KR20170110320A - 피하주사용 항암제 함유 리포솜 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 독소루비신, 시스플라틴 등의 수용성 항암제의 생체이용률 증가와 환자 맞춤형 투여가 가능한 제제 및 이러한 제제의 제조방법에 관한 것이다. 이러한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 탄산 및 항암제를 함유하고 있는 리포솜이며, 이러한 리포솜들이 히야론산으로 연결되어 클러스터를 형성하고 있는 것을 특징으로 하는 항암제 함유 리포솜 클러스터를 유효 성분으로 함유하고 있으며, 온열 적용으로 항암제의 방출이 유도되는 것을 특징으로 하는 항암제의 피하주사용 약학 조성물과 이러한 약학 조성물의 제조방법을 제공한다.

Description

피하주사용 항암제 함유 리포솜 조성물{Liposome composition containing anti-cancer drug for subcutaneous injection}
본 발명은 독소루비신, 시스플라틴 등과 같은 수용성 항암제의 효과적 투여 및 이용을 위한 약학 제제에 관한 것으로서, 환자 맞춤형 투여가 가능한 피하 주사형 제제 및 이러한 주사 제제의 제조방법에 관한 것이다.
독소루비신, 시스플라틴 등의 수용성 항암제는 대부분 경구 흡수시 생체흡수율이 낮아 주사를 통한 방법으로 투여된다 (한국 공개특허공보 제2002-0013174호). 이러한 항암제의 주사 제형과 관련하여, 병원의 방문 횟수를 줄이고, 통증 등 여러 부작용을 감소시킬 목적으로 다양한 연구가 행해지고 있다.
최근 리포솜(liposome)에 의한 효과적인 약물전달을 위하여 특정 병소에서 특이적인 외부 자극(예를 들어, 광선, pH, 온도, 초음파 등)에 의해 약물이 방출 및 제어되는 리포솜이 널리 연구되고 있다. 특히 현재 병원에서 비침습성 항암 치료를 위해 사용 중인 High Intensity Focused Ultrasound (HIFU)를 이용하거나 피부 미용에 사용되는 근적외선을 이용하는 외부자극 감응성 리포솜은 효과적이고 편리하게 응용 가능하다는 점에서 매우 큰 장점이 있다.
또한 리포솜의 표면을 개질하거나 봉입되는 물질을 다양화하여 단순한 약물전달 이외의 조영 작용이나 2차 치료효과를 나타내는 리포솜의 개발이 널리 연구되고 있다.
예를 들어, 미국 특허출원공개공보 제2006-0002994호의 경우 리포솜의 표면에 폴리에틸렌글리콜과 같은 친수성 고분자를 도입하여 초음파에 의한 방출을 유도하고자 하였다. 하지만 상기 특허 기술로 제조된 리포솜의 경우 체온인 37℃ 부근에서 봉입된 약물의 방출이 일부 일어나 약물을 방출을 효율적으로 제어하기 어렵고, 이러한 의도하지 않은 약물의 방출로 인해 여러 부작용이 나타날 수 있다.
또, 미국 특허출원공개공보 제2006-0127467호의 경우 리포솜의 구성성분인 인지질로 무극성 지질만을 사용하여 초음파 감응성 리포솜을 제조하였다. 하지만 상기 특허 기술로 제조된 리포솜의 경우 지질의 유리전이온도(Tg)에만 의존하여 약물을 방출하는 단점을 가지기 때문에 초음파의 공동화 효과에 의한 방출보단 열 효과에 의한 방출이 될 수밖에 없고, 이로 인해 높은 초음파 Hz에서만 제한적인 방출을 보인다는 단점을 갖는다.
또, 미국 특허출원공개공보 제2006-0034771호의 경우 리포솜의 내부에 가스를 봉입하여 초음파 응답이 가능한 리포솜을 제조하였다. 제조된 리포솜은 조영효과를 가지는 가스를 봉입하여 동시에 조영작용을 나타낼 수 있다. 하지만 상기 특허로 제조된 리포솜은 활성 물질의 전체적인 봉입량이 상당히 낮았다(1.4~1.8%). 따라서 투여 용량이 많은 약물을 고용량으로 봉입하는데 있어서는 적용 불가능한 단점이 있다. 또, 상기 방법에서는 생리활성물질이 열에 의해서 변성될 수 있다는 단점이 있으며, 또한 봉입시 온도 조절과 고압이 필요하는 등 복잡한 제조과정으로 생산화하기가 힘든 단점이 있다. 즉, 제조가 용이하지 않으며, 불안정한 가스를 봉입하였기에 그 안정성에 한계가 있다.
미국 특허출원공개공보 제2006-0002994호 (2006. 1. 5. 공개) 미국 특허출원공개공보 제2006-0127467호 (2006. 6. 15. 공개) 미국 특허출원공개공보 제2006-0034771호 (2006. 2. 16. 공개)
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 독소루비신, 시스플라틴 등 수용성 항암제의 방출을 효율적으로 제어할 수 있어서, 빈번한 주사 필요성으로 인한 통증과 불편함 문제를 효과적으로 해결할 수 있는 수용성 항암제 함유 제제 및 이러한 제제의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 탄산 및 수용성 항암제를 함유하고 있는 리포솜이며, 이러한 리포솜들이 히야론산으로 연결되어 클러스터를 형성하고 있는 것을 특징으로 하는 리포솜 클러스터를 유효 성분으로 함유하고 있으며, 온열을 조사하여 수용성 항암제의 방출이 유도되는 것을 특징으로 하는 수용성 항암제의 피하주사용 약학 조성물을 제공한다.
