KR20180030848A

KR20180030848A - 피롤로［2,3-d］피리미딘 화합물 또는 그 염

Info

Publication number: KR20180030848A
Application number: KR1020187002320A
Authority: KR
Inventors: 마사유키 나카무라; 히로요시 야마나카; 모리히로 미츠야; 다카후미 하라다
Original assignee: 다이호야쿠힌고교 가부시키가이샤
Priority date: 2015-07-31
Filing date: 2016-07-29
Publication date: 2018-03-26
Also published as: MA42544A; CN107849052A; KR102086999B1; CA2989989A1; WO2017022648A1; PT3330271T; DK3330271T3; EP3330271B1; CA2989989C; TWI716427B; US10421760B2; HUE060733T2; RU2018103360A3; TW201713664A; AU2016302302B2; EP3330271A1; BR112018001695A2; US20180208598A1; RU2018103360A; PL3330271T3

Abstract

JAK3 을 선택적으로 또한 강력하게 저해함과 함께, 우수한 인간 말초혈 단핵구의 증식 억제 작용 및 우수한 경구 흡수성을 가지며, in vivo 에 있어서 IL-2 유발 IFN-γ 산생에 대한 저해 활성을 나타내는 신규 화합물 또는 그 염, 및 이것을 함유하는 의약 조성물의 제공. 하기 식 (I) ［식 중, X 는, -CH=CH-, -NH-, 황 원자 또는 산소 원자를 나타내며 ； n 은, 0 ∼ 2 의 정수를 나타낸다.］ 로 나타내는 화합물 또는 그 염.

Description

피롤로［2,3-d］피리미딘 화합물 또는 그 염{PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINE COMPOUND OR SALT THEREOF}

본 발명은, 선택적 JAK3 저해 작용을 갖는 신규 피롤로［2,3-d］피리미딘 화합물 또는 그 염, 및 이것을 유효 성분으로서 함유하는 의약 조성물에 관한 것이다.

JAK3 은, JAK1, JAK2, TYK2 와 함께 JAK 패밀리에 속하는 비수용체형의 티로신 키나아제이며, 여러 가지의 사이토카인의 시그널 전달에 관여하고 있는 것이 알려져 있다.

JAK1, JAK2 및 TYK2 는 광범위하게 발현하고 있는 것에 대해, JAK3 의 발현은 주로 T 세포, B 세포, 내츄럴 킬러 세포 등의 임파구에 국한되어 있다. JAK1 및 JAK2 의 결손 마우스가 태생 치사 혹은 생후 얼마 되지않아 사망하는데 대해, JAK3 의 결손 마우스 및 인간에서는, 임파구의 기능 부전에 의한 중증 복합형 면역 부전이 발병한다.

JAK3 저해제는, 6 종의 사이토카인 (IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, IL-21) 의 시그널을 저해함으로써, 면역계에서 중요한 역할을 담당하는 T 세포, B 세포 등의 임파구의 기능을 특이적으로 억제하는 것이 상정되기 때문에, 그들 세포의 활성화가 관계되는 질환에 대해서는, 부작용의 발현을 최소한으로 억제한 유효한 치료약이 될 수 있는 것이 기대되고 있다 (비특허문헌 1 ∼ 2).

JAK3 저해제로 치료할 수 있는 질환으로서는, 자기 면역 질환 (관절 류머티즘, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 낭창, 강피증, 다발성 근염·피부 근염, 시그렌 증후군, 베체트병 등), 알레르기 질환 (기관지 천식, 알레르기성 비염·꽃가루 알레르기, 아토피성 피부염, 음식 알레르기, 아나팔락시스, 약물 알레르기, 두드러기, 결막염 등), 신경계의 질환 (다발성 경화증, 알츠하이머병 등), 염증성 장질환 (궤양성 대장염, 크론병), 건선, 접촉성 피부염, 당뇨병, 세리악크병, 바이러스 감염증, 급성 호흡 촉박 증후군 (ARDS), 이식편 대숙주병 (GVHD), 이식 거절, 혈액의 악성 종양 (임파종, 백혈병) 및 다른 악성 종양 등이 보고되어 있다 (비특허문헌 3 ∼ 6).

임상에 있어서는, JAK3 저해제인 토파시티니브 (Pfizer 사) 가 관절 류머티즘 치료제로서 이용되고 있지만, JAK3 에 대한 선택성이 낮고, JAK1 및 JAK2 를 저해해 버리는 것에서 기인하는 부작용 (지질 상승, 빈혈, 호중구 감소, 면역 억제 등) 이 보고되어 있다 (비특허문헌 7).

또, 지금까지, 4 위치에 고리형의 치환기를 갖는 피롤로피리미딘 화합물 (특허문헌 1), 4 위치에 시클로헥센을 갖는 피롤로피리미딘 화합물 (특허문헌 2), 4 위치에 아크릴아미드로 치환된 방향족을 갖는 피롤로피리미딘 화합물 (특허문헌 3) 이 JAK 저해 활성을 갖는 것이 보고되어 있다.

미국 공개 US20040058922 국제 공개 제2006/096270호 국제 공개 제2013/085802호 국제 공개 제2015/054572호

Immunol Rev., 2009 년, 제 228 권 제 1 호, p. 273-287 Int J Biochem Cell Biol., 2009 년, 제 41 권 제 12 호, p. 2376-2379 Trends Pharmacol Sci., 2004 년, 제 25 권 제 11 호, p. 558-562 J Clin Immunol., 2013 년, 제 33 권 제 3 호, p. 586-594 PLoS One., 2012 년, 제 7 권 제 2 호, e31721 Cancer Discov., 2012 년, 제 2 권 제 7 호, p. 591-597 J Med Chem., 2010 년, 제 53 권 제 24 호, p. 8468-8484

그러나, 특허문헌 1 에 기재된 화합물은, 피롤로［2,3-d］피리미딘 화합물의 4 위치에 직접 질소 원자가 결합하고 있고, 거기에 아크릴아미드로 치환된 시클로알케닐기의 기재는 없다. 또, 특허문헌 2 에 기재된 화합물은, 피롤로［2,3-d］피리미딘 화합물의 4 위치에 아크릴아미드로 치환된 시클로알케닐기의 기재는 없고, 또한 그 특허문헌에 기재된 화합물은 JAK3 에 대한 선택성이 낮고, 그 저해 활성도 충분하지 않다. 또한, 특허문헌 3 에는, 아크릴아미드로 치환된 시클로알케닐기가 4 위치에 결합한 피롤로［2,3-d］피리미딘 화합물의 기재는 없다.

한편, 4 위치에 피페라진을 갖는 피롤로［2,3-d］피리미딘 화합물이 G12C 변이를 갖는 KRAS 저해제로서 보고되어 있지만 (특허문헌 4), 이것에는 JAK3 에 대한 저해 활성의 기재는 없다.

따라서, 본 발명의 과제는, JAK3 을 선택적으로 또한 강력하게 저해함과 함께, 우수한 인간 말초혈 단핵구 (이하, PBMC) 의 증식 억제 작용 및 우수한 경구 흡수성을 가지며, in vivo 에 있어서 IL-2 유발 IFN-γ 산생에 대한 저해 활성을 나타내는 신규 화합물 또는 그 염, 및 이것을 함유하는 의약 조성물을 제공하는 것에 있다.

본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위하여 예의 검토를 거듭한 결과, 피롤로［2,3-d］피리미딘을 기본 구조로 하고, 그 4 위치에는 아크릴아미드로 치환된 시클로알케닐기를 가지며, 또한 5 위치에는 한정된 고리형의 치환기를 갖는 화합물군이, JAK3 에 대한 선택적인 저해 활성을 갖는 것을 알아냈다. 또, 본 발명 화합물이 우수한 인간 PBMC 의 증식 억제 작용을 발휘하는 것을 알아내어, JAK3 이 관여하는 여러 가지의 질환, 특히 자기 면역 질환을 치료하기 위한 의약으로서 유용한 것을 알아냈다. 더하여, 본 발명 화합물이 우수한 경구 흡수성을 가지며, 경구용 의약품으로서 유용한 것을 확인했다. 또한, 본 발명 화합물이 in vivo 에 있어서 IL-2 유발 IFN-γ 산생에 대한 저해 활성을 나타내는 것을 알아내어, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명은, 다음의〔1〕∼〔19〕를 제공하는 것이다.

〔1〕하기 식 (I)

[화학식 1]

［식 중, X 는, -CH=CH-, -NH-, 황 원자 또는 산소 원자를 나타내고 ； n 은, 0 ∼ 2 의 정수를 나타낸다.］

로 나타내는 화합물 또는 그 염.

〔2〕X 가 -CH=CH-, 황 원자 또는 산소 원자이며, n 이 0 또는 1 인〔1〕에 기재된 화합물 또는 그 염.

〔3〕

[화학식 2]

식 (I) 중, 상기의 구조가 이하의 어느 구조이며 ； ,

[화학식 3]

[화학식 4]

식 (I) 중, 상기의 구조가 이하의 어느 구조인 화합물인〔1〕또는〔2〕에 기재된 화합물 또는 그 염.

[화학식 5]

〔4〕화합물이 N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 또는 (S)-N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드인〔1〕∼〔3〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염.

〔5〕〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효 성분으로 하는 JAK3 저해제.

〔6〕〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염을 함유하는 의약 조성물.

〔7〕의약 조성물이, JAK3 이 관여하는 질환을 치료하기 위한 의약 조성물인〔6〕에 기재된 의약 조성물.

〔8〕〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효 성분으로 하는 관절 류머티즘 또는 다발성 경화증의 치료제.

〔9〕JAK3 저해제를 제조하기 위한〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 사용.

〔10〕의약 조성물을 제조하기 위한〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 사용.

〔11〕의약 조성물이, JAK3 이 관여하는 질환을 치료하기 위한 의약 조성물인〔10〕에 기재된 사용.

〔12〕관절 류머티즘 또는 다발성 경화증의 치료약 제조를 위한〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 사용.

〔13〕JAK3 저해에 사용하기 위한〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염.

〔14〕의약으로서 사용하기 위한〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염.

〔15〕의약이, JAK3 이 관여하는 질환을 치료하기 위한 의약인〔14〕에 기재된 화합물 또는 그 염.

〔16〕관절 류머티즘 또는 다발성 경화증의 치료에 사용하기 위한〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염.

〔17〕JAK3 저해 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에게,〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.

〔18〕JAK3 이 관여하는 질환의 치료 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에게,〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.

〔19〕관절 류머티즘 또는 다발성 경화증의 치료 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에게,〔1〕∼〔4〕중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.

본 발명에 의하면, 선택적 JAK3 저해제로서 유용한 상기 식 (I) 로 나타내는 신규 피롤로［2,3-d］피리미딘 유도체 또는 그 염이 제공된다.

본 발명 화합물 또는 그 염은, 우수한 선택적 JAK3 저해 활성을 가지며, JAK3 시그널에 기초하는 인간 PBMC 의 증식을 억제하는 것이 밝혀졌다. 또, 본 발명 화합물은 우수한 경구 흡수성을 가지고 있어, 특히 경구 투여용의 의약으로서 유용하다. 따라서, 본 발명 화합물 또는 그 염은, JAK1 및 JAK2 에서 기인하는 중독인 부작용 (지질 상승, 빈혈, 호중구 감소, 면역 억제 등) 을 발생하는 일 없이, JAK3 이 관여하는 질환, 예를 들어 자기 면역 질환의 치료를 실시할 수 있다.

