KR20170107934A - 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단용 바이오마커 - Google Patents

동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단용 바이오마커 Download PDF

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KR20170107934A
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Abstract

본 발명은 혈관 조직을 이용한 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단용 바이오마커에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 정상인 혈관 조직 보다 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환을 갖는 환자의 혈관 조직에서 그 발현양이 감소 또는 증가되는 바이오마커에 관한 것이다.

Description

동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단용 바이오마커{BIOMARKER FOR DIAGNOSIS OF ARTERIOSCLEROSIS AND ISCHEMIC HEART DISEASE ASSOCIATED THEREWITH}
본 발명은 혈관 조직을 이용한 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단용 바이오마커에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 정상인 혈관 조직 보다 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환을 갖는 환자의 혈관 조직에서 그 발현양이 감소 또는 증가되는 바이오마커에 관한 것이다.
본 발명에 따르면 사람의 혈관 조직으로부터 동맥경화증을 진단하여 그 증상의 경도를 경도를 파악할 수도 있다. 또한 본 발병의 바이오마커를 기초로 제조된 단일클론항체는 immunoassay 키트(ELISA, antibody coated tube test, lateral-flow test, portable biosensor)에 이용될 수 있을 뿐만 아니라, 동맥경화증의 진단 및 진행 정도를 판단하고, 치료용 목적으로는 신약 개발에 사용될 수 있다.
국내에서 시행되는 법의부검 사인의 약 50%에 해당하는 내인성 급사의 가장 많은 원인은 허혈성 심장질환으로 임상 현장에서는 심전도, 심초음파, 관상동맥조영술, 심장표지자 등을 활용하여 그 진단이 용이하고 질병상태에 대한 모니터링이 잘 이루어지고 있으나, 법의학 분야에서는 임상의학적 분석 방법들을 이용할 수 없고, 해부를 통하여 관상동맥의 폐쇄 여부, 심근의 허혈성 변화가 있는지를 보고 판단하게 된다. 그러나, 1) 관상동맥 폐쇄의 정도와 심근경색에 의한 사망은 비례하지 않으며, 2) 관상동맥 폐쇄는 없지만 관상동맥 경축(spasm)에 의한 심근경색도 있는데 이 경우에는 부검을 하여도 심근경색이라고 단정하지 못하고 3) 사망의 경과나 보조적인 자료에 의해 '심인성 급사의 가능성을 배제할 수 없다'라고 진단할 수밖에 없는 현실이다. 급성 심장사의 직접 사인 중 대부분이 '관상동맥질환 폐쇄'를 원인으로 하는 급, 만성 심근경색이지만 현재 임상의학에서는 환자 혈액을 중심으로 한, 소위 circulatome을 통한 SNPs, GWAS 분석을 통하여 질병 특이 생체 표지자를 확보하고자 하지만 많은 제한점을 가지고 있다.
죽상동맥경화증 및 허혈성 심장질환은 전 세계적으로 주요한 사망 원인으로 알려져 있으나 아직까지 그 병태생리에 대해서는 명확히 밝혀져 있지 않은 상태이다. 죽상동맥경화증은 침범하는 혈관에 따라 발생연령, 빈도 및 복합판(complicate plaque)까지의 진행양상이 특징적인 임상 양상을 보이고 있어 발병장소에 따른 조절인자가 있을 것으로 추정되고 있다. 또한 두개강외 동맥경화증(extra-cerebral atherosclerosis; ECAS)과 대뇌 동맥경화증(intra-cerebral atherosclerosis; ICAS)은 병태 생리학적인 면에서 많은 차이를 보이고 있다. ECAS가 10대에서부터 발현되기 시작하는데 반해 ICAS는 대개 30대 이후에 인지되기 시작하며, ICAS의 경우 ECAS에 비하여 합병판 및 동맥벽 석회화의 빈도가 현저히 낮고, 대개의 경우 섬유판형성까지만 진행되는 경우와 같은 차이를 지닌다.
