KR20170115095A - 질환 치료를 위한 kdm1a 저해제 - Google Patents

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휴 영 주니어 린호프
존 엠 맥콜
마이클 클레어
카산드라 셀라트카
에이미 이 테퍼
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이마고 바이오사이언시즈 인코포레이티드
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Abstract

신규한 화합물 및 조성물 및 질환의 치료를 위한 약학제로서의 그것의 적용이 본원에 공개된다. 급성 골수성 백혈병과 같은 질환의 치료를 위해 KDM1A 의 저해 방법, 감마 글로빈 유전자 발현의 증가 방법, 및 인간 또는 동물 대상에서 암 세포 분화의 유도 방법이 또한 제공된다.

Description

질환 치료를 위한 KDM1A 저해제 {KDM1A INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF DISEASE}
본 출원은 2015 년 2 월 12 일자로 제출된 미국 가출원 번호 62/115,474 의 우선권의 유익함을 주장하며, 상기 개시물은 이로써 그 전문이 본원에 기재된 바와 같이 참조로 포함되어 있다.
본 개시물은 신규의 화합물 및 조성물, 및 질환 치료를 위한 약학제로서의 이의 적용에 관한 것이다.
효소 KDM1A (또한 라이신-특이적 데메틸라제 1, LSD1, 플라빈-함유 아민 옥시다제 도메인-함유 단백질, AOF2, BRAF35-HDAC 복합체 단백질 BHC110, FAD-결합 단백질 BRAF35-HDAC 복합체로서 알려짐) 의 저해는 세포의 적절한 생리적 기능 또는 조직, 기관 또는 환자의 기능을 전체적으로 회복시키기에 충분할 만큼 세포에서의 유전자 발현을 변경할 수 있다. 이는, 예를 들어 일부 암 세포 및 유전 질환의 경우와 같이, 병리적으로 침묵된 유전자 또는 유전자들의 전사를 향상시키거나 또는 병리적 상태에 참여하는 유전자 또는 유전자들의 전사를 감소시킴으로써 달성될 수 있다. 그와 같이, KDM1A 의 저해는 질환, 예컨대 암 및 유전 질환, 예컨대 윌슨씨 병, 심장근육병증, 및 혈색소병증의 치료에 유용할 것이다.
유전자 발현은 DNA 주형에게로의 RNA 폴리머라제 II 전사 기구의 동원을 통해 조절된다. 이러한 큰 다중-단백질 복합체가 DNA 전사 시작점에 또는 그 근처에 도착하여 유전자의 전체 코딩 영역을 통해 진행할 개연성은 프로모터 및 인핸서로 호칭되는 특정 DNA 서열, 전사 시작점 부근의 DNA 서열의 수식, DNA 에 결합된 단백질 및 DNA 주형 자체의 위상기하학에 의해 부분적으로 결정된다. 단백질-코딩 유전자의 RNA 합성의 개연성을 향상시키는 인자는 전사 인자로서 알려져 있으며, 이들 중 일부는 모든 단백질-코딩 유전자의 전사에 참여하고, 일부는 개별 유전자의 전사에 특이적이다.
전사 제어의 하나의 주요한 메카니즘은 전사를 활성화 또는 완수할 수 있는 단백질에게로의 전사 조절 영역의 물리적 접근가능성을 제한하는 것으로 이루어진다; 프로모터 또는 인핸서 DNA 서열에 결합된 단백질은 활성화 인자가 이들 DNA 서열에 결합하는 것을 막아서 활성화된 진행하는 RNA 폴리머라제 복합체의 더 적은 전사 개시 또는 연장을 초래할 수 있다. 마찬가지로, 주형 위에서의 RNA 폴리머라제의 꾸준한 진행을 허용하기에 충분할 정도로 주형 DNA 가 풀리는 것을 허용하지 않는 위상기하학적 구속도 또한 전사 속도를 제한하는 역할을 한다.
생체 내에서 DNA 주형을 사용하는 RNA 합성에 영향을 미치는 가장 중요한 일반적 인자는 다른 인자들 중에서 전사를 위한 DNA 주형의 위상기하학 및 RNA 폴리머라제 복합체에 의한 그것의 접근가능성을 제어하는 히스톤 단백질의 수식이다. 히스톤 단백질의 작은 패밀리 - H2A, H2B, H3 및 H4 - 는 조합되어 히스톤 옥타머로 호칭되는 스카폴드를 생성하며, 여기에서 DNA 는 DNA 의 길이를 따라 뉴클레오솜으로 호칭되는 규칙적 반복 구조로 공간적으로 및 위상기하학적으로 조직화되어 있다. 히스톤, 기타 단백질, 다양한 RNA 및 DNA 의 집합체는 크로마틴으로 호칭된다. DNA 및 히스톤 둘 모두 기타 단백질을 유인 및 결합 또는 격퇴하여 전사를 향상 또는 억압하는 효과를 제공하도록 화학적으로 수식된다.
원형 DNA 염기의 치환을 수반하지 않는 전사 및 복제의 조절에 영향을 미치는 DNA 및 연관된 RNA 및 단백질의 수식은 후생적이라고 일컬어 진다. 이들 후생적 영향은 4 가지 DNA 염기 자체의 가역적 화학적 수식 또는 DNA 와 연합하는 크로마틴 단백질 및 RND 에 대한 번역후 화학적 변화를 수반한다. 이들 후생적 과정은 유전자 발현의 활성화 또는 침묵에서 중심 역할을 수행할 수 있다; 게다가, 후생적 수식은 유기체의 삶 동안 유지될 수 있거나 또는 세포 내에서 내부적으로 또는 세포 외에서 기원하는 특정 생화학적 신호에 응답하여 동적으로 수식될 수 있다. 이들 크로마틴 변경은 신속히 일어나거나 매우 안정적일 수 있으며, 예를 들어 유전자 발현의 호르몬 유도 동안, 최대 전사를 허용하도록 특정 좌위에서의 크로마틴 구조가 몇초 안에 급진적으로 변화할 수 있거나 유전자 발현을 완전히 억제하도록 크로마틴 구조가 수식될 수 있고, 크로마틴의 상태가 복수의 세포 분열에 걸쳐 그리고 심지어는 다음 세대에도 안정적으로 유지될 수 있다.
5' 위치에서의 시토신의 메틸화는 흔한 DNA 염기 수식이며, 이러한 염기 수식은 결국 전사 억압과 가장 빈번히 연관되는 클래스의 단백질에 의해 인지된다. 유사하게, 히스톤 단백질이 화학적으로 수식되지만 더 다양한 화학 부가물로 수식되며, 이러한 화학 부가물 각각은 단독으로 또는 조합으로 인근 유전자의 전사를 향상시키거나 억압한다. 이들 히스톤 수식은 특히 메틸화, 아세틸화, 수모화 (sumoylation), 인산화, 유비퀴틴화, 및 미리스토일화를 포함하며, 다른 크로마틴-연합 단백질에 의해 인지되어 결국 전사 속도 및 DNA 복제에 영향을 미친다. 유전자 발현의 동적 상태 및 연관된 크로마틴 상태는 히스톤 수식이 영구적이지 않지만 그 대신 개체발생, 성체 시기 및 변화하는 환경 영향 동안 특정 시점에 특정 유전자 산물에 대한 세포의 필요에 따라 부가 및 제거된다는 점을 시사한다. 실제로, 히스톤의 특정 화학적 수식은 각각 특정 자리에서 작용하는 클래스의 효소에 의해 일어난다. 이들 히스톤-수식 효소는 결국 엄격한 조절에 적용된다. 이들 효소는 잠재적으로 그들의 활성을 저해하는 화합물에 의해 표적화되어, 그 결과 유전자 발현이 치료적 방식으로 변경될 수 있다.
히스톤 메틸화 상태의 변화는 세포 주기 및 성장의 정상적 조절, DNA 손상 및 스트레스에 대한 응답, 및 분화를 포함하는 태아기 발달에서 중요한 역할을 수행하는 것으로 현재 알려져 있다. 암과 같은 병리적 상태는 변경된 패턴의 히스톤 수식 및 크로마틴-수식 효소를 포함하는 이상조절된 히스톤-수식 단백질과 연관된다. 히스톤 수식을 밀접하게 조절할 필요는 히스톤 메틸화 상태와 노화를 포함하는 인간 이환율의 연관에 의해 입증된다.
히스톤 메틸화는 3 가지 염기성 아미노산 잔기 - 라이신 (K), 아르기닌 (R), 및 히스티딘 (H) 중 임의의 것에 대해 발생할 수 있다. 위치 4 (H3K4), 9 (H3K9), 27 (H3K27), 36 (H3K36) 및 79 (H3K79) 에서의 라이신 상의 히스톤 H3 의 메틸화는 유전자 발현에 영향을 미치는 히스톤 수식 중에서 가장 잘 연구되었다. 위치 4 에서의 히스톤 3 (H3) 상의 라이신 트리-메틸화 (Kme3) (H3K4me3) 는 일반적으로 유전자 발현의 활성화와 연관되는 히스톤 마크 (mark) 이며, 한편 H3K9me1 또는 H3K27me3 은 유전자 전사의 억압과 연관된다. H3K4me1 은 유전자 전사의 DNA 인핸서와 연관되고, 한편 H3K4me3 은 유전자 프로모터 활성과 연관된다. 마찬가지로, H3K4 에서의 메틸 기의 상실은 유전자 발현의 억압과 연관된다. 따라서, H3K4 에서의 메틸 기의 부가 및 제거는 유전자 전사 전환을 구성한다. 라이신이 모노-, 디- 또는 트리-메틸 기로 수식될 수 있으며, 각각의 수식은 그 자리에서의 특정 메틸화 수식을 인지하는 상이한 단백질의 유인을 통해 상이한 생물학적 효과를 갖는다는 점이 또한 명백하다.
히스톤 메틸화 상태의 조절의 중요한 양상은 특정 유전자 좌위로의 메틸트랜스퍼라제 및 데메틸라제의 동원이다. 전사 인자를 포함하는 DNA 서열-특이적 결합 단백질은 이들 메틸-전달 효소에 결합하는 단백질 복합체의 집합을 통해 이러한 동원을 책임지는 단백질의 한 클래스이다. 잘 연구된 예는 노랑 초파리 (Drosophila melanogaster) 트리토락스 그룹 (TrxG) 응답 요소 (TREs) 이며, 이는 TRE DNA 서열을 인지하는 전사 인자를 통해 H3K4 메틸트랜스퍼라제, TRX 를 특정 유전자에게로 동원한다.
히스톤 메틸화 마크는 단백질의 다양한 그룹에서의 메틸-결합 도메인에 의해 인지된다; 이들 도메인은 PHD 핑거, WD40 및 안키린 리피트, CW 및 PWWP 도메인, 및 단백질의 Royal 슈퍼패밀리를 포함한다. 이들 단백질은, 결국, 어떠한 부가적 활성이 크로마틴 자리로 동원되는지 및 궁극적으로 주어진 좌위에서의 전사 상태를 결정한다. 실제로, 어떠한 메틸-인지 단백질이 마크된 히스톤에 결합하는지에 따라, 동일한 메틸-라이신 수식이 전사에 대해 반대의 효과를 가질 수 있다. H3K4me2 및 H3K4me3 은 전사 활성화와 연관되지만, 성장 패밀리 일원 2 (ING2) 의 PHD-도메인-함유 보조-억압인자 단백질 저해인자에 의해 결합되었을 때, 연합된 히스톤 데아세틸라제 복합체는 안정화되어 유전자 발현을 억압한다. 따라서, 메틸-라이신 히스톤 수식을 인지하는 이들 효과기 단백질은 전사 활성 수준에 유의하게 영향을 미친다.
크로마틴의 상태를 수식함으로써 유전자 발현을 선택적으로 변경하는 능력은 유익을 제공할 수 있는 유전자의 발현을, 특히 발현이 일부 암의 경우에서와 같이 병리적 메카니즘에 의해 억제된 또는 생리적 메카니즘에 의해 억제된 그러나 그것의 억압해제가 상보적 기능을 갖는 파랄로고스 (paraologous) 유전자에서의 돌연변이를 표현형적으로 억제할 수 있는 유전자의 발현을, 유도 또는 억압해제하는 신규한 치료 전략을 허용한다.
게놈 내의 많은 유전자는 유전자 복제의 결과로서의 유전자 패밀리의 일원이다. 이들 유전자는 서로의 파랄로그 (paralog) 로 일컬어진다. 유전자 복제에 뒤이어, 2 개의 유전자의 발현의 패턴은 구별되는 방식으로 진화하여 부분적으로 유전자량 (gene dosage) 의 효과를 제어할 것이다. 유전자 복제에 뒤이어, 자연 발생적 돌연변이 및 후속적인 뉴클레오티드 서열의 선별로부터 발생하는 무작위 유전적 부동 (genetic drift) 이 복제된 유전자의 비-코딩 영역에서, 흔히 전사 조절 영역에서 통상적으로 처음 관찰된다. 조절 서열에서의 DNA 변화는 하기와 같은 유전자 발현의 임의의 또는 모든 양상에 영향을 미칠 수 있다: 발현의 규모, 그것의 발달 타이밍, 호르몬 또는 대사 신호를 포함하는 세포 외부의 자극에 의한 유도, 및 발현이 제한되는 세포 유형. 복제가 진화 시간에서 최근인 경우에 또는 자연 선택이 높은 정도의 단백질-코딩 서열 유사성을 유지한 경우에, 유전자 A 의 발현이 동일한 세포에서 제한적이지 않은 경우 하나의 파랄로그, 유전자 A 의 유전자 산물은 다른 파랄로그, 유전자 B 의 병리적 상실 또는 침묵을 보상할 수 있다.
유전자 발현의 변경 패턴은 파랄로고스 유전자의 향상된 발현이 파랄로그에서의 돌연변이에 의해 야기되는 표현형을 "구조" 하는 유전적 상태에 엄청난 치료적 유익을 제공할 수 있다. 이는 자가 유전자 보완으로 호칭될 수 있다. ATP7B 에서의 돌연변이에 의해 야기되는 윌슨씨 병의 경우에, ATP7A, 밀접하게 관련된 구리 전달체 단백질의 약리학적 유도에 의한 향상된 발현은 ATP7B, 또다른 구리 전달체에서의 돌연변이를 구조할 것이다. 각각의 구리 전달체 단백질의 기본 기능은 보존되었으나 공통 조상 유전자의 복제에 뒤이어, 이들 2 개의 유전자의 발현은 공간적으로 분리되었으며, 즉 하나는 창자 장세포, 다른 것은 간세포에 국한되었다. 이는 동일한 세포 또는 조직에서 적절히 발현되는 경우에 하나의 유전자가 두번째 유전자의 상실을 보완할 수 있는 파랄로고스 유전자의 많은 예 중 하나이다.
파랄로고스 유전자 패밀리의 주목할 만한 예는 헤모글로빈의 알파 및 베타 서브유닛에 대해 코딩하는 글로빈 유전자의 잘 연구된 알파 및 베타 패밀리이다. 각각 유전자 복제에 의해 발생하는 5 가지 베타-유사 유전자는 염색체 16 상에서 서로 옆에 배열되며, 각각의 유전자는 9 개월의 인간 배아 및 태아 발달을 통하여 일시적으로-특이적 방식으로 전사된다. 베타-유사 글로빈 패밀리의 다른 4 가지 서브유닛 일원 중 임의의 하나의 발현이 적절한 경우에 성체 베타 글로빈 유전자를 불활성화시키는 유전자 돌연변이가 임상적으로 침묵될 수 있을 정도로 많이, 5 가지 베타-유사 글로빈 단백질은 높은 정도의 단백질 서열 유사성을 공유한다. 각각의 특정 배아 및 태아 베타-유사 글로빈 유전자의 발현의 활성화 및 후속적 전사 침묵은 부분적으로 후생적 메카니즘에 의해 조절된다. 후생적 침묵의 약리학적 조작을 통한 하나 이상의 다른 베타-유사 유전자의 전사 유도에 의한, 베타 글로빈 유전자에서의 돌연변이, 중증성 지중해빈혈 또는 겸상 적혈구 빈혈과 같은 질환의 원인이 되는 돌연변이의 구조는 임상적으로 유익할 것이다. 돌연변이된 또는 병리적으로 침묵된 유전자의 기능적으로 상보적인 파랄로그의 약리학제에 의한 자가 활성화는 돌연변이된 유전자를 야생형 (정상적) 카피로 대체 또는 복구하는 것보다 더욱 성공적인 치료 전략일 수 있다.
치료 효과를 위해 히스톤 수식의 활성에 영향을 미치는 것에 대한 관심은 후생적 제어 하의 특정 유전자의 발현이 메틸화와 같은 후생적 마크의 변경에 의해 변경될 수 있다는 관찰에서 유래한다. 암의 경우에, 히스톤 데메틸라제의 과발현에 수반되는 특정 히스톤 메틸화 마크의 상실은 암의 재발 및 그에 수반되는 더 불량한 결과와 연관된다. 이들 연구는 특정 종양 억제인자 유전자가 메틸화 수식의 상실에 의해 침묵되고, 이는 결국 신생 세포의 생존 및 성장 잠재성을 향상시킨다는 점을 시사한다. 이는 히스톤 데메틸라제 활성의 저해가 치료적 가치를 가질 수 있다는 제안을 초래했다.
KDM1A (또한 라이신-특이적 데메틸라제 1 (LSD1) 또는 AOF2 또는 BHC110 로서 알려짐) 는 히스톤 수식이 영구적이라기 보다는 가역적이라는 점을 명백히 입증하는 것으로 최초로 기술된 특정 라이신 데메틸라제 활성을 갖는 효소였다. 그것의 데메틸라제 기질 중에서, KDM1A 는 H3K4mel 또는 me2 및 H3K9mel 또는 me2 의 산화적 탈메틸화를 촉매작용하는 그러나 기질 H3K4me3 의 산화적 탈메틸화는 촉매작용하지 않는 히스톤 H3 라이신 데메틸라제이다. 상기 효소는 또한 비-히스톤 단백질, 예컨대 p53 및 Gfi1 을 탈메틸화한다. KDM1A 는 기타 모노아민 (MAO) 및 폴리아민 옥시다제 저해인자와 유사한 플라빈 아데닌 디뉴클레오티드 (FAD)-의존적 방식으로 H3Kme 기질을 탈메틸화하는 아민 옥시다제 도메인을 함유한다. 실제로, MAO 효소의 비-특이적 저해인자는 KDM1A 의 데메틸라제 활성을 저해할 수 있다.
KDM1A 는 빌름스 종양, 소세포 폐, 방광, 전립선, 유방, 두경부, 결장, 및 난소 암을 포함하는 많은 인간 암에서 과발현되고 더욱 빈번한 재발과 연관된다. KDM1A 는 전립선 암에서의 안드로겐 수용체, 유방 암종에서의 에스트로겐 수용체, 및 신경모세포종에서의 TLX 수용체에 의해 매개되는 전사 조절에 요구된다. KDM1A 발현의 녹다운은 암 세포의 증식을 감소시킨다. KDM1A 는 또한 ER-음성 유방을 포함하는 핵 호르몬 수용체-독립적인 암 세포에서 과발현된다. KDM1A 의 강력한, 선택적 소분자 저해인자는 KDM1A 활성이 과다한 이들 및 다른 암의 치료에 유용할 것이다.
크로마틴의 구조 및 상태는 또한 병원성 바이러스가 숙주 DNA 내로 삽입되고, 전사를 겪고 복제하는 능력에 영향을 미칠 수 있다. 알파 헤르페스 바이러스, 단순 헤르페스 바이러스 (HSV) 및 수두대상포진바이러스 (VSV) 에 의한 감염은 숙주 세포의 감염 후에 크로마틴의 재형성 (remodeling) 을 실행하여 KDM1A 및 히스톤 H3K4 메틸트랜스퍼라제 Set1 또는 MLL 패밀리 일원을 함유하는 숙주 HCF-1 보조-활성화인자 복합체를 동원하는 바이러스-인코딩되는 전사 인자를 이용함으로써 전사 억압성 마크에 의해 히스톤을 함유하는 뉴클레오솜의 신속한 퇴적을 대응한다. HSV1 로 감염된 세포에서의 KDM1A 의 저해는 HSV IE 유전자 발현을 저해하고, 용균 감염을 억제하고, 바이러스 부하 (viral load) 를 감소시키는 것으로 입증되었다. 유사하게, 인간 사이토메갈로바이러스 및 아데노바이러스로 감염된 세포에서 KDM1A 의 저해는 조기 발현 유전자의 발현의 감소를 야기하며 이는 바이러스 발병기전에서의 KDM1A 에 관한 더 넓은 역할을 시사한다.
KDM1A 활성이 특정 유전자의 전사에 대해 갖는 영향은 DNA 결합 단백질을 통한 특정 유전자 프로모터 영역에게로의 KDM1A 의 동원에 의존적이다. 안드로겐-의존적 유전자 발현의 경우에, KDM1A 는 안드로겐-응답성 유전자의 프로모터 내의 DNA 결합 자리를 특이적으로 표적화하는 안드로겐 스테로이드 수용체와 연합한다. 따라서, KDM1A 에 결합하는 단백질은 염색체를 따라 어디에서 데메틸라제 활성이 표적화되는지를 결정한다. 많은 단백질이 KDM1A 와 상호작용하는 것으로 보고되었으며, 이들 단백질에는 CoREST, CtBP, NuRD, BRAF35 복합체, DNMT1, MTA1/2, Mi2베타, RbAp46/48, HDAC1, 2, 및 3, TIF1베타, Blimp-1, ZNF217 및 ZNF198 이 포함되며, 이들의 부분집합은 더 큰 그리고 어떤 경우에는 서로를 상호적으로 배제하는 복합체를 형성한다. 기타 인자 중에서 DNMT1 및 NuRD 를 또한 포함할 수 있는 KDM1A/CoREST 복합체는 특정 유전자의 발현의 억제에 특히 중요하다.
KDM1A 는 자리-특이적 전사 인자를 통해 유전자의 프로모터 영역에 동원된다. 그러한 인자는 특히 안드로겐 수용체, 에스트로겐 수용체 알파, Snail1, Slug, HIV Tat, ZEB1, RBP-J, PIT1, REST, NR2C1, NR2C2 및 Gfi1b 의 동형을 포함한다. 이들 전사 인자는 KDM1A 를 동원하여 세포 유형 및 특정 전사 인자에 따라 유전자 발현의 활성화 또는 유전자 발현의 침묵에 참여하게 할 수 있다.
크로마틴의 상태를 조절하는 효소 활성 중 다수는 알로스테릭하게 영향을 받거나 보조-인자로서 세포 대사의 대사 중간체, 매개인자 또는 최종 산물을 요구한다. 유전자 발현 및 대사 사이의 이들 분자간 관계는 유전자 발현을 조정하는 메카니즘으로 영양소를 포함하는 외부 및 내부 세포 환경을 연결하는 신호전달 경로를 세포에게 제공한다. 이러한 세포 감지 (sensing) 는 역사적 대사 상태 및 환경 조건의 후생적 기억을 구성하는 유전자 발현 패턴에 대한 단기 및 장기 조정 둘 모두를 변경할 수 있다. 예를 들어, 장쇄 지방산 대사 산물 및 기아 또는 지속적 운동 동안 포유류의 주요 에너지 공급원인 베타-히드록시부티레이트는 클래스 I 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) 를 저해하나, 클래스 2b HDAC 는 저해하지 않는다. 따라서 기아 및 영양소 상실의 효과는 후생적으로 코드화 및 보존될 수 있다. 아세틸-조효소 A, 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 (NAD) 및 알파-케토글루타레이트는 또한 히스톤 메틸화 및 아세틸화 상태에 영향을 미친다.
플라빈 아데닌 디뉴클레오티드 (FAD) 는 KDM1A 에 요구되는 보조-인자이다. FAD 는, NAD 및 NADP 와 함께 세포 산화환원 센서로서 작용한다. KDM1A 는 일시적으로 FAD 를 FADH 로 전환하고, 그 후에 전자 수용체, 아마도 O2 등은 FAD 및 H2O2 를 재생함으로써 촉매 사이클을 완료한다. 따라서, 세포 산화환원 상태는 FADH 및 기타 전자 수용체를 산화하는 그것의 능력 둘 모두에 의해 KDM1A 활성에 영향을 미친다. 일반적 의미에서, 크로마틴 상태, 따라서 유전자 발현은 대사 중간체의 가변 농도에 의해 변경될 수 있고 KDM1A 의 특수한 경우에 그 활성은 세포의 에너지 경제의 함수로서 농도가 변동하는 FAD 에 전적으로 의존적이다. 게다가, KDM1A 의 저해는 혈청 글루코스를 저하시켜, 간 글리코겐을 감소시킬 수 있고, 강력한 인슐린 분비촉진제라는 것이 밝혀졌다. KDM1A 활성의 약학적 조작은 따라서 대사 증후군, 이상지질혈증, 당뇨병, 비만증, 거식증, 성장 장애, 악액질, 지방이영양증, 및 지방간염을 포함하는 세포의 에너지 상태의 병리적 이상을 나타내는 질환의 치료에 유용한 것으로 입증될 수 있다.
스테로이드 호르몬 에스트라디올 및 테스토스테론 및 관련된 화합물은 종양 세포 성장이 호르몬 신호전달에 의존적인 유방 및 전립선 암과 같은 병리적 상태 및 정상적 발달 둘 모두에서 핵심 역할을 수행한다. 스테로이드 호르몬의 생물학적 효과는 특정 DNA 결합 자리로 동원되는 전사 인자로서 기능하는 구조적으로 및 기능적으로 구별되는 리간드-결합 수용체에 의해 매개된다. 리간드-결합된 스테로이드 수용체는 호르몬 효과의 주요 전사 조절인자로서 작용한다. 모든 스테로이드-의존적 호르몬에 관한 유전자 발현의 전사 활성화는 크로마틴 구조 및 보조-인자의 존재에 의존적이다. 에스트로겐 수용체는, 예를 들어 보조-인자 SRC1, SRC2, AIB1, PELP1, CBP, p300, PCAF, CARM1, PRMT1 및 보조-억제인자, 예컨대 NCoR, SMRT 및 MTA1 을 이용한다. 호르몬 자극에 대한 전사 응답은 이들 보조-인자 및 억제인자의 상호작용 뿐만 아니라 크로마틴의 상태, 특히 보조-조절인자와 연합된 히스톤-수식 효소에 의한 히스톤의 수식에 의존적이다. 에스트로겐 및 안드로겐 호르몬 자극은 둘 모두 국부 히스톤의 아세틸화, 인산화 및 메틸화 상태를 변경하는 표적 유전자의 프로모터에서 여러 히스톤 수식을 유도한다. 호르몬-응답성 유전자에 관한 최대 전사율에 영향을 미치기 위해, KDM1A 활성이 요구된다. 따라서, KDMA1 은 종양 세포의 호르몬-의존성을 둔화 또는 제거함에 있어서 약제의 치료적 표적으로서 유용한 것으로 입증될 것이다. 이러한 동일한 치료 논리는 전사를 촉진하기에 충분하게 크로마틴 상태를 변경하는 KDM1A 활성에 전사 활성화가 일부 또는 전부 의존적인 기타 리간드-의존적 전사 인자에 적용된다 - 이들의 예는 비타민 D, 레티노이드 및 지질-활성화되는 수용체를 포함한다.
크로마틴 상태를 변경하는 단백질, 일반적으로 효소에 직접 또는 간접 작용하는 유전자 발현을 변경하는 효과를 갖는 수많은 치료제가 확인되었다. 그들의 정확한 작용 메카니즘이 완전히 밝혀지지는 않았지만, 특정 유전자 발현의 활성화에 참여하는 단백질 복합체에 대한 우리의 이해로부터 그 메카니즘이 추론될 수 있다. 이들 작용제는 침묵된 유전자의 프로모터 자리, 예컨대 감마 글로빈 프로모터에서 존재하고 활성인 것으로 알려진 DNMT1 또는 기타 DNA 메틸트랜스퍼라제를 저해하는 5'-아자시타딘 및 5'-아자-2' 데옥시시티딘 (데시타빈); 보리노스타트 및 파노비노스타트 또는 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) 효소의 기타 저해인자; 히드록시우레아 (HU), 발프로에이트 및 소듐 부티레이트 및 그것의 유사체 (이들 각각은 고아 핵 수용체의 활성을 간섭할 수 있음) 를 포함한다. 모든 이들 작용제는 주로 종양 질환의 관리에서 일부 임상적 용도를 갖는다. 기타 질환 상태에 관한 이들 작용제의 일부 임상적 유용성이 입증되었지만, 이들 작용제는 그들의 그다지 크지 않은 치료 효과 및 그들의 독성 때문에 널리 채택되지는 않았다.
유전자 프로모터에 결합된 단백질 복합체에 거주하는 임의의 효소 활성을 저해하는 작용제의 사용은 감마 글로빈 유전자 발현의 억압을 파괴하는 잠재력을 갖고, 헤모글로빈 F (HbF) 로서도 알려진 태아 헤모글로빈의 증가된 수준을 초래한다. 그러한 표적은 임의의 특정 단백질-단백질 접촉, 예를 들어 NuRD 복합체 및 KDM1A 의 경계면; 예를 들어, NR2C1 및 NR2C2 의 DNA 결합 인지 도메인; 예를 들어, NR2C1 및 NR2C2 의 리간드 결합 도메인; 효소 활성, 예컨대 라이신 데메틸라제, 예를 들어 KDM1A; 히스톤 데아세틸라제 (HDAC), 예를 들어 HDAC1, 2, 또는 3; DNA 메틸트랜스퍼라제, 예를 들어 DNMT1 을 포함한다.
예를 들어, 암의 경우에 적당한 세포자멸사를 포함하여, 정상적 생리적 기능으로 세포 또는 조직을 회복시키기에 충분하게 세포 및 조직에서의 유전자 발현을 변경하기 위한, 또는 병리적 상태를 억제하기에 충분하게 하나 이상의 유전자의 발현을 유도함으로써 세포, 조직, 기관 또는 유기체의 병리적 표현형을 변경하기 위한 조성물 및 방법에 대한 필요가 여전히 존재한다.
따라서 발명자들은 본원에서 신규한 화합물, 조성물 및 KDM1A 활성과 연관되는 질환의 치료 방법을 공개한다.
도 1 은 무정형 실시예 1 비스-토실레이트의 XRPD 회절도를 나타낸다.
도 2 는 실시예 1 비스-토실레이트 형태 2 의 XRPD 회절도를 나타내고; 상부는 반결정성 고체로부터 재결정화되었다.
도 3 은 반결정성 고체로부터 재결정화된 실시예 1 비스-토실레이트 형태 2 의 1H NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 4 는 반결정성 고체로부터 재결정화된 실시예 1 비스-토실레이트 형태 2 의 DCS 및 TGA 를 나타낸다.
도 5 는 실시예 1 비스-토실레이트 형태 2 의 XRPD 회절도를 나타내고; 상부는 ACN 중에서 합성되었다.
도 6 은 ACN 중에서 합성된 실시예 1 비스-토실레이트 형태 2 의 1H NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 7 은 ACN 중에서 합성된 실시예 1 비스-토실레이트 형태 2 의 DCS 및 TGA 를 나타낸다.
도 8 은 실시예 1 비스-토실레이트 형태 2 (A), 3 (E), 4 (D), 및 5 (B 및 C, 각각 고해상도 및 고처리 스캔으로부터) 의 XRPD 회절도를 나타내고; 점선으로 표시된, 형태 2 와 비교되는 추가 피크는 형태 3, 4, 및 5 의 부가적 특성화를 유도하였다.
도 9 는 실시예 1 비스-토실레이트 형태 2, 및 테트라히드로푸란 (F) 및 톨루엔 (G) 로부터의 반결정성 형태 3 의 XRPD 회절도를 나타내고; 점선으로 표시된, 형태 2 와 비교되는 추가 피크는 부가적 특성화를 유도하였다.
도 10 은 각종 용매 중에서 염 실험에서 회수한 고체 재료의 XRPD 회절도를 나타낸다. A 는 약한 결정성 술페이트이고; B 는 무정형 포스페이트이고; C 는 무정형 타르트레이트이고; D 는 무정형 술페이트이고; E 는 무정형 포스페이트이고; F 는 무정형 타르트레이트이고; G 는 무정형 푸마레이트이고; H 는 무정형 술페이트이고; I 는 무정형 포스페이트이고; J 는 무정형 타르트레이트이고; K 는 약한 결정성 푸마레이트이다.
도 11 은 성숙 후에 각종 용매 중에서 염 실험에서 회수한 고체 재료의 XRPD 회절도를 나타낸다. A 는 MTBE 로부터의 무정형 히드로클로라이드이고; B 는 부분 결정성 술페이트 패턴 1 이고; C 는 IPA 로부터의 무정형 메실레이트이고; D 는 부분 결정성 포스페이트 패턴 1 이고; E 는 무정형 타르트레이트이고; F 는 무정형 푸마레이트이고; G 는 무정형 술페이트이고; H 는 MTBE 로부터의 무정형 메실레이트이고; I 는 무정형 포스페이트이고; J 는 무정형 타르트레이트이고; K 는 무정형 푸마레이트이고; L 은 무정형 술페이트이고; M 은 MTBE 로부터의 무정형 메실레이트이고; N 은 무정형 포스페이트이고; O 는 무정형 타르트레이트이고; P 는 약한 결정성 푸마레이트 패턴 1 이다.
도 12 는 메틸에틸 케톤 중에서 염 실험에서 회수한 고체 재료의 XRPD 회절도를 나타낸다. A 는 무정형 술페이트이고; B 는 무정형 옥살레이트이고; C 는 갈락타르산이고; D 는 무정형 타르트레이트이고; E 는 무정형 술페이트이고; F 는 p-TSA (토실레이트) 형태 1 이고; G 는 무정형 옥살레이트이고; H 는 갈락타르산이고; I 는 약한 결정성 아스코르베이트이고; J 는 무정형 타르트레이트이다.
도 13 은 성숙 후에 메틸에틸 케톤 중에서 염 실험에서 회수한 고체 재료의 XRPD 회절도를 나타낸다. A 는 술페이트 패턴 2 이고; B 는 옥살레이트 형태 1 이고; C 는 갈락타르산이고; D 는 무정형 타르트레이트이고; E 는 갈락타르산이고; F 는 약한 결정성 타르트레이트이다.
도 14 는 MeCN 중에서 염 실험에서 회수한 고체 재료의 XRPD 회절도를 나타낸다. A 는 약한 결정성 술페이트이고; B 는 약한 결정성 옥살레이트이고; C 는 갈락타르산이고; D 는 무정형 술페이트이고; E 는 토실레이트 형태 2 이고; F 는 무정형 옥살레이트이고; G 는 갈락타르산이고; H 는 무정형 타르트레이트이다.
도 15 는 성숙 후에 MeCN 중에서 염 실험에서 회수한 고체 재료의 XRPD 회절도를 나타낸다. A 는 술페이트 패턴 3 이고; B 는 옥살레이트 형태 1 이고; C 는 갈락타르산이고; D 는 무정형 타르트레이트이고; E 는 무정형 옥살레이트이고; F 는 갈락타르산이고; G 는 무정형 타르트레이트이다.
도 16 은 타르트레이트 형태 2 염의 고해상도 XRPD 회절도이다.
도 17 은 옥살레이트 형태 1 염의 고해상도 XRPD 회절도이다.
도 18 은 타르트레이트 형태 1 염의 고해상도 XRPD 회절도이다.
도 19 는 타르트레이트 형태 3 염의 고해상도 XRPD 회절도이다.
도 20 은 옥살레이트 형태 2 염의 고해상도 XRPD 회절도이다.
도 21 은 제 2 염 실험으로부터 술페이트 염 형태의 XRPD 회절도를 나타낸다.
도 22 는 제 2 염 실험으로부터 벤젠술포네이트 염 형태의 XRPD 회절도를 나타낸다.
도 23 은 제 2 염 실험으로부터 옥살레이트 염 형태의 XRPD 회절도를 나타낸다.
도 24 는 제 2 염 실험으로부터 푸마레이트 염 형태의 XRPD 회절도를 나타낸다.
도 25 는 제 2 염 실험으로부터 베실레이트 염의 XRPD 회절도이다.
도 26 은 제 2 염 실험으로부터 L-말레이트 염의 XRPD 회절도이다.
도 27 은 제 2 염 실험으로부터 L-말레이트 염의 XRPD 회절도이다.
[057] 따라서, 본원에서 제공되는 것은 식 (I) 의 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물이다:
Figure pct00001
[식 중:
Y 는 결합, NR4a, O, C(O)NH, NHC(O), S, SO2, CHOH, 및 CH2 로부터 선택되고;
Z 는 결합, NR4b, O, C(O)NH, NHC(O), S, SO2, 및 CH2 로부터 선택되고;
m 은 0, 1, 2, 3, 4, 및 5 로부터 선택되고;
n 은 0, 1, 2, 및 3 으로부터 선택되고;
R1 및 R2 는 각각 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 알킬술포닐알킬, 알콕시알킬, 아릴, 아릴알킬, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 페닐, 바이페닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 헤테로시클로알킬, 및 헤테로시클로알킬알킬로부터 선택되고, R1 및 R2 는 이들이 부착된 질소와 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
R3 은 알킬아미노, 시클로알킬아미노, 아릴아미노, 헤테로아릴아미노, 헤테로시클로알킬아미노, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 헤테로시클로알킬, 및 헤테로시클로알킬알킬로부터 선택되며, 이들 중 어느 하나는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
R4, R4a, 및 R4b 는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 시클로알킬로부터 선택되고;
R5 는 아릴 및 헤테로아릴로부터 선택되며, 이들 중 어느 하나는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
각 R6 은 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 알킬술포닐아릴, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 할로알킬, 할로알콕시, 할로아릴, 알콕시아릴, 아릴, 아릴옥시, 아르알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 시아노, 알콕시, 알콕시아릴, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 옥소, COR7, SO2R7, NHSO2R7, NHSO2NHR7, NHCOR7, NHCONHR7, CONHR7, 및 CONR7R8 로부터 선택되고;
R7 및 R8 은 독립적으로 수소, 아릴, 및 저급 알킬로부터 선택되거나; 또는 R7 및 R8 은 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성할 수 있으며, 이는 저급 알킬로 임의 치환될 수 있음].
특정 구현예에서, 화합물은 식 Ia, Ib, Ic, 또는 Id 를 갖는다:
Figure pct00002
또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물 (식 중, 모든 기는 식 I 에 정의된 바와 같음).
특정 구현예에서, 화합물은 식 II 또는 III 을 갖는다:
Figure pct00003
또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물 (식 중, 모든 기는 식 I 에 정의된 바와 같음).
특정 구현예에서, 화합물은 식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId 를 갖는다:
Figure pct00004
또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물 (식 중, 모든 기는 식 I 에 정의된 바와 같음). 모든 시스 및 트랜스 이성질체가 간주된다.
특정 구현예에서, Z 는 NR4b 이다.
특정 구현예에서, R4b 는 메틸 및 수소로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R4b 는 수소이다.
특정 구현예에서, 알킬은 그 자체로 또는 또다른 비(非)시클릭 치환기의 명명되는 부분으로서 이든지간에, C1-C8 알킬이다.
특정 구현예에서, R3 은 아릴이며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, R3 은 아릴 및 헤테로아릴로부터 선택되며, 이들 중 하나는 헤테로아릴, 시아노, 및 S(O)2N(CH3)2 로부터 선택되는, R6a 로 불리는 R6 기로 치환된다. 특정 구현예에서, R3 은 1-2 개의 추가의 R6 기로 임의 치환된다.
특정 구현예에서, m 은 0 이고; Y 는 CH2 이고; n 은 0, 1, 및 2 로부터 선택된다.
특정 구현예에서, m 은 0 이고; Y 는 CH2 이고; n 은 2 이다.
특정 구현예에서, R3 은 페닐 및 헤테로아릴로부터 선택되며, 이들 중 하나는 헤테로아릴, 시아노, 및 S(O)2N(CH3)2 로부터 선택되는, R6a 로 불리는 R6 기로 치환된다.
특정 구현예에서, R6a 는 시아노, S(O)2N(CH3)2,
Figure pct00005
로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R6a 는 헤테로아릴이다.
특정 구현예에서, R6a 는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00006
특정 구현예에서, R6a 는 하기이다:
Figure pct00007
특정 구현예에서, R4 는 수소이다.
특정 구현예에서, R1 및 R2 에 의해 형성되는 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리는 이들이 부착된 질소와 함께 3 내지 8 개의 원자를 함유한다.
특정 구현예에서, R1 및 R2 는 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬을 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00008
Figure pct00009
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00010
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 하기이다:
Figure pct00011
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 알킬 및 옥소로부터 선택되는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환된다.
특정 구현예에서, R5 는 페닐이며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, R5 는 하기이다:
Figure pct00012
[식 중, R6b 는 할로겐 및 히드록시로부터 선택됨].
특정 구현예에서, R6b 는 플루오로, 메톡시, 및 히드록시로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R6b 는 플루오로이다.
특정 구현예에서, R4b 는 메틸 및 수소로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R4b 는 수소이다.
특정 구현예에서, 화합물은 식 IV 를 갖는다:
Figure pct00013
또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물
[식 중:
Y 는 결합, NR4a, O, C(O)NH, NHC(O), S, SO2, CHOH, 및 CH2 로부터 선택되고;
Z 는 결합, NR4b, O, C(O)NH, NHC(O), S, SO2, 및 CH2 로부터 선택되고;
m 은 0, 1, 2, 3, 4, 및 5 로부터 선택되고;
n 은 0, 1, 2, 및 3 으로부터 선택되고;
R1 및 R2 는 각각 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 알킬술포닐알킬, 알콕시알킬, 아릴, 아릴알킬, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 페닐, 바이페닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 헤테로시클로알킬, 및 헤테로시클로알킬알킬로부터 선택되고, R1 및 R2 는 이들이 부착된 질소와 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
R3 은 알킬아미노, 시클로알킬아미노, 아릴아미노, 헤테로아릴아미노, 헤테로시클로알킬아미노, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 헤테로시클로알킬, 및 헤테로시클로알킬알킬로부터 선택되며, 이들 중 어느 하나는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
R4a 및 R4b 는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 시클로알킬로부터 선택되고;
R5 는 아릴 및 헤테로아릴로부터 선택되며, 이들 중 어느 하나는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
R6a 는 헤테로아릴, 시아노, 및 S(O)2N(CH3)2 로부터 선택되고;
각 R6 은 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 알킬술포닐아릴, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 할로알킬, 할로알콕시, 할로아릴, 알콕시아릴, 아릴, 아릴옥시, 아르알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 시아노, 알콕시, 알콕시아릴, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 옥소, COR7, SO2R7, NHSO2R7, NHSO2NHR7, NHCOR7, NHCONHR7, CONHR7, 및 CONR7R8 로부터 선택되고;
R7 및 R8 은 독립적으로 수소, 아릴, 및 저급 알킬로부터 선택되거나; 또는 R7 및 R8 은 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성할 수 있으며, 이는 저급 알킬로 임의 치환될 수 있음].
특정 구현예에서, Z 는 NR4b 이다.
특정 구현예에서, R4b 는 메틸 및 수소로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R4b 는 수소이다.
특정 구현예에서, 알킬은 그 자체로 또는 또다른 비시클릭 치환기의 명명되는 부분으로서 이든지간에, C1-C8 알킬이다.
특정 구현예에서, m 은 0 이고; Y 는 CH2 이고; n 은 0, 1, 및 2 로부터 선택된다.
특정 구현예에서, n 은 2 이다.
특정 구현예에서, R1 및 R2 는 각각 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 알킬술포닐알킬, 알콕시알킬, 및 헤테로아릴로부터 선택되고, R1 및 R2 는 이들이 부착된 질소와 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, R1 및 R2 에 의해 형성되는 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리는 이들이 부착된 질소와 함께 3 내지 8 개의 원자를 함유한다.
특정 구현예에서, R1 및 R2 는 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬을 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 알킬, 알콕시, 알콕시알킬, 할로겐, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 알킬술포닐, 알킬술포닐알킬, 듀테륨, 트리듀테로메틸, 아미노, -COOH, -CONH2, -SO2CH3, 시아노, 스피로-헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, 및 옥소로부터 선택되는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환된다.
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 알킬, 할로겐, CONH2, SO2CH3, 시아노, 스피로-헤테로시클로알킬, 및 옥소로부터 선택되는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환된다.