바람직하게, 본 발명에 있어서 상기 수용성 항암제는 독소루비신, 시스플라틴 또는 이들의 혼합물이다.
본 발명에 이용된 기술사상들 중 일부를 도 1 및 2에 나타내었다. 도 1 및 2에서 보는 바와 같이, 탄산 함유 리포솜 클러스터에 외부 온열로서 집속 초음파나 열 적외선과 같은 에너지를 가해주어 리포솜 클러스터가 투여된 부위가 약 42℃ 이상으로 되도록 온도가 상승하게 되면 리포솜 내부의 탄산이 기화되면서 리포솜을 파괴시키게 된다. 이에 따라 내부에 로딩되어 있는 항암제가 밖으로 방출되어 암세포에 흡수됨으로써 치료 목적을 달성할 수 있다. 어느 정도 방출이 되고 나서 외부 온열을 제거하게 되면 리포솜에서 약물의 방출이 멈추게 된다. 즉, 환자의 진피층에 일정양의 탄산 함유 리포솜 클러스터(직경이 약 5-50 μm)를 주사하고 피부에 집속 초음파나 열적외선을 일정 시간 조사하고 난 후, 항암제의 방출이 이루어지면 외부 온열을 제거하여 방출을 멈추게 하고 필요에 따라 반복적으로 재사용이 가능하다.
본 발명에 있어, "온열"은 약 39-50℃의 온도를 의미하며, 더욱 바람직하게는 약 40-43℃의 온도를 의미한다. 예를 들어, 병원에서 암 환자의 치료 요법중의 하나인 온열 치료를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "약" 또는 "대략"은 기재된 수치 대비 ±10%의 범위를 가질 수 있음을 의미한다.
본 발명에 따른 리포솜은 인지질을 이용하여 제조된다. 예를 들어, 난황 레시틴, 대두 레시틴, 수첨 레시틴 등의 레시틴, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 디팔미토일포스파티딜콜린 등이 1종 이상 이용될 수 있다. 리포솜을 구성하는 기본적인 지질로서 인지질은 리포솜 같은 층상 구조(lamellar structure)의 제조에 필수적으로 사용되어 온 물질이며, 이는 입자 형성에 안정화를 부여하는 이중막, 다중막을 구성하는 필수적인 역할을 하게 된다.
본 발명에 따른 항암제 함유 리포솜은 본 발명의 목적을 위해서 아민기를 함유한 지질 및 열 민감성 지질을 포함하고 있다. 아민기 함유 지질은 본 발명에서 사용된 히야론산과 결합하여 클러스터를 형성하는 역할을 하며, 열 민감성 지질은 온열 시 탄산 가스의 방출을 촉진하는 역할을 한다.
본 발명에서 사용될 수 있는 아민기를 함유한 지질로는 1차 아민(primary amine)을 가지는 인지질이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 탄소수 12 내지 20인 포화 지질(예를 들어, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid) 및/또는 탄소수 16 내지 20인 불포화 지질(예를 들어, palmitoleic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, arachidonic acid) 중에서 선택된 2개의 지질이 포스파티딜에탄올아민의 글리세롤 1 및 2번 위치에 연결된 아미노 PEG-포스파티딜에탄올아민이 사용될 수 있다. 본 발명의 여러 목적상 더욱 바람직하게, 본 발명에서 사용될 수 있는 아민기를 함유한 지질로는 DSPE-PEG 아민(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-amino(polyethylene glycol))(예를 들어, 바람직하게는 DSPE-PEG(2000) Amine)이 사용될 수 있다.
바람직하게, 본 발명에서 사용될 수 있는 열 민감성 지질로는 모노팔미토일포스파티딜콜린(1-palmitoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine), 모노스테아로일포스파티딜콜린(1-stearoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine), 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 열 민감성 지질로는 소수성기의 탄소수가 16-18인 알킬 사슬을 가지는 것이 바람직하다. 탄소수가 16 미만인 경우에는 상전이 온도가 체온 이하로 떨어져 지질 나노 입자의 체내 안정성이 저하될 우려가 있고, 탄소수가 18을 초과하는 경우에는 리포솜 입자의 크기가 증가하기 때문에 본 발명의 여러 목적상 또한 약물이 수용성 항암제라는 특성상 바람직하지 못하다.
상기 열 민감성 지질(예를 들어, 바람직하게는 MSPC 및/또는 MPPC)은 리포솜을 형성하는 전체 지질의 총 중량 대비 5-20 중량%를 함유하는 것이 바람직하며, 5-15 중량%를 함유하는 것이 더욱 바람직하고, 5-10 중량%를 함유하는 것이 더욱더 바람직하다.
이와 관련하여, 본 발명의 리포솜에 있어 구조 내에 포스파티딜콜린(PC)을 함유한 지질은 리포솜 입자의 열민감성을 부여해 줄 수 있는 특성이 있으며 전체 지질 조성에 대하여 40-95 중량% 함유하는 것이 바람직하다.
