KR20170139130A

KR20170139130A - 설하 투여를 위한 글루코피라노실 지질 a 및 땅콩 알레르겐 제형

Info

Publication number: KR20170139130A
Application number: KR1020177033665A
Authority: KR
Inventors: 제롬 아리공; 피에르 데몬티그니; 엘-브다우이 하다드; 피에르 칼리치아마; 얀 헤; 크리스 호
Original assignee: 사노피
Priority date: 2015-04-23
Filing date: 2016-04-22
Publication date: 2017-12-18
Also published as: WO2016172511A1; EP3285740A1; US20160310589A1; SG11201708590PA; AU2016252857A1; JP2018516867A; CA2983437A1; CN107847439A; MX2017013564A; BR112017022755A2; TW201709926A

Abstract

본원은 환자에서 알레르기, 예를 들어 땅콩 알레르기를 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 설하 경로를 통해 환자에게 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 땅콩 알레르겐(들)을 투여하는 단계를 수반한다.

Description

설하 투여를 위한 글루코피라노실 지질 A 및 땅콩 알레르겐 제형

관련 출원에 대한 상호 참조

본원은 2015년 4월 23일에 출원된 미국 가출원 제62/151,922호, 2015년 7월 17일에 출원된 미국 가출원 제62/194,067호 및 2016년 3월 3일에 출원된 미국 가출원 제62/303,224호(이의 각각은 그 전문이 참고문헌으로 본원에 포함됨)에 대한 우선권을 주장한다.

본 발명은 알레르기, 예를 들어 땅콩 알레르기의 치료, 및 알레르기 치료를 위해 글루코피라노실 지질 A(Glucopyranosyl Lipid A: GLA) 및 알레르겐, 예컨대 땅콩 알레르겐을 포함하는 유용한 조성물에 관한 것이다.

땅콩 알레르기는 땅콩에 존재하는 보통 독이 없는 항원에 대한 비정상 T-헬퍼-2형(Th-2) 면역 반응을 특징으로 한다. 북미의 학령기의 아동에서의 땅콩 알레르기의 이환율은 대략 1%이고, 대개 평생 동안의 병태이다. 이것은 서구에서 치명적인 알레르기 반응의 가장 흔한 식품 관련 원인이다.

본 발명은, 적어도 부분적으로, 알레르겐, 예컨대 땅콩 알레르겐(들)과 함께 TLR4 작용제를 설하로 투여하는 것이 병원성, 알레르겐 특이적 면역 반응을 조절할 수 있다는 결정에 기초한다. 구체적으로, 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA)는 환자에서 알레르기, 예컨대 땅콩 알레르기를 치료하기 위해 알레르겐, 예를 들어 땅콩 단백질과 함께 투여될 수 있다. GLA 및 땅콩 단백질 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 개시된 약제학적 조성물은 알레르기, 예를 들어 땅콩 알레르기의 치료를 목적으로 하는 설하 면역치료제(sublingual immunotherapy: SLIT)이다.

따라서, 일 양태에서, 본 명세서는 담체(예를 들어, 수성 담체, 즉 물이 용매로서 작용하는 담체) 내에 복수의 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 입자(예를 들어, GLA 리포솜, 미셀(micelle), 응집체 또는 이들의 혼합물), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC), 및 치료학적 유효량의 알레르겐(들), 예를 들어 땅콩 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, GLA 대 DPPC의 몰 비는 약 1:1 내지 약 1:3의 범위이고, 알레르겐(들), 예를 들어 땅콩 단백질의 적어도 약간은 적어도 하나의 지질 입자(예를 들어, 리포솜) 내에 및/또는 상에 적어도 부분적으로(예를 들어, 완전히) 배치되고/배치되거나, 담체(예를 들어, 수성 담체) 중에 유리된다.

또 다른 양태에서, 본 명세서는 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 알레르겐(들), 예를 들어 땅콩 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 약제학적 조성물은 고체 또는 반고체 투여형으로 존재한다.

수성 담체가 사용되는 본원에 기재된 약제학적 조성물의 구현예에서, 수성 담체는 물을 포함할 수 있다. GLA를 포함하는 조성물은 복수의 지질 입자, 예컨대 리포솜, 미셀 및/또는 응집체를 포함하는 형태로 존재할 수 있다. 복수의 평균 지질 입자 크기(예를 들어, 지질 입자의 평균 수력학 직경(Z-평균 직경))은 약 10 ㎚ 내지 약 2000 ㎚, 예를 들어 약 16 ㎚ 내지 약 1800 ㎚, 약 50 ㎚ 내지 약 1000 ㎚, 약 80 ㎚ 내지 약 500 ㎚, 예를 들어 약 90 ㎚, 100 ㎚, 약 200 ㎚, 약 300 ㎚ 또는 약 400 ㎚일 수 있다. GLA를 포함하는 조성물은 콜로이드성 분산액으로 존재할 수 있다. 입자 크기는 Malvern Zetasizer를 사용하여 측정될 수 있고, 이것은 입자의 평균 수력학 직경(Z-평균 직경) 및 다분산도(PDI)를 제공한다. 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물의 몇몇 구현예에서, 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질 및/또는 다른 알레르겐)은 지질 입자 내에 포함되고 완전히 둘러싸이거나 지질 입자 내에 부분적으로 둘러싸이거나, 또는 둘 모두이고/이거나, 지질 입자 표면(들) 상에 배치될 수 있다. 다른 구현예에서, 일부 알레르겐(예를 들어, 땅콩 단백질(들))은 지질 입자에 의해 둘러싸이고/둘러싸이거나 부분적으로 둘러싸일 수 있지만, 다른 것은 약제학적 조성물 중에 유리되고, 지질 입자 내에 둘러싸이지 않고/둘러싸이지 않거나 부분적으로 둘러싸인다. 또 다른 구현예에서, 실질적으로 모든 알레르겐, 예를 들어 땅콩 단백질(들)은 약제학적 조성물 내에 유리되고, 지질 입자 내에 둘러싸이지 않고/둘러싸이지 않거나 부분적으로 둘러싸인다.

본원에 기재된 약제학적 조성물 내의 GLA의 농도는 예를 들어 약 0.2 ㎍/㎖ 내지 약 5 ㎎/㎖, 예를 들어 약 2 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 20 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 150 ㎍/㎖, 200 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 300 ㎍/㎖, 400 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 0.8 ㎎/㎖, 1 ㎎/㎖ 또는 약 1.6 ㎎/㎖일 수 있다. 예를 들어, 조성물 내의 GLA의 농도는 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 5 ㎎/㎖, 예를 들어 약 0.02 ㎎/㎖ 내지 0.2 ㎎/㎖, 또는 0.16 ㎎/㎖일 수 있다. 약제학적 조성물은 0.001% 내지 0.1% DPPC, 예를 들어 0.01% 내지 0.05% DPPC, 예를 들어 0.02% 내지 0.03% DPPC를 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 약 0.010% DPPC, 0.015% DPPC, 0.020% DPPC, 0.025% DPPC, 0.030% DPPC, 0.035% DPPC, 0.040% DPPC, 0.045% DPPC, 또는 약 0.050% DPPC를 함유할 수 있다. 몇몇 경우에, GLA 대 DPPC의 몰 비는 약 1:2일 수 있다. 일 구현예에서, GLA 조성물은 보존제, 예컨대 글리세롤을 포함한다. 예를 들어, SLIT 제형에서 사용하기 위한 GLA 조성물은 0.025% DPPC, 60% 글리세롤 및 물을 포함할 수 있다.

설하 투여를 위한 약제학적 조성물 내의 땅콩 단백질의 농도는 약 2 ㎍/㎖ 내지 약 25,600 ㎍/㎖, 예를 들어 약 2,000 ㎍/㎖ 내지 약 7,000 ㎍/㎖, 예를 들어 약 5,000 ㎍/㎖일 수 있다. 몇몇 구현예에서, 설하 투여를 위한 약제학적 조성물 내의 땅콩 단백질의 농도는 약 3 ㎍/㎖, 약 4 ㎍/㎖, 약 5 ㎍/㎖, 약 6 ㎍/㎖, 약 7 ㎍/㎖, 약 8 ㎍/㎖, 약 10 ㎍/㎖, 약 20 ㎍/㎖, 약 23 ㎍/㎖, 약 24 ㎍/㎖, 약 25 ㎍/㎖, 약 26 ㎍/㎖, 약 50 ㎍/㎖, 약 100 ㎍/㎖, 약 200 ㎍/㎖, 약 500 ㎍/㎖, 약 1 ㎎/㎖, 약 5 ㎎/㎖, 약 10 ㎎/㎖, 또는 약 20 ㎎/㎖이다. 몇몇 구현예에서, 설하 투여를 위한 약제학적 조성물 내의 땅콩 단백질의 농도는 약 6.4 ㎎/㎖ 또는 약 12.8 ㎎/㎖이다. 예를 들어, 본원에 기재된 약제학적 조성물 내의 땅콩 단백질의 농도는 약 5 ㎍/㎖ 내지 약 25,600 ㎍/㎖ 또는 약 1,000 ㎍/㎖ 내지 약 7,000 ㎍/㎖일 수 있다.

다른 알레르겐은, 땅콩 알레르겐에 대한 대안으로서 또는 이것 이외에, 본원에 기재된 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물을 제조하는 방법에 포함될 수 있다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 땅콩 알레르겐(들) 이외의 식품 알레르겐이 포함될 수 있다. 이러한 식품 알레르겐의 예는, 하기의 식품 각각에 대한 알레르기를 치료하기 위해, 우유 알레르겐(예를 들어, 전유 또는 이의 추출물, 카세인(예를 들어, 알파 S1-카세인), 및/또는 베타-락토글로불린), 해산물 알레르겐(예를 들어, 척추동물(예를 들어, 연어, 대구, 고등어, 정어리, 청어, 멸치, 참치, 송어, 해덕, 장어 및/또는 가오리로부터의 알레르겐) 및/또는 무척추동물(예를 들어, 갑각류(예를 들어, 새우, 게, 가재 및/또는 바닷가재 알레르겐) 및/또는 연체동물(예를 들어, 조개, 홍합, 굴, 문어, 오징어 및/또는 가리비 알레르겐)), 난 알레르겐, 겨자 알레르겐, 참깨 알레르겐, 대두 알레르겐, 밀 알레르겐(예를 들어, 글루텐), 과실 알레르겐(예컨대, Bet v 1 또는 이의 동족체, 지질 수송 단백질, 및/또는 프로피린, 및/또는 딸기, 사과, 아보카도, 블루베리, 대추, 키위 과실, 복숭아, 라즈베리, 무화과, 포도, 자두, 체리, 그레이프프루트(grapefruit) 및/또는 프룬으로부터의 알레르겐), 야채 알레르겐(예를 들어, 알팔파, 꽃양배추, 오이, 버섯, 무, 잠두, 가지, 시금치, 주키니, 브로콜리, 및/또는 후추 알레르겐) 또는 견과류 알레르겐(예를 들어, 호두, 아몬드, 캐슈, 피스타치오, 및/또는 피칸 알레르겐)을 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 집 먼지 진드기(house dust mite; HDM) 알레르겐, 공기 알레르겐(예를 들어, 꽃가루 알레르겐) 및/또는 잔디 알레르겐이, 예를 들어 알레르기, 예컨대 계절성 알레르기의 치료를 위해 포함될 수 있다. 추가로, 이러한 알레르겐을 포함하는 조성물은 본원에 기재된 알레르기(즉, 약제학적 조성물에 포함된 알레르겐에 대한 알레르기)를 치료하는 방법에서 사용될 수 있다.

몇몇 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 0.1 ㎍ 내지 약 80 ㎍의 GLA, 예를 들어 0.5 ㎍ 내지 40 ㎍, 예를 들어 0.8 ㎍ 내지 20 ㎍의 GLA의 용량을 전달하도록 제형화될 수 있다. 몇몇 구현예에서, 약제학적 설하 제형은 약 0.5 ㎍, 약 1 ㎍, 약 2 ㎍, 약 5 ㎍, 약 10 ㎍, 약 20 ㎍, 약 40 ㎍ 또는 약 50 ㎍의 GLA를 포함할 수 있다.

몇몇 구현예에서, 본원에 기재된 약제학적 조성물은 약 50 ng 내지 약 30 그램 이상의 땅콩 단백질, 예를 들어 100 ng 내지 약 20 그램 이상의 땅콩 단백질, 약 300 ng 내지 약 15 그램 이상의 땅콩 단백질, 약 500 ng 내지 약 10 그램 이상의 땅콩 단백질; 800 ng 내지 약 9 그램 이상의 땅콩 단백질; 약 1000 ng 내지 약 8.5 그램 이상의 땅콩 단백질; 약 2 ㎍ 내지 약 8.3 그램 이상의 땅콩 단백질; 예를 들어, 약 5 ㎍, 10 ㎍, 20 ㎍, 40 ㎍, 80 ㎍, 100 ㎍, 160 ㎍, 250 ㎍, 320 ㎍, 500 ㎍, 640 ㎍, 1000 ㎍, 1280 ㎍, 2000 ㎍, 2560 ㎍, 3000 ㎍, 4000 ㎍, 5000 ㎍, 5120 ㎍, 6000 ㎍, 7000 ㎍, 10 ㎎, 20 ㎎, 40 ㎎, 50 ㎎, 100 ㎎, 500 ㎎, 1000, ㎎, 1500 ㎎, 2000 ㎎, 또는 약 5000 ㎎, 또는 이것 초과의 땅콩 단백질의 용량을 전달하도록 제형화된다. 조성물은 pH 4 내지 pH 8.5의 범위, 예를 들어 약 pH 4.5, pH 5.5, pH 7.5, 또는 약 pH 8.5일 수 있다. 몇몇 구현예에서, 조성물은 약 pH 8.0, pH 8.1, pH 8.2 또는 약 pH 8.3에 있다. 약제학적 조성물은 약 100 ㎍ 내지 약 8 그램 이상의 땅콩 단백질; 예를 들어, 약 500 ㎍ 내지 약 7.5 그램 이상의 땅콩 단백질의 용량을 전달하도록 제형화될 수 있다.

본원에 기재된 약제학적 조성물 내의 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17, 또는 임의의 이들의 조합 중 하나 이상을 포함하거나, 이들로 이루어질 수 있다. 몇몇 구현예에서, 약제학적 조성물에 포함된 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3 및 Ara h6으로 이루어진다. 다른 구현예에서, 약제학적 조성물에 포함된 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2 및 Ara h6으로 이루어진다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물에 포함된 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h2 및 Ara h6으로 이루어진다.

본원에 기재된 약제학적 조성물은 예를 들어 액체, 반고체, 정제(예를 들어, 속붕해정(fast disintegrating tablet: FDT), 겔 캡슐, 박막, 설하 드롭(sublingual drop), 또는 설하 스프레이의 형태일 수 있다. 본원에 기재된 약제학적 조성물은 생접착성 성분을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 정제 또는 예를 들어 사쉐(sachet) 형태로 포장된 다중입자 과립 또는 코팅된 마이크로스피어의 형태일 수 있다. 본원에 기재된 FDT는 초붕해제(superdisintegrant), 예를 들어 가교결합된 셀룰로스, 가교결합된 폴리비닐피롤리돈, 가교결합된 전분 또는 가교결합된 알긴산, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 조성물은 겔화제, 결합제, 활택제, 부착방지제, 착향료, 감미료 및/또는 착색제, 또는 임의의 이들의 조합을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 박막은 예를 들어 가소화 하이드로콜로이드를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 소정의 박막에서, GLA 또는 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질), 또는 둘 모두는 박막 내에 배치될 수 있다. 다른 박막에서, GLA 또는 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질), 또는 둘 모두는 박막의 표면에 배치된다. 또 다른 박막에서, GLA 또는 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질), 또는 둘 모두는 박막 내에 및 이의 표면에 배치된다.

