KR20180027532A - 소수성 약물의 효능 개선용 제형 - Google Patents

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KR20180027532A
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레이놀드 호만
윌리엄 엘 엘리엇
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펩티노보 바이오파마, 엘엘씨
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Abstract

신규한 양친매성 펩타이드, 펩타이드 양친매체 지질 미셀, 양친매성 펩타이드 및 인지질을 포함하고 선택적으로 화물 분자를 포함하는 펩타이드 양친매체 지질 미셀의 제조 방법, 및 이용 방법.

Description

소수성 약물의 효능 개선용 제형
관련 출원에 대한 교차 참조
본 PCT 출원은 2015년 7월 10일 출원된, 미국 가출원 일련 번호 62/190,909의 이익을 주장한다. 이의 개시내용은 이로써 그 전문이 참고로 편입된다.
서열 목록
본 출원은, 29 KB인, 2015년 7월 1일, 1:17 pm에 창작되었고, 여기 전자적으로 제출된 "236603-371638_Sequence_Listing_ST25.txt" 명칭의 서열목록을 그 전문이 참고로 편입한다.
분야
본 발명은 비경구 투여를 통해 그들의 작용 부위에 치료 분자의 수송 및 전달에 관한 것이다. 더 상세하게는, 본 발명은 그들의 치료 표적에 편입된 약물의 안전한 및 효과적인 전달을 위하여 비경구로 쉽게 투여될 수 있는 나노입자 속에 약물의 편입을 가능하게 하는 배합 기술에 관한 것이다.
전신으로 작동하는 많은 치료 서브스턴스는 경구 투여의 상대 단순성에 적합하지 않고 대신 비경구로 투여되어야 한다. 그러나, 종종 경구 투여를 복잡하게 하는 동일한 인자는 비경구 투여 공정을 방해한다. 상기 인자는 소수성 또는 다른 특성으로 인한 좋지 못한 수용성, 소화관에서 약물 불안정, 불충분한 흡수 또는 흡수 이후 향상된 청소능을 포함하여, 부적절한 혈장 농도 및/또는 노출 시간을 초래한다.
비경구 투여를 요구하는 소수성 약물을 다루는 옵션은 일반적으로 주사에 적합한 안정적인 현탁액, 분산물 또는 용액을 수득하기 위해 다양한 부형제의 첨가를 포함한다. 사용된 부형제의 유형은 세제, 다양한 유형의 폴리머, 오일 에멀젼, 인지질 및 알부민을 포함한다. 많은 사례에서 필요한 약물 가용화를 수득하는데 사용된 부형제는 세제-유사 서브스턴스이다. 이들은 데옥시콜레이트; 피마자유의 폴리에틸록세이티드(polyehtyloxated) 유도체인, Cremophor EL®; 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 후자 2개는 에탄올과 동시에 전형적으로 사용된다. 이들 제제들은 가용화 문제를 해결하지만 이들은 고위험의 과민증 반응을 도입하는 유독한 특성을 갖는다. Cremophore EL® 또는 폴리소르베이트 80을 함유하는 용액으로 주사된 환자가 제형-의존적 염증을 완화하기 위해 항-염증성 약물로 처리되는 것이 통상 요건이다. 과민증 반응의 가장 심각한 결과는 치료에 대한 감소된 내성 및 증가된 사망의 위험이다.
가용화를 위하여 Cremophore EL® 또는 폴리소르베이트 80을 함유하는 승인된 약물 제형의 예는 소수성 항-암 약물 파클리탁셀 (Taxol®), 도세탁셀 (Taxotere®), 카바지탁셀 (Jevtana®) 및 익사베필론 (Ixempra®)을 포함한다. 면역억제제 사이클로스포린 (Sandimmune®), 타크롤리무스 (Prograf®) 및 템시롤리무스 (Torisel®)은 또한 이들 배합용 제제들에 의존한다. 파클리탁셀의 경우에서, 일부 진전이 분산제 (즉 Abraxane®)로서 Cremophore EL® 및 에탄올로 알부민의 치환을 통해 실시되고 있다. 항진균제 암포테리신 B는 또한 상당히 소수성이고 안정적인 주입용 현탁액을 수득하기 위한 조치를 요구하다.
많은 약물이 직면하는 다른 투여 난관은 대사 경로에 의한 불활성화 및 급속 청소능을 포함한다. 예를 들어, 항-암 제제 젬시타빈은 치료 수준을 수득하기 위해 시티딘 데아미나제에 의해 이의 파손을 압도하는 고용량으로 주입되어야 한다. 약물 투여를 제한하는 추가 문제는 그들 약물의 효과에 비-표적 조직의 의도되지 않은 노출이다. 이는 세포독성 항-암 약물에 특히 중요하다.
에멀젼, 미셀, 리포좀 제형, 폴리머, 및 고형-지질 나노입자를 포함하는 우월한 비경구 제형을 찾기 위한 설명은 많지만 낮은 포착 효율, 약물 불안정, 적재물 누출 및 좋지 못한 저장 안정성의 문제에 의해 많은 노력이 방해받고 있다. 일부 성공은 리포좀 제형으로 수득되고 있다. 그 예는 청소율을 감소시키기 위한 리포좀내 사이타라빈 (DepoCyt®), 심장독성을 감소시키기 위한 리포좀내 독소루비신 (Doxil®, Myocet®), 및 가용화를 개선하기 위한 리포좀내 암포테리신-B (예를 들면 AmBisome®)을 포함한다.
제한된 수의 현행 치료, 및 옵션의 부족이 제공되면, 개선된 안전성 프로파일 및 치료 지수를 가진 비경구로 투여된 약물에 대하여 제형 대안; 및/또는 공공에 유용한 선택을 적어도 제공하는 요법을 제공하는 것이 분명히 필요하다.
요약
본 개시내용은 지질 및 펩타이드의 신규한 나노입자 제형 그리고 분자, 예를 들면, 약물의 편입을 허용하고 주입 또는 주사 용액에서 안정적인 이들을 형성하는 방법의 제공에 의해 상기 필요성을 설명한다. 본 발명의 제형은, 비제한적으로, 개선된 약력학적 파라미터, 증가된 반감기, 표적화된 전달, 줄어든 독성 또는 비경구로-투여된 약물, 특히, 항-암 약물에 대하여 개선된 치료 지수를 포함하는, 하나 이상의 개선을 제공한다.
본 개시내용은 서열 식별 번호:1, 서열 식별 번호:24, 서열 식별 번호:36 또는 서열 식별 번호:59의 아미노산 서열을 포함하는 양친매성, 알파-나선 펩타이드를 제공한다.
추가로, 본 개시내용은 본 개시내용의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드, 스핑고미엘린 및 하나 이상의 추가 인지질을 포함하는 펩타이드 양친매체 지질 미셀 (PALM)을 제공한다. 본 개시내용의 PALM은 선택적으로 하나 이상의 화물 분자, 예컨대 조영제 및 약물을 포함한다.
본 개시내용은 또한 PALM 제조 방법 및 화물 분자로 제형화된 PALM 조성물을 제공한다.
추가적으로 본 개시내용은 화합물 콘주게이트 및 PALM으로 사용에 적합한 화합물 콘주게이트의 제조 방법을 제공한다.
추가로 본 개시내용은 PALM-약물 콘주게이트 투여에 의한 장애의 치료 방법을 제공한다.
도 1A 및 1B는 그들의 양친매성 형태를 각각 보여주는 서열 식별 번호: 3 및 25의 펩타이드의 에드먼드손 휘일(Edmundson Wheel) 도시이다. 도 1A 및 1B는 추가로 알파-나선의 장축 주위 (표준 단일 문자 약어로 확인된) 구성요소 아미노산의 축 위치를 보여준다. 문자 "B"는 2-아미노-이소부티르산을 나타낸다. 점선은 펩타이드의 극성 면을 형성하는 친수성 아미노산 (그늘)과 무극성 면을 형성하는 소수성 아미노산 사이 대략적 경계를 나타낸다. 도 1C 및 1D는 서열 식별 번호: 3 및 25 각각의 펩타이드의 나선형 네트 도시이다.
도 2. 인간 HDL(점선)에 비교된 미리플라틴을 함유하는 PALM (실선)의 크기 배제 크로마토그램. PALM은 2.5:3:7:0.75 몰비로 서열 식별 번호:25의 펩타이드 및 POPC, SM 및 미리플라틴으로 구성되었다.
도 3. 1:4:0.4의 펩타이드:인지질:XC 몰비로 서열 식별 번호:25의 펩타이드로 제조되고 XC를 함유하는 PALM의 크기 배제 크로마토그래프를 보여준다. 다양한 스토크 직경의 단백질 표준의 용출 위치는 마킹된다.
도 4. 서열 식별 번호:25의 펩타이드 (점선) 또는 R4F 펩타이드 (실선)으로 제조되고 XT3을 함유하는 PALM용 크기 배제 크로마토그램의 비교. 양쪽의 조성물은 1:2.8:1.2:0.4의 몰 당량 비로 펩타이드:POPC:SM:XT3이었다.
도 5. 서열 식별 번호:25의 펩타이드로 제조되고 펜레티나이드를 함유하는 PALM의 크기 배제 크로마토그램을 도시한다. PALM 조성물은 2.5:3:7:2의 몰 당량 비로 펩타이드:POPC:SM:펜레티나이드이었다.
도 6. 시스플라틴에 의한 억제에 비교된 PALM(MP)에 의한 PC3 전립선암 세포 성장의 억제
도 7. PALM(MP)에 의한 PC3 전립선암 세포 성장의 억제에 관한 SR-BI 항체의 효과. 선은 로지스틱 방정식에 데이터의 맞춤을 나타낸다.
도 8. 파클리탁셀 (원형, 점선)에 의한 억제에 비교된 PALM/(XC) (정사각형, 점선) 또는 PALM(XT3) (다이아몬드, 실선)에 의한 SKOV3 난소암 세포 성장의 억제 선은 로지스틱 방정식에 데이터의 맞춤을 나타낸다.
도 9. 표시된 바와 같이, 다양한 펩타이드로 제조되고, DiI를 함유하는 PALM은 미페프리스톤 유도성, 인간 SR-BI 유전자로 안정적으로 형질감염된 BHK(SR-BI) 세포로 인큐베이션되었다. 인큐베이션은 비-유도된 (대조군) 또는 유도된 세포로 수행되었다. DiI로 표지된, 인간 HDL은 비교로 시험되었다. 4 시간의 인큐베이션 동안 세포에 의해 취해진 DiI의 양은 형광에 의해 검출되었다.
도 10. 유도된 (SR-BI+) 또는 비-유도된 (대조군), 미페프리스톤 유도성, 인간 SR-BI 유전자를 가진 BHK(SR-BI) 세포는 12시간 동안 PTX 또는 PALM(XT3)의 표시된 농도로 인큐베이션되었다 세포는 MTT 검정에 의한 % 성장의 검출 이전 추가의 36 시간 동안 시험 제제의 부재하에 추가로 인큐베이션되었다.
도 11. SR-BI 항체는 PALM(XT3)으로부터 XT3 흡수를 차단한다 (화살표).
정의
"나노입자"는 100 nm 초과 치수를 갖지 않는 입자를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 맥락이 명확히 달리 지시하지 않는 한 복수의 참조를 포함한다.
본 개시내용에서, 용어 예컨대 "포함하다", 포함된", "포함하는", "함유하다", "함유하는" 및 기타 동종의 것이 미국 특허법에 속하는 의미를 갖고; 이들이 포괄적이거나 개방형이고 추가의, 비-인용된 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다는 것이 언급된다. 용어 예컨대 "으로 본질적으로 구성되는" 및 "으로 본질적으로 구성된다"는 미국 특허법에 속하는 의미를 갖고; 이들은 청구된 발명의 기본적 및 신규한 특징에 물질적으로 영향을 주지 않는 추가의 성분 또는 단계의 포함을 허용한다. 용어 "으로 구성된다" 및 "으로 구성되는"은 미국 특허법에서 이들에 속하는 의미를 갖고; 즉 이들 용어는 폐쇄형이다.
선행사 "약"은 값이 근사치인 것을 나타낸다. 예를 들어 "약 1 mg 내지 약 50 mg"의 범위는 값이 근사치 값인 것을 나타낸다. "약 1 mg 내지 약 50 mg"의 범위는 근사치 및 특정 값, 예를 들면, 약 1 mg, 1 mg, 약 50 mg 및 50 mg을 포함하는 범위를 나타낸다.
범위가 기재되는 경우, 그 범위는 범위의 두 종점 뿐만 아니라 그 사이의 모든 수를 포함한다. 예를 들어, "1 mg과 10 mg 사이"는 1 mg, 10 mg 및 1 mg과 10 mg 사이 모든 양을 포함한다. 마찬가지로, "1 mg 내지 10 mg"은 1 mg, 10 mg 및 1 mg과 10 mg 사이 모든 양을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "알킬"은 7-21 탄소 원자를 함유하는 포화된 지방족 탄화수소 기를 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 (C1-Cn) 알킬은 1-n 탄소 원자를 함유하는 알킬 기를 지칭한다. 예를 들어, (C8-C12) 알킬은 8, 9, 10, 11, 또는 12 탄소 원자를 함유하는 알킬 기를 지칭한다. 알킬 기는 분지형 또는 비분지형일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "알케닐"은 7-21 탄소 원자 및 적어도 하나의 이중 결합을 함유하는 지방족 탄소 기를 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 (C1-Cn) 알케닐은 1-n 탄소 원자를 함유하는 알케닐 기를 지칭한다. 알케닐 기는 분지형 또는 비분지형일 수 있다.