도 1 은, 마우스에 있어서의, 화합물 7 및 비교예 12 의 화합물을 경구 투여했을 때의 IFN-γ 산생 억제 효과를 나타낸다.
도 2 는, 관절 류머티즘 모델 마우스에 있어서의, 화합물 7, 토파시티니브, 및 프레드니졸론을 경구 투여했을 때의 임상 증상 스코어를 나타낸다.

본 발명의 상기 식 (I) 로 나타내는 화합물은, 피롤로［2,3-d］피리미딘을 기본 구조로 하고, 그 4 위치에 시클로알케닐기를 가지며, 또한 5 위치에 고리형의 치환기를 갖는 화합물이며, 상기의 어느 선행 기술 문헌 등에도 기재되지 않은 신규 화합물이다.

본 명세서에 있어서 「C₁ ∼ C₆ 알킬기」 란, 탄소수 1 ∼ 6 의 직사슬형 혹은 분기 사슬형의 포화 탄화수소기이며, 구체적으로는 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, sec-부틸기, tert-부틸기, n-펜틸기, n-헥실기 등을 들 수 있다.

본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물에 있어서, X 는, -CH=CH-, -NH-, 황 원자 또는 산소 원자를 나타낸다. X 는, -CH=CH-, 황 원자 또는 산소 원자가 바람직하고, -CH=CH- 또는 산소 원자가 보다 바람직하고, 산소 원자가 특히 바람직하다.

본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물에 있어서, n 은, 0 ∼ 2 의 정수를 나타낸다. n 은, 0 또는 1 이 바람직하고, 1 이 특히 바람직하다.

본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물에 있어서,

[화학식 6]

상기의 구조의 구체적인 구조로서는, 이하의 (1) ∼ (5) 가 바람직하다.

[화학식 7]

상기의 (1) ∼ (5) 중, (1), (2), (3) 이 보다 바람직하고, (2) 가 특히 바람직하다.

본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물에 있어서,

[화학식 8]

상기의 시클로알케닐 부분의 구체적인 구조로서는, 이하의 (1) ∼ (10) 이 바람직하다.

[화학식 9]

상기의 (1) ∼ (10) 중, (1), (3), (5), (6), (10) 이 보다 바람직하고, (1), (3), (5), (6) 이 더욱 바람직하고, (1), (3) 이 더욱 바람직하고, (3) 이 특히 바람직하다.

본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물에 있어서, 바람직한 화합물로서는, 식 (I) 중의 X 가 -CH=CH-, 황 원자 또는 산소 원자이며, n 이 0 또는 1 인 화합물이다.

본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물에 있어서, 보다 바람직한 화합물은,

[화학식 10]

식 (I) 중, 상기의 구조가 이하의 어느 구조이며 ； ,

[화학식 11]

[화학식 12]

식 (I) 중, 상기의 구조가 이하의 어느 구조인 화합물이다.

[화학식 13]

본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물에 있어서, 더욱 바람직한 화합물은, 식 (I) 중의 X 가 산소 원자이며, n 이 1 인 화합물이다.

본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물에 있어서, 특히 바람직한 화합물은,

[화학식 14]

식 (I) 중, 상기의 구조가 이하의 구조이며 ； ,

[화학식 15]

[화학식 16]

식 (I) 중, 상기의 구조가 이하의 구조인 화합물이다.

[화학식 17]

바람직한 본 발명 화합물로서 구체적으로는 이하의 것을 예시할 수 있다 ：

(1) N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 1)

(2) N-(3-(5-(티오펜-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 2)

(3) N-(3-(5-(티오펜-3-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 3)

(4) N-(3-(5-(푸란-3-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 4)

(5) N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 5)

(6) (R)-N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 6)

(7) (S)-N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 7)

(8) N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 8)

(9) N-(3-(5-페닐-7H-피롤［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 9)

(10) N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 10)

(11) N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헵트-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 11)

(12) N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 12)

(13) N-(3-(5-(티오펜-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 13)

(14) N-(3-(5-(티오펜-3-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 14)

(15) N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 15)

(16) N-(3-(5-(푸란-3-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 16)

그 중에서도, 화합물 2, 5, 7, 8, 9, 13, 14 가 바람직하고, 화합물 5, 7 이 보다 바람직하고, 화합물 7 이 특히 바람직하다.

다음으로, 본 발명에 관련된 화합물의 제조법에 대해 설명한다.

본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물은, 예를 들어 하기 제조 방법을 사용하여 제조할 수 있다.

＜제조 방법＞

[화학식 18]

［식 중, L¹, L²는, 동일 또는 상이하여 탈리기를 나타내고, P¹, P²는 보호기를 나타내고, R¹, R², R³, R⁴, R⁵는, 동일 또는 상이하여 수소 원자 또는 C₁ ∼ C₆ 알킬기를 나타내고, 여기서, R¹ 및 R², R³ 및 R⁴는, 각각 인접하는 산소 및 붕소 원자와 하나가 되어 고리를 형성해도 되고, 그 밖의 기호는 상기와 동일한 의미이다.］

식 2, 식 3 ∼ 식 5 및 식 8 ∼ 식 9 중에서 나타내는 NP¹ 은 질소 원자가 보호기 P¹에 의해 보호되어 있는 상태를 나타내고 있다. 예를 들어, 보호기로서 tert-부틸옥시카르보닐기 (Boc 기) 를 사용했을 경우, 1 개 혹은 2 개의 Boc 기로 보호되어 있는 것을 의미하거나, 또는 프탈산이미드 등의 이미드를 형성하여 보호되어 있는 것을 의미한다.

(제 1 공정)

본 공정은, 식 1 로 나타내는 화합물과 시판품 또는, 공지된 방법에 의해 제조할 수 있는 식 2 로 나타내는 화합물을 커플링 반응하여, 식 3 으로 나타내는 화합물을 얻는 방법이다.

본 공정은, 통상적으로 공지된 방법 (예를 들어, Chemical Reviews, Vol. 95, p. 2457, 1995) 에 준하여 실시할 수 있고, 예를 들어, 천이 금속 촉매 및 염기 존재하, 반응에 악영향을 미치지 않는 용매 중에서 실시할 수 있다.

식 2 로 나타내는 보론산 또는 보론산에스테르의 사용량은, 식 1 로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 1 ∼ 10 당량 사용할 수 있고, 바람직하게는 1 ∼ 3 당량이다.

천이 금속 촉매로서는, 예를 들어, 팔라듐 촉매 (예, 아세트산팔라듐, 염화팔라듐, 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐 등), 니켈 촉매 (예, 염화니켈 등) 등이 사용되고, 필요에 따라, 리간드 (예, 트리페닐포스핀, 트리-tert-부틸포스핀 등) 를 첨가하여, 금속 산화물 (예, 산화구리, 산화은 등) 등을 공촉매로서 사용해도 된다.

천이 금속 촉매의 사용량은, 촉매의 종류에 따라 상이하지만, 식 1 로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 통상적으로 약 0.0001 ∼ 1 몰, 바람직하게는 약 0.01 ∼ 0.5 몰 정도이며, 리간드의 사용량은, 식 1 로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 통상적으로 약 0.0001 ∼ 4 몰, 바람직하게는 약 0.01 ∼ 2 몰 정도이며, 공촉매의 사용량은, 식 1 로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 통상적으로 약 0.0001 ∼ 4 몰, 바람직하게는 약 0.01 ∼ 2 몰 정도이다.

염기로서는, 예를 들어, 유기 아민류 (예, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로［5,4,0］운데카-7-엔, 피리딘, N,N-디메틸아닐린 등), 알칼리 금속염 (예, 탄산수소나트륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산세슘, 인산나트륨, 인산칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등), 금속 수소화물 (예, 수소화칼륨, 수소화나트륨 등), 알칼리 금속 알콕시드, (예, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 나트륨tert-부톡시드, 칼륨tert-부톡시드 등), 알칼리 금속 디실라지드 (예, 리튬디실라지드, 나트륨디실라지드, 칼륨디실라지드 등) 등을 들 수 있다.

염기의 사용량은, 식 1 로 나타내는 화합물 (1 몰) 대해, 통상적으로 0.1 ∼ 10 몰, 바람직하게는 약 1 ∼ 5 몰 정도이다.

용매로서는, 반응에 악영향을 미치지 않는 것이면 되고, 예를 들어, 탄화수소류 (예, 벤젠, 톨루엔, 자일렌 등), 할로겐화 탄화수소류 (예, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄 등), 니트릴류 (예, 아세토니트릴 등), 에테르류 (예, 1,4-디옥산, 디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란 등), 알코올류 (예, 메탄올, 에탄올 등), 비프로톤성 극성 용매 (예, 디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드, 헥사메틸포스포르아미드 등), 물 혹은 그들의 혼합물 등을 들 수 있다.

반응 시간은 0.1 ∼ 100 시간이며, 바람직하게는 0.5 ∼ 24 시간이다. 반응 온도로서는 0 ℃ ∼ 용매가 비등하는 온도이며, 바람직하게는 0 ℃ ∼ 150 ℃ 이다.

이와 같이 하여 얻어지는 식 3 으로 나타내는 화합물은, 후술하는 공지된 분리 정제 수단에 의해 단리 정제하거나 또는 단리 정제하는 일 없이 다음 공정에 제공할 수 있다.

(제 2 공정)

본 공정은, 식 3 으로 나타내는 화합물을 할로겐화하여, 식 4 로 나타내는 화합물을 얻는 방법이다. 할로겐화는, 예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 요오드 등을 사용하는 방법, N-클로로숙신이미드, N-브로모숙신이미드, N-요오드숙신이미드를 사용하는 방법에 의해 실시할 수 있다. 본 반응에 있어서는, N-클로로숙신이미드, N-브로모숙신이미드, N-요오드숙신이미드 등을 사용하는 방법이 바람직하다.

N-클로로숙신이미드, N-브로모숙신이미드, N-요오드숙신이미드 등은, 식 3 으로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해 1 ∼ 10 당량 사용할 수 있고, 바람직하게는 1 ∼ 3 당량 사용할 수 있다.

용매로서는, 반응에 악영향을 미치지 않는 것이면 되고, 예를 들어, 탄화수소류 (예, 벤젠, 톨루엔, 자일렌 등), 할로겐화 탄화수소류 (예, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄 등), 니트릴류 (예, 아세토니트릴 등), 에테르류 (예, 디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란 등), 알코올류 (예, 메탄올, 에탄올 등), 비프로톤성 극성 용매 (예, 디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드, 헥사메틸포스포르아미드 등), 물 혹은 그들의 혼합물 등을 들 수 있다.

반응 시간은 0.1 ∼ 100 시간이며, 바람직하게는 0.5 ∼ 24 시간이다. 반응 온도로서는 0 ℃ ∼ 용매가 비등하는 온도이며, 바람직하게는 0 ℃ ∼ 100 ℃ 이다.

이와 같이 하여 얻어지는 식 4 로 나타내는 화합물은, 후술하는 공지된 분리 정제 수단에 의해 단리 정제하거나 또는 단리 정제하는 일 없이 다음 공정에 제공할 수 있다.

(제 3 공정)

본 공정은, 식 4 로 나타내는 화합물로부터 보호기 P²를 도입하여 식 5 로 나타내는 화합물을 얻는 방법이다.

