KR20180053476A - 칡소의 친자감정용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 칡소의 친자 감정을 위한 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하 칡소에 특화되어 정확도가 높은 표 1 또는 서열번호 1 내지 92의 염기서열로 이루어지는 SNP 마커를 포함하는 폴리뉴클레오티드, 친자 감정용 조성물, 키트 및 이를 이용한 칡소의 친자감정 방법에 관한 것이다.

Description

칡소의 친자감정용 조성물{Composition for parentage testing in Chickso}
본 발명은 칡소의 친자감정용 유전자 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게 칡소에 특화되어 정확도가 높은 SNP 마커를 포함하는 폴리뉴클레오티드, 친자 감정용 조성물, 키트 및 이를 이용한 칡소의 친자감정 방법에 관한 것이다.
일반적으로 국내 한우 집단은 유전 능력 향상, 혈통 관리, 동일성 검사 등 다양한 목적으로 혈통을 확인하는 것이 필수적이다. 한우 친자감정을 위한 유전자 조성물은 초위성체(Microsatellite), 단일염기서열다형성(SNP, Single Nucleotide Polymorphism) 등 다양한 마커들과 방법들이 보고되고 있다.
황갈색 한우가 국내 대부분을 차지하지만, 칡소는 호반무늬의 털색을 지닌 우리 나라 고유의 한우로 전국적으로 2,000여 마리가 사육되고 있으며, 2012년 국제연합식량농업기구 가축다양성정보시스템(FAO, DADIS)에 등재된 품종이다.
칡소 집단은 적은 규모로 폐쇄적으로 관리되어 왔고, 혈통관리 및 유전 능력 향상을 위한 개량체계 등 한우와 비교하여 현재까지 유전적 특징 확립, 개량체계 확립 등이 체계적으로 진행되지 못하고 있는 실정이다. 또한, 국제동물유전학회(International Society for Animal Genetics, ISAG)에서 친자감정용 SNP 마커 세트(100 core SNPs, 100 additional SNPs)를 제안하였으나, 유럽 소 품종들의 혈통 검사를 위한 세트로써, 마커 개발 당시 한우를 포함한 아시안 육우는 포함되지 않았다. 나아가, 한우 집단의 동일성 검사, 개체식별, 친자감정 등의 목적으로 제공되는 SNP 마커 정보 역시 칡소 집단을 분석 목적에 있어 따로 고려하지 않았기 때문에 직접적으로 활용이 불가능하다.
본 발명의 배경기술로 대한민국 공개특허 제10-2012-0113852에는 단일염기다형성을 이용한 한우육 판별방법이 기재되어 있다.
본 발명의 목적은 표 1에 기재된 단일염기다형성(SNP) 마커를 포함하는 20개 내지 200개의 연속적인 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 서열번호 1 내지 92의 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 SNP 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 칡소의 친자 감정용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 폴리뉴클레오티드, 그에 의해 코딩되는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드의 cDNA를 포함하는 칡소의 친자 감정용 마이크로어레이를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 칡소의 친자 감정용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 SNP 마커를 이용한 칡소의 친자 감정방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 측면에 의하면, 표 1에 기재된 단일염기다형성(SNP) 마커를 포함하는 20개 내지 200개의 연속적인 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 서열번호 1 내지 92의 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드가 제공될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 SNP 마커는 대립유전자형빈도(MAP, minor allele frequency)가 0.3 이상인 폴리뉴클레오티드를 제공될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 상기 SNP 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 칡소의 친자 감정용 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 폴리뉴클레오티드, 그에 의해 코딩되는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드의 cDNA를 포함하는 칡소의 친자 감정용 마이크로어레이가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 상기 조성물을 포함하는 칡소의 친자 감정용 키트가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, (a) 피검체로부터에서 핵산을 추출하는 단계; 및 (b) 상기 핵산의 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드의 대립유전자형을 결정하고 분석하는 단계; 를 포함하는 칡소의 친자 감정방법이 제공된다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 칡소의 친자 감정 방법은 종래의 ISAG 패널을 이용한 방법에 비해 정확도가 높아 칡소의 유전적 특징 파악, 혈통정립 및 개량체계 개선 등 다양한 목적에서 친자 감정을 수행 할 때 유용하게 활용할 수 있다.
