KR20180042140A - 은행종자 추출물을 포함하는 혈행개선 및 비만 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 은행종자 추출물을 포함하는 혈행개선용 및/또는 항비만용 조성물에 관한 것이다.

Description

은행종자 추출물을 포함하는 혈행개선 및 비만 치료용 조성물{A composition for blood flow improvement and for treating obesity comprising Ginkgo Biloba seed extract}

본 발명은 은행종자 추출물을 포함하는 혈행개선용 및/또는 항비만용 조성물에 관한 것이다.

식생활의 서구화로 인한 과다 영양섭취로 비만 인구의 증가와 함께 고혈압, 심혈관질환 및 동맥경화증 등의 심혈관계 질환 환자수가 급증하고 있다. 이러한 질환의 가장 위험한 인자로 혈중 콜레스테롤의 함량이 주목 받고 있다. 따라서, 콜레스테롤 및 포화 지방산이 많이 함유된 식품 섭취를 제한하고, 각종 섬유소와 불포화지방산 등이 많이 함유된 식품을 권장하고 있는 추세이다. 즉, 단백질과 지방이 풍부한 동물성 식품과 설탕, 식염을 함유한 가공식품의 과다섭취로 인해 체내 콜레스테롤과 중성지방의 축적이 많아져 성인병의 발병 가능성이 높다는 보고에 따라 체내 콜레스테롤 수치를 저하시키기 위한 새로운 자연건강식품의 개발에 대한 관심이 높아지고 있다.

은행나무(Ginkgo biloba)는 행자목이라고도 하며, 겉씨식물에 속하는 낙엽성 활엽수로 한국, 중국 및 일본 등지에 고루 분포한다. 9~10월 경에 열리는 황색의 은행종자는 크게 바깥쪽 육질층(육질외종피, sarcotesta)과 딱딱한 중간 껍질(후벽내종피, sclerotesta), 그리고 그 안쪽의 얇은 껍질(내종피, endotesta)로 이루어져 있다. 은행에는 간놀, 펙틴, 히스티딘, 전분, 단백질 등이 많이 함유되어 있어 폐기능을 향상시키고 기침을 멎게 하며, 레시틴을 함유하고 있어 신경세포막을 보호해 뇌의 건강에 도움을 준다. 또한 장코플라톤이라는 성분에 의해 안좋은 콜레스테롤을 제거하고 여러 독소를 제거하는 효과가 있으며, 글로불린이 풍부하고 아미노산 조성도 우수하다. 무기질 P, Ca와 비타민 A, 비타민 C 및 나이아신 등을 적절히 함유하고 있으며, 특히 나이아신의 함량이 높다. 그 외에도 혈액순환 촉진 및 혈관 확장작용, 항균작용, 항알레르기 등에 효과적이며 관상동맥을 확장하여 혈압과 콜레스테롤 수치를 내린다.

이와 관련하여, 대한민국 등록특허 제10-1118778호는 은행나무추출물의 근육량을 증가시켜 지방량을 감소시키기 위한 은행나무추출물의 용도에 대하여 개시하고 있으나, AST(aspirate aminotransferase) 또는 ALT(alanine aminotransferase)의 활성을 억제, 콜레스테롤의 증가 억제, 혈행개선에 관하여는 밝혀내지 못하고 있어 이에 대한 보다 진보된 연구가 필요한 시점이다.

한국 등록특허 10-1118778호

본 발명은 혈행개선용 또는 비만의 개선, 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 식품조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 은행종자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 혈행개선용 또는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 은행종자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 비만 예방용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 은행종자 추출물을 포함하는 조성물은 AST(aspirate aminotransferase) 또는 ALT(alanine aminotransferase)의 활성을 억제하고, 콜레스테롤의 증가를 억제하는 효과를 지니고 있어, 비만 치료/개선/예방제로 사용될 수 있을 뿐 아니라, 혈행개선용으로 사용될 수 있다.