지질 성분을 기재하는데 사용될 때 "으로 본질적으로 구성되는"은 지질 성분이 지정된 것 이외의 0.1 mol% 미만의 임의의 추가의 지질을 포함하는 것을 의미한다.
"XC"는 파클리탁셀 2'-콜레스테릴 카보네이트의 약자이다.
XT3은 파클리탁셀 2'-δ-토코트리에닐 카보네이트의 약자이다.
"MP"는 미리플라틴의 약자이다.
"PTX"는 파클리탁셀의 약자이다
"POPC"는 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜콜린의 약자이다
"SM"은 스핑고미엘린의 약자이다
"HDL"은 고밀도 지질단백질의 약자이다.
"SR-BI"는 포착제 수용체 부류 B, 1형의 약자이다.
"BHK"는 어린 햄스터 신장의 약자이다.
"DiI"는 1,1'-디옥타데실-3,3,3',3'-테트라메틸인도카보시아닌의 약자이다
"PALM"은 수성 현탁액에서 인지질 및 선택적으로 다른 소수성 분자와 양친매성 펩타이드의 조합으로부터 형성된 펩타이드 양친매체 지질 미셀을 확인하는데 사용된 머리글자이다.
"양친매성"은 분자 또는 폴리머에서 친수성 (물 추구) 치환체 및 소수성 (물 회피) 치환체가 서로 구조적으로 격리되는 형태 때문에 지질 및 수성상 둘 모두에 대하여 친화도를 가진 분자 또는 폴리머 (예를 들면 펩타이드)를 설명한다.
"친유성"은 수성 현탁액내 지질-풍부 입자의 지질 도메인에 우선적으로 분배하는 서브스턴스를 설명한다. 지질-풍부 입자는 지질 미셀, 리포좀, 지질단백질, 세포 막 및 지질 에멀젼을 포함한다.
"펩타이드"는 폴리머에서 하나의 아미노산의 카복실 기와 다음 아미노산의 알파-아민 기 사이 형성된 아미드 결합에 의해 함께 연결된 알파-아미노산 모노머로부터 생산된 폴리머이다. "펩타이드"는 또한 함께 연결된 아미노산 모노머의 폴리머를 포함한다. 아미노산의 L-광학 이성질체 및 D-광학 이성질체 둘 모두가 사용될 수 있다. 폴리머를 구성하는 아미노산은 자연에서 발견된 것 (즉 천연 아미노산) 또는 비-천연 아미노산일 수 있다. 용어 "잔기" 또는 "아미노산 잔기"는 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 단백질 속에 편입되는 아미노산에 대한 참조를 포함한다.
종래에 따른, 및 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 펩타이드 서열은 좌측에서 우측으로 N-말단에서 C-말단으로 기재된다.
"미셀"은 수성상에서 비-공유 상호작용에 의해 조직화된 다중-분자 구조이다. 미셀은 분자의 소수성 도메인이 물로부터 보호되고 친수성 구성요소가 미셀-물 계면에 있는 그와 같은 방식으로 응집하는 양친매성 및 소수성 분자로 구성된다.
"화물 분자"는 PALM 속에 안정적으로 편입되고 PALM의 안정성을 파괴하지 않는 약제학적, 치료 또는 진단 특성을 가진 소수성 또는 양친매성 분자이다.
"siRNA"는 RNA-유도된 유전자 침묵 복합체의 일부로서 세포 유전자 발현을 제어하기 위해 창출된 작은, 간섭하는 리보핵산이다.
"Aib"는 아미노산 알파-아미노 이소부티르산의 3 문자 코드이다.
"Aba"는 아미노산 알파-아미노 부티르산의 3 문자 코드이다.
"Amv"는 비천연 아미노산 알파-메틸 발린의 3 문자 코드이다.
"Orn"은 아미노산 오르니틴의 3 문자 코드이다.
"SEC"는 크기 배제 크로마토그래피이다
"DLS"는 동적 광 산란이다
본 개시내용의 제1 측면은 "양친매성 펩타이드"를 제공한다. 양친매성 펩타이드는 나선이 나선의 장축을 따라 배향된 대향하는 극성 및 무극성 면을 갖는 알파 나선 형태를 채택할 수 있다. 펩타이드 합성 기술은 당해 기술에 공지되어 있다. 본 개시내용의 펩타이드는 당해 기술에 공지된 임의의 기술에 의해 합성될 수 있다.
표 1은 몇 개의 선행기술 서열과 비교된 본 개시내용의 특이적인 양친매성 펩타이드의 전하 분포를 보여준다. 본 발명의 펩타이드의 전하 분포는 아래 보여진 선행기술의 점에서 신규하다.
Figure pct00001
본 개시내용의 제1 측면의 하나의 구현예는 X1이 아미노산 D이고; X2 및 X20이 각각 아미노산 V이고; X3, X6, X10 및 X13이 각각 L 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4, X12 및 X19가 각각 아미노산 Q이고; X5가 아미노 A 또는 Aib이고; X7, X16 및 X18이 각각 아미노산 K이고; X8 및 X15가 각각 아미노산 E이고; X9 및 X14가 각각 A, L, F 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X11이 A, Aib 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X17이 W, F 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인, 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:1)을 포함하는 펩타이드로서, 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인, 펩타이드를 제공한다.
제1 측면의 또 다른 구현예는 X1이 아미노산 D이고; X2 및 X20이 각각 아미노산 V이고; X3, X6, X10 및 X13이 각각 L 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4, X12 및 X19가 각각 아미노산 Q이고; X5가 아미노 A 또는 Aib이고; X7, X16 및 X18이 각각 아미노산 K이고; X8 및 X15가 각각 아미노산 E이고; X9 및 X14가 각각 A, L, F 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X11이 A, Aib 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X17이 W, F 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인, 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:1)로 본질적으로 구성되는 펩타이드로서, 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인, 펩타이드를 제공한다.
제1 측면의 더욱 또 다른 구현예는 X1이 아미노산 D이고; X2 및 X20이 각각 아미노산 V이고; X3, X6, X10 및 X13이 각각 L 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4, X12 및 X19가 각각 아미노산 Q이고; X5가 아미노 A 또는 Aib이고; X7, X16 및 X18이 각각 아미노산 K이고; X8 및 X15가 각각 아미노산 E이고; X9 및 X14가 각각 A, L, F 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X11이 A, Aib 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X17이 W, F 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인, 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:1)로 구성되는 펩타이드를 제공한다
제1 측면의 추가의 또 다른 구현예는 X1, X8 및 X15가 아미노산 D 및 E로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; X2 및 X20이 각각 V, Y, 및 L로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X6, X10 및 X17이 L, I, V, W, Y 및 F로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X4, X11, X12 및 X19가 각각 Q 및 N으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X5, X16 및 X18이 각각 K, R, H 및 Orn으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X3, X7, X9, X13, 및 X14가 각각 A, L, F, V, Amv, 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산인, 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:24)를 포함하는 펩타이드로서, 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인, 펩타이드를 제공한다.
제1 측면의 또 다른 구현예는 X1이 D 및 E로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 및 X20이 각각 V, I, 및 L로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X3, X6, X10 및 X13이 각각 L, I, V, W, Y 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4, X12 및 X19가 각각 Q 및 N으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X5, X16 및 X18이 각각 K, R, H 및 Orn으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X7이 A, G, S, V, Aib 및 Amv로 구성된 군으로부터 선택되고; X8 및 X15가 아미노산 E 및 D로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; X9 및 X14가 A, G, S L, F, V, Amv, 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X11이 A, G, S, Aib, Amv, V 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X17이 W, F, Y, I, V, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인, 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:24)로 본질적으로 구성되는 펩타이드를 제공하고 펩타이드는 20 내지 24 아미노산 길이이다.
제1 측면의 더욱 또 다른 구현예는 X1이 D 및 E로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 및 X20이 각각 V, I, 및 L로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X3, X6, X10 및 X13이 각각 L, I, V, W, Y 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4, X12 및 X19가 각각 Q 및 N으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X5, X16 및 X18이 각각 K, R, H 및 Orn으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X7이 A, G, S, V, Aib 및 Amv로 구성된 군으로부터 선택되고; X8 및 X15가 아미노산 E 및 D로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; X9 및 X14가 A, G, S L, F, V, Amv, 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X11이 A, G, S, Aib, Amv, V 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X17이 W, F, Y, I, V, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인, 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:24)로 구성되는 펩타이드를 제공한다.
제1 측면에 따른 펩타이드의 임의의 개시된 구현예가 펩타이드의 N-말단 아미노산의 알파-아민에서 선택적으로 아실화되거나, 펩타이드의 말단 카복실 기에서 선택적으로 아미드화되거나, N-말단 아미노산의 알파-아민에서 선택적으로 아실화되고 펩타이드의 말단 카복실 기에서 아미드화되는 것이 고려된다. 펩타이드는 당해 기술에 공지된 방법에 의해 아실화 또는 아미드화될 수 있다.
본 발명의 특정한 펩타이드는 아래 표 2에 제공된다.
Figure pct00002
Figure pct00003
본 개시내용의 제1 측면의 하나의 구현예는 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인 서열 식별 번호:1-23의 아미노산 서열의 어느 하나를 포함하는 펩타이드이다. 추가의 또 다른 구현예는 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인 서열 식별 번호: 1-23의 아미노산 서열의 어느 하나로 본질적으로 구성되는 펩타이드이다. 추가의 또 다른 구현예는 서열 식별 번호: 1-23의 아미노산 서열의 어느 하나로 구성되는 펩타이드이다. 개시된 펩타이드의 임의의 상기 구현예에서, 선택적으로 펩타이드의 N-말단 아미노산의 알파-아민이 아실화되거나; 말단 카복실 기가 아미드화되거나; N-말단 아미노산의 알파-아민이 아실화되고 펩타이드의 말단 카복실 기가 아미드화된다.
본 개시내용의 제1 측면의 하나의 구현예는 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인 서열 식별 번호:25-35의 아미노산 서열의 어느 하나를 포함하는 펩타이드이다. 더욱 또 다른 구현예는 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인 서열 식별 번호: 25-35의 아미노산 서열의 어느 하나로 본질적으로 구성되는 펩타이드이다. 또 다른 구현예는 서열 식별 번호: 25-35의 아미노산 서열의 어느 하나로 구성되는 펩타이드이다. 펩타이드의 임의의 상기 구현예에서, 선택적으로 펩타이드의 N-말단 아미노산의 알파-아민이 아실화되거나; 말단 카복실 기가 아미드화되거나; N-말단 아미노산의 알파-아민이 아실화되고 펩타이드의 말단 카복실 기가 아미드화된다.
본 개시내용의 구현예는 추가로 서열 식별 번호: 1 및 24에 의해 일반적으로 한정된 펩타이드의 역방향 서열을 갖는 펩타이드를 포함한다.
본 개시내용의 제1 측면의 하나의 구현예는 서열 식별 번호:1의 역방향인 펩타이드를 제공하고 펩타이드는 X1 및 X19가 각각 아미노산 V이고; X2, X9 및 X17이 각각 아미노산 Q이고; X3, X5, 및 X14가 각각 아미노산 K이고; X4가 W, F, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X6 및 X13이 각각 아미노산 E이고; X7 및 X12가 각각 A, L, F, 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X8, X11, X15 및 X18이 각각 L 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X10이 A, Aib 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X16이 A 및 Aib로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X20이 아미노산 D인 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:36)을 포함하고, 여기에서 펩타이드는 20 내지 24 아미노산 길이이다.
본 개시내용의 제1 측면의 또 다른 구현예는 서열 식별 번호:1의 역방향인 펩타이드를 제공하고 펩타이드는 X1 및 X19가 각각 아미노산 V이고; X2, X9 및 X17이 각각 아미노산 Q이고; X3, X5, 및 X14가 각각 아미노산 K이고; X4가 W, F, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X6 및 X13이 각각 아미노산 E이고; X7 및 X12가 각각 A, L, F, 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X8, X11, X15 및 X18이 각각 L 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X10이 A, Aib 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X16이 A 및 Aib로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X20이 아미노산 D인 아미노산 서열 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:36)을 포함하고, 여기에서 펩타이드는 20 내지 24 아미노산 길이이다.
본 개시내용의 제1 측면의 하나의 구현예는 서열 식별 번호:1의 역방향인 펩타이드를 제공하고 펩타이드는 X1 및 X19가 각각 아미노산 V이고; X2, X9 및 X17이 각각 아미노산 Q이고; X3, X5, 및 X14가 각각 아미노산 K이고; X4가 W, F, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X6 및 X13이 각각 아미노산 E이고; X7 및 X12가 각각 A, L, F, 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X8, X11, X15 및 X18이 각각 L 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X10이 A, Aib 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X16이 A 및 Aib로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X20이 아미노산 D인 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:36)으로 구성된다.
본 개시내용의 제1 측면의 또 다른 구현예는 서열 식별 번호:24의 역방향인 펩타이드를 제공하고 역방향 펩타이드는 X1 및 X19가 각각 V, I 및 L로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X2, X9 및 X17이 각각 Q 및 N으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X3, X5, 및 X16이 각각 K, R, H, 및 Orn으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4가 W, F, Y, I, V, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X6, X13 및 X20이 각각 E 및 D로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X7 및 X12가 각각 A, G, S, L, F, V, Amv 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X8, X11, X15, 및 X18이 아미노산 L, I, V, W, 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; X10이 A, G, S, Aib, Amv, V 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X14가 A, G, S, V, Aib 및 Amv로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:59)를 포함하고, 여기에서 펩타이드는 20 내지 24 아미노산 길이이다.
