KR20180068551A - 돼지 액상 정액의 제조방법 및 이를 위한 장치 - Google Patents

돼지 액상 정액의 제조방법 및 이를 위한 장치 Download PDF

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이영주
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전북대학교산학협력단
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Abstract

버퍼 용액에 광을 조사하는 단계; 상기 광 조사된 버퍼 용액 및 돼지 정액을 필터 막을 포함하는 교반 용기에 주입하는 단계; 및 상기 교반 용기에 가스를 퍼지하여 상기 버퍼 용액에 압력을 가해 상기 버퍼 용액 중에 포함된 세균을 상기 필터 막을 통해 여과시키는 단계를 포함하는 돼지 액상 정액의 제조방법에 관한 것이다.

Description

돼지 액상 정액의 제조방법 및 이를 위한 장치{PREPARATION METHOD OF BOAR LIQUID SEMEN AND APPARATUS THEREFOR}
본원은 돼지 액상 정액 제조방법 및 이를 위한 장치에 관한 것이다.
현재 양돈 농가들은 대규모화 및 단지화 됨에 따라 자연종부가 아닌 인공수정을 통하여 번식을 실시하고 있다(Althouse 등, Theriogenology 2008;70:1317-1323). 따라서 농가에 깨끗하고 우수한 품질의 액상정액 공급이 요구되고 있다.
일반적으로 건강한 돼지 종모돈의 정액에는 박테리아(bacteria)와 같은 세균이 거의 발견되지 않지만, 채취 과정 중 돼지의 포피게실(preputial diverticulum), 분뇨나 더러운 피부 등을 통한 세균의 유입이 일어날 수 있고, 채취 장소, 채취자와 채취 시험관의 오염 등을 통해서도 세균 유입이 발생할 수 있다(Kuster와 Althouse, Theriogenology 2016;85:21-26). 정액의 세균 오염은 정자 응집반응, 정자의 첨체손상, 정자운동성 감소 등을 유발시켜 정자의 생존능을 저하시킨다(Althouse 등, Theriogenology 2000;53:1167-1176; Althouse와 Lu, Theriogenology 2005;63:573-584). 또한 인공수정을 통한 세균의 유입은 암컷의 생식기 질병을 유발 할 수도 있다고 보고되었다(Sone 등, Japanese Journal of Animal Reproduction 1989;35:159-164; Althouse와 Lu, Theriogenology 2005;63:573-584). 돼지 정액 내에는 세균과 바이러스가 상당량 포함되어 있다. 보존된 액상정액에서 주로 발견되는 박테리아는 그람음성균으로 알려져 있으며(Althouse 등, Theriogenology 2000;53:1167-1176; Ubeda 등, Theriogenology 2013;80:565-570), 국내에서는 녹농균, 대장균, 스핑고모나스 파우시모비리스(Sphingomonas paucimobilis), 코쿠리아 바리안스(Kocuria varians), 스타필로코커스(Staphylococcus spp) 등의 검출이 보고되었다(손 등, Korean Journal of Veterinary Service 2010;33(4):319-326).
채취된 돼지 정액은 항생제가 포함된 다양한 종류의 희석액을 이용하여 제조된 뒤, 약 15℃ 내지 17℃가 유지 되는 저장고에 보관/운반된다. 그러나 세포 배양액 성분으로 구성되어있는 희석액과 적절한 보관온도는 오히려 항생제 내성을 가지는 세균이 증식할 수 있는 환경을 제공하게 된다(Kuster와 Althouse, Theriogenology 2016;85:21-26). 아직까지도 세균의 오염을 최소화하기 위한 여러 방법들이 제시되어 왔으나, 채취과정 중의 종모돈 상태(연령이나 생식기관의 해부학적 특성 등)나 채취기술, 온도, 습도 등과 같은 영향들은 객관적으로 제어하기가 어렵다(Goldberg 등, Research in Veterinary Science 2013;95:362-367).
본원의 배경이 되는 기술은 한국특허등록공보 제10-0903581호는 돼지 액상 정액의 장기보존 희석제에 관한 것이다. 그러나, 상기 공개 특허는 희석제에 항생제를 포함하고 있으며, 상기 공개 특허의 희석제를 사용하여 인공수정을 하여 자란 성인 돼지에게도 항생제가 포함된다는 문제점이 있다.