또 다른 양태에서, 본 명세서는, 환자에서 알레르기를 치료하기 위한 유효량으로 복수의 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 입자 및 알레르겐(예를 들어, 땅콩 단백질)을 알레르기를 가지는 환자에게 설하로 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 알레르기를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 환자에게 설하로 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 몇몇 구현예에서, 복수의 GLA 입자는 제1 약제학적 조성물로서 제형화되고, 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질)은 제2의 별개의 약제학적 조성물로서 제형화된다. 제1 및 제2 약제학적 조성물은 예를 들어 동시에 투여될 수 있거나, 제1 제형은 제2 제형 전에 환자에게 투여될 수 있거나, 제2 제형은 제1 제형 전에 환자에게 투여될 수 있다. 다른 구현예에서, GLA 및 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질)은 수성 담체 내에 복수의 GLA 입자 및 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질)을 포함하는 단일 약제학적 조성물 내에 제형화된다. 약제학적 조성물은 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 추가로 포함할 수 있고, 몇몇 경우에 약제학적 조성물 내의 GLA 대 DPPC의 몰 비는 약 1:1 내지 약 1:3의 범위일 수 있다.

또 다른 양태에서, 본 명세서는, 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질)을 포함하는 약제학적 조성물을 알레르기를 가지는 환자에게 설하로 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 알레르기를 치료하는 방법을 제공하고, 약제학적 조성물은 고체 또는 반고체 투여형으로 존재한다. 약제학적 조성물은 본원에 기재된 바대로 예를 들어 박막 또는 정제 또는 캡슐일 수 있다.

땅콩 알레르겐이 치료에 포함된 본원에 기재된 알레르기를 치료하는 방법에서, 알레르기는 땅콩 알레르기, 자작나무 꽃가루에 대한 알레르기, 복숭아 및 복숭아 관련 과실에 대한 알레르기, 또는 이들의 조합일 수 있다.

본원에 기재된 알레르기를 치료하는 방법은 치료제를 투여하기 전에 환자에서 호염기구(basophil) 활성화 시험을 수행하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 현재 기재된 방법을 이용하여 치료되는 환자는 예를 들어 인간, 예를 들어 성인 인간(18세 이상) 또는 청소년 인간(17세 이하)일 수 있다. 환자는 사춘기(12세 내지 17세), 또는 아동(11세 이하)일 수 있다. 환자는 4세 내지 11세의 아동일 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 설하 제형에 의한 알레르기 환자의 치료는 땅콩 단백질에 대한 노출 시 환자의 미래의 알레르기 반응을 예방할 수 있다. 예를 들어, 땅콩 알레르기 치료에서, 환자의 치료는 20 그램 이상까지의 땅콩 단백질에 대한 환자의 (예컨대, 섭취에 의한) 노출 후 환자의 알레르기 반응의 중증도를 예방하거나 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 보강된 설하 제형에 의한 환자의 치료는 100 ㎎ 내지 10 그램 이상의 땅콩 단백질, 예를 들어 약 200 ㎎, 300 ㎎, 500 ㎎, 800 ㎎, 1000 ㎎, 2000 ㎎, 3000 ㎎, 4000 ㎎, 또는 약 5000 ㎎의 땅콩 단백질에 대한 환자의 노출 후 환자의 알레르기 반응의 중증도를 예방하거나 감소시킬 수 있다. 통상적으로, 설하 제형에 의한 환자의 치료는 땅콩 단백질에 대한 우연한 노출 후 아나필락시스 반응의 예방을 발생시킨다.

더욱 또 다른 양태에서, 본 명세서는 약제학적 조성물을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 클로로포름 중에 1:2 몰 비로 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 동시 용해시켜, GLA/DPPC 혼합물을 형성하는 단계; 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질)을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하여, GLA/DPPC/알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질) 혼합물을 형성하는 단계; GLA/DPPC/알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질) 혼합물로부터 클로로포름을 제거하는 단계; 물을 GLA/DPPC/알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질) 혼합물에 첨가하는 단계; 및 GLA/DPPC/알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질) 혼합물을 아지테이션(agitation)시켜, 약제학적 조성물을 형성하는 단계를 포함한다.

더욱 또 다른 양태에서, 본 명세서는 약제학적 조성물을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 클로로포름 중에 1:2 몰 비로 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 동시 용해시켜, GLA/DPPC 혼합물을 형성하는 단계; GLA/DPPC 혼합물로부터 클로로포름을 제거하는 단계; 물을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하는 단계; GLA/DPPC 혼합물을 아지테이션시키는 단계; 및 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질)을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하여, 약제학적 조성물을 형성하는 단계를 포함한다.

더욱 또 다른 양태에서, 본 명세서는 약제학적 조성물을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 물, 예를 들어 예컨대 약 40℃ 내지 80℃의 온도, 예를 들어 내지 50℃ 내지 70℃까지 가열된 물 중에 1:2 몰 비로 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 혼합하여, GLA/DPPC 혼합물을 형성하는 단계를 포함한다. 이후, GLA/DPPC 혼합물을 승온에서(예를 들어, 약 70℃에서) 아지테이션시키고; 이후 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질)을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하여, 약제학적 조성물을 형성한다.

또 다른 양태에서, 본 명세서는 약제학적 조성물을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 계면활성제를 혼합하는 단계; 물을 GLA/계면활성제 혼합물에 첨가하는 단계; GLA/계면활성제 혼합물을 아지테이션시키는 단계; 및 알레르겐(들)(예를 들어, 땅콩 단백질)을 GLA/계면활성제 혼합물에 첨가하여, 약제학적 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 계면활성제는 예를 들어 라우릴황산나트륨, 폴리소르베이트-80, 폴록사머 407 또는 폴록사머 188, 또는 레시틴 및 타우로콜레이트의 조합, 또는 이들의 조합일 수 있다. 일 예에서, 계면활성제는 폴리소르베이트-80일 수 있고, 혼합물은 40% w/v 내지 80% w/v의 글리세롤, 예를 들어 약 50% w/v, 약 60% w/v, 또는 약 70% w/v의 글리세롤을 추가로 포함할 수 있다. 몇몇 경우에, 본원에 기재된 약제학적 조성물을 제조하는 방법에서, 아지테이션은 음파처리, 미세유동화, 고압 균질화, 또는 예컨대 Ultra-Turrax 시스템에 의한 기계적 아지테이션, 또는 임의의 이들의 조합을 포함할 수 있다. 상기 방법은 약제학적 조성물을 압축 성형하여 정제를 형성하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 방법은 약제학적 조성물을 동결건조 또는 분무 건조하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 방법은 용매 캐스팅, 반고체 캐스팅, 핫 멜트(hot melt) 압출, 고체 분산 압출 및 압연으로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 얇은 중합체 필름을 형성하는 단계; 및 박막 내에 및/또는 박막의 적어도 하나의 표면에 약제학적 조성물을 배치하는 단계를 포함할 수 있다.

본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물 및 약제학적 조성물을 제조하는 방법에서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17, 또는 임의의 이들의 조합 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 약제학적 조성물 및 약제학적 조성물을 제조하는 방법에서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17, 또는 임의의 이들의 조합 중 하나 이상으로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3 및 Ara h6으로 이루어질 수 있다. 또 다른 예로서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2 및 Ara h6으로 이루어질 수 있다. 또 다른 예로서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h2 및 Ara h6으로 이루어질 수 있다.

약제학적 조성물을 제조하는 방법은, 땅콩 단백질을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하기 전에, 땅콩 단백질에서 호염기구 활성화 시험을 수행하여 땅콩 단백질의 효력을 측정하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

환자에서 알레르기(예를 들어, 땅콩 알레르기)의 치료를 위한, 설하 제형(들) 내에, 함께 또는 별개로, GLA 및 알레르겐(들), 예를 들어 땅콩 알레르겐(들)의 용도가 본원에서 또한 제공된다. 알레르기, 예를 들어 땅콩 알레르기의 치료 또는 예방을 위한 설하 약제의 제조에서의, 적어도 GLA 및/또는 알레르겐(들), 예를 들어 땅콩 알레르겐(들)의 용도가 본원에서 또한 제공된다. 약제는 환자에서 알레르기를 치료하는 방법에서 사용될 수 있다. 약제는 본원에 기재된 임의의 형태, 예를 들어 액체, 반고체, 또는 고체 조성물로 존재할 수 있다.

용어 "유효량" 및 "치료하기에 효과적인"은, 본원에 사용된 바대로, 의도된 효과 또는 생리학적 결과를 발생시키기 위해 이의 투여의 맥락 내에 효과적인 시간의 기간 동안(급성 또는 만성 투여 및 정기적 또는 연속적 투여를 포함) 사용되는 본원에 기재된 조성물의 양 또는 농도를 의미한다. 본 발명에서 사용하기 위한 본원에 기재된 조성물의 유효량은 예를 들어 땅콩 또는 땅콩 기반 성분을 포함하는 제품에 대한 섭취 또는 노출에 대한 알레르기 반응을 예방하거나 이의 강도를 감소시키고/감소시키거나, 이러한 알레르기 반응의 위험을 감소시키고/감소시키거나, 이러한 알레르기 반응의 하나 이상의 증상을 감소시키고/감소시키거나, 다른 땅콩 알레르기 치료의 결과를 개선하는 양을 포함한다. 유효량은 당업자에 의해 결정될 수 있다.

용어 "치료한다" 및 "치료"는 본원에서 땅콩 또는 땅콩 기반 성분을 포함하는 제품에 대한 병태, 예를 들어 땅콩 알레르기 또는 알레르기 반응의 증상의 해로운 효과의 발병을 지연시키거나, 이를 저해하거나 경감시키는 것을 기재하는 데 사용된다.

용어 "환자"는 본 명세서에 걸쳐 본 발명의 방법에 따라 치료가 제공되는 동물, 인간 또는 비인간을 기재하도록 사용된다. 수의 및 비수의 용도가 본 발명에 의해 고려된다. 인간 환자는 성인 인간 또는 청소년 인간(예를 들어, 18세 미만의 인간)일 수 있다. 인간 이외에, 환자는 마우스, 랫트, 햄스터, 기니아 피그, 토끼, 페릿, 고양이, 개 및 영장류를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 예를 들어, 비인간 영장류(예를 들어, 원숭이, 침팬지, 고릴라 등), 설치류(예를 들어, 랫트, 마우스, 게르빌루스쥐, 햄스터, 페릿, 토끼), 토끼과, 돼지과(예를 들어, 돼지, 미니 돼지), 말과, 개과, 고양이과, 소과 및 다른 가축, 농장, 및 동물원 동물이 포함된다.

달리 정의되지 않은 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자가 흔히 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실행 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 하기 기재되어 있다. 본원에서 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허 및 다른 참조문헌은 그 전문이 참고문헌으로 포함된다. 상충하는 경우에, 정의를 포함하는 본 명세서가 지배할 것이다. 재료, 방법 및 예는 오직 예시적이고, 제한인 것으로 의도되지 않는다.

도 1a는 미정제 땅콩 추출물(CPE)에 의한 시험감염 후 마우스에서의 아나필락시스 점수에 대한 (다양한 농도의) GLA 및 땅콩 단백질 치료의 효과를 예시하는 막대 그래프이다.

= 비히클 + 대조(CT)군과 비교하여 p<0.001; ^* 비히클 + CPE/CT군과 비교하여 p<0.05.
도 1b는 미정제 땅콩 추출물에 의한 시험감염 후 마우스에서의 아나필락시스 점수에 대한 (다양한 농도의) GLA 및 땅콩 단백질 치료의 효과를 예시하는 막대 그래프이다. CPE 단독 그룹은 이 제시로부터 생략된다.

= 비히클 + 대조(CT)군과 비교하여 p<0.001; ^* 비히클 + CPE/CT군과 비교하여 p<0.05.
도 2a는 미정제 땅콩 추출물에 의한 시험감염 후 마우스에서의 중심 체온 하강에 대한 GLA 및 땅콩 단백질 치료(0.5 ㎍)의 효과를 예시하는 막대 그래프이다.

= 비히클 + 대조(CT)군과 비교하여 p<0.05.
도 2b는 미정제 땅콩 추출물에 의한 시험감염 후 마우스에서의 중심 체온 하강에 대한 GLA 및 땅콩 단백질 치료(0.5 ㎍)의 효과를 예시하는 막대 그래프이다. CPE 단독 그룹은 이 제시로부터 생략된다.

= 비히클 + 대조(CT)군과 비교하여 p<0.05.
도 3은 통상적인 땅콩 추출 공정의 다이어그램이다.
도 4a는 배수 경부 절에서 항원 특이적 T 세포 증식에 대한 GLA 단독의 설하 투여의 효과를 예시하는 히스토그램이다.
도 4b는 비장에서 항원 특이적 T 세포 증식에 대한 GLA 단독의 설하 투여의 효과를 예시하는 히스토그램이다.
도 4c는 배수 경부 림프절에서 항원 특이적 T 세포 증식에 대한 Ova 펩타이드 단독의 설하 투여의 효과를 예시하는 히스토그램이다.
도 4d는 비장에서 항원 특이적 T 세포 증식에 대한 Ova 펩타이드 단독의 설하 투여의 효과를 예시하는 히스토그램이다.
도 4e는 배수 경부 림프절에서 항원 특이적 T 세포 증식에 대한 GLA 및 Ova 펩타이드의 설하 동시 투여의 효과를 예시하는 히스토그램이다.
도 4f는 비장에서 항원 특이적 T 세포 증식에 대한 GLA 및 Ova 펩타이드의 설하 동시 투여의 효과를 예시하는 히스토그램이다.
도 5는 항원과 함께 GLA의 설하 투여가 마우스의 배수 림프절에서 항원 특이적 T 세포 증식을 증대시킨다는 것을 예시하는 막대 그래프이다.

본 명세서는, 적어도 부분적으로, 예를 들어 땅콩 알레르기의 치료를 위해, 설하 투여에 특히 적합한, 알레르겐, 예컨대 땅콩 단백질 및 TLR-4 작용제 GLA를 포함하는 제형에 기초한다. 따라서, 환자에서 알레르기, 예를 들어 땅콩 알레르기를 치료하기 위한 조성물 및 방법이 본원에서 제공된다. 일반적으로, 치료는, 알레르겐의 적어도 하나의 유형과 조합된 GLA를, 설하 경로를 통해, 환자에게 투여함으로써 달성될 수 있다. GLA 및 알레르겐(들), 예를 들어 땅콩 알레르겐은 별개의 설하 제형에서 또는 GLA 및 알레르겐, 예를 들어 땅콩 알레르겐 둘 모두를 포함하는 단일 설하 제형에서 환자에게 투여될 수 있다. GLA 및 알레르겐(들), 예컨대 땅콩 알레르겐 중 하나 또는 둘 모두를 함유하는 개시된 약제학적 제형은 예를 들어 땅콩 알레르기의 치료를 위해 의도된 설하 면역치료제(SLIT)이다.

글루코피라노실 지질 애쥬번트 ( GLA )

현재 기재된 조성물은 분야에서 공지된 애쥬번트 GLA 및 상업적으로 구입 가능한 화합물을 포함한다. 통상적으로, GLA는 화학식 (I) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염일 수 있으며:

식 중, R1, R3, R5 및 R6은 C11-C20 알킬이고; R2 및 R4는 C12-C20 알킬이고; 더 구체적인 구현예에서, GLA는, R1, R3, R5 및 R6이 C11-14 알킬이고; R2 및 R4가 C12-15 알킬인, 상기 기재된 화학식 (I)을 가진다. 다른 더 구체적인 구현예에서, GLA는, R1, R3, R5 및 R6이 C11 알킬 또는 운데실이고; R2 및 R4가 C13 알킬 또는 트리데실인, 상기 기재된 화학식 (I)을 가진다. 또 다른 구체적인 구현예에서, GLA는, R1, R3, R5 및 R6이 운데실이고, R2 및 R4가 트리데실인, 상기 기재된 화학식 (I)을 가진다. GLA는 당해 분야에 공지되어 있고, 숙련자에 의해 제조되고/제조되거나, 다양한 상업적 공급사로부터 얻어질 수 있다.

