KR20170083898A - 옥시레스베라트롤을 포함하는 상지 추출물 및 이의 제조방법 - Google Patents

옥시레스베라트롤을 포함하는 상지 추출물 및 이의 제조방법 Download PDF

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임영희
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이민영
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이재후
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Abstract

본 발명은 옥시레스베라트롤을 포함하는 상지 추출물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 상지에 미생물을 접종하고 숙성시킨 후 상지 추출물을 추출함으로써 상기 상지 추출물 중의 옥시레스베라트롤의 함량이 증가된 것이 특징인 상지 추출물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 상지 추출물의 제조방법은 항염증성 및 항산화성 옥시레스베라트롤 함량이 증가된 상지 추출물의 생산을 가능하게 함으로써, 항염증 및 항산화 기능성 조성물의 유효성분으로 포함되어 항염증성 및 항산화성 기능성 식품 및 의약품의 신소재로서 적용가능한 상지 추출물을 제공할 수 있다.

Description

옥시레스베라트롤을 포함하는 상지 추출물 및 이의 제조방법{Ramulus Mori extract comprising oxyresveratrol and a method for preparing the same}
본 발명은 옥시레스베라트롤(Oxyresveratrol)을 포함하는 상지(Ramulus Mori) 추출물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 상지에 미생물을 접종하고 숙성시킨 후 상지 추출물을 추출함으로써 상기 상지 추출물 중의 옥시레스베라트롤의 함량이 증가된 것이 특징인 상지 추출물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
상지(Ramulus Mori)는 뽕나무과(Moraceae)의 뽕나무(Morus alba L.), 또는 동속식물의 어린 가지를 말린 것으로, 풍습을 없애고 관절을 이롭게 하며, 수기로 뼈마디가 쑤시고 저리는 풍한습비, 사지 비틀림, 기침, 및 중풍에 의해 입이 돌아가는 증상을 치료하는 효능을 나타내는 것으로 알려져 있으며, 우리나라에서는 한약재로 널리 사용되어 왔다.
상지는 폴리페놀 물질을 상당량 함유하고 있어 다양한 질병으로부터 신체를 보호하는 효과가 있으며, 특히 옥시레스베라트롤, 멀베로사이드 에이(mulberroside A), 레스베라트롤(resveratrol)과 같은 스틸베노이드(stilbenoid) 계열의 물질이 상지 내에 다량 존재하여 항산화, 항염증, 항당뇨, 혈관 개선 및 항암 등의 다양한 생리활성 효능를 나타내는 것으로 알려져 있다. 특히, 상지 내의 옥시레스베라트롤은 피부 멜라닌 색소 생성을 촉진하는 티로시나제(tyrosinase)의 강력한 저해제로서 미백화장품 원료로 각광을 받고 있을 뿐만 아니라(비특허문헌 1 참조), 염증성 매개물질인 일산화질소(NO) 생성 효소(inducible nitric oxide synthase(iNOS))와 염증 촉진물질인 NF-κB(Nuclear factor κB) 및 사이클로옥시게나아제-2(cyclooxygenase-2; COX-2)의 활성을 억제하는 항염증 물질로 보고되었으며, 또한 활성 산소 및 질소(ROS/RNS)의 생성을 억제하여 우수한 항산화 효능을 나타내는 것으로 알려져 있다(비특허문헌 2 및 비특허문헌 3 참조).
한편, 상지에 함유된 스틸베노이드 성분은 식물의 생장 과정 중에 외부의 자극에 반응하면서 생성될 뿐만 아니라, 수확 후 숙성되는 과정에서도 다량으로 생성되는 것으로 알려지면서, 최근에는 작물 내의 생리활성 물질인 스틸베노이드와 플라보노이드(flavonoid)의 함량을 증진시키기 위한 수확 후의 숙성 과정에 대한 연구가 주목받고 있다.
