KR20160143820A - 출혈의 예방 및 치료를 위한 반감기 연장 인자 ｆｖｉｉａ 단백질 및 이의 투약 용법 - Google Patents

출혈의 예방 및 치료를 위한 반감기 연장 인자 ｆｖｉｉａ 단백질 및 이의 투약 용법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 출혈의 예방 및 "온-디맨드(on-demand)" 치료를 위한 그리고 선천적 또는 후천적 출혈 장애를 지닌 환자에서의 수술 동안 또는 수술 후 출혈 에피소드를 예방하기 위한 반감기 연장 인자 VIIa(FVIIa)를 이용한 투약 용법에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 출혈 상황에서, 즉, 외상 또는 수술로 인한, 출혈 장애를 갖지 않는 환자에서의 실혈을 치료하거나 예방하기 위한 반감기 연장 FVIIa의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 다른 양상은 후천적 혈우병의 치료이다.

Description

출혈의 예방 및 치료를 위한 반감기 연장 인자 ＦＶＩＩＡ 단백질 및 이의 투약 용법{HALF-LIFE EXTENDED FACTOR FVIIA PROTEIN FOR PREVENTION AND TREATMENT OF BLEEDING AND DOSING REGIMENS THEREFOR}
관련 출원 데이터
본 출원은 2014년 4월 11일에 출원된 미국 특허 출원 제61/978218호, 2014년 5월 9일에 출원된 유럽 특허 출원 제14167612.2호, 및 2014년 5월 15일에 출원된 유럽 특허 출원 제14168389.6호로부터의 우선권을 주장한다. 모든 출원의 전문은 본원에 인용에 의해 포함된다.
서열목록
본 출원은 전자 형태의 서열목록과 함께 제출된다. 서열목록의 전문은 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 분야
본 발명은 출혈의 예방 및 "온-디맨드(on-demand)" 치료를 위한 그리고 선천적 또는 후천적 출혈 장애를 지닌 환자에서의 수술 동안 또는 수술 후 출혈 에피소드를 예방하기 위한 반감기 연장 인자 VIIa(FVIIa)를 이용한 투약 용법에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 출혈 상황에서, 즉, 외상 또는 수술로 인한, 출혈 장애를 갖지 않는 환자에서의 실혈을 치료하거나 예방하기 위한 반감기 연장 FVIIa의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 다른 양상은 후천적 혈우병의 치료이다.
혈우병 A는 유전적 응혈 장애이다. 이는 응혈 인자 VIII의 염색체 X-연관 결핍으로부터 초래되고, 10,000명당 1 내지 2명 개체의 발생률(incidence)로 거의 전적으로 남성에게 영향을 미친다. X-염색체 결함은 임상학적 증상이 없는 여성 보유자에 의해 전염된다. 혈우병 A의 임상학적 징후는 증가된 출혈 성향(bleeding tendency)이다. 인자 VIII 농축물을 이용한 대체 치료요법이 도입되기 전에, 중증의 혈우병을 지닌 사람의 평균 수명은 20년 미만이었다. 혈장으로부터 생성된 인자 VIII의 농축물의 사용 및 인자 VIII의 재조합체 형태의 이후의 사용은 혈우병 환자에 관한 상황을 현저하게 개선시켜 평균 수명을 널리 증가시키고 이들 중 대부분에 정상 수명보다 더 많거나 적게 살 가능성을 제공하였다. 혈우병 A보다 5배 적게 유포되어 있는 혈우병 B는 비-기능성 또는 상실된 인자 IX에 의해 야기되고, 혈장 유래의 인자 IX 농축물 또는 인자 IX의 재조합체 형태로 치료된다.
혈우병에 대한 치료요법의 목표는 출혈을 치료하거나 예방함으로써 장애 관절 및 조직 손상을 감소시키고 삶의 질(QoL)을 향상시키는 것이다. 혈우병 A 및 혈우병 B 둘 다에서, 상기 질환 치료시 가장 심각한 의료 문제는 대체 인자들에 대한 억제성 동종항체(alloantibody)의 생성이다. 모든 혈우병 A 환자의 30% 이하가 인자 VIII에 대한 억제성 항체를 발달시킨다. 인자 IX에 대한 억제성 항체는 면역 내성 유도 치료요법에 덜 민감하고 FIX에 결합시 알레르기 반응을 유발할 잠재력이 보다 높으므로 이들은 보다 적은 정도이지만 보다 심각한 결과를 발생시킨다. FVIII 또는 FIX에 대해 억제성 항체(특히 고역가 억제제)를 발달시킨 혈우병 A(FVIII 결핍) 또는 혈우병 B(FIX 결핍)를 지닌 환자에 대한 (억제제 존재 하의 선천적 혈우병, CHwI) 치료는 인자 VIII 또는 IX를 이용한 정상적 대체가 효과적이지 않으므로 시도할 만하다.
인자 VIII 또는 FIX 활성 또는 기능을 억제하는 자가항체(autoantibody)의 형성을 유도하는 인자 VIII 또는 인자 IX에 대한 다른 면역 반응은 각각 후천적 혈우병 A 또는 후천적 혈우병 B로서 나타낸다. 이러한 병태는 보통 인자 VIII 또는 인자 IX의 임의의 결핍을 갖지 않는 환자에서 발생한다. 후천적 혈우병은 백만 인구당 0.2 내지 1.0명의 연간 발생률로 드문 병태이다. 대다수의 경우는 인자 VIII에 대한 자가항체로 인한 것이고, 단지 몇몇 경우의 후천적 혈우병 B만이 보고되어 있다. 자가항체는 주로, 응혈 인자에 결합하여 이들의 활성화 또는 기능을 부분적으로 또는 완전하게 중화시키거나 이들의 청소(clearance)를 가속화시키는 IgG4 항체이다. 이는 높은 비율의 이환된 환자들에서 생명을 위협하는 출혈을 초래한다. 흔한 출혈 부위는, 관절 및 근육에서의 출혈이 우세한 유전적 혈우병을 지닌 환자와는 대조적으로 피부, 점막, 근육 및 후복막이다. CHwI와 유사하게, 후천적 혈우병은 출혈 에피소드를 제어하기 위해 활성화된 프로트롬빈 복합 농축물 또는 재조합체 활성화된 인자 VII(NovoSeven®, Novo Nordisk)로 치료할 수 있다.
응혈의 현재 모델은 응혈의 생리학적 촉발(trigger)이, 보통 혈관구조 외부에 위치하는 TF 발현 세포의 표면 상의 조직 인자(TF)와 인자 VIIa(FVIIa) 사이의 복합체의 형성임을 나타낸다. 이는, 궁극적으로 소정 트롬빈을 생성시키는 인자 IX 및 인자 X의 활성화를 유도한다. 양의 피드백 루프(positive feedback loop)에서, 트롬빈은 소위 응혈 캐스케이드(cascade)의 "내인성(intrinsic)" 아암(arm)인 인자 VIII 및 인자 IX를 활성화하고, 따라서, 완전 지혈을 달성하기 위한 완전 트롬빈 버스트(burst)의 생성에 필요한 인자 Xa의 생성이 증폭된다. 초생리학적(supraphysiological) 농도의 인자 VIIa를 투여함으로써 인자 VIIIa 및 인자 Ixa에 대한 요구를 우회시켜 지혈이 달성됨이 밝혀졌다. 인자 VII에 관한 cDNA의 클로닝(US 4,784,950)은 활성화된 인자 VII를 약제로서 개발하는 것을 가능하게 하였다. 인자 VIIa는 1988년에 처음으로 성공적으로 투여되었다.
FVII는 약 50kDa의 분자량을 갖는 단일쇄 당단백질이고, 이는 간 세포에 의해 혈류에 406개 아미노산의 불활성 지모겐(zymogen)으로서 분비된다. 이는 상기 단백질의 N-말단 Gla-도메인에 위치하는 10개의 γ-카르복시-글루탐산 잔기(위치 6, 7, 14, 16, 19, 20, 25, 56, 29, 및 35)를 함유한다. Gla 잔기는 이들의 생합성을 위해 비타민 K를 필요로 한다. 2개의 표피 성장 인자 도메인, 이어서, 트립신-형 세린 프로테아제 도메인은 Gla 도메인의 C-말단에 위치한다. FVII의 추가의 번역후 변형은 하이드록실화(Asp 63), N-형(Asn145 및 Asn322) 및 O-형 글리코실화(Ser52 및 Ser60)를 포함한다.
FVII는 Arg152-Ile153에서의 단일 펩타이드 결합의 단백질 가수분해에 의해 이의 활성형 인자 VIIa로 전환되고, 이는, 1개의 디설파이드 가교에 의해 함께 고정되는 2개의 폴리펩타이드 쇄들, N-말단 경쇄(24kDa) 및 C-말단 중쇄(28kDa)의 형성을 유도한다. 다른 비타민 K-의존적 응혈 인자와는 대조적으로, 이들 다른 비타민-K 의존적 응혈 인자의 활성화 동안 절단되는 활성화 펩타이드는 FVII에 관해서 기술되어 있지 않았다. Arg152-Ile153 절단 부위 및 몇몇의 아미노산 다운스트림(downstream)은 다른 비타민 K-의존적 폴리펩타이드의 활성화 절단 부위와의 상동성을 보여준다.
Ile153과 Asp343 사이의 활성화 절단 후 염 가교의 형성은 인자 VIIa의 활성 입체구조(active conformation)를 수득하기 위해 필수적이다. 인자 VII의 활성화 절단은 인자 Xa, 인자 XIIa, 인자 IXa, 인자 VIIa, 인자 7 활성화 프로테아제(FSAP) 및 트롬빈에 의해 시험관내에서 달성될 수 있다. 문헌[Mollerup et al., 1995 (Biotechnol. Bioeng. 48:501-505)]은 몇몇의 절단은 또한 Arg290 및 또는 Arg315의 중쇄에서 발생함을 보고하였다.
NovoSeven®(Novo Nordisk)은 CHwI에서의 출혈을 치료하기 위해 미국 및 유럽 둘 다에서 승인된 재조합체 인자 VIIa 생성물이다(Auerswald G and Morfini M, 2010, JCD; 2:(1): 1-8). 그러나, NovoSeven®은 매우 짧은 반감기(비-출혈 상태에서 2.89시간 및 출혈 에피소드에서 2.30시간)를 가지므로 급성 출혈 에피소드의 초기 치료 동안에는 rFVIIa를 2시간 간격으로 주사하는 것이 권고된다(Brackmann H-H, et al., 2000 (Blood Coagulation and Fibrinolysis. 11(suppl 1):S39-S44).
rFVIIa의 임상학적 사용은 이의 극도로 짧은 반감기에 의해 방해되어 왔다. 빈번한 정맥내(IV) 주사에 대한 필요성은 환자 및 이들의 장애를 치료하는 의사에게 유의한 부담을 갖는다. 특히, 보다 어린 아이들의 경우, 이러한 용법은 (항상은 아니지만) 종종 감염성 합병증을 피하고 라인(line) 내의 혈병 발달을 방지하기 위해 극도로 청결하게 유지되어야만 하는 정맥 접근 장치(venous access device)의 삽입을 필요로 한다. 이러한 장치과 관련된 위험 및 이환율(morbidity)은 CHwI를 지닌 몇몇의 매우 어린 아이들이 적절한 케어(care)를 받는 것을 막을 수 있다.
rFVIIa를 CHwI에 대한 예방학적 제제로서 사용하기 위한 몇몇의 시도가 이루어져 왔다(Bianco RP, et al., 2010. Medicina (Buenos Aires). 70: 209-214; Auerswald G and Morfini M, 2010. JCD. 2(1):1-8). 연장된 반감기 및 보다 우수한 회수율을 갖는 FVIIa 생성물은 환자가 보다 적은 주사로 적절한 지혈을 달성하는 것을 가능하게 할 것이다. 예방의 다수의 이점들 중 하나는 감소된 연간 관절 출혈 수이고, 그 결과로 감소된 무능성(crippling) 관절 질환의 발생률이다. FVIIa의 반감기 연장된 버젼을 제공하기 위한 각종 연구가 실행되어 왔다(문헌[WO2004/101740, WO2007/090584, WO2007/022512, WO2010/091122 및 WO2011/092242]을 참조한다).
