표지물질은 형광, 인광 또는 방사성을 발하는 물질일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 상기 표지 물질은 Cy5 또는 Cy3 이다. 제1가닥 cDNA 합성시 프라이머의 5'-말단에 Cy5 또는 Cy3를 표지하여 합성을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 또한, 방사성 물질을 이용한 표지는 제1가닥 cDNA 합성시 32P 또는 35S 등과 같은 방사성 동위원소를 반응액에 첨가하면 합성 산물이 합성되면서 방사성이 합성 산물에 혼입되어 합성 산물이 방사성으로 표지될 수 있다.
상기 혼성화 정도를 검출하는 단계는 모세관 전기영동, 겔 전기영동, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행될 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따르면 상기 암 진단방법은 상기 검출 결과를 해당 진단개체의 표준과 비교하여 진단개체의 암 발생 또는 성장 여부를 통해 암을 진단하는 단계를 더 포함할 수 있다.
다른 한편으로 상기 암 진단 방법은 상기 진단개체의 암 진단에 필요한 정보를 제공하기 위한 것으로, 상기 진단개체로부터 분리된 세포를 이용하여 생체 외에서 상기 분리된 진단개체의 세포로부터 RNA를 분리하고, 여기에 상기 서열번호 1 내지 4로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열의 발현을 검출할 수 있는 프로브 또는 서열번호 5 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열의 발현을 검출할 수 있는 항체를 첨가함으로써, 상기 서열번호 1 내지 4로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열을 포함하는 유전자 또는 서열번호 5 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 검출하는 것일 수 있다.
상기 과정을 통해 검출된 유전자와 단백질 발현량을 해당 진단개체의 표준과 비교하여 진단개체의 암 발생 및 성장 여부를 진단하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 진단개체는 인간 또는 인간을 제외한 포유류 또는 곤충인 것일 수 있다.
아울러, 상기 각각의 키트를 이용하여 노화 진행 판별, 비만 판별 및 암 진단을 각각 수행할 수 있으나, 본 발명에서는 상기 복합 진단용 키트를 이용함으로써 노화 진행 여부, 비만 증가 여부 및 암 발생 여부를 동시에 검출할 수도 있다.
앞서 설명한 바와 같이 상기 복합 진단용 키트를 상술한 각각의 키트를 이용한 판별방법과 동일한 과정으로 수행한다.
다만 검출 결과를 해당 진단개체의 표준과 비교하여 진단개체의 노화, 비만, 암 발생 또는 성장 여부를 판별 및 진단할 수 있다.
이하 본 발명을 바람직한 실시예를 참고로 하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
<준비 과정>
노화의 진행을 측정하는 것에 대한 연구를 위하여 우선 Actin-GS-Gal4 초파리와 야생형(w1118)의 초파리를 교배하여 RU486이 수명에 영향을 미치는지 알아보았으며, 그 결과 RU486이 수명에 영향을 미치지 않음을 확인하였다(하기 ‘도 1’ 참조).
Actin-GS-Gal4는 RU486이 있을 때 초파리 온 몸에서 발현되며, UAS-fbp RNAi는 Gal4가 만들어지면 fbp(Fructose-1,6-bisphosphatase, CG31692)의 전사가 RNAi 작용으로 인하여 fbp의 발현이 낮아진다. 이렇게 Actin-GS-Gal4와 UAS-fbp RNAi 초파리를 교배하여 얻은 자손(F1) 초파리에서 fbp의 발현이 낮아지는지 확인하기 위하여 fbp mRNA 양을 RT-PCR로 확인한 결과 RU486을 먹였을 때 fbp의 mRNA 양이 RU486을 먹이지 않았을 때 보다 현저하게 줄어든 것을 확인하였다. 이 결과는 Actin-GS-Gal4와 UAS-fbp RNAi가 정상적으로 작동한다는 것을 증명하는 것이다(하기 ‘도 2’ 참조).