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00014
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00015
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 하기이다:
Figure pct00016
특정 구현예에서, R6a 는 헤테로아릴이다.
특정 구현예에서, R6a 는 시아노, S(O)2N(CH3)2,
Figure pct00017
로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R6a 는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00018
특정 구현예에서, R5 는 페닐이며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, R5 는 하기이다:
Figure pct00019
[식 중, R6b 는 할로겐, 히드록시, 및 메톡시로부터 선택됨].
특정 구현예에서, R6b 는 플루오로, 메톡시, 및 히드록시로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R6b 는 플루오로이다.
특정 구현예에서, 화합물은 식 V 를 갖는다:
Figure pct00020
또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물
[식 중:
R1 및 R2 는 각각 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 알킬술포닐알킬, 알콕시알킬, 아릴, 아릴알킬, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 페닐, 바이페닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 헤테로시클로알킬, 및 헤테로시클로알킬알킬로부터 선택되고, R1 및 R2 는 이들이 부착된 질소와 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
R4b 는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 시클로알킬로부터 선택되고;
R6a 는 헤테로아릴, 시아노, 및 S(O)2N(CH3)2 로부터 선택되고;
각 R6 및 각 R6b 는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 알킬술포닐아릴, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 할로알킬, 할로알콕시, 할로아릴, 알콕시아릴, 아릴, 아릴옥시, 아르알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 시아노, 알콕시, 알콕시아릴, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 옥소, COR7, SO2R7, NHSO2R7, NHSO2NHR7, NHCOR7, NHCONHR7, CONHR7, 및 CONR7R8 로부터 선택되고;
R7 및 R8 은 독립적으로 수소, 아릴, 및 저급 알킬로부터 선택되거나; 또는 R7 및 R8 은 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성할 수 있으며, 이는 저급 알킬로 임의 치환될 수 있음].
특정 구현예에서, R4b 는 메틸 및 수소로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R4b 는 수소이다.
특정 구현예에서, R6a 는 시아노, S(O)2N(CH3)2,
Figure pct00021
로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R1 및 R2 는 각각 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 알킬술포닐알킬, 알콕시알킬, 및 헤테로아릴로부터 선택되고, R1 및 R2 는 이들이 부착된 질소와 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, R1 및 R2 에 의해 형성되는 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리는 이들이 부착된 질소와 함께 3 내지 8 개의 원자를 함유한다.
특정 구현예에서, R1 및 R2 는 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬을 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00022
Figure pct00023
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00024
특정 구현예에서, 질소-함유 헤테로시클로알킬은 하기이다:
Figure pct00025
특정 구현예에서, R6b 는 플루오로, 메톡시, 및 히드록시로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R6b 는 플루오로이다.
상기 단락 [057] - [0122] 의 임의의 구현예가 임의의 하나 이상의 이들 구현예와 조합될 수 있는 구현예가 또한 제공된다 (다만 그 조합은 상호 배타적이 아님). 본원에 사용되는, 하나의 구현예가 다른 구현예와 중복될 수 없는 것으로서 정의될 때 2 개의 구현예는 "상호 배타적" 이다. 예를 들어, Y 가 CH2 인 구현예는 Y 가 NR4b 인 구현예와 상호 배타적이다. 그러나, R1 및 R2 가 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬을 형성하는 구현예는 R5 가 불소로 임의로 치환되는 페닐인 구현예와 상호 배타적이지 않다.
[0122] 특정 구현예에서, 화합물은 본원에 공개된 예, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 화합물은 본원에 공개된 예, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물로부터 선택되며, 이때 R6a 는 헤테로아릴, 시아노, 및 S(O)2N(CH3)2 로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 화합물은 본원에 공개된 예, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물로부터 선택되며, 이때 R6a 는 헤테로아릴 및 시아노로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 화합물은 본원에 공개된 예, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물로부터 선택되며, 이때 R6a 는 헤테로아릴이다.
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
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Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
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Figure pct00058
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Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
Figure pct00063
또한 본원에서 제공되는 것은 본원에 공개된 화합물의 염, 또는 이의 다형체 또는 용매화물이다.
특정 구현예에서, 염은 식 VI 을 갖는다:
Figure pct00064
또는 이의 다형체 또는 용매화물
[식 중:
X 는 토실레이트, 술페이트, 타르트레이트, 옥살레이트, 베실레이트, 푸마레이트, 시트릭, 에실레이트, 및 말레이트로부터 선택되고;
q 는 1 및 2 로부터 선택되는 정수임].
특정 구현예에서, X 는 토실레이트이다.
특정 구현예에서, q 는 2 이다.
본원에서 제공되는 것은 N-((S)-5-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일)-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 비스-토실레이트, 또는 이의 다형체이다. 또한 본원에서 제공되는 것은 N-((S)-5-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일)-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 비스-토실레이트 형태 2 이다.
또한 본원에서 제공되는 것은 본원에 공개된 화합물의 토실레이트 염, 또는 이의 다형체 또는 용매화물이다. 또한 본원에서 제공되는 것은 본원에 공개된 화합물의 비스-토실레이트 염, 또는 이의 다형체 또는 용매화물이다.
또한 본원에서 제공되는 것은 본원에 공개된 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물로서, 약제로서의 용도가 제공된다. 또한 본원에서 제공되는 것은 KDM1A-매개된 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에서 사용하기 위한 본원에 공개된 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물이다.
또한 본원에서 제공되는 것은 겸상적혈구병, 중증성 지중해빈혈, 및 기타 베타-혈색소병증으로부터 선택되는 질환 또는 상태의 예방 또는 치료용 약제의 제조에 사용하기 위한 본원에 공개된 화합물이다.
또한 본원에서 제공되는 것은 본원에 공개된 화합물을, 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 포함하는 약학 조성물이다.
특정 구현예에서, 약학 조성물은 경구 투여를 위해 제형화된다.
특정 구현예에서, 약학 조성물은 또다른 치료제를 부가적으로 포함한다.
또한 본원에서 제공되는 것은 KDM1A 를 본원에 공개된 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 KDM1A 의 저해 방법이다.
또한 본원에서 제공되는 것은 치료 유효량의 본원에 공개된 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물을 이를 필요로 하는 환자에 투여하는 것을 포함하는, KDM1A-매개된 질환의 치료 방법이다.
특정 구현예에서, 질환은 암이다.
특정 구현예에서, 암은 유윙 육종, 다발성 골수종, T-세포 백혈병, 빌름스 종양, 소세포 폐암, 방광암, 전립선암, 유방암, 두경부암, 결장암, 및 난소암으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 질환은 골수성 질환이다.
특정 구현예에서, 골수성 질환은 골수섬유, 진성다혈구증, 본태성 혈소판증가증, 골수형성 증후군 (MDS), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 만성 골수성 백혈병 (CML) 으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 질환은 염증성 질환이다.
특정 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류머티스성 관절염, 또는 전신 홍반성 루프스로부터 선택된다.
또한 본원에서 제공되는 것은 치료 유효량의 본원에 공개된 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물을 이를 필요로 하는 환자에 투여하는 것을 포함하는, 글로빈-매개된 질환의 치료 방법이다.
또한 본원에서 제공되는 것은 본원에 공개된 화합물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 환자에서 효과를 달성하는 방법으로서, 효과가 적혈구 총수 (count) 의 상승, 태아 헤모글로빈을 함유하는 적혈구의 적혈구 총수의 상승, 적혈구 중 태아 헤모글로빈의 총 농도의 상승, 망상적혈구 중 태아 헤모글로빈의 총 농도의 상승, 골수-유래 적혈구 전구체, 예를 들어 전적혈모구 중 감마 글로빈 유전자의 전사의 증가, 단위 시간에 걸쳐 환자가 경험하는 겸상 적혈구 발증의 수의 감소, 겸상적혈구화 세포에 의해 야기되는 예를 들어, 심장, 비장, 뇌 또는 신장에서의 조직 손상의 중단 또는 방지, 시험관내 검정에서 환자 혈액을 사용하여 측정되는 상대적 저산소증의 생리적 상태 하에 겸상적혈구화를 겪는 적혈구의 비율의 감소, 치료된 환자에서 유래하는 세포를 사용하여 ChIP 에 의해 검정되는 감마 글로빈 프로모터에서 또는 그 가까이에서 라이신 위치 4 에서의 히스톤 3 라이신 메틸화 (H3K4me1 및 H3K4me2) 의 양의 증가, 및/또는 라이신 위치 9 에서의 히스톤 3 메틸화 (H3K9me1 또는 H3K4me2) 의 양의 감소로부터 선택되는 방법이다.
또한 본원에서 제공되는 것은 KDM1A 를 본원에 공개된 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는 적어도 하나의 KDM1A 기능의 저해 방법으로서, 저해가 인간 베타 글로빈 좌위 또는 이의 일부를 함유하는 인간 또는 마우스 또는 트랜스제닉 마우스의 생체 내의 또는 배양된 적혈구 또는 이의 전구체의 표현형, 암 세포의 증식 능력, KDM1A 활성에 의해 조절되는 것으로 알려진 특정 유전자, 예컨대 감마 글로빈의 발현, 히스톤 메틸화 상태의 변화, KDM1A 에 의해 탈메틸화되는 것으로 알려진 단백질, 예컨대 G9a 또는 SUV39H1 의 메틸화 상태의 변화, KDM1A-조절되는 유전자의 발현, 또는 KDM1A 와 천연 결합 상대, 예컨대 CoREST, DNMT1 또는 HDACs 의 결합에 의해 측정되는 방법이다.
KDM1A (LSD1) 활성의 저해 단독은 일부 질환의 치료에서는 충분한 요법일 수 있다; 다른 질환, 예컨대 암에서는, 조합 요법이 흔히 그들의 치료 효과에서 상가적 또는 상승작용적이고 심지어는 요망되는 완전한 임상 유익을 달성하는데 필수적일 수 있다. KDM1A 의 저해인자와 올-트랜스 (all-trans) 레틴산 (ATRA), 3산화 비소, DNA 메틸트랜스퍼라제의 저해인자, 예컨대 5'-아자시티딘 또는 5'-아자 2'-데옥시시티딘, NFκB 신호전달의 저해인자, 예컨대 술린닥 또는 종래의 항-신생물제, 예컨대 안트라사이클린 또는 뉴클레오시드 유사체, 예컨대 시토신 아라비노사이드의 조합을 합리화하는 특정 과학적 증거가 존재한다. 마찬가지로, 백혈병 줄기 세포를 세포 주기 내로 유도하는 작용제 (G-CSF, GM-CSF, 줄기 세포 인자, 트롬보포이에틴 (TPO)) 또는 암 줄기 세포의 적소 (niche) 를 개조하는 역할을 하는 분담 역할 사이토카인 (TPO, CCL3(MIP-1)) 을 무효화하는 작용제는 LSD1 저해인자를 포함하는 조합의 일부로서 유용할 수 있다.
약어 및 정의
본 공개의 이해를 촉진하기 위해, 본원에 사용되는 다수의 용어 및 약어가 다음과 같이 정의된다:
본 공개의 요소들 또는 이의 바람직한 구현예(들)을 도입할 때, 관사 "하나", "그" 및 "상기" 는 하나 이상의 요소들이 존재하는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 용어 "포함하는", "포함되는" 및 "갖는" 은 포괄적인 것으로 의도되고 열거된 요소들 이외에 부가적 요소들이 존재할 수 있다는 것을 의미한다.
용어 "및/또는" 은 둘 이상의 항목들의 나열에서 사용될 때, 나열된 항목 중 임의의 하나가 그것만으로 또는 임의의 하나 이상의 나열된 항목과 조합하여 이용될 수 있다는 것을 의미한다. 예를 들어, 표현 "A 및/또는 B" 은 A 및 B 중 하나 또는 둘 모두, 즉 A 단독, B 단독 또는 A 및 B 의 조합을 의미하는 것으로 의도된다. 표현 "A, B 및/또는 C" 는 A 단독, B 단독, C 단독, A 및 B 의 조합, A 및 C 의 조합, B 및 C 의 조합 또는 A, B, 및 C 의 조합을 의미하는 것으로 의도된다.
측정가능한 값, 예컨대 화합물, 투여량, 시간, 온도 등의 양을 언급할 때 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "약" 은 명시된 양으로부터 20%, 10%, 5%, 1%, 0.5%, 또는 심지어는 0.1% 의 차이를 망라하는 것으로 여겨진다.
약물의 "치료 유효량" 은 약물을 투여하는 이유가 되는 질환의 증상을 제거, 완화, 또는 경감을 제공하는 약물 또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염의 양이다.
"그것을 필요로 하는 대상" 은 질환의 하나 이상의 증상 또는 증인을 나타내는 인간 또는 비-인간 동물이다.
값의 범위가 공개되고, 표기법 "n1 ... 내지 n2" 또는 "n1 ... 와 n2 사이" 가 사용되고, 이 경우 n1 및 n2 이 숫자일 때, 다르게 명시되지 않으면, 이러한 표기법은 숫자 자체 및 그들 사이의 범위를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 범위는 그 사이에 포함되어 있거나 연속적일 수 있으며 마지막 값을 포함한다. 예를 들어, 범위 "2 내지 6 개의 탄소" 는, 탄소가 정수 단위로 존재하므로, 2, 3, 4, 5 및 6 개 탄소를 포함하는 것으로 의도된다. 이와 비교하여, 예를 들어 범위 "1 내지 3 μM (마이크로몰)" 은 1 μM, 3 μM, 및 임의 수의 유효 숫자 사이의 모든 값을 포함하는 것으로 의도된다 (예를 들어, 1.255 μM, 2.1 μM, 2.9999 μM 등). "0 개의 탄소 원자" 의 맥락에서 n 이 0 으로 설정될 때, 그것은 결합 또는 무를 나타내는 것으로 의도된다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알킬술포닐" 은 본원에 정의된 바와 같은 술포닐 기를 통해 부모 분자 부분에 부속된 본원에 정의된 바와 같은 알킬 기를 의미한다. 알킬술포닐의 대표적 예는 메틸술포닐 및 에틸술포닐을 포함하나 그에 제한되지 않는다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알킬술포닐알킬" 은 본원에 정의된 바와 같은 알킬 기를 통해 부모 분자 부분에 부속된 본원에 정의된 바와 같은 알킬술포닐 기를 의미한다. 알킬술포닐알킬의 대표적 예는 메틸술포닐메틸 및 에틸술포닐메틸을 포함하나 그에 제한되지 않는다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아실" 은, 단독 또는 조합으로, 알케닐, 알킬, 아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클, 또는 카르보닐에 부착된 원자가 탄소인 임의의 기타 부분에 부착된 카르보닐을 지칭한다. "아세틸" 기는 -C(O)CH3 기를 지칭한다. "알킬카르보닐" 또는 "알카노일" 기는 카르보닐 기를 통해 부모 분자 부분에 부착된 알킬 기를 지칭한다. 그러한 기의 예는 메틸카르보닐 및 에틸카르보닐을 포함한다. 아실 기의 예는 포르밀, 알카노일 및 아로일을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알케닐" 은, 단독 또는 조합으로, 하나 이상의 이중 결합을 갖고 2 내지 20 개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 기를 지칭한다. 특정 구현예에서, 상기 알케닐은 2 내지 6 개의 탄소 원자를 포함할 것이다. 용어 "알케닐렌" 은 둘 이상의 위치에서 부착된 탄소-탄소 이중 결합 시스템, 예컨대 에테닐렌 [(-CH=CH-), (-C::C-)] 을 지칭한다. 적합한 알케닐 기의 예는 에테닐, 프로페닐, 2-메틸프로페닐, 1,4-부타디에닐 등을 포함한다. 다르게 명시되지 않으면, 용어 "알케닐" 은 "알케닐렌" 기를 포함할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알콕시" 는, 단독 또는 조합으로, 알킬 에테르 기를 지칭하며, 여기에서 용어 알킬은 아래 정의된 바와 같다. 적합한 알킬 에테르 기의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소-부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시 등을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알킬" 은, 단독 또는 조합으로, 1 내지 20 개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. 특정 구현예에서, 상기 알킬은 1 내지 10 개의 탄소 원자를 포함할 것이다. 추가의 구현예에서, 상기 알킬은 1 내지 6 개의 탄소 원자를 포함할 것이다. 알킬 기는 본원에 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다. 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 이소-아밀, 헥실, 옥틸, 노닐 등을 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알킬렌" 은, 단독 또는 조합으로, 둘 이상의 위치에서 부착된 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소에서 유래하는 포화 지방족 기, 예컨대 메틸렌 (-CH2-) 를 지칭한다. 다르게 명시되지 않으면, 용어 "알킬" 은 "알킬렌" 기를 포함할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알킬아미노" 는, 단독 또는 조합으로, 아미노기를 통해 부모 분자 부분에 부착된 알킬기를 지칭한다. 적합한 알킬아미노기는 모노- 또는 디알킬화될 수 있으며, 예를 들어 N-메틸아미노, N-에틸아미노, N,N-디메틸아미노, N,N-에틸메틸아미노 등과 같은 기를 형성할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알킬리덴" 은, 단독 또는 조합으로, 탄소-탄소 이중 결합의 1 개 탄소 원자가 알케닐기가 부착되는 부분에 속하는 알케닐기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알킬티오" 는, 단독 또는 조합으로, 알킬 티오에테르 (R-S-) 기를 지칭하며, 이때 용어 알킬은 상기 정의한 바와 같고 황은 단일 또는 이중 산화될 수 있다. 적합한 알킬 티오에테르기의 예는 메틸티오, 에틸티오, n-프로필티오, 이소프로필티오, n-부틸티오, 이소-부틸티오, sec-부틸티오, tert-부틸티오, 메탄술포닐, 에탄술피닐 등을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "알키닐" 은, 단독 또는 조합으로, 하나 이상의 삼중 결합을 가지며 탄소수가 2 내지 20 인 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소기를 지칭한다. 특정 구현예에서, 상기 알키닐은 탄소수가 2 내지 6 이다. 추가적인 구현예에서, 상기 알키닐은 탄소수가 2 내지 4 이다. 용어 "알키닐렌" 은 2 개의 위치에서 부착된 탄소-탄소 삼중 결합, 예컨대 에티닐렌 (-C≡C-) 를 지칭한다. 알키닐기의 예는 에티닐, 프로피닐, 히드록시프로피닐, 부틴-1-일, 부틴-2-일, 펜틴-1-일, 3-메틸부틴-1-일, 헥신-2-일 등을 포함한다. 다르게 명시되지 않으면, 용어 "알키닐" 은 "알키닐렌" 기를 포함할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아미도" 및 "카르바모일" 은, 단독 또는 조합으로, 카르보닐기를 통해 부모 분자 부분에 부착된 하기 기재한 바와 같은 아미노기 (반대의 경우도 마찬가지임) 를 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "C-아미도" 는, 단독 또는 조합으로, R 이 본원에서 정의한 바와 같은 -C(=O)-NR2 기를 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "N-아미도" 는, 단독 또는 조합으로, R 이 본원에서 정의한 바와 같은 RC(=O)NH- 기를 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아실아미노" 는, 단독 또는 조합으로, 아미노기를 통해 부모 부분에 부착된 아실기를 포함한다. "아실아미노" 기의 예는 아세틸아미노 (CH3C(O)NH-) 이다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아미노" 는, 단독 또는 조합으로, -NRR' 를 지칭하며, 이때 R 및 R' 는 수소, 알킬, 히드록시알킬, 아실, 헤테로알킬, 아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴 및 헤테로시클로알킬 (이들 중 임의의 것은 그 자체로 임의로 치환될 수 있음) 로부터 독립적으로 선택된다. 추가적으로, R 및 R' 는 조합되어 헤테로시클로알킬을 형성할 수 있고, 이들 중 어느 하나는 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아미노산" 은, 단독 또는 조합으로, 부모 분자 부분에 부착되어 N-말단 또는 C-말단 아미노산을 제공할 수 있는 -NHCHRC(O)O- 기 (식 중, R 은 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, 아미노알킬, 아미도, 아미도알킬, 카르복실, 카르복실알킬, 구아니딘알킬, 히드록실, 티올, 및 티오알킬로부터 선택되고, 이들 중 임의의 것은 임의로 치환될 수 있음) 를 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 C-말단은, 단독 또는 조합으로, 아미노 기에서 아미노산에 결합되어 카르복실 기가 결합되어 있지 않은 본원에 기재된 바와 같은 아미드를 제공하여 말단 카르복실 기, 또는 상응하는 카르복실레이트 음이온을 초래하는 부모 분자 부분을 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 N-말단은, 단독 또는 조합으로, 카르복실 기에서 아미노산에 결합되어, 아미노 기가 결합되어 있지 않은 본원에 기재된 바와 같은 에스테르를 제공하여, 말단 이차 아민, 또는 상응하는 암모늄 양이온을 초래하는 부모 분자 부분을 지칭한다. 다시 말하면, C-말단은 -NHCHRC(O)OH 또는 -NHCHRC(O)O- 를 지칭하고, N-말단은 H2NCHRC(O)O- 또는 H3N+CHRC(O)O- 를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아미노알킬" 은, 단독 또는 조합으로, 알킬기를 통해 부모 부분에 연결되는 본원에 정의된 바와 같은 아미노기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아릴" 은, 단독 또는 조합으로, 폴리시클릭 고리계가 함께 융합된 1, 2 또는 3 개 고리를 포함하는 카르보시클릭 방향족 시스템을 의미한다. 용어 "아릴" 은 방향족기, 예컨대 페닐, 나프틸, 안트라세닐 및 페난트릴을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아릴알케닐" 또는 "아르알케닐" 은, 단독 또는 조합으로, 알케닐기를 통해 부모 분자 부분에 부착된 아릴기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아릴알콕시" 또는 "아르알콕시" 는, 단독 또는 조합으로, 알콕시기를 통해 부모 분자 부분에 부착된 아릴기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아릴알킬" 또는 "아르알킬" 은, 단독 또는 조합으로, 알킬기를 통해 부모 분자 부분에 부착된 아릴기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아릴알키닐" 또는 "아르알키닐" 은, 단독 또는 조합으로, 알키닐기를 통해 부모 분자 부분에 부착된 아릴기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "아릴알카노일" 또는 "아르알카노일" 또는 "아로일" 은, 단독 또는 조합으로, 아릴-치환 알칸카르복실산에서 유래한 아실기, 예컨대 벤조일, 나프토일, 페닐아세틸, 3-페닐프로피오닐 (히드로신나모일), 4-페닐부티릴, (2-나프틸)아세틸, 4-클로로히드로신나모일 등을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 아릴옥시는, 단독 또는 조합으로, 옥시를 통해 부모 분자 부분에 부착된 아릴기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "벤조" 및 "벤즈" 는, 단독 또는 조합으로, 벤젠에서 유래하는 2 가 기 C6H4= 를 지칭한다. 예는 벤조티오펜 및 벤즈이미다졸을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "바이페닐" 은 각각의 고리 상의 하나의 탄소 자리에서 연결된 2 개의 페닐 기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "카르바메이트" 는, 단독 또는 조합으로, 질소 또는 산 말단으로부터의 부모 분자 부분에 부착될 수 있고 본원에서 정의한 바와 같이 임의로 치환될 수 있는 카르밤산 (-NHCOO-) 의 에스테르를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "O-카르바밀" 은, 단독 또는 조합으로, R 및 R' 가 본원에서 정의한 바와 같은 -OC(O)NRR' 기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "N-카르바밀" 은, 단독 또는 조합으로, R 및 R' 가 본원에서 정의한 바와 같은 ROC(O)NR'- 기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "카르보닐" 은, 단독으로는 포르밀 [-C(O)H] 을 포함하며 조합으로 -C(O)- 기이다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "카르복실" 또는 "카르복시" 는, -C(O)OH 또는 카르복실산 염에서의 경우와 같은 상응하는 "카르복실레이트" 음이온을 지칭한다. "O-카르복시" 기는 R 이 본원에서 정의한 바와 같은 RC(O)O- 기를 지칭한다. "C-카르복시" 기는 R 이 본원에서 정의한 바와 같은 -C(O)OR 기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "시아노" 는, 단독 또는 조합으로, -CN 을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "시클로알킬" 또는 대안적으로는 "카르보사이클" 은, 단독 또는 조합으로, 포화 또는 부분 포화 모노시클릭, 바이시클릭 또는 트리시클릭 알킬기를 지칭하며, 이때 각각의 시클릭 부분은 3 내지 12 개의 탄소 원자 고리원을 포함하고, 임의로는 본원에서 정의한 바와 같이 임의로 치환되는 벤조 융합 고리계일 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 시클로알킬은 탄소수가 5 내지 7 일 것이다. 이러한 시클로알킬기의 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 테트라히드로나프틸, 인다닐, 옥타히드로나프틸, 2,3-디히드로-1H-인데닐, 아다만틸 등을 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같은 "바이시클릭" 및 "트리시클릭" 은 융합 고리계, 예컨대 데카히드로나프탈렌, 옥타히드로나프탈렌 및 멀티시클릭 (다중심화) 포화 또는 부분 불포화 유형 모두를 포함하는 것으로 의도된다. 이성질체의 멀티시클릭 (다중심화) 포화 또는 부분 불포화 유형은 일반적으로 바이시클로[1,1,1]펜탄, 캄포르, 아다만탄 및 바이시클로[3,2,1]옥탄에 의해 예시된다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "에스테르" 는, 단독 또는 조합으로, 탄소 원자에서 연결된 2 개 부분을 브릿지 연결 (bridging) 하는 카르복시기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "에테르" 는, 단독 또는 조합으로, 탄소 원자에서 연결된 2 개 부분을 브릿지 연결하는 옥시기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "구아니딘" 은, 단독 또는 조합으로, -NHC(=NH)NH2, 또는 상응하는 구아니디늄 양이온을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "할로" 또는 "할로겐" 은, 단독 또는 조합으로, 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "할로알콕시" 는, 단독 또는 조합으로, 산소 원자를 통해 부모 분자 부분에 부착된 할로알킬기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "할로알킬" 은, 단독 또는 조합으로, 하나 이상의 수소가 할로겐으로 대체되는, 상기 정의한 바와 같은 의미를 갖는 알킬기를 지칭한다. 모노할로알킬, 디할로알킬 및 폴리할로알킬기가 특히 포함된다. 한 가지 예를 들어, 모노할로알킬기는 기 내에 요오도, 브로모, 클로로 또는 플루오로 원자를 가질 수 있다. 디할로 및 폴리할로알킬기는 둘 이상의 동일한 할로 원자 또는 상이한 할로기의 조합을 가질 수 있다. 할로알킬기의 예는 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 클로로메틸, 디클로로메틸, 트리클로로메틸, 펜타플루오로에틸, 헵타플루오로프로필, 디플루오로클로로메틸, 디클로로플루오로메틸, 디플루오로에틸, 디플루오로프로필, 디클로로에틸 및 디클로로프로필을 포함한다. "할로알킬렌" 은 둘 이상의 위치에서 부착된 할로알킬기를 지칭한다. 그 예는 플루오로메틸렌 (-CFH-), 디플루오로메틸렌 (-CF2-), 클로로메틸렌 (-CHCl-) 등을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "헤테로알킬" 은, 단독 또는 조합으로, 전체 포화 또는 1 내지 3 의 불포화도를 갖는, 언급된 수의 탄소 원자 및 O, N 및 S 에서 선택되는 1 내지 3 개의 헤테로원자로 이루어지고, 이때 상기 질소 및 황 원자가 임의로는 산화될 수 있고 질소 헤테로원자가 임의로 사차화될 수 있는, 안정한 직쇄 또는 분지쇄 또는 시클릭 탄화수소기, 또는 이의 조합을 지칭한다. 헤테로원자(들) O, N 및 S 는 헤테로알킬기의 임의의 내부 위치에 존재할 수 있다. 2 개 이하의 헤테로원자가 연속하여 있을 수 있다 (예를 들어, -CH2-NH-OCH3).
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "헤테로아릴" 은, 단독 또는 조합으로, 3 내지 7 원 불포화 헤테로모노시클릭 고리, 또는 융합 모노시클릭, 바이시클릭, 또는 트리시클릭 고리계를 지칭하며, 이때 융합된 고리 중 1 개 이상이 방향족이고, 이는 O, S 및 N 에서 선택되는 1 개 이상의 원자를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 헤테로아릴은 탄소수가 5 내지 7 일 것이다. 상기 용어는 또한 융합된 폴리시클릭기를 포함하며, 이때 헤테로시클릭 고리는 아릴 고리와 융합되고, 헤테로아릴 고리는 다른 헤테로아릴 고리와 융합되고, 헤테로아릴 고리는 헤테로시클로알킬 고리와 융합되거나, 헤테로아릴 고리는 시클로알킬 고리와 융합된다. 헤테로아릴기의 예는 피롤릴, 피롤리닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 트리아졸릴, 피라닐, 푸라닐, 티에닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 티아졸릴, 티아디아졸릴, 이소티아졸릴, 인돌릴, 이소인돌릴, 인돌리지닐, 벤즈이미다졸릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 인다졸릴, 벤조트리아졸릴, 벤조디옥솔릴, 벤조피라닐, 벤족사졸릴, 벤족사디아졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티아디아졸릴, 벤조푸라닐, 벤조티에닐, 크로모닐, 쿠마리닐, 벤조피라닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라졸로피리다지닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 티에노피리디닐, 푸로피리디닐, 피롤로피리디닐, 아제피닐, 디아제피닐, 벤즈아제피닐 등을 포함한다. 예시적인 트리시클릭 헤테로시클릭기는 카르바졸릴, 벤지돌릴, 페난트롤리닐, 디벤조푸라닐, 아크리디닐, 페난트리디닐, 잔테닐 등을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "헤테로아릴알킬" 은, 단독으로 또는 또다른 기의 일부로서, 헤테로아릴 치환기를 갖는 위에 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "헤테로시클로알킬" 및 상호교환적인 "헤테로사이클" 은, 단독 또는 조합으로, 각각 고리원으로서 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 포화, 부분 불포화, 또는 전체 불포화 모노시클릭, 바이시클릭 또는 트리시클릭 헤테로시클릭기를 지칭하며, 이때 각각의 상기 헤테로원자는 질소, 산소 및 황에서 독립적으로 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 헤테로시클로알킬은 고리원으로서 1 내지 4 개의 헤테로원자를 포함할 것이다. 추가적인 구현예에서, 상기 헤테로시클로알킬은 고리원으로서 1 내지 2 개의 헤테로원자를 포함할 것이다. 특정 구현예에서, 상기 헤테로시클로알킬은 각각의 고리에 3 내지 8 개의 고리원을 포함할 것이다. 추가적인 구현예에서, 상기 헤테로시클로알킬은 각각의 고리에 3 내지 7 개의 고리원을 포함할 것이다. 추가적인 구현예에서, 상기 헤테로시클로알킬은 각각의 고리에 5 내지 6 개의 고리원을 포함할 것이다. "헤테로시클로알킬" 및 "헤테로사이클" 은 3 차 질소 고리원의 N-산화물, 술폭시드, 술폰, 및 카르보시클릭 융합 및 벤조 융합 고리계를 포함하는 것으로 의도되며; 추가적으로 두 용어 모두는 또한, 본원에서 정의한 바와 같은, 헤테로사이클 고리가 아릴기에 융합되는 시스템, 또는 추가적인 헤테로사이클기를 포함한다. 헤테로사이클기의 예는 아지리디닐, 아제티디닐, 1,3-벤조디옥솔릴, 디히드로이소인돌릴, 디히드로이소퀴놀리닐, 디히드로신놀리닐, 디히드로벤조디옥시닐, 디히드로[1,3]옥사졸로[4,5-b]피리디닐, 벤조티아졸릴, 디히드로인돌릴, 디히드로피리디닐, 1,3-디옥사닐, 1,4-디옥사닐, 1,3-디옥솔라닐, 이미다졸리디닐, 이소인돌리닐, 모르폴리닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 메틸피페라지닐, N-메틸피페라지닐, 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피리디닐, 티오모르폴리닐, 티아졸리디닐, 디아제파닐 등을 포함한다. 헤테로사이클기는 특별히 금하지 않는 한 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "히드라지닐" 은, 단독 또는 조합으로, 단일 결합에 의해 연결되는 2 개 아미노기, 즉, -N-N- 을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "히드록시" 는, 단독 또는 조합으로, -OH 를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "히드록시알킬" 은, 단독 또는 조합으로, 알킬기를 통해 부모 분자 부분에 부착된 히드록시기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "히드록삼산" 은, 단독 또는 조합으로, 부모 분자 부분이 탄소 원자에 의해 히드록삼산 기에 부착된 -C(=O)NHOH 를 지칭한다.
어구 "주쇄에서" 는 본원에 공개된 식 중 임의로 하나의 화합물에 기가 부착되는 지점에서 시작하는 탄소 원자의 최장의 근접 또는 인접 사슬을 지칭한다. 어구 "원자의 선형 사슬" 은 탄소, 질소, 산소 및 황에서 독립적으로 선택되는 원자의 최장 직쇄를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "저급" 은 구체적으로 다르게 정의하지 않는 한, 단독 또는 조합으로, 1 내지 6 (6 포함) 개의 탄소 원자를 포함하는 것을 의미한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "저급 아릴" 은, 단독 또는 조합으로, 주어진 바에 따라 임의로 치환될 수 있는 페닐 또는 나프틸을 의미한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "저급 헤테로아릴" 은, 단독 또는 조합으로, 1) 5 또는 6 개 고리원을 포함하는 모노시클릭 헤테로아릴 (1 내지 4 개의 상기 고리원은 O, S 및 N 에서 선택되는 헤테로원자일 수 있음), 또는 2) 각각의 융합된 고리가, O, S 및 N 에서 선택되는 1 내지 4 개 헤테로원자를 그 사이에 포함하는 5 또는 6 개 고리원을 포함하는 바이시클릭 헤테로아릴을 의미한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "저급 시클로알킬" 은, 단독 또는 조합으로, 3 내지 6 개 고리원을 갖는 모노시클릭 시클로알킬을 의미한다. 저급 시클로알킬은 불포화될 수 있다. 저급 시클로알킬의 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "저급 헤테로시클로알킬" 은, 단독 또는 조합으로, 1 내지 4 개의 고리원이 O, S 및 N 에서 선택되는 헤테로원자일 수 있는 3 내지 6 개 고리원을 갖는 모노시클릭 헤테로시클로알킬을 의미한다. 저급 헤테로시클로알킬의 예는 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐 및 모르폴리닐을 포함한다. 저급 헤테로시클로알킬은 불포화될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "저급 아미노" 는, 단독 또는 조합으로, -NRR' 을 지칭하며, 이때 R 및 R' 는 수소, 저급 알킬 및 저급 헤테로알킬에서 독립적으로 선택되고, 이들 중 임의의 것은 임의로 치환될 수 있다. 추가적으로, 저급 아미노기의 R 및 R' 는 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로시클로알킬을 형성할 수 있으며, 이들 중 어느 하나는 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "니트로" 는, 단독 또는 조합으로, -NO2 를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "옥시" 또는 "옥사" 는, 단독 또는 조합으로, -O- 를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "옥소" 는, 단독 또는 조합으로, =O 를 지칭한다.
용어 "퍼할로알콕시" 는 모든 수소 원자가 할로겐 원자에 의해 대체되는 알콕시기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "퍼할로알킬" 은, 단독 또는 조합으로, 모든 수소 원자가 할로겐 원자에 의해 대체되는 알킬기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "포스포네이트" 는, 단독 또는 조합으로,는 -P(=O)(OR)2 기 (식 중, R 은 알킬 및 아릴로부터 선택됨) 를 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "포스폰산" 은, 단독 또는 조합으로, -P(=O)(OH)2 기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "술포네이트" "술폰산" 및 "술폰" 은, 단독 또는 조합으로, -SO3H 기 및 이의 음이온 (술폰산이 염 형태로 사용되므로) 을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "술파닐" 은, 단독 또는 조합으로, -S- 를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "술피닐" 은, 단독 또는 조합으로, -S(O)- 를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "술포닐" 은, 단독 또는 조합으로, -S(O)2- 를 지칭한다.
용어 "N-술폰아미도" 는, R 및 R' 가 본원에서 정의한 바와 같은 RS(=O)2NR'- 기를 지칭한다.
용어 "S-술폰아미도" 는, R 및 R' 가 본원에서 정의한 바와 같은 -S(=O)2NRR' 기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "티아" 및 "티오" 는, 단독 또는 조합으로, 산소가 황으로 대체되는 -S- 기 또는 에테르를 지칭한다. 티오기의 산화된 유도체, 즉 술피닐 및 술포닐이 티아 및 티오의 정의에 포함된다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "티올" 은, 단독 또는 조합으로, -SH 기를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "티오카르보닐" 은, 단독으로는 티오포르밀 -C(S)H 를 포함하며 조합으로 -C(S)- 기이다.
용어 "N-티오카르바밀" 은, R 및 R' 가 본원에서 정의한 바와 같은 ROC(S)NR'- 기를 지칭한다.
용어 "O-티오카르바밀" 은, R 및 R' 가 본원에서 정의한 바와 같은 -OC(S)NRR' 기를 지칭한다.
용어 "티오시아나토" 는 -CNS 기를 지칭한다.
용어 "트리할로메톡시" 는 X 가 할로겐인 X3CO- 기를 지칭한다.
본원에서의 임의의 정의는 복합 구조적 기를 설명하기 위해 임의의 다른 정의와 조합으로 사용될 수 있다. 관례상, 임의의 이러한 정의에서 뒤따르는 부분 (trailing element) 은 부모 부분에 부착되는 것이다. 예를 들어, 복합기 알킬아미도는 아미도기를 통해 부모 분자에 부착된 알킬기를 나타내며, 용어 알콕시알킬은 알킬기를 통해 부모 분자에 부착된 알콕시기를 나타낼 것이다.
기가 "무 (null)" 인 것으로 정의되는 경우, 이는 상기 기가 부재한다는 것을 의미한다. 유사하게, 정수의 군 또는 범위로부터 선택될 수 있는 "n" 과 같은 지정이 0 으로 지정될 때, 그것이 지정하는 기는, 말단 위치에서인 경우에 부재하거나, 그것이 2 개의 다른 기 사이에 속하는 경우에 축합되어 결합을 형성한다.
용어 "임의로 치환된" 은 치환되거나 비치환될 수 있는 선행기를 의미한다. 치환되는 경우, "임의로 치환된" 기의 치환기는 하기 기 또는 특정 지정된 기의 집합에서 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기를 단독 또는 조합으로 비제한적으로 포함할 수 있다: 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 알카노일, 저급 헤테로알킬, 저급 헤테로시클로알킬, 저급 할로알킬, 저급 할로알케닐, 저급 할로알키닐, 저급 퍼할로알킬, 저급 퍼할로알콕시, 저급 시클로알킬, 페닐, 아릴, 아릴옥시, 저급 알콕시, 저급 할로알콕시, 옥소, 저급 아실옥시, 카르보닐, 카르복실, 저급 알킬카르보닐, 저급 카르복시에스테르, 저급 카르복사미도, 시아노, 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 저급 알킬아미노, 아릴아미노, 아미도, 니트로, 티올, 저급 알킬티오, 저급 할로알킬티오, 저급 퍼할로알킬티오, 아릴티오, 술포네이트, 술폰산, 삼중치환된 실릴, N3, SH, SCH3, C(O)CH3, CO2CH3, CO2H, 피리디닐, 티오펜, 푸라닐, 저급 카르바메이트 및 저급 우레아. 2 개 치환기는 함께 연결되어, 0 내지 3 개의 헤테로원자로 이루어지며 예를 들어 메틸렌디옥시 또는 에틸렌디옥시를 형성하는 융합된 5-, 6- 또는 7-원 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성할 수 있다. 임의로 치환된 기는 비치환되거나 (예를 들어, -CH2CH3), 전체 치환되거나 (예를 들어, -CF2CF3), 단일치환되거나 (예를 들어, -CH2CH2F) 전체 치환과 단일치환의 중간 수준으로 치환될 수 있다 (예를 들어, -CH2CF3). 치환기가 치환에 관한 적격화 없이 인용되는 경우, 치환된 형태 및 비치환된 형태 모두 포함된다. 치환기가 "치환된" 것으로서 적격화되는 경우, 치환된 형태가 특히 의도된다. 추가적으로, 특정 부분에 대한 임의적인 치환기의 상이한 집합이 필요한 것으로 정의될 수 있으며; 이러한 경우, 임의적인 치환은 종종 다음의 어구 "~로 임의로 치환된" 으로 정의될 것이다.
구조
Figure pct00065
가 본원에 사용되는 바와 같은 경우, ( )m 및 ( )n 로 둘러싸인 알킬렌기는 m 또는 n 개의 탄소 길이일 수 있다.
다르게 정의하지 않는 한, 그 자체로, 그리고 수 지정 없이 나타내는 용어 R 또는 용어 R' 는 수소, 알킬, 시클로알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클로알킬에서 선택되는 부분을 지칭하며, 이들 중 임의의 것은 임의로 치환될 수 있다. 이러한 R 및 R' 기는 본원에서 정의하는 바와 같이 임의로 치환되는 것으로 이해되어야 한다. R 기가 수 지정을 갖거나 갖지 않는 여부에 따라, R, R' 및 Rn (n=(1, 2, 3...n) 임) 을 포함하는 모든 R 기, 모든 치환기 및 모든 용어는 기로부터의 선택의 측면에 있어서 모든 다른 것에 대해 독립적인 것으로 이해되어야 한다. 임의의 변수, 치환기 또는 용어 (예를 들어, 아릴, 헤테로사이클, R, 등) 는 식 또는 포괄적 구조에서 1 회 초과로 발생하며, 각각의 경우 이의 정의는 모든 다른 발생시의 정의에 독립적이다. 통상의 기술자는 작성된 바와 같이, 특정 기가 부모 분자에 부착될 수 있거나 양쪽 끝 중 어느 하나로부터의 부분의 사슬에서 위치를 차지할 수 있다는 것을 추가로 인지할 것이다. 따라서 단지 예로써, -C(O)N(R)- 과 같은 비대칭기가 탄소 또는 질소 중 어느 하나에서 부모 부분에 부착될 수 있다.
비대칭 중심이 본원에 공개된 화합물에서 존재한다. 이들 중심은 키랄 탄소 원자 주변의 치환기의 배치에 따라 기호 "R" 또는 "S" 로 지정된다. 본 발명이 부분입체이성질체, 거울상이성질체 및 에피머 형태 뿐 아니라 d-이성질체 및 l-이성질체 및 이의 혼합물을 포함하는 모든 입체화학적 이성질체 형태를 포함하는 것이 이해되어야 한다. 화합물의 개별적인 입체이성질체는, 키랄 중심을 포함하는 시판 출발 물질로부터 합성적으로 제조되거나, 거울상이성질체 산물의 혼합물 제조 후 부분입체이성질체 혼합물로의 분리, 예컨대 전환, 이후 분리 또는 재결정화, 크로마토그래피 기술, 키랄 크로마토그래피 컬럼 상에서의 거울상이성질체의 직접 분리, 또는 당업계에 알려져 있는 임의의 다른 적절한 방법에 의해 제조될 수 있다. 특정 입체화학의 출발 화합물은 시판되거나 당업계에 알려져 있는 기술에 의해 제조되고 분석될 수 있다. 추가적으로, 본원에 공개된 화합물은 기하학적 이성질체로서 존재할 수 있다. 본 발명은 모든 시스, 트랜스, 합성, 안티, 반대쪽 (entgegen) (E) 및 공동 (zusammen) (Z) 이성질체 뿐 아니라 이의 적절한 혼합물을 포함한다. 추가적으로, 화합물은 호변이성질체로서 존재할 수 있고; 모든 호변이성질체성 이성질체가 본 발명에 의해 제공된다. 추가적으로, 본원에 공개된 화합물은 비용매화된 형태로 존재할 수 있을 뿐 아니라 물, 에탄올 등과 같은 약학적으로 허용가능한 용매로의 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화된 형태는 비용매화된 형태와 동등한 것으로 간주된다.
