KR20180038571A

KR20180038571A - [2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시]-3-에톡시-1,2-벤즈이속사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태

Info

Publication number: KR20180038571A
Application number: KR1020187009238A
Authority: KR
Inventors: 에드워드 리; 데이비드 맥칼리스터; 앤드류 트리그웰; 3세 로버트 빈센트 튜오히; 피터 주니어 스나이더; 크리스타 레이사 프라쎄토
Original assignee: 아비라겐 테라퓨틱스, 인코포레이티드
Priority date: 2014-06-20
Filing date: 2015-06-19
Publication date: 2018-04-16
Also published as: US20180162849A1; ZA201608440B; BR112016029942A2; EP3157908A4; US9802926B2; IL249248A0; CN106715404A; AU2015276857A1; CA2952627C; SG11201610593YA; NZ728412A; AU2015276857B2; MX2016017282A; EP3157908A2; EA201692549A1; JP2017518325A; KR20170012332A; JP2018168153A; WO2015196113A3; CA2952627A1

Abstract

인간 리노바이러스(HRV)와 같은 피코나바이러스에 의해 유발된 감염의 치료에 유용한 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 결정 형태가 제공된다. 특히, 그 결정 형태는 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태이다. 또한, 상기 유리 염기 결정 형태를 제조하는 방법으로서, 습윤제를 선택적으로 이용하여 화합물 입자를 마이크로화하는 단계를 포함하는 방법뿐만 아니라, 정제 또는 현탁액과 같은, 상기 유리 염기 결정 형태를 포함하는 약학적 조성물, 및 이러한 형태 및 이의 약학적 조성물을 이용한 치료 방법이 제공된다.

Description

[2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시]-3-에톡시-1,2-벤즈이속사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태{ANHYDROUS CRYSTALLINE FREE BASE FORM OF [2-[1-(6-METHYL-3-PYRIDAZINYL)-4-PIPERIDINYL]ETHOXY]-3-ETHOXY-1,2-BENZISOXAZOLE}

관련 출원의 상호참조

본 출원은 2014년 6월 20일자 출원된 미국 가출원 제 62/015,126호의 이점을 주장하며, 상기 출원은 본원에 참조로 포함된다.

본 발명은 일반적으로는 6-{2-[ 1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 결정성 유리 염기 형태에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 이의 신규한 무수 유리 염기 결정성 형태 및 약학적 조성물의 제조에서 이의 용도, 상기 무수 결정성 형태의 제조 방법, 상기 결정성 형태를 포함하는 약학적 조성물, 및 이러한 형태 및 이의 약학적 조성물을 이용한 치료 방법에 관한 것이다.

6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 본 출원인이 이전에 출원한 WO 2002/050045호('045 공보)에 화합물 35로서 개시되어 있고 하기의 일반적 구조식을 갖는다:

또한, 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 "바펜다비르(vapendavir)"란 국제 일반명(INN)으로도 알려져 있다. 바펜다비르는 예전에 기재된 바와 같이, 인간 리노바이러스((HRV))와 같은 피코나바이러스 및 장내 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방뿐만 아니라, 천식 및/또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)의 증상의 치료 및/또는 완화 및 천식 및/또는 COPD의 악화 발생의 감소 및/또는 악화의 예방에서 특히 유용한 것으로 확인된 항바이러스제이다(WO2002/050045호, WO2011/127538호 및 WO2011/160191호 참조). 인간 리노바이러스는 피코나바이러스과의 리노바이러스속의 구성원으로서, 감기 감염의 40 내지 50%의 원인이 되는 것으로 판단된다. 인간 리노바이러스는 100종 이상의 혈청학적으로 구별되는 바이러스들의 그룹을 구성한다. 따라서, 바펜다비르는 장내바이러스로도 대표되는 피코나바이러스과의 바이러스에 대하여 효과적인 것으로 확인되었다. 이러한 속은 폴리오바이러스 1-3, 콕사키 바이러스 A (23개 혈청형) 및 B (6개 혈청형), 에코바이러스 (31개 혈청형) 및 다수의 장내 바이러스 68번 내지 71번을 포함한다. 장내 바이러스에 의해 유발된 임상 증상으로는 급성 회백수염, 뇌막염, 뇌염, 측흉통, 구협염, 수족구병, 결막염, 심근염 및 신생아 질환, 예를 들어, 호흡기 질환 및 열병 질환이 있다. 피코나바이러스과의 바이러스는 유사 정이십면체 대칭을 갖는 단백질 껍질(또는 캡시드)로 둘러싸인 단일 가닥의 (+) RNA 게놈에 특징이 있다. 그 캡시드의 표면은 정이십면체의 5배 축(icosahedral fivefold axes)들의 각각을 둘러싸는 캐년(canyon)을 함유하고, 그 세포 수용체는 그 캐년 바닥상의 잔기들에 결합하는 것으로 판단된다. WO2002/050045호의 일 실시예인 실시예 6은 중합체 지지된 트리페닐포스핀 시약을 이용한 미츠노부 커플링(Mitsunobu coupling)을 통해 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 소규모로 합성하고, 구배 용리 칼럼 크로마토그래피 후 밀리그램 양의 백색 분말 형태로 분리하는 것을 기재하고 있다(36페이지의 실시예 6 참조).

WO 2009/143571호('571 PCT 공보)는 바람직한 용해도 및/또는 안정성 특성을 갖는 것으로 기재되는 바펜다비르의 비스-디히드로겐포스페이트 결정성 염을 비롯한, 바펜다비르의 특히 바람직한 염 형태들을 개시하고 있다. 그러나, 대규모 약품 제조 후, 본 발명자들은 바펜다비르 비포스페이트의 이러한 결정성 염 형태가 "공정에 의해 유발된 변형" 또는 "물에 의해 유발된 상변화"로 알려진 현상이 있다는 것을 확인했고, 따라서 유의한 양의 세스퀴포스페이트 세미히드레이트와 같은 적어도 한 종의 다른 결정상의 생성이 관찰되었다. 또한, 본 발명자들은 바펜다비르의 비스-디히드로겐포스페이트의 사각 평면형 결정 습성(crystal habit)이 유동성이 불량하고 제조 동안 응집체(활성 약물의 재현가능한 형성을 방해하는)를 형성하는 경향이 있다는 것을 확인했다.

화합물 제형화의 분야에서, 화합물의 특정 결정 형태를 제조하는 것은 수행하기가 어렵고, 예측가능하고 반복가능한 결정 형태의 제조에는 많은 불확실성이 있다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함되는 다음 논문["From Form to Function: Crystallization of Active Pharmaceutical Ingredients" by Variankaval et al., AIChE Journal, Vol. 54, No. 7, 1682-1688 (2008)]은 원하는 제형 특성을 갖는 바람직한 (약제 또는 다른 제형) 결정을 제조하기 위한 시도를 기재하고 있다. 이러한 분야에서 극복하기 어려웠던 문제로는 결정 형상 및 크기, 입자 크기 분포, 및 결정 형태의 효율적이고 유용한 제조에 필요한 다수의 다른 물리적 특성에 관한 바람직하지 않은 양 또는 과도한 변화성이 있는데, 특히 이는 대규모 제조와 관련이 있기 때문이다. 상기 논문에서 나타낸 바와 같이, 이러한 분야에서의 대부분의 기법들은 "대규모 설비에서 실제 공정 흐름으로부터 결정화되는 약물 분자의 복잡성에 대처할 준비가 덜 되어 있다"(Variankaval 등의 문헌의 1687 페이지 참조).

또한, 이러한 분야에서의 안정성의 문제들은 현탁액으로 제조될 수 있는 효과적인 제형들을 제안하는 것을 어렵게 만들었다. 특히 소아 환자의 보호에 있어서는, 현탁액이 종종 필수적인 치료법이지만, 적당한 안정성 및 용해도의 유효 성분을 개발하는데 있어서의 문제들은 그 유효 성분으로부터 제조될 수 있는 효과적인 현탁액들의 수를 크게 제한했다.

또한, 인간 리노바이러스 또는 장내 바이러스에 의해 유발되는 것들과 같은 감염을 치료 및/또는 예방하는데 특히 유용하고 또한 안전하고 효과적인 항피코나바이러스 화합물에 대한 미충족 필요성이 계속되고 있다. 또한, 안전하고 안정한 경구용 약제를 확보하는데 필요한 균일한 입자 크기와 같은 제조 및 반복성에 관한 예전의 문제들을 극복할 수 있는 소체 정제 및 현탁액과 같은 다른 유용한 형태로 쉽게 제조될 수 있는 새로운 약학적 조성물을 개발할 필요성이 있다. 또한, 대규모로 제조될 수 있으면서 전체 비용을 최소화할 수 있는 효율적인 제조 방법으로 얻어질 수 있는 새롭고 유용한 형태의 약제에 대한 필요성이 있다.

WO 2002/050045호

"From Form to Function: Crystallization of Active Pharmaceutical Ingredients" by Variankaval et al., AIChE Journal, Vol. 54, No. 7, 1682-1688 (2008)

본 발명자들은 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 포함하는 약학적 조성물의 더욱 안정하고, 효율적이고 값싼 대규모 제조를 가능하게 하는 것을 포함한 하나 이상의 이점들을 갖는 것으로 판단되는 유리 염기 형태, 즉 비염(non-salt) 형태의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수(즉, 비수화) 결정 형태를 확인했다. 또한, 본 발명자들은 정제, 캡슐, 현탁액 및 다른 형태를 비롯한, 유효 성분을 전달하기 위한 유용한 제형(formulation)들을 개발했다.

발명의 요약

인간 리노바이러스 또는 장내 바이러스에 의해 유발된 것들과 같은 피코나바이러스를 비롯한 감염의 치료, 천식 또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)의 증상 또는 악화의 치료, 완화, 예방 또는 감소, 또는 수족구병의 치료, 완화, 예방 또는 감소에 유용하게 되는 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸(또는 바펜다비르)의 무수(즉, 비수화) 유리 염기 결정 형태가 제공된다.

또한, 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 대규모 제조 방법으로서, 첨부 도면에서 도시한 바와 같은 XRPD 패턴을 갖는 것들과 같은 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정형 유리 염기를 형성하는 단계를 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 또한, 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기의 제조 방법으로서, 더욱 균일한 평균 입자 크기를 가능하게 하고 정제 및 현탁액을 비롯한 약학적 조성물에 더욱 적합한 형태로 바펜다비르(vapendavir)를 제공하는 마이크로화(micronization) 단계를 포함하는 방법이 제공된다.

또한, 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 포함하는 약학적 조성물의 제조에서, 첨부 도면에서 도시한 바와 같은 XRPD 패턴을 갖는 것들과 같은, 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기의 용도를 제공한다.

일 실시예에서, 상기 약학적 조성물은 건조 분말 조성물이다. 또 다른 실시예에서, 상기 약학적 조성물은 경구 투여, 특히 경구 장내 투여에 적합한 것이다. 이러한 점에서, 상기 약학적 조성물은 현탁액, 정제, 캐플릿(caplet), 캡슐, 또는 경구 투여에 적당한 다른 형태로 형성될 수 있다. 여전히 다른 적당한 형태는 환자에게의 다른 투여 방법을 위한 것들, 예를 들어, 특정 소아의 경우에 바람직할 수 있는 좌약, 정맥내 투여를 위한 용액 등일 수 있다. 또한, 상기 조성물은 재현탁가능한 새세이(sachet) 또는 분말의 형태일 수 있다.

일 실시예에서, 상기 무수 결정 형태는 침상 결정 습성을 갖는다. 이는 판상 결정습성을 갖는 포스페이트 염과 같은 바펜다비르의 다른 이전의 형태와 크게 다르다.

하나의 모범적인 실시예에서, 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정 형태의 XRPD 프로필은 하기의 대략적인 값들로 이루어진 군에서 선택된 주요 피크(2θ)를 나타낸다: 4.5, 1 1.0, 13.6, 20.3, 20.6, 22.1, 23.1, 24.5, 및 25.7. 또한, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기는 대략적으로 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 피크(d-간격, Å)를 갖는 XRPD 프로필을 가질 수 있다: 19.5, 8.0, 6.5, 4.4, 4.3, 4.0, 3.8, 3.6, 및 3.5.

또한, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정 형태의 XRPD 프로필은 하기의 대략적인 값들로 이루어진 군에서 선택된 피크(2θ)를 가질 수 있다: 4.6, 10.4, 11.1, 13.7, 16.1, 16.7, 17.8, 20.4, 20.8, 21.6, 22.1,22.3, 22.4, 23.4, 및 24.8. 또한, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정 형태는 대략적으로 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 피크(d-간격, Å)를 갖는 XRPD 프로필을 가질 수 있다: 19.2, 8.5, 8.0, 6.5, 5.5, 5.3, 5.0, 4.35, 4.27, 4.12, 4.03, 3.99, 3.96, 3.80 및 3.60.

본 발명의 하나의 모범적인 실시예에서, 상기 바펜다비르의 유리 염기 결정 형태의 XRPD 패턴은 도 1에서 도시되어 있다. 도 1에서 나타낸 바와 같이, 하기의 피크들이 관찰되었다:

또 다른 실시예에서, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정(유리 염기) 형태는 적당한 약학적 담체를 이용하여 약학적 조성물로 제형화될 수 있다. 특정의 실시예에서, 상기 약학적 조성물은 조성물의 중량을 기준으로 약 40 내지 60 중량%의 양으로 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정 형태를 포함하는 정제 또는 현탁액이다. 상기 약학적 조성물은 피코나바이러스 또는 장내 바이러스 감염과 같은 감염을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 유리 염기 결정 형태는 천식 및/또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)의 증상의 치료 및/또는 완화 및 악화(exacerbations)의 발생의 감소 및/또는 천식 및/또는 COPD의 악화의 예방에서 사용될 수 있다. 일 실시예에서, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 결정 형태는 콕사키바이러스 A(예, 혈청형 1 내지 22 및 24), 콕사키바이러스 B(예, 혈청형 1 내지 6), 에코바이러스(예, 혈청형 1 내지 7, 9, 11 내지 27, 29 내지 34) 및 장내 바이러스(예, 혈청형 EV 68 내지 71)를 포함하는, 비폴리오 장내 바이러스(non-polioenteroviruses) 및 폴리오바이러스(polioviruses)를 비롯한, 인간 장내 바이러스 A, 인간 장내 바이러스 B, 인간 장내 바이러스 C 및 인간 장내 바이러스 D 중 한 종 이상의 혈청형과 같은 장내 바이러스 또는 인간 리노바이러스(HRV)와 같은 피코나바이러스 등과 같은 여러 가지 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위하여 치료를 필요로 하는 개체에게 투여될 치료제에서 사용될 수 있다. 여전히 다른 실시예에서, 상기 바펜다비르의 무수 결정 형태는 수족구병의 치료, 완화 및/또는 예방에서 사용될 수 있다.