본 발명의 리포솜은 본 발명의 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 중성 지질(들)을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 이용될 수 있는 중성 지질로는 포스파티딜콜린; 라이소포스파티딜콜린(lysophosphatidylcholine); EPC(egg phosphatidylcholine); 탄소수 12 내지 20인 포화 지질(lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid) 및/또는 탄소수 16 내지 20인 불포화 지질(예를 들어, palmitoleic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, arachidonic acid) 중에서 선택된 하나 이상이 글리세롤에 연결된 포스파티딜콜린(예를 들어, DSPC(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DOPC(1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DL(linoleoyl)PC(dilinoleoyl phosphatidylcholine), DL(lauryloyl)PC(dilauryloyl phosphatidylcholine), DMPC(dimyristoyl phosphatidylcholine), DPPC(dipalmitoyl phosphatidylcholine), PLPC(1-palmitoyl-2-linoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), MPPC(l-myristoyl-2-palmitoyl phosphatidylcholine), PMPC(l-palmitoyl-2-myristoyl phosphatidylcholine), SPPC(l-stearoyi-2-palmitoyl phosphatidylcholine), DBPC(l,2-diarachidoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DEPC(1,2-dieicosenoyl-sn-glycero-3-phosphochohne), POPC(palmitoyloleoyl phosphatidylcholine), DOPC(dioleoyl phosphatidylcholine), DMPC(dimyristoyl phosphatidylcholine)); PE(phosphatidylethanolamine); 라이소포스파티딜에탄올아민(lysophosphatidylethanolamine); 탄소수 12 내지 20인 포화 지질(lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid) 및/또는 탄소수 16 내지 20인 불포화 지질(예를 들어, palmitoleic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, arachidonic acid) 중에서 선택된 하나 이상이 글리세롤에 연결된 포스파티딜에탄올아민(예를 들어, DSPE(distearoyl phophatidylethanolamine), DMPE(dimyristoyl phosphatidylethanolamine), DPPE(dipalmitoyl phosphatidylethanolamine), POPE(palmitoyloleoyl phosphatidylethanolamine), DOPE(dioleyl phosphatidylethanolamine), DSPE(distearoyl phophatidylethanolamine), POPE(palmitoyloleoyl phosphatidylethanolamine), DOPE(dioleyl phosphatidylethanolamine)); PEG-PE(polyethylene glycol-phosphatidylethanolamine); 탄소수 12 내지 20인 포화 지질(lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid) 및/또는 탄소수 16 내지 20인 불포화 지질(예를 들어, palmitoleic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, arachidonic acid) 중에서 선택된 하나 이상이 글리세롤에 연결된 알콕시 PEG-PE(예를 들어, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-[알콕시(폴리에틸렌글리콜)](DSPE-PEG)(예를 들어, 바람직하게는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)2000](DSPE-mPEG-2000)), MPEG-DSPE(carbonyl methoxypolyethylene glycol-distearoyl phosphatidylethanolamine)(예를 들어, 바람직하게는 DSPE-MPEG-750, DSPE-MPEG-2000 및 DSPE-MPEG-5000), MPEG-DPPE(carbonyl methoxypolyethylene glycol-dipalmitoyl phosphatidyl ethanolamine)(예를 들어, 바람직하게는 DPPE-MPEG-2000 및 DPPE-MPEG-5000), DMPE-MPEG(carbonyl methoxypolyethylene glycol-dimyristoyl phosphatidylethanolamine)(예를 들어, 바람직하게는 DMPE-MPEG-2000 및 DMPE-MPEG-5000); 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다.
다만, 본 발명의 목적상 또 약물이 독소루비신, 시스플라틴 등의 수용성 항암제라는 특성상 중성 지질로 디아스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-hosphocholine; DSPC), 디팔미토일포스파티딜콜린(dipalmitoyl phosphatidylcholine; DPPC), DOPC(1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DMPC(dimyristoyl phosphatidylcholine), PLPC(1-palmitoyl-2-linoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), PE(phosphatidylethanolamine), EPC(egg phosphatidylcholine) DLPC(dilauryloyl phosphatidylcboline), DMPC(dimyristoyl phosphatidylcholine), MPPC(l-myristoyl-2-palmitoyl phosphatidylcholine), PMPC(l-palmitoyl-2-myristoyl phosphatidylcholine), SPPC(l-stearoyi-2-palmitoyl phosphatidylcholine), DBPC(l,2-diarachidoyl-snglycero-3-phosphocholine), DEPC(1,2-dieicosenoyl-sn-glycero-3-phosphochohne), POPC(palmitoyloleoyl phosphatidylcholine), DSPE(lysophosphatidylcholine), 또는 이들의 혼합물이 바람직하며, DPPC, DSPE 또는 이들의 혼합물을 이용하는 것이 더욱더 바람직하다.
본 발명의 리포솜은 본 발명의 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 양이온성 지질 및/또는 음이온성 지질을 추가적으로 포함할 수 있다.
상기 양이온성 지질로 사용되는 것은 디알킬디메틸암모늄, 디오레오일포스파티딜에탄올아민, 디오레오일디알킬트리메틸암모늄프로판 또는 디오레오일디알킬디메틸암모늄프로판을 포함하나, 이외에 본 발명이 속한 분야에서 잘 알려진 다른 다양한 양이온성 지질이 사용될 수 있다.
상기 음이온성 지질에는 디미리스틸글리세로포스페이트, 디팔미토일글리세로포스페이트 디미리스틸글리세로포스페이트, 디스테로일글리세로포스페이트, 디스테로일글리세로포스포글리세롤, 디팔미토일글리세로포스포라글리세롤, 디미리스틸글리세로포스포세린, 디팔미토일글리세로포스포세린 또는 디스테로일글리세로포스포세린을 포함하나, 이외에 본 발명이 속한 분야에서 잘 알려진 다른 다양한 음이온성 지질이 사용될 수 있다.