숙성 시의 스틸베노이드 생성에 영향을 주는 외부 자극 요인으로는 건조, 탈수, 초음파 처리, 자외선 등의 물리적 스트레스와 오존, 과산화수소, 질소가스, 이산화탄소 처리 등의 화학적 스트레스가 알려져 있다. 대표적으로 포도의 레스베라트롤, 양파의 쿼세틴(quercetin) 및 딸기의 안토시아닌(anthocyanin)에 관한 연구가 진행되어 왔으며, 예를 들어, 레스베라트롤은 'French Paradox'로 알려진 스틸베노이드 물질로서, 포도의 수확 후 숙성 과정에서 초음파 처리에 의해 포도 중 함량이 증가된다는 연구 결과가 보고되었다(비특허문헌 4 참조).
반면에, 옥시레스베라트롤은 레스베라트롤에 비해 항산화 및 항염증 등의 생물학적 활성이 우수하며, 높은 세포 투과성 및 낮은 세포 독성을 가지고 있는 물질로 주목받고 있으나, 작물 내의 옥시레스베라트롤의 함량 증가와 관련된 연구는 전혀 이루어지지 않고 있으며, 특히 작물의 수확 후 숙성 과정에 의한 옥시레스베라트롤 함량의 증가와 관련된 연구 결과는 전무한 실정이다.
이와 같은 배경하에서, 본 발명자들은 상지 내에 포함되어 있는 옥시레스베라트롤의 함량을 증가시키는 방법을 개발하기 위해 예의 연구 노력한 결과, 수확 후 숙성 과정에 있어서 사용되는 상지의 절편 크기 및 숙성 온도의 조절, 및 상지에의 미생물 접종에 의하여 상지 추출물 내의 옥시레스베라트롤의 함량이 증가함을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
Chang et al., Food Chem Toxicol, 2011, 49, 785-790. Chung et al., J Pharm Pharm, 2003, 55, 1695-1700. Lorenz P et al., Nitric Oxide, 2003, 9, 64-76. Hasan M et al., Ultrasonics Sonochemistry, 2014, 21, 729-734.
본 발명의 목적은 옥시레스베라트롤을 포함하는 상지 추출물 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다. 본 발명은 상지의 수확 후 숙성 과정을 통해 상지 내에 존재하는 옥시레스베라트롤의 함량을 증가시키는 방법을 제공하고자 하였다. 또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된, 다량의 옥시레스베라트롤을 포함하는 상지 추출물, 및 이를 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항산화 기능성 조성물을 제공하고자 하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 제1양태는 하기 단계를 포함하는, 옥시레스베라트롤의 함량을 증가시키기 위한 상지 추출물의 제조방법을 제공한다.
1) 상지를 절단하고, 절단된 상지에 미생물을 접종하는 단계;
2) 상기 미생물이 접종된 상지를 숙성시키는 단계; 및
3) 상기 숙성된 상지를 50% 내지 90% 에탄올 수용액을 이용하여 추출하는 단계.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상지 추출물 내의 옥시레스베라트롤의 함량은, 미생물이 접종되지 않은 상지의 경우 추출전 건조 상지의 전체 중량 대비 0.18 중량% 내지 0.28 중량%이며, 미생물이 접종된 상지의 경우 추출전 건조 상지의 전체 중량 대비 0.20 중량% 내지 0.45 중량%일 수 있다.
본 발명의 제2양태는 상지에 미생물을 접종하고 숙성시킨 후 상지 추출물을 추출함으로써, 상기 상지 추출물 중의 옥시레스베라트롤의 함량이 증가된 상지 추출물을 제공한다.
본 발명의 제3양태는 상기 제2양태에 따른 상지 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항산화 기능성 조성물을 제공한다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "약", "실질적으로" 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본원의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 본원 명세서 전체에서 사용되는 용어 "~(하는) 단계" 또는 "~의 단계"는 "~ 를 위한 단계"를 의미하지 않는다.
본원 명세서 전체에서, 마쿠시 형식의 표현에 포함된 "이들의 조합"의 용어는 마쿠시 형식의 표현에 기재된 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 혼합 또는 조합을 의미하는 것으로서, 상기 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 의미한다.