본 개시내용의 제1 측면의 또 다른 구현예는 서열 식별 번호:24의 역방향인 펩타이드를 제공하고 역방향 펩타이드는 X1 및 X19가 각각 V, I 및 L로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X2, X9 및 X17이 각각 Q 및 N으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X3, X5, 및 X16이 각각 K, R, H, 및 Orn으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4가 W, F, Y, I, V, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X6, X13 및 X20이 각각 E 및 D로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X7 및 X12가 각각 A, G, S, L, F, V, Amv 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X8, X11, X15, 및 X18이 아미노산 L, I, V, W, 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; X10이 A, G, S, Aib, Amv, V 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X14가 A, G, S, V, Aib 및 Amv으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:59)으로 본질적으로 구성되고, 여기에서 펩타이드는 20 내지 24 아미노산 길이이다.
본 개시내용의 제1 측면의 또 다른 구현예는 서열 식별 번호:24의 역방향인 펩타이드를 제공하고 역방향 펩타이드는 X1 및 X19가 각각 V, I 및 L로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X2, X9 및 X17이 각각 Q 및 N으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X3, X5, 및 X16이 각각 K, R, H, 및 Orn으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4가 W, F, Y, I, V, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X6, X13 및 X20이 각각 E 및 D로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X7 및 X12가 각각 A, G, S, L, F, V, Amv 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X8, X11, X15, 및 X18이 아미노산 L, I, V, W, 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; X10이 A, G, S, Aib, Amv, V 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X14가 A, G, S, V, Aib 및 Amv로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:59)로 구성된다.
본 발명의 추가의 펩타이드가 표 3에 제공된다. 이들 펩타이드내 아미노산의 서열은 서열 식별 번호:2-23 및 25-35의 아미노산 서열의 역방향이다.
Figure pct00004
본 개시내용의 제1 측면의 하나의 구현예는 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인 서열 식별 번호:36-58의 아미노산 서열의 어느 하나를 포함하는 펩타이드이다. 추가의 또 다른 구현예는 서열 식별 번호: 36-58의 아미노산 서열의 어느 하나로 본질적으로 구성되는 펩타이드이다. 추가의 또 다른 구현예는 서열 식별 번호: 36-58의 아미노산 서열의 어느 하나로 구성되는 펩타이드이다. 펩타이드의 임의의 상기 구현예에서, 선택적으로 펩타이드의 N-말단 아미노산의 알파-아민이 아실화되거나; 말단 카복실 기가 아미드화되거나; N-말단 아미노산의 알파-아민이 아실화되고 펩타이드의 말단 카복실 기가 아미드화된다.
본 개시내용의 제1 측면의 하나의 구현예는 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인 서열 식별 번호: 59-70의 아미노산 서열의 어느 하나를 포함하는 펩타이드이다. 더욱 또 다른 구현예는 서열 식별 번호: 59-70의 아미노산 서열의 어느 하나로 본질적으로 구성되는 펩타이드이다. 추가의 또 다른 구현예는 서열 식별 번호: 59-70의 아미노산 서열의 어느 하나로 구성되는 펩타이드이다. 펩타이드의 임의의 상기 구현예에서, 선택적으로 펩타이드의 N-말단 아미노산의 알파-아민이 아실화된되거나; 말단 카복실 기가 아미드화되거나; N-말단 아미노산의 알파-아민이 아실화되고 펩타이드의 말단 카복실 기가 아미드화된다.
본 개시내용의 펩타이드가 서열 식별 번호: 1-70의 어느 하나의 아미노산 서열 및 아미노산 서열의 N-말단 또는 C-말단에 독립적으로 첨가된 1-4 추가의 아미노를 포함하는 경우, 추가의 아미노산은 아미노산의 첨가가 펩타이드의 양친매성에 부정적으로 영향을 주지 않는 정도로 선택된다.
본 개시내용의 제2 측면은 인지질과 양친매성 펩타이드의 조합으로부터 형성된 펩타이드 양친매체 지질 미셀 (PALM)을 제공한다. 본 개시내용의 제2 측면의 PALM은 지질 성분이 스핑고미엘린 및 하나 이상의 추가 인지질을 포함하는 지질 성분으로 복합체화된 본 개시내용의 제1 측면의 하나 이상의 펩타이드를 포함한다. 본 개시내용에 따른 PALM은 표적 세포 집단에 수동적으로 또는 활동적으로 전달될 수 있다. 본 개시내용의 제2 측면의 하나의 구현예에서, PALM은 지질 성분이 스핑고미엘린 및 하나 이상의 추가 인지질로 본질적으로 구성되는 본 개시내용의 하나 이상의 펩타이드를 포함한다. 하나의 구현예에서 PALM은 본 개시내용의 펩타이드 및 지질 성분을 포함하고 여기에서 지질 성분은 추가의 인지질이 포스파티딜콜린, 폴리에틸렌 글리콜-포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE), 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 카디올리핀, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가 인지질 및 스핑고미엘린을 포함한다. 또 다른 구현예에서 PALM은 본 개시내용의 펩타이드를 포함하고 지질 성분은 스핑고미엘린, 및 포스파티딜콜린을 포함한다. 또 다른 구현예에서 PALM은 본 개시내용의 펩타이드, 스핑고미엘린, 및 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜콜린 (POPC)를 포함한다. 추가의 또 다른 구현예에서 PALM은 본 개시내용의 펩타이드를 포함하고 지질 성분은 스핑고미엘린, 및 포스파티딜에탄올아민을 포함한다. 추가의 또 다른 구현예에서 PALM은 본 개시내용의 펩타이드를 포함하고, 지질 성분은 스핑고미엘린, 및 폴리(에틸렌 글리콜)포스파티딜-에탄올아민을 포함한다. 더욱 또 다른 구현예에서 PALM은 본 개시내용의 펩타이드를 포함하고 지질 성분은 스핑고미엘린, 및 포스파티딜세린을 포함한다. 또 다른 구현예에서 PALM은 본 개시내용의 펩타이드를 포함하고 지질 성분은 스핑고미엘린 및 카디올리핀을 포함한다.
본 개시내용의 제2 측면의 더욱 또 다른 구현예에서, PALM은 본 개시내용의 펩타이드를 포함하고 지질 성분은 하나 이상의 추가 인지질이 포스파티딜콜린, 폴리에틸렌 글리콜-포스파티딜-에탄올아민 (PEG-PE), 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 카디올리핀, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가 인지질 및 스핑고미엘린으로 본질적으로 구성된다. 더욱 또 다른 구현예에서 PALM은 본 개시내용의 펩타이드를 포함하고 지질 성분은 스핑고미엘린 및 포스파티딜콜린으로 본질적으로 구성된다. 또 다른 구현예에서 PALM은 본 개시내용의 펩타이드를 포함하고 지질 성분은 스핑고미엘린 및 1-팔미토일-2-올레오일-포스파티딜콜린 (POPC)로 본질적으로 구성된다.
본 개시내용의 제2 측면의 일부 구현예에서, PALM은 본 개시내용의 펩타이드를 포함하고 지질 성분은 하나 이상의 추가 인지질이 포스파티딜콜린, 폴리에틸렌 글리콜-포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE), 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 카디올리핀, 및 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되고 인지질 대 스핑고미엘린의 몰비가 약 95:5 내지 약 10:90인 하나 이상의 추가 인지질 및 스핑고미엘린으로 본질적으로 구성된다. 또 다른 구현예에서 인지질 대 스핑고미엘린의 몰비는 약 90:10 내지 약 20:80이다. 더욱 또 다른 구현예에서 인지질 대 스핑고미엘린의 몰비는 약 25:75 내지 약 35:65이다. 또 다른 구현예에서 인지질 대 스핑고미엘린의 몰비는 약 30:70이다. 또 다른 구현예에서 인지질 대 스핑고미엘린의 몰비는 약 80:20 내지 약 60:40이다. 추가의 또 다른 구현예에서 인지질 대 스핑고미엘린의 몰비는 약 75:25 내지 약 65:35이다. 더욱 또 다른 구현예에서 인지질 대 스핑고미엘린의 몰비는 약 70:30이다.
인지질의 지방산 구성요소는 R이 (C7-C21) 알킬 기 또는 (C7-C21) 알케닐 기이고 알케닐 기가 1 내지 6 이중 결합을 가질 수 있는 식: R-COOH에 따른 지방산을 포함한다. 적합한 지방산의 예는, 비제한적으로, 피탄산, 리놀렌산, 리놀레산, 도코사테트라에노산, 올레산, 카프릴산, 라우르산, 아라키드산, 미리스트산 및 팔미트산을 포함한다. 특정한 인지질의 글리세롤 골격에 에스테르화된 지방산의 쌍은 동일할 수 있거나 각각 지방산의 상이한 유형일 수 있다.
지질 성분 대 펩타이드의 몰비는 약 10:1 내지 약 2:1이다. 하나의 구현예에서 비율은 약 9:1 내지 약 2:1이다. 하나의 구현예에서 지질 성분 대 펩타이드의 몰비는 약 8:1 내지 약 2:1이다. 더욱 또 다른 구현예에서 지질 성분 대 펩타이드의 몰비는 약 7:1 내지 약 3:1이다. 또 다른 구현예에서 지질 성분 대 펩타이드의 몰비는 약 6:1 내지 약 4:1이다.
양친매성 펩타이드와 포스파티딜콜린의 복합체는 공지되어 있다. 이들 복합체의 하나의 생산 방법은 수성 현탁액에서 복합체를 형성하기 위해 통상 용매 상으로부터 초기 공동-동결건조 그 다음 건조 리오필리제이트의 재수화에 의한 것이다.
입자 크기는 DLS에 의해 측정되고 유체역학적 평균 직경 ("평균 직경")으로서 표현된다. 본 개시내용의 제2 측면에 따른 PALM은 30 nm 이하의 평균 직경을 갖는 나노미터-크기의 입자이다. 하나의 구현예에서 평균 입자 직경은 약 5 nM 내지 약 30 nm이다. 추가의 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 7.5 nM 내지 약 30 nm이다. 더욱 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 10 nM 내지 약 30 nm이다. 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 5 nM 내지 약 25 nm이다. 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 7.5 nM 내지 약 25nm이다. 추가의 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 10 nM 내지 약 25 nm이다. 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 5 nM 내지 약 20 nm이다. 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 7.5 nM 내지 약 20 nm이다. 추가의 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 10 nM 내지 약 20 nm이다. 더욱 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 5 nM 내지 약 15 nm이다. 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 7.5 nM 내지 약 15 nm이다. 추가의 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 10 nM 내지 약 15 nm이다. 더욱 또 다른 구현예에서 평균 입자 직경은 약 7.5 nM 내지 약 10 nm이다.
본 개시내용의 제3 측면은 본 개시내용의 제2 측면의 PALM 구현예의 어느 하나 및 화물 분자를 포함하는 PALM-화물 분자 조성물을 제공한다. 화물 분자는, 비제한적으로, 약제학적 또는 치료 특성을 갖는 분자를 포함한다. 화물 분자의 비-제한 예는, 집합적으로 또는 개별적으로, 하기를 포함한다: 항-암 화합물 예컨대 올-트랜스 레티노산, 레티노산의 메틸-, 에틸-, 및 더 긴 사슬 지방 알킬 사슬 알코올 에스테르를 포함하는 올-트랜스 레티노산의 알코올 에스테르 및 레티노산의 콜레스테릴 에스테르; 레티노산 아미드 예컨대 펜레티나이드; 레티노산의 메틸-, 에틸-, 및 더 긴 사슬 지방 알킬 사슬 알코올 에스테르를 포함하는 레티놀 및 레티놀의 카복실산 에스테르; 친유성 항진균 제제 예컨대 암포테리신 B 또는 나이스타틴; 스테로이드 예컨대 프로게스테론, 테스토스테론, 프레드니솔론, 하이드로코르티손, 덱사메타손 및 에스트라디올; 진통제 예컨대 프로포폴 및 할로페리돌; 항정신병 예컨대 플루펜아진 데카노에이트 및 아리피프라졸; 비타민 D 유사체 콜레칼시페롤 및 에르고칼시페롤; 및 비타민 E의 이성질체.
화물 분자는 또한 진단 또는 이미지형성 절차를 가능하게 하는 분자 예컨대 형광 조영제, 방사선표지된 조영제, 및 MRI, PET, CT, SPECT/CT 및 x-선 연구에 사용된 제제를 포함한다. MRI 조영제는, 비제한적으로, 조영제 예컨대 가돌리늄 이온 또는 유사한 란탄족 이온 또는 인듐-111 또는 갈륨-67 또는 루테튬-177 또는 사마륨-153과 킬레이트화되는 디에틸렌트리아민 펜타아세트산 모이어티를 가진 포스파티딜에탄올아민을 포함한다.
화물 분자는 또한 공지된 방법에 의해 콜레스테롤 또는 다른 다환형 지방 알코올에 연결되고 있는 RNA 또는 DNA의 다양한 유형 및 길이일 수 있다.
제3 측면의 하나의 구현예에서 화물 분자는 화학명: 시스-[((1R, 2R)-1,2-사이클로헥산디아민-N,N')비스(미리스타토)] 백금(II)을 갖는 미리플라틴이다.
