KR20170045205A

KR20170045205A - 감마 델타 t 세포 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20170045205A
Application number: KR1020177003596A
Authority: KR
Inventors: 마이클 리크; 아델 해니건
Original assignee: 티씨 바이오팜 리미티드
Priority date: 2014-07-09
Filing date: 2015-07-08
Publication date: 2017-04-26
Also published as: IL249970A0; CA2954546A1; US20210030794A1; BR112017000464A2; US20170196910A1; JP2023123437A; JP2017524031A; JP2020172522A; IL249970B; EA201790010A1; EP3167050A1; CN107075480A; SG11201700134PA; WO2016005752A1; AU2015287456A1

Abstract

바이러스 감염, 진균 감염, 원생동물 감염 및 암을 앓는 대상체의 동종이계 또는 자가조직 치료에서 감마 델타 T 세포를 제조하고 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

감마 델타 T 세포 및 이의 용도{GAMMA DELTA T CELLS AND USES THEREOF}

본 출원은 감마 델타 T 세포를 제조하고 사용하는 방법, 구체적으로 바이러스 감염, 진균 감염, 원생동물 감염 및 암을 포함한 병태의 치료를 위한 동종이계 또는 자가조직 수용자 대상체에서 감마 델타 T 세포의 용도에 관한 것이다.

동종이계 줄기 세포 이식(알로-SCT)은 혈액학적 악성종양과 관련하여 제안되고 시도되었었다. 그러나, 그러한 동종이계 요법의 주된 단점은 이식 실패 및 이식편 대 숙주 질환(GVHD)의 높은 발생 빈도이다. HLA-반수체 동일 도너는 이러한 이식 결과를 개선시키고자 하는 시도에 이용되어 왔다. 부가적으로, T 세포 고갈된 HLA-대응-SCT가 GVHD를 감소시키기 위해 이식 T 세포의 생체외 고갈을 사용하여 시도되었지만, 높은 이식 실패 위험성을 초래하는 것으로 간주된다.

수용자가 이식 실패 위험성을 감소시키기 위해 집중적으로 몸상태를 조절하여 T 세포 고갈된 이식편을 수용하면, 면역 재구성이 허용되지 않고 너무 많은 환자가 기회 감염으로 인해 사망할 수 있는 것으로 여겨진다.

감마 델타 T 림프구는 인간의 말초 혈액 내 소수의 세포 서브셋트를 의미한다(10% 미만). Vγ9Vδ2(감마 9 델타 2) T 세포 수용체를 발현하는 감마 델타 T 세포는 이상조절된 메발로네이트 경로의 결과로 인해 암 세포에서 과생산되는 내생성아이소펜테닐 파이로포스페이트(IPP)를 인식한다. IFN-감마와 같은 풍부한 프로염증성 사이토카인을 생산하는 감마 델타 T 림프구의 능력, 그들의 잠재적인 세포독성 유효 기능 및 항원의 MHC-독립적 인식은 그들을 암 면역요법의 중요한 층으로 만든다. 감마 델타 T 세포는 백혈병, 신경아세포종 및 다양한 암종을 포함하여, 많은 상이한 유형의 종양 세포주 및 종양을 시험관 내에서 사멸시킬 수 있는 것으로 나타났다. 또한, 감마 델타 T 세포는 자발적으로 또는 졸레드로네이트를 포함하여 상이한 비스포스포네이트로 치료 후 많은 상이한 분화된 종양 세포를 인식하여 사멸시킬 수 있는 것으로 입증되었다. 인간 종양 세포는 파이로포스포모노에스테르 화합물을 감마 델타 T 세포에 효과적으로 제시하여 그들의 증식 및 IFN-감마 생산을 유도시킬 수 있다.

현재, 감마 델타 T 세포 종양 면역요법을 사용한 2가지 전략이 이용된다. 첫번째 방법은 시험관 내 확장된 감마 델타 T 세포를 환자에게 다시 양자 세포 이식하는 것을 포함한다(즉, 자가조직 치료). 두번째 방법은 저용량 재조합 IL-2와 함께 포스포항원 또는 아미노 비스포스포네이트를 자극하는 감마 델타 T 세포의 생체내 치료 적용을 포함한다.

감마 델타 T 세포의 자가조직 이식 전략은 동종이계 줄기 세포 이식에 대해 상기에 언급한 단점을 극복하고자 이용되었다. 이러한 자가조직 이식 기술의 일부로서, 자가조직적으로 치료 효과를 발휘하기 위해 감마 델타 T 세포의 충분한 수를 유도시키고 배양하는 방법은 예를 들어, US 2002/0107392에서 이전에 개시한 바 있다. 그러나, 자가조직 치료 전략은 수많은 단점에 시달린다.

따라서, 대안적이고/이거나 개선된 자가조직 및 동종이계 치료 전략이 요구된다.

암요법과 관련하여 감마 델타 T 세포 요법이 자가조직 이용에 관해 기술되었지만, 그러한 감마 델타 T 세포 요법을 동종이계로 제공하는 것이 지금까지 고려되지 않았다. 이러한 감마 델타 T 세포 요법의 동종이계 용도는 면역계 매개 거부와 연관된 잠재적 문제로 인해 전형적으로 고려되지 않는 것으로 여겨졌다. 본 발명자들은 놀랍게도 감마 델타 T 세포가 전형적으로 이식편 대 숙주 질환을 야기하지 않고, 동종이계 이식을 위한 감마 델타 T 세포의 선택이 T 세포가 수용자에게 이식편대 숙주 질환의 위험성을 최소로 제공할 수 있다는 것을 주시하였다. 감마 델타 T 세포는 MHC 제한적이지 않다(Tanaka Y et al., 1995). 본 발명자들은 이것이 감마 델타 T 세포가 MHC-일배체형 독립적 세포용해를 위해 세포를 표적화할 수 있는 실행가능한 요법을 제공하도록 동종이계 이식에 감마 델타 T 세포를 이용할 수 있게 한다고 생각한다. 감마 델타 T 세포에 의한 MHC-제시된 항체의 인식 결여를 고려하여, 본 발명자들은 GVHD 위험성이 B 세포 및 알파 베타 T 세포 수용체(TCR) T 세포를 포함한 다른 백혈구로부터 충분하게 정제된 감마 델타 T 세포의 고순도 동종이계 이식에서 최소화된다고 생각한다. 부가적으로, 제한 없이, 중증 바이러스 감염 예를 들어 에볼라, HIV 및 인플루엔자 감염된 환자를 비롯하여 PTLD-EBV 환자와 다른 암 유형을 갖는 환자를 포함해, 일정 질환 상태의 수용자의 면역-약화 상태로 인한 이식 거부 기회가 낮아지는 것으로 생각된다.