ICAS가 이러한 차이는 ICAS에 존재하는 특성 항동맥경화 기전의 존재를 암시하며, 이러한 기전의 소실은 허혈성 심장질환의 악화를 초래, 급성심장사의 가능성을 높일 것으로 추정할 수 있다. 인체 대뇌 동맥혈관구조, 기존의 연구가 집중 된 혈관내피세포뿐만 아니라, 특히 혈관근육세포에 존재하는 동맥경화 억제 기전의 존재를 암시하며, 이러한 기전의 소실은 동맥경화 및 이로 인한 허혈성 심장질환의 악화를 초래, 급성심장사의 가능성을 높일 것으로 추정할 수 있다.
그러나, 죽상동맥경화증은 동일 개체에서도 극명히 다른 해부학적 분포, 성상, 질병의 진행을 보이지만, 기존의 죽상동맥경화증 및 이에 연관된 허혈성 심장질환의 생체표지자 발굴은 대부분 혈액을 이용한 위험인자의 해석에 국한되어 있다.
선행특허문헌
1. 국제특허출원 WO2009/148252
본 발명은 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 바이오마커를 제공하고자 한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "진단"은 특정 질병 또는 질환에 대한 한 개체의 감수성(susceptibility)을 판정, 한 개체가 특정 질병 또는 질환을 현재 가지고 있는지 여부를 판정, 특정 질병 또는 질환에 걸린 한 개체의 예후(prognosis)를 판정, 또는 테라메트릭스(therametrics)(예를 들면, 치료 효능에 대한 정보를 제공하기 위하여 객체의 상태를 모니터링 하는 것)을 포함한다. 본 발명의 목적상, 진단은 동맥경화증의 발병 여부 또는 발병 가능성 여부를 확인하는 것이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "동맥 경화증"은 좁게는 동맥벽이 전반적으로 탄력성을 잃는 현상을 의미하나, 일반적으로는 죽상경화증을 의미한다. 상기 용어 "죽상경화증(arteriosclerosis)"은 주로 탄력성 동맥의 내층에 지방과 콜레스테롤로 이루어진 죽종(atheroma)이 생기는 병태를 의미한다. 죽종이 생긴 동맥은 죽종이 혈관의 내부로 돌출을 하게 되어서 혈관의 내경이 작아지게 된다. 이로 인해서 혈류가 감소하게 되고 계속 진행이 될 경우에는 완전히 동맥을 막을 수도 있다. 전 세계적으로 주요한 사망 원인으로 알려져 있으나 아직까지 그 병태생리는 잘 알려져 있지 않은 편으로 대개 식이와 혈중에 있는 지방의 농도, 고혈압, 그리고 유전과 관련이 있다고만 알려져 있다. 본 발명에 따르면, 상기 혈관 조직은 동맥혈관 조직일 수 있다. 예를 들면, 상기 동맥혈관 조직은 중뇌대동맥 조직 및 관상동맥 조직을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 용어 "허혈성 심장질환(ischemic heart disease)"은 심장에 혈액을 공급해주는 관상동맥이 좁아지면 심장근육에 혈액 공급이 부족한 허혈현상이 나타나는 것을 의미한다. 대표적으로 협심증, 심근경색증이 포함되며 심한 경우 심정지를 유발하게 된다. 증상으로는 가슴 통증이 전형적이지만 많이 진행한 경우에는 심장 기능 저하로 인한 심부전으로 호흡 곤란, 부정맥을 유발하기도 하며 동맥경화증이 주요 원인으로 지목되고 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "바이오마커"는 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환을 진단할 수 있는 물질을 의미한다. 본 발명에 따른 동맥경화증 및 허혈성 심장질환 진단 바이오마커는 APOD, DES, CLDN11, LOC642852, F3, ATP1A2, IFITM1, ITM2C, FOXD1, IL8, NTN1, CXCR7, HBB, PMP2, COL16A1, COL6A1, COL27A1, MYH10, COL6A2, PDGFA, ADH1C, ADH1B, ADH1A, GSN, MYH10, PDGFA, TMSB10/TMSB4X, EEF2, SOD3, GPX3, CACNA1C, MYH10, MYH10 및 EPN1로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택될 수 있다.
제1구현예에 따르면,
정상인 혈관 조직 보다 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환 환자의 혈관 조직에서 그 발현양이 감소 또는 증가되는 바이오마커 조성물이 개시된다.