보호의 방법으로서는, 통상적으로 공지된 방법, 예를 들어 Protective Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene, John Wiley ＆ Sons (1981 년) 에 기재된 방법, 또는 그것에 준하는 방법에 의해 실시할 수 있다. 본 반응에 있어서 보호기 P²는, 톨루엔술폰산기, 벤젠술폰산기, 메탄술폰산기, 메톡시메틸기, 트리틸기 등이 바람직하다.

본 반응의 보호기화제는, 예를 들어, 염화톨루엔술포닐, 염화벤젠술포닐, 염화메탄술포닐, 클로로(메톡시)메탄, 염화트리틸 등을 들 수 있다.

이들 보호기화제의 사용량은, 식 4 로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 통상적으로 약 1 ∼ 100 몰, 바람직하게는 약 1 ∼ 10 몰 정도이다.

염기의 사용량은, 식 4 로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 통상적으로 0.1 ∼ 100 몰, 바람직하게는 약 1 ∼ 10 몰 정도이다.

이와 같이 하여 얻어지는 식 5 로 나타내는 화합물은, 후술하는 공지된 분리 정제 수단에 의해 단리 정제하거나 또는 단리 정제하는 일 없이 다음 공정에 제공할 수 있다.

(제 4 공정)

본 공정은, 식 5 로 나타내는 화합물과 시판품 또는, 공지된 방법에 의해 제조할 수 있는 식 6 의 보론산 또는 보론산에스테르와 커플링 반응시킴으로써, 또는, 식 5 로 나타내는 화합물과 시판품 또는, 공지된 방법에 의해 제조할 수 있는 식 7 의 유기 주석 화합물과 커플링 반응시킴으로써, 식 8 로 나타내는 화합물을 얻는 방법이다.

본 공정은, 제 1 공정과 동일한 방법에 의해 실시할 수 있다.

(제 5 공정)

본 공정은, 식 8 로 나타내는 화합물의 보호기 P²를, 탈보호하여 식 9 로 나타내는 화합물을 얻는 방법이다. 탈보호의 방법으로서는, 통상적으로 공지된 방법, 예를 들어 Protective Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene, John Wiley ＆ Sons (1981 년) 에 기재된 방법, 또는 그것에 준하는 방법에 의해 실시할 수 있다.

예를 들어, 보호기 P²로서 파라톨루엔술폰산기를 사용한 경우, 수산화리튬, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 테트라부틸암모늄플루오리드 등의 탈보호제를 사용하는 것이 바람직하고, 탈보호제의 사용량은, 식 8 로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 통상적으로 0.5 ∼ 100 몰, 바람직하게는 약 1 ∼ 10 몰 정도이다.

또, 보호기 P²로서 트리틸기를 사용한 경우, 수산화리튬, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 테트라부틸암모늄플루오리드, 산 (예, 염산, 트리플루오로아세트산, 아세트산, 황산 등) 등의 탈보호제를 사용하는 것이 바람직하고, 탈보호제의 사용량은, 식 8 로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 통상적으로 0.5 ∼ 100 몰, 바람직하게는 약 1 ∼ 10 몰 정도이다.

반응에 사용하는 용매로서는, 반응에 악영향을 미치지 않는 것이면 되고, 예를 들어, 알코올류 (예, 메탄올 등) 탄화수소류 (예, 벤젠, 톨루엔, 자일렌 등), 할로겐화 탄화수소류 (예, 염화메틸렌, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄 등), 니트릴류 (예, 아세토니트릴 등), 에테르류 (예, 디메톡시에탄, 테트라하이드로푸란 등), 비프로톤성 극성 용매 (예, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸술폭시드, 헥사메틸포스포르아미드 등) 혹은 그들의 혼합물이 사용된다.

이와 같이 하여 얻어지는 식 9 의 화합물은, 후술하는 공지된 분리 정제 수단에 의해 단리 정제하거나 또는 단리 정제하는 일 없이 다음 공정에 제공할 수 있다.

(제 6 공정)

본 공정은, 식 9 로 나타내는 화합물의 아미노기의 보호기 P¹을 탈보호하여 식 10 으로 나타내는 화합물을 얻는 방법이다. 탈보호의 방법으로서는, 통상적으로 공지된 방법, 예를 들어 Protective Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene, John Wiley ＆ Sons (1981 년) 에 기재된 방법, 또는 그것에 준하는 방법에 의해 실시할 수 있다.

보호기 P¹로서 tert-부틸옥시카르보닐기를 사용한 경우, 산성 조건하에서의 탈보호가 바람직하고, 산으로서는 염산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 황산, 토실산 등을 들 수 있다. 산의 사용량은, 식 9 로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 바람직하게는 약 1 ∼ 100 당량이다.

반응 시간은 0.1 ∼ 100 시간이며, 바람직하게는 0.5 ∼ 24 시간이다. 반응 온도로서는 0 ∼ 100 ℃ 이며, 바람직하게는 0 ∼ 50 ℃ 이다.

이와 같이 하여 얻어지는 식 10 으로 나타내는 화합물은, 후술하는 공지된 분리 정제 수단에 의해 단리 정제하거나 또는 단리 정제하는 일 없이 다음 공정에 제공할 수 있다.

(제 7 공정)

본 공정은, 식 10 으로 나타내는 화합물의 아미노기와 아크릴산, 또는 아크릴산할라이드와의 아미드화 반응에 의해, 본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물을 얻는 방법이다.

아크릴산을 사용하는 경우, 축합제 존재하, 식 10 으로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 아크릴산은 통상적으로 0.5 ∼ 10 몰, 바람직하게는 약 1 ∼ 5 몰 정도 사용된다.

축합제로서는, N,N'-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC), N,N'-디이소프로필카르보디이미드 (DIC), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드염산염 (WSC), 디페닐포스포릴아지드 (DPPA), 벤조트리아졸-1-일-옥시트리스디메틸아미노포스포늄헥사플루오로포스페이트 (BOP), 벤조트리아졸-1-일-옥시트리스피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트 (PyBOP), 7-아자벤조트리아졸-1-일옥시트리스피롤리디노포스포늄포스페이트 (PyAOP), 브로모트리스피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트 (BroP), 클로로트리스(피롤리딘-1-일)포스포늄헥사플루오로포스페이트 (PyCroP), 3-(디에톡시포스포릴옥시)-1,2,3-벤조트리아진-4(3H)-온 (DEPBT), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트 (HATU), 4-(5,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴린염산염 (DMTMM) 등을 들 수 있고, 그 때의 첨가제로서 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt), 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸 (HOAt), N-하이드록시숙신이미드 (HOSu) 등을 들 수 있다.

이들의 사용량은, 식 10 으로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 통상적으로 1 ∼ 100 몰, 바람직하게는 약 1 ∼ 10 몰 정도이다.

또, 필요에 따라 염기를 첨가할 수 있다.

염기로서는, 예를 들어, 유기 아민류 (예, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로［5,4,0］운데카-7-엔, 피리딘, N,N-디메틸아닐린 등), 알칼리 금속염 (예, 탄산수소나트륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산세슘, 인산나트륨, 인산칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등), 금속 수소화물 (예, 수소화칼륨, 수소화나트륨 등), 알칼리 금속 알콕시드, (예, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 나트륨tert-부톡시드, 칼륨tert-부톡시드 등) 등을 들 수 있다.

염기의 사용량은, 식 10 으로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 통상적으로 1 ∼ 100 몰, 바람직하게는 약 1 ∼ 10 몰 정도이다.

아크릴산할라이드를 사용하는 경우, 식 10 으로 나타내는 화합물 (1 몰) 에 대해, 산할라이드는 통상적으로 0.5 ∼ 10 몰, 바람직하게는 약 1 ∼ 5 몰 정도 사용된다. 또한, 당해 산할라이드는, 시판품, 또는 공지된 방법에 준하여 제조할 수 있다.

또, 필요에 따라 염기를 첨가할 수 있다. 염기로서는, 예를 들어, 유기 아민류 (예, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로［5,4,0］운데카-7-엔, 피리딘, N,N-디메틸아닐린 등), 알칼리 금속염 (예, 탄산수소나트륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산세슘, 인산나트륨, 인산칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등), 금속 수소화물 (예, 수소화칼륨, 수소화나트륨 등), 알칼리 금속 알콕시드, (예, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드, 나트륨tert-부톡시드, 칼륨tert-부톡시드 등) 등을 들 수 있다.

상기 제조 방법에서는 「피롤로피리미딘 골격과 식 2 로 나타내는 화합물을 연결」 (제 1 공정), 「식 6 혹은 식 7 로 나타내는 화합물을 피롤로피리미딘 골격에 도입」 (제 4 공정) 을 차례로 실시하고 있지만, 이 차례를 바꿔 넣을 수 있다.

즉, 「식 6 혹은 식 7 로 나타내는 화합물을 피롤로피리미딘 골격에 도입」 (제 4 공정), 「피롤로피리미딘 골격과 식 2 로 나타내는 화합물을 연결」 (제 1 공정) 의 순서로 합성할 수도 있다.

구체적으로는, 식 1 로 나타내는 화합물로부터, 제 2 공정, 제 3 공정, 제 4 공정, 제 1 공정의 순서로 각 공정을 거쳐, 식 8 로 나타내는 화합물로 유도할 수 있다. 각 공정의 조건은 상기의 조건과 동일하다.

이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 식 (I) 로 나타내는 화합물 및 그 중간체는, 공지된 분리 정제 수단에 의해 용이하게 단리 정제할 수 있다. 이러한 수단으로서는, 예를 들어, 농축, 감압 농축, 용매 추출, 재결정, 재침전, 분취용 역상 고속 액체 크로마토그래피, 칼럼 크로마토그래피, 분취 박층 크로마토그래피 등을 예시할 수 있다.

본 발명 화합물은, 광학 이성체, 입체 이성체, 호변 이성체, 회전 이성체가 존재하는 경우에는 어느 이성체도 혼합물도 본 발명 화합물에 포함된다. 또, 본 발명 화합물은, 라세미체, 또는 라세미체로부터 분할된 광학 활성체도 본 발명 화합물에 포함된다.

또, 본 발명 화합물에는, 이하와 같은 호변 이성체도 포함된다.

[화학식 19]

본 발명 화합물 또는 그 염은, 결정이어도 되고, 결정형이 단일이거나 다형 혼합물이어도 본 발명 화합물 또는 그 염에 포함된다. 결정은, 자체 공지된 결정화법을 적용하여, 결정화함으로써 제조할 수 있다. 본 발명 화합물 또는 그 염은, 용매화물 (예를 들어, 수화물 등) 이거나, 무용매화물이어도 되고, 모두 본 발명 화합물 또는 그 염에 포함된다. 동위 원소 (예를 들어, 중수소, 3H, 13C, 14C, 35S, 125I 등) 등으로 표식된 화합물도, 본 발명 화합물 또는 그 염에 포함된다.

본 발명 화합물 또는 그 염의 프로드러그도 본 발명에 포함되지만, 당해 프로드러그는, 생체 내에 있어서의 생리 조건하에서 효소나 위산 등에 의한 반응에 의해 본 발명 화합물 또는 그 염으로 변환하는 화합물, 즉 효소적으로 산화, 환원, 가수 분해 등을 일으켜 본 발명 화합물 또는 그 염으로 변화되는 화합물, 위산 등에 의해 가수 분해 등을 일으켜 본 발명 화합물 또는 그 염으로 변화되는 화합물을 말한다. 또, 본 발명 화합물 또는 그 염의 프로드러그는, 히로카와 서점 1990 년 간행 「의약품의 개발」 제 7 권 분자 설계 163 페이지 내지 198 페이지에 기재되어 있는 바와 같은 생리적 조건에서 본 발명 화합물 또는 그 염으로 변화되는 것이어도 된다.