또한, 상기 약학적 조성물은, 그 감소된 폐기능이 일반적인 징후인 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 또는 천식의 증상 또는 악화의 치료, 완화, 예방 또는 감소에서 사용될 수 있다. 또한, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정 형태는 아래에 더욱 상세히 기재되는 바와 같이 적절한 재결정화 용매 및 조건을 이용하여 재결정 형태로 제공될 수 있다. 예를 들어, 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 아래에 더욱더 기재되는 바와 같이 알코올, 예를 들어, 에탄올, 또는 넓은 범위의 적당한 슬러리 또는 재결정화 용매들 중 임의의 것으로부터 재결정화될 수 있다.

또한, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정 형태는 아래에 더욱 상세히 기재되는 바와 같이, 현탁액과 같은 특정의 약학적 조성물에서 그의 사용을 용이하게 하는 매우 작은 입자 크기를 갖는 마이크로화된 형태로 제공될 수 있다. 예를 들어, 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 마이크로화된 형태는 5 미크론 미만의 평균 입자 크기를 가질 수 있다. 또한, 상기 마이크로화 공정은 바펜다비르의 용출률을 더욱더 향상시키기 위해 적당한 습윤제 또는 계면활성제를 이용할 수 있다.

본 발명은 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸('바펜다비르"라고 알려짐)의 무수 유리 염기 결정 형태에 관한 것이다. 본 발명의 유리 염기 결정 형태는 아래에 더욱 상세히 기재되는 바와 같이 바이러스 감염 및 다른 증상을 치료하기 위한 약학적 조성물에서 사용될 수 있다.

도 1A 및 도 1B는 본 개시에 따른 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기에 대한 XRPD 피크의 모범적인 예를 도시한다.
도 2A 및 도 2B는 본 개시에 따른 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기에 대한 XRPD 피크의 또 다른 모범적인 예를 도시한다.
도 3은 본 개시에 따른 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기에 대한 또 다른 XRPD 피크(2θ) 프로필이다.
도 4는 초기 제형(formulation)의 용출 비교를 도시하는 그래프이다.
도 5는 본 개시에 따른 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기의 상대 습도에 따른 중량 퍼센트 변화 특성을 나타내는 동적 증기 흡수 그래프이다.
도 6은 본 개시에 따른 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기와 바펜다비르의 종래의 비스-디히드로겐 포스페이트 염 사이의 XRPD 비교를 나타내는 도면이다.
도 7A 내지 도 7C는 본 개시의 일 실시예에 따른 습식 분쇄 후 침상형 결정 습성(우측)과 WO2009/143571호에 따른 XRPD 특성을 갖는 6-{2-[l-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-l,2-벤족사졸 비스-디히드로겐포스페이트 염에서, 본원에 정의한 XRPD 특성을 갖는 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 유리 염기 결정 형태를 여러 척도로 나타내는 일련의 주사 전자 현미경(SEM) 이미지를 도시한다.
도 8은 적당한 약학적 담체와 함께 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸 유리 염기를 포함하는 약학적 조성물을 제조하기 위해 사용될 수 있는 하나의 모범적인 정제 제조 방법을 도시한다.
도 9는 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 종래 포스페이트 염 형태에 대한 XRPD 피크(2θ) 프로필을 도시한다.
도 10은 아래에 더욱 상세히 기재된 바와 같은 바펜다비르 300mg 정제와 마이크로화 결정성 유리 염기 바펜다비르의 XRPD 패턴의 비교 그래프이다.
도 11은 아래에 더욱 상세히 기재된 바와 같은 마이크로화되지 않은 결정성 유리 염기 바펜다비르와 마이크로화 결정성 유리 염기 바펜다비르의 XRPD 패턴의 비교 그래프이다.
도 12는 본원에 더욱더 기재된 바와 같은 입자 크기 분석의 그래프이다.
도 13은 본원에 더욱더 기재된 바와 같은 입자 크기 분석의 그래프이다.
도 14는 본원에 더욱더 기재된 바와 같은 입자 크기 분석의 그래프이다.
도 15는 마이크로화 이전의 침상형 결정 습성을 갖는 본 발명의 화합물로부터 얻은 입자를 보여주는 현미경사진이다.
도 16은 마이크로화 이후의 본 발명의 화합물로부터 얻어진 입자를 보여주는 현미경사진이다.
도 17은 판상형 결정 습성을 갖는 바펜다비르의 종래 포스페이트 염으로부터 얻은 입자를 보여주는 현미경사진이다.
도 18A는 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 용출률을 보여주는 그래프이다.
도 18B는 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 용출률을 보여주는 그래프이다.
도 18C는 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 용출률을 보여주는 그래프이다.
도 18D는 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 용출률을 보여주는 그래프이다.
도 19는 마이크로화 이전의 침상형 결정 습성을 갖는 본 발명의 화합물로부터 얻은 입자를 보여주는 현미경사진이다.
도 20은 마이크로화 이후의 본 발명의 화합물로부터 얻은 입자를 보여주는 현미경사진이다.
도 21은 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 현탁액 위약의 입자 크기 분석의 그래프이다.
도 22는 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 본 발명에 따른 현탁액의 입자 크기 분석의 그래프이다.
도 23A는 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 용출 비교의 그래프이다.
도 23B는 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 용출 비교의 그래프이다.
도 24A는 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 용출 비교의 그래프이다.
도 24B는 본원에 더욱더 기재한 바와 같은 용출 비교의 그래프이다.
도 25는 본 발명의 화합물의 비미크론화 및 미크론화된 형태에 대한 XRDP 패턴들의 오버레이(overlay)를 도시한다.

상세한 설명

하나의 모범적인 실시예에서, 상기 바펜다비르의 유리 염기 결정 형태에 대한 XRPD 프로필은 아래에 나타낸 바와 같은 XRPD 피크를 가질 수 있다:

이러한 실시예에 대한 XRDP 패턴은 도 1A 및 도 1B에 도시되어 있다. 거기에 도시된 바와 같이, 이러한 실시예는 적어도 하기의 대략적인 (2θ) 값들의 주요 피크를 포함한다: 4.5, 11.0, 13.6, 20.3, 20.6, 22.1, 23.1, 24.5, 및 25.7. 이러한 패턴에서, 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정 형태는 그 주요 피크가 하기의 대략적인 (d-간격, Å) 값을 갖는 프로필을 나타낸다: 19.5, 8.0, 6.5, 4.4, 4.3, 4.0, 3.8, 3.6, 및 3.5.

또 다른 모범적인 실시예에서, 상기 바펜다비르의 유리 염기 결정 형태는 대략적으로 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 피크(d-간격, Å)를 갖는 XRPD 프로필을 가질 수도 있다: 19.2, 8.5, 8.0, 6.5, 5.5, 5.3, 5.0, 4.35, 4.27, 4.12, 4.03, 3.99, 3.96, 3.80 및 3.60. 일 실시예에서, 본 발명의 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 도 2A, 도 2B 및 도 3에서 도시한 바와 같은 XRPD 피크((d-간격, Å)를 갖는다. 이러한 실시예의 주요 피크들은 하기의 표에서 나타내고, 19.2, 8.5, 8.0, 6.5, 5.5, 5.3, 5.0, 4.35, 4.27, 4.12, 4.03, 3.99, 3.96, 3.80 및 3.60의 대략적인 값들을 포함한다.

또한, 상기 바펜다비르의 유리 염기 결정 형태에 대한 XRPD 프로필은 대략적으로 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택되는 그의 2θ 피크들의 측면에서 나타낼 수 있다: 4.6, 10.4, 11.1, 13.7, 16.1, 16.7, 17.8, 20.4, 20.8, 21.6, 22.1, 22.3, 22.4, 23.4, 및 24.8. 본 발명의 결정성 유리 염기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 도 2A, 도 2B 및 도 3에서 나타낸 XRPD 피크(2θ) 프로필을 가질 수 있다. 주요 피크들은 하기의 표에서 나타내고, 4.6, 11.1, 13.7, 16.1, 20.4, 20.8, 22.3 및 24.8의 대략적인 값들을 포함한다.

본 발명에 따른 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 하기 화학식 (I)을 갖는다:

이러한 화합물은 본원에 참조로 포함되는 WO 02/50045호에 개시된 것들을 비롯한 다수의 통상적인 방법을 통해 제형화될 수 있다.

하나의 적당한 방법에서, 상기 바펜다비르 화합물은 화학식

를 갖는 화합물을 화학식

를 갖는 화합물과 적당한 반응 매질에서 결합함으로써 형성될 수 있다.

몇몇 실시예에서, 이들 반응물들은 용매로서 N-메틸피롤리딘을 이용하여 결합될 수 있다. 탄산세슘 및 요오드화칼륨과 같은 다른 물질들이 테트라히드로푸란 및 필요에 따라 사용될 수 있는 물과 함께 첨가될 수 있다. 반응 후에 얻어진 여과 케이크를 세척하기 위해 에탄올이 사용될 수 있다. 이러한 반응은 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 원하는 유리 염기 결정 형태를 직접 생성할 수 있다. 본 발명의 또 다른 측면에서, 위에서 얻어진 바와 같은 바펜다비르의 유리 염기 형태는 다수의 적당한 방법으로 재결정화될 수도 있다. 본 발명의 추가의 측면에서, 본 발명의 유리 염기 형태는 아래에 더욱 상세히 기재한 바와 같이 매우 작은 입자 크기로 마이크로화될 수 있다.

하나의 모범적인 실시예에서, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 알코올, 예를 들어 에탄올, 또는 다른 적당한 재결정화 용매와 같은 적당한 용매를 포함하는 재결정화 방법을 이용하여 재결정화된 형태로 제공될 수도 있다. 에탄올과 같은 알코올 외에도, 상기 재결정화 용매는 아세톤, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 메틸 에틸 케톤, 1-프로판올, 2-프로판올, 테트라히드로푸란 및 톨루엔을 포함하나 그로 제한되지 않는 적당한 용매들의 군에서 선택된 것들과 같은 슬러리화 또는 재결정화에 적당한 임의의 적절한 용매일 수 있다. 또한, 상기 바펜다브르의 결정성 유리 염기는 아세톤, 아세토니트릴, 에탄올, 1-프로판올 및 테트라히드로푸란을 비롯한 한 종 이상의 용매들의 수성 혼합물로부터 분리될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태를 재결정화하기 위한 하나의 모범적인 방법에서, 바펜다비르의 재결정화는 활성탄 처리 및 디클로로메탄을 비롯한 일련의 용매의 사용을 통해 얻어진다.

재결정화 과정은 반응기에 바펜다비르, 디클로로메탄 및 에탄올을 채우고, 그 혼합물을 적당한 온도(예, Ta =20℃)에서 적당한 시간 동안 교반하는 단계를 포함할 수 있다. 선택적으로, 불순물 조절에 도움을 주기 위해 활성탄(나중에 여과를 통해 제거됨)이 사용될 수도 있다. 상기 초기 단계의 종료 시, 예를 들어 누체 필터(nutsche filter) 및 인라인(inline) 필터(예, 0.45 ㎛ 인라인 필터)를 이용하여 존재하는 현탁액이 여과될 수 있다. 다음에, 그 여과된 현탁액은 추가의 단계들을 위한 청정 반응기에 운반될 수 있다. 이들 단계들은 디클로로메탄/에탄올 용액(예, 1/1 v/v)을 이용한 세정 단계 및 그 세정 용액을 필터를 통해 상기 여과된 반응 용액에 운반하는 것을 포함한다. 다음에, 에탄올의 단계적인 첨가 및 진공하의 증류를 포함한 다수의 증류 단계들이 있을 수 있다. 최종적으로, 그 새로이 형성된 현탁액은 가열될 수 있고, 증류의 완결 여부가 확인될 수 있는데, 이때 그 현탁액이 냉각 및 여과되어 고체 여과 케이크가 얻어질 수 있다. 그 여과 케이크는, 예를 들어 인라인 여과되고 예비 냉각된 에탄올을 이용하여 세척된 다음, 일정 유속의 질소 또는 공기하에 건조될 수 있다. 임의의 습윤 케이크가 일정 질량까지 최대 배스(bath) 온도(예, 45℃)와 같은 온도에서 건조된다(예, 30분 내에 순 중량의 0.5% 미만의 중량 손실).

또 다른 모범적인 방법에서, 우선 90℃와 같은 적당한 온도에서 N-메틸피롤리딘에서 3-에톡시-6-히드록시-1,2-벤족사졸, 탄산 세슘 및 요오드화 칼륨의 교반 혼합물에 3-[4-(2-클로로에틸)-l-피페리딜]-6-메틸-피리다진을 첨가함으로써 바펜다비르가 제조될 수 있다. 그 혼합물은 긴 시간, 예를 들어 적어도 10 시간 동안 상기 온도에서 교반될 수 있다. 반응 종결(HPLC에 의해 95% 초과의 전환율)의 확인시, 그 혼합물은 적당한 온도(예, 65℃)에서 냉각될 수 있다. 이러한 온도(예, 약 65℃ 또는 임의의 경우 70℃ 이하)에서 그 현탁액에 물과 THF의 혼합물이 첨가될 수 있다. 그 혼합물은 적당한 시간(예를 들어, 적어도 1 시간) 동안 교반된 다음, 냉각될 수 있다(예를 들어, 5℃까지). 다음에, 그 냉각된 현탁액은 여과 케이크가 얻어지고, 그 여과 케이크는 물과 THF의 혼합물과 같은 것으로 세척된 다음, 건조에 앞서 에탄올로 다시 세척되어 바펜다비르가 얻어진다.

필요한 경우, 상기 무수 유리 염기 결정성 바펜다비르를 재결정화하기 위한 공정이, 바펜다비르 및 챠콜에 디클로로메탄과 에탄올의 혼합물을 첨가함으로써 달성될 수 있다. 얻어지는 혼합물이 교반(예를 들어, 20℃에서)된 다음, 예를 들어 여과 보조제 층 상에서 인라인 필터를 통한 여과에 의해 고체가 제거된다. 다음에, 그 여과 케이크는 디클로로메탄과 에탄올의 혼합물을 이용하여 세척된 다음, 얻어지는 여액은, 디클로로메탄의 수준이 감소(예를 들어, 1% w/w 이하)될 때까지 감압하에서 농축을 통해 에탄올로 용매 교환될 수 있다. 이는 예를 들어 20℃까지 냉각전에 환류 냉각될 수 있는 바펜다비르의 에탄올 현탁액을 결과한다.

하나의 적당한 실시예에서, 습식 분쇄 펌프 헤드를 구비한 인라인 펌프를 통한 재순환을 통해 습식 분쇄(wet milling)가 수행된 다음, 예를 들어 적어도 10 분간 40℃까지 가열된 다음, 냉각(예를 들어, 20℃까지)된 후 여과된다. 다음에, 얻어지는 결정성 고체 바펜다비르는 에탄올 또는 다른 적당한 용매를 이용하여 세척되고, 잔류 용매 함량(예를 들어, 에탄올의 함량)이 원하는 수준, 예를 들어 약 1000 ppm 이하)이 될 때까지 건조된다.

에탄올과 같은 알코올 외에도, 아세톤, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 1,4-디옥산, 메틸 에틸 케톤, 1-프로필, 2-프로판올, 테트라히드로푸란, 톨루엔 및 물을 비롯한 다수의 적당한 재결정화 용매가 사용될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 바펜다비르의 결정성 유리 염기 형태는 아세톤, 아크릴로니트릴, 에탄올, 1-프로판올 및 테트라히드로푸란의 수성 혼합물로부터 분리될 수 있다.