언급한 바와 같이, 이전의 치료 전략은 동종이계 줄기 세포 이식 전에, 음성 선별 또는 양성 선별 방법론을 사용하여, 도너 혈액, 구체적으로 말초혈액으로부터 의 T 세포 제거를 포함하였다.

본 발명자들은 도너 대상체로부터 세포의 수집을 가능하게 하고 그러한 도너 세포를 수용자 대상체에게 동종이계로 감마 델타 T 세포의 충분한 수를 제공할 수 있도록 처리하여, 감마 델타 T 세포가 수용자 대상체에게 치료 효과를 발휘할 수 있게 하는 방법을 결정하였다.

예로서, 본 발명자의 감마 델타 T 세포 확장 방법은 밀도 구배 원심분리를 사용하여 혈액 또는 백혈구분리반출 물질로부터 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 단리하는 단계를 포함한다. 단리된 PBMC는 배양으로 확장하기 전에 냉동보존될 수 있는 한편, 혈장이 공동추출되어 후속 감마 델타 T 세포 배양 단계에서 사용을 위한 자가조직 부형제에서 유지된다. 실시형태에서, 신선하게 단리된 PBMC(또는 냉동보존물로부터 소생된 것들)를 인간 재조합 IL-2(예컨대, 최대 1000 U/㎖ 농도) 및 졸레드론산(예컨대, 5μM)을 함유하는 성장 배지에 접종하였다. γδ T 림프구 개체군은 졸레드론산의 부가(0일) 및 14일 배양 기간 동안 IL-2의 연속 포함을 통해 활성화되어 PBMC로부터 선택적으로 증식될 수 있다. 세포 현탁물은 이 기간 동안 연속물로 확장될 수 있다(전형적으로 1:2 분할 비율). 배양 개시 후 14일에, 세포를 회수하고 100㎖ 염수액을 함유하는 주입병으로 옮기기 전에 젖산 링거액 및 HSA에 재현탁시킬 수 있다.

확장 후, 실시형태에서, 감마 델타 T 세포 생산물은 다음의 최소 사양을 충족한다; 총 세포의 80% 이상이 T 림프구(CD3 양성)이고, 감마 델타 T 림프구는 총 T 림프구 개체군의 60% 이상을 포함하며(V감마9 양성), NK 세포는 총 T 림프구 개체군의 25% 미만(CD3 양성/CD56 양성)이고, 세포독성 T 세포는 총 T 림프구 개체군의 10% 이하(CD3/CD8 양성)이고 T 헬퍼 세포는 총 T 림프구 개체군의 5% 이하(CD3/CD4 양성)이다. 실시형태에서, 이들 사양을 충족하는 세포 개체군이 99%가 넘는 감마 델타 T 세포를 갖는 것이 목표인 고순도 동종이계 세포 은행의 생성을 위한 출발 물질로서 사용될 수 있다.

본 발명의 제1 양상에 따르면, 하기 단계들을 포함하는, 제2 대상체에게 동종이계로 감마 델타 T 세포를 제공하기 위한 방법을 제공한다:

- 제1 대상체로부터 감마 델타 T 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계;

- 제2 대상체에게 투여할 수 있도록 감마 델타 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다.

실시형태에서, 제공하는 단계는 제1 대상체로부터 감마 델타 T 세포를 수집하는 단계를 포함할 수 있다. 수집물은 도너 대상체로부터 유래할 수 있으며 여기서 도너 대상체는 즉각적으로 인지되는 건강 상태를 갖지 않거나 또는 제대혈 물질에서 유래될 수 있다. 적합하게 수용자 대상체는 척추동물, 예를 들어 인간이거나, 또는 상업적으로 가치있는 가축, 실험 동물, 말, 소, 염소, 래트, 마우스, 토끼, 돼지 등일 수 있다. 실시형태에서, 제1 및 제2 대상체는 인간일 수 있다. 이해하는 바와 같이, 본 발명에 있어서, 제1 대상체는 감마 델타 T 세포를 수집하는 도너 대상체이고, 세포는 상이한 제2(수용자) 대상체의 동종이계 치료에 사용된다. 적합하게, 제1 대상체는 전질환 상태이다. 본원에서 사용시 용어 "전질환" 상태는 "건강한", "질환이 없는", "및 질환의 잠재적 진행의 종료와 관련된 용어", "∼보다 건강한" 또는 "∼보다 질환이 덜한" 후질환 상태에 관한 절대 용어들을 포괄한다. "전질환"이 제1 대상체가 질환을 진단받기 전 시기로 정의될 수 있으므로, 제1 대상체는 절대 용어로 건강하거나 또는 그 질환이 아직 그 자체로 드러나지 않았거나 또는 진단되지 않았거나 또는 검출되지 않은 질환을 이미 가질 수 있다. 실시형태에서, 본 발명의 제1 측면은 감마 델타 T 세포를 제2 대상체에게 제공할 수 있도록 제1 대상체로부터 얻은 감마 델타 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다.

실시형태에서, 감마 델타 T 세포는 말초 혈액 또는 분리반출 또는 백혈구분리반출 후에 얻은 말초 혈액 단핵 세포로부터 또는 제대혈로부터 수집할 수 있다. 말초 혈액 유래의 감마 델타 T 세포의 생체외 확장은 포스포항원 또는 아미노비스포스포네이트로 활성화시 Vγ9Vδ2 표현형의 감마 델타 T 세포를 우선적으로 야기시키게 된다. 생체외 확장을 위한 출발 물질로서 제대혈의 사용은 활성화 항원에 의존적인 몇몇 T 세포 수용체(TCR) 서브유형의 선택적 확장을 허용한다. 이들 TCR 아이소타입은 Vγ1-9 및 Vδ1-8, 예를 들어, 제한 없이 Vδ1, Vδ2 및 Vδ3 TCR 변이체로부터의 임의의 감마 델타 TCR 쌍을 포함할 수 있다. 별개 서브유형의 감마 델타 T 세포는 명확히 다른 항원을 인식하므로 표적 세포에 의해 제시되는 항원에 의존적으로 다른 수준의 세포독성을 나타내게 된다. 각각의 델타 TCR 서브타입의 상대적 풍부함은 배양 조건 및 제시된 특이적 항원에 대체로 의존적이다. 배양 조건은 제대혈에서 유래된 원하는 TCR 아이소타입을 우선적으로 확장시키도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 단일 TCR 아이소타입을 발현하는 감마 델타 T 세포는 특정 암유형의 치료 또는 특이적 바이러스 감염의 치료에서 보다 효율적일 수 있다.

실시형태에서, 수집 단계는 제1 대상체로부터 감마 델타 T 세포를 수집하기 전에, 제1 대상체에게 감마 델타 T 세포 강화제를 투여하는 단계를 포함한다.