WO2007/090584는 인자 VII 및 인자 VIIa 알부민 링크된 폴리펩타이드에 관한 것이다. 이들 알부민 융합은 인자 VII/FVIIa 생물학적 활성을 보유하는 것으로 밝혀졌고, 생체내 인자 VII/VIIa의 기능성 혈장 반감기의 유의한 연장을 나타냈다. US2014/0004095는 또한 FVIIa-알부민 융합 단백질에 관한 것이다.
문헌[Ljung R, et al., 2013 (Journal of Thrombosis and Haemostasis. 11:1260-1268)]은, 글리코페길화된(glycoPEGylated) 재조합체 인자 VIIa(rFVIIa)에 비하여 연장된 반감기를 갖는 40K rFVIIa 우회제(bypassing agent)(N7-FP)의 다중 용량은 CHwI를 지닌 환자에서의 내성이 우수하였고, 심각한 부작용(adverse effect)이 관찰되지 않았음을 보여주었다. 그러나, 출혈 사건 수의 전체적 감소가 나타났지만, 용량-반응 관계는 측정될 수 없었고, 즉, 고용량의 효능은 최저 용량과 구별될 수 없었고, 출혈 사건은 모든 시험된 용량에서 계속해서 발생하였다. 결과적으로, 억제제 환자의 예방에 있어서 N7-GP의 임상학적 개발은 중단되었다.
문헌[Mahlangu JN, et al., 2012 (Journal of Thrombosis and Haemostasis. 10:773-780)]은, 높은 전응혈(procoagulant) 활성 및 보다 긴 작용을 위해 개발된 변이체 사람 재조합체 인자 VIIa 변이체(BAY 86-6150)의 단일 용량은 억제제 존재 또는 부재 하에 중간 정도 또는 중증의 혈우병 A 또는 B를 갖는 비-출혈 남성에서의 안전성 우려를 나타내지 않았음을 공개하였다. BAY 86-6150의 반감기는 rFVIIa에 대한 반감기보다 더 긴 5 내지 7시간이었다. 그러나, 페이즈 II/III 시험에서 변이체 rFVIIa에 대한 중화 항체가 검출되었으므로 상기 시험을 중단하였다.
FVIIa 폴리펩타이드는 또한 정상 응혈 시스템을 지닌 대상체에서의 수술 전후(perioperative) 및 외상성 실혈과 관련된 출혈을 치료하기 위한 치료요법으로서 사용할 수 있다. 예를 들면, FVIIa 폴리펩타이드는, 응혈을 촉진시키고 외상 및 수술과 관련된 실혈을 감소시키고 추가로 수혈에 대한 요건을 감소시키기 위해 환자에게 투여할 수 있다.
FVIIa 폴리펩타이드는 또한 외상성 손상의 결과로서 출혈을 갖는 대상체에서 응혈을 촉진시키고 실혈을 예방하기 위해 사용될 수 있다. 이들 환자는 선천적 또는 후천적 혈우병을 가질 수 있거나 갖지 않을 수 있다. 그러나, 중증 외상에서 지혈을 지시하기 위한 부가물로서의 rFVIIa의 효능 및 안전성을 평가하는 페이즈 3 임상 시험은 조기에 종료되었다(Hauser CJ, et al., 2010. The Journal of TRAUMA® Injury, Infection, and Critical Care. 69(3):489-500).
반감기 연장된 FVIIa 변이체를 이용한 유효한 투약 용법에 대한 요구가 지속되고 있고, 특히, 이러한 변이체를 사용하는 예방학적 투약 용법은 매우 이로울 것이다.
본 발명은, 대상체에서의 출혈을 예방하고("예방학적 치료"), 외상 후를 포함하는 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하고("온-디맨드 치료"), 또한 선천적 또는 후천적 출혈 장애를 갖거나 갖지 않는 환자에서의 수술 동안 또는 수술 후 출혈 에피소드를 예방하는데 사용하기 위한, FVIIa 부분 및 반감기 증진 모이어티(HLEM: half-life enhancing moiety)(예를 들면, rFIVVa-알부민)를 포함하는 반감기 연장된 인자 VIIa(FVIIa)를 이용한 투약 용법에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 반감기 연장된 FVIIa를 이용한 예방학적 치료에 관한 것이다. 이러한 예방학적 치료는 환자의 불편감을 완화시키고 요구되는 전문 의료진에게의 방문 횟수를 감소시킨다. 이들 이점은 환자 수용 상태(patient compliance)에 긍정적 영향을 미칠 것이고, 따라서, 혈우병에 대한 예방학적 치료요법의 유효성에도 긍정적 영향을 미칠 것이다. 효과적인 예방은 연간 감소된 수의 관절 출혈을 초래할 수 있고, 결과적으로 무능성 관절 질환의 발생률을 감소시키고/시키거나 무능성 관절 질환의 개시를 지연시킬 수 있다.
본 발명의 요약
본 발명의 중요한 양상은 반감기 연장된 FVIIa 단백질을 이용한 출혈의 예방학적 치료를 위한 용법을 제공하는 것이다.
본 발명은, 대상체에서의 출혈의 예방 방법("예방학적 치료")에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM: half-life enhancing moiety)
를 포함하는 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 매일 적어도 1회의 투약 간격으로 혈액의 ml당 적어도 약 30 IU의 Cmax를 유도하는 용량으로 투여되고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 인자 VIIa(FVIIa) 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 160 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 35 내지 130 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 40 내지 105 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 46 내지 92 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 70 IU의 Cmax를 유도한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 36 내지 56 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 41 내지 51의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 70 내지 110 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 80 내지 105 IU의 Cmax를 유도한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 82 내지 102 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 87 내지 97 IU의 Cmax를 유도한다.
본 발명은 또한 대상체에서의 출혈을 예방하는 방법("예방학적 치료")에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서,
대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 매일 적어도 1회의 투약 간격으로 약 200 내지 800㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 300 내지 700㎍/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 320 내지 650㎍/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 310 내지 330㎍/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 630 내지 650㎍/kg이다.
본 발명은 추가로 대상체에서의 출혈을 예방하는 방법("예방학적 치료")에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 매일 적어도 1회의 투약 간격으로 약 1750 내지 8000 IU/kg이고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1800 내지 7000 IU/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2500 내지 6500 IU/kg이다. 추가의 바람직한 실시형태에서, 상기 FVII 부분의 용량은 약 3200 내지 5800 IU/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2800 내지 3200 IU/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 5800 내지 6200 IU/kg이다.
상기 실시형태들 중 임의의 하나에서, 투약 간격은 1 내지 4일마다 1회, 1 내지 3일마다 1회, 바람직하게는 약 2 내지 4일마다 1회 또는 약 2 내지 3일 마다 1회를 포함하는 약 1 내지 5일마다 1회일 수 있다. 투약 간격은 약 격일마다(즉, 2일마다) 1회인 것이 가장 바람직하다.
상기 실시형태에서, 상기 방법은 예방학적 투약 용법을 포함한다.
본 발명은 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법("온-디맨드 치료")에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 혈액의 ml당 적어도 약 30 IU의 Cmax를 유도하는 용량으로 투여되고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 160 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 35 내지 130의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 40 내지 105 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 46 내지 92 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 70 IU의 Cmax를 유도한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 36 내지 56 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 41 내지 51의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 70 내지 110 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 80 내지 105 IU의 Cmax를 유도한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 82 내지 102 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 87 내지 97 IU의 Cmax를 유도한다. 바람직한 실시형태에서, 제1 투여는 환자들의 적어도 30%에서 출혈 정지를 유도한다. 임의로, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 제2 투여는 대상체에게 약 5 내지 10시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 투여된다. 투약 간격은 약 6 내지 8시간인 것이 바람직하다. 바람직한 실시형태에서, 제2 투여는 환자들의 적어도 60%에서 출혈 정지를 유도한다.
본 발명은 또한 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법("온-디맨드 치료")에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 200 내지 800㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 300 내지 700㎍/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 300 내지 700㎍/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 320 내지 650㎍/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 310 내지 330㎍/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 630 내지 650㎍/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 제1 투여는 환자들의 적어도 30%에서 출혈 정지를 유도한다. 임의로, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 제2 투여는 대상체에게 약 5 내지 10시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 투여된다. 투약 간격은 약 6 내지 8시간인 것이 바람직하다. 바람직한 실시형태에서, 제2 투여는 환자들의 적어도 60%에서 출혈 정지를 유도한다.
본 발명은 추가로 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법("온-디맨드 치료")에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1750 내지 8000 IU/kg이고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1800 내지 7000 IU/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2500 내지 6500 IU/kg이다. 추가의 바람직한 실시형태에서, FVIIa 부분의 용량은 약 3200 내지 5800 IU/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2800 내지 3200 IU/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 5800 내지 6200 IU/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 제1 투여는 환자들의 적어도 30%에서 출혈 정지를 유도한다. 임의로, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 제2 투여는 대상체에게 약 5 내지 10시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 투여된다. 투약 간격은 약 6 내지 8시간인 것이 바람직하다. 바람직한 실시형태에서, 제2 투여는 환자들의 적어도 60%에서 출혈 정지를 유도한다.
본 발명은 외상의 결과인 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 혈액의 ml당 적어도 약 30 IU의 Cmax를 유도하는 용량으로 투여되고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 160 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 35 내지 130 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 40 내지 105 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 46 내지 92 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 70 IU의 Cmax를 유도한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 36 내지 56 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 41 내지 51 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 70 내지 110 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 82 내지 102 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 87 내지 97 IU의 Cmax를 유도한다. 바람직한 실시형태에서, 제1 투여는 투여 후 24시간 이내에 적혈구 세포(RBC) 및/또는 신선 동결 혈장(FFP)의 수혈 요건의 적어도 20%의 감소를 유도한다.
본 발명은 또한 외상의 결과인 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 200 내지 800㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 300 내지 700㎍/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 320 내지 650㎍/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 310 내지 330㎍/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 630 내지 650㎍/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 제1 투여는 투여 후 24시간 이내에 수혈 요건(RBC 및/또는 FFP)의 20%의 감소를 유도한다.
본 발명은 추가로 외상의 결과인 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1750 내지 8000 IU/kg이고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1800 내지 7000 IU/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2500 내지 6500 IU/kg이다. 추가의 바람직한 실시형태에서, FVIIa 부분의 용량은 약 3200 내지 5800 IU/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2800 내지 3200 IU/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 5800 내지 6200 IU/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 제1 투여는 투여 후 24시간 이내에 수혈 요건(RBC 및/또는 FFP)의 20%의 감소를 유도한다.
본 발명은 수술 동안 또는 수술 후 대상체에서의 출혈 에피소드를 예방하는 방법에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 수술 전에, 수술 동안 및/또는 수술 후에 혈액의 ml당 적어도 약 30 IU의 Cmax를 유도하는 용량으로 투여되고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 160 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 35 내지 130 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 40 내지 105 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 46 내지 92 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 70 IU의 Cmax를 유도한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 36 내지 56 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 41 내지 51 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 70 내지 110 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 80 내지 105 IU의 Cmax를 유도한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 82 내지 102 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 87 내지 97 IU의 Cmax를 유도한다. 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 약 5 내지 10시간, 바람직하게는 약 6 내지 8시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 재투여될 수 있다. 대안으로, 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 수술 동안 연속적 주입으로 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 수술 동안 또는 수술 후 대상체에서의 출혈 에피소드를 예방하는 방법에서 사용하기 위한,
a) 인자 VIIa(FVIIa) 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 수술 전에, 수술 동안 및/또는 수술 후에 투여되고, 대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 200 내지 800㎍/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 300 내지 700㎍/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 320 내지 650㎍/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 310 내지 330㎍/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 630 내지 650㎍/kg이다. 바람직하게, 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 약 5 내지 10시간, 바람직하게는 약 6 내지 8시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 재투여될 수 있다. 대안으로, 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 수술 동안 연속적 주입으로 사용될 수 있다.
본 발명은 추가로 수술 동안 또는 수술 후 대상체에서의 출혈 에피소드를 예방하는 방법에서 사용하기 위한,
a) FVIIa 부분, 및
b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 수술 전에, 수술 동안 및/또는 수술 후에 투여되고, 대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1750 내지 8000 IU/kg이고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1800 내지 7000 IU/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2500 내지 6500 IU/kg이다. 추가의 바람직한 실시형태에서, FVIIa 부분의 용량은 약 3200 내지 5800 IU/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2800 내지 3200 IU/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 5800 내지 6200 IU/kg이다. 바람직하게, 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 약 5 내지 10시간, 바람직하게는 약 6 내지 8시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 재투여될 수 있다. 대안으로, 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 수술 동안 연속적 주입으로 사용될 수 있다.