아래에 더욱 상세히 기재되는 바와 같이, 얻어지는 바펜다비르는 습식 분쇄 또는 제트 분쇄와 같은 공정을 통해 마이크로화될 수 있는데, 이때 그 입자 크기는 더욱 균일한 입자 크기가 확보되어 약품 제조 목적을 위한 약물 물질의 특성의 적합성 및 일관성이 최대화되도록 감소된다. 상기 마이크로화(micronization)는, 약품 제조에 더욱 적당하지만 유효 성분 및 유리 염기 결정 형태의 치료 특성에 영향을 미치지 않는 더욱 작은 종횡비로 니들(needle)들을 파쇄한다.

특정 실시예에서, 본 발명의 유리 염기 결정 형태는 평균 입자 크기가 감소되도록 마이크로화될 수 있다. 일반적으로, 우선 제조되면, 유리 염기 바펜다비르의 침상 결정은 마이크로화 전에 일반적으로 약 15 내지 100 미크론의 입자 크기를 갖는데, 더욱 많은 입자들이 약 70 내지 100 미크론의 크기에 속한다. 상기 마이크로화 공정을 통해, 그 입자들은 더욱 작은 크기로 감소되는데, 평균 입자 크기는 약 2 내지 5 미크론의 범위이고, 일반적으로는 5 미크론 미만이다. 마이크로화는 당업계에 알려진 제트 분쇄 또는 습식 분쇄 공정과 같은 임의의 적당한 공정을 이용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 상기 결정성 유리 염기 바펜다비르의 마이크로화된 형태는 Sturdevant, Inc사에 의해 제작된 NGMP-2 제트 분쇄기(jet mill)와 같은 통상적인 제트 분쇄 장치를 이용하여 얻어질 수 있다.

상기 공정의 결과로서, 상기 화학식 (I)로 나타낸 바와 같은 6-{2-[l-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸, 또는 3-에톡시-6- {2-[1-(6-메틸-피리다진-3-일)-피페리딘-4-일]-에톡시}-벤조[d]이속사졸의 무수 결정성 유리 염기를 포함하는 화합물이 제조된다. 이러한 결정성 유리 염기 형태는 침상 결정 습성(needle-like crystal habit)에 특징이 있고, 첨부 도면에 도시한 바와 같이, 6-{2-[l-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-l,2-벤족사졸의 이러한 결정 형태는 대략적으로 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(d-간격, Å)를 가질 수 있다: 19.5, 8.0, 6.5, 4.4, 4.3, 4.0, 3.8, 3.6, 및 3.5. 그 2θ XRPD 피크는 대략적으로 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택될 수 있다: 4.5, 11.0, 13.6, 20.3, 20.6, 22.1, 23.1, 24.5, 및 25.7. 따라서, 그 결정 형태는 도 1A, 도 1B, 도 2A, 도 2B 및 도 3에서 도시된 바와 같은 XRPD 패턴을 가질 수 있다.

또 다른 모범적인 실시예에서, 본 발명에 따른 6-{2-[l-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-l,2-벤족사졸의 결정 형태는 적당한 약학적 담체를 포함하는 약학적 조성물로 제형화될 수 있다. "적당한 약학적 담체"란 유효 성분, 본 발명의 경우 6-{2-[l-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-l,2-벤족사졸의 결정성 유리 염기 형태가 당업계에 잘 알려져 있는 넓은 종류의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제들 중 임의의 것을 포함하여 투여될 수 있는 일련의 물리적 형태들 중 임의의 것을 의미한다.

따라서, 적당한 약학적 담체로는 용매, 코팅제, 항균 및 항진균제, 이소토닉 및 흡수 강화 또는 지연제 등이 있다. "약학적으로 허용가능한"이란 상기 담체가 조성물 또는 제형 내의 유효 성분 및 다른 성분과 실질적으로 양립할 수 있고 치료를 받는 환자에게 실질적으로 해롭지 않은 것을 의미하는 것으로 일반적으로 이해된다. 적당한 담체의 일반적인 예로는 말토텍스트린, 탄산 마그네슘, 스테아르산 마그네슘, 탤크, 당, 락토오스, 펙틴, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 트라가칸트, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 규화 미소결정질 셀룰로오스, 만니톨 400과 같은 만니톨, 글리콜산 나트륨 전분과 같은 글리콜레이트, 소듐 카르복시메틸셀룰로오스와 같은 카르복시메틸셀룰로오스, 저융점 왁스, 코코아 버터 등이 있다. 다른 적당한 담체로는 바펜다비르가 용액, 겔, 크림, 로션, 연고, 안약 등으로 형성될 수 있도록 하는 물질들이 있다.

일반적으로, 본 발명은 경구, 장내, 비경구, 국소, 설하, 정맥내, 피하, 근육내, 경피 및 흡입을 비롯한 임의의 적당한 방법으로 본 발명의 활성 바펜다비르 화합물의 전달을 위한 약학적 담체를 고려한다.

본 발명의 약학적 조성물의 하나의 적당한 형태는 현탁액이다. 현탁액의 형태로 약학적 조성물을 제공하기 위한 능력은 특히 소아용 의약의 경우에 아주 중요했었는데, 이러한 형태는 어린 환자에게 유효 성분을 투여하는 것이 필수적일 수 있기 때문이다. 이러한 점에서, 본 발명자들은 그 결정의 침상 입자들이 더욱 작지만 더욱 균일한 입자 크기로 마이크로화된 결정성 유리 염기 바펜다비르의 적당한 형태가 제조될 수 있다는 것을 확인했다. 마이크로화되고 그의 활성 형태를 계속 유지하기 위한 상기 결정성 유리 염기의 능력은, 판상 결정 형태를 형성하고 마이크로화될 수 있고 그의 활성을 유지하는 포스페이트 염 형태와 같은 이전의 바펜다비르 형태보다 개선된 것이다.

따라서, 본 발병의 또 다른 모범적인 실시예에서, 본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르는 현탁액으로 제형화되도록 마이크로화된다.

가장 바람직한 pH 조건을 평가하기 위한 시험에서, 본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르는 pH 5.0 내지 8.0에서 최저 용해도를 갖는 것으로 판단되어, 이러한 pH 범위는 현탁액 제형에 가장 바람직한 것으로 확인되었다.

특정 실시예에서, 상기 현탁액 제제는 약학적 현탁액을 형성하는데 유용한 임의의 통상적인 성분들을 이용하여 얻어질 수 있다. 예를 들어, 유효 성분 외에도, 그 현탁액은 완충액, 보존제 및/또는 점도 향상제와 같은 다른 물질들을 포함할 수 있다. 하나의 모범적인 실시예에서, 목적 pH에서 그 조성물을 더욱 효과적으로 보존하기 위하여 벤조산 나트륨, 또는 바람직하게는 부틸파라벤과 같은 보존제와 함께 시트르산 완충액이 사용된다. 게다가, 그 현탁액의 점도를 증가시키기 위하여 잔탄 검이 첨가될 수 있다.

마이크로화를 달성하기 위하여, 상기 결정성 유리 염기 바펜다비르는 Sturdevant, Inc사에 의해 제조된 NGMP-2 제트 분쇄기와 같은 통상적인 제트 분쇄 장치를 이용하여 제트 분쇄될 수 있다. 얻어지는 마이크로화된 결정성 유리 염기 바펜다비르는 더욱 균일한 입자 크기 분포를 가질 수 있고, 얻어지는 형태는 5 미크론 미만의 평균 입자 크기를 가질 수 있다. 이러한 더욱 작은 입자 크기는 용출을 강화하고, 대규모 조작에 관여하는 것과 같은 처리에 대하여 안정한 유리 염기 형태를 제공하기 위해 더욱 큰 표면적을 제공할 수 있다.

상기 공정의 결과로서, 마이크로화된 결정성 유리 염기 바펜다비르를 함유하는 소아용 현탁액은 외관, 점도, pH, 약물 현탁성 및 감각 수용 특성의 점에서 바람직한 특성을 포함하도록 얻어질 수 있다. 다음은 본 발명에 따라 유용하게 되는 현탁액의 일 예이다.

당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 상기 제형의 성분들의 일부 또는 전부를 이용하여 적당한 현탁액이 제조될 수 있고, 이들 성분들의 범위는 위에서 나타낸 모범적인 예들을 초과하여 변화할 수 있다.

또 다른 모범적인 실시예에서, 본 발명의 결정성 유리 염기는 재현탁가능한 새세이 또는 분말의 형태로 제공될 수 있다.

본 발명의 또 다른 모범적인 실시예에서는, 본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르의 경구 투여를 위해 적당히 사용될 수 있는 정제와 같은 고체상의 약학적 투여 형태가 제공된다. 이러한 실시예에서, 마이크로화된 결정성 유리 염기 바펜다비르가 상기 고체상의 약학적 투여 형태의 제조에서 이용된다. 그 투여 형태를 제조하는데 있어서, 만니톨과 같은 물질을 황산 라우릴과 같은 습윤제 또는 계면활성제로 대체하면 약물 습윤성 및 전체 용해도가 개선되는 것으로 확인되었다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 습윤제 또는 계면활성제는 액체의 표면 장력을 감소시키고 그 액체의 확산 및 표면 침투를 더욱 효과적으로 만들기 위해서 그 액체에 첨가될 수 있는 화학물질로 일반적으로 알려져 있다.

이러한 점에서, 고체상의 약학적 투여 형태의 제조에서 습윤제의 역할을 평가하기 위하여 하기의 제형들의 용출 특성을 시험하였다.

시료	CU05-129-01	CU05-129-12	CU05-128-01	CU05-128-12
바펜다비르 유리 염기(마이크로화되지 않은)	---	---	52.8%	52.8%
바펜다비르 유리 염기(마이크로화된)	52.8%	52.8%	---	---
황산라우릴나트륨	2.0%	2.0%	2.0%	2.0%
말토덱스트린	18.0%	18.0%	18.0%	18.0%
글리콜산 전분 나트륨(Explotab)	6.0%	6.0%	6.0%	6.0%
규화(silicified) 미소결정질 셀룰로오스(Porsolv SMCC 90)	20.5%	20.5%	20.5%	20.5%
스테아르산 마그네슘	0.8%	0.8%	0.8%	0.8%

API 마이크로화 및 투여 형태 비교

용출 결과는 마이크로화된 것과 마이크로화되지 않은 바펜다비르 유리 염기 제형들 사이의 용출률의 차이가 무시될 수 있다는 것을 나타냈다. 따라서, 약물 제형의 표면 습윤성을 더욱더 개선하기 위하여, 여러 가지 계면활성제/습윤제들을 평가했다.

시료	CU05-095(4)	CLF13-113	CLF13-112	CLF13-114	CU05-093	CLF13-115	CU05-128-12
비펜다비르 유리 염기(마이크로화되지 않은)	---	67.0%	67.0%	67.0%	44.5%	67.0%	52.8%
바펜다비르 포스페이트 염	68.1%	---	---	---	---	---	---
폴록사머(Kolliphor P118)	---	25.4%	---	---	---	---	---
황산 라우릴 나트륨	---	---	---	---	---	---	2.0%
Soluplus		---	---	25.4%	---	---	---
Providone K29/32	---	---	---	---	---	25.4%	---
폴리소르베이트 80	---	---	2.5%	---	---	---	---
말토덱스트린	---	---	22.8%	---	---	---	18.0%
글리콜산 전분 나트륨(Explotab)	---	7.6%	7.6%	7.6%	---	7.6%	6.0%
SMCC 90	---	---	---	---	---	---	20.5%
스테아르산 마그네슘	---	---	---	---	---	---	0.8%
무수 덱스트로스	31.9%	---	---	---	55.5%	---	---

습윤제 비교

시험 결과, 폴록사머 및 폴리소르베이트 80을 갖는 제형은 용출률에 가장 획기적인 영향을 미치는 것으로 확인되었다. Soluplus는 용출률에 가장 적당한 개선을 제공했고, 포비돈 K29/32는 용출률을 개선하지 않았다. 이는 용출 바스켓 내부에서 히드로겔의 형성에 의해 유발된 느린 분해(disintegration)때문일 가능성이 가장 높다. 무한원점(infinity data) 데이터는, 무한 원점에서의 약물 방출이 다른 습윤제와 유사했기 때문에 포비돈 제형에 대하여 관찰된 느린 용출 프로필이 느린 분해에 의한 것이라는 이온을 지지한다. 그 증가된 바스켓 속도는 히드로겔의 분해를 촉진했고 그 약물이 용액내로 방출되도록 하였다.

평가된 습윤제들 중 하나는 폴록사머였고, 마이크로화된 것과 마이크로화되지 않은 결정성 유리 염기 바펜다비르와 함께 폴록사머의 사용을 평가하기 위해 본 발명에 따른 제형을 제조했다. 또한, 아래의 표에 나타낸 바와 같이 여러 가지 수준의 폴록사머를 평가하기 위해 제형들을 제조했다.

시료	CU05-095(4)	CLF13-113	PS01-08	PS01-12
바펜다비르 유리 염기(마이크로화되지 않은)	---	67.0%	---	76.7%
바펜다비르 유리 염기(마이크로화된)	---	---	67.0%	---
바펜다비르 포스페이트 염	68.1%	---	---	---
폴록사머(Kolliphor P188)	---	25.4%	25.4%	14.5%
글리콜산 전분 나트륨(Explotab)	---	7.6%	7.6%	8.7%
무수 덱스트로스	31.9%	---	---	---

마이크로화된 API 및 폴록사머 수준 비교

마이크로화된 것과 폴록사머 수준에 기초한 비교가 도 4에서 도시되어 있다.

폴록사머의 상이한 수준들 사이에 용출 프로필의 차이가 없어서, 그 제형에서 폴록사머 사용 수준이 감소될 수 있는 것으로 확인되었다. 따라서, 최종 투여 형태의 크기를 최소화하여 약물 조절을 이용한 가능한 순응성(compliance)에 도움을 줄 수 있다. 또한, 무한 원점 측정치는 마이크로화되지 않은 물질을 함유하는 제형보다 더욱 큰 정도까지 마이크로화 바펜다비르 유리 염기 방출을 이용하는 제형을 나타낸다.

바펜다비르 유리 염기 고체 경구 제형의 용출률 및 정도는 예전에 제조된 정제 제형에 비해 유의하게 증가되었다. 모범적인 선도 및 보완(back-up) 그래뉼화 제형들이 아래에 열거되어 있다.

상기 시험에 따라, 마이크로화 공정에서 습윤제의 첨가는 본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르를 이용하여 적당한 약학적 제형을 얻는데 있어서 도움이 되고 본 발명의 적당한 정제 형태를 개발하는데 있어서 또 다른 유용한 단계인 것으로 확인되었다.