실시형태에서, 감마 델타 T 세포를 수집하는 방법은 제1 대상체에게 강화제 예컨대 골수로부터 백혈구 이동을 유도시키는 성장 인자, 예컨대 G-CSF, 아미노비스포스포네이트, 구체적으로 파미드론산, 알렌드론산, 졸레드론산, 리세드론산, 이반드론산, 인카드론산, 이의 염 및/또는 이의 수화물, TNF알파 또는 인터루킨 2를 투여하는 단계를 포함할 수 있다(Meraviglia S et al., 2010).

실시형태에서, 상기 방법은 하기 단계들 중 어느 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다:

- 제1 대상체(도너) 유래의 혈액, 예를 들어 제대혈 또는 분리반출/백혈구분리반출 유래된 세포를 제공하는 단계,

- 혈액으로부터 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 또는 제대혈 단핵 세포(CBMC)를 분리하는 단계,

- PBMC 또는 CBMC에 아미노 비스포스포네이트 및 표적 항원을 부가하는 단계, 및

- 표적 항원 특이적 세포독성 T 세포(CTL) 및 감마 델타 T 세포를 증식/유도하기 위해 PBMC 또는 CBMC를 배양하는 단계, 및 경우에 따라

- 표적 항원 특이적 세포독성 T 세포(CTL) 및 감마 델타 T 세포를 증식/유도하기 위해 PBMC 또는 CBMC 또는 T 세포를 인공 항원 제시 세포(aAPC)와 공동 배양하는 단계.

본 발명자들은 백혈구의 다른 성분으로부터 실질적으로 단리된 감마 델타 T 세포를 제공하는 것이 이들 실질적으로 단리된 감마 델타 T 세포를 제2 대상체에게 동종이계 투여시 이식 실패를 감소시키게 된다고 생각한다. 감마 델타 T 세포를 동종이계로 제공하는 방법은 활성 정제 예를 들어 항-감마 델타 T 세포 수용체 항체를 사용하여 혼합 세포 개체군에서 감마 델타 T 세포를 단리하는 단계를 포함할 수 있다. 결과적으로, 본 발명의 방법은 전혈, 또는 이의 성분으로부터 감마 델타 T 세포를 정제하는 단계를 포함할 수 있다. 총 세포수에서 말초 혈액의 10% 미만이 감마 델타 T 세포를 구성하므로, 전혈 샘플, 또는 이의 성분을 정제하여, 샘플의 10 중량% 이상이 감마 델타 T 세포로 이루어지는 것이 수용자 대상체를 동종이계 치료하는 효율을 향상시킬 것으로 생각된다. 결과적으로, 본 발명의 방법은 정제된 샘플 중 총 세포수의 10, 25, 50, 75, 85, 90, 95 또는 98%가 넘게 감마 델타 T 세포를 획득하기 위해, 전혈 샘플, 또는 이의 성분을 정제 또는 확장시키는 단계를 포함한다. 정제된 샘플의 총 세포수의 10, 25, 50, 75, 85, 90, 95 또는 98%가 넘게 감마 델타 T 세포를 획득하는 한편 면역 반응 및/또는 이식 실패를 초래하는 샘플 내 세포를 감소시키기 위해 전혈 샘플 또는 이의 성분을 정제 또는 확장시키는 것이 감마 델타 T 세포의 동종이계 이식을 가능하게 한다고 생각된다.

전혈, 제대혈 또는 이의 성분으로부터 감마 델타 T 세포를 정제할 수 있는 당업자에게 공지된 임의 방법이 본 발명의 일부를 형성할 수 있다. 명확하게, 정제 단계는 감마 델타 T 세포의 생존능에 영향을 미치지 않거나 또는 최소로 영향을 미쳐야 한다. 예를 들어, 상기에 언급한 감마 델타 T 세포의 정제를 획득하기 위해, 조합하거나, 또는 단독으로 다음의 단계들을 사용할 수 있다: 투석 공정(예컨대, 분리반출 및/또는 백혈구분리반출); 분별 원심분리; 감마 델타 T 세포의 배양 성장(예컨대, 배양으로 우선적 성장).

정제 단계는 적어도 부분적으로, 배양 단계 동안 수행될 수 있다. 예를 들어, 배양 단계 동안, 특정 성분 예컨대 아미노비스포스포네이트 구체적으로, 파미드론산, 알렌드론산, 졸레드론산, 리세드론산, 이반드론산, 인카드론산, 이의 염 및/또는 이의 수화물 중 적어도 하나 또는 이의 조합의 부가는 감마 델타 T 세포가 배양물에서 선택적으로 확장될 수 있게 한다. 세포 배양 동안 정제는 또한 합성 항원 예컨대 포스포스팀/브로모할로하이드린 파이로포스페이트(BrHPP), 합성 아이소펜테닐 파이로포스페이트(IPP), (E)-4-하이드록시-3-메틸-부트-2-에닐 파이로포스페이트(HMB-PP)의 부가 또는 인공 항원 제시 세포(aAPC)에 의해 획득될 수 있다(Wang et al., 2011). 이러한 성분들의 부가는 전형적으로 정제된 샘플 중 총 세포 수의 70% 또는 그 이상으로 감마 델타 T 세포의 양성 선별을 가능하게 하는 배양 환경을 제공한다.

아미노비스포스포네이트는 감마 델타 T 세포를 배양하는 제1일부터 임의 시기에 부가될 수 있다. 아미노비스포스포네이트는 0.05 내지 100 마이크로몰, 바람직하게 0.1 내지 30 마이크로몰의 농도로 말초 혈액 단핵 세포에 부가될 수 있다. 적합하게, 비스포스포네이트는 파이로포스포르산의 유사체이며 파이로포스포르산 골격 P-O-P의 O(산소 원자)가 C(탄소 원자)로 치환된 화합물(P-C-P)이다. 대체로 골다공증을 위한 치료 약물로서 사용된다. 아미노비스포스포네이트는 비스포스포네이트 중에 N(질소 원자)를 갖는 화합물을 의미한다. 예를 들어, 본 발명에서 사용되는 아미노비스포스포네이트는 특별히 제한적이지 않으며, WO 2006/006720 및 WO 2007/029689에 개시된 것과 같은 아미노비스포스포네이트 등이 사용될 수 있다. 이의 특정 예에는 파미드론산, 이의 염 및/또는 그들의 수화물, 알렌드론산, 이의 염 및/또는 그들의 수화물, 및 졸레드론산, 이의 염 및/또는 그들의 수화물이 포함된다(Thompson K. et al., 2010). 아미노비스포스포네이트의 농도는 바람직하게 파미드론산, 이의 염 및/또는 그들의 수화물은 1 내지 30μM, 알렌드론산, 이의 염 및/또는 그들의 수화물은 1 내지 30μM이고, 졸레드론산, 이의 염 및/또는 그들의 수화물은 0.1 내지 10μM이다. 여기서, 예로서 5μM의 졸레드론산이 부가된다.