본 발명 화합물의 염이란, 약학적으로 허용되는 염이면 특별히 제한되지 않고, 유기 화학의 분야에서 사용되는 관용적인 것을 의미하고, 예를 들어 카르복시기를 갖는 경우의 당해 카르복시기에 있어서의 염기 부가염, 또는 아미노기 혹은 염기성의 복소 고리형기를 갖는 경우의 당해 아미노기, 혹은 염기성 복소 고리형기에 있어서의 산 부가염의 염류를 들 수 있다.

그 염기 부가염으로서는, 예를 들어 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염 ； 예를 들어 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리 토금속염 ； 예를 들어 암모늄염 ； 예를 들어 트리메틸아민염, 트리에틸아민염, 디시클로헥실아민염, 에탄올아민염, 디에탄올아민염, 트리에탄올아민염, 프로카인염, N,N'-디벤질에틸렌디아민염 등의 유기 아민염 등을 들 수 있다.

그 산 부가염으로서는, 예를 들어 염산염, 황산염, 질산염, 인산염, 과염소산염 등의 무기산염 ； 예를 들어 아세트산염, 포름산염, 말레산염, 푸마르산염, 타르타르산염, 시트르산염, 아스코르브산염, 트리플루오로아세트산염 등의 유기 산염 ； 예를 들어 메탄술폰산염, 이세티온산염, 벤젠술폰산염, p-톨루엔술폰산염 등의 술폰산염 등을 들 수 있다.

본 발명 화합물 또는 그 염은, JAK1, JAK2 와 비교해서, JAK3 에 대해 선택적인 저해 활성을 갖는다. 또, 본 발명 화합물 또는 그 염은, 인간 PBMC 에 대한 우수한 증식 억제 작용을 갖는다. 또한, 본 발명 화합물 또는 그 염은, in vivo 에 있어서 IL-2 유발 IFN-γ 산생에 대해 저해 활성을 갖는다.

본 발명 화합물 또는 그 염은, 그 우수한 JAK3 저해 활성에 의해, JAK3 이 관여하는 질환의 치료를 위한 의약으로서 유용하다. 또, JAK3 에 대한 우수한 선택성에 의해 JAK1 및 JAK2 에서 기인하는 부작용 (지질 상승, 빈혈, 호중구 감소, 면역 억제 등) 이 경감된 의약으로서 유용하다.

「JAK3 이 관여하는 질환」 이란, JAK3 의 기능을 결실, 억제 및/또는 저해함으로써, 발증률의 저하, 증상의 경감, 관해, 완화, 및/또는 완치하는 질환을 들 수 있다. 이와 같은 질환으로서 예를 들어, 자기 면역 질환 (관절 류머티즘, 다발성 경화증, 전신성 홍반성 낭창, 강피증, 다발성 근염·피부 근염, 시그렌 증후군, 베체트병 등), 알레르기 질환 (기관지 천식, 알레르기성 비염·꽃가루 알레르기, 아토피성 피부염, 음식 알레르기, 아나필락시스, 약물 알레르기, 두드러기, 결막염 등), 신경계의 질환 (다발성 경화증, 알츠하이머병 등), 염증성 장질환 (궤양성 대장염, 크론병), 건선, 접촉성 피부염, 당뇨병, 세리악크병, 바이러스 감염증, 급성 호흡 촉박 증후군 (ARDS), 이식편 대숙주병 (GVHD), 이식 거절, 혈액의 악성 종양 (임파종, 백혈병) 및 다른 악성 종양을 예시할 수 있다. 이 중 건선, 이식편 대숙주병, 다발성 경화증, 염증성 장질환, 전신성 홍반성 낭창 및 관절 류머티즘이 바람직하고, 관절 류머티즘 또는 다발성 경화증이 보다 바람직하다.

본 명세서에 있어서 「치료」 에는, 상기 JAK3 이 관여하는 질환의 예방 및/또는 치료 외에, 증상의 경감 및/또는 재발 방지를 위한 유지가 포함된다.

본 발명 화합물 또는 그 염을 의약으로서 사용하는데 있어서는, 필요에 따라 약학적 담체를 배합하고, 치료 목적에 따라 각종의 투여 형태를 채용 가능하고, 그 형태로서는, 예를 들어, 경구제, 주사제, 좌제, 연고제, 흡입제, 첩부제 등 어느 것이어도 되지만, 본 발명 화합물 또는 그 염은 우수한 경구 흡수성을 갖기 때문에, 바람직하게는 경구제가 채용된다. 이들의 투여 형태는, 각각 당업자에게 공지 관용의 제제 방법에 의해 제조할 수 있다.

약학적 담체로서는, 제제 소재로서 관용의 각종 유기 혹은 무기 담체 물질이 사용되고, 고형 제제에 있어서의 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 액상 제제에 있어서의 용제, 용해 보조제, 현탁화제, 등장화제, 완충제, 무통화제 등으로서 배합된다. 또, 필요에 따라 방부제, 항산화제, 착색제, 감미제, 안정화제 등의 제제 첨가물을 사용할 수도 있다.

경구용 고형 제제를 조제하는 경우에는, 본 발명 화합물에 부형제, 필요에 따라 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미·교취제 등을 첨가한 후, 통상적인 방법에 의해 정제, 피복 정제, 과립제, 산제, 캡슐제 등을 제조할 수 있다.

주사제를 조제하는 경우에는, 본 발명 화합물에 pH 조절제, 완충제, 안정화제, 등장화제, 국소 마취제 등을 첨가하고, 통상적인 방법에 의해 피하, 근육내 및 정맥내용 주사제를 제조할 수 있다.

상기의 각 투여 단위 형태 중에 배합되어야 할 본 발명 화합물의 양은, 이것을 적용할 환자의 증상에 따라, 혹은 그 제형 등에 따라 일정하지는 않지만, 일반적으로 투여 단위 형태당, 경구제에서는 약 0.05 ∼ 1000 mg, 주사제에서는 약 0.01 ∼ 500 mg, 좌제에서는 약 1 ∼ 1000 mg 으로 하는 것이 바람직하다.

또, 상기 투여 형태를 갖는 약제의 1 일당 투여량은, 환자의 증상, 체중, 연령, 성별 등에 따라 상이하여 일률적으로는 결정할 수 없지만, 본 발명 화합물로서 통상 성인 (체중 50 kg) 1 일당 약 0.05 ∼ 5000 mg, 바람직하게는 0.1 ∼ 1000 mg 으로 하면 되고, 이것을 1 일 1 회 또는 2 ∼ 3 회 정도로 나누어 투여하는 것이 바람직하다.

실시예

이하에 실시예를 들어 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명은 실시예로 한정되는 것은 아니다. 실시예에서 사용한 각종 시약은, 특별히 기재가 없는 한 시판품을 사용했다. 실리카 겔 크로마토그래피에는, 바이오타지사 제조 바이오타지 SNAP 카트리지 Ultra 또는 염기성 실리카 겔 크로마토그래피에는 바이오타지사 제조 바이오타지 SNAP 카트리지 KP-NH 를 사용했다.

분취용 박층 크로마토그래피에는 머크사 제조 KieselgelTM60F254, Art. 5744 또는 와코사 제조 NH2 실리카 겔 60F254 플레이트 와코를 사용했다.

¹H-NMR 은 JEOL 사 제조 AL400 (400 MHz), Varian 사 제조 Mercury (400 MHz) 또는 Varian 사 제조 Inova (400 MHz) 를 사용하여, 테트라메틸실란을 표준 물질로서 측정했다. 또 매스 스펙트럼은, Waters 사 제조 MicromassZQ 또는 SQD 를 사용하여, 일렉트로 스프레이 이온화법 (ESI) 혹은 대기압 화학 이온화법 (APCI) 으로 측정했다. 마이크로 웨이브 반응은, 바이오타지사 제조 Initiator 를 사용하여 실시했다.

약호의 의미를 이하에 나타낸다.

s ： 싱글렛

d ： 더블렛

t ： 트리플렛

q ： 콰르텟

dd ： 더블 더블렛

dt ： 더블 트리플렛

td ： 트리플 더블렛

tt ： 트리플 트리플렛

ddd ： 더블 더블 더블렛

ddt ： 더블 더블 트리플렛

dtd ： 더블 트리플 더블렛

tdd ： 트리플 더블 더블렛

m ： 멀티플렛

br ： 브로드

Boc ： tert-부톡시카르보닐

DMSO-d₆ ： 중디메틸술폭시드

CDCl₃ ： 중클로로포름

CD₃OD ： 중메탄올

THF ： 테트라하이드로푸란

DMF ： N,N-디메틸포름아미드

DMSO ： 디메틸술폭시드

Pd(PPh₃)₄ ： 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐

PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂ ：［1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센］디클로로팔라듐 (II) 디클로로메탄 착물

PdCl₂(PPh₃)₂ ： 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐 (II)

참고예 1

참고예 1 (1a) 5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥스-1-엔-1-일트리플루오로메탄술포네이트

참고예 1 (1b) 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥스-1-엔-1-일트리플루오로메탄술포네이트

tert-부틸(3-옥소시클로헥실)카르바메이트 (5.0 g) 와 N-페닐-비스(트리플루오로메탄술폰이미드) (11.0 g) 를 THF (100 ㎖) 에 용해하고, -78 ℃ 로 냉각 후, 2.0 M 리튬디이소프로필아미드의 THF 용액 (26.0 ㎖) 을 첨가하고, 0 ℃ 로 승온하여 30 분간 교반했다. 반응 혼합물에 0.5 M 황산수소칼륨 수용액을 첨가하여 희석한 후, 아세트산에틸로 추출했다. 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 참고예 1 (1a) 화합물 (4.39 g, 수율 54 ％), 참고예 1 (1b) 화합물 (2.00 g, 수율 25 ％) 을 각각 얻었다.

참고예 1 (2a) tert-부틸(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트

참고예 1 (1a) 화합물 (9.25 g), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보로란) (10.2 g), 아세트산칼륨 (3.95 g) 에 DMF (90 ㎖) 를 첨가하고, 질소 치환한 후, PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂(980 mg) 를 첨가하고, 80 ℃ 에서 14 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산에틸과 물을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 목적물 (6.51 g, 수율 75 ％) 을 얻었다.

참고예 1 (2b) tert-부틸(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)시클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트

참고예 1 (2a) 에 준하여, 참고예 1 (1a) 화합물 대신에 참고예 1 (1b) 화합물을 사용함으로써, 목적물을 얻었다.

참고예 2

참고예 2 (1a) 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로펜트-1-엔-1-일트리플루오로메탄술포네이트

참고예 2 (1b) 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로펜트-1-엔-1-일트리플루오로메탄술포네이트

질소 분위기하, THF (100 ㎖) 에, 1.0 M 리튬헥사메틸디실라지드의 THF 용액 (114 ㎖) 을 첨가하여 -78 ℃ 로 냉각시키고, tert-부틸(3-옥소시클로펜틸)카르바메이트 (9.0 g) 의 THF (100 ㎖) 용액을 10 분간에 걸쳐 첨가했다. N-페닐-비스(트리플루오로메탄술폰이미드) (19.4 g) 를 첨가하고, 0 ℃ 로 승온하여 10 분간 교반했다. 반응 혼합물에 물, 톨루엔, 5 M 수산화나트륨 수용액을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반한 후, 톨루엔으로 추출했다. 합한 유기층을 순차 0.5 M 황산수소칼륨 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 참고예 2 (1a) 화합물 (8.61 g, 수율 58 ％), 참고예 2 (1b) 화합물 (4.31 g, 수율 29 ％) 을 각각 얻었다.