본 발명의 여러 목적상, 본 발명에 따른 수용성 항암제 함유 리포솜에 있어 아민기를 함유한 지질은 바람직하게 DSPE-PEG 아민(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-amino(polyethylene glycol))이고, 열 민감성 지질은 바람직하게 모노팔미토일포스파티딜콜린(1-palmitoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine), 모노스테아로일포스파티딜콜린(1-stearoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine), 또는 이들의 혼합물이다.
본 발명의 여러 목적상 보다 바람직하게, 본 발명에 따른 수용성 항암제 함유 리포솜에 있어 리포솜을 형성하는 중성 지질로는 DPPC와 같은 타입의 포스파티딜콜린류 지질 및 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-[알콕시(폴리에틸렌글리콜)](DSPE-PEG)(예를 들어, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)2000](DSPE-mPEG-2000)]이 사용되고, 아민기 함유 지질로는 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] (ammonium salt)이 사용된다. 이와 같은 지질은 클러스터 형성을 위한 히야론산과의 반응에 필요한 아민기를 공여하는 역할을 하게 되고, PEG 고분자는 리포솜을 안정하게 하는 역할을 한다.
본 발명의 리포솜은 본 발명의 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 여러 가지 보조제를 추가적으로 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 또한 리포솜의 제조에 있어 유화안정보조제로 폴리올을 포함할 수 있으며, 이러한 폴리올로는 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스리톨, 자이리톨, 솔비톨 등이 사용될 수 있고, 이러한 폴리올로는 글리세린, 부틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜등이 더욱 바람직하다. 본 발명은 또한 리포솜 제조에 세라마이드를 추가로 이용할 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 리포솜에 올리고당을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 올리고당으로 푸코이단, 글루코사민, 팩틴질, 헤파린등이 사용될 수 있으며, 푸코이단이 가장 바람직하다.
본 발명의 리포솜을 클러스터를 만들기 위해 사용되는 히야론산 고분자는 분자량이 증가할수록 리포솜과의 결합을 할 수 있는 카르복실기를 많이 함유하고 있고 주사제의 적절한 점도 유지에 도움이 된다. 본 발명의 목적상 이러한 히야론산의 분자량은 중량평균 분자량이 약 10만 내지 100만인 것이 바람직하며, 중량평균 분자량이 약 30만 내지 50만인 것이 더욱 바람직하다. 바람직한 분자량을 가진 히야론산이 사용될 경우 주사 후 리포솜의 이동을 방지하여 적용 부위가 3일 이상 동일한 위치에 있을 수 있게 하는 역할을 할 수 있을 것이며 적절한 점도유지로 주사하기에 편리하다.
본 발명의 수용성 항암제 함유 리포솜 클러스터에 있어, 리포솜은 본 발명의 목적상 직경이 약 10-400 nm인 것이 바람직하며, 약 50-300 nm인 것이 더욱 바람직하고, 50-200 nm인 것이 더욱더 바람직하며, 100-150 nm의 입자 지름을 갖는 것이 가장 바람직하다. 리포솜 나노 입자의 평균 입경이 상기 범위를 초과할 경우 리포솜의 안정성이 저하되거나 수용성 항암제의 로딩이 감소하게 된다.
본 발명의 수용성 항암제 함유 리포솜 클러스터에 있어, 클러스터는 본 발명의 목적상 (특히 피하주사 후 주사 부위에 고정한다는 목적상) 직경이 약 1-50 μm인 것이 바람직하다. 작은 주사바늘을 사용이 가능하고 주사 후 통증이 적다는 측면도 고려하면 클러스터 입경은 10-30 μm인 것이 더욱 바람직하다. 다만, 10 μm 보다 적을 경우 입자의 체내에서 이행될 가능성이 증가한다.
본 발명에 있어 리포솜과 클러스터의 입경은 전기영동 광산란 분광광도기(Electrophoretic Light Scattering Spectrophotometer)를 이용해 측정된 값으로, 입도 분포에서 누적 체적이 50 부피%에 해당하는 입자의 직경인 평균 입경(D50)을 의미한다.
본 발명은 또한 (a) 아민기를 함유한 지질 및 열 민감성 지질을 이용하여 수용성 항암제 및 탄산을 함유하는 리포솜을 제조하는 단계, 및 (b) 상기 (a)단계에서 제조된 리포솜과 히야론산 고분자의 반응을 통해 리포솜 클러스터를 형성하는 단계를 추가적으로 포함하는, 수용성 항암제의 피하주사에 적합한 수용성 항암제 함유 리포솜 클러스터를 제조하는 방법을 제공한다.
바람직하게, 상기 탄산 함유 리포솜은 카르복실기가 2개 이상 있는 약산 및 탄산수소암모늄(ammonium bicarbonate)을 리포솜 내에 봉입하여 만들어질 수 있다. 약산은 50-500 mmol, 바람직하게는 200-300 mmol에서 항암제의 봉입효율을 가장 높일 수 있다. 상기 카르복실기가 2개 이상 있는 약산으로는, 예를 들어, 말레익, 퓨마릭, 석시닉, 타르타릭, 시트릭 산, 또는 이들의 혼합물을 이용할 수 있으나, 보다 바람직하게, 상기 약산으로는 구연산(citric acid)이 이용된다.