적합하게, 배양 기간이 7일 또는 그 이상인 경우, 감마 델타 T 세포를 포함하는 세포군이 고순도로 얻어질 수 있지만, 배양은 바람직하게 감마 델타 T 세포의 수를 더 증가시키기 위해 약 14일 동안 수행된다.

실시형태에서, 배양 기간은 약 7일 또는 그 이상일 수 있다. 적합하게, 배양 기간은 높은 수의 실질적으로 정제된 감마 델타 T 세포 개체군을 획득하기 위해 약 14일 또는 그 이상 동안 수행될 수 있다.

배양은 전형적으로, 감마 델타 T 세포가 지수 증식을 지속하는 것이 중단된 시기 이후, 14일 동안 수행된다. 그러나, 일정 실시형태는 상당한 수로 감마 델타 T 세포의 확장 배양 및 선택 확장을 제공한다. 이러한 실시형태는 배양물에 합성 항원(예컨대, 합성 IPP, DMAPP, Br-HPP, HMB-PP)의 제공, 인공 또는 조사된 항원 제시 세포에 순환기 노출, 고정된 항원 또는 항체의 제공 또는 세포 배양용 출발 물질로서 제대혈의 사용을 포함한다.

적합하게, 세포는 최소로 적어도 2회의 개체군 배증 후 그들 세포 표면 수용체 프로파일을 재설정하기 위해 적어도 7일 기간 동안 이 환경에서 배양될 수 있다.

경우에 따라, 감마 델타 T 세포를 배양하는 단계는 감마 델타 T 세포 표면 수용체 프로파일을 변화시키기 위한 단계를 포함할 수 있다(Iwasaki M. et al., 2011).

예를 들어, 배양 단계는 제1 대상체 유래의 샘플에서 제공되는 감마 델타 T 세포에 존재하는 1 이상의 감마 델타 T 세포 표면 수용체 유형을 감소시키거나 또는 제거하기 위한 1 이상의 하위 단계들을 포함할 수 있다. 그러한 단계는 감마 델타 T 세포의 수용체 프로파일을 나이브 또는 부분적으로 나이브 형태로 "재설정" 또는 "부분적으로 재설정"하기 위한 것으로 이해될 수 있다. 그러한 재설정은 암 및 바이러스 감염을 치료하는 감마 델타 T 세포의 능력을 강화시키는 것으로 간주된다. 일부 T 세포 수용체는 T 세포가 유래된 대상체에서 암 또는 바이러스의 존재에 의해 유도될 수 있다고 알려져 있으며, 이들 수용체가 일부 사례에서 T 세포에 의한 종양 또는 바이러스 감염에 대한 반응성을 억제할 수 있음이 확인되었다. 따라서, 그러한 수용체의 제거는 본 발명의 감마 델타 T 세포의 유효성을 증가시킬 수 있다.

1 이상의 감마 델타 T 세포 수용체 유형의 감소 또는 제거는 세포 개체군이 그 크기가 몇배 증가되는 수 일 동안 제1 대상체에서 유래된 감마 델타 T 세포를 배양시켜 본 발명의 방법에 의해 획득할 수 있다. 예를 들어, 세포를 적어도 7일 동안 배양하여 최소로 적어도 2회 개체군 배증 후에 그들 세포 표면 수용체 프로파일을 재설정되게 할 수 있다.

감마 델타 T 세포 표면 수용체 프로파일이 재설정되는 경우에, 예를 들어, 1차, 미배양된 감마 델타 세포 상에 존재하는 면역 체크포인트 억제제를 포함한 세포 표면 수용체, 예컨대 종양-특이적 세포 표면 수용체 B7-H1/PD-L1, B7-DC/PD-L2, PD-1 및 CTLA-4는 배양 확장 기간 동안 그 수가 실질적으로 감소하거나 또는 부재하게 될 수 있다.

배양 단계는 선택된 감마 델타 T 세포 표면 수용체(예를 들어, 상기 기술된 수용체 중 어느 하나 또는 임의 조합)(B7-H1/PD-L1, B7-DC/PD-L2, PD-1 및 CTLA-4)를 유의하게 감소시키거나 또는 제거하기 위해 요구되는 배양 단계의 적절한 지속기간을 결정하기 위해 감마 델타 T 세포의 표면 수용체 프로파일을 모니터링하는 단계를 더 포함할 수 있다. 감마 델타 T 세포 수용체를 모니터링하는 공정은 예를 들어, 유세포 측정 기술, 예컨대 문헌 [Chan D. et. al., 2014]에 개략된 것들을 사용해 수행할 수 있다. 간략하게, 면역 체크포인트 억제제 수용체 및/또는 리간드에 특이적인 항체는 그들의 세포 표면 상에 면역 체크포인트 억제제를 발현하는 감마 델타 T 세포의 하위개체군(예를 들어, 항-V감마9로 동시염색됨)을 동정하는데 사용하게 된다.

부가적으로, 또는 경우에 따라서, 본 발명의 배양 단계는 제1 대상체로부터 추출시 미배양된 감마 델타 세포의 표면 상에 존재하지 않았던 감마 델타 T 세포의 표면 수용체 유형의 발현을 감마 델타 T 세포에서 유도하는 단계(들), 또는 제1 대상체로부터 추출시 미배양된 감마 델타 세포의 표면 상에 존재했던 세포 표면 수용체 유형(들)의 발현량 증가를 유도하는 단계(들)를 포함할 수 있다. 이는 암, 박테리아, 진균, 원생동물 또는 바이러스로부터 유래된 항원으로 감마 델타 T 세포를 공격하여 획득할 수 있다. 이러한 항원을 배양 확장 배지에 부가하여 확장된 감마 델타 T 세포의 효능, 항원-제시 잠재능 및 세포독성을 증가시킬 수 있다. 적합하게, 항원은 제한 없이, 고정된 항원 또는 항체, 조사된 종양 세포주, 인공 항원 제시 세포 및 합성 가용성 항원의 부가를 포함한, 다양한 형태로 제공될 수 있다. 항원은 배양 제1일에 배양 확장 배지에 부가될 수 있다. 실시형태에서, 바이러스는 인플루엔자, HIV, C형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, 헤르페스 변이체, 사이토메갈로바이러스(CMV), 엡스테인 바 바이러스, 수두 바이러스, 파필로마바이러스, 에볼라, 바리셀라 조스터 바이러스 또는 천연두 바이러스에서 선택될 수 있다. 대안적으로 항원은 세포 감염, 박테리아 감염, 진균 감염 또는 원생동물 감염에서 발견된 항원일 수 있다. 구체적으로, 표적 항원은 인플루엔자, HIV, C형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, 헤르페스 변이체, 사이토메갈로바이러스(CMV), 에볼라 바이러스, 엡스테인 바 바이러스, 수두 바이러스, 파필로마바이러스, 바리셀라 조스터 바이러스 또는 천연두 바이러스에서 유래될 수 있다.