[
실시예
1: Actin-
GS
-
Gal4
>
UAS
-
fbp
RNAi
의 RT-
PCR
]
UAS-fbp RNAi 초파리가 정상적으로 작동하는지 확인하기 위해서 Actin-GS-Gal4 초파리 암컷과 UAS- fbp RNAi 초파리 수컷을 교배하여 F1 세대의 수컷을 모아서 RU486(150μM)이 들어간 배지(설탕 2.5%, 포도당 5%, 한천 0.7%, 옥수수가루 6.1 %, 효모 2.6 %, 10 % Tegosept 1.6 %, 물 80.7 %)와 RU486이 들어가지 않은 배지에 10 일 동안 키운 후 fbp의 mRNA 양을 측정하기 위하여 역전사효소 중합효소연쇄반응(reverse transcriptase mediated PCR, RT-PCR)를 수행하였다. 그 결과 UAS-fbp RNAi가 작동하여 RU486이 들어가 있는 배지에서 키운 초파리의 fbp의 mRNA양이 대조구에 비하여 통계적으로 유의하게 감소되는 것을 확인하였다.
[
실시예
2:
RU486
을 먹인 Actin-
GS
-
Gal4
>
UAS
-
fbp
RNAi
초파리의 수명 측정]
Actin-GS-Gal4 초파리 암컷과 UAS-fbp RNAi 초파리 수컷을 교배하여 F1 세대의 수컷을 모아서 RU486(150μM)이 들어간 배지와 RU486이 들어가지 않은 배지에 120 마리를 넣고 최종 6 마리가 남을 때까지 온도 25 ℃, 상대습도 50 %, 12:12 시간 일광주기 조건으로 키우면서 수명을 측정하였다. 이 수명을 측정한 실험은 3 회 반복했다. 하기 도 3의 결과에서 나타난 것처럼 fbp의 발현이 줄어들면 수명이 감소하는, 즉 노화가 더 진행되는 것을 확인 할 수 있다(하기 ‘도 3’ 참조).
[
실시예
3:
RU486
을 먹인 Actin-
GS
-
Gal4
;
UAS
-
fbp
RNAi
초파리의 중성지방 측정]
Actin-GS-Gal4 초파리 암컷과 UAS- fbp RNAi 초파리 수컷을 교배하여 F1 세대의 수컷을 모아서 RU486(150μM)이 들어간 배지와 RU486이 들어가지 않은 배지에 약 100 마리 이상의 초파리를 넣어 10 일 간 키운 후 박층크로마토그래피법(TLC)를 이용하여 중성지방을 측정하였다(한편, 하기 ‘도 4’는 RU486을 먹인 야생형 초파리의 중성지방 함량 변화를 측정한 결과임). 각 실험군 당 초파리 10 마리를 에펜돌프 튜브에 넣고 추출용매(10 mM Tris, 1 mM EDTA, 0.1 % TritonX-100), 100 μl를 넣고 5 분 간 분쇄한 다음 원심분리를 하여 상층액 5 μl를 TLC 판에 점적하였다. 중성지방을 분리를 위한 TLC 전개용매 조성은 hexane; diethylether; acetic acid(70: 30: 1) 이었으며, 중성지방 표준물질은 참기름(sesame oil, Sigma-Aldrich S3547-250ML)이었다. TLC 판에 전개한 후, TLC 판을 건조시키고, 요오드 포화 상자에 넣어서 TLC 판을 염색한 후 사진을 찍어서 Image J 프로그램을 이용하여 중성지방 밴드를 정량했다. 그 결과, RU486을 먹인 초파리에서 즉, fbp 발현이 억제된 그룹에서 중성지방 함량이 유의하게 증가함을 확인 할 수 있었다(하기 ‘도 5’ 참조).