본원은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 돼지 액상 정액의 제조방법 및 이를 위한 장치를 제공하는 것을 목적으로 한다.
다만, 본원의 실시예가 이루고자 하는 기술적 과제는 상기된 바와 같은 기술적 과제들에 한정되지 않으며, 또 다른 기술적 과제들이 존재할 수 있다.
상기한 기술적 과제를 달성하기 위한 기술적 수단으로서, 본원의 제 1측면은, 버퍼 용액에 광을 조사하는 단계; 상기 광 조사된 버퍼 용액 및 액상 돼지 정액을 필터 막을 포함하는 교반 용기에 주입하는 단계; 및 상기 교반 용기에 가스를 퍼지하여 상기 버퍼 용액에 압력을 가해 상기 버퍼 용액 중에 포함된 세균을 상기 필터 막을 통해 여과시키는 단계를 포함하는, 돼지 액상 정액의 제조 방법 을 제공한다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 세균을 상기 필터 막을 통해 여과시키는 단계에서, 상기 버퍼 용액 및 상기 액상 돼지 정액을 교반하는 것을 포함하는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 버퍼 용액은 글루코제, 시트르산 나트륨, 탄산수소나트륨, 에틸렌디아민사아세트산, 염화칼륨 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함하는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 광은 자외선을 포함하는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 자외선은 10 mJ/cm2 이상 조사되는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 필터 막의 포어 크기는 2 ㎛ 내지 4 ㎛의 범위 를 가지는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 필터 막의 포어 크기는 상기 세균의 크기보다 크고 상기 돼지 정자의 크기보다 작은 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 가스는 질소, 아르곤, 헬륨, 네온, 크립톤, 제논, 라돈 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 기체를 포함하는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 제 2측면은, 액상 돼지 정액 및 버퍼 용액을 수용하기 위한 교반 용기; 상기 교반 용기에 상기 버퍼 용액을 주입하기 위한 버퍼 용액 주입부; 상기 주입부 상에 연결되고, 상기 버퍼 용액을 소독하기 위한 광 조사부; 액상 돼지 정액을 주입하기 위한 돼지 정액 주입부; 상기 교반 용기 하부에 배치된 필터 막; 및 상기 교반 용기에 가스를 공급하기 위한 가스 공급부를 포함하는, 돼지 액상 정액 제조 장치치를 제공한다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 버퍼 용액은 글루코제, 시트르산 나트륨, 탄산수소나트륨, 에틸렌디아민사아세트산, 염화칼륨 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함하는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 광 조사부는 자외선을 조사하는 것을 포함하는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 자외선은 10 mJ/cm2 이상 조사되는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 필터 막의 포어 크기는 2 ㎛ 내지 4 ㎛ 의 범위를 가지는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 필터 막의 포어 크기는 상기 세균의 크기보다 크고 상기 돼지 정자의 크기보다 작은 것을 특징으로 한다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 가스는 질소, 아르곤, 헬륨, 네온, 크립톤, 제논, 라돈 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 기체를 포함하는 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상술한 과제 해결 수단은 단지 예시적인 것으로서, 본원을 제한하려는 의도로 해석되지 않아야 한다. 상술한 예시적인 실시예 외에도, 도면 및 발명의 상세한 설명에 추가적인 실시예가 존재할 수 있다.
전술한 본원의 과제 해결 수단에 의하면, 본원에 따른 돼지 정액 제조 장치는 정자에 직접적인 물리적 손상을 가하지 않고 세균만을 걸러낼 수 있다. 여과된 정자는 항생제가 포함되지 않은 희석액을 이용하여 액상 정액으로 제조될 수 있다. 상기 액상 정액에는 항생제가 포함되지 않아 상기 액상 정액을 사용하여 인공수정을 하여 자란 성인 돼지에게 항생제가 포함되지 않는 장점이 있다. 이로써 돼지고기 섭취를 통해 발생하는 항생제 내성에 대한 문제점을 해결할 수 있다.