예를 들어, Avanti Polar Lipids, Inc.사로부터 얻어질 수 있는, 예를 들어 화학식 (II)의 GLA는 본 발명에서 특히 유용하다:

본 발명에서 특징으로 하는 설하 제형에서 사용하기에 적합한 GLA의 약제학적으로 허용 가능한 염은 알루미늄염 또는 암모늄염, 또는 벤자틴염일 수 있다. 다른 적합한 염은 칼슘, 에틸렌 디아민, 리신, 마그네슘, 메글루민, 칼륨, 프로카인, 나트륨, 트로메타민 및 아연을 포함한다. GLA의 아노머 변이체는 본 발명에서 특징으로 하는 설하 제형에서 또한 사용될 수 있다.

본 발명에서 특징으로 하는 설하 제형에서 사용하기에 적합한 GLA는 반대 이온 염을 가지지 않는 GLA의 유리 산 형태(상기 구조 (A) 참조)일 수 있다.

본원에 사용된 바대로, "알킬"은, 1개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하고, 소정의 바람직한 구현예에서 11개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는, 직쇄 또는 분지쇄, 비사이클릭 또는 사이클릭, 불포화 또는 포화 지방족 탄화수소를 의미한다. 대표적인 포화 직쇄 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸, n-헥실 등, 예컨대 운데실, 도데실, 트리데실, 테트라데실, 펜타데실, 헥사데실, 헵타데실, 옥타데실 등을 포함하는 한편; 포화 분지쇄 알킬은 이소프로필, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 이소펜틸 등을 포함한다. 대표적인 포화 사이클릭 알킬은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 등을 포함하는 한편; 불포화 사이클릭 알킬은 사이클로펜테닐 및 사이클로헥세닐 등을 포함한다. 사이클릭 알킬은 본원에서 "호모사이클" 또는 "호모사이클릭 고리"라고도 칭해진다. 불포화 알킬은 인접한 탄소 원자 사이에 적어도 하나의 이중 또는 삼중 결합을 함유한다(각각 "알케닐" 또는 "알키닐"이라 칭함). 대표적인 직쇄 및 분지쇄 알케닐은 에틸레닐, 프로필레닐, 1-부테닐, 2-부테닐, 이소부틸레닐, 1-펜테닐, 2-펜테닐, 3-메틸-1-부테닐, 2-메틸-2-부테닐, 2,3-디메틸-2-부테닐 등을 포함하는 한편; 대표적인 직쇄 및 분지쇄 알키닐은 아세틸레닐, 프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 1-펜티닐, 2-펜티닐, 3-메틸-1-부티닐 등을 포함한다. 예를 들어, "C18-13 알킬" 및 "C6-11 알킬"은 각각 8개 내지 13개 또는 6개 내지 11개의 탄소 원자를 함유하는, 상기 정의된 바와 같은 알킬을 의미한다.

본원에 사용된 바대로, "산 작용기"는 수성 매질 중에 양성자를 공여할 수 있는 작용기(즉, 브뢴스테드-로우리 산)을 의미한다. 양성자를 공여한 후, 산 작용기는 음으로 하전된 종(즉, 산 작용기의 짝염기)이 된다. 산 작용기의 예는 -OP(=O)(OH)₂(포스페이트), -OS(=O)(OH)₂(설페이트), -OS(OH)₂(설파이트), -OC(OH)₂(카복실레이트), -OC(=O)CH(NH₂)CH₂C(=O)OH(아스파르테이트), -OC(=O)CH₂CH₂C(=O)OH(숙시네이트) 및 -OC(=O)CH₂OP(=O)(OH)₂(카복시메틸포스페이트)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.

본원에 사용된 바대로, "하이드로카빌"은 전적으로 수소 및 탄소로부터 형성된 화학 모이어티를 의미하고, 여기서 탄소 원자의 배열이 직쇄 또는 분지쇄, 비사이클릭 또는 사이클릭일 수 있고, 인접한 탄소 원자 사이의 결합이 전적으로 단일 결합일 수 있거나(즉, 포화 하이드로카빌을 제공), 임의의 2개의 인접한 탄소 원자 사이에 이중 또는 삼중 결합이 존재할 수 있고(즉, 불포화 하이드로카빌을 제공), 하이드로카빌 기 내의 탄소 원자의 수는 3개 내지 24개의 탄소 원자이다. 하이드로카빌은 알킬일 수 있고, 여기서 대표적인 직쇄 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸, n-헥실 등, 예컨대 운데실, 도데실, 트리데실, 테트라데실, 펜타데실, 헥사데실, 헵타데실, 옥타데실 등을 포함하는 한편; 분지쇄 알킬은 이소프로필, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 이소펜틸 등을 포함한다. 대표적인 포화 사이클릭 하이드로카빌은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 등을 포함하는 한편; 불포화 사이클릭 하이드로카빌은 사이클로펜테닐 및 사이클로헥세닐 등을 포함한다. 불포화 하이드로카빌은 인접한 탄소 원자 사이에 적어도 하나의 이중 또는 삼중 결합을 함유한다(하이드로카빌이 비사이클릭인 경우 각각 "알케닐" 또는 "알키닐", 및 하이드로카빌이 적어도 부분적으로 사이클릭인 경우 각각 사이클로알케닐 및 사이클로알키닐이라 칭함). 대표적인 직쇄 및 분지쇄 알케닐은 에틸레닐, 프로필레닐, 1-부테닐, 2-부테닐, 이소부틸레닐, 1-펜테닐, 2-펜테닐, 3-메틸-1-부테닐, 2-메틸-2-부테닐, 2,3-디메틸-2-부테닐 등을 포함하는 한편; 대표적인 직쇄 및 분지쇄 알키닐은 아세틸레닐, 프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 1-펜티닐, 2-펜티닐, 3-메틸-1-부티닐 등을 포함한다.

화학식 I 및/또는 II의 화합물은 당해 분야에서 공지된 합성 방법, 예를 들어 PCT 국제 공보 제WO 2009/035528호에 개시된 합성 방법론에 의해 얻어질 수 있다. 숙련자는 GLA가 예를 들어 Avanti Polar Lipids, Inc.로부터 상업적으로 얻어질 수 있다는 것을 또한 이해할 것이다.

알레르겐

본원에 사용된 바대로, "알레르겐"은 환자에서 알레르겐 특이적 알레르기 반응을 생성할 수 있는 임의의 항원 물질이다. 알레르겐은 예를 들어 단백질, 당단백질, 탄수화물, 지질, 당지질 또는 다른 유기 화합물일 수 있다.

본 조성물 및 방법에서 유용한 몇몇 예시적인 알레르겐은 (a) 전장 항원, (2) 항원의 면역원성 단편, (3) 전장 항원 또는 면역원성 단편의 면역원성 변이체, (4) 상이한 폴리펩타이드/항원으로부터의 부분을 포함하는 키메라 융합, 및 (5) 이러한 예의 2개 이상을 포함하는 접합체를 포함한다.

땅콩 단백질은 본원에 기재된 조성물 및 방법에서 특히 유용한 다수의 알레르겐을 함유한다. 본원에 기재된 조성물은 땅콩 알레르겐의 적어도 하나의 유형을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 조성물에 사용된 땅콩 알레르겐은, 예를 들어 (a) 전장 항원, (2) 항원의 면역원성 단편, (3) 전장 항원 또는 면역원성 단편의 면역원성 변이체, (4) 상이한 땅콩 폴리펩타이드로부터의 부분을 포함하는 키메라 융합, 및/또는 (5) 이러한 땅콩 알레르겐의 2개 이상을 포함하는 접합체일 수 있다.

몇몇 경우에, 조성물은 단리된 땅콩 알레르겐의 단일 유형, 단리된 땅콩 알레르겐의 혼합물, 또는 땅콩 알레르겐을 포함하는 땅콩 단백질의 혼합물인 전체 땅콩 추출물을 포함한다. 본원에 사용된 바대로, 용어 "단리된"은 재료가 이의 원래 환경(예를 들어, 이것이 자연 발생하는 경우 자연 환경)으로부터 제거된다는 것을 의미한다. 땅콩 알레르겐의 개별 유형과 관련하여, 이러한 알레르겐의 적어도 17개가 확인되었다. 이들 중에 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17이 있다. 예시적인 알레르겐의 cDNA 서열에 대한 Genbank 수탁 번호는 각각 L34402.1(Ara h1), AY007229.1(Ara h2.0101), AY158467.1(Ara h2.0201), AF093541.1(Ara h3.0101), AF086821.1(Ara h3.0201), AF059616(Ara h5), AF092846.1(Ara h6), AF091737.1(Ara h7), EU046325.1(Ara h7.0201), AY328088.1(Ara h8.0101), EF436550.1(Ara h8.0201), EU159429.1(Ara h9.0101), 및 EU161278.1(Ara h9.0201), AY722694.2(Ara h10.0101), AY722695.1(Ara h10.0201), DQ097716.1(Ara h11), EY396089.1(Ara h12), EY396019.1(Ara h13), AF325917.1(Ara h14.0101), AF325918(Ara h14.0102), DQ368496(Ara h14.0103) 및 AY722696(Ara h15)을 포함한다(예를 들어, 문헌[Leon et al., The peanut allergy epidemic: allergen molecular characterisation and prospects for specific therapy. Expert Rev. Mol. Med. Vol. 9, Issue 1, 2007년 1월] 참조; 또한 문헌[Arkwright et al., IgE Sensitization to the Nonspecific Lipid-Transfer Protein Ara h 9 and Peanut-Associated Bronchospasm, BioMed Research International, vol. 2013, 논문 번호 746507] 참조). 알레르겐 Ara h1, 2, 3, 6, 8 및 9는 땅콩 감작화의 중요한 마커이고, 알레르기 반응을 예측할 수 있다. Ara h1, 2 및 3은 시드 저장 단백질이다. Ara h2는 Ara h1 및 3보다 임상 땅콩 알레르기의 더 중요한 예측변수이고, 대개 중증 반응과 연관된다. Ara h6은 Ara h2와 상호작용하는 항체를 유발하고, Ara h6 및 Ara h2에 대한 감작화는 대개 함께 발생한다. Ara h8은 발병 관련(pathogenesis-related: PR)-10 단백질이고, 감작화는 대개 경증의 국소화 증상과 연관된다. Ara h8은 소정의 꽃가루(예를 들어, 자작나무 및 자작나무 관련 나무 꽃가루)와 상호작용한다. Ara h9는 지질 수송 단백질이고, 감작화는 아나필락시스를 포함하는 전신 반응을 발생시킬 수 있다. Ara h9에 대한 감작화를 가지는 환자는 대개 또한 Ara h1-3에 감작한다. Ara h9는 대개 씨를 뺀 과실, 예컨대 복숭아와 상호작용한다. 본원에 기재된 조성물은, 예를 들어 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17, 또는 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17의 알레르기 반응 유도 부분으로 이루어진 군으로부터 선택된 땅콩 알레르겐의 적어도 하나의 유형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 전체 땅콩의 추출물을 사용할 수 있고, 단일 땅콩 알레르겐 또는 이의 알레르기 반응 유도 부분을 사용할 수 있고, 임의의 단리된 땅콩 알레르겐 및/또는 이의 알레르기 반응 유도 부분을 임의의 조합으로 사용할 수 있다고 생각된다. 예를 들어, 전체 땅콩 추출물 대신에, 조성물은 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17, 또는 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 또는 Ara h17의 알레르기 반응 유도 부분(들)의 적어도 2개, 예를 들어 적어도 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개 또는 17개의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 조성물은 Ara h1, Ara h2 및 Ara h6, 또는 이의 알레르기 반응 유도 부분(들)을 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, 조성물은 Ara h2 및 Ara h6, 또는 이의 알레르기 반응 유도 부분(들)을 포함할 수 있다. 더욱 또 다른 예로서, 조성물은 Ara h1, Ara h2, Ara h3 및 Ara h6, 또는 이의 알레르기 반응 유도 부분(들)을 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, 조성물은 Ara h12 및 Ara h13, 또는 이의 알레르기 반응 유도 부분(들)을 포함할 수 있다. 임의의 전장 알레르겐(들) 및 알레르겐의 임의의 알레르기 반응 유도 부분의 조합을 함께 사용할 수 있는 것으로 생각된다.

몇몇 경우에, 본원에 기재된 조성물은 전장 Ara h 단백질의 혼합물, Ara h 단백질의 알레르기 반응 유도 부분(즉, 면역원성 단편)의 혼합물, 또는 Ara h 단백질의 전장 및 알레르기 반응 유도 부분 둘 모두의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역원성 단편은 적어도 5개, 예를 들어 적어도 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개, 34개, 35개, 36개, 37개, 38개, 39개, 40개, 41개, 42개, 43개, 44개, 45개, 46개, 47개, 48개, 49개 또는 50개, 60개, 70개, 80개, 90개, 또는 적어도 100개, 또는 이것 초과의 단백질의 인접 아미노산을 포함할 수 있다. 면역원성 단편은 작은, 예를 들어 약 50개 이하의 아미노산, 또는 약 6개 내지 10개, 10개 내지 15개, 15개 내지 20개, 20개 내지 30개, 30개 내지 40개, 40개 내지 50개, 50개 내지 60개, 60개 내지 70개, 70개 내지 80개, 80개 내지 90개, 90개 내지 100개, 또는 이것 초과의 인접 아미노산일 수 있다. 면역원성 단편은 선형 에피토프를 형성하는 인접 아미노산을 충분한 수로 포함할 수 있고/있거나, 단편이 비선형 에피토프 또는 에피토프들(또한 당해 분야에서 구조적 에피토프라 칭함)를 제시하도록 유래한, 전장 폴리펩타이드와 동일한(또는 충분히 유사한) 3차원 입체구조에서 단편이 폴딩하도록 허용하는 인접 아미노산을 충분한 수로 포함할 수 있다. 항원의 면역원성 영역 및/또는 에피토프의 확인은 당업자에 의해 및/또는 컴퓨터 분석 및 컴퓨터 모델링에 의해, 당업자에 의해 일상적으로 실행되는 방법 및 기법을 이용하여 용이하게 결정될 수 있다.

몇몇 경우에, 본원에 기재된 조성물은 땅콩 추출물, 예컨대 로스팅된 땅콩으로부터 제조된 추출물, 또는 생(비로스팅된) 땅콩으로부터 제조된 추출물을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 인간에서 사용하기에 적합하고, 약물 물질 또는 약물 제품이라 칭해진다(예를 들어, 도 3 참조). 약물 물질의 형태의 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 약물 제품의 형태로 인간에 대한 투여를 위해 추가로 제형화될 수 있다. 인간에 대한 투여에 허용 가능한 단계로 처리되지 않은 땅콩 추출물은 본원에서 "미정제 땅콩 추출물"이라 칭해진다. 미정제 땅콩 추출물의 예는 땅콩 가루 추출물, 땅콩 오일 및 미정제 땅콩 분말 추출물, 또는 액체 추출물을 포함한다. 또한 "새로운 활성 물질"일 수 있는 약물 물질은 동결건조된 땅콩 분말 추출물, 액체 땅콩 추출물 농축물 또는 희석된 액체 땅콩 추출물일 수 있다. 약물 물질은 또한 정제된 가루 또는 오일 추출물일 수 있다.

약물 물질 또는 약물 제품인, 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 다양한 방식으로, 예컨대 Ara h 단백질 함량, 전체 단백질 함량, 지질 함량, 폴리사카라이드 함량 금속 함량, 아플라톡신 함량, 미생물 함량, 물 함량(특히, 추출물이 동결건조된 경우) 등 중 하나 이상을 측정함으로써 규명될 수 있다. 예를 들어, 추출물은 예컨대 HPTLC(high performance thin layer chromatography: 고성능 박층 크로마토그래피)에 의해 아플라톡신 제품 B1, B2, G1 및 G2 중 하나 이상의 양에 따라 규명될 수 있다. 미생물 함량은 예를 들어 전체 호기성 미생물 수(total aerobic microbial count: TAMC), 전체 효모 및 곰팡이 수(total yeasts and molds count: TYMC) 및 특정한 미생물의 측정을 포함할 수 있다. 몇몇 구현예에서, 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 추출물에 함유된 소정의 불순물, 예컨대 살충제, 용매 또는 다른 유기 또는 무기 재료의 양에 따라 규명될 수 있다.