도 1은 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 ALT(alanine aminotarnsferase)의 활성을 측정 그래프이다.
도 2는 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 AST(aspirate aminotarnsferase)의 활성을 측정 그래프이다.
도 3은 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 총 콜레스테롤(total cholesterol) 함량을 측정한 그래프이다.
도 4는 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 트리글리세리드(triglyceride) 함량을 측정한 그래프이다.
도 5는 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 HDL-콜레스테롤 함량을 측정한 그래프이다.
도 6은 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 LDL-콜레스테롤 함량을 측정한 그래프이다.
도 7은 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 간 조직의 Hematoxylin-eosin 염색결과를 나타내는 사진이다
도 8은 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 간 조직의 Oil-red-O 염색결과를 나타내는 사진이다
도 9는 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 복부 지방조직의 Hematoxylin-eosin 염색결과를 나타내는 사진이다.
도 10은 실시예 1(GSE300), 비교예 1(LF), 비교예 2(HF) 및 비교예 3(GRE300)의 부고환 지방조직의 Hematoxylin-eosin 염색결과를 나타내는 사진이다.

이하, 본 발명을 보다 자세히 설명한다.

은행종자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 조성물에 대한 것으로, 은행종자 추출물이 AST(aspirate aminotransferase) 또는 ALT(alanine aminotransferase)의 활성을 억제하고, 콜레스테롤의 증가를 억제하는 효과를 지니고 있어, 비만 치료/개선/예방제로 사용될 수 있을 뿐 아니라, 혈행개선 용으로 사용될 수 있음을 실험적으로 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

구체적으로, 본 발명은 은행종자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 혈행개선및/또는 비만의 치료/예방/개선용 약학 조성물 또는 식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 조성물은 AST(aspirate aminotransferase) 또는 ALT(alanine aminotransferase) 활성을 억제시키는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 아니한다.

본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 조성물은 콜레스테롤 증가를 억제시키는 것이 바람직하나, 이제 한정되지 아니하며, 상기 콜레스테롤은 바람직하게는 저밀도(low density lipoprotein, LDL) 콜레스테롤이다.

또한, 본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 은행종자 추출물은 물, 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 추출할 수 있다. 상기 알코올은 C1~C4의 저급 알코올을 사용하는 것이 바람직하며, 메탄올 또는 에탄올을 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 바람직하게는 상기 추출용매는 에탄올 수용액을 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게 40 ~ 90% 에탄올 수용액을 사용할 수 있다. 상기 에탄올 수용액을 이용한 추출은 상온에서 1일 내지 7일 동안, 바람직하게는 3일 동안 수행될 수 있다. 추출 방법은 추출은 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 추출 방법을 이용할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 추출회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하다.

본 발명에서 상온은 온도를 승온하거나 감온하지 않고 작업자가 가장 편하게 반응할 수 있는 15 ~ 25℃를 의미하나 이에 국한되는 것이 아니다. 즉, 주변의 여건 및 환경에 따라 그 이하 또는 그 이상의 온도도 될 수 있다

*본 발명에서, 혈행개선은 고지혈증 및 동맥경화증을 포함하는 질병의 치료/개선 효과를 나타내며, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 은행종자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 약학 조성물은 상기 유효 성분 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.

상기 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

상기 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다.

예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다.

상기 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다.

상기 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다.

액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1종 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.

또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화 할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물의 유효성분인 은행종자 추출물의 투여량은 환자의 연령, 성별, 증상, 투여방법 또는 예방 목적에 따라, 체중 kg 당 200mg/kg/day 내지 300mg/kg/day를 일일 1회 내지 3회 분복할 수 있다. 특이 증상을 나타내는 환자에 대한 투여용량 수준은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설율, 질환의 중증도 등에 따라 당업자가 투여량을 변화시킬 수도 있다.

또한, 상기 본 발명의 약학 조성물은 경구, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 경피, 국소, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 은행종자 추출물을 포함하는 유효 성분으로 포함하는 비만 예방용 식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 식품 조성물은 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.

또한, 본 발명은 포유동물에게 치료상 유효량의 은행종자 추출물을 투여하는 것을 포함하는 비만의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

여기에서 사용된 용어 "포유동물"은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하여, 바람직하게는 인간을 말한다.

여기에서 사용된 용어 "치료상 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

제조예 1. 은행종자 추출물 제조

용매는 물과 에탄올을 3:7의 부피비로 혼합(70% 에탄올)하여 사용하였다.