용어 "결합" 은 결합에 의해 연결된 원자가 큰 구조의 일부인 것으로 고려되는 경우, 2 개 부분 또는 2 개 원자 사이의 공유 결합을 지칭한다. 다르게 명시되지 않으면, 결합은 단일, 이중 또는 삼중일 수 있다. 분자 그림에서 2 개 원자 사이의 점선은 그 위치에 추가적인 결합이 존재하거나 부재할 수 있다는 것을 표시한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "질환" 은, 정상 기능을 악화시키며 통상 특징적인 징후 및 증상에 의해 나타나고 인간 또는 동물에 있어서 삶의 지속 기간 또는 질을 감소시키는 인간 또는 동물 신체 또는 이의 일부 중 하나의 비정상적 상태를 모두 반영한다는 점에 있어서, 용어 "장애" 및 "상태" (의학적 상태에서와 같은) 와 일반적으로 동의어인 것으로 의도되며 이와 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "조합 요법" 은 둘 이상의 치료제를 투여하여 본 공개에서 기재된 치료적 상태 또는 장애를 치료하는 것을 의미한다. 이러한 투여는 이들 치료제를 실질적 동시 방식으로, 예컨대 고정비의 활성 성분을 갖는 단일 캡슐로, 또는 각각의 활성 성분에 대한 다수의, 별개 캡슐로 동시 투여하는 것을 포함한다. 추가로, 이러한 투여는 또한 각 유형의 치료제를 순차적 방식으로 사용하는 것을 포함한다. 어느 하나의 경우, 치료 계획은 본원에서 기재한 상태 또는 장애를 치료하는데 있어서 약물 조합의 유리한 효과를 제공한다.
어구 "치료적으로 유효한" 은 질환 또는 장애 치료에서 사용하는 활성 성분의 양을 적격화하는 것으로 의도된다. 이러한 양으로, 상기 질환 또는 장애를 감소시키거나 없애는 목표가 이루어질 것이다.
용어 "치료적으로 허용가능한" 은, 환자의 조직과 접촉시 지나친 독성, 자극 및 알레르기성 반응이 없이 적합한 이들 화합물 (또는 염, 전구약물, 호변이성질체, 쌍성이온 형태 등) 이 타당한 유익/위험비에 비례하고, 이의 의도된 사용에 대해 유효한 것을 지칭한다.
본원에서 사용하는 바와 같이, 환자의 "치료" 에 대한 언급은 예방을 포함하는 것으로 의도된다. 용어 "환자" 는 인간을 포함하는 모든 포유동물을 의미한다. 환자의 예는 인간, 소, 개, 고양이, 염소, 양, 돼지 및 토끼를 포함한다. 바람직하게는, 환자는 인간이다.
용어 "전구약물" 은 생체내에서 보다 활성이 되는 화합물을 지칭한다. 본원에서 개시한 특정 화합물은 또한 [Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism : Chemistry, Biochemistry, and Enzymology (Testa, Bernard and Mayer, Joachim M. Wiley-VHCA, Zurich, Switzerland 2003)] 에서 기재한 바와 같이 전구약물로서 존재할 수 있다. 본원에서 기재한 화합물의 전구약물은 상기 화합물이 제공되도록 생리학적 조건 하에 화학적 변화를 용이하게 거치는 화합물의 구조적 개질 형태이다. 추가적으로, 전구약물은 생체외 (ex vivo) 실험에서 화학적 또는 생화학적 방법에 의해 상기 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, 전구약물은 적합한 효소 또는 화학 시약과 함께 경피용 패치 저장소에 위치하는 경우 화합물로 천천히 전환될 수 있다. 일부 경우에 전구약물이 화합물 또는 모 (parent) 약물보다 투여하기에 용이할 수 있기 때문에, 전구약물은 종종 유용하다. 예를 들어 이는 경구 투여에 의해 생물학적으로 이용가능할 수 있는 반면, 모 약물은 그렇지 않다. 전구약물은 또한 모 약물보다 약학 조성물에서 향상된 가용성을 가질 수 있다. 광범위하게 다양한 전구약물 유도체가 당업계에 알려져 있다 (예컨대, 전구약물의 가수분해적 분열 또는 산화적 활성에 의존적인 것들). 전구약물의 비제한적인 예는, 에스테르로서 투여될 수 있으나 ("전구약물") 활성 개체인 카르복실산으로 대사적으로 가수분해되는 화합물일 수 있다. 추가적인 예는 화합물의 펩티딜 유도체를 포함한다.
본원에 공개된 화합물은 치료적으로 허용가능한 염으로서 존재할 수 있다. 본 발명은 상기 열거한 화합물을 산 부가염을 포함하는 염 형태로 포함한다. 적합한 염은 유기 및 무기산 모두로 형성된 것들을 포함한다. 이러한 산 부가염은 보통 약학적으로 허용가능할 것이다. 그러나, 비-약학적으로 허용가능한 염의 염이 의문 화합물의 제조 및 정제에서 이용될 수 있다. 염기성 부가염이 또한 형성될 수 있으며 약학적으로 허용가능할 수 있다. 염의 제조 및 선택에 대한 보다 완전한 토의에 대해서는 [Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use (Stahl, P. Heinrich. Wiley-VCHA, Zurich, Switzerland, 2002)] 를 참조한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "치료적으로 허용가능한 염" 은 본원에서 정의한 바와 같이 수용성 또는 유용성 또는 분산성이며 치료적으로 허용가능한 본원에 공개된 화합물의 염 또는 쌍성이온 형태를 나타낸다. 상기 염은 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 제조될 수 있거나, 자유 염기 형태의 적절한 화합물을 적합한 산과 반응시켜 별개로 제조될 수 있다. 대표적인 산 부가염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, L-아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트 (베실레이트), 바이술페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시트레이트, 디글루코네이트, 포르메이트, 푸마레이트, 겐티세이트, 글루타레이트, 글리세로포스페이트, 글리콜레이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히푸레이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로요오다이드, 2-히드록시에탄술포네이트 (이세티오네이트), 락테이트, 말레에이트, 말로네이트, DL-만델레이트, 메시틸렌술포네이트, 메탄술포네이트, 나프틸렌술포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로프리오네이트, 포스포네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 피로글루타메이트, 숙시네이트, 술포네이트, 타르트레이트, L-타르트레이트, 트리클로로아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 포스페이트, 글루타메이트, 바이카르보네이트, 파라-톨루엔술포네이트 (p-토실레이트) 및 운데카노에이트를 포함한다. 또한, 본원에 공개된 화합물에서의 염기성 기는 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드; 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 술페이트; 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테릴 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드; 및 벤질 및 페네틸 브로마이드로 사차화될 수 있다. 치료적으로 허용가능한 부가 염이 형성되도록 이용할 수 있는 산의 예는 무기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산, 및 유기산, 예컨대 옥살산 말레산, 숙신산 및 시트르산을 포함한다. 염은 또한 화합물과 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 이온과의 배위에 의해 형성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본원에 공개된 화합물의 나트륨, 칼륨, 마그네슘 및 칼슘 염 등을 고려한다.
염기성 부가염은 카르복시기와 적합한 염기, 예컨대 금속 양이온의 히드록시드, 카르보네이트 또는 바이카르보네이트, 또는 암모니아 또는 유기 일차, 이차 또는 삼차 아민의 반응에 의해, 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 제조될 수 있다. 치료적으로 허용가능한 염의 양이온은 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 알루미늄 뿐 아니라 비독성 사차 아민 양이온, 예컨대 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디에틸아민, 에틸아민, 트리부틸아민, 피리딘, N,N-디메틸아닐린, N-메틸피페리딘, N-메틸모르폴린, 디시클로헥실아민, 프로카인, 디벤질아민, N,N-디벤질페네틸아민, 1-에펜아민 및 N,N'-디벤질에틸렌디아민을 포함한다. 염기 부가염 형성에 유용한 다른 대표적 유기 아민은 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페리딘 및 피페라진을 포함한다.
화합물의 염은 자유 염기 형태의 적당한 화합물과 적당한 산의 반응에 의해 제조될 수 있다.
본원에 공개된 화합물은 다형체 및 기타 구별되는 고체 형태, 예컨대 용매화물, 수화물 등으로서 존재할 수 있다. 화합물은 염 또는 자유 염기 또는 산의 다형체, 용매화물, 또는 수화물일 수 있다.
본원에 공개된 화합물은 원 화학물질로서 투여되는 것이 가능할 수 있지만, 그것을 약학 제형 (동등하게, "약학 조성물") 으로서 제공하는 것이 또한 가능하다. 따라서, 본원에서는 하나 이상의 본원에 공개된 특정 화합물, 또는 이의 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 전구약물, 아미드 또는 용매화물을, 이의 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체 및 임의로는 하나 이상의 기타 치료 성분과 함께 포함하는 약학 제형이 제공된다. 담체(들) 는 제형의 다른 성분과 양립가능하다는 면에 있어서 "허용가능" 해야 하며 이의 수용자에게 유해해서는 안 된다. 적절한 제형은 선택된 투여 경로에 의존적이다. 임의의 잘 알려져 있는 기술, 담체 및 부형제를 적합하며 예를 들어 Remington's Pharmaceutical Sciences 에서와 같이 당업계에서 이해되는 바로서 사용할 수 있다. 본원에 공개된 약?e 조성물은 당업계에 알려져 있는 임의의 방식, 예를 들어 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당제-제조, 가루화, 유화, 캡슐화, 포괄법 또는 압축 방법에 의해 제조될 수 있다.
제형은 경구, 비경구 (피하, 피내, 근육내, 정맥내, 관절내, 지방질내 (intraadiposal), 동맥내, 두개내, 병변내, 비강, 안내, 심막내, 복강내, 흉부내, 전립선내, 직장내, 경막내, 기관내, 종양내, 탯줄내, 질내, 방광내, 유리체내, 및 골수내 포함), 복강내, 직장, 국부 (피부, 구강, 설하, 질, 직장, 비강, 귀, 및 안구내를 제한 없이 포함), 국소, 점막, 설하, 피하, 경점막, 경피, 볼 (transbuccal), 경피, 및 질; 리포솜, 크림 내, 지질 조성물 내, 카테터를 통해, 세척 (lavage) 을 통해, 연속 주입을 통해, 주입을 통해, 흡입을 통해, 주사를 통해, 국소 전달을 통해, 국소화된 관류를 통해, 표적 세포의 직접 배싱 (bathing), 또는 그들의 조합에 적합한 것들을 포함한다. 하지만 가장 적합한 투여 경로는 예를 들어 수용자의 상태 및 장애에 의존적일 수 있다. 상기 제형은 편리하게 단위 투여 형태로 존재할 수 있으며 약학 업계에서 잘 알려져 있는 임의의 방법으로 제조될 수 있다. 통상, 이들 방법은 본원에 공개된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 아미드, 전구약물 또는 용매화물 ("활성 성분") 을 하나 이상의 부속 성분을 구성하는 담체와 조합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 상기 활성 성분을 액체 담체 또는 미세 분쇄된 고체 담체 또는 둘 모두와 균일하고 직접적으로 조합시킨 후, 필요시, 산물을 원하는 제형으로 성형함으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 본원에 공개된 화합물의 제형은 개별 단위, 예컨대 경질 또는 연질 캡슐, 웨이퍼 (wafer), 카셰 (cachet) 또는 정제 (각각 소정량의 활성 성분 함유) 로서; 분말 또는 과립으로서; 시럽, 엘릭시르 (elixir), 용액, 또는 수성 액체 또는 비수성 액체 중 현탁물으로서; 또는 수중유 액체 유액, 유중수 액체 유액, 또는 리포솜에 분산된 화합물로서 존재할 수 있다. 상기 활성 성분은 또한 볼루스, 연약 또는 페이스트로서 존재할 수 있다.
경구 사용할 수 있는 약학 제제는 정제, 젤라틴으로 제조한 끼워 맞춤형 (push-fit) 캡슐 뿐 아니라 젤라틴 및 가소제, 예컨대 글리세롤 또는 소르비톨로 제조한 연질, 밀폐형 캡슐을 포함한다. 정제는 임의로는 하나 이상의 부속 성분과 함께, 압축 또는 성형으로 제조될 수 있다. 압축 정제는 임의로는 결합제, 불활성 희석제 또는 윤활제, 표면 활성제 또는 분산제와 혼합된 분말 또는 과립과 같은 자유 유동 형태로 활성 성분을 적합한 기계에서 압축하여 제조될 수 있다. 주형정은 불활성 액체 희석제로 습윤된 분말 화합물의 혼합물을 적합한 기계에서 성형하여 제조될 수 있다. 정제는 임의로는 코팅되거나 금이 새겨질 수 있으며, 그 안의 활성 성분의 연기, 둔화, 또는 조절되는 방출 또는 흡수를 제공하도록 제형화될 수 있다. 조성물은 가용성 또는 분산성을 향상시키는 작용제를 추가로 포함할 수 있다. 모든 경구 투여용 제형은 이러한 투여에 적합한 투여량이어야 한다. 상기 끼워 맞춤형 캡슐은 충전제, 예컨대 락토오스, 결합제, 예컨대 전분 및/또는 윤활제, 예컨대 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트 및 임의로는 안정화제와의 혼합물로 활성 성분을 함유할 수 있다. 연질 캡슐에서, 활성 화합물은 적합한 액체, 예컨대 지방 오일, 액체 파라판 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해되거나 현탁될 수 있다. 또한, 안정화제를 추가할 수 있다. 당제 코어가 적합한 코팅으로 제공된다. 이러한 목적을 위해, 농축 당 용액이 사용될 수 있으며, 이는 임의로는 아라비아 검, 탈크, 폴리비닐 피롤리돈, 카르보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 이산화티탄, 래커 (lacquer) 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 함유할 수 있다. 활성 화합물 투여량의 상이한 조합을 분석하고 확인하기 위해 염료 또는 안료를 정제 또는 당제 코팅에 추가할 수 있다.
투여 경로에 따라, 화합물, 또는 이의 과립 또는 입자는 재료 내에 코팅되어 화합물을 산의 작용 및 화합물을 불활성화시킬 수 있는 기타 자연적 조건으로부터 보호할 수 있다.
화합물은 신체 또는 질환 또는 부상 자리로의 주사, 예를 들어 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의한 비경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 주사용 제형은 단위 투여 형태로, 예를 들어 앰플 또는 다투여량 용기 (보존제가 추가됨) 로 존재할 수 있다. 상기 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁물, 용액 또는 유액과 같은 형태를 취할 수 있으며, 제형제, 예컨대 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 제형은 단위-투여량 또는 다투여량 용기, 예를 들어 밀봉 앰플 및 바이알로 존재할 수 있으며, 사용 직전 단지 멸균 액체 담체, 예를 들어 염수 또는 멸균 발열원-불포함 수의 추가만을 필요로 하는 냉동 건조 (동결 건조) 상태 또는 분말 형태로 보관될 수 있다. 즉석 주사액 및 현탁물은 이전에 기재된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
비경구 투여용 제형은 산화방지제, 완충제, 세균발육억제제 및 의도된 수용자의 혈액과 등장성인 제형을 제공하는 용질을 함유할 수 있는 활성 화합물의 수성 및 비수성 (유성) 멸균 주사액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁물을 포함한다. 적합한 친유성 용매 또는 비히클은 지방 오일, 예컨대 참깨 오일, 또는 합성 지방산 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 또는 트리글리세리드, 또는 리포솜을 포함한다. 수성 주사 현탁물은 현탁물의 점도를 증가시키는 물질, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨 또는 덱스트란을 함유할 수 있다. 임의로는, 현탁물은 또한 적합한 안정화제 또는 화합물의 용해도를 증가시켜 고도로 농축된 용액이 제조될 수 있게 하는 작용제를 함유할 수 있다. 비경구 이외의 투여에 의해 치료 화합을 투여하기 위해, 화합물을 그것의 불활성화를 방지하는 재료로 코팅하거나, 화합물을 상기 재료와 함께 동시-투여하는 것이 필수적일 수 있다 (예를 들어, 리포솜 제형을 통해).
이전에 기재한 제형에 추가로, 상기 화합물은 또한 데포 (depot) 제제로서 제형화될 수 있다. 이러한 장기간 작용 제형은 이식 (예를 들어, 피하 또는 근육내) 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다. 따라서 예를 들어, 화합물은 적합한 중합체 또는 소수성 물질 (예를 들어, 허용가능한 오일 중의 유액으로서) 또는 이온 교환 수지로, 또는 약간 가용성인 유도체, 예를 들어 약간 가용성인 염으로서 제형화될 수 있다.
구강 또는 설하 투여용으로, 조성물은 정제, 로젠지, 캔디 (pastille), 또는 통상적 방식으로 제형화된 겔의 형태를 취할 수 있다. 이러한 조성물은 수크로오스 및 아카시아 또는 트라가칸트와 같은 풍미 기반의 활성 성분을 포함할 수 있다.
상기 화합물은 또한, 예를 들어 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 또는 다른 글리세리드와 같은 종래의 좌제 베이스를 함유하는 좌제 또는 정체 관장과 같은 직장 조성물로 제형화될 수 있다.
본원에 공개된 특정 화합물은 국소적으로, 즉 비-전신 투여로 투여될 수 있다. 이는 본원에 공개된 화합물의 상피 또는 구강에 대한 외부 적용 및 이러한 화합물의 눈, 귀 및 코 내로의 점적 주입을 포함하여, 상기 화합물이 혈류에 크게 들어가지 않게 한다. 반대로, 전신 투여는 경구, 정맥내, 복강내 및 근육내 투여를 지칭한다.
국소 투여에 적합한 제형은 피부를 통해 염증 부위에 침투시키기에 적합한 액체 또는 반액체 제제, 예컨대 겔, 리니먼트제, 로션, 크림, 연고 또는 페이스트, 및 눈, 귀 또는 코에 투여하기에 적합한 점적을 포함한다. 국소 투여용 활성 성분은, 예를 들어 0.001% 내지 10% w/w (중량 기준) 의 제형을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 활성 성분은 10% w/w 만큼을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 이는 5% w/w 미만을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 활성 성분은 2% w/w 내지 5% w/w 을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 이는 0.1% w/w 내지 1% w/w 의 제형을 포함할 수 있다.
본원에 공개된 국소 안구, 귀, 및 경비 제형은 활성 성분에 더하여 부형제를 포함할 수 있다. 그러한 제형에서 흔히 사용되는 부형제는 장성제 (tonicity agent), 보존제, 킬레이트제, 완충제, 및 계면활성제를 포함하나 그에 제한되지 않는다. 기타 부형제는 가용화제, 안정화제, 편안함-향상제 (comfort-enhancing agent), 중합체, 에몰리언트, pH-조정제 및/또는 윤활제를 포함한다. 물, 물과 물-혼화성 용매, 예컨대 C1-C7-알칸올의 혼합물, 0.5 내지 5% 비-독성 수용성 중합체를 포함하는 식물 오일 또는 광물 오일, 자연 산물, 예컨대 알기네이트, 펙틴, 트라가칸트, 카라야 검, 구아 검, 잔탄 검, 카라기난, 아가 및 아카시아, 전분 유도체, 예컨대 전분 아세테이트 및 히드록시프로필 전분, 및 또한 기타 합성 산물, 예컨대 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 메틸 에테르, 폴리에틸렌 옥시드, 바람직하게는 가교된 폴리아크릴산 및 이들 산물의 혼합물을 포함하는 여러 가지 부형제 중 임의의 것이 본원에 공개된 제형에서 사용될 수 있다. 부형제의 농도는 전형적으로 활성 성분의 농도의 1 내지 100,000 배이다. 바람직한 구현예에서, 제형에 포함되는 부형제는 전형적으로 제형의 활성 구성 성분에 대한 이의 불활성 때문에 선택된다.
안구, 귀, 및 경비 제형에 관하여, 적합한 장성-조정제는 만니톨, 소듐 클로라이드, 글리세린, 소르비톨 등을 포함하나 그에 제한되지 않는다. 적합한 완충제는 포스페이트, 보레이트, 아세테이트 등을 포함하나 그에 제한되지 않는다. 적합한 계면활성제는 이온성 및 비이온성 계면활성제 (비이온성 계면활성제가 바람직함), RLM 100, POE 20 세틸스테아릴 에테르, 예컨대 Procol® CS20 및 폴록사머, 예컨대 Pluronic® F68 을 포함하나 그에 제한되지 않는다.
본원에 제시된 제형은 하나 이상의 보존제를 포함할 수 있다. 그러한 보존제의 예는 p-히드록시벤조산 에스테르, 소듐 퍼보레이트, 소듐 클로라이트, 알코올, 예컨대 클로로부탄올, 벤질 알코올 또는 페닐 에탄올, 구아니딘 유도체, 예컨대 폴리헥사메틸렌 비구아니드, 소듐 퍼보레이트, 폴리콰테르늄-1, 아미노 알코올, 예컨대 AMP-95, 또는 소르브산을 포함한다. 특정 구현예에서, 제형은 자가-보존되어 보존제가 요구되지 않을 수 있다.
특정 국부 구현예에서, 제형을 pH 약 4.5 내지 pH 약 8 에서 유지하는 완충 시스템을 사용하여 제형이 제조된다. 추가의 구현예에서, pH 는 7 내지 8 이다.
국소 또는 경피 투여용 겔은, 일반적으로, 휘발성 용매, 비휘발성 용매, 및 물의 혼합물을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 완충되는 용매 시스템의 휘발성 용매 성분은 저급 (C1-C6) 알킬 알코올, 저급 알킬 글리콜 및 저급 글리콜 중합체를 포함할 수 있다. 추가의 구현예에서, 휘발성 용매는 에탄올이다. 휘발성 용매 성분은 투과 향상제로서 작용하는 한편, 또한 그것이 증발하면서 피부에 냉각 효과를 제공하는 것으로 여겨진다. 완충되는 용매 시스템의 비휘발성 용매 부분은 저급 알킬렌 글리콜 및 저급 글리콜 중합체로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 프로필렌 글리콜이 사용된다. 비휘발성 용매는 휘발성 용매의 증발을 둔화시키고 완충되는 용매 시스템의 증기압을 감소시킨다. 이러한 비휘발성 용매 성분의 양은, 휘발성 용매의 경우처럼, 사용되는 약학 화합물 또는 약물에 의해 결정된다. 너무 적은 비휘발성 용매가 시스템에 존재할 때, 휘발성 용매의 증발로 인해 약학 화합물이 결정화할 수 있으며, 한편 과잉량은 용매 혼합물로부터의 약물의 불량한 방출로 인해 생체이용률의 결여를 초래할 수 있다. 완충되는 용매 시스템의 완충제 성분은 당업계에서 통상적으로 사용되는 임의의 완충제로부터 선택될 수 있다; 특정 구현예에서, 물이 사용된다. 통상적인 성분비는 약 20% 의 비휘발성 용매, 약 40% 의 휘발성 용매, 및 약 40% 의 물이다. 여러 임의적인 성분들이 국소 조성물에 첨가될 수 있다. 이들은 킬레이트제 및 겔화제를 포함하나 그에 제한되지 않는다. 적당한 겔화제는 반합성 셀룰로스 유도체 (예컨대, 히드록시프로필메틸셀룰로스) 및 합성 중합체, 갈락토만난 중합체 (예컨대, 구아 및 이의 유도체), 및 미용제 (cosmetic agent) 를 포함할 수 있으나 그에 제한되지 않는다.
로션은 피부 또는 눈에 대한 적용에 적합한 것을 포함한다. 눈 로션은 살균제를 임의로 함유하는 멸균 수용액을 포함할 수 있고, 점적약제의 제조를 위한 것과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다. 피부에 대한 적용을 위한 로션 또는 리니먼트제는 건조를 촉진하고 피부를 냉각시키는 작용제, 예컨대 알코올 또는 아세톤, 및/또는 보습제, 예컨대 글리세롤 또는 오일, 예컨대 피마지유 또는 땅콩기름을 또한 포함할 수 있다.
크림, 연고 또는 페이스트는 외부 적용을 위한 활성 성분의 반고체 제형이다. 그들은 미분된 또는 분말화된 형태의 활성 성분을, 단독으로 또는 수성 또는 비-수성 유체 중 용액 또는 현탁물 중에, 적합한 기계류의 도움으로, 지성 또는 비-지성 베이스와 함께 혼합함으로써 제조될 수 있다. 베이스는 탄화수소, 예컨대 경질, 연질 또는 액체 파라핀, 글리세롤, 밀랍, 금속 비누; 점액; 자연 기원의 오일, 예컨대 아몬드, 옥수수, 땅콩, 피마자 또는 올리브 오일; 양모지 또는 그것의 유도체 또는 지방산, 예컨대 스테아르 또는 올레산을 알코올, 예컨대 프로필렌 글리콜 또는 마크로겔과 함께 포함할 수 있다. 제형은 임의의 적합한 표면 활성제, 예컨대 음이온성, 양이온성 또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 소르비탄 에스테르 또는 이의 폴리옥시에틸렌 유도체를 포함할 수 있다. 현탁화제, 예컨대 천연 검, 셀룰로스 유도체 또는 무기 재료, 예컨대 규산질 실리카, 및 기타 성분, 예컨대 라놀린이 또한 포함될 수 있다.
점적약제는 멸균 수성 또는 오일성 용액 또는 현탁물을 포함할 수 있고, 활성 성분을 살균 및/또는 진균제 및/또는 임의의 기타 적합한 보존제 (및, 특정 구현예에서, 표면 활성제를 포함) 의 적합한 수용액에 용해시켜 제조될 수 있다. 결과적인 용액은 그 후 여과에 의해 정화되고, 적합한 용기에 옮겨질 수 있고, 이것이 그 후 밀봉되고 고압살균에 의해 또는 98-100℃ 에서 반시간 동안 유지하여 멸균된다. 대안적으로, 용액은 여과에 의해 멸균되고 무균 기술에 의해 용기에 옮겨질 수 있다. 점적약제에 포함시키기에 적합한 살균 및 진균제의 예는 페닐머큐릭 니트레이트 또는 아세테이트 (0.002%), 벤즈알코늄 클로라이드 (0.01%) 및 클로르헥시딘 아세테이트 (0.01%) 이다. 오일성 용액의 제조에 적합한 용매는 글리세롤, 희석된 알코올 및 프로필렌 글리콜을 포함한다.
입에, 예를 들어 볼에 또는 설하에 국소 투여하기 위한 제형은 활성 성분을 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트와 같은 가향 기반에 포함하는 로젠지, 및 활성 성분을 겔라틴 및 글리세린 또는 수크로스 및 아카시아와 같은 기반에 포함하는 향정을 포함한다.
흡입 투여용으로, 화합물은 취입기, 네블라이져 가압 팩 또는 에어로졸 분무의 다른 통상의 전달 수단으로부터 편리하게 전달될 수 있다. 가압 팩은 적합한 추진제, 예컨대 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 기타 적합한 기체를 포함할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투여 단위는 밸브를 제공하여 계량된 양을 전달함으로써 결정될 수 있다. 대안적으로는, 흡입 또는 취입 투여용으로, 본 발명에 따른 화합물은 건조 분말 조성물, 예를 들어 락토오스 또는 전분과 같은 적합한 파우더 베이스 및 화합물의 파우더 믹스의 형태를 취할 수 있다. 분말 조성물은 단위 투여 형태, 예를 들어 캡슐, 카트리지, 젤라틴 또는 블리스터 팩 (분말이 흡입기 또는 취입기에 의해 투여될 수 있음) 으로 존재할 수 있다.
치료적 화합물은 또한 척수내에 또는 대뇌내에 투여될 수 있다. 이들 유형의 투여를 위한 분산물은 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 그들의 혼합물 중에 및 오일 중에 제조될 수 있다. 보통의 저장 및 사용 조건 하에, 이들 제제는 미생물의 성장을 방지하는 보존제를 함유할 수 있다.
주사 용도에 적합한 약학 조성물은 멸균 수용액 (수용성인 경우에) 또는 분산물 및 멸균 주사용 용액 또는 분산물의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 모든 경우에, 조성물은 멸균되어야 하고, 용이한 주사가능성이 존재할 정도로 유체여야 한다. 조성물은 제조 및 저장 조건 하에 안정적이어야 하고, 미생물, 예컨대 세균 및 진균의 오염 작용에 대항하여 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이의 적합한 혼합물, 및 식물 오일을 함유하는 용매 또는 분산매일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산물의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 방지는 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에, 등장화제, 예를 들어 당, 소듐 클로라이드, 또는 폴리알코올, 예컨대 만니톨 및 소르비톨을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 것이다.
멸균 주사용 용액은 요구되는 양의 치료적 화합물을 필요에 따라 위에 열거된 성분들 중 하나 또는 이의 조합과 함께 적당한 용매에 혼입시키고, 그에 뒤이어 여과 멸균하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산물은 기본 분산매 및 약리학적으로 안전한 요구되는 기타 성분을 함유하는 멸균 담체 내로 치료적 화합물을 혼입시켜 제조된다. 멸균 주사용 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조이며, 이들은 활성 성분 (즉, 치료적 화합물) 및 이의 이전에 멸균 여과된 용액으로부터의 임의의 부가적 요망되는 성분의 분말을 초래한다.
투여 용이성 및 투여 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용되는 투여 단위 형태는 치료될 대상을 위한 단위 투여물로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭한다; 각각의 단위는 요구되는 약학 담체와 연합하여 요망되는 치료적 효과를 제공하도록 계산된 미리결정된 양의 치료적 화합물을 함유한다. 발명의 투여 단위 형태에 관한 세부사항은 (a) 치료적 화합물의 독특한 특성 및 달성될 특별한 치료적 효과, 및 (b) 환자에서 선택된 상태의 치료를 위해 그러한 치료적 화합물을 배합하는 기술에 내재하는 제한에 의해 지시되고 그에 직접 의존적이다.
특히 상기 언급한 성분에 추가로, 상기 기재한 제형은 의문의 제형 유형에 관해 당업계에서 통상적인 다른 작용제를 포함할 수 있으며, 예를 들어 경구 투여용으로 적합한 작용제는 향미제를 포함할 수 있다는 것이 이해되어야 한다.
화합물은 1 일 0.1 내지 500 mg/kg 의 투여량으로 투여될 수 있다. 성인에 대한 투여량 범위는 일반적으로 1 일 5 mg 내지 2 g 이다. 별개 단위로 제공되는 정제 또는 다른 제시 형태는 이러한 투여량에서, 또는 이의 복수로서, 예를 들어 5 mg 내지 500 mg, 통상 약 10 mg 내지 200 mg 을 함유하는 단위로서 유효한 하나 이상의 화합물의 양을 편리하게 함유할 수 있다.
바람직한 단위 투여 제형은, 본원에서 아래 언급된 바와 같은, 활성 성분의 유효 투여량, 또는 이의 적당한 분량을 함유하는 것이다. 특정 구현예에서, 본원에 공개된 제형은 1 일 1 회 투여된다. 그러나, 제형은 또한 1 주 1 회, 매 5 일 마다 1 회, 매 3 일 마다 1 회, 매 2 일 마다 1 회, 1 일 2 회, 1 일 3 회, 1 일 4 회, 1 일 5 회, 1 일 6 회, 1 일 8 회, 매 시간, 또는 임의의 더 잦은 빈도를 포함하는, 임의의 투여 빈도의 투여를 위해 제형화될 수 있다. 그러한 투여 빈도는 또한 치료 섭생법에 따라 다양한 지속시간 동안 유지된다. 특별한 치료 섭생법의 지속시간은 1 회 투여에서부터 수개월 또는 수년 동안 연장되는 섭생법까지 다양할 수 있다. 제형은 다양한 투여량으로 투여되나, 전형적인 투여량은 각각의 투여시 1 내지 2 개의 점적약제, 또는 비슷한 양의 겔 또는 기타 제형이다. 통상의 기술자는 특정 증상에 관한 치료 섭생법을 결정하는데 익숙할 것이다.
담체 물질과 조합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성 성분 양은 치료 숙주 및 특정 투여 방법에 따라 가변적일 것이다. 유사하게, 환자에게 투여되는 화합물의 정확한 양은 수행 의사의 책임일 것이다. 임의의 특정 환자에 대한 특이적인 투여량 수준은 사용한 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반 건강 사항, 성별, 식이, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도, 약물 조합, 치료하는 정확한 장애, 및 치료하는 징후 또는 상태의 중증도를 포함하는 다양한 인자에 의존적일 것이다. 또한, 투여 경로는 상태 및 이의 중증도에 따라 가변적일수 있다.
특정한 경우, 본원에 기재된 하나 이상의 화합물 (또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물) 을 또다른 치료제와 조합으로 투여하는 것이 적절할 수 있다. 단지 예를 들어, 환자가 본원의 화합물 중 하나를 투여받았을 때 경험한 부작용 중 하나가 염증인 경우, 초기 치료제와 조합으로 소염제를 투여하는 것이 적절할 수 있다. 대안적으로, 단지 예를 들어, 본원에 기재된 화합물 중 하나의 치료 효과는 보조제의 투여에 의해 증강될 수 있다 (즉, 그것만으로 상기 보조제는 단지 최소의 치료 유익을 가질 수 있으나, 또다른 치료제와의 조합으로는, 환자에 대한 전체 치료 유익이 증강됨). 2 가지 화합물의 가능성이 있으며, 화합물 중 하나는 본원에 기재된 것이고 두번째 화합물은 단독으로는 달성할 수 없는 요망되는 치료 효과를 함께 달성할 수 있다. 대안적으로, 단지 예를 들어, 환자가 경험한 유익은 본원에 기재된 화합물 중 하나를 치료 유익을 또한 갖는 또다른 치료제 (치료 섭생법을 또한 포함함) 와 함께 투여하여 증가될 수 있다. 단지 예를 들어, 본원에 기재된 화합물 중 하나를 투여하는 것을 포함하는 급성 골수성 백혈병 또는 겸상 적혈구 빈혈의 치료에 있어서, 환자에게 급성 골수성 백혈병 또는 겸상 적혈구 빈혈을 위한 또다른 치료제를 또한 제공함으로써 치료 유익이 증가될 수 있다. 임의의 경우, 치료하는 질환, 장애 또는 상태에 관계없이, 환자가 경험하는 전체 유익은 단순히 2 가지 치료제의 부가인 것일 수 있거나, 2 가지 작용제는 환자에서 상승작용적 치료 효과를 가질 수 있다.
효과적인 조합 요법은 작용제 둘 모두를 포함하는 단일 조성물 또는 약리학적 제형으로 달성될 수 있으며, 또는 2 개의 구별되는 조성물 또는 제형으로, 동시에 달성될 수 있으며, 이 경우에 하나의 조성물은 본 공개의 화합물을 포함하고, 다른 조성물은 두번째 작용제(들)을 포함한다. 대안적으로, 요법은 수 분 내지 수 개월 범위의 간격으로 다른 작용제 처리에 선행 또는 후행할 수 있다. 본 공개의 화합물의 환자에게의 투여는, 만약에 있다면, 약물의 독성을 고려하여, 약제 투여에 관한 일반적인 프로토콜을 따를 것이다. 필요에 따라 처리 주기가 반복될 것이라고 예상된다.
가능한 조합 요법의 구체적인 비제한적 예는 다음 작용제 및 작용제 클래스와 함께 발명의 특정 화합물의 사용을 포함한다: DNA 메틸트랜스퍼라제의 저해제, 예컨대 데시타빈 또는 5'-아자-시타딘; 히스톤 데아세틸라제, 히스톤 데-수모일라제, 히스톤 데-유비퀴티나제, 또는 히스톤 포스파타제의 활성의 저해제, 예컨대 히드록시우레아; 감마 글로빈 프로모터 내의 DR 자리에 결합된 단백질 복합체의 기타 성분의 발현을 저해할 수 있는 안티센스 RNA; Klf1 의 작용 또는 KLF1 의 발현의 저해제; Bcl11a 의 작용 또는 BCL11A 의 발현의 저해제; 및 세포 주기 진행의 저해제, 예컨대 히드록시우레아, ara-C 또는 다우노루비신; 백혈병 세포에서의 분화 유도제, 예컨대 올-트랜스 레틴산 (ATRA).
따라서, 또다른 양상에서, 본 발명은 질환 또는 장애의 치료 방법으로서 그러한 치료를 필요로 하는 인간 또는 동물 대상에서 임의로는 기술분야에 알려진 상기 장애의 치료를 위한 적어도 하나의 부가적 작용제와의 조합으로 대상에서 상기 장애를 감소 또는 예방하는데 효과적인 양의 본원에 공개된 화합물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
단일요법으로서 또는 기타 작용제와의 조합으로 사용될 때, 본원에 공개된 화합물은 베타-혈색소병증, 예컨대 중증성 지중해빈혈, 겸상적혈구병, 헤모글로빈 E/지중해빈혈, 및 중간성 지중해빈혈의 예방 및/또는 치료에 유용하다.
본원에 공개된 화합물은 후생적 조절 인자의 조작, 예컨대 KDM1A 의 저해를 통한 전사 증가가 환자에게 유익할 질환의 치료에서 사용될 수 있다. 이는 기능 돌연변이 (이에 제한되는 것은 아니나 반수체기능부전 (haploinsufficiency) 을 초래하는 돌연변이) 의 상실, 유전 물질의 결실 및 중복 또는 후생적 조절 메카니즘이 유전자 산물 (들) 의 투여량 변경 효과를 갖는 유전자 또는 유전자들의 정상적 발현 패턴을 변경한 질환에 적용된다. 그러한 질환은, 예를 들어 면역 기능에 영향을 미치는 사이토카인의 발현이 변경되는 질환 (후천성 및 유전성 질환 둘 모두), X-연관 정신 지체 및 기타 형태의 저하된 인지 또는 운동 기능, 예컨대 알츠하이머 및 파키슨 질환 (후천성 또는 유전성 형태 여부와 무관함), 지질 장애, 예컨대 상승된 콜레스테롤, 저밀도 지질단백질, 초저밀도 지질단백질 또는 트리글리세리드, 제 1 형 당뇨병 및 제 2 형 당뇨병 둘 모두, 및 멘델의 유전 질환을 포함할 수 있다.
본원에 공개된 화합물에 의해 유리하게 치료될 수 있는 기타 장애 또는 상태는 염증 및 염증성 상태를 포함한다. 염증성 상태는 하기를 제한 없이 포함한다: 하위 유형 및 관련 상태, 예컨대 류마티스 관절염, 척추 관절 병증, 통풍성 관절염, 골관절염, 전신 홍반성 루푸스, 소아 관절염, 급성 류마티스성 관절염, 장병증성 관절염, 신경병증성 관절염, 건선성 관절염, 및 화농성 관절염을 포함한 관절염; 골다공증, 건염, 활액낭염, 및 기타 관련 뼈와 관절 장애; 위장관 상태, 예컨대 역류성 식도염, 설사, 염증성 장 질환, 크론 질환, 위염, 과민성 대장 증후군, 궤양성 대장염, 췌장의 급성 및 만성 염증; 폐 염증, 예컨대 바이러스성 감염 및 낭포성 섬유증과 관련된 것; 피부 관련 상태, 예컨대 건선, 습진, 화상, 일광 화상, 피부염 (예컨대, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 및 알레르기성 피부염), 및 두드러기; 췌장염, 간염, 가려움증 및 백반증. 게다가, 발명의 화합물은 또한 기관 이식 환자에서 단독으로 또는 종래의 면역조정제와의 조합으로 유용하다.
자가면역 장애는 본원에 공개된 화합물을 이용하는 치료에 의해 개선될 수 있다. 자가면역 장애는 크론 질환, 궤양성 대장염, 피부염, 피부근염, 제 1 형 당뇨병, 굿 파스처의 증후군, 그레이브스 질환, 길랑-바레 증후군 (GBS), 자가면역 뇌척수염, 하시모토 질환, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 홍반성 루푸스, 혼합 결합 조직 질환, 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증, 기면증, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 건선, 건선성 관절염, 다발성근염, 원발성 담즙성 간경변, 류마티스 관절염, 쇼그렌의 증후군, 경피증, 측두 동맥염 (또한 "거대 세포 동맥염"으로 알려짐), 혈관염 및 베게너 육아종증을 포함한다.
본원에 공개된 화합물은 또한 심한 화상, 패혈증, 외상, 상처, 및 출혈- 또는 소생술-유도 저혈압과 연관된 기관 및 조직 손상, 및 또한 혈관 질환, 편두통, 결절성 동맥주위염, 갑상선염, 재생불량성 빈혈, 호지킨 질환, 경피증, 류마티스 열, 제 I 형 당뇨병, 중증 근무력증을 포함하여 신경근 접합부 질환, 백질 질환 예를 들어 다발성 경화증, 사르코이드증, 신염, 신장 증후군, 베체트 증후군, 다발성 근염, 치은염, 치주염, 손상 후 발생하는 부종, 심근 허혈, 심장혈관 허혈 및 심장 마비에 이차적인 허혈을 포함하는 허혈 등의 치료에 유용하다.
본원에 공개된 화합물은 또한 신경계의 특정 질환 및 장애의 치료에 유용하다. KDM1A 저해가 유용한 중추 신경계 장애는 피질성 치매 예를 들어 알츠하이머 질환, 뇌졸증, 허혈 예를 들어 뇌 허혈 (국소 허혈, 혈전성 뇌졸중 및 전 허혈 둘 모두 (예를 들어, 심장 마비에 이차적인), 및 외상으로부터 초래되는 중추 신경계 손상을 포함한다. KDM1A 저해가 유용한 신경변성 장애는 장애, 예컨대 저산소증, 저혈당증, 간질, 및 중추 신경계 (CNS) 외상 (예컨대, 척수 및 두부 손상) 의 경우에, 고압 산소-유도 경련 및 독성, 치매 예를 들어, 초로성 치매, 및 AIDS-관련 치매, 악액질, 시드남 무도병, 헌팅턴의 질환, 파킨슨 질환, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 코르사코프의 질환, 뇌 혈관 장애와 관련된 인지 장애, 과민, 수면 장애, 정신 분열증, 우울증, 월경전 증후군 (PMS) 과 연관된 우울증 또는 기타 증상, 및 불안증에서의 신경 변성 또는 신경 괴사를 포함한다.
단독으로 또는 관리 표준 특히 악성 세포에서 종양 억제인자 유전자를 회복시켜 종양 성장을 표적화하는 작용제와의 조합으로 본원에 공개된 화합물에 의해 유리하게 치료되는 기타 장애 또는 상태는 과증식성 질환, 특히 암의 예방 또는 치료를 포함한다. 치료 또는 예방될 수 있는 혈액성 및 비-혈액성 악성종양은 다발성 골수종, 급성 및 만성 백혈병 및 조혈 증식성 및 신생물 장애 예를 들어 골수형성이상 증후군 (MDS), 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 및 만성 골수성 백혈병 (CML), 림프종, 예를 들어 호지킨 림프종 및 비-호지킨 림프종 (낮은, 중간, 및 높은 등급), 뿐만 아니라 뇌, 두경부, 유방, 폐 (비-소세포 폐암 포함), 생식 기관, 상부 소화관, 췌장, 간, 신장계, 방광, 전립선 및 대장의 고체 종양 및 악성 종양을 포함하나 그에 제한되지 않는다. 본 발명의 화합물 및 방법은 또한 섬유증, 예컨대 방사선 요법으로 발생하는 것을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물 및 방법은 선종성 용종을 갖는 대상, 예를 들어 가족성 선종성 용종증 (FAP) 또는 사르코이드증을 갖는 대상을 치료 또는 그 진행을 예방하는데 사용될 수 있다. 비-암 증식성 장애는 건선, 습진 및 피부염을 부가적으로 포함한다.
본 발명의 화합물은 또한 보조-요법으로, 부분적으로 또는 완전히, 기타 종래의 항-염증 요법을 대신해서, 예컨대 스테로이드, NSAID, COX-2 선택적 저해인자, 5-리폭시게나제 저해인자, LTB4 안타고니스트 및 LTA4 하이드롤라제 저해인자와 함께 사용될 수 있다. 본원에 공개된 화합물은 또한 항균 또는 항바이러스제와 치료적으로 조합될 때 조직 손상을 방지하는데 사용될 수 있다.
본원에 공개된 화합물은 또한 대사 장애의 치료에 유용하다. KDM1A 는, 플라빈 아데노신 디뉴클레오티드 (FAD) 를 보조인자로서 사용하여, 지방세포에서 세포 FAD 이용률에 따라 에너지-지출 유전자를 후생적으로 조절한다. 부가적으로, KDM1A 기능의 상실은 에너지 지출 및 미토콘드리아 대사의 다수의 조절인자를 유도하여 미토콘드리아 호흡의 활성화를 초래한다. 게다가, 고지방식을 공급받은 마우스로부터의 지방질 조직에서, KDM1A-표적 유전자의 발현이 감소된다.