6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 결정 형태의 또 다른 모범적인 이점은 이러한 새로운 결정 형태를 함유하는 정제의 물리적 크기 또는 질량이 포스페이트 염 형태보다 더욱 작은 분자량을 갖는 본 발명의 결정 형태로 인해 비스-포스페이트 형태보다 작다는 것이다. 따라서, 위에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 하나의 모범적인 실시예는 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸이 정제로 형성된다는 것이다.

하나의 모범적인 실시예에서, 무수의 결정성 유리 염기 바펜다비르의 약학적 조성물은 건조 분말 조성물이다. 또 다른 실시예에서, 상기 약학적 조성물은 경구 투여, 특히 경구 장내 투여에 적합하다. 이러한 점에서, 상기 약학적 조성물은 정제 또는 캡슐로 형성될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 재현탁가능한 새세이 또는 분말의 형태일 수도 있다.

또 다른 모범적인 실시예에서, 상기 바펜다비르의 무수 유리 염기 형태는 이를 필요로 하는 환자에게 경구 투여하기에 적당한 정제로 형성될 수 있다. 상기 정제를 형성하기 위한 모범적인 방법이 도 8에서 도시되어 있다. 이러한 모범적인 방법에서, 상기 유리 염기 결정인 바펜다비르는 말토덱스트린, 전분 나트륨 및 적당한 글리콜레이트와 결합되어 혼합물이 형성되고, 그 혼합물에 정제수가 첨가되고, 그 성분들이 혼합되고 그래뉼화된 다음, 유동층 건조기에 공급되어 건조된다. 건조 후, 그 성분들은 스크린을 통과하여 분쇄된 다음, 그 선별된 성분들이 만니톨 400 및 규화 미소결정성 셀룰로오스와 같은 적당한 물질과 배합된다. 다음에, 그 성분들은 스테아르산 마그네슘과 적당한 시간 동안 배합된 다음, 압착 및 코팅되어 최종 정제가 얻어진다. 그 정제에는 Opadry 코팅제, 예를 들어 오파드라이(Opadry) 03F2300015와 같은 폴리(비닐 알코올) 또는 PVA 코팅제를 비롯한 당업계에 알려진 임의의 약학적으로 허용가능한 코팅제가 코팅될 수 있다. 이러한 적당한 중합체 코팅제는 PVA 및 PVA의 필름 유연성을 강화하기 위한 가소제로 사용되는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 일반적으로 포함한다.

본 발명에 따른 정제는 경구 투여를 위해 일반적으로 제조되는 양, 예를 들어 100 mg, 200 mg, 300 mg, 500 mg 등의 양으로 유효 성분을 포함할 수 있다. 모범적인 실시예에서, 이러한 정제는 20 내지 80 중량%, 또는 40 내지 70 중량%, 또는 54 내지 60 중량%의 양으로 바펜다비르, 및 잔여량의 적당한 약학적으로 허용가능한 비히클, 부형제 및/또는 담체를 포함할 수 있다. 300 mg 용량의 바펜다비르를 갖는 정제는 하기의 성분들을 가질 수 있다.

또한, 본 발명의 결정 형태의 추가의 이점은 이러한 결정 형태가 무수 형태이므로, 그 새로운 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 물을 흡수하지 않고 비스-디히드로겐포스페이트 형태를 이용할 때 관찰되는 것과 바와 같은 약학적 제형화 동안의 변화에 견딘다.

그 새로운 결정성 유리 염기 형태 때문에, 본 발명의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 안정성 및 유동성의 측면에서 개선된 특성을 제공할 수 있다. 또한, 이는 제조하기 용이하고 종래 기술보다 더욱 효율적이고 효과적으로 고체 정제 형태 또는 현탁액으로 포함되기에 적당한 특성을 갖는 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 형태를 제공할 수 있다. 또한, 본 발명의 이점 및 장점은 종래 기술에서 사용된 비스-디히드로겐포스페이트 형태와 비교하여 본 발명의 유리 염기 바펜다비르의 동일 용량에 대한 더욱 작은 입자 크기로 인한 개선된 환자 순응도 때문에 HRV와 같은 피코나바이러스의 개선된 치료를 포함한다.

상기 바펜다비르의 유리 염기의 새로운 결정 형태는 바펜다비르의 최저 에너지/가장 열역학적으로 안정한 형태를 구성하고, 수성 용매계에서 재결정화가 수행되는 때 수화물 형성을 나타내지 않는다. 이러한 형태는 바펜다비르 유리 염기의 비수화성(즉, 무수) 결정 형태이다. 그 형태는 낮은 흡습성(DVS <0.1 중량% 증가)을 갖는 것으로 확인되었고, 수성 조건하에서 수화물이 형성되지 않았기 때문에, 상기 유리 염기 바펜다비르의 새로운 결정 형태는 경구 투여/제조 강건성(robustness) 및 분말 취급 안전성에 적당한 경구 제제, 현탁액 또는 유사한 형태로서의 제형화(습식 그래뉼화를 일반적으로 포함하는 공정) 동안에 이점이 있을 수 있다. 이와 같이, 수화물 형성이 없으면, 그 새로운 결정 형태는 바펜다비르의 예전의 비스-디히드로겐 포스페이트 결정 형태와 관련된 것들과 같은, 종래의 정제 제조의 문제점인 제조/제형화 동안의 물에 의해 유발된 형태 변화(공정에 의해 유발된 변화)를 받는 경향이 없다. 또한, 본 발명의 새로운 결정 형태는 종래의 비스-디히드로겐 포스페이트의 판상 결정 습성과 대조적인 침상 결정 습성을 갖는다.

또한, 그 결정 습성은 분말의 압착의 용이성 및 고체 상태에서 약물의 유동성에 영향을 미칠 수 있다는 점에서, 유동성의 측면에서 침상 결정 습성과 관련된 제조상의 이점이 있다. 예를 들어, 톨부타미드(tolbutamide)의 판상 결정 형태는 정제기의 호퍼에서 분말 결합(powder bridging)을 유발하는 외에도, 정제 제조 동안 캐핑(capping) 문제를 유발한다. 이러한 문제들은 다른 결정 습성의 톨부타미드의 경우에는 발생하지 않는다. 또한, 입자 형상은 유동성에 영향을 미치고, 크기가 유사하지만 형상이 상이한 입자들은 입자간 접촉 면적의 차이 때문에 현저히 상이한 유동성을 가질 수 있다.

따라서, 비수화물, 즉 무수이고 따라서 "공정에 의해 유발된 변형" 또는 "물에 의해 유발된 상변화"를 받는 것으로 예상되지 않기 때문에 대규모 약품 제조를 위한 종래 기술 보다 더욱 안정하다는 것은 본 발명의 신규한 결정 형태의 중요한 이점이다. 위에서 나타낸 바와 같이, 이는 위에서 언급한 바와 같은 바펜다비르의 비스-디히드로겐 포스페이트 염과 같은 유효 성분들의 예전을 형태를 포함하는 습식-그래뉼화/분무 건조 공정 단계를 통한 정제 제조의 종래 경험과 대조적인 것이다. 또한, 본 발명에 따른 바펜다비르의 무수 유리 염기 결정 형태는 화학적 안정성을 나타냈고 열역학적으로 가장 안정한 형태인 것으로 확인되었다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 바이러스 감염, 예를 들어 인간 리노바이러스(HRV)와 같은 피코나바이러스 감염을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 바람직한 실시예들 중 하나에 있어서, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여에 적당한 형태로 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 고체 정제의 형태일 수 있지만, 충전된 캡슐 또는 캐플릿과 같은 다른 형태 및 경구 투여를 위한 현탁액과 같은 다른 형태 및 다른 적당한 형태도 고려된다. 일반적으로 이러한 단위 투여 형태는 아래에 더욱더 기재하는 바와 같이 이용되는 하루 투여량 범위에 적합한 유효량의 결정성 유효 성분 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 함유한다. 또한, 본 발명의 화합물 및 조성물은 천식 또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)의 증상 또는 악화를 치료, 완화, 예방 또는 감소시키는데 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 수족구병을 치료하는데 사용될 수 있다. 이러한 방법에서, 본 발명에 따른 치료적으로 유효량의 화합물 또는 조성물은 상기 치료를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

본 발명에 따른 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸 및 약학적 조성물의 모범적인 투여량은 리노바이러스 또는 수족구병 등과 같은 바이러스 감염을 포함한 환자를 괴롭히는 상태를 예방 또는 치료하거나, 천식 또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)의 증상 또는 악화를 치료, 완화, 예방 또는 감소시키는데 효과적인 양이다. 당업자가 쉽게 인식하는 바와 같이, 이러한 양은 감염의 특성 및 환자의 상태에 따라 크게 변화할 수 있다.

따라서, 본 발명에 따라 사용되는 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸/6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 함유하는 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 원하는 예방 또는 치료 효과를 나타내는 화합물, 조성물 또는 제제의 임의의 비독성이지만 충분한 양을 의미한다. 따라서, 당업자가 쉽게 인식하는 바와 같이, 필요한 조성물 또는 특정 제제의 정확한 양은 개체를 감염시키는 바이러스의 종류, 개체의 연령 및 일반 건강 상태, 치료되는 상태의 심각성, 사용되는 특정 담체 또는 보조제, 투여 방법 등에 따라 개체마다 다양하게 된다. 마찬가지로, 투여 용법은 조성물에 투여되는 개체에 적합하도록 조절되어야 하고, 개체의 연령, 체중, 대사 등에 따라 변화할 수 있다. 따라서, 임의의 특정 화합물, 조성물 또는 제제의 "유효량"은 특정 상황에 따라 변화할 수 있고, 적절한 유효량은 정규 실험만을 이용하여 당업자에 의해 각각의 적용의 경우마다 결정될 수 있다.

예를 들어, 본 발명에 따른 제형은 투여 단위당 0.1 내지 500 밀리그램의 유효 성분을 함유하고, 일일 전체 투여량은 하루에 100 내지 1500 mg일 수 있다. 다른 실시예에서, 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 하루에 300 mg 내지 1200 mg 또는 600 내지 1000 mg의 양으로 투여될 수 있다. 모범적인 투여 단위에 있어서, 정제는 200 내지 400 mg, 예를 들어 300 mg의 양으로 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 함유하도록 얻어질 수 있다. 또 다른 모범적인 투여 단위에 있어서, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 약학적 조성물의 전체 중량을 기준으로 약 40 내지 60 중량%의 양으로 조성물에 포함될 수 있다. 위에서 나타낸 바와 같이, 실제 투여 용법은 위에서 나타낸 바와 같이 그를 필요로 하는 환자에게 유효량의 활성 화합물을 투여하는 것일 수 있다.

본 발명에 따라, 피코나바이러스와 같은 바이러스 감염을 치료하기 위한 방법으로서, 상기 치료를 필요로 하는 환자에게 전술한 바와 같은 치료적 유효량의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 결정성 유리 염기 형태를 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 위에서 나타낸 바와 같이, 이러한 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 결정성 유리 염기 형태는 침상 결정 습성을 갖고, 도 1A, 도 1B, 도 2A, 도 2B 및 도 3에서 도시한 XRPD 패턴을 갖는다. 상기 방법은 인간 리노바이러스(HRV)와 같은 피코나바이러스를 치료 또는 예방하기 위해 투여될 수 있다. 위에서 나타낸 바와 같이, 상기 화합물은 정제와 같은 다수의 고체 형태들 중 임의의 형태로 투여될 수 있고, 모범적인 실시예에서는 하루에 300 내지 1500 mg의 양으로 투여될 수 있다. 다른 모범적인 치료법에서, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 하루에 100 내지 1500 mg, 하루에 300 mg 내지 1200 mg, 또는 하루에 600 mg 내지 1000 mg의 양으로 투여될 수 있다.

또 다른 실시예에서, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸 및 적당한 약학적 담체를 포함하는 약학적 조성물로 투여될 수 있다.

또한, 본 발병에 따라, 감소된 폐기능이 일반적인 징후인 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 또는 첨식의 증상 또는 악화를 치료, 완화, 예방 또는 감소시키기 위한 방법으로서, 상기 치료를 필요로 하는 환자에게 위에서 나타낸 바와 같은 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태를 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.

또한, 본 발명의 화합물은 예를 들어 ACQ-5, β-작용제 사용의 빈도수의 감소, 악화의 감소된 빈도, 개선된 폐기능(FEV₁), 및 환자에 의해 완성된 생활 설문지의 품질에 의해 측정될 수 있는 가정된 징후적인 리노바이러스 감염 동안 개선된 천식 제어를 포함한 이점을 제공한다. 다른 개선된 치료 결과로는 환자 입원의 감소, 감기 심각성 및 기간의 감소, 중이염과 같은 합병증의 감소, 이차 감염의 감소 및 항생제 사용의 감소가 있다.

요약하면, 본 발명의 결과로서, 바펜다비르의 예전의 형태보다 더욱 작은 크기를 갖는 정제에서 효과적인 치료 투여량을 달성할 수 있다. 또한, 본 발명은 상기 결정 형태가, 종래 기술에서 문제가 되어왔던 제조/제형화 동안의 물 유발/형태 변화("공정 유발 변화")를 받는 경향이 없기 때문에 유리하고, 그 침상 결정 습성은 분말의 압착의 용이성 및 고체 상태에서 약물의 유동성에 영향을 미칠 수 있다는 점에서 유동성의 측면에서 이점을 제공한다.

본원에서 개시된 요지의 여러 가지 사항은 본원에 개시된 요지의 범위를 벗어나지 않고 변화될 수 있는 것으로 이해된다. 또한, 전술한 설명 및 하기의 실시예들은 예시의 목적을 위한 것으로서, 제한의 목적이 있는 것은 아니다.

실시예

이하, 본 발명의 더욱 심도 있는 이해를 위해 제공되는 특정 실시예, 도면을 포함한 실험 데이터 및 결과를 참조하여 설명하기로 한다. 이러한 실시예, 실험 데이터 및 결과들은 오로지 예시의 목적을 위해 제공되고, 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다. 또한, 당업자는 추가의 제조 방법, 약학적 제형 및 치료법이 통상적인 실험 및/또는 통상적인 기법을 통해 달성될 수 있다는 것을 쉽게 이해할 수 있다.

실시예 1: 6 -{2-[1-(6- 메틸 -3- 피리다지닐 )-4- 피페리디닐 ] 에톡시 }-3- 에톡시 -1,2-벤족사졸의 결정성 유리 염기 형태의 제조 방법

본 발명에 따른 바펜다비르의 무수 결정성 유리 염기 형태의 제조 방법은 하기의 반응식으로 나타낼 수 있다:

상기 반응식에서, Ac는 아세탈이고, BTEAC는 벤질트리에틸암모늄 클로라이드이고, CDI는 1,1'-카보닐디이미다졸이고, DCM는 디클로로메탄이고, DES는 디에틸 설페이트이고, Et는 에틸이고, iPr은 이소프로필이고, NMP는 N-메틸피롤리돈이고, THF는 테트라히드로푸란이다. 간략히 말해서, 바펜다비르의 제조는 하기 화학식 (II)을 갖는 화합물을 하기 화학식 (III)을 갖는 화합물과 적당한 반응 매질에서 반응시킴으로써 달성된다:

상기 반응 매질은 탄산 세슘, 요오드화 칼륨 및 N-메틸피롤리돈을 포함할 수 있다. 또한, 테트라히드로푸란, 에탄올 및 물이 반응에서 얻어지는 유리 염기 결정의 처리를 위해 사용될 수도 있다. 상기 반응은 본 발명에 따른 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 유리 염기 형태를 생성한다. 상기 화학식 (II)로 나타낸 화합물은 하기의 반응을 통해 제조될 수 있다:

상기 예시적인 반응식에서 더욱더 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태의 제조 방법은 적당한 용매에서 재결정화하는 단계를 또한 포함할 수 있다. 하나의 실시예에서, 본 발명의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태의 재결정화는 불순물을 제거하기 위한 활성탄 및 일련의 용매를 이용하여 수행되어, 재결정화된 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸 무수 유리 염기 결정 형태가 제조된다.