바람직한 실시형태에서, 지혈 잠재력은 전체 투약 간격 동안 기저선의 적어도 약 1%, 바람직하게는 적어도 약 2% 초과, 보다 바람직하게는 전체 투약 간격 동안 기저선의 5 내지 15% 초과의 트러프(trough)로 유지된다.
본 발명의 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 약 5시간 초과의 반감기를 갖는 것이 바람직하다.
상기 실시형태들 중 어느 하나에 있어서, 반감기 증진 모이어티(HLEM)는 폴리알킬렌 글리콜 모이어티, 바람직하게는 PEG일 수 있다. 대안으로, 반감기 증진 모이어티(HLEM)는 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)이다. 한 실시형태에서, 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)는 카르복시-말단 펩타이드(CTP)이다. 다른 실시형태에서, 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)는 FcRn 결합 파트너이다. 바람직하게, 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP) FcRn 결합 파트너는 알부민 또는 항원 결합 도메인(예를 들면, Fc) 부재 하의 면역글로불린이다.
가장 바람직하게, 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)는 알부민이다. 이러한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 적어도 약 500㎍/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 500 내지 2500㎍/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 750 내지 2000㎍/kg이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1000 내지 1500㎍/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1100 내지 1600㎍/kg이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1200 내지 1500㎍/kg이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1300 내지 1500㎍/kg이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1400 내지 1500㎍/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 740 내지 760㎍/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1490 내지 1510㎍/kg이다. 대상체에서의 출혈을 예방하는 방법("예방학적 치료")에서 사용하기 위해, 투약 간격은 1 내지 4일마다 1회, 1 내지 3일마다 1회, 바람직하게는 약 2 내지 4일마다 1회 또는 약 2 내지 3일 마다 1회를 포함하는 약 1 내지 5일마다 1회일 수 있고, 약 격일마다(즉, 2일마다) 1회인 것이 가장 바람직하다. 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법("온-디맨드 치료")에서 사용하기 위해, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 제2 투여는 대상체에게 약 5 내지 10시간, 바람직하게는 약 6 내지 8시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 투여될 수 있다. 수술 동안 또는 수술 후에 대상체에서의 출혈 에피소드를 예방하는 방법에 사용하기 위해, 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 약 5 내지 10시간, 바람직하게는 약 6 내지 8시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 재투여될 수 있다.
상기 논의된 바와 같이, FVIIa 변이체의 투여에 관한 치료 구간을 연장시키는 것은 특히 이점일 수 있다. 따라서, 다른 양상에서, 본 발명은 대상체에서의 출혈을 예방하는 방법에서 약 2 내지 4일마다 1회의 투약 간격으로 사용하기 위한,
a) FVIIa 부분, 및
b) 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)
를 포함하는 반감기 연장된 인자 VIIa(FVIIa) 단백질에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)는 카르복시-말단 펩타이드(CTP)이다. 다른 실시형태에서, 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)는 FcRn 결합 파트너이다. 바람직하게, 반감기 증진 폴리펩타이드(HELP) FcRn 결합 파트너는 알부민 또는 항원 결합 도메인(예를 들면, Fc) 부재 하의 면역글로불린이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)는 알부민이다. 투약 간격은 1 내지 4일마다 1회, 1 내지 3일마다 1회를 포함하는 약 1 내지 5일마다 1회일 수 있다. 바람직하게, 연장된 투약 간격은 약 2 내지 4일마다 1회 또는 약 2 내지 3일마다 1회이다. 투약 간격은 약 격일마다 1회(즉, 2일마다 1회)인 것이 가장 바람직하다. 이러한 실시형태에서, 상기 방법은 예방학적 투약 용법을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 목적을 위해, 반감기 연장된 FVIIa 단백질이 투여되는 바람직한 대상체는 사람이다. 혈우병 A 또는 혈우병 B를 앓고 있는 사람, 특히 FVIII 및/또는 FIX에 대한 억제제(항체)를 발달시킨 혈우병 A 또는 혈우병 B 환자(즉, 억제제 존재 하의 선천적 혈우병, CHwI)가 특히 바람직하다. 다른 바람직한 실시형태에서, 상기 사람은 후천적 혈우병을 앓고 있다. 후천적 혈우병은 후천적 혈우병 A 또는 B일 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 상기 사람은 유전적 인자 VII 결핍을 앓고 있다. 특히 바람직한 실시형태에서, 용량은 정맥내 투여되어야 한다.
본 발명의 치료 방법들 중 임의의 것에서, 상기 대상체는 FVIII 및/또는 FIX에 대한 억제성 항체를 갖는 것이 바람직하다. 상기 대상체는 억제제 존재 하의 선천적 혈우병(CHwI)을 갖는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 반감기 연장된 FVIIa의 사용은 특히 이러한 환자들에서 이롭다.
특히, 외상 치료에 있어서, 대상체가 선천적 또는 후천적 출혈 장애를 갖는 것이 요구되지 않는다. 외상 치료에 관해서, 본 발명은 기존에 존재하는 출혈 장애를 갖지 않는 환자, 예를 들면, 자동차 사고 피해자 또는 전투에서 부상을 입은 군인에게 반감기 연장된 FVIIa 단백질을 투여함을 고려한다.
본 발명의 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 바람직하게는 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는다. 볼드체 서열에서 밑줄 그어진 아미노산 서열 RI는 FVII가 FVIIa(디설파이드-가교에 의해 여전히 함께 고정되어 있는 분자)로 활성화될 때 아미노산 R 뒤에서 절단된다. FVIIa 부분(볼드체)에는 SSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGS(31 aa 가요성 링커이다)가 이어지고, 이어서, DAHHK 내지 사람 알부민(전장)에 의한 C-말단이 이어진다.
Figure pct00001
대안으로, 융합 단백질의 서열은 서열번호 1에 제시된 서열과 적어도 70%의 동일성을 갖는다. 융합 단백질의 서열은 서열번호 1에 제시된 서열과 적어도 75%의 동일성을 가질 수 있다. 융합 단백질의 서열은 서열번호 1에 제시된 서열과 적어도 80%의 백분율 동일성을 가질 수 있다. 융합 단백질의 서열은 서열번호 1에 제시된 서열과 적어도 85%의 백분율 동일성을 가질 수 있다. 융합 단백질의 서열은 서열번호 1에 제시된 서열과 적어도 90%의 백분율 동일성을 가질 수 있다. 융합 단백질의 서열은 서열번호 1에 제시된 서열과 적어도 95%의 백분율 동일성을 가질 수 있다. 융합 단백질의 서열은 서열번호 1에 제시된 서열과 적어도 98%의 백분율 동일성을 가질 수 있다. 융합 단백질의 서열은 서열번호 1에 제시된 서열과 적어도 99%의 서열 동일성을 가질 수 있다.
도 1: 연구에 걸친 연구 참가자들의 플로우(flow) 및 배정(allocation)을 보여주는 CONSORT 다이아그램.
도 2: 투약 그룹당 시간에 따른 rVIIa-FP를 투여받은 대상체에서의 기저선 조정된 FVIIa 혈장 수준을 보여주는 도면.
도 3: 혈액희석, 치료, 실험적 신장 외상 및 지혈 효과의 평가를 위한 연구 절차. 약어: HES, 하이드록시에틸 전분; rVIIa-FP(CSL689(서열번호 1)), 활성화된 인자 VIIa를 사람 알부민과 링크하는 융합 단백질; rFVIIa(NovoSeven®), 활성화된 재조합 인자 VII.
도 4: 염수(양성 대조군), CSL689(서열번호 1)(rVIIa-FP) 또는 NovoSeven®(rFVIIa)으로의 치료 후 혈액희석된 토끼에서의 표준화된 신장 손상 후 전체 실혈.
도 5: 염수(양성 대조군), CSL689(서열번호 1)(rVIIa-FP) 또는 NovoSeven®(rFVIIa)으로의 치료 후 혈액희석된 토끼에서의 표준화된 신장 손상 후 지혈까지의 시간.
본 발명은 바람직하게는 HLEP 알부민을 포함하는 반감기 연장된 FVIIa 단백질에 관한 예방학적 "온-디맨드" 및 외과적 투약 용법을 제공하고, 여기서, 인자 VIIa(FVIIa) 부분은 31개 아미노산 폴리 글리신-세린(GS) 절단불가능한 펩타이드 링커를 통해 알부민에 연결되어 있다. 투약 간격은 매일, 예를 들면, 격일마다 적어도 1회일 수 있지만, 이전에 계획된 것보다 더 긴 기간, 예를 들면, 3, 4 또는 5일마다 1회의 예방학적 투약이 달성될 수 있다.
다른 공지의 FVIIa 생성물과 비교하여 보다 긴 반감기 및 연장된 생물학적 활성의 반감기 연장된 FVIIa 단백질(예를 들면, rVIIa-알부민)은 rFVIIa(예를 들면, NovoSeven®)에 대해 이전 당해 분야에 의해 제안된 것보다 유의하게 더 긴 투약 간격으로의 혈우병의 예방학적 치료를 가능하게 한다.
CSL689(서열번호 1)(본원에 "rVIIa-알부민" 또는 "rVIIa-FP"로서도 나타냄)는, 31개 아미노산 폴리 글리신-세린(GS) 링커 펩타이드에 의해 사람 알부민에 링크된 활성화된 형태(FVIIa)로의 사람 응혈 인자 VII(FVII)를 포함하는 정제된 재조합 단백질이다. 평가되어 온 몇몇의 다른 분자들과는 달리, 이는 근본적으로 사람 알부민에의 절단불가능한 링커를 통해 융합된 야생형 FVIIa이도록, FVIIa의 효력을 증가시키거나 FVIIa의 반감기를 연장시키도록 교환된 아미노산들은 존재하지 않았다. 와파린으로 항응혈처리된(anticoagulated) 건강한 성인 남성 대상체에서의 CSL689의 단일 용량을 실험한 페이즈 I 연구를 완료하였다(Golor G, et al., 2013. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 11:1977-1985). 그 결과는 FVIIa의 반감기 및 생물학적 활성 둘 다 연장됨을 입증한다. 이는 6.1 내지 9.7h의 연장된(3 내지 4배 증가된) 반감기를 갖는다.
본 발명의 기술적 이점은 반감기 연장된 FVIIa 단백질(예를 들면, rVIIa-알부민/rVIIa-FP)가 다른 공지의 FVIIa 생성물보다 더 긴 반감기 및 연장된 생물학적 활성을 갖는다는 점이다. 이는 놀랍게도 rFVIIa에 대해 이전의 당해 분야에 의해 제안된 것보다 유의하게 더 긴 투약 간격으로의 혈우병의 예방 및 치료를 가능하게 한다. 환자에서 동일한 FVIIa 피크(peak) 및 트러프 활성 수준을 달성하기 위해 덜 빈번한 투여가 요구된다.
바람직한 실시형태에서, 지혈 잠재력은 전체 투약 간격에 대해 기저선 위 적어도 약 0.5%, 또는 적어도 약 1%, 또는 적어도 약 2%, 또는 적어도 약 3%, 또는 적어도 약 4%, 바람직하게는 전체 투약 간격에 대해 기저선 위 5 내지 15%의 트러프로 유지된다.
향상된 특성의 반감기 연장된 FVIIa는 또한 외상 후 rFVIIa(NovoSeven®)와 비교한 "온 디맨드 치료"의 효능을 향상시킨다. 이들 환자는 선천적 또는 후천적 출혈 장애를 갖거나 갖지 않을 수 있다. 이러한 이점은 외상의 토끼 모델에서의 실험에 의해 입증되었다(실시예 3 참조).
향상된 특성의 반감기 연장된 FVIIa는 또한 rFVIIa(NovoSeven®)와 비교한 후천적 혈우병의 치료에 관한 효능을 향상시킨다. 이는 원숭이 모델에서의 실험에 의해 시사된다(실시예 4 참조). 본원에 제공된 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 보다 큰 효능으로, 보다 적은 용량으로, 덜 빈번하게 그리고/또는 보다 적은 잠재적 유해 반응으로 외상 후에 또는 후천적 혈우병을 치료하기 위해 투여할 수 있다.