참고예 2 (2a) tert-부틸(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)시클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트

참고예 1 (2a) 에 준하여 참고예 1 (1a) 화합물 대신에 참고예 2 (1a) 화합물을 사용함으로써, 목적물을 얻었다.

참고예 2 (2b) tert-부틸(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)시클로펜트-2-엔-1-일)카르바메이트

참고예 1 (2a) 에 준하여 참고예 1 (1a) 화합물 대신에 참고예 2 (1b) 화합물을 사용함으로써, 목적물을 얻었다.

참고예 3 (S)-tert-부틸(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트

참고예 3 (1) tert-부틸((1S,3R)-3-하이드록시시클로헥실)카르바메이트

(1R,3S)-3-아미노시클로헥산올 (13.7 g) 을 2-메틸테트라하이드로푸란 (140 ㎖) 에 용해하고, 포화 탄산수소나트륨 수용액 (70 ㎖) 을 첨가한 후, 0 ℃ 에서 이탄산디-tert-부틸 (27.5 g) 을 첨가하고, 실온에서 16 시간 교반했다. 반응 혼합물에 물을 첨가하여 희석한 후, 2-메틸테트라하이드로푸란으로 추출했다. 합한 유기층을 포화 염화암모늄 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 고체를 헵탄으로 세정하여, 목적물 (22.7 g, 수율 89 ％) 을 얻었다.

참고예 3 (2) (S)-tert-부틸(3-옥소시클로헥실)카르바메이트

참고예 3 (1) 화합물 (21.5 g) 을 아세트산에틸 (200 ㎖) 로 용해하고, 순차, 1-메틸-2-아자아다만탄N-옥실 (166 mg), 5 M 브롬화나트륨 수용액 (6 ㎖), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (100 ㎖) 을 첨가한 후, 0 ℃ 에서 10 ％ 차아염소산나트륨 수용액 (100 ㎖) 을 첨가하고, 1 시간 교반했다. 반응 혼합물에 0 ℃ 에서 10 ％ 아황산수소나트륨 수용액을 첨가한 후, 10 ％ 탄산칼륨 수용액으로 희석하여, 아세트산에틸로 추출했다. 합한 유기층을 1 M 염산, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 물, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 고체를 디이소프로필에테르-헵탄으로 세정하여, 목적물 (19.4 g, 수율 91 ％) 을 얻었다.

참고예 3 (3) (S)-5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)시클로헥스-1-엔-1-일트리플루오로메탄술포네이트

참고예 3 (2) 화합물 (32.3 g) 의 THF (160 ㎖) 용액을, -78 ℃ 로 냉각시킨 나트륨비스(트리메틸실릴)아미드 (60.5 g) 의 THF 용액 (780 ㎖) 에 적하한 후, 반응 혼합물을 30 분간 교반했다. 반응 혼합물에 -78 ℃ 에서 N-페닐-비스(트리플루오로메탄술폰이미드) (64.3 g) 를 첨가하고, 30 분간 교반한 후, 0 ℃ 로 승온하여 다시 2 시간 교반했다. 반응 혼합물에 물, 1 M 수산화나트륨 수용액을 첨가한 후, 실온으로 승온하여, 톨루엔으로 추출했다. 합한 유기층을 1 M 황산수소칼륨 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 물, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물에 헵탄을 첨가하고, 석출한 고체를 여과 채취하여, 헵탄으로 세정함으로써 목적물 (41.6 g, 수율 79 ％) 을 얻었다.

참고예 3 (4) (S)-tert-부틸(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트

참고예 3 (3) 화합물 (32.8 g) 의 톨루엔 (450 ㎖) 용액에, 순차, 비스(피나콜레이트)디보론 (26.5 g), 아세트산칼륨 (28.0 g), 트리페닐포스핀 (2.49 g), PdCl₂(PPh₃)₂(3.33 g) 를 첨가하고, 60 ℃ 로 승온하여 질소 분위기하에서 4 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켜, 톨루엔을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 1 M 수산화나트륨 수용액, 1 M 염산, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 물, 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물에 아세트산에틸-헵탄, 활성탄을 첨가하여 1 시간 경과한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 감압 농축하여 얻어진 잔류물에 시클로헥산-헵탄을 첨가하고, 석출한 고체를 여과 채취하여, 시클로헥산-헵탄으로 세정함으로써 목적물 (21.3 g, 수율 69 ％) 을 얻었다.

참고예 4 (R)-tert-부틸(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트

참고예 3 에 준하여, (1R,3S)-3-아미노시클로헥산올 대신에 (1S,3R)-3-아미노시클로헥산올을 사용함으로써, 목적물을 얻었다.

참고예 5 tert-부틸(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)시클로헵트-3-엔-1-일)카르바메이트

참고예 1 에 준하여, tert-부틸(3-옥소시클로헥실)카르바메이트 대신에 tert-부틸(3-옥소시클로헵틸)카르바메이트를 사용함으로써, 목적물을 얻었다.

[표 1]

실시예 1 N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 1)

실시예 1 (1) tert-부틸(3-(5-요오드-7-토실-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 (화합물 1 (1))

4-클로로-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (2.97 g), 참고예 1 (2a) 화합물 (9.39 g), 인산삼칼륨 (10.2 g) 에 1,4-디옥산 (66 ㎖), 물 (11 ㎖) 을 첨가하고, 질소 치환한 후, PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂(1.41 g) 를 첨가하고, 100 ℃ 에서 14 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산에틸과 물을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, tert-부틸(3-(7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트를 얻었다. 얻어진 본 화합물은 다시 정제하는 일 없이 다음의 반응에 사용했다.

얻어진 본 화합물에 DMF (100 ㎖) 를 첨가하여 0 ℃ 로 냉각시킨 후, N-요오드숙신이미드 (6.21 g) 를 첨가하고, 0 ℃ 에서 30 분간 교반했다. 반응 혼합물에 0.5 M 아황산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출하여, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, 3-(5-요오드-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트를 얻었다. 얻어진 본 요오드체는 다시 정제하는 일 없이 다음의 반응에 사용했다.

얻어진 본 요오드체에 DMF (80 ㎖) 를 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 60 ％ 수소화나트륨 (1.72 g), 이어서 염화파라톨루엔술포닐 (4.46 g) 을 첨가하고, 0 ℃ 에서 30 분간 교반했다. 반응 혼합물에, 빙수를 첨가한 후, 수층을 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 목적물 (7.29 g, 수율 63 ％) 을 얻었다.

실시예 1 (2) N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 1)

화합물 1 (1) (100 mg), 페닐보론산 (41 mg), 인산삼칼륨 (89.2 mg) 에 1,4-디옥산 (1.8 ㎖), 물 (0.3 ㎖) 을 첨가하여 질소 치환한 후, PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂(12.3 mg) 를 첨가하고, 100 ℃ 에서 2 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산에틸과 물을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다.

얻어진 잔류물에 THF (1.0 ㎖) 와 1.0 M 테트라부틸암모늄플루오리드의 THF 용액 (1.0 ㎖) 을 첨가하고, 실온에서 4 시간 교반했다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, tert-부틸(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트를 얻었다. 얻어진 본 화합물은 다시 정제하는 일 없이 다음의 반응에 사용했다.

얻어진 본 화합물에 메탄올 (1 ㎖), 4 M 염산의 1,4-디옥산 용액 (1 ㎖) 을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 농축했다. 질소 분위기하로 한 후, 디클로로메탄 (3 ㎖) 과 디이소프로필에틸아민 (1 ㎖) 을 첨가하여 0 ℃ 냉각시켰다. 염화아크릴로일 (0.1 ㎖) 을 첨가하여 30 분간 교반한 후, 순차 암모니아 수용액, 클로로포름, 메탄올을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물을 클로로포름으로 추출하고, 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, 표제 화합물 (34.2 mg, 수율 59 ％) 을 얻었다.

실시예 2 N-(3-(5-(티오펜-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 2)

실시예 1 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, 티오펜-2-일보론산을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 3 N-(3-(5-(티오펜-3-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 3)

실시예 1 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, 티오펜-3-일보론산을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 4 N-(3-(5-(푸란-3-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 4)

실시예 1 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, 푸란-3-일보론산을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 5 N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 5)

화합물 1 (1) (740 mg) 과 트리부틸(푸란-2-일)스탄난 (890 mg) 에 DMF (6.2 ㎖) 를 첨가하여 질소 치환한 후, PdCl₂(PPh₃)₂(87 mg) 를 첨가하여 100 ℃ 에서 2 시간 가열 교반했다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액과 아세트산에틸을 첨가하여 교반한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출한 후, 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다.

얻어진 잔류물을 THF (5 ㎖) 에 용해하고, 1.0 M 테트라부틸암모늄플루오리드의 THF 용액 (5 ㎖) 을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물에 0.067 M 인산 완충액 pH 7.4 를 첨가하고, 아세트산에틸로 추출했다. 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, tert-부틸(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트를 얻었다.

얻어진 본 화합물은 다시 정제하는 일 없이 다음의 반응에 사용했다.

얻어진 커플링체에 메탄올 (3 ㎖) 과 4 M 염산의 1,4-디옥산 용액 (4 ㎖) 을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반하여, 반응 혼합물을 감압 농축했다. 질소 분위기하로 한 후, 디클로로메탄 (6.2 ㎖) 과 디이소프로필에틸아민 (2.21 ㎖) 을 첨가하여 0 ℃ 냉각시켰다. 염화아크릴로일 (0.20 ㎖) 을 첨가하여 30 분간 교반한 후, 순차 암모니아 수용액, 클로로포름, 메탄올을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물을 클로로포름으로 추출하고, 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, 표제 화합물 (348 mg, 수율 84 ％) 을 얻었다.

실시예 6 (R)-N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 6)

실시예 6 (1) (R)-tert-부틸(3-(5-요오드-7-토실-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 (화합물 6 (1))

실시예 1 (1) 에 준하여, 참고예 1 (2a) 화합물 대신에, 참고예 4 화합물을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 6 (2) (R)-N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 6)

실시예 5 에 준하여, 화합물 1 (1) 대신에 화합물 6 (1) 을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 7 (S)-N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 7)

실시예 7 (1) 4-클로로-5-요오드-7-트리틸-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (화합물 7 (1))

4-클로로-5-요오드-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (111 g), 트리에틸아민 (84 ㎖) 의 클로로포름 (1 ℓ) 의 용액에, 빙랭하, 트리틸클로라이드 (134 g) 를 첨가했다. 실온에서 1 시간 교반 후, 반응 혼합물을 농축했다. 얻어진 잔류물에 메탄올 (400 ㎖) 을 첨가하고, 고체를 여과 채취하여, 메탄올로 세정, 건조 후, 표제 화합물 (204 g, 수율 98 ％) 을 얻었다.

실시예 7 (2) 4-클로로-5-(푸란-2-일)-7-트리틸-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (화합물 7 (2))

질소 분위기하, 화합물 7 (1) (78.3 g), Pd(PPh₃)₄(8.7 g) 의 1,4-디옥산 (750 ㎖) 용액을 90 ℃ 로 가열하고, 2-푸릴보론산 (21.4 g) 의 1 M 탄산나트륨 수용액 (180 ㎖) 을, 6 시간에 걸쳐 첨가했다. 반응 혼합물을 또한 90 ℃ 에서 3 시간 교반한 후, 감압하, 반응 용매를 증류 제거했다. 물 (1 ℓ) 을 첨가하여, 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물에 메탄올을 첨가하고, 고체를 여과 채취하여, 메탄올로 세정, 건조 후, 표제 화합물 (59.8 g, 수율 86 ％) 을 얻었다.