또한, 상기 액상 정액을 이용하여 양돈 농가에서의 인공수정과 실험실에서의 체외수정이 용이하여 우수 종모돈을 이용한 돼지의 품종개량과 생명공학분야에 활용될 수 있다.
도 1은 본원의 일 구현예에 따른 돼지 액상 정액 제조장치의 개략도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따라 도출된 제 1 실험 결과의 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따라 도출된 제 2 실험 결과의 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라 도출된 제 3 실험 결과의 그래프이다.
아래에서는 첨부한 도면을 참조하여 본원이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 실시예를 상세히 설명한다.
그러나 본원은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 그리고 도면에서 본원을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였으며, 명세서 전체를 통하여 유사한 부분에 대해서는 유사한 도면 부호를 붙였다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 다른 부분과 "연결"되어 있다고 할 때, 이는 "직접적으로 연결"되어 있는 경우뿐 아니라, 그 중간에 다른 소자를 사이에 두고 "전기적으로 연결"되어 있는 경우도 포함한다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부재가 다른 부재 "상에", "상부에", "상단에", "하에", "하부에", "하단에" 위치하고 있다고 할 때, 이는 어떤 부재가 다른 부재에 접해 있는 경우뿐 아니라 두 부재 사이에 또 다른 부재가 존재하는 경우도 포함한다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 정도의 용어 "약", "실질적으로" 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본원의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 또한, 본원 명세서 전체에서, "~ 하는 단계" 또는 "~의 단계"는 "~를 위한 단계"를 의미하지 않는다.
본원 명세서 전체에서, 마쿠시 형식의 표현에 포함된 "이들의 조합"의 용어는 마쿠시 형식의 표현에 기재된 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 혼합 또는 조합을 의미하는 것으로서, 상기 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 의미한다.
본원 명세서 전체에서, "A 및/또는 B" 의 기재는, "A, B, 또는, A 및 B" 를 의미한다.
이하에서는 본원의 돼지 액상 정액 제조 장치 및 방법에 대하여 구현예 및 실시예와 도면을 참조하여 구체적으로 설명하도록 한다. 그러나, 본원이 이러한 구현예 및 실시예와 도면에 제한되는 것은 아니다.
본원의 제 1측면은 버퍼 용액에 광을 조사하는 단계; 상기 광 조사된 버퍼 용액 및 액상 돼지 정액을 필터 막을 포함하는 교반 용기에 주입하는 단계; 및 상기 교반 용기에 가스를 퍼지하여 상기 버퍼 용액에 압력을 가해 상기 버퍼 용액 중에 포함된 세균을 상기 필터 막을 통해 여과시키는 단계를 포함하는, 돼지 액상 정액의 제조 방법에 관한 것이다.
먼저, 버퍼 용액에 광을 조사하여, 상기 버퍼 용액을 소독한다 (S100).
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 광은 살균 영역의 자외선을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 자외선의 파장 영역은 제한되지 않으며, 각종 세균이나 박테리아를 제거하기 위한 살균 영역의 자외선을 사용하는 것이 바람직하다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 버퍼 용액은 글루코제, 시트르산 나트륨, 탄산수소나트륨, 에틸렌 디아민사아세트산, 염화칼륨 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 버퍼 용액은 액상 정액의 세균 증식을 억제하고 보존성을 높여 인공수정 시 암컷 돼지의 생식기 질병을 줄일 수 있다.
상기 광 조사를 통해 상기 버퍼 용액 상의 세균을 제거하여 교반 용기에 세균 및 박테리아가 99.9% 이상 제거된 소독된 버퍼 용액을 공급할 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 자외선은 10 mJ/cm2 이상 조사되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이어서, 상기 광 조사된 버퍼 용액 및 액상 돼지 정액을 필터 막을 포함하는 교반 용기에 주입한다 (S200).
상기 액상 돼지 정액 및 상기 광 조사된 버퍼 용액은 교반 용기되어 현탁액을 형성할 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 돼지 액상 정액의 제조 방법은 상기 세균을 상기 필터 막을 통해 여과시키는 단계에서, 상기 버퍼 용액 및 상기 액상 돼지 정액을 교반하는 것을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 필터 막의 포어 크기는 상기 세균의 크기보다 크고 상기 돼지 정자의 크기보다 작은 것으로서, 상기 필터 막을 통해 세균을 걸러낼 수 있다.