정의
본원에 사용된 "예방학적 치료"는 대상체의 혈장에서의 인자 VIIa 활성의 수준을 증가시키기 위해 시간의 과정에 걸쳐 대상체에게 반감기 연장된 인자 VIIa 단백질을 다중 용량으로 투여함을 의미한다. 바람직하게, 상기 증가된 수준은 자발적 출혈의 발생률을 감소시키거나 예상하지 못한 부상의 경우에 출혈을 예방하기에 충분하다. 예방학적 치료는 출혈 에피소드, 예를 들면, 온-디맨드 치료 하에 기술된 것들을 감소시키거나 예방한다. 예방학적 치료는 고정될 수 있거나, 예를 들면, 환자간 가변성을 보상하기 위해 "투약 간격" 하에 논의되는 바와 같이 개별화될 수 있다.
예방은, 1 IU/dl 초과(1% 초과)의 응혈 인자 수준을 갖는 중간 정도의 혈우병 환자들은 자발적 출혈을 경험하는 일이 거의 없고 관절 기능의 훨씬 더 우수한 보존을 갖는다는 관찰로부터 착안되었다. 따라서, 출혈 및 관절 파괴를 예방하기 위해서, 치료요법의 목표는 근골격 기능을 보존하는 것이다(GUIDELINES FOR THE MANAGEMENT OF HEMOPHILIA, 2nd edition, Prepared by the Treatment Guidelines Working Group, on behalf of the World Federation of Hemophilia (WFH)). 환자에서의 FVIIa 활성을 이용한 예방은 전체 치료 기간 동안 1% 초과의 지혈 잠재력에 상응하여 유지되어야만 한다. 1% 초과의 지혈 잠재력은, 응혈 인자가 없거나 기능적으로 결함이 있거나 또는 응혈 인자에 대해 억제성 항체가 존재하는 응혈 인자의 건강한 사람에서의 정상 수준과 관련되어 있다. 본 발명에서 사용되는 바와 같이, 기능성 FVIII 또는 기능성 FIX의 1%의 잔류 수준 또는 억제성 항체에 의한 환자에서의 정상 FVIII 또는 정상 FIX 활성의 99%의 억제는 1% 지혈 잠재력에 상응할 것이다.
본원에 사용되는 "온-디맨드 치료"는 대상체에서의 출혈 에피소드를 제어하기 위해 반감기 연장된 인자 VIIa 단백질을 투여함을 의미한다. 출혈 에피소드는 자발적으로 발생할 수 있거나 외상의 결과일 수 있다. 대상체는 선천적 또는 후천적 출혈 장애를 가질 수 있거나 갖지 않을 수 있다. 바람직하게, 투여된 반감기 연장된 인자 VIIa 단백질은 출혈을 감소시키기에 충분하다. 출혈을 제어하기 위해 제1 용량과 동등한 용량의 제2 투여 또는 다중 투여가 요구될 수 있다. 온-디맨드 치료는 고정될 수 있거나, 예를 들면, 환자간 가변성을 보상하기 위해 "투약 간격" 하에 논의되는 바와 같이 개별화될 수 있다.
본원에 사용되는 "투약 간격"은 대상체에게 투여되는 다중 용량들 사이에 흐르는 시간의 양을 의미한다. 키메라 FVIIa-HLEM, 예를 들면, FVIIa-HLEP를 이용한 본 발명의 방법에서의 투약 간격은 HLEM, 예를 들면, 알부민(즉, 상기 FVIIa로 이루어진 폴리펩타이드) 부재 하의 상기 인자 VIIa(즉, 상기 FVIIa로 이루어진 폴리펩타이드)의 등가량(IU/kg)에 요구되는 투약 간격보다 적어도 약 1.5 내지 8배 더 길 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 반감기 연장된 인자 VIIa 단백질(예를 들면, rVIIa-알부민/rVIIa-FP) 투여시의 투약 간격은 HLEM, 예를 들면, 알부민 부재 하의 상기 인자 VIIa의 등가량에 요구되는 투약 간격보다 적어도 약 1.5배 내지 8배 더 길 수 있다.
투약 간격은 적어도 매일 1회, 약 1 내지 5일마다 1회, 약 1 내지 4일마다 1회, 약 1 내지 3일마다 1회, 바람직하게는 약 2 내지 4일마다 1회 또는 약 2 내지 3일마다 1회일 수 있다. 특히, 격일마다 1회(즉, 2일마다 1회)의 투약 간격이 고려된다.
대안으로, 투약 간격은 각각의 대상체에 대한 약동학적 데이터 또는 다른 정보에 기초하여 각각의 대상체에 대해 결정된 개별화된 간격일 수 있다. 개별화된 용량/투약 간격 조합은 선행 단락에서 고정화된 간격 용법에 관한 것과 동일할 수 있거나, 상이할 수 있다. 상기 용법은 처음에 고정화된 투약 간격으로 이루어질 수 있고, 이어서, 개별화된 투약 간격으로 변경될 수 있다. 상기 용법은 처음에는 고정된 용량(예를 들면, IU/kg 또는 ㎍/kg) 및 투약 간격으로 이루어질 수 있고, 이어서, 이는 고정된 용량으로 개별화된 투약 간격으로 변경될 수 있다. 상기 용법은 또한 처음에는 고정된 투약 간격 및 용량(예를 들면, IU/kg 또는 ㎍/kg)으로 이루어질 수 있고, 이어서, 동일한 고정화된 투약 간격으로 개별화된 용량으로 변경될 수 있다.
본원에 사용되는 "중앙값 용량(median dose)"은 해당 용량보다 더 높게 사용된 연구 대상체 절반 및 해당 용량보다 더 낮게 사용된 연구 대상체 절반을 의미한다. "평균 용량(mean dose)"은 평균 용량(average dose)(용량들을 모두 합하고 용량들의 총 수로 나눔으로써 계산됨)을 의미한다. 주어진 용량에 관해서, "약"은 당해 표시된 용량의 플러스 또는 마이너스 1, 2, 5, 10, 15 또는 20%를 나타내는 용량을 의미한다. 약 1 내지 5일마다 1회의 투약 간격에 관해서, "약"은 플러스 또는 마이너스 12시간을 의미한다. 약 1 내지 4일마다 1회 또는 약 2 내지 4일마다 1회의 투약 간격에 관해서, "약"은 플러스 또는 마이너스 10시간을 의미한다. 약 1 내지 3일마다 1회 또는 약 2 내지 3일마다 1회의 투약 간격에 관해서, "약"은 플러스 또는 마이너스 8시간을 의미한다. 약 격일마다 1회, 또는 약 매일 1회의 투약 간격에 관해서, "약"은 플러스 또는 마이너스 6시간을 의미한다.
본 발명의 목적을 위해, FVIIa 또는 반감기 연장된 FVIIa 단백질을 투여함의 맥락에서 "반감기"는 Staclot® 검정으로 측정시 혈장에서의 FVIIa의 활성이 절반으로 감소되는데 요구되는 시간의 양으로서 정의된다.
"Cmax"는 Staclot® 검정으로 측정시 FVIIa의 투여 후에 측정되는 최대 혈장 FVIIa 활성으로서 정의된다.
"반감기 연장된"은 재조합체 FVIIa(즉, NovoSeven®)와 비교하여 더 긴 반감기를 갖는 FVIIa 단백질을 말한다.
본 발명의 방법에 사용되는 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 치료학적 용량은 매일 적어도 1회의 투약 간격으로 혈액의 ml당 적어도 약 30 IU의 Cmax를 유도한다. 바람직하게, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 160 IU의 Cmax를 유도한다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 35 내지 130 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 40 내지 105 IU의 Cmax를 유도한다. 매우 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 46 내지 92 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 30 내지 70 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 36 내지 56 IU의 Cmax를 유도한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 41 내지 51 IU의 Cmax를 유도한다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 70 내지 110 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 80 내지 105 IU의 Camx를 유도한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 82 내지 102 IU의 Cmax를 유도한다. 또 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 혈액의 ml당 약 87 내지 97 IU의 Cmax를 유도한다. 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 활성은 Staclot® 검정으로 측정된다.
대안으로, 본 발명의 방법에 사용되는 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 치료학적 용량은 매일 적어도 1회의 투약 간격으로 약 200 내지 800㎍/kg이다. 본 발명의 목적을 위해, ㎍/kg의 용량은 대상체의 체중의 kg당 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 ㎍을 말한다. 바람직하게, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 300 내지 700㎍/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 320 내지 650㎍/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 310 내지 330㎍/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 630 내지 650㎍/kg이다.
추가의 대안으로서, 본 발명의 방법에 사용되는 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 치료학적 용량은 매일 적어도 1회의 투약 간격으로 약 1750 내지 8000 IU/kg이다. 바람직하게, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1800 내지 7000 IU/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2500 내지 6500 IU/kg이다. 추가의 바람직한 실시형태에서, FVIIa 부분의 용량은 약 3200 내지 5800 IU/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 2800 내지 3200 IU/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 5800 내지 6200 IU/kg이다. 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 활성은 Staclot® 검정으로 측정된다.
또한 추가의 대안으로서, 본 발명의 방법에 사용되는, 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)로서 알부민을 포함하는 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 치료학적 용량은 약 500㎍/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 500 내지 2500㎍/kg이다. 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 750 내지 2000㎍/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1000 내지 1500㎍/kg이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1100 내지 1600㎍/kg이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1200 내지 1500㎍/kg이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1300 내지 1500㎍/kg이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1400 내지 1500㎍/kg이다. 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 740 내지 760㎍/kg이다. 다른 보다 바람직한 실시형태에서, 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량은 약 1490 내지 1510㎍/kg이다.
바람직한 용량 및 투약 간격은 하기와 같고: 격일마다 약 1회의 투약 간격으로 혈액의 ml당 약 41 내지 51 IU의 Cmax를 유도하는 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량; 격일마다 약 1회의 투약 간격으로 혈액의 ml당 약 87 내지 97 IU의 Cmax를 유도하는 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 용량; 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량; 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 격일마다 약 1회의 투약 간격으로 310 내지 330㎍/kg이고; 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 격일마다 약 1회의 투약 간격으로 630 내지 650㎍/kg이고; 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 격일마다 약 1회의 투약 간격으로 2800 내지 3200 IU/kg이고; 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 격일마다 약 1회의 투약 간격으로 5800 내지 6200 IU/kg이다.
본 출원에 사용되는 "인자 VII/VIIa"는 비-활성화된 형태(인자 VII) 또는 활성화된 형태(인자 VIIa) 중 어느 하나 또는 이들의 혼합물로 이루어진 치료학적 폴리펩타이드를 의미한다. 상기 정의 이내의 인자 VII/VIIa는, 천연 사람 인자 VII/VIIa의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 이는 또한 약간 변형된 아미노산 서열, 예를 들면, 당해 폴리펩타이드가 인자 VIIa의 생물학적 활성을 실질적으로 보유하는 한, 말단 아미노산 결실 또는 부가를 포함하는 변형된 N-말단 또는 C-말단을 갖는 폴리펩타이드도 포함한다. 상기 정의 이내의 "인자 VII"는 또한 어느 개체에서나 존재하고 발생할 수 있는 천연 대립형질 변이도 포함한다. 상기 정의 이내의 인자 VII는 추가로 FVII/FVIIa의 변이체를 포함한다. 이러한 변이체는 야생형 서열로부터 하나 이상의 아미노산 잔기에 있어서 상이하다. 이러한 차이의 예는 하나 이상의 아미노산 잔기(예를 들면, 1 내지 10개의 아미노산 잔기)에 의한 N- 및/또는 C-말단의 절단, 또는 N- 및/또는 C-말단에의 하나 이상의 추가의 잔기의 부가, 및 보존적 아미노산 치환, 즉, 유사한 특징을 갖는 아미노산들, 예를 들면, (1) 소형 아미노산들, (2) 산성 아미노산들, (3) 극성 아미노산들, (4) 염기성 아미노산들, (5) 소수성 아미노산들, 및 (6) 방향족 아미노산들의 그룹 내에서 수행되는 치환을 포함할 수 있다. 이러한 보존적 치환의 예는 하기 표에 나타낸다.
Figure pct00002
일반적으로 말단 반감기 또는 β-반감기로서 측정되는 본 발명의 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 생체내 반감기는 비-융합 폴리펩타이드의 생체내 반감기보다 보통 적어도 약 25%, 바람직하게는 적어도 약 50%, 보다 바람직하게는 100% 더 높다.