[
실시예
4:
RU486
을 먹인 Actin-
GS
-
Gal4
>
UAS
-
fbp
RNAi
초파리의
지방체
공초점
현미경 분석]
지방구 크기를 관찰하기 위하여 Actin-GS-Gal4 초파리 암컷과 UAS-fbp RNAi 초파리 수컷을 교배하여 F1 세대의 수컷을 모아서 RU486(150μM)이 들어간 배지와 RU486이 들어가지 않은 배지에 각각 10 일 간 키운 후 나일레드(Nile red)로 염색했다. 초파리를 해부하여 지방체 조직을 PBS에 녹인 4 % 파라폼알데히드 용액에 30 분간 상온에서 고정한 다음, PBS로 세척하고 0.5 mg/ml 나일레드(Sigma) 용액을 1:2,500으로 희석하여 상온에서 30 분간 염색한 후 증류수로 2번 세척한다. 이어 염색된 샘플을 슬라이드 글라스에 올려서 80 % 글리세롤 용액에 넣고 공초점 현미경으로 측정하였다(한편, 하기 ‘도 6’은 RU486을 먹인 Actin-GS-Gal4/UAS-nls.GFP 초파리의 지방체 조직에 대한 공초점 현미경 사진). 그 결과 지방구의 크기 및 밀도가 증가한 것을 확인할 수 있었다(하기 ‘도 7’ 참조).
[
실시예
5: 암 증식 모델 초파리(
UAS
-
Ras85D
;
c765
-
Gal4
)의 제작]
암과 관련한 연구를 수행하기 위하여, c765-Gal4 초파리와 UAS-Ras85D 초파리를 교배하여 암 증식 모델 초파리를 제작하였다.
[
실시예
6: 암 증식 모델 초파리(
UAS
-
Ras85D
;
c765
-
Gal4
)의 표현형 분석]
제작된 UAS-Ras85D; c765-Gal4 암 증식 검정 초파리 모델의 표현형을 분석하기 위하여 야생형 초파리(CS10)와 c765-Gal4와 CS10을 교배한 c765-Gal4/+CS10, UAS-Ras85D/+CS10 와 UAS-Ras85D/+CS10; c765-Gal4/+CS10 의 날개 길이를 비교한 결과 UAS-Ras85D/+CS10; c765-Gal4/+CS10 의 날개 길이가 3가지 대조구에 비하여 날개 길이가 길어진 것을 확인하였다. 날개 길이 비교는 초파리 각 개체마다의 차이를 보정하기 위하여 흉곽의 길이 대비 날개 길이를 측정하였다. 즉 암 증식 검정 모델로서 충분히 이용할 수 있음을 확인하였다. (하기 ‘도 8’ 참조)
[
실시예
7: 암 증식 모델
초파리(UAS-Ras85D; c765-Gal4)에서
fbp
유전자 발현 억제가 표현형에 미치는 영향]
fbp 유전자 발현 억제가 암 성장에 미치는 영향을 추정하기 위하여 암 증식 모델 초파리(UAS-Ras85D; c765-Gal4)와 UAS-fbp RNAi 초파리를 교배하여 얻은 F1 세대의 날개 표현형을 조사하였다. 그 결과, Ras85D 과발현으로 인해 증가한 날개 길이와 면적이 fbp의 발현이 억제되면 유의하게 감소하는 것이 확인 되었다(하기 도 9 및 도 10’ 참조).
상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 설명하였지만, 본 발명은 이에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 기술 사상 범위 내에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하고, 이 또한 첨부된 특허 청구 범위에 속하는 것은 당연하다.
<110> Korea University Research and Business Foundation
<120> Fbp gene in common associating life decrease, cancer and obesity
<130> HPC-6032
<160> 8
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1005
<212> DNA
<213> Drosophila sp.