대사 증후군 (또한 대사 증후군 X 로서 알려짐) 은 하기 증상 중 적어도 3 가지를 갖는 것으로 특징지어진다: 인슐린 저항성; 복부 지방 - 남성에서 이는 허리 40 인치 이상, 여성에서 35 인치 이상으로서 정의됨; 높은 혈당 수준 - 단식 후 적어도 110 밀리그램/데시리터 (mg/dL); 높은 트리글리세리드 - 혈류 중 적어도 150 mg/dL; 낮은 HDL- 40 mg/dL 미만; 부혈전 상태 (예를 들어, 혈액 중 높은 피브리노겐 또는 플라스미노겐 활성화인자 저해인자); 또는 혈압 130/85 mmHg 이상. 대사 증후군과 기타 상태, 예컨대 비만증, 높은 혈압 및 높은 수준의 LDL 콜레스테롤 (이들은 모두 심혈관 질환의 위험 인자임) 사이의 연관성이 발견되었다. 예를 들어, 대사 증후군과 죽상동맥경화증 사이의 증가된 관련성이 밝혀졌다. 대사 증후군이 있는 사람은 또한 제 2 형 당뇨병, 뿐만 아니라 여성에서 PCOS (다낭성 난소 증후군) 및 남성에서 전립선 암을 발달시키기 더 쉽다.
위에 기재된 바와 같이, 인슐린 저항성은 제 2 형 당뇨병을 포함하여 여러 방식으로 표명될 수 있다. 제 2 형 당뇨병은 인슐린 저항성과 가장 명백하게 연관되는 상태이다. 보상 과인슐린혈증은 현성 당뇨병이 발달하기 전에 수십 년간 흔히 정상적 글루코스 수준을 유지하는 것을 돕는다. 결국 췌장의 베타 세포는 분비과다를 통해 인슐린 저항성을 극복할 수 없다. 글루코스 수준은 상승하고 당뇨병의 진단이 내려질 수 있다. 제 2 형 당뇨병 환자는 질환의 진행 단계에 있기 전까지 과인슐린혈증 상태로 유지된다. 위에 기재된 바와 같이, 인슐린 저항성은 또한 고혈압과 관련이 있을 수 있다. 본태성 고혈압 환자의 절반이 인슐린 저항성 및 과인슐린혈증이고, 혈압이 인슐린 저항성의 정도와 연관된다는 증거가 존재한다. 과지질혈증이 또한 인슐린 저항성과 연관된다. 제 2 형 당뇨병 환자의 지질 프로파일은 증가된 혈청 초저밀도 지질단백질 (VLDL) 콜레스테롤 및 트리글리세리드 수준 및, 때때로, 감소된 저밀도 지질단백질 (LDL) 콜레스테롤 수준을 포함한다. 인슐린 저항성은 낮은 수준의 고밀도 지질단백질 (HDL) 을 갖는 사람에서 발견되었다. 인슐린 수준은 또한 VLDL 합성 및 혈장 트리글리세리드 수준과 연관되었다.
본원에 공개된 화합물, 조성물, 및 방법에 의해 치료되는 특정 대사 질환 및 증상은 KDM1A 에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 것이다. 따라서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물의 치료적 양을 그것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 하기를 위한 방법이 본원에 공개된다: 대상에서의 인슐린 저항성 치료; 대상에서의 글리코겐 축적 감소; 대상에서의 HDL 또는 HDLc 상승, LDL 또는 LDLc 저하, 작고 조밀함으로부터 정상적 LDL 로의 LDL 입자 크기 이동, VLDL 저하, 트리글리세리드 저하, 또는 콜레스테롤 흡수 저해; 대상에서의 인슐린 저항성 감소, 글루코스 사용 향상 또는 혈압 저하; 대상에서의 내장 지방 감소; 대상에서의 혈청 트랜스아미나제 감소; 대상에서의 미토콘드리아 호흡 유도; 또는 질환 치료. 추가의 구현예에서, 치료될 질환은 대사 질환일 수 있다. 추가의 구현예에서, 대사 질환은 하기로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다: 비만증, 당뇨병, 특히 제 2 형 당뇨병, 과인슐린혈증, 글루코스 불내성, 대사 증후군 X, 이상지질혈증, 과트리글리세리드혈증, 과콜레스테롤혈증, 및 간지방증. 다른 구현예에서, 치료될 질환은 하기로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다: 심혈관 질환 예를 들어 혈관 질환, 죽상동맥경화증, 관상동맥성 심장 질환, 뇌혈관 질환, 심부전 및 말초 혈관 질환. 바람직한 구현예에서, 상기 방법들은 저혈당 상태의 유도 또는 유지를 초래하지 않는다.
인간 치료에 유용할 뿐만 아니라, 본원에 공개된 특정 화합물 및 제형은 또한 반려 동물, 외래 동물 및 농장 동물, 예를 들어 포유류, 설치류 등의 수의과 치료에 유용할 수 있다. 더욱 바람직한 동물은 말, 개, 및 고양이를 포함한다.
방법
화합물의 제조를 위한 일반 합성 방법
하기 발명은 하기 실시예로 추가로 예시된다.
하기 및 개시물을 통틀어 실시예에서, 하기 약어가 사용될 수 있다: PTFE = 폴리테트라플루오로에틸렌; RM = 반응 혼합물; RH = 상대 습도; RT = 실온; SM = 출발 재료; MeCN = 아세토니트릴; ClPh = 클로로페놀; DCE = 디클로로에탄; DCM = 디클로로메탄; DIPE = 디-이소프로필에테르; DMA = 디메틸 아세트아미드; DMF = 디메틸 포름아미드; DMSO = 디메틸술폭시드; Et2O = 디-에틸 에테르; EtOAc = 에틸 아세테이트; EtOH = 에탄올; H2O = 물; IPA = 프로판-2-올; i-PrOAc = 이소-프로필 아세테이트; MEK = 메틸 에틸 케톤; MeOH = 메탄올; MIBK = 메틸 이소부틸 케톤; MTBE = 메틸 tert-부틸 에테르; n-BuOAc = n-부틸 아세테이트; n-BuOH = n-부탄올; NMP = n-메틸 피롤리돈; n-PrOH = n-프로판올; s-BuOAc = s-부틸 아세테이트; t-BuOH = t-부탄올; TFA = 트리-플루오로 아세트산; THF = 테트라히드로푸란; TMP = 2,2,4-트리메틸펜탄; 1H-NMR = 양성자 핵 자기 공명; DSC = 시차 주사 열량측정법; DVS = 역동적 증기 흡수; GVS = 중량측정적 증기 흡수; HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피; HS = 헤드 스페이스; HSM = 뜨거운 정도 검경; IC = 이온 크로마토그래피; IDR = 고유 용해율; KF = 칼-피셔; MAS = 매직각 스핀닝; MDSC = 조절된 시차 주사 열량측정법; PLM = 편광된 광학 현미경법; PVM = 입자 투시 및 측정; SCXRD = 단결정 X-선 회절; SS-NMR = 고체 상태 핵 자기 공명; TGA = 열적 중량측정 분석; UV = 자외선; VH-XRPD = 가변 습도 X-선 분말 회절; VT-XRPD = 가변 온도 X-선 분말 회절; 및 XRPD = X-선 분말 회절. 기타 약어가 사용될 수 있고, 맥락상 통상의 기술자에 친숙할 것이다.
실시예 1
반응식 1
Figure pct00066
1 의 합성
4-(1H-1,2,3-트리아졸릴-1-일)벤조일 클로라이드 (201) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 티오닐 클로라이드 (20 mL) 중의 4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조산 (1.2 g, 6.34 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 수합하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 80℃ 에서 교반한 후, 진공 하에 농축시켜 1.2 g (78%) 의 생성물 (이의 히드로클로라이드 염으로서) 을 황백색 고체로서 수득하였다.
1-(4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조일-2-카르보메톡시 아지리딘 (203) 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 CH2Cl2 (80 mL) 중의 메틸 아지리딘-2-카르복실레이트 (1 g, 9.89 mmol, 1.00 equiv) 의 용액 및 Et3N (3 g, 29.65 mmol, 3.00 equiv) 을 첨가한 후, CH2Cl2 (20 mL) 중의 4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조일 클로라이드 (2.3 g, 11.08 mmol, 1.12 equiv) 의 용액을 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 25℃ 에서 교반한 후, 1x50 mL 의 물 및 1x50 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:3) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다 상기는 2.5 g (93%) 의 생성물을 백색 고체로서 유도하였다.
메틸 3-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-2-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]프로파노에이트 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계에서 생성된 화합물 (1.5 g, 5.51 mmol, 1.00 equiv), CH3CN (20 mL), (1S,2R)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 히드로클로라이드 (2.6 g, 13.86 mmol, 2.50 equiv) 및 Et3N (1.4 g, 13.84 mmol, 2.48 equiv) 을 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 80℃ 에서 오일 배쓰에서 교반한 후, 50 mL 의 EtOAc 로 희석하고, 1x30 mL 의 물 및 1x30 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (2:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하여 1 g (43%) 의 PH-IMA-2013-003-362-11 을 황백색 고체로서 수득하였다.
메틸 3-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](tert-부톡시카르보닐)아미노]-2-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]프로파노에이트 (204) 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계에서 생성된 화합물 (1 g, 2.36 mmol, 1.00 equiv), CH2Cl2 (20 mL), Et3N (500 mg, 4.94 mmol, 2.09 equiv) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (780 mg, 3.57 mmol, 1.51 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 1x30 mL 의 물 및 1x30 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:2) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하여 600 mg (49%) 의 PH-IMA-2013-003-362-12 를 백색 고체로서 수득하였다.
3-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](tert-부톡시카르보닐)아미노]-2-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]프로판산 (205) 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 THF (25 mL) 중의 이전 단계에서 생성된 화합물 (600 mg, 1.15 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 첨가한 후, 물 (6 mL) 중의 LiOH (41 mg, 1.71 mmol, 1.49 equiv) 를 첨가하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 HCl (2 M) 을 사용해 5 로 조정하였다. 수득한 용액을 2x30 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 1x30 mL 의 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 580 mg (99%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
N-[3-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](tert-부톡시카르보닐)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소프로판-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (206) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (580 mg, 1.14 mmol, 1.00 equiv), THF (40 mL), 및 3-(디에톡시포스포릴옥시)-1,2,3-벤조트리아진-4(3H)-온 ("DEPBT") (530 mg, 1.77 mmol, 1.56 equiv) 을 수합한 후, 0℃ 에서 이미다졸 (120 mg, 1.76 mmol, 1.55 equiv) 을 첨가하였다. 혼합물을 40 min 동안 교반하였다. 상기에 THF (10 mL) 중의 1-메틸피페라진 (180 mg, 1.80 mmol, 1.58 equiv) 의 용액을 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반하고, 50 mL 의 EtOAc 로 희석한 후, 1x50 mL 의 sat.NaHCO3 및 1x50 mL 의 염수로 세정하였다. 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 600 mg (89%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
N-[3-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소프로판-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (1) 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (600 mg, 1.01 mmol, 1.00 equiv), CH2Cl2 (20 mL) 및 CF3COOH (4 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 sat. NaHCO3 을 사용해 9 로 조정하였다. 수득한 용액을 3x30 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 1x50 mL 의 염수로 세정하였다. 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제물 (5 mL) 을 Prep-HPLC 로 하기 조건 하에 정제하였다 (2#-AnalyseHPLC-SHIMADZU(HPLC-10)): 컬럼, XBridge C18 OBD Prep Column, 100? 10 μm, 19 mm X 250 mm; 이동상, 물 (10MMOL/L NH4HCO3) 및 ACN--물 (20.0% ACN--물 60.0% 까지 (6 min 내에)); 검출기, uv 254/220nm. 150 mL 생성물을 수득하였다. 상기는 330 mg (66%) 의 1 을 백색 고체로서 유도하였다.
실시예 4
반응식 2
Figure pct00067
4 의 합성
4-페닐벤조일 클로라이드 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 4-페닐벤조산 (15 g, 75.67 mmol, 1.00 equiv) 및 티오닐 클로라이드 (30 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 80℃ 에서 오일 배쓰에서 교반한 후, 진공 하에 농축시켜 15 g (91%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(2S)-2-[(4-(페닐)페닐)포름아미도]-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]부탄산 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-아미노-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]부탄산 (6.8 g, 19.02 mmol, 1.00 equiv) 및 4-페닐벤조일 클로라이드 (5 g, 23.08 mmol, 1.20 equiv) 를 가지고서 사용해 8 g (78%) 의 PH-IMA-2013-003-174-2 를 황색 오일로서 수득하였다.
N-[1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소-4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-부탄-2-일]-4-페닐벤즈아미드 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (5 g, 9.29 mmol, 1.00 equiv) 및 티오모르폴린-1,1-디옥시드 히드로클로라이드 (2.4 g, 13.98 mmol, 1.50 equiv) 를 가지고서 사용해 5 g (83.3%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[4-(페닐)페닐)포름아미도]-1-부탄올 (207) 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (22 g, 33.59 mmol, 1.00 equiv) 및 THF (150 ml) 를 수합하였다. Bu4NF (66 mL, 66 mmol, THF 중 1.0 M) 를 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반하고, 진공 하에 농축시키고, 100 mL 의 EtOAc 로 희석하고, 4x100 mL 의 물 및 2x100 mL 의 염수로 세정하였다. 수합한 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, EtOAc 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 10 g (71%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[4-(페닐)페닐)포름아미도]-1-부타날 (208) 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 500-mL 플라스크 내에서 CH2Cl2 (250 ml) 중의 이전 단계에서 생성된 화합물 (10 g, 24.01 mmol, 1.00 equiv) 을 수합하였다. 상기 이후 Dess-Martin 퍼요오디난 (20.4 g, 48.11 mmol, 2.00 equiv) 을 0℃ 에서 부분 첨가하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 25℃ 에서 교반한 후, 규조토 상에서 여과해내고, 감압 하에 농축시키고, 30 mL CH2Cl2 로 희석하고, EtOAc/석유 에테르 (1:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 9 g (90%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-4-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소부탄-2-일]-4-페닐벤즈아미드 (4) 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 50-mL 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (450 mg, 1.09 mmol, 1.00 equiv), CH2Cl2 (10 ml), 및 (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (30 mg, 0.39 mmol, 1.20 equiv) 의 용액을 수합하였다. 상기 이후 NaBH(AcO)3 (552 mg, 2.60 mmol, 2.40 equiv) 을 0℃ 에서 부분 첨가하였다. 수득한 용액을 10 min 동안 25℃ 에서 교반하였다. 이후, 반응물을 5 mL 의 물의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 3x10 mL 의 CH2Cl2 로 추출하고, 유기층을 수합하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, Prep-HPLC 로 정제하여 223.9 mg (38%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 12
반응식 3
Figure pct00068
12 의 합성
4-(1H-피라졸-1-일)벤조일 클로라이드 201 을 제조하는데 사용되는 방법을 4-(1H-피라졸-1-일)벤조산 (100 mg, 0.53 mmol) 을 가지고서 사용해 110 mg (미정제) 의 4-(1H-피라졸-1-일)벤조일 클로라이드를 황색 고체로서 수득하였다.
tert-부틸 N-[(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[[4-(1H-피라졸-1-일)페닐]포름아미도]부틸]-N-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]카르바메이트 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 tert-부틸 N-[(3S)-3-아미노-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소부틸]-N-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]카르바메이트 (227 mg, 0.48 mmol, 1.00 equiv) 및 4-(1H-피라졸-1-일)벤조일 클로라이드 (110 mg, 0.53 mmol, 1.10 equiv) 를 가지고서 사용해 150 mg (49%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-4-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소부탄-2-일]-4-(1H-피라졸-1-일)벤즈아미드 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (150 mg, 0.23 mmol, 1.00 equiv), CF3COOH (1 mL), 및 CH2Cl2 (10 mL) 를 수합하였다. 용액을 12 h 동안 실온에서 교반한 후, 감압 하에 농축시키고, Prep-HPLC 로 정제하여 63.1 mg (42%) 의 12 트리플루오로아세트산 염을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 20
반응식 4
Figure pct00069
20 의 합성
에틸 4-메탄술포닐페닐 벤조에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 500-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디옥산 (200 mL) 중의 에틸 4-브로모벤조에이트 (5 g, 21.83 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, (4-메탄술포닐페닐)보론산 (5.2 g, 26.00 mmol, 1.19 equiv), 및 물 (20 mL) 중의 K2CO3 (6 g, 43.41 mmol, 1.99 equiv) 의 용액, Pd(PPh3)4 (2.5 g) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 100℃ 에서 오일 배쓰에서 교반한 후, 실온으로 냉각하고, 500 mL 의 H2O 로 희석하고, 3x200 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, 1x500 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제물을 EtOAc 로부터의 재결정화로 정제하여 6 g 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
4-메탄술포닐페닐 벤조산 (209) 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 반응으로부터의 생성물 (9 g, 29.57 mmol, 1.00 equiv), 메탄올 (150 mL), NaOH (3 g, 75.00 mmol, 2.54 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 5 h 동안 25℃ 에서 교반한 후, 진공 하에 농축시키고, 200 mL 의 H2O 로 희석하였다. 수성물의 pH 값을 HCl (2 M) 을 사용해 2 로 조정하였다. 형성된 고체를 여과로 수합하고, 오븐에서 건조시켜 6 g (73%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
4-메탄술포닐페닐 벤조일 클로라이드 201 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (5 g, 18.10 mmol) 을 가지고서 사용해 5 g (94%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
N-((S)-4-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-(4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)-1-옥소부탄-2-일)-4'-(메틸술포닐)바이페닐-4-카르복사미드 나머지 합성은 반응식 2 에서와 같이 진행되었다.
실시예 21
반응식 5
Figure pct00070
21 의 합성
4-(메톡시카르보닐)벤조일 클로라이드 201 을 제조하는데 사용되는 방법을 4-(메톡시카르보닐)벤조산 (2 g, 11.10 mmol) 을 가지고서 사용해 2.2 g (100%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-(2,2-디에톡시에틸)-4-(메톡시카르보닐)벤즈아미드 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 및 2,2-디에톡시에탄-1-아민 (1.22 g, 9.16 mmol) 을 가지고서 사용해 3 g (92%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
메틸 4-(옥사졸-2-일)-벤조에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 500-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 생성물 (3 g, 10.16 mmol, 1.00 equiv), 메탄술폰산 (150 mL), 오산화인 (8.52 g, 59.18 mmol, 5.00 equiv) 을 두었다. 수득한 용액을 2 h 동안 140℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하고, 실온으로 냉각하고, 3x150 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, EtOAc/석유 에테르 (1:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 1.5 g (73%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
4-(옥사졸-2-일)-벤조산 209 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 생성물 (1.5 g, 7.38 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 1.2 g (86%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-((S)-4-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소부탄-2-일)-4-(옥사졸-2-일)페닐-4-카르복사미드 나머지 합성은 반응식 2 에서와 같이 진행되었다.
실시예 23
반응식 6
Figure pct00071
23 의 합성
(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로펜-3-일)아미노]-2-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]펜탄산 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-2-아미노펜탄산 (800 mg, 2.61 mmol, 1.00 equiv) 및 4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조일 클로라이드 (800 mg, 3.85 mmol, 1.50 equiv) 를 가지고서 사용해 550 mg (44%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(4-(tert-부틸옥시카르보닐)피페라진-1-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] (프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (250 mg, 0.52 mmol, 1.00 equiv) 및 4-(tert-부틸옥시-카르보닐)피페라진 (148 mg, 0.79 mmol, 1.50 equiv) 을 가지고서 사용해 210 mg (62%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(4-(tert-부틸옥시카르보닐)피페라진-1-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (210) 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (210 mg, 0.32 mmol, 1.00 equiv), THF (30 mL), 바르비투르산 (127 mg, 0.81 mmol, 2.50 equiv), 및 테트라키스-(트리페닐포스핀)팔라듐 (94 mg, 0.08 mmol, 0.25 equiv) 이 있었다. 수득한 용액을 2 h 동안 50℃ 에서 오일 배쓰에서 교반한 후, 감압 하에 농축시키고, CH2Cl2/메탄올 (10:1) 을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 150 mg (76%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소-1-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄-2-일]-4-(피리미딘-2-일)벤즈아미드 트리플루오로아세트산 염 1 을 제조하는데 사용되는 절차를 이전 단계에서 생성된 화합물 (150 mg, 0.25 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 53.2 mg (43%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 35
반응식 7
Figure pct00072
35 의 합성
N-[(2S)-1-(3-시아노아제티딘-1-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-피라졸-1-일)벤즈아미드 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-2-[[4-(1H-피라졸-1-일)페닐]포름아미도]펜탄산 (400 mg, 0.84 mmol, 1.00 equiv) 및 아제티딘-3-카르보니트릴을 가지고서 사용해 301 mg (66%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(3-시아노아제티딘-1-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] 아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-피라졸-1-일)벤즈아미드 (35) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (301 mg, 0.56 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 72.1 mg (26%) 의 35 를 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 86
반응식 8
Figure pct00073
86 의 합성
N-[(2S)-1-(4-(tert-부틸옥시카르보닐)피페라진-1-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피리미딘-2-일)벤즈아미드 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-2-[[4-(피리미딘-2-일)페닐]포름아미도]펜탄산 (250 mg, 0.51 mmol, 1.00 equiv) 및 1-tert-부틸-1^3,3,6-옥사디아조칸-2-온 (143 mg, 0.76 mmol, 1.50 equiv) 을 가지고서 사용해 280 mg (66%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(4-(tert-부틸옥시카르보닐)피페라진-1-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피리미딘-2-일)벤즈아미드 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (280 mg, 0.43 mmol) 을 가지고서 사용해 0.2 g (76%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소-1-(피페라진-1-일)펜탄-2-일]-4-(피리미딘-2-일)벤즈아미드 트리플루오로아세트산 염 (86) 1 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (200 mg, 0.32 mmol) 을 가지고서 사용해 70 mg (34%) 의 86 을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 91
반응식 9
Figure pct00074
91 의 합성
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-카르보에톡시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-2-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]펜탄산 (200 mg, 0.42 mmol, 1.00 equiv) 및 메틸 피페리딘-4-카르복실레이트 (80 mg, 0.56 mmol, 1.33 equiv) 를 가지고서 사용해 180 mg (71%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-카르보에톡시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (180 mg, 0.30 mmol) 을 가지고서 사용해 100 mg (60%) 의 생성물을 주황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-카르복시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (91) 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 THF (20 mL) 중의 이전 단계로부터의 화합물 (100 mg, 0.17 mmol, 1.00 equiv) 및 물 (5 mL) 중의 LiOH (20 mg, 0.84 mmol, 4.82 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반한 후, 진공 하에 농축시켰다. 미정제물을 Prep-HPLC 로 정제하여 52.9 mg (46%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 92
반응식 10
Figure pct00075
92 의 합성
4-시아노-N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]벤즈아미드 (211) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 CH2Cl2 (20 mL) 중의 4-시아노벤조산 (136.7 mg, 0.93 mmol, 1.20 equiv) 의 용액, i-Pr2NEt (298 mg, 2.31 mmol, 3.00 equiv), 및 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 ("HATU") (439 mg, 1.15 mmol, 1.50 equiv) 를 수합하였다. 혼합물을 1h 동안 교반한 후, CH2Cl2 (5 mL) 중의 (2S)-2-아미노-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)펜탄-1-온 (300 mg, 0.77 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 첨가하였다. 수득한 용액을 60 min 동안 25℃ 에서 교반한 후, 진공 하에 농축시키고, CH2Cl2/메탄올 (10:1) 을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 480 mg (120%) 의 생성물을 밝은 황색 액체로서 수득하였다.
4-시아노-N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] 아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]벤즈아미드 (92) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (480 mg, 0.93 mmol) 을 가지고서 사용해 46.7 mg (11%) 의 92 를 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 109
반응식 11
Figure pct00076
109 의 합성
메틸 4-[[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]카르바모일] 벤조에이트 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 4-(메톡시카르보닐)벤조산 (231.4 mg, 1.28 mmol, 1.00 equiv) 및 (2S)-2-아미노-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)펜탄-1-온 (500 mg, 1.28 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 420 mg (59%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
메틸 4-[[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]카르바모일] 벤조에이트 (109) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (420 mg, 0.76 mmol) 을 가지고서 사용해 650 mg (99%) 의 생성물을 주황색 오일로서 수득하였다.
4-[[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]카르바모일]벤조산 (109) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (650 mg, 1.27 mmol, 1.00 equiv), LiOH (60 mg, 2.51 mmol, 2.00 equiv), 메탄올 (20 mL), 및 물 (13 mL) 을 수합하였다. 수득한 용액을 3 h 동안 실온에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 미정제물을 Prep-HPLC 로 정제하여 45.1 mg (7%) 의 생성물을 주황색 고체로서 수득하였다.
실시예 109
반응식 12
Figure pct00077
110 의 합성
N-[(2R)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]카르바메이트 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 2-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]-5-[[2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]펜탄산 (1 g, 2.46 mmol, 1.00 equiv) 및 1-메틸피페라진 (500 mg, 4.99 mmol, 2.00 equiv) 을 가지고서 사용해 1.1 g (95%) 의 생성물을 황백색 오일로서 수득하였다.
4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조산 (926 mg, 4.90 mmol) (2R)-2-아미노-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)펜탄-1-온 1 을 제조하는데 사용되는 절차를 이전 단계에서 생성된 화합물 (2.4 g, 4.91 mmol) 을 가지고서 사용해 1.8 g (95%) 의 생성물을 황백색 오일로서 수득하였다.
N-[(2R)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (1.9 g, 4.89 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 1.2 g (44%) 의 생성물을 황백색 오일로서 수득하였다.
N-[(2R)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (110) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (1.2 g, 2.14 mmol) 을 가지고서 사용해 15.1 mg (1%) 의 110 을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 111
반응식 13
Figure pct00078
111 의 합성
(2S)-2-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]펜탄산 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 (2S)-2-아미노-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]펜탄산; CF3COOH (2 g, 4.76 mmol, 1.00 equiv), 1,4-디옥산 (100 mL), Boc2O (1.44 g, 6.60 mmol, 1.39 equiv), 및 H2O (25 mL) 중의 Na2CO3 (1.4 g, 13.21 mmol, 2.78 equiv) 의 용액을 수합하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 실온에서 교반하고, 진공 하에 농축시키고, 40 mL 의 DMF 로 희석하고, MeCN/H2O (1:1) 를 사용한 C18 컬럼에 적용해 1.8 g (93%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
tert-부틸 N-[(2S)-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]카르바메이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]펜탄산 (900 mg, 2.21 mmol, 1.00 equiv) 및 피페리딘-4-올 (335 mg, 3.31 mmol, 1.50 equiv) 을 가지고서 사용해 1.2 g (98%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
(2S)-2-아미노-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)펜탄-1-온; 트리플루오로아세트산 염 1 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (1.2 g, 2.45 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 880 mg (71%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (400 g, 794.39 mmol, 1.00 equiv), 및 4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조산 (205 mg, 1.08 mmol) 을 가지고서 사용해 300 mg 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-히드록시피페리딘-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (111) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (300 mg, 0.54 mmol) 을 가지고서 사용해 (23%) 의 111 을 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 117
반응식 14
Figure pct00079
117 의 합성
tert-부틸 N-[(2R)-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-옥소-1-(3-(디메틸아미노)-아제티딘-1-일)-펜탄-2-일]카르바메이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]펜탄산 (400 mg, 0.98 mmol, 1.00 equiv) 및 N,N-디메틸아제티딘-3-아민 (147.9 mg, 1.48 mmol, 1.50 equiv) 을 가지고서 사용해 490 mg (99%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
1-옥소-1-(3-(디메틸아미노)-아제티딘-1-일)-(2R)-2-아미노-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-펜탄 1 을 제조하는데 사용되는 절차를 이전 단계에서 생성된 화합물 (490 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 470 mg (99%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(3-(디메틸아미노)-아제티딘-1-일-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-벤즈아미드 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (470 mg, 1.21 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 608 mg (90%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(3-(디메틸아미노)-아제티딘-1-일 -1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-벤즈아미드 (117) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (978 mg, 1.75 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 61.0 mg (7%) 의 117 을 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 126
반응식 15
Figure pct00080
126 의 합성
2-[4-[(2S)-2-[(4-시아노페닐)포름아미도]-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-시클로프로필]아미노]펜타노일]피페라진-1-일]아세테이트 (126) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 THF (20 mL) 중의 에틸 2-[4-[(2S)-2-[(4-시아노페닐)포름아미도]-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]펜타노일]피페라진-1-일]아세테이트 (150 mg, 0.27 mmol, 1.00 equiv) 의 용액 및 물 (5 mL) 중의 LiOH (13.1 mg, 0.55 mmol, 2.00 equiv) 의 용액을 수합하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 수성 HCl (2 M) 을 사용해 3~4 로 조정하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 MeCN/H2O (1:10) 를 사용한 역상 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 미정제물 (5 mL) 을 Prep-HPLC 로 정제하여 108 mg (64%) 의 126 을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 127
반응식 16
Figure pct00081
127 의 합성
N-벤질 N-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]-N-[(4R)-5-(4-메틸피페라진-1-일)-5-옥소-4-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]펜틸]카르바메이트 (127) 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 테트라히드로푸란 (5 mL) 중의 N-[(2R)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (40 mg, 0.08 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, TEA (23 mg, 0.23 mmol, 3.00 equiv), CbzCl (19.7 mg, 0.12 mmol, 1.50 equiv) 을 수합하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 실온에서 교반한 후, 15 mL 의 물/얼음의 첨가로 켄칭하고, 3x20 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, 3x20 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄/메탄올 (20:1) 을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 49.5 mg (98%) 의 127 을 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 128
반응식 17
Figure pct00082
128 의 합성
(2S)-5-메톡시-5-옥소-2-[(4-페닐페닐)포름아미도]펜탄산 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-아미노-5-메톡시-5-옥소펜탄산 (4.9 g, 30.41 mmol, 1.00 equiv) 및 4-페닐벤조일 클로라이드 (5 g, 23.08 mmol, 0.76 equiv) 를 가지고서 사용해 4 g (39%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
메틸 (4S)-5-(4-메탄술포닐피페라진-1-일)-5-옥소-4-[(4-페닐페닐)포름아미도]펜타노에이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-5-메톡시-5-옥소-2-[(4-페닐페닐)포름아미도]펜탄산 (2 g, 5.86 mmol, 1.00 equiv) 및 1-메탄술포닐피페라진 (1.15 g, 7.00 mmol, 1.20 equiv) 을 가지고서 사용해 2.5 g (88%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-(4-메탄술포닐피페라진-1-일)-5-옥소-4-[(4-페닐페닐)포름아미도]펜탄산 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (1 g, 2.05 mmol, 1.00 equiv), LiOH (73 mg, 3.05 mmol, 1.49 equiv), 및 THF/H2O (50/12 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 실온에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 HCl (2 M) 을 사용해 2 로 조정하였다. 수득한 용액을 3x30 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 700 mg (72%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-(4-메탄술포닐피페라진-1-일)-5-옥소-4-[(4-페닐페닐)포름아미도]-1-펜탄올 (202) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 THF (10 mL) 및 BH3 (THF 중 1 M) (2.2 mL) 중의 이전 단계로부터의 화합물 (700 mg, 1.48 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 수합하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 20 mL 의 물의 첨가로 켄칭한 후, 3x20 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 400 mg (59%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(4S)-5-(4-메탄술포닐피페라진-1-일)-5-옥소-4-[(4-페닐페닐)포름아미도]펜틸 메탄술포네이트 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 CH2Cl2 (5 mL) 중의 이전 단계로부터의 화합물 (300 mg, 0.65 mmol, 1.00 equiv) 및 Et3N (132 mg, 1.30 mmol, 2.00 equiv) 의 용액을 수합하였다. 상기 이후 메탄술포닐 클로라이드 (90 mg, 0.78 mmol, 1.20 equiv) 를 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 30 min 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 10 mL 의 물의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 3x10 mL 의 CH2Cl2 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:2) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 200 mg (57%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-메탄술포닐피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-페닐벤즈아미드 (128) 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (200 mg, 0.37 mmol, 1.00 equiv), iPr2NEt (96 mg, 0.74 mmol, 2.00 equiv), KI (62 mg), (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (62 mg, 0.41 mmol, 1.10 equiv) 및 CH3CN (10 mL) 을 수합하였다. 수득한 용액을 12 h 동안 50℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 이후, 반응물을 10 mL 의 물의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 3x10 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제물을 Prep-HPLC 로 정제하여 12.7 mg (6%) 의 128 을 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 129
반응식 18
Figure pct00083
129 의 합성
(2S)-5-메톡시-5-옥소-2-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]]-펜탄산 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-아미노-5-메톡시-5-옥소펜탄산 (3 g, 18.63 mmol, 1.00 equiv), 및 4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조일 클로라이드 (4.65 g, 22.36 mmol, 1.20 equiv) 를 가지고서 사용해 2.5 g (40%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
메틸 (4S)-5-(4-메틸피페라진-1-일)-5-옥소-4-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]-펜타노에이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (2.5 g, 7.53 mmol, 1.00 equiv) 및 1-메틸피페라진 (1.13 g, 11.30 mmol, 1.50 equiv) 을 가지고서 사용해 2 g (64%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(4S)-5-(4-메틸피페라진-1-일)-5-옥소-4-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]-펜탄산 205 를 제조하기 위한 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (2 g, 4.83 mmol) 을 가지고서 사용해 1.8 g (93%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-(4-메틸피페라진-1-일)-5-옥소-4-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]-1-펜탄올 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 THF (20 mL) 중의 이전 단계로부터의 생성물 (1.6 g, 4.00 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, N-메틸 모르폴린 (983 mg, 8.40 mmol, 2.10 equiv), 및 tert-부틸 클로로포르메이트 (1151 mg, 8.40 mmol, 2.10 equiv) 를 수합하였다. 수득한 혼합물을 2 h 동안 -20℃ 에서 교반한 후, 메탄올 (10 mL) 중의 NaBH4 (1.52 g, 40.0 mmol, 10.00 equiv) 를 첨가하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 -20℃ 에서 액체 질소 배쓰에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (10:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 450 mg (29%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-(4-메틸피페라진-1-일)-5-옥소-4-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]-펜타날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (200 mg, 0.52 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 150 mg (75%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-메톡시페닐)시클로프로필] 아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (129) 25-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (150 mg, 0.391 mmol, 1.00 equiv), (1R,2S)-2-(4-메톡시페닐)-시클로프로판아민 (76 mg, 0.47 mmol, 1.20 equiv), NaBH(OAc)3 (199 mg, 0.94 mmol, 2.40 equiv) 및 CH2Cl2 (20 mL) 의 용액을 수합하였다. 수득한 용액을 10 min 동안 25℃ 에서 교반한 후, 30 mL 의 H2O 로 희석하고, 2x20 mL 의 CH2Cl2 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제물을 Prep-HPLC 로 정제하여 5.9 mg (2.8%) 의 129 를 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 130
반응식 19
Figure pct00084
130 의 합성
메틸 4-아지도-2-플루오로벤조에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 염화수소 (5 mL) 중의 메틸 4-아미노-2-플루오로벤조에이트 (1 g, 5.91 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 물 (5 mL) 중의 NaNO2 (407 mg, 5.90 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 물 (5 mL) 중의 NaN3 (575 mg, 8.85 mmol, 1.50 equiv) 의 용액을 두었다. 수득한 용액을 15 min 동안 0℃ 에서 교반하였다. 고체를 여과해냈다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 상기는 800 mg (69%) 의 생성물을 황색 고체로서 유도하였다.
메틸 2-플루오로-4-[5-(트리메틸실릴)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]벤조에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 메탄올 (20 mL) 중의 메틸 4-아지도-2-플루오로벤조에이트 (800 mg, 4.10 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 에티닐트리메틸실란 (603 mg, 6.14 mmol, 1.50 equiv), CuI (1.2 g, 6.30 mmol, 1.50 equiv), TEA (1.2 g, 11.88 mmol, 3.00 equiv) 를 두었다. 수득한 용액을 16 h 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 50 mL 의 물/얼음의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 수합하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 상기는 700 mg (58%) 의 생성물을 황색 고체로서 유도하였다.
메틸 2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 테트라히드로푸란 (10 mL) 중의 메틸 2-플루오로-4-[5-(트리메틸실릴)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]벤조에이트 (700 mg, 2.39 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, TBAF (1.25 g, 4.78 mmol, 2.00 equiv), AcOH (144 mg, 2.40 mmol, 1.00 equiv) 를 두었다. 수득한 용액을 2 일 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 50 mL 의 물/얼음의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 수합하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄/메탄올 (100:1) 을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 상기는 550 mg (미정제) 의 생성물을 황색 고체로서 유도하였다.
2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조산 205 를 제조하는데 사용되는 절차를 이전 단계에서 생성된 화합물을 가지고서 사용해 450 mg (87%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
2-플루오로-N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (160 mg, 0.77 mmol, 1.00 equiv) 및 (2S)-2-아미노-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)펜탄-1-온 (300 mg, 0.77 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 250 mg (56%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
2-플루오로-N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (130) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (250 mg, 0.43 mmol) 을 가지고서 사용해 33.2 mg (14%) 의 130 을 밝은 갈색 고체로서 수득하였다.
실시예 131
반응식 20
Figure pct00085
131 의 합성
tert-부틸 4-카르바모일-4-플루오로피페리딘-1-카르복실레이트 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 1-[(tert-부톡시)카르보닐]-4-플루오로피페리딘-4-카르복실산 (3 g, 12.13 mmol, 1.00 equiv), DMF (50 mL), NH4Cl (1.75 g, 32.72 mmol, 1.50 equiv), HATU (9.23 g, 24.27 mmol, 2.00 equiv), 및 iPr2NEt (3.13 g, 24.22 mmol, 2.00 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 밤새 25℃ 에서 교반하였다. 수득한 용액을 200 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 5x50 mL 의 H2O 로 세정한 후, 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 2.7 g (90%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
tert-부틸 4-시아노-4-플루오로피페리딘-1-카르복실레이트 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (1.6 g, 6.50 mmol, 1.00 equiv), 피리딘 (15 mL), TFAA (10 mL), 및 THF (30 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 0℃ 에서 물/얼음 배쓰에서 교반하였다. 미정제물 (50 mL) 을 하기 조건 하에 Flash-Prep-HPLC 로 정제하였다 (IntelFlash-1): 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, MeCN/H2O=0/100 은 MeCN/H2O=50/50 로 증가 (30 min 내에); 검출기, UV 254 nm. 10 mL 생성물을 수득함으로써 1.2 g (81%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
4-플루오로피페리딘-4-카르보니트릴 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (800 mg, 3.50 mmol, 1.00 equiv), CF3COOH (1 mL), 및 CH2Cl2 (5 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 25℃ 에서 교반한 후, 진공 하에 농축시켜 350 mg (78%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(4-시아노-4-플루오로피페리딘-1-일)-1-옥소-5-[[(1R,2S)-2-페닐시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-2-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]펜탄산 (700 mg, 1.47 mmol, 1.00 equiv) 및 4-플루오로피페리딘-4-카르보니트릴 (350 mg, 2.73 mmol, 2.00 equiv) 을 가지고서 사용해 816 mg (98%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(4-시아노-4-플루오로피페리딘-1-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (131) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물을 가지고서 사용해 40.7 mg (5%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 132
반응식 21
Figure pct00086
132 의 합성
(4S)-N-메틸-N-메톡시-5-(tert-부톡시)-4-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-5-옥소펜탄아미드 1-L 둥근-바닥 플라스크 내에서 CH2Cl2 (200 mL) 중의 (4S)-5-(tert-부톡시)-4-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]-5-옥소펜탄산 (20.0 g, 65.93 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, EDCI (18.9 g, 98.59 mmol, 1.50 equiv), HOBT (13.4 g, 98.80 mmol, 1.50 equiv), 메톡시(메틸)아민 히드로클로라이드 (9.7 g, 98.94 mmol, 1.50 equiv), 및 Et3N (20.0 g, 197.65 mmol, 3.00 equiv) 을 수합하였다. 수득한 용액을 3 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 이후, 3x100 mL 의 H2O 로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시킨 후, EtOAc/석유 에테르 (1:3) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 22.1 g (96%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
(4S)-N-메틸-N-메톡시-5-(tert-부톡시)-4-[디(tert-부톡시카르보닐)아미노]-5-옥소펜탄아미드 204 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (19.1 g, 54.99 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 23.6 g (96%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
(4S)-5-(tert-부틸옥시)-4-[디(tert-부톡시카르보닐)아미노]-5-옥소펜타날 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 500-mL 3-구 둥근-바닥 플라스크 내에서 THF (50 mL) 중의 이전 단계로부터의 화합물 (6 g, 13.42 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 수합한 후, 디이소부틸 알루미늄 히드라이드 (30 mL, 2.50 equiv) 를 교반 하에 -78℃ 에서 30 min 내에 적가하였다. 수득한 용액을 30 min 동안 -78℃ 에서 교반한 후, 50 mL NH4Cl(aq) 의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 3x100 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 6.3 g (미정제) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
tert-부틸 (2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-2-[디(tert-부톡시카르보닐)아미노]펜타노에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 500-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (6.3 g, 16.26 mmol, 1.00 equiv), 2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 히드로클로라이드 (2.45 g, 13.06 mmol, 0.80 equiv), NaBH(OAc)3 (8.25 g, 38.93 mmol, 2.40 equiv), 및 메탄올 (150 mL) 을 수합하였다. 수득한 용액을 30 min 동안 25℃ 에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시킨 후, 100 mL EtOAc 로 희석하였다. 수득한 혼합물을 3x20 mL 의 H2O 로 세정하고, 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:4) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 3.1 g (36%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
tert-부틸 (2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로펜-2-일)아미노]-2-[디(tert-부톡시카르보닐)아미노]펜타노에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 500-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 DMF (10 mL) 중의 이전 단계로부터의 화합물 (3.1 g, 5.93 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, K2CO3 (2.45 g, 17.78 mmol, 3.00 equiv), 및 3-브로모프로프-1-엔 (1.43 g, 11.85 mmol, 2.00 equiv) 을 수합하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 수득한 용액을 50 mL 의 EtOAc 로 희석한 후, 3x5 mL 의 H2O 로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:7) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 3 g (90%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로펜-2-일)아미노]-2-아미노펜탄산 500-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (3 g, 43.01 mmol, 1.00 equiv) 및 CF3COOH (10 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반한 후, 진공 하에 농축시켰다. 미정제물을 CH3CN:H2O (1:100-15:1) 를 사용한 Flash-Prep-HPLC 로 정제하여 2 g (83%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
(2S)-5-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로펜-2-일)아미노]-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]펜탄산 500-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디옥산 (20 mL) 중의 이전 단계로부터의 화합물 (2 g, 6.51 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, (Boc)2O (2.13 g, 9.77 mmol, 1.50 equiv), H2O (20 ml) 중의 Na2CO3 (2.07 g, 19.54 mmol, 3.0 equiv) 을 두었다. 수득한 용액을 2 h 동안 실온에서 교반하였다. 고체를 여과로 제거하고, 수득한 용액을 진공 하에 농축시켰다. 미정제물을 CH3CN:H2O (1:100-1:1) 를 사용한 flash 로 정제하여 2.3 g (86%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] (프로펜-2-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (2.3 g, 5.67 mmol, 1.00 equiv) 및 N-메틸피페라진 (850 mg, 8.50 mmol, 1.5 equiv) 을 가지고서 사용해 2.3 g (83%) 의 PH-IMA-2013-003-384-8 을 황색 오일로서 수득하였다.
(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] (프로펜-2-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물을 가지고서 사용해 1.8 g 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(2S)-N-[5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로펜-2-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1.8 g, 4.63 mmol, 1.0 equiv) 및 4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조산 (875 mg, 4.63 mmol, 1.0 equiv) 을 가지고서 사용해 1.7 g (66%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
(2S)-N-[5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] 아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (132) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물을 가지고서 사용해 281.8 mg (18%) 의 132 를 밝은-황색 고체로서 수득하였다.
실시예 134
반응식 22
Figure pct00087
134 의 합성
메틸 4-(2-피라지닐) 벤조에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 1,4-디옥산 (30 mL) 중의 [4-(메톡시카르보닐)페닐]보론산 (1 g, 5.56 mmol, 1.20 equiv) 의 용액, 2-브로모피라진 (800 mg, 5.03 mmol, 1.00 equiv), 물 (30 mL) 중의 Na2CO3 (1.5 g, 14.15 mmol, 3.00 equiv) 의 용액, 및 Pd(Ph3P)2Cl2 (330 mg, 0.47 mmol, 0.10 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 90℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 고체를 여과해냈다. 수득한 용액을 3x30 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 진공 하에 농축시켰다. 상기는 0.8 g (74%) 의 생성물을 백색 고체로서 유도하였다.
