KR20160140909A - 크립토크롬 조정제로서의 카르바졸-함유 아미드, 카르바메이트, 및 우레아 - Google Patents

크립토크롬 조정제로서의 카르바졸-함유 아미드, 카르바메이트, 및 우레아 Download PDF

Info

Publication number
KR20160140909A
KR20160140909A KR1020167030709A KR20167030709A KR20160140909A KR 20160140909 A KR20160140909 A KR 20160140909A KR 1020167030709 A KR1020167030709 A KR 1020167030709A KR 20167030709 A KR20167030709 A KR 20167030709A KR 20160140909 A KR20160140909 A KR 20160140909A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
compound
subject
aryl
disorder
cry
Prior art date
Application number
KR1020167030709A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102224423B1 (ko
Inventor
로스 베르소트
폴 험프리스
Original Assignee
리셋 테라퓨틱스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 리셋 테라퓨틱스 인코포레이티드 filed Critical 리셋 테라퓨틱스 인코포레이티드
Publication of KR20160140909A publication Critical patent/KR20160140909A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102224423B1 publication Critical patent/KR102224423B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
    • C07D209/80—[b, c]- or [b, d]-condensed
    • C07D209/82—Carbazoles; Hydrogenated carbazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/36—Opioid-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/52—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring condensed with a ring other than six-membered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
    • C07D209/80—[b, c]- or [b, d]-condensed
    • C07D209/82—Carbazoles; Hydrogenated carbazoles
    • C07D209/88—Carbazoles; Hydrogenated carbazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the ring system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
    • Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
    • Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)

Abstract

본원의 대상은 구조 화학식 I의 카르바졸-함유 아미드, 카르바메이트, 및 우레아 유도체 및 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물에 관한 것이다. Cry-매개 질환 또는 장애, 예컨대 당뇨병, 당뇨병 연관 합병증, 쿠싱 증후군, NASH, NAFLD, 천식, 및 COPD를 치료하기 위한 화학식 I의 화합물을 함유하는 제약 조성물이 또한 제공된다.
<화학식 I>
Figure pct00149

여기서 가변기 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, A, D, E, G, J, L, M, Q, a, 및 b는 기재된 바와 같다.

Description

크립토크롬 조정제로서의 카르바졸-함유 아미드, 카르바메이트, 및 우레아 {CARBAZOLE-CONTAINING AMIDES, CARBAMATES, AND UREAS AS CRYPTOCHROME MODULATORS}
관련 출원
2014년 4월 7일에 출원된 미국 가출원 번호 61/976,350을 우선권 주장하며, 그의 전문은 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
본원에 개시된 대상은 특히 카르바졸-함유 아미드, 카르바메이트, 및 우레아 유도체, 이들 화합물을 함유하는 제약 조성물, 크립토크롬-매개 질환 또는 장애의 치료에서의 그의 사용 방법, 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 또한, 본원에 개시된 화합물 및 조성물을 투여받는 대상체에서 크립토크롬-의존성 질환을 진단하거나, 검출하거나 또는 그의 진행을 모니터링하는 방법이 제공된다.
일주기 시계는 많은 생리학적 프로세스, 예컨대 수면/각성 거동, 체온, 호르몬 분비 및 대사의 1일 리듬을 제어하는 내인성 타임-키핑 메카니즘이다 (문헌 [Takahashi, J. S. et al. Nat. Rev. Genet. 2008, 9, 764; Green, C. B. et al. Cell, 2008, 134, 728; Zhang, E. E. et al. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2010, 11, 764]). 일주기 리듬은 시계 유전자의 전사 조절 네트워크를 통해 세포-자율 방식으로 발생한다. 코어 피드백 루프에서, 전사 인자 CLOCK 및 BMAL1은 주기 (Per1 및 Per2) 및 크립토크롬 (Cry1 및 Cry2) 유전자의 발현을 활성화시킨다. 번역 및 핵 국재화 후에, PER 및 CRY 단백질은 CLOCK-BMAL1의 기능을 억제하여, 지속된 리듬 유전자 발현을 일으킨다. 많은 생리학적 경로는 일주기 시계의 제어 (문헌 [Panda, S. et al. Cell, 2002, 109, 307]), 예를 들어 다수의 간 프로세스의 직접적 조절 (문헌 [Rey, G. et al. PLoS Biol. 2011, 9, e1000595; Bugge, A. et al. Genes Dev. 2012, 26, 657]) 하에 있다.
일주기 탈동시성은 인슐린 감수성 장애 (문헌 [Spiegel, K. et al. J. Appl. Physiol. 2005, 99, 2008; Spiegel, K. et al. Lancet, 1999, 354, 1435]), 렙틴 수준 감소와 연관된 바 있으며, 고혈당증, 고인슐린혈증, 및 전당뇨병성 상태의 것과 유사한 식후 글루코스 반응을 유발한다 (문헌 [Scheer, F. A. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2009, 106, 4453]). 몇몇 게놈-전반 연관성 연구는 Cry2가 포유동물 글루코스 수준의 조절에서 중요할 수 있다는 발견을 도출하였다 문헌 ([Dupuis, J. et al. Nat. Genet. 2010, 42, 105; Liu, C. et al. PLoS One, 2011, 6, e21464; Barker, A. et al. Diabetes, 2011, 60, 1805]).
혈중 글루코스 농도는 인슐린 감수성 및 내분비 췌장의 인슐린 분비 용량에서의 변화 때문에 고도로 리듬적이다 (문헌 [Polonsky, K. S. et al. N. Engl. J. Med. 1988, 318, 1231]). ClockΔ19 돌연변이체 마우스에서는 연령-의존성 고혈당증이 발생하고, 이들 동물에서는 또한 식이-유발 비만에 대한 감수성이 발생하며, 부적절하게 낮은 농도의 인슐린을 갖고 (문헌 [Turek, F. W. et al. Science, 2005, 308, 1043]), 인슐린을 사용한 치료에 반응하여 보다 가파른 혈당 강하를 나타내며, 이는 이들 동물이 증진된 인슐린 감수성을 가지며 그로 인해 그의 β-세포 결핍이 차폐된다는 것을 나타낸다 (문헌 [Marcheva, B. et al. Nature, 2010, 466, 627]). 마우스에서의 Bmal1의 간-특이적 결실은 글루코스 내성 장애 및 증가된 인슐린 감수성을 유발한다 (문헌 [Lamia, K. A. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2008, 105, 15172]). 제2형 당뇨병을 앓는 개체 및 심지어 아직 상기 질환에 이환되지 않은 그의 1촌 친척은 글루코스 내성에서 변경된 리듬성을 나타낸다 (문헌 [Boden, G. et al. Diabetes, 1999, 48, 2182]). 또한, Per2, Per3 및 Cry2 발현은 질환을 앓지 않는 인간에 대비하여 제2형 당뇨병을 앓는 인간에서 유의하게 더 낮다 (문헌 [Stamenkovich, J. A. et al. Metabolism, 2012, 61, 978]). 글루코스신생 유전자 포스포엔올 피루베이트 카르복시키나제 (Pck1) 및 글루코스 6-포스파타제 (G6pc)는 CRY 및 Bmal1 유전자 조절인자 REV-ERB에 의해 제어된다 (문헌 [Zhang, E. E. et al. Nat. Med. 2010, 16, 1152; Lamia, K. A. et al. Nature, 2011, 480, 552; Yin, L. et al. Science, 2007, 318, 1786]). 글루코스신생은 다중 신호전달 메카니즘에 의해 엄격하게 제어되며, 더욱이 마우스에서의 연구에서 Cry1 및 Cry2의 조정이 글루코스신생을 교란시키고 혈당 수준을 조절할 수 있는 것으로 밝혀진 바 있다 (문헌 [Zhang, E. E. et al. Nat. Med. 2010, 16, 1152]).
단독요법 또는 조합 요법 문맥에서, 신규의 확립된 경구 항당뇨병제는 비-균일하며 제한된 유효성을 갖는다. 경구 항당뇨병 요법은 불량하거나 제한된 혈당 조절, 또는 허용되지 않는 부작용, 예컨대 부종, 체중 증가 또는 저혈당증과 같이 훨씬 더 심각한 합병증으로 인한 불량한 환자 순응도를 겪게 된다. 치환된 비구아니드인 메트포르민은 설사 및 위장 불쾌감을 유발할 수 있다. 마지막으로, 부종, 체중 증가, 및 일부 경우에 간독성 및 심장독성이 일부 티아졸리딘-2,4-디온 항당뇨병제 (예를 들어 로시글리타존 및 피오글리타존)의 투여와 연계된 바 있다. 상기 작용제 중 2종 이상을 사용하는 조합 요법이 통상적이지만, 일반적으로 단지 혈당 조절에서의 점진적 개선만을 유도한다.
Cry1 및 Cry2는 또한 글루코코르티코이드 수용체 (GR)와 상호작용하여 글루코코르티코이드에 대한 전사 반응을 전체적으로 변경한다 (문헌 [Lamia, K. A. et al. Nature, 2011, 480, 552]). Cry1 및/또는 Cry2의 손실은 글루코스 불내성 및 구성적으로 높은 수준의 순환 코르티코스테론을 유발하며, 이는 시상하부-뇌하수체-부신 축의 감소된 억제가 간에서의 상승된 글루코코르티코이드 전사활성화와 연결된다는 것을 시사한다. 게놈적으로, Cry1 및 Cry2는 Pck1 프로모터에서 글루코코르티코이드 반응 요소와 호르몬-의존성 방식으로 연관되며, 크립토크롬-결핍 간에서 Pck1 유전자의 덱사메타손-유도된 전사가 두드러지게 증가하였다. 이는, 염증을 억제하기 위해 사용된 글루코코르티코이드의 바람직하지 않은 대사 부작용 (예를 들어 고혈당증, 인슐린 저항성 및 부신 기능의 억제)이, 이를 Cry1 및/또는 Cry2를 안정화시킬 수 있는 작용제와 조합함으로써 완화될 수 있다는 것을 시사한다.
본원의 대상은 크립토크롬 (Cry) 조정 화합물, Cry 조정 화합물을 함유하는 제약 조성물, 및 Cry 조정 화합물의 투여에 의해 Cry-관련 질환 또는 장애, 예컨대, 예를 들어 당뇨병, 비만, 대사 증후군, 쿠싱 증후군 및 녹내장을 치료하는 방법에 관한 것이다.
한 측면에서, 본원에 개시된 대상은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물에 관한 것이다.
<화학식 I>
Figure pct00001
여기서
각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 독립적으로 N 또는 C이고;
각각의 R1 및 R2는, A, D, E, G, J, L, M, 및 Q가 C인 경우에, 독립적으로 H, 할로, 시아노, 니트로, -CF3, -CHF2, -CH2F, 트리플루오로메톡시, 아지도, 히드록실, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R8, -(C=O)-O-R8, -O-(C=O)-R8, -NR8(C=O)-R10, -(C=O)-NR8R9, -NR8R9, -NR8OR9, -S(O)cNR8R9, -S(O)d(C1-C8)알킬, -O-SO2-R8, NR8-S(O)c, -(CR8R9)d(3-10)-원 시클로알킬, -(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(C6-C10)아릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 선택되고;
각각의 R3 및 R5는 독립적으로 H, 시아노, -CF3, -CHF2, -CH2F, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R8, -(C=O)-O-R8, -(C=O)-NR8R9, -S(O)cNR8R9, -S(O)d(C1-C8)알킬, -(CR8R9)d(3-10)-원 시클로알킬, -(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(C6-C10)아릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 선택되고;
여기서 각각의 R3 기는 4-12원 모노- 또는 비시클릭 고리로서 서로에 임의로 연결되고;
여기서 각각의 R5 기는 4-12원 모노- 또는 비시클릭 고리로서 서로에 임의로 연결되고;
R4는 H, -CF3, -CHF2, -CH2F, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R8, -(C=O)-O-R8, -(C=O)-NR8R9, -(CR8R9)d(3-10)-원 시클로알킬, -(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(C6-C10)아릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴이고;
여기서 R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 고리로서 서로에 연결되고;
각각의 R8, R9 및 R10은 독립적으로 H, (C1-C6)알킬, -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)g(C6-C10)아릴, 및 -(CR11R12)g(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 선택되고;
상기 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, 및 R16의 (C1-C6)알킬, (3-10)-원 시클로알킬, (C6-C10)아릴 및 (4-10)-원 헤테로시클릴의 임의의 탄소 원자는 독립적으로 할로, 시아노, 니트로, -CF3, -CHF2, -CH2F, 트리플루오로메톡시, 아지도, 히드록실, -O-R15, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R11, -(C=O)-R15, -(C=O)-O-R11, -(C=O)-O-R15, -O-(C=O)-R11, -O-(C=O)-R15, -NR11(C=O)-R13, -(C=O)-NR11R12, -(C=O)-NR11R15, -NR11R12, -NR11R15, -NR11OR12, -NR11OR15, -S(O)cNR11R12, -S(O)cNR11R15, -S(O)d(C1-C6)알킬, -S(O)dR15, -O-SO2-R11, -O-SO2-R15, -NR11-S(O)c, -NR15-S(O)c, -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)e(C6-C10)아릴, -(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(C6-C10)아릴, -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)eO(CR11R12)f(C6-C10)아릴, -(CR11R12)eO(CR11R12)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)fS(O)d(CR11R12)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR11R12)fS(O)d(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 각각 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R14 치환기로 임의로 치환되고;
상기 R14의 (C1-C6)알킬, (3-10)-원 시클로알킬, (C6-C10)아릴 및 (4-10)-원 헤테로시클릴의 임의의 탄소 원자는 독립적으로 할로, 시아노, 니트로, -CF3, -CHF2, -CH2F, 트리플루오로메톡시, 아지도, (CH2)eOH, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R11, -(C=O)-R15, -(C=O)-O-R11, -(C=O)-O-R15, -O-(C=O)-R11, -O-(C=O)-R15, -NR11(C=O)-R13, -(C=O)-NR11R12, -NR11R12, 및 -NR11R15로부터 각각 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R16 치환기로 임의로 치환되고;
상기 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R14, 및 R15의 (4-10)-원 헤테로시클릴의 임의의 질소 원자는 독립적으로 (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R11, -(C=O)-O-R11, -(C=O)-NR11R12, -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)e(C6-C10)아릴, -(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(C6-C10)아릴, 또는 -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴로 임의로 치환되고;
각각의 R11, R12, 및 R13은 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬이고;
R15는 -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)e(C6-C10)아릴, 또는 -(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴이고;
a 및 b는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4이고;
c는 1 또는 2이고;
d는 0, 1, 또는 2이고;
e, f, 및 g는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다.
일부 실시양태에서, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 C이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4는 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5는 H이고; R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 아미드 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f는 본원에 정의된 바와 같다.
다른 실시양태에서, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 C이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4는 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5는 H이고; R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 우레아 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f는 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 C-3에서 (R)-배위를 보유하는 단일 거울상이성질체이며, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 C이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4는 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5는 H이고; R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 아미드 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f는 본원에 정의된 바와 같다.
본원에 개시된 대상의 다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 C-3에서 (R)-배위를 보유하는 단일 거울상이성질체이며, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 C이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4는 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5는 H이고; R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 우레아 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f는 본원에 정의된 바와 같다.