앞서 언급한 바와 같이, 본 발명의 제조방법에서 상기 (a) 단계의 리포솜을 제조하는 단계는 중성 지질을 추가적으로 이용할 수 있으며, 본 발명의 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 양이온성 지질 및/또는 음이온성 지질을 추가적으로 더 이용할 수 있다.
본 발명의 리포솜은 곧은 통로 또는 굴곡 통로를 가진 필터를 통해 압출하거나, 호모게나이저를 이용하여 균질화함으로써 축소된 균일한 크기분포를 가지도록 할 수 있으며, 제조된 용액을 탈수법 또는 동결건조법으로 건조시킬 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어 수용성 항암제의 리포솜 내 로딩은 본 발명이 속한 분야에서 통상적으로 알려진 여러 방법을 이용할 수 있다. 예를 들어, 열 민감성의 리포솜을 제조하면서 수용성 항암제를 통상적인 수화방법으로 로딩할 수 있다. 이외에 본 발명이 속한 분야에서 통상적으로 알려진 pH gradient loading 방법과 ammonium ion loading 방법을 이용하여 항암제를 봉입시킬 수 있다(예를 들어, Biochimica et Biophysica Acta 1758 (2006) 1633-1640 참조). 보다 구체적으로 예를 들어, 본 발명의 바람직한 약산인 구연산을 먼저 봉입하고 클러스터를 다 만든 다음 약물을 수용액에 넣으면 리포솜 표면에 삼투압이 발생하여 약이 리포솜 내로 들어가게 되고 이후에 유기산과 수소 결합하여 분자가 큰 가교체를 형성하여 다시 밖으로 나오지 못하여 로딩이 증가하는 '리모트 로딩' 방식을 이용할 수 있다.
또한, 상기 탄산수소암모늄 등은 본 발명이 속한 분야에서 통상적인 방법으로 리포솜 내에 로딩될 수 있다. 예를 들어, 저온의(약 4℃ 이하) 탄산수소암모늄 포화 수용액에 만들어진 열 민감성의 리포솜을 수화하는 방법을 사용하여 탄산 포화 용액을 1차 로딩시키고, 이어서 앞서 언급한 리모트 로딩 방법을 이용하여 항암제인 독소루비신 등을 10 내외에서 24시간 동안 로딩하여 2차 로딩을 마칠 수 있다.
히야론산을 이용한 리포솜 클러스터의 제조는 본 발명이 속한 분야에서 알려진 통상적인 방법을 이용할 수 있으며, 본 발명의 목적상 바람직하게는, Carbodiimide 커플링 반응을 이용할 수 있다. 예를 들어, 히야론산과 EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide)(또는 DCC(dicyclohexylcarbodiimide))와 NHS(N-hydroxysuccinimide esters)을 혼합하여 카복시기를 활성화시킨 다음 아민기를 함유한 리포솜을 첨가하여 상온에서 2시간 이상 반응을 유도하여 히야론산과 리포솜이 결합된 클러스터를 얻을 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 앞서 언급한 수용성 항암제 함유 리포솜 클러스터 이외에, 본 발명의 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 주사용 생리식염수, 등장화제, pH조절제, 안정화제, 계면활성제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 수용성 항암제 함유 리포솜 클러스터는 수용성 항암제의 생체이용률을 증가시킬 수 있으며, 필요에 따라 항암제를 방출하게 할 수 있는 환자 맞춤형 투여가 가능한 제제이다. 본 발명의 항암제 함유 리포솜 클러스터는 특히 주사 부위에 투여 약물이 고정되어 있어 열적외선, 집속초음파 등과 같은 온열의 국소 적용이 가능하다. 본 발명의 리포솜 클러스터는 또한 생분해성의 리포솜으로 제조되어 몸에 축적되지 않고 분해될 수 있으며, 독성이 없어 안전하다.
본 명세서에 첨부되는 다음의 도면들은 본 발명의 바람직한 실시예를 예시하는 것이며, 전술한 발명의 내용과 함께 본 발명의 기술사상을 더욱 이해시키는 역할을 하는 것이므로, 본 발명은 그러한 도면에 기재된 사항에만 한정되어 해석되어서는 아니 된다.
도 1은 본 발명의 여러 기술사상들 중 일부를 보여주는 개념도이다. 리포솜(직경이 약 100-400 nm) 내부에 로딩된 함암제와 탄산은 일정 온도 이상(약 42℃ 이상) 가열되면 탄산이 기화하여 리포솜을 파괴하고 항암제가 방출하게 된다. 그 후 온열을 제거하면 방출이 중지된다.
도 2는 본 발명의 여러 기술사상들 중 일부를 보여주는 개념도로, 히야론산으로 결합되고, 항암제인 약물이 로딩된 리포솜(직경이 약 100-400 nm)과 히야론산 고분자로 결합된 리포솜 글러스터의 구성 예를 보여준다. 피하 주사 후, 일정 강도의 온열을 받아 약 42℃ 이상으로 가열되면 탄산이 기화되어 항암제를 방출하게 된다.
도 3은 본 발명에 따른 일 실시예인 실시예 1-3의 탄산 리포솜에 온열을 가했을 때 형태의 변화를 알아보기 위하여 측정한 Cryo-TEM 사진이다.