4-(2-피라지닐) 벤조산 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 메탄올 (20 mL) 중의 메틸 4-(피라진-2-일)벤조에이트 (800 mg, 3.73 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 물 (20 mL) 중의 NaOH (150 mg, 3.75 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 80℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 HCl (1M) 을 사용해 7 로 조정하였다. 고체를 여과로 수합하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 상기는 0.65 g (87%) 의 생성물을 백색 고체로서 유도하였다.
4-(2-피라지닐)-벤조일 클로라이드 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 4-(피라진-2-일)벤조산 (650 mg, 3.25 mmol, 1.00 equiv) 및 티오닐 클로라이드 (20 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 80℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 상기는 0.7 g (99%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 유도하였다.
(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-2-[[4-(2-피라지닐)페닐]포름아미도]펜탄산 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (500 mg, 1.63 mmol, 1.00 equiv) 및 4-(피리딘-2-일)벤조일 클로라이드 (393 mg, 1.81 mmol, 1.10 equiv) 를 가지고서 사용해 360 mg (45%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피라진-2-일)벤즈아미드 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (360 mg, 0.74 mmol, 1.00 equiv) 및 1-메틸피페라진 (111 mg, 1.11 mmol, 1.50 equiv) 을 가지고서 사용해 300 mg (71%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] 아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피라진-2-일)벤즈아미드 (134) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (300 mg, 0.53 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 88.8 mg (32%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 135
반응식 23
Figure pct00088
135 의 합성
메틸 4-(피리미딘-5-일)벤조에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 MeCN (60 mL) 중의 5-브로모피리미딘 (2.2 g, 13.84 mmol, 1.10 equiv) 의 용액을 수합하였다. 상기 이후 [4-(메톡시카르보닐)페닐]보론산 (2.26 g, 12.56 mmol, 1.00 equiv) 을 부분 첨가하였다. 상기에 물 (30 mL) 중의 Na2CO3 (2.9 g, 27.36 mmol, 2.00 equiv) 의 용액을 교반 하에 실온에서 2 min 내에 적가하였다. 혼합물에 Pd(PPh3)4 (1.45 g, 1.25 mmol, 0.10 equiv) 를 부분 첨가하였다. 수득한 용액을 4 h 동안 90℃ 에서 교반하였다. 고체를 여과로 제거하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 상기는 1.31 g (49%) 의 생성물을 황색 고체로서 유도하였다.
4-(피리미딘-5-일)벤조산 209 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (1.31 g, 6.12 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 0.7 g (57%) 로 백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피리미딘-5-일)벤즈아미드 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (250 mg, 0.50 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 (70%) 로 황색 폼으로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피리미딘-5-일)벤즈아미드 (135) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (200 mg, 0.35 mmol) 을 가지고서 사용해 15 mg (8%) 의 135 를 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 137
반응식 24
Figure pct00089
137 의 합성
tert-부틸 4-(d 3 )-메틸피페라진-1-카르복실레이트 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (1 g, 5.37 mmol, 1.00 equiv), K2CO3 (2.23 g, 16.13 mmol, 3.01 equiv) 및 THF (40 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 실온에서 교반하였다. 상기 이후 요오도메탄-d3 (780 mg, 5.38 mmol, 1.00 equiv) 을 교반 하에 -12℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 밤새 실온에서 교반하였다. 고체를 여과로 제거하고, 미정제물을 Prep-HPLC 로 정제하였다. 수득한 용액을 3x30 mL 의 5:1 CH2Cl2:MeOH 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 진공 하에 농축시켜 500 mg (46%) 의 생성물을 무색 오일로서 수합하였다.
1-(d 3 )-메틸피페라진 1 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (500 mg, 2.46 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 250 mg (99%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(2S)-2-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]펜탄산 204 를 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-아미노-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]펜탄산 (1.29 g, 4.21 mmol, 1.00 equiv), 1,4-디옥산 (50 mL) 을 가지고서 사용해 1.3 g (76%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
tert-부틸 N-[(2S)-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-[4-(d 3 )-메틸피페라진-1-일]-1-옥소펜탄-2-일]카르바메이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (1.075 g, 2.64 mmol, 1.00 equiv) 및 1-(d3)-메틸피페라진 (300 mg, 2.91 mmol, 1.10 equiv) 을 가지고서 사용해 650 mg (50%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(2S)-2-아미노-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-[4-(d 3 )-메틸피페라진-1-일]펜탄-1-온; 트리플루오로아세트산 염 1 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (650 mg, 1.32 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 710 mg (96%) 로 황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-[4-(d 3 )-메틸피페라진-1-일]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 및 4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조산 (231 mg, 1.22 mmol, 1.23 equiv) 을 가지고서 사용해 700 mg (96%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-[4-(d 3 )-메틸피페라진-1-일]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (137) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (850 mg, 1.51 mmol) 을 가지고서 사용해 112.2 mg (14%) 의 137 을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 138
반응식 25
Figure pct00090
138 의 합성
1-(tert-부톡시카르보닐)-(2,2,3,3,5,5,6,6-d 8 )피페라진 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 메탄올 (10 mL) 중의 (2,2,3,3,5,5,6,6-d8)피페라진 디히드로클로라이드 (1 g, 5.98 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 첨가한 후, 메탄올 (10 mL) 중의 NaOH (480 mg, 12.00 mmol, 2.00 equiv) 의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 30 min 동안 교반한 후, CF3COOH (682 mg, 5.98 mmol, 1.00 equiv) 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가적인 15 min 동안 교반한 후, 물 (20 mL) 을 첨가하였다. 용액을 30 min 동안 교반한 후, 메탄올 (40 mL) 중의 Boc2O (1.3 g, 5.96 mmol, 1.00 equiv) 및 I2 (152 mg, 0.60 mmol, 0.10 equiv) 의 용액을 첨가하였다. 수득한 용액을 3 h 동안 25℃ 에서 교반한 후, 진공 하에 농축시켰다. 용액의 pH 값을 NaOH (20%) 를 사용해 11 로 조정하였다. 고체를 여과로 제거하고, 수득한 용액을 3x30 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, 1x50 mL 의 염수로 세정한 후, Na2SO4 로 건조시켰다. 수득한 용액을 진공 하에 농축시켜 1 g (86%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
1-(tert-부톡시카르보닐)-4-메틸-(2,2,3,3,5,5,6,6-d 8 )피페라진 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (1 g, 5.15 mmol, 1.00 equiv), THF (30 mL), 및 K2CO3 (2.14 g, 15.48 mmol, 3.01 equiv) 을 수합하였다. 혼합물을 1h 동안 교반한 후, THF (10 mL) 중의 CH3I (730 mg, 5.14 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 교반 하에 -12℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 형성된 고체를 여과로 제거하였다. 수득한 용액을 진공 하에 농축시키고, 50 mL 의 H2O 로 희석하고, 3x30 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, 1x50 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 500 mg (47%) 의 생성물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다.
1-메틸-(2,2,3,3,5,5,6,6-d 8 )피페라진 1 을 제조하는데 사용되는 절차를 이전 단계에서 생성된 화합물 (500 mg, 2.40 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 200 mg (37%) 의 PH-IMA-2013-003-336-3 을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸-(2,2,3,3,5,5,6,6-d 8 )-피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-벤즈아미드 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 및 (2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-2-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]펜탄산 (300 mg, 0.63 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 150 mg (42%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-메틸-(2,2,3,3,5,5,6,6-d 8 )-피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-벤즈아미드 (138) 210 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (150 mg, 0.26 mmol) 을 가지고서 사용해 65.7 mg (47%) 의 138 을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 142
반응식 26
Figure pct00091
142 의 합성
(2S)-2-[(4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)포름아미도]-헥산디오산 500-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 물 (50 mL) 및 디옥산 (50 mL) 중의 (2S)-2-아미노헥산디오산 (3 g, 18.62 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, H2O (50 mL) 중의 Na2CO3 (5.9 g, 55.67 mmol, 2.99 equiv) 의 용액을 수합하였다. 이후, 디옥산 (50 mL) 중의 4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조일 클로라이드 (4.26 g, 20.52 mmol, 1.10 equiv) 의 용액을 적가하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 HCl (2 M) 을 사용해 2 로 조정하였다. 수득한 용액을 3x150 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 1x300 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시키고, CH2Cl2/메탄올을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 4.5 g 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(2S)-6-메톡시-6-옥소-2-[(4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)포름아미도]-헥산산 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 메탄올 (40 mL) 중의 (2S)-2-[(4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)포름아미도]-헥산디오산 (2500 mg, 7.52 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 첨가한 후, AcCl (700 mg) 을 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 100 min 동안 0℃ 에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 sat. NaHCO3 을 사용해 9 로 조정하였다. 수득한 용액을 2x20 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 수성층을 수합하였다. HCl (2 M) 을 활용해 pH 를 2 로 조정하였다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 1x50 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 1.5 g (58%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
메틸 (5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)포름아미도]헥사노에이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1.5 g, 4.33 mmol, 1.00 equiv) 및 1-메틸피페라진 (500 mg, 4.99 mmol, 1.73 equiv) 을 가지고서 사용해 1 g (54%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)포름아미도]헥산산 205 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1 g, 2.33 mmol) 을 가지고서 사용해 950 mg (98%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)포름아미도]헥산올 (212) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 생성물 (980 mg, 2.36 mmol, 1.00 equiv), N-메틸모르폴린 (500 mg, 4.94 mmol, 2.09 equiv), 및 THF(50 mL) 을 수합한 후, i-BuOCOCl (500 mg, 3.65 mmol, 1.54 equiv) 을 교반 하에 -20℃ 에서 적가하였다. 혼합물을 2h 동안 -20℃ 에서 교반하였다. 상기에 메탄올 (20 mL) 중의 NaBH4 (1 g, 26.43 mmol, 11.18 equiv) 의 용액을 교반 하에 -20℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 25℃ 에서 교반하고, 진공 하에 농축시키고, CH2Cl2/메탄올 (5:1) 을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 300 mg (32%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)포름아미도]헥사날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (300 mg, 0.75 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 200 mg (67%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-6-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] 아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소헥산-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (142) 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (200 mg, 0.50 mmol, 1.00 equiv) 및 (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (76 mg, 0.50 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 21.4 mg (7%) 의 142 를 무색 오일로서 수득하였다.
실시예 143
반응식 27
Figure pct00092
143 의 합성
(2S)-2-[(4-시아노페닐)포름아미도]-헥산디오산 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-아미노헥산디오산 (5 g, 31.03 mmol, 1.00 equiv) 및 4-시아노벤조일 클로라이드 (5.2 g, 31.41 mmol, 1.01 equiv) 를 가지고서 사용해 7 g (78%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(2S)-2-[(4-시아노페닐)포름아미도]-6-히드록시헥산산 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 250-mL 3-구 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 생성물 (2 g, 6.89 mmol) 및 THF (100 mL) 를 수합한 후, BH3 (17 mL, THF 중 1 M) 을 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 0℃ 에서 교반하였다. 이후, 반응물을 5 mL 의 메탄올의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 50 mL 의 sat Na2CO3 으로 희석하고, 3x30 mL 의 EtOAc 로 세정하였다. 수성층을 수합하고, HCl (2 M) 을 사용해 pH 2 로 조정하였다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 1x50 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 1 g (53%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[(4-시아노페닐)포름아미도]헥산올 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-[4-시아노페닐)포름아미도]-6-히드록시헥산산 (1 g, 3.62 mmol, 1.00 equiv) 및 1-메틸피페라진 (540 mg, 5.39 mmol, 1.49 equiv) 을 가지고서 사용해 1 g (77%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[(4-시아노페닐)포름아미도]헥사날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 (5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[(4-시아노페닐)포름아미도]헥산올 (500 mg, 1.39 mmol) 을 가지고서 사용해 450 mg (91%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-6-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] 아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소헥산-2-일]-4-시아노벤즈아미드 (142) 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 (5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[(4-시아노페닐)포름아미도]헥사날 (450 mg, 1.26 mmol, 1.00 equiv) 및 (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (250 mg, 1.65 mmol, 1.31 equiv) 을 가지고서 사용해 174.1 mg (28%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 144
반응식 28
Figure pct00093
144 의 합성
(2S)-2-아미노-6-메톡시-6-옥소-헥산산 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 메탄올 (40 mL) 중의 티오닐 클로라이드 (6.2 mL) 의 용액 및 (2S)-2-아미노헥산디오산 (10 g, 62.05 mmol, 1.00 equiv) 을 수합하였다. 수득한 용액을 10 min 동안 0℃ 에서 물/얼음 배쓰에서 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 Et2O (200 mL) 에 붓고, 10 min 동안 교반하였다. 형성된 고체를 여과로 수합하여 10 g (92%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
(2S)-6-메톡시-6-옥소-2-[(4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]-헥산산 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-아미노-6-메톡시-6-옥소-헥산산 (3 g, 14.17 mmol, 1.00 equiv) 및 4-(피리미딘-2-일)벤조일 클로라이드 (3 g, 13.72 mmol, 0.97 equiv) 를 가지고서 사용해 3 g (59%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
메틸 (5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]헥사노에이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-6-메톡시-6-옥소-2-[(4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]-헥산산 (3 g, 8.39 mmol, 1.00 equiv) 및 1-메틸피페라진 (1.3 g, 12.98 mmol, 1.55 equiv) 을 가지고서 사용해 1 g (27%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]헥산산 205 를 제조하는데 사용되는 방법을 메틸 (5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]헥사노에이트 (1 g, 2.28 mmol, 1.00 equiv) 를 가지고서 사용해 600 mg (62%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]헥산올 212 를 제조하는데 사용되는 방법을 (5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]헥산산 (600 mg, 1.41 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 300 mg (52%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
(5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]헥사날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 (5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]헥산올 (300 mg, 0.73 mmol) 을 가지고서 사용해 150 mg (50%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-6-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] 아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소헥산-2-일]-4-(피리미딘-2-일)벤즈아미드 (144) 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 (5S)-6-(4-메틸피페라진-1-일)-6-옥소-5-[4-(피리미딘-2-일)페닐)포름아미도]헥사날 (150 mg, 0.37 mmol, 1.00 equiv) 및 (1S,2R)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (80 mg, 0.53 mmol, 1.44 equiv) 을 가지고서 사용해 9.2 mg (5%) 의 144 를 밝은 황색 반-고체로서 수득하였다.
실시예 145
반응식 29
Figure pct00094
145 의 합성
(2R)-2-[(4-플루오로페닐)포름아미도]-3-[(2-히드록시에틸)술파닐]프로판산 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 N,N-디메틸포름아미드 (50 mL) 중의 (2R)-2-[(4-플루오로페닐)포름아미도]-3-메르캅토프로판산 (5 g, 20.55 mmol) 의 용액 및 K2CO3 (5.7 g, 40.94 mmol) 을 둔 후, N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 중의 2-브로모에탄올 (2.8 g, 22.41 mmol) 의 용액을 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 5 h 동안 실온에서 교반한 후, 200 mL 의 H2O 로 희석하였다. 용액의 pH 를 HCl (2 M) 을 사용해 3 으로 조정하였다. 수득한 용액을 2x200 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 CH2Cl2/메탄올 (20:1) 을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 4 g (68%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
4-플루오로-N-[(2R)-3-[(2-히드록시에틸)술파닐]-1-(모르폴린-4-일)-1-옥소프로판-2-일]벤즈아미드 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 THF (50 mL) 중의 (2R)-2-[(4-플루오로페닐)포름아미도]-3-[(2-히드록시에틸)술파닐]프로판산 (4 g, 13.92 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, DEPBT (6.25 g, 20.90 mmol, 1.50 equiv) 및 이미다졸 (1.42 g, 20.88 mmol, 1.50 equiv) 을 수합하였다. 혼합물을 30 min 동안 0℃ 에서 교반한 후, 모르폴린 (1.2 g, 13.77 mmol, 0.99 equiv) 을 첨가하였다. 수득한 용액을 12 h 동안 실온에서 교반한 후, 200 mL 의 EtOAc 로 희석하고, 1x100 mL 의 염수로 세정하였다. 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:10) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 3 g (60%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2R)-3-([2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸]술파닐)-1-(모르폴린-4-일)-1-옥소프로판-2-일]-4-플루오로벤즈아미드 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 CH2Cl2 (30 mL) 중의 4-플루오로-N-[(2R)-3-[(2-히드록시에틸)술파닐]-1-(모르폴린-4-일)-1-옥소프로판-2-일]벤즈아미드 (3 g, 8.42 mmol, 1.00 equiv) 의 용액 및 이미다졸 (1.14 g, 16.76 mmol, 1.99 equiv) 을 수합한 후, TBSCl (1.9 g, 12.58 mmol, 1.49 equiv) 을 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 6 h 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 50 mL 의 물의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 2x100 mL 의 CH2Cl2 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:30) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 상기는 2 g (50%) 의 생성물을 백색 고체로서 유도하였다.
N-[(2R)-3-([2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸]술포닐)-1-(모르폴린-4-일)-1-옥소프로판-2-일]-4-플루오로벤즈아미드 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 CH2Cl2 (20 mL) 중의 N-[(2R)-3-([2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸]술파닐)-1-(모르폴린-4-일)-1-옥소프로판-2-일]-4-플루오로벤즈아미드 (2 g, 4.25 mmol, 1.00 equiv) 의 용액 및 m-CPBA (1.84 g, 10.66 mmol, 2.51 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 6 h 동안 실온에서 교반한 후, 50 mL 의 CH2Cl2 로 희석하였다. 수득한 혼합물을 1x50 mL 의 포화 Na2CO3, 이후 1x50 mL 의 염수로 세정하였다. 유기층을 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:30) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 1.3 g (61%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
4-플루오로-N-[(2R)-3-[(2-히드록시에탄)술포닐]-1-(모르폴린-4-일)-1-옥소프로판-2-일]벤즈아미드 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 THF (10 mL) 및 Bu4NF (2M) (1.5 mL) 중의 N-[(2R)-3-([2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸]술포닐)-1-(모르폴린-4-일)-1-옥소프로판-2-일]-4-플루오로벤즈아미드 (500 mg, 0.99 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 수합하였다. 수득한 용액을 10 h 동안 실온에서 교반한 후, 50 mL 의 EtOAc 로 희석하였다. 수득한 혼합물을 2x10 mL 의 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:20) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 300 mg (78%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
2-[[(2R)-2-[(4-플루오로페닐)포름아미도]-3-(모르폴린-4-일)-3-옥소프로필]술포닐]에틸 메탄술포네이트 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 THF (5 mL) 중의 4-플루오로-N-[(2R)-3-[(2-히드록시에틸)술포닐]-1-(모르폴린-4-일)-1-옥소프로판-2-일]벤즈아미드 (300 mg, 0.77 mmol, 1.00 equiv) 의 용액 및 Et3N (156 mg, 1.54 mmol, 2.00 equiv) 을 수합하였다. 상기 이후 메탄술포닐 클로라이드 (134 mg, 1.17 mmol, 1.51 equiv) 를 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 10 mL 의 물의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 3x10 mL 의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 수합한 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:50) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 200 mg (56%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
에틸 (1R)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로판-1-카르복실레이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 100-mL 3-구 둥근-바닥 플라스크 내에서 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르 (20 mL) 중의 에틸 2-(디에톡시포스포릴)프로파노에이트 (3.45 g, 14.48 mmol, 2.00 equiv) 의 용액을 수합한 후, n-BuLi (2.5M) (5.8 mL) 를 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 30 min 동안 실온에서 교반하였다. 상기에 2-(4-플루오로페닐)옥시란 (1 g, 7.24 mmol, 1.00 equiv) 을 첨가하였다. 수득한 용액을 교반 하에 추가적인 12 h 동안 반응시키면서, 온도를 오일 배쓰에서 80℃ 로 유지하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 20 mL 의 물의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:100) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 1 g (62%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(1R)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로판-1-카르복실산 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 메탄올/H2O (10/2 mL) 중의 에틸 (1R)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로판-1-카르복실레이트 (1 g, 4.50 mmol, 1.00 equiv) 의 용액 및 KOH (1.26 g, 22.46 mmol, 4.99 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 10 h 동안 실온에서 교반한 후, 20 mL 의 H2O 로 희석하였다. 용액의 pH 값을 HCl (2 M) 을 사용해 2 로 조정하였다. 수득한 용액을 3x20 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 800 mg (92%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
tert-부틸 N-[(1R)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로필]카르바메이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 50-mL 3-구 둥근-바닥 플라스크 내에서 톨루엔 (10 mL) 중의 (1R)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로판-1-카르복실산 (400 mg, 2.06 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 디페닐포스포릴 아지드 (680 mg, 2.47 mmol, 1.20 equiv), 및 Et3N (312 mg, 3.08 mmol, 1.50 equiv) 을 수합하였다. 수득한 용액을 30 min 동안 90℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 이후, tert-부탄올 (2 mL) 을 첨가하였다. 수득한 용액을 교반 하에 추가적인 12 h 동안 반응시키면서, 온도를 오일 배쓰에서 90℃ 로 유지하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 50 mL 의 EtOAc 로 희석하였다. 수득한 혼합물을 30 mL 의 H2O 로 세정하고, 무수 Na2SO4 로 건조시킨 후, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 (1:100) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 350 mg (64%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로판-1-아민 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 메탄올(HCl) (10 mL) 중의 tert-부틸 N-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로필]카르바메이트 (350 mg, 1.32 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 첨가하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 실온에서 교반한 후, 10 mL 의 H2O 로 희석하였다. 용액의 pH 값을 포화 Na2CO3 을 사용해 9 로 조정하였다. 수득한 용액을 3x10 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 200 mg (92%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
4-플루오로-N-[(2R)-3-[(2-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로필]아미노]에탄)술포닐]-1-(모르폴린-4-일)-1-옥소프로판-2-일]벤즈아미드 (145) 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 25-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 MeCN (10 mL) 중의 2-[[(2R)-2-[(4-플루오로페닐)포름아미도]-3-(모르폴린-4-일)-3-옥소프로판]술포닐]에틸 메탄술포네이트 (200 mg, 0.43 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, i-Pr2NEt, (110 mg, 0.85 mmol, 1.99 equiv), KI (71 mg, 0.43 mmol, 1.00 equiv), 및 (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로판-1-아민 (71 mg, 0.43 mmol, 1.00 equiv) 을 수합하였다. 수득한 용액을 12 h 동안 50℃ 에서 오일 배쓰에서 교반한 후, 30 mL 의 EtOAc 로 희석하였다. 수득한 혼합물을 1x20 mL 의 H2O 로 세정하고, Na2SO4 로 건조시킨 후, 진공 하에 농축시켰다. 미정제물을 HPLC 로 정제하여 64.3 mg (28%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 146
반응식 30
Figure pct00095
146 의 합성
4-(3,5-디메틸피라졸-1-일)벤조산 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 4-히드라지닐벤조산 (8.8 g, 57.84 mmol, 1.00 equiv), AcOH (100 mL), 및 펜탄-2,4-디온 (5.8 g, 57.93 mmol, 1.00 equiv) 을 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 118℃ 에서 오일 배쓰에서 교반한 후, 진공 하에 농축시켰다. 수득한 고체를 3x100 mL 의 EtOAc 로 세정하고, 진공 하에 건조시켜 9.2 g (74%) 의 생성물을 밝은-갈색 고체로서 수득하였다.
(2S)-2-[(4-(3,5-디메틸피라졸-1-일)페닐)포름아미도]-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]부탄산 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (5 g, 23.12 mmol, 1.50 equiv) 및 (2S)-2-아미노-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]부탄산 (5.52 g, 15.44 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 1 g (12%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
(2S)-N-[1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소-4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-부탄-2-일]-4-(4-(3,5-디메틸피라졸-1-일)벤즈아미드 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계에서 생성된 화합물 (5 g, 9.00 mmol, 1.00 equiv) 및 티오모르폴린-1,1-디옥시드 (1.46 g, 10.8 mmol, 1.20 equiv) 를 가지고서 사용해 1 g (17%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[[4-(3,5-디메틸피라졸-1-일)페닐]포름아미도]-부탄올 207 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1 g, 1.49 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 300 mg (46%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[[4-(3,5-디메틸피라졸-1-일)페닐]포름아미도]-부타날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (50 mg, 0.11 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 45 mg (91%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-4-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소부탄-2-일]-4-(3,5-디메틸피라졸-1-일)벤즈아미드 (146) 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (45 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv) 및 (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (19 mg, 0.125 mmol, 1.20 equiv) 을 가지고서 사용해 11.7 mg (20%) 의 146 을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 148
반응식 31
Figure pct00096
148 의 합성
(2S)-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐]아미노]부탄산 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 1000-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 MeCN (300 mL), 5% 수성 NaHCO3 (300 mL) 중의 (2S)-2-아미노-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]부탄산 (10 g, 27.97 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 및 Fmoc-OSu (10.4 g, 30.86 mmol, 1.10 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 12 h 동안 실온에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 HCl (2 M) 을 사용해 3 으로 조정하였다. 수득한 용액을 3x200 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, EtOAc/석유 에테르 (1:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 11 g (68%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(2S)-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소부탄-2-일]카르바메이트 206 의 절차를 이전 단계로부터의 화합물 및 티오모르폴린-1,1-디옥시드 (3.9 g, 22.59 mmol, 1.19 equiv) 를 가지고서 사용해 9 g (68%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[((9H-플루오렌-9-일메틸)옥시카르보닐)아미노]-1-부탄올 207 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (5 g, 7.17 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 1.7 g 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[((9H-플루오렌-9-일메틸)옥시카르보닐)아미노]-1-부타날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1.7 g, 3.71 mmol) 을 가지고서 사용해 1.2 g (71%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(2R)-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소부탄-2-일]카르바메이트 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1.2 g, 2.63 mmol, 1.00 equiv) 및 (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (476 mg, 3.15 mmol, 1.20 equiv) 을 가지고서 사용해 1.4 g (90%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
tert-부틸 N-[(3R)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐]아미노]-4-옥소부틸]-N-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]카르바메이트 204 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 반응으로부터의 생성물 (1.4 g, 2.37 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 1.5 g (92%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
tert-부틸 N-[(3S)-3-아미노-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소부틸]-N-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]카르바메이트 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (1.5 g, 2.17 mmol, 1.00 equiv), 피페리딘 (5 mL), 및 DMF (20 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 12 h 동안 실온에서 교반한 후, 100 mL 의 H2O 로 희석하였다. 형성된 고체를 여과로 제거하였다. 수득한 용액을 3x20 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 800 mg (79%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
tert-부틸 N-[(3S)-3-[[4-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)페닐]포름아미도]-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소부틸]-N-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]카르바메이트 211 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 생성물 (397 mg, 0.85 mmol, 1.00 equiv) 및 4-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)벤조산 (200 mg, 0.93 mmol, 1.10 equiv) 을 가지고서 사용해 200 mg (35%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
4-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)-N-[(2S)-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소부탄-2-일]벤즈아미드, 트리플루오로아세트산 염 1 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 생성물 (120 mg, 0.18 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 12 mg (10%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 150
반응식 32
Figure pct00097
(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판카르복실산 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디옥산 (100 ml) 및 H2SO4 (30 mL) 중의 (1R)-N-(2-히드록시-1-페닐에틸)-2-(4-플루오로페닐)-1-메틸시클로프로판-1-카르복사미드 (5 g, 16.70 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 두었다. 수득한 용액을 16 h 동안 100℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 이후, 수득한 용액을 300 mL 의 CH2Cl2 로 희석하였다. 수합한 유기층을 2x200 mL 의 H2O 및 1x500 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 2 g (66%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
N-(tert-부톡시카르보닐)-(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아민 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 톨루엔 (100 mL) 중의 상기 단계로부터의 화합물 (2 g, 11.10 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 수합하였다. 이후, DPPA (4.6 g, 16.72 mmol, 1.51 equiv) 및 Et3N (1.7 g, 16.80 mmol, 1.51 equiv) 을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 30 min 후에, 반응 혼합물을 90℃ 로 냉각하였다. 이후, t-BuOH (20 mL) 를 용액에 첨가하였다. 수득한 용액을 5 h 동안 90℃ 에서 교반한 후, 3x100 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 수합한 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, EtOAc/석유 에테르 (1:10) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 2 g (72%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아민 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (2 g, 7.93 mmol) 및 HCl/MeOH (50 mL) 의 용액을 수합하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 1.4 g (92%) 의 생성물을 무색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-4-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소부탄-2-일]-4-페닐벤즈아미드 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 상기 반응으로부터의 생성물 (137 mg, 0.72 mmol, 1.50 equiv) 및 (3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[4-(페닐)페닐)포름아미도]-1-부타날 (200 mg, 0.48 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 106.9 mg (34.4%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 152
반응식 33
Figure pct00098
152 의 합성
tert-부틸 N-[(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-3-[[4-(4-메탄술포닐페닐)페닐]포름아미도]-4-옥소부틸]-N-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]카르바메이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 tert-부틸 N-[(3S)-3-아미노-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소부틸]-N-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]카르바메이트 (100 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv), Et3N (43 mg, 0.42 mmol, 2.00 equiv), CH2Cl2 (10 mL) 을 수합한 후, CH2Cl2 (5 mL) 중의 4-(4-메탄술포닐페닐)벤조일 클로라이드 (70 mg, 0.24 mmol, 1.12 equiv) 의 용액을 교반 하에 적가하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 실온에서 교반한 후, 10 mL 의 물의 첨가로 켄칭하였다. 수득한 용액을 3x10 mL 의 CH2Cl2 로 추출하였다. 수합한 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, EtOAc/석유 에테르 (1:5) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 100 mg (65%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소부탄-2-일]-4-(4-메탄술포닐페닐)벤즈아미드 트리플루오로아세트산 염 50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (100 mg, 0.14 mmol, 1.00 equiv), CF3COOH (1 mL) 및 CH2Cl2 (10 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 실온에서 교반한 후, 감압 하에 농축시켰다. 미정제물을 Prep-HPLC 로 정제하여 51.5 mg (52%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 158
반응식 34 (a)
Figure pct00099
158 의 합성
4-(1H-1,2,3-트리아졸릴-1-일)벤조일 클로라이드 (1) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤조산 (1 g, 5.29 mmol, 1.00 equiv) 및 티오닐 클로라이드 (20 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 80℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 이후, 수득한 혼합물을 감압 하에 농축시켜 1 g (91%) 의 중간체 (1) 을 황색 고체로서 수득하였다.
(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로펜-3-일)아미노]-2-[[4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐]포름아미도]펜탄산 (2) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 (2S)-2-아미노-5-[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]-(프로프-2-엔-1-일)아미노펜탄산 (500 mg, 1.63 mmol, 1.00 equiv), Et3N (494 mg, 4.88 mmol, 3.00 equiv) 및 THF (20 mL) 를 수합하였다. 상기 이후 THF (20 mL) 중의 이전 단계로부터의 중간체 (1) (1 g, 4.82 mmol, 2.95 equiv) 의 용액을 교반 하에 0℃ 에서 30 min 내에 적가하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 0℃ 에서 얼음/염 배쓰에서 교반한 후, 감압 하에 농축시키고, CH2Cl2/메탄올 (10:1) 을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 수합한 분획을 조합하고, 감압 하에 농축시켜 400 mg (51%) 의 중간체 (2) 를 황백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(4-(메틸)피페라진-1-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (3) 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 중간체 (2) (400 mg, 0.84 mmol, 1.00 equiv), DEPBT (375 mg, 1.25 mmol, 1.50 equiv), 및 THF (20 mL) 를 수합한 후, 이미다졸 (85 mg, 1.25 mmol, 1.50 equiv) 을 첨가하였다. 혼합물을 30 min 동안 0℃ 에서 교반하며, 이 지점에서 1-메틸피페라진 (127 mg, 1.27 mmol, 1.50 equiv) 을 교반 하에 0℃ 에서 3 min 내에 적가하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 20℃ 에서 교반한 후, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 CH2Cl2/메탄올 (10:1) 을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 수합한 분획을 조합하고, 진공 하에 농축시켜 300 mg (64%) 의 중간체 (3) 을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(4-(메틸)피페라진-1-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-시클로프로필]아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (3) 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (300 mg, 0.54 mmol, 1.00 equiv), 1,3-디메틸-1,3-디아지난-2,4,6-트리온 (210 mg, 1.34 mmol, 2.50 equiv), Pd(PPh3)4 (155 mg, 0.13 mmol, 0.25 equiv) 를 두었다. 수득한 용액을 2 h 동안 45℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 미정제물 (10 mL) 을 Flash-Prep-HPLC 로 정제하였다. 상기는 65 mg (23%) 의 실시예 158 을 황색 고체로서 유도하였다.
대안적으로, 실시예 158 및 이의 비스-토실레이트 염을 하기 방법으로 제조할 수 있다.
반응식 34 (b)
Figure pct00100
실시예 162
반응식 35
Figure pct00101
162 의 합성
메틸 4-(피리딘-2-일)벤조에이트 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디옥산 (50 mL) 중의 메틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조에이트 (5 g, 0.019 mol, 1.00 equiv) 의 용액, Na2CO3 (6.04 g, 0.057 mol, 3.00 equiv), 2-브로모피리딘 (4.5 g, 0.028 mol, 1.50 equiv), 및 Pd(Ph3P)4 (1.1 g, 0.001 mmol, 0.05 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 80℃ 에서 교반하였다. 수득한 용액을 물/얼음으로 켄칭하고, 3x50 ml EtOAc 로 추출하였다. 수합한 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, EtOAc/석유 에테르 (1:5) 를 사용한 플래시 크로마토그래피로 정제하여 3.5 g (86%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
4-(피리딘-2-일)벤조산 209 를 제조하는데 사용되는 방법을 MeOH (50 mL) 중의 이전 단계로부터의 화합물 (3.5 g, 0.016 mol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 3 g (92%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
4-(피리딘-2-일)벤조일 클로라이드 201 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 반응으로부터의 화합물 (3 g, 0.015 mol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용하였다. 미정제물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
(S)-5-메톡시-5-옥소-2-(4-(피리딘-2-일)벤즈아미도)펜탄산 질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디옥산 (25 mL) 중의 (2S)-2-아미노-5-메톡시-5-옥소펜탄산 (2 g, 12.41 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 물 (50 mL) 중의 Na2CO3 (3.94 g, 37.17 mmol, 3.00 equiv) 의 용액을 두었다. 이후, N-메틸-2-피롤리돈 (100ml) 중의 4-(피리딘-2-일)벤조일 클로라이드 (미정제) 를 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 0℃ 에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 HCl (1 M) 을 사용해 6 으로 조정하였다. 수득한 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 CH3CN/H2O (1%-20%) 을 사용한 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 1.9 g (45%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
메틸 (4S)-5-옥소-5-[1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)]-4-[(4-(2-피리딜)페닐)포름아미도]펜타노에이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 생성물 (1.9 g, 5.56 mmol, 1.00 equiv) 및 티오모르폴린-1,1-디옥시드 (1.13 g, 8.34 mmol, 1.50 equiv) 를 가지고서 사용해 1.4 g (55%) 의 생성물을 갈색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-옥소-5-[1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)]-4-[(4-(2-피리딜)페닐)포름아미도]펜탄산 205 를 제조하는데 사용되는 절차를 이전 단계로부터의 화합물 (1.4 g, 3.04 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 1.2 g (89%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-옥소-5-[1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)]-4-[(4-(2-피리딜)페닐)포름아미도]펜탄올 212 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 생성물 (800 mg, 1.8 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 550 mg (71%) 의 생성물을 갈색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-옥소-5-[1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)]-4-[(4-(2-피리딜)페닐)포름아미도]펜타날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (550 mg, 1.27 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 350 mg (64%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
[(2S)-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-시클로프로필]아미노]-1-옥소펜탄-2-일] 4-(피리딘-2-일)-벤즈아미드 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (350 mg, 0.82 mmol, 1.00 equiv) 및 (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 히드로클로라이드 염 (231 mg, 1.23 mmol, 1.50 equiv) 를 가지고서 사용해 61.9 mg (13.4%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 163
반응식 36
Figure pct00102
163 의 합성
4-(4H-1,2,4-트리아졸-4-일)벤조일 클로라이드 201 을 제조하는데 사용되는 방법을 4-(4H-1,2,4-트리아졸-4-일)벤조산 (2 g, 10.57 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 2 g (91%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
(2S)-5-메톡시-5-옥소-2-[[4-(4H-1,2,4-트리아졸-4-일)페닐]포름아미도]펜탄산 500-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 (2S)-2-아미노-5-메톡시-5-옥소펜탄산 (1.55 g, 9.62 mmol, 1.00 equiv), 디옥산 (100 mL), 물 (100 mL), 및 Na2CO3 (3.06 g, 28.87 mmol, 3.00 equiv) 을 수합한 후, NMP (50 mL) 중의 4-(4H-1,2,4-트리아졸-4-일)벤조일 클로라이드 (2 g, 9.63 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 실온에서 교반한 후, 진공 하에 농축시키고, Prep-HPLC 로 정제하여 2 g (63%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
메틸 (4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[[4-(4H-1,2,4-트리아졸-4-일)페닐]포름아미도] 펜타노에이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 생성물 (2 g, 6.02 mmol, 1.00 equiv) 및 티오모르폴린-1,1-디옥시드 (1.22 g, 8.96 mmol, 1.49 equiv) 를 가지고서 사용해 1.4 g (52%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[[4-(4H-1,2,4-트리아졸-4-일)페닐]포름아미도] 펜탄산 205 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1.4 g, 3.11 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 1 g (74%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[[4-(4H-1,2,4-트리아졸-4-일)페닐]포름아미도] 펜탄올 202 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (900 mg, 2.07 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 450 mg (52%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
(4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[[4-(4H-1,2,4-트리아졸-4-일)페닐]포름아미도] 펜타날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (450 mg, 1.07 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 300 mg (67%) 의 생성물을 황색 오일로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(4H-1,2,4-트리아졸-4-일)벤즈아미드 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 생성물 (300 mg, 0.72 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 17 mg (4%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 164
반응식 37
Figure pct00103
164 의 합성
4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-벤조니트릴 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 4-플루오로벤조니트릴 (2 g, 16.51 mmol, 1.00 equiv), Cs2CO3 (10.8g, 2.00 equiv), 1H-1,2,3-트리아졸 (1.4g, 1.20 equiv), 및 N,N-디메틸포름아미드 (50 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 4 h 동안 80℃ 에서 교반한 후, 50 mL 의 H2O 로 희석하고, 3x50 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, 1x100 mL 의 염수로 세정하고, Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, EtOAc 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 1.2 g (43%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-벤조산 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 H2SO4 (20 mL, 9 mol/L) 중에 이전 반응으로부터의 화합물 (1 g, 5.88 mmol, 1.00 equiv) 을 용해시켰다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 형성된 고체를 여과로 수합하여 1 g (90%) 의 생성물을 회색 고체로서 수득하였다.
4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-벤조일 클로라이드 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (7 g, 37.04 mmol, 1.00 equiv) 및 티오닐 클로라이드 (30 mL) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 80℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켜 6 g (80%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
N-((2S)-5-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-옥소-1-(티오모르폴리노-4,4-디옥시드-1-일)-펜탄-2-일)-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 나머지 합성은 반응식 18 에서와 같이 진행되었다.
실시예 166
반응식 38
Figure pct00104
166 의 합성
1-페닐-1H-피라졸-4-카르보닐 클로라이드 히드로클로라이드 201 을 제조하는데 사용되는 방법을 1-페닐-1H-피라졸-4-카르복실산 (5 g, 26.57 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 5 g (77%) 미정제물을 황색 고체로서 수득하였다.
(2S)-5-메톡시-5-옥소-2-[(1-페닐-1H-피라졸-4-일)포름아미도]펜탄산 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 (2S)-2-아미노-5-메톡시-5-옥소펜탄산 (2.76 g, 17.13 mmol, 1.00 equiv) 및 1-페닐-1H-피라졸-4-카르보닐 클로라이드 히드로클로라이드 (5 g, 20.57 mmol, 1.20 equiv) 를 가지고서 사용해 2.7 g (48%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
메틸 (4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[(1-페닐-1H-피라졸-4-일)포름아미도]펜타노에이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (2.7 g, 8.15 mmol, 1.00 equiv) 및 티오모르폴린-1,1-디옥시드 (1.34 g, 9.84 mmol, 1.21 equiv) 를 가지고서 사용해 1.8 g (49%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[(1-페닐-1H-피라졸-4-일)포름아미도]펜탄산 205 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1.8 g, 4.01 mmol) 을 가지고서 사용해 1.22 g (70%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[4-(1H-피라졸-1-일)페닐)포름아미도]-1-부탄올 202 를 제조하기 위한 방법을 이전 단계로부터의 화합물을 가지고서 사용해 0.8 g (68%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(3S)-4-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-4-옥소-3-[4-(1H-피라졸-1-일)페닐)포름아미도]-1-부타날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (800 mg, 1.90 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 480 mg (60%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-1-페닐-1H-피라졸-4-카르복사미드 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 반응으로부터의 화합물 (480 mg, 1.15 mmol, 1.00 equiv) 및 (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-시클로프로판-1-아민 (208 mg, 1.38 mmol, 1.20 equiv) 을 가지고서 사용해 33.5 mg (5%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 168
반응식 39
Figure pct00105
168 의 합성
메틸 4-(피리미딘-2-일)벤조에이트 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 [4-(메톡시카르보닐)페닐]보론산 (5 g, 27.78 mmol, 1.00 equiv), 디옥산 (100 mL), 2-브로모피리미딘 (5.3 g, 33.34 mmol, 1.20 equiv), Na2CO3 (5.89 g, 55.57 mmol, 2.00 equiv), 물 (10 mL), 및 Pd(Ph3P)2Cl2 (3.2 g, 2.77 mmol, 0.10 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 80℃ 에서 교반하였다. 형성된 고체를 여과로 제거하였다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 EtOAc 로 추출하였다. 유기층을 수합하고, CH2Cl2/메탄올 (10:1) 을 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용해 4.4 g (74%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
4-(피리미딘-2-일)벤조산 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (4.4 g, 20.54 mmol, 1.00 equiv), NaOH (2.4 g, 60.00 mmol, 2.92 equiv), 및 메탄올 (50 mL) 을 수합하였다. 수득한 용액을 2 h 동안 실온에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 HCl (1 M) 을 사용해 7 로 조정하였다. 형성된 고체를 여과로 수합하여 3.15 g (77%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
4-(피리미딘-2-일)벤조일 클로라이드 201 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (3.15 g, 15.73 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 3.20 g (80%) 의 미정제 4-(피리미딘-2-일)벤조일 클로라이드 히드로클로라이드를 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
(2S)-5-메톡시-5-옥소-2-[[4-(피리미딘-2-일)페닐]포름아미도]펜탄산 203 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1.68 g, 10.42 mmol, 0.83 equiv) 및 4-(피리미딘-2-일)벤조일 클로라이드 히드로클로라이드 (3.20 g, 12.54 mmol, 1.00 equiv) 를 가지고서 사용해 1.75 g (41%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
메틸 (4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[[4-(피리미딘-2-일)페닐]포름아미도]펜타노에이트 206 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (1.7 g, 4.95 mmol, 1.00 equiv) 및 티오모르폴린-1,1-디옥시드 (800 mg, 5.87 mmol, 1.19 equiv) 를 가지고서 사용해 1.35 g (59%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[[4-(피리미딘-2-일)페닐]포름아미도]펜탄산 205 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 생성물 (1.35 g, 2.93 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 0.98 g (75%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[[4-(피리미딘-2-일)페닐]포름아미도]펜탄올 212 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (980 mg, 2.19 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 710 mg (75%) 의 생성물을 고체로서 수득하였다.
(4S)-5-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-옥소-4-[[4-(피리미딘-2-일)페닐]포름아미도]펜타날 208 을 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (710 mg, 1.64 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 (72%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-1(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피리미딘-2-일)벤즈아미드 4 를 제조하는데 사용되는 방법을 이전 단계로부터의 화합물 (510 mg, 1.18 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 59.9 mg (9%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 180
반응식 40
Figure pct00106
180 의 합성
에틸 4-(1H-피롤-1-일) 벤조에이트 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 CH2Cl2 (100 mL) 중의 에틸 4-아미노벤조에이트 (4 g, 24.21 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 물 (30 mL) 중의 AcOH (300 mg, 5.00 mmol, 0.20 equiv) 의 용액, NaOAc (2 g, 24.39 mmol, 1.00 equiv), 및 2,5-디메톡시옥솔란 (4.8 g, 36.32 mmol, 1.50 equiv) 을 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 90℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켜 3.5 g (67%) 의 생성물을 황백색 고체로서 수득하였다.