본원에 기재된 대상의 다른 실시양태는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물이다:
1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온;
2-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온;
1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)이미다졸리딘-2-온;
(1R,4S)-2-((R)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온;
(R)-1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)이미다졸리딘-2-온;
(R)-1-((R)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온;
(S)-1-((S)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시-2-메틸프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온;
(R)-1-((R)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-4-메틸이미다졸리딘-2-온;
또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 화합물은 Cry1 또는 Cry2를 조정한다. Cry1 또는 Cry2의 조정은 하기 중 임의의 것을 포함한다: Cry1 또는 Cry2에 결합시키는 것; Cry1 또는 Cry2의 변형을 억제하는 것; Cry1 또는 Cry2 국재화를 변경시키는 것; Cry1 또는 Cry2 안정화를 증가 또는 감소시키는 것; 표적에 대한 Cry1 또는 Cry2 사이의 결합을 증가 또는 감소시키는 것; Cry1 또는 Cry2 활성을 증가 또는 감소시키는 것; 및 Cry1 또는 Cry2 표적의 활성을 증가 또는 감소시키는 것. Cry1 및/또는 Cry2의 표적은 Per1, Per2, 글루코코르티코이드 수용체 (GR), CLOCK, BMAL1 또는 CLOCK-BMAL1 프로모터 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 대상은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물, 및 제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 1종 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함한다. 추가의 치료제의 예는 DPP-IV 억제제 예컨대 시타글립틴, 알로글립틴, 빌다글립틴, 삭사글립틴 및 리나글립틴; GLP-1 효능제 예컨대 엑세나티드, 리라글루티드 및 알비글루티드; SGLT2 억제제 예컨대 카나글리플로진, 에르투글리플로진 및 다파글리플로진; 메트포르민; 및 술포닐우레아 예컨대 글리부리드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 추가의 치료제의 다른 예는 시그니포르(Signifor)®, 케토코나졸, 메티라폰, 미토탄, 에토미데이트, 코르림(Korlym)®, 표피 성장 인자 억제제, 알도스테론 신타제/11β-히드록실라제 억제제 LCI699 및 케보케토코나졸 (COR-003)을 포함한다.
다른 측면에서, 대상체에게 치료 유효량의 본원에 기재된 제약 조성물을 투여함으로써, 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 추가 측면에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 본원에 기재된 제약 조성물을 투여함으로써, 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애의 증상을 완화시키는 방법을 제공한다. 질환 또는 장애는 당뇨병, 당뇨병성 합병증, 예컨대 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 신병증, 백내장 형성, 녹내장, 당뇨병성 혈관병증, 아테롬성동맥경화증; 비알콜성 지방간염 (NASH); 비-알콜성 지방간 질환 (NAFLD); 천식; 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 대사 증후군; 인슐린 저항성 증후군; 비만; 녹내장; 쿠싱 증후군; 정신병적 우울증; 알츠하이머병; 신경병증성 통증; 약물 남용; 골다공증; 암; 황반 변성; 및 근병증으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본원에 기재된 임의의 방법은 또한 대상체에게의 1종 이상의 추가의 치료제의 투여를 수반할 수 있다. 추가의 치료제의 예는 DPP-IV 억제제 예컨대 시타글립틴, 알로글립틴, 빌다글립틴, 삭사글립틴 및 리나글립틴; GLP-1 효능제 예컨대 엑세나티드, 리라글루티드 및 알비글루티드; SGLT2 억제제 예컨대 카나글리플로진, 에르투글리플로진 및 다파글리플로진; 메트포르민; 술포닐우레아, 예컨대 글리부리드; 시그니포르®; 케토코나졸; 메티라폰; 미토탄; 에토미데이트; 코르림®; 표피 성장 인자 억제제; 알도스테론 신타제/11β-히드록실라제 억제제 LCI699; 및 케보케토코나졸 (COR-003)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
또 다른 측면에서, 제1 기간에서의 대상체로부터의 제1 샘플에서 1종 이상의 크립토크롬 또는 크립토크롬-조절 유전자의 유효량을 측정하는 것; 제2 기간에서의 대상체로부터의 제2 샘플에서 1종 이상의 크립토크롬 또는 크립토크롬-조절 유전자의 유효량을 측정하는 것; 및 제1 샘플에서 검출된 1종 이상의 크립토크롬 또는 크립토크롬-조절 유전자의 양을 제2 샘플에서 검출된 1종 이상의 크립토크롬 또는 크립토크롬-조절 유전자의 양 또는 참조 값과 비교하는 것을 수반하는, 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애의 진행 또는 예후를 모니터링하는 방법이 제공된다. 크립토크롬-조절 유전자의 예는 E-박스 서열을 그의 프로모터 내에 함유하는 유전자를 포함한다. 이러한 유전자는 Dbp, Rev-erb 알파, Rev-erb 베타, Ror 알파, Ror 베타, Ror 감마, Per1, Per2, Per3, Cry1, Cry2, Pck1, G6Pc, Avp, Vip, Cck, SP (물질 P), AA-Nat, PK2 (프로키네티신 2), c-Myc, MyoD 및 Nampt를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 모니터링은 대상체에서의 Cry-매개 질환 또는 장애의 발생 위험의 변화를 평가하는 것을 포함한다.
인간에서의 투여를 위한 최적 시간은 저녁인 것으로 예상되며, 이는 인간 Cry 발현의 피크 및 활성 (주간) 기간의 종료에 상응한다.
대상체는 이전에 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 치료받은 바 있는 대상체, 이전에 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 치료받은 바 없는 대상체, 또는 이전에 Cry-매개 질환 또는 장애로 진단받은 바 없는 대상체를 포함할 수 있다. 샘플은 전혈, 혈청, 혈장, 혈액 세포, 내피 세포, 조직 생검, 림프액, 복수액, 간질액, 골수, 뇌척수액 (CSF), 정액, 타액, 점액, 객담, 땀 또는 소변일 수 있다.
일부 실시양태에서, 제1 샘플은 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 치료하기 전에 대상체로부터 채취되고, 제2 샘플은 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 치료한 후에 대상체로부터 채취된다. 다른 실시양태에서, 대상체는 본원에 개시된 화학식 I의 화합물을 함유하는 제약 조성물로 치료된다. 특정 실시양태에서, 모니터링은 대상체에 대한 치료를 선택하는 것 및/또는 Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 치료의 유효성을 모니터링하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 치료는 외과적 개입, 본원에 정의된 바와 같은 제약 조성물을 단독으로 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 투여하는 것, 본원에 제공된 제약 조성물을 단독으로 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 투여한 후의 또는 그 전의 외과적 개입, 또는 추가 조치를 취하지 않는 것을 포함한다.
다른 실시양태에서, 참조 값은 지수 값, 1종 이상의 Cry-매개 질환 또는 장애 위험 예측 알고리즘으로부터 유도된 값, Cry-매개 질환 또는 장애를 앓지 않는 대상체로부터 유도된 값, 또는 Cry-매개 질환 또는 장애로 진단된 대상체로부터 유도된 값을 포함한다. 일부 실시양태에서, 측정은 1종 이상의 크립토크롬의 존재 또는 부재를 검출하는 것, 1종 이상의 크립토크롬의 양을 정량분석하는 것, 1종 이상의 크립토크롬의 유형을 정성분석하는 것, 및 표적에 결합하는 1종 이상의 크립토크롬의 능력을 평가하는 것을 포함한다. 표적은 Per1, Per2 또는 CLOCK-BMAL1 프로모터 서열일 수 있다.
본원에 개시된 바와 같이, Cry-매개 질환 또는 장애는 당뇨병, 당뇨병성 합병증 예컨대 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 신병증, 백내장 형성, 녹내장, 당뇨병성 혈관병증, 아테롬성동맥경화증; 비알콜성 지방간염 (NASH); 비-알콜성 지방간 질환 (NAFLD); 천식; 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 대사 증후군; 인슐린 저항성 증후군; 비만; 녹내장; 쿠싱 증후군; 정신병적 우울증; 알츠하이머병; 신경병증성 통증; 약물 남용; 골다공증; 암; 황반 변성; 및 근병증으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
한 실시양태에서, 본원에 개시된 화학식 I의 화합물에서, A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 탄소이다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물에서, R1 및 R2는 수소이다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물에서, R1 및 R2는 플루오린이고, a 및 b는 1이다. 추가 실시양태에서, 화학식 I의 화합물에서, R3 및 R5는 수소이다. 또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물에서, R3, R4, 및 R5는 수소이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물에서, R6 및 R7은 연결되어 임의로 치환된 모노시클릭 고리를 형성한다.
다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물에서, R6 및 R7은 연결되어 임의로 치환된 융합된 비시클릭 고리, 임의로 치환된 연결된 비시클릭 고리, 임의로 치환된 스피로 비시클릭 고리, 임의로 치환된 피롤리디논 고리, 임의로 치환된 이미다졸리디논 고리, 임의로 치환된 피페리디논 고리 및/또는 임의로 치환된 피리미디논 고리를 형성한다. 마찬가지로, 이들 실시양태 중 임의의 것에서, R6 및 R7에 의해 형성된 고리는 플루오린, 메틸 기, 에틸 기, 이소프로필 기, C3-6 시클로알칸 또는 페닐 기로 독점적으로 치환될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질은 하기 기재되어 있다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 다른 참고문헌은 그 전문이 명백히 참조로 포함된다. 상충되는 경우에, 정의를 비롯하여 본 명세서가 제어할 것이다. 또한, 본원에 기재된 물질, 방법 및 예는 단지 예시적이며, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 다른 특색 및 이점은 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.
도 1A-H는 화합물 72의 투여 후 마우스에서의 코어 시계 유전자 발현을 나타내는 일련의 그래프를 나타낸다. 코어 시계 유전자 Per2 (A 및 B), Bmal1 (C 및 D), Cry1 (E 및 F), 및 Cry2 (G 및 H)의 mRNA 발현을 비히클 (H2O) 또는 화합물 72로 처리된 C57Bl/6J DIO (A, C, E, G) 또는 Balb/c (B, D, F, H) 마우스의 간에서 24시간에 걸쳐 6시간 간격으로 측정하였다. 전사체 수준을 RT-qPCR에 의해 결정하고, 쉐이딩된 암흑 기간을 갖는 ZT8에서 비히클과 비교하였다. 각각의 시점에 대해 화합물 72-처리된 것으로부터의 mRNA 수준을 T-검정에 의해 비히클과 비교하였다: * < 0.05, ** < 0.01, *** < 0.001, **** < 0.0001.
도 2A-D는 화합물 72의 투여 후 마우스에서의 글루코스신생 유전자 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. 비히클 (H2O) 또는 화합물 72로 처리된 C57Bl/6J DIO (A 및 C) 또는 Balb/c (B 및 D) 마우스의 간에서 24시간에 걸쳐 6시간 간격에서의 글루코스신생 유전자 Pck1 (PEPCK; A 및 B), G6Pc (글루코스 6-포스파타제 촉매 서브유닛; C 및 D)의 mRNA 발현. 전사체 수준을 RT-qPCR에 의해 결정하고, 쉐이딩된 암흑 기간을 갖는 ZT8에서 비히클과 비교하였다. 각각의 시점에 대해 화합물 72-처리된 것으로부터의 mRNA 수준을 T-검정에 의해 비히클과 비교하였다: * < 0.05, ** < 0.01, *** < 0.001, **** < 0.0001.
도 3A-C는 화합물 72, 화합물 48, 화합물 9, 또는 화합물 57의 투여 후에 ICR 마우스의 간에서의 코어 시계 유전자 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. 코어 시계 유전자 Per2 (A), Bmal1 (B), 및 Cry2 (C)의 mRNA 발현을 화합물 72, 화합물 48, 화합물 9, 화합물 57 또는 비히클로 4일 동안 BID 처리된 ICR 마우스의 간에서 측정하였다. mRNA의 수준을 최종 ZT0 용량 후 ZT6에서 취한 샘플 상에서 RT-qPCR에 의해 결정하였다. 각각의 시점에 대해 화합물 72-처리된 것으로부터의 mRNA 수준을 T-검정에 의해 비히클과 비교하였다: * < 0.05, ** < 0.01, *** < 0.001, **** < 0.0001.
도 4는 Cry1 발현의 피크에서 화합물 72의 3회 1일 용량 후 Dbp 유전자 발현을 나타내는 그래프이다. Dbp mRNA의 발현을 100 mg/kg 화합물 72의 3회 1일 용량 후 db/db 마우스로부터의 전혈에서 ZT7.5에서 측정하였다. 전사체 수준을 RT-qPCR에 의해 결정하고, ZT7.5에서 비히클 (10% 콜리포르)-처리된 마우스로부터의 혈액과 비교하였다. 각각의 화합물 처리로부터의 mRNA 수준을 T-검정에 의해 비히클과 비교하였다 (***; p ≤ 0.001).
도 5A-D는 Cry1 발현의 피크 또는 최저점에서 화합물 72의 단일 용량 후 코어 시계 유전자 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. 코어 시계 유전자 Per2 (A), Bmal1 (B), Cry1 (C) 및 Cry2 (D)의 mRNA 발현을 100 mg/kg 화합물 72의 단일 용량 후 C57Bl/6J DIO 마우스로부터의 간에서 ZT7.5 (Cry1 발현의 피크) 또는 ZT17.5 (Cry1 발현의 최저점)에서 측정하였다. 전사체 수준을 RT-qPCR에 의해 결정하고, 비히클 (10% 콜리포르)-처리된 것으로부터의 간과 비교하였다. 각각의 시점에 대해 화합물 72-처리된 것으로부터의 mRNA 수준을 T-검정에 의해 비히클과 비교하였다: * < 0.05, ** < 0.01, *** < 0.001, **** < 0.0001.
도 6은 db/db 마우스에서 경구 글루코스 내성 검사 (OGTT)에 대한 화합물 72의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 화합물 72 (50 mg/kg, PO) 또는 10% 콜리포르 (대조군)를 Cry1 및 Bmal1 유전자 발현의 피크 (ZT0) (A) 또는 최저점 (ZT10) (B)에서 단일 용량으로서 투여하였다.
도 7은 db/db 마우스에서 글루코스 곡선하 면적 (AUC)에 대한 화합물 72의 효과를 나타내는 그래프이다. 화합물 72 (50 mg/kg, PO) 또는 10% 콜리포르 (대조군)를 Cry1 및 Bmal1 유전자 발현의 피크 (ZT0)에서 단일 용량으로서 투여하였다.
도 8A-C는 db/db 마우스에서 글루코스 대사에 대한 7일 동안 투여된 화합물 72의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 화합물 72 (50 mg/kg, PO) 또는 10% 콜리포르 (대조군)를 7일 동안 투여하였다. A) 공복 혈액 글루코스 수준; B) 경구 글루코스 내성 검사 (OGTT); C) 글루코스 AUC.
도 9A-B는 db/db 마우스에서 인슐린 수준에 대한 7일 동안 투여된 화합물 72의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 화합물 72 (50 mg/kg, PO) 또는 10% 콜리포르 (대조군)를 투여하였다. A) 글루코스 로드 전 (0시간째) 및 후 (2시간째) 인슐린 수준; B) 항상성 모델 평가 추정된 인슐린 저항성 (HOMA-IR).
도 10은 마지막 용량 (50 mg/kg, PO)의 투여 후 대략 8시간째에 혈장 및 간에서 측정된 화합물 72의 화합물 수준을 나타내는 그래프이다. Per2 검정에서의 화합물 72에 대한 EC50 농도는 그래프 상에 파선에 의해 지정된다.