실시예 7 (3) (S)-tert-부틸(3-(5-(푸란-2-일)-7-트리틸-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 (화합물 7 (3))

질소 분위기하, 화합물 7 (2) (13.4 g), Pd(PPh₃)₄(1.68 g), 참고예 3 화합물 (10.32 g), 2 M 탄산나트륨 수용액 (32 ㎖) 의 1,4-디옥산 (150 ㎖) 용액을 105 ℃ 에서 철야 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산에틸과 물을 첨가한 후, 분배하고, 유기층을 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 표제 화합물 (15.69 g, 수율 87 ％) 을 얻었다.

실시예 7 (4) (S)-3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-세나민 (화합물 7 (4))

화합물 7 (3) (12.3 g), 2-프로판올 (120 ㎖), 2 M 메실산 수용액 (50 ㎖) 의 혼합 용액을 85 ℃ 에서 3 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물을 첨가한 후, 유기 용매를 감압하 증류 제거했다. 아세트산에틸로 수층을 세정하고, 수층을 5 M 수산화나트륨으로 염기성으로 하고, 클로로포름-에탄올 (4/1) 혼합 용매로 추출했다. 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 고체를 모아, 아세트산에틸로 세정하고, 건조 후, 표제 화합물 (4.32 g, 수율 78 ％) 을 얻었다.

실시예 7 (5) (S)-N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 7)

화합물 7 (4) (2.76 g), 에탄올 (100 ㎖), 디이소프로필에틸아민 (2.01 ㎖) 의 용액에 빙랭하, 2 M 염화아크릴로일의 아세토니트릴 용액 (5.17 ㎖) 을 10 분간에 걸쳐 첨가했다. 반응액에 물을 첨가한 후, 유기 용매를 감압하 증류 제거하고, 석출한 고체를 여과 채취하여, 물 및 아세트산에틸로 세정했다. 건조 후, 표제 화합물 (3.03 g, 수율 92 ％) 을 얻었다.

실시예 8 N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 8)

실시예 8 (1) tert-부틸(3-(5-요오드-7-토실-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트 (화합물 8 (1))

실시예 1 (1) 에 준하여, 참고예 1 (2a) 대신에, 참고예 2 (2a) 화합물을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 8 (2) N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 8)

실시예 5 에 준하여, 화합물 1 (1) 대신에, 화합물 8 (1) 을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 9 N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 9)

실시예 9 (1) 4-클로로-5-요오드-7-토실-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (화합물 9 (1))

4-클로로-5-요오드-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (10 g) 에 DMF (100 ㎖) 를 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 60 ％ 수소화나트륨 (2.15 g), 이어서 염화파라톨루엔술포닐 (8.19 g) 을 첨가하고, 0 ℃ 에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물에, 빙수를 첨가한 후, 수층을 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 목적물 (14.1 g, 수율 91 ％) 을 얻었다.

실시예 9 (2) 4-클로로-5-페닐-7-토실-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (화합물 9 (2))

화합물 9 (1) (1.71 g), 페닐보론산 (530 mg), 인산삼칼륨 (1.67 g) 에 1,4-디옥산 (18 ㎖), 물 (3 ㎖) 을 첨가하고, 질소 치환한 후, PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂(280 mg) 를 첨가하고, 60 ℃ 에서 3 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산에틸과 물을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 목적물 (1.21 g, 84 ％) 을 얻었다.

실시예 9 (3) N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트- 3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 9)

화합물 9 (2) (125 mg), 참고예 2 (2a) 화합물 (127 mg), 인산삼칼륨 (181 mg) 에 1,4-디옥산 (1.8 ㎖), 물 (0.3 ㎖) 을 첨가하고, 질소 치환한 후, PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂(25 mg) 를 첨가하고, 100 ℃ 에서 4 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산에틸과 물을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다.

얻어진 잔류물에 THF (1 ㎖) 와 1.0 M 테트라부틸암모늄플루오리드의 THF 용액 (1 ㎖) 을 첨가하고, 실온에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, tert-부틸(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트를 얻었다.

얻어진 본 화합물에 메탄올 (2 ㎖) 과 4 M 염산의 1,4-디옥산 용액 (2 ㎖) 을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반하여, 반응 혼합물을 감압 농축했다. 질소 분위기하로 한 후, 디클로로메탄 (3.0 ㎖) 과 디이소프로필에틸아민 (1.0 ㎖) 을 첨가하여 0 ℃ 냉각시켰다. 염화아크릴로일 (0.1 ㎖) 을 첨가하여 30 분간 교반한 후, 순차 암모니아 수용액, 클로로포름, 메탄올을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물을 클로로포름으로 추출하고, 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, 표제 화합물 (74.7 mg, 수율 60 ％) 을 얻었다.

실시예 10 N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로펜트-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 10)

실시예 9 (3) 에 준하여, 참고예 2 (2a) 화합물 대신에, 참고예 2 (2b) 화합물을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 11 N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헵트-3-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 11)

실시예 9 (3) 에 준하여, 참고예 2 (2a) 화합물 대신에, 참고예 5 화합물을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 12 N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 12)

실시예 12 (1) tert-부틸(3-(5-요오드-7-토실-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트 (화합물 12 (1))

4-클로로-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (3.89 g), 참고예 1 (2b) (12.3 g), 인산삼칼륨 (13.4 g) 에 1,4-디옥산 (78 ㎖), 물 (13 ㎖) 을 첨가하고, 질소 치환한 후, PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂(1.85 g) 를 첨가하고, 100 ℃ 에서 14 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산에틸과 물을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, tert-부틸(3-(7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트를 얻었다.

얻어진 본 화합물에 DMF (50 ㎖) 를 첨가하여 0 ℃ 로 냉각시킨 후, N-요오드숙신이미드 (4.03 g) 를 첨가하고, 0 ℃ 에서 30 분간 교반했다. 반응 혼합물에 0.5 M 아황산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출하여, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, tert-부틸(3-(5-요오드-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트를 얻었다.

얻어진 상기 요오드체에 DMF (50 ㎖) 를 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 60 ％ 수소화나트륨 (1.01 g), 이어서 염화파라톨루엔술포닐 (2.63 g) 을 첨가하고, 0 ℃ 에서 30 분간 교반했다. 반응 혼합물에, 빙수를 첨가한 후, 수층을 아세트산에틸로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 목적물 (2.41 g, 수율 16 ％) 을 얻었다.

실시예 12 (2) N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 12)

화합물 12 (1) (30 mg), 페닐보론산 (10 mg), 인산삼칼륨 (32 mg) 에 1,4-디옥산 (1.8 ㎖), 물 (0.3 ㎖) 을 첨가하여 질소 치환한 후, PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂(7.4 mg) 를 첨가하고, 100 ℃ 에서 2 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산에틸과 물을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출하여, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다.

얻어진 잔류물에 THF (1.0 ㎖) 와 1.0 M 테트라부틸암모늄플루오리드의 THF 용액 (1.0 ㎖) 을 첨가하고, 실온에서 4 시간 교반했다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후, 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, tert-부틸(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)카르바메이트를 얻었다.

얻어진 본 화합물에 메탄올 (1 ㎖), 4 M 염산의 1,4-디옥산 용액 (1 ㎖) 을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 농축했다. 질소 분위기하로 한 후, 디클로로메탄 (1 ㎖) 과 디이소프로필에틸아민 (0.1 ㎖) 을 첨가하여 0 ℃ 냉각시켰다. 염화아크릴로일 (0.012 ㎖) 을 첨가하여 30 분간 교반한 후, 순차 암모니아 수용액, 클로로포름, 메탄올을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물을 클로로포름으로 추출하고, 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, 표제 화합물 (18 mg) 을 얻었다.

실시예 13 N-(3-(5-(티오펜-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 13)

실시예 12 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, 티오펜-2-일보론산을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 14 N-(3-(5-(티오펜-3-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 14)

실시예 12 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, 티오펜-3-일보론산을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 15 N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 15)

실시예 5 에 준하여, 화합물 1 (1) 대신에 화합물 12 (1) 을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

실시예 16 N-(3-(5-(푸란-3-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-2-엔-1-일)아크릴아미드 (화합물 16)

실시예 9 에 준하여, 페닐보론산 대신에 푸란-3-일보론산에, 또 참고예 2 (2a) 대신에, 참고예 1 (2b) 를 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

ESI-MS m/z 335(MH⁺)

비교예 1 N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)메타크릴아미드

실시예 1 (2) 에 준하여, 염화아크릴로일 대신에, 염화메타크릴로일을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

비교예 2 (E)-N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)부트-2-에나미드

실시예 1 (2) 에서 얻어진 tert-부틸(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)카르바메이트 (50 mg) 에 메탄올 (1 ㎖) 과 4 M 염산의 1,4-디옥산 용액 (1 ㎖) 을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반하여, 반응 혼합물을 감압 농축했다. 질소 분위기하로 한 후, 디클로로메탄 (2 ㎖) 과 디이소프로필에틸아민 (0.2 ㎖) 을 첨가하여 0 ℃ 냉각시켰다. 염화(E)-부트-2-에노일 (0.02 ㎖) 을 첨가하여 30 분간 교반한 후, 순차 암모니아 수용액, 클로로포름, 메탄올을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물을 클로로포름으로 추출하고, 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, 표제 화합물 (41.1 mg, 수율 90 ％) 을 얻었다.

비교예 3 N-(3-(5-(3-시아노페닐)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드

실시예 1 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, (3-시아노페닐)보론산을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

비교예 4 N-(3-(5-(p-톨릴)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드

실시예 1 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, p-톨릴보론산을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

비교예 5 N-(3-(5-(3-플루오로페닐)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드

실시예 1 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, (3-플루오로페닐)보론산을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

비교예 6 N-(3-(5-(피리딘-3-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드

실시예 1 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)피리딘을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

비교예 7 N-(3-(5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드

실시예 1 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)-1H-피라졸을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

비교예 8 N-(3-(5-(피리미딘-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드

실시예 5 에 준하여, 트리부틸(푸란-2-일)스탄난 대신에, 2-(트리부틸스타닐)피리미딘을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

비교예 9 N-(3-(5-(벤조푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드

실시예 1 (2) 에 준하여, 페닐보론산 대신에, 벤조푸란-2-일보론산을 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

비교예 10 4-(시클로헥스-1-엔 1-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘

4-클로로-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (30 mg), 2-(시클로헥스-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란 (48.8 mg), 인산삼칼륨 (124 mg) 에 1,4-디옥산 (2.0 ㎖), 물 (0.3 ㎖) 을 첨가하고, 질소 치환한 후, PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂(28.5 mg) 를 첨가하고, 100 ℃ 에서 14 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산에틸과 물을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출하여, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 목적물 (15 mg, 수율 38 ％) 을 얻었다.