본 발명을 더 쉽게 이해하기 위해 편의상 특정 용어를 본원에 정의한다. 본원에서 달리 정의하지 않는 한, 본 발명에 사용된 과학 용어 및 기술 용어들은 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥상 특별히 지정하지 않는 한, 단수 형태의 용어는 그것의 복수 형태도 포함하는 것이며, 복수 형태의 용어는 그것의 단수 형태도 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 용어 "SNP 마커"란, 개체 또는 종을 식별하기 위해 이용되는 DNA 서열 상의 단일 염기 다형성 대립인자 염기쌍을 의미한다. SNP는 비교적 그 빈도가 높고 안정하며 유전체 전체에 분포되어 있고 이에 의하여 개체의 유전적 다양성이 발생하므로, SNP 마커는 개체 간의 유전적 근접성을 알려주는 지표의 역할을 할 수 있다. SNP 마커는 일반적으로 단일 염기 다형성에 수반되는 표현형의 변화를 포함 하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 SNP 마커의 경우 아미노산 서열의 변이 또는 칡소 개체의 표현형의 차이를 나타낼 수 있다.
본 발명의 용어 "다형성(polymorphism)"이란, 하나의 유전자 좌위(locus)에 두 가지 이상의 대립유전자(allele)가 존재하는 경우를 의미하며 다형성 부위 중에서, 개체에 따라 단일 염기만이 다른 것을 단일염기 다형성이라 한다. 바람직한 다형성 마커는 선택된 집단에서 3% 이상, 더욱 바람직하게는 5% 또는 10% 이상의 발생빈도를 나타내는 두 가지 이상의 대립유전자를 가진다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면에 의하면, 표 1에 기재된 단일염기다형성(SNP) 마커를 포함하는 20개 내지 200개의 연속적인 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
본 발명의 일 측면에 의하면, 표 1에 기재된 단일염기다형성(SNP) 마커를 포함하는 20개 내지 200개의 연속적인 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
Figure pat00001
Figure pat00002
Figure pat00003
상기 마커는 종래 공지된 국제동물 유전학회(ISAG)에서 친자감정용 SNP 마커 세트와 비교하여, 높은 다형정보량 및 부권부정률을 가지고 있어 칡소의 친자감정에 적합하다.
본 발명에는 폴리뉴클레오타이드의 크기를 20 ~ 200 bp로 한정하였으나, 이는 현재의 혼성화 기술로 재현이 가능한 수준에서 기술적인 구체성을 나타내도록 한정한 것이며, 상기 단일염기다형성을 식별할 수 있는 정도라면 사용하는 기술에 따라 상기 범위를 벗어나는 크기로서 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 의하면, 서열번호 1 내지 92의 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 SNP 마커는 대립유전자형빈도(MAP, minor allele frequency)가 0.3 이상인 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 상기 대립유전자형빈도는 대립 유전자형의 빈도가 낮은 것의 비율을 의미하며, SNP마커의 유전적 다양성을 표현하는 표준지표로, MAF가 5% 이상의 경우를 일반 다형성(common polymorphism), MAF가 1 내지 5%일 경우, 희귀 다형성(Rare polymorphism) 및 MAF가 1% 이하의 경우를 돌연변이(Mutation)로 나뉜다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 상기 SNP 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 칡소의 친자 감정용 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 폴리뉴클레오티드, 그에 의해 코딩되는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드의 cDNA를 포함하는 칡소의 친자 감정용 마이크로어레이가 제공된다. 