4-(1H-피롤-1-일) 벤조산 250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 이전 단계로부터의 화합물 (3.5 g, 16.26 mmol, 1.00 equiv), 메탄올 (100 mL), 및 NaOH (1.3 g, 32.50 mmol, 2.00 equiv) 를 수합하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 50℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 HCl (1 M) 을 사용해 7 로 조정하였다. 형성된 고체를 여과로 수합하여 3 g (99%) 의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로펜-3-일)아미노]-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-피롤-1-일)벤즈아미드 211 의 절차를 이전 단계로부터의 화합물 (100 mg, 0.53 mmol, 1.50 equiv) 및 (2S)-2-아미노-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)-시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)펜탄-1-온 (150 mg, 0.35 mmol, 1.00 equiv) 을 가지고서 사용해 150 mg (72%) 의 생성물을 황색 고체로서 수득하였다.
N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필] 아미노]-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(1H-피롤-1-일)벤즈아미드 210 의 제조를 위한 방법을 이전 단계로부터의 화합물을 가지고서 사용해 41.5 mg (30%) 의 생성물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 181
반응식 41
Figure pct00107
250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 (2S)-2-아미노-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)펜탄-1-온 (1.04 g, 2.68 mmol, 1.00 equiv), 디클로로메탄 (50 mL), HATU (1.71 g, 4.50 mmol, 1.68 equiv), DIEA (1.16 g, 8.98 mmol, 3.35 equiv) 를 두었다. 상기 이후 CH2Cl2 (5 mL) 중의 4-(피리미딘-2-일)벤조산 (450 mg, 2.25 mmol, 0.84 equiv) 의 용액을 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 밤새 실온에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하였다. 상기는 0.52 g (34%) 의 N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피리미딘-2-일)벤즈아미드를 적색 고체로서 유도하였다.
질소의 불활성 분위기로 퍼징 및 유지된 100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필](프로프-2-엔-1-일)아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피리미딘-2-일)-벤즈아미드 (520 mg, 0.91 mmol, 1.00 equiv), THF (15 mL), 1,3-디메틸-1,3-디아지난-2,4,6-트리온 (426 mg, 2.73 mmol, 2.99 equiv), Pd(PPh3)4 (210 mg, 0.18 mmol, 0.20 equiv) 를 두었다. 수득한 용액을 2 h 동안 50℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 고체를 여과해냈다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 EtOAc 로 추출하고, 유기층을 수합하고, 진공 하에 농축시켰다. 혼합물을 Na2SO4 로 건조시켰다. 미정제물을 Prep-HPLC 로 정제하였다. 상기는 180.9 mg (37%) 의 N-[(2S)-5-[[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일]-4-(피리미딘-2-일)벤즈아미드를 밝은 황색 고체로서 유도하였다.
실시예 182
반응식 42
Figure pct00108
182 의 합성
(S)-메틸 1-트리틸아지리딘-2-카르복실레이트 [2] 클로로포름 (30 mL) 중의 (S)-메틸 3-히드록시-2-(트리틸아미노)프로파노에이트 (1, 2.00 g, 5.54 mmol) 의 용액에 트리에틸아민 (2.08 mL, 14.95 mmol) 및 디메틸아미노피리딘 (67 mg, 0.55 mmol) 을 첨가한 후, 메탄술포닐 클로라이드 (888 mg, 7.75 mmol) 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 65℃ 에서 16 h 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각하고, 물 (50 mL) 로 희석하였다. 층을 분리시키고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL) 로 추출하였다. 수합한 유기층을 염수 (100 mL) 로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 수득한 잔류물을 에탄올로부터 재결정화하여 2 (1.20 g, 63%) 를 황백색 고체로서 수득하였다.
(S)-메틸 아지리딘-2-카르복실레이트 트리플루오로아세트산 염 [3] 0℃ 에서 메탄올 (3.0 mL) 및 클로로포름 (3.0 mL) 의 혼합물 중의 2 (1.00 g, 2.91 mmol) 의 교반 용액에 트리플루오로아세트산 (2.1 mL) 을 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 2 h 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 미정제물 3 (600 mg) 을 무색 액체로서 수득하며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
4-(1H-피라졸-1-일)벤조일 클로라이드 [4] 메틸렌 클로라이드 (8.0 mL) 중의 4-(1H-피라졸-1-일)벤조산 (400 mg, 2.12 mmol) 의 용액에 옥살릴 클로라이드 (270 mg, 2.12 mmol), 이후 디메틸포름아미드 (0.05 mL) 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 2 h 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 미정제물 4 (400 mg, IN-MRG-K-163-1) 를 황백색 고체로서 수득하며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
(S)-메틸 1-[4-(1H-피라졸-1-일)벤조일]아지리딘-2-카르복실레이트 [5] 클로로포름 (10 mL) 중의 3 (600 mg, 3.03 mmol) 의 용액에 4 (756 mg, 3.63 mmol), 이후 트리에틸아민 (1.0 mL, 7.57 mmol) 을 첨가하고, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 16 h 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 물 (10 mL) 로 희석하였다. 층을 분리시키고, 수성층을 클로로포름 (2 × 20 mL) 으로 추출하였다. 수합한 유기층을 염수 (20 mL) 로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 수득한 잔류물을 크로마토그래피 (실리카 겔, CH3OH/CH2Cl2, 구배) 로 정제하여 5 [480 mg, 60% (2 개의 단계)] 를 황백색 고체로서 수득하였다.
(S)-메틸 2-[4-(1H-피라졸-1-일)벤즈아미도]-3-{[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노}프로파노에이트 [7] 아세토니트릴 (10 mL) 중의 5 (450 mg, 1.66 mmol) 의 용액에 6 (776 mg, 4.15 mmol), 이후 트리에틸아민 (0.6 mL, 4.15 mmol) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃ 에서 16 h 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 냉각하고, 물 (10 mL) 로 희석하였다. 층을 분리시키고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 × 20 mL) 로 추출하였다. 수합한 유기층을 염수 (10 mL) 로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 수득한 잔류물을 MS-작동식 분취 HPLC 로 정제하여 7·TFA (100 mg, 14%) 를 갈색 적색 검으로서 수득하였다. MS-작동식 분취 HPLC 정제를 용매 구배 프로그램 (15% 내지 55% 아세토니트릴/물 (0.1% 트리플루오로아세트산 포함)) 을 사용하는, 220 nm 에서 UV 검출을 갖는 Sunfire C18 컬럼, OBD, 10 μ (30 × 250 mm) 을 사용해 수행하였다.
(S)-메틸 2-[4-(1H-피라졸-1-일)벤즈아미도]-3-[(tert부톡시카르보닐)[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]프로파노에이트 [8] 메틸렌 클로라이드 (5.0 mL) 중의 7 (100 mg, 0.23 mmol) 의 용액에 Boc 무수물 (0.7 mL, 0.35 mmol), 이후 트리에틸아민 (0.06 mL, 0.47 mmol) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 2 h 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 물 (5.0 mL) 로 희석하였다. 층을 분리시키고, 수성층을 클로로포름 (2 × 10 mL) 으로 추출하였다. 수합한 유기층을 염수 (5.0 mL) 로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 수득한 잔류물을 크로마토그래피 (실리카 겔, EtOAc/헥산, 구배) 로 정제하여 8 (60 mg, 48%) 을 황백색 고체로서 수득하였다.
(S)-2-[4-(1H-피라졸-1-일)벤즈아미도]-3-[(tert-부톡시카르보닐)[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노]프로판산 [9] 테트라히드로푸란 (2.0 mL) 및 물 (1.0 mL) 의 혼합물 중의 8 (60 mg, 0.11 mmol) 의 용액에 리튬 히드록시드 1 수화물 (8.9 mg, 0.17 mmol) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 h 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 물 (5 mL) 로 희석하고, 2 N 수성 HCl 을 사용해 pH 5 로 산성화하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 × 10 mL) 로 추출하였다. 수합한 유기층을 염수 (10 mL) 로 세정하고, 무수 Na2SO4 로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 9 (50 mg, 86%) 를 황백색 고체로서 수득하였다.
tert-부틸 [(S)-2-[4-(1H-피라졸-1-일)벤즈아미도]-3-(4-메틸피페라진-1-일)-3-옥소프로필][(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]카르바메이트 [10] 테트라히드로푸란 (3.0 mL) 중의 9 (50 mg, 0.09 mmol) 의 용액에 (3-(디에톡시포스포릴옥시)-1,2,3-벤조트리아진-4(3H)-온) (DEPBT, 44 mg, 0.14 mmol), 이후 이미다졸 (10 mg, 0.147 mmol) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 0℃ 에서 40 min 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 1-메틸피페라진 (15 mg, 0.14 mmol) 을 0℃ 에서 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 질소 분위기 하에 16 h 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (10 mL) 로 헹구었다. 여과물을 염수 (5.0 mL) 로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 수득한 잔류물을 크로마토그래피 (실리카 겔, CH3OH/CH2Cl2, 구배) 로 정제하여 10 (30 mg, 51%) 을 황백색 고체로서 수득하였다.
N-[(S)-3-{[(1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필]아미노}-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소프로판-2-일]-4-(1H-피라졸-1-일)벤즈아미드 히드로클로라이드 염 트리플루오로에탄올 (3.0 mL) 중의 10 (30 mg, 0.05 mmol) 의 용액에 클로로트리메틸실란 (0.1 mL) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 0℃ 에서 2 h 동안 교반하였다. 상기 시간 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 수득한 잔류물을 메틸 tert-부틸 에테르 및 펜탄으로 분쇄하여 생성물 (20 mg, 71%) 을 흡습성 황백색 고체로서 수득하였다.
실시예 186
반응식 43
Figure pct00109
186 의 합성
250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 4-(페닐술포닐)벤조산 (2 g, 7.63 mmol, 1.00 equiv), 술푸로오일 디클로라이드 (20 mL) 를 두었다. 수득한 용액을 16 h 동안 80℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 상기는 2 g (93%) 의 (1) 을 황백색 고체로서 유도하였다.
1000-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 H2O (50 ml), 디옥산 (50 mL) 중의 (2S)-2-아미노-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]부탄산 (2.12 g, 5.93 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 물 (20 mL) 중의 탄산나트륨 (1.89 g, 17.79 mmol, 3 equiv) 의 용액을 두었다. 상기 이후 디옥산 (40 mL) 중의 (1) (2 g, 7.12 mmol, 1.20 equiv) 의 용액을 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 0℃ 에서 물/얼음 배쓰에서 교반하였다. 용액의 pH 값을 염화수소 (2mol/L) 를 사용해 2 로 조정하였다. 수득한 용액을 3x100 mL 의 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 수합하였다. 수득한 혼합물을 1x100 mL 의 염수로 세정하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 수득한 혼합물을 20 mL 의 DCM 으로 세정하였다. 고체를 여과해냈다. 상기는 3 g (70%) 의 (2) 를 황색 오일로서 유도하였다.
100-mL 3-구 둥근-바닥 플라스크 내에서 테트라히드로푸란 (100 mL) 중의 (2) (3 g, 4.98 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, DEPBT (2235 mg, 7.48 mmol, 1.50 equiv) 를 두었다. 상기 이후 이미다졸 (508 mg, 7.48 mmol, 1.50 equiv) 을 첨가하고, 40 min 동안 0℃ 에서 교반하였다. 상기에 테트라히드로푸란 (10 mL) 중의 티오모르폴린-1,1-디옥시드 (807 mg, 5.98 mmol, 1.20 equiv) 의 용액을 교반 하에 0℃ 에서 적가하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 고체를 여과해냈다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 수득한 용액을 100 mL 의 H2O 로 희석하였다. 수득한 용액을 3x100 mL 의 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 수합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:3) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 수합한 분획을 조합하고, 진공 하에 농축시켰다. 상기는 2.5 g (70%) 의 (3) 을 황색 오일로서 유도하였다.
50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 테트라히드로푸란 (30 mL) 중의 (3) (1500 mg, 2.09 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, TBAF (4.2 mL, 2.00 equiv) 를 두었다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 수득한 용액을 50 mL 의 H2O 로 희석하였다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 수합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 수합한 분획을 조합하고, 진공 하에 농축시켰다. 상기는 700 mg (70%) 의 (4) 를 황색 오일로서 유도하였다.
25-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디클로로메탄 (20 mL) 중의 (4) (200 mg, 0.42 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, Dess-Martin (353 mg, 0.83 mmol, 2.00 equiv) 을 두었다. 수득한 용액을 30 min 동안 25℃ 에서 교반하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 수합한 분획을 조합하고, 진공 하에 농축시켰다. 상기는 150 mg (75%) 의 (5) 를 밝은 황색 고체로서 유도하였다.
25-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디클로로메탄 (20 mL) 중의 (5) (150 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (57 mg, 0.38 mmol, 1.20 equiv), NaBH(AcO)3 (159 mg, 0.75 mmol, 2.40 equiv) 을 두었다. 수득한 용액을 10 min 동안 25℃ 에서 교반하였다. 수득한 용액을 30 mL 의 H2O 로 희석하였다. 수득한 용액을 2x20 mL 의 디클로로메탄으로 추출하고, 유기층을 수합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제물을 Prep-HPLC 로 정제하였다. 상기는 19.2 mg (10%) 의 N-((S)-4-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-옥소-1-(티오모르폴리노-4,4-디옥시드-1-일)-부탄-2-일)-4-(페닐술포닐)벤즈아미드를 백색 고체로서 유도하였다.
실시예 187
반응식 44
Figure pct00110
187 의 합성
250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 테트라히드로푸란 (50 mL) 중의 (2S)-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2-[[4-(4-플루오로페닐)페닐]포름아미도]부탄산 (2 g, 3.60 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, DEPBT (1.62 g, 5.41 mmol, 1.50 equiv) 를 두었다. 상기 이후 이미다졸 (370 mg, 5.44 mmol, 1.50 equiv) 을 첨가하고, 40 min 동안 0℃ 에서 교반하였다. 상기에 테트라히드로푸란 (20 mL) 중의 티오모르폴린-1,1-디옥시드 (890 mg, 6.58 mmol, 1.50 equiv) 의 용액을 교반 하에 0℃ 에서 30 min 내에 적가하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 수득한 용액을 50 mL 의 H2O 로 희석하였다. 수득한 용액을 3x50 mL 의 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 수합하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (1:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 상기는 2 g (82%) 의 (1) 을 황백색 고체로서 유도하였다.
100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 테트라히드로푸란 (10 mL), TBAF (6 mL, 2.00 equiv) 중의 N-[(2S)-4-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-1-옥소-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-부탄-2-일]-4-(4-플루오로페닐)-벤즈아미드 (2 g, 2.97 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 두었다. 수득한 용액을 16 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 상기는 1 g (77%) 의 (2) 를 황백색 고체로서 유도하였다.
50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디클로로메탄 (10 mL) 중의 4-(4-플루오로페닐)-N-[(2S)-4-히드록시-1-옥소-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-부탄-2-일]벤즈아미드 (200 mg, 0.46 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, Dess-Martin (389 mg, 0.92 mmol, 2.00 equiv) 을 두었다. 수득한 용액을 1 h 동안 25℃ 에서 교반하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 수합한 분획을 조합하고, 진공 하에 농축시켰다. 상기는 150 mg (75%) 의 (3) 을 황색 오일로서 유도하였다.
50-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디클로로메탄 (15 mL) 중의 N-[(2S)-1,4-디옥소-1-(티오모르폴린-1,1-디옥시드-4-일)-부탄-2-일]-4-(4-플루오로페닐)벤즈아미드 (150 mg, 0.35 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (63.2 mg, 0.42 mmol, 1.20 equiv), NaBH(AcO)3 (147 mg, 0.69 mmol, 2.00 equiv) 을 두었다. 수득한 용액을 10 min 동안 28℃ 에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 미정제물을 Prep-HPLC 로 정제하였다. 상기는 37.1 mg (19%) 의 4'-플루오로-N-((S)-4-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-옥소-1-(티오모르폴리노-4,4-디옥시드-1-일)-부탄-2-일)바이페닐-4-카르복사미드를 백색 고체로서 유도하였다.
실시예 188
반응식 45
Figure pct00111
188 의 합성
500-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 테트라히드로푸란 (200 mL) 중의 (2S)-2-[(4-플루오로페닐)포름아미도]-5-메톡시-5-옥소펜탄산 (3.4 g, 12.00 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, DEPBT (5.4 g, 1.50 equiv) 를 두었다. 상기 이후 이미다졸 (1.2 g, 1.50 equiv) 을 첨가하고, 40 min 동안 0℃ 에서 교반하였다. 상기에 아제티딘 (1.1 g, 19.27 mmol, 1.50 equiv) 을 교반 하에 0℃ 에서 10 min 내에 적가하였다. 수득한 용액을 16 h 동안 20℃ 에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (10:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 수합한 분획을 조합하고, 진공 하에 농축시켰다. 상기는 3.5 g (90%) 의 PH-(1) 을 황색 오일로서 유도하였다.
250-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 테트라히드로푸란 (100 mL) 중의 메틸 (4S)-5-(아제티딘-1-일)-4-[(4-플루오로페닐)포름아미도]-5-옥소펜타노에이트 (2 g, 6.20 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, 물 (20 mL) 중의 리튬올 (270 mg, 11.27 mmol, 1.80 equiv) 의 용액을 두었다. 수득한 용액을 2 h 동안 20℃ 에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 상기는 1.5 g (78%) 의 (2) 를 밝은 황색 고체로서 유도하였다.
100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 테트라히드로푸란 (20 mL) 중의 (4S)-5-(아제티딘-1-일)-4-[(4-플루오로페닐)포름아미도]-5-옥소펜탄산 (500 mg, 1.62 mmol, 1.00 equiv) 의 용액을 두었다. 상기 이후 NMM (350 mg, 3.46 mmol, 2.10 equiv) 을 첨가하고, 40 min 동안 0℃ 에서 교반하였다. 상기에 클로로(2-메틸프로폭시)-메타논 (470 mg, 3.44 mmol, 2.10 equiv) 을 첨가하고, 60 min 동안 -20℃ 에서 교반하였다. 혼합물에 NaBH4 (650 mg, 17.18 mmol, 10.00 equiv), 메탄올 (5 mL) 을 첨가하였다. 수득한 용액을 1 h 동안 30℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (10:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 수합한 분획을 조합하고, 진공 하에 농축시켰다. 상기는 350 mg (73%) 의 (3) 을 황색 오일로서 유도하였다.
100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디클로로메탄 (20 mL) 중의 N-[(2S)-1-(아제티딘-1-일)-5-히드록시-1-옥소펜탄-2-일]-4-플루오로벤즈아미드 (350 mg, 1.19 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, Dess-Martin (1 g, 2.36 mmol, 2.00 equiv) 을 두었다. 수득한 용액을 60 min 동안 30℃ 에서 오일 배쓰에서 교반하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (10:1) 를 사용한 실리카 겔 컬럼에 적용하였다. 수합한 분획을 조합하고, 진공 하에 농축시켰다. 상기는 230 mg (66%) 의 (4) 를 황색 오일로서 유도하였다.
100-mL 둥근-바닥 플라스크 내에서 디클로로메탄 (20 mL) 중의 N-[(2S)-1-(아제티딘-1-일)-1,5-디옥소펜탄-2-일]-4-플루오로벤즈아미드 (230 mg, 0.79 mmol, 1.00 equiv) 의 용액, (1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-아민 (176 mg, 1.16 mmol, 1.20 equiv), NaBH(AcO)3 (422 mg, 2.40 equiv) 을 두었다. 수득한 용액을 5 min 동안 20℃ 에서 교반하였다. 수득한 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 미정제물 (1 mL) 을 Flash-Prep-HPLC 로 정제하였다. 상기는 86 mg (26%) 의 N-((S)-1-(아제티딘-1-일)-5-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-옥소펜탄-2-일)-4-플루오로벤즈아미드를 황백색 고체로서 유도하였다.
하기 표는 화합물에 대한 물리적 데이터를 공개하고; 상기 나열되지 않은 실시예를 상기 공개된 방법에 따라 합성하고, 확인되는 반응식에 따른 실시예를 형성한다. 상기 화합물을 또한 당업계에 공지된 방법에 따라 통상의 기술자에 의해 합성할 수 있다.
Figure pct00112
Figure pct00113
Figure pct00114
Figure pct00115
Figure pct00116
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Figure pct00118
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Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
Figure pct00127
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Figure pct00145
Figure pct00146
Figure pct00147
Figure pct00148
본 발명은 하기 실시예로 추가로 예시되며, 이는 아직 실시 또는 시험되지 않을 수 있다. 하기 예시되는 방법은 또한 아직 실시 또는 시험되지 않을 수 있는 본원에 공개된 화합물로 추론될 수 있다. 다양한 입체화학적 배열이 하기 나타나 있고, 모든 라세믹, (R), (S), 시스, 및 트랜스 이성질체가 간주되는 것으로 제시됨을 의미한다.
Figure pct00149
Figure pct00150
Figure pct00151
Figure pct00152
Figure pct00153
염 및 다형체
실시예 1 자유 염기 형태는 고습도에 노출시 조해되고 시간의 경과에 따라 주위 조건에서 분해되는 불안정, 무정형 및 흡습성 재료이다. 실시예 1 의 각종 로트(lot) 를 합성 직후 HPLC 로 분석하고 (1-24 시간 후합성으로부터 분석), 추후에 시간 단위 당 순도에 대해 재시험하였다. 결과가 표 3 에 제시되어 있다.
Figure pct00154
하기 염 및 다형체 실험에서, 하기 반대이온은 하기 염을 형성하고, 하기와 같이 축약된다: 2,5-디히드록시벤조산 - 디히드록시벤조에이트 - DHBA; 아디프산 - 아디페이트 염 - ADA; 벤젠술폰산 - 벤젠술포네이트 또는 베실레이트 염 - BSA; 벤조산 - 벤조에이트 염 - BA; 카프릴산 - 카프릴레이트 - CYA; 시트르산 - 시트레이트 - CA; D-글루쿠론산 - 글루쿠로네이트 - GA; 에탄술폰산 - 에탄술포네이트 또는 에실레이트 - ESA; 푸마르산 - 푸마레이트 - FUA; 갈락타르산 - 갈락타레이트 - GA; 글리콜산 - 글리콜레이트 - GLYA; 히푸르산 - 히푸레이트 - HPA; 염산 - 히드로클로라이드 - HCl; 케토글루타르산 - 케토글루타레이트 - KGA; L-아스코르브산 - 아스코르베이트 염 - ASBA; L-아스파르트산 - 아스파르테이트 - ASP; L-글루탐산 - 글루타메이트 - GLU; L-락트산 - 락테이트 - LA; L-말산 - 말레이트 - MA; L-타르타르산 - 타르트레이트 - TAR; 말레산 - 말레에이트 - MEA; 말론산 - 말로네이트 - MLNA; 니코틴산 - 니코티네이트 - NA; 오로트산 - 오로테이트 - ORA; 옥살산 - 옥살레이트 - OXA; 인산 - 포스포레이트 - PHOA; 프로피온산 - 프로피오네이트 - PROA; p-톨루엔 술폰산 (1 수화물) - 토실레이트 - pTSA; 숙신산 - 숙시네이트 - SUCA; 황산 - 술페이트 - SUL 또는 SO4; 및 티오시안산 - 티오시아네이트 - TCA. 염은 화학량론적 비로, 예를 들어 1:1 (모노-염) 또는 2:1 (비스-염) 로 반대이온들 간에 형성될 수 있다.
실시예 1 의 염의 제조
염 형태를 냉각, 성숙, 증발 및 안티-솔벤트 첨가를 포함하는 기법 및 각종 다양한 용매로부터 제조하였다. 모노 및 비스 염의 형성 가능성은 또한 수많은 반대이온에 대하여 연구되었다.
용매. 실시예 1 을 재료가 완전 용해될 때까지 또는 최대 100 vol. 가 사용될 때까지 용매 (2-프로판올 (IPA), 아세톤, 메틸에틸 케톤, 에틸 아세테이트, 테트라히드로푸란, 아세토니트릴, 1,4-디옥산, 90:10 IPA:물, 90:10 THF:물, tert-부틸메틸 에테르 (MTBE), 및 n-헵탄) 의 부피를 증가시킴으로 처리하였다. 용매의 각 첨가 후에, 시스템을 25℃ 에서 10 min 동안 교반한 후, 용매의 새 앨리쿼트를 첨가하였다. 실시예 1 은 2-프로판올 (IPA), 아세톤, 메틸에틸 케톤, 에틸 아세테이트, 테트라히드로푸란, 아세토니트릴, 1,4-디옥산, 90:10 IPA:물, 및 90:10 THF:물에 용이하게 용해성이었다 (10 vol. 용매 중에서 용이하게 용해). MTBE 및 n-헵탄은 실시예 1 이 100 vol. 용매에서 용해성이 없는 경우 안티-솔벤트로서 확인되었다.
히드로클로라이드 염. 실시예 1 의 용액을 니트 HCl (37 wt% (12M), 4.8 μL) 로 처리하였다. 이후, 샘플을 25℃ 에서 1 시간 동안 교반하였다. 용액을 냉장고 (약 4℃) 에서 24 시간 동안 냉각하였다. 현탁물이 수득되지 않은 경우, 샘플을 이후에 4 일 동안 8-시간 사이클로 주위/50℃ 에서 성숙시켰다 (Section 8.11). 수득한 임의의 고체를 XRPD 로 분석하였다. 각종 용매 중의 실시예 1 의 용액에 HCl 을 첨가하는 경우, 수많은 샘플은 침전물을 형성하였으며, 추가 교반 후에 검이 되었다. XRPD 에 의한 이들 고체의 분석은 모두가 무정형인 것으로 확인되었다. 결과가 표 4 에 제시되어 있다.
Figure pct00155
제 1 염 실험. 수 개의 염 실험을 착수해 실시예 1 의 안정, 비흡습성 결정성 형태가 식별될 수 있는지를 측정하였다. 다양한 결정성을 갖는 염을 HCl, 인산, 황산, L-타르타르산, 푸마르산, p-톨루엔술폰산 및 옥살산으로부터 단리하였다. 일반적으로, 단리된 고체의 결정성은 불량하였다.
염 실험 1. 실시예 1 을 용매 (2.4 mL 중 240 mg, 10 부피) 중에 용해시켜 스톡 용액을 형성하였고, 이후 바이알 내에 분배하였다 (바이알 당 400 μL/~40 mg). 스톡 용액을 사용해 1 당량의 반대이온 (염산 (HCl), 황산 (H2SO4 또는 "SO4"), 메탄술폰산 (메실레이트 또는 "MSA"), 인산 (H3PO4 또는 "PHOA"), 및 L-타르타르산 (TAR) 의 경우, 1M 에 대해서 77 μL; 푸마르산 (FUA) 의 경우, 0.5M 에 대해서 154 μL) 으로 용액을 처리하였다. 이후, 용액/현탁물을 0.2℃/min 에서 0℃ 로 냉각하고, 0℃ 에서 밤새 교반하였다. 수득한 고체를 XRPD 로 분석한 후, 무정형 또는 분량한 결정성인 것들을 5 일 동안 성숙시켰다. 0℃ 로 냉각 후에, 투명 용액 또는 검이 수득되는 경우, 모액을 바이알로부터 제거하고, 둘로 나누고, 안티-솔벤트 (MTBE 또는 헵탄, 400 μl) 를 앨리쿼트 각각에 첨가하였다. 안티-솔벤트 첨가 후에, 샘플을 5 일 동안 성숙시켰다. 성숙 후에, 투명 용액 및 검을 주위 조건에서 증발시켰다. 현탁물을 여과하고, 공기-건조시키고, XRPD 로 특성화하였다. 임의의 수득한 결정성 고체를 고해상도 XRPD, 1H NMR, HPLC 및 40℃ 및 75% RH 에서 1 주 저장으로 특성화하였다.
결정성 고체를 IPA 중에 황산, 인산, L-타르타르산을 포함하는 실험으로부터 단리하였다. 추가의 약한 결정성 고체가 또한 에틸 아세테이트 중에 푸마르산으로부터 확인되었다. 모든 기타 고체가 무정형인 것으로 확인되었지만, 이들 중 일부가 NMR 로 피크 이동 (염 형성을 나타냄) 을 보였다. 결과가 표 5 에 제시되어 있다.
Figure pct00156
Figure pct00157
수득한 16 개의 고체 중에서, 4 개가 부분 결정성인 것으로 확인되었다: IPA 중에 황산, 인산, L-타르타르산. 추가의 약한 결정성 고체가 또한 에틸 아세테이트 중에 푸마르산으로부터 확인되었다. 모든 기타 고체가 무정형인 것으로 확인되었다. XRPD 로 분석한 모든 샘플을 1 주 동안 40℃ 및 75% RH 에서 저장해 두었다. 그러나, 1 일 후에 타르트레이트를 제외한 모든 샘플이 조해되었고, 따라서 추가로 특성화하지 못했다. 타르트레이트를 40℃ 및 75% RH 에서 1 주 후에 XRPD 로 분석하고, 형태의 변화 없음이 관찰되었고, TGA 및 DSC 로 추가 분석하였다. 열적 분석은 TGA 에서 초기 중량 손실을 보였고, 이는 DSC 에서 광대한 흡열에 상응한다. 이는 샘플로부터의 물 및 IPA 의 손실로 인한 것 같다. HPLC 에 의한 샘플의 순도는, 인풋 실시예 1 에서 93.6%1 와 비교시 89.7% 였다.
실험 2. 실시예 1 을 주위 조건에서 메틸에틸 케톤 (MEK) 또는 아세토니트릴 (MeCN) (200 μl 중 20 mg, 10 vol) 중에 용해시켰다. 이후, 용액을 50℃ 로 가열하고, 1.1 또는 2.1 eq 의 산으로 처리하고, 상기 온도에서 1 시간 동안 교반하였다. 이후, 수득한 용액/현탁물을 0.1℃/min 에서 5℃ 로 냉각하고, 밤새 유지하였다. 수득한 임의의 고체를 XRPD 로 분석한 후, 무정형 또는 불량한 결정성인 것들을 8-시간 사이클로 50℃/주위 사이에서 성숙시켰다. 임의의 투명 용액을 주위 조건에서 서서히 증발되도록 두었다. 샘플이 증발되어 검이 형성되는 경우, 이들을 IPA (10 vol, 200 μL) 중에 용해시킨 후, 성숙시켰다. 검이 존재하는 임의의 용액을 또한 8 시간 사이클로 50℃/주위 사이에서 성숙시켰다. 임의의 수득한 결정성 고체를 고해상도 XRPD, NMR, HPLC, IC (무기 반대이온의 경우) 및 40℃ 및 75% RH 에서 1 주 저장에 의해 특성화하였다. 표 4 는 시험되는 실험 조건을 나타낸다.
Figure pct00158
하기 실험을 MEK 중에 1:1 eq 로 수행하였다.
Figure pct00159
하기 실험을 MEK 중에 2:1 eq 로 수행하였다.
Figure pct00160
하기 실험을 MeCN 중에 1:1 eq 로 수행하였다.
Figure pct00161
하기 실험을 MeCN 중에 2:1 eq 로 수행하였다.
Figure pct00162
전체 10 개의 고체를 MEK 중에 냉각으로부터 수득하였다. 2.1 eq p-톨루엔 술폰산 1 수화물을 사용해 이들 중 하나는 결정성 (pTSA 형태 1) 인 것으로 확인되었고, 아스코르브산으로부터 또다른 것은 약한 결정성인 페이스트였다. 갈락타르산으로부터 수득한 고체는 상기 반대이온에 관한 참조 회절도와 일치하였다. 냉각으로부터 모든 기타 고체는 무정형이었다. 성숙 후에, 결정성 고체는 황산 (Sulf 패턴 1) 및 옥살산 (OXA 형태 1) 의 1.1 eq 첨가로부터 샘플에서 확인되었다.
냉각 후에, 7 개의 고체를 MeCN 으로부터 단리하고, XRPD 로 분석하였다. 2.1 eq 의 톨루엔 술폰산 1 수화물로부터의 고체는 결정성인 것으로 확인되었고, MEK 실험으로부터 수득한 기타 토실레이트 고체 (pTSA 패턴 1) 및 산에 관한 참조 패턴과 상이한 XRPD 회절도 (pTSA 형태 2) 를 나타냈다. 황산 및 옥살산의 1.1 당량 첨가로부터의 샘플은 약한 결정성인 것으로 확인되었고, 결정성은 성숙 후에 개선되었다. 술페이트의 경우 회절도 (Sulf 패턴 3) 는 초기 실험 및 MEK 에서 이전에 관찰된 것 (각각 Sulf 패턴 1 및 2) 과 상이하였다. 냉각 및 성숙 후에 수득한 모든 기타 고체는 무정형이었다.
MEK 및 MeCN 중에서 냉각 시에 수득한 투명 용액을 증발되도록 두었고, 검을 수득하였다. 이들을 IPA 중에 재용해시키고, 성숙시켰다. 성숙 후에, 샘플의 일부에서 고체가 수득되었다. 그러나, 이들 고체 모두는 첨가되는 상이한 반대이온 (벤조산 및 숙신산) 및 산 등가물을 가짐에도 불구하고 동일한 XRPD 패턴을 가졌다. 1H NMR 은, 이들 샘플 모두가 동일한 결정성 생성물로 분해되었음을 확인하였다 (미량의 반대이온 존재). 이들 샘플의 분해는 아마도 초기 냉각 후에 겪는 이들 샘플의 추가 처리량에 의해 (승온에서) 야기된다. 염 형성이 불완전한 경우, 불안정한 것으로 알려진 무정형 자유 염기의 존재는 또한 미공지된 결정성 화합물로의 분해에 기여할 수 있다.
실시예 1 및 S36 (1:1 eq 로 MEK 로부터 숙시네이트) 을 상기 분해의 추가 이해를 위해 다양한 1D 및 2D NMR 실험으로 특성화하였다. 단리된 소량의 S36 으로 인해, 13C NMR 스펙트럼은 완전히 할당될 수 없었다. 플루오라이드를 갖는 페닐 고리가 손실된 것이 분명하였다. 주 분해 생성물은 필시 상기 고리의 손실 후의 1 차 아민이다.
염의 특성화. 결정성 및 부분 결정성 염을 다양한 기법을 추가 사용해 특성화하였다.
토실레이트. 토실레이트 염 둘 모두에 대한 초기 HPLC 분석은, 순도가 81.4% 인 실시예 1 과 비교시 염 형성의 순도가 88.0% 및 90.6% 로 증가되었음을 나타냈다. 확인된 두 형태 중에서, pTSA 형태 2 가 보다 안정하다. 기타 염, pTSA 형태 1 은 단리 시에 무정형이 되고, 또한 40℃ 및 75%RH 에서 저장 후에 pTSA 형태 2 로 전환되었다. 결과가 하기 표 8 에 나타나 있다.
Figure pct00163
술페이트. 술페이트 둘 모두는 40℃ 및 75% RH 에서 저장 시에 조해된 초기 염 실험에서 수득한 술페이트 (Sulf 패턴 1) 와 일치하지 않는 상이한 XRPD 회절도 (Sulf 패턴 2 및 3) 를 갖는 것으로 확인되었다. 40℃ 및 75% RH 에서 저장 후에, 고체 둘 모두는 동일한 회절도, Sulf 패턴 2 를 나타냈다. 결과가 하기 표 9 에 나타나 있다.
Figure pct00164
옥살레이트. 옥살레이트 둘 모두는 동일한 XRPD 회절도 (OXA 패턴1) 를 나타내지만, 기타 염에서와 같이 MEK 로부터의 고체는 단리 시에 일부 결정성을 잃는다. 40℃ 및 75% RH 에서 저장 후에, 옥살레이트 둘 모두는 동일한 형태 (OXA 형태 2) 로 변하였다. 결과가 하기 표 10 에 나타나 있다.
Figure pct00165
스케일-업. 3 개의 가장 결정성인 염 형태, 모노 타르트레이트 (TAR 형태 1), 모노 옥살레이트 (OXA 형태 1), 및 비스 토실레이트 (pTSA 형태 2) 를 스케일업 및 추가의 특성화를 위해 선별하였다. 상기는 예비 다형성 평가를 포함하였다.
타르트레이트. TAR 형태 1 은 스케일업 시에 수득되지 않았다. 대신에, 신규의 용매화물 형태, TAR 형태 2 를 단리하였다. 상기 형태는 결정성의 손실, 새로운 형태 (TAR 형태 3) 로의 전환 및 관찰된 순도의 유의한 하락으로 습도에 불안정한 것으로 확인되었다.
제 1 실험에서, 실시예 1 을 주위 조건에서 IPA (1 mL 중 100 mg, 10 vol) 중에 용해시켰다. 이후, 용액을 50℃ 로 가열하고, 1.1 eq 의 L-타르타르산 (THF 중 1M, 212 μL) 으로 처리하고, 50℃ 에서 1 시간 동안 교반하였다. 이후, 수득한 현탁물을 0.1℃/min 에서 밤새 5℃ 로 냉각하였다. XRPD 는 단지 무정형 고체만을 나타냈으며, 이를 이후에 7 일 동안 8-시간 사이클로 50℃/주위 사이에서 성숙시켰다. 1H NMR (DMSO-d6) 은 단지 자유 염기로의 피크 이동 (~0.5 eq IPA) 을 나타냈다. 결정성 타르트레이트는 추가 성숙 후에도 상기 실험에서 수득되지 않았다. DSC 에 의한 무정형 타르트레이트의 분석은 결정화 증거를 나타내지 않았다.
제 2 실험에서, 실시예 1 을 주위 조건에서 IPA (10 vol., 5 mL 중 500 mg) 중에 용해시켰다. 이후, 용액을 25℃ 에서 교반하고, 1.1 eq 의 L-타르타르산 (1030 μL, THF 중 1 M) 으로 처리하였다. 이후, 샘플을 1 시간 동안 25℃ 에서 교반하고, 0.2℃/min 에서 0℃ 로 냉각하고, 0℃ 에서 밤새 두었다. 수득한 임의의 고체를 XRPD 로 분석한 후, 2 일 동안 8 시간 사이클로 50℃/주위 사이에서 성숙시켰다. 샘플의 앨리쿼트를 취하고, 결정성의 모니터링을 위해 성숙 동안 XRPD 로 분석하였다. 샘플은 결정성이 낮았고, 2 일 후에 결정성 타르트레이트 염 (S7) 으로 시딩되었다. 시딩된 샘플을 추가적인 4 일 동안 성숙으로 되돌린 후, 벌크 샘플을 여과하고, 진공 하에 주위 조건에서 밤새 건조시켰다. 임의의 수득한 결정성 고체를 특성화하였다.
타르트레이트는 냉각 후에 약한 결정성인 것으로 확인되었으며, 2 일 성숙 후에 개선이 나타나지 않았다. 샘플을 시딩하여 결정성 재료의 형성을 도왔지만, 추가적인 4 일 성숙 후에 XRPD 분석은 샘플이 무정형인 것을 나타냈다. 단리 및 건조 후에, 고해상도 XRPD 는 샘플이 새로운 형태, TAR 형태 2 로 결정화되었음을 나타냈다.
타르트레이트 염은 1H NMR 에 의해 ~1 eq 의 IPA 가 함유되었고, 이것이 새로운 XRPD (TAR 형태 2) 회절도와 결합되어 상이한 형태 (필시 용매화물됨) 가 수득되었음을 확인하였다. TGA 에서 제 1 중량 손실 후의 지점으로 가열 (75℃) 및 XRPD 로 분석 시에, TAR 형태 1 및 2 의 혼합물을 관찰하였다. 상기 재료의 1H NMR 은 존재하는 IPA 의 양의 감소를 나타냈다. VT-XRPD 는, 샘플이 120℃ 에서 다시 변하였음을 나타냈는데, 이는 DSC 에서 광대한 흡열의 종료에 상응한다. 기타 복잡한 열적 거동은 분해 전의 발열로 주목되었다. GVS 는, 타르트레이트가 ~30% w/w 물을 흡수함으로 매우 흡습성인 것을 나타냈으며, GVS 후 XPPD 에 의해 결정성의 감소 및 형태의 변화가 주목되었다. 저장 조건 둘 모두는 결정성 및 형태의 변화를 유도하였지만, 40℃ 및 75% RH 에서의 저장은 또한 순도의 유의한 손실 (>30%) 을 야기하였다. 상기 실험으로부터의 결과가 하기 표 12 에 나타나 있다.
토실레이트. 비스 토실레이트, pTSA 형태 2 를 성공적으로 스케일업하였고, 연구된 염 모두는 최적의 고체 상태 특성을 나타냈다. 상기 형태는 채널 수화물인 것으로 여겨지는데, 물이 결정성 형태의 변화 없이 흡수될 수 있고 구조로부터 손실될 수 있기 때문이다. 연구 동안 관찰된 토실레이트의 유일한 기타 결정성 형태, pTSA 형태 1 은 상승된 온도 및 습도에서 저장 시에 pTSA 형태 2 로 전환되었다. 토실레이트에 대한 제한된 안정성 연구는, 자유 형태에 비해 개선된 화학적 안정성을 가짐을 나타냈다. 비스-토실레이트 염은 상응하는 자유 염기보다 높은 순도를 가졌다.
제 1 실험에서, 실시예 1 을 주위 조건에서 MEK 또는 MeCN (1 mL 중 100 mg, 10 vol) 중에 용해시켰다. 이후, 용액을 50℃ 로 가열하고, 2.1 eq 의 p-톨루엔 술폰산 1 수화물 (THF 중 1M, 405 μL) 로 처리하고, 일정한 온도에서 1 시간 동안 교반하였다. 이후, 수득한 현탁물을 0.1℃/min 에서 밤새 5℃ 로 냉각하였다. 수득한 임의의 고체를 XRPD 로 분석한 후, 무정형 또는 약한 결정성인 것들을 7 일 동안 8-시간 사이클로 50℃/주위 사이에서 성숙시켰다. 임의의 수득한 결정성 고체를 고해상도 XRPD, 1H NMR, HPLC, TGA, DSC 및 40℃ 및 75%RH 에서 1 주 저장에 의해 특성화하였다. 토실레이트의 냉각 후에, 고체는 이전에 관찰된 바와 동일한 XRPD 회절도, pTSA 형태 1 및 2 를 나타냈다. 그러나, 결정성의 시도 및 개선을 위한 추가의 성숙 후에, 토실레이트 염 둘 모두는 XRPD 에 의해 pTSA 형태 2 와 일치하였다. 상기 염은 두 사례 모두에서 자유 염기보다 높은 순도를 갖는 비스 토실레이트인 것으로 확인되었지만, MeCN 으로부터의 고체가 특히 양호하였다. 결과가 하기 표 11 에 나타나 있다.
Figure pct00166
토실레이트 염의 TGA 에서 제 1 중량 손실은 DSC 에서 광대한 흡열에 상응한다. 상당량의 잔류 용매를 나타내지 않는 1H NMR 을 기반으로, 이는 pTSA 형태 2 가 수화물 형태임을 시사하였다. 토실레이트의 가변 온도 XRPD (VT-XRPD) 는 170℃ 이하에서 재료의 결정성 형태에 대한 변화 없음을 나타냈다 (그 이후에는 샘플은 용융됨). 이는, pTSA 형태 2 가 물이 결정성 격자에 영향을 미치지 않으면서 구조 밖으로 이동할 수 있는 채널 수화물일 수 있음을 나타낸다.
제 2 실험에서, 실시예 1 을 주위 조건에서 아세토니트릴 (10 vol., 5 mL 중 500 mg) 중에 용해시켰다. 이후, 용액을 50℃ 에서 교반하고, 2.1 eq 의 p-톨루엔술폰산 1 수화물 (2060 μL, THF 중 1 M) 로 처리하였다. 이후, 샘플을 1 시간 동안 50℃ 에서 교반하고, 0.1℃/min 에서 5℃ 로 냉각하고, 5℃ 에서 밤새 두었다. 수득한 임의의 고체를 XRPD 로 분석한 후, 1 일 동안 8 시간 사이클로 50℃/주위 사이에서 성숙시켰다. 샘플의 앨리쿼트를 취하고, 결정성의 모니터링을 위해 성숙 동안 XRPD 로 분석하였다. 결정성의 주목할만한 변화가 성숙 전 및 후의 XRPD 회절도 사이에서 관찰되지 않았다. 벌크 샘플을 여과하고, 진공 하에 주위 조건에서 밤새 건조시켰다. 임의의 수득한 결정성 고체를 특성화하였다. 토실레이트가 냉각 후에 결정성이었지만, 성숙시켜 결정성의 임의의 증가가 수득되었는지를 확인하였다. 샘플에 대한 변화 없음이 XRPD 에 의해 보여진 경우, 1 일 후의 성숙으로부터 샘플을 제거하였다.