비교예 11

비교예 11 (1a) tert-부틸((1S,3R)-3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥실)카르바메이트

비교예 11 (1b) tert-부틸((1S,3S)-3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥실)카르바메이트

4-클로로-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘 (2.0 g), 참고예 3 화합물 (5.1 g), 인산삼칼륨 (6.9 g) 에 1,4-디옥산 (72 ㎖), 물 (12 ㎖) 을 첨가하고, 질소 치환한 후, PdCl₂(dppf)CH₂Cl₂(1.4 g) 를 첨가하고, 100 ℃ 에서 14 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 클로로포름과 물을 첨가한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 클로로포름으로 추출하고, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세톤) 로 정제하여, 대응하는 커플링체를 얻었다. 얻어진 커플링체는 다시 정제하는 일 없이 다음의 반응에 사용했다.

얻어진 커플링체에 THF (200 ㎖) 와 10 ％ 팔라듐탄소 촉매 (2.0 g) 를 첨가하고, 수소 분위기하로 치환한 후, 실온에서 14 시간 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트 여과하고, THF 로 세정한 후, 여과액을 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세톤) 로 정제하여, 대응하는 커플링체 (3.12 g, 수율 76 ％) 를 얻었다.

ESI-MS m/z 317(MH⁺)

얻어진 커플링체 (3.04 g) 에 DMF (30 ㎖) 를 첨가하여 0 ℃ 로 냉각시킨 후, N-요오드숙신이미드 (2.59 g) 를 첨가하고, 0 ℃ 에서 30 분간 교반했다. 반응 혼합물에 0.5 M 아황산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출하여, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세톤) 로 정제하여, 대응하는 요오드체를 얻었다. 얻어진 요오드체는 다시 정제하는 일 없이 다음의 반응에 사용했다.

얻어진 요오드체에 DMF (36 ㎖) 를 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 60 ％ 수소화나트륨 (0.72 g), 이어서 염화파라톨루엔술포닐 (1.86 g) 을 첨가하고, 0 ℃ 에서 30 분간 교반했다. 반응 혼합물에, 빙수를 첨가한 후, 수층을 아세트산에틸로 추출하여, 합한 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 대응하는 토실체 (4.22 g, 수율 74 ％) 를 얻었다.

ESI-MS m/z 597(MH⁺)

토실체 (4.20 g) 와 트리부틸(푸란-2-일)스탄난 (5.03 g) 에 DMF (42 ㎖) 를 첨가하여 질소 치환한 후, PdCl₂(PPh₃)₂(494 mg) 를 첨가하여 100 ℃ 에서 30 분간 가열 교반했다. 반응 혼합물에 포화 탄산수소나트륨 수용액과 아세트산에틸을 첨가하여 교반한 후, 셀라이트 여과했다. 여과액을 아세트산에틸로 추출한 후, 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세트산에틸) 로 정제하여, 비교예 11 (1a) (1.71 g, 수율 45 ％), 비교예 11 (1b) (1.99 g, 수율 53 ％) 를 각각 얻었다.

비교예 11 (a) N-((1S,3R)-3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥실)아크릴아미드

비교예 11 (1a) (1.70 g) 를 THF (8.5 ㎖) 에 용해하고, 1.0 M 테트라부틸암모늄플루오리드의 THF 용액 (6.3 ㎖) 을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물에 0.067 M 인산 완충액 pH 7.4 를 첨가하고, 아세트산에틸로 추출했다. 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 ： 아세톤) 로 정제하여, 대응하는 탈토실체를 얻었다. 얻어진 탈토실체는 다시 정제하는 일 없이 다음의 반응에 사용했다.

얻어진 탈토실체에 메탄올 (10 ㎖) 과 4 M 염산의 1,4-디옥산 용액 (10 ㎖) 을 첨가하고, 실온에서 40 분간 교반하여, 반응 혼합물을 감압 농축했다. 질소 분위기하로 한 후, 디클로로메탄 (20 ㎖) 과 디이소프로필에틸아민 (5.28 ㎖) 을 첨가하여 0 ℃ 로 냉각시켰다. 염화아크릴로일 (0.49 ㎖) 을 첨가하여 30 분간 교반한 후, 순차 암모니아 수용액, 클로로포름, 메탄올을 첨가하여 실온에서 1 시간 교반했다. 반응 혼합물을 클로로포름으로 추출하고, 합한 유기층을 포화 식염수로 세정하여, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 ： 메탄올) 로 정제하여, 표제 화합물 (657 mg, 수율 62 ％) 을 얻었다.

비교예 11 (b) N-((1S,3S)-3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥실)아크릴아미드

비교예 11 (a) 에 준하여, 비교예 11 (1a) 대신에 비교예 11 (1b) 를 사용함으로써, 표제 화합물을 얻었다.

비교예 12 N-(3-(5-페닐-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)페닐)아크릴아미드

국제 공개 제2013/085802호에 기재된 방법에 의해, 표제 화합물을 얻었다.

ESI-MS m/z 341(MH⁺)

[표 2-1]

[표 2-2]

[표 3-1]

[표 3-2]

시험예

본 발명에 관련된 화합물을, 이하의 시험법을 사용하여 평가했다.

시험예 1 각종 JAK 키나아제 활성 저해 작용 시험 (in vitro)

1) JAK1 키나아제 저해 활성 측정

본 발명 화합물의 JAK1 키나아제 활성에 대한 저해 활성을 측정했다.

이 저해 활성 측정의 재료 중 기질 펩티드와 키나아제 단백질은 이하와 같이 입수했다. 기질 펩티드에는 QSS Assist^TMJAK1-MSA 어세이 키트용 기질 펩티드 (카르나바이오 사이언스사) 를 구입했다. 키나아제 단백질에는 정제 리콤비넌트 인간 JAK1 단백질 (카르나바이오 사이언스사) 을 구입했다.

저해 활성 측정 방법은 이하와 같다. 먼저, 본 발명 화합물 각각을 디메틸술폭시드 (DMSO) 로 용해한 후, DMSO 로 계열 희석을 조제했다. 다음으로, 화합물의 계열 희석 용액 (키나아제 반응 시의 DMSO 의 종농도는 5.0 ％) 혹은 DMSO (종농도는 5.0 ％) 와, 키나아제 반응용 완충액 (20 mM HEPES (pH 7.5), 2 mM 디티오트레이톨 (dithiothreitol), 0.01 ％ 트리톤 (Triton) X-100) 중에 기질 펩티드 (종농도는 1 μM), 염화마그네슘 (종농도는 5 mM), ATP (종농도는 75 μM) 를 포함하는 용액을 혼합하고, 추가로 JAK1 단백질을 첨가하여 25 ℃ 에서 120 분간 인큐베이션하여 키나아제 반응을 실시했다. 거기에, 종농도 30 mM 이 되도록 EDTA 를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 마지막으로, LabChip EZ Reader II (파킨에르마사) 로 인산화되지 않은 기질 펩티드 (S) 와 인산화된 펩티드 (P) 를 마이크로 유로 캐필러리 전기 영동에 의해 분리·검출했다. S 와 P 각각의 피크의 높이로부터 인산화 반응량을 구하고, 인산화 반응을 50 ％ 억제할 수 있는 화합물 농도를 IC₅₀치 (nM) 로 정의하여 이하의 표에 나타냈다.

2) JAK2 키나아제 저해 활성 측정

본 발명 화합물의 JAK2 키나아제 활성에 대한 저해 활성을 측정했다.

이 저해 활성 측정의 재료 중 기질 펩티드와 키나아제 단백질은 이하와 같이 입수했다. 기질 펩티드에는 FL-Peptide 22 (파킨에르마사) 를 구입했다. 키나아제 단백질에는 정제 리콤비넌트 인간 JAK2 단백질 (카르나바이오 사이언스사) 을 구입했다.

저해 활성 측정 방법은 이하와 같다. 먼저, JAK1 의 섹션에 기재한 것과 동일한 방법으로 본 발명 화합물의 계열 희석을 조제했다. 이 계열 희석 용액 (키나아제 반응 시의 DMSO 의 종농도는 5.0 ％) 혹은 DMSO (종농도는 5.0 ％) 와, 키나아제 반응용 완충액 (15 mM Tris (pH 7.5), 2 mM 디티오트레이톨 (dithiothreitol), 0.01 ％ 트윈20 (Tween20)) 중에 기질 펩티드 (종농도는 1 μM), 염화마그네슘 (종농도는 10 mM), ATP (종농도는 10 μM) 를 포함하는 용액을 혼합하고, 추가로 JAK2 단백질을 첨가하여 25 ℃ 에서 80 분간 인큐베이션하여 키나아제 반응을 실시했다. 거기에, 종농도 30 mM 이 되도록 EDTA 를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응 정지 후, JAK1 의 섹션에 기재한 것과 동일한 방법으로 측정과 데이터 해석을 실시했다.

3) JAK3 키나아제 저해 활성 측정

본 발명 화합물의 JAK3 키나아제 활성에 대한 저해 활성을 측정했다.

이 저해 활성 측정의 재료 중 기질 펩티드와 키나아제 단백질은 이하와 같이 입수했다. 기질 펩티드에는 QSS Assist^TMJAK3-MSA 어세이 키트용 기질 펩티드 (카르나바이오 사이언스사) 를 구입했다. 키나아제 단백질에는 정제 리콤비넌트 인간 JAK3 단백질 (카르나바이오 사이언스사) 을 구입했다.

저해 활성 측정 방법은 이하와 같다. 먼저, JAK1 의 섹션에 기재한 것과 동일한 방법으로 본 발명 화합물의 계열 희석을 조제했다. 이 계열 희석 용액 (키나아제 반응 시의 DMSO 의 종농도는 5.0 ％) 혹은 DMSO (종농도는 5.0 ％) 와, 키나아제 반응용 완충액 (20 mM HEPES (pH 7.5), 2 mM 디티오트레이톨 (dithiothreitol), 0.01 ％ 트리톤 (Triton) X-100) 중에 기질 펩티드 (종농도는 1 μM), 염화마그네슘 (종농도는 5 mM), ATP (종농도는 5 μM) 를 포함하는 용액을 혼합하고, 추가로 JAK3 단백질을 첨가하여 25 ℃ 에서 80 분간 인큐베이션하여 키나아제 반응을 실시했다. 거기에, 종농도 30 mM 이 되도록 EDTA 를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응 정지 후, JAK1 의 섹션에 기재한 것과 동일한 방법으로 측정과 데이터 해석을 실시했다.

결과를 이하의 표에 나타낸다.

[표 4]

이상의 결과로부터, 본 발명 화합물은 JAK3 의 저해 활성이 매우 강하고, 또한 JAK1 혹은 JAK2 의 선택성이 IC₅₀치에 있어서 100 배 이상 확인되었다. 그에 대해, 비교예 화합물 1, 2 및 8 은 JAK3 의 저해 활성이 본 발명 화합물과 비교해서 20 배 이상 감약 (減弱) 되었다. 동일하게 비교예 화합물 10 도 100 배 이상 감약되어 있고, 또한 JAK1, JAK2 의 선택성은 확인되지 않았다.

시험예 2 인간 말초혈 단핵구 (PBMC) 증식 시험

JAK3 에서 기인하는 인간 PBMC 의 IL-2 의존 증식 반응에 대한 본 발명 화합물의 저해 활성을 측정했다 (Arthritis Rheum. 2010 ； 62 (8) ： 2283-93).