실시예 2: 6 -{2-[1-(6- 메틸 -3- 피리다지닐 )-4- 피페리디닐 ] 에톡시 }-3- 에톡시 -1,2-벤족사졸의 결정성 유리 염기 형태의 제조를 위한 대안의 방법

본 발명에 따른 바펜다비르의 무수 결정성 유리 염기 형태의 제조를 위한 또 다른 모범적인 방법이 아래에 제공된다.

이 실시예에서는, 90℃에서 N-메틸피롤리돈(87 L)에 용해된 3-에톡시-6-히드록시-1,2-벤족사졸(10.9 kg), 탄산세슘(29.7 kg) 및 요오드화칼륨(2.0 kg)의 교반 혼합물에 3-[4-(2-클로로에틸)-l-피페리디닐]-6-메틸-피리다진(14.6 kg)을 고체 형태로 조금씩 첨가했다. 그 혼합물을 90℃에서 적어도 10 시간 동안 교반했다. 반응의 완결(HPLC에 의해 >95%의 전환율)의 확인 시, 그 혼합물을 65℃로 냉각했다. 다음에, 온도를 70℃ 이하로 유지하면서 그 현탁액에 물과 THF (4/1 v/v, 240L)의 혼합물을 첨가했다. 그 혼합물을 적어도 1 시간 동안 교반한 다음, 5℃로 냉각했다. 그 냉각된 현탁액을 여과하고, 그 여과 케이크를 물과 THF (4/1 v/v, 2 x 55 L)의 혼합물로 세척하고 에탄올(2 x 27 L)로 세척한 다음, 건조하여 바펜다비르(19.4 kg, 83% 수율)를 얻었다.

위에서 얻은 바펜다비르(18.2 kg) 및 챠콜(1.8 kg)에 디클로로메탄(100L)과 에탄올(73L)의 혼합물을 첨가했다. 그 혼합물을 20℃에서 적어도 10 시간 동안 교반한 다음, 여과 보조제 층상에서 인라인 필터를 통한 여과에 의해 고체를 제거했다. 다음에, 그 여과 케이크를 디클로로메탄과 에탄올(1/1 v/v, 2 x 18 L)의 혼합물로 세척했다. 얻어지는 여액을, 디클로로메탄의 수준이 1% w/w이 될 때까지 감압하에서 농축을 통해 에탄올로 용매 교환했다. 얻어지는 바펜다비르의 에탄올 현탁액을 환류 가열한 다음 20℃로 냉각했다. 얻어지는 현탁액을 습식 분쇄 펌프 헤드를 구비한 인라인 펌프를 통한 제순환에 의해 분쇄했다. 그 현탁액을 적어도 10분간 40℃로 가열한 다음, 20℃로 냉각한 후 여과했다. 얻어지는 결정성 고체를 에탄올(2 x 28 L)로 세척하고, 잔류 에탄올 함량이 1000 ppm이 될 때까지 건조했다(16.6 kg, 91% 수율).

실시예 3: 바펜다비르의 포스페이트 염 형태와 비교한 결정성 유리 염기 형태의 고체상 특성규명 및 수용해도 측정

본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르(BTA-798이라고도 나타냄)뿐만 아니라 약물 물질의 포스페이트 염 형태를 포함한 바펜다비르의 종래 형태의 고체성 특성 및 수용해도를 평가하기 위하여 시험을 수행했다. 또한, 이들 시험은 약품으로 제형화된 약물 물질들의 비교 용출 프로필을 요약한다.

I. 시험된 시료:

A. BTA-798 유리 염기 약물 물질 로트(lot) # NE-021602-BATCH-01-2013

B. BTA-798 포스페이트 염 물질 로트 # DB330701.2

C. 300mg BTA-798 유리 염기 정제 로트 #C14011

D. 200mg BTA-798 포스페이트 염 캡슐 로트 # PPP.14.098

E. 300mg BTA-798 유리 염기 정제 로트 #C14002B

F. 132mg BTA-798 유리 염기 캡슐 로트 #CU05-087 & CU05-093

II. 장치:

A. X선 회절분석기: 구리 x선 소스를 구비한 Rigaku Miniflex 600

B. 입자 크기 분석기: Malvern Mastersizer 3000

C. 주사 전자 현미경: JEOL JCM-6000 NeoScope Benchtop

D. 용출 배스(Dissolution Bath): Distek Dissolution System Evolution 6100

E. 용출 자동 샘플러(Dissolution Auto Sampler): Distek Autosampler Evolution 4300

III. 과정:

A. 분말 X선 회절

1. BTA-798 유리 염기(도 1A 및 도 1B) 및 BTA-798 포스페이트 염(도 9)를 분리된 샘플러 홀더에 적용하고 분석했다.

2. 하나의 정제를 막자사발에서 분쇄했다(로트 # Cl4011). 그 분쇄된 정제로부터 얻은 분말을 시료 홀더에 적용하고 분석했다. 그 정제를 BTA-798 유리 염기 API(도 10)와 비교했다.

3. BTA-798 유리 염기 약물 물질 로트 # NE-021602-BATCH-01-2013을 마이크로화를 위해 Micron Technologies사에 보냈다. 이러한 마이크로화된 약물 물질을 마이크로화되지 않은 BTA-798 유리 염기 약물 물질(도 11)과 비교했다.

4. 기기 파라미터:

a. X선: 40 kV, 15 mA

b. 고니오미터(Goniometer): MiniFlex 300/600

c. 부착: 표준

d. 필터: 없음

e. CBO 선택 슬리트: -

f. 회절된 비임 모노: 없음

g. 검출기: SC-70

h. 스캔 모드: 연속

i. 스캔 속도/기간: 10.0000도( deg)/분

i. 스텝 폭: 0.0200 도

k. 스캔 축: Theta/2-Theta

1. 스캔 범위: 3.0000 내지 65.0000도

m. 입사 슬리트: 1.250도

n. 길이 제한 슬리트: 10.0mm

o. 수용 슬리트 #1: 1.250도

p. 수용 슬리트 #2: 0.3mm

B. 입자 크기 분석:

1. 약물 물질들을 약 400mL의 물에 분산시켰다. 입자 크기 분석 결과는 도 12, 도 13, 도 14 및 표 4에 나타낸다.

시료	D₁₀	D₅₀	D₉₀
BTA-798 유리 염기 로트 # NE-021602-BATCH-01-2013	7.21㎛	21.7㎛	52.8㎛
BTA-798 유리 염기 로트 # NE-021602-BATCH-01-2013(마이크로화된)	0.893㎛	2.14㎛	4.19㎛
BTA-798 포스페이트 염 로트 # DB330701.2	9.69㎛	29.4㎛	665㎛

약물 물질 입자 크기 분석의 요약

2. 기기 파라미터

a. 입자 RI: 1.680

b. 분산제 RI: 1.330

c. 흡수 지수: 0.010

d. 산란 모델: Mie

C. 주사 전자 현미경관찰(SEM)

1. 소량의 BTA-798 유리 염기(도 15 및 도 16) 및 BTA-798 포스페이트 염(도 17)을 별개의 핀 마운트(pin mount)들에 적용했다.

2. 그 시료에 얇은 코팅이 균일하게 도포될 때까지 금을 스퍼터 코팅했다.

3. 핀 마운트를 45° 각도에서 장착했다.

D. 용해도 연구

1. 몇 개의 0.6 mg/mL의 BTA-798 유리 염기 용액들을 여러 가지 완충액 계들에서 제조했다(표 5). 용액들을 37℃ 물중탕에 약 24 시간 동안 위치시켰다.

완충액	pH
0.01M HCl	1.2
0.1M 제1 인산나트륨	2.1
0.1M 시트르산	3.0
0.1M 아세트산	4.0
0.1M 시트르산	5.0
0.1M 제1 인산칼륨	6.0
0.1M 제1 인산칼륨	7.0
0.1M 제1 인산칼륨	8.0

완충액 계

2. 각각의 용액의 일부를 여과하고 HPLC로 분석했다.

3. 기기 파라미터(HPLC):

a. 칼럼: X-Bridge C18 3.5㎛, 4.6 x l50mm

b. 유속: l.O mL/min

c. 칼럼 속도: 35℃

d. 주입 체적: 2.5 μL

e. 검출: 252nm

f. 진행(Run) 시간: 32 분

g. 이동상 A: lOmM 인산염 완충액 pH 3.0

h. 이동상 B: 메탄올

i. 희석제: 메탄올에 용해된 50% 0.1M HCl

i. 구배

4. 본 연구는 BTA-798 포스페이트 염에 대하여 반복했다.

용해도 연구의 결과가 하기 표 6에서 요약되어 있다.

pH	BTA-798 유리 염기(mg/mL)	BTA-798 포스페이트 염(mg/mL)
로트(Lot)	NE-021602-BATCH-01-2013	DB330701.2
1.2	≥0.6	≥0.6
2.1	0.37	≥0.6
3.0	0.11	0.20
4.0	0.01	0.02
5.0	ND	0.004
6.0	ND	ND
7.0	ND	ND
8.0	ND	ND

약물 물질 용해도의 요약

ND = 검출되지 않음

E. 용출

1. HPLC에서 pH 1.2 및 2.1 용출 매질에서 여러 가지 정제 및 캡슐의 용출 속도를 측정.

2. 용출 파라미터:

a. 장치: USP 1, 바스켓

b. 교반 속도: 50 및 100 RPM

c. 용기 온도: 37℃±0.5℃

d. 샘플 시간: 15, 30 및 45 분

e. 매질: 0.1M 인산염 완충액 pH 2.1 또는 0.1 M HCl pH 1.2

f. 매질 체적: 900 mL

g. 필터: 45 ㎛ 인라인

3. 기기 파라미터 (HPLC):

a. 칼럼: X-Bridge C18 3.5㎛, 4.6 x l50 mm

b. 유속: l.O mL/min

c. 칼럼 속도: 35℃

d. 주입 체적: 5 μL

e. 검출: 252nm

f. 진행 시간: 7 분

g. 이동상 A: 30% lOmM 인산염 완충액 pH

h. 이동상 B: 70% 메탄올

i. 희석제: 메탄올에 용해된 50% 0.1M HCl

용출 연구의 결과가 도 18A 내지 도 18D에 도시되어 있고 하기 표 7 내지 표 10에서 요약되어 있다.

시료	0분	15분	30분	45분
BTA-798 유리 염기 CU05-087	0	17	60	75
BTA-798 포스페이트 염 캡슐 PPP.14.098	0	90	92	92
BTA-798 유리 염기 정제 C14002B	0	0	1	2
BTA-798 유리 염기 정제 C14011	0	0	2	4

(도 18A 참조)

50 RPM에서 pH 2.1에서 용출률(표시 기재사항(label claim)%)

3개 용기의 평균	0분	15분	30분	45분
BTA-798 유리 염기 CU05-087	0	32	67	81
BTA-798 포스페이트 염 캡슐 PPP.14.098	0	91	95	95
BTA-798 유리 염기 정제 C14002B	0	1	3	6
BTA-798 유리 염기 정제 C14011	0	2	6	12

(도 18B 참조)

100 RPM에서 pH 2.1에서 용출률(표시 기재사항%)

3개 용기의 평균	0분	15분	30분	45분
BTA-798 유리 염기 MJD01-35	0	96	101	99
BTA-798 포스페이트 염 캡슐 PPP.14.098	0	94	99	100
BTA-798 유리 염기 정제 C14002B	0	19	51	75
BTA-798 유리 염기 정제 C14011	0	9	37	61

(도 18C 참조)

50 RPM에서 pH 1.2에서 용출률(표시 기재사항%)

3개 용기의 평균	0분	15분	30분	45분
BTA-798 유리 염기 MJD01-35	0	98	96	97
BTA-798 포스페이트 염 캡슐 PPP.14.098	0	91	95	96
BTA-798 유리 염기 정제 C14002B	0	45	91	104
BTA-798 유리 염기 정제 C14011	0	29	70	95

(도 18D 참조)

100 RPM에서 pH 1.2에서 용출률(표시 기재사항%)

IV. 결과 및 결론:

본 발명의 유리 염기 결정성 바펜다비르의 XRDP 패턴은 도 1A 및 도 1B에 나타낸 바와 같은 하기의 피크들을 갖는 것으로 확인되었다:

본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르의 XRDP 패턴의 더욱 상세한 분석은 하기의 패턴 사항들을 나타냈다:

본 발명의 유리 염기 결정성 바펜다비르의 XRDP 패턴은 디히드로겐 포스페이트 염의 형태의 종래 바펜다비르와 상이한 것으로 확인되었다. 상기 포스페이트 염은 도 9에서 나타낸 형태를 갖고, 하기의 피크들을 나타냈다:

따라서, 분말 X선 회절의 경우, 본 발명의 유리 염기 결정은 바펜다비르의 예전의 포스페이트 염 형태와 명백히 상이한 결정 구조를 갖는 것으로 확인되었다.

결정학적 특성의 유지를 평가하기 위한 비교 시험에 있어서, 300mg 바펜다비르를 BTA-798 유리 염기와 비교했고, 그 정제 및 API의 회절 패턴은 그 결정학적 특성이 정제의 제조 동안 변화하지 않았다는 것을 암시한다. 또한, 마이크로화된 BTA-798 결정성 유리 염기 바펜다비르를 마이크로화되지 않은 BTA-798 유리 염기와 비교했다. 상기 마이크로화된 것과 마이크로화되지 않은 것의 회절 패턴은 그 결정학적 특성이 마이크로화 동안 변화하지 않았다는 것을 암시한다.

입자 크기의 경우, 본 발명의 BTA-798 유리 염기 결정은 예전의 비스-포스페이트 형태보다 아주 더 균일한 입자 크기 분포를 가졌다. 그 결정성 유리 염기 바펜다비르는 21.7㎛의 D₅₀ 및 52.8㎛의 D₉₀을 갖는 단봉(unimodal) 입자 크기 분포를 가졌고, 마이크로화된 BTA-798 유리 염기는 2.14㎛의 D₅₀ 및 4.19㎛의 D₉₀을 갖는 단봉(unimodal) 입자 크기 분포를 가졌다. 다른 한편으로, BTA-798 포스페이트 염은 29.4㎛의 D₅₀ 및 665㎛의 D₉₀을 갖는 삼봉(trimodal) 입자 크기 분포를 가졌다.