상기 세균은, 예를 들어, 그람음성균, 녹농균, 대장균, 스핑고모나스 파우시모비리스(Sphingomonas paucimobilis), 코쿠리아 바리안스(Kocuria varians), 또는 스타필로코커스(Staphylococcus spp) 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 세균의 크기를 고려하여, 본원의 일 구현예에 따르면, 상기 필터 막의 포어 크기는 2 ㎛ 내지 4 ㎛ 의 범위를 가지는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는 약 3 ㎛ 내외의 포어 크기를 가지는 필터막을 사용할 수 있다.
이어서, 상기 교반 용기에 가스를 퍼지하여 상기 버퍼 용액에 압력을 가해 상기 버퍼 용액 중에 포함된 세균을 상기 필터 막을 통해 여과시킨다 (S300).
상기 교반 용기에 가스 공급부를 통해 가스를 퍼지하여 상기 버퍼 용액에 압력을 가함으로써 상기 버퍼 용액 중에 포함된 세균을 상기 필터 막을 통해 여과시킬 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 가스는 질소, 아르곤, 헬륨, 네온, 크립톤, 제논, 라돈 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 기체를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 돼지 액상 정액 제조 장치 내의 총 버퍼 용액의 양이 1/2 이하로 감소하면 가스 퍼징을 멈추고 버퍼 용액을 추가로 공급한 후 퍼징을 진행하는 세척 단계를 반복한다. 상기 세척 횟수는 1회 이상 반복할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
도 1은 돼지 정액 내의 세균을 제거하기 위한 돼지 액상 정액 제조 장치(100)를 설명하기 위한 개략적인 평면도이다.
도 1을 참조하면, 상기 돼지 액상 정액 제조 장치(100)는 교반 용기(110)를 포함한다.
상기 교반 용기(110) 상단부에는 버퍼 용액을 소독하기 위하여 광이 조사되는 광 조사부(200)와, 상기 소독된 버퍼 용액을 상기 교반 용기(110)에 주입하기 위한 버퍼 용액 주입부(300) 및 상기 액상 돼지 정액을 상기 교반 용기에 주입하기 위한 돼지정액 주입부 (400)가 연결되어 있다.
따라서, 버퍼 용액을 상기 버퍼 용액 주입부(300)에 주입하는 동시에 상기 광 조사부(200)에 의해 광 조사를 진행하여 상기 버퍼 용액 내에 포함된 세균이나 박테리아를 제거할 수 있다.
상기 광 조사부(200)에서 조사되는 상기 광은 살균 영역의 자외선을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 자외선의 파장 영역은 제한되지 않으며, 각종 세균이나 박테리아를 제거하기 위한 살균 영역의 자외선을 사용하는 것이 바람직하다.
상기 교반 용기(110) 상단부에는 가스 공급부(500)가 연결되어 있다.
상기 가스 공급부(500)에 공급되는 상기 가스는 질소, 아르곤, 헬륨, 네온, 크립톤, 제논, 라돈 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 기체를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 교반 용기(110) 하단부에는 필터 막(120)이 있어 상기 버퍼 용액(150) 내에 포함된 세균들이 여과될 수 있다.
상기 필터 막(120)의 상기 필터 막의 포어 크기는 상기 세균의 크기보다 크고 상기 돼지 정자의 크기보다 작은 것으로서, 상기 필터 막을 통해 세균을 걸러낼 수 있다.
상기 세균은, 예를 들어, 그람음성균, 녹농균, 대장균, 스핑고모나스 파우시모비리스(Sphingomonas paucimobilis), 코쿠리아 바리안스(Kocuria varians), 또는 스타필로코커스(Staphylococcus spp) 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 세균의 크기를 고려하여, 본원의 일 구현예에 따르면, 상기 필터 막의 포어 크기는 2 ㎛ 내지 4 ㎛ 의 범위를 가지는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는 약 3 ㎛ 내외의 포어 크기를 가지는 필터막을 사용할 수 있다.