본 발명에 따른 바이오마커 조성물에 있어서, 상기 바이오마커는 APOD, DES, CLDN11, LOC642852, F3, ATP1A2, IFITM1, ITM2C, FOXD1, IL8, NTN1, CXCR7, HBB, PMP2, COL16A1, COL6A1, COL27A1, MYH10, COL6A2, PDGFA, ADH1C, ADH1B, ADH1A, GSN, MYH10, PDGFA, TMSB10/TMSB4X, EEF2, SOD3, GPX3, CACNA1C, MYH10, MYH10 및 EPN1로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있다.
*본 발명에 따른 바이오마커 조성물에 있어서, 상기 혈관 조직은 중뇌대동맥 또는 관상동맥일 수 있다.
제2구현예에 따르면,
본 발명에 따른 바이오마커 조성물을 포함하는 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환 진단 키트가 개시된다.
본 발명에 따른 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환 진단 키트에 있어서, 상기 키트는 RT-PCR 키트, 마이크로어레이 칩 키트, DNA 키트 또는 단백질 칩 키트를 포함할 수 있다.
제3구현예에 따르면,
(A) 피검자의 혈관 조직을 채취하는 단계; 및
(B) 상기 피검자의 혈관 조직에서 APOD, DES, CLDN11, LOC642852, F3, ATP1A2, IFITM1, ITM2C, FOXD1, IL8, NTN1, CXCR7, HBB, PMP2, COL16A1, COL6A1, COL27A1, MYH10, COL6A2, PDGFA, ADH1C, ADH1B, ADH1A, GSN, MYH10, PDGFA, TMSB10/TMSB4X, EEF2, SOD3, GPX3, CACNA1C, MYH10, MYH10 및 EPN1로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단 및 예측 방법이 개시된다.
본 발명에 따른 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단 및 예측 방법에 있어서, 상기 방법은 (C) 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 원인이 두개강외 동맥경화증(extra-cerebral atherosclerosis; ECAS)인지 또는 대뇌 동맥경화증(intra-cerebral atherosclerosis; ICAS)인지 여부를 결정하는 단계를 더욱 포함할 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 피검자의 혈관 조직에서 APOD, DES, CLDN11, LOC642852, F3, ATP1A2, IFITM1, ITM2C, FOXD1, IL8, NTN1, CXCR7, HBB 및 PMP2로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준이 정상 대조군의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준 보다 증가한 경우 대뇌 동맥경화증(ICAS)로 판단하거나, 상기 피검자의 혈관 조직에서 COL16A1, COL6A1, COL27A1, MYH10, COL6A2, PDGFA, ADH1C, ADH1B, ADH1A, GSN, MYH10, PDGFA, TMSB10/TMSB4X, EEF2, SOD3, GPX3, CACNA1C, MYH10, MYH10 및 EPN1로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준이 정상 대조군의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준 보다 증가한 경우 두개강외 동맥경화증(ECAS)로 판단할 수 있다.
본 발명에 따른 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단 및 예측 방법에 있어서, 상기 mRNA의 발현 수준은 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Realtime RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 및 DNA 칩으로 이루어진 군에서 선택된 1개 이상의 방법으로 수행될 수 있다.
본 발명에 따른 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단 및 예측 방법에 있어서, 상기 단백질의 발현 수준은 웨스턴 블랏, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS) 및 단백질 칩(protein chip)으로 이루어진 군에서 선택된 1개 이상의 방법으로 수행될 수 있다. 본 발명에서 단백질 발현 수준을 측정하는 제제는 바람직하게는 항체일 수 있다.
본 발명의 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 바이오마커에 따르면 동맥경화증의 발생 원인, 예를 들면, 두개강외 동맥경화증(extra-cerebral atherosclerosis; ECAS)인지 또는 대뇌 동맥경화증(intra-cerebral atherosclerosis; ICAS)의 차이를 규명할 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예 2에 따른 혈관근육세포 유래 RNA의 마이크로어레이 결과이다.
도 2는 본 발명의 실시예 2에 따른 중뇌동맥 혈관근육세포에서 관상동맥 혈관근육세포보다 발현이 높은 유전자 및 이의 CANONICAL PATHWAY를 나타낸다.