본 발명에 따른 칡소의 친자 감정용 마이크로어레이는 칡소의 감정에 특화된 표 1에 표기된 SNP 또는 서열번호 1 내지 92의 각 다형성 부위의 염기를 특이적으로 구별할 수 있도록 혼성화 할 수 있는 폴리뉴클레오티드, 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드 또는 이들과 혼성화 하는 폴리뉴클레오티드 및 이에 의해 코딩되는 폴리펩티드나 이의 cDNA를 이용하여 프로브로 사용함으로써, 본 기술분야의 당업자에게 알려져 있는 통상에 방법에 의해 제조될 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드는 아미노-실란, 폴리-L-라이신 및 알데히드로 이루어진 군에서 선택되는 활성기가 코팅된 기판 상에 고정될 수 있고, 상기 기판은 실리콘 웨이퍼, 유리, 석영, 금속 및 플라스틱으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드를 기판에 고정화시키는 방법으로는 피에조일렉트릭(piezoelectric) 방식을 이용한 마이크로피펫팅 (micropipetting)법, 핀(pin) 형태의 스팟터(spotter)를 이용한 방법 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 변이 부위의 정보를 가진 당업자들은 용이하게 마이크로어레이의 제작이 가능 할 것이다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 상기 조성물을 포함하는 칡소의 친자 감정용 키트가 제공된다. 본 발명에 따른 키트는 본 발명의 마이크로어레이 이외에 진단 대상으로부터 해당 SNP를 포함하는 DNA를 분리 및 증폭하는데 사용되는 프라이머 세트를 추가로 포함할 수 있다. 상기 적절한 프라이머 세트는 본 발명의 서열을 참조하여 당업자는 용이하게 설계할 수 있을 것이다. 또한, 본 발명에 따른 키트는 중합 반응에 필요한 시약, 예컨대 dNTP, 각종의 중합효소 및 발색제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 키트가 만일 PCR 증폭 과정에 적용되는 경우, 본 발명의 키트는 선택적으로, PCR 증폭에 필요한 시약, 예컨대, 완충액, DNA 중합효소(예컨대, Thermus aquaticus (Taq), Thermus thermophilus (Tth), Thermus filiformis, Thermis flavus, Thermococcus literalis 또는 Pyrococcus furiosus(Pfu)로부터 수득한 열 안정성 DNA 중합효소), DNA 중합 효소 조인자 및 dNTPs를 포함할 수 있으며, 본 발명의 키트가 면역 분석에 적용되는 경우, 본 발명의 키트는 선택적으로, 이차항체 및 표지의 기질을 포함할 수 있다. 나아가, 본 발명에 따른 키트는 상기한 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, (a) 피검체로부터에서 핵산을 추출하는 단계; 및 (b) 상기 핵산의 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드의 대립유전자형을 결정하고 분석하는 단계; 를 포함하는 칡소의 친자 감정방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 방법의 단계 (a)는 피검체의 핵산을 얻는 과정으로서, 이는 당해 기술분야에 널리 알려져 있다. 예를 들어, 상기 핵산은 칡소의 근육, 표피, 혈액, 뼈, 장기로부터 얻을 수 있고, 근육 또는 혈액으로부터 얻는 것이 더 적합할 수 있다. 상기 핵산이 게놈 DNA인 경우, 게놈 DNA의 분리는, 본 기술분야에 공지된 통상의 방법에 따라 실시될 수 있다(참조: Rogers S. O. and A.J. Bendich. 1988, In PlantMolecular Biology Manual). 또한 상기 핵산이 mRNA인 경우에는, mRNA의 분리는 본 기술분야에 공지된 통상의 방법에 따라 총 RNA를 분리함으로써 실시될 수 있다(참조: Sambrook, J. et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 2001; Ausubel, F.M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, 1987; 및 Chomczynski, P. et al., Anal. Biochem. 162:156, 1987). 상기 분리된 총 RNA는 역전사효소를 이용하여 cDNA로 합성될 수 있는데, 상기 총 RNA는 동물세포로부터 분리된 것이어서 mRNA의 말단에 폴리-A 테일을 갖고 있으므로, 이러한 서열 특성을 이용한 올리고 dT 프라이머 및 역전사 효소를 이용하여 cDNA를 용이하게 합성할 수 있다.