<400> 1
atgacccaac agaggccagc tttcgactcc aatgcgatga cgctgacgcg tttcgtgctg 60
caggagcagc gaaagttcaa gagcgccact ggcgatctct cccagctgct caactccatc 120
cagaccgcca tcaaggctac atcatccgcg gtgcggaagg caggtatcgc caagctccat 180
ggattcgctg gcgacgtgaa tgtccaaggc gaggaggtca agaaactgga cgtgctctcc 240
aacgagctgt tcatcaacat gctgaagtca tcctatacca catgtctaat ggtttccgag 300
gagaacgaga atgtgatcga ggtggaagtg gagaaacagg gcaaatacat cgtgtgcttc 360
gatcccttgg atggatcctc caacatagac tgcctggtgt cgatcggttc aatcttcgcc 420
atttaccgca agaaaagcga tggtccgccc acagtggagg atgcactgca gcccggaaat 480
cagctggtgg ccgccggcta cgcgctatac ggttcggcca cagcaattgt cctgggtctg 540
ggttcgggag tgaatggctt cacttatgac ccggccatcg gagagttcgt gctgaccgat 600
cccaacatgc gggtgccgga gaagggaaag atatactcta tcaacgaggg atatgcagcg 660
gattgggagg atggtgtctt caactacatt gcggccaaga aggatcccgc caagggaaag 720
ccctatggag cgcggtacgt gggttccatg gtcgcggatg tgcatcgcac cattaaatac 780
ggcggcatct ttatctatcc ggcaacaaag tccgctccca gcggaaaact tcgtctgctg 840
tacgagtgcg tgcccatggc ctatctgatg atccaggctg gaggtctggc cagcgacgga 900
aagatcagca ttttggacat tgtgcccaag aagatccacg agcgcagtcc catattccta 960
ggatccaagt ccgacgtgga ggaggcactt agctacttaa agtga 1005
<210> 2
<211> 969
<212> DNA
<213> Drosophila sp.
<400> 2
atgacgctga cgcgtttcgt gctgcaggag cagcgaaagt tcaagagcgc cactggcgat 60
ctctcccagc tgctcaactc catccagacc gccatcaagg ctacatcatc cgcggtgcgg 120
aaggcaggta tcgccaagct ccatggattc gctggcgacg tgaatgtcca aggcgaggag 180
gtcaagaaac tggacgtgct ctccaacgag ctgttcatca acatgctgaa gtcatcctat 240
accacatgtc taatggtttc cgaggagaac gagaatgtga tcgaggtgga agtggagaaa 300
cagggcaaat acatcgtgtg cttcgatccc ttggatggat cctccaacat agactgcctg 360
gtgtcgatcg gttcaatctt cgccatttac cgcaagaaaa gcgatggtcc gcccacagtg 420
gaggatgcac tgcagcccgg aaatcagctg gtggccgccg gctacgcgct atacggttcg 480
gccacagcaa ttgtcctggg tctgggttcg ggagtgaatg gcttcactta tgacccggcc 540
atcggagagt tcgtgctgac cgatcccaac atgcgggtgc cggagaaggg aaagatatac 600
tctatcaacg agggatatgc agcggattgg gaggatggtg tcttcaacta cattgcggcc 660
aagaaggatc ccgccaaggg aaagccctat ggagcgcggt acgtgggttc catggtcgcg 720
gatgtgcatc gcaccattaa atacggcggc atctttatct atccggcaac aaagtccgct 780
cccagcggaa aacttcgtct gctgtacgag tgcgtgccca tggcctatct gatgatccag 840
gctggaggtc tggccagcga cggaaagatc agcattttgg acattgtgcc caagaagatc 900
cacgagcgca gtcccatatt cctaggatcc aagtccgacg tggaggaggc acttagctac 960
ttaaagtga 969
<210> 3
<211> 969
<212> DNA
<213> Drosophila sp.
<400> 3
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ctctcccagc tgctcaactc catccagacc gccatcaagg ctacatcatc cgcggtgcgg 120
aaggcaggta tcgccaagct ccatggattc gctggcgacg tgaatgtcca aggcgaggag 180
gtcaagaaac tggacgtgct ctccaacgag ctgttcatca acatgctgaa gtcatcctat 240
accacatgtc taatggtttc cgaggagaac gagaatgtga tcgaggtgga agtggagaaa 300
cagggcaaat acatcgtgtg cttcgatccc ttggatggat cctccaacat agactgcctg 360
gtgtcgatcg gttcaatctt cgccatttac cgcaagaaaa gcgatggtcc gcccacagtg 420
gaggatgcac tgcagcccgg aaatcagctg gtggccgccg gctacgcgct atacggttcg 480
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<211> 1032
<212> DNA
<213> Drosophila sp.