도 4는 초음파 영상 진단장치를 이용하여 온열 조건에서 리포솜에서 기체 발생여부를 측정한 결과이며, 또, 외부 온도에 대한 약물방출의 민감성을 확인하기 위한 변화도이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명이 속한 분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
실시예 1: 탄산 함유 리포솜의 제조
리포솜을 제조하기 위하여, 지질 성분인 디팔미토일포스파티딜콜린(dipalmitoyl phosphatidylcholine, DPPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)2000](DSPE-mPEG-2000), DSPE-mPEG-2000amine(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000](ammonium salt), 및 모노스테아로일포스파티딜콜린(1-stearoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine) (MSPC)을 다양한 비율의 질량비로 사용하였다. 각 지질을 클로로포름에 용해시킨 후, 회전 증발기를 사용하여 40℃에서 감압하여 둥근 플라스크 벽면에 얇은 지질 막을 형성시켰다.
지질 막에 300 mM 구연산(citric acid)과 탄산수소암모늄(ammonium bicarbonate)를 서서히 넣으면서 pH 4의 완충액으로 제조하였다. 제조된 리포솜은 크기를 조절하기 위하여 가압압출기로 각각 200 nm, 100 nm 및 80 nm의 폴리카보네이트 분리막(Whatman, USA)을 이용하여 4-5회 이상씩 가압 압출하였다. 리포솜 내부에 봉입되지 않은 구연산은 Sephadex G-50 columns (20 mM HEPES buffer pH 7)을 이용하여 제거하였다.
제조되어진 리포솜에 독소루비신을 약물(독소루비신) : 지질비율이 1 : 10 (w/w)이 되도록 첨가하여 24℃에서 20시간 pH gradient loading 방법과 ammonium ion loading 방법을 이용하여 독소루비신 봉입을 수행하였다. 리포솜 내부에 봉입되지 않은 독소루비신은 Sephadex G-50 columns을 이용하여 제거하였다. 봉입효율은 UV-vis 분광광도계를 이용하여 최대 흡수파장 497 nm에서 측정하여, 하기 수학식 1에 의하여 계산하였다. 봉입 효율은 하기 표 2에 함께 나타내었다.
Figure pat00001
상기 화학식 1에서, 여기서 C f 는 클로로포름 : 메탄올 (8 : 2)(부피비)로 리포솜을 용해시킨 후의 독소루비신 농도이고 C i 는 초기에 첨가한 독소루비신의 농도이다.
리포솜의 모폴로지를 측정하기 위하여 Cryo-TEM (Tecnai G2 Spirit, FEI Company, Hillsboro, OR, USA)장비를 이용하였다. 5μl 용액을 채취 후 구리 그리드의 탄소필름에 시료를 로딩시킨 다음, 액화 질소로 급속 냉각 후 측정하였다. 본 이미지는 CCD camera (Proscan GmbH, Scheuring, Germany)로 기록하였으며, Analysis software (Soft Imaging System, GmbH, Munster, Germany)를 사용하였다.
비교예 1은 하기 표 1의 지질들을 사용하였다는 점과 구연산과 탄산수소암모늄을 봉입하는 과정을 제외하고는 실시예들과 동일하게 제조하였다.
하기 표 1은 실시예 1의 인지질 배합조건(중량비)를 나타낸다.
DPPC DSPE-mPEG-2000 DSPE-mPEG-2000amine MSPC
실시예1-1 80 4 4 12
실시예1-2 80 10 4 6
실시예1-3 80 4 10 6
실시예1-4 80 0 14 6
실시예1-5 80 14 0 6
비교예1 70 0 30 0
실시예 2: 탄산 함유 리포솜과 히야론산 고분자 반응을 통한 클러스터 형성
0.5 중량% 히야론산 고분자(중량평균 MW 350,000) 1ml를 1 중량% EDC와 1 중량% NHS 수용액에 첨가하여 카르복시 기의 활성화를 유도하였다. 탄산 함유 리포솜과 히야론산 반응 용액은 상온에서 2시간 이상 서서히 교반하면서 반응을 유도하였다. 반응이 종료된 후 미반응물의 제거를 위하여 4000 rpm이상에서 원심 분리하여 상층액을 버리고 침전물을 생리식염수로 재분산시켰다. 이와 같은 조작을 3회 이상 반복하였다.
시험예 1: 제조된 리포솜의 입자크기와 표면 전하 측정
각각 실시예에서 제조한 탄산 함유 리포솜과 비교예 1의 입자크기 및 표면 전하를 전기영동 광산란 분광광도기(ELS-Z, Otuska, 일본)를 이용하여 측정하였다. 측정결과는 하기 표 2에 나타내었다.
시험예 2: 온도에 따른 리포솜의 기포 발생
온도에 따른 리포솜의 기포 발생 여부를 판단하기 위하여 초음파 영상 진단장치를 이용하였다. 초음파 영상 진단장치는 7 MHz transducer (TELEMED, Lithuania)를 사용했다. 리포솜 1ml가 담긴 둥근 바닥 튜브를 항온조에 담지 후 측정하였다. 초음파 영상 이미지는 B-mode anatomic images로 나타내었다.
시험예 3: 리포솜으로부터 약물의 방출 특성
리포솜으로부터 약물의 방출 특성을 확인하기 위하여 각각의 온도와 시간에 따라 방출되는 독소루비신의 농도를 UV 분광 광도계를 사용하여 측정하였다. 온도에 따른 리포솜으로부터 독소루비신의 방출은 비교예 1, 및 실시예 1을 2분 간격으로 각각의 온도에 노출시킨 후, 리포솜 용액의 흡광도를 측정하였다. 시간에 대한 독소루비신의 방출 농도는 각각의 온도를 일정하게 유지시킨 후, 매 2분마다 리포솜 용액을 채취하여 분광광도계로 측정하여 다음의 수학식 2에 의하여 계산하였다.