본 발명에 따른 방법의 단계 (b)에서는 분리된 핵산의 염기서열의 결정은 당업계에 알려진 다양한 방법에 의하여 이루어질 수 있다. 예를 들면, 디데옥시 법에 의한 직접적인 핵산의 뉴클레오티드 서열의 결정을 통하여 이루어지거나, SNP 부위의 서열을 포함하는 프로브 또는 그에 상보적인 프로브를 상기 DNA와 혼성화시키고 그로부터 얻어지는 혼성화 정도를 측정함으로써 다형성 부위의 뉴클레오티드 서열을 결정하는 방법 등이 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 혼성화의 정도는 예를 들면, 검출 가능한 표지를 표적 DNA에 표지하여, 혼성화된 표적 DNA 만을 특이적으로 검출함으로써 이루어질 수 있으며, 그 외 전기적 신호 검출방법 등이 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 피검체로부터 분리한 핵산 본 발명에 따른 SNP를 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적 폴리뉴클레오티드, 또는 이와 혼성화하는 폴리뉴클레오티드와 혼성화 시킨 후 혼성화 결과를 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 프로브는 본 발명의 단일염기다형성 부위와 혼성화되며, 이때 발생하는 혼성화 신호를 검출하여 단일염기다형성 변이 여부를 직접 결정할 수 있다. 상기 이용되는 프로브로서, 상기 단일염기다형성을 포함하는 서열에 완전하게 상보적인 서열이 이용될 수 있으나, 특이적 혼성화를 방해하지 않는 범위 내에서 실질적으로 상보적인 서열이 이용될 수도 있다. 바람직하게는, 상기 프로브의 3'-말단 또는 5'-말단은 상기 단일염기다형성 염기에 상보적인 염기를 갖는다. 일반적으로, 혼성화에 의해 형성되는 듀플렉스(duplex)의 안정성은 말단의 서열의 일치에 의해 결정되는 경향이 있기 때문에, 3'-말단 또는 5'-말단에 단일염기다형성 염기에 상보적인 염기를 갖는 프로브에서 말단 부분이 혼성화되지 않으면, 이러한 듀플렉스는 엄격한 조건에서 해체될 수 있다. 혼성화에 적합한 조건은 문헌[Joseph Sambrook, et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2001 및 Haymes, B. D., et al., Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach, 1985]에 개시된 사항을 참조하여 결정할 수 있다. 혼성화에 이용되는 엄격한 조건(stringent condition)은 온도, 이온 세기(완충액 농도) 및 유기 용매와 같은 화합물의 존재 등을 조절하여 결정될 수 있다. 이러한 엄격한 조건은 혼성화 되는 서열에 의존하여 다르게 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 단계 b)의 분석은 본 기술분야에 널리 알려진 공지된 방법을 적용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 단일염기다형성을 분석하기 위한 방법으로서, 대립 유전자 특이적 프로브 혼성화 방법(allelespecific probe hybridization), 대립 유전자 특이적 증폭 방법(allele-specific amplification), 서열분석법 (sequencing), 5' 뉴클레아제 분해법(5' nuclease digestion), 분자 비콘 어세이법(molecular beacon assay), 올리고뉴클레오티드 결합 어세이법 (oligonucleotide ligation assay), 크기 분석법(size analysis) 또는 단일가닥 배좌 다형성법(single-stranded conformation polymorphism) 등이 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 칡소의 친자감정 방법은 종래 공지된 ISAG SNP 패널을 이용한 방법에 비해 정확도가 우수하여 프로그램 및 DNA 칩 등에 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
칡소 집단(N=48)에서 친자검정을 위한 후보 SNP 마커 추출
공지된 50K SNP 칩 패널(illumina Inc., USA)로부터 유전자형 빈도를 비교분석하는 과정을 통하여, 최소 대립유전자 빈도(minor allele frequency), 하디-웨인버그 평형(HWE)에서의 SNP, 이형접합성에 의해 92개 SNP마커를 선발하였다.
표 2는 92개 SNP마커의 염색체별 위치 및 프로브 서열 정보를 나타낸 것이다.
Figure pat00004
Figure pat00005
Figure pat00006
SNP 마커 비교분석 결과
각 마커에 대하여 다형정보량(Polymorphic Information Contents), 부권부정률(None-exclusion probability)을 산출하였으며, 92개 SNP마커가 조합되었을 때 각 통계수치를 정리하였다(표 3 참조).
표 3은 본 발명에서 개발된 92개의 SNP마커의 칡소 집단 적용 결과를 나타낸다.
Figure pat00007
친자 감정을 위한 종래의 ISAG SNP 패널도 동일 조건(MAF, HWE)에 품질관리(QC)를 수행하여 처리한 결과, 100개의 core SNP 마커의 경우, 4개의 마커는 MAF가 0.1 이하로 칡소 집단에서 낮은 최소 대립유전자빈도를 가지고 있어 활용이 불가능하였다.
또한, 다형정보량, 부권부정률 역시 본 발명에서 제공하는 92개 SNP 마커 조합보다 낮은 값을 가지고 있는 것을 확인하였다(표 4 참조).