Figure pct00005
본 개시내용의 제3 측면의 추가의 또 다른 구현예는 화물 분자가 식 I의 화합물 콘주게이트인 PALM-화물 분자 복합체이다
A-R-L-X (식 I)
여기에서 A는 하이드록시 또는 아민 기를 갖는 제제이고; R은 제제의 하이드록실 또는 아민 기이고; L은 링커이고, X는 앵커 모이어티이다.
본 개시내용의 제3 측면의 또 다른 구현예는 화물 분자가 식 I의 화합물 콘주게이트인 PALM-화물 분자 복합체이다:
A-R-L-X (식 I)
여기에서 A는 하이드록시 또는 아민 기를 갖는 제제이고; R은 제제의 하이드록실 또는 아민 기이고; L은 카본산, 석신산 또는 디글라이콜산이고; X는 콜레스테롤, α-토코트리에놀, β-토코트리에놀, γ-토코트리에놀, δ-토코트리에놀, 콜레스테롤, 코프로스타놀, 식물 스테롤, (β-시토스테롤, 시토스타놀, 스티그마스테롤, 스티그마스타놀, 캄페스테롤, 브라씨카스테롤), 에르고스테롤, 레티놀, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤, 토코페롤, 또는 토코트리에놀이다.
본 개시내용의 제3 측면의 또 다른 구현예는 화물 분자가 식 I의 화합물 콘주게이트인 PALM-화물 분자 복합체이다:
여기에서 A는 하이드록시 또는 아민 기를 갖는 제제이고; R은 제제의 하이드록실 또는 아민 기이고; L은 카본산, 석신산 또는 디글라이콜산으로 구성된 군으로부터 선택되고; X는 콜레스테롤, α-토코트리에놀, β-토코트리에놀, γ-토코트리에놀, δ-토코트리에놀, 콜레스테롤, 코프로스타놀, 식물 스테롤, (β-시토스테롤, 시토스타놀, 스티그마스테롤, 스티그마스타놀, 캄페스테롤, 브라씨카스테롤), 에르고스테롤, 레티놀, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤, α-토코페롤, β-토코페롤, γ-토코페롤, 및 δ-토코페롤로 구성된 군으로부터 선택된다,
본 개시내용의 제3 측면의 또 다른 구현예는 화물 분자가 식 I의 화합물 콘주게이트인 PALM-화물 분자 복합체이다:
여기에서 A는 하이드록시 또는 아민 기를 갖는 제제이고; R은 제제의 하이드록실 또는 아민 기이고; L은 링커이고; X는 콜레스테롤, 콜레칼시페롤 및 δ-토코트리에놀로 구성된 군으로부터 선택되는 앵커 모이어티이다.
식 (1)의 화합물 콘주게이트의 하나의 구현예에서, R은 제제의 하이드록시 기이고, 앵커 모이어티는 카보네이트 에스테르 결합에 의해 제제에 공유 결합된다. 식 (1)의 화합물 콘주게이트의 또 다른 구현예에서, R은 제제의 아민 기이고, 앵커 모이어티는 카바메이트 에스테르 결합에 의해 제제에 공유 결합된다.
식 (1)의 화합물 콘주게이트의 또 다른 구현예에서, 앵커 모이어티는 콜레스테롤이다. 식 (1)의 화합물 콘주게이트의 더욱 또 다른 구현예에서, 앵커 모이어티는 콜레스테롤이고, 단, 앵커 모이어티가 콜레스테롤이면, 화합물은 파클리탁셀이 아니다.
식 (1)의 화합물 콘주게이트의 추가의 또 다른 구현예에서 앵커 모이어티는 α-토코트리에놀이다. 식 (1)의 화합물 콘주게이트의 또 다른 구현예에서 앵커 모이어티는 β-토코트리에놀이다. 식 (1)의 화합물 콘주게이트의 더욱 또 다른 구현예에서 앵커 모이어티는 γ-토코트리에놀이다. 식 (1)의 화합물 콘주게이트의 추가의 또 다른 구현예에서 앵커 모이어티는 δ-토코트리에놀이다.
식 (1)의 화합물 콘주게이트의 일부 구현예에서 제제는 약물이다.
식 (1)의 화합물 콘주게이트의 일부 구현예에서 제제는 항-암 약물이다. 식 (1)의 화합물 콘주게이트의 하나의 구현예에서 제제는 항-암 약물이고 항-암 약물은 카보네이트 에스테르 결합에 의해 앵커에 공유 결합된다.
식 (1)의 화합물 콘주게이트의 하나의 구현예에서 제제는 항-암 약물이고 항-암 약물은 카바메이트 에스테르 결합에 의해 앵커에 공유 결합된다.
카보네이트 에스테르 결합을 형성하기 위해 이용가능한 하이드록실 기를 갖는 항-암 약물의 비-제한 예는 AZD2811, 하이드록시 캄프토테신, 독소루비신, 트록사시타빈, 빈크리스틴, 시롤리무스, 투불라이신 A, 도세탁셀, 또는 파클리탁셀을 포함한다
카바메이트 에스테르 결합을 형성하기 위하여 이용가능한 아민을 갖는 항-암 약물의 비-제한 예는 독소루비신, 다우노루비신, 젬시타빈, 사이타라빈 및 트록사시타빈을 포함한다.
본 개시내용의 제3 측면의 PALM-화물 분자 조성물의 일부 구현예에서, 화물 분자는 파클리탁셀 2'-콜레스테릴 카보네이트이다. 또 다른 구현예에서 화물 분자는 파클리탁셀 2'-δ-토코트리에닐 카보네이트이다.
추가의 다른 구현예에서, 화물 분자는 도세탁셀 2'-콜레스테릴 카보네이트이다. 다른 구현예에서, 화물 분자는 10-하이드록시캄프토테신의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르이다. 또 다른 구현예에서, 화물 분자는, 이리노테칸의 활성 대사물인, 7-에틸-10-하이드록시캄프토테신의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르이다. 또 다른 구현예에서, 화물 분자는 시롤리무스의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르이다. 다른 구현예에서, 화물 분자는 젬시타빈의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르이다. 다른 구현예에서, 화물 분자는 투불라이신 A의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르이다. 다른 구현예에서, 화물 분자는 모르핀의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르, 하이드로모르폰의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르, 또는 코데인의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르이다.
본 개시내용의 제3 측면의 PALM-화물 분자 조성물의 다른 구현예에서, 화물 분자는 젬시타빈의 콜레스테릴 카바메이트 에스테르 (콜레스테릴 (N4)-젬시타빈 카바메이트)이다. 추가의 다른 구현예에서, 화물 분자는 아데노신의 콜레스테릴 카바메이트 에스테르이다. 추가의 다른 구현예에서, 화물 분자는 독소루비신의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르이고, 이의 구조는 하기이다:
Figure pct00006
추가의 또 다른 구현예에서, 화물 분자는 빈크리스틴의 콜레스테릴 카보네이트 에스테르이고, 이의 구조는 하기이다:
Figure pct00007
더욱 또 다른 구현예에서 화물 분자는 파클리탁셀의 델타-토코트리에닐 카바메이트 에스테르이고, 이의 구조는 하기이다:
Figure pct00008
더욱 또 다른 구현예에서 화물 분자는 젬시타빈 델타-토코트리엔일릴(tocotrienlyl) 카보네이트 에스테르이고, 이의 구조는 하기이다:
Figure pct00009
추가의 또 다른 구현예에서 화물 분자는 독소루비신 델타-토코트리엔일릴 카보네이트 에스테르이고, 이의 구조는 하기이다:
Figure pct00010
표 4는 화살표에 의해 표시된 하이드록실 또는 아민 기 (R)를 가진 본 발명에 유용한 제제 (A)의 비-제한 예의 구조를 제공한다.
Figure pct00011
표 5는 식　A-R-L-X의 PALM-화물 조성물의 비-라이밍(liming) 예를 제공한다.
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
본 개시내용의 제4 측면은 tert-부틸 알코올 및 물로 구성된 균질한 용매 상으로부터 PALM 또는 PALM-화물 분자 조성물을 생산하기 위해 놀랍게도 효과적인 공동-동결건조 기술을 제공한다. 상기 접근법의 이점은 하기이다: 1) 펩타이드, 포스포포리피드(phosphopholipid) 및 선택적인 친유성 화물 (예를 들면 파클리탁셀-2'-콜레스테릴 카보네이트)를 포함하는 모든 PALM 구성요소가 단일 용매 상에서 공동-용해되고, 2) 용매 성분이 전적으로 혼화성이고 표준 동결건조 절차에 의해 제거에 양호하게-맞춰지고, 3) tert-부틸 알코올이 저독성, 부류 3 용매이기 때문에 절차가 잠재적으로 독성 서브스턴스를 피하고 4) 수득한 건조된 리오필리제이트가 수성 제제로 가능한 것보다 저장 동안 더 큰 안정성에 대한 기회를 가능하게 한다.
PALM을 제조하는데 사용된 용매 혼합물은 바람직하게는 tert-부틸 알코올 (TBA) 및 물의 혼합물이다. 하나의 구현예에서 TBA 대 물의 퍼센트 할당량은 약 70%:30% 내지 약 90%:10%이다. 또 다른 구현예에서 비는 약 75%:25% 내지 약 85%:15%이다. 추가의 또 다른 구현예에서 비는 80%:20%이다.
제4 측면의 하나의 구현예는 하기 단계를 포함하는 PALM 제조 방법을 제공한다:
i) 펩타이드 용액을 제공하기 위해 제1 용매 혼합물에서 양친매성 펩타이드의 가용화 단계;
ii) 스핑고미엘린 용액을 제공하기 위해 제2 용매 혼합물에서 스핑고미엘린의 가용화 단계
iii) 인지질 용액을 제공하기 위해 제3 용매 혼합물에서 추가의 인지질의 가용화 단계;
iv) 펩타이드/스핑고미엘린/인지질 용액을 형성하기 위해 펩타이드 용액, 스핑고미엘린 용액 및 인지질 용액의 배합 단계; 및
v) 펩타이드/스핑고미엘린/인지질 용액의 동결건조 단계,
여기에서 단계 i), ii), 및 iii)은 임의의 순서로 수행되고; 여기에서 제1, 제2, 및 제3 용매 혼합물은 tert-부틸 알코올 및 물을 포함함.
본 개시내용의 제4 측면의 또 다른 구현예는 하기 단계를 포함하는 PALM 제조 방법을 제공한다:
i) 펩타이드/스핑고미엘린/인지질 혼합물을 형성하기 위해, 양친매성 펩타이드, 스핑고미엘린 및 추가의 인지질의 배합 단계;
ii) 펩타이드 스핑고미엘린/인지질 용액을 형성하기 위해 용매 혼합물에서 펩타이드/스핑고미엘린/인지질 혼합물의 가용화 단계; 및
iii) 펩타이드/인지질 용액의 동결건조 단계,
여기에서 용매 혼합물은 tert-부틸 알코올 및 물을 포함함.
본 개시내용의 제4 측면은 추가로 PALM-화물 분자 복합체를 형성하기 위해 화물 분자를 포함하는 PALM의 제조 방법을 제공한다. PALM-화물 분자 복합체를 제조하기 위해, 펩타이드, 스핑고미엘린, 하나 이상의 추가 인지질 및 화물 분자는 용매 혼합물에서 각각 개별적으로 제조되고, 요망된 제형에 의존하여, 특이적인 몰비로 배합된다. 대안적으로, 펩타이드, 스핑고미엘린, 하나 이상의 추가 인지질 및 화물 분자는, 선행 가용화 없이, 직접적으로 배합될 수 있고, 그 다음 동결건조에 앞서 요망된 용매 혼합물과 용액이 될 수 있다.
본 개시내용의 제4 측면의 하나의 구현예는 하기 단계를 포함하는 PALM-화물 분자 복합체의 제조 방법을 제공한다:
i) 펩타이드 용액을 제공하기 위해 제1 용매 혼합물에서 양친매성 펩타이드의 가용화 단계;
ii) 스핑고미엘린 용액을 제공하기 위해 제2 용매 혼합물에서 스핑고미엘린의 가용화 단계
iii) 인지질 용액을 제공하기 위해 제3 용매 혼합물에서 추가의 인지질의 가용화 단계;
iv) 화물 분자 용액을 제공하기 위해 제4 용매 혼합물에서 화물 분자의 가용화 단계;
v) 펩타이드/스핑고미엘린/인지질/화물 분자 용액을 형성하기 위해 펩타이드 용액, 스핑고미엘린 용액, 인지질 용액 및 화물 분자 용액의 배합 단계; 및
vi) 펩타이드/스핑고미엘린/인지질/화물 분자 용액의 동결건조 단계,
여기에서 단계 i) ii), iii) 및 iv)는 임의의 순서로 수행되고; 여기에서 제1, 제2, 제3 및 제4 용매 혼합물은 tert-부틸 알코올 및 물을 포함함.
PALM-화물 분자 복합체 제조의 또 다른 구현예는 하기 단계를 포함한다:
i) 펩타이드/스핑고미엘린/인지질/화물 분자 혼합물을 형성하기 위해, 양친매성 펩타이드, 스핑고미엘린, 추가의 인지질 및 화물 분자의 배합 단계;
ii) 펩타이드/인지질 용액을 형성하기 위해 용매 혼합물에서 펩타이드/스핑고미엘린/인지질/화물 분자 혼합물의 가용화 단계; 및
iii) 펩타이드/스핑고미엘린/인지질/화물 분자 용액의 동결건조 단계,
여기에서 용매 혼합물은 tert-부틸 알코올 및 물을 포함함.