적합하게, 항원은 그러한 바이러스 유기체에서 유래하는 활성 또는 불활성 바이러스 단편, 펩타이드, 단백질, 항원성 절편 등을 포함할 수 있다.

적합하게, 항원은 종양 세포에만 존재하고 임의의 다른 세포에는 존재하지 않는 종양-특이적 항원 및/또는 일부 종양 세포 및 또한 일부 정상 세포 상에 존재하는 종양-연관 항원을 포함할 수 있다. 그러한 종양-특이적 항원은 제한 없이, MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, MAGEA12, MAGEC2, BAGE, GAGE, XAGE1B, CTAG2, CTAG1, SSX2, 또는 LAGE1을 포함하는 MAGE-유형 항원, 상피 종양 항원, MUC-1, CA-125 및 암배아 항원 또는 이의 조합을 포함할 수 있다.

적합하게, 감염된 세포, 괴저성 세포, 또는 암세포의 용해물을 적합한 항원을 제공하는데 이용할 수 있다. 실시형태에서, 항원은 합성된 항원, 예를 들어 합성 펩타이드일 수 있다. 대안적으로, 항원은 대상체로부터 회수할 수 있다. 적합하게, 1㎖ 당 약 0.02 내지 2 마이크로그램 항원이 배양 단계 동안 세포에 제공될 수 있다.

실시형태에서, 감마 델타 T 세포의 증식 및 세포 표현형의 유지를 촉진하는 인자들 예컨대 IL-2, IL-15 또는 IL-18(Garcia V. et al., 1998, Nussbaumer O. et al., 2013)이 혈액 단핵 세포를 배양하는 단계에서 제공될 수 있다. 적합하게, 그러한 실시형태에서, IL-2, IL-15 또는 IL-18 또는 이의 조합은 배양 배지에 50 내지 2000 U/㎖, 보다 바람직하게 400 내지 1000 U/㎖의 범위로 제공될 수 있다. 배양은 전형적으로 34 내지 38℃, 보다 바람직하게 37℃에서 2 내지 10%, 보다 바람직하게 5%의 CO₂ 존재 하에 수행될 수 있다. 배양 배지는 배양된 세포수에 의존적으로 부가될 수 있다. 적합하게 혈청은 배양 용액에 0.1 내지 20%의 양으로 부가될 수 있다. 혈청으로서, 태아 소 혈청 AB 혈청, 또는 자가 혈장을 예를 들어, 사용할 수 있다.

실시형태에서, 고갈 또는 아네르기 감마 델타 T 세포의 재생을 고무시키는 인자들을 배양 배지에 부가할 수 있다. 적합하게, 이들 인자는 사이토카인 예컨대 IL-15 또는 IL-18 또는 특이적 면역 체크포인트 억제제 수용체 또는 리간드를 표적화하는 항체 예를 들어 항-PDL1 항체(Chang K. et al., 2014)를 포함할 수 있고 또한 CTLA-4, PD-1, PD-2, LAG3, CD80, CD86, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, TIM3 또는 A2aR에 대해 유도된 항체를 포함할 수도 있다.

실시형태에서, 제공 단계는 도너 대상체에서 유래하는 혈액 또는 제대혈 수집물을 포함할 수 있다. 그러한 혈액 수집물은 약 15㎖ 내지 25㎖의 혈액일 수 있다. 실시형태에서, 제공 단계는 수집 단계를 포함할 수 있고, 이때 수집하는 단계는 단일 수집 과정으로 제1 대상체로부터의 적어도 감마 델타 T 세포의 수집이다. 실시형태에서, 수집 단계는 다수회 수집 기간일 수 있다.

본 발명의 일 실시형태에서, 감마 델타 T 세포를 제공하는 방법은 제1 대상체로부터 수집된 세포의 적어도 하나의 특징을 결정하는 분석 단계를 포함할 수 있다. 실시형태에서, 세포의 적어도 하나의 특징은 세포의 DNA 또는 RNA 서열 또는 아미노산 서열, 세포의 단백질체 또는 세포의 세포 표면 마커일 수 있다. 실시형태에서, 상기 방법은 감마 델타 T 세포를 조직 적합 검사하는 단계를 포함할 수 있다. 감마 델타 세포 표면 마커 특징은 (제한 없이) CD3, CD4, CD8, CD69, CD56, CD27 CD45RA , CD45, TCR-Vg9, TCR-Vd2, TCR-Vd1, TCR-Vd3, TCR-pan g/d,NKG2D, 단일클론 케모카인 수용체 항체 CCR5, CCR7, CXCR3 또는 CXCR5 또는 이의 조합을 포 함할 수 있다. 이러한 적합 검사는 유전자형 또는 표현형 정보를 포함할 수 있다. 표현형 정보는 미시적, 세포, 또는 분자 수준에서 관찰가능하거나 또는 측정가능한 특징을 포함할 수 있다. 유전자형 정보는 예를 들어 인간 백혈구 항원의 특이적 유전자 변이 또는 돌연변이(도너의 HLA 유형)에 관한 것일 수 있다. 적합하게 감마 델타 T 세포는 다수의 환자에서 사용하기 위해 확장하고 분화시킬 수 있는 임상 등급 세포주 은행을 제공할 수 있다. 실시형태에서, 감마 델타 T 세포는 제대혈 출발 물질로부터 생체외 확장되어 다수 도너로부터 조합되어 세포 은행을 형성하기에 충분한 수의 감마 델타 T 세포를 생성시킬 수 있다. 실시형태에서, 이러한 은행은 적합하게 인간 백혈구 항원(HLA) 대응을 위한 기회를 극대화하여서 면역억제 약물의 실질적인 사용 필요성 또는 동종이식 거부 위험성을 최소화하도록 선택된 건강한 지원자 도너의 혈액군 O에서 얻은 감마 델타 T 세포로 개체군을 형성시킬 수 있다. 예를 들어, UK/EU 환자를 위한 이러한 은행은 감소된 거부 위험성으로 UK/EU 개체군의 상당 비율을 치료할 수 있는 이하를 포함할 수 있다:

실시형태에서, 수집되고 처리된 감마 델타 T 세포는 세포 은행 또는 보관소에 향후 사용을 위해 예치된다. 따라서, 세포는 동결보존제 예컨대 DMSO 또는 크리요스토르(CryoStor)(상표명)에 저장될 수 있고 액체 질소를 사용하여 제어된 속도로 냉동 및 저장된다. 감마 델타 T 세포는 단일 또는 복수 치료 단계에 필요한 정해진 유닛 또는 용량의 단위화 저장부에 저장될 수 있다.

실시형태에서, 상기 방법은 수집된 샘플 내에 감마 델타 T 세포의 저장능, 생존능 또는 치료능을 강화시키기 위한 작용제로 제1 대상체에서 수집된 세포 개체군을 처리하는 단계를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 보존 단계를 포함할 수 있고, 여기서 동결보존제가 감마 델타 T 세포 샘플 중 감마 델타 T 세포에 제공된다.