몇몇 구현예에서, 추출물은 얼마나 많은 특정한 Ara h 단백질, 또는 Ara h 단백질의 조합이 추출물에 함유되는지에 의해 규명된다. 예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물, 또는 미정제 단백질 추출물(예를 들어, 공지된 단백질 함량을 가지는 미정제 단백질 추출물)은 추출물 내의 2개 이상의 Ara h 단백질, 예를 들어 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17 단백질 중 적어도 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개 또는 17개의 백분율에 의해 규명될 수 있다. 땅콩 추출물, 예컨대 약제학적으로 허용 가능한 추출물은 추출물 내의 2개 이상의 Ara h 단백질의 비율에 의해 규명될 수 있다. 예를 들어, Ara h2/Ara h6 비율은 약 3.0 내지 1.0의 범위일 수 있다(예를 들어, 약 3.0, 약 2.5, 약 2.2, 약 2.0, 약 1.9, 약 1.7, 약 1.5, 약 1.4, 약 1.3, 약 1.2, 약 1.1 또는 약 1.0).

약제학적으로 허용 가능한 추출물의 전체 단백질 함량은 약 12% 내지 약 6%(예를 들어, 약 11.5%, 약 11%, 약 10.5%, 약 10%, 약 9.5%, 약 9%, 약 8.5%, 약 8%, 약 7.5% 또는 약 7%)일 수 있다.

일 구현예에서, 추출물은 Ara h1, Ara h2 및 Ara h6 함량 및 전체 단백질 함량의 백분율 함량에 의해 규명된다. 또 다른 구현예에서, 추출물은 Ara h1, Ara h2 및 Ara h6 함량, 전체 단백질 함량 및 지질 함량의 백분율 함량에 의해 규명된다. 또 다른 구현예에서, 추출물은 적어도 (i) Ara h1, Ara h2 및 Ara h6 함량의 백분율 함량, (ii) 전체 단백질 함량, (iii) 지질 함량, 및 (iv) 폴리사카라이드 함량에 의해 규명된다.

땅콩 추출물, 예컨대 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물의 성분은 당해 분야에서 공지된 방법에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 추출물에 존재하는 단백질 및 전체 단백질 함량은 전기영동에 의해, 예컨대 브래드퍼드(Bradford) 검정, SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯(Western Blot), 또는 쿠마시 염색에 의해; ELISA 검정에 의해 또는 크로마토그래피 방법, 예컨대 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피), 또는 HPLC-UV 또는 질량 분광법, 예컨대 LC-MS(액체 크로마토그래피-질량 분광법)에 의해 평가될 수 있다. 이러한 검정은 땅콩 추출물의 단백질 프로필(예를 들어, Ara h 단백질, 예컨대 Ara h1: Ara h2: Ara h6의 비율)을 확인하도록 추가로 사용될 수 있다. 땅콩 추출물의 Ara h 함량은 예를 들어 ELISA에 의해, 특이적 항체(예를 들어, Ara h1, Ara h2 또는 Ara h6에 특이적으로 결합하는 항체)를 사용하여, 또는 LC-MS에 의해 측정될 수 있다. 지질 함량은 예를 들어 HPTLC 또는 HPLC-ESLD(Evaporating light scattering detector: 증발 광 산란 검출기)에 의해 측정될 수 있다. 금속 함량은 예를 들어 ICP-MS(inductively coupled plasma mass spectrometry: 유도 커플링된 플라스마 질량 분광법)에 의해 측정될 수 있다.

땅콩 추출물, 예컨대 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 정성적으로, 예컨대 용액 중의 이의 색상 또는 투명도에 의해 평가될 수 있다.

몇몇 구현예에서, 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 기능적으로, 예컨대 땅콩 알레르기 환자의 생물학적 샘플(예를 들어, 혈청 샘플) 내의 IgE 및 IgG에 결합하는 이의 능력에 의해 규명될 수 있다. 다른 구현예에서, 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 추출물의 생물학적 활성에 의해, 예컨대 땅콩 알레르기 환자의 생물학적 샘플(예를 들어, 혈액 또는 혈청 샘플) 내의 호염기구 또는 PBMC(말초 혈액 단핵 세포) 중 하나 또는 둘 모두를 활성화하기 위한 추출물의 능력에 의해 규명될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 추출물의 효력을 측정함으로써, 예컨대 하기 실시예에 기재된 바와 같은 호염기구 활성화 시험을 이용함으로서 평가될 수 있다.

약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 배치-배치(batch-to-batch) 일관성을 검증하기 위해 인하우스 기준 제품(in house reference product; IHRP)으로서 규명되고 확립될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 IHRP와 동일한 것으로 결정된 단백질 조성을 가질 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 기준 제품의 80% 내지 120%의 단백질 함량, 및 기준 제품에서 확인된 양의 50% 내지 200%인 개별 알레르겐(예를 들어, 소정의 Ara h 단백질, 예컨대 Ara h1, Ara h2 및 Ara h6 단백질)을 가질 수 있다. 몇몇 경우에, 동결건조된 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 예를 들어 5% 이하의 물 함량을 가질 것이다. 몇몇 경우에, 약제학적으로 허용 가능한 땅콩 추출물은 알레르겐 제품에 대한 유럽 약전 모노그래프(European Pharmacopoeia 7.0 01/2010:1063)에 기재된 허용 기준을 만족시킬 것이다.

알레르겐은 항원의 적어도 10개의 인접 아미노산에 대해 적어도 90%의 아미노산 동일성, 또는 항원의 적어도 15개의 인접 아미노산에 대해 적어도 85%의 아미노산 동일성을 보유하는 하나 이상의 천연 발생 폴리펩타이드 항원(예를 들어, Ara h 단백질)의 면역원성 변이체일 수 있다. 다른 예는 항원의 적어도 50개의 인접 아미노산에 대해 적어도 또는 약 70%, 예를 들어 적어도 또는 약 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 또는 약 99%의 동일성, 또는 항원의 적어도 100개의 인접 아미노산에 대해 적어도 또는 약 70%, 예를 들어 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 또는 약 99%의 동일성을 포함한다. 이 폴리펩타이드 면역원성 변이체는 네이티브 항원에 대해 특이적인 면역글로불린과 상호작용하는 능력을 보유한다.

변이체는 아미노산 서열에서 적어도 하나의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 포함할 수 있다. 아미노산의 보존적 치환은 널리 공지되어 있고, 폴리펩타이드에서 천연 발생할 수 있거나, 폴리펩타이드가 재조합으로 제조될 때 도입될 수 있다. 아미노산 치환, 결실 및 부가는 널리 공지되고 일상적으로 실행되는 돌연변이유발 방법을 이용하여 폴리펩타이드로 도입될 수 있다. 대안적으로, 랜덤 돌연변이유발 기법, 예컨대 알라닌 스캐닝 돌연변이유발, 오류가 발생하기 쉬운 중합효소 연쇄 반응 돌연변이유발, 및 올리고뉴클레오타이드 지정 돌연변이유발은 변이체를 제조하도록 사용될 수 있다.

다양한 공지된 기준은 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 특정한 위치에서 치환된 아미노산이 보존적인지(또는 유사한지)를 나타낸다. 예를 들어, 유사한 아미노산 또는 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 가지는 아미노산 잔기에 의해 대체된 것이다. 유사한 아미노산은 하기 카테고리에 포함될 수 있다: 염기성 측쇄를 가지는 아미노산(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘); 산성 측쇄를 가지는 아미노산(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산); 비하전 극성 측쇄를 가지는 아미노산(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 히스티딘); 비극성 측쇄를 가지는 아미노산(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판); 베타 분지된 측쇄를 가지는 아미노산(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신), 및 방향족 측쇄를 가지는 아미노산(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판). 분류하기 더 어렵다고 생각되는 프롤린은 지방족 측쇄를 가지는 아미노산(예를 들어, 류신, 발린, 이소류신 및 알라닌)과 특성을 공유한다. 소정의 상황에서, 글루탐산에 대한 글루타민의 치환 또는 아스파르트산에 대한 아스파라긴의 치환은, 글루타민 및 아스파라긴이 각각 글루탐산 및 아스파르트산의 아미드 유도체라는 점에서, 유사한 치환으로 생각될 수 있다.

폴리펩타이드 알레르겐의 재조합 제조를 위한 다양한 방법이 당해 분야에 공지되어 있다. 재조합 폴리펩타이드를 단리하고 정제하는 데 사용될 수 있는 방법은, 예로서, 재조합 알레르겐 또는 항원을 배양 배지로 분비하는 적합한 숙주/벡터 시스템으로부터 상청액을 얻는 것 및 이후 상업적으로 구입 가능한 필터를 사용하여 배지를 농축시키는 것을 포함할 수 있다. 농축 후, 농축물을 단일의 적합한 정제 매트릭스 또는 일련의 적합한 매트릭스, 예컨대 친화도 매트릭스 또는 이온 교환 수지에 적용할 수 있다. 하나 이상의 역상 HPLC 단계는 재조합 폴리펩타이드를 추가로 정제하도록 사용될 수 있다. 다양한 대안적인 정제 방법은 당해 분야에 공지되어 있다.

알레르겐/항원을 포함하는 조성물은 몇몇 경우에 알레르겐/항원을 발현하는 재조합 발현 벡터를 포함하는 조성물의 형태일 수 있다. 따라서, 본원에서 알레르겐 또는 항원을 포함하는 조성물에 대한 모든 언급은 알레르겐(들) 또는 항원(들)을 코딩하는 뉴클레오타이드를 보유하는 바이러스 벡터를 포함하는 조성물에 동등하게 적용된다.

대안적으로 또는 추가로, 조성물은, 제2 전장 Ara h 단백질에 융합된 제1 전장 Ara h 단백질, 제2 Ara h 단백질의 단편에 융합된 제1 Ara h 단백질의 단편, 또는 제2 Ara h 단백질의 단편에 융합된 제1 전장 Ara h 단백질을 포함하는 융합 단백질과 같은, 상이한 알레르겐으로부터 다수의 부분을 포함하는 키메라 융합인 알레르겐을 포함할 수 있다. 융합 단백질을 제조하는 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있고, 숙련자는 적어도 2개, 예를 들어 적어도 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개 또는 적어도 17개의 알레르겐, 예를 들어 Ara h 단백질의 전부 또는 일부를 포함하는 융합 단백질을 포함하는 많은 변형이 가능하다는 것을 이해할 것이다.

땅콩 알레르겐에 대한 대안으로서 또는 이것 이외에 다른 알레르겐이, 약제학적 조성물 또는 본원에 기재된 약제학적 조성물을 제조하는 방법에 포함될 수 있다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 땅콩 알레르겐(들) 이외의 식품 알레르겐이 포함될 수 있다. 이러한 식품 알레르겐의 예는 하기 식품 각각에 대한 알레르기를 치료하기 위해 우유 알레르겐(예를 들어, 전유 또는 이의 추출물, 카세인(예를 들어, 알파 S1-카세인), 및/또는 베타-락토글로불린), 해산물 알레르겐(예를 들어, 척추동물(예를 들어, 연어, 대구, 고등어, 정어리, 청어, 멸치, 참치, 송어, 해덕, 장어 및/또는 가오리로부터의 알레르겐) 및/또는 무척추동물(예를 들어, 갑각류(예를 들어, 새우, 게, 가재 및/또는 바닷가재 알레르겐) 및/또는 연체동물(예를 들어, 조개, 홍합, 굴, 문어, 오징어 및/또는 가리비 알레르겐)), 난 알레르겐, 겨자 알레르겐, 참깨 알레르겐, 대두 알레르겐, 밀 알레르겐(예를 들어, 글루텐), 과실 알레르겐(예컨대, Bet v 1 또는 이의 동족체, 지질 수송 단백질, 및/또는 프로피린, 및/또는 딸기, 사과, 아보카도, 블루베리, 대추, 키위 과실, 복숭아, 라즈베리, 무화과, 포도, 자두, 체리, 그레이프프루트 및/또는 프룬으로부터의 알레르겐), 야채 알레르겐(예를 들어, 알팔파, 꽃양배추, 오이, 버섯, 무, 잠두, 가지, 시금치, 주키니, 브로콜리, 및/또는 후추 알레르겐) 또는 견과류 알레르겐(예를 들어, 호두, 아몬드, 캐슈, 피스타치오, 및/또는 피칸 알레르겐)을 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 집 먼지 진드기(HDM) 알레르겐, 공기 알레르겐(예를 들어, 꽃가루 알레르겐) 및/또는 잔디 알레르겐은 예를 들어 알레르기, 예컨대 계절성 알레르기의 치료에 포함될 수 있다. 땅콩 알레르겐에 대한 대안으로 또는 추가로, 이러한 알레르겐을 포함하는 조성물은 본원에 기재된 알레르기(즉, 약제학적 조성물에 포함된 알레르겐에 대한 알레르기)를 치료하는 방법에서 사용될 수 있다.

설하 투여를 위한 조성물의 조제

설하 투여 투여형(들) 내에 GLA 및 별개로 알레르겐(예를 들어, 별개의 GLA 및 땅콩 단백질 조성물), 또는 GLA 및 알레르겐 둘 모두의 조합(예를 들어, 단일 조성물 내의 GLA 및 땅콩 단백질의 조합)을 포함하는 조성물은 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에서 유용한 조성물은 땅콩 알레르겐을 포함하는 조성물이다. 땅콩 단백질을 추출하고 알레르겐 조제품을 제조하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 미정제 땅콩 추출물을 제조하는 방법은 미국 특허 제6,486,311호에 제공된다. 몇몇 방법에서, 땅콩은 (예를 들어, 상업적 공급사로부터) 제공되고, 임의로 땅콩 가공 분야에서 공지된 방법을 이용하여 로스팅되고, 163℃ 내지 177℃에서 13 내지 16분 동안 (적용 가능한 경우, 로스팅 후) 헥산에 의해 탈지된다. 이후, 분말이 된 미정제 땅콩을 4℃에서 4시간 동안 1 ㏖/ℓ의 NaCl, 20 m㏖/ℓ의 인산나트륨(pH 7.0) 및 8 ㏖/ℓ의 우레아 중에 추출할 수 있다. 추출물을 4℃에서 60분 동안 20,000 g에서 원심분리에 의해 청징할 수 있다. 또 다른 예시적인 방법은 미국 특허 공보 제2014/0363470호에 기재되어 있고, 이것은 땅콩을 땅콩 분말로 분쇄하는 단계; 50 ㎖의 아세톤마다 5 그램의 땅콩 분말을 사용하여 30분 동안 아세톤 중에 땅콩을 항온처리하여 탈지된 땅콩 분말을 제공하는 단계, 탈지된 땅콩 분말을 건조시키는 단계, 7 내지 9의 pH를 가지는 완충제 중에 분말을 현탁시키는 단계, 및 생성된 상청액을 단리하여 전체 땅콩 추출물을 제공하는 단계를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 땅콩 추출물, 땅콩 가루(예를 들어, 분쇄된 땅콩 및 탈지된 땅콩을 포함) 및/또는 개별 알레르겐은 개인, 학계, 정부 또는 상업적 공급사(예를 들어, Greer(미국 노스캐롤라이나주); Golden Peanut(미국 텍사스주); Amanda Nut Processing Plant(독일); INDOOR biotechnologies(미국 버지니아주))로부터 얻어질 수 있다.