도 11A-C는 db/db 마우스에서 글루코스 대사에 대한 화합물 72의 증가하는 투여량 (10 mg/kg, 50 mg/kg, 및 100 mg/kg)의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 10% 콜리포르를 비히클 대조군으로서 사용하였다. A) 공복 혈액 글루코스 수준; B) OGTT; C) 글루코스 AUC.
도 12A-B는 db/db 마우스에서 인슐린 수준에 대한 화합물 72의 증가하는 투여량 (10 mg/kg, 50 mg/kg, 및 100 mg/kg)의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 10% 콜리포르를 비히클 대조군으로서 사용하였다. A) 글루코스 로드 전 (0시간째) 및 후 (2시간째) 인슐린 수준; B) 항상성 모델 평가 추정된 인슐린 저항성 (HOMA-IR).
도 13은 증가하는 투여량 (10 mg/kg, 50 mg/kg, 및 100 mg/kg)에서의 마지막 용량의 투여 후 대략 8시간째에 혈장 및 간에서 측정된 화합물 72의 화합물 수준을 나타내는 그래프이다. Per2 검정에서의 화합물 72에 대한 EC50 농도는 그래프 상에 파선에 의해 지정된다.
도 14A-C는 db/db 마우스에서 글루코스 대사에 대한 화합물 9의 증가하는 투여량 (30 mg/kg, 100 mg/kg 및 300 mg/kg)의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 10% 콜리포르를 대조군으로서 사용하였다. A)공복 혈액 글루코스 수준; B) OGTT; C) 글루코스 AUC.
도 15A-B는 db/db 마우스에서 인슐린 수준에 대한 화합물 9의 변화하는 투여량 (30 mg/kg, 100 mg/kg 및 300 mg/kg)의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 10% 콜리포르를 대조군으로서 사용하였다. A) 글루코스 로드 전 (0시간째) 및 후 (2시간째) 인슐린 수준; B) 항상성 모델 평가 추정된 인슐린 저항성 (HOMA-IR).
도 16은 증가하는 투여량 (30 mg/kg, 100 mg/kg, 및 300 mg/kg)에서의 마지막 용량의 투여 후 대략 8시간째에 혈장 및 간에서 화합물 9의 화합물 수준을 나타내는 그래프이다. Per2 검정에서의 화합물 9에 대한 EC50 농도는 그래프 상에 파선에 의해 지정된다.
도 17A-C는 C57/Bl6J DIO 마우스에서 글루코스 대사에 대한 화합물 72의 효과를 나타내는 그래프이다. 화합물 72 (100 mg/kg, PO), 10% 콜리포르 (대조군), 또는 로시글리타존 (30mg/kg)을 7일 동안 투여하였다. A) 공복 혈액 글루코스 수준; B) OGTT; C) 글루코스 AUC.
도 18A-B는 C57/Bl6J DIO 마우스에서 인슐린 수준에 대한 화합물 72의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 화합물 72 (100 mg/kg, PO), 10% 콜리포르 (대조군), 또는 로시글리타존 (30mg/kg)을 7일 동안 투여하였다. A) 글루코스 로드 전 (0시간째) 및 후 (2시간째) 인슐린 수준; B) 항상성 모델 평가 추정된 인슐린 저항성 (HOMA-IR).
도 19는 코르티손-유도된 인슐린 저항성의 래트 모델에 대한 화합물 72의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 코르티손 (30mg/kg, SC)을 비히클, 화합물 72 (50 mg/kg, PO) 또는 미페프리스톤 (30 mg/kg, PO)과 함께 7일 동안 투여하였다. (A) 공복 혈장 글루코스 수준 및 (B) 공복 혈장 인슐린 수준.
도 20은 코르티손-유도된 인슐린 저항성의 래트 모델에서 HOMA-IR에 대한 7일 동안 투여된 화합물 72 (50 mg/kg, PO)의 효과를 나타내는 그래프이다. 코르티손 (30mg/kg, SC)을 비히클, 화합물 72 (50 mg/kg, PO) 또는 미페프리스톤 (30 mg/kg, PO)과 함께 7일 동안 투여하였다.
도 21은 CRY1 FAD-결합 도메인의 시험관내 열적 안정성에 대한 화합물 72의 효과를 나타내는 그래프이다. 화합물 72로의 정제된 CRY1 FAD-결합 도메인의 처리는 시차 주사 형광측정법 ('열 이동') 검정에 의해 결정 시, 단백질 용융 온도에서 용량-의존성 증가를 유발하였다.
도 22A-C는 DIO 마우스에서 글루코스 대사에 대한 화합물 72의 증가하는 투여량 (10 mg/kg, 30 mg/kg 및 100 mg/kg)의 효과를 나타내는 일련의 그래프이다. 화합물 72 (100 mg/kg, PO), 10% 콜리포르 (대조군), 또는 로시글리타존 (30mg/kg)을 7일 동안 투여하였다. A) 공복 혈액 글루코스 수준; B) OGTT; C) 글루코스 AUC.
본문에 인용된 각각의 출원 및 특허, 뿐만 아니라 각각의 출원 및 특허에 인용된 각각의 문헌 또는 참고문헌 (각각의 등록된 특허의 심사 동안의 것 포함; "출원 인용된 문헌"), 및 이들 출원 및 특허 중 임의의 것에 상응하고/거나 그를 우선권 주장하는 각각의 미국 및 외국 출원 또는 특허, 및 각각의 출원 인용된 문헌에 인용되거나 참조된 각각의 문헌은 이로써 명백히 본원에 참조로 포함된다. 보다 일반적으로, 문헌 또는 참고문헌은 본문에서 청구범위 전의 참고문헌 목록에 또는 본문 자체에 인용되고; 각각의 이들 문헌 또는 참고문헌 ("본원에-인용된 참고문헌"), 뿐만 아니라 각각의 본원에-인용된 참고문헌에 인용된 각각의 문헌 또는 참고문헌 (임의의 제조업체의 설명서, 지침서 등 포함)은 이로써 명백히 본원에 참조로 포함된다. 본문에 참조로 포함된 문헌은 본 발명의 실시에 이용될 수 있다. 본 명세서 전반에 걸쳐 기재된 특색, 구조 또는 특징은 하나 이상의 실시양태에서 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서 전반에 걸친 어구 "예시적 실시양태", "예시 실시양태", "일부 실시양태", 또는 다른 유사어의 사용은, 실시양태와 관련하여 기재된 특정한 특색, 구조, 또는 특징이 본원에 기재된 적어도 하나의 실시양태에 포함될 수 있다는 사실을 지칭한다. 따라서, 본 명세서 전반에 걸친 어구 "예시적 실시양태", "예시 실시양태", "일부 실시양태에서", "다른 실시양태에서" 또는 다른 유사어의 출현이 반드시 모두가 동일한 군의 실시양태를 지칭하는 것은 아니며, 기재된 특색, 구조, 또는 특징은 하나 이상의 실시양태에서 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다.
본 개시내용의 이해를 용이하게 하기 위해, 다수의 용어가 하기 정의된다. 본원에 정의된 용어는 본원에 기재된 대상과 관련된 분야의 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 단수형의 용어는 단일 개체만을 지칭하는 것으로 의도되는 것이 아니라, 특정 예가 예시를 위해 사용될 수 있는 일반적인 부류를 포함한다. 본원의 용어는 본원에 기재된 대상의 구체적 실시양태를 기재하기 위해 사용되지만, 이들의 사용은 청구범위에 개략된 것을 제외하고는 본 발명의 대상을 제한하지 않는다.
본원에 사용된 용어 "포함하는", "포함한", 또는 "갖는"은 그의 개방적인 비제한적 의미로 사용된다.
본원에 사용된 용어 "할로"는, 달리 나타내지 않는 한, 플루오로, 클로로, 브로모 또는 아이오도를 의미한다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은, 달리 나타내지 않는 한, 직쇄형 또는 분지형 모이어티를 갖는 포화 1가 탄화수소 라디칼을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "알케닐"은 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는, 달리 명시되지 않는 한, 2 내지 6개의 탄소의 1가 직쇄 또는 분지쇄 기를 나타내며, 에테닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 2-메틸-1-프로페닐, 1-부테닐, 2-부테닐 등에 의해 예시된다.
본원에 사용된 용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 2 내지 6개의 탄소 원자의 1가 직쇄 또는 분지쇄 기를 나타내며, 에티닐, 1-프로피닐 등에 의해 예시된다.
본원에 사용된 용어 "알콕시"는, 달리 나타내지 않는 한, 알킬이 상기 정의된 바와 같은 것인 O-알킬을 포함한다.
용어 "Me"는 메틸을 의미하고, "Et"는 에틸을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은, 달리 나타내지 않는 한, 총 3 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 것으로 본원에 언급된 비-방향족 포화 또는 부분 포화, 모노시클릭 또는 융합된, 스피로 또는 비융합된 비시클릭 또는 트리시클릭 탄화수소를 지칭한다. 시클로알킬의 예시적인 예는 하기 것들로부터 유도되나, 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00002
본원에 사용된 용어 "아릴"은, 달리 나타내지 않는 한, 방향족 탄화수소로부터 1개의 수소를 제거함으로써 유도된 유기 라디칼, 예컨대 페닐 또는 나프틸을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "(4-12)-원 헤테로시클릴"은, 달리 나타내지 않는 한, O, S 및 N으로부터 각각 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하며 여기서 각각의 헤테로시클릭 기가 그의 고리계 내에 4-12개의 원자를 갖고, 단 상기 기의 고리가 2개의 인접한 O 또는 S 원자를 함유하지 않는 것인 방향족 및 비-방향족 헤테로시클릭 기를 포함한다. 비-방향족 헤테로시클릭 기는 그의 고리계 내에 단지 3개의 원자를 갖는 기를 포함하지만, 방향족 헤테로시클릭 기는 그의 고리계 내에 적어도 5개의 원자를 가져야 한다. 헤테로시클릭 기는 벤조-융합된 고리계를 포함한다. 3원 헤테로시클릭 기의 예는 아지리딘이고, 4원 고리 헤테로시클릭 기의 예는 아제티디닐 (아제티딘으로부터 유도됨)이다. 5원 헤테로시클릭 기의 예는 티아졸릴이고, 7원 고리의 예는 아제피닐이고, 10원 헤테로시클릭 기의 예는 퀴놀리닐이다. 비-방향족 헤테로시클릭 기의 예는 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 디히드로푸라닐, 테트라히드로티에닐, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 피페리디노, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 티옥사닐, 피페라지닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 1,2,3,6-테트라히드로피리디닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 디옥사닐, 1,3-디옥솔라닐, 피라졸리닐, 디티아닐, 디티올라닐, 디히드로피라닐, 디히드로티에닐, 디히드로푸라닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자비시클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자비시클로[4.1.0]헵타닐, 3H-인돌릴 및 퀴놀리지닐이다. 방향족 헤테로시클릭 기의 예는 피리디닐, 이미다졸릴, 피리미디닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 푸릴, 티에닐, 이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 신놀리닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 이소인돌릴, 프테리디닐, 퓨리닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸라자닐, 벤조푸라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 나프티리디닐 및 푸로피리디닐이다. 상기 목록으로부터 유도된 상기 기는 가능한 경우에 C-부착될 수 있거나 또는 N-부착될 수 있다. 예를 들어, 피롤로부터 유도된 기는 피롤-1-일 (N-부착) 또는 피롤-3-일 (C-부착)일 수 있다. 또한, 이미다졸로부터 유도된 기는 이미다졸-1-일 (N-부착) 또는 이미다졸-3-일 (C-부착)일 수 있다. 4-12원 헤테로시클릭은 임의의 고리 탄소, 황 또는 질소 원자(들) 상에서 고리당 1 또는 2개의 옥소에 의해 임의로 치환될 수 있다. 2개의 고리 원자가 옥소 모이어티로 치환된 헤테로시클릭 기의 예는 1,1-디옥소-티오모르폴리닐이다. 4-12원 헤테로시클릭의 다른 예시적인 예는 하기 것들로부터 유도되나, 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00003
본원에 사용된 용어 "치환된"은, 지정된 원자 상의 임의의 1개 이상의 수소 원자가 나타낸 군으로부터의 선택물로 대체되며, 단 지정된 원자의 정상 원자가를 초과하지 않고 치환에 의해 안정한 화합물이 생성된다는 것을 의미한다. 치환기가 케토 (즉, =O)인 경우에, 원자 상의 2개의 수소가 대체된다. 방향족 모이어티 상에는 케토 치환기가 존재하지 않는다. 본원에 사용된 고리 이중 결합은 2개의 인접한 고리 원자 사이에 형성된 이중 결합 (예를 들어, C=C, C=N 또는 N=N)이다. 이러한 기의 비제한적 예는, 제한 없이, H, CH3, NO2, SO2N(CH3)2, SO2N((CH3)SO2), COOH, COOCH3, CO(N(CH3)), 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 아르알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 알킬아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, 알콕시 (즉, 메톡시, 에톡시 등), 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, 알콕시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 카르복실레이트, 알킬카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 아르알킬아미노카르보닐, 알케닐아미노카르보닐, 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 아르알킬카르보닐, 알케닐카르보닐, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬티오카르보닐, 트리플루오로메틸, 펜타플루오로에틸, 할로겐 (즉, 클로로, 플루오로, 브로모, 아이오도), 시아노, 티오, 아미도, 에테르, 에스테르, 히드록실, 히드록시알킬, 포화 또는 불포화 지방산, 아지도, 포스폰아미도, 술폰아미도, 락탐, 포스페이트, 포스포네이토, 포스피네이토, 아미노 (알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노 및 알킬아릴아미노 포함), 아실아미노 (알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 카르바모일 및 우레이도 포함), 아미디노, 이미노, 구아니디노, 술프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 티오카르복실레이트, 술페이트, 알킬술피닐, 술포네이토, 술파모일, 술폰아미도, 니트로, 시아노, 아지도 등을 포함한다.
본원에 개시된 대상은 1종 이상의 크립토크롬 분자를 조정하는 카르바졸-함유 술폰아미드 화합물을 제공한다. 이들 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물은 화학식 I로 제시된 일반적 구조를 갖는다.