작물은 땅으로부터 수확된 이후에 제품의 품질이 악화되는 것이 일반적인 경향인 반면, 일부 작물들은 수확 후 숙성 과정을 거치는 동안 특정 성분의 함량이 증가되는 경향을 나타내기도 한다. 작물 내에 함유된 생리활성 물질인 스틸베노이드 성분은 수확 후 숙성되는 과정에서 다량으로 생성되는 것으로 알려지면서, 작물 내의 스틸베노이드 함량을 증진시키기 위한 수확 후의 숙성 과정에 대한 연구가 진행되고 있으나, 스틸베노이드의 일종인 옥시레스베라트롤의 함량 증가를 위한 수확 후 숙성 방법에 대해서는 알려진 바가 없다.
수확 후 숙성이라 함은 작물의 풍미, 조직, 영양분 등의 품질을 개선하기 위해 수확 이후에 처리되는 건조, 세척, 혼합, 저장 등의 과정을 일컫는 것으로, 본 발명에서는 숙성 과정에 이용되는 수확된 상지의 절편 크기, 숙성 온도의 변화에 따라 상지 내 옥시레스베라트롤의 함량이 변화할 수 있으며, 특히 숙성 과정 이전에 미생물을 접종하고 숙성시킨 후에 추출함으로써 상지 추출물 내의 옥시레스베라트롤의 함량이 증가될 수 있음을 발견하였다. 본 발명은 이에 기초한다.
이하, 본 발명을 자세히 설명한다.
본 발명의 옥시레스베라트롤의 함량을 증가시키기 위한 상지 추출물의 제조방법은, 1) 상지를 절단하고, 절단된 상지에 미생물을 접종하는 단계; 2) 상기 미생물이 접종된 상지를 숙성시키는 단계; 및 3) 상기 숙성된 상지를 50% 내지 90% 에탄올 수용액을 이용하여 추출하는 단계를 포함하는 것이 특징이다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 상지 추출물 내의 옥시레스베라트롤의 함량은, 미생물이 접종되지 않은 상지의 경우 추출전 건조 상지의 전체 중량 대비 0.18 중량% 내지 0.28 중량%이며, 미생물이 접종된 상지의 경우 추출전 건조 상지의 전체 중량 대비 0.20 중량% 내지 0.45 중량%일 수 있다.
상기 1) 단계는, 수확된 상지의 숙성 과정을 수행하기 이전에 미생물을 접종하는 단계로, 수확된 상지를 3 내지 50 mm 크기로 절단하고, 절단된 상지에 미생물 배양액을 스프레이 분무 접종하여 수행할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 미생물은 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 프라질리스(Saccharomyces fragilis), 피키아 아노말라(Pichia anomala), 피키아 데세르티콜라(Pichia deserticola), 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis), 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 로도박터 스페로이드스(Rhodobacter sphaeroides), 로도박터 캡슐라터스(Rhodobacter capsulatus), 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum), 아스퍼질러스 니게르(Aspergillus niger), 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae), 아스퍼질러스 아와모리(Aspergillus awamori) 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 미국 식약청에서 안전성 및 안정성을 인정하는 GRAS(generally recognized as safe) 미생물, 및 인체에 무해하고 유익한 기능을 지닌 유용미생물이라면 모두 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 1) 단계의 미생물의 접종은, 105 내지 109 CFU/mL 농도의 미생물 배양액을 이용하여 수행될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 2) 단계는, 미생물 접종된 상지를 숙성시키는 단계로, 일정한 온도가 유지되는 배양기 내에서 15 내지 45℃의 온도에서 4일 내지 15일 동안 수행될 수 있다.
발명의 일 실시예에 있어서, 상기 3) 단계는, 추출 용매 내에서 숙성된 상지를 추출하는 단계로, 숙성된 상지 무게(g)의 5배 내지 10배의 추출 용매를 첨가한 후, 80 내지 100℃의 온도에서 2 내지 6시간 동안 환류 추출하는 과정을 통해 수행될 수 있다.