표 4는 ISAG 제공 100개 core SNP 마커의 칡소 집단 적용 결과를 나타낸다.
Figure pat00008
이상으로 본 발명을 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION <120> Composition for parentage testing in Chickso <130> NPF30468 <160> 92 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 1 ccaccgtagc aactcgagcc ccacacaaag agcccccaac ttaaaggcat gtaccctgcc 60 aacccttcac tctgggattc tgggactcca tagccagaag ttcttttctt tcacatgctt 120 c 121 <210> 2 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 2 agtcataaag taggtagtta acagacctga aagtctgggc attcttgcct gagctgctct 60 atgtctttca ccatggaaca gatcactggt attagaaatg atgacacagt taaaacatgc 120 a 121 <210> 3 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 3 ggaactctgt acgtgacaag tagtctgcat actatcgagc tgttctccag ccccacactg 60 tatttctaac ctcctgggat cttttattaa tatatgtatt taatagggtt ttttttttcc 120 c 121 <210> 4 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 4 gcacttgccc tttccccgtg gattgaacag gaaaagatgt gggctgagac tcaagaatca 60 tgctggtggc caaaaagcct ggttctcagt ccatctggaa ctgtttggaa ctgacaaggg 120 a 121 <210> 5 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 5 aagttgatat atcattctat attccaaagg aaaaatattt taacacagaa ttattatagc 60 aataacactt aagaaacatg taatttttct gacctagatc atactacctt tggcttcaac 120 t 121 <210> 6 <211> 120 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 6 cctgctcata tccaagtgag aagaaacagc aggtcaggag ccagctactc tgtaaagcca 60 agccatgtgt tttggcctct gtgaccagtg ttggaaaggt ctggagcatt tcatttttac 120 120 <210> 7 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 7 gcagcactga gtgtgtatgg gccataaaaa ggcagctgtt taagactggg cacatgtgtg 60 aatactgcaa cacaaaatgt acacacacct gagcaattac atcataaatt tcacacccaa 120 a 121 <210> 8 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 8 ctctgtgtct aacagtctca acttggagcg tccactgaga cattctgaaa tggttgttgc 60 atgactcaca ggtgaaaaac tacaaacagg taaggaaaca gcctttccat gaaataactt 120 c 121 <210> 9 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 9 agtctcttat ggggctgcag aaacctgaag tctagagggg cgcttccaag ctcactcact 60 tggttgttgg ccagagccct ctttccttgc catgtggagc tcatcactaa ccagcccaaa 120 t 121 <210> 10 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 10 agcaagggta cgttttgaaa actttagact ctggttcccc acacaagcca actgggccat 60 ttgtgtcaaa gtcactgcag aaaatgtaga ctggcgttgc tttaattcag gtgtcagtaa 120 t 121 <210> 11 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 11 cagcttccca gattccccaa agttggtaaa attaagaaga caaaacaaca ggacagaaga 60 acaaacggct gttttacttg tgaacgctga agaattcatg tttatggaga atttattaac 120 a 121 <210> 12 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 12 ggcattgagt atgccagtac aagggtggtc atcacatttg tgatgaatgg ttggggcgga 60 tggactaaag agtttattgg tagatggacg atgaagtgta agtgttgagg atctgggaaa 120 a 121 <210> 13 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 13 cttctggtgt ccttccatta acctaggata agaagccctg atcggaaggt caaggcccac 60 atcacaggtt cacaccagcc cttgctggtc tgcctctgaa gaaccttcat ttccaactct 120 c 121 <210> 14 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 14 gcagtcctca ccatacctat tgctcctgtc ggctctaagg ggctagaggc tttgttttta 60 ttccacaaat gctgaggcca atgtctgact cgtggccagt tcttgatgtg tgtgaagaga 120 a 121 <210> 15 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 15 gctttattaa aatatcactt acagtaaaat tgaccctatt ttaaatgtat cattctgtgc 60 attttgacag atatgtacgg ttatgtgacc actaccacag tcatgataca gaatacttct 120 a 121 <210> 16 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 16 aaagatacag tagcatcagc atgagacttt ctcttgacat aaccagagga gctgggaggg 60 tgctctaaag gcctctgttc ttactctgtg actcagttat tttgctgggt gttcattcac 120 c 121 <210> 17 