땅콩 단백질을 포함하는 본원에 기재된 조성물(단독이든 또는 GLA와 조합이든)은 약 0.3 ㎍/100 ㎖ 내지 약 26,000 ㎍/㎖, 예를 들어 0.5 ㎍/100 ㎖ 내지 25,600 ㎍/㎖, 예를 들어 5 ㎍/100 ㎖ 내지 약 10,000 ㎍/㎖, 예를 들어 약 3 ㎍/㎖ 내지 약 5,000 ㎍/㎖의 범위의 땅콩 단백질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 약 100 ㎍/㎖ 내지 약 25,600 ㎍/㎖, 또는 약 2000 ㎍/㎖ 내지 약 10,000 ㎍/㎖의 범위의 땅콩 단백질을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 조성물은 적어도 또는 약 1 ㎍/㎖, 예를 들어 적어도 또는 약 3 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 20 ㎍/㎖, 24 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 26 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 200 ㎍/㎖, 400 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖, 2000 ㎍/㎖, 3000 ㎍/㎖, 4000 ㎍/㎖, 5000 ㎍/㎖, 6000 ㎍/㎖, 6400 ㎍/㎖, 6500 ㎍/㎖, 6600 ㎍/㎖, 7000 ㎍/㎖, 8000 ㎍/㎖, 9000 ㎍/㎖, 10,000 ㎍/㎖, 15,000 ㎍/㎖, 20,000 ㎍/㎖, 25,000 ㎍/㎖, 또는 26,000 ㎍/㎖의 땅콩 단백질을 포함할 수 있다.

땅콩 단백질을 포함하는 조성물은 0.05% 내지 1%, 예를 들어 0.1% 내지 0.5%, 예를 들어 0.2% 내지 0.3%, 예를 들어 0.25%의 양으로 염, 예컨대 염화나트륨 또는 시트르산나트륨을 포함할 수 있다. 땅콩 단백질을 포함하는 조성물은 보존제, 예컨대 글리세롤을, 30% 글리세롤 내지 80% 글리세롤, 예를 들어 40% 글리세롤 내지 60% 글리세롤, 예를 들어 45% 글리세롤, 50% 글리세롤 또는 55% 글리세롤의 양으로 함유할 수 있다. 땅콩 단백질을 포함하는 조성물은 중성 또는 염기성 pH, 예를 들어 pH 7 내지 pH 9, 예를 들어 pH 7.5, pH 8.0, pH 8.2, pH 8.5에 있을 수 있다.

일 구현예에서, (GLA를 가지거나 가지지 않는) 설하 투여를 위한 땅콩 단백질을 포함하는 조성물은 0.25% NaCl, 0.27% NaHCO₃, 60% 글리세롤 및 물을 포함한다. 일 구현예에서, 조성물은 약 8.2의 pH를 가진다.

GLA를 포함하는 조성물은 임의의 수의 당분야에 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 예시적인 일 방법에서, GLA는 상업적 공급사(예를 들어, Avista Pharma Solutions(노스캐롤라이나주 더럼), Avanti Polar Lipids(앨라배마주 알라바스터), Immune Design Corporation(워싱턴주 시애틀))로부터 합성되거나 얻어질 수 있다. GLA는 약 1:2(GLA:DPPC)의 몰 비로 지질, 예컨대 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC; 예를 들어 Avanti Polar Lipids, Inc.로부터 상업적으로 구입 가능)과 조합되고, 임의로 와류에 의해 또는 당분야에 공지된 다른 혼합 수단에 의해 클로로포름 중에 용해될 수 있다. 이후, 클로로포름은 (예를 들어, 진공 하에) 증발될 수 있고, 생성된 박막 고체 혼합물은 예를 들어 물 중에 재수화되고 희석될 수 있다. 이후, 혼합물은 (예컨대, 나노입자를 생성하기 위해, 예를 들어 Ultra-Turrax®(IKA®(노스캐롤라이나주 윌밍턴)) 등에 의한 하나 이상의 기계적 아지테이션에 의해, BecoMix(A. Berents GmbH & Co. KG(독일 슈투어))에 의해, 또는 음파처리, 미세유동화 또는 고압 균질화, 또는 임의의 이들의 조합에 의해) 아지테이션되고 여과될 수 있다. 상기 방법 동안 제형의 음파처리는 GLA 지질 입자, 예컨대 리포솜, 미셀, 및/또는 응집체, 또는 이들의 조합을 포함하는 제형을 생성시킨다. 몇몇 경우에, 최종 평균 지질 입자 크기는 100 ㎚ 미만이다. 몇몇 경우에, 본원에 기재된 방법에 의해 제조된 제형 내의 지질 입자의 최종 평균 크기는 약 10 ㎚ 내지 약 2000 ㎚, 예를 들어 약 16 ㎚ 내지 약 1800 ㎚, 약 50 ㎚ 내지 약 1000 ㎚, 약 80 내지 약 500 ㎚, 약 85 ㎚ 내지 약 300 ㎚, 약 95 ㎚ 내지 약 200 ㎚, 약 90 ㎚ 내지 약 100 nm이다. 몇몇 경우에, 최종 평균 지질 입자 크기는 500 ㎚ 미만이다.

GLA를 포함하는 조성물은 예를 들어 0.001% 내지 0.1% DPPC, 예를 들어 0.01% 내지 0.05% DPPC, 예를 들어 0.02% 내지 0.03% DPPC, 예를 들어 0.025% DPPC의 농도로 DPPC를 함유할 수 있다. GLA를 포함하는 조성물은 보존제, 예컨대 글리세롤을, 30% 글리세롤 내지 80% 글리세롤, 예를 들어 40% 글리세롤 내지 60% 글리세롤, 예를 들어 45% 글리세롤, 50% 글리세롤 또는 55% 글리세롤의 양으로 함유할 수 있다. 땅콩 단백질을 포함하는 조성물은 중성 또는 염기성 pH, 예를 들어 pH 7 내지 pH 9, 예를 들어 pH 7.5, pH 8.0, pH 8.2, pH 8.5에 있을 수 있다.

일 구현예에서, (땅콩 알레르겐을 가지거나 가지지 않는) GLA를 포함하는 조성물은 0.025% w/v DPPC, 60% w/v 글리세롤 및 물을 포함한다. 상기 제형은 물 중에 포함될 수 있다. 몇몇 구현예에서, 상기 제형은 여과될 수 있다.

몇몇 경우에, 조제 방법에서 클로로포름을 사용하지 않는 것이 유리할 수 있다. 따라서, 또 다른 예시적인 방법은 절차에서 클로로포름을 사용하는 것을 생략한다. 예를 들어, GLA 및 DPPC는 1:2의 몰 비로 조합될 수 있다. (예를 들어, 50℃ 내지 75℃의) 따뜻한 정제수를 첨가하고, 혼합물을 예컨대 기계적 아지테이션 또는 음파처리에 의해 아지테이션시키고 여과시킨다. 예를 들어, 일 구현예에서, GLA 및 0.025% DPPC를 조합한다. (예를 들어, 70℃의) 따뜻한 정제수를 첨가하고, Ultra-Turrax를 사용하여 혼합물을 기계적으로 아지테이션시킨다. 몇몇 구현예에서, 혼합물을 추가로 정제한다.

중요하게는, 숙련자는 DPPC에 대한 대안으로서 또는 이것 이외에 지질 또는 계면활성제를 사용할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예시적인 대안적인 지질 또는 계면활성제는 예를 들어 라우릴황산나트륨; 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올레에이트(또한 폴리소르베이트-20 및 Tween-80으로 공지됨); 폴록사머(또한 상표명 Synperonics, Pluronics 및 Kolliphor 하에 공지됨), 예를 들어 폴록사머 407 또는 폴륵사머 188; 캄퍼; Tween-20; 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 일 경우에, 상기 조제는 50% 또는 60% 글리세롤과 함께 폴리소르베이트(예를 들어, 폴리소르베이트-80)를 이용할 것이고, 이것은 보존제 비함유 제형을 유지시키는 데에 유용할 수 있다. 일 예에서, 설하 제형은 레시틴 및 타우로콜레이트 중 하나 또는 둘 모두를 포함할 것이다.

일 구현예에서, 설하 제형은 보존제를 함유하지 않는다.

GLA과 사용될 때, 예를 들어 스케일 업 공정 동안 특히 유용한 나노현탁액을 형성하기 위해 GLA 용액을 음파처리할 필요를 감소(또는 제거)시킬 수 있는, (예를 들어, 제형의 0.5% 내지 10%의) Tween-80이 현재 기재된 방법에서 특히 유용하다.

본원에 기재된 방법에 의해 제조된 조성물 내의 GLA의 농도는 약 0.002 ㎎/㎖ 내지 약 8.0 ㎎/㎖, 약 0.005 ㎎/㎖ 내지 약 7.0 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 6.0 ㎎/㎖, 약 0.02 ㎎/㎖ 내지 약 5.5 ㎎/㎖, 예를 들어 약 0.05 ㎎/㎖ 내지 약 5.0 ㎎/㎖, 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 4.0 ㎎/㎖, 약 0.2 ㎎/㎖ 내지 약 3.5 ㎎/㎖, 약 0.3 ㎎/㎖ 내지 약 3 ㎎/㎖, 약 0.4 ㎎/㎖ 내지 약 2.5 ㎎/㎖, 약 0.5 내지 약 2.0 ㎎/㎖, 또는 약 0.6 내지 약 2 ㎎/㎖의 범위일 수 있다. 예를 들어, GLA 농도는 약 0.02 ㎎/㎖, 약 0.1 ㎎/㎖, 약 0.8 ㎎/㎖ 또는 약 1.6 ㎎/㎖일 수 있다. 추가로, 본원에 기재된 GLA를 제조하는 방법에서, GLA 대 DPPC의 몰 비는 약 1:1 내지 약 1:3, 예를 들어 약 1:2의 범위일 수 있다. 몇몇 경우에, GLA 이외에, 지질 및/또는 애쥬번트의 적어도 하나의 다른 유형(예를 들어, 지질의 적어도 2개, 적어도 3개 또는 적어도 4개의 유형 및/또는 애쥬번트의 적어도 2개, 적어도 3개 또는 적어도 4개의 유형)이 본원에 기재된 조성물에 포함될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 몇몇 경우에, DPPC 이외에, 계면활성제의 적어도 하나의 다른 유형(예를 들어, 계면활성제의 적어도 2개, 적어도 3개 또는 적어도 4개의 유형)이 본원에 기재된 조성물에 포함될 수 있다.

GLA 및 땅콩 단백질 둘 모두를 포함하는 조성물은 상기 기재된 땅콩 단백질(예를 들어, 본원에 기재된 전체 땅콩 추출물 또는 개별 알레르겐)의 수성 용액을 GLA 및 계면활성제(예를 들어, DPPC)와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 대안적으로, GLA는 항원과 공침될 수 있다. 일 예에서, 상기 방법은 용매, 예컨대 클로로포름 중에 1:2 몰 비로 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 동시 용해시켜 GLA/DPPC 혼합물을 형성하고, 이후 예컨대 땅콩 단백질의 형태의 땅콩 알레르겐을 혼합물에 첨가하는 것을 포함한다. 이후, 용매, 예를 들어 클로로포름을 예를 들어 진공 하에 GLA/DPPC/땅콩 단백질 혼합물로부터 제거한다. 이후, 물을 GLA/DPPC/땅콩 단백질 혼합물에 첨가하여 혼합물을 재수화시키고, 이후 혼합물을 예를 들어 음파처리 및/또는 미세유동화를 통해 아지테이션시킨다. 또 다른 예시적인 방법은 클로로포름 중에 1:2 몰 비로 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 동시 용해시켜 GLA/DPPC 혼합물을 형성하는 것을 포함한다. 이후, 클로로포름을 예를 들어 진공 하에 GLA/DPPC 혼합물로부터 제거한다. 이후, 물을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하고, 이후 혼합물을 (예를 들어, 기계적 아지테이션을 이용하여, 예컨대 Ultra-Turrax, 또는 음파처리 및/또는 미세유동화에 의해) 아지테이션시킨다. 이후, 땅콩 단백질 추출물을 단백질의 원하는 농도를 달성하도록 적절한 양으로 제형에 첨가한다.

또 다른 예시적인 방법에서, GLA 및 DPPC를 클로로포름 중에 1:2 몰 비로 동시 용해시켜 GLA/DPPC 혼합물을 형성한다. 이후, 클로로포름을 예를 들어 진공 하에 GLA/DPPC 혼합물로부터 제거한다. 이후, 혼합물을 분무 건조시켜 GLA/DPPC의 고체 입자를 형성한다. 이후, 땅콩 단백질을 유체 층 코팅 공정에 의해 GLA/DPPC 입자의 표면에 적층한다. 최종 조성물은 GLA 및 땅콩 단백질을 함유하는 건조 분말이다.

대안적으로, 숙련자는 GLA 및 땅콩 단백질의 별개의 조성물이 본원에 기재된 바대로 생성되고, 환자에 대한 투여 직전에 함께 혼합될 수 있다는 것을 이해할 것이다.

조성물은 투여에 적합한 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제와 편리하게 제형화될 수 있다. 약제학적 부형제의 상세내용은 문헌["Handbook of Pharmaceutical Excipients", 7th Ed. (2012), The Pharmaceutical Press, London, Editors: Rowe et al]에서 발견될 수 있다. 적합한 생리학적으로 허용 가능한 담체 및 희석제는 예를 들어 무균수 또는 5% 덱스트로스 물 용액을 포함한다. 생리학적 pH에서의 무균 식염수 및/또는 인산염 완충 식염수를 사용할 수 있다. 보존제, 안정화제, 염료 및/또는 착향료가 본원에 기재된 약제학적 조성물에 제공될 수 있다. 예를 들어, 나트륨 벤조에이트, 소르브산 및 p-하이드록시벤조산 에스터는 보존제로서 첨가될 수 있다. 항산화제 및/또는 현탁제가 포함될 수 있다.

현재 기재된 조성물의 설하 투여는 본 발명에서 특히 유용하다. 겔 또는 다른 점성 제형은 설하 표면과의 항원 접촉 증가로 인해 유용할 수 있다. 숙련자는 제형이 점막 조직에 물리적으로 또는 화학적으로 결합할 필요가 없다는 것을 이해할 것이다.

설하 투여에 적합한 제형은 수성 및 비수성 무균 용액을 포함할 수 있다. 이러한 제형은 항산화제, 완충제, 정세균성 화합물 및 제형이 개체의 체액, 예를 들어 점액과 등장성이 되게 하는 용질을 포함할 수 있다. 수성 및 비수성 무균 현탁액은 현탁제 또는 증점제를 포함할 수 있다.

구체적으로, GLA 단독 또는 항원 단독을 포함하는 조성물, 및 GLA 및 항원 둘 모두를 포함하는 조성물을 포함하는, 본원에 기재된 조성물은 설하 전달을 위한 형태, 예컨대 겔, 캡슐, 겔 캡슐, 로젠지, 정제, 스프레이, 드롭, 스트립, 또는 필름으로 혼입되거나, 장치, 예컨대 (예를 들어, 서방형 전달을 위한) 패치 또는 펌프 또는 분무기에 배치될 수 있다. 조성물은 예를 들어 계량 투입 펌프에 의해 투여될 수 있다. 조성물은 대안적으로 다중입자 과립 또는 마이크로스피어로 혼입되고 임의로 용기, 예컨대 사쉐 등에 포장될 수 있다.

예로서, 별개의 제형에서 또는 조합 제형으로서 땅콩 단백질 및 GLA를 전달하기 위한 스프레이 또는 드롭 제형이 제조될 수 있다. 본 발명에서 유용한 스프레이 또는 드롭 제형은 약 0.5% NaCl, 0.54% Na-바이카보네이트 및 50% 글리세롤을 포함할 수 있다. 대안적으로, 본 발명에서 유용한 스프레이 또는 드롭 제형은 약 0.5% NaCl, 0.54% Na-바이카보네이트 및 60% 글리세롤을 포함할 수 있다. 제형은 약 4.0 내지 약 8.4(예를 들어, pH 5.0, pH 5.5, pH 6.0, pH 6.8, pH 7.0, pH 7.5 또는 pH 8.0)의 pH를 가질 수 있다. 하나의 예시적인 스프레이 또는 드롭 제형은 착향료, 예컨대 감귤향(예를 들어, 오렌지향 또는 체리향)을 포함하고, pH 4 내지 4.5를 가진다.