<400> 4
atggcggcca gtagcggtga ttccaaaatg acccaacaga ggccagcttt cgactccaat 60
gcgatgacgc tgacgcgttt cgtgctgcag gagcagcgaa agttcaagag cgccactggc 120
gatctctccc agctgctcaa ctccatccag accgccatca aggctacatc atccgcggtg 180
cggaaggcag gtatcgccaa gctccatgga ttcgctggcg acgtgaatgt ccaaggcgag 240
gaggtcaaga aactggacgt gctctccaac gagctgttca tcaacatgct gaagtcatcc 300
tataccacat gtctaatggt ttccgaggag aacgagaatg tgatcgaggt ggaagtggag 360
aaacagggca aatacatcgt gtgcttcgat cccttggatg gatcctccaa catagactgc 420
ctggtgtcga tcggttcaat cttcgccatt taccgcaaga aaagcgatgg tccgcccaca 480
gtggaggatg cactgcagcc cggaaatcag ctggtggccg ccggctacgc gctatacggt 540
tcggccacag caattgtcct gggtctgggt tcgggagtga atggcttcac ttatgacccg 600
gccatcggag agttcgtgct gaccgatccc aacatgcggg tgccggagaa gggaaagata 660
tactctatca acgagggata tgcagcggat tgggaggatg gtgtcttcaa ctacattgcg 720
gccaagaagg atcccgccaa gggaaagccc tatggagcgc ggtacgtggg ttccatggtc 780
gcggatgtgc atcgcaccat taaatacggc ggcatcttta tctatccggc aacaaagtcc 840
gctcccagcg gaaaacttcg tctgctgtac gagtgcgtgc ccatggccta tctgatgatc 900
caggctggag gtctggccag cgacggaaag atcagcattt tggacattgt gcccaagaag 960
atccacgagc gcagtcccat attcctagga tccaagtccg acgtggagga ggcacttagc 1020
tacttaaagt ga 1032
<210> 5
<211> 334
<212> PRT
<213> Drosophila sp.
<400> 5
Met Thr Gln Gln Arg Pro Ala Phe Asp Ser Asn Ala Met Thr Leu Thr
1 5 10 15
Arg Phe Val Leu Gln Glu Gln Arg Lys Phe Lys Ser Ala Thr Gly Asp
20 25 30
Leu Ser Gln Leu Leu Asn Ser Ile Gln Thr Ala Ile Lys Ala Thr Ser
35 40 45
Ser Ala Val Arg Lys Ala Gly Ile Ala Lys Leu His Gly Phe Ala Gly
50 55 60
Asp Val Asn Val Gln Gly Glu Glu Val Lys Lys Leu Asp Val Leu Ser
65 70 75 80
Asn Glu Leu Phe Ile Asn Met Leu Lys Ser Ser Tyr Thr Thr Cys Leu
85 90 95
Met Val Ser Glu Glu Asn Glu Asn Val Ile Glu Val Glu Val Glu Lys
100 105 110
Gln Gly Lys Tyr Ile Val Cys Phe Asp Pro Leu Asp Gly Ser Ser Asn
115 120 125
Ile Asp Cys Leu Val Ser Ile Gly Ser Ile Phe Ala Ile Tyr Arg Lys
130 135 140
Lys Ser Asp Gly Pro Pro Thr Val Glu Asp Ala Leu Gln Pro Gly Asn
145 150 155 160
Gln Leu Val Ala Ala Gly Tyr Ala Leu Tyr Gly Ser Ala Thr Ala Ile
165 170 175
Val Leu Gly Leu Gly Ser Gly Val Asn Gly Phe Thr Tyr Asp Pro Ala
180 185 190
Ile Gly Glu Phe Val Leu Thr Asp Pro Asn Met Arg Val Pro Glu Lys
195 200 205
Gly Lys Ile Tyr Ser Ile Asn Glu Gly Tyr Ala Ala Asp Trp Glu Asp
210 215 220
Gly Val Phe Asn Tyr Ile Ala Ala Lys Lys Asp Pro Ala Lys Gly Lys
225 230 235 240
Pro Tyr Gly Ala Arg Tyr Val Gly Ser Met Val Ala Asp Val His Arg
245 250 255
Thr Ile Lys Tyr Gly Gly Ile Phe Ile Tyr Pro Ala Thr Lys Ser Ala
260 265 270
Pro Ser Gly Lys Leu Arg Leu Leu Tyr Glu Cys Val Pro Met Ala Tyr
275 280 285
Leu Met Ile Gln Ala Gly Gly Leu Ala Ser Asp Gly Lys Ile Ser Ile
290 295 300
Leu Asp Ile Val Pro Lys Lys Ile His Glu Arg Ser Pro Ile Phe Leu
305 310 315 320
Gly Ser Lys Ser Asp Val Glu Glu Ala Leu Ser Tyr Leu Lys
325 330
<210> 6
<211> 322
<212> PRT
<213> Drosophila sp.