반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 활성은 Staclot®을 이용하여 측정한다. 본원에 사용되는 Staclot® 검정은 Staclot® VIIa-rTF(Diagnostica Stago, France, 참조:
http://www.stago-cn.com/en/products-services/catalogue/reagents/fiche-produit/selection/type-reagents/reference/staclotR-viia-rtf)이다.
문헌[Morissey et al., 1993. Blood. 81:734-744]에 기술된 방법에 기초하여 ELISA에 의해 측정시 인자 VII/VIIa 항원의 100 IU당 국제 단위(IU)로 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 활성화 후 Staclot® 검정으로 활성을 측정한다.
본원에 사용되는 용어 "FVIIa 부분" 또는 "FVII 부분"은 반감기 연장된 FVIIa 또는 FVII 분자의 일부를 의미하고, 이 일부는 전적으로 천연 사람 인자 VII/VIIa, 또는 "FVII/VIIa" 하에 정의된 바와 같은 이들의 변이체의 아미노산 서열로부터 유도되고, 반감기 연장 모이어티로부터 유도되지 않는다. 서열번호 1에서의 비-제한적 예로, "FVIIa 부분"은 위치 1 내지 위치 406(위치 1 및 위치 406 포함) 유래의 폴리펩타이드 쇄이다.
본원에 사용되는 용어 "FVIIa 부분의 용량"은 상기 용량을 투여받는 대상체(예를 들면, 사람)의 체중 kg당 반감기 연장된 FVIIa 분자의 용량에 있어서 "FVII 부분"의 중량을 의미한다. 예를 들면, CSL689(서열번호 1)에 있어서 CSL 689에서의 FVIIa 부분은 51000Da의 분자량을 갖는다. CSL689의 링커 및 알부민은 68.689Da의 분자량을 갖는다. 따라서, CSL689의 FVIIa 부분은 42.6%이다. CSL689의 750㎍/kg의 용량은 FVIIa 부분에 대해 320㎍/kg에 상응하고, CSL689의 1500㎍/kg의 용량은 FVIIa 부분에 대해 640㎍/kg에 상응한다.
야생형 형태의 사람 인자 VIIa의 생체내 기능적 반감기는 사람에서 대략 2시간이다. 본 발명의 인자 VIIa 링크된 알부민 폴리펩타이드의 기능적 반감기는 보통 적어도 약 4시간, 바람직하게는 적어도 약 6시간, 보다 바람직하게는 적어도 약 12시간이다.
본 출원에 사용되는 "반감기 증진 모이어티(HLEM)"는 FVIIa의 반감기를 연장시키는 임의의 모이어티를 의미한다. HLEM은 폴리알킬렌 글리콜 모이어티, 바람직하게는 PEG일 수 있다. 대안으로, HLEM은 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)이다. HLEP는 카르복시-말단 펩타이드(CTP)일 수 있다. 한 실시형태에서, 본 발명의 카르복시 말단 펩타이드(CTP) 펩타이드는 사람 융모막 생식선 자극 호르몬(chorionic gonadotrophin)의 아미노산 위치 112 내지 145 유래의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호 2(SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ)에 제시된 바와 같은, 사람 융모막 생식선 자극 호르몬의 아미노산 위치 118 내지 145 유래의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시형태에서, CTP 서열은 또한 사람 융모막 생식선 자극 호르몬의 위치 112 내지 118 사이의 임의의 위치로부터 시작하여 위치 145에서 종료된다. 몇몇의 실시형태에서, CTP 서열 펩타이드는 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34개 아미노산 길이이고, CTP 아미노산 서열의 위치 112, 113, 114, 115, 116, 117 또는 118에서 시작한다.
대안으로, HLEP는 FcRn 결합 파트너, 예를 들면, 알부민 또는 항원 결합 도메인(예를 들면, Fc) 부재 하의 면역글로불린이다. 본 발명의 바람직한 HLEP는 알부민이다.
본원에 사용되는 "알부민"은 총체적으로 알부민 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열, 또는 알부민의 하나 이상의 기능적 활성(예를 들면, 생물학적 활성)을 갖는 알부민 단편 또는 변이체를 말한다. 특히, "알부민'은 사람 알부민 또는 이의 단편, 특히 성숙한 형태의 사람 알부민을 말한다. 예를 들면, 알부민은 본원에 그 전문이 참조에 의해 포함되는 US2008260755A1에 기술된 서열 또는 이의 변이체를 가질 수 있다. 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 알부민 부분은 HA 서열의 전장을 포함할 수 있거나 치료학적 활성을 안정화시키거나 연장시킬 수 있는 이의 하나 이상의 단편을 포함할 수 있다. 이러한 단편은 10개 또는 그 이상의 아미노산 길이일 수 있거나, HA 서열로부터의 약 15, 20, 25, 30, 50 또는 그 이상의 연속하는 아미노산들을 포함할 수 있거나, HA의 특정 도메인의 일부 또는 전부를 포함할 수 있다.
용어 사람 혈청 알부민(HSA) 및 사람 알부민(HA)은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 용어 "알부민" 및 "혈청 알부민"은 보다 광범위하고, 사람 혈청 알부민(및 이의 단편 및 변이체) 및 다른 종 유래의 알부민(및 이의 단편 및 변이체)을 포함한다. 또한, 알부민 대신에, 제한없이 사람 알파-태아 단백질(WO 2005/024044에 기술됨) 및 이들의 기능성 단편 또는 변이체와 같은 다른 알부민-유사 단백질을 사용할 수 있다.
본 발명의 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 알부민 부분은 천연의 또는 인공의 정상 HA의 변이체일 수 있다. 본 발명의 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 치료학적 폴리펩타이드 부분은 또한 본원에 기술되는 상응하는 치료학적 폴리펩타이드의 변이체일 수 있다. 용어 "변이체"는 보존적 또는 비-보존적, 천연의 또는 인공의 삽입, 결실, 및 치환을 포함하고, 여기서, 이러한 변화는 실질적으로 활성 부위, 또는 본원에 그 전문이 본원에 참조에 의해 포함되는 US2008260755A1에 기술된 치료학적 폴리펩타이드의 치료학적 활성을 부여하는 활성 도메인을 변경시키지 않는다.
IgG 및 IgG-단편은 또한 HLEP 단편이 비-융합된 응혈 인자와 비교하여 적어도 25%의 반감기 연장을 제공하는 한 HLEP로서 사용될 수 있다. 치료학적 폴리펩타이드 부분은 링커, 바람직하게는 절단불가능한 링커를 통해 IgG 또는 IgG 단편에 연결될 수 있다.
본 발명의 관점에서 "응혈-관련 검정"은 응혈 프로세스와의 관련성이 있는 효소적 활성 또는 보조인자 활성을 측정하거나 내인적 또는 외인적 응혈 캐스케이드 중 어느 하나가 활성화되었음을 측정할 수 있는 임의의 검정이다. 따라서, "응혈-관련" 검정은 aPTT, PT, 또는 트롬빈 생성 검정과 같은 직접적 응혈 검정일 수 있다. 그러나, 예를 들면, 특정 응혈 인자에 대해 적용되는 비색 검정과 같은 다른 검정도 포함된다. 이러한 검정 또는 상응하는 시약에 관한 예로는 상응하는 응혈 인자 결핍 혈장(Dade Behring)을 이용한 Pathromtin® SL(aPTT 검정, Dade Behring) 또는 Thromborel® S(프로트롬빈 시간 검정, Dade Behring), 예를 들면, 응혈 인자 결핍 혈장을 이용한 트롬빈 생성 검정 키트(Technoclone, Thrombinoscope), Biophen 인자 IX(Hyphen BioMed), Staclot® FVIIa-rTF(Roche Diagnostics GmbH), Coatest® 인자 VIII:C/4(Chromogenix)와 같은 비색 검정이 있다.
비-활성화된 응혈 인자에 과해 높은 생체내 회복 및 긴 반감기를 갖는 것이 바람직할 수 있지만, 전혈전성 위험(prothrombotic risk)을 회피하기 위해서 이의 활성화 또는 이의 보조-인자의 활성화 후 응혈 인자의 반감기를 제한하는 것이 유리하다. 따라서, 응혈 프로세스가 개시된 후, 활성 응혈 인자의 반감기는 재차 감소되어야만 한다. 이는 응혈-관련 방식으로 불활성화를 향상시킴으로써 또는 응혈 인자의 제거에 의해 달성될 수 있다.
본 발명에 따른 불활성화는 예를 들면, 응혈 인자 및 상응하는 응혈 인자의 억제제의 복합체 형성에 의해 또는 예를 들면, FVIII 및 FV의 경우에 공지되어 있는 바와 같은 추가의 단백질분해적 절단에 의해 야기될 수 있는 치료학적 폴리펩타이드의 활성의 감소를 의미한다.
활성화된 치료학적 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 불활성화 속도는 예를 들면, 억제제와의 반응에 의해 또는 단백질분해적 불활성화에 의해 활성이 감소하는 속도로서 정의된다. 불활성화 속도는, 활성화된 응혈 인자의 억제제의 생리학적 양의 존재 하에 시간에 따른 이러한 응혈 인자의 몰 특이적 활성에 따라 측정할 수 있다.
대안으로, 불활성화 속도는 동물에게 활성화된 생성물을 투여한 후, 이어서, 활성 및 항원 검정을 이용한 적절한 시간 프레임(frame)에서 혈장 샘플을 시험함으로써 측정할 수 있다.
활성화된 치료학적 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 제거 속도는 사람 또는 동물의 순환계로부터 폴리펩타이드가 제거되는 속도로서 정의된다. 제거 속도는 정맥내 투여 후 활성화된 치료학적 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 약동학을 측정함으로써 결정될 수 있다. 항원 검정을 이용하여, 순환계로부터의 직접적 제거에 의한 제거를 측정할 수 있다. 또한, 활성 검정을 이용하여, 특정 제거 및 불활성화 속도를 측정할 수 있다.
본원에 사용되는 "후천적 혈우병"은 보통 성인기에, 각각 후천적 혈우병 A 또는 B를 초래하는, FVIII 또는 FIX의 이전 결핍증을 앓고 있지 않은 대상체에서 FVIII 또는 FIX의 활성 또는 기능을 억제하거나 이들의 청소를 가속화시키는 자가항체의 생산으로부터 발병하는 혈우병의 한 유형을 말한다.
수술 전후 출혈을 감소시키기 위한 치료요법으로서 반감기 연장된 FVII가 사용될 수 있는 수술 절차의 비-제한적 예로는 심장 판막 수술(Al Douri et al., 2000. Blood Coag Fibrinol. 11:S121-S127), 대동맥 판막 치환술(Kastrup et al., 2002. Ann Thorac Surg. 74:910-912), 재발성 혈관주위세포종의 절제술(Gerlach et al., 2002. J Neurosurg. 96:946-948), 암 수술(Sajdak et al., 2002. Eur J Gynaecol Oncol. 23:325-326), 및 십이지장 궤양에 대한 수술(Vlot et al., 2000. Am J Med. 108:421-423)이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 수술을 경험하는 대상체에게는 수술 부위의 응혈을 향상시킴으로써 수술 전후 실혈을 감소시키기 위해 초기 수술 페이즈에 치료학적 양의 FVII의 정맥내 볼루스가 제공될 수 있다. 반감기 연장된 FVIIa 폴리펩타이드는, 다른 유형의 수술을 경험하는 정상 응혈을 지닌 환자에게 투여하여 신속한 지혈을 이루어 실혈을 예방할 수 있다. 반감기 연장된 FVIIa 단백질을 이용한 치료는 수술 부위에서의 지혈을 촉진시키고 실혈을 감소시키거나 예방함로써 수혈에 대한 필요성을 감소시키거나 폐지할 수 있다.