상기 추출 용매는 50% 내지 90% 에탄올 수용액 또는 주정용 에탄올일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 당업계에서 허용하는 용매라면 어느 것을 사용해도 무방하다. 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올 등을 포함하는 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 3) 단계의 추출 과정에 의해 수득된 추출액은, 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 본 발명의 상지 추출물의 제조방법은 특별히 제한되지 않을 수 있으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 상지 추출물은, 상기 3) 단계의 추출 과정에 의해 수득된 추출액을 여과, 농축 및 건조하는 추가적인 과정을 통해 분말 상태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 구체적으로, 여과지 또는 감압여과기를 이용하여 여과하고, 감압 회전 증발기를 이용하여 감압 농축한 후, 상기 농축된 추출물을 동결건조법으로 건조할 수 있다. 여기서, 상기 농축된 추출물은 건조하기 전에 급속 냉동 냉장고에 보관할 수 있으며, 동결되어 있는 농축된 추출물을 동결 건조하여 수분을 완전히 제거한 후 분말형태로 제조할 수 있다.
또한, 상기 상지 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고속 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography), 흡착 크로마토그래피(adsorption chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 상지 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념일 수 있다.
발명의 일 실시예에 있어서, 상기 옥시레스베라트롤을 포함하는 상지 추출물의 제조방법은 상지 추출물 내에 포함된 옥시레스베라트롤의 함량을 증가시킬 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 상지 추출물의 제조방법은, 제조 과정에 사용한 상지의 절편 크기 및 숙성 온도를 변화시킴에 따라 상지 추출물 내에 포함된 옥시레스베라트롤의 함량이 변화되는 양상을 나타내었으며, 숙성 기간에 따라 변화되는 양상은 상이하나, 3 내지 50 mm 크기의 상지 절편을 사용하여 7 내지 45℃의 온도에서 숙성시킴으로써, 상지 추출물 내에 포함된 옥시레스베라트롤의 함량이 숙성 전에 비해 증가됨을 확인하였다.(도 1 및 표 1 참조).
또한, 본 발명의 일 실시예에서, 상기 상지 추출물의 제조방법은, 상지를 숙성시키기 이전에 미생물을 접종하는 과정을 포함함으로써 상지 추출물 중의 옥시레스베라트롤의 함량이 증가되는 효과를 나타낼 수 있다(도 3 참조).
본 발명의 다른 양태는, 상지에 미생물을 접종하고 숙성시킨 후 상지 추출물을 추출함으로써, 상기 상지 추출물 중의 옥시레스베라트롤의 함량이 증가된 상지 추출물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 상지 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항산화 기능성 조성물을 제공한다.
상지의 생리적 작용으로는 항염증, 항산화, 항노화, 항암, 항고지혈증 등이 보고되었으며, 특히 상지 내에 포함된 생리활성 물질 중의 하나인 옥시레스베라트롤은 우수한 항염증 및 항산화 활성을 나타내는 물질로 알려져 있다(비특허문헌 2 및 3 참조). 본 발명의 상지 추출물은 미생물을 접종하고 숙성시키는 과정을 통해 제조됨으로써 추출물 내에 다량의 옥시레스베라트롤을 포함하고 있으므로, 상기 상지 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 우수한 항염증 및 항산화 효능을 나타낼 수 있다.
본 발명의 상지 추출물의 제조방법은 미생물을 이용한 숙성 과정으로 상지 내의 옥시레스베라트롤 함량을 증가시켜 항염증, 항산화와 같은 생리활성 효능이 증진된 상지 추출물의 생산을 가능하게 한다.
또한, 본 발명의 상지 추출물은 항염증 및 항산화 기능성 조성물의 유효성분으로 포함되어 항염증성 및 항산화성 기능성 식품 및 의약품의 신소재로의 적용가능성을 나타낼 수 있다.