또 다른 예에서, 조성물은 연고, 페이스트, 겔, 용액제, 산제 등의 형태일 수 있다. 겔은 카보머로 또한 공지된 카보폴, 카복시비닐 중합체, 또는 셀룰로스계 증점제, 예컨대 하이드록시에틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스 칼슘, 카복시메틸셀룰로스 나트륨, 에틸 셀룰로스, 메틸셀룰로스를 사용하여 제형화될 수 있다. 겔은 아카시아, 알긴산, 벤토나이트, 카라기난, 세토스테아릴 알콜, 젤라틴, 구아 검, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 말토덱스트린, 폴리비닐 알콜, 프로필렌 카보네이트, 프로필렌 글리콜 알기네이트, 콜로이드성 이산화규소, 나트륨 알기네이트, 트래거캔스, 및/또는 잔탄 검을 사용하여 또한 편리하게 제형화될 수 있다. 카보폴 및 셀룰로스계 물질이 특히 유용하다.

설하 정제로서 제형화된 약제학적 조성물은 본원에 기재된 방법에서 특히 유용하다. 설하 정제는 혀 아래에 놓이고, 보통 작고 평평하고 약간 압축되어 연질 정제를 생성한다. 정제는 용이하게 용해되어서 조성물이 빨리 흡수될 수 있게 해야 한다. 신속히 붕해하거나 용해되는 정제를 제형화하도록 다양한 기법이 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Fu et al., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 2004; 21: 433-476] 참조). 직접 압축은, 신속한 정제 붕해를 달성하기 위한 제형으로의 초붕해제의 혼입 또는 고도로 수용성인 부형제의 사용을 수반할 수 있는, 이들 기법 중 하나이다. 직접 압축은 제형화 절차 동안 물 또는 열의 사용을 요하지 않고, 수분 및 열 불안정 약제에 대한 이상적인 방법이다. 초붕해제는 예를 들어 가교결합된 셀룰로스, 가교결합된 폴리비닐피롤리돈, 가교결합된 전분 및 가교결합된 알긴산을 포함한다. 설하 정제는 예를 들어 결합제, 예컨대 젤라틴, 미정질 셀룰로스, 수크로스와 덱스트린, 폴리비돈, 트래거캔스, 아카시아, 전분 또는 메틸셀룰로스; 기질 지지/붕해제, 예컨대 만니톨, L-알라닌, 옥수수 전분, 알긴산, 셀룰로스 또는 셀룰로스 유도체, 포비돈 또는 나트륨 크로스카르멜로스; 활택제, 예컨대 스테아르산, 스테아레이트(예를 들어, 마그네슘 스테아레이트), 나트륨 스테아릴 푸마레이트 또는 탈크; 완충제; 표면 활성제; 콜로이드성 이산화규소, 황산칼슘, 염화칼슘, 탈크, 옥수수 전분으로부터 선택된 부착방지제; 물, 에틸 알콜, 아세톤, 이소프로필 미리스테이트, 폴리옥시프로필렌, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, 70% 소르비톨, 폴리에틸렌 글리콜, 광유, 페트롤라툼, 라놀린, 식물성 왁스, 동물 왁스, 식물성 오일, 예컨대 올리브유, 면실유, 옥수수유, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 극성 및 비극성 용해제; 및 감미료(예를 들어, 덱스트로스, 수크랄로스, 스테비아, 아스파탐, 아세설팜 칼륨, 프럭토스, 글루코스, 만니톨, 소르비톨, 당 및 수크로스) 또는 다른 착향료(예를 들어, 초콜릿, 멘톨, 바닐린, 시나몬, 소르비톨, 시트르산, 체리향, 오렌지향, 파인애플향, 복숭아향, 포도향 또는 베리향, 예컨대 딸기향 또는 블루베리향) 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 착향료는 감귤향, 예컨대 SyrSpend 체리, SyrSpend 그레이프 또는 Ora-Sweet 체리이다. 착향료는 0.0001% 내지 5.0%의 비율로 존재할 수 있다.

예시적인 정제는 설하 속붕해정(FDT)(동결건조물일 수 있음), 생접착성 설하 정제, 압축 정제(ODT - 경구로 붕해하는 정제), 및 지질 매트릭스 설하 정제를 포함한다. 이러한 정제를 제조하는 예시적인 방법은 예를 들어 문헌[Nibha et al., International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences, p. 913-923, vol. 3 (2) Apr. - June 2012]에 기재되어 있다. 설하 정제는 예를 들어 (로스팅된 땅콩 또는 생땅콩으로부터의) 땅콩 추출물, GLA, 옥수수 전분 및 락토스 1수화물 마그네슘 스테아레이트를 포함할 수 있다. 설하 정제는, 또 다른 예로서, (로스팅된 땅콩 또는 생땅콩으로부터의) 땅콩 추출물, GLA, 만니톨, 미정질 셀룰로스, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 예컨대 크로스카르멜로스 나트륨, 콜로이드성 무수 실리카, 마그네슘 스테아레이트 및 락토스 1수화물을 포함할 수 있다. 설하 정제의 또 다른 예는 (로스팅된 땅콩 또는 생땅콩으로부터의) 땅콩 추출물, GLA, 젤라틴, 만니톨 및 수산화나트륨을 포함하는 것이다. 몇몇 경우에, 설하 정제 제형은 GLA 또는 땅콩 추출물의 둘 모두가 아닌 이들 중 하나를 함유할 수 있다.

박막 또는 스트립이 또한 유용하다. 박막 또는 스트립은 액체, 예를 들어 환자의 타액과 접촉할 때 용해하고, 필름 또는 스트립이 용해하도록 허용하는 적절한 양의 시간 동안 혀 아래에 배치된다. 속붕해 필름은 가소화 하이드로콜로이드로 제조될 수 있다. 필름은 통상적으로 수분에 안정하고, 가요성이고, 포장 재료 및 손가락에 달라붙는 것에 저항하도록 제형화될 수 있다. 설하 투여를 위한 박막 또는 스트립을 제조하는 예시적인 방법은 용매 캐스팅, 반고체 캐스팅, 핫 멜트 압출, 고체 분산 압출 및/또는 압연을 포함한다(예를 들어, 문헌[Nibha et al., International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences, p. 913-923, vol. 3 (2) Apr. - 2012년 6월] 참조). 숙련자는 본 발명의 박막 또는 스트립이 다수의 상이한 입체구조를 취할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, GLA 또는 땅콩 단백질(예를 들어, 로스팅된 땅콩 또는 생땅콩으로부터 제조된 땅콩 추출물), 또는 둘 모두는 박막 내에 배치될 수 있다. 대안적으로, GLA 또는 땅콩 단백질(예를 들어, 로스팅된 땅콩 또는 생땅콩으로부터 제조된 땅콩 추출물), 또는 둘 모두는 박막의 표면에 배치될 수 있다. 대안적으로, GLA 또는 땅콩 단백질(예를 들어, 로스팅된 땅콩 또는 생땅콩으로부터 제조된 땅콩 추출물), 또는 둘 모두는 박막 내에 및 이의 표면에 둘 모두에 배치될 수 있다.

설하 투여를 위한 박막 또는 스트립은 통상적으로 예를 들어 중합체, 예컨대 풀루란 또는 미정질 셀룰로스와 말토덱스트린; 가소제, 예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 저분자량 폴리에틸렌 글리콜, 프탈레이트 유도체, 예컨대 디메틸, 디에틸, 또는 디부틸 프탈레이트, 시트레이트 유도체와 트리부틸, 트리에틸, 아세틸 시트레이트, 트리아세틴 또는 캐스터유; 감미료; 착색제, 및 증점제 및 안정화제 중 하나 이상을 함유한다.

환자의 혀 아래에 제형의 점착 또는 보유를 증대시키기 위해 제형에 첨가될 수 있는 화합물, 즉 점막점착제가 특히 유용하다. 예시적인 점막점착제는 키토산, 히알루네이트, 알기네이트, 젤라틴, 콜라겐, 폴리(아크릴산), 폴리(메타크릴산), 폴리(L-리신), 폴리(에틸렌이민), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(2-하이드록시에틸 메타크릴레이트), 및 이들의 유도체 또는 공중합체, 및 임의의 이들의 조합을 포함한다. 숙련자는 점막점착제가 본원에 기재된 임의의 제형 또는 투여형에 첨가될 수 있다는 것을 이해할 것이다.

고체 투여형을 제조하기 위한 다양한 상업적 공급처, 예컨대 Zydis® technology를 사용하는 Catalent®; Suglets® Sugar Spheres를 제조하는 Colorcon®; Sprayspheres™ 미정질 셀룰로스(microcrystalline cellulose; MCC) 펠렛을 제조하는 Umang Pharmatech가 존재한다.

제형은 단일 용량 또는 다중 용량 용기, 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이알에서 제시될 수 있고, 사용 직전에 오직 무균 액체 담체의 첨가를 요하는 동결 건조 조건에서 저장될 수 있다.

치료 및 조성물의 투여

본원에 기재된 치료를 실행하는 데 반드시 필요한 것은 아니지만, 환자는 치료 전에 및/또는 동안에 땅콩 알레르기로 진단되고/진단되거나, 표준 임상 기준에 따라 모니터링될 수 있다. 표준 임상 기준은 예를 들어 땅콩 섭취와 일시적으로 관련된 1형 과민증 반응(예를 들어, 두드러기, 종창, 천명, 복통, 구토, 숨가쁨)의 병력을 포함할 수 있다. 양성 피부 단자 시험(3 ㎜ 이상의 팽진 직경) 또는 0.35 kU/ℓ 초과의 ImmunoCap 혈청 IgE에 의한 땅콩 특이적 IgE의 존재는 땅콩 알레르기를 또한 나타낼 수 있다. 환자의 혈액은 예를 들어 하기 실시예 부문에 자세히 기재된 호염기구 활성화 시험을 이용하여 평가될 수 있다.

조성물은 용량 제형와 상용성인 방식으로 투여되고, 이러한 양은 예방적으로 및/또는 치료학적으로 효과적일 것이다. 투여되는 분량은 치료되는 환자, 항체를 합성하는 환자의 면역계의 역량, 및 원하는 보호의 정도에 따라 달라진다. 몇몇 경우에, 환자는 상승하는 땅콩 단백질 용량 섭생을 포함할 수 있는 일련의 투여에 의해 치료될 수 있다. 투여되는 활성 성분의 정확한 양은 의사의 판단에 따라 달라질 수 있고, 각각의 개별 환자에 특별할 수 있다. 조성물은 단일 용량 스케줄로, 또는 다중 용량 스케줄로 제공될 수 있다.

하나의 예시적인 투약량 섭생에서, GLA를 포함하는 조성물, 예컨대 GLA를 포함하는 고체 또는 액체 조성물이 처음에 투여되고, 이후 알레르겐, 예를 들어 땅콩 알레르겐(들)을 포함하는 조성물(예를 들어, 고체 또는 액체 조성물)이 투여된다. 또 다른 예시적인 투약량 섭생에서, GLA 및 땅콩 알레르겐(들) 둘 모두가 거의 동일한 시간에 투여된다. 일 섭생에서, GLA(예를 들어, 1 ㎍/50 ㎕ 또는 10 ㎍/50 ㎕에서의, 또는 이 2개 값(포함) 사이의 범위의 액체 제형) 및 DPPC(또는 GLA, DPPC 및 글리세롤, 또는 GLA, DPPC 및 Tween 80)를 포함하는 GLA 조성물이 제공된다. 일정량의 GLA 조성물(예를 들어, 약 50 ㎕ 내지 약 500 ㎕의 액체 제형)은 설하로, 즉 환자의 혀 아래로 투여된다. 환자에 대한 GLA 조성물의 투여 후에 및/또는 동안에, 일정량의 땅콩 단백질 조성물(예를 들어, 약 6 ㎍/㎖ 내지 약 25.6 ㎎/㎖(포함)의 단백질 농도, 예를 들어 6 ㎍/㎖ 또는 25.6 ㎎/㎖의 단백질 농도를 가지는 약 50 ㎕ 내지 약 200 ㎕의 액체 제형)은 설하로, 즉 환자의 혀 아래로 투여된다. 여기서, 땅콩 단백질 조성물은 6.8 내지 8.4의 pH에서 예를 들어 50% 글리세롤 또는 60% 글리세롤 또는 70% 글리세롤, 및, 임의로, 보존제로서의 0.4% 페놀, 0.2% 내지 0.5% NaCl, 0.20% 내지 0.45% 중탄산나트륨 및 50% 글리세롤을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 땅콩 단백질 조성물은 약 8.2의 pH에서 예를 들어 60% 글리세롤, 0.25% NaCl, 0.27% 중탄산나트륨, 60% 글리세롤, 및 물을 포함한다.

또 다른 예시적인 섭생에서, GLA 및 GLA의 가용화를 돕는 화합물, 예컨대 DPPC 또는 폴리소르베이트, 예컨대 PS80 또는 PS20을 포함하는 조성물(예를 들어, 고체 제형)이 제공된다. GLA 조성물은 DPPC, 폴리소르베이트, 글리세롤, 또는 Tween(예를 들어, Tween 80) 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 일정량의 GLA 조성물은 설하로, 즉 환자의 혀 아래로 투여된다. 캡슐 또는 정제의 형태의 고체 제형은 예를 들어 설하 투여를 위해 GLA의 치료학적 유효량, 예컨대 0.5 ㎍, 1 ㎍, 1.5 ㎍, 2 ㎍, 3 ㎍, 5 ㎍, 7 ㎍, 10 ㎍, 12 ㎍, 15 ㎍, 20 ㎍ 또는 이것 초과의 GLA를 함유할 수 있다.

몇몇 경우에, GLA를 포함하는 고체 제형 및 땅콩 단백질을 포함하는 별개의 고체 제형은 예를 들어 고체 제형을 혀 아래에 함께 또는 반대 측에서 환자의 혀 아래에 배치함으로써 거의 동일한 시간에 환자에게 투여된다. 다른 경우에, GLA 및 땅콩 단백질 둘 모두를 포함하는 단일 고체 제형은 환자의 혀 아래에 배치된다. 다른 경우에, GLA를 포함하는 액체 제형 및 땅콩 단백질을 포함하는 별개의 액체 제형은 예를 들어 액체 제형을 혀 아래에 함께 또는 반대 측에서 환자의 혀 아래에 배치함으로써 거의 동일한 시간에 환자에게 투여된다. 또 다른 경우에, GLA 및 땅콩 단백질 둘 모두를 포함하는 단일 액체 제형은 환자의 혀 아래에 배치된다. 또 다른 경우에, 조성물의 각 유형 중 하나, 즉, 1개의 고체(GLA 또는 땅콩 단백질을 포함) 및 1개의 액체(GLA 또는 땅콩 단백질을 포함, 즉 어떤 성분이든 고체 조성물 내에 포함되지 않음)는 환자에게 투여될 수 있다.

환자에게 조성물이 투약되는 빈도는 환자의 필요 및 필요한 보호의 수준에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 각각의 조성물(즉, GLA 조성물 및 땅콩 단백질 조성물)의 하루에 오직 단일 용량이 환자에게 투여된다. 다른 경우에, 환자에게 하루에 1회 초과, 예컨대 하루에 2회, 3회 이상 투약될 수 있다. 또 다른 경우에, 환자에게 다수 일(예를 들어, 적어도 2일, 예를 들어 적어도 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일) 동안, 또는 수주(예를 들어, 적어도 2주, 예를 들어 적어도 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 또는 8주 초과) 동안 또는 수개월(예를 들어, 적어도 2개월, 예를 들어 적어도 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 또는 6개월 초과) 동안 1일 1회, 또는 다수 일(예를 들어, 적어도 2일, 예를 들어 적어도 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일) 동안, 또는 수주(예를 들어, 적어도 2주, 예를 들어 적어도 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 또는 8주 초과) 동안 또는 수개월(예를 들어, 적어도 2개월, 예를 들어 적어도 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 또는 6개월 초과 내지 수년까지) 동안 매일 1회 초과(예를 들어, 적어도 2회 또는 적어도 3회) 투약될 수 있다. 숙련자는 상기 방법이 환자에 대한 조합된 GLA/땅콩 단백질 제형의 전달에 맞게 조정될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 이러한 제형은 액체 조합된 GLA/땅콩 단백질 제형 또는 고체의, 용해 가능한 정제 조합된 GLA/땅콩 단백질 제형의 형태를 취할 수 있다.