"외상"은 외인적 제제(extrinsic agent)에 의한 살아 있는 조직에의 부상으로서 정의된다. 외상은 압박 외상(blunt trauma)(체내 압박, 장기 손상 및 체내 출혈을 초래함) 또는 침입성 외상(penetrative trauma)(신체에 침입하여 조직, 혈관 및 장기를 파괴하는 외인적 제제의 결과, 체외 출혈을 초래함) 중 어느 하나로서 분류된다. 외상은 차량 사고(압박 및/또는 침입성 외상을 야기함), 총상(침입성 외상을 야기함), 자상(침입성 외상을 야기함), 기계 사고(침입성 및/또는 압박 외상을 야기함), 및 상당한 높이로부터의 낙상(침입성 및/또는 압박 외상을 야기함)을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 몇몇의 사건들에 의해 야기될 수 있다. 치료학적 양의 FVIIa의 투여에 의한 치료는 외상 환자에서 응혈을 촉진시켜 실혈을 감소시킬 수 있다. 예를 들면, 외과적 개재(surgical intervention) 이외에도 다량의 실혈을 보이는 총상을 입은 환자에는 응혈이상(coagulopathy) 출혈을 제어하기 위해 FVIIa를 투여할 수 있다. FVIIa를 이용한 응혈 치료요법은 압박 및 침입성 외상을 지닌 환자에서의 실혈 및 출혈을 효과적으로 감소시킬 수 있다(Rizoli et al., 2006. Crit Care. 10:R178).
약제학적 조성물 및 투여 방식
본 발명의 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 투여에 적합한 약제학적 조성물에 포함될 수 있다. 이러한 조성물은 전형적으로 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본원에서 사용되는 "약제학적으로 허용되는 담체"는 약제학적 투여에 적합한, 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 및 등장성 제제 및 흡수 지연제 등을 포함하는 것으로 의도된다. 적합한 담체는 본원에 참조에 의해 포함되는 당해 분야의 표준 참조 서적인 Remigton's Pharmaceutical Sciences의 가장 최신판에 기술되어 있다. 이러한 담체 또는 희석제의 바람직한 예로는 물, 염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 및 5% 사람 혈청 알부민이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 리포솜 및 비-수성 비히클, 예를 들면, 고정유도 사용할 수 있다. 약제학적 활성 물질에 대한 이러한 매질 및 제제의 사용은 당해 분야에 익히 공지되어 있다. 임의의 종래 매질 또는 제제가 활성 화합물과 부적합한 경우를 제외하고는, 조성물 중의 이의 사용이 고려된다. 보충의 활성 화합물도 조성물에 포함될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 의도된 투여 경로와 적합하도록 제형화된다. 투여 경로의 예로는 비경구, 예를 들면, 정맥내, 피내, 피하, 경구(예를 들면, 흡입), 경피(국소); 경점막, 및 직장 투여가 포함된다. 비경구, 피내 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 하기 구성성분들을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예를 들면, 주사용수, 염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항균제, 예를 들면, 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예를 들면, 아스코르브산 또는 중아황산 나트륨; 킬레이팅제, 예를 들면, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA); 완충제, 예를 들면, 아세테이트, 시트레이트, 또는 포스페이트, 및 등장성 조정제, 예를 들면, 염화 나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기; 예를 들면, 수산화 나트륨의 염산으로 조정될 수 있다. 비경구 조제는 앰플, 일회용 시린지, 또는 플라스틱 또는 유리로 이루어진 다중 용량 바이알 내에 밀봉될 수 있다. 정맥내 주사로서의 투여가 바람직한 투여 경로이다.
주사가능한 사용에 적합한 약제학적 조성물로는 멸균 수용액(물 가용성) 또는 분산액 및 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 조제(extemporaneous preparation)를 위한 멸균 분말이 포함된다. 정맥내 투여를 위해, 적합한 담체로는 생리학적 염수, 정균수(bacteriostatic water), Cremophor EL(BASF, Parsippany, N.J.) 또는 포스페이트 완충된 염수(PBS)가 포함된다. 모든 경우에, 당해 조성물은 멸균성이어야만 하고, 용이한 시린지 역량(syringe ability)이 존재하는 정도로 유동성이어야만 한다. 이는 제조 및 보관 조건 하에 안정해야만 하고 미생물, 예를 들면, 세균 및 진균의 오염성 작용에 대해 보존되어야만 한다. 담체는 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들면, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들면, 레시틴과 같은 코팅제의 사용에 의해, 분산제의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 각종 항균제 및 항진균제, 예를 들면, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 및 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 다수의 경우, 당해 조성물에 등장성 제제, 예를 들면, 당, 폴리알콜, 예를 들면, 만니톨, 소르비톨, 염화 나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 실행될 수 있다.
멸균 주사가능한 용액은 필요에 따라 상기 열거된 성분들 중 하나 또는 이들의 조합을 갖는 적절한 용매 중에 활성 화합물(예를 들면, rVIIa-알부민/rVIIa-FP)을 필요량으로 포함시키고, 이어서, 여과 멸균함으로써 조제될 수 있다. 일반적으로, 분산액은, 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터 요구되는 다른 성분들을 함유하는 멸균 비히클에 활성 화합물을 포함시킴으로써 조제된다. 멸균 주사가능한 용액의 조제를 위한 멸균 분말의 경우, 조제 방법은 이전의 멸균 여과된 용액으로부터 활성 성분 + 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 수득하는 진공 건조 및 동결-건조이다.
투여의 용이함 및 용량의 균일성(uniformity)을 위해 용량 단위 형태(dosage unit form)로 약제학적 조성물, 예를 들면, 주사용 조성물을 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용되는 용량 단위 형태는 치료되는 대상체를 위해 단일 용량으로서 적당한 물리적으로 별개의 단위를 말하고; 각각의 단위는 요구되는 약제학적 담체와 함께 원하는 치료학적 효과를 생성시키는 것으로 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 용량 단위 형태에 관한 설명은 활성 화합물의 고유한 특징들 및 달성되는 특정 치료학적 효과에 의해 설명되거나 이들에 직접적으로 의존한다.
약제학적 조성물은 컨테이너, 팩(pack) 또는 디스펜서(dispenser) 내에 투여를 위한 지침서와 함께 포함될 수 있다.
하기에 본 발명을 상세하게 기술하면서, 본 발명은 하기 실시예를 참조하여 보다 명확하게 이해될 것이고, 실시예는 본 발명의 설명 목적만을 위해 포함되고 본 발명을 제한하도록 의도되는 것은 아니다. 본원에 나타낸 모든 특허 및 출판물은 명백히 참조에 의해 포함된다.
실시예
하기 실시예들은 재조합 FVIIa(NovoSeven®) 및 알부민을 포함하는, "rVIIa-FP" 또는 "CSL689"로서 알려져 있는 반감기 연장된 인자 VIIa 단백질을 이용하여 수행하였다. 이러한 단백질(rVIIa-FP/CSL689)은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는다.
실시예 1 - 와파린으로 항응혈처리된 40명의 건강한 남성 대상체에서의 반감기 연장된 인자 VIIa 단백질의 단일 용량, 위약-조절된, 용량-증가 안전성 및 PK 연구
18세 내지 35세 사이의 연령의 총 103명의 건강한 남성 참가자들을 스크리닝하여 40명의 대상체들을 본 연구에 등록하였다. 스크리닝 실패의 가장 관련 있는 이유는 실험실 안전성 파라미터, 특히, 상승된 호모시스테인, 감소된 단백질 S 및 상승된 LFT 내에서 정의된 포함/제외 기준으로부터의 편차, 또는 페이즈에서 와파린 실행 동안 안정한 INR에 도달하는 것에 대한 실패였다. 연구에 걸친 연구 대상자들의 플로우는 도 1에 나타낸다. 대상체 특징은 표 2에 설명된다.
Figure pct00003
안전성 평가(1차 종점):
rVIIa-FP의 국부 내성 모든 대상체에서 양호하였다. 총 34명의 AE가 관찰되었고, SAE는 관찰되지 않았다. 위약 그룹에서는 3명의 AE(두통, 주입 부위 혈종 및 고창(flatulence))가 발생하였다. rVIIa-FP 그룹에서는 임의의 용량 수준에서 특정 축적(specific accumulation)을 갖지 않는 31명의 AE가 발생하였다. 4명을 제외한 모든 AE는 경미하였고; 4명의 AE는 중간 정도로 보고되었다(비인두염 [2x], 인대 염좌 및 전완부에서의 몇몇의 혈관지방종의 발생). 1명의 AE(1000㎍/kg 주사 후 주입 부위에서의 통증)는 rVIIa-FP와 관련되어 있는 것으로 판단되었다. 연구 약물 투여 전, 연구 약물 투여 후 8일째, 또는 28일째에 항-약물 항체 또는 억제제에 대해 양성으로 시험된 대상체는 없었다.
500㎍/kg의 rVIIa-FP로의 1명의 대상체는 좌측 전완부 및 우측 상완부 상의 몇몇의 피하 결절의 갑작스러운 출현을 보고하였다. 이러한 대상체는 전완부 양쪽 상에 다수의 기존 지방종을 가졌다. 새롭게 보고된 결절은 수동으로 이동가능한 피하 결절이었고, 염증의 징후를 나타내지 않았다. 생검을 수행하였고, 조직학은 각각의 미세혈전을 갖는 모세관 증식에 의해 교차된 지방세포의 결절성 종양을 나타냈다. 이들 결과는 혈관지방종(말초혈관 확장성 림프종)과 일치하고, 이는 해당 연령의 남성에 대해 정상인 것으로 간주된다. 또한, 면역조직화학적 조사는 지방세포에서의 증식 활성(Ki-67)을 나타내지 않았다. 혈관지방종 내의 모세관 증식의 몇몇의 내피 세포에 핵 발현이 존재하였다(5% 미만). 이러한 결과는 대상체에 의해 보고되는 바와 같은 갑작스러운 출현을 초래하는 신속한 성장과 일치하지 않는다. rVIIa-FP의 투여와의 관계는 확립되지 않았을 것이다.
모든 AE는, 크기는 감소되었지만 연구 종료시 여전히 검출가능한 혈관지방종을 제외하고는 후유증 없이 해결되었다.
안전성 분석은 혈전색전성 합병증에 특히 주목하였다. 연구 동안 혈전색전성 사건은 관찰되지 않았다. 1명의 대상체(1000㎍/kg 용량으로의 rVIIa-FP를 투여받음)는 주입 부위에서의 통증을 경험하였지만, 이는 혈전성 정맥염 또는 혈전 반응과 관련되어 있지 않았다.
rVIIa-FP의 약동학적 프로파일의 평가(2차 종점):
rVIIa-FP의 주입 전에, FVIIa 활성은, 8.6mU/mL의 기저선 FVIIa 활성을 가졌던 대상체를 제외한 모든 대상체에서 검정의 정량 수준(7.8mU/mL) 미만이었다. PK 파라미터는 표 3에 요약된다.
Figure pct00004
140㎍/kg 내지 1000㎍/kg의 단일 IV 주입 후, FVIIa 활성은 주입 종료 가까이에 최정점이었다(도 2). tmax 중앙값은 용량 수준에 걸쳐 0.267 내지 0.500시간이었고, 이는 대상체의 대략 절반에 대한 주입 종료에 상응하였다. FVIIa 기저선-조정된 평균 Cmax(SD) 값은 용량 7-배 증가에 대해 대략 Cmax 7-배로 용량-비례 방식으로 증가하였다(140㎍/kg 용량에 대한 9240(515)mU/mL 내지 1000㎍/kg 용량에 대한 63520(13515)mU/mL). 따라서, IR은 용량 수준에 걸쳐 상당히 일치하였고, 500㎍/kg 용량 수준에서의 56.35[(mU/mL)/(㎍/kg)] 내지 300㎍/kg 용량 수준에서의 71.58[(mU/mL)/(㎍/kg)]의 범위였다. 이는 rFVIIa의 보고된 거동과 일치하였다(Lindley CM, et al., 1994. Clinical pharmacology and therapeutics. 55(6):638-48).
기저선-조정된 평균 FVIIa AUC0-t는 용량 범위에 걸쳐 용량-비례 방식보다 약간 더 증가하였고, 140㎍/kg 용량에 대한 49546(7109)h*mU/mL 내지 1000㎍/kg 용량에 대한 616638(125522)h*mU/mL이다.
평균 반감기의 각각의 값은 6.1 내지 13.5시간의 범위 내로 기록되었다. 반감기에 대한 CV%는 300㎍/kg 내지 500㎍/kg 용량 그룹에 대해 높았다(각각 92% 및 70%). 이는 이들 용량 그룹 내의 다른 대상체와 비교하여 긴 t1/2을 갖는 각각의 코호트(cohort)의 1명의 대상체로 인한 것이었다. 하위 3개의 용량 그룹의 각각에서의 1명의 대상체에 대해, 제거 속도 상수 및 관련 PK 파라미터들은 기저선 주위의 마지막 몇몇 시점의 변동으로 인하여 추정할 수 없었다. 용량 범위에 걸쳐, 중앙값 t1/2은 6.1 내지 9.7시간 범위로 상당히 일치하였다. 최고 용량(1000㎍/kg)에서 중앙값 t1/2은 8.5시간이었다.