도 1은 본 발명의 상지 추출물의 제조방법에서 상지의 절편 크기에 따른 옥시레스베라트롤 함량의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 상지 추출물의 제조방법에서 미생물 접종에 따른 옥시레스베라트롤 함량의 변화를 분석한 고속액체크로마토그래피(HPLC) 프로파일을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 상지 추출물의 제조방법에서 미생물 접종에 따른 옥시레스베라트롤 함량의 변화를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
시험 재료
상지는 경기도 양평군 양동면 계정리 양평오디영농조합 농가에서 2015년 1월, 2월, 8월, 10월, 11월에 채집된 지름 10 내지 30 mm의 1년산 수원뽕과 청일뽕 상지를 사용하였다.
상지 추출물의 제조에 사용한 주정용 에탄올인 프레타놀 A(pretanol A, 94.5%)는 덕산이화학 제품을 구입하여 사용하였고, 옥시레스베라트롤(97%) 및 레스베라트롤(99%)의 표준품은 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich, USA)에서 구입하여 사용하였다. 고속액체크로마토그래피(HPLC) 분석에 사용된 아세토니트릴(acetonitrile, CH3CN)은 제이티베이커(J. T. Baker, USA; HPLC급) 제품을 사용하였고, 인산(H3PO4, 85%)은 플루카(Fluka, USA) 제품을 사용하였다.
실시예 1: 상지 추출액의 제조
1-1. 상지의 숙성
채집한 당일에 상지를 전지용 가위를 이용하여 3 내지 30 mm의 길이로 절단하고 배양기(KDO-150, Kukje engineering, Korea)를 이용하여 7 내지 60℃에서 12일 동안 숙성시켰다.
또한, 미생물 접종에 의한 상지 중의 옥시레스베라트롤 함량 증가 양상을 분석하기 위하여, 상기 절단된 상지에 Saccharomyces cerevisiae, Lactobacillus acidophilus 및 Aspergillus awamori를 접종하였으며, 각각의 균주 1 g(107 내지 109 CFU/g)을 멸균수 100 mL에 용해시킨 후 분무기를 이용하여 상지 500 g에 접종시켰다. 상기 접종된 상지는 30℃의 배양기에서 12일 동안 숙성하여 추출 과정에 사용하였다.
1-2. 상지 추출액의 제조
1 L의 둥근 바닥 플라스크에 상기 실시예 1-1에서 준비한 상지 시료 50 g 및 80% 주정용 에탄올 400 mL를 첨가하고 95℃의 항온 수조(J-BS3D, Jisico, Korea)에서 2시간 동안 환류 추출하였다. 추출 후 추출물을 냉각시키고 여과한 후 여액을 이용하여 옥시레스베라트롤의 정량 분석을 수행하였다.
실시예 2 : 상지 추출액 중의 옥시레스베라트롤의 정량 분석
상기 실시예 1에 의해 제조된 상지 추출액 1 mL에 아세토니트릴:인산(CH3CN:10 mM H3PO4=35:65(v/v)) 용매 9 mL를 첨가하여 10배 희석한 후, 0.4 μm의 PTFE 실린지 필터(Chromafil O-20/15 MS, Macherey-Nagel, USA)를 통과시키고, 이 중 100 μL를 HPLC에 주입하여 정량분석하였다. HPLC 분석은 HPLC-UV/VIS(YL-9100 HPLC system, Younglin Inst., Korea)을 이용하여 수행하였으며, HPLC 분석조건은 다음과 같다: 분석 컬럼; Luna C18(5 μm, 250 × 4.6 mm, phenomenex, USA), 이동상; CH3CN:10 mM H3PO4(10:90(0 min) -> 25:75(0-10 min) -> 50:50(10-30 min)으로 30분간 농도구배 용출), 자외선 검출기; UV 325 nm, 유속; 0.7 mL/min.
2-1. 상지의 절편 길이에 따른 옥시레스베라트롤의 함량 변화 분석
상지의 절편 길이에 따른 상지내 옥시레스베라트롤의 함량 변화를 확인하기 위하여, 채집된 상지를 6 mm 이하, 7 내지 18 mm, 및 20 내지 30 mm의 크기로 절단하고 30℃ 배양기에서 10일간 숙성시킨 후, 상기 실시예 1 및 2에 따라 추출 및 정량분석을 수행하였다.