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 17 actcctagaa cacttctaaa agtaggaagg agtacattaa gaataagtcc taaaaaagaa 60 aagagtaatt cctacttagg agaagcaaaa gcaggcagaa ctaagaagaa agcagaccag 120 g 121 <210> 18 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 18 agtctttctt taatatttat gatttatgta cttggtggcc ctggtcttgg cggcagcatg 60 tgggatttct agctgcagca cgcacactta gctgtggcat acaggatcta gctccctccc 120 c 121 <210> 19 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 19 gccaccaagg tcaagggctg tgctgcttac ttctgggtgc acagcatcta acacagaaca 60 ttgcagagat tagggcctca gtaaatgtgt ttcagaggaa taaatgaatc ttcctgtgaa 120 c 121 <210> 20 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 20 ctaacaataa gccaattaca aagttttctg ggcatattta gactttcaga tgttgatact 60 ttgtaaggcc atactgccta tggggcggca atgcactcat ttattgctct gtcctaataa 120 g 121 <210> 21 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 21 attgtacaac agaaacaaag aggctcctgt gttgcaggac caacacgcag gggcaggcgc 60 taaaacaggc ccttgaagtt aaatccagcg tcttgtacct ttctaccctt ttaaaggttt 120 g 121 <210> 22 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cagcaaagaa gaccattttg gctaaaagag agcctggaga agtgtggaga aatgacatca 60 tagatgtaac agggggccac accatcgcct cggagcaacc agaactctat tttttgaatg 120 c 121 <210> 27 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 27 acagggaact ctctcactcc tgaaaaccta caactcatta aaaaaacatt tggaaaagca 60 tgatgtggac tatcttaggc cacagaccaa gaacacaatt ccaggttcag tcctgcttgg 120 c 121 <210> 28 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 28 cacacagtgg acttaggtca cccactcttt ctgaatttgg atcttgggcc cagtaggatt 60 atcaactaga agtcctaaat cattttcaga tttcccttcc agcaggtcta ttatggaagc 120 a 121 <210> 29 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 29 gctaagaaag agaggtacat gatgttagga gcctgaacag gaggggagat gggtctagct 60 aagcagtgga attggcctca aaggagaaag aaaagaaaag gggcagaatt ctgcagccag 120 a 121 <210> 30 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 30 aaatgacaaa gctatttgtt tctgctccag aagagagcag agttgggaaa gaaaatgcat 60 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agggaatccc 60 tccattctgg ttctcatgcc aggcggcgtt ttaaactggt cacctgcgtt gaccccttaa 120 a 121 <210> 57 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 57 gctctcagaa tgacattggg tctttgttgt tgttgctgtt ctggcaagat cgcttctgac 60 agctttgcac tccctcagcc ggctgaagcc tccaggtccc agtgctgccg tgtgtgaccc 120 c 121 <210> 58 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 58 ggaaataaat tgttcttggt tgttcctcca ttgttacatt atggattaat acttaaatat 60 aatatctacc taaaaaaaat cctaaagatt tctctggctt taaagttctt tcattcaatc 120 c 121 <210> 59 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 59 cctatttcct cactgccctt attatttata gattttccac ttttttttat accttgaatt 60 atccagataa taattttaat tctccacatc aatcatggca acaaacactg ccacagaaat 120 a 121 <210> 60 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 60 aggaaatccc cgttgcttcc tggaggaaat ggcattttaa ttggccttag aaatcatgca 60 tcgagagggg gaaagggact cctatatttt gaactatttt ttagacttcc tacctctttt 120 c 121 <210> 61 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 61 ataaaggaag tagttaataa taggtaatgc ttttgagaat tttctaatat gcaggggaca 60 ttgttaaata cttcttatgc attaatgatt ataaagagag ttatccttct ctttatatat 120 g 121 <210> 62 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 62 cttttctcca tttaaatgac tctttttcca cgaggccatt tccccttcac atacgtagtg 60 tagaggtctt gtttgtacat tcctttcttc gtacttcaag actgttaaag cacttggtac 120 c 121 <210> 63 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 63 aagggctcag aagttacagc tgttatcaaa aagagggcca ccttgacttt ataaaacaag 60 tcttgaaaga