수득한 동결건조된 케이크는 장기간 동안 저장될 수 있고 안정적으로 남아있을 것이다. 동결건조된 생성물은 임의의 적합한 수용액, 예를 들면, 물 또는 염수의 첨가, 그 다음 내용물의 부드러운 소용돌이에 의해 재수화된다. PALM 리오필리제이트의 재구성은 5 내지 30 분 동안 50℃에서 PALM 용액의 인큐베이션에 의해 향상될 수 있다. 용액은 그 다음 필터 멸균되고 (0.2 μm) 4℃에서 저장된다. 대안적으로, 펩타이드, 인지질 및 화물 분자를 포함하는 용매 혼합물은 동결건조에 앞서 필터 멸균된다.
본 개시내용의 제5 측면은, 본 개시내용의 제3 측면의 구현예의 임의의 하나에 따른 유효량의 PALM-화물 조성물을 그것을 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 장애의 치료 방법을 제공한다.
포착제 수용체 B-1 (SR-B1)는, 콜레스테롤의 세포 수송을 촉진시키기 위한, HDL의 원리 단백질 성분인, 아포지질단백질 A-I을 결합하는 막 수용체이다. 콜레스테롤은 악성 종양에서 발견된 것처럼 세포 증식을 위한 필수 영양소이다. SR-B1은, 비제한적으로 유방, 전립선, 결장직장, 췌장, 부신, 피부, 비인두 및 난소 암을 포함하는, 많은 종양 세포에서 고도로 발현된다. 일부 양친매성 펩타이드는 또한 기술적으로 인식되고 SR-BI에 의해 결합된다. PALM은 SR-BI에 결합하도록 그리고 이로써 SR-BI-양성 세포에 화물 분자를 선택적으로 전달하도록 설계된 인지질 및 양친매성 펩타이드의 배합으로부터 형성된다.
따라서 본 개시내용의 제5 측면의 하나의 구현예는 PALM-약물을 그것을 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 SR-B1 수용체의 과발현과 관련된 장애의 치료 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서 상기 방법은 PALM-화물 분자 조성물의 그것을 필요로 하는 대상체에 투여에 의한 암의 치료 방법이다.
약제학적 용도를 위하여, 동결건조된 PALM은 표준 희석제 예컨대 주사용 멸균수, 정상 멸균된 염수 또는 멸균된 5% 덱스트로오스 용액을 이용하여 사용현장, 예를 들면, 병원 또는 진료실에서 편리하게 재구성될 수 있는 단일 용량 또는 다중 용량 용기로 제공될 수 있다. 적합한 용기는 그 다음 멸균된 혼합물로 무균처리로 충전되고, 동결건조되고 적절하게 밀봉되어 동결건조된 물질의 멸균을 유지한다. 적합한 용기는 비제한적으로, 예를 들면, 주사기를 통해 재구성용 희석제의 도입을 허용하는, 고무 밀봉제, 또는 등가물을 포함하는 바이알을 포함한다. 상기 PALM 제제는 정맥내, 피하, 근육내, 복강내 주사를 포함하는 비경구 투여에 적합하다.
실시예
실시예 1 펩타이드 합성 및 정제
펩타이드는 GenScript USA, Inc. (Piscataway, NJ)에서 표준 Fmoc 고체상 합성 기술에 의해 생산되었다. 특정 펩타이드는 표준 절차에 의해 C-말단의 아미드화 및 N-말단의 아세틸화에 의해 말단 아미노산에서 변형되었다. 펩타이드는 펩타이드 정제를 위한 표준 고-성능 액체 크로마토그래피 방법에 의해 90% 초과 순도로 크로마토그래피적으로 정제되었다. 순도는 HPLC 및 질량 분광 분석에 의해 확인되었다.
실시예 2 파클리탁셀 2'-콜레스테릴 카보네이트 (XC) 합성
50 밀리그램의 파클리탁셀은 2 ml의 클로로포름에 용해되었고 그 다음 2 ml의 클로로포름 플러스 4 ml의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 2 ml 아세토니트릴내 1.5 몰 과잉의 콜레스테롤 클로로포르메이트와 배합되었다. 혼합물은 주위 온도에서 밤새 교반되었고 그 다음 회전식 증발기 상에서 건조되었다. 수득한 황백색 침전물은 그 다음 아세트산에틸/헥산 (3:1)에 용해되었고 물로 추출되었고, 건조되었고, 그 다음 클로로포름에 재용해되었다. 생성물의 형성은 이동상 (파클리탁셀의 Rf 0.4, Tax-Chol의 Rf 0.92)로서 아세트산에틸/헥산 (3:1)을 이용하는 박-층 크로마토그래피에 의해 확인되었다. 생성물의 추가 정제는 그 다음 표제 화합물 ( 1)을 수득하기 위해 이동상으로서 아세트산에틸/헥산 (3:1)을 이용하는 실리카겔 칼럼 상에서 수행되었다. 구조는 질량 분광분석법 및 NMR 분석에 의해 확인되었다.
Figure pct00016
실시예 3 파클리탁셀 2'-δ-토코트리에닐 카보네이트 (XT3) 합성
단계 1. 델타-토코트리에놀의 p-니트로페닐 카보네이트의 합성
Figure pct00017
무수 염화메틸렌 (1.5 mL)내 델타-토코트리에놀 (25 Mg, 0.0629 mmol)의 용액에, 실온에서 4-니트로페닐 클로로포르메이트 (51 Mg, 0.25 mmol) 및 트리에틸민 (35 μL, 0.25 mmol)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에서 24시간 동안 교반되었고 그 다음 농축되었고 그 다음 요망된 생성물 (2)는 용리액으로서 아세트산에틸/헵탄 (10:90)을 이용하는 분취 TLC를 이용하여 수득되었다. 요망된 생성물은 황색 분말 (18 Mg)로서 수득되었다. 1H NMR (CDCl3): δ 8.30 (d, 2H), 7.45 (d, 2H), 6.80 (dd, 2H), 5.05-5.20 (m, 3H), 2.72-2.78 (t, 2H), 2.18 (s, 4H), 1.95 - 2.15 (m, 4H), 1.72 - 1.85 (m, 4H), 1.68 (s, 3H), 1.55-1.62 (br s, 12 H), 1.30 (br s, 5H).
단계 2. 파클리탁셀 (3)의 델타-토코트리에놀 카보네이트의 합성
Figure pct00018
염화메틸렌 (2 mL)내 화합물 (2) (18 mg, 단계 1 생성물), 파클리탁셀 (28 mg) 및 DMAP (10 Mg)의 용액은 실온에서 배합된다. 혼합물은 실온에서 24시간 동안 교반되었다. 혼합물은 농축되었고 용리액으로서 아세트산에틸/헵탄 (50:50)을 이용하는 분취 TLC 이용에 의해 정제되었다. 요망된 생성물 (3) (17 Mg)은 무색 고체로서 수득되었다. TLC 분석 (Rf 0.25, EA/헥산: 1:1). 1H NMR (CDCl3): δ 8.20 (d, 2H), 7.75 (d, 2H), 7.60-7.62 (m, 1H), 7.30-7.52 (m, 9H), 6.90 - 6.95 (d, 1H), 6.60 - 6.75 (dd, 2H), 6.20 - 6.30 (m, 2H), 6.00 - 6.05 (m, 1H), 5.70 -5.75 (d, 1H), 5.50 (s, 1H), 5.10 - 5.20 (br s, 2H), 4.95 - 5.00 (d, 1H), 4.30 - 4.35 (br s, 1H), 4.20-4.30 (dd, 2H), 3.75-3.80 (d, 1H), 2.70-2.75 (m, 2H), 2.30-2.60 (m, 7H), 2.23-2.27 (m, 11H), 1.50-2.20 (m, 26H), 1.25 (m, 9H), 1.15 (s, 3H)
실시예 4 펩타이드 양친매체 지질 미셀 (PALM) 제제
펩타이드 및 인지질의 별개의 원액은 10mM 펩타이드, 20mM 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DOPC) 또는 20mM 1-팔미토일-2-올레오일-포스파티딜콜린 (POPC) 및 20mM 에그 SM의 별개의 용액을 수득하기 위해 80% tert-부틸 알코올 (TBA) 및 20% 물로 구성된 용매 혼합물에서 제조되었다. 원액의 분취액은 10 몰 당량의 펩타이드, 42 몰 당량의 포스파티딜콜린 및 18 몰 당량의 SM을 함유하는 최종 용액을 수득하기 위해 배합되었다. 용액은 1.5 ml 유리 바이알에서 배합되었고, 냉동되었고 (-70 ℃), -5 내지 -10℃에서 밤새 동결건조되었다. 수득한 동결건조된 케이크는 둘베코 포스페이트 완충된 염수의 첨가 그 다음 내용물의 소용돌이에 의해 재수화되었다. PALM의 형성은 50℃에서 10 분 동안 PALM 용액의 인큐베이팅에 의해 완료되었다. 일부 펩타이드 복합체는 가열시 탁하게 남아있었고 또한 맑은 용액을 수득하기 위한 시도로 -80℃로 냉동 그 다음 실온으로 해동의 1 사이클에 적용되었다. PALM 제제의 품질은 그들의 외관에서 분명하였다. 시각적으로 맑은 제제는 형성 완료된 임의의 나노입자가 대략 20nm 미만 직경이었다는 것을 표시하였다. 결과는 표　5에서 나타난다.
Figure pct00019
실시예 5 형광 염료 DiI를 함유하는 PALM의 제조
40μl 분취량의 10mM 또는 펩타이드는 작은 유리 바이알에서 56μl의 20mM POPC, 24μl 20mM SM(에그) 및 16μl 2.5mM DiI와 배합되었다. 펩타이드 및 지질 용액은 80% TBA/20% 물로 제조되었다. DiI 스톡은 92% TBA/8% 물로 제조되었다. 용액은 동결건조되었고 수득한 케이크는 0.2 ml의 둘베코 포스페이트 완충된 염수의 첨가에 의해 재수화되었다. 용액은 간단히 소용돌이되었고, (대략 15 초 동안) 수조 초음파처리되었고 50 ℃ 히팅 블록에서 20 분 동안 배치되었다.
실시예 6 미라플라틴을 함유하는 PALM의 제조
2.5 몰 당량의 펩타이드에 대응하는 80% TBA/20% 물내 50 μl 분취량의 10 mM 서열 식별 번호:25는, 각각, 동일한 용매 혼합물로 구성된, 40 mM 및 20 mM 원액으로부터 3 몰 당량의 POPC 및 7 몰 당량의 에그 SM과 배합되었다. 이것에 100% TBA로 제조된 1 mM 원액으로부터 0.75 몰 당량의 미리플라틴 (MedKoo Biosciences, Raleigh, NC)이 첨가되었다. 용액은 동결건조되었고 수득한 케이크는 물내 0.4 ml의 5% 덱스트로오스의 첨가에 의해 재수화되었다. 용액은 간단히 소용돌이되었고, (대략 15 초 동안) 수조 초음파처리되었고 50℃ 히팅 블록에서 20 분 동안 배치되었다. 수득한 맑은 용액은 0.2 μm 기공 크기, 폴리에테르설폰, 멸균 필터를 통과되었고 4 ℃에서 저장되었다. DLS에 의한 입자 크기 분석 (실시예 11)은 8 nm의 유체역학적 평균 직경을 표시하였다. SEC는 크기로 HDL에 비교할만한 단일 입자 집단을 확인하였다. SEC 크로마토그램은 도 2 (미리플라틴 (실선), 인간 HDL(점선))에서 나타난다.
실시예 7 파클리탁셀 콜레스테릴 카보네이트 (XC)를 함유하는 PALM의 제조
XC를 함유하는 PALM의 제조는 본질적으로 하기를 예외하고 실시예 6에 기재된 바와 같았다. 92% TBA/8% 물내 10 mM 원액으로부터 총 1.5 몰 당량의 XC는 다른 PALM 성분과 배합되었다. 용액은 동결건조되었고 수득한 케이크는 0.4 ml의 둘베코 포스페이트 완충된 염수로 재수화되었다. DLS에 의해 결정된, 본 제제의 유체역학적 평균 직경은 9nm이었다 (실시예 11). SEC에 의한 크기 분석은 주요하게 10nm 직경인 단일 입자 집단 (도 3)을 표시하였다.
실시예 8 파클리탁셀 δ-토코트리에닐 카보네이트 (XT3)를 함유하는 PALM의 제조
2.5 몰 당량의 펩타이드에 대응하는 80% TBA/20% 물내 50 μl 분취량의 10 mM의 서열 식별 번호:25의 펩타이드는, 동일한 용매 혼합물로 구성된, 20 mM 원액으로부터 7 몰 당량의 POPC 및 3 몰 당량의 에그 SM과 배합되었다. 이것에 92% TBA/8% 물내 10 mM 원액으로부터 1 몰 당량의 XT3이 첨가되었다. 동결건조된 케이크는 0.4 ml의 둘베코 포스페이트 완충된 염수로 재수화되었다.
실시예 9 R4F는 파클리탁셀 δ-토코트리에닐 카보네이트 (XT3)을 함유하는 PALM의 제조에 적합하지 않다.