현미경 패턴의 경우, 본원에 포함된 SEM 현미경사진은 BTA-798 유리 염기가 마이크로화 전에 약 25 ㎛ 내지 100㎛의 범위의 침상 결정 구조를 갖는다는 것을 나타낸다. 마이크로화 후, 그 마이크로화된 BTA-798 유리 염기 약물 물질은 약 2 ㎛ 내지 5 ㎛의 크기 범위의 결정 구조를 갖는다. 본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르와 아주 대조적으로 , 바펜다비르의 예전의 포스페이트 형태는 본 발명의 결정성 유리 염기 형태보다 아주 큰 범위를 갖는 다봉(multi-modal) 입자 크기 분포의 판상 결정 구조를 갖는다. 그 시험은 바펜다비르의 포스페이트 염 형태가 약 2㎛ 내지 150㎛의 범위의 입자 크기를 갖는다는 것을 나타냈다.

용해도의 경우, BTA-798 포스페이트 염의 용해도는 pH 5.0 이하에서 BTA-798 유리 염기의 용해도보다 큰 것으로 보이지만, pH 5.0에서 유리 염기 및 pH 6.0 내지 8.0에서 두 약물 물질의 용해도는 HPLC 분석 방법의 검출 한계보다 낮다. 그 HPLC 방법의 LOD는 0.00006mg/mL 이다.

용출의 경우, 4개의 완성된 제품들의 용출률을 두 개의 상이한 바스켓 속도(50, 및 100 RPM)에서 시험했다.

a. 200mg BTA-798 포스페이트 염 캡슐

i. 15 분에서, 약물은 두 바스켓 속도에서 밀착되거나 완전히 방출된다.

b. 132mg BTA-798 유리 염기 캡슐

i. 45 분 후, 약물은 완전히 방출되지 않았다(33 to 35% LC). 그 프로필은 두 바스켓 속도에서 유사하다.

c. 300mg BTA-798 유리 염기 정제

i. 두 개 로트의 정제들을 시험했다. 두 로트에서, 두 바스켓 속도에서 45분 후 15% 미만이 방출되었다. 상기 유리 염기가 45분 후 유리 염기 정제보다 유의하게 큰 방출을 나타냈기 때문에, 약품 제형은 약물 방출 프로필에 유의한 영향을 미치는 것으로 판단될 수 있다.

이러한 용출 실험은 품질 제어 시험을 위해 예전에 사용된 pH 1.2의 용출 매질을 이용하여 반복했다.

d. 200mg BTA-798 포스페이트 염 캡슐

e. 132mg BTA-798 유리 염기 캡슐

f. 300mg BTA-798 유리 염기 정제

i. 두 개 로트의 정제들이 시험되었다.

두 로트(lot)들의 용출 프로필은 각각의 바스켓 속도에서 유사했다. lOORPM 바스켓 속도에서, 두 정제들은 캡슐 제형보다 지연되었지만, 45분 후 완전히 방출되었다. 50RPM 바스켓 속도에서, 정제 제형은 45분 후 완전히 방출되지 않았다. pH 1.2 용출 매질은 유리 염기 캡슐과 포스페이트 염 캡슐 사이를 구별하지 않았다.

실시예 4A: 6-{2-[1-(6- 메틸 -3- 피리다지닐 )-4- 피페리디닐 ] 에톡시 }-3- 에톡시 -1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기의 XRPD 분석

위에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 결정 형태는 침상 습성을 갖는 결정들로 구성된다. 본 발명의 결정 형태는 판상 결정 습성을 갖는 바펜다비르의 비스-디히드로겐 포스페이트와 같은 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 종래 형태와 구별될 수 있다. 또한, 본 발명의 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 약학적 조성물에서 사용하기에 아주 이롭게 되는 무수 화합물인데, 그 무수 화합물은 안정하고(예를 들어, 물 흡수에 저항함) 습윤 및 분쇄시 형태를 변화하지 않는다. 따라서, 본 발명의 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 약학적 조성물에 포함되기 위한 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 아주 유익하고 유리한 형태이다.

위에서 기재한 시험 외에도, 상기 무수 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 하기의 장치 및 방법을 이용하여 X선 결정 분말 회절을 통해 분석했다.

장치: 실리콘 저배경(low background) 샘플 홀더(직경 24 mm, 피트(pit) 0.2 mm)를 이용하는 Rigaku Corporation사의 Miniflx. 튜브는 Cu, λ = 1.54056 Å, 15 kV 였다.

방법: 각도 2θ=2°내지 2θ=40°및 샘플링 폭 0.02 [2θ]

이러한 시험의 결과로서, 본 발명의 무수 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸은 도 2A 및 도 2B에서 도시된 XRPD 피크 (2θ) 프로필을 갖는 것으로 확인되었다.

아래에 나타낸 주요 XRPD 피크(d-간격, Å)는 대략적으로 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된다:19.2, 8.5, 8.0, 6.5, 5.5, 5.3, 5.0, 4.35, 4.27, 4.12, 4.03, 3.99, 3.96, 3.80 및 3.60. 그 2θ XRPD 피크는 대략적으로 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택될 수 있다: 4.6, 10.4, 11.1 , 13.7, 16.1, 16.7, 17.8, 20.4, 20.8, 21.6, 22.1 ,22.3, 22.4, 23.4, 및 24.8.

실시예 4B: 6-{2-[1-(6- 메틸 -3- 피리다지닐 )-4- 피페리디닐 ] 에톡시 }-3- 에톡시 -1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태의 XRPD 분석

무수 결정성 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 X선 분말 회절(XRPD)을 이용하여 분석했고, 얻어지는 관찰 결과가 도 3에서 도시되어 있다. 하기의 표는 관찰된 피크들의 목록 및 현저한 피크들의 목록을 나타낸다. 약 30 °2θ 이하의 범위의 피크들이 선택되었고, 라운딩 알고리즘(rounding algorithm)을 이용하여 각각의 피크를 거의 0.01 °2θ까지 라운드했다.

Optix의 긴 미동 소스(fine-focus source)를 이용하여 생성된 Cu 방사선의 입사 빔을 이용한 PANalytical X'Pert PRO MPD 회절분석기를 이용하여 XRPD 패턴을 수집했다. 타원형 그레이드(elliptically graded)의 다층 거울을 이용하여, Cu Ka X선을 시편를 통해 검출기 상에 집속했다. 분석에 앞서, 실리콘 시편(NIST SRM 640d)을 분석하여, Si 111 피크의 관찰 위치가 NIST-증명 위치와 일치하는 것을 확인했다. 그 시료의 시편을 3 ㎛ 두께의 필름들의 사이에 위치시키고 투과 방식(transmission geometry)으로 분석했다. 빔 정지, 짧은 항산란 연장(antiscatter extension) 및 항산란 나이프 에지를 이용하여, 공기에 의해 발생된 배경을 최소화했다. 입사 및 회절된 빔에 대한 Soller 슬리트를 이용하여 축 발산으로부터의 확장(broadening)을 최소화했다. 시편으로부터 240 mm에 위치한 스캐닝 위치 감작 검출기(X'Celerator) 및 데이터 수집 소프트웨어 v. 2.2b를 이용하여 회절 패턴을 수집했다.

표 1. BTA798 형태 A, 로트 NE-021602-E-5-33 크러드(crude) 2-1, XRPD 파일 627932에 대한 관찰된 피크

실시예 4C: 결정 흡습성 및 화학적 안정성 연구

또한, 본 발명의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 유리 염기의 특성을 평가하기 위해 연구를 수행했다. 도 3에서 도시한 바와 같이, 상기 유리 염기 바펜다비르의 중량을 상대 습도%에 대하여 측정했다(변화%의 측면에서). 그 결과, 동적 증기 흡수(DVS)가 <0.1% 중량 증가인 것으로 확인되어, 낮은 흡습성이 확인되었다.

본 발명의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 유리 염기의 화학적 안정성에 대하여 수행된 시험에서, 라미네이트된 호일 백 내측의 LDPE 백 및 HDPE 통에 시료를 위치시키고 외관, 물 함량(KF), 분석(¹H-NMR), 순도 및 관련 물질(HPLC)을 모니터했다. 본 연구는 36 개월에 걸쳐서 25℃/60% rH 및 6 개월에 걸쳐서 40℃/75% rH에서 측정 특성의 유의한 변화를 나타내지 않았다.

이러한 특성에 의한 본 발명의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 한 가지 이점은 이러한 신규 결정 형태를 함유하는 정제의 물리적 크기 또는 질량이 본 발명의 결정 형태로 인해 비스-디히드로겐 포스페이트 형태의 것보다 작아서, 그 형태가 대응하는 종래의 비스-포스페이트 염 형태보다 더욱 작은 양을 갖는 효과적인 조성물 또는 정제로 제조될 수 있다는 것이다.

또한, 이들 시험에서 확인된 바와 같이, 본 발명의 결정 형태의 추가의 이점은 무수 형태인 신규한 결정형 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸이, 비스-디히드로겐 포스페이트 형태를 이용할 때 관찰되는 것과 다르게, 약학적 제형화 동안 물을 흡수하지 않고 변형에 견딘다는 것이다.

실시예 5: 바펜다비르의 결정성 유리 염기 형태 및 비스 - 디히드로겐 포스페이트 염 형태의 물리적 특성의 추가 연구 및 비교 연구

본 발명의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 추가의 물리적 및 화학적 특성을 비교 데이터에 관한 특정의 연구를 이용하여 확인했다. HPLC 및 NMR 데이터를 포함한 위에서 제조한 바와 같은 본 발명의 무수 결정성 유리 염기 바펜다브르의 추가의 분석. HPLC (상대적 잔류 시간) 및 NMR 데이터는 기준 표준치에 대한 상관관계를 확인할 수 있었다. 얻어진 NMR 데이터의 특정 ¹H NMR 사항들은 아래와 같았다:

¹H NMR (CDCl₃): δ7.47 (d, 1H, J = 9 Hz), 7.06 (d, 1H, J = 9 Hz), 6.88-6.85 (m, 2H), 6.84 (s, 1H), 4.47 (q, 2H, J = 7Hz), 4.33 (d, 2H, J = 13 Hz), 4.08 (t, 2H, J= 6 Hz), 2.92 (t, 2H, J= 13 Hz), 2.53 (s, 3H), 1.75 - 1.90 (m, 5H), 1.50 (t, 3H, J =7 Hz), 1.34-1.38 (m, 2H).

본 발명의 무수 유리 염기 결정 형태의 결과로서, HRV와 같은 피코나바이러스의 개선된 치료가, 종래 기술에서 사용된 비스-디히드로겐포스페이트 형태와 비교하여 본 발명의 유리 염기 바펜다비르의 동일 용량에 대한 더욱 작은 입자 크기로 인한 개선된 환자 순응도 때문에 가능하게 된다.

추가의 시험 결과, 본 발명의 무수 결정성 유리 염기 바펜다비르와 바펜다비르의 종래 비스-디히드로겐 포스페이트 염 형태 사이의 차이가 더욱더 확인되었다. XPRD 데이터에서 둘 사이의 차이가 확인되었고(도 4 참조), 주사 전자 현미경 사진은 종래의 비스-포스페이트 바펜다비르는 판상 결정 형태(도 7A 내지 도 7C의 좌측 참조)를 갖는 반면에, 본 발명의 무수 유리 염기 결정성 바펜다비르는 침상 형태(도 7A 내지 도 7C의 우측 참조)를 갖는다는 것을 확인시켜 주었다.

실시예 6: 6 -{2-[1-(6- 메틸 -3- 피리다지닐 )-4- 피페리디닐 ] 에톡시 }-3- 에톡시 -1,2-벤족사졸의 결정성 유리 염기 형태의 정제의 제조 방법

본 발명에 따라, 바펜다비르의 무수 유리 염기 결정 형태를, 이를 필요로 하는 환자에게 경구 투여하기에 적당한 정제로 형성했다. 이러한 과정의 개략도가 도 8에서 도시되어 있다. 이러한 모범적인 방법에서, 상기 유리 염기 결정인 바펜다비르는 말토덱스트린, 전분 나트륨 및 적당한 글리콜레이트와 결합되어 혼합물이 형성되고, 그 혼합물에 정제수가 첨가되고, 그 성분들이 혼합되고 그래뉼화된 다음, 유동층 건조기에 공급되어 건조된다. 건조 후, 그 성분들은 1.14 밀리미터 스크린을 통과하여 분쇄된 다음, 그 선별된 성분들이 만니톨 400 및 규화 미소결정성 셀룰로오스와 같은 적당한 물질과 20 분간 배합된다. 다음에, 그 성분들은 스테아르산 마그네슘과 더욱더 배합된 다음, 압착 및 코팅되어 최종 정제가 얻어진다. 그 정제에는 PVA 코팅제인 Opadry 03F2300015가 코팅될 수 있다. 그 정제는 임의의 적당한 크기를 가지도록 제조될 수 있고, 예를 들어 300 mg 용량의 정제일 수 있다.

하나의 모범적인 실시예에서, 유리 염기 무수 결정성 바펜다비르를 다음과 같은 제형을 갖는 300 mg 용량의 정제로 형성했다.

실시예 7: 다형성(Polymorphism) 연구

본 발명의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 유리 염기 형태의 다형성 연구를 수행했다. 실험은 신속 증발, 크래시(crash) 냉각, 뜨겁고/차가운 슬러리, 및 용융 및 동결과 같은 시험을 포함했다. 수집된 데이터는 무수 결정성 유리 염기인 바펜다비르의 바람직한 단일 다형체(형태 A)가 용매 기반 실험으로부터 얻어졌다는 것을 나타냈고, 용매화물이나 수화물은 관찰되지 않았다. 또한, 대안적인 것이지만 완전히 특성 규명되지 않은 다형체를 이용한 형태 A의 비교 슬러리 시험 결과, 형태 A가 가장 안정한 것으로 확인되었다.

실시예 8: 결정성 유리 염기인 바펜다비르의 현탁액

현탁액의 형태로 약학적 조성물을 제공하기 위한 능력은 특히 소아용 의약의 경우에 아주 중요했었는데, 이러한 형태는 어린 환자에게 유효 성분을 투여하는 것이 필수적일 수 있기 때문이다. 이러한 점에서, 본 발명자들은 그 결정의 침상 입자들이 더욱 작지만 더욱 균일한 입자 크기로 마이크로화된 결정성 유리 염기 바펜다비르의 적당한 형태가 제조될 수 있다는 것을 확인했다. 마이크로화되고 그의 활성 형태를 계속 유지하기 위한 상기 결정성 유리 염기의 능력은, 판상 결정 형태를 형성하고 마이크로화될 수 없고 그의 활성을 유지할 수 없었던 포스페이트 염 형태와 같은 이전의 바펜다비르 형태보다 개선된 것이다.