aacagacata gcttaaagaa aatttatttt tctatttctg gcccctcaat 120 a 121 <210> 64 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 64 gtttattttt catctggata ttcaagcatg aacaaactca ggagtaaaac tgcatctcta 60 aacaactgtt actatgtgaa cagtgtaatg tggctgtgtt aagccagatg tactaatttc 120 a 121 <210> 65 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 65 aggacaaacc ctcgtttaat gtcactggac ttaaaaggcc cacaggccca ggtgcctcca 60 tgaggtttaa ggtcagtcca gccttaggct ggtcttggag gatttgtctc tctcttgcgg 120 g 121 <210> 66 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 66 gcttcaggag acctggaagt aggagtcctg gaggatcagg ggaagacccg gacagtcctg 60 aaaatagaga caatcatccc aggcctcttt acgttctctc aatgagctaa aagtcagctg 120 a 121 <210> 67 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 67 gaatgactgt tttgaatgtc ataatatagt aataatatag tcacaacccc atgcagtgac 60 tgctttctgt ctaccaggcc ctgtgtgaag cccttgacat gtgtaacctt gtctaatcct 120 c 121 <210> 68 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 68 agagggaagt aaggcagaga ttacaaatcc cacgagactg ggacaaaggt tattaacata 60 tagggggccc tagccagaga gatgaagcct tgctgtggac tgaaaattgg atcctcctcc 120 t 121 <210> 69 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 69 ccaaatgttt ccaggagccc cacgaggtgg gtgctattat tatcccattt ttcagataag 60 tcaactaact gaggcccaga gataggaaca gcattgccta gtgtgggctg aacccaaaag 120 c 121 <210> 70 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 70 caggtgttga aatccttaac tatcctgctg cctggtgcta ggccggatgc ccaggcctcc 60 atggggtcac attcttcttt cctcacaccc acctttagca gggcactcct accatgcatg 120 c 121 <210> 71 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 71 cgggcgcccc gcagcatcca ttgtcgcact ctcaaccagg cccaaaggct cagagagctt 60 tcaggtgacc catggtgcag ctcctgggga ggggaaccaa aattcacagc caggcccctc 120 c 121 <210> 72 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 72 ctattacata cagtgaggta tacctgaagt gagccagaag agttgggctt caaacctgaa 60 tagagagagt gtgttcttac ttagaataag aggaaatggt tgggggcacg tgttccctca 120 a 121 <210> 73 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 73 cccacttgaa ggaaacaagt taatatatag ccctagaatg gtagaacgag gcagatttgc 60 agtaatttat cgagtgcttc tggcccacac tccttagcca acctgccctt ttggggtaaa 120 a 121 <210> 74 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 74 acctctgtaa aagctgcacc agcgttatga gcacctccgg ggcgtctgtc cctgaaataa 60 taaggccttc actaccaggc ttcagaaggc agaaggcaac catctctctt gagctgtttc 120 t 121 <210> 75 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 75 aatcttgata ggttatgcga cctacccaag gttccaaggc taaaaatggt aaagttaaat 60 attgaggctc tatttctgat gtcaaaagtc tgtattcttg acaaccaagg cttattactt 120 c 121 <210> 76 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 76 cctcagttct cccagttact ttcagtggca gcaccctgtt ccttaccagg atctcctgct 60 attagacacc tcaggcaagt gggcctggcc aaggtgggtg gtttctatca atagttccct 120 a 121 <210> 77 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 77 tttagggagt cattggaatt tagcactgga aggaaagcca agagaacatt atacaggctt 60 ttccacgtta ggcctagtct cccaggcttt ctaatcccgg ccctgacctg aaaaacataa 120 a 121 <210> 78 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 78 gaagatctgc cccagtgctt cttacaggac tcactggcga ggaaggaagc tgtaacagcc 60 tggtgggcct ggtggccaac ttctacttgt ctgcagctgt gaagaggaca ctgggagagc 120 a 121 <210> 79 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 79 tatactcttg tgatatctaa cactgtcttg tcaaatgaag actaacatgt attgagtcct 60 tacctatagt caaggcatta tgggagacac acaaatattt gtgcccaaaa ttttaacaga 120 a 121 <210> 80 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 80 ctcaccccct caatctcatc ctcctttatc ctggtgagat acacccagag caggccaagc 60 