PALM 제조는 서열 식별 번호:25로 및 R4F로 실시예 9에서와 같이 수행되었다 (표 1). 실온 및 4 ℃에서 맑은 용액으로 남아있던, 서열 식별 번호:25의 펩타이드로 제조된 PALM과 달리, R4F를 함유하는 PALM은 실온에서 맑은 용액이었지만 4 ℃에서 탁한 겔이 되었다. 겔은 실온으로 가온시 맑은 액체로 돌아왔다. PALM 제제는 크기로 분석되었다 (실시예 11). 동적 광 산란은 서열 식별 번호:25의 펩타이드를 가진 PALM이 8nm (용적 강도)의 평균 유체역학적 직경을 가졌다는 것을 표시하였다. R4F를 가진PALM에 대하여 동일한 분석은 32nm에서 나머지와 11nm의 평균 유체역학적 직경에서 입자 집단의 94%를 보여주었다. SEC는 서열 식별 번호:25의 펩타이드를 가진 PALM의 균일한 크기 분포를 확인하였다 (도 4). 그에 반해서, R4F를 가진 PALM은 서열 식별 번호:25 PALM 초과 크기 내지 8nm 미만 크기에서 용리하는 피크의 범위를 보여주었다. DLS에 의한 더 작은 입자 검출의 부족이 놀랍지 않은 것은 7 nm 미만 입자에 대한 감수성이 상당히 약하기 때문이다. 이들 결과는 R4F가 PALM 제조에 적합한 펩타이드가 아니라는 것을 표시한다.
실시예 10 펜레티나이드는 서열 식별 번호:25의 펩타이드로 제조된 PALM에 장입된다
2.5 몰 당량의 펩타이드에 대응하는 80% TBA/20% 물내 서열 식별 번호:25의 35 μl 분취량의 10 mM 펩타이드는, 각각, 동일한 용매 혼합물로 구성되는, 40 mM 및 20 mM 원액으로부터 3 몰 당량의 POPC 및 7 몰 당량의 에그 SM과 배합되었다. 동일한 용매 혼합물내, 2 몰 당량의 20 mM 펜레티나이드는 또한 첨가되었다. 용액은 동결건조되었고 수득한 케이크는 0.325 ml 포스페이트 완충된 염수로 재수화되었다. 용액은 50 ℃에서 20 분내에 맑아졌다. SEC에 의한 분석 (실시예 11)은 8nm-10nm 직경 범위에서 단일 피크로서 용출된 모든 성분을 표시하였다 (도 5).
실시예 11 PALM 크기의 결정
PALM 제제의 크기 및 크기 균일성은 DLS 및 SEC에 의해 결정되었다. 유체역학적 평균 직경에 기반된 크기는 Nicomp 370 입자 크기 분석기를 수반한 DLS에 의해 결정되었다. 분석기는 라텍스 표준으로 보정되었다. 본 명세서에서 및 청구항에서 언급된 입자 크기는 명확히 달리 표시되지 않는 한 상기에 기재된 바와 같이 DLS에 의해 계산된다.
PALM 입자의 상대 유체역학적 크기는 베크만/코울터 모델 126 펌프 및 모델 128 다이오드 어레이 검출기에 연결된 GE Superose 6 증가 칼럼, (10x300 mm)을 수반한 SEC에 의해 또한 결정되었다. 이동상 (150 mM NaCl, 6 mM NaPO4 (pH 7.4)) 유량은 0.5 ml/분이었다. 용리액은 215 및 280 nm 파장에서 모니터링되었다. 시스템 성능은 단백질 분자량 표준의 주사로 확인되었다 (도 3).
실시예 12 BHK(SR-BI) 세포내 PALM의 SR-BI 선택성
SR-BI 상호작용 연구는 NIH로부터 수득된 BHK(SR-BI) 세포로 실시된다. 세포는 GeneSwitch™ 시스템 (Invitrogen)에 의하여 유도성 인간 SR-BI 유전자로 안정적으로 형질감염되었다. 세포는 제오신 및 하이그로마이신의 200 ug/ml 각각을 함유하는 성장 배지 (10% 우태 혈청을 함유하는 둘베코 변형된 이글 배지)에 플레이팅되었다 (96-웰 플레이트) (8000 세포/웰). 24 시간 인큐베이션 이후, 성장 배지는 제거되었고 둘베코 변형된 이글 배지내 0.2% 소 혈청 알부민으로 대체되었다. SR-BI 발현을 위하여 유도되기 위한 세포의 배지는, DMSO 원액으로부터 첨가된, 10nM 미페프리스톤을 또한 함유하였다. DMSO 단독은 유도되지 않은 세포의 배지에 첨가되었다. 유도 배지는 24 시간 이후 제거되었고 DiI-표지된 PALM (32 μg 펩타이드/ml) 또는 DiI-표지된 HDL (19 μg 단백질/ml) (Kalen Biomedical, Montgomery Village, MD)를 함유하는 배지로 대체되었다. 시험 배지는 둘베코 변형된 이글 배지에서 0.2% 소 혈청 알부민내 분취량의 Di-I-표지된 PALM (실시예 5) 또는 DiI-표지된 HDL 희석에 의해 제조되었다. 용액은 사용 전에 0.2 μm 기공 크기, 폴리에테르설폰, 멸균 필터를 통과되었다. 세포는 4시간 동안 인큐베이션되었다. 다음으로, 세포는 (칼슘 및 마그네슘을 가진) 둘베코 포스페이트 완충된 염수내 0.1% 알부민으로 3회 세정되었다. 마지막 세정은 200 ul/웰의 t-부탄올/물 (95%/5%)로 대체되었다. 피복된 플레이트는 실온에서 30분 동안 가끔 진탕하면서 방치되었다. 각각의 웰에서 형광은 분자 동력학 제미니 형광 플레이트 리더 상에서 550 nm 컷오프 필터로 520nm 여기 및 580nm 방출에서 검출되었다 (도 9).
Figure pct00020
실시예 13 파클리탁셀의 정량화
파클리탁셀, XT3 및 XC는 4 용적의 아세트산에틸/아세톤/메탄올 (70/30/5 v/v)와 1 용적 수성 샘플의 혼합에 의해 수성 샘플로부터 추출된다. 진탕 및 원심분리 이후 수득된, 상부 유기층은 수집되고, 용매 증발 및 진공에 의해 건조되고, HPLC 이동상 (메탄올/물 (65/35 v/v))에 재용해된다. 20 μL 분취량의 재구성된 샘플은 Macherey-Nagel 칼럼 (Nucleosil 10-5 C18을 가진 4 x 250 mm)을 통해 1.2 ml/분의 유량으로 HPLC에서 주사되고 230nm 파장에서 UV 검출기로 검출된다.
실시예 14 미리플라틴을 함유하는 PALM은 PC-3 세포 성장 뿐만 아니라 시스플라틴을 억제시킨다
PC-3세포 (미국 종균 협회, CRL-1435)는 5x103 세포/웰 (100 μL)의 밀도로 96-웰 플레이트에 씨딩되었고 10% 우태 혈청으로 보충된 F-12K 배지로 구성되는 성장 배지에서 대략 70% 합류점 (24 시간)까지 성장되었다. 다음으로, 성장 배지는, 실시예 6에서 제조된 바와 같이, 100 μL 신선한 성장 배지 (대조군)에 의해 또는 5% 덱스트로오스에서 제조된 100-배 농축된 원액으로부터 첨가된 시스플라틴의 다양한 농도 (예를 들면 배지내 0 μM 및 0.1 내지 100 μM 최종 농도)로 또는 PALM내 MP의 동등량으로 보충된 성장 배지에 의해 대체되었다. 각각의 조건은 3중으로 시험되었다. 플레이트는 48시간 동안 인큐베이션되었다. 세포 생존력은 (칼슘 및 마그네슘을 가진) 둘베코 포스페이트 완충된 염수내 5 mg/ml MTT의 20 μl 첨가 및 3시간 동안 인큐베이팅에 의해 티아졸릴 블루 테트라졸륨 브로마이드 (MTT) 검정으로 분석되었다. 다음으로, 배지는 주의하여 제거되었고 디메틸설폭사이드 (DMSO)의 200 μL에 의해 대체되었다. 플레이트는 회전식 진탕기에서 15 분 동안 부드럽게 교반되었다. 각각의 웰의 흡광도는 570 nm에서 판독되었다. 50% 성장 억제 (IC50)를 초래하는 농도는 로지스틱 방정식에 데이터의 비-선형 회귀 맞춤에 의해 결정되었다. 대조군 웰의 평균 흡광도는 100% 성장을 나타냈다 (도 6).
실시예 15 SR-BI 항체는 미리플라틴을 함유하는 PALM에 의해 PC-3 세포 성장 억제를 약화시킨다
PC-3셀은 실시예 14에서와 같이 성장되었다. SR-BI 항체 (Novus Biologics, NB400-113)의 존재하에 시험되는 세포는 항체 원액의 1/400 희석액을 함유하는 성장 배지에서 1시간 동안 사전인큐베이션되었다. 다음으로, 모든 배지는 제거되었고, 실시예 13에서와 같이 제조된, 백금 화합물의 표시된 양을 함유하는 성장 배지로 대체되었다. 항체-처리된 세포를 위하여 PALM(MP)를 가진 성장 배지는 항체 원액의 1/400 희석액으로 항체를 함유하였다. 세포는 5시간 동안 인큐베이션되었다. 다음으로, 모든 배지는 제거되었고; 세포는 배지로 1회 세정되었고 그 다음 성장 배지에서 추가로 43 시간 동안 인큐베이션되었다. 세포 생존은 실시예 14에서와 같이 MTT 검정에 의해 결정되었다 (도 7).
실시예 16 PALM내 XT3은 SKOV-3 세포 성장 XC 차단에서 PALM내 XC보다 더욱 활성이다
SKOV-3 난소암 세포 (미국 종균 협회, HTB-77)은 5x103 세포/웰 (100 μL)의 밀도로 96-웰 플레이트에서 씨딩되었고 10% 우태 혈청으로 보충된 맥코이 배지로 구성되는 성장 배지에서 대략 70% 합류점 (24 시간)까지 성장되었다. 다음으로, 성장 배지는 100 μL 신선한 성장 배지 (대조군)에 의해 또는 다양한 농도의 파클리탁셀, PALM(XC) 또는 PALM(XT3)으로 보충된 성장 배지에 의해 대체되었다. 20μM 파클리탁셀의 시험 용액은 성장 배지 속에 DMSO내 파클리탁셀의 5mM 원액의 희석 그 다음 필터 멸균 (0.2 μm 필터)에 의해 제조되었다. 분취량의 20μM 용액은 4μM 파클리탁셀을 수득하기 위해 성장 배지에서 5-배 희석되었다. 5-배 희석 과정은 800nM 파클리탁셀 용액을 수득하기 위해 4μM로 계속되었다. 상기 과정은 성장 배지내 0.051nM 파클리탁셀의 농도가 수득 완료된 때까지 계속되었다. 이렇게 수득된 9 용액 각각의 4개 100μL 분취액은 세포를 함유하는 별개의 웰들에 적용되었다. 유사한 그러나 변형된 과정은 PALM(XC) 및 PALM(XT3) 시험 용액의 제조에 사용되었다. 시험된 최고 농도는 50μM이었고, 이는 성장 배지내 PALM(XC) 및 PALM(XT3)의 1mM 제제 (실시예 7, 8)의 희석 그 다음 필터 멸균에 의해 제조되었다. 8회 반복된 각각 최신 희석액의 5-배 희석액의 과정에서 수득된 최저 농도는 0.13 nM이었다. 세포는 72시간 동안 시험 용액으로 인큐베이션되었다. 상기 기간의 마지막에서 세포 생존력은 실시예 14에서와 같이 MTT 검정에 의해 결정되었다. (도 8).
실시예 17 PALM(XT3)에 의한 BHK(SR-BI) 세포 성장의 억제는 SR-BI-의존적이다
BHK(SR-BI) 세포는 성장 배지 (10% 우태 혈청 및 200 ug/ml 각각의 제오신 및 하이그로마이신을 함유하는 둘베코 변형된 이글 배지)를 가진 96-웰 플레이트에서 플레이팅되었고 (3000 세포/웰) 24 시간 인큐베이션되었다. 성장 배지는, DMSO 원액으로부터 첨가된 10 nM 미페프리스톤 (유도된), 또는 단독 DMSO (대조군)의 동등량을 함유하는 둘베코 변형된 이글 배지내 0.2% 소 혈청 알부민으로 대체되었다. 세포는 24시간 동안 인큐베이션되었다. 다음으로, 배지는 표시된 농도로 둘베코 변형된 이글 배지에서 0.2% 소 혈청 알부민내 PTX 또는 PALM(XT3)으로 대체되었고, 세포는 12시간 동안 인큐베이션되었다. 그 배지는 그 다음 정상 성장 배지로 대체되었고 세포는 36시간 더 인큐베이션되었다. 시험 제제 없이 세포에 대한 퍼센트 세포 성장은 MTT 검정에 의해 결정되었다 (도 10).