실시형태에서, 감마 델타 T 세포는 포스포항원 아이소펜테닐 파이로포스페이트(IPP) 확장된 인간 Vγ9Vδ2 T 세포일 수 있다.

실시형태에서, 감마 델타 T 세포는 확장된 인간 Vδ1 T 또는 Vδ3 T 세포일 수 있다.

본 발명의 제2 양상에 따르면, 개체에서 감염 또는 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 개체에게 상이한 개체로부터 얻은 감마 델타 T 세포를 제공하는 단계를 포함한다. 따라서, 도너 감마 델타 T 세포는 예를 들어, 바이러스, 진균 또는 원생동물의 감염의 치료, 또는 수용자 대상체에서 암의 치료를 위해 사용되고, 여기서 도너 및 수용자는 동일한 개체가 아니다.

수용자 대상체에게 감마 델타 T 세포를 제공하기 위한 투여 방법은 정맥내, 피내, 또는 피하 주사를 포함할 수 있다. 투여는 영향받은 영역에 하거나 또는 개체에게 전신으로 할 수 있다.

실시형태에서, 바이러스, 진균 또는 원생동물에 의해 감염된 제2의 상이한 대상체의 치료에 사용하기 위해 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제공하고 여기서 대상체의 상기 치료는 동종이계이다.

실시형태에서, 바이러스에 의해 감염된 제2의 상이한 대상체의 치료를 위한 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제공하고, 여기서 상기 바이러스는 HIV, 인플루엔자, 또는 간염 바이러스에서 선택되며, 상기 치료는 동종이계이다. 일 실시형태에서, 상기 바이러스는 B형 간염 바이러스 또는 C형 간염 바이러스, 인플루엔자 바이러스, 헤르페스 변이체, 사이토메갈로바이러스(CMV), 엡스테인 바 바이러스, 수두 바이러스, 파필로마 바이러스, 바리셀라 조스터 바이러스 또는 천연두 바이러스일 수 있다.

실시형태에서, 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 A(플루 A) 바이러스일 수 있다. 실시형태에서, 인플루엔자 바이러스는 조류 또는 돼지-기원 범유행 인플루엔자 바이러스, 예를 들어 H5N1, H7N3, H7N7, H7N9 및 H9N2(조류 서브타입) 또는 H1N1, H1N2, H2N1, H3N1, H3N2 H2N3(돼지 서브타입)일 수 있다.

실시형태에서, 암을 갖는 대상체의 치료를 위해 감마 델타 T 세포를 제공하고, 여기서 상기 치료는 동종이계이다.

실시형태에서, 제2 대상체의 치료에 사용하기 위해 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제공하며, 여기서 제2 대상체는 바이러스, 진균 또는 원생동물 감염 중 적어도 하나를 앓고 있다. 실시형태에서, 감마 델타 T 세포가 제공되는 대상체는 면역억제 약물과 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여될 수 있다. 면역억제 약물의 투여는 감마 델타 T 세포에 대한 임의의 유해한 면역계 반응을 완화시키는데 도움을 줄 수 있다.

실시형태에서, 엡스테인-바 바이러스-유도된 림프구증식성 질환(EBV-LPD)을 갖는 대상체의 치료를 위해 감마 델타 T 세포를 제공한다.

엡스테인-바 바이러스(EBV)는 감마 헤르페스 바이러스 패밀리의 구성원이고 서양인 집단에서 우세하다(성인의 > 90%가 양성 혈청반응임). EBV는 바이러스 재활성화를 방지하여 EBV가 숙주 B 세포에서 잠복 감염으로서 무증상적으로 지속되게 하는 숙주의 세포독성 T 세포(CTL)에 의해 잠복 감염으로 유지된다.

EBV는 B 세포 기원의 수많은 악성종양 예컨대 버킷 림프종(BL), 호지킨 질환(HD) 및 이식후 림프구증식성 질환(PTLD)을 비롯하여 상피 기원의 암 예컨대 비인두 암종(NPC) 및 위암과 연관된다.

PTLD는 고형 장기 이식 및 조혈모 세포 이식과 연관된 공통 위험이다.

실시형태에서, EBV-연관된 악성종양을 갖는 제2 대상체의 치료에 사용하기 위해 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제공한다.

실시형태에서, 상이한 바이러스 징후의 치료를 위한 1 이상의 특이적 감마 델타 TCR 이소타입의 감마 델타 T 세포를 제공한다. 예를 들어, Vδ2^pos 서브타입은 HIV 및 인플루엔자 감염의 치료에서 가장 효율적일 수 있는 한편(Wallace M. et al., 1996, Tu W. et al. 2011), EBV 감염된 세포의 제어에서 적어도 2가지 감마 델타 T 세포 서브유형, Vδ1^pos (Farnault L, et al., 2013) 및 Vδ2^pos 세포(Xiang Z. et al., 2014)의 역할에 대한 증거가 존재한다. 적합하게, 감마 델타 T 세포 서브타입의 조합을 선택하여 환자에게 투여해서 감마 델타 T 세포 요법의 효능을 증가시킬 수 있다. 적합하게, 이들은 별개 배양 조건을 이용해서 생성된 단일 아이소타입 감마 델타 T 세포 개체군 또는 정해진 한가지 세트의 세포 배양 변수를 부수적으로 사용해 생성된 다가의 감마 델타 T 세포 개체군을 포함할 수 있다.

본 발명의 제2 양상에서 사용되는 감마 델타 T 세포는 즉 상기 기술된 제공 단계 및 배양 단계 후에, 본 발명의 제1 양상에서 기술된 임의의 것들일 수 있다.

본 발명의 제3 양상에서, 대상체에게 감마 델타 T세포를 자가조직으로 제공하는 방법을 제공하되, 상기 방법은

- 대상체 유래의 감마 델타 T 세포의 샘플을 제공하는 단계;

- 감마 델타 T 세포를 상기 대상체에게 다시 투여할 수 있도록 감마 델타 T 세포를 배양하는 단계를 포함한다.

본 발명의 제1 측면에 대해 상기에 기술된 임의의 제공 단계 및 배양 단계는 본 발명의 제3 측면에 적용될 수 있다. 예를 들어, 감마 델타 T 세포를 배양하는 단계는 상기 기술된 바와 같이, 감마 델타 T 세포 표면 수용체 프로파일을 변화시키기 위한 단계를 포함할 수 있다.

본 발명의 제4 양상에서, 개체에서 감염 또는 암을 치료하는 방법을 제공하되, 상기 방법은 상기 개체에게 이 개체로부터 얻은 감마 델타 T 세포를 제공하는 단계를 포함하고, 여기서 감마 델타 T 세포는 본 발명의 제3 양상에서 기술된 바와 같은 방법에 의해 제공된다.