aatctttggg attttaagct ttcagatagg gccctgagtc acagcaattg ccttagaggt 120 c 121 <210> 81 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 81 ctcccacttg ccagagccaa caatgcttga ctctatgtag tacccgacca gctctttagc 60 atctttgggt tcctcccatg taacgaccac tgatgtgtct gtgtttctgc ttgggatgat 120 a 121 <210> 82 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 82 tagcttaaaa ttttacccga caattcagaa gggatgttag acttacaggg cagtgaggcc 60 atgctaaaca ctgatccaca aacactcata gggcaggaag gtgcatgtgg tgaaagtcac 120 a 121 <210> 83 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 83 acaaagcaga gtggtgtcaa aataaaaatt tgtcttggag accctagagg tatccatgca 60 agaagtggaa tttgaacttg gcctgaaagg ctgcttagat ttctacaagc gaagatgatg 120 a 121 <210> 84 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 84 atagtgtctt ttaaaaatac aaataccatg aagtctcctc tttgttgcaa ccttctggag 60 atttctcatt gtacttggaa caggccccaa cttcctgcct gtcttttgaa ccaccaccca 120 c 121 <210> 85 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 85 taatttggag tgaggaactt tgccaatttc agtctagctg aatagcagat taattctctt 60 ttgtcctatg tttgggggta tttgttactc taaaaatatc catggctgct gtgtacagcc 120 a 121 <210> 86 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 86 actgtcaacc cagtgaagtt ggagagttgt cctgtagggt taagtaacaa ggttttgtac 60 ttggccctgc tctgtctgac agctttacca acattataac taaagatata gcattcatgt 120 c 121 <210> 87 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 87 ctgaccctgg actgatggcg gatggggtct ggtactggct catcactcag ctgcatccct 60 tgtgcctggt cctctctttc cctcctgttg cttttcccag gccacttggc ctggagccaa 120 c 121 <210> 88 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 88 cttaccaagt ttatatttga aatgatcttg tacataagtt tccttttttc tttttcaata 60 acagtacacg aattaggcct tcactagcct gaccctggag aaatgcctaa cttttctggg 120 c 121 <210> 89 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 89 atgacatgaa tcaagacctc gccatcaccc ccagaccact gacagagctg tacttgggtg 60 tcagggccag gaggccttgg tgtgtaagtg atgtttctag agagcaggcc aggcaggcgc 120 a 121 <210> 90 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 90 agctaattct cttgacttgc aggcggagac tgaggctcaa caagggggct tcagcaaccc 60 atggagatgc agctctttcc cctcacatcc aattcagtgc ttttattgag ttattgactt 120 t 121 <210> 91 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 91 aatgtgtggc cctattctat actttcccag ccctctgtga attcagagtt tttgatttta 60 tatcaacctg tcaatcaatc tggcctcaac caatcaactg atacattctt ctgcacacct 120 c 121 <210> 92 <211> 121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SNPmarker <400> 92 attaaatgct ctggaagtcc caagagagcc atttgtaact agctgtaaag tggcctatac 60 aatgtaacta tatccattgt tccctgtcta gagcaagggc gcgcattttc ttcaaattaa 120 a 121

Claims (7)

  1. 하기 표 1에 기재된 단일염기다형성(SNP) 마커를 포함하는 20개 내지 200개의 연속적인 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드.
    [표 1]
    Figure pat00009

    Figure pat00010

    Figure pat00011
  2. 제1항에 있어서,
    상기 SNP 마커는 서열번호 1 내지 92의 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 SNP 마커는 대립유전자형빈도(MAP, minor allele frequency)가 0.3 이상인 폴리뉴클레오티드.
  4. 제1항 또는 제2항의 SNP마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 칡소의 친자 감정용 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 따른 폴리뉴클레오티드, 그에 의해 코딩되는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드의 cDNA를 포함하는 칡소의 친자 감정용 마이크로어레이.
  6. 제5항의 조성물을 포함하는 칡소의 친자 감정용 키트.
  7. (a) 피검체로부터에서 핵산을 추출하는 단계; 및
    (b) 상기 핵산의 제1항 또는 제2항에 따른 폴리뉴클레오티드의 대립유전자형을 결정하고 분석하는 단계;
    를 포함하는 칡소의 친자 감정방법.
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KR102083675B1 (ko) * 2018-12-13 2020-03-02 대한민국 단일염기다형성 마커를 이용한 칡소 품종 식별 방법

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