본원에서 특징으로 하는 GLA 및 땅콩 SLIT 제형의 투여에 적합한 대상체는 1세 이상의 아동, 예를 들어 4세 이상의 아동이다. 본원에서 특징으로 하는 GLA 및 땅콩 SLIT 제형의 투여에 적합한 환자는 2세 내지 12세, 예를 들어 4세 내지 10세의 아동, 13세 내지 20세의 사춘기 및 21세 이상의 성인을 포함한다.

본원에 기재된 땅콩 단백질/GLA 조합 설하 치료의 효능은 환자에서의 소정의 마커, 예를 들어 면역계의 마커, 예컨대 사이토카인 및 인터류킨의 발현을 검사함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 환자는 Th1 사이토카인, 예컨대 IL-1β, IL-6, 또는 IFN-γ, IFN-β 또는 Th2 사이토카인, 예컨대 IL-4, IL-5, IL-10 또는 IL-13의 발현에 대한 제형의 효과에 대해 평가될 수 있다. 몇몇 구현예에서, 환자는 생물학적 샘플, 예컨대 타액 또는 혈액 또는 혈청 샘플, 또는 설하 점막으로부터의 샘플(예를 들어, 면봉 또는 생검)에서 IL-10, IL-7, IL-8, IL-2, IL-12, IL-17, GM-CSF, CRP(C 반응성 단백질), 피브리노겐, RSAD2, IFIT1B, TLR4, TNFα, TNFγ, CXCL2, CXCL10, CCL4, CCL7, CD154, I형 인터페론 및/또는 TGFβ의 발현에 대한 효과에 대해 평가된다. 예를 들어, GLA 및 항원을 포함하는 제형의 투여는 항원에 대한 노출 후 CD154 또는 IL-13 발현의 상향조절을 예방할 수 있고, IL-10 발현 수준을 유지시키거나 증가시키거나, IL-10 발현의 감소를 예방할 수 있다. 바이오마커 발현에 대한 효과는 환자로부터 단리된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 평가될 수 있다. 발현은 mRNA 또는 단백질 수준의 변화에 대해 평가함으로써 모니터링될 수 있다. 환자는 수지상 세포(DC)의 상향조절 또는 CD40, CD80, CD83, CD86, 및 MHC II 중 하나 이상의 대식세포 표면 발현에 대해 또한 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 환자는 CD80 및 CD86의 대식세포 발현의 상향조절에 대해 모니터링될 수 있다. 환자는 침 분비 땅콩 알레르겐 특이적 IgA, 땅콩 알레르겐 특이적 IgE, 땅콩 알레르겐 특이적 IgG, 또는 알레르겐 특이적 Ig4 중 하나 이상의 발현에 대해 또한 모니터링될 수 있다. 일 구현예에서, 환자는 생물학적 샘플 내의, 예컨대 환자의 설하 점막으로부터의 샘플 내의 IL-6 수준에 대한 제형의 효과에 대해 평가된다. 통상적으로, GLA/땅콩 알레르겐 제형의 투여는 IL-6 수준이 설하 투여의 부위에서 용량 의존적 방식으로 상승하게 할 것이다.

몇몇 구현예에서, GLA/땅콩 알레르겐 설하 치료의 효과를 측정하기 위해 호염기구 활성화 시험이 사용될 것이다. 예를 들어, 호염기구 활성화 시험은 환자로부터의 혈액 샘플에서 바이오마커 발현 샘플링에 사용될 수 있다. 예시적인 바이오마커는 IgE, CD203c, HLS-DR, CD123, CD63 및 Lin을 포함한다. 통상적으로, 치료 전의 수준과 비교하여 GLA/땅콩 알레르겐 샘플로 치료된 환자로부터의 혈액 샘플 내에 CD203c, CD63 및 호염기구 탈과립(예를 들어, 히스타민 및 베타 헥소사미니다제 방출)은 감소할 것이다. 또한, 땅콩 알레르겐 유도된 기억 T 세포 활성화가 감소할 것이고, 이것은 알레르겐 유도된 증식, 및 IL-2 및 IL-13 발현의 감소, 및 IFNγ 및 IL-10 발현의 증가에 의해 입증될 것이다. 환자는 T 조절 세포 활성의 예상된 증가에 대해 또한 모니터링될 수 있고, 이것은 FoxP3 양성 T 세포, IL-10 발현의 증가, 및 조절 T 세포의 FoxP3 좌위에서의 후성학적 변화의 증가에 의해 통상적으로 입증된다. 환자는 땅콩 알레르겐 특이적 IgG, 예컨대 IgG1, IgG2a, IgG2c 및 IgG4의 증가에 대해 또한 모니터링될 수 있다.

추가로, 본 발명에서 병용 치료가 고려된다. 예를 들어, 숙련자는 본원에 기재된 치료 방법이 알레르기, 예를 들어 땅콩 알레르기에 대해 당분야에 공지된 다른 치료제와 함께 환자에게 투여될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 이러한 병용 치료는 알레르기 자체, 및/또는 환자에서의 알레르기의 하나 이상의 증상에 대한 공지된 치료를 포함할 수 있다.

추가로, 소정의 땅콩 알레르겐이 다른 비땅콩 알레르겐과 신체에서 상호작용하므로, 숙련자는 현재 기재된 조성물이 알레르기의 다른 유형을 치료하는 데 유용할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 땅콩 알레르겐(들)을 포함하는 본원에 기재된 조성물 및 방법은 자작나무 꽃가루에 대한 알레르기를 치료하는 데 유용할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 조성물 및 방법은 씨를 뺀 과실, 예컨대 복숭아 및 복숭아 관련 과실 및 제품에 대한 알레르기를 치료하는 데 유용할 수 있다.

본 발명은 제한이 아니라 오직 예시를 위한 것인 하기 실시예를 참조하여 기재될 것이다.

실시예

실시예 1. 설하로 동시 투여 된 GLA 및 땅콩 알레르겐은 땅콩 알레르기에 대한 보호 효과를 제공한다

본 실시예는 GLA 및 땅콩 알레르겐(들)의 조합이, 설하로 투여될 때, 땅콩 알레르겐에 의한 후속하는 시험감염에 대해 보호를 부여한다는 것을 나타내는 생체내 마우스 연구를 기재한다. 모든 실험을 마우스 모델 C3H/HeOuJ에서 수행하였다. 간단히 말하면, 마우스를 0일, 1일, 2일, 7일, 14일 및 21일에 1 ㎎의 미정제 땅콩 추출물(CPE), 및/또는 10 ㎍의 콜레라 독소(cholera toxin: CT)에 의해 감작화시켰다. 이후, 마우스를 28일, 35일, 42일 및 49일에 설하로 CPE(0.5 ㎍, 5.0 ㎍ 또는 50 ㎍), GLA(수성 제형; GLA-AF) 및 메틸 셀룰로스(MC)(1.875%)에 의해 치료하였다. 마지막으로, 마우스를 56일에 500 ㎍의 CPE에 의해 복강내로(IP) 시험감염시켰다. 실험을 57일에 종료하였다. 실험 프로토콜은 하기 표 1에 요약되어 있다.

결과는 도 1a, 도 1b, 도 2a 및 도 2b에 제공된다. 각각의 도면에서, x축은 마우스의 소정의 그룹에 투여된 치료의 설명을 제공한다. 모든 마우스를 500 ㎍의 CPE에 의해 복강내로 시험감염시키고, 이것은 x축 아래에 표시된다. 도 1a 및 도 1b에서, y축은 각각의 치료에 대해 0 내지 5의 규모로 마우스에서 관찰된 아나필락시스 점수를 제공한다. 도 2a 및 도 2b에서, y축은 시험감염 후 마우스에서 관찰된 중심 체온의 변화를 제공한다. 중증 반응은 아나필락시스 점수의 증가(도 1a 및 도 1b) 또는 체온 하강(도 2a 및 도 2b)으로 분명해진다. 중심 온도의 감소, 또는 아나필락시스의 증가가 더 클수록, 반응이 더 중증이다. IP 시험감염 후, 덜 심한 체온 하강 또는 더 낮은 아나필락시스 점수가 관찰될 때 보호 효과가 주목된다.

방법: 설하 투여를 위해, 무침 주사기를 사용하여 마취된 마우스의 혀 아래로 설하로 5 ㎕의 화합물을 적용하였다. 마우스를 용량이 흡수되는 시간을 허용하도록 10분 동안 모니터링한 후, 마우스를 이들의 우리로 돌려보냈다.

식염수는 0.9% NaCl이었다. CPE를 DPBS(둘베코 인산염 완충 식염수) 중에 제형화하고, 식염수 중에 희석시켰다. 물 중에 GLA 및 DPPC를 1:2 몰 비로 혼합함으로써 GLA-AF를 제형화하였다. 투약 직전에, 메틸셀룰로스를 첨가하여 최종 농도가 되게 하여 젤라틴성 혼합물을 생성하였다. 혼합물을 격렬히 와류시키고, 이후 혼합물을 10분 동안 음파처리하였다.

동시 제형화된 CPE 및 GLA-AF의 경우, CPE를 식염수 중에 0.4 ㎎/㎖로 희석하였다. 물 중의 1:2 몰 비 혼합물 GLA-AF:DPPC를 0.4 ㎎/㎖ CPE 혼합물에 첨가하여 0.8 ㎎/㎖의 GLA / 0.2 ㎎/㎖의 CPE 용액을 생성하였다. 이후, 메틸셀룰로스를 0.8 ㎎/㎖의 GLA / 0.2 ㎎/㎖의 CPE 용액에 첨가하여 0.4 ㎎/㎖의 GLA / 0.1 ㎎/㎖의 CPE / 1.875% 메틸셀룰로스 용액의 최종 용액을 만들었다. 이 혼합물을 격렬히 와류시키고, 이후 10분 동안 음파처리하였다. 마우스에 이 최종 용액의 5 ㎕를 설하로 투여하고, 이것은 2.0 ㎍의 GLA-AF + 0.5 ㎍의 CPE의 용량을 전달하였다.

실시예 2. GLA 및 항원의 설하 동시 투여는 배수 경부 림프절에서의 항원 특이적 T 세포 증식을 유도한다

Ova 특이적 OT-II TcR 형질전환 T 세포를 세포-트래커 바이올렛 염료에 의해 표지하고, 동계유전자적 야생형 마우스로 입양 전달하였다. 이후, 마우스에 GLA(0.2 ㎍) 단독(도 4a 및 도 4b), Ova_323-339 펩타이드(10 ㎍) 단독(도 4c 및 도 4d), 또는 Ova 펩타이드와 동시 투여되는 GLA(도 4e 및 도 4f)를 설하 투여하였다. 4일 후, 배수 경부 림프절(도 4a, 도 4c 및 도 4e) 및 비장(도 4b, 도 4d 및 도 4f)을 제거하고, (세포-트래커 염료 형광에서의 감소를 통한) OT-II T 세포 증식을 유세포분석법에 의해 측정하였다. 도 4a 내지 4f에 도시된 바대로, GLA 또는 항원 단독이 아니라 GLA와 Ova 항원의 설하 투여가 비장이 아니라 배수 림프절에서 항원 특이적 T 세포 증식을 유도한다.

방법. 설하 투여를 실시예 1에서 상기 기재된 바대로 수행하였다.

Ova 펩타이드 및/또는 GLA의 제형은 실시예 1에 기재된 바대로 메틸셀룰로스를 포함하였다. 메틸셀룰로스 + Ova 펩타이드, 및 메틸셀룰로스 + Ova 펩타이드 + GLA의 혼합물을 투약 전날에 제조하였다.

실시예 3. GLA 및 Ova ₃₂₃ _-329 펩타이드의 설하 동시 투여 후 배수 경부 림프절에서의 항원 특이적 T 세포 증식

Ova 특이적 OT-II TcR 형질전환 T 세포를 세포-트래커 바이올렛 염료에 의해 표지하고, 동계유전자적 야생형 마우스로 입양 전달하였다. 이후, 마우스에 Ova₃₂₃ _-339 펩타이드와 동시 투여되는 GLA(0.2 ㎍, 0.02 ㎍ 또는 0.002 ㎍) 또는 GLA가 없는(0 ㎎) 펩타이드를 설하 투여하였다. 4일 후, 경부 림프절을 제거하고, (세포-트래커 염료 형광에서의 감소를 통한) OT-II T 세포 증식을 유세포분석법에 의해 측정하였다. 도 5에 도시된 바대로, GLA와 항원의 설하 투여는 배수 림프절에서 용량 의존적 방식으로 항원 특이적 T 세포 증식을 증대시킨다.

실시예 4. IL-6 발현은 설하 투여의 부위에서 증가한다

GLA의 세 가지의 상이한 용량에 의해 치료된 비인간 영장류(Non-Human Primate: NHP)로부터의 설하 점막 브러싱(brushing)의 mRNA 유전자 발현 분석은 설하 투여 후 6시간에 IL-6의 용량 의존적 발현을 밝혀냈다.

GLA를 Millipore(무균) 물 중에 GLA:DPPC 1:2(M:M)로서 DPPC(1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린) 중에 제형화하였다. 동물을 우리에 있게 한 채 IM(근육내) 케타민(5 ㎎/kg 내지 10 ㎎/kg)/덱스메데토미딘(0.01 ㎎/kg 내지 0.016 ㎎/kg)에 의해 진정시켰다. 진정되면, 이들을 실험실에 놓고, 순환 물 가열 패드(Gaymar)에 두었다. 설하(오른쪽 측) 및 왼쪽 볼주머니 점막 브러싱을 Copan FLOQSwabs™을 사용하여 투약 전 15분에 취하고, RLT 완충제(QIAmp Minikit Plus, Qiagen)에 배치하고, 와류시키고 드라이 아이스에서 즉시 동결시켰다. GLA의 설하 투약(주사기를 통해 100 ㎕ 투약)을 동물 혀의 오른쪽 측 아래에서 수행하고, 3분 동안 점막으로 흡수되게 하였다. 추가의 설하 및 볼 브러싱을 투약 후 6시간, 24시간 및 48시간에 얻었다.

RNA 프로세싱을 gDNA(게놈 DNA) 제거자 칼럼을 포함하는 QIAmp Minikit Plus(Qiagen)를 이용하여 볼 및 설하 면봉으로부터 수행하였다. 비교 CT 방법을 이용하여 유전자 발현을 정량화하고, 이 방법은 표적 유전자와 내인성 대조군 사이의 상대 유전자 발현 정량화를 계산한다. 모든 표적 유전자를 하우스키핑 유전자 ARL1의 발현에 대해 정량화하였다. 상대 발현을 이용하여, 기준 발현의 배수를 [(관심 있는 시점에서의 상대 유전자 발현) / (기준 상대 유전자 발현)]으로서 계산하였다.

IL-6이 이 시점에 볼로부터의 브러싱에서 또는 혈액에서 검출되지 않으므로, 발현은 설하 점막으로 국소화되었다. IL-6 발현은 GLA의 설하 투여 후 24시간에 검출되지 않았다. 종합하면, 데이터는 GLA의 본 제형이 구강 내에 매우 국소로 작용하고, 1일보다 오래 지속하지 않고, 0.1 내지 5 ㎍의 활성의 잠재적인 창을 가진다는 것을 제시한다. 결과는 또한 IL-6 발현이 GLA 활성에 대한 바이오마커일 수 있다는 것을 제시한다.

실시예 5. 호염기구 활성화 시험

본 명세서는 호염기구 활성화 시험을 제공한다. 시험에 대한 적어도 2개의 사용이 있다. 제1 사용은 임상에서의 이의 사용, 예를 들어 땅콩 알레르기 환자의 혈청에서 바이오마커를 측정하기 위한 하나의 관 검정에 관한 것이다. 제2 사용은, 땅콩 추출물의 효력(알레르겐성)을 측정하기 위한, 본원에 기재된 조성물을 생성하는 데 사용되는 땅콩 추출물의 상이한 배치(batch)의 효력을 표준화하기 위해 사용될 수 있는, 검정으로서의 이의 사용에 관한 것이다.