10 ㎍/㎖ 의 PHA-M (Sigma 사) 을 첨가한 배지 (10 ％ 의 인간 혈청 AB 형 (MP Biomedicals 사) 을 포함하는 RPMI-1640 (Sigma 사)) 를 사용하여, 1 × 10⁶ 세포/㎖ 의 밀도로 한 인간 PBMC (C. T. L. 사) 를 37 ℃, 5 ％ 탄산 가스 함유의 배양기 중에서 3 일간 배양했다. RPMI-1640 으로 4 회 세정 후, 배지 (10 ％ 의 인간 혈청 AB 형을 포함하는 RPMI-1640) 를 첨가함으로써, 세포 현탁액을 조제했다. 96 웰 U 바닥 (底) 마이크로 플레이트의 각 웰에 1 × 10⁴ 개씩의 세포 및 단계 희석한 본 발명 화합물을 첨가하고, 37 ℃, 5 ％ 탄산 가스 함유의 배양기 중에서 30 분간 배양했다. 배양 후, 2 ng/㎖ 의 종농도가 되도록 리콤비넌트 인간 IL-2 (Peprotech 사) 를 첨가하고, 37 ℃, 5 ％ 탄산 가스 함유의 배양기 중에서 2 일간 배양했다 (1 × 10⁴개/ 100 ㎕/각 웰). 배양 후, 실온에 30 분간 방치하고, 100 ㎕ 의 CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega 사) 를 첨가하여, 교반했다. 10 분간 방치한 후, 마이크로 플레이트 리더 (TECAN 사) 로 각 웰의 생세포 유래 발광량을 측정했다. IL-2 자극에 의한 세포 증식에 대한 억제율을 산출하고, 세포 증식을 50 ％ 억제할 수 있는 화합물 농도를 IC₅₀치 (nM) 로 정의하여 이하의 표에 나타냈다.

[표 5]

이상의 결과로부터, 본 발명 화합물은 인간 PBMC 증식 억제의 IC₅₀치가 약 100 nM 이하라는 매우 강한 증식 억제가 확인되었다. 그에 대해, 비교예 화합물의 IC₅₀치는 1000 nM 이상으로 감약되어 있었다.

시험예 3 경구 흡수성의 평가

본 발명 화합물을 0.1 N HCl, 0.5 ％ HPMC 수용액에 현탁 또는 용해하고, BALB/cA 마우스에 경구 투여했다. 경구 투여 후, 0.5, 1, 2, 4 및 6 시간 후에 안저 채혈하여 혈장을 얻었다. 얻어진 혈장 중의 화합물 농도를 LCMS 에 의해 측정하고, 혈중 농도-시간 곡선 하면적 (AUC) 의 값을 구했다. 결과, 본 발명 화합물은, 양호한 경구 흡수성을 나타냈다.

시험예 4 마우스 IL-2 유발 IFN-γ 산생 시험

JAK3 에서 기인하는 마우스 IL-2 유발 IFN-γ 산생에 대한 본 발명 화합물과 비교예 화합물의 저해 활성을 측정했다 (Arthritis Rheum. 2010 ； 62 (8) ： 2283-93, Inflammation Research 2015 ； 64 (1) ： 41-51).

7 주령 웅성의 BALB/c 마우스 (닛폰 찰스·리버) 를 5 군 (각 군 6 마리) 으로 나누어, 비히클 (Vehicle) 군, 화합물 7 1 mpk 군, 화합물 7 3 mpk 군, 비교예 12 1 mpk 군, 비교예 12 3 mpk 군으로 했다. 1 mpk 군과 3 mpk 군에 화합물 7 또는 비교예 12 를 각각 1 mg/kg, 3 mg/kg 경구 투여하고, 30 분 후에 비히클 (Vehicle) 군, 화합물 7 1 mpk 군, 화합물 7 3 mpk 군, 비교예 12 1 mpk 군, 비교예 12 3 mpk 군에 각각 IFN-γ 포착 항체 (BD Biosciences 사, 10 ㎍/마우스) 와 리콤비넌트 인간 IL-2 (Peprotech 사, 10 ㎍/마우스) 의 혼합 용액을 200 ㎕ 의 용량으로 복강 내 투여했다. IL-2 투여로부터 3 시간 후에 전체 5 군을 채혈하고, 혈청 중의 IFN-γ 농도를 BD In Vivo Capture Assay for Mouse IFN-γ (BD Biosciences 사) 를 사용하여 측정했다. IL-2 자극에 의해 산생되는 IFN-γ 의 상대량을

IFN-γ 의 상대량 (％) = (각 군의 IFN-γ 농도) × 100/(비히클군의 IFN-γ 농도)

의 계산식에 의해 산출하고, 도 1 (평균치 ± 표준 오차 ： vs 비히클에 대해서는 Dunnett 검정, * ： p ＜ 0.05, *** ： p ＜ 0.001 ； vs 비교예 12 (3 mpk) 에 대해서는 Student t 검정, ＃＃： p ＜ 0.01) 에 나타냈다.

이상의 결과로부터, 본 발명 화합물은, In vivo 에 있어서, 통계 상 유의하게 IFN-γ 산생의 억제를 나타냈다. 한편, 비교예 12 의 화합물은 본 발명 화합물에서 보여지는 바와 같은 유의한 IFN-γ 산생의 억제 작용을 나타내지 않았다.

시험예 5 관절 류머티즘에 대한 치료 효과

관절 류머티즘의 마우스 실험 모델인 콜라겐 유발 관절염 (Collagen-Induced Arthritis) 을 사용했다. 관절염의 임상 증상을 스코어화하고, 스코어를 지표로 하여 본 발명 화합물의 경구 투여에 의한 작용을 확인했다. 7 주령 웅성의 DBA/1 마우스 (닛폰 찰스·리버) 에 소 타입 2 콜라겐 용액 (콜라겐 기술 연수회) 4 mg/㎖ 와 프로인트의 완전 아쥬반트 (DIFCO) 의 등량 혼합 용액 (에멀션) 10 ㎕/body 를 배부 피내 주사했다 (첫회 면역). 그 21 일 후, 소 타입 2 콜라겐 용액 (콜라겐 기술 연수회) 4 mg/㎖ 와 프로인트의 불완전 아쥬반트 (DIFCO) 의 등량 혼합 용액 (에멀션) 10 ㎕/body 를 미근부에 피내 주사하여 (추가 면역), 관절염 반응을 유도했다 (Arthritis Rheum 2010-62 (8) ： 2283-93). 본 발명 화합물과 토파시티니브는 추가 면역의 실시일 (제 0 일로 한다) 의 8 일 후부터 15 일간, 50 mg/kg (50 mpk) 으로의 1 일 2 회의 경구 투여, 프레드니졸론은 추가 면역의 실시일의 8 일 후부터 15 일간, 0.3 mg/kg (3 mpk) 으로의 1 일 1 회의 경구 투여를 계속했다. 제 8 일, 제 11 일, 제 14 일, 제 17 일, 제 22 일에 육안으로 관절염의 임상 증상을 스코어화, 본 발명 화합물의 작용을 확인했다. 일지 (一肢) 의 임상 증상에 대해 각각 점수화하고 (○ ： 변화 없음, 1 ： 손가락 1 개의 종창, 2 ： 손가락 2 개 이상의 종창, 3 ： 발등의 종창, 4 ： 전체 손가락의 종창 또한 손발목에 미치는 종창), 사지의 합계를 개체의 점수 (최고 16 점) 로 했다.

그 결과, 본 발명 화합물은, 관절 류머티즘에 대해 우수한 치료 효과를 나타냈다.

임상 증상 스코어의 평균치 (사지 합계) 를,

임상 증상 스코어의 평균치 (사지 합계) = 오른쪽 앞다리의 임상 증상 스코어의 평균치 ＋ 왼쪽 앞다리의 임상 증상 스코어의 평균치 ＋ 오른쪽 뒷다리의 임상 증상 스코어의 평균치 ＋ 왼쪽 뒷다리의 임상 증상 스코어의 평균치

의 계산식에 의해 산출하여, 도 2 에 나타냈다.

시험예 6 다발성 경화증에 대한 치료 효과

다발성 경화증의 마우스 실험 모델인 실험적 자기 면역성 뇌척수염 (Experimental Autoimmune Encephalomyelitis) 을 사용했다. 8 주령 자성의 SJL/J 마우스 (닛폰 찰스·리버) 에 프로테오리피드 단백의 139-151 잔기에 상당하는 펩티드 (토오레 리서치 센터) 의 생리 식염수 용액 (1 mg/㎖) 과 4 mg/㎖ 의 결핵사균 (H37Ra) 을 포함하는 프로인트의 완전 아쥬반트 (DIFCO) 의 등량 혼합 용액 (에멀션) 을 마우스의 배부 2 지점에 100 ㎕ 씩 피하 주사하여, 뇌척수염을 유도했다. 본 발명 화합물은 면역 실시일 (제 0 일로 한다) 의 7 일 후부터 4 주간, 1 일 2 회의 경구 투여를 계속했다. 제 0 일, 제 2 일, 제 5 일, 제 7 일 ∼ 제 35 일에 육안으로 뇌척수염의 임상 증상을 관찰하고, 본 발명 화합물의 작용을 확인했다. 임상 증상에 대해서는 점수화를 실시했다 (0 ： 증상 없음, 1 ： 꼬리가 약해짐, 1.5 ： 꼬리의 완전 하수, 2 ： 운동 실조, 3 ： 뒷다리의 경마비, 3.5 ： 뒷다리의 마비, 4 ： 뒷다리의 완전 마비, 4.5 ： 사지 마비, 빈사, 5 ： 사망).

그 결과, 본 발명 화합물은, 다발성 경화증에 대해 우수한 치료 효과를 나타냈다.

Claims

하기 식 (I)
[화학식 1]

［식 중, X 는 -CH=CH-, -NH-, 황 원자 또는 산소 원자를 나타내고 ； n 은 0 ∼ 2 의 정수를 나타낸다.］
로 나타내는 화합물 또는 그 염.
제 1 항에 있어서,
X 가 -CH=CH-, 황 원자 또는 산소 원자이며, n 이 0 또는 1 인 화합물 또는 그 염.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
[화학식 2]

식 (I) 중, 상기의 구조가 이하의 어느 구조이며 ； ,
[화학식 3]

[화학식 4]

식 (I) 중, 상기의 구조가 이하의 어느 구조인 화합물인 화합물 또는 그 염.
[화학식 5]
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
화합물이 N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드 또는 (S)-N-(3-(5-(푸란-2-일)-7H-피롤로［2,3-d］피리미딘-4-일)시클로헥스-3-엔-1-일)아크릴아미드인 화합물 또는 그 염.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효 성분으로 하는 JAK3 저해제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염을 함유하는 의약 조성물.
제 6 항에 있어서,
의약 조성물이, JAK3 이 관여하는 질환을 치료하기 위한 의약 조성물인 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염을 유효 성분으로 하는 관절 류머티즘 또는 다발성 경화증의 치료제.
JAK3 저해제를 제조하기 위한 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 사용.
의약 조성물을 제조하기 위한 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된화합물 또는 그 염의 사용.
제 10 항에 있어서,
의약 조성물이, JAK3 이 관여하는 질환을 치료하기 위한 의약 조성물인 사용.
관절 류머티즘 또는 다발성 경화증의 치료약 제조를 위한 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 사용.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
JAK3 저해에 사용하기 위한 화합물 또는 그 염.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
의약으로서 사용하기 위한 화합물 또는 그 염.
제 14 항에 있어서,
의약이, JAK3 이 관여하는 질환을 치료하기 위한 의약인 화합물 또는 그 염.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
관절 류머티즘 또는 다발성 경화증의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그 염.
JAK3 저해 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에게, 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
JAK3 이 관여하는 질환의 치료 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에게, 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
관절 류머티즘 또는 다발성 경화증의 치료 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에게, 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 그 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.