<화학식 I>
Figure pct00004
여기서,
각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 독립적으로 N 또는 C이고;
각각의 R1 및 R2는, A, D, E, G, J, L, M, 및 Q가 C인 경우에, 독립적으로 H, 할로, 시아노, 니트로, -CF3, -CHF2, -CH2F, 트리플루오로메톡시, 아지도, 히드록실, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R8, -(C=O)-O-R8, -O-(C=O)-R8, -NR8(C=O)-R10, -(C=O)-NR8R9, -NR8R9, -NR8OR9, -S(O)cNR8R9, -S(O)d(C1-C8)알킬, -O-SO2-R8, NR8-S(O)c, -(CR8R9)d(3-10)-원 시클로알킬, -(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(C6-C10)아릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 선택되고;
각각의 R3 및 R5는 독립적으로 H, 시아노, -CF3, -CHF2, -CH2F, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R8, -(C=O)-O-R8, -(C=O)-NR8R9, -S(O)cNR8R9, -S(O)d(C1-C8)알킬, -(CR8R9)d(3-10)-원 시클로알킬, -(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(C6-C10)아릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 선택되고;
각각의 R3 기는 4-12원 모노- 또는 비시클릭 고리로서 서로에 임의로 연결되고;
각각의 R5 기는 4-12원 모노- 또는 비시클릭 고리로서 서로에 임의로 연결되고;
R4는 H, -CF3, -CHF2, -CH2F, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R8, -(C=O)-O-R8, -(C=O)-NR8R9, -(CR8R9)d(3-10)-원 시클로알킬, -(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(C6-C10)아릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴이고;
여기서 R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 고리로서 서로에 연결되고;
각각의 R8, R9 및 R10은 독립적으로 H, (C1-C6)알킬, -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)g(C6-C10)아릴, 및 -(CR11R12)g(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 선택되고;
상기 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, 및 R16의 (C1-C6)알킬, (3-10)-원 시클로알킬, (C6-C10)아릴 및 (4-10)-원 헤테로시클릴의 임의의 탄소 원자는 독립적으로 할로, 시아노, 니트로, -CF3, -CHF2, -CH2F, 트리플루오로메톡시, 아지도, 히드록실, -O-R15, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R11, -(C=O)-R15, -(C=O)-O-R11, -(C=O)-O-R15, -O-(C=O)-R11, -O-(C=O)-R15, -NR11(C=O)-R13, -(C=O)-NR11R12, -(C=O)-NR11R15, -NR11R12, -NR11R15, -NR11OR12, -NR11OR15, -S(O)cNR11R12, -S(O)cNR11R15, -S(O)d(C1-C6)알킬, -S(O)dR15, -O-SO2-R11, -O-SO2-R15, -NR11-S(O)c, -NR15-S(O)c, -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)e(C6-C10)아릴, -(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(C6-C10)아릴, -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)eO(CR11R12)f(C6-C10)아릴, -(CR11R12)eO(CR11R12)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)fS(O)d(CR11R12)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR11R12)fS(O)d(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 각각 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R14 치환기로 임의로 치환되고;
상기 R14의 (C1-C6)알킬, (3-10)-원 시클로알킬, (C6-C10)아릴 및 (4-10)-원 헤테로시클릴의 임의의 탄소 원자는 독립적으로 할로, 시아노, 니트로, -CF3, -CHF2, -CH2F, 트리플루오로메톡시, 아지도, (CH2)eOH, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R11, -(C=O)-R15, -(C=O)-O-R11, -(C=O)-O-R15, -O-(C=O)-R11, -O-(C=O)-R15, -NR11(C=O)-R13, -(C=O)-NR11R12, -NR11R12, 및 -NR11R15로부터 각각 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R16 치환기로 임의로 치환되고;
상기 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R14, 및 R15의 (4-10)-원 헤테로시클릴의 임의의 질소 원자는 독립적으로 (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R11, -(C=O)-O-R11, -(C=O)-NR11R12, -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)e(C6-C10)아릴, -(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(C6-C10)아릴, 또는 -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴로 임의로 치환되고;
각각의 R11, R12, 및 R13은 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬이고;
R15는 -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)e(C6-C10)아릴, 또는 -(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴이고;
a 및 b는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4이고;
c는 1 또는 2이고;
d는 0, 1, 또는 2이고;
e, f, 및 g는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다.
화학식 I의 화합물의 예시적 실시양태에서, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 C이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4는 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5는 H이고; R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 아미드 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f는 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 C이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4는 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5는 H이고; R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 우레아 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f는 본원에 정의된 바와 같다.
본원에 개시된 대상의 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 C-3에서 (R)-배위를 보유하는 단일 거울상이성질체이며, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 C이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4는 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5는 H이고; R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 아미드 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f는 본원에 정의된 바와 같다.
다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 C-3에서 (S)-배위를 보유하는 단일 거울상이성질체이며, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 C이고; 각각의 R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4는 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5는 H이고; R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 우레아 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f는 본원에 정의된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다:
1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온;
2-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온;
1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)이미다졸리딘-2-온;
(1R,4S)-2-((R)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온;
(R)-1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)이미다졸리딘-2-온;
(R)-1-((R)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온;
(S)-1-((S)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시-2-메틸프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온;
(R)-1-((R)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-4-메틸이미다졸리딘-2-온;
또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는"은, 본원에 기재된 화합물의 생물학적 활성 또는 특성을 없애지 않으면서 상대적으로 비-독성인 물질, 예컨대 담체 또는 희석제를 지칭하며, 즉 상기 물질은 바람직하지 않은 생물학적 효과를 초래하거나 조성물 내에 함유된 임의의 성분과 해로운 방식으로 상호작용하지 않으면서 개체에게 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 명시된 화합물의 유리 산 및 염기의 생물학적 효과를 보유하며 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 못한 것이 아닌 염을 지칭한다. 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염은 그의 산 부가 및 염기 염을 포함한다. 적합한 산 부가염은 비-독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 그 예는 아세테이트, 아디페이트, 아라비노갈락탄술포네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 보레이트, 캄실레이트, 콜레이트, 시트레이트, 에디실레이트, 에스톨레이트, 에실레이트, 포르메이트, 푸마레이트, 갈락투로네이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 헥사플루오로포스페이트, 히벤제이트, 히푸레이트, 히드로클로라이드/클로라이드, 히드로브로마이드/브로마이드, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 3-히드록시-2-나프토에이트, 1-히드록시-2-나프토에이트, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 뮤케이트, 나파디실레이트, 나프탈레이트, 2-나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 오로테이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 사카레이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 타르트레이트, 토실레이트, 트리플루오로아세테이트 및 트립토파네이트 염을 포함한다.
적합한 염기 염은 비-독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다. 그 예는 아데닌, 알루미늄, 2-아미노-2-메틸프로판-1-올, 아르기닌, 베네타민, 벤자틴, 칼슘, 콜린, 시토신, 디에틸아민, 디올아민, 에폴라민, 에르부민, 에틸렌디아민, 글루코사민, 글리신, 구아니딘, 구아닌, 히드라바민, 리신, 마그네슘, 메글루민, 모르폴린, 니코틴아미드, 올라민, 오미틴, 피페라진, 칼륨, 프로카인, 프롤린, 피리독신, 세린, 은, 나트륨, 트롤아민, 트로메타민, 티로신, 발린 및 아연 염을 포함한다. 적합한 염에 대한 검토를 위해, 문헌 ["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]을 참조한다.
화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염은 적절한 경우에 화학식 I의 화합물의 용액 및 바람직한 산 또는 염기를 함께 혼합함으로써 용이하게 제조될 수 있다. 염은 용액으로부터 침전시켜 여과에 의해 수집할 수 있거나, 또는 용매의 증발에 의해 회수할 수 있다. 염의 이온화 정도는 완전히 이온화된 것에서부터 거의 이온화되지 않은 것까지 다양할 수 있다.
화학식 I의 화합물은 또한 다형체로서 공지된 다양한 결정질 형태로 존재할 수 있다. 다형체는 화합물의 동일한 원소 조성의 상이한 결정 패킹 배열을 포함한다. 다형체는 상이한 X선 회절 패턴, 적외선 스펙트럼, 융점, 밀도, 경도, 결정 형상, 광학 및 전기 특성, 안정성, 용매화물 및 용해도를 가질 수 있다. 재결정화 용매, 결정화의 속도 및 저장 온도와 같은 다양한 인자는 단결정 형태가 우세하도록 유도할 수 있다.
"용매화물"은 이러한 화합물의 생물학적 유효성을 유지하는, 명시된 화합물의 제약상 허용되는 용매화물 형태를 의미하는 것으로 의도된다. 용매화물의 예는 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, 디메틸술폭시드, 에틸 아세테이트, 아세트산 또는 에탄올아민과 조합된 본 발명의 화합물을 포함한다. 용어 "수화물"은 용매가 물인 용매화물을 지칭한다. 용어 "알콜레이트"는 용매가 알콜인 용매화물을 지칭한다. 수화물은 1개 이상의 물 분자와 물질의 1개의 분자의 조합에 의해 형성되며, 여기서 물은 그의 분자 상태를 H2O로서 유지한다. 수화물의 비제한적 예는 1수화물, 2수화물 등을 포함한다.
본 발명의 화합물은 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물, 그의 다형체, 전구약물 및 이성질체 (광학 이성질체, 기하 이성질체, 호변이성질체 포함), 뿐만 아니라 동위원소-표지된 화학식 I의 화합물을 포함한다.
본 발명의 화합물은 전구약물로서 투여될 수 있다. 따라서, 그 자체로는 약리학적 활성이 적거나 없을 수 있는 화학식 I의 화합물의 특정 유도체가, 신체 내로 또는 신체에 투여되었을 때, 예를 들어 가수분해 절단에 의해 목적 활성을 갖는 화학식 I의 화합물로 전환될 수 있다. 이러한 유도체는 '전구약물'로 지칭된다. 전구약물의 사용에 대한 추가의 정보는 문헌 ["Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi and W. Stella), 및 "Bioreversible Carriers in Drug Design", Pergamon Press, 1987 (Ed. E. B. Roche, American Pharmaceutical Association)]에서 찾아볼 수 있다. 전구약물은 예를 들어 화학식 I의 화합물 내에 존재하는 적절한 관능기를 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 특정 모이어티, 예를 들어 문헌 ["Design of Prodrugs" by H. Bundgaard (Elsevier, 1985)]에 기재된 바와 같은 '프로-모이어티'로 대체함으로써 생성될 수 있다.
이러한 전구약물의 일부 예는, 화학식 I의 화합물이 카르복실산 관능기 (-CO2H)를 함유하는 경우에 그의 에스테르 (예를 들어, 수소의 (C1-C8)알킬로의 대체); 화학식 I의 화합물이 알콜 관능기 (-OH)를 함유하는 경우에 그의 에테르 (예를 들어, 수소의 (C1-C8)알카노일옥시메틸로의 대체); 및 화학식 I의 화합물이 2급 아미노 관능기 (-NHR, 여기서 R은 H가 아님)를 함유하는 경우에 그의 아미드 (예를 들어, 1개의 수소의 (C1-C10)알카노일로의 대체)를 포함한다. 상기 예에 따른 대체 기의 추가의 예 및 다른 전구약물 유형의 예는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
화학식 I의 화합물은 1개 이상의 비대칭 탄소 원자를 함유한다. 화학식 I의 화합물에 상응하는 모든 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체가 유사한 방법에 의해 제조될 수 있음을 이해해야 한다. 화학식 I의 화합물의 모든 광학 이성질체 및 입체이성질체, 및 그의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 간주한다. 화학식 I의 화합물에 관하여, 본 발명은 그의 라세미체, 1종 이상의 거울상이성질체 형태, 1종 이상의 부분입체이성질체 형태 또는 그의 혼합물의 사용을 포함한다. 화학식 I의 화합물은 또한 호변이성질체로서 존재할 수 있다. 본 발명은 이러한 모든 호변이성질체 및 그의 혼합물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 화합물 내에 함유된 특정 관능기는 생동배체 기, 즉 모 기와 유사한 공간 또는 전자 요건을 갖지만 상이한 또는 개선된 물리화학적 또는 다른 특성을 나타내는 기로 치환될 수 있다. 적합한 예는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있으며, 문헌 [Patini, et al. Chem Rev. 1996, 96, 3147-3176] 및 그에 인용된 참고문헌에 기재된 모이어티를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
반대이온이 광학 활성인 제약상 허용되는 산 부가 또는 염기 염, 예를 들어 D-락테이트 또는 L-리신, 또는 라세미, 예를 들어 DL-타르트레이트 또는 DL-아르기닌이 본 발명의 화학식 I의 화합물의 범주 내에 포함된다. 시스/트랜스 이성질체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 통상의 기술, 예를 들어 크로마토그래피 및 분별 결정화에 의해 분리될 수 있다. 개별 거울상이성질체의 제조/단리를 위한 통상의 기술은 광학적으로 순수한 적합한 전구체로부터의 키랄 합성, 또는 예를 들어 키랄 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 사용하는 라세미체 (또는 염 또는 유도체의 라세미체)의 분해를 포함한다.
대안적으로, 라세미체 (또는 라세미 전구체)는 적합한 광학 활성 화합물, 예를 들어 알콜, 또는 화학식 I의 화합물이 산성 또는 염기성 모이어티를 함유하는 경우에 산 또는 염기, 예컨대 타르타르산 또는 1-페닐에틸아민과 반응할 수 있다. 생성된 부분입체이성질체 혼합물은 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 분리될 수 있으며, 부분입체이성질체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 수단에 의해 상응하는 순수한 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체로 전환될 수 있다. 본 발명의 키랄 화합물 (및 그의 키랄 전구체)은 0 내지 50%, 전형적으로 2 내지 20%의 이소프로판올, 및 0 내지 5%의 알킬아민, 전형적으로 0.1%의 디에틸아민을 함유하는 탄화수소, 전형적으로 헵탄 또는 헥산으로 이루어진 이동상을 사용하여 비대칭 수지 상에서 크로마토그래피, 전형적으로 HPLC를 사용함으로써 거울상이성질체적으로- 및/또는 부분입체이성질체적으로-풍부한 형태로 수득될 수 있다. 용리액을 농축시켜 풍부한 혼합물을 수득한다. 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체 혼합물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상의 기술에 의해 분리될 수 있다. 예를 들어, 문헌 ["Stereochemistry of Organic Compounds" by E. L. Eliel (Wiley, New York, 1994)]을 참조한다.
화학식 I의 화합물은 동위원소-표지될 수 있으며, 여기서 1개 이상의 원자가, 동일한 원자 번호를 갖지만 자연에서 통상적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된다. 본 발명의 화합물에 포함되기에 적합한 동위원소의 예는 수소의 동위원소, 예컨대 2H 및 3H, 탄소의 동위원소, 예컨대 11C, 13C 및 14C, 염소의 동위원소, 예컨대 36Cl, 플루오린의 동위원소, 예컨대 18F, 아이오딘의 동위원소, 예컨대 123I 및 125I, 질소의 동위원소, 예컨대 13N 및 15N, 산소의 동위원소, 예컨대 15O, 17O 및 18O, 인의 동위원소, 예컨대 32P, 및 황의 동위원소, 예컨대 35S를 포함한다. 특정 동위원소-표지된 화학식 I의 화합물, 예를 들어 방사성 동위원소가 혼입된 것들은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소 삼중수소, 즉 3H, 및 탄소-14, 즉 14C가 혼입의 용이성 및 용이한 검출 수단의 측면에서 이러한 목적에 특히 유용하다. 보다 무거운 동위원소, 예컨대 중수소, 즉 2H로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건으로 인한 특정의 치료 이점을 제공할 수 있으며, 따라서 일부 상황에서 바람직할 수 있다. 양전자 방출 동위원소, 예컨대 11C, 18F, 15O 및 13N으로의 치환은 기질 수용체 점유율을 검사하기 위한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 연구에 유용할 수 있다. 화학식 I의 동위원소-표지된 화합물은 일반적으로 이전에 사용한 비-표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해, 또는 첨부된 실시예 및 제조예에 기재된 것과 유사한 과정에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 Cry1 및/또는 Cry2를 조정한다. 본원에 사용된 바와 같이, "조정하는"은 Cry1 및 Cry2 기능, 활성 또는 고유 특징을 증가, 감소 또는 변경시키는 것을 지칭한다. Cry1 또는 Cry2의 조정은 하기 중 임의의 것을 포함한다: Cry1 또는 Cry2에 결합시키는 것; Cry1 또는 Cry2의 변형을 억제하는 것; Cry1 또는 Cry2 국재화를 변경시키는 것; Cry1 또는 Cry2 안정화를 증가 또는 감소시키는 것; 표적에 대한 Cry1 또는 Cry2 사이의 결합을 증가 또는 감소시키는 것; Cry1 또는 Cry2 활성을 증가 또는 감소시키는 것; 및 Cry1 또는 Cry2 표적의 활성을 증가 또는 감소시키는 것.