<400> 6
Met Thr Leu Thr Arg Phe Val Leu Gln Glu Gln Arg Lys Phe Lys Ser
1 5 10 15
Ala Thr Gly Asp Leu Ser Gln Leu Leu Asn Ser Ile Gln Thr Ala Ile
20 25 30
Lys Ala Thr Ser Ser Ala Val Arg Lys Ala Gly Ile Ala Lys Leu His
35 40 45
Gly Phe Ala Gly Asp Val Asn Val Gln Gly Glu Glu Val Lys Lys Leu
50 55 60
Asp Val Leu Ser Asn Glu Leu Phe Ile Asn Met Leu Lys Ser Ser Tyr
65 70 75 80
Thr Thr Cys Leu Met Val Ser Glu Glu Asn Glu Asn Val Ile Glu Val
85 90 95
Glu Val Glu Lys Gln Gly Lys Tyr Ile Val Cys Phe Asp Pro Leu Asp
100 105 110
Gly Ser Ser Asn Ile Asp Cys Leu Val Ser Ile Gly Ser Ile Phe Ala
115 120 125
Ile Tyr Arg Lys Lys Ser Asp Gly Pro Pro Thr Val Glu Asp Ala Leu
130 135 140
Gln Pro Gly Asn Gln Leu Val Ala Ala Gly Tyr Ala Leu Tyr Gly Ser
145 150 155 160
Ala Thr Ala Ile Val Leu Gly Leu Gly Ser Gly Val Asn Gly Phe Thr
165 170 175
Tyr Asp Pro Ala Ile Gly Glu Phe Val Leu Thr Asp Pro Asn Met Arg
180 185 190
Val Pro Glu Lys Gly Lys Ile Tyr Ser Ile Asn Glu Gly Tyr Ala Ala
195 200 205
Asp Trp Glu Asp Gly Val Phe Asn Tyr Ile Ala Ala Lys Lys Asp Pro
210 215 220
Ala Lys Gly Lys Pro Tyr Gly Ala Arg Tyr Val Gly Ser Met Val Ala
225 230 235 240
Asp Val His Arg Thr Ile Lys Tyr Gly Gly Ile Phe Ile Tyr Pro Ala
245 250 255
Thr Lys Ser Ala Pro Ser Gly Lys Leu Arg Leu Leu Tyr Glu Cys Val
260 265 270
Pro Met Ala Tyr Leu Met Ile Gln Ala Gly Gly Leu Ala Ser Asp Gly
275 280 285
Lys Ile Ser Ile Leu Asp Ile Val Pro Lys Lys Ile His Glu Arg Ser
290 295 300
Pro Ile Phe Leu Gly Ser Lys Ser Asp Val Glu Glu Ala Leu Ser Tyr
305 310 315 320
Leu Lys
<210> 7
<211> 322
<212> PRT
<213> Drosophila sp.