하기 표 11에서 나타낸 물질들이 제형 개발에서 사용되었다:

시료	상품명	제조자	로트(Lot)
BTA-798 유리 염기(마이크로화되지 않은)	바펜다비르	Carbogen Amics사	NE-021602-BATCH-01-2013
BTA-798 유리 염기(마이크로화된)	바펜다비르	Carbogen Amics사	NE-021602-BATCH-01-2013
황산 라우릴 나트륨	황산 라우릴 나트륨	Fisher사	140277
미소결정성 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨	Avicel RC-591	FMC사	DM14827246
수크랄로스	Splenda	Tate&Lyle사	XM2M036301
폴리소르베이트 80	폴리소르베이트 80	Spectrum사	2DH0335
글리세린	글리세린	Spectrum사	214072447B
수크로스	수크로스	Fisher사	121768
잔탄 검	Xantural 11k	CP Kelco사	330308K
프로필렌 글리콜	프로필렌 글리콜	Spectrum사	2GH0075
부틸파라벤	부틸파라벤	Spectrum사	2EA0365
혼합 베리(Berry)	혼합 베리	Wild Flavors사	14072447B
탈이온수	물	Emerson Resources사	인하우스
시트르산 일수화물	시트르산 일수화물	BDH사	95097
삼나트륨염 이수화물	삼나트륨염 이수화물	Acros사	B0137689B

원료 확인

제형 개발 전에, 바펜다비르(또는 "BTA-798")의 결정성 유리 염기 형태의 용해도를 여러 pH 완충액에서 측정했다. 상세한 용해도 측정 결과를 하기의 표 12를 비롯하여 본원에서 나타낸다.

pH	BTA-798 유리 염기(mg/mL) NE-021602-BATCH-01-2013
1.2	≥0.6
2.1	0.37
3.0	0.11
4.0	0.01
5.0	ND
6.0	ND
7.0	ND
8.0	ND

약물 물질 용해도 요약

ND=검출되지 않음

이들 시험에서, 결정성 유리 염기인 바펜다비르(BTA-798)는 pH 5.0 내지 8.0 사이에서 최저 용해도를 나타내어, 이러한 pH 범위가 현탁액 제형화를 위해 가장 바람직한 것으로 확인되었다.

바펜다비르를 함유하지 않는 초기 위약 제형의 물리적 외관 및 점도를 평가했다.

시료	로트#	외관
BTA-798 유리 염기 현탁액 위약	CLF13-106	반투명한 균질 현탁액

외관

시료	로트#	점도(cP)
현탁액 위약	CLF13-106-23	18.1

점도(25℃에서 Spindle S18)

하기의 제형을 위하여, 0.1M 시트르산을 현탁액에 첨가하여 5.5의 pH를 달성했다. 위약 현탁액의 pH를 이용하여 처리 후 현탁액의 pH가 5.5에 머물러 있는 지의 여부를 확인했다. 보존제를 벤조산 나트륨에서, 표적 pH에 대한 더욱 효과적인 보존제인 부틸파라벤으로 변화시켰다. 추가로, 현탁액의 점도를 증가시키기 위해 잔탄 검을 첨가했다.

0.1M 시트르산이 충분한 완충을 제공했다는 것을 확인하였지만, 점도가 감소될 필요가 있다는 것을 확인한 후, 결정형 유리 염기인 바펜다비르의 마이크로화된 형태를 평가했다. 바펜다비르를 통상적인 제트 분쇄 장치를 이용하여 제트 분쇄했다. 이 경우 유연한 봉쇄 유닛을 이용한 Sturdevant, Inc사의 NGMP-2 제트 분쇄기를 이용했다. 진행 조건 및 수율 계산 데이터는 아래에 나타낸다.

I. 진행 조건 및 입자 크기 데이터

II. 수율 계산

1. 유용한 수율 계산: 92.8%

분쇄된 제품 + 의뢰 시료/분쇄되지 않은 제품 X 100

2. 전체 수율 계산: 97.2%

분쇄된 제품 +잔류물 + 의뢰 시료/분쇄되지 않은 제품 X 100

시험 결과, 결정성 유리 염기 바펜다비르의 성공적인 마이크로화가 확인되었고, 얻어지는 형태는 5 미크론 미만의 평균 입자 크기를 가져서, 입자가 더욱 작았고 표면적이 더욱 커서 용출이 향상된 것으로 확인되었다. 그 유리 염기 형태는 이러한 처리에 대하여 안정했다. 마이크로화 이전의 결정성 유리 염기 형태의 현미경 사진을 도 19에서 나타내고, 5 미크론 이하의 평균 입자 크기를 나타내는 마이크로화된 형태의 현미경 사진을 도 20에서 나타낸다. 마이크로화 이전에, 입자 크기는 하기의 도표에서 나타낸 바와 같이 약 15 내지 100 미크론의 범위였다.

그러나, 마이크로화 후, 입자 크기는 하기의 도표에서 나타낸 바와 같이 약 2 내지 5 미크론의 범위였다.

다음에, 아래에 나타낸 바와 같이, 결정성 유리 염기 바펜다비르의 이러한 마이크로화된 형태의 물리적 외관, 점도, 임자 크기, pH, 및 분산성/침전 속도를 테스트했다.

시료	PS01-06(위약)	PS01-10
BTA-798 유리 염기(마이크로화된)	---	2.40%
미소결정성 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨	1.50%	1.50%
잔탄 검	0.34%	0.34%
폴리소르베이트 80	0.20%	0.20%
프로필렌 글리콜	1.00%	1.00%
부틸파라벤	0.02%	0.02%
글리세린	5.00%	5.00%
향미제	0.10%	0.10%
수크로스	40.00%	40.00
0.1M 시트르산	49.76%	49.44

제형의 비교

1. 필요한 양의 0.1M 시트르산 완충액을 분배한다.

2. 0.1M 시트르산 완충액을 적절한 전단 혼합 블레이드로 혼합한다. 0.1M 시트르산 완충액에 필요한 양의 Avicel RC-591을 분산한다.

3. 수크로스, 글리세린, PS80을 첨가하고, 용해될 때까지 혼합한다.

4. 수크로스 용액을 혼합하면서, 작은 비이커에 프로필렌 글리콜을 분배한다.

5. 부틸파라벤을 분배하고 프로필렌 글리콜에 첨가한다. 용해될 때까지 혼합한다.

6. 파라벤 용액에 향미제를 첨가하고 용해될 때까지 계속 혼합한다.

7. 수크로스 용액에 파라벤 용액을 첨가한다.

8. 잔탄을 첨가하고 용해될 때까지 혼합한다.

9. 0.1M 시트르산 완충액을 이용하여 500 mL까지 희석한다. 필요한 추가의 0.1M 시트르산 완충액의 중량을 기록한다.

10. US 20 매시를 통해 BTA 798 유리 염기를 선별하고 계속 혼합하면서 필요한 양을 현탁액에 분배한다.¹

과정 로트# PS01-06/PS01-10

¹ 이 공정 단계는 오직 PS01-10에 대한 것이었다.

시료	로트#	pH
BTA-798 유리 염기 현탁액 위약	PS01-06	5.55
BTA-798 유리 염기 현탁액	PS01-10	5.54

pH 분석

시료	로트#	외관
BTA-798 유리 염기 현탁액 위약	PS01-06	반투명한 균질 현탁액
BTA-798 유리 염기 현탁액	PS01-10	백색의 균질 현탁액

외관

시료	로트#	점도(Cp)
BTA-798 유리 염기 현탁액 위약	PS01-06	50.7
BTA-798 유리 염기 현탁액	PS01-10	46.6

점도(25℃에서 Spindle S18)

Mastersizer™ 3000 레이저 회절 입자 크기 분석기를 이용하여 활성과 위약 사이의 입자 크기의 비교를 수행했다. 입자 크기 분석 결과를 도 21 및 도 22에 나타낸다. 그 첨부 도면에서 나타낸 바와 같이, 마이크로화된 바펜다비르의 유리 염기 현탁액은 위약보다 아주 더 균일한 입자 크기를 갖는다.

BTA-798 유리 염기 헌탁액에 대하여 관찰된 D10/50/90은 위약 현탁액에서 관찰된 것(44.2/87.6/150 ㎛)보다 약간 높았다(85.0/129/190 ㎛). 이러한 관찰 결과는 그 현탁액 내의 API의 응집을 나타낸다. API 응집이 발생하는 경우, 이는 분산성/침전속도 데이터에 기초하여 제품에 부정적인 영향을 미치는 것으로 판단되지 않는다.

BTA-798에 대한 분산성/침전 속도의 평가를 수행했다. 이러한 시험은 교반 후 현탁액 내 API 균일성 및 이후의 현탁액에서 API의 침전 속도를 검사하는 것이다. 교반 후 즉시(T=0) 현탁액 병의 상부 및 바닥부로부터 시료를 취한 다음, 1 시간 및 4일 후에 다시 취했다. 모든 시료를 HPLC를 통해 분석했다.

칼럼	Waters X Bridge C18, 3.51 Jm, 150 x 4.6 mm
칼럼 온도	35℃
UV 검출	252 nm
유속	1.0 mL/분
이동상	A: 10 mM 인산염 완충액, pH 3.0
이동상	B: MeOH
구배	시간(분)	%A	%B
	0.0	60	40
	25.0	15	85
	27.0	15	85
	28.0	60	40
	32.0	60	40

HPLC 파라미터

시료	샘플링 위치	%LC	평균 LC%
PS01-10 t=0	상부	98.7	100.6
PS01-10 t=0	바닥부	102.6	100.6
PS01-10 1 시간	상부	100.2	99.9
PS01-10 1 시간	바닥부	99.6	99.9
PS01-10 4일	상부	98.4	100.9
PS01-10 4일	바닥부	103.4	100.9

분산성/침전 속도의 평가

상부 및 바닥부 시료의 T=0 분석 결과는 서로 아주 일치하여, 그 현탁액은 교반 후 균일한 것으로 확인되었다. 게다가, 1 시간 및 4일 후에 취한 시료도 아주 일치하여, 4일의 기간에 걸쳐서 API의 유의한 침전이 발생하지 않은 것으로 확인되었다.

상기 과정의 결과로서, 마이크로화된 결정성 유리 염기 바펜다비르를 함유하는 소아용 현탁액이 개발되었는데, 이는 외관, 점도, pH, 약물 현탁성, 및 감각 수용성의 측면에서 원하는 특성을 나타낸다. 하기의 것은 본 발명에 따라 유용하게 되는 현탁액의 일 예이다.

실시예 9: 바펜다비르 유리 염기 고체 경구 투여 형태

본 발명에 따라, 본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르의 경구 투여를 위해 사용될 수 있는 정제와 같은 추가의 고체 약학적 투여 형태를 얻는 것이 요구되었다. 이러한 점에서, 유효 성분의 특성을 유지할 수 있는 충분한 용해도 특성을 갖는 적당한 투여 형태를 개발하기 위하여, 마이크로화되지 않은 것 및 마이크로화된 결정성 유리 염기 바펜다비르를 시험했다. 시험은 하기의 물질들을 이용하여 수행했다:

시료	상품명	제조사	로트
바펜다비르 유리 염기(마이크로화되지 않은)	바펜다비르	Carbogen Amics사	NE-021602-BATCH-01-2013
바펜다비르 유리 염기(마이크로화된)	바펜다비르	Carbogen Amics사	NE-021602-BATCH-01-2013
바펜다비르 포스페이트 염	바펜다비르	Institute of Drug Technology사	NE-022743-Batch-01-2013
바펜다비르 300mg 정제	바펜다비르 300mg 정제	Biota사	C14011
바펜다비르 300mg 정제	바펜다비르 300mg 정제	Biota사	C14002B
황산 라우릴 나트륨	황산 라우릴 나트륨	Fisher사	140277
폴리소르베이트 80	폴리소르베이트 80	Spectrum사	2DH0335
폴록사머	Kolliphor P188	BASF사	WPWI625C
Soluplus	Soluplus	BASF사	84414368E0
PVP k29/32	Plasdone K-29/32	ISP사	052299950
말토덱스트린	Maltrin	GPC사	M1031332
글리콜산 전분 나트륨	Explotab	JRS Pharma사	4111012087
SMCC 90	Prosolv	JRS Pharma사	P9B0L62X
스테아르산 마그네슘	스테아르산 마그네슘	Mallinckrodt사	J35596
무수 덱스트로스	무수 덱스트로스	Avantor사	0000083939
사이즈 0 젤라틴 스웨덴 오랜지 캡슐	스웨덴 오랜지 캡슐	Capsugel사	71121481

원료물질 확인

제형 개발 전에, 표준 품질 제어 목적을 위해 디자인된 방법을 이용하여 예전에 관찰된 것보다 바펜다비르 제형들의 용출 프로필이 더욱 잘 구별되도록 하기 위한 용출 방법을 개발했다. 그 시험에서 사용된 용출 파라미터는 아래에 요약되어 있다:

용출 장치	장치 1 (바스켓)
용출 매질	pH 2 완충액
용출 체적	900 mL
RPMs	50
시점	15, 30 및 45분

용출 파라미터

구별되는 용출 파라미터를 이용하여 예전에 제조한 제형들의 초기 비교를 위하여 하기의 제형들의 용출을 시험했다. 제형 로트# CU05-095(4)가, 인간 임상 연구에서 예전에 사용된 바펜다비르 포스페이트 염 캡슐 제제의 대표였다. 유사한 바펜다비르 유리 염기 제형에 대하여 바펜다비르 포스페이트 염 제형을 평가하기 위하여 제형 로트# CU05-093을 제조했다. 제형 로트# CI 4011 및 # C14002B은 인간 임상 시험을 위하여 예전에 제조된 바펜다비르 유리 염기 정제의 배치(batch)들 이었다.

로트 CU05-093 및 CU05-095(4)는 두 개의 성분을 갖는 제형이다. 이들 두 성분을 V-블렌더에서 혼합하고 00EL 젤라틴 캡슐에 채워넣었다.

시료	CU05-095(4	CU05-093	C14011	C14002B
바펜다비르 유리 염기(마이크로화되지 않은)	---	44.5%	54.1%	54.1%
바펜다비르 포스페이트 염	68.1%	---	---	---
말토덱스트린	---	---	19.5%	19.5%
글리콜산 전분 나트륨(Explotab)	---	---	5.8%	5.8%
규화 미소결정질 셀룰로오스(Prosolv SMCC 90)	---	---	13.4%	13.4%
스테아르산 마그네슘	---	---	0.7%	0.7%
무수 덱스트로스	31.9%	55.5%
Opadry O3F230015	---	---	3.8%	3.8%

초기 제형의 비교

초기 제형의 용출 비교를 도 23A에서 나타낸다.

초기 특성 규명 후, 예전에 제조한 바펜다비르 유리 염기 정제와 유사한 제형을 제조하였으나, 이들 제형은 약물 습윤을 개선하기 위한 계면활성제로서 만니톨 및 황산 라우릴 나트륨의 사용을 생략했다. 이러한 염기 제형을 이용하여, 마이크로화된 것/마이크로화되지 않은 약물 물질 및 정제/캡슐 투여 형태의 효과를 평가하기 위하여 4개의 배치(batch)를 제조했다.