Figure pat00002
상기 수학식 2에서, F t 는 각 조건에서 리포솜의 흡광강도이고, F i 는 약물의 방출이 일어나지 않은 범위(4)에서의 흡광강도이며, F f 는 클로로포름 : 메탄올 (8:2)(부피비)로 리포솜을 처리하여 측정한 독소루비신의 흡광강도이다.
각 실시예에 따른 리포솜의 단계별 물성 특성을 하기 표 2에 종합하여 나타내었다.
입자크기(μm) 표면전하(mV) 독소루비신
농도(mg/ml)/봉입율(%)		 ammonium bicarbonate(mg/ml)
실시예1-1 0.17 -11 0.76/38 20
실시예1-2 0.21 -16 0.87/44 20
실시예1-3 0.18 -19 0.97/49 20
실시예1-4 0.16 -26 1.2/60 20
실시예1-5 0.17 -29 1.1/55 20
비교예1 0.15 -17 1.2/60 0
실시예2-1 14.3 - -
실시예2-2 13.3 - -
실시예2-3 15.8 - 0.7*
실시예2-4 17.2 - -
실시예2-5 0.4 - 0*
비교예2 17.6 - -
* ; 마우스 피부 주사 1일 후 피부 내의 독소루비신 함량 변화
실시예 1에서 제조한 탄산 함유 리포솜의 물리적 특성을 확인한 결과, 표 2에 나타낸 바와 같이, 입자크기는 100-250 nm 정도로 큰 차이를 보이지 않았으나, DSPE-mPEG-2000와 DSPE-mPEG-2000amine의 질량비가 커질수록 표면전하가 점점 증가하였다.
또한, 항암제의 로딩율은 MSPC가 증가하면 리포솜의 안정성이 감소하여 로딩이 잘되지 않았다.
실시예 2의 결과, DSPE-mPEG-2000만 사용하고 DSPE-mPEG-2000amine를 사용하지 않은 실시예 2-5경우 히야론산 고분자의 카복시기와 결합할 수 있는 아민가가 없어서 입자의 크기가 증가하지 않았다. 따라서 주사 후 피부조직에서 다른 곳으로 쉽게 이행될 수 있는 아주 작은 크기를 보였다. 적어도 10마이크로 근처의 클러스터를 형성해야 주사 후 고정이 되어 근적외선 조사에서 약물을 방출하는 효과를 볼 수 있다.
본 발명에 따른 일 실시예인 실시예 1-3의 탄산 리포솜에 온열(42℃ 이상)을 가했을 때 형태의 변화를 알아보기 위하여 Cryo-TEM을 측정하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에서 보는 바와 같이, 실시예 1-3의 탄산 리포솜은 단일 막을 가지는 소포제의 모습으로 보였으며, 파티클의 사이즈는 100 내지 150nm로 보였다. 이것은 앞서 ELS를 통한 수치와 비슷한 수치이다. 열처리를 하기 전에는 100 내지 150 nm의 크기를 보였으나, 열처리 후에는 80 내지 100nm의 사이즈를 보였다. 또, 열처리를 하기 전에는 독소루비신은 리포솜 안에 봉입되어있는 상태로 보였지만, 열처리 후 리포솜 외부에 독소루비신이 방출된 상태를 확인하였다.
초음파 영상 진단장치를 이용하여 온열 조건에서 리포솜에서 기체 발생여부를 측정한 결과를 도 4에 나타내었으며, 또, 외부 온도 변화에 대한 약물방출의 민감성을 확인하기 위한 실험 결과를 도 4에 함께 나타내었다.
도 4에서 보는 바와 같이, 비교예 1에서는 45℃까지 기체 발생을 확인할 수 없었다. 그러나 실시예 1-3의 탄산 리포솜의 경우 37℃에서는 기포가 발생되지 않았지만, 42℃ 이상에서 기포가 발생하는 것을 확인할 수 있었다. 이것을 통해 리포솜 안에 봉입된 탄산암모늄이 기포를 발생한다는 것을 확인할 수 있었다.
외부 온도에 대한 약물방출의 민감성을 확인하기 위하여 비교예 1 및 실시예 1-3의 탄산 리포솜으로부터 온도 및 시간의 변화에 따른 약물의 방출 경향을 확인하였다. 온도에 의한 약물의 방출 민감성은 실시예 1-3의 탄산 리포솜의 경우, 37 - 40℃에서 약 80%의 급격한 방출현상을 나타내었다. 또한 비교예 1는 38 - 44℃ 범위에서 약 80% 이상의 방출을 나타내었다. 또한 37℃ 이하에서는 비교예 1과 실시예 1-3의 탄산 리포솜 모두 약 5% 이내로 방출이 제한적이었다. 본 결과로부터 체온 (37℃) 이하의 온도에서는 약물의 방출이 제한적이고 리포솜이 안정하며, 외부에서 체온 이상의 온도가 도입되었을 때 리포솜으로부터 약물의 방출을 급격히 증가시킬 것이라고 확인할 수 있었다. 본 결과는 초음파 영상에 기체 발생 온도와 연관성을 보이며, 예상대로 기체가 발생하는 온도 42℃ 이상에서 약물의 방출이 급격히 증가된다는 것을 확인하였다.