은행종자는 가로 및 세로의 길이가 1cm 이하가 되도록 분쇄한 것을 시료로 사용하였고, 상기 시료와 용매의 비가 1:10(w:v)로 상온에서 3일 동안 추출, 여과, 감압농축 및 동결건조하여 은행종자 추출물을 제조하였다. 좀 더 구체적으로 상기 시료 및 용매 조건에서 3일, 즉, 72시간동안 추출하여 여과(Whatman NO.3, England)하고 vaccum exaporator(R-3000, Buchi, Switzerland)로 농축한 후 동결 건조하여 은행종자 추출물을 제조하였다.

실시예 1 및 비교예 1 내지 3.

실험 동물은 대한바이오링크(Korea)로부터 4주령의 C57BL/6 수컷 랫트 를 공급받아, 1주일간의 순화사육을 거쳐 사용하였다. 사육환경은 23±2℃, 상대습도는 55±15%, 환기횟수는 시간당 10 내지 20회, 조명시간 12시간(08:00 점등, 20:00 소등) 및 조도 150 내지 300 Lux였으며, 상기 사육환경에서 사육 및 실험을 수행하였다.

저지방식이군과 고지방식이군의 사료는 대한바이오링크에서 생산하는 실험동물용 저지방 사료(10%의 지방이 함유된 사료, LF) 및 고지방 사료(60%의 지방이 함유된 사료, HF)를 공급받아 급이기에 넣고 자유 섭취시켰으며, 사육기간 중 실험동물의 체중은 주 1회 측정하였다.

실험동물은 각 군당 6마리이며, 저지방식이군 및 고지방식이군으로 나누었으며, 보다 구체적으로 저지방식이군인 비교예 1(LF), 고지방식이군인 비교예 2(HF), 비교예 3(고지방 식이에 녹차 추출물 300mg/kg/day 경구투여, GRE300) 및 실시예 1(고지방 식이에 제조예 1에서 제조한 은행종자 추출물 300mg/kg/day 경구투여, GSE300)로 분류되며, 하기 표 1에 나타내었다.

상기의 조건으로 12주 동안 사육하였으며, 고지혈증 유발을 위해 제조예 1에서 제조한 은행종자 추출물 및 녹차 추출물 경구 투여 전에 8주 동안 저지방사료 및 고지방 사료를 급여한 뒤, 4주 동안 제조예 1에서 제조한 은행종자 추출물 및 녹차 추출물 경구 투여하였다. 경구 투여 농도는 300mg/kg/day이며, 이는 예비실험으로 200, 300 및 400mg/kg/day 농도 중 가장 우수한 농도를 보인 300mg/kg/day를 선택하여 수행한 것이다.

구분	개체수	Treatment
비교예 1 (LF)	6	10% 저지방 식이군
비교예 2 (HF)	6	60% 고지방 식이군
비교예 3 (GRE300)	6	60% 고지방 식이군, 녹차 추출물 300mg/kg/day 경구투여
실시예 1 (GSE300)	6	60% 고지방 식이군, 제조예 1의 은행종자 추출물 300mg/kg/day 경구투여

실험예1. 체중증가량 및 식이섭취량 측정

은행종자 추출물의 투여가 고지방사료를 섭취한 마우스의 체중증가에 미치는 영향을 측정하였다.

상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 8주 동안 저지방 사료 및 고지방 사료를 섭취하였을 때의 체중은 각각 25.40±2.17 및 38.58±3.74g 이었으며, 고지방 사료를 섭취하였을 때 체중 증가가 유의적으로 나타냈다.

이 후, 4주 동안 제조예 1에서 제조한 은행종자 추출물 및 녹차 추출물 경구 투여한 후의 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 체중 증가량 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

구분	Body Weight Gain (g/4 weeks)	식이효율(FER)
비교예 1 (LF)	2.17±0.28	2.14±0.09
비교예 2 (HF)	5.46±0.92	4.16±0.13
비교예 3 (GRE300)	-2.24±3.95	3.49±0.53
실시예 1 (GSE300)	-0.60±1.91	3.93±0.08

상기 표 2의 결과에서, 은행종자 추출물 투여군인 실시예 1에서 체중 증가량이 적은 것을 확인할 수 있었고, 특히, 은행종자 추출물 투여 전보다 체중이 감소한 것을 확인할 수 있었다.

식이효율(food efficiency ratio, FER)에서는 고지방식이군인 비교예 2(HF)보다 은행종자 추출물을 섭취한 실시예 1(GSE300)이 식이효율이 유의적으로 감소된 것을 확인할 수 있었다.