실시형태에서, 암은 골수종 또는 흑색종일 수 있다. 실시형태에서, 암은 제한 없이, 위암, 신장 세포 암종, 간세포 암종, 췌장암, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 급성 림프아구성 백혈병, 비소세포 폐암, EBV-LPD, 버킷 림프종 및 호지킨 질환을 포함한, 종양 유형을 포함할 수 있다.

본 발명의 추가 양상에 따라서, 본 발명의 임의 방법의 감마 델타 T 세포를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

실시형태에서, 상기 조성물은 치료적 효과를 제공하도록 개체에게 제공하기 적합한 감마 델타 T 세포의 통일된 용량을 포함한다.

실시형태에서, 약제학적 조성물은 개체 당 25×10⁹ 감마 델타 T 세포 이상의 총 용량을 포함할 수 있다.

실시형태에서, 암의 치료에 사용하기 위한 감마 델타 T 세포 및 항체 면역요법제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

실시형태에서, 항체 면역요법은 예를 들어, 로슈(Roche) 및 프리스톨 마이어스 스킵(Bristol Myers Squibb)에서 개발한 것과 같은, 면역 캐스캐이드 차단제 예컨대 PD-1, PDL-1 및/또는 CTLA-4 억제제, PD-1, PDL-1 및 CTLA-4 억제제일 수 있다.

실시형태에서, 약제학적 조성물은 CTLA-4 억제 신호를 차단할 수 있는 항체를 포함할 수 있다. CTLA-4 신호의 차단은 T 림프구가 인식하여 세포를 파괴할 수 있게 한다. 실시형태에서 그러한 항체는 이필리무맙(MDX-010, MDX-101)일 수 있다.

실시형태에서, 상기 항체는 예정 세포사-리간드(Programmed death-ligand) 1(PDL-1)를 억제할 수 있다. 실시형태에서 그러한 항체는 MPDL3280A(로슈) 또는 MDX-1105에서 선택될 수 있다.

실시형태에서 약제학적 조성물은 사이토카인, 예를 들어, IL-2 또는 IL-12와 조합될 수 있다. 실시형태에서, 약제학적 조성물은 인터페론 감마를 포함할 수 있다.

실시형태에서, 암의 치료에 사용하기 위한 감마 델타 T 세포 및 화학요법제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

실시형태에서, 바이러스의 치료에 사용하기 위한 감마 델타 T 세포 및 치료제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

실시형태에서, 약제학적 조성물은 암 또는 감염에 대한 치료제 또는 예방제로서 사용될 수 있다.

본 발명의 실시형태에서, 감마 델타 T 세포는 Vγ9Vδ2 T 세포일 수 있다.

본 발명의 각 측면의 바람직한 특징들 및 실시형태들은 달리 문맥에서 요구하지 않으면 필요한 변화를 가하여 다른 측면의 각각에 대한 것과 같다.

본 명세서에서 언급된 각각의 문헌, 참조, 특허 출원 또는 특허는 그들 전체로 명백하게 참조로 편입되고, 이는 독자가 본 명세서의 일부로서 읽어야 하고 고려해야 한다는 것을 의미한다. 본 명세서에서 인용된 문헌, 참조, 특허 출원 또는 특허가 본 명세서에서 반복되지 않은 것은 단지 간결함의 이유이다.

본 명세서에 포함된 인용된 재료 또는 정보에 대한 언급은 그러한 재료 또는 정보가 통상의 일반 지식의 일부이거나 또는 임의의 지역에서 공지되어 있다는 인정으로서 이해되어서는 안 된다.

명세서 전반에서, 달리 문맥에서 요구하지 않으면, 용어 '포함하다' 또는 '포괄하다', 또는 별형 예컨대 '포함한다' 또는 '포함하는', '포괄한다' 또는 '포괄하는'은 명시된 정수 또는 정수군을 포함하는 것으로 이해하며, 임의의 다른 정수 또는 정수군의 배제를 의미하는 것이 아니다.

본 발명의 실시형태들은 이제 이하의 첨부된 도면을 참조하여 단지 예로서 설명된다.

도 1은 출발 배양 PBMC 및 γδ T 세포 개체군(V감마9 V델타2)을 선택적으로 활성화시키고 증식시키기 위한 배양 확장 14일 후의 면역표현형을 도시하며 여기서 세포 개체군의 유세포측정 면역표현형은 출발 물질로서 인간 혈액에서 단리된 PBMC를 사용하여, 배양 공정 시작(0일), 및 선택적 확장 공정 종료(14일)에 사용되었다: - A - PBMC의 출발 개체군 중 γδ T 세포의 비율을 검출하기 위해 항-V감마9-FITC 항체로 염색한 0일의 단리된 PBMC의 막대 그래프(PBMC의 1.3%가 γδ T 세포임): B - 항-CD3(T 세포) 및 항-V감마9(γδ T 세포)로 염색된 선택적 배양 14일 후 세포 개체군의 점도표 분석(T 세포의 77.5%가 γδ T 세포임): C,D - 단리된 PBMC(C) 및 배양 확장 14일 후 세포 개체군(D)의 명시야 영상: E - 각각의 세포 배양 개체군에 존재하는 γδ T 세포의 비율을 나타낸 표;

도 2는 γδ T 세포 개체군(V감마9 V델타2)을 활성화시키고 증식시키기 위해 배양으로 선택적으로 확장시킨 세포의 지수 성장을 도시하고, 여기서 유의한 수의 고순도 γδ T 세포가 12일에 생성되었고 시험관 내 EBV-양성 림프종 세포주 패널을 사용하여 암 세포의 세포용해의 강력한 이펙터인 것이 입증되었으며, 세포 개체군의 유세포측정 면역표현형이 출발 물질로서 인간 혈액에서 단리된 PBMC를 사용하여 배양 공정 출발(0일)시에, 그리고 선택적 확장 공정 후(12일)에 사용되었다: - A - 처음 확장 12일동안 배양한 총 생존 세포수를 도시한 성장 그래프로서, 12일 까지 총 4×10⁹ 세포를 획득하였다: B,C - 출발 PBMC(B) 및 배양으로 선택적 확장 12일 후 세포 개체군(C)의 유세포측정 분석으로서, 각각 3.1%(0일) 및 87.1%(12일) γδ T 세포(항-V감마9)가 확인되었다: D - γδ T 세포를 16시간 동안 5:1의 이펙터:표적 세포 비율로 5종의 EBV 양성 표적 세포주(BL2 B95-8, BL30 B95-8, BL74 B95-8, Raji 및 IB4)와 항온반응시켰고, γδ T 세포 유발된 세포용해를 비방사능 사이토톡스96 검정법을 사용해 측정하고 최대 표적 세포 용해 비율로서 표시하였으며; 그리고

도 3은 이종성 세포 개체군에서 개별 세포 표현형을 단리하기 위해 적용된 항체-매개 정제 방법을 도시하며, 이 예에서, 세포를 범-항-γδ T 세포 수용체 항체를 사용해 선별하여 초고순도로 γδ T 세포 개체군을 얻었다 - 항-γδ T 세포 수용체-FITC 접합된 항체를 사용한 정제 전(A) 및 정제 후(B) 세포 개체군의 유세포측정 면역표현형 분석은 γδ T 세포가 45%의 γδ T 세포 출발 물질로부터 99.7% 순도로 얻어졌음을 입증하였다.