<400> 7
Met Thr Leu Thr Arg Phe Val Leu Gln Glu Gln Arg Lys Phe Lys Ser
1 5 10 15
Ala Thr Gly Asp Leu Ser Gln Leu Leu Asn Ser Ile Gln Thr Ala Ile
20 25 30
Lys Ala Thr Ser Ser Ala Val Arg Lys Ala Gly Ile Ala Lys Leu His
35 40 45
Gly Phe Ala Gly Asp Val Asn Val Gln Gly Glu Glu Val Lys Lys Leu
50 55 60
Asp Val Leu Ser Asn Glu Leu Phe Ile Asn Met Leu Lys Ser Ser Tyr
65 70 75 80
Thr Thr Cys Leu Met Val Ser Glu Glu Asn Glu Asn Val Ile Glu Val
85 90 95
Glu Val Glu Lys Gln Gly Lys Tyr Ile Val Cys Phe Asp Pro Leu Asp
100 105 110
Gly Ser Ser Asn Ile Asp Cys Leu Val Ser Ile Gly Ser Ile Phe Ala
115 120 125
Ile Tyr Arg Lys Lys Ser Asp Gly Pro Pro Thr Val Glu Asp Ala Leu
130 135 140
Gln Pro Gly Asn Gln Leu Val Ala Ala Gly Tyr Ala Leu Tyr Gly Ser
145 150 155 160
Ala Thr Ala Ile Val Leu Gly Leu Gly Ser Gly Val Asn Gly Phe Thr
165 170 175
Tyr Asp Pro Ala Ile Gly Glu Phe Val Leu Thr Asp Pro Asn Met Arg
180 185 190
Val Pro Glu Lys Gly Lys Ile Tyr Ser Ile Asn Glu Gly Tyr Ala Ala
195 200 205
Asp Trp Glu Asp Gly Val Phe Asn Tyr Ile Ala Ala Lys Lys Asp Pro
210 215 220
Ala Lys Gly Lys Pro Tyr Gly Ala Arg Tyr Val Gly Ser Met Val Ala
225 230 235 240
Asp Val His Arg Thr Ile Lys Tyr Gly Gly Ile Phe Ile Tyr Pro Ala
245 250 255
Thr Lys Ser Ala Pro Ser Gly Lys Leu Arg Leu Leu Tyr Glu Cys Val
260 265 270
Pro Met Ala Tyr Leu Met Ile Gln Ala Gly Gly Leu Ala Ser Asp Gly
275 280 285
Lys Ile Ser Ile Leu Asp Ile Val Pro Lys Lys Ile His Glu Arg Ser
290 295 300
Pro Ile Phe Leu Gly Ser Lys Ser Asp Val Glu Glu Ala Leu Ser Tyr
305 310 315 320
Leu Lys
<210> 8
<211> 343
<212> PRT
<213> Drosophila sp.
<400> 8
Met Ala Ala Ser Ser Gly Asp Ser Lys Met Thr Gln Gln Arg Pro Ala
1 5 10 15
Phe Asp Ser Asn Ala Met Thr Leu Thr Arg Phe Val Leu Gln Glu Gln
20 25 30
Arg Lys Phe Lys Ser Ala Thr Gly Asp Leu Ser Gln Leu Leu Asn Ser
35 40 45
Ile Gln Thr Ala Ile Lys Ala Thr Ser Ser Ala Val Arg Lys Ala Gly
50 55 60
Ile Ala Lys Leu His Gly Phe Ala Gly Asp Val Asn Val Gln Gly Glu
65 70 75 80
Glu Val Lys Lys Leu Asp Val Leu Ser Asn Glu Leu Phe Ile Asn Met
85 90 95
Leu Lys Ser Ser Tyr Thr Thr Cys Leu Met Val Ser Glu Glu Asn Glu
100 105 110
Asn Val Ile Glu Val Glu Val Glu Lys Gln Gly Lys Tyr Ile Val Cys
115 120 125
Phe Asp Pro Leu Asp Gly Ser Ser Asn Ile Asp Cys Leu Val Ser Ile
130 135 140
Gly Ser Ile Phe Ala Ile Tyr Arg Lys Lys Ser Asp Gly Pro Pro Thr
145 150 155 160
Val Glu Asp Ala Leu Gln Pro Gly Asn Gln Leu Val Ala Ala Gly Tyr
165 170 175
Ala Leu Tyr Gly Ser Ala Thr Ala Ile Val Leu Gly Leu Gly Ser Gly