실험예2. 장기무게 측정

사육기간이 종료된 비교예 1 내지 3 및 실시예 1의 실험동물은 희생 전 12시간 동안 절식시킨 후, 경정맥에서 주사기를 이용하여 채혈하였으며, 채혈 후 간, 신장, 비장, 부고환, 복부지방 및 부고환 지방을 즉시 적출하여 생리식염수에 헹군 후, 표면의 수분을 제거하여 중량을 측정한 후, 간과 부고환 주위 지방은 즉시 액체질소에 급냉시켜 -70℃에 보관하였다.

상기 방법대로 측정한 장기 무게를 측정하여 100g당 무게로 환산한 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

(단위 : %)

구분	비교예 1 (LF)	비교예 2 (HF)	비교예 3 (GRE300)	실시예 1 (GSE300)
간	2.83±0.57	4.99±0.91	2.82±0.44	3.72±0.61
비장	0.24±0.05	0.29±0.11	0.14±0.03	0.27±0.10
신장	0.75±0.22	1.11±0.03	0.98±0.02	0.96±0.17
부고환	0.64±0.22	0.88±0.10	0.78±0.02	0.85±0.18
부고환 지방	2.64±0.83	7.34±1.88	5.14±1.84	6.92±0.74
복부 지방	0.75±0.42	4.41±0.16	2.60±0.99	3.72±0.50

상기 표 3의 결과에서, 비장과 부고환은 비교예 1 내지 3 및 실시예 1에서 큰 차이를 나타내지 않았다.

간의 경우, 은행종자 추출물을 경구 투여한 실시예 1은 고지방식이군인 비교예 2보다 간의 무게가 감소한 결과를 보였으며, 특히 부고환 지방 및 복부지방에서 실시예 1이 지방이 감소되는 효과를 보였다.

실험예3 AST(aspirate aminotransferase) 및 ALT(alanine aminotransferase)의 측정

사육기간이 종료된 비교예 1 내지 3 및 실시예 1의 실험동물은 희생 전 12시간 동안 절식시킨 후, 경정맥에서 주사기를 이용하여 채혈하였으며, 채혈한 혈액을 3000rpm에서 15분간 원심분리하여 혈청을 얻었고, 즉시 -70℃의 초저온냉동고에 넣어 급속 동결시켜 보관하였다.

상기에서 얻어진 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 각각의 혈청 중 ALT(alanine aminotransferase) 및 AST(aspirate aminotransferase)의 활성을 자동혈청 분석기(Komelab 20XT, Thermo Electron, Louisville, CO, USA)를 이용하여 측정하였다(도 1 및 도 2)

그 결과, 은행종자 추출물을 경구 투여한 본 발명의 실시예 1은 ALT 및 AST의 활성이 고지방 식이군인 비교예 2보다 감소하는 결과를 보였다.

따라서, 본원 발명의 은행종자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 비만을 예방, 개선 또는 치료할 수 있을 뿐 아니라 혈행개선용으로도 사용될 수 있음을 실험을 통하여 확인할 수 있었다.

실험예4. 혈장의 중성지질 및 콜레스테롤 함량 측정

상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 혈장 내 총 콜레스테롤, 트리글리세리드(triglyceride), HDL 콜레스테롤 및 LDL 콜레스테롤 함량을 자동혈청 분석기(Komelab 20XT, Thermo Electron, Louisville, CO, USA)를 이용하여 측정하였다(도 3 내지 6).

혈장 중 총 콜레스테롤의 함량은 고지방식이군인 비교예 2에서 증가하였으며, 비교예 3 및 실시예 1에서는 함량이 감소하였다.

상기 총 콜레스테롤의 증가는 고혈압과 같은 심혈관 질환을 일으키는 중요한 요소로 알려져 있으며, 상기 결과를 통하여 은행종자 추출물이 총 콜레스테롤의 증가를 효과적으로 감소시킬 수 있다는 것을 확인할 수 있었다.

또한, 혈장 중 HDL 콜레스테롤 함량은 실시예 1이 비교예 2보다 증가한 결과를 보였다.

반면, 혈장 중 LDL 콜레스테롤 함량은 비교예 2에 비하여 실시예 1에서 감소하는 결과를 보였다.