일반적으로, 예시적인 시험을 하기와 같이 수행하였다. 땅콩 알레르기 환자로부터의 전혈 샘플을 얻고, 4 ng/㎖의 rhIL-3 및 5000 IU/㎖의 헤파린(2 ng/㎖의 rhIL-3의 최종 농도로)을 함유하는, BAT 완충제(호염기구 활성화 시험 완충제) 중에 혈액을 1:1 희석하고, 37℃에서 10분 동안 전혈 세포를 항온처리함으로써 호염기구를 프라이밍하였다. 활성화된 호염기구는 IgE 항체를 발현한다. 항원 자극 단계에서, 600 ㎕의 프라이밍된 전혈을 BAT 완충제 중의 600 ㎕의 2x 항원 조제(예를 들어, 땅콩 항원 조제)에 첨가하고, 혼합물을 37℃ 물 욕 내에서 30분 동안 항온처리하였다. 항원의 첨가는 세포를 자극한다(그리고 탈과립한다). 이후, 호염기구를 표면 염색하고 용해시키고 고정하였다. 이후, 호염기구를 형광 활성화 세포 분류(fluorescence-activated cell sorting: FACS)에 의해 분석하고, 가시화를 예를 들어 CD63: 리소좀 연관 당단백질에 의해 달성할 수 있다. 하기 항체 패널은 호염기구 활성화를 모니터링하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 호염기구 항체 칵테일을 나타낸다:

i. FITC IgE

ii. PE CD203c

iii. PE-Cy7 CD123

iv. APC Lin^*

v. V450 CD63

Lin^* = CD2, CD3, CD14, CD16, CD19, CD56, CD235a를 함유하는 인간 조혈 계통 칵테일

더 긴 기간에 걸친 호염기구 단백질의 상향조절, 또는 단백질 상향조절의 속도의 증가, 또는 이들 마커 중 하나 이상의 과발현은 더 강한 알레르기 반응, 또는 더 강력한(더 알레르겐성) 항원 조제를 나타낼 수 있다.

감작화된 호염기구가 항원(예를 들어, 땅콩 알레르겐)에 노출될 때, IgE 수준은 호염기구가 탈감작화되면서 시간이 지남에 따라 감소하는 것으로 예상된다.

호염기구는 통상적으로 특이적 마커, 예컨대 CCR3⁺/CD3^-, CD123⁺/HLA-DR^-, IgE⁺/CD203c⁺, CD63⁺에 의해 확인된다. CD63 및 CD203c 둘 모두는 시험관내 호염기구 활성화 측정에 흔히 사용되는 마커이다. 몇몇 실험에서, CD203c의 발현 수준은 활성화된 호염기구에서 CD63보다 빨리 피크가 되고, 이에 따라 검출의 시기가 중요할 수 있다. 추가로, IL3 프라이밍은 CD63 발현을 증대시킨다. CD203c의 활성화는 CD63의 발현보다 일시적이고 더 빨라서, CD203c를 사용하는 검정은 검출에 대한 시기의 조심스러운 고려를 요한다. 따라서, CD203c 기반 호염기구 활성화 시험은 혈액 샘플을 취한 후 4시간 내 가장 잘 수행될 수 있다. 호염기구 상의 세포 표면 항원의 IgE 의존적 상향조절에 기초한 강력한 검정은 CD63-시험이고, CD63은 알레르기 (IgE 의존적) 반응에 더 특이적일 수 있고, 사이토카인 또는 다른 인자에 의한 비특이적 상향조절에 덜 감수성일 수 있다. 호염기구 활성화를 측정하는 일 방식은 CD63 및 CD203c 둘 모두를 사용하는 것일 것이다.

시험의 제1 사용에서, 즉 임상에서, 전혈 샘플은 임상에서 환자로부터 나오고, 항원 자극 단계는 땅콩 추출물 또는 땅콩 펩타이드의 공지된 칵테일로부터 제조된 2x 항원 조제를 첨가하는 것을 수반한다. 이후, 호염기구 항체 칵테일을 바이오마커 발현을 찾기 위해 첨가한다. 예시적인 항체 칵테일은 하기 바이오마커 중 하나 이상에 결합하는 항체를 포함한다: IgE, CD203c, HLS-DR, CD123, CD63 및 Lin. 더 중증인 땅콩 알레르기를 가지는 환자는, 활성화된 호염기구가 IgE, CD203c, HLS-DR, CD123, CD63 및 Lin 중 하나 이상을 포함하는 호염기구 마커의 더 높은 수준을 발현하거나; 더 긴 기간 동안 마커 중 하나 이상의 더 높은 수준을 발현하거나; 곧 피크가 되는 마커 중 하나 이상의 수준을 발현하는, 호염기구 활성화 시험에서의 결과를 발생시키는 혈액 샘플을 생성할 것이다.

예를 들어 땅콩 추출물의 효력을 측정하기 위한, 시험의 제2 사용에서, 땅콩 알레르기 공여자로부터의 혈청을 공지된 분량의 공지된 항-항원 항체(예를 들어, 항-Ara h2 항체)에 의해 스파이킹하여 표준품을 제공할 수 있고, 이후 "항원 자극" 단계는 시험되는 합성된 땅콩 추출물을 첨가하는 것을 포함할 것이다. 이후, "호염기구 항체 칵테일"은 바이오마커 발현(예상된 표준품과 일치해야 함)을 찾기 위해 첨가될 것이다. 예시적인 바이오마커는 IgE, CD203c, HLS-DR, CD123, CD63, Lin을 포함한다. 더 강력한(즉, 더 알레르겐성) 땅콩 추출물은, 활성화된 호염기구가 IgE, CD203c, HLS-DR, CD123, CD63 및 Lin 중 하나 이상을 포함하는 호염기구 활성화 마커의 더 높은 수준을 발현하거나; 더 긴 기간 동안 마커 중 하나 이상의 더 높은 수준을 발현하거나; 곧 피크가 되는 마커 중 하나 이상의 수준을 발현하는, 호염기구 활성화 시험에서의 결과를 발생시킬 것이다.

Claims

수성 담체 내에 복수의 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 입자, 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC), 및 치료학적 유효량의 땅콩 단백질을 포함하는 약제학적 조성물로서, GLA 대 DPPC의 몰 비는 약 1:1 내지 약 1:3의 범위이고, 땅콩 단백질의 적어도 일부는 적어도 하나의 지질 입자 내에 배치되거나 수성 담체 내에 유리되거나, 또는 둘 모두인, 약제학적 조성물.
글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 땅콩 단백질을 포함하는 약제학적 조성물로서, 약제학적 조성물은 고체 또는 반고체 투여형으로 존재하는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 지질 입자는 리포솜 또는 미셀(micelle)인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 수성 담체는 물을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 복수의 GLA 입자는 약 16 ㎚ 내지 약 1800 ㎚의 Z-평균 직경을 가지는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 복수의 GLA 입자는 약 80 ㎚ 내지 약 500 ㎚의 Z-평균 직경을 가지는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 조성물 내의 GLA의 농도는 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 5 ㎎/㎖인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 조성물 내의 GLA의 농도는 약 0.02 ㎎/㎖ 내지 0.2 ㎎/㎖인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 조성물 내의 GLA의 농도는 약 0.16 ㎎/㎖인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 조성물 내의 GLA 대 DPPC의 몰 비는 약 1:2인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 조성물 내의 땅콩 단백질의 농도는 약 5 ㎍/㎖ 내지 약 25,600 ㎍/㎖인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 조성물 내의 땅콩 단백질의 농도는 약 1,000 ㎍/㎖ 내지 약 7,000 ㎍/㎖인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 조성물 내의 땅콩 단백질의 농도는 약 5,000 ㎍/㎖인, 약제학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17 중 하나 이상을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h14, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17 중 하나 이상으로 이루어진, 약제학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3 및 Ara h6을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2 및 Ara h6을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h2 및 Ara h6을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 약제학적 조성물은 액체인, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 약제학적 조성물은 반고체인, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 약제학적 조성물은 정제의 형태로 존재하는, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 약제학적 조성물은 겔 캡슐의 형태로 존재하는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 약제학적 조성물은 설하 드롭(sublingual drop) 또는 스프레이로서 제형화된, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 약제학적 조성물은 생접착성 성분을 포함하는, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 약제학적 조성물은 사쉐(sachet) 형태로 포장된 다중입자 과립 또는 코팅된 마이크로스피어인, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 약제학적 조성물은 속붕해정(fast disintegrating tablet: FDT)인, 약제학적 조성물.
제26항에 있어서, FDT는 초붕해제(superdisintegrant)를 포함하는, 약제학적 조성물.
제27항에 있어서, 초붕해제는 가교결합된 셀룰로스, 가교결합된 폴리비닐피롤리돈, 가교결합된 전분 및 가교결합된 알긴산으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 겔화제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 결합제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 활택제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 부착방지제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 착향료, 감미료 또는 착색제, 또는 임의의 이들의 조합을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, 조성물은 박막인, 약제학적 조성물.
제34항에 있어서, 조성물은 가소화 하이드로콜로이드를 포함하는, 약제학적 조성물.
제34항에 있어서, GLA 또는 땅콩 단백질, 또는 둘 모두는 박막 내에 배치되는, 약제학적 조성물.
제34항에 있어서, GLA 또는 땅콩 단백질, 또는 둘 모두는 박막의 표면 상에 배치되는, 약제학적 조성물.
제34항에 있어서, GLA 또는 땅콩 단백질, 또는 둘 모두는 박막 내 및 이의 표면 상 둘 모두에 배치되는, 약제학적 조성물.
환자에서 알레르기를 치료하는 방법으로서, 환자에서 알레르기를 치료하기 위한 유효량으로 복수의 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 입자 및 땅콩 단백질을, 알레르기를 가지는 환자에게 설하로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제39항에 있어서, 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 환자에게 설하로 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제39항에 있어서, 복수의 GLA 입자는 제1 약제학적 조성물로서 제형화되고, 땅콩 단백질은 제2의 별개의 약제학적 조성물로서 제형화된, 방법.
제41항에 있어서, 제1 및 제2 약제학적 조성물은 동시에 투여되는, 방법.
제41항에 있어서, 제1 제형은 제2 제형 전에 환자에게 투여되는, 방법.
제41항에 있어서, 제2 제형은 제1 제형 전에 환자에게 투여되는, 방법.
제39항에 있어서, GLA 및 땅콩 단백질은 수성 담체 내에 복수의 GLA 입자 및 땅콩 단백질을 포함하는 단일 약제학적 조성물 내에 제형화되는, 방법.
제45항에 있어서, 약제학적 조성물은 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 추가로 포함하는, 방법.
제46항에 있어서, 약제학적 조성물 내의 GLA 대 DPPC의 몰 비는 약 1:1 내지 약 1:3의 범위인, 방법.
제39항에 있어서, 알레르기는 땅콩 알레르기인, 방법.
제39항에 있어서, 알레르기는 자작나무 꽃가루에 대한 알레르기인, 방법.
제39항에 있어서, 알레르기는 복숭아 및 복숭아 관련 과실에 대한 알레르기인, 방법.
환자에서 알레르기를 치료하는 방법으로서, 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 땅콩 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을, 알레르기를 가지는 환자에게 설하로 투여하는 단계를 포함하고, 약제학적 조성물은 고체 또는 반고체 투여형으로 존재하는, 방법.
제51항에 있어서, 약제학적 조성물은 박막인, 방법.
제51항에 있어서, 약제학적 조성물은 정제 또는 캡슐인, 방법.
제51항에 있어서, 알레르기는 땅콩 알레르기인, 방법.
제51항에 있어서, 알레르기는 자작나무 꽃가루에 대한 알레르기인, 방법.
제51항에 있어서, 알레르기는 복숭아 및 복숭아 관련 과실에 대한 알레르기인, 방법.
제39항 또는 제51항에 있어서, 상기 방법은 환자에게 약제학적 조성물을 투여하기 전에 환자에서 호염기구(basophil) 활성화 시험을 수행하는 단계를 포함하는, 방법.
제39항 또는 제51항에 있어서, 환자는 성인 인간인, 방법.
제39항 또는 제51항에 있어서, 환자는 청소년 인간인, 방법.
제39항 또는 제51항에 있어서, 환자는 4세 이상인, 방법.
약제학적 조성물을 제조하는 방법으로서,
a. 클로로포름 중에 1:2 몰 비로 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 동시 용해시켜, GLA/DPPC 혼합물을 형성하는 단계;
b. 땅콩 알레르겐을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하여, GLA/DPPC/땅콩 단백질 혼합물을 형성하는 단계;
c. GLA/DPPC/땅콩 단백질 혼합물로부터 클로로포름을 제거하는 단계;
d. 물을 GLA/DPPC/땅콩 단백질 혼합물에 첨가하는 단계; 및
e. GLA/DPPC/땅콩 단백질 혼합물을 아지테이션(agitation)시켜, 약제학적 조성물을 형성하는 단계를 포함하는, 방법.
약제학적 조성물을 제조하는 방법으로서,
a. 클로로포름 중에 1:2 몰 비로 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 동시 용해시켜, GLA/DPPC 혼합물을 형성하는 단계;
b. GLA/DPPC 혼합물로부터 클로로포름을 제거하는 단계;
c. 물을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하는 단계;
d. GLA/DPPC 혼합물을 아지테이션시키는 단계; 및
e. 땅콩 단백질을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하여, 약제학적 조성물을 형성하는 단계를 포함하는, 방법.
약제학적 조성물을 제조하는 방법으로서,
a. 물 중에 1:2 몰 비로 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC)을 혼합하여, GLA/DPPC 혼합물을 형성하는 단계;
b. 70℃에서 GLA/DPPC 혼합물을 아지테이션시키는 단계; 및
c. 땅콩 단백질을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하여, GLA/DPPC/땅콩 단백질 혼합물을 형성하는 단계;
이로써 약제학적 조성물을 형성하는 것을 포함하는, 방법.
약제학적 조성물을 제조하는 방법으로서,
a. 글루코피라노실 지질 애쥬번트(GLA) 및 계면활성제를 혼합하는 단계;
b. 물을 GLA/계면활성제 혼합물에 첨가하는 단계;
c. GLA/계면활성제 혼합물을 아지테이션시키는 단계; 및
d. 땅콩 단백질을 GLA/계면활성제 혼합물에 첨가하여, 약제학적 조성물을 형성하는 단계를 포함하는, 방법.
제63항에 있어서, 단계 (a)에서의 물은 50℃ 내지 70℃인, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 아지테이션은 음파처리를 포함하는, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 아지테이션은 미세유동화 또는 고압 균질화, 또는 둘 모두를 포함하는, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 약제학적 조성물을 압축 성형하여 정제를 형성하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 약제학적 조성물을 동결건조 또는 분무 건조하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은
용매 캐스팅, 반고체 캐스팅, 핫 멜트(hot melt) 압출, 고체 분산 압출 및 압연으로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 얇은 중합체 필름을 형성하는 단계; 및
박막 내에 및/또는 박막의 적어도 하나의 표면 상에 약제학적 조성물을 배치하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12, Ara h13, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, Ara h7, Ara h8, Ara h9, Ara h10, Ara h11, Ara h12 또는 Ara h13, Ara h15, Ara h16 및 Ara h17로 이루어진, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2, Ara h3 및 Ara h6으로 이루어진, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h1, Ara h2 및 Ara h6으로 이루어진, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 단백질은 땅콩 알레르겐 성분 Ara h2 및 Ara h6으로 이루어진, 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 땅콩 단백질을 GLA/DPPC 혼합물에 첨가하기 전에, 땅콩 단백질 내의 땅콩 알레르겐에 대한 호염기구 활성화 시험을 수행하여 땅콩 알레르겐의 효력을 측정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제64항에 있어서, 계면활성제는 라우릴황산나트륨(Sodium Lauryl Sulfate), 폴리소르베이트-80, 폴록사머 407 또는 폴록사머 188, 또는 레시틴 및 타우로콜레이트의 조합인, 방법.
제64항에 있어서, 계면활성제는 폴리소르베이트-80이고, 혼합물은 50% 글리세롤 또는 60% 글리세롤을 추가로 함유하는, 방법.