상기 액상 돼지 정액과 상기 광 조사된 버퍼 용액의 교반을 용이하게 하기 위해 상기 돼지 액상 정액 제조 장치(100) 상층부에 자석 바(magnetic bar)(130)가 부착되어 있을 수 있다.
상기 자석 바(130)는 필터 막에 직접 접촉하지 않으면서 돼지 정액이 손상되지 않는 수준에서 서서히 교반하여 상기 돼지 정액을 포함하는 버퍼 용액을 혼합한다.
상기 교반 용기(110) 하단에 처리부(140)가 있어 상기 필터 막(120)에 의해 여과된 박테리아들이 상기 처리부(140)에 분리될 수 있다. 상기 분리된 박테리아들은 상기 처리부(140)와 연결된 처리관(141)을 통해 제거된다. 이 과정을 통해 상기 버퍼용액 (150)으로부터 박테리아와 같은 세균을 분리시킬 수 있다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며 본원의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.
[실시예]
증류수 100ml에 3.7 g 글루코제, 0.6 g 시트르산 나트륨, 0.125 g 탄산수소나트륨, 0.125 g 에틸렌디아민사아세트산, 및 0.075 g 염화칼륨을 혼합하여 버퍼용액을 제조하였다.
상기 버퍼 용액에 10 mJ/cm2 이상의 자외선을 조사하여 상기 버퍼 용액에 포함된 세균을 소독하였다.
상기 자외선이 조사된 버퍼 용액 및 액상 돼지 정액을 필터 막(포어크기: 3㎛)을 포함하는 교반 용기에 주입하였다.
상기 교반 용기에 질소를 퍼지하여 상기 돼지 정액을 포함하는 버퍼 용액에 압력을 가하였다.
상기 돼지 정액을 포함하는 버퍼 용액에 포함된 세균들이 필터 막에 의해 여과되어 걸러지고, 상기 교반 용기에는 세균이 걸러진 돼지 액상 정액을 수득하였다.
[비교예]
증류수 100ml에 3.7 g 글루코제, 0.6 g 시트르산 나트륨, 0.125 g 탄산수소나트륨, 0.125 g 에틸렌디아민사아세트산, 및 0.075 g 염화칼륨을 혼합하여 버퍼용액을 제조하였다.
돼지 정액을 추출하고, 상기 버퍼 용액과 혼합하여 돼지 정액을 포함하는 버퍼 용액을 제조하였다.
상기 돼지 정액을 포함하는 버퍼 용액에 10 mJ/cm2 이상의 자외선을 조사하여 돼지 액상 정액을 수득하였다.
[실험예]
상기 실시예 및 비교예에서 제조된 액상 정액을 1ⅹ108 spermatozoa/ml 농도로 희석하고 17℃ 저장고에서 5일간 보관하였다.
상기 액상 정액은 비교를 위하여 여과하여 희석액으로 보존된 정액(여과 정액, 실시예), 버퍼 용액으로 희석하여 보존된 정액(희석 정액, 비교예) 및 원 정액(액상 돼지 정액, 비교예)으로 나누어 보존하였다.
상기 여과 정액, 희석 정액 및 원 정액의 정자 운동성을 관찰하였고 (제 1 실험), 그 결과를 도 2 로서 표시하였다.
구체적으로, 정자의 운동성은 38.5℃ 가온판이 장착된 광학현미경하에서 육안으로 각각 관찰하였다.
도 2에 나타난 정자의 운동성 결과에 따르면, 보존 2일 동안 여과 정액, 희석 정액 및 원 정액 사이의 운동성 차이는 크게 나타나지 않았다. 보존 3일째부터 원 정액의 운동성이 유의적으로 감소하기 시작하였고, 희석 정액과 여과 정액의 운동성은 보존 5일 동안 비슷한 운동성을 보였다.
상기 여과 정액, 희석 정액 및 원 정액의 정자의 생존능(viability)을 관찰하였고 (제 2 실험), 그 결과를 도 3 으로서 표시하였다.
구체적으로, 정자의 생존능 확인을 위해 5일간 보존된 정액을 38.5℃ 배양기에서 1시간 동안 배양 시킨 후, 정자를 SYBR14과 프로피디움 요오드화물(PI) 형광시약을 이용하여 염색하였다. 형광염색 처리된 정자는 형광현미경 하에서 관찰하여 살아있는 정자(녹색:SYBR14)와 죽은 정자(빨강:PI)의 수를 세어 확인하였다.