감마 델타 T 세포는 문헌 [Nicol A.J. et. al., 2011]에 요약된 기술을 사용해 확장시킨 배양물일 수 있다. 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 피콜-파크(Ficoll-Paque)(GE Healthcare, 영국 버킹엄셔 주에 소재)를 사용한 밀도 구배 원심분리에 의해 단리하였고 Vγ9Vδ2 T 세포는 10% 인간 AB 혈장(Lonza), L-글루타민(2 mM; Lonza) 및 젠타마이신(40㎍; Pfizer, 오스트레일리아의 웨스턴 오스트레일이아주의 벤틀리시에 소재)이 보충된 RPMI 1640 배지(Lonza, 미국 매릴랜드주의 워커스빌시에 소재) 중에서 PBMC의 배양을 통해 선택적으로 증식시켰다. 재조합 인간 IL-2(700 IU/㎖; Novartis, 스위스의 바젤시에 소재) 및 졸레드로네이트(1μM; Novartis)를 0일에 부가하였고 추가 IL-2(350 IU/㎖)는 배양 기간 동안 2-3일마다 부가하였다. 7-14일 배양 후, 70-95% Vγ9Vδ2 T 세포를 함유하는 정제된 이펙터 세포 개체군은 미니맥스(miniMACS)(Miltenyi Biotec, 독일의 베르기슈글라트바흐시에 소재)를 사용해 CD4+, CD8+ 및 CD56+ 세포를 고갈시켜 시험관 내 기능 분석을 위해 획득하였다.

생체 외 확장시킨 Vγ9Vδ2 T 세포를 사용한 고형 종양을 갖는 환자의 자가조직 치료는 임상적 이득을 제공하는 것이 입증되었다(Noguchi et al., 2011). 부가적으로, HLA-대응된, 생체외 확장된 αβ TCR-양성 세포독성 T 림프구(CTL)를 사용한 동종이계 치료는 EBV-PTLD의 치료에 효과적인 것으로 입증되었다(Haque T et al., 2007). 따라서, 본 발명자들은 동종이계 감마 델타 T 세포를 사용한 암 및 바이러스 감염의 치료가 환자에게 입증가능한 치료적 이득을 제공할 수 있고 실현가능하다고 생각한다.

본 발명을 특정 실시예를 참조하여 구체적으로 제시하고 설명하였지만, 본 발명의 범주를 벗어나지 않고 형태 및 상세사항에 다양한 변화가 만들어질 수 있음을 당업자라면 이해할 것이다.

참조문헌

Claims

하기 단계들을 포함하는, 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제2 동종이계 대상체에게 제공하는 방법:
- 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계; 및
- 상기 감마 델타 T 세포를 제2 대상체에게 투여할 수 있도록 상기 샘플에 존재하는 상기 감마 델타 T 세포를 배양하는 단계.
제1항에 있어서, 상기 감마 델타 T 세포를 배양하는 단계는 상기 샘플 내 다른 세포 유형에 비해 상기 샘플 내 감마 델타 T 세포의 수 증가를 제공하는, 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제2 동종이계 대상체에게 제공하는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 배양 단계는 상기 샘플 내 다른 세포 유형으로부터 상기 샘플 내 감마 델타 T 세포를 정제하는 단계를 포함하는, 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제2 동종이계 대상체에게 제공하는 방법.
제3항에 있어서, 상기 정제 단계는 상기 샘플 내 상기 다른 세포 유형으로부터 상기 감마 델타 T 세포를 정제 및 단리하기 위해 항-감마 델타 T 세포를 사용하는, 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제2 동종이계 대상체에게 제공하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감마 델타 T 세포는 상기 샘플에 존재하는 전체 세포수의 10%가 넘게 제공되도록 배양되거나 또는 정제되는, 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제2 동종이계 대상체에게 제공하는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 배양 단계는 상기 제1 대상체 유래의 상기 샘플 내 상기 감마 델타 T 세포 상에 존재하는 1 이상의 감마 델타 T 세포 표면 수용체 유형을 감소시키거나 또는 제거하기 위한 1 이상의 하위 단계를 포함하는, 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제2 동종이계 대상체에게 제공하는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 배양 단계는 상기 제1 피 험체 유래의 상기 미배양된 감마 델타 T 세포의 표면 상에 존재하지 않았던 표면 수용체 유형(들)의 발현을 상기 감마 델타 T 세포에서 유도시키거나, 또는 상기 제1 대상체 유래의 상기 감마 델타 T 세포의 표면 상에 존재했던 세포 표면 수용체 유형(들)의 발현량 증가를 유도시키는 단계를 포함하는, 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제2 동종이계 대상체에게 제공하는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 샘플 내 상기 감마 델타 T 세포의 상기 세포 표면 수용체 프로파일을 모니터링하는 단계를 더 포함하는, 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포를 제2 동종이계 대상체에게 제공하는 방법.
개체에서 감염 또는 암을 치료하는 방법으로서, 상기 개체에게 상이한 동종이계 개체로부터 얻은 감마 델타 T 세포를 제공하는 단계를 포함하는, 감염 또는 암을 치료하는 방법.
제9항에 있어서, 상기 감마 델타 T 세포는 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제공되는, 감염 또는 암을 치료하는 방법.
암 또는 감염을 앓는 제2 동종이계 대상체의 치료에 사용하기 위한 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포.
제2 동종이계 대상체의 치료에 사용하기 위한 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포로서, 상기 감마 델타 T 세포는 면역억제 약물과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여되는, 제2 동종이계 대상체의 치료에 사용하기 위한 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포.
제9항, 제11항 또는 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감염은 바이러스, 진균 또는 원생동물 감염 중 적어도 하나인, 감염 또는 암을 치료하는 방법 또는 제2 동종이계 대상체의 치료에 사용하기 위한 제1 대상체 유래의 감마 델타 T 세포.
암 또는 감염을 치료하는데 사용하기 위한 감마 델타 T 세포를 포함하는 약제학적 조성물.
암 또는 바이러스, 진균 또는 원생동물 감염의 치료에서 동시적, 개별적 또는 순차적 사용을 위한 항체 면역요법제 및 감마 델타 T 세포를 포함하는 약제학적 조성물.