Cry1 및 Cry2의 조정은 Cry1 및/또는 Cry2에 본 발명의 화합물을 직접 상호작용 또는 간접 상호작용을 통해 결합시키는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 본 발명의 화합물은 Cry1 및/또는 Cry2를 함유하는 복합체에 결합될 수 있다. 소분자 및 단백질 사이의 상호작용을 검출하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 면역침전 기술, 크로마토그래피 및 다양한 어레이 포맷이 있다.
Cry1 및 Cry2의 고유 특징, 예컨대 번역후 변형, 안정성 또는 국재화는 본 발명의 화합물에 의해 변경될 수 있다. Cry1 및 Cry2의 번역후 변형은 Cry1 및 Cry2의 활성, 안정성 또는 세포 국재화를 결정하는데 있어서 결정적인 역할을 할 수 있다. 일부 연구에서 인산화가 Cry1 및 Cry2 안정성을 변경할 수 있는 것으로 나타났다. 본 발명의 화합물은 Cry1 및 Cry2의 번역후 변형, 예를 들어 인산화, 유비퀴틴화, 아세틸화, 글리코실화, 리보실화 또는 SUMO화를 예방하거나 증가시킬 수 있다.
Cry1 또는 Cry2의 번역후 변형을 검출하는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 수행될 수 있다. 이러한 검출 방법은 웨스턴 블롯 및 방사성면역검정을 포함한다. Cry1 및 Cry2는 특정한 조건 하에, 예를 들어 Per1 및 Per2와의 이종이량체화 시에 핵으로 국재화된다. 핵 내에 국재화되면, Cry1 및 Cry2는 핵 CLOCK-BMAL1 복합체를 전사 개시로부터 교란시키는 역할을 하고, 그로 인해 일주기 진동을 유지하는데 결정적인 음성 피드백 루프에서의 일주기 리듬 유전자를 하향 조절한다. 단백질의 국재화는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해, 예를 들어 면역형광, 세포하 분획화 및 웨스턴 블롯 검정에 의해 용이하게 결정될 수 있다. Cry1 및 Cry2의 하향조절은 또한 일주기 진동에 있어서 결정적이며, 전사 및 단백질 수준에서 조절된다. Cry1 및 Cry2 안정성은 관련 기술분야에 공지된 방법, 뿐만 아니라 실시예 5-8에 제시된 것들에 의해 측정될 수 있다.
본원에 사용된 Cry1 및 Cry2 활성은 표적에 대한 Cry1 또는 Cry2 사이의 결합 및 하류 Cry1 또는 Cry2 표적의 활성을 포함한다. 본 발명의 화합물은 표적에 대한 Cry1 또는 Cry2 사이의 결합을 증가 또는 감소시킬 수 있다. Cry1 및/또는 Cry2에 결합하는 표적은 관련 기술분야에 공지되어 있고, Per1, Per2, 글루코코르티코이드 수용체, CLOCK-BMAL1 프로모터 서열 및 VEGF 프로모터 서열을 포함한다. 다른 표적은 발현이 Cry1 또는 Cry2에 의해 조정되는 것인 유전자, 예컨대 E-박스 서열을 그의 프로모터 내에 함유하는 유전자를 포함한다. 이러한 유전자는, 제한 없이, Dbp, Rev-erb 알파, Rev-erb 베타, Ror 알파, Ror 베타, Ror 감마, Per1, Per2, Per3, Cry1, Cry2, Pck1, G6Pc, Avp, Vip, Cck, SP (물질 P), AA-Nat, PK2 (프로키네티신 2), c-Myc, MyoD 및 Nampt를 포함한다. 본원에 언급된 Cry1 및 Cry2 표적은 또한 아직 확인된 바 없는 그러한 표적을 포함한다.
Cry1 또는 Cry2, 및 표적 사이의 결합은 예를 들어 면역침전, 효모 2종-하이브리드, 친화성 크로마토그래피에 의해 결정될 수 있다. Cry1 또는 Cry2 표적의 하류 활성은 CLOCK-BMAL1-매개 전사, CLOCK-BMAL-1 프로모터에 대한 Cry1 또는 Cry2의 결합, VEGF 프로모터에 대한 Cry1 또는 Cry2의 결합, Per1 또는 Per2 국재화 또는 안정성, CLOCK-BMAL1 이량체화, CLOCK-BMAL1 표적 유전자, 예컨대 Cry1, Cry2, Per1, Per2, Rev-erb α 및 β, Rora, TIM 단백질 및 VEGF의 발현을 포함한다. 프로모터 활성을 검출하는 방법은 실시예 3 및 4에 기재된 바와 같은 염색질 면역침전, 전기영동 이동성 변화 검정 또는 프로모터-루시페라제 검정에 의해 결정될 수 있다. 표적 유전자의 발현을 결정하는 방법은 유전자 발현 분석 및 마이크로어레이를 포함하며, 이는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 추정 효능을 결정하는 방법 또는 검정은 Cry-매개 질환 또는 장애의 치료 또는 증상의 완화에 적합한 본원에 기재된 그러한 특정한 화합물을 확인하는데 유용할 수 있다. 한 측면에서, 기준선 및 명시된 노출 시간 후의 최대 사이의 반응의 중간을 유도하는 화합물의 농도 (본원에서 EC50 값 또는 농도로서 지칭됨)는 코어 시계 유전자 발현에 대한 화합물의 효과를 측정하는 시험관내 검정에서 결정될 수 있다. 코어 시계 유전자 프로모터 서열 (즉, Per1, Per2, Cry1, Cry2 또는 Bmal1)에 작동가능하게 연결된 루시페라제 리포터는 본 발명의 화합물로 처리된 세포에 도입 (즉, 형질감염, 형질도입, 감염)되고, 발광 (또는 시계 유전자-구동 발현)은 시간 경과에 따라 측정된다. 구체적으로, 일주기 리듬과 관련한 예상 발현과 비교하여 발광 주기, 진폭 및 위상이 결정된다. 화합물에 대한 EC50 값은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 용이하게 이용가능한 방법을 사용하여 계산될 수 있다. 이러한 검정의 예는 실시예 3에 본원에 기재된다. EC50 값은 본 발명의 화합물의 효력을 평가하는데 유용하다.
다른 측면에서, 상승된 효능을 갖는 본 발명의 화합물은 생체내 검정에 의해 결정될 수 있다. 화합물은 소정 기간 동안 대상체 (즉, 마우스 모델)에 투여된다. 생물학적 샘플은 대상체로부터 단리되고, 생물학적 샘플에 존재하는 화합물의 농도 수준이 측정된다. 생물학적 샘플은, 예를 들어, 전혈 또는 그의 임의의 분획 (즉, 혈청 또는 혈장) 또는 조직, 예컨대 Cry-매개 질환 또는 장애에 의해 이환된 조직이다. 치료된 대상체의 샘플에서 측정된 농도는 시험관내 검정 (상기 및 실시예 3에 기재된 바와 같음)과 관련한 시험 시 동일한 화합물에 대한 EC50 농도 값과 비교된다. 결정된 EC50 값보다 더 큰 생체내 측정된 화합물 농도를 갖는 화합물은 본 발명의 바람직한 화합물이다. 이들 바람직한 화합물은 Cry-매개 질환 또는 장애 치료 또는 그의 증상의 완화에 대해 증가된 효능을 입증할 수 있다.
본원에 개시된 대상의 다른 측면에서, 화학식 I에 따른 화합물, 및 제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 활성 화합물을 특정한 양으로 함유하는 다양한 제약 조성물을 제조하는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있거나, 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 또한, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 제제화 및 투여 기술에 친숙하다. 이러한 주제는 예를 들어 문헌 [Goodman and Gilman's "The Pharmaceutical Basis of Therapeutics", current edition, Pergamon Press; 및 "Remington's Pharmaceutical Sciences", current edition, Mack Publishing, Co., Easton, PA]에서 논의될 것이다. 이들 기술은 본원에 기재된 방법 및 조성물의 적절한 측면 및 실시양태에 사용될 수 있다. 제약 조성물은 바람직하게는 GMP 조건 하에서 제조된다. 하기 실시예는 단지 예시적 목적을 위해 제공되며, 본 발명을 제한하는 역할을 하도록 의도되지 않는다.
본원에 기재된 화합물은 제약 조성물에 사용하기 위해 의도되기 때문에, 이는 각각 바람직하게는 실질적으로 순수한 형태로, 예를 들어 적어도 50% 순수, 적어도 55% 순수, 적어도 60% 순수, 적어도 65% 순수, 적어도 70% 순수, 적어도 75% 순수, 적어도 80% 순수, 적어도 85%, 적어도 90% 순수, 적어도 95% 순수, 적어도 96% 순수, 적어도 97% 순수, 적어도 98% 순수, 또는 적어도 99% 순수한 형태로 제공된다는 것이 용이하게 이해될 것이다. 본원에 제공된 백분율은 중량에 대한 중량 기준의 것이다. 화합물의 불순한 제제는 제약 조성물에 사용되는 보다 순수한 형태를 제조하기 위해 사용될 수 있고; 이들 덜 순수한 화합물의 제제는 적어도 1%, 보다 적합하게는 적어도 5%, 예를 들어 10 내지 49%의 화학식 I의 화합물을 함유해야 한다.
화학식 I의 화합물은 Cry 매개 질환의 치료에 사용하기에 적합한 국소, 경구, 비강, 안구, 점막, 직장, 질 및 비경구 제약 제제로 제공될 수 있다. 본 발명의 화합물은 정제 또는 캡슐로서, 유성 또는 수성 현탁액, 로젠지, 트로키, 분말, 과립, 에멀젼, 시럽 또는 엘릭시르로서 경구로 투여될 수 있다. 경구 사용을 위한 조성물은 제약상 우아하고 맛우수한 제제를 제조하기 위해 향미, 감미, 착색 및 보존을 위한 1종 이상의 작용제를 포함할 수 있다. 정제는 이러한 정제의 제조에서의 보조제로서 제약상 허용되는 부형제, 담체, 희석제 및 아주반트를 함유할 수 있다. 관련 기술분야에서 통상적인 바와 같이, 이들 정제는 장기간에 걸친 지속 작용을 제공하기 위해 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시키도록, 제약상 허용되는 장용 코팅, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트로 코팅될 수 있다. 난수용성 화합물의 용해 속도는 분무-건조된 분산액, 예컨대 문헌 [Takeuchi, H. et al. J. Pharm. Pharmacol. 1987, 39, 769-773]에 기재된 것들을 사용함으로써 증진될 수 있다.
경구 사용을 위한 제제는 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합된 경질 젤라틴 캡슐 형태로 제공될 수 있다. 이들은 또한 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예컨대 땅콩 오일, 액상 파라핀 또는 올리브 오일과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐 형태로 제공될 수 있다.
수성 현탁액은 통상적으로 활성 성분을 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합하여 함유한다. 이러한 부형제는 현탁화제, 예컨대 콜리포르, 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검; 분산제 또는 습윤제 (자연 발생 포스파티드, 예컨대 레시틴, 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방산의 축합 생성물, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방산 알콜의 축합 생성물, 예컨대 헵타데카에틸렌옥시세탄올, 에틸렌 옥시드와, 지방산 및 헥시톨로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트, 또는 지방산 헥시톨 무수물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트일 수 있음)일 수 있다.
제약 조성물은 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 현탁액제의 형태일 수 있다. 이러한 현탁액은 공지된 방법에 따라 수성 등장성 용액 또는 현탁액으로서 제제화될 수 있고, 좌제는 지방 에멀젼 또는 현탁액으로부터 제조될 수 있다. 조성물은 멸균될 수 있고/거나, 보조제, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용해 촉진제, 삼투압 조절용 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 추가로, 이들은 또한 다른 치료상 유익한 물질을 함유할 수 있다. 멸균 주사가능한 제제는 또한, 예를 들어 1,3-부탄디올 중의 용액과 같은, 비-독성의 비경구적으로-허용되는 희석제 또는 용매 중의 현탁액으로서 제제화될 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함한 임의의 완하성 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한 지방산, 예컨대 올레산이 주사가능한 제제에 사용된다.
화학식 I의 화합물은 또한 약물의 직장 투여를 위한 좌제 형태로 투여될 수 있다. 이들 조성물은, 약 25℃에서는 고체이지만 직장 온도에서는 액체이며, 따라서 직장 내에서 용융되어 약물을 방출시키는 적합한 비-자극성 부형제와 약물을 혼합함으로써 제조될 수 있다. 이러한 물질은 코코아 버터 및 다른 글리세리드를 포함한다.
국소 또는 경피 사용을 위한 제제, 예를 들어 본 발명의 화합물을 함유하는 크림, 연고, 젤리, 용액 또는 현탁액이 사용된다. 경피 적용에 적합한 제제는 유효량의 본 발명의 화합물을 담체와 함께 포함한다. 담체는 숙주의 피부를 통과하는 것을 돕기 위해 흡수가능한 약리학상 허용되는 용매를 포함할 수 있다. 예를 들어, 경피 장치는 백킹 부재, 임의로 담체와 함께 화합물을 함유하는 저장소, 임의로 장기간에 걸쳐 제어된 예정 속도로 숙주의 피부에 화합물을 전달하기 위한 속도 제어 장벽 및 장치가 피부에 부착되도록 하는 수단을 포함하는 붕대 형태이다. 또한, 매트릭스 경피 제제 및 이온영동 장치가 사용될 수 있다. 예를 들어, 피부 및 눈으로의 국소 적용에 적합한 제제는, 바람직하게는 관련 기술분야에 널리 공지된 수용액, 연고, 크림 또는 겔이다. 이러한 제제는 가용화제, 안정화제, 장성 증진제, 완충제 및 보존제를 함유할 수 있다.
활성 화합물은 임플란트 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 포함한 제어 방출 제제와 같이, 화합물이 신체로부터 빠르게 제거되는 것을 보호할 제약상 허용되는 담체와 함께 제조될 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 상기 제제의 제조 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다.
화학식 I의 화합물은 또한 리포솜 전달 시스템, 예컨대 소형 단층 소포, 대형 단층 소포 및 다층 소포의 형태로 제조될 수 있다. 리포솜은 다양한 인지질, 예컨대 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린으로부터 형성될 수 있다.
활성 제약 성분 중 어느 하나 또는 둘 다의 적합한 연장 방출 형태는 매트릭스 정제 또는 캡슐 조성물일 수 있다. 물질을 형성하는 적합한 매트릭스는 예를 들어 왁스 (예를 들어, 카르나우바, 비즈 왁스, 파라핀 왁스, 세레신, 쉘락 왁스, 지방산, 및 지방 알콜), 오일, 경화 오일 또는 지방 (예를 들어, 경화 평지씨 오일, 피마자 오일, 우지, 팜 오일 및 대두 오일), 및 중합체 (예를 들어, 히드록시프로필 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 및 폴리에틸렌 글리콜)를 포함한다. 물질을 정제화하는 다른 적합한 매트릭스는 미세결정질 셀룰로스, 분말화 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 기타 담체, 및 충전제이다. 정제는 또한 과립, 코팅 분말 또는 펠릿을 함유할 수 있다. 정제는 또한 다중-층일 수 있다. 다중-층 정제는 활성 성분들이 현저하게 상이한 약동학적 프로파일을 갖는 경우에 특히 바람직하다. 임의로, 완성 정제는 코팅 또는 비코팅될 수 있다.