도 3에 나타난 정자의 생존능 결과에 따르면, 원 정액은 유의적으로 높은 죽은 정자의 비율을 나타내었으며, 희석 정액과 여과 정액은 보존 5일 후에도 절반 이상의 살아있는 정자 수를 나타내었다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따라 도출된 제 3의 결과 그래프를 나타낸 도면으로, 상술한 바와 같은 방법에 의해 비교한 정액에 있어서 여과 과정에서 박테리아의 제거율을 확인할 수 있다.
도4에 나타난 여과 과정에서 박테리아의 제거율 결과에 따르면, 1번의 여과 과정 마다 절반 이상의 박테리아가 제거 되며, 특히 슈도모나스 에루지노사 (Pseudomonas Aruginosa)의 경우 4번의 여과 과정을 반복하여 99%의 제거가 가능함을 확인할 수 있었다.
도 4에 나타난 여과 과정에서 박테리아의 제거율 결과에 따르면, 희석 정액에서 나타나는 세균종이 여과 과정 반복을 통해 여과 정액에서는 상기 세균종이 제거되는 것을 확인할 수 있다.
전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
100: 돼지 액상 정액 제조 장치
110: 교반 용기
120: 필터 막
130: 자석 바
140: 처리부
141: 처리관
150: 버퍼용액
200: 광 조사부
300: 버퍼용액 주입부
400: 돼지정액 주입부
500: 가스 공급부

Claims (9)

  1. 버퍼 용액에 광을 조사하는 단계;
    상기 광 조사된 버퍼 용액 및 액상 돼지 정액을 필터 막을 포함하는 교반 용기에 주입하는 단계;
    및 상기 교반 용기에 가스를 퍼지하여 상기 버퍼 용액에 압력을 가해 상기 버퍼 용액 중에 포함된 세균을 상기 필터 막을 통해 여과시키는 단계
    를 포함하는, 돼지 액상 정액의 제조 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 세균을 상기 필터 막을 통해 여과시키는 단계에서, 상기 버퍼 용액 및 상기 액상 돼지 정액을 교반하는 것을 포함하는, 돼지 액상 정액의 제조 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 버퍼 용액은 글루코제, 시트르산 나트륨, 탄산수소나트륨, 에틸렌 디아민사아세트산, 염화칼륨 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함하는 것인, 돼지 액상 정액의 제조 방법.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 광은 자외선을 포함하는 것인, 돼지 액상 정액의 제조 방법.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 자외선은 10 mJ/cm2 이상 조사되는 것인, 돼지 액상 정액의 제조 방법.
  6. 제 1 항에 있어서,
    상기 필터 막의 포어 크기는 2 ㎛ 내지 4 ㎛의 범위를 가지는 것인, 돼지 액상 정액의 제조 방법.
  7. 제 1 항에 있어서,
    상기 필터 막의 포어 크기는 상기 세균의 크기보다 크고 상기 돼지 정자의 크기보다 작은 것인, 돼지 액상 정액의 제조 방법.
  8. 제 1 항에 있어서,
    상기 가스는 질소, 아르곤, 헬륨, 네온, 크립톤, 제논, 라돈 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 기체를 포함하는 것인, 돼지 액상 정액의 제조 방법.
  9. 액상 돼지 정액 및 버퍼 용액을 수용하기 위한 교반 용기;
    상기 교반 용기에 상기 버퍼 용액을 주입하기 위한 버퍼 용액 주입부;
    상기 주입부 상에 연결되고, 상기 버퍼 용액을 소독하기 위한 광 조사부;
    상기 액상 돼지 정액을 상기 교반 용기에 주입하기 위한 돼지 정액 주입부;
    상기 교반 용기 하부에 배치된 필터 막; 및
    상기 교반 용기에 가스를 공급하기 위한 가스 공급부
    를 포함하는, 돼지 액상 정액 제조 장치.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200095392A (ko) * 2019-01-31 2020-08-10 (주)바이오라이트 극미약광을 이용한 수컷 포유류의 번식능력 개선 방법

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