토실레이트의 XRPD 회절도는 기대되는 바와 같이 pTSA 형태 2 와 일치한 것으로 확인되었다. DSC 에서 광대한 흡열에 상응한 TGA 에서 중량 손실은, 상기가 수화물 형태임을 나타냈다. 이는 상당량의 잔류 용매를 나타내지 않는 1H NMR 에 의해 추가로 지지된다. 샘플은 DSC 에서 용융, 흡열 (개시 170℃) 을 나타낸다. 재료의 GVS 는, 전 사이클에 대해 ~5% w/w 물만을 흡수함으로 샘플이 물의 완전 가역적 흡수 및 손실을 갖는 것으로 나타낸다. 형태의 변화 없음이 관찰되었다. 40℃ 및 75% RH, 및 25℃ 및 95% RH 둘 모두에서의 저장은 샘플의 형태 또는 순도에 있어서 변화 없음을 나타냈다. 상기 실험으로부터의 결과가 하기 표 12 에 나타나 있다.
옥살레이트. 새로운 형태의 옥살레이트를 또한 스케일업 시에 수득하였다. OXA 형태 3 으로 명명되는 상기 재료는 초기 실험에서 단리된 OXA 형태 1 과 매우 유사하였다. OXA 형태 3 은 습도에 노출 시에 보다 고수화물로 용이하게 전환되는 수화물 형태인 것으로 여겨진다. 상기 보다 고수화물, OXA 형태 2 는 흡습성이지만, 상승된 습도에서 안정하다. 상기 형태를 또한 다형성 평가에서 THF:물 (95:5) 중에서 OXA 형태 3 의 성숙에 의해 수득하였다.
실시예 1 을 주위 조건에서 아세토니트릴 (10 vol., 5 mL 중 500 mg) 중에 용해시켰다. 이후, 용액을 50℃ 에서 교반하고, 1.1 eq 의 옥살산 (1030 μL, THF 중 1 M) 으로 처리하였다. 이후, 샘플을 1 시간 동안 50℃ 에서 교반하고, 0.1℃/min 에서 5℃ 로 냉각하고, 5℃ 에서 밤새 두었다. 수득한 임의의 고체를 XRPD 로 분석한 후, 2 일 동안 8 시간 사이클로 50℃/주위 사이에서 성숙시켰다. 샘플의 앨리쿼트를 취하고, 결정성의 모니터링을 위해 성숙 동안 XRPD 로 분석하였다. 결정성의 주목할만한 변화가 성숙 전 및 후의 XRPD 회절도 사이에서 관찰되지 않았다. 벌크 샘플을 여과하고, 진공 하에 주위 조건에서 밤새 건조시켰다. 임의의 수득한 결정성 고체를 특성화하였다. 옥살레이트가 냉각 후에 결정성이었지만, 성숙시켜 결정성의 임의의 증가가 수득되었는지를 확인하였다. 샘플에 대한 변화 없음이 XRPD 에 의해 보여지는 경우, 2 일 후의 성숙으로부터 샘플을 제거하였다.
옥살레이트는 일부 차이를 가지면서 OXA 형태 1 과 유사한 XRPD 회절도를 갖는 것으로 확인되었다. OXA 형태 3 은 OXA 형태 1 의 보다 결정성인 샘플일 수 있다. DSC 에서 광대한 흡열 및 TGA 에서 제 1 중량 손실은, 옥살레이트가 수화물 형태임을 시사한다. 옥살레이트 형태는 140℃ 이하의 온도까지는 변화 없는 것으로 확인되었는데, 이는 물이 채널에 있고 결정 구조 내에 결합되지 않았음을 시사한다. 타르트레이트에서와 같이, 옥살레이트는 DSC 에서 분해 전에 발열을 나타냈다. 옥살레이트 형태가 온도에 의해 변하지 않지만, 습도에 의해서는 변한다. 40℃ 및 75% RH, 및 25℃ 및 95% RH 둘 모두에서의 저장에서 재료 형태가 OXA 형태 2 로 변하였는데, 샘플의 순도에는 영향을 미치지 않았다. OXA 형태 2 는 보다 고수화물 형태일 것 같다. GVS 는 전 사이클 동안 샘플이 ~12% w/w 물을 흡수함으로써 흡습성임을 나타내고, GVS 후 XRPD 는, GVS 후에 OXA 형태 2 로의 형태의 변화를 나타낸다. 상기 실험으로부터의 결과가 하기 표 12 에 나타나 있다.
상기 보다 큰 스케일-업 실험으로부터의 결과가 하기 표 12 에 나타나 있다.
Figure pct00167
Figure pct00168
무정형 실시예 1 (10 mg) 를 용매의 부피를 증가시면서 25℃ 에서 교반 하에 처리하였다 (표 #). 투명 용액을 대부분의 경우에서 관찰하였다. 용해가 관찰되지 않은 이들 사례에서, 샘플을 50℃ 에서 10 분 동안 두었다. 여전히 현탁물 중의 모든 샘플에 추가의 10 부피의 용매를 첨가하고, 샘플을 25℃ 에서 두었다. 이후, 온도를 다시 한번 50℃ 로 증가시키고, 실험이 종료될 때까지 유지하였다. 추가의 용매를 재료가 완전 용해될 때까지 또는 최대 70 부피가 사용될 때까지 첨가하였다. 이후, 염산을 모든 샘플에 첨가하였다 (1.1 당량). 냉각 램프를 0.1℃/min 에서 5℃ 로 설정하고, 용액 또는 오일을 상기 온도에서 밤새 교반하여, 오일 또는 용액을 수득하였다.
용액을 증발 건조시키거나 (주위 조건), 또는 안티-솔벤트 (TBME, 150μL, 25℃ 에서 교반) 로 처리하였다. 임의의 오일 또는 검을 초음파처리에 적용한 후, 각 온도에서 약 4 시간 동안 주위 내지 50℃ 에서 성숙시켰다 (Section 7.7). 이어서, 오일을 안티-솔벤트로 처리하고, 상기 조건에서 추가로 성숙시켰다. 결과가 하기 표 13 에 나타나 있다.
Figure pct00169
Figure pct00170
무정형 실시예 1 의 용해를 25℃ 에서 대부분의 용매 중에서 관찰하였다 (10 부피). 예외는 물, 디에틸 에테르 및 시클로헥산이었으며, 여기서는 오일이 결국 형성되었다. 염산의 첨가 후에 고체가 수득되지 않았다. 혼탁도를 산의 첨가 시에 대부분의 사례에서 관찰하였지만, 오일은 냉각 램프 후에 및 또한 차후의 초음파처리, 안티-솔벤트 첨가 (교반 하에) 및/또는 성숙 후에 관찰되었다.
제 2 염 실험. 무정형 실시예 1 을 25℃ 에서 1-프로판올, 아세톤 또는 이소프로필 아세테이트 (13.8mL 중 1380 mg, 10 부피) 중에 용해시켰다. 30 mg 실시예 1 (300μL) 에 대한 등가물을 바이알 내에 피펫팅하며, 이를 이후에 50℃ 에서 두었다. 선택된 산을 50℃ 에서 첨가하였다. 온도를 1 시간 동안 유지하고, 0.1℃/min 에서 5℃ 로 냉각 램프를 밤새 설정하였다.
관찰된 임의의 침전물을 여과하고, XRPD 로 분석하였다. 잔존 오일 또는 용액을 안티-솔벤트 첨가에 적용하였다. TBME (10 부피) 를 1-프로판올 실험에서 안티-솔벤트로서 사용하였다. n-헵탄 (10 부피) 은 아세톤 실험에서 첨가되는 안티-솔벤트이고, 헥산 (7 부피) 은 이소프로필 아세테이트 실험에서 첨가되었다. 샘플을 적용가능한 경우 성숙, 냉각 또는 증발로 추가 처리하였다. 마지막으로, 모든 오일 및 검을 진공 하에 실온에서 1 주에 걸쳐 건조시켰다. 추가의 용매 (IPA/5% 물, 니트로메탄 또는 톨루엔, 8 부피) 를 첨가하였다. 주위 조건 내지 50℃ 에서 추가 성숙을 전체 11 일 동안 각 온도에서 4 시간 설정하였다.
결정성 또는 부분 결정성 재료를 술페이트, 벤젠술포네이트, 옥살레이트, 푸마레이트, L-말레이트, 시트레이트 및 에탄술포네이트 염에 대해서 단리하였다. 옥살레이트 염은, 이들 염이 이전의 염 선별 프로젝트에서 보고되었던 사실로 인해 특성화하지 않았다.
수많은 상이한 XRPD 패턴을 상기 실험에서 관찰된 것 (SUL3) 을 포함해 시도되는 술페이트 염에 대해서 관찰하였다. 벤젠술포네이트 염의 한 형태를 3 개의 사례에서 1-프로판올 및 아세톤으로부터 관찰하였다. 푸마레이트 염의 한 형태를 산의 사용량과 독립적으로 IPAc/TBME 로부터 관찰하였다. FUA2 로서 나타낸 또다른 불량한 결정성 푸마레이트를 IPA/5% 물 중에서 성숙 후에 관찰하였다. 마지막으로, 부분 결정성 L-말레이트, 시트레이트 및 에탄술포네이트 염을 관찰하였다. 결과가 표 12a - 12c 에 요약되어 있다.
1-프로판올 중에서 수행된 염 실험으로부터의 결과가 하기 표 14a 에 제시되어 있다.
Figure pct00171
Figure pct00172
Figure pct00173
아세톤 중에서 수행된 염 실험으로부터의 결과가 하기 표 14b 에 제시되어 있다.
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176
이소프로필 아세테이트 중에서 수행된 염 실험으로부터의 결과가 하기 표 14c 에 제시되어 있다.
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
IPA/5% 물로부터의 성숙 후에 수득한 푸마레이트 염 (FUA2) 은 불량한 결정성이었다. 1H NMR 분석을 수행하였는데, 이는 염 형성이 발생할지라도 (화학적 이동이 기타 염과 일치함), 과잉의 푸마르산이 존재한다는 것을 시사한다.
IPAc 중에서 카프릴산으로부터 수득한 불량한 결정성인 고체는 이전 실험 동안 식별된 결정성 불순물과 일치하였다. 1H NMR 스펙트럼은 상기 프로젝트를 통틀어 형성된 기타 염과 일치하지 않으며, 이는 분해를 시사한다 (적분이 상이하고, 화합물 또는 카프릴산에 기인하지 않은 수많은 추가의 피크가 존재함).
충분한 재료가 이용가능한 경우, 술페이트, 벤젠술포네이트, 푸마레이트, 에탄술포네이트, L-말레이트, 및 시트레이트 염의 기본 특성화를 수행하였다. 불충분한 재료가 특성화에서 이용가능한 사례에서는, 제조를 약간 더 큰 스케일로 하여 반복하였다.
염의 특성화. 상기 연구를 통틀어 수득한 결정성 또는 부분 결정성의 신규의 염을 추가로 특성화하였다.
무정형 실시예 1 을 50℃ 에서 1-프로판올 또는 아세톤 (0.6mL 중 60mg, 10 부피) 중에 용해시켰다. 선별된 산 (상세하게는, 하기 표 참조) 을 50℃ 에서 첨가하였다. 침전물을 50℃ 에서 술페이트 염 형성 시도 둘 모두로부터 관찰하였다. 침전이 관찰된 경우, 안티-솔벤트 (TBME, 0.6mL, 10 부피) 를 50℃ 에서 벤젠술포네이트 염 시도에 첨가하였다. 온도를 1 시간 동안 유지하고, 0.1℃/min 에서 5℃ 로 냉각 램프를 밤새 설정하였다. 고체를 여과하고, 진공 하에 밤새 주위 조건에서 건조시키고, XRPD 로 분석하였다. 결과가 하기 표 15 에 나타나 있다.
Figure pct00180
상기 연구를 통틀어 수득한 결정성 또는 부분 결정성 염을, 예를 들어 화학량론, 용매 함량, HPLC 에 의한 화학적 순도 및 상승된 온도 및 습도에서의 안정성에 대해 추가로 특성화하였다 (247).
술페이트. SUL3 및 SUL5 는 둘 모두 결정성이고, 모노 염으로서 이온 크로마토그래피로 확인하였다. 둘 모두의 재료는 4 일 동안 40℃/75% RH 에서 저장 후에 고체로서 있지만, XRPD 로 변화를 관찰하였다 (SUL3 은 변화를 보이지만, SUL5 는 무정형이 됨). 둘 모두의 재료는 열중량측정 실험에서 가열시 중량 손실 (각각 190℃ 미만에서 6.2%, 및 175℃ 미만에서 4.4%) 을 나타냈다. SUL3 은 또한 1H NMR 로 대략 1 몰 당량의 1-프로판올을 함유하였는데, 이는 용매화물 형태일 수 있음을 나타낸다. 상기 형태의 HPLC 분석은 98.8% 의 순도를 나타냈다.
벤젠술포네이트. BSA1 은 부분 결정성이고, 1H NMR 에 의해 비스-벤젠술포네이트 염으로서 확인하였다. DSC 는 광대한 흡열을 보인 후 (150℃ 미만에서 5.1% 의 TG 중량 손실과 일치함), 보다 급격한 흡열을 보였다 (115.5℃ 에서 개시). 상기 재료는 밤새 40℃/75% RH 에서 저장 시에 조해되었고, 97.8% 의 순도를 가졌다.
푸마레이트. FUA1 은 불량한 결정성이고, 1H NMR 로 모노-푸마레이트 염으로서 확인하였다. 3.6% w/w 의 TG 중량 손실을 또한 150℃ 미만에서 관찰하였다. 샘플의 DSC 분석은 다중 미분해 이벤트로 복잡하였다. 상기 재료는 94.3% 의 순도를 갖고, 밤새 40℃/75% RH 에서 저장 시에 조해되었다.
부분 결정성 ESA1 은 비스-에탄술포네이트 염으로서 확인하였다. 상기 재료는 밤새 40℃/75% RH 에서 저장 시에 조해되었다. 2.8% w/w 의 중량 손실을 150℃ 미만에서 관찰하였다.
부분 결정성 MA1 을 또한 특성화하였다 (248). 화학량론은 1H NMR 스펙트럼에서 중복 피크로 인해 정확히 측정될 수 없었다. 상기 재료는 94.7% 의 순도를 갖고, 밤새 40℃/75% RH 에서 저장 시에 조해되었다. 7.4% w/w 의 TG 중량 손실을 150℃ 미만에서 관찰하였다.
마지막으로, 부분 결정성 CA1 을 또한 특성화하였다. 순도는 모든 단리된 염 중에서 최저였고, 그 값은 87.8% 였다. 재료는 또한 밤새 40℃/75% RH 에서 저장 시에 조해되었고, 화학량론은 1H NMR 스펙트럼에서 중복 피크로 인해 정확히 측정될 수 없었다. 결과가 하기 표 16 에 나타나 있다.
Figure pct00181
실시예 1 의 염의 다형체의 제조
예비 다형성 평가를 3 개의 가장 결정성인 염 형태, 모노 타르트레이트 (TAR 형태 1), 모노 옥살레이트 (OXA 형태 1), 및 비스 토실레이트 (pTSA 형태 2) 에서 수행하였다. 각 염을 25℃ 에서 관련 용매 (10 vol, 300 μL 중 30 mg) 로 처리하였다. 샘플을 10 분 동안 교반한 후, 1 시간 동안 50℃ 로 가열하였다. 수득한 현탁물을 24 시간 동안 성숙시키고, 임의의 수득한 용액을 서서히 증발시켰다. 성숙 또는 증발 후에, 고체를 여과하고, 공기-건조시킨 후, XRPD 로 분석하였다. 새로운 XRPD 패턴을 보이는 임의의 고체를 1H NMR, IC (반대이온이 NMR 에서 보이지 않는 경우) 및 단리된 고체의 양이 충분치 않은 경우에 40℃ 및 75%RH 에서 1 주 저장으로 특성화하였다.
타르트레이트. 사용된 용매 및 결과가 하기 표 17 에 나타나 있다.
Figure pct00182
상기 소규모 다형성 평가에서 10 개의 사용된 용매로부터, 타르트레이트 샘플 중 5 개가 형태가 변하였다. DCM 및 니트로메탄으로부터의 샘플은 초기 염 실험에서 이전에 수득한 TAR 형태 1 로 변한다. 새로운 패턴, TAR 형태 3 은 2-메톡시에탄올, THF:물 및 아세톤:물로부터 확인되었다.
제한된 특성화를 샘플에서 수행하였다. 이들 연구는, XRPD 에 의해 TAR 형태 1 과 일치한 샘플이 저장 시에 TAR 형태 3 으로 전환되는 것으로 나타났다. 고해상도 XRPD 에 의해, 2-메톡시에탄올로부터의 샘플이 기타 2 개의 TAR 형태 3 샘플로부터의 회절도와 일부 차이를 나타냈음에 주목하였다. 스케일업된 타르트레이트 염 (TAR 형태 2) 의 특성화 동안 저장 시에 분해된 샘플이 TAR 형태 3 와 유사한 피크를 나타냈음에 주목되어야 한다. 재료 이용가능성으로 인해, 다형성 평가 및 저장 조건 후에 샘플의 순도를 평가할 수 없었다. 결과가 하기 표 18 에 나타나 있다.
Figure pct00183
토실레이트. 사용된 용매 및 결과가 하기 표 19 에 나타나 있다.
Figure pct00184
10 개의 사용된 용매로부터, 토실레이트 샘플 중 9 개에서 결정성 형태의 변화 없음이 주목되었다. THF:물 샘플로부터 무정형 트레이스는 성숙 후에 검이 되었기 때문인 것이다. 상기 경우에, 기타 용매와 달리, 샘플은 50℃ 에서 완전 용해되고, 검은 냉각 시에 침전되었다. 상기 발견은, 상기가 결정성 토실레이트 염의 수득에 양호한 용매 시스템이 아니라는 것을 나타낸다. 상기 소규모 다형성 평가 동안 기타 샘플 중 어느 것도 형태를 변화시키지 않았지만, 실험은 토실레이트 염이 2 개 이상의 형태를 가졌음을 나타냈다.
옥살레이트. 사용된 용매 및 결과가 하기 표 20 에 나타나 있다.
Figure pct00185
옥살레이트 염에서 상기 소규모 다형성 평가에서 사용된 10 개의 용매 중에서, 단 하나의 형태의 변화를 관찰하였다. THF:물로부터의 샘플은 OXA 형태 1 및 3 의 고습도에의 노출 시에 이미 관찰된 OXA 형태 2 인 것으로 확인되었다. 상기 형태가 또다른 수화물 형태의 옥살레이트인 것으로 여겨진다.
결론.
타르트레이트는 온도 및 습도 조건 모두 하에 변화가 확인되었는데, 후자 조건 하에 순도의 하락이 주목된다. 또한, 다형성 평가에서 샘플의 절반이 형태가 변함으로써, 다형성에 대한 경향을 보인다. 타르트레이트는 또한 고흡습성 재료이고, 복잡한 열적 거동을 나타낸다.
옥살레이트는 습도 하에 형태가 바뀌지만, 온도 조건에서는 아니다. 슬러리 실험으로부터 샘플 중 단 하나가 형태가 변하였다. 그러나, 재료는 흡습성이고, 바람직하지 않은 열적 거동을 갖는다.
토실레이트 염, pTSA 형태 2 는 다형성 평가 슬러리를 포함해 대부분의 시험 조건 하에 형태가 변하지 않았다. 상기에 대한 예외는 THF:물 중에서였는데, 여기서는 무정형 고체가 수득되었다. 또한, 이는 실험 과정 동안 식별된 가장 결정성인 염이고, 최적의 고체 상태 특성을 나타낸다.
토실레이트 다형체의 추가 특성화.
우선, 자유 염기 형태의 실시예 1 을 이의 고체 형태 및 화학적 특성의 연구를 위해 특성화하였다. 이전 배치와 일치한, 재료는 무정형이며, 순도는 약 97.6% 였다. 재료는 상승된 저장 조건에서 안정하지 않았다 (25℃/97%RH 및 40℃/75%RH 에서 조해됨). 1H-NMR 은 일반적으로 구조와 일치하고, 물 외에 어떠한 상당량의 잔류 용매도 나타내지 않는다. 물의 양은 KF 에 의해 2.3% 로서 정량화되었다.
무정형 비스 토실레이트 염의 제조 및 특성화.
무정형 상태로의 초기 전환은 가장 열역학적으로 안정한 것 외에 준안정 형태의 식별 가능성을 증가시킨다. 이러한 이유로, 무정형 비스 토실레이트를 상기 실험에 사용하였다. 무정형 실시예 1 을 주위 조건에서 DCM (10mL 중 1g) 중에 용해시켰다. 수득한 용액을 주위에서 p-톨루엔술폰산 1 수화물 (4044μL, THF 중 1M, 2.1eq) 로 처리하였다. 용액을 회전 증발기에서 신속하게 증발시키고, 회수한 고체를 XRPD 로 분석하였다. 제 1 상기 절차를 통해 형태 2 로부터 상이한 반결정성 패턴을 수득하였는데, 이를 DCM (10mL) 중에 재용해시키고, 신속-증발시키고, XRPD 로 재분석하고, 형태 2 인 것으로 확인하였다. 하기 기재되는 제 2 절차를 통해 형태 2 를 수득하였다. 상기와 같이 제조한 무정형 실시예 1 비스 토실레이트를 이의 고체 형태 및 화학적 특성의 연구를 위해 간단히 특성화하였다. XRPD 분석은 재료가 무정형인 것으로 확인하였고; 1H-NMR 은 구조와 일치하였고, 2 당량의 토실레이트 반대이온을 나타냈고; KF 분석은 단지 2.0% w/w 물을 나타냈고; HPLC 분석은 97.6% 순도를 나타냈다 (출발 재료와 일치함).
형태 2 비스 토실레이트 염의 제조 및 특성화. 실시예 1 을 주위 조건에서 ACN (20mL 중 2g) 중에 용해시켰다. 수득한 용액을 50℃ 에서 교반하고, p-톨루엔술폰산 1 수화물 (8088μL, THF 중 1M, 2.1eq) 로 처리하였다. 1h 동안 50℃ 에서 교반한 후에, 투명 용액을 -4℃ (0.1℃/min) 로 냉각한 후, 밤새 -4℃ 로 있었다. 회수한 고체 (형태 2 배치 1) 를 진공 하에 여과하고, 2h 동안 공기 건조시키고, 오븐 (RT, 진공) 에서 밤새 건조시켰다.
상기 기재된 제 2 배치 (형태 2 배치 2) 를 무정형 비스 토실레이트의 제조 시도 후에 회수하였다. 반결정성 트레이스를 XRPD 로 우선 관찰하고, DCM (20vol) 을 첨가하여 다시 용해시키고자 시도하였다. 그러나, 현탁물이 형성되었다. 40℃ 에서 2 시간 교반 후에, 이를 여과하고, 오븐 (RT/진공) 에서 건조시켰다.
배치 둘 모두는 XRPD 로 형태 2 와 일치하였다. 열적 분석은 물의 손실에 상응하는 이벤트, 이후 약 170℃ 에서 샘플의 용융을 보였다. 배치 둘 모두는 또한 상승된 조건에서 1 주 동안 안정하였다. 이들 결과는 이전 실험 동안 수득한 형태 2 와 관련이 있다. 2 개의 배치의 PLM 분석 동안, 상이한 형태를 관찰하였다. DCM 중에 슬러리화함으로써 수득한 샘플에서 지금까지 관찰된 집합화된 입자 대신에, 니들이 존재하였다. 이들이 단결정으로 인해 분석하기에 너무 작을지라도, 이는 성장성의 적합한 결정의 가능성이 있을 수 있음을 나타낸다. 결과가 하기 표 21 에 나타나 있다.
Figure pct00186
슬러리 실험. 무정형 비스 토실레이트를 주위 조건에서 하기 용매 시스템 (150μl 중 30mg) 중에 현탁시켰다. 현탁물을 19 h 동안 주위 내지 50℃ 의 성숙 챔버에서 쉐이킹한 후 (8 h 사이클), 주위 조건에서 10min 동안 정치시켰다. 고체의 앨리쿼트를 공기 건조시키고, XRPD 로 분석한 후, 1 주 동안 40℃/75% RH 에 두고, 재분석하였다. 용액을 회수한 경우, 용매를 주위 조건에서 증발시키고, 잔류물을 우선 XRPD 로 분석하였다. 결과가 하기 표 22 에 나타나 있다.
Figure pct00187
Figure pct00188
용해성. 결정성 비스 토실레이트 형태 2 (30mg) 를 재료가 완전 용해될 때까지 또는 최대 100 vol 이 첨가될 때까지 용매 (n-헵탄, 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 메틸이소부틸 케톤, 2-프로판올, 메틸에틸 케톤, 아세톤, 디메틸 술폭시드, 물, tert-부틸메틸 에테르, 시클로헥산, 1,4-디옥산, 톨루엔, 클로로포름, 1,2-디메톡시에탄, 테트라히드로푸란, N,N-디메틸포름아미드, 아세토니트릴, 니트로메탄, N-메틸피롤리돈, 테트라히드로푸란:물 95:5, 2-프로판올:물 95:5, 또는 아세톤:물 95:5 (전체 5, 10, 20, 30, 50, 70, 또는 100 vol)) 의 부피를 증가시키면서 처리하였다. 용매의 각 첨가 후에, 시스템을 10 분 동안 50℃ 에서 서서히 쉐이킹한 후, 주위 조건에서 5 분 동안 정치시킨 다음, 용매의 새 앨리쿼트를 첨가하였다. 평가 완료 후에, 수득한 임의의 현탁물을 성숙시키고, 투명 용액을 4℃ 로 냉각하고, 등온가열로 유지하였다. 실시예 1 비스 토실레이트 형태 2 에는 디메틸술폭시드 및 N,N-디메틸포름아미드 (5 vol 에서 용액임), 및 테트라히드로푸란:물 95:5 (10 vol 에서 용액임) 를 제외하고는 100 vol 까지 모든 용매에서 현탁물로 남았다.
성숙. 용해성 평가 후에 수득한 현탁물을 주위 내지 50℃ 에서 성숙 챔버에서 쉐이킹하였다 (8h 사이클). 4 일 후에, 고체를 여과하고, 공기 건조시켰다. 수득한 고체를 우선 XRPD 로 분석하였다. n-헵탄, 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 메틸이소부틸 케톤, 2-프로판올, 메틸에틸 케톤, 아세톤, tert-부틸메틸 에테르, 시클로헥산, 1,4-디옥산, 톨루엔, 클로로포름, 1,2-디메톡시에탄, 테트라히드로푸란, 아세토니트릴, 니트로메탄, 및 2-프로판올:물 95:5 중에서의 성숙을 통해 여과된 형태 2 의 고체를 수득하였다.
저속 증발 및 냉각. 성숙 실험으로부터의 상청액 및 냉각으로부터의 용액을 주위 조건에서 서서히 증발시켰다. 잔류물을 XRPD 로 분석하였다. 하기 상청액으로부터의 저속 증발을 통해 하기를 수득하였다: 디메틸 술폭시드, 오일; 물, 오일; N,N-디메틸포름아미드, 검; N-메틸피롤리돈, 오일; 테트라히드로푸란:물 95:5, 검; 및 아세톤:물 95:5 검. 용해성 평가 후에 수득한 용액을 2 일 동안 냉장고 (4℃) 및 또다른 2 일 동안 냉동고 (-20℃) 에 두었다. 고체가 회수되지 않았다. n-헵탄 용액의 2 개의 배치로부터의 저속 증발을 통해 하나의 배치로부터 검 및 다른 하나로부터 형태 2 를 수득하였다.
4℃ 또는 60℃ 에서의 슬러리화. 결정성 비스 토실레이트 형태 2 (30mg) 를 용매 시스템 (10 vol, 300μl) 중에 현탁시켰다. 현탁물을 4℃ 또는 60℃ 에서 주말에 걸쳐 교반하였다. 4℃ 실험의 XRPD 특성화를 통해 에틸 아세테이트, 2-프로판올, 메틸에틸 케톤, tert-부틸메틸 에테르, N,N-디메틸포름아미드, 아세토니트릴, 에탄올, 및 니트로메탄으로부터 형태 2, 테트라히드로푸란:물 95:5 의 경우 검, 및 N-메틸피롤리돈의 경우 용액을 수득하였다. 60℃ 실험의 XRPD 특성화를 통해 에틸 아세테이트, 2-프로판올, 메틸에틸 케톤, tert-부틸메틸 에테르, 아세톤, 1,4-디옥산, 아세토니트릴, 에탄올, 니트로메탄, 및 N-메틸피롤리돈으로부터 형태 2 를 수득하였다.
결과. 비스-토실레이트 다형체 실험에서 단리된 샘플 대부분은 형태 2 와 일치하였다. 그러나, 3 개의 결정성 고체 (형태 3 (메틸이소부틸 케톤으로부터 P35), 형태 5 (메틸에틸 케톤으로부터 P37), 및 형태 4 (1,4-디옥산으로부터 P43)) 는 일부 차이를 나타냈다. 이들을 고해상도 X-선 분말 회절 (HR-XRPD) 로 분석하였다. 결과가 도 # 에 나타나 있다. 형태 3 및 형태 4 에서 일부 추가 피크가 주목되었다. 추가로 HPLC, 1H-NMR 및 DSC 에 의해 이들 2 개의 새로운 패턴을 특성화하는 것을 결정하였다. 고해상도에 의해서 형태 5 는 형태 2 와 일치하였지만, 초기 회절도 (고처리 (HT) 적색 트레이스) 와 새로운 것 (고해상도) 과의 비교시 변화가 나타날 수 있다. 이들 발견을 기반으로, 단리 및 HR-XRPD 로 분석하는 경우 재료는 보다 안정한 것, 형태 2 로 급격히 변형되는 준안정 형태인 것으로 결론지었다.
무정형 샘플을 추가적인 7 일 동안 성숙시켰지만, 결정성의 개선은 관찰되지 않았다. 반결정성 고체를 또한 보다 길게 성숙시켰지만, 추가적인 6 일 사이클링 후에 결정성의 어떠한 개선을 나타내지 않았다. 이들 (테트라히드로푸란으로부터의 반결정성 형태 3 (P44), 및 톨루엔으로부터의 반결정성 형태 3 (P47)) 이 XRPD 에 의해 형태 2 와 일부 차이를 나타내기 때문에, 이들을 DSC, HPLC 및 1H-NMR 로 추가 연구하였다. 수득한 모든 고체를 또한 7 일 동안 40℃ 및 75% RH 에서 저장하고, XRPD 로 재분석하였다. 형태 2 는 상기 시간 후에 관찰된 유일한 형태였다.
형태 3. 형태 3 (P35) 으로부터의 고체의 열적 분석은 37.6℃ 에서 흡열 이벤트를 보였는데, 이는 형태 3 이 수화물일 수 있는 것을 나타낸다. 광대한 흡열을 또한 145.8℃ 에서 관찰하였다. VT-XRPD 에 의한 분석은 135℃ 에서 형태 2 와 유사한 어떤 것으로의 변화를 나타냈다. 이는 40℃/75%RH 에서 7 일 후에 보이는 회절도 (데이터는 나타나 있지 않음) 와 관련이 있는데, 이는 형태 3 이 열 및/또는 습도에 의해 형태 2 로 용이하게 전환되는 준안정 형태인 것을 나타낸다.
형태 4. 형태 4 의 1H-NMR 은 2 당량의 1,4-디옥산을 나타냈다. 상기 결과는 DSC 중에서 관찰된 약 70.4℃ 에서의 흡열과 관련이 있다. 탈용매화 후에, 169.3℃ 에서 흡열이 보였다. 상기 용융물은 형태 2 와 동일하며, 이는 용매가 방출되면 형태 4 가 형태 2 로 변형되는 것을 나타낸다. 수득한 재료의 양으로 인해, TGA 및 KF 분석은 샘플에 대해 수행될 수 없었다. 40℃/75%RH 에서 7 일 후에 XRPD 에 의한 재분석은, 형태 4 가 열 및/또는 습도에 의해 형태 2 로 전환되는 준안정 형태인 것으로 확인하였다. 상기 형태의 HPLC 순도는 또한 그 밖의 것들보다 낮았다.
분석 및 기구적 방법
X-선 분말 회절 (XRPD). X-선 분말 회절 패턴을 Cu Kα 방사선 (40 kV, 40 mA), 자동화 XYZ 스테이지, 오토-샘플 포지셔닝용 레이저 비디오 현미경 및 HiStar 2-차원 면적 검출기를 사용하는 Bruker AXS C2 GADDS 회절계에서 수합하였다. X-선 옵틱(optic) 은 0.3 mm 의 핀홀 콜리메이터(pinhole collimator) 와 결합된 단일 Gobel 다층 거울로 이루어진다. 주간 수행성 체크를 보증된 표준 NIST 1976 Corundum (평판) 을 사용해 수행한다.
빔 확산, 즉 샘플에 대한 X-선 빔의 유효 크기는 대략 4 mm 였다. θ-θ 연속 스캔 모드를 3.2°- 29.7°의 유효한 2θ 범위를 제공하는 20 cm 의 샘플 - 검출기 거리 하에서 활용하였다. 전형적으로, 샘플을 120 초 동안 X-선 빔에 노출시킬 것이다. 데이터 수집에 사용되는 소프트웨어는 XP/2000 4.1.43 을 위한 GADDS 였고, Diffrac Plus EVA v15.0.0.0 을 사용해 데이터를 분석 및 제시하였다.
주위 조건 하에 실시되는 샘플을 연삭 없이 제공받은 분말을 사용해 평판 시험체로서 제조하였다. 대략 1 - 2 mg 의 샘플을 유리 슬라이드 상에서 가볍게 압착하여 평평한 표면을 수득하였다. 비주위 조건 하에 실시되는 샘플을 열-전도 화합물이 포함된 규소 웨이퍼 상에 탑재하였다. 이후, 샘플을 20℃/min 에서 적절한 온도로 가열한 후, 등온가열로 1 분 동안 유지한 다음, 데이터 수집을 개시하였다.
고해상도 XRPD. X-선 분말 회절 패턴을 Cu Kα 방사선 (40 kV, 40 mA), θ - 2θ 각도계, 및 V4 의 디버전스(divergence) 및 리시빙 슬릿(receiving slit), Ge 단색화장치 및 Lynxeye 검출기를 사용하는 Bruker D8 회절계에서 수합하였다. 기기의 수행성을 보증된 Corundum 표준 (NIST 1976) 을 사용해 체크하였다. 데이터 수집에 사용되는 소프트웨어는 Diffrac Plus XRD Commander v2.6.1 였고, Diffrac Plus EVA v15.0.0.0 을 사용해 데이터를 분석 및 제시하였다.
샘플을 제공받은 분말을 사용해 평판 시험체로서 주위 조건 하에서 실시하였다. 샘플을 윤이 나는 제로-백그라운드 (510) 규소 웨이퍼 내에서 절단된 캐버티 내로 서서히 팩킹하였다. 샘플을 분석 동안 이의 자체 평면에서 회전시켰다. 데이터 수집의 세부사항은 하기이다: 각도 범위: 2 내지 42°2θ; 단계 크기: 0.05°2θ; 수집 시간: 0.5 s/단계.
핵 자기 공명 (NMR). NMR 스펙트럼을 오토-샘플러가 구비되어 있고 DRX400 콘솔에 의해 조절되는 Bruker 400MHz 기기에서 수합하였다. 자동화 실험을 표준 Bruker 적재 실험을 사용하는데, Topspin v1.3 하에 실시되는 ICON-NMR v4.0.7 을 사용해 획득하였다. 비통상적 분광법에서, 데이터를 Topspin 단독 사용을 통해 획득하였다. 달리 언급되지 않는 한, 샘플을 DMSO-d6 중에서 제조하였다. 오프-라인 분석을 ACD Spectrus Processor 2012 또는 2014 를 사용해 수행하였다.
시차 주사 열량측정법 (DSC).
TA Instruments Q2000: DSC 데이터를 50 위치 오토-샘플러가 구비된 TA Instruments Q2000 에서 수합하였다. 열용량을 위한 칼리브레이션을 사파이어를 사용해 수행하고, 에너지 및 온도를 위한 칼리브레이션을 보증된 인듐을 사용해 수행하였다. 전형적으로, 핀-홀 알루미늄 팬에서 0.5 - 3 mg 의 각 샘플을 10℃/min 로 25℃ 에서 300℃ 로 가열하였다. 50 mL/min 로 건조 질소의 퍼지를 샘플에 대하여 유지하였다. 조절된 온도 DSC 를 2℃/min 의 기본 가열 속도 및 60 초 마다 (기간) ± 0.318℃ (진폭) 의 온도 조절 파라미터를 사용해 수행하였다. 기기 조절 소프트웨어는 Advantage for Q Series v2.8.0.394 및 Thermal Advantage v5.5.3 이었고, 데이터를 Universal Analysis v4.5A 를 사용해 분석하였다.
TA Instruments Discovery DSC: DSC 데이터를 50 위치 오토-샘플러가 구비된 TA Instruments Discovery DSC 에서 수합하였다. 열용량을 위한 칼리브레이션을 사파이어를 사용해 수행하고, 에너지 및 온도를 위한 칼리브레이션을 보증된 인듐을 사용해 수행하였다. 전형적으로, 핀-홀 알루미늄 팬에서 0.5 - 3 mg 의 각 샘플을 10℃/min 로 25℃ 에서 260℃ - 300℃ 로 가열하였다. 50 mL/min 로 건조 질소의 퍼지를 샘플에 대하여 유지하였다. 기기 조절 및 데이터 분석 소프트웨어는 TRIOS v3.2.0.3877 이었다.
열중량측정 분석 (TGA). TGA 데이터를 25 위치 오토-샘플러가 구비된 TA Instruments Discovery TGA 에서 수합하였다. 기기는 보증된 알루멜 및 니켈을 사용해 온도 칼리브레이션하였다. 전형적으로, 5 - 10 mg 의 각 샘플을 사전-테어링된(pre-tared) 알루미늄 DSC 팬에 적재하고, 10℃/min 로 주위 온도에서 350℃ 로 가열하였다. 25 mL/min 로 질소 퍼지를 샘플에 대하여 유지하였다. 기기 조절 및 데이터 분석 소프트웨어는 TRIOS v3.2.0.3877 이었다.
편광된 광학 현미경법 (PLM). 샘플을 이미지 캡쳐를 위한 디지털 비디오 카메라가 구비된 Leica LM/DM 편광된 광학 현미경에서 연구하였다. 소량의 각 샘플을 유리 슬라이드에 두고, 침지 오일 중에 올려 두고, 글래스 슬립으로 덮었다 (가능하다면 별개 입자는 분리됨). λ 적외선 필터와 결합시켜, 샘플을 적절한 배율 및 부분 편광된 광으로 보았다.
HPLC 에 의한 화학적 순도 측정. 순도 분석을 다이오드 어레이 검출기가 구비된 Agilent HP1100 시리즈 시스템에서 및 ChemStation 소프트웨어 vB.04.03 을 사용해 하기 상세히 설명된 방법들 중 하나를 사용함으로써 수행하였다:
Figure pct00189
Figure pct00190
전형적으로, 5 - 20 mg 의 샘플을 주위 조건 하에 테어링된 메시 스테인리스 강 바스켓에 두었다. 샘플을 40% RH 및 25℃ (전형적인 실내 조건) 에서 적재 및 비적재하였다. 수분 흡수 등온을 하기 나열되는 바와 같이 수행하였다 (2 개의 스캔은 1 회의 완전 사이클을 제공함). 표준 등온을 0 - 90% RH 범위에 대하여 10% RH 간격으로 25℃ 에서 수행하였다. 데이터 분석을 DVS Analysis Suite v6.2 (또는 6.1 또는 6.0) 을 사용함으로 Microsoft Excel 을 사용해 수행하였다.
중량측정적 증기 흡수 (GVS). 흡수 등온을 DVS Intrinsic Control 소프트웨어 v1.0.1.2 (또는 v 1.0.1.3) 에 의해 조절되는, SMS DVS 고유 수분 흡수 분석기를 사용해 수득하였다. 샘플 온도를 기기 조절에 의해 25℃ 로 유지하였다. 건조 및 습윤 질소의 스트림을 혼합함으로써 (전체 유속은 200 mL/min) 습도를 조절하였다. 상대 습도를 샘플 근처에 위치한 칼리브레이션된 Rotronic 프로브 (동적 범위 1.0 - 100% RH) 로 측정하였다. % RH 에 따른 샘플의 중량 변화 (메스 릴랙세이션(mass relaxation)) 를 미량천칭 (정확도 ±0.005 mg) 으로 계속 모니터링하였다.
전형적으로, 5 - 20 mg 의 샘플을 주위 조건 하에 테어링된 메시 스테인리스 강 바스켓에 두었다. 샘플을 40% RH 및 25℃ (전형적인 실내 조건) 에서 적재 및 비적재하였다. 수분 흡수 등온을 하기 나열되는 바와 같이 수행하였다 (2 개의 스캔은 1 회의 완전 사이클을 제공함). 표준 등온을 0 - 90% RH 범위에 대하여 10% RH 간격으로 25℃ 에서 수행하였다. 데이터 분석을 DVS Analysis Suite v6.2 (또는 6.1 또는 6.0) 을 사용함으로 Microsoft Excel 을 사용해 수행하였다.
Figure pct00191
수용성. 화합물의 부모 자유-형태의 최대 최종 농도가 ≥10 mg/mL 가 되도록 수중에 충분한 화합물을 현탁함으로써 수용성을 측정하였다. 현탁물을 25℃ 에서 24 시간 동안 평형화한 후, pH 를 측정하였다. 이후, 현탁물을 유리 섬유 C 필터를 통해 여과하였다. 이후, 여과물을 적절한 팩터(factor) 로 희석하였다. DMSO 중에서 표준 용액이 대략 0.2 mg/ml 인 것을 참조함으로, HPLC 로 정량화를 실시하였다. 상이한 부피의 표준물, 희석 및 미희석된 샘플 용액을 주입하였다. 표준 주입시 주 피크와 동일한 체류 시간에 확인된 피크를 적분함으로써 측정된 피크 면적을 사용해 용해성을 산출하였다.
Figure pct00192
분석을 다이오드 어레이 검출기가 구비된 Agilent HP1100 시리즈 시스템에서 및 ChemStation 소프트웨어 vB.04.03 을 사용해 수행하였다.
이온 크로마토그래피 (IC). 데이터를 IC MagicNet 소프트웨어 v3.1 을 사용함으로, 858 Professional 오토샘플러 및 800 Dosimo 투여 단위 모니터가 구비된 Metrohm 930 Compact IC Flex 에서 수합하였다. 정확하게 칭량된 샘플을 적절한 용해 용액 중에서 스톡 용액으로서 제조하고, 시험 전에 적절히 희석하였다. 분석된 공지된 이온 농도의 표준 용액과의 비교로 정량화를 달성하였다.
Figure pct00193
성숙/슬러리 숙성. 성숙을 위한 현탁물을 플랫폼 쉐이커 인큐베이터 (Heidolph Titramax/Inkubator 1000) 에 두고, 주위 내지 50℃ 에서 쉐이킹 하에 일련의 가열-냉각 사이클에 적용하였다 (8 시간 사이클: 4 시간 동안 50℃ 로 가열, 및 이후 가열을 종료하고, 샘플을 추가적인 4 시간 동안 주위 조건으로 점차적으로 냉각함).
칼 피셔 적정 (KF) 에 의한 물 측정. 각 샘플의 물 함량을 Hydranal Coulomat AG 오븐 시약 및 질소 퍼지를 사용해 851 Titrano Coulometer 에 의해 150℃ 에서 Metrohm 874 Oven Sample Processor 에서 측정하였다. 칭량된 고체 샘플을 밀봉된 샘플 바이알 내에 도입하였다. 대략 10 mg 의 샘플을 적정 당 사용하고, 이중 측정을 실시하였다. Tiamo v2.2 를 사용한 데이터 수집 및 분석.