멱법칙(power-law) 모델을 이용한 용량 비례의 평가는 기저선-조정된 Cmax 및 비조정된 Cmax가 140㎍/kg 내지 1000㎍/kg 용량 수준에 걸쳐 용량-비례 방식으로 증가하였음을 보여주었고; 기울기 측정값은 (0.8606 - 1.0095)의 상응하는 95% 신뢰 구간으로 0.9351이었다. 대조적으로, AUC0 -t는 기저선 조정된 기울기 측정값이 (1.1250 - 1.3160)의 상응하는 신뢰 구간으로 1.2205이었으므로 용량-비례 방식보다 더 증가하였다. 따라서, 평균 AUC0-t의 증가는 상응하는 용량 증가와 비교하여 예측된 것보다 22% 더 높았다.
CL은 용량 수준에 걸쳐 일치하였고, 7.62 내지 12.74[mL/h/kg]의 범위였다. 분포 체적(Vss)도 일치하였고, 81.70 내지 97.97[mL/kg]이었다.
실시예 2: 반감기 연장된 인자 VIIa 단백질의 예방학적 투여
디맨드 연구의 CSL689에 참가한 대상체들에게는 예방 시험에의 참가가 제안될 것이다. 예방 시험은 CSL689_2001 연구에 기록된 연간 출혈률과 예방 하의 연간 출혈률을 비교할 것이다. 예방 시험은 하기 표 4에 요약된다.
Figure pct00005
Figure pct00006
CSL689의 특성으로 인하여 1.5mg/kg의 예방학적 용량이 효과적일 수 있음과 투약 간격이 이전에 rVIIa로 달성된 것보다 더 클 수 있음, 예를 들면, 2일마다 1회(즉, 격일마다 1회)일 수 있음이 예측된다. 잠재적으로, 1mg/kg 또는 0.75mg/kg과 같은 보다 낮은 용량도 이러한 예방학적 투약 용법에 효과적일 수 있다.
실시예 3 - 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 희석 응혈이상( dilutional coagulopathy)의 토끼 모델에서의 표준화된 신장 손상(수술 및 외상에 있어서 출혈에 관한 모델) 후 rFVIIa에 비하여 출혈을 보다 효율적으로 제어한다
재료 및 방법
동물
2.0 내지 4.0kg 체중의 암컷 CHB 토끼 3 내지 4개월령(Bauer, Neuental, Germany)을 12h/12h 명암 사이클 하에 21 내지 23℃ 및 50% 상대 습도에서 와이어스틸(wire-steel) 케이지 내에 케이지당 1마리 수용하였다. 동물들에게 임의로 수돗물을 제공하였고, 토끼 펠렛(pellet)(Deukanin®, Deutsche Tiernahrung Cremer GmbH & Co. KG, Dusseldorf, Germany)을 공급하였다. 모든 토끼는 유럽 동물 관리 협약(the European Convention on Animal Care)을 준수하여 관리하였고, 연구는 조직 윤리 위원회(the organizational Ethics Committee)에 의해 승인되었다.
혈액희석
모든 치료는 마취된 동물에서 수행하였다. 마취는 케타민 및 크실라진의 조합물에 의해 유도되었고, 흡입 이소플루란 마취를 통해 유지되었다. 이어서, 동물들을 기관내삽관하였고(intubated) 환기 장치(ventilator)(Heyer Access, Heyer Medical AG, Bad Ems, Germany)에 두었다.
동물들에게, 경동맥으로부터 30mL·kg-1의 혈액의 채혈에 의한 페이즈에서의 혈액희석 및 37℃로 예열된 30mL·kg-1의 하이드록시에틸 전분(HES) 200/0.5(Infukoll 6%, Schwarz Pharma AG, Mannheim, Germany)의 주입을 행하였다(도 3). 해당 절차를 45분째에 반복하였다. 30분째에, 채혈 및 HES 주입의 2회 사이클 사이의 구간 동안, 동물들은, 800xg에서 10분 동안의 원심분리에 의해 채혈된 토끼 전혈로부터, 생리식염수로 세척하고 링거 락테이트에 재현탁시켜 제조된 15mL·kg-1의 회수된(salveged) 적혈구를 외경정맥에 투여하여 투여받았다.
신장 손상
혈액희석의 개시 후 60분째에, 측면 신장 끝에서 15mm 길이 및 5mm 깊이의 메스 절개의 형태로 표준화된 신장 손상을 가하였다(도 3).
치료
동물들은 무작위로 할당되어 신장 절개 손상 직전에 등장성 염수, 0.75mg/kg 또는 1.5mg/kg의 용량으로의 rVIIa-FP(CSL Behring GmbH, Marburg, Germany), 또는 90㎍/kg 또는 180㎍/kg의 용량으로의 rFVIIa(NovoSeven®, Novo Nordisk A/S, Bagsværd, Denmark)의 i.v. 투여를 받았다(도 3). 실험 그룹은 각각 5마리의 토끼로 이루어졌다.
Staclot® 검정에 기초하여 rVIIa-FP 및 rFVIIa의 비교할만한 FVIIa 활성 수준을 달성하기 위한 용량 수준을 선택하였다. 결과적으로, 0.75mg/k의 rVIIa-FP는 FVIIa 활성에 기초하여 90㎍/kg의 rFVIIa와 상호관련되어 있고, 반면, 1.5mg/kg의 rVIIa-FP는 FVIIa 활성에 기초하여 180㎍/kg의 rFVIIa와 상호관련되어 있다.
종점
1차 연구 종점은 표준화된 시장 절개 손상 후 지혈까지의 시간 및 표준화된 시장 절개 손상 후 30분까지 관찰된 실혈이었다(도 3). 지혈까지의 시간은 신장 절개로부터 관찰가능한 출혈 또는 삼출(oozing)의 중지까지 간격으로서 정의되었다. 실혈은 흡인에 의해 절개 부위로부터 수집된 혈액의 체적이었다. 실혈에 대한 30분 관찰 기간 및 지혈까지의 시간은 절개 직후 시작되었다.
결과
도 4에 나타낸 바와 같이, 90 및 180㎍/kg의 용량으로의 NovoSeven®은 표준화된 신장 손상 후 총 실혈을 평균 115mL(치료되지 않음; 양성 대조군)로부터 각각 77 및 80mL로 감소시킬 수 있었고, 따라서, 어떠한 분명한 용량-반응도 나타나지 않았다. 대조적으로, CSL689(rVIIa-FP)는 용량 0.75mg/kg에서 동등하게 효과적이었고(76mL의 평균 실혈), 1.5mg/kg의 보다 높은 용량에서 더욱 더 효과적이었고, 이는 실혈을 49mL로 감소시킨다. 따라서, CSL689는 혈액희석된 토끼에서의 역출혈(bleeding reversal) 관한 명백한 용량-반응 효과를 나타냈고 비슷한 용량의 rFVIIa(NovoSeven®)와 비교하여 보다 효과적이었다.
또한, rVIIa-FP는, 이들 동물에서 표준화된 신장 손상 후 완전 지혈을 달성하는데 요구되는 시간을 현저하게 감소시킬 수 있었다(도 5). 대조적으로, rFVIIa(NovoSeven®)을 이용한 치료 후 효과는 관찰되지 않았거나 단지 적은 효과만이 관찰되었고, 이는 급성 외상 후 역출혈에 관한 CSL689의 개선된 효능을 확인시켜준다.
실시예 4 - 후천적 혈우병의 원숭이 모델에서의 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 효능
도입/목적
후천적 혈우병 A를 지닌 환자의 임상 병태를 모방하는 순환성 항-인자 VIII 항체를 갖는 사이노몰거스 원숭이에서, 본 연구를 수행하여 활성화된 인자 VII를 사람 알부민과 링크하는 재조합 융합 단백질(CSL689(서열번호 1))의 효능을 평가하였다. 또한, 효과적인 출혈 예방에 요구되는 투약 빈도에 관한 rVIIa-FP와 재조합체 활성화된 인자 VII(rFVIIa; NovoSeven®) 사이의 직접적 비교도 포함되었다.
재료 및 방법
동물 관리
모든 생전(in-life) 실험 절차는 지역 동물 보호 당국(the local animal welfare authorities)에 의해 승인되었다.
치료 시작시에 적어도 2년 연령인 암컷 사이노몰거스 원숭이(마카카 파스시쿨라리스(Macaca fascicularis); 목적 사육됨(purpose bred))를 치료 시작 전에 4주 이하 동안 영장류 빌딩에서의 수용 조건에 적응시켰다. 동물들의 건강 상태를 수의 책임자에 의해 검토하였고, 치료 시작 전에 수락가능함을 확인하였다. 동물들(그룹당 n=4)은, 대략 동등한 평균 체중 및 FVII 활성 기저선 수준을 갖는 그룹들을 수득하는 의사-무작위(pseudo-random) 체중 및 기저선 혈장 인자 VIII(FVIII) 활성 계층화 절차에 기초하여 치료 그룹들에 할당하였다. 동물들에게 고유한 신규 식별 번호를 제공하였다. 동물들을 12시간 명, 12시간 암의 조명으로 온도 및 습도 제어된 영역에 짝을 지어 수용하였다. 각각의 동물은 제한 식이(표준 건조 식이 및 비스킷 및 과일 보충제 200g)가 제공되었고 물에의 접근은 자유로웠다.
치료
1일째에 사이노몰거스 원숭이를 FVII 및 항원 보강제(adjuvant)의 혼합물의 피하 투여에 의해 면역접종하였다. 혈장 중의 FVIII 활성 수준에 의해 나타내어지는 바와 같은 후천적 혈우병 표현형의 발병시, 동물들은 각각 8 및 3시간의 투약 간격으로 시작하여 정맥내 볼루스 용량의 rVIIa-FP(1.5mg/kg) 또는 rFVIIa(90㎍/kg)을 뇌 또는 복재 정맥에 투여받았다. 일단 적어도 48시간 또는 2회의 후속 용량에 걸쳐 임상학적 관찰 및 혈액학에 기초하여 만족스러운 출혈 조건이 달성되었으면, 무엇이 더 길든지 관계없이 투약 간격은 증가되었다. 하기 투약 간격이 적용되었다:
rVIIa-FP: 8, 12, 16, 32시간
rFVIIa: 3, 6, 12, 24시간
평가된 종점들
일련의 관찰은 임상학적 관찰, 사망률, 체중(검시 전에 적어도 매주 1회), 음식 소비, 혈장 중의 FVIII 활성 수준, 헤마토크리트(적혈구 용적율, hematocrit), 헤모글로빈 농도, 프로트롬빈 시간(PT 및 활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간(aPTT))의 측정을 포함하는 혈액학, 혈액 화학, 골수 스미어, 항-FVIII 항체; 항-FVII 항체; 중화 FVIII 항체; FVIIa 활성(Staclot® 검정); 거시적 병리학, 조직병리학을 포함하였다.
결과
사이노몰거스 원숭이를 인자 VIII 및 항원 보강제의 혼합물의 피하 투여에 의해 면역접종하였다. 후속적으로, 동물들은, 치료 부재 하의 임상학적 관찰, 혈액학 및 거시적 및 미시적 평가에 기초하여 후천적 혈우병 A를 지닌 환자에서 관찰되는 임상학적 출혈 표현형을 밀접하게 반영하는 출혈 표현형을 유도하는 내인성 원숭이 인자 VIII에 교차-반응성인 항-인자 VIII 항체를 생산하였다. 결과는 혈장 중의 FVIII 활성 수준이, 원숭이 FVIII에 교차-반응성인 항-FVIII 항체의 출혈과 상당히 상호관련되어 있는 이러한 후천적 혈우병 A 표현형의 성공적인 유도의 지표인 가장 민감한 종점임을 확인시켜 주었다. 따라서, 예방학적 rVIIa-FP 또는 rFVIIa 치료는 일단 FVIII 활성 수준이 10%(0.1 IU/m) 미만으로 떨어지면 개시되었다.