코팅 조성물은 전형적으로 불용성 매트릭스 중합체 (코팅 조성물의 대략 15-85 중량%) 및 수용성 물질 (예를 들어, 코팅 조성물의 대략 15-85 중량%)을 함유한다. 임의로, 장용 중합체 (코팅 조성물의 대략 1 내지 99 중량%)가 사용되거나 포함될 수 있다. 적합한 수용성 물질은 중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 알콜 및 단량체 물질, 예컨대 당 (예를 들어, 락토스, 수크로스, 프룩토스, 만니톨 등), 염 (예를 들어, 염화나트륨, 염화칼륨 등), 유기 산 (예를 들어, 푸마르산, 숙신산, 락트산, 및 타르타르산) 및 그의 혼합물을 포함한다. 적합한 장용 중합체는 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 아세테이트 숙시네이트, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 프탈레이트, 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로스 아세테이트 트리멜리테이트, 쉘락, 제인, 및 카르복실 기를 함유하는 폴리메타크릴레이트를 포함한다.
코팅 조성물은 코팅 블렌드의 특성, 예컨대 주성분 또는 성분들의 혼합물의 유리 전이 온도, 또는 코팅 조성물을 적용하기 위해 사용된 용매에 따라 가소화될 수 있다. 적합한 가소제가 코팅 조성물의 0 내지 50 중량%로 첨가될 수 있고, 예를 들어 디에틸 프탈레이트, 시트레이트 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, 아세틸화 글리세리드, 아세틸화 시트레이트 에스테르, 디부틸세바케이트 및 피마자 오일을 포함한다. 원하는 경우에, 코팅 조성물은 충전제를 포함할 수 있다. 충전제의 양은 코팅 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 1% 내지 대략 99 중량%일 수 있고, 불용성 물질, 예컨대 이산화규소, 이산화티타늄, 활석, 카올린, 알루미나, 전분, 분말화 셀룰로스, MCC 또는 폴라크릴린 포타슘일 수 있다. 코팅 조성물은 유기 용매 또는 수성 용매 또는 그의 혼합물 중의 용액 또는 라텍스로서 적용될 수 있다. 용액이 적용되는 경우에, 용매는 용해된 고체의 총 중량을 기준으로 하여 대략 25-99 중량%의 양으로 존재할 수 있다. 적합한 용매는 물, 저급 알콜, 저급 염소화 탄화수소, 케톤 또는 그의 혼합물이다. 라텍스가 적용되는 경우에, 용매는 라텍스 중 중합체 물질의 양을 기준으로 하여 대략 25-97 중량%의 양으로 존재한다. 용매는 주로 물일 수 있다.
본 발명의 화합물의 투여량 수준은 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 100 mg/kg 체중 정도, 또는 그 사이의 임의의 증분이다. 바람직한 투여량 비율은 약 30 mg/kg 체중 내지 약 100 mg/kg 체중이다. 총 1일 용량은 단일 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 화학식 I의 화합물의 적합한 치료 용량은 1일에 수용자의 킬로그램 체중당 1 마이크로그램 (μg) 내지 1000 밀리그램 (mg)의 범위, 및 그 사이의 임의의 증분, 예컨대, 예를 들어, 1, 2, 3, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 또는 1000 μg (1 mg); 2, 3, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 또는 1000 mg일 수 있다. 그러나, 임의의 특정한 환자에 대한 구체적 용량 수준은 투여되는 특정한 화합물의 활성, 연령, 체중, 전반적 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 투여 경로, 배출 속도, 약물 조합, 및 요법을 받는 특정한 질환의 중증도를 포함한 다양한 요인에 따라 달라질 것으로 이해될 것이다.
투여 요법은 최적의 목적 반응을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 여러 분할 용량이 경시적으로 투여될 수 있거나, 또는 용량이 치료 상황의 위급성에 따라 지시되는 바와 같이 비례적으로 감소 또는 증가될 수 있다. 비경구 조성물은 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 투여 단위 형태는 치료될 포유동물 대상체를 위한 단위 투여량으로 적합한 물리적 이산 단위를 지칭하며; 각각의 단위는 계산된 활성 화합물을 예정된 양으로 함유하여 요구되는 제약 담체와 함께 목적 치료 효과를 생성한다. 본 발명의 투여 단위 형태에 관한 상세사항은 (a) 치료제 고유의 특징 및 달성하고자 하는 특정한 치료 또는 방지 효과, 및 (b) 개체에서 감수성 치료를 위해 이러한 활성 화합물을 배합하는 분야에 존재하는 제한사항에 의해 지시되고, 이에 직접적으로 좌우된다. 따라서, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 제공된 개시내용을 바탕으로 용량 및 투여 요법이 치료 분야에 널리 공지된 방법에 따라 조정된다는 것을 인지할 것이다. 즉, 최대 허용 용량이 용이하게 확립될 수 있고, 검출가능한 치료 이익을 환자에게 제공하는 유효량이 또한 결정될 수 있으며, 검출가능한 치료 이익을 환자에게 제공하기 위해 각각의 작용제를 투여하기 위한 시간적 요건일 수 있다. 따라서, 특정 용량 및 투여 요법이 본원에 예시되지만, 이들 예는 어떠한 방식으로도 본 발명을 실시하는데 있어서 환자에게 제공될 수 있는 용량 및 투여 요법을 제한하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 및 조성물은 대상체에게 대략 취침 시간 또는 수면 시간에 밤에 투여된다. 바람직하게는, 본원에 기재된 화합물 및 조성물은 대상체에게 취침 시간 전후 6시간, 5시간, 4시간, 3시간, 120분, 90분, 60분, 45분, 30분, 25분, 20분, 15분, 10분, 5분 내에, 또는 직전 또는 직후에 투여된다. 바람직하게는, 본 발명의 화합물 및 조성물은 대상체에게 취침 시간 직전 2시간 내에 투여된다. 본원에 사용된 "취침 시간"은 대상체가 휴식 또는 수면에 들기위해 침대로 가는 밤 시간을 지칭한다.
다른 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 및 조성물은 음식물의 존재 또는 부재 하에 투여될 수 있다. 화합물 또는 조성물이 음식물과 함께 투여되는 경우에, 화합물 또는 조성물을 아침식사, 점심식사, 저녁식사 또는 간식과 같은 식사 전 또는 후 4시간 내에 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 식사 전후 6시간 내에, 5시간 내에, 4시간 내에, 3시간 내에, 120분 내에, 90분 내에, 60분 내에, 45분 내에, 30분 내에, 25분 내에, 20분 내에, 15분 내에, 10분 내에, 5분 내에, 또는 직전 또는 직후에 투여된다. 바람직하게는, 본 발명의 화합물 및 조성물은 대상체에게 저녁식사 후 4시간 내에, 3시간 내에, 120분 내에, 90분 내에, 또는 60분 내에 투여된다.
본원에 개시된 대상의 또 다른 측면에서, 치료 유효량의 본원의 상기 실시양태 중 어느 하나에 기재된 바와 같은 화학식 I에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, Cry-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 본 발명의 바람직한 실시양태는, Cry의 비정상적 수준을 특징으로 하는 질환 또는 장애가 당뇨병, 당뇨병 연관 합병증, 대사 증후군, 인슐린 저항성 증후군, 비만, 녹내장, 쿠싱 증후군, 염증성 장애, 미토콘드리아 장애, 프리드리히 운동실조, 정신병적 우울증, 알츠하이머병, 신경병증성 통증, 약물 남용, 골다공증, 암, 황반 변성 및 근병증으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, Cry-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법이다. 본원에 개시된 화합물에 의해 치료되는 특히 바람직한 Cry-매개 질환 또는 장애는 당뇨병, 당뇨병성 합병증 예컨대 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 신병증, 백내장 형성, 녹내장, 당뇨병성 혈관병증, 아테롬성동맥경화증; 비알콜성 지방간염 (NASH); 비-알콜성 지방간 질환 (NAFLD); 천식; 및 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "투여하다", "투여하는", "투여" 등은 생물학적 작용의 목적 부위로의 화합물 또는 조성물의 전달을 가능하게 하도록 사용될 수 있는 방법을 지칭한다. 이들 방법은 경구, 비경구, 국소, 점막, 안구, 눈, 질 및 직장 투여를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 문헌 [Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon; 및 Remington's, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, Pa]에서 논의된 바와 같이, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 기재된 화합물 및 방법과 함께 이용할 수 있는 투여 기술에 친숙하다. 본원에 사용된 바와 같이, 제약 조성물의 "비경구 투여"는 대상체 조직의 물리적 파괴 및 조직의 파괴를 통한 제약 조성물의 투여를 특징으로 하는 임의의 투여 경로를 포함한다. 따라서, 비경구 투여는 조성물의 주사, 외과적 절개를 통한 조성물의 적용, 조직-침투 비외과적 상처를 통한 조성물의 적용 등에 의한 제약 조성물의 투여를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특히, 비경구 투여는 피하, 복강내, 근육내 및 흉골내 주사, 및 신장 투석 주입 기술을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 것으로 고려된다.
본 발명의 문맥에서 "대상체"는 바람직하게는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 비-인간 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말 또는 소일 수 있으나, 이들 예에 제한되지는 않는다. 인간 이외의 포유동물은 유리하게는 ob/ob 마우스와 같은, Cry-매개 질환 또는 장애의 동물 모델을 나타내는 대상체로서 사용될 수 있다. 대상체는 남성 또는 여성일 수 있다. 대상체는 이전에 Cry-매개 질환 또는 장애를 앓는 것으로 진단 또는 확인된 바 있는 대상체, 임의로 질환 또는 장애에 대한 치료적 개입 또는 치료를 이미 받은 바 있거나 또는 받고 있는 대상체일 수 있다. 대안적으로, 대상체는 또한 이전에 Cry-매개 질환 또는 장애를 앓는 것으로 진단된 바 없는 대상체일 수 있다. 예를 들어, 대상체는 Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 1종 이상의 위험 인자를 나타내는 대상체, 또는 Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 위험 인자를 나타내지 않는 대상체, 또는 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 무증상인 대상체일 수 있다. 대상체는 또한 Cry-매개 질환 또는 장애가 발생하였거나 또는 그의 발생 위험에 있는 대상체, 또는 Cry-매개 질환 또는 장애가 재발하였거나 또는 그의 재발 위험에 있는 대상체일 수 있다. 대상체는 또한 본원에 개시된 화합물 및 조성물의 단독으로, 또는 다른 치료제, 수술 또는 상기 것들의 임의의 조합과 조합하여 투여하는지의 여부에 관계없이, 이전에 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 치료받은 바 있는 대상체일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "대상체" 및 "환자"는 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
"Cry-매개 질환 또는 장애"는, 제한 없이, 당뇨병 (제한 없이, 인슐린-의존성 "제I형" 당뇨병, 비-인슐린 의존성 "제II형" 당뇨병, 임신성 당뇨병 및 당뇨병-관련 합병증, 예컨대 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 심근병증, 당뇨병성 신병증, 치주 질환, 및 당뇨병성 케톤산증 포함), 대사 증후군, 인슐린 저항성 증후군, 비만, 녹내장, 쿠싱 증후군, 정신병적 우울증, 알츠하이머병, 신경병증성 통증, 약물 남용, 골다공증, 암, 황반 변성, 및 근병증을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "치료하는", "치료하다" 또는 "치료"는 예방적 (예를 들어 방지적), 고식적, 보조적 및 치유적 치료를 포함한다. 예를 들어, 본원에 사용된 바와 같은 제2형 당뇨병의 치료는 제2형 당뇨병을 앓는 환자 또는 제2형 당뇨병의 위험에 있는 환자를 본원에 기재된 방법에 따라 치료할 수 있다는 것을 의미한다. 예방적 치료를 받는 환자의 경우에, 예방적으로 치료되는 질환 상태의 발생률에서 유도된 감소는 예방적 치료의 측정가능한 결과이다.
본원에 사용된 용어 "완화시키는" 또는 "완화시키다"는 장애의 징후 또는 증상의 중증도를 감퇴, 감소, 또는 억제하는 과정을 기재한다. 중요하게는, 증상은 제거되지 않고 완화될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물의 투여는 증상의 제거를 일으키지만, 제거가 요구되지는 않는다. 치료 유효량의 본원에 기재된 화합물 또는 제약 조성물은 증상의 중증도를 감소시킬 것으로 기대된다.
본원에 사용된 용어 "증상"은 질환, 질병, 손상, 또는 체내에서 정상적이지 않은 어떤 것의 적응증으로서 정의된다. 증상은 증상을 겪는 개체에 의해 느껴지거나 인지되지만, 다른 이들에 의해서는 용이하게 인지되지 않을 수 있다. 다른 이들은 건강-관리 또는 임상 전문가에 의해 규정된다.
본원에 사용된 용어 "대사 증후군"은 달리 나타내지 않는 한 건선, 당뇨병, 상처 치유, 염증, 신경변성 질환, 갈락토스혈증, 메이플 시럽뇨 질환, 페닐케톤뇨, 고사르코신혈증, 티민 우라실뇨, 술핀뇨, 이소발레르산혈증, 사카로퓨린뇨, 4-히드록시부티르산뇨, 글루코스-6-포스페이트 데히드로게나제 결핍, 및 피루베이트 데히드로게나제 결핍을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "비만" 및 "비만증"은 일반적으로 개체의 연령, 성별 및 키에 대한 평균 체중에 비해 약 20-30％ 이상인 개체를 지칭한다. 전문적으로, "비만증"은 남성의 경우에 체질량 지수가 27.8 kg/m2를 초과하는 개체, 및 여성의 경우에 체질량 지수가 27.3 kg/m2를 초과하는 개체로서 정의된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 방법이 상기 기준에 포함되는 이들에 제한되지 않음을 용이하게 인지한다. 사실상, 본 발명의 방법은 또한 이들 통상적 기준에 속하지 않는 개체, 예를 들어 비만이 되기 쉬울 수 있는 개체를 통해 실시될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "염증성 장애"는 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 건선, 연골석회증, 통풍, 염증성 장 질환, 궤양성 결장염, 크론병, 섬유근육통 및 악액질과 같은 장애를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "쿠싱 증후군"은 코르티솔의 상승된 수준에의 장기간 노출로부터 발생된 징후 및 증상의 집합을 지칭한다. 쿠싱 증후군은 내인성 또는 외인성 원인으로부터 발생할 수 있다. 내인성 쿠싱 증후군의 원인은 뇌하수체 종양 (또한 쿠싱병으로 불림), 부신 종양, 및 다른 종양 (소세포 폐암을 포함하나, 이에 제한되지는 않음)으로부터의 부신피질자극 호르몬 (ACTH) 및/또는 코르티코트로핀-방출 호르몬 (CRH)의 이소성 분비를 포함한다. 외인성 (또는 의인성) 쿠싱 증후군은 천식, 건선 및 류마티스 관절염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 염증성 장애를 포함한 다양한 장애의 치료를 위한 코르티코스테로이드의 사용으로부터 발생된다.