생물학적 활성
상기 실시예의 활성은 하기 검정에서 설명될 수 있다. 아직 제조 및/또는 시험된 적이 없는 위에 열거된 화합물들은 이들 검정에서 활성을 가질 것으로 예측된다.
KDM1A 저해의 검정은 시험관내에서, 배양된 세포에서, 및 동물에서 확인될 수 있다. 메틸화된 라이신의 탈메틸화의 결과를 탐지하는, 즉, 네번째 라이신 잔기에서 모노메틸을 함유하는 히스톤 H3 기질의 N-말단에 해당하는 적어도 18 개의 아미노산의 펩티드 조각에 대한 KDM1A 데메틸라제 산화 활성의 산물을 탐지하는 여러 가지 분광광도법이 존재한다. KDM1A 데메틸라제 반응의 하나의 산물인 수소 퍼옥시드는 홀스래디쉬 퍼옥시다제 및 디히드록시페녹사진 (ADHP) 과 반응하여 형광 화합물 레소루핀 (여기= 530-560nm:방출= 590nm) 을 생성한다. KDM1A 데메틸라제 효소 활성은 내생적 또는 재조합 유전자로부터 KDM1A 를 발현하는 포유류 세포 또는 조직으로부터 수득되고, 전체 세포 추출물로부터 정제 또는 검정될 수 있다. 이들 방법을 사용하여 효소 활성의 50 퍼센트를 저해할 수 있는 공개된 화합물의 농도 (IC50) 를 확인할 수 있다. 하나의 양상에서, 공개된 화합물은 500 nM 미만, 100 nM 미만, 50 nM 미만 또는 10 nM 미만의 농도에서 KDM1A 효소 활성의 50 퍼센트 저해를 나타낸다.
KDM1A 와 기타 단백질의 연합은 통상의 기술자에게 알려진 여러 가지 시험관내 및 생체내 방법 둘 모두에서 확인될 수 있다. 예를 들어, KDM1A 와 연합된 단백질의 파괴는 전기영동이동도 변위 검정 (EMSA) 에서 확인될 수 있다. 다양한 양상에서, 공개된 화합물에 의한 KDM1A 와 CoRest 의 물리적 연합의 파괴는 EMSA 를 사용하여 관찰될 수 있다. 또다른 실시예에서, KDM1A 와 연합된 단백질의 파괴는 면역침전 그에 뒤이어 질량 분광법 또는 겔 전기영동에 의한 동시-침전된 단백질의 분리에 의해 확인될 수 있다. 또다른 실시예에서, KDM1A 와 CoRest 의 연합의 파괴는 KDM1A 및 CoRest 둘 모두의 존재를 요구하는 기질인 K4 또는 K9 메틸화된 히스톤 H3 을 함유하는 뉴클레오솜 기질에 대해 작용하는 KDM1A 의 능력에 의해 확인될 수 있다. 공개된 화합물은 뉴클레오솜 기질을 사용하여 CoRest 와 KDM1A 의 연합의 저해를 검정하는데 사용될 수 있었다; 그러한 화합물은 히스톤 H3 K4 메틸화된 펩티드 기질의 사용에 의해 확인되는 바와 같이 KDM1A 효소 활성을 저해하지 않을수 있다.
KDM1A 의 저해는 세포-기반 검정에서 확인될 수 있다. 예를 들어, KDM1A 는 필수 효소이고, KDM1A 의 연장된 저해는 세포 사망을 초래할 것이며, 그에 따라 세포 성장 저해, 세포 성장의 정지 또는 세포 사망이 검정될 수 있다. 또다른 양상에서, 안드로겐 및 에스트로겐에 의해 유도되는 유전자는 KDM1A 활성을 요구한다; 공개된 화합물에 의한 KDM1A 의 저해는 안드로겐 또는 에스트로겐으로 처리된 세포에서 유전자 발현의 유도를 폐지할 것이다. 이들 효과는, 예를 들어 안드로겐- 및 에스트로겐-의존적 유전자에 관한 유전자 발현의 규모를 측정하는 mRNA 의 정량적 PCR 를 사용하여 측정될 수 있다. KDM1A 활성은 특정 유전자의 전사의 억제에 요구된다. 공개된 화합물에 의한 KDM1A 의 저해는 세포에서 그러한 유전자의 발현을 억압해제 (de-repress) 할 수 있었다. 이들 유전자는 Meis1, VEG-A, AIM1, HMOX1, VIM, SKAP1, BMP, EOMES, FOXA2, HNF4, SOX17, GH, PSA, pS2, GREB1, GR-1b, PRL, TSHB, SYN1, HBG, SCN1A, SCN2a, 및 SCN3A 를 포함하며, 이들의 발현은 공개된 화합물에 의한 세포 처리 전에 및 후의 다양한 시점에 mRNA 의 정량적 PCR 을 사용하여 검정될 수 있다. 또다른 양상에서, KDM1A 는 백혈병 줄기 세포 잠재력의 조절인자이고, MLL-AF9 에 의한 골수 세포의 급성 골수성 백혈병 (AML) 으로의 종양원성 형질전환에 요구된다. 배양물에서 성장된 MLL-AF9-형질전환된 세포에서 KDM1A 의 저해는 분화 정지를 극복하여 CD11b 표면 항원, 단핵구 세포 항원을 발현하는 더욱 성숙한 세포를 초래한다. 따라서, KDM1A 의 저해는 배양물에서 성장된 AML 세포주, 예컨대 THP-1 을 사용하여 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 를 사용하여 CD11b 항원을 새롭게 발현하는 세포의 비율을 정량화하여 검정될 수 있다. CD14 또는 CD86 을 표시하는 세포를 계수하는 FACS 를 사용하는 유사한 검정을 또한 사용할 수 있으며, 이들 각각은 마크로파지/단핵구 계통을 따라 더욱 성숙한 세포의 특징이다. 급성 골수성 백혈병 환자에서 유래하는 기타 세포주, 예컨대 MV4;11 또는 MOLM-13 세포를 이러한 검정에 사용할 수 있다. 마크로파지/단핵구 계통을 따라 분화의 기타 마커는 FACS, 예컨대 CD14 및 CD86 에 의해 유사하게 검정될 수 있다. 기타 AML 세포주, 예컨대 MPLM-13 또는 MV4;11 은 위에 언급된 특정 유전자 또는 분화 마커의 유도 뿐만 아니라 세포 성장 또는 세포자멸사에 관해 Annexin V 염색 및 FACS 계수에 의해 검정될 수 있다.
KDM1A 에 관한 공개된 화합물의 선택성은 기타 FAD-의존적 아미녹시다제, 예컨대 모노아민 옥시다제 A (MAO-A), 모노아민 옥시다제 B (MAO-B), IL4I1, KDM1B, 또는 SMOX 에 관한 공개된 화합물의 IC50 을 검정함으로써 확인될 수 있다. 그와 같이, 공개된 화합물은 MAO-A 또는 MAO-B 의 경우보다 50-배, 또는 100-배 또는 250-배 또는 500-배 미만인 IC50 로 KDM1A 를 저해할 것이다.
부가적 데메틸라제 검정
히스톤 데메틸라제 검정을 본질적으로 Shi, Y et al. Cell 199, 941- 953 (2004) 에 기재된 바와 같이 수행할 수 있다. 간략히, 벌크 히스톤, 히스톤 펩티드 또는 뉴클레오솜을 정제된 인간 재조합 KDM1A 와 함께, 히스톤 데메틸라제 활성 (HDM) 검정 완충액 1 (50 mM Tris pH 8.5, 50 mM KCl, 5 mM MgCl, 0.5% BSA, 및 5% 글리세롤) 에서 30 분 내지 4 시간 동안 37℃ 에서 인큐베이션한다. 전형적 반응을 100 ㎕ 로 수행하며, 이 경우에 20 ㎍ 의 정제된 벌크 히스톤 또는 3 ㎍ 의 수식된 히스톤 펩티드를 기질로서 사용한다. 1-20 ㎍ 범위의 상이한 양의 KDM1A 를, 필요에 따라, 선택된 기질에 따라 기타 보조-인자, 예컨대 FAD 또는 CoREST 와 함께 반응에서 사용한다. 반응 혼합물을 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯팅에 의해 히스톤 메틸-특이적 항체를 사용하여 또는 포름알데히드 형성 검정에 의해 메틸 기의 포름알데히드로의 제거 및 전환을 조사하여, 또는 펩티드 기질의 경우에 질량 분광법에 의해 데메틸화된 히스톤 펩티드를 확인하여 분석한다.
벌크 히스톤 (예를 들어, 4 mg) 을 명시된 양의 재조합 단백질 또는 복합체와 함께 히스톤 데메틸라제 (HDM) 검정 완충액 A (50mM Tris pH8.5, 50mM KCl, 5mM MgCl, 5% 글리세롤, 0.2mM 페닐메틸술포닐 플루오라이드 및 1mM 디티오트레이톨) 에서 최종 부피 10 ml 로 12-16 h 동안 37℃ 에서 인큐베이션한다. 뉴클레오솜 (0.3 mg) 또는 모노뉴클레오솜 (0.3 mg) 의 경우에, 0.1% NP40 을 함유하는 HDM 완충액 A 을 사용할 수 있다. 그 후 반응 혼합물을 SDS-PAGE 그에 뒤이어 웨스턴 블롯팅에 의해 분석할 수 있다. 히스톤 H3 의 모노- 또는 디-메틸 K4 및 히스톤 H3 의 아세틸-K9/ K14 에 대한 항체를 사용하여 각각 메틸화 및 아세틸화의 정도를 탐지한다. 그 후 웨스턴 블롯을 밀도계에 의해 또는 발광의 강도에 의해 정량화한다.
대안적으로, 표준 형광발생 검정을 사용할 수 있으며, 이 경우에 히스톤 메틸화된 기질에 접합된 비오틴 및 비드 위의 스트렙타비딘 (SA) 또는 플레이트에 부착된 SA 을 사용하여 비오티닐화된 기질을 고정시켜, 메틸화된 히스톤 기질을 96 웰 플레이트의 바닥에 (또는 플레이트에 있는 비드에) 고정시킨다. 히스톤 데메틸라제 완충액 A 에서 KDM1A 효소의 인큐베이션 후에, 데메틸화된 히스톤 기질을 형광단에 접합된 데메틸화된 H3K4 기질에 특이적인 항체 또는 일부 기타 탐지될 수 있는 작용제를 사용하여 탐지할 수 있다. 그 검정 방법의 변형은 메틸화된 형태의 히스톤에 특이적인 항체를 이용할 것이며, 이 경우에 효소와 함께 인큐베이션 전에 및 후에 기질의 양을 정량화한다. 또다른 형태의 유사한 검정은 형광 공명 에너지 전달 (FRET) 탐지 시스템을 이용할 것이며, 이 경우에 메틸화된 형태를 인지하는 항체가 실체 (entity), 예를 들어 비드 또는 거대 담체 분자 (이 위에 형광단 (공여체) 가 부착됨) 에 접합 또는 그렇지 않으면 연결되고, 기질에 연결된 실체에 형광단 (수용체) 이 결합된다.
대안적으로, KDM1A 반응 동안 H2O2 의 생성은 형광분석으로 탐지될 수 있다. 이러한 시스템에서, H2O2 의 생성은 HDM 검정 완충액에서 홀스 래디쉬 퍼옥시다제 (HRP) 에 대한 형광발생 기질로서 ADHP (10-아세틸-3, 7-디히드록시페녹사진) 를 사용하여 기질, 보조-인자 및 효소에 노출 후에 탐지된다. ADHP (또한 Amplex Red 시약으로 알려짐) 는 HRP 에 대한 가장 안정적이고 민감한 형광발생 기질이다. 형광 산물은 레소루핀이다. 민감도는 10-15 M 의 표적 단백질 만큼 낮을 수 있다. 신호를 형광 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 여기 및 방출 파장 각각 530-560 nm 및 590 nm 에서 판독한다.
부가적으로, KDM1A 반응은 KDM1A 의 활성에 영향을 미칠 수 있는 기타 인자를 포함할 수 있다. 그러한 인자는, 예를 들어 KDM1A 또는 KDM1A-함유 복합체와 연합하는 것으로 알려진 단백질로서, CoREST, NuRD 복합체, DNMT1, HDAC1, HDAC2, 및 HDAC3 를 포함할 것이다. 주형, 기질에 대한 특이성, Km, Kcat, 또는 FAD 농도에 대한 민감도를 포함하여 임의의 양상의 KDM1A 활성에 영향을 미치는 상호작용이 검정될 수 있다. 예를 들어, KDM1A 와 CoREST 사이의 시험관내 상호작용 검정을, 재조합 KDM1A (예를 들어, 10 mg) 및 CoREST (예를 들어, 5 mg) 를 첨가하고 혼합하고, 1 h 동안 4-8℃ 에서 인큐베이션하고, Superdex 200 겔 여과 컬럼에 의해 20mM Tris-HCl pH 7.9, 500mM KCl, 10% 글리세롤, 0.2mM EDTA, 1mM 디티오트레이톨, 0.1% Nonidet P40 및 0.2mM 페닐메틸술포닐 플루오라이드를 함유하는 완충액에서 분별하고, 그 후 실버 염색에 의해 분석하여 수행할 수 있다.
모노뉴클레오솜과 KDM1A 및 CoREST 의 동시-면역침전을 위해, 뉴클레오솜 (1.5 mg) 을 미구균 뉴클레아제로 소화시키고, 1 h 동안 4-8℃ 에서 0.1% NP40 을 함유하는 HDM 완충액 A 에서 재조합 KDM1A (예를 들어, 1 mg), CoREST (예를 들어, 500 ng) 또는 2 가지 모두의 단백질과 함께 인큐베이션할 수 있다. 친화성 수지에 부착된 KDM1A 또는 CoREST 에 대한 항체를 첨가하고, 0.1% NP40 을 함유하는 HDM 완충액 A 으로 광범위한 세정 후에, 결합된 단백질을 세정 완충액으로 용리했다. KDM1A 활성을 용리물에서 검정할 수 있거나, 또는 KDM1A 의 농도를 정량적 웨스턴 블롯팅에 의해 확인할 수 있다.
화합물을 10-도스 (dose) IC50 모드 형광 커플링 효소 검정으로 100 μM 에서 출발하여 듀플리케이트 (duplicate) 로 3-배 계열 희석하여 시험했다. 10 μM 히스톤 H3(1-21)K4me2 펩티드 기질에 대한 LSD1 의 데메틸라제 활성의 결과로서의 FAD-의존적 H2O2 의 생성을 HRP 및 Amplex Red 와의 커플링에 의해 레소루핀 (형광을 EnVision, Perkin Elmer 로 Ex/Em=535/590 nm 에서 측정함) 을 산출하여 측정했다. 결과가 하기 표 1 에 제시되어 있다.
Figure pct00194
Figure pct00195
정제된 인간 CD34+ 세포의 적혈구 계통으로의 생체외 분화
과립구 콜로니 자극 인자 (G-CSF) 에 의한 동원 후에 건강한 공여자의 정맥혈로부터 단리된 인간 CD34+ 세포를 Cui, S., et al. Mol Cell Biol 31, 3298-3311 (2011) 에 기재된 2-상 배양 방법을 사용하여 14 일 인큐베이션 동안 생체외에서 성장 및 분화시킨다. 세포를 혈구계를 사용하여 계수하고, 생육력을 트립판 블루 배제에 의해 확인한다. 생리적 조건과 화합성인 적당한 용매에 용해된 시험물 (후보 화합물) 을 Day 4 에서 시작하여 Day 14 까지 매일 다양한 시험 농도로 신선한 배양 배지에 첨가한다. 세포 형태 및 분화 시기를 라이트 김사 염색에 의해 확인한다.
분화 표면 마커 및 HbF 함량을 확인하는 유동 세포분석법
배양된 적혈구 세포를 피코에리트린 (PE)-Cy7-접합된 항-CD34, PE-접합된 항-CD71, 및 PECy5-접합된 항-글리코포린 A 항체로 염색한다. 세포질 HbF 의 농도를 확인하기 위해, 세포를 0.05% 글루타르알데히드에서 10 분 동안 고정시키고, 0.1%Triton X-100 로 5 분 동안 투과성화하고, 알로피코시아닌-접합된 항-HbF 항체로 염색시킨다. 염색된 세포를 FACS 분석기를 사용하여 분류하고 계수한다.
KDM1A 및 히스톤 H3 및 H3 수식의 존재 및 농도를 확인하는 웨스턴 블롯.
세포를 Laemmli 샘플 완충액에 용해시키고, SDS-PAGE 에 적용한다. 단백질을 겔로부터 니트로셀룰로스로 옮기고, KDM1A, 및/또는 히스톤 H3, 모노-메틸 (H3K4me1) 및/또는 디메틸 히스톤 H3K4 (H3K4me2) 에 대한 항체로 프로브 (probe) 하고, 그 후 형광-접합된 이차 항체로 프로브한다. 단백질 농도를 영상화 시스템으로 정량화한다.
게놈-특이적 자리에서 단백질 점유 (occupancy) 를 확인하는 크로마틴 면역침전 (ChIP) 검정.
ChIP 검정을 SDS 에 대한 KDM1A 항체의 민감도에 따라 SDS 를 함유하거나 함유하지 않는 면역침전 (IP) 완충액에서 수행한다. 간략히, 전형적으로 KMD1A ChIP 마다 3x107 개의 세포를 사용하고, H3K4me2 ChIP 마다 3X106 개의 세포를 사용한다. 10 분의 0.75% 포름알데히드 처리 후에, 세포를 수확하고 ChIP 용해 완충액 (1% Triton X-100, 10 mM EDTA, 50mM Tris-HCl 및 프로테아제 저해인자) 에서 초음파처리하여 평균 크기 300 내지 1000 bp 의 가용성 크로마틴을 얻는다. 그 후 크로마틴 샘플을 희석 완충액 (5mM EDTA, 25mM Tris-HCl, 167mM NaCl, 및 프로테아제 저해인자 칵테일) 에서 10-배 희석하고, 연어 정자 DNA/단백질-A 아가로스 비드를 사용하여 1 시간 동안 미리 세척한다. 그 후 10 ㎍ 의 토끼 항-KDM1A 항체, 3 ㎕ 의 항-H3K4me2 또는 대조군 항체를 각각의 샘플에 첨가하고, 4℃ 에서 밤새 인큐베이션한다. 면역복합체를 수집하기 위해, 40 ㎕ 의 연어 정자 DNA/단백질-A 아가로스 비드를 4℃ 에서 1 시간 동안 샘플에 첨가한다. 비드를 세정 완충액 (0.1% Triton X-100, 5mM EDTA, 30mM Tris-HCl, 150mM NaCl) 에서 3 회 세정하고, 세정 완충액 2 (1% Triton X-100, 5mM EDTA, 30mM Tris-HCl, 150mM NaCl) 에서 1 회 세정한다. 결합된 단백질-DNA 복합체를 100 ㎕ 의 용리 완충액 (1% SDS, 0.1 M NaHCO3, 250mM NaCl, 및 0.2 ㎍ 프로테아제 K) 으로 용리하고, 65℃ 에서 4 hr 동안 교차결합해제 (de-cross-link) 한다. 교차결합해제된 크로마틴 DNA 를 추가로 QIAquick 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 정제 키트 (Qiagen) 에 의해 정제하고 100 ㎕ 의 TE 완충액으로 용리한다. 4 ㎕ 의 용리된 DNA 샘플을 각각의 PCR 반응에 사용한다. KDM1A ChIP 의 경우 36 회 PCR 사이클을 사용하고, H3K4mme2 ChIP 의 경우 32 회 PCR 사이클을 사용할 수 있다. 관심의 좌위, 예를 들어 감마 글로빈 유전자에 대한 적당한 프라이머를 사용한다.
글로빈-특이적 ChIP 분석을 위해, Cui, S., et al. Mol Cell Biol 31, 3298-3311 (2011) 에 기재된 바와 같이 검정을 수행한다. 예를 들어, 에틸렌 글리콜 비스(숙신이미딜 숙시네이트) 또는 포름알데히드를 교차결합제로서 사용할 수 있다. 표적 단백질, 예컨대 KDM1A 및 메틸 수식이 있거나 없는 히스톤 H3 에 대한 항체를 면역침전에 사용할 수 있다. 면역침전물에 함유된 DNA 를 실시간 정량적 PCR (RT-qPCR) 검정에 의해 인간 배아, 감마, 및 성체 베타-글로빈 프로모터 서열에 대한 프라이머를 사용하여 정량화할 수 있다; 배아와 감마G -글로빈 유전자 사이의 유전자간 영역에 대한 프라이머를 음성 대조군으로서 사용할 수 있다.
HPLC 에 의한 헤모글로빈 분석
세포를 용해하고, 이온-교환 HPLC 컬럼 (Hercules) 을 갖춘 Bio-Rad Variant II 헤모글로빈 시험 시스템을 사용하여 헤모글로빈 조성에 대해 분석할 수 있다.
감마 글로빈 유전자 발현의 유도를 시험하기 위한 마우스 모델
정상적 마우스 또는 Tanabe, O., et al. EMBO J 26, 2295-2306 (2007) 에 기재된 바와 같이 인간 베타-글로빈 좌위의 전부 또는 인간 베타-글로빈 좌위의 일부를 함유하는 효모 인공 염색체 (YAC) 에서 트랜스제닉인 마우스 내로 주입하기 위해 생리적으로 화합성인 용매에 시험물을 용해시킬 수 있다. 시험물을 매일 복강내에 또는 피하에 또는 위관영양에 의해 적당한 시험 투여량으로 26 주 이하 동안 투여할 수 있다. 간격을 두고, 말초 전혈 및 골수 세포를 수확하여, 마우스 배아 베타-유사 글로빈 유전자 또는 적혈구 용해물의 베타-유사 글로빈 조성물 또는 인간 베타-유사 글로빈 유전자를 보유하는 트랜스제닉 마우스의 경우에 인간 및 마우스 태아 γ- 및 성체 β-글로빈 유전자 둘 모두의 RT-qPCR 에 의해 유전자 발현을 확인한다.
인간 감마 글로빈 유전자 발현 또는 HbF 의 유도에 관한 시험.
겸상적혈구병 및 베타-지중해빈혈을 포함하여 혈색소병증을 앓는 환자는 KDM1A 의 저해인자를 이용하는 치료로부터 유익을 얻을 것이다. 적당한 투여 후에, HbF 의 척도를 위에 기재된 바와 같이 확인할 수 있다. 감마 글로빈 유전자 발현을 골수 세포에서 qPCR 을 사용하여 검정할 수 있다. 추가로, HbF 유도제의 임상적 유익을 총 헤모글로빈의 증가, 겸상 적혈구 발증의 감소, 수혈 의존성의 감소, 효과 없는 조혈의 감소, 및 염증성 바이오마커, 예컨대 GDF15 의 혈장 수준의 감소 등으로서 측정할 수 있다.
약물동태학
흡수, 분포, 대사, 및 분비를 포함하는 상기 실시예의 약물동태학적 특성을 하기 검정으로 설명할 수 있다. 아직 제조 및/또는 시험되지 않았을 위에 열거된 화합물은 이들 검정에서 활성을 가질 것으로 예측된다.
인간 및 쥐 간 마이크로솜에서의 대사 안정성
푸울드 (pooled) 인간 간 마이크로솜 (HLM) 및 푸울드 수컷 마우스 간 마이크로솜 (MMLM) 에서의 본원에 공개된 화합물의 대사 안정성을 하기 프로토콜에 따라 확인할 수 있으며, 이 경우에 간 마이크로솜에서의 안정성을 추정하기 위해 반응 시스템에서의 화합물의 농도를 LC/MS/MS 에 의해 평가했다.
연구 디자인
푸울드 인간 간 마이크로솜 (HMMCPL; PL050B) 및 푸울드 수컷 마우스 간 마이크로솜 (MSMCPL; MS033) 을 CellzDirect (Invitrogen) 로부터 구입했다. 마이크로솜을 사용 전에 -80 C 에서 저장했다.
마이크로솜 (스톡 농도 5 mg/mL, 부피 50 ㎕, 최종 농도 0.5 mg/mL), MgCl2 용액 (스톡 농도 50 mM, 부피 50 ㎕, 최종 농도 5 mM), 포스페이트 완충액 (스톡 농도 200 mM, 부피 250 ㎕, 최종 농도 100 mM), 및 물 (부피 95 ㎕) 을 함유하는 마스터 용액을 조제했다. 그 후 5 ㎕ 의 200 μM 시험 화합물 또는 대조군 용액 (대조군 화합물: 베라파밀) 을 첨가했다. 반응 시스템 중 시험 화합물 또는 베라파밀의 최종 농도는 2 μM 이었다. 혼합물을 5 min 동안 37℃ 에서 미리 데웠다.
반응을 50 ㎕ 의 10 mM NADPH 용액을 최종 농도 1 mM 로 부가하여 시작했고, 37℃ 에서 수행했다. 음성 대조군에서 NADPH 용액 대신 50 ㎕ 의 초순수 H2O 를 사용했다.
0 및 30 min 에 반응 용액으로부터 50 ㎕ 의 앨리쿼트를 취했다. 지정된 시점에 3 부피의 차가운 메탄올과 IS (200 nM 이미프라민, 200 nM 라베탈올 및 2μM 케토프로펜) 를 첨가하여 반응을 중단시켰다. 샘플을 16,000 g 에서 10 분 동안 원심분리하여 단백질을 침전시켰다. 상청액의 100 ㎕ 의 앨리쿼트를 100 ㎕ 초순수 H2O 로 희석시키고, 혼합물을 LC/MS/MS 분석에 사용했다. 모든 실험을 듀플리케이트로 수행할 수 있다.
생물분석 방법
액체 크로마토그래피-질량 분광법을 사용하여 샘플을 분석했다. LC 시스템은 디개서 DGU-20A3, 용매 전달기 LC-20AD, 시스템 컨트롤러 CBM-20A, 컬럼 오븐 CTO-10ASVP 및 CTC Analytics HTC PAL 시스템을 갖춘 Shimadzu 액체 크로마토그래프 분리 시스템을 포함할 수 있다. 크로마토그래피 조건은 Phenomenex 컬럼, 5.0 μ C18 (2.0x50 mm); 아세토니트릴 중 0.1% 포름산 및 물 중 0.1% 포름산의 이동상; 용리 속도 500 ㎕/min; 컬럼 온도 25℃; 주입 부피 10 ㎕ 를 포함할 수 있다. ESI 인터페이스가 있는 AB Inc. (Canada) 로부터의 API 4000 장비를 사용하여 질량 분광분석을 수행했다. ABI Inc. 로부터의 Analyst 1.5.1 소프트웨어를 사용하여 데이터 수집 및 제어 시스템을 창조했다. 터보 스프레이 이온 소스 및 일렉트로스프레이 이온화를 다중 반응 모니터링 (MRM) 스캔에서 이용했다. 부가적 파라미터는 하기를 포함했다: 충돌 기체, 6 L/min; 커튼 기체, 30L/min; 네불라이즈 (nebulize) 기체, 50 L/min; 보조 기체, 50 L/min; 온도, 500℃; 이온스프레이 전압, +5500 v (양성 MRM). Quadripoles Q1 및 Q3 을 각각 456.2 및 200.2 로 설정했다; 디클러스터링 전위 (declustering potential) (DP), 입구 전위 (entrance potential) (EP), 및 충돌 전지 입구 전위 (collision cell entrance potential) (CE) 를 각각 120, 10, 및 55 v 로 설정했다; 충돌 전지 출구 전위 (collision cell exit potential) (CXP) 는 12 v 였다.
분석
모든 계산을 Microsoft Excel 을 사용하여 수행할 수 있다. 추출된 이온 크로마토그램으로부터 피크 면적을 확인했다. 대조군 화합물을 검정에 포함시켰다. 명시된 한계 내에 있지 않은 화합물의 임의의 값을 거부했고, 실험을 반복했다. 보조 인자가 없는 반응 시스템을 사용하여 화학물질 자체의 불안정성으로부터 초래된 임의의 오도 인자를 배제했다.
결과
약학 및 의료 화학에서, 용해성, 안정성, 및 합성 신뢰성과 같은 약물 개발에 대한 적합성을 빌려주는 특성을 갖는 잠재적 화합물을 갖는 것이 흔히 요망된다. 예를 들어, -(CH2)3-NR4b- 를 유도하는 부분 -(CH2)m-Y-(CH2)n-Z- 를 포함하는 화합물은 비교적 양호한 안정성 및/또는 생성물에 의해 거의 바람직하지 않지 않은 것으로 합성되기 쉬운 것으로 나타났다. 추가로, 상기 표에 개시된 바와 같이, R3 이 헤테로아릴, 시아노, 또는 -S(O)2N(CH3)2 (R6 또는 R6a 로 칭함) 로 치환되는 아릴인 화합물은 일반적으로 양호한 잠재성을 제시하였다.
조성물
하기는 본원에 공개된 화합물을 전달하는데 사용될 수 있는 조성물의 실시예이다. 이들은 기술분야에 알려진 방법을 사용하여 캡슐화 또는 습식 과립화될 수 있다.
Figure pct00196
상기 설명으로부터, 통상의 기술자는 본 발명의 본질적 특성을 쉽게 확인할 수 있고, 본 발명의 주제 및 범위에서 벗어나지 않으면서 발명을 다양하게 변화 및 변경하여 발명을 다양한 용도 및 조건에 적응시킬 수 있다.
다른 구현예
위에 제시된 상세한 설명은 통상의 기술자가 본 공개를 실시하는 것을 돕기 위해 제공된 것이다. 그러나, 본원에 기재되고 청구된 공개는 본원에 공개된 특정 구현예에 의해 범위가 제한되지 않으며, 그 이유는 이들 구현예가 공개의 여러 양상들의 예시로서 의도되기 때문이다. 임의의 등가 구현예가 이 공개의 범위 내에 있는 것이 의도된다. 실제로, 본원에 제시 및 기재된 것에 더하여 공개의 다양한 변경이 상기 명세서로부터 통상의 기술자에게 명백해질 것이며, 이러한 변경은 본 발명의 발견의 주제 또는 범위에서 벗어나지 않는다. 그러한 변경은 또한 첨부된 청구 범위에 속하는 것으로 의도된다.
이 명세서에서 언급된 모든 참고문헌은 본원에 참조로 포함된다. 본원에서 참고문헌의 논의는 단지 그것들의 저자에 의해 제기된 주장을 요약하기 위한 것이고, 어떠한 참고문헌이 특허성과 관련하여 선행 기술을 이루는 것은 허용되지 않는다. 출원인은 언급된 참고문헌의 정확성 및 적절성에 도전할 권리를 갖는다.

Claims (62)

  1. 식 IV 의 화합물, 또는 이의 염, 다형체 또는 용매화물:
    Figure pct00197

    [식 중:
    Y 는 결합, NR4a, O, C(O)NH, NHC(O), S, SO2, CHOH, 및 CH2 로부터 선택되고;
    Z 는 결합, NR4b, O, C(O)NH, NHC(O), S, SO2, 및 CH2 로부터 선택되고;
    m 은 0, 1, 2, 3, 4, 및 5 로부터 선택되고;
    n 은 0, 1, 2, 및 3 으로부터 선택되고;
    R1 및 R2 는 각각 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 알킬술포닐알킬, 알콕시알킬, 아릴, 아릴알킬, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 페닐, 바이페닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 헤테로시클로알킬, 및 헤테로시클로알킬알킬로부터 선택되고, R1 및 R2 는 이들이 부착된 질소와 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
    R4a 및 R4b 는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 시클로알킬로부터 선택되고;
    R5 는 아릴 및 헤테로아릴로부터 선택되며, 이들 중 어느 하나는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
    R6a 는 헤테로아릴, 시아노, 및 S(O)2N(CH3)2 로부터 선택되고;
    각 R6 은 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 알킬술포닐아릴, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 할로알킬, 할로알콕시, 할로아릴, 알콕시아릴, 아릴, 아릴옥시, 아르알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 시아노, 알콕시, 알콕시아릴, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 옥소, COR7, SO2R7, NHSO2R7, NHSO2NHR7, NHCOR7, NHCONHR7, CONHR7, 및 CONR7R8 로부터 선택되고;
    R7 및 R8 은 독립적으로 수소, 아릴, 및 저급 알킬로부터 선택되거나; 또는 R7 및 R8 은 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성할 수 있으며, 이는 저급 알킬로 임의 치환될 수 있음].
  2. 제 1 항에 있어서, Z 가 NR4b 인 화합물.
  3. 제 2 항에 있어서, R4b 가 메틸 및 수소로부터 선택되는 화합물.
  4. 제 3 항에 있어서, R4b 가 수소인 화합물.
  5. 제 4 항에 있어서, 알킬이 그 자체로 또는 또다른 비(非)시클릭 치환기의 명명되는 부분으로서 이든지간에, C1-C8 알킬인 화합물.
  6. 제 5 항에 있어서, m 이 0 이고; Y 가 CH2 이고; n 이 0, 1, 및 2 로부터 선택되는 화합물.
  7. 제 6 항에 있어서, n 이 2 인 화합물.
  8. 제 5 항에 있어서, R1 및 R2 가 각각 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 알킬술포닐알킬, 알콕시알킬, 및 헤테로아릴로부터 선택되고, R1 및 R2 가 이들이 부착된 질소와 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성하며, 이것이 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있는 화합물.
  9. 제 8 항에 있어서, R1 및 R2 에 의해 이들이 부착된 질소와 함께 형성되는 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리가 3 내지 8 개의 원자를 함유하는 화합물.
  10. 제 9 항에 있어서, R1 및 R2 가 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬을 형성하며, 이것이 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있는 화합물.
  11. 제 10 항에 있어서, 질소-함유 헤테로시클로알킬이 알킬, 할로겐, CONH2, SO2CH3, 시아노, 스피로-헤테로시클로알킬, 및 옥소로부터 선택되는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환되는 화합물.
  12. 제 10 항에 있어서, 질소-함유 헤테로시클로알킬이 하기로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00198

    Figure pct00199
  13. 제 12 항에 있어서, 질소-함유 헤테로시클로알킬이 하기로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00200
  14. 제 13 항에 있어서, 질소-함유 헤테로시클로알킬이 하기인 화합물:
    Figure pct00201
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 각 R6a 가 시아노, S(O)2N(CH3)2,
    Figure pct00202

    로부터 선택되는 화합물.
  16. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, R5 가 페닐이며, 이것이 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있는 화합물.
  17. 제 5 항에 있어서, R5 가 하기인 화합물:
    Figure pct00203

    [식 중, R6b 는 할로겐, 히드록시, 및 메톡시로부터 선택됨].
  18. 제 17 항에 있어서, R6b 가 플루오로, 메톡시, 및 히드록시로부터 선택되는 화합물.
  19. 제 18 항에 있어서, R6b 가 플루오로인 화합물.
  20. 제 1 항에 있어서, 식 V 의 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물:
    Figure pct00204

    [식 중:
    R1 및 R2 는 각각 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 알킬술포닐알킬, 알콕시알킬, 아릴, 아릴알킬, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 페닐, 바이페닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 헤테로시클로알킬, 및 헤테로시클로알킬알킬로부터 선택되고, R1 및 R2 는 이들이 부착된 질소와 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성하며, 이는 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있고;
    R4a 는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 시클로알킬로부터 선택되고;
    R6a 는 헤테로아릴, 시아노, 및 S(O)2N(CH3)2 로부터 선택되고;
    각 R6 및 R6b 는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 알킬술포닐아릴, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 할로알킬, 할로알콕시, 할로아릴, 알콕시아릴, 아릴, 아릴옥시, 아르알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로아릴, 알킬헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 시아노, 알콕시, 알콕시아릴, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 옥소, COR7, SO2R7, NHSO2R7, NHSO2NHR7, NHCOR7, NHCONHR7, CONHR7, 및 CONR7R8 로부터 선택되고;
    R7 및 R8 은 독립적으로 수소, 아릴, 및 저급 알킬로부터 선택되거나; 또는 R7 및 R8 은 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성할 수 있으며, 이는 저급 알킬로 임의 치환될 수 있음].
  21. 제 20 항에 있어서, R4b 가 메틸 및 수소로부터 선택되는 화합물.
  22. 제 21 항에 있어서, R4b 가 수소인 화합물.
  23. 제 22 항에 있어서, 각 R6a 가 시아노,
    Figure pct00205

    로부터 선택되는 화합물.
  24. 제 20 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, R1 및 R2 가 각각 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 알킬술포닐알킬, 알콕시알킬, 및 헤테로아릴로부터 선택되고, R1 및 R2 가 이들이 부착된 질소와 함께 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리를 형성하며, 이것이 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있는 화합물.
  25. 제 24 항에 있어서, R1 및 R2 에 의해 이들이 부착된 질소와 함께 형성되는 질소-함유 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴 고리가 3 내지 8 개의 원자를 함유하는 화합물.
  26. 제 25 항에 있어서, R1 및 R2 가 함께 취해져 질소-함유 헤테로시클로알킬을 형성하며, 이것이 0 내지 3 개의 R6 기로 임의 치환될 수 있는 화합물.
  27. 제 26 항에 있어서, 질소-함유 헤테로시클로알킬이 하기로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00206

    Figure pct00207
  28. 제 27 항에 있어서, 질소-함유 헤테로시클로알킬이 하기로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00208
  29. 제 28 항에 있어서, 질소-함유 헤테로시클로알킬이 하기인 화합물:
    Figure pct00209
  30. 제 20 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, R6b 가 플루오로, 메톡시, 및 히드록시로부터 선택되는 화합물.
  31. 제 30 항에 있어서, R6b 가 플루오로인 화합물.
  32. 제 1 항에 있어서, 본원에 공개된 실시예들 중 하나로부터 선택되는 화합물.
  33. 하기 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물:
    Figure pct00210
    .
  34. 하기 식의 염, 또는 이의 다형체 또는 용매화물:
    Figure pct00211

    [식 중:
    X 는 토실레이트, 술페이트, 타르트레이트, 옥살레이트, 베실레이트, 푸마레이트, 시트릭, 에실레이트, 및 말레이트로부터 선택되고;
    q 는 1 및 2 로부터 선택되는 정수임].
  35. 제 34 항에 있어서, X 가 토실레이트인 염.
  36. 제 35 항에 있어서, q 가 2 인 염.
  37. N-((S)-5-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일)-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 비스-토실레이트, 또는 이의 다형체.
  38. N-((S)-5-((1R,2S)-2-(4-플루오로페닐)시클로프로필아미노)-1-(4-메틸피페라진-1-일)-1-옥소펜탄-2-일)-4-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 비스-토실레이트 형태 2.
  39. 제 1 항에서 인용된 바와 같은 화합물의 토실레이트 염, 또는 이의 다형체 또는 용매화물.
  40. 제 1 항에서 인용된 바와 같은 화합물의 비스-토실레이트 염, 또는 이의 다형체 또는 용매화물.
  41. 약제로서 사용되는, 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 염, 다형체, 또는 용매화물.
  42. KDM1A-매개된 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에서 사용되는, 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 염, 다형체, 또는 용매화물.
  43. 약학적으로 허용가능한 담체와 함께, 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 염, 다형체, 또는 용매화물을 포함하는 약학 조성물.
  44. 제 43 항에 있어서, 경구 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
  45. 제 44 항에 있어서, 또다른 치료제를 추가 포함하는 약학 조성물.
  46. 본원에 공개된 실시예 1-38, 41-86, 및 89-188 로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물.
  47. 제 46 항에 있어서, 약제로서 사용되는 화합물, 또는 이의 염 또는 전구약물.
  48. KDM1A-매개된 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에 사용되는, 제 44 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 또는 이의 염 또는 전구약물.
  49. 약학적으로 허용가능한 담체와 함께, 제 46 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 이의 염, 다형체, 또는 용매화물을 포함하는 약학 조성물.
  50. 제 49 항에 있어서, 경구 투여를 위해 제형화되는 약학 조성물.
  51. 제 49 항에 있어서, 또다른 치료제를 추가 포함하는 약학 조성물.
  52. KDM1A 를 제 1 항 내지 제 40 항 또는 제 46 항 중 어느 한 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물과 접촉시키는 것을 포함하는, KDM1A 의 저해 방법.
  53. 치료 유효량의 제 1 항 내지 제 40 항 또는 제 46 항 중 어느 한 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물을 이를 필요로 하는 환자에 투여하는 것을 포함하는, KDM1A-매개된 질환의 치료 방법.
  54. 제 53 항에 있어서, 질환이 암인 방법.
  55. 제 54 항에 있어서, 암이 유윙 육종(Ewing's sarcoma), 다발성 골수종, T-세포 백혈병, 빌름스 종양(Wilm's tumor), 소세포 폐암, 방광암, 전립선암, 유방암, 두경부암, 결장암, 및 난소암으로부터 선택되는 방법.
  56. 제 53 항에 있어서, 질환이 골수성 질환인 방법.
  57. 제 56 항에 있어서, 골수성 질환이 골수섬유증, 진성다혈구증, 본태성 혈소판증가증, 골수형성 증후군 (MDS), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 만성 골수성 백혈병 (CML) 으로부터 선택되는 방법.
  58. 제 53 항에 있어서, 질환이 염증성 질환인 방법.
  59. 제 58 항에 있어서, 염증성 질환이 염증성 장 질환, 류머티스성 관절염, 또는 전신 홍반성 루프스로부터 선택되는 방법.
  60. 치료 유효량의 제 1 항 내지 제 40 항 또는 제 46 항 중 어느 한 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물을 이를 필요로 하는 환자에 투여하는 것을 포함하는, 글로빈-매개된 질환의 치료 방법.
  61. 치료 유효량의 제 1 항 내지 제 40 항 또는 제 46 항 중 어느 한 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물, 또는 이의 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 환자에서 효과를 달성하는 방법으로서, 효과가 적혈구 총수 (count) 의 상승, 태아 헤모글로빈을 함유하는 적혈구의 적혈구 총수의 상승, 적혈구 중 태아 헤모글로빈의 총 농도의 상승, 망상적혈구 중 태아 헤모글로빈의 총 농도의 상승, 골수-유래 적혈구 전구체, 예를 들어 전적혈모구 중 감마 글로빈 유전자의 전사의 증가, 단위 시간에 걸쳐 환자가 경험하는 겸상 적혈구 발증의 수의 감소, 겸상적혈구화 세포에 의해 야기되는 예를 들어, 심장, 비장, 뇌 또는 신장에서의 조직 손상의 중단 또는 방지, 시험관내 검정에서 환자 혈액을 사용하여 측정되는 상대적 저산소증의 생리적 조건 하에 겸상적혈구화를 겪는 적혈구의 비율의 감소, 치료된 환자에서 유래하는 세포를 사용하여 ChIP 에 의해 검정되는 감마 글로빈 프로모터에서 또는 그 가까이에서 라이신 위치 4 에서의 히스톤 3 라이신 메틸화 (H3K4me1 및 H3K4me2) 의 양의 증가, 및/또는 라이신 위치 9 에서의 히스톤 3 메틸화 (H3K9me1 또는 H3K4me2) 의 양의 감소로부터 선택되는 방법.
  62. KDM1A 를 제 1 항 내지 제 40 항 또는 제 46 항 중 어느 한 항에서 인용된 바와 같은 화합물, 또는 이의 염, 다형체, 또는 용매화물과 접촉시키는 단계를 포함하는 적어도 하나의 KDM1A 기능의 저해 방법으로서, 저해가 인간 베타 글로빈 좌위 또는 그의 일부를 함유하는 인간 또는 마우스 또는 트랜스제닉 마우스의 생체 내의 또는 배양된 적혈구 또는 그의 전구체의 표현형, 암 세포의 증식하는, 분화되는 또는 세포자멸사를 겪도록 유도되는 능력, KDM1A 활성에 의해 조절되는 것으로 알려진 특정 유전자, 예컨대 감마 글로빈 또는 HOXA9 의 발현, 히스톤 메틸화 상태의 변화, KDM1A 에 의해 탈메틸화되는 것으로 알려진 단백질, 예컨대 G9a, p53, DNMT1 또는 SUV39H1 의 메틸화 상태의 변화, KDM1A-조절되는 유전자의 발현, 또는 KDM1A 와 천연 결합 상대, 예컨대 CoREST, NuRD, DNMT1 또는 HDACs 의 결합에 의해 측정되는 방법.
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