0일, 2일, 4일, 6일, 8일 및 10일간 숙성된 상지 중의 옥시레스베라트롤의 함량을 정량 분석한 결과, 6일간 숙성 시 6 mm 이하의 상지에서 옥시레스베라트롤의 함량이 상지 전체 중량 대비 0.199 중량%(1,987.3 μg/g D.W.)로 가장 높게 나타났으며, 상기 함량은 숙성시키기 전(0.117 중량%, 1,173.9 μg/g D.W.)에 비해 약 1.7배 높은 수치로 확인되었다. 또한, 7 내지 18 mm의 상지에서는 8일간 숙성 시 약 1.8배(0.117 중량% -> 0.206 중량%) 높은 것으로 나타났다. 한편, 10일간 숙성시킨 경우, 20 내지 30 mm의 상지에서 상지 전체 중량 대비 0.223 중량%(2,230.6 μg/g D.W.)로 가장 높은 함량을 나타내어 숙성시키기 전에 비해 약 1.9배 증가함을 확인하였다(도 1).
2-2. 숙성 온도에 따른 옥시레스베라트롤의 함량 변화 분석
숙성 온도에 따른 상지내 옥시레스베라트롤의 함량 변화를 확인하기 위하여, 30 mm 이하로 절단한 상지를 7℃, 15℃, 25℃, 35℃, 45℃, 60℃의 배양기에서 10일 동안 숙성하였으며, 4일, 6일, 10일 경과된 시점의 숙성된 상지를 이용하여, 상기 실시예 1 및 2에 따라 추출 및 정량분석을 수행하였다.
그 결과, 35℃에서 6일 동안 상지를 숙성시킨 경우, 상지 중의 옥시레스베라트롤의 함량은 추출전 건조 상지 전체 중량 대비 0.137 중량%(1,356.4 μg/g D.W.)로 가장 높게 나타났으며, 상기 함량은 숙성시키기 전(0.087 중량%, 886.7 μg/g D.W.)에 비해 약 1.6배 증가된 수치로 확인되었다. 한편, 10일간 숙성시킨 경우에는 7℃에서 추출전 건조 상지 전체 중량 대비 0.132 중량%(1,315.6 μg/g D.W.)로 가장 높은 함량을 나타내어, 숙성시키기 전에 비해 약 1.5배 증가함을 확인하였다(표 1).
온도(℃) 옥시레스베라트롤 (μg/g D.W.)
0일 4일 6일 10일
7 886.7
(±226.8)		 856.1
(±49.5)		 1,063.7
(±117.8)		 1,315.6
(±60.8)
15 886.7
(±226.8)		 937.0
(±98.6)		 1,221.7
(±44.1)		 1,183.4
(±39.1)
25 886.7
(±226.8)		 1,191.3
(±62.0)		 1,328.5
(±23.9)		 1,253.8
(±612.9)
35 886.7
(±226.8)		 1,220.1
(±101.8)		 1,356.4
(±32.7)		 1,186.7
(±195.8)
45 886.7
(±226.8)		 1,187.4
(±69.7)		 973.2
(±29.3)		 928.2
(±170.0)
60 886.7
(±226.8)		 608.4
(±93.7)		 642.2
(±126.7)		 695.9
(±103.4)
2-3. 미생물 접종에 의한 옥시레스베라트롤의 함량 변화 분석
미생물 접종에 의한 상지 중의 옥시레스베라트롤 함량 증가 양상을 분석하기 위하여, 상기 절단된 상지에 Saccharomyces cerevisiae, Lactobacillus acidophilus 및 Aspergillus awamori를 접종시킨 후, 30℃의 배양기에서 12일 동안 숙성시켰으며, 0일, 2일, 4일, 6일, 8일 및 10일 경과된 시점의 숙성된 상지를 이용하여, 상기 실시예 1 및 2에 따라 추출 및 정량분석을 수행하였다.