전반적으로, 당해 결과는 rVIIa-FP 치료에 대한 억제제의 존재 하에 임의의 출혈 증상을 발병시키는 것으로부터 모든 동물을 효과적으로 보호하는 최대 투약 간격은 8시간이었음을 확인시켜 주었다. 비교하면, 시험된 모든 동물들을 효과적으로 보호하기 위해 요구되는 90㎍/kg의 용량으로의 NovoSeven®에 관한 최대 투약 간격은 3시간이었다.
SEQUENCE LISTING <110> CSL LIMITED <120> HALF-LIFE EXTENDED FACTOR FVIIA PROTEIN FOR PREVENTION AND TREATMENT OF BLEEDING AND DOSING REGIMENS THEREFOR <130> 516721 <150> US 61/978,218 <151> 2014-04-11 <150> EP 14167612.2 <151> 2014-05-09 <150> EP 14168389.6 <151> 2014-05-15 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1022 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fusion protein: N-terminal human FVII followed by flexible linker followed by human serum albumin <400> 1 Ala Asn Ala Phe Leu Glu Glu Leu Arg Pro Gly Ser Leu Glu Arg Glu 1 5 10 15 Cys Lys Glu Glu Gln Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Ile Phe Lys 20 25 30 Asp Ala Glu Arg Thr Lys Leu Phe Trp Ile Ser Tyr Ser Asp Gly Asp 35 40 45 Gln Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Gln 50 55 60 Leu Gln Ser Tyr Ile Cys Phe Cys Leu Pro Ala Phe Glu Gly Arg Asn 65 70 75 80 Cys Glu Thr His Lys Asp Asp Gln Leu Ile Cys Val Asn Glu Asn Gly 85 90 95 Gly Cys Glu Gln Tyr Cys Ser Asp His Thr Gly Thr Lys Arg Ser Cys 100 105 110 Arg Cys His Glu Gly Tyr Ser Leu Leu Ala Asp Gly Val Ser Cys Thr 115 120 125 Pro Thr Val Glu Tyr Pro Cys Gly Lys Ile Pro Ile Leu Glu Lys Arg 130 135 140 Asn Ala Ser Lys Pro Gln Gly Arg Ile Val Gly Gly Lys Val Cys Pro 145 150 155 160 Lys Gly Glu Cys Pro Trp Gln Val Leu Leu Leu Val Asn Gly Ala Gln 165 170 175 Leu Cys Gly Gly Thr Leu Ile Asn Thr Ile Trp Val Val Ser Ala Ala 180 185 190 His Cys Phe Asp Lys Ile Lys Asn Trp Arg Asn Leu Ile Ala Val Leu 195 200 205 Gly Glu His Asp Leu Ser Glu His Asp Gly Asp Glu Gln Ser Arg Arg 210 215 220 Val Ala Gln Val Ile Ile Pro Ser Thr Tyr Val Pro Gly Thr Thr Asn 225 230 235 240 His Asp Ile Ala Leu Leu Arg Leu His Gln Pro Val Val Leu Thr Asp 245 250 255 His Val Val Pro Leu Cys Leu Pro Glu Arg Thr Phe Ser Glu Arg Thr 260 265 270 Leu Ala Phe Val Arg Phe Ser Leu Val Ser Gly Trp Gly Gln Leu Leu 275 280 285 Asp Arg Gly Ala Thr Ala Leu Glu Leu Met Val Leu Asn Val Pro Arg 290 295 300 Leu Met Thr Gln Asp Cys Leu Gln Gln Ser Arg Lys Val Gly Asp Ser 305 310 315 320 Pro Asn Ile Thr Glu Tyr Met Phe Cys Ala Gly Tyr Ser Asp Gly Ser 325 330 335 Lys Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Ala Thr His Tyr 340 345 350 Arg Gly Thr Trp Tyr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Gln Gly Cys 355 360 365 Ala Thr Val Gly His Phe Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser Gln Tyr Ile 370 375 380 Glu Trp Leu Gln Lys Leu Met Arg Ser Glu Pro Arg Pro Gly Val Leu 385 390 395 400 Leu Arg Ala Pro Phe Pro Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly 405 410 415 Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser 420 425 430 Gly Gly Ser Gly Ser Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe 435 440 445 Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe 450 455 460 Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val 465 470 475 480 Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala 485 490 495 Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys 500 505 510 Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys 515 520 525 Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp 530 535 540 Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met 545 550 555 560 Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu 565 570 575 Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu 580 585 590 Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala 595 600 605 Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp 610 615 620 Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu 625 630 635 640 Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu 645 650 655 Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val 660 665 670 Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu 675 680 685 Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn 690 695 700 Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu 705 710 715 720 Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro 725 730 735 Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val 740 745 750 Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu 755 760 765 Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu 770 775 780 Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala 785 790 795 800 Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro 805 810 815 Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe 820 825 830 Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr 835 840 845 Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser 850 855 860 Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala 865 870 875 880 Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln 885 890 895 Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys 900 905 910 Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu 915 920 925 Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe 930 935 940 Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile 945 950 955 960 Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala 965 970 975 Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val 980 985 990 Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu 995 1000 1005 Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu 1010 1015 1020 <210> 2 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg 1 5 10 15 Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 20 25

Claims (69)

  1. 대상체에서의 출혈을 예방하는 방법에서 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 모이어티(HLEM: half-life enhancing moiety)
    를 포함하는, 반감기 연장된 인자 VIIa(FVIIa) 단백질로서,
    상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 매일 적어도 1회의 투약 간격으로 혈액의 ml당 적어도 약 30 IU의 Cmax를 유도하는 용량으로 투여되고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 인자 VIIa(FVIIa) 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 30 내지 160 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 35 내지 130 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 40 내지 105 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 46 내지 92 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 30 내지 70 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  7. 제1항, 제2항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 36 내지 56 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 41 내지 51 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 70 내지 110 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  10. 제1항 내지 제3항, 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 80 내지 105 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  11. 제1항 내지 제3항, 제9항 및 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 82 내지 102 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  12. 제1항 내지 제3항, 및 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 혈액의 ml당 약 87 내지 97 IU의 Cmax를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  13. 대상체에서의 출혈을 예방하는 방법에서 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
    를 포함하는, 반감기 연장된 인자 VIIa(FVIIa) 단백질로서,
    대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 매일 적어도 1회의 투약 간격으로 약 200 내지 800㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  14. 제13항에 있어서, 상기 FVIIa 부분의 용량이 약 300 내지 700㎍/kg인, 반감기 연장된 FIVVa 단백질.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 FVIIa 부분의 용량이 약 320 내지 650㎍/kg인, 반감기 연장된 FIVVa 단백질.
  16. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 FVIIa 부분의 용량이 약 310 내지 330㎍/kg인, 반감기 연장된 FIVVa 단백질.
  17. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FVIIa 부분의 용량이 약 630 내지 650㎍/kg인, 반감기 연장된 FIVVa 단백질.
  18. 대상체에서의 출혈을 예방하는 방법에서 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
    를 포함하는, 반감기 연장된 인자 VIIa(FVIIa) 단백질로서,
    대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 매일 적어도 1회의 투약 간격으로 약 1750 내지 8000 IU/kg이고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  19. 제18항에 있어서, 상기 FVIIa 부분의 용량이 약 1800 내지 7000 IU/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 상기 FVIIa 부분의 용량이 약 2500 내지 6500 IU/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FVIIa 부분의 용량이 약 3200 내지 5800 IU/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  22. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FVIIa 부분의 용량이 약 2800 내지 3200 IU/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  23. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FVIIa 부분의 용량이 약 5800 내지 6200 IU/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약 간격이 약 1 내지 5일마다 1회인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약 간격이 약 2 내지 4일마다 1회인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약 간격이 약 2 내지 3일마다 1회인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약 간격이 약 격일마다 1회인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  28. 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법("온-디맨드 치료")에서 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
    를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서,
    상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 혈액의 ml당 적어도 약 30 IU의 Cmax를 유도하는 용량으로 투여되고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  29. 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법("온-디맨드 치료")에서 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
    를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서,
    대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 200 내지 800㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  30. 대상체에서의 출혈 에피소드를 치료하는 방법("온-디맨드 치료")에서 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
    를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서,
    대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1750 내지 8000 IU/kg이고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  31. 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 투여가 환자들의 30%에서 출혈 정지를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  32. 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 제2 투여는 대상체에게 약 5 내지 10시간, 바람직하게는 약 6 내지 8시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 투여되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  33. 제32항에 있어서, 상기 제2 투여가 환자들의 60%에서 출혈 정지를 유도하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  34. 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서의 출혈 에피소드가 외상의 결과인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  35. 제34항에 있어서, 수혈 요건(적혈구 세포(RBC) 및/또는 신선 동결 혈장(FFP))의 적어도 20%의 감소가 투여 후 24시간 이내에 달성되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  36. 수술 동안 또는 수술 후 대상체에서의 출혈 에피소드를 예방하는 방법에서 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
    를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서,
    상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 수술 전에, 수술 동안 및/또는 수술 후에 혈액의 ml당 적어도 약 30 IU의 Cmax를 유도하는 용량으로 투여되고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  37. 수술 동안 또는 수술 후 대상체에서의 출혈 에피소드를 예방하는 방법에서 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
    를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서,
    상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 수술 전에, 수술 동안 및/또는 수술 후에 투여되고, 대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 200 내지 800㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  38. 수술 동안 또는 수술 후 대상체에서의 출혈 에피소드를 예방하는 방법에서 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 모이어티(HLEM)
    를 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질로서,
    상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 수술 전에, 수술 동안 및/또는 수술 후에 투여되고, 대상체에게 투여되는 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 FVIIa 부분의 용량은 약 1750 내지 8000 IU/kg이고, 상기 활성(IU)은 Staclot® 검정으로 측정되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  39. 제36항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질은 대상체에게 약 5 내지 10시간, 바람직하게는 약 6 내지 8시간의 투약 간격으로 상기 제1 용량과 동등한 용량으로 재투여되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 지혈 잠재력은 전체 투약 간격 동안 적어도 1%의 트러프(trough)로 유지되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 반감기는 약 5시간보다 더 큰, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 증진 모이어티(HLEM)가 폴리알킬렌 글리콜 모이어티, 바람직하게는 PEG인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 증진 모이어티(HLEM)가 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  44. 제43항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)가 카르복시-말단 펩타이드(CTP)인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  45. 제43항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)가 FcRn 결합 파트너인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)가 알부민이거나 항원 결합 도메인(예를 들면, Fc)이 부재하는 면역글로불린인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)가 알부민인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  48. 제47항에 있어서, 상기 용량이 적어도 약 500㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  49. 제47항 또는 제48항에 있어서, 상기 용량이 약 500 내지 2500㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  50. 제47항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 약 750 내지 2000㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  51. 제47항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 적어도 약 1000 내지 1500㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  52. 제47항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 약 1200 내지 1500㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  53. 제47항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 약 740 내지 760㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  54. 제47항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 약 1490 내지 1510㎍/kg인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  55. 대상체에서의 출혈을 예방하는 방법에서 약 2 내지 4일마다 1회의 투약 간격으로 사용하기 위한,
    a) FVIIa 부분, 및
    b) 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)
    를 포함하는, 반감기 연장된 인자 VIIa(FVIIa) 단백질.
  56. 제55항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)가 카르복시-말단 펩타이드(CTP)인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  57. 제55항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)가 FcRn 결합 파트너인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  58. 제55항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)가 알부민이거나 항원 결합 도메인(예를 들면, Fc)이 부재하는 면역글로불린인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  59. 제55항, 제57항 및 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드(HLEP)가 알부민인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  60. 제55항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약 간격이 약 2 내지 3일마다 1회인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  61. 제60항에 있어서, 상기 투약 간격이 약 격일마다 1회인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반감기 연장된 FVIIa 단백질의 서열이 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  63. 제1항 내지 제27항 및 제55항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 예방학적 투약 용법을 포함하는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 사람인, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  65. 제64항에 있어서, 상기 사람은 혈우병 A 또는 혈우병 B를 앓고 있는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  66. 제64항에 있어서, 상기 사람은 후천적 혈우병을 앓고 있는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용량이 정맥내 투여되는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  68. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 FVIII 및/또는 FIX에 대한 억제성 항체를 갖는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
  69. 제68항에 있어서, 상기 대상체가 억제제 존재 하의 선천적 혈우병(CHwI)을 갖는, 반감기 연장된 FVIIa 단백질.
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