180 185 190
Val Asn Gly Phe Thr Tyr Asp Pro Ala Ile Gly Glu Phe Val Leu Thr
195 200 205
Asp Pro Asn Met Arg Val Pro Glu Lys Gly Lys Ile Tyr Ser Ile Asn
210 215 220
Glu Gly Tyr Ala Ala Asp Trp Glu Asp Gly Val Phe Asn Tyr Ile Ala
225 230 235 240
Ala Lys Lys Asp Pro Ala Lys Gly Lys Pro Tyr Gly Ala Arg Tyr Val
245 250 255
Gly Ser Met Val Ala Asp Val His Arg Thr Ile Lys Tyr Gly Gly Ile
260 265 270
Phe Ile Tyr Pro Ala Thr Lys Ser Ala Pro Ser Gly Lys Leu Arg Leu
275 280 285
Leu Tyr Glu Cys Val Pro Met Ala Tyr Leu Met Ile Gln Ala Gly Gly
290 295 300
Leu Ala Ser Asp Gly Lys Ile Ser Ile Leu Asp Ile Val Pro Lys Lys
305 310 315 320
Ile His Glu Arg Ser Pro Ile Phe Leu Gly Ser Lys Ser Asp Val Glu
325 330 335
Glu Ala Leu Ser Tyr Leu Lys
340
Claims (7)
- 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열을 포함하는 암 진단용 바이오마커 조성물.
- 제1항에 있어서,
진단개체의 암 세포 또는 암 조직의 발생이 증가함에 따라 상기 바이오마커의 발현량은 감소하는 것을 특징으로 하는 암 진단용 바이오마커 조성물., - 제1항에 따른 바이오마커 조성물; 및 혼성화 용액을 포함하는 암 진단용 키트.
- 제3항에 있어서,
상기 바이오마커 조성물은 바이오마커가 용액 상에 분산된 형태로 존재하거나. 기판 상에 바이오마커가 고정화된 마이크로어레이 형태로 존재하는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트. - 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열, 이들의 상보적 염기서열 및 이들의 mRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 염기서열을 포함하는 바이오마커 조성물; 및 혼성화 용액;을 포함하는 노화 진행 판별, 비만 판별 및 암 진단을 동시에 검출하는 복합 진단용 키트.
- Ⅰ) 진단 개체의 분리된 세포 혹은 조직으로부터 RNA를 분리 및 추출하는 단계;
Ⅱ) 상기 분리된 RNA 또는 이로부터 합성된 cDNA와 상기 제4항에 따른 키트를 접촉시켜 상기 RNA 또는 cDNA와 바이오마커를 혼성화하는 단계; 및
Ⅲ) 상기 바이오 마커와 RNA 또는 cDNA 사이의 혼성화 정도를 검출하는 단계;를 포함하는 암 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법. - Ⅰ) 진단 개체의 분리된 세포 혹은 조직으로부터 RNA를 분리 및 추출하는 단계;
Ⅱ) 상기 분리된 RNA 또는 이로부터 합성된 cDNA와 상기 제5항에 따른 키트를 접촉시켜 상기 RNA 또는 cDNA와 바이오마커를 혼성화하는 단계; 및
Ⅲ) 상기 바이오 마커와 RNA 또는 cDNA 사이의 혼성화 정도를 검출하는 단계;를 포함하는 노화 진행 판별, 비만 증가 판별 및 암 진단에 필요한 정보를 동시에 제공하는 방법.
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| KR1020180075676A KR20180088602A (ko) | 2015-07-24 | 2018-06-29 | 암에 공통적으로 관련되는 fbp 유전자를 포함하는 바이오마커 및 이의 용도 |
Family Applications Before (1)
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| KR1020160093586A KR20170012139A (ko) | 2015-07-24 | 2016-07-22 | 노화, 비만 및 암에 공통적으로 관련되는 fbp 유전자를 포함하는 바이오마커 및 이의 용도 |
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Patent Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| KR20120021401A (ko) | 2010-07-29 | 2012-03-09 | 서울대학교산학협력단 | Ａｔｇ5 유전자를 과발현하는 수명이 연장된 형질전환 동물, 및 이의 제조방법 |
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