본원에 사용된 용어 "미토콘드리아 질환"은 미토콘드리아 뇌근병증, 락트산 산증, 및 졸중-유사 에피소드 (MELAS), 불균일-적색 근섬유를 갖는 근간대성 간질 (MERRF), 컨스-세이어 증후군, 만성 진행성 외안근마비, 레베르 유전성 시신경병증, 라이 증후군, 당뇨병, 난청, 신경원성 근육 약화, 운동실조, 및 색소성 망막염 (NARP) 및 근신경원성 위장 뇌병증과 같은 질환을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "암"은 비제어된 세포 성장 및/또는 증식을 특징으로 하는 장애 또는 질환을 지칭하며, 양성 및 악성 암, 과다증식성 장애 및 질환, 및 전이를 포함한다. 특히 바람직한 암의 예는 폐암; 뇌암; 췌장암; 두경부암 (예를 들어, 편평 세포 암종); 유방암; 결장직장암; 간암; 위암; 신장암; 난소암; 전립선암; 또는 선암종을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 고형 종양 암 또는 상피암을 포함한다. 다른 암은 증가된 VEGF 발현, 증가된 혈관신생 또는 저산소 종양을 갖는 것들이다.
본원에 사용된 어구 "치료 유효량"은 연구원, 수의사, 의사 등에 의해 정해지는, 조직, 계, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 이끌어 낼 약물 또는 제약 작용제의 양을 지칭한다.
본원에 사용된 어구 "혈액 글루코스 수준을 낮추는데 효과적인...양"은 목적 효과를 달성하기에 충분히 높은 순환 농도를 제공하기에 충분한 화합물의 수준을 지칭한다. 이러한 농도는 전형적으로 약 10 nM 내지 2 μM 범위에 속하고; 약 100 nM 내지 500 nM의 범위의 농도가 바람직하다. 앞서 주지된 바와 같이, 상기 제시된 바와 같은 화학식 I의 정의에 속하는 다양한 화합물의 활성이 상당히 달라질 수 있기 때문에, 그리고 개별 대상체가 증상의 중증도에 있어서 광범위한 차이를 나타낼 수 있기 때문에, 치료에 대한 대상체의 반응을 결정하고 그에 따라 투여량에 차이를 주는 것은 진료의에게 달려있다.
본원에 사용된 어구 "인슐린 저항성"은 전신 또는 개별 조직, 예컨대 골격근 조직, 심근 조직, 지방 조직 또는 간 조직에서의 인슐린의 작용에 대한 감소된 감수성을 지칭한다. 인슐린 저항성은 당뇨병을 앓거나 앓지 않는 많은 개체에서 발생한다.
본원에 사용된 어구 "인슐린 저항성 증후군"은 인슐린 저항성, 고인슐린혈증, 비-인슐린 의존성 당뇨병 (NIDDM), 동맥 고혈압, 중심 (내장) 비만 및 이상지혈증을 포함하는 징후의 클러스터를 지칭한다.
본 발명의 화합물은 또한 글루코스 이용 장애 및 인슐린 저항성과 연관된 다른 대사 장애, 예를 들어 NIDDM의 주요 후기-단계 합병증, 예컨대 당뇨병성 혈관병증, 아테롬성동맥경화증, 비-알콜성 지방간염 (NASH), 비-알콜성 지방간 질환 (NAFLD), 당뇨병성 신병증, 당뇨병성 신경병증, 및 당뇨병성 안구 합병증, 예컨대 망막병증, 백내장 형성 및 녹내장, 및 NIDDM과 연계된 많은 다른 합병증, 예를 들어 이상지혈증, 글루코코르티코이드-유도된 인슐린 저항성, 다낭성 난소 증후군, 비만, 고혈당증, 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 고트리글리세리드혈증, 고인슐린혈증, 및 고혈압의 치료에 유용할 수 있다. 이들 상태의 간단한 설명은 임의의 의학 사전, 예를 들어 문헌 ["Stedman's Medical Dictionary" (Xth Ed.)]에서 얻을 수 있다.
본원에 개시된 화합물 및 조성물은 본원에 정의된 바와 같은 1종 이상의 추가의 치료제와 조합되어 치료 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 상승작용 효과가 Cry-매개 질환 또는 장애의 치료에 사용되는 다른 물질과 함께 일어날 수 있다. 본 발명의 화합물이 다른 치료제와 함께 투여되는 경우, 공-투여된 화합물의 투여량은 물론 사용된 공-약물의 유형, 사용된 구체적 약물, 치료할 상태 등에 따라 달라질 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 상호교환가능하게 사용된 용어 "조합 치료", "조합 요법", "조합된 치료" 또는 "조합적 치료"는 적어도 2종의 상이한 치료제를 사용한 개체의 치료를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "공-투여" 또는 "조합 투여" 등은 선택된 치료제를 단일 대상체에게 투여하는 것을 포괄하는 의미이고, 작용제가 반드시 동일한 투여 경로에 의해 또는 동시에 투여되는 것은 아닌 치료 요법을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 기재된 조합 치료는 본원에 개시된 화합물 및 조성물 및 1종 이상의 추가의 치료제의 공동-작용으로부터 유익한 효과를 제공하는 것으로 의도된다. 조합의 유익한 효과는 본원에 개시된 화합물 및 치료제의 조합으로부터 발생된 약동학적 또는 약역학적 공동-작용을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 전형적으로 조합물로의 이들 치료제의 투여는 정의된 기간 (통상적으로 선택된 조합에 따라 분, 시간, 일 또는 주)에 걸쳐 수행된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 1종 이상의 추가의 치료제와 조합되어 동시 또는 순차적 방식으로 투여된다. 동시에 투여되는 경우에, 본 발명의 화합물(들)은, 예를 들어, 추가의 치료제의 것과 동일한 캡슐로 투여될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 화합물 및 추가의 치료제는 동시에 투여될 개별 조성물 (즉, 캡슐)에 포괄된다. 순차적으로 투여되는 경우에, 본 발명의 화합물(들)은 추가의 치료제의 투여 전 또는 후에 투여될 수 있다. 용어 "제약 조합물"은 1종 초과의 활성 성분의 혼합 또는 조합으로부터 생성된 생성물을 의미하고, 활성 성분의 고정 조합물 및 비-고정 조합물을 둘 다 포함한다. "고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 본원에 개시된 화합물 및 추가의 치료제가 둘 다 단일 개체 또는 투여량의 형태로 동시에 환자에게 투여된다는 것을 의미한다. 용어 "비-고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 본원에 개시된 화합물 및 추가의 치료제가 둘 다 개별 개체로서 동시에, 공동으로 또는 구체적 시간 제한없이 순차적으로 환자에게 투여되는 것을 의미하며, 여기서 이러한 투여는 환자 체내에서 2종의 화합물의 치료 유효 수준을 제공한다. 후자는 또한 칵테일 요법, 예를 들어 3종 이상의 활성 성분의 투여에도 적용된다.
당뇨병, 대사 증후군, 비만, 인슐린 저항성 증후군, 당뇨병성 합병증 또는 암을 치료하기 위한 치료제는, 제한 없이 하기의 것들: 인슐린, 혈당강하제, 항당뇨병제, 항염증제, 지질 감소제, 항고혈압제, 예컨대 칼슘 채널 차단제, β-아드레날린성 수용체 차단제, 시클로옥시게나제-2 억제제, 안지오텐신 시스템 억제제, ACE 억제제, 레닌 억제제, 화학요법제, 방사선요법, 호르몬-조정제, 면역조정제, 항혈관신생제를 다른 통상의 위험 인자 변경제와 함께 포함한다.
인슐린은 신속 작용 형태, 예컨대 인슐린 리스프로 rDNA 기원: 휴마로그(HUMALOG) (1.5 mL, 10 mL, 일라이 릴리 앤드 캄파니(Eli Lilly and Company), 인디애나주 인디애나폴리스), 인슐린 주사 (속효성 인슐린) 형태 소 및 돼지 (속효성 일레틴(ILETIN) I, 일라이 릴리], 인간: rDNA: 휴물린(HUMULIN) R (일라이 릴리), 노보린(NOVOLIN) R (노보 노르디스크(Novo Nordisk)), 반합성: 벨로슐린(VELOSULIN) 인간 (노보 노르디스크), rDNA 인간, 완충: 벨로슐린 BR, 돼지: 속효성 인슐린 (노보 노르디스크), 정제된 돼지: 돼지 속효성 일레틴 II (일라이 릴리), 속효성 정제된 돼지 인슐린 (노보 노르디스크) 및 속효성 (농축) 일레틴 II U-500 (500 단위/mL, 일라이 릴리); 중간-작용 형태, 예컨대 인슐린 아연 현탁액, 소 및 돼지: 렌테(LENTE) 일레틴 G I (일라이 릴리), 인간, rDNA: 휴물린 L (일라이 릴리), 노보린 L (노보 노르디스크), 정제된 돼지: 렌테 일레틴 II (일라이 릴리), 이소판 인슐린 현탁액 (NPH): 소 및 돼지: NPH 일레틴 I (일라이 릴리), 인간, rDNA: 휴물린 N (일라이 릴리), 노보린 N (노보 노르디스크), 정제된 돼지: 돼지 NPH 일레틴 II (일라이 릴리), NPH-N (노보 노르디스크); 및 장기-작용 형태, 예컨대 인슐린 아연 현탁액, 연장 (울트라렌트(ULTRALENTE), 일라이 릴리) 인간, rDNA: 휴물린 U (일라이 릴리)를 포함한다.
혈당강하제는, 제한 없이, 술포닐우레아: 아세토헥사미드 (디멜로르(Dymelor)), 클로르프로파미드 (다이아비네스(Diabinese)), 톨부타미드 (오리나제(Orinase)); 제2-세대 술포닐우레아: 글리피지드 (글루코트롤(Glucotrol), 글루코트롤 XL), 글리부리드 (디아베타(Diabeta); 마이크로나제(Micronase); 글리나제(Glynase)), 글리메피리드 (아마릴(Amaryl)); 비구아니드: 메트포르민 (글루코파지(Glucophage)); α-글루코시다제 억제제: 아카르보스 (프레코스(Precose)), 미글리톨 (글리세트(Glyset)), 티아졸리딘디온: 로시글리타존 (아반디아(Avandia)), 피오글리타존 (악토스(Actos)), 트로글리타존 (레줄린(Rezulin)); 메글리티니드: 레파글리니드 (프란딘(Prandin)); 및 다른 혈당강하제, 예컨대 아카르보스; 부포르민; 부톡사민 히드로클로라이드; 카미글리보스; 시글리타존; 엔글리타존 소듐; 다르글리타존 소듐; 에토포르민 히드로클로라이드; 글리아밀리드; 글리보무리드; 글리세타닐 글리클라지드 소듐; 글리플루미드; 글루카곤; 글리헥사미드; 글리미딘 소듐; 글리옥타미드; 글리파라미드; 리노글리리드; 리노글리리드 푸마레이트; 메틸 팔목시레이트; 팔목시레이트 소듐; 피로글리리드 타르트레이트; 프로인슐린 인간; 세글리티드 아세테이트; 톨라자미드; 톨피라미드; 조폴레스타트를 포함한다.
항당뇨병제는, 제한 없이, 디펩티딜 펩티다제 IV 억제제 예컨대 시타글립틴, 알로글립틴, 빌다글립틴, 삭사글립틴, 리나글립틴, 아나글립틴, 테네리글립틴, 게미글립틴, 두토글립틴, 또는 현재 개발 중인 임의의 다른 글립틴, 베르베린 및 루페올; 및 GLP-1 효능제 예컨대 엑세나티드, 리라글루티드, 알비글루티드, 타스포글루티드 및 AVE0010을 포함한다.
항염증제는 알클로페낙; 알클로메타손 디프로피오네이트; 알게스톤 아세토니드; α-아밀라제; 암시나팔; 암시나피드; 암페낙 소듐; 아미프릴로스 히드로클로라이드; 아나킨라; 아니롤락; 아니트라자펜; 아파존; 발살라지드 디소듐; 벤다작; 베녹사프로펜; 벤지다민 히드로클로라이드; 브로멜라인; 브로페라몰; 부데소니드; 카프로펜; 시클로프로펜; 신타존; 클리프로펜; 클로베타솔 프로피오네이트; 클로베타손 부티레이트; 클로피락; 클로타카손 프로피오네이트; 코르메타손 아세테이트; 코르토독손; 데플라자코르트; 데소니드; 데스옥시메타손; 덱사메타손 디프로피오네이트; 디클로페낙 포타슘; 디클로페낙 소듐; 디플로라손 디아세테이트; 디플루미돈 소듐; 디플루니살; 디플루프레드네이트; 디프탈론; 디메틸 술폭시드; 드로시노니드; 엔드리손; 엔리모맙; 에놀리캄 소듐; 에피리졸; 에토돌락; 에토페나메이트; 펠비낙; 페나몰; 펜부펜; 펜클로페낙; 펜클로락; 펜도살; 펜피팔론; 펜티아작; 플라잘론; 플루아자코르트; 플루페남산; 플루미졸; 플루니솔리드 아세테이트; 플루닉신; 플루닉신 메글루민; 플루오코르틴 부틸; 플루오로메톨론 아세테이트; 플루쿠아존; 플루르비프로펜; 플루레토펜; 플루티카손 프로피오네이트; 푸라프로펜; 푸로부펜; 할시노니드; 할로베타솔 프로피오네이트; 할로프레돈 아세테이트; 이부페낙; 이부프로펜; 이부프로펜 알루미늄; 이부프로펜 피코놀; 일로니답; 인도메타신; 인도메타신 소듐; 인도프로펜; 인독솔; 인트라졸; 이소플루프레돈 아세테이트; 이속세팍; 이속시캄; 케토프로펜; 로페미졸 히드로클로라이드; 로르녹시캄; 로테프레드놀 에타보네이트; 메클로페나메이트 소듐; 메클로페남산; 메클로리손 디부티레이트; 메페남산; 메살라민; 메세클라존; 메틸프레드니솔론 술렙타네이트; 모르니플루메이트; 나부메톤; 나프록센; 나프록센 소듐; 나프록솔; 니마존; 올살라진 소듐; 오르고테인; 오르파녹신; 옥사프로진; 옥시펜부타존; 파라닐린 히드로클로라이드; 펜토산 폴리술페이트 소듐; 펜부타존 소듐 글리세레이트; 피르페니돈; 피록시캄; 피록시캄 신나메이트; 피록시캄 올라민; 피르프로펜; 프레드나제이트; 프리펠론; 프로돌산; 프로쿠아존; 프록사졸; 프록사졸 시트레이트; 리멕솔론; 로마자리트; 살콜렉스; 살나세딘; 살살레이트; 살리실레이트; 산구이나리움 클로라이드; 세클라존; 세르메타신; 수독시캄; 술린닥; 수프로펜; 탈메타신; 탈니플루메이트; 탈로살레이트; 테부펠론; 테니답; 테니답 소듐; 테녹시캄; 테시캄; 테시미드; 테트리다민; 티오피낙; 틱소코르톨 피발레이트; 톨메틴; 톨메틴 소듐; 트리클로니드; 트리플루미데이트; 지도메타신; 글루코코르티코이드; 조메피락 소듐을 포함한다. 중요한 항염증제는 아스피린이다.
다른 항염증제는 시토카인 억제제, 예를 들어 시토카인 길항제 (예를 들어, IL-6 수용체 길항제), 아자-알킬 리소인지질 (AALP), 및 종양 괴사 인자-α (TNF-α) 억제제, 예컨대 항-TNF-α 항체, 가용성 TNF 수용체, TNF-α, 안티센스 핵산 분자, 다가 구아닐히드라존 (CNI-1493), N-아세틸시스테인, 펜톡시필린, 옥스펜티필린, 카르보시클릭 뉴클레오시드 유사체, 소분자 S9a, RP 55778 (TNF-α 합성 억제제), 덱사나비놀 (HU-211), MDL 201,449A (9-[(1R, 3R)-트랜스-시클로펜탄-3-올] 아데닌, 및 트리코디메롤 (BMS-182123)이다. 다른 TNF-α 억제제는 에타네르셉트 (엔브렐(ENBREL), 이뮤넥스(Immunex), 시애틀) 및 인플릭시맙 (레미케이드(REMICADE), 센토코르(Centocor), 펜실베니아주 맬번)을 포함한다.