도 3은 본 발명의 실시예 2에 따른 관상동맥 혈관근육세포에서 중뇌동맥 혈관근육세포보다 발현이 높은 유전자 및 이의 CANONICAL PATHWAY를 나타낸다.
도 4는 본 발명의 실험예 1에 따른 중뇌대동맥과 관상동맥 민무늬근세포에서의 ApoD의 발현량을 비교한 웨스턴 블로팅 결과를 나타낸다.
도 5는 본 발명의 실험예 2에 따른 중뇌대동맥과 관상동맥 민무늬근세포에서의 CLDN11의 발현량을 비교한 웨스턴 블로팅 결과를 나타낸다.
도 6 내지 도 9는 본 발명에 의한 Cldn11 유전자의 cell line 구축을 확인한 결과를 나타낸다.
이하, 발명의 이해를 돕기 위해 다양한 실시예를 제시한다. 하기 실시예는 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 발명의 보호범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 >
실시예 1. 시료 준비
전남대 의대 법의학교실에서 수행한 부검 조직 중 좌관상동맥 전하행지(Left Anterior Descending Coronary artery) 및 중뇌동맥(Middle Cerebral Artery; 중간 대뇌동맥)으로부터 혈관근육세포만을 분리하여 확보하였으며 RNA-later(Thermo Fisher Scientific)에 보관하였다. 이때, 대사증후군이 없는 군으로 비심인성 사망 부검례(30례)를 확보하였다. 또한, 허혈성 심장사(20례), 비허혈성 심장사(10례) 및 비심인성 급사(10례)에 해당하는 증례의 심상관상동맥, 중뇌대동맥 및 심장조직을 각각 확보하였다. 상기 비심인성 급사는 뇌출혈에 의한 사망군을 대상으로 하였다.
실시예 2. 마이크로어레이 분석 및 핵심 유전자 발굴
실시예 1에서 분리된 혈관근육세포는 TRIZOL(Invitrogen)을 이용하여 total RNA를 분리하고, 분리된 RNA를 Agilent 2100 BioAnalyzer(Agilent Technologies, Inc.)을 이용하여 RIN(RNA integration number)을 분석하여 마이크로어레이(microarray) 활용 가능여부를 스크리닝하였다. 그 다음, Agilent Human GE (V2) 4 X 44K chip으로 마이크로어레이를 수행하고, 분석용 소프트웨어인 GeneSpring GX(Agilent Technologies, Inc.)를 이용하여 정규화(normalization) 및 군집화(clustering)를 수행한 후, 마이크로어레이 분석의 Intensity-dependent ratio를 MA-plot으로 나타내었다.
그 결과, 중뇌동맥 혈관근육세포에서 관상동맥 혈관근육 세포 보다 발현이 높은 유전자는 모두 272개 및 발현이 낮은 유전자는 87개로 나타났다(도 1). 그 중 Fold 변화 (log2)를 5 이상으로 하였을 때 중뇌동맥 혈관근육세포에서 발현이 증가하는 유전자는 APOD, DES, CLDN11, LOC642852, F3, ATP1A2, IFITM1, ITM2C, FOXD1, IL8, NTN1, CXCR7, HBB 및 PMP2로 확인되었다(도 2). 한편, 관상동맥 혈관근육 세포에서 발현이 증가하는 유전자는 COL16A1, COL6A1, COL27A1, MYH10, COL6A2, PDGFA, ADH1C, ADH1B, ADH1A, GSN, MYH10, PDGFA, TMSB10/TMSB4X, EEF2, SOD3, GPX3, CACNA1C, MYH10, MYH10 및 EPN1로 확인되었다(도 3).
< 실험예 >
실험예 1. 인간 혈관조직에서 ApoD 발현
인간 중뇌대동맥과 관상동맥의 동맥 평활근 세포(Thermo Fisher Scientific)에서의 ApoD 발현을 웨스턴 블로팅을 이용하여 비교하였다. 그 결과, ApoD는 중뇌대동맥에서 보다 관상동맥에서 발현이 증가함이 확인되었다(도 4).