시료	CU05-129-01	CU05-129-12	CU05-128-01	CU05-128-12
바펜다비르 유리 염기(마이크로화되지 않은)	---	---	52.8%	52.8%
바펜다비르 유리 염기(마이크로화된)	52.8%	52.8%	---	---
황산 라우릴 나트륨	2.0%	2.0%	2.0%	2.0%
말토덱스트린	18.0%	18.0%	18.0%	18.0%
글리콜산 전분 나트륨(Explotab)	6.0%	6.0%	6.0%	6.0%
규화 미소결정성 셀룰로오스(Prosolv SMCC 90)	20.5%	20.5%	20.5%	20.5%
스테아르산 마그네슘	0.8%	0.8%	0.8%	0.8%

API 마이크로화 및 투여 형태의 비교

1. US20 매시 스크린을 통해 API를 선별한다.

2. 고전단 그래뉼화기의 1 L 보울에 선별된 약물 물질, 황산 라우릴 나트륨, 글리콜산 전분 나트륨 및 말토덱스트린을 첨가한다.

3. 870 rpm에서 혼합 블레이드를 이용하여 2분간 혼합한다.

4. 낮은 세팅(setting)에서 믹서(870 rpm) 및 쵸퍼(1800 rpm)를 이용하여, 충분한 그래뉼화가 관찰될 때까지 물을 첨가한다.

5. 트레이 상에 습식 그래뉼을 위치시키고 40℃ 오븐에서 건조한다.

6. US20 매시 스크린을 통해 그래뉼을 선별한다.

7. V-블렌더에서 10분간 그래뉼 및 SMCC 90을 배합한다.

8. US20 매시를 통해 스테아르산 마그네슘을 선별하고 배합물에 첨가한다.

9. 추가의 2분간 배합한다.

10. 그 배합물의 일부를 사이즈 00EL 젤라틴 캡슐에 채운다.¹

11. 그 배합물의 나머지 부분을 정제로 압착한다.²

제조 과정 로트# CU05-128/129

¹ CU05-XXX-12

² CU05-XXX-01

API 마이크로화 및 투여 형태의 용출 비교를 도 23B에서 나타낸다.

용출 결과, 마이크로화된 것과 마이크로화되지 않은 바펜다비르 유리 염기 제형들 사이의 용출률의 무시할 수 있는 차이가 확인되었다. 약물 물질을 마이크로화하는 것으로부터 얻어진 증가된 표면적의 가능한 용출 이점은 그의 흡습성으로 인한 약물 입자의 응집에 의해 부정될 수 있었다. 약물의 표면 습윤을 개선하기 위하여, 여러 가지 계면활성제/습윤제를 함유하는 제형들을 평가했다.

시료	CU05-095(04)	CLF13-113	CLF13-112	CLF13-114	CU05-093	CLF13-115	CU05-128-12
바펜다비르 유리 염기(마이크로화되지 않은)	---	67.0%	67.0%	67.0%	44.5%	67.0%	52.8%
바펜다비르 포스페이트 염	68.1%	---	---	---	---	---	---
폴록사머(Kolliphor P188)	---	25.4%	---	---	---	---	---
황산 라우릴 설페이트	---	---	---	---	---	---	2.0%
Soluplus	---	---	---	25.4%	---	---	---
포비돈 K29/32	---	---	---	---	---	25.4%	---
폴리소르베이트 80	---	---	2.5%	---	---	---	---
말토덱스트린	---	---	22.8%	---	---	---	18.0%
글리콜산 전분 나트륨(Explotab)	---	7.6%	7.6%	7.6%	---	7.6%	6.0%
SMCC 90	---	---	---	---	---	---	20.5%
스테아르산 마그네슘	---	---	---	---	---	---	0.8%
무수 덱스트로스	31.9%	---	---	---	55.5%	---	---

습윤제 비교

1. US20 매시 스크린을 통해 API를 선별한다.

2. 고전단 그래뉼화기의 1 L 보울에 선별된 API, 글리콜산 전분 나트륨, 습윤제¹ 및 말토덱스트린을 첨가한다.

3. 870 rpm에서 혼합 블레이드를 이용하여 2분간 혼합한다.

4. 필요한 양의 폴리소르베이트 80을 비이커에 분배한다. 이에 적절한 양의 물을 첨가한다.²

5. 낮은 세팅(setting)에서 믹서(870 rpm) 및 쵸퍼(1800 rpm)를 이용하여, 충분한 그래뉼화가 관찰될 때까지 물³을 첨가한다.

6. 트레이 상에 습식 그래뉼을 위치시키고 40℃ 오븐에서 건조한다.

7. US20 매시 스크린을 통해 그래뉼을 선별한다.

8. 그래뉼을 사이즈 00EL 젤라틴 캡슐에 채운다.¹

제조 과정 로트# CLF13-112/113/114/115

¹ 폴록사머, Soluplus 및 PVP k29/32

² 이 단계는 폴리소르베이트 80 제형에 대하여만 수행되었다.

³ 폴리소르베이트 80을 위한 물은 PS80과 물의 혼합물이다.

여러 가지 습윤제를 이용한 용출 비교를 도 24A에서 나타낸다.

폴록사머 및 폴리소르베이트 80을 갖는 제형은 용출률에 가장 유의한 영향을 미쳤다. Soluplus는 용출률을 적당히 개선했고, 포비돈 K29/32는 용출률을 개선하지 않았다. 이는 용출 바스켓 내의 히드로겔의 형성에 의해 유발된 느린 분해 때문일 가능성이 가장 높다.

샘플링 이전에 30분간 바스켓 속도를 150 rpm으로 증가시킴으로써 용출 프로필에 무한 시점을 추가했다.

제형	무한원점 (방출된 %)
바펜다비르 (유리 염기) 캡슐 로트# CLF13-112 - 폴리소르베이트 80	77%
바펜다비르 (유리 염기) 캡슐 로트# CLF13-113 - Kolliphor	84%
바펜다비르 (유리 염기) 캡슐 로트# CLF13-114 - Soluplus	50%
바펜다비르 (유리 염기) 캡슐 로트# CLF13-115 - PVP K29/32	82%

용출 비교 습윱제(무한 원점)

무한원점 데이터는 무한원점에서의 약물 방출이 다른 습윤제와 유사했기 때문에 포비돈 제형에 대하여 관찰된 느린 분해 프로필이 느린 분해에 의해 유발되었다는 이론을 지지한다. 이러한 증가된 바스켓 속도는 히드로겔의 분해를 촉진했고 약물이 용액으로 방출될 수 있도록 하였다.

평가된 습윤제로부터, 추가의 연구를 위해 폴록사머를 선택했다. 마이크로화된 것 및 마이크로화되지 않은 약물 물질과 폴록사머의 사용을 평가하기 위하여 제형들을 제조했다. 또한, 폴록사머의 더욱 낮은 사용 수준을 평가하기 위하여 제형들을 제조했다.

시료	CU05-095(4)	CLF13-113	PS01-08	PS01-12
바펜다비르 유리 염기(마이크로화되지 않은)	---	67.0%	---	76.7%
바펜다비르 유리 염기(마이크로화된)		---	67.0%	---
바펜다비르 포스페이트 염	68.1%	---	---	---
폴록사머(Kolliphor P188)	---	25.4%	25.4%	14.5%
글리콜산 전분 나트륨(Explotab)	---	7.6%	7.6%	8.7%
무수 덱스트로스	31.9%	---	---	---

마이크로화된 API 및 폴록사머 수준 비교

1. US20 매시 스크린을 통해 API를 선별한다.

2. 고전단 그래뉼화기의 1 L 보울에 선별된 약물 물질, 글리콜산 전분 나트륨, 폴록사머 및 말토덱스트린을 첨가한다.

3. 870 rpm에서 혼합 블레이드를 이용하여 2분간 혼합한다.

6. US 20 매시 스크린을 통해 그래뉼을 선별한다.

7. 그래뉼을 사이즈 00EL 젤라틴 캡슐에 채운다.¹

공정 과정 로트# CLF13-112/113/114/115

마이크로화된 것 및 폴록사머 수준에 기초한 용출 비교를 도 24B에서 나타낸다.

폴록사머의 상이한 수준들 사이에 용출 프로필의 차이가 없어서, 제형에서 폴록사머 사용 수준이 감소될 수 있는 것으로 확인되었다. 이는 최종 투여 형태의 크기 및 FDA의 불활성 성분 가이드(경구 캡슐에서 폴록사머에 대한 한계는 확실치 않다)에 대한 가능한 순응성을 최소화한다. 마이크로화된 약물 물질의 사용은 마이크로화되지 않은 약물 물질과 비교하여 용출률을 감소시켰다. 이는 마이크로화된 것 및 마이크로화되지 않은 물질을 이용하여 제조한 그래뉼의 물리적 차이 때문일 가능성이 크다. 마이크로화된 물질은 마이크로화되지 않은 물질보다 그래뉼이 더 컸다. 이러한 더욱 큰 그래뉼들은 더욱 조밀했고 더욱 느리게 분해되어 용출 속도가 더욱 느렸다.

이러한 제제에 대하여 무한 원점을 수집했다.

제형	무한 원점(방출 %)
바펜다비르 (유리 염기) 캡슐 로트# CLF13-113 - Kolliphor	84%
바펜다비르 (유리 염기) 캡슐 로트# PS01-08 - 마이크로화된 API	98%
바펜다비르 (유리 염기) 캡슐 로트# PS01-12 - Reduce Kolliphor	88%

용출 비교 마이크로화된 것 및 폴록사머 수준(무한 원점)

상기 무한원점 측정 결과는 마이크로화된 바펜다비르 유리 염기를 이용한 제형이 마이크로화되지 않은 물질을 함유하는 제형과 비교하여 더욱 많은 정도까지 방출된다는 것을 나타낸다.

바펜다비르 유리 염기 고체 경구 제형의 용출률 및 용출 정도는 예전에 제조된 정제 제형보다 유의하게 증가되었다. 선도(lead) 및 보완 그래뉼화 제형들을 아래에 열거한다.

상기 시험에 따라, 마이크로화 공정에서 습윤제를 사용하면, 본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르를 갖는 적당하고 안정한 약학적 조성물을 얻는 것이 촉진되는 것으로 확인되었다.

실시예 10: 마이크로화 이전 및 이후의 XRPD 패턴의 평가

본 발명에 따라, 본 발명의 결정성 유리 염기 바펜다비르의 다형체가 위에서 마이크로화 후에도 위에서 나타낸 바와 동일한 지의 여부를 확인하기 위하여 시험을 수행했다. 이러한 점에서, 마이크로화 전 및 후의 결정성 유리 염기 바펜다비르 화합물을 하기의 측정 조건하에서 시험했다:

XRDP 패턴의 오버레이(overlay)를 도 25에서 나타낸다. 거기에 나타낸 바와 같이, 유리 염기 다형체는 마이크로화 전 및 후에 동일하므로, 본 발명의 다형체는 기계적 처리에 대하여 매우 안정하다.

Claims

6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태를 포함하며, 상기 결정성 유리 염기 형태가 침상 결정 습성을 갖는 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 천식 또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)의 치료, 완화, 예방 또는 감소하거나, 또는 수족구병의 치료, 완화, 예방 또는 감소하기 위한, 약학적 조성물로서,
상기 결정성 유리 염기 형태가
i) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(d-간격, Å)를 갖거나:
19.5, 8.0, 6.5, 4.4, 4.3, 4.0, 3.8, 3.6, 및 3.5.
ii) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(2θ)를 갖거나:
4.5, 11.0, 13.6, 20.3, 20.6, 22.1, 23.1, 24.5, 및 25.7.
iii) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(d-간격, Å)를 갖거나:
19.2, 8.5, 8.0, 6.5, 5.5, 5.3, 5.0, 4.35, 4.27, 4.12, 4.03, 3.99, 3.96, 3.80 및 3.60.
iv) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(2θ)를 갖거나:
4.6, 11.1, 13.7, 16.1, 20.4, 20.8, 22.3, 및 24.8.
또는, v) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(2θ)를 갖는, 약학적 조성물:
4.6, 10.4, 11.1, 13.7, 16.1, 16.7, 17.8, 20.4, 20.8, 21.6, 22.1,22.3, 22.4, 23.4, 및 24.8.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 정제, 캐플릿, 캡슐, 현탁액, 정맥내 투여를 위한 용액 및 좌약으로 이루어진 군에서 선택된 형태인 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 현탁액의 형태인 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 정제의 형태인 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 재현탁가능한 새세이(sachet) 또는 분말의 형태인 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 200 내지 400 mg의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 포함하는 약학적 조성물.
침상 결정 습성을 갖는 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸의 무수 결정성 유리 염기 형태 및 약학적 담체를 포함하는, 천식 또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)의 치료, 완화, 예방 또는 감소하거나, 또는 수족구병의 치료, 완화, 예방 또는 감소하기 위한, 약학적 조성물로서,
상기 결정성 유리 염기 형태가
i) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(d-간격, Å)를 갖거나:
19.5, 8.0, 6.5, 4.4, 4.3, 4.0, 3.8, 3.6, 및 3.5.
ii) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(2θ)를 갖거나:
4.5, 11.0, 13.6, 20.3, 20.6, 22.1, 23.1, 24.5, 및 25.7.
iii) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(d-간격, Å)를 갖거나:
19.2, 8.5, 8.0, 6.5, 5.5, 5.3, 5.0, 4.35, 4.27, 4.12, 4.03, 3.99, 3.96, 3.80 및 3.60.
iv) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(2θ)를 갖거나:
4.6, 11.1, 13.7, 16.1, 20.4, 20.8, 22.3, 및 24.8.
또는, v) 하기의 값들로 이루어진 군에서 선택된 XRPD 피크(2θ)를 갖는, 약학적 조성물:
4.6, 10.4, 11.1, 13.7, 16.1, 16.7, 17.8, 20.4, 20.8, 21.6, 22.1,22.3, 22.4, 23.4, 및 24.8.
제7항에 있어서, 상기 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸이 약학적 조성물의 전체 중량을 기준으로 20 내지 80 중량%의 양으로 존재하는, 약학적 조성물.
제7항에 있어서, 상기 조성물이 정제, 캐플릿, 캡슐, 현탁액, 정맥내 투여를 위한 용액 및 좌약으로 이루어진 군에서 선택된 형태인, 약학적 조성물.
제7항에 있어서, 상기 조성물이 정제의 형태인 약학적 조성물.
제10항에 있어서, 상기 조성물이 하기의 성분들을 포함하는 약학적 조성물:
제7항에 있어서, 상기 조성물이 200 내지 400 mg의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 포함하는 약학적 조성물.
제7항에 있어서, 상기 조성물이 300 mg의 6-{2-[1-(6-메틸-3-피리다지닐)-4-피페리디닐]에톡시}-3-에톡시-1,2-벤족사졸을 포함하는 약학적 조성물.
제7항에 있어서, 상기 조성물이 현탁액의 형태인 약학적 조성물.
제14항에 있어서, 상기 현탁액이 완충액, 보존제 및 점도 향상제로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는, 약학적 조성물.
제14항에 있어서, 상기 현탁액이 하기의 성분들을 포함하는, 약학적 조성물:
제7항에 있어서, 상기 조성물이 재현탁가능한 새세이(sachet) 또는 분말의 형태인 약학적 조성물.