실시예 18 누드 마우스내 SKOV-3 난소 세포 이종이식 억제
최대 내성 용량은 상업적 공급자로부터 수득된 암컷 마우스 (Foxn1nu)에서 결정된다. PALM(XT3)의 효능은, cremophor EL 및 에탄올로 제형화된 파클리탁셀로 구성되는, Taxol®과 비교로 시험된다. 각각의 제제는 수준당 8 마우스를 이용하여 3 용량 수준으로 시험된다. 시험되는 Taxol® 수준은 9, 15, 25 mg/kg이다. 마우스는 정맥내로 Q2Dx4 복용된다. 별개의 비히클 대조군 그룹은 염수 또는 cremophor EL/에탄올 비히클의 적절한 용적으로 처리된다. 모든 마우스는 매일 계량되고 임상 징후에 대하여 관측된다. 모든 마우스는 임의의 지연된 독성을 검출하기 위해 마지막 용량 이후 14 일 유지된다
효능 연구를 위하여, 마우스는 공여체 동물로부터 수집된 30 내지 60mg 종양 단편으로 피하로 이식된다. 명백한 고통에서 또는 빈사 상태에서 발견되는 경우, 1g의 과량으로 종양을 가진 또는 궤양화된 종양을 가진 마우스는 안락사된다. 실험에서 모든 그룹에 대하여 평균 추정된 종양 질량이 100-150mg인 경우 투여 (Q2Dx4)가 시작된다. 2 비히클의 각각에 대하여 비히클 대조군 그룹, 0.6X, 1X, 및 1.67X 최대 내성 용량에서 Taxol®에 대하여 3 처리된 그룹 및 0.3X, 0.6X, 1X, 1.7X 및 2.8X 최대 내성 용량에서 PALM(XT3)에 대하여 5 그룹을 포함하는 10 처리 그룹 (8 마우스 / 그룹)이 있다. 모든 마우스는 임상 징후에 대하여 적어도 1일 1회 관측된다. 체중 및 종양 측정은 매주 3회 기록된다. 마우스는 종양 성장 지연 데이터를 수득하기 위해 마지막 용량 이후 60 일 동안 평가를 계속한다.
종양 부담 (mg)은 하기로서 단위 밀도를 상정하는 장형 타원체의 용적에 대하여 식으로 추정된다: 종양 부담 (mg) = (L x W2)/2, 여기에서 L 및 W는 캘리퍼스 (mm)로 각각의 직교 종양 길이 및 폭 측정이다. 효능을 평가하는데 사용된 1차 종점은 하기이다: 1) 대조군 그룹의 중앙 종양 질량에 의해 분할된 처리된 그룹의 중앙 종양 질량 x 100으로서 한정되는 %T/C, 2) 완전한 및 부분적인 종양 반응, 3) 종양 성장 지연, 및 4) 연구의 마지막에 무종양 생존자의 수. 모든 연구 그룹에 대하여 크기 평가에 대한 중앙 횟수는 임의의 유의차가 그룹 사이 존재하는지를 결정하기 위해 로그 순위 시험 (카플란-마이어)에 의해 분석된다.
실시예 19 δ-토코트리에닐 (N4)-젬시타빈 카바메이트
젬시타빈내 하이드록실 기는 ( 1)을 수득하기 위해 Guo and Gallo (J. Org. Chem. 1999, 64, 8319)의 절차에 따라 디-tert-부틸 디카보네이트를 가진 tert-부톡시카보닐 (BOC) 에스테르로 전환에 의해 보호된다
Figure pct00021
화합물 4는 0.2M 화합물 (4)의 최종 농도로 무수 디클로로메탄에 용해된다. 용액내 화합물 (4)의 모든 몰에 대하여, 염화메틸렌내 0.5M 농도로 1.2 몰 당량의 화합물 (2) 및 3 몰 당량의 DMAP는 실온에서 배합된다. 혼합물은 실온에서 24시간 동안 교반된다. 수득한 생성물은 언급된 바와 같이 트리플루오르아세트산으로 탈보호된다. 순수한 화합물은 표제 화합물 ( 5)를 수득하기 위해 100% 디클로로메탄으로 시작하고 10% 메탄올로 농도를 서서히 증가시키는, 디클로로메탄 및 메탄올 용리액을 이용하는 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 수득된다.
Figure pct00022
실시예 20 α, β 또는 γ-토코트리에놀 이성질체와 (N4)-젬시타빈 카바메이트의 합성은 실시예 19와 유사하게 수행된다.
실시예 21 콜레스테릴 (N4)-젬시타빈 카바메이트
콜레스테릴 (N4)-젬시타빈 카바메이트 (6)의 합성은 실시예 19에 기재된 바와 동일한 방식으로 수행되고 단, 화합물 ( 4)는 (상업적으로 입수가능한) 콜레스테롤 클로로포르메이트와 반응되고 실시예 19에서와 같이 탈보호되어 표제 화합물 (6)을 수득한다.
Figure pct00023
실시예 22 석신산 및 디글라이콜산을 통해 지방 알코올에 연결된 파클리탁셀
석시네이트 또는 디글라이콜레이트 디에스테르 연결을 통해 지방 알코올에 연결된 파클리탁셀의 합성은 실온에서 24시간 동안 일정한 교반과 함께 무수 피리딘내 4-(디메틸아미노)피리딘 및 석신산 무수물 또는 디글라이콜산 무수물과 지방 알코올의 반응에 의해 달성된다. 반응은 디클로로메탄내 0.1 N HCl로 켄칭된다. 생성물은 석유 에테르내 아세트산에틸로 분취 TLC 또는 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 수득된다. 알코올-석신산 또는 -디글라이콜산 콘주게이트는 건조 디클로로메탄내 4-(디메틸아미노)피리딘 및 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드와 배합된다. 파클리탁셀은 반응 혼합물 속에 첨가된다. 24 시간후, 반응은 물로 켄칭되고 디클로로메탄으로 추출된다. 생성물은 용리액으로서 아세트산에틸/헵탄 (50:50)을 이용하는 분취 TLC에 의해 수득된다.
실시예 23 SKOV-3 세포내 PALM(XT3) 세포독성에 관한 SR-BI 항체의 효과
SKOV-3은 실시예 16에서와 같이 플레이팅되었고 24시간 동안 인큐베이션되었다. 다음으로, 성장 배지는 항-SRBI (1/250 희석액) (NB400-113, Novus Biologicals)와 상관없이 0.5% 알부민 및 표시된 농도의 시험 제제를 함유하는 무혈청 배지로 대체되었다. 세포는 12 시간 인큐베이션되었다. 다음으로, 세포는 0.5% 알부민을 함유하는 무혈청 배지로 세정되었고 성장 배지에서 추가로 60 시간 성장되었다. 세포 성장은 MTT 검정에 의해 검출되었다 (도 11).
본 개시내용의 수많은 구현예가 기재되는 동안, 기본 예는 본 발명의 방법 및 공정을 이용 또는 포함하는 다른 구현예를 제공하도록 변경될 수 있다는 것이 분명하다. 구현예 및 예는 예시적인 목적을 위한 것이고 본 개시내용의 제한으로서 해석되지 않고, 오히려, 첨부된 청구항은 본 발명의 범위를 한정한다.
SEQUENCE LISTING <110> HOMAN, REYNOLD <120> FORMULATIONS FOR IMPROVING THE EFFICACY OF HYDROPHOBIC DRUGS <130> 236603-371638 <160> 70 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> L or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> A or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> L or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> A, L, F, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> L or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> A, Aib, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> L or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> A, L, F, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> W, F. or L <400> 1 Asp Val Xaa Gln Xaa Xaa Lys Glu Xaa Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Glu Lys 1 5 10 15 Xaa Lys Gln Val 20 <210> 2 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 2 Asp Val Phe Gln Ala Leu Lys Glu Leu Phe Ala Gln Leu Leu 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<400> 15 Asp Val Phe Gln Ala Leu Lys Glu Leu Phe Asn Gln Leu Xaa Glu Lys 1 5 10 15 Phe Lys Gln Val 20 <210> 16 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 16 Asp Val Phe Gln Ala Phe Lys Glu Ala Phe Ala Gln Leu Phe Glu Lys 1 5 10 15 Trp Lys Gln Val 20 <210> 17 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Aib <400> 17 Asp Val Phe Gln Ala Phe Lys Glu Xaa Phe Ala Gln Leu Phe Glu Lys 1 5 10 15 Trp Lys Gln Val 20 <210> 18 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Aib <400> 18 Asp Val Phe Gln Xaa Phe Lys Glu Xaa Phe Ala Gln Leu Phe Glu Lys 1 5 10 15 Trp Lys Gln Val 20 <210> 19 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Aib <400> 19 Asp 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MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Aib <400> 23 Asp Val Phe Gln Xaa Leu Lys Glu Leu Leu Asn Gln Leu Leu Glu Lys 1 5 10 15 Leu Lys Gln Val 20 <210> 24 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> D or E <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> V, I, or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> L, I, V, W, F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Q or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> K, R, H, or Orn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> L, I, V, W, F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> A, G, S, V, Aib, or Amv <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> A, G, S, L, F, V, Amv, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> L, I, V, W, F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> A, G, S, Aib, Amv, V, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Q or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> L, I, 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can be any naturally occurring amino acid <400> 31 Asp Val Leu Gln Lys Phe Xaa Glu Leu Phe Asn Gln Leu Leu Glu Lys 1 5 10 15 Trp Lys Gln Val 20 <210> 32 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Aib <400> 32 Asp Val Xaa Gln Lys Phe Leu Glu Leu Phe Asn Gln Leu Leu Glu Lys 1 5 10 15 Trp Lys Gln Val 20 <210> 33 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Aib <400> 33 Asp Val Phe Gln Lys Leu Leu Glu Xaa Phe Asn Gln Leu Leu Glu Lys 1 5 10 15 Trp Lys Gln Val 20 <210> 34 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Aib <400> 34 Asp Val Phe Gln Lys Leu Xaa Glu Leu Phe Asn Gln Xaa Leu Glu Lys 1 5 10 15 Trp Lys Gln Val 20 <210> 35 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> 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1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 46 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Aib <400> 46 Val Gln Lys Trp Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Lys Leu Xaa 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 47 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Aib <400> 47 Val Gln Lys Phe Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Lys Leu Xaa 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 48 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Aib <400> 48 Val Gln Lys Trp Lys Glu Xaa Leu Gln Ala Phe Leu Glu Lys Leu Ala 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 49 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Aib <400> 49 Val Gln Lys Trp Lys Glu Xaa Leu Gln Asn Phe Leu Glu Lys Leu Ala 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 50 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Aib <400> 50 Val Gln Lys Phe Lys Glu Xaa Leu Gln Asn Phe Leu Glu Lys Leu Ala 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 51 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 51 Val Gln Lys Trp Lys Glu Phe Leu Gln Ala Phe Ala Glu Lys Phe Ala 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 52 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Aib <400> 52 Val Gln Lys Trp Lys Glu Phe Leu Gln Ala Phe Xaa Glu Lys Phe Ala 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 53 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Aib <400> 53 Val Gln Lys Trp Lys Glu Phe Leu Gln Ala Phe Xaa Glu Lys Phe Xaa 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 54 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Aib <400> 54 Val Gln Lys Trp Lys Glu Phe Leu Gln Xaa Phe Ala Glu Lys Phe Ala 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 55 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Aib <400> 55 Val Gln Lys Trp Lys Glu Phe Leu Gln Xaa Phe Xaa Glu Lys Phe Ala 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 56 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Aib <400> 56 Val Gln Lys Trp Lys Glu Phe Leu Gln Xaa Phe Xaa Glu Lys Phe Xaa 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 57 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 57 Val Gln Lys Trp Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Lys Leu Ala 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 58 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Aib <400> 58 Val Gln Lys Leu Lys Glu Leu Leu Gln Asn Leu Leu Glu Lys Leu Xaa 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 59 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> V, I, or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Q or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> K, R, H, or Orn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> W, F, Y, I, V, or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> K, R, H, or Orn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> E or D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> A, G, S, L, F. V, Amv, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> L, I, V, W, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Q or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> A, G, S, Aib, Amv, V, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> L, I, V, W, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> A, G, S, L, F, V, Amv, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> E or D <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> A, G, S, V, Aib, or Amv <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> L, I, V, W, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> K, R, H, or Orn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Q or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> L, I, V, W, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> V, I, or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> D or E <400> 59 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 60 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Aib <400> 60 Val Gln Lys Trp Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Xaa Leu Lys 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 61 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 61 Val Gln Lys Trp Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Val Leu Lys 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 62 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Aib <400> 62 Val Gln Lys Trp Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Phe Leu Lys 1 5 10 15 Gln Xaa Val Asp 20 <210> 63 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Aib <400> 63 Val Gln Lys Phe Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Xaa Leu Lys 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 64 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 64 Val Gln Lys Phe Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Val Leu Lys 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Aib <400> 65 Val Gln Lys Phe Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Phe Leu Lys 1 5 10 15 Gln Xaa Val Asp 20 <210> 66 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Aib <400> 66 Val Gln Lys Trp Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Xaa Phe Lys 1 5 10 15 Gln Leu Val Asp 20 <210> 67 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Aib <400> 67 Val Gln Lys Trp Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Leu Glu Leu Phe Lys 1 5 10 15 Gln Xaa Val Asp 20 <210> 68 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Aib <400> 68 Val Gln Lys Trp Lys Glu Leu Leu Gln Asn Phe Xaa Glu Leu Leu Lys 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 69 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Aib <400> 69 Val Gln Lys Trp Lys Glu Leu Xaa Gln Asn Phe Leu Glu Xaa Leu Lys 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20 <210> 70 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Aib <400> 70 Val Gln Lys Trp Lys Glu Xaa Leu Gln Asn Phe Leu Glu Xaa Leu Lys 1 5 10 15 Gln Phe Val Asp 20

Claims (39)

  1. X1이 상기 아미노산 D이고; X2 및 X20이 각각 상기 아미노산 V이고; X3, X6, X10 및 X13이 각각 L 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4, X12 및 X19가 각각 상기 아미노산 Q이고; X5가 아미노 A 또는 Aib이고; X7, X16 및 X18이 각각 상기 아미노산 K이고; X8 및 X15가 각각 상기 아미노산 E이고; X9 및 X14가 각각 A, L, F 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X11이 A, Aib 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X17이 W, F 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인, 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:1)을 포함하는 펩타이드로서, 상기 펩타이드가 선택적으로 상기 N-말단에서 아실화되거나, 상기 C-말단에서 아미드화되거나, 상기 N-말단에서 아실화되고 상기 C-말단에서 아미드화되고 상기 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인, 펩타이드.