실험예 2. 인간 혈관조직에서 CLDN11 발현
인간 중뇌대동맥과 관상동맥의 동맥 평활근 세포(Thermo Fisher Scientific)에서의 CLDN11 발현을 웨스턴 블로팅을 이용하여 비교하였다. 그 결과, Cldn11는 중뇌대동맥에서 보다 관상동맥에서 발현이 증가함이 확인되었다(도 5).
실시예 2. cell line 구축
primary human aortic smooth cell line (Sciencell, Inc., USA)를 이용하여 Cldn11 유전자를 대상으로 siRNA를 이용, siRNA transient cell line을 구축하고, 도 6 내지 도 9의 결과를 얻었다.
도 6 내지 도 9에서 본 발명에 의한 Cldn11 유전자의 cell line 이 잘 구축된 것을 확인할 수 있다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (10)

  1. 정상인 혈관 조직 보다 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환 환자의 혈관 조직에서 그 발현양이 감소 또는 증가되는 바이오마커 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 바이오마커는 APOD, DES, CLDN11, LOC642852, F3, ATP1A2, IFITM1, ITM2C, FOXD1, IL8, NTN1, CXCR7, HBB, PMP2, COL16A1, COL6A1, COL27A1, MYH10, COL6A2, PDGFA, ADH1C, ADH1B, ADH1A, GSN, MYH10, PDGFA, TMSB10/TMSB4X, EEF2, SOD3, GPX3, CACNA1C, MYH10, MYH10 및 EPN1로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 것인, 바이오마커 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 혈관 조직은 중뇌대동맥 조직 또는 관상동맥 조직인 것을 특징으로 하는 것인, 바이오마커 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 바이오마커 조성물을 포함하는 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환 진단 키트.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 키트는 RT-PCR 키트, 마이크로어레이 칩 키트, DNA 키트 또는 단백질 칩 키트인 것을 특징으로 하는 것인,
    동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환 진단 키트.
  6. (A) 피검자의 혈관 조직을 채취하는 단계; 및
    (B) 상기 피검자의 혈관 조직에서 APOD, DES, CLDN11, LOC642852, F3, ATP1A2, IFITM1, ITM2C, FOXD1, IL8, NTN1, CXCR7, HBB, PMP2, COL16A1, COL6A1, COL27A1, MYH10, COL6A2, PDGFA, ADH1C, ADH1B, ADH1A, GSN, MYH10, PDGFA, TMSB10/TMSB4X, EEF2, SOD3, GPX3, CACNA1C, MYH10, MYH10 및 EPN1로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계;를 포함하는
    동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단 및 예측 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    (C) 상기 피검자의 혈관 조직에서 APOD, DES, CLDN11, LOC642852, F3, ATP1A2, IFITM1, ITM2C, FOXD1, IL8, NTN1, CXCR7, HBB 및 PMP2로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준이 정상 대조군의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준 보다 증가한 경우 대뇌 동맥경화증(ICAS)로 판단하거나, 또는 상기 피검자의 혈관 조직에서 COL16A1, COL6A1, COL27A1, MYH10, COL6A2, PDGFA, ADH1C, ADH1B, ADH1A, GSN, MYH10, PDGFA, TMSB10/TMSB4X, EEF2, SOD3, GPX3, CACNA1C, MYH10, MYH10 및 EPN1로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준이 정상 대조군의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준 보다 증가한 경우 두개강외 동맥경화증(ECAS)로 판단하는 단계를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 것인, 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단 및 예측 방법.
  8. 제6항에 있어서,
    상기 혈관 조직은 중뇌대동맥 조직 또는 관상동맥 조직인 것을 특징으로 하는 것인, 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단 및 예측 방법.
  9. 제6항에 있어서,
    상기 mRNA의 발현 수준은 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Realtime RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 및 DNA 칩으로 이루어진 군에서 선택된 1개 이상의 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는 것인, 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단 및 예측 방법.
  10. 제6항에 있어서,
    상기 단백질의 발현 수준은 웨스턴 블랏, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS) 및 단백질 칩(protein chip)으로 이루어진 군에서 선택된 1개 이상의 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는 것인, 동맥경화증 및 이와 관련된 허혈성 심장질환의 진단 및 예측 방법.
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