그 결과, 각각의 미생물을 접종한 상지를 6일간 숙성하여 분석한 결과에서, 미생물에 감염되지 않은 상지는 추출전 건조 상지 전체 중량 대비 0.265 중량%(2,653.7 μg/g D.W.)의 옥시레스베라트롤을 포함하고 있고, 미생물을 접종한 상지 내의 옥시레스베라트롤 함량은, S. cerevisae의 경우, 추출전 건조 상지 전체 중량 대비 0.309 중량%(3,091.1 μg/g D.W.), L. acidophilus의 경우, 0.359 중량%(3,591.3 μg/g D.W.), A. awamori의 경우, 0.390 중량%(3,896.7 μg/g D.W.)를 나타내었다. 미생물의 종류에 따라 옥시레스베라트롤의 함량 변화 양상은 상이하나, 미생물 접종에 의해 상지 내의 옥시레스베라트롤 함량이 현저하게 증가됨을 확인할 수 있다(표 2, 도 2 및 도 3).
미생물
균 명		 옥시레스베라트롤 (μg/g D.W.)
0일 2일 4일 6일 8일 10일
대조구
(물)		 1,652.0
(±339.8)		 1,816.4
(±137.7)		 2,400.2
(±26.2)		 2,653.7
(±132.7)		 2,008.4
(±105.9)		 1,803.4
(±19.2)
S. cerevisae 1,652.0
(±339.8)		 1,854.6
(±71.7)		 2,902.1
(±21.8)		 3,091.1
(±118.4)		 2,570.5
(±35.6)		 2,312.6
(±31.9)
L. acidophilus 1,652.0
(±339.8)		 2,028.2
(±93.3)		 3,348.7
(±76.8)		 3,591.3
(±149.8)		 3,226.3
(±41.7)		 2,509.5
(±118.3
A. awamori 1,652.0
(±339.8)		 2,209.7
(±102.4)		 3,634.8
(±69.9)		 3,896.7
(±112.5)		 3,504.1
(±124.6)		 3,154.4
(±190.5)
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (8)

  1. 하기 단계를 포함하는, 옥시레스베라트롤(Oxyresveratrol)의 함량을 증가시키기 위한 상지 추출물(Ramulus Mori)의 제조방법:
    1) 상지를 절단하고, 절단된 상지에 미생물을 접종하는 단계;
    2) 상기 미생물이 접종된 상지를 숙성시키는 단계; 및
    3) 상기 숙성된 상지를 50% 내지 90% 에탄올 수용액을 이용하여 추출하는 단계.
  2. 제1항에 있어서, 상기 상지 추출물 내의 옥시레스베라트롤의 함량은, 미생물이 접종되지 않은 상지의 경우 추출전 건조 상지의 전체 중량 대비 0.18 중량% 내지 0.28 중량%이며, 미생물이 접종된 상지의 경우 추출전 건조 상지의 전체 중량 대비 0.20 중량% 내지 0.45 중량%인 제조방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 미생물은 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 프라질리스(Saccharomyces fragilis), 피키아 아노말라(Pichia anomala), 피키아 데세르티콜라(Pichia deserticola), 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis), 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 로도박터 스페로이드스(Rhodobacter sphaeroides), 로도박터 캡슐라터스(Rhodobacter capsulatus), 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum), 아스퍼질러스 니게르(Aspergillus niger), 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae), 아스퍼질러스 아와모리(Aspergillus awamori) 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제조방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 1) 단계의 미생물의 접종은, 105 내지 109 CFU/mL의 미생물을 접종하는 제조방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 2) 단계의 숙성은, 15 내지 45℃의 온도에서 4일 내지 15일 동안 수행되는 제조방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 3) 단계는, 80 내지 100℃의 온도에서 2 내지 6시간 동안 환류 추출하는 제조방법.
  7. 상지에 미생물을 접종하고 숙성시킨 후 상지 추출물을 추출함으로써, 상기 상지 추출물 중의 옥시레스베라트롤의 함량이 증가된 상지 추출물.
  8. 제7항에 따른 상지 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항산화 기능성 조성물.
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