한편, 온열 온도 부근에서 시간에 대한 약물방출 특성을 확인하기 위하여 비교예 1과 실시예 1-3의 탄산 리포솜으로부터 시간에 따른 약물 방출 경향을 확인하였다. 또한 비교예 1과 실시예 1-3의 탄산 리포솜 모두 체온 (37℃)에서는 약물의 방출이 시간에 무관하였다. 한편, 비교예 1과 실시예 1-3의 탄산 리포솜은 42℃와 45℃ 범위에서 10분 이내에 약물의 방출이 80%정도 증가하였다. 특히 실시예 1-3의 탄산 리포솜는 42℃에서 1분 동안에 약 80%가 방출되었다. 이에 반해 비교예 1는 실시예 1-3의 탄산 리포솜에 비해 42℃에서는 다소 약물 방출 속도가 느리게 진행됨을 확인할 수 있었다.
본 결과로부터, 체온(약 37℃)에서는 시간과는 무관하게 약물의 방출이 최소한으로 제어됨으로써 리포솜 클러스터를 체내 근육주사 후, 리포솜이 체온에서는 비교적 안정한 상태로 유지되며 체온에 의하여 큰 영향을 받지 않음을 예측할 수 있다.
한편, 실시예의 탄산 리포솜은 온열 치료 범위에서 1-2분 이내에 약물의 방출이 최대한으로 증가함으로써 이러한 물성을 고형암 치료에 효과적으로 이용할 수 있을 것으로 생각된다. 즉, 본 발명의 항암제 포함 리포솜 클러스터를 고형암에 국소 주사하고, 외부에서 종양 조직의 온도를 상승시켜 줄 경우 고형암 이외의 부위에 항암제가 퍼지는 것을 최소화하면서, 즉, 부작용의 발생은 최소화하면서 고형암 치료는 극대화할 수 있을 것이라 판단된다.
시험예 3: 형성된 클러스터의 고정성 평가
실시예 3-3 및 3-5를 마우스에 피하 주사하고, 1일 후 주사부위를 적출하여 적출된 부위에 독소루비신의 함량을 측정하였다. 그 결과를 상기 표 2에 함께 나타내었다.
표 3의 결과(* 표시됨)에 나타나는 바와 같이, 마우스를 대상으로 0.1 ml를 피하 주사하고 1일 후 피부를 절제하여 피부에 남아 있는 독소루비신의 함량을 측정한 결과 실시예 3-3 리포솜 클러스터와 실시예 3-5의 리포솜을 비교해보면 리포솜 상태에서는 피부의 체액에 의하여 유실되어 독소루비신 리포솜이 관찰되지 않았지만, 리포솜 클러스터의 경우는 거의 그대로 유지됨을 알 수 있었다.

Claims (10)

  1. 탄산 및 수용성 항암제를 함유하고 있는 리포솜이며, 이러한 리포솜들이 히야론산으로 연결되어 클러스터를 형성하고 있는 것을 특징으로 하는 리포솜 클러스터를 유효 성분으로 함유하고 있으며,
    온열을 조사하여 수용성 항암제의 방출이 유도되는 것을 특징으로 하는 수용성 항암제의 피하주사용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 리포솜은 아민기를 함유한 지질 및 열 민감성 지질을 포함하고 있는 것을 특징으로 하는 수용성 항암제의 피하주사용 약학 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 아민기를 함유한 지질은 1차 아민을 가지는 인지질이며, 탄소수 12 내지 20인 포화 지질 및 탄소수 16 내지 20인 불포화 지질 중에서 선택된 2개의 지질이 포스파티딜에탄올아민의 글리세롤 1 및 2번 위치에 연결된 아미노 폴리에틸렌글리콜(PEG)-포스파티딜에탄올아민인 것을 특징으로 하는 수용성 항암제의 피하주사용 약학 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 상기 열 민감성 지질은 모노팔미토일포스파티딜콜린(1-palmitoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine), 모노스테아로일포스파티딜콜린(1-stearoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine), 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 수용성 항암제의 피하주사용 약학 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 수용성 항암제는 독소루비신, 시스플라틴 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 수용성 항암제의 피하주사용 약학 조성물.
  6. 제2항에 있어서, 상기 리포솜은 중성 지질을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 항암제의 피하주사용 약학 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 히야론산의 분자량은 30 내지 50만인 것을 특징으로 하는 수용성 항암제의 피하주사용 약학 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 리포솜은 직경이 50-300 nm이며, 클러스터는 직경이 10-50 μm인 것을 특징으로 하는 수용성 항암제의 피하주사용 약학 조성물.
  9. (a) 아민기를 함유한 지질 및 열 민감성 지질을 이용하여 수용성 항암제 및 탄산을 함유하는 리포솜을 제조하는 단계, 및
    (b) 상기 (a)단계에서 제조된 리포솜과 히야론산 고분자의 반응을 통해 리포솜 클러스터를 형성하는 단계를 추가적으로 포함하는,
    수용성 항암제의 피하주사에 적합한 수용성 항암제 함유 리포솜 클러스터를 제조하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 탄산은 탄산수소암모늄(ammonium bicarbonate)을 이용하여 만들어지는 것을 특징으로 하는,
    수용성 항암제의 피하주사에 적합한 수용성 항암제 함유 리포솜 클러스터를 제조하는 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Acta. Biomaterialia, 24, 279-285, 2015. *
Journal of Drug Delivery, 2013, 1-8, 2013. *
논문1: Acta Biomaterialia *
논문2: Journal of Drug delivery *

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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