HDL 콜레스테롤은 말초 조직이나 혈액 중에 축적된 콜레스테롤을 콜레스테롤 에스테르로 만들어 간으로 수송하여 혈액 중 콜레스테롤 함량을 저하시켜 동맥경화증의 개선 및 예방에 효과가 있다고 알려져 있으나, LDL 콜레스테롤 함량은 상기 HDL 콜레스테롤과 역상관 관계를 나타낸다.

따라서, 본원 발명의 은행종자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 비만을 예방, 개선 또는 치료할 수 있을 뿐 아니라 고지혈증, 동맥경화증 등을 예방, 개선 및 치료할 수 있다는 것을 실험을 통하여 확인할 수 있었다.

실험예5. 간, 복부지방 및 부고환 지방의 병리학적/형태학적 변화 관찰

상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 간, 복부지방 및 부고환지방의 일부분을 떼어내 10% neutral buffered formalin에서 24시간 동안 고정한 후, 자동 파라핀 침투기를 이용하여 탈수, 투명 및 침투 과정을 진행하여 파라핀에 포맷한 다음, 회전형 박절기를 사용하여 4μm 두께의 파라핀 절편을 제작하였다.

상기 파라핀 절편을 각각 자일렌(xylene)에 탈파라핀하고, 하강 계열 알코올 과정을 진행하여 함수한 후, hematoxylin-eosin(H&E) 염색을 실시하였다. 염색 후, 절편은 탈수 및 투명 과정을 거쳐 카나다 발삼으로 봉입하여 광학 현미경으로 관찰하였다. H&E 염색 결과는 도 7(간), 도 9(복부 지방) 및 도 10(부고환 지방)과 같다.

또한 상기 파라핀 절편 중 간 파라핀 절편을 자일렌(xylene)에 탈파라핀하고, 하강 계열 알코올 과정을 진행하여 함수한 후, Oil-red-O 염색을 실시하였다. Oil-red-O 염색시약은 중성지방, cholesterol ester만이 염색되고, 그 외 유리지방산, 인지질은 염색되지 않으며 Lipid droplet이 축적된 부분은 대부분이 중성지방이기 때문에 염색이 가능한 특성을 갖는다. 염색 후, 절편은 탈수 및 투명 과정을 거쳐 카나다 발삼으로 봉입하여 광학 현미경으로 관찰하였다. Oil-red-O 염색 결과는 도 8과 같다.

간 지방세포의 병리학적 변화 관찰 결과, 도 7의 H&E 염색결과에서 확인되는 바와 같이 저지방 식이군인 비교예 1에 비하여 고지방 식이군인 비교예 2에서 지방구가 가장 많이 축적된 것을 확인하였다. 한편, 실시예 1의 지방구의 침착 정도는 비교예 1 수준으로 크게 감소된 것을 뚜렷하게 확인할 수 있으며 이는 비교예 2와 대비시 더욱 확실하게 알 수 있다.

또한 도 8의 Oil-red-O 염색 결과에서 확인되는 바와 같이, 비교예 2에 비해 실시예 1은 붉은색으로 염색된 부분이 거의 없음을 확인하였다.

한편, 복부 지방세포 및 부고환 지방세포의 형태학적 변화 분석 결과, 도 9에서 확인되는 바와 같이 복부 지방세포의 크기가 비교예 2에서 커졌다가 실시예 1에서 다시 작아졌음을 알 수 있으며, 도 10에서 확인되는 바와 같이 부고환 지방세포 역시 복부 지방세포와 마찬가지로 실시예 1이 비교예 2보다 작아졌음을 도출해낼 수 있었다.

즉, 본원 발명의 은행종자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 비만을 예방 또는 치료할 수 있다는 것을 실험을 통하여 확인할 수 있었다.

Claims (7)

1. 은행종자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 혈행개선용 또는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물.
2. 청구항 1에 있어서, 혈행개선용 및 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물.
3. 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 물, 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 추출된 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
4. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 AST(aspirate aminotransferase) 또는 ALT(alanine aminotransferase) 활성을 억제시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 콜레스테롤 증가를 억제시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
6. 청구항 5에 있어서, 상기 콜레스테롤은 저밀도(low density lipoprotein, LDL) 콜레스테롤인 것을 특징으로 하는 조성물.
7. 은행종자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 비만 예방용 식품 조성물.

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