  2. X1이 D 및 E로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 및 X20이 각각 V, I, 및 L로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X3, X6, X10 및 X13이 각각 L, I, V, W, Y, Aib, Amv 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4, X12 및 X19가 각각 Q 및 N으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X5, X16 및 X18이 각각 K, R, H 및 Orn으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X7이 A, G, S, V, Aib 및 Amv로 구성된 군으로부터 선택되고; X8 및 X15가 상기 아미노산 E 및 D로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; X9 및 X14가 A, G, S L, F, V, Amv, 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X11이 A, G, S, Aib, Amv, V 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X17이 W, F, Y, I, V, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인, 아미노산 서열: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:24)를 포함하는 펩타이드로서, 상기 펩타이드가 선택적으로 상기 N-말단에서 아실화되거나, 상기 C-말단에서 아미드화되거나, 상기 N-말단에서 아실화되고 상기 C-말단에서 아미드화되고 상기 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인, 펩타이드.
  3. X1 및 X19가 각각 상기 아미노산 V이고; X2, X9 및 X17이 각각 상기 아미노산 Q이고; X3, X5, 및 X14가 각각 상기 아미노산 K이고; X4가 W, F, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X6 및 X13이 각각 상기 아미노산 E이고; X7 및 X12가 각각 A, L, F, 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X8, X11, X15 및 X18이 각각 L 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X10이 A, Aib 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X16이 A 및 Aib로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X20이 상기 아미노산 D인, 아미노산 서열 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:36)을 포함하는 펩타이드로서, 상기 펩타이드가 선택적으로 상기 N-말단에서 아실화되거나, 상기 C-말단에서 아미드화되거나, 상기 N-말단에서 아실화되고 상기 C-말단에서 아미드화되고 상기 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인, 펩타이드.
  4. X1 및 X19가 각각 V, I 및 L로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X2, X9 및 X17이 각각 Q 및 N으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X3, X5, 및 X16이 각각 K, R, H, 및 Orn으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X4가 W, F, Y, I, V, 및 L로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X6, X13 및 X20이 각각 E 및 D로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X7 및 X12가 각각 A, G, S, L, F, V, Amv 및 Aib로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 아미노산이고; X8, X11, X15, 및 X18이 상기 아미노산 L, I, V, W, Aib, Amv 및 F로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; X10이 A, G, S, Aib, Amv, V 및 N으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X14가 A, G, S, V, Aib 및 Amv로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산인, 아미노산 서열 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20 (서열 식별 번호:59)를 포함하는 펩타이드로서, 상기 펩타이드가 선택적으로 상기 N-말단에서 아실화되거나, 상기 C-말단에서 아미드화되거나, 상기 N-말단에서 아실화되고 상기 C-말단에서 아미드화되고 상기 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인, 펩타이드.
  5. 서열 식별 번호:2; 서열 식별 번호:3; 서열 식별 번호:4; 서열 식별 번호:5; 서열 식별 번호:6; 서열 식별 번호:7; 서열 식별 번호:8; 서열 식별 번호:9; 서열 식별 번호:10; 서열 식별 번호:11; 서열 식별 번호:12; 서열 식별 번호:13; 서열 식별 번호:14; 서열 식별 번호:15; 서열 식별 번호:16; 서열 식별 번호:17; 서열 식별 번호:18; 서열 식별 번호:19; 서열 식별 번호:20; 서열 식별 번호:21; 서열 식별 번호:22; 서열 식별 번호:23; 서열 식별 번호:25; 서열 식별 번호:26; 서열 식별 번호:27; 서열 식별 번호:28; 서열 식별 번호:29; 서열 식별 번호:30; 서열 식별 번호:31, 서열 식별 번호:32; 서열 식별 번호:33; 서열 식별 번호:34; 서열 식별 번호:35; 서열 식별 번호:37; 서열 식별 번호:38; 서열 식별 번호:39; 서열 식별 번호:40; 서열 식별 번호:41; 서열 식별 번호:42; 서열 식별 번호:43; 서열 식별 번호:44; 서열 식별 번호:45; 서열 식별 번호:46; 서열 식별 번호:47; 서열 식별 번호:48; 서열 식별 번호:49; 서열 식별 번호:50; 서열 식별 번호:51; 서열 식별 번호:52; 서열 식별 번호:53; 서열 식별 번호:54; 서열 식별 번호:55; 서열 식별 번호:56; 서열 식별 번호:57; 서열 식별 번호:58; 서열 식별 번호:60; 서열 식별 번호:61; 서열 식별 번호:62; 서열 식별 번호:63; 서열 식별 번호:64; 서열 식별 번호:65; 서열 식별 번호:66; 서열 식별 번호:67; 서열 식별 번호:68, 서열 식별 번호:69 및 서열 식별 번호:70으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드로서, 상기 펩타이드가 선택적으로 상기 N-말단에서 아실화되거나, 상기 C-말단에서 아미드화되거나, 상기 N-말단에서 아실화되고 상기 C-말단에서 아미드화되고 상기 펩타이드가 20 내지 24 아미노산 길이인, 펩타이드.
  6. 청구항 5에 있어서, 서열 식별 번호:2; 서열 식별 번호:3; 서열 식별 번호:4; 서열 식별 번호:5; 서열 식별 번호:6; 서열 식별 번호:7; 서열 식별 번호:8; 서열 식별 번호:9; 서열 식별 번호:10; 서열 식별 번호:11; 서열 식별 번호:12; 서열 식별 번호:13; 서열 식별 번호:14; 서열 식별 번호:15; 서열 식별 번호:16; 서열 식별 번호:17; 서열 식별 번호:18; 서열 식별 번호:19; 서열 식별 번호:20; 서열 식별 번호:21; 서열 식별 번호:22; 및 서열 식별 번호:23으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되는 펩타이드로서, 상기 펩타이드가 선택적으로 상기 N-말단에서 아실화되거나, 상기 C-말단에서 아미드화되거나, 상기 N-말단에서 아실화되고 상기 C-말단에서 아미드화되는, 펩타이드.
  7. 청구항 5에 있어서, 서열 식별 번호:25; 서열 식별 번호:26; 서열 식별 번호:27; 서열 식별 번호:28; 서열 식별 번호:29; 서열 식별 번호:30; 서열 식별 번호:31, 서열 식별 번호:32; 서열 식별 번호:33; 서열 식별 번호:34; 및 서열 식별 번호:35로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되는 펩타이드로서, 상기 펩타이드가 선택적으로 상기 N-말단에서 아실화되거나, 상기 C-말단에서 아미드화되거나, 상기 N-말단에서 아실화되고 상기 C-말단에서 아미드화되는, 펩타이드.
  8. 청구항 5에 있어서, 서열 식별 번호:37; 서열 식별 번호:38; 서열 식별 번호:39; 서열 식별 번호:40; 서열 식별 번호:41; 서열 식별 번호:42; 서열 식별 번호:43; 서열 식별 번호:44; 서열 식별 번호:45; 서열 식별 번호:46; 서열 식별 번호:47; 서열 식별 번호:48; 서열 식별 번호:49; 서열 식별 번호:50; 서열 식별 번호:51; 서열 식별 번호:52; 서열 식별 번호:53; 서열 식별 번호:54; 서열 식별 번호:55; 서열 식별 번호:56; 서열 식별 번호:57; 및 서열 식별 번호:58로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되는 펩타이드로서, 상기 펩타이드가 선택적으로 상기 N-말단에서 아실화되거나, 상기 C-말단에서 아미드화되거나, 상기 N-말단에서 아실화되고 상기 C-말단에서 아미드화되는, 펩타이드.
  9. 청구항 5에 있어서, 서열 식별 번호:60; 서열 식별 번호:61; 서열 식별 번호:62; 서열 식별 번호:63; 서열 식별 번호:64; 서열 식별 번호:65; 서열 식별 번호:66; 서열 식별 번호:67; 서열 식별 번호:68, 서열 식별 번호:69 및 서열 식별 번호:70으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되는 펩타이드로서, 상기 펩타이드가 선택적으로 상기 N-말단에서 아실화되거나, 상기 C-말단에서 아미드화되거나, 상기 N-말단에서 아실화되고 상기 C-말단에서 아미드화되는, 펩타이드.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 따른 펩타이드, 및 스핑고미엘린과 하나 이상의 추가 인지질을 포함하는 지질 성분을 포함하는, 펩타이드 양친매체 지질 미셀 (PALM).
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 PALM이 상기 지질 성분이 본질적으로 스핑고미엘린 및 하나 이상의 추가 인지질로 구성되는, PALM.
  12. 청구항 10 또는 청구항 11에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 인지질이 포스파티딜콜린, 폴리에틸렌 글리콜-포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE), 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 카디올리핀, 또는 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는, PALM.
  13. 청구항 10 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 인지질이 포스파티딜콜린을 포함하는, PALM.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 포스파티딜콜린이 1-팔미토일-2-올레오일-포스파티딜콜린 (POPC)인, PALM.
  15. 청구항 10 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 인지질 대 스핑고미엘린의 상기 몰비가 약 90:10 내지 약 5:95인, PALM.
  16. 청구항 15에 있어서, 인지질 대 스핑고미엘린의 상기 몰비가 30:70인, PALM.
  17. 청구항 15에 있어서, 인지질 대 스핑고미엘린의 상기 몰비가 약 80:20 내지 약 60:40인, PALM.
  18. 청구항 17에 있어서, 인지질 대 스핑고미엘린의 상기 몰비가 약 70:30인, PALM.
  19. 청구항 10 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 성분 대 펩타이드의 상기 몰비가 약 10:1 내지 약 2:1인, PALM.
  20. 청구항 19에 있어서, 상기 지질 성분 대 펩타이드의 상기 몰비가 약 6:1 내지 약 4:1인, PALM.
  21. 청구항 10 내지 20 중 어느 한 항에 따른 상기 PALM, 및 적어도 하나의 화물 분자를 포함하는, PALM-화물 조성물.
  22. 청구항 21에 있어서, 적어도 하나의 화물 분자가 조영제인, PALM-화물 조성물.
  23. 청구항 22에 있어서, 상기 조영제가 조영제인, PALM-화물 조성물.
  24. 청구항 21 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 화물 분자가 약물인, PALM-화물 조성물.
  25. 청구항 24에 있어서, 상기 약물이 미리플라틴 또는 펜레티나이드인, PALM-화물 조성물.
  26. 청구항 24 또는 청구항 25에 있어서, 상기 PALM-화물 조성물이 추가로 조영제를 포함하는, PALM-화물 조성물.
  27. 청구항 21에 있어서, 적어도 하나의 화물 분자가 하기 식 (I)을 갖는 화합물 콘주게이트인, PALM-화물 조성물:
    A-R-L-X (식 I)
    여기에서 A는 하이드록실 또는 아민 기를 갖는 제제이고; R은 상기 제제의 하이드록실 또는 아민 기이고; L은 링커이고; X는 콜레스테롤, α-토코트리에놀, β-토코트리에놀, γ-토코트리에놀, 및 δ-토코트리에놀로 구성된 군으로부터 선택되는 앵커 모이어티임.
  28. 청구항 27에 있어서, R이 하이드록시 기이고 상기 앵커 모이어티가 카보네이트 에스테르 결합에 의해 제제에 공유 결합되는, PALM-화물 조성물.
  29. 청구항 27에 있어서 R이 아민 기이고 상기 앵커 모이어티가 카바메이트 에스테르 결합에 의해 제제에 공유 결합되는, PALM-화물 조성물.
  30. 청구항 27 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 앵커 모이어티가 콜레스테롤인, PALM-화물 조성물.
  31. 청구항 27 내지 29 중 어느 한 항에 있어서 상기 앵커 모이어티가 δ-토코트리에놀인, PALM-화물 조성물.
  32. 청구항 27 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제가 약물인, PALM-화물 조성물.
  33. 청구항 21 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PALM-화물 조성물이 추가로 조영제를 포함하는, PALM-화물 조성물.
  34. 청구항 33에 있어서, 상기 조영제가 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-디에틸렌트리아민펜타아세트산 (가돌리늄 염) (PE-DTPA(Gd)), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-디에틸렌트리아민펜타아세트산 (망간 염) (PE-DTPA(Mn)), 111In-DTPA-A인, PALM-화물 조성물.
  35. 청구항 32 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약물이 항-암 약물인, PALM-화물 조성물.
  36. 청구항 35에 있어서, 상기 항-암 약물이 하이드록시 캄프토테신; 다우노루비신; 또는 파클리탁셀; 도세탁셀인, PALM-화물 조성물.
  37. 청구항 21 내지 36 중 어느 한 항에 따른 유효량의 PALM-화물 조성물을 그것을 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 장애의 치료 방법.
  38. 청구항 37에 있어서, 상기 장애가 암인, 방법.
  39. 청구항 21 내지 38 중 어느 한 항에 있어서 상기 펩타이드가 서열 식별 번호: 25, 서열 식별 번호: 28, 서열 식별 번호: 34 및 서열 식별 번호: 35로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
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