지질 감소제는 겜피브로질, 콜리스티라민, 콜레스티폴, 니코틴산 및 HMG-CoA 리덕타제 억제제를 포함한다. 본 발명에 따른 투여 또는 기타 작용제와의 공-투여에 유용한 HMG-CoA 리덕타제 억제제는 심바스타틴 (미국 특허 번호 4,444,784), 로바스타틴 (미국 특허 번호 4,231,938), 프라바스타틴 소듐 (미국 특허 번호 4,346,227), 플루바스타틴 (미국 특허 번호 4,739,073), 아토르바스타틴 (미국 특허 번호 5,273,995) 및 세리바스타틴을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
칼슘 채널 차단제는 디히드로피리딘, 예컨대 니페디핀, 페닐 알킬 아민, 예컨대 베라파밀 및 벤조티아제핀, 예컨대 딜티아젬을 포함한다. 다른 칼슘 채널 차단제는 암리논, 암로디핀, 벤시클란, 펠로디핀, 펜딜린, 플루나리진, 이스라디핀, 니카르디핀, 니모디핀, 페르헥실렌, 갈로파밀, 티아파밀 및 티아파밀 유사체 (예컨대 1993RO-11 -2933), 페니토인, 바르비투레이트 및 펩티드 디노르핀, 오메가-코노톡신 및 오메가-아가톡신 등 및/또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
β-아드레날린성 수용체 차단제는 아테놀롤, 아세부톨롤, 알프레놀롤, 베푸놀롤, 베탁솔롤, 부니트롤롤, 카르테올롤, 셀리프롤롤, 헤드록살롤, 인데놀롤, 라베탈롤, 레보부놀롤, 메핀돌롤, 메티프라놀, 메틴돌, 메토프롤롤, 메트리조라놀롤, 옥스프레놀롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤, 프락톨롤, 프락톨롤, 소탈롤나돌롤, 티프레놀롤, 토말롤롤, 티몰롤, 부프라놀롤, 펜부톨롤, 트리메프라놀, 2-(3-(1,1-디메틸에틸)-아미노-2-히드록시프로폭시)-3-피리덴카르보니트릴HCl, 1-부틸아미노-3-(2,5-디클로로페녹시- )-2-프로판올, 1-이소프로필아미노-3-(4-(2- 시클로프로필메톡시에틸)페녹시)-2-- 프로판올, 3-이소프로필아미노-1-(7-메틸인단-4-일옥시)-2-부탄올, 2-(3-t-부틸아미노-2-히드록시-프로필티오)-4-(5-카르바모일-2-티에닐)티아졸, 7-(2-히드록시-3-t-부틸아민프로폭시)프탈리드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 상기-확인된 화합물은 이성질체 혼합물로서, 또는 그의 각각의 좌선성 또는 우선성 형태로 사용될 수 있다.
다수의 선택적 COX-2 억제제가 관련 기술분야에 공지되어 있고, 미국 특허 번호 5,474,995; 미국 특허 번호 5,521,213; 미국 특허 번호 5,536,752; 미국 특허 번호 5,550,142; 미국 특허 번호 5,552,422; 미국 특허 번호 5,604,253; 미국 특허 번호 5,604,260; 미국 특허 번호 5,639,780; 미국 특허 번호 5,677,318; 미국 특허 번호 5,691,374; 미국 특허 번호 5,698,584; 미국 특허 번호 5,710,140; 미국 특허 번호 5,733,909; 미국 특허 번호 5,789,413; 미국 특허 번호 5,817,700; 미국 특허 번호 5,849,943; 미국 특허 번호 5,861,419; 미국 특허 번호 5,922,742; 미국 특허 번호 5,925,631; 및 미국 특허 번호 5,643,933에 기재된 COX-2 억제제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 다수의 상기-확인된 COX-2 억제제는 선택적 COX-2 억제제의 전구약물이고, WO 95/00501, WO 95/18799, 및 1995년 12월 12일 등록된 미국 특허 번호 5,474,995에 기재된 것들을 포함한다.
안지오텐신 II 길항제의 예는 펩티드성 화합물 (예를 들어, 사랄라신, [(San1)(Val5)(Ala8)] 안지오텐신-(1-8) 옥타펩티드 및 관련 유사체); N-치환된 이미다졸-2-온 (미국 특허 번호 5,087,634); 이미다졸 아세테이트 유도체, 예를 들어 2-N-부틸-4-클로로-1-(2-클로로벤질) 이미다졸-5-아세트산 (문헌 [Long et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 247(1), 1-7 (1988)] 참조); 4,5,6,7-테트라히드로-1H-이미다조 [4,5-c] 피리딘-6-카르복실산 및 유사체 유도체 (미국 특허 번호 4,816,463); N2-테트라졸 β-글루쿠로니드 유사체 (미국 특허 번호 5,085,992); 치환된 피롤, 피라졸 및 트리아졸 (미국 특허 번호 5,081,127); 페놀 및 헤테로시클릭 유도체, 예컨대 1,3-이미다졸 (미국 특허 번호 5,073,566); 이미다조-융합된 7-원 고리 헤테로사이클 (미국 특허 번호 5,064,825); 펩티드 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,772,684); 안지오텐신 II에 대한 항체 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,302,386); 및 아르알킬 이미다졸 화합물, 예컨대 비페닐-메틸 치환된 이미다졸 (예를 들어, EP 253,310, 1988년 1월 20일); ES8891 (N-모르폴리노아세틸-(-1-나프틸)-L-알라닐-(4, 티아졸릴)-L-알라닐 (35,45)-4-아미노-3-히드록시-5-시클로-헥사펜타노일-- N-헥실아미드, 산쿄 캄파니, 리미티드(Sankyo Company, Ltd.), 일본 도쿄); SKF108566 (E-α-2-[2-부틸-1-(카르복시 페닐) 메틸] 1H-이미다졸-5-일[메틸렌]-2-티오펜프로판산, 스미스 클라인 비참 파마슈티칼스(Smith Kline Beecham Pharmaceuticals), 펜실베니아주); 로사르탄 (DUP753/MK954, 듀폰 머크 파마슈티칼 캄파니(DuPont Merck Pharmaceutical Company)); 레미키린 (RO42-5892, 에프. 호프만 라로슈 아게(F. Hoffman LaRoche AG)); A2 효능제 (마리온 머릴 다우(Marion Merrill Dow)) 및 특정 비-펩티드 헤테로사이클 (지. 디. 서얼 앤드 캄파니(G. D. Searle and Company))을 포함한다.
안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제는 ACE의 활성을 억제함으로써 레닌-안지오텐신 시스템에 개입하여 승압제 물질 안지오텐신 II의 형성을 감소시키거나 제거하는, 아미노산 및 그의 유도체, 펩티드, 예를 들어 디- 및 트리-펩티드, 및 ACE에 대한 항체를 포함한다. 다른 ACE 억제제는 아실메르캅토 및 메르캅토알카노일 프롤린, 예컨대 캅토프릴 (미국 특허 번호 4,105,776) 및 조페노프릴 (미국 특허 번호 4,316,906), 카르복시알킬 디펩티드, 예컨대 에날라프릴 (미국 특허 번호 4,374,829), 리시노프릴 (미국 특허 번호 4,374,829), 퀴나프릴 (미국 특허 번호 4,344,949), 라미프릴 (미국 특허 번호 4,587,258) 및 페린도프릴 (미국 특허 번호 4,508,729), 카르복시알킬 디펩티드 모방체, 예컨대 실라자프릴 (미국 특허 번호 4,512,924) 및 베나자프릴 (미국 특허 번호 4,410,520), 포스피닐알카노일 프롤린, 예컨대 포시노프릴 (미국 특허 번호 4,337,201) 및 트란돌로프릴을 포함한다.
레닌 억제제는 아미노산 및 그의 유도체, 펩티드 및 그의 유도체, 및 레닌에 대한 항체를 포함한다. 다른 레닌 억제제는 펩티드의 우레아 유도체 (미국 특허 번호 5,116,835); 비펩티드 결합에 의해 연결된 아미노산 (미국 특허 번호 5,114,937); 디- 및 트리-펩티드 유도체 (미국 특허 번호 5,106,835); 아미노산 및 그의 유도체 (미국 특허 번호 5,104,869 및 5,095,119); 디올 술폰아미드 및 술피닐 (미국 특허 번호 5,098,924); 변형된 펩티드 (미국 특허 번호 5,095,006); 펩티딜 β-아미노아실 아미노디올 카르바메이트 (미국 특허 번호 5,089,471); 피롤이미다졸론 (미국 특허 번호 5,075,451); 플루오린 및 염소 스타틴 또는 스타톤 함유 펩티드 (미국 특허 번호 5,066,643); 펩티딜 아미노 디올 (미국 특허 번호 5,063,208 및 4,845,079); N-모르폴리노 유도체 (미국 특허 번호 5,055,466); 펩스타틴 유도체 (미국 특허 번호 4,980,283); N-헤테로시클릭 알콜 (미국 특허 번호 4,885,292); 레닌에 대한 모노클로날 항체 (미국 특허 번호 4,780,401); 및 다양한 다른 펩티드 및 그의 유사체 (미국 특허 번호 5,071,837, 5,064,965, 5,063,207, 5,036,054, 5,036,053, 5,034,512 및 4,894,437)를 포함한다.
당뇨병 및 관련 장애를 치료하는데 유용한 다른 치료제는 리파제 억제제, 예컨대 세틸리스타트 (ATL-962); 합성 아밀린 유사체, 예컨대 재조합 렙틴을 함유하거나 함유하지 않는 심린(Symlin) 프람린티드; 나트륨-글루코스 공동수송체 2 (SGLT2) 억제제, 예컨대 세르글리플로진 (869682; KGT-1251), YM543, 카나글리플로진, 에르투글리플로진, 다파글리플로진, 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline) 분자 189075 및 사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis) 분자 AVE2268; 이중 지방 트리글리세리드 리파제 및 PI3 키나제 활성화제, 예컨대 아디비아(Adyvia) (ID 1101); 뉴로펩티드 Y2, Y4, 및 Y5 수용체의 길항제, 예컨대 나스테크(Nastech) 분자 PYY3-36, 인간 호르몬 PYY3-36 및 췌장 폴리펩티드의 합성 유사체 (7TM 분자 TM30338); 시오노기(Shionogi) 분자 S-2367; 칸나비노이드 CB1 수용체 길항제, 예컨대 리모나반트 (아콤플리아(Acomplia)), 타라나반트, CP-945,598, 솔베이(Solvay) 분자 SLV319, 베르날리스(Vernalis) 분자 V24343; 호르몬, 예컨대 올레오일-에스트론; 세로토닌, 도파민 및 노르에피네프린의 억제제 (또한 삼중 모노아민 재흡수 억제제로서 관련 기술분야에 공지됨), 예컨대 테소펜신 (뉴로서치(Neurosearch) 분자 NS2330); 노르에피네프린 및 도파민 재흡수의 억제제, 예컨대 콘트라브(Contrave) (부프로피온 플러스 오피오이드 길항제 날트렉손) 및 엑스칼리아(Excalia) (부프로피온 플러스 항경련제 조니사미드); 11β-히드록시스테로이드 데히드로게나제 유형 1 (11b-HSD1)의 억제제, 에컨대 인사이트(Incyte) 분자 INCB13739; 코르티솔 합성의 억제제, 예컨대 케토코나졸 (디오벡스(DiObex) 분자 DIO-902); 글루코스신생의 억제제, 예컨대 메타바시스(Metabasis)/다이이치(Daiichi) 분자 CS-917; 글루코키나제 활성화제, 에컨대 로슈 분자 R1440; 단백질 티로신 포스파타제-1B의 안티센스 억제제, 예컨대 이시스(ISIS) 113715; 뿐만 아니라 기타 작용제, 에컨대 니콕스(NicOx) 분자 NCX 4016; 가스트린 및 표피 성장 인자 (EGF) 유사체의 주사, 예컨대 섬 신생성 요법 (E1-I.N.T.); 베타히스틴 (오베큐어(Obecure) 분자 OBE101); 담즙산 격리제 (예를 들어, 콜레스티라민 및 콜레스티폴), 비타민 B3 (또한 니코틴산 또는 니아신으로 공지됨), 비타민 B6 (피리독신), 비타민 B12 (시아노코발라민), 피브린산 유도체 (예를 들어, 겜피브로질, 클로피브레이트, 페노피브레이트 및 벤자피브레이트), 프로부콜, 니트로글리세린, 및 콜레스테롤 흡수의 억제제 (예를 들어, β-시토스테롤 및 아실CoA-콜레스테롤 아실트랜스퍼라제 (ACAT) 억제제, 예컨대 멜리나미드), HMG-CoA 신타제 억제제, 스쿠알렌 에폭시다제 억제제 및 스쿠알렌 신테타제 억제제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
쿠싱 증후군을 치료하는데 사용되는 작용제의 예는, 제한 없이, 신경조정제 (시그니포르® (파시레오티드), 카베르골린); 부신 스테로이드생성 억제제 (케토코나졸, 메티라폰, 미토탄, 에토미데이트); 및 핵 수용체 조정제 (코르림® (미페프리스톤), 레티노산)을 포함한다. 다른 작용제는, 제한 없이, 표피 성장 인자 수용체 억제제 (예를 들어, 게피티닙), 알도스테론 신타제/11β-히드록실라제 억제제 LCI699, 및 레보케토코나졸 (COR-003)을 포함한다.
통증, 예를 들어 신경병증성 통증을 치료하는데 빈번히 사용되는 진통제의 예는, 제한 없이, 오피오이드 또는 비-오피오이드 진통제를 포함한다. 적합한 오피오이드 진통제는 모르핀, 헤로인, 히드로모르폰, 히드로코돈, 옥시모르폰, 옥시코돈, 메토폰, 아포모르핀, 노르모르핀, 에토르핀, 부프레노르핀, 메페리딘, 로페르미드, 아닐레리딘, 에토헵타진, 피미니딘, 베타프로딘, 디페녹실레이트, 펜타닐, 수펜타닐, 알펜타닐, 레미펜타닐, 레보르파놀, 덱스트로메토르판, 페나조신, 펜타조신, 시클라조신, 메타돈, 이소메타돈 및 프로폭시펜을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 적합한 비-오피오이드 진통제는 아스피린, 셀레콕시브, 로페콕시브, 디클로피낙, 디플루시날, 에토돌락, 페노프로펜, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 케토프로펜, 인도메타신, 케토롤락, 메클로페나메이트, 메파남산, 나부메톤, 나프록센, 피록시캄 및 술린닥을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
녹내장을 치료하는데 빈번히 사용되는 치료제의 예는 콜린성 효능제 (예를 들어, 필로카르핀 및 카르바콜), 콜린에스테라제 억제제 (예를 들어, 피소스티그민, 네오스티그민, 데마카륨, 에코티오페이트 아이오다이드 및 이소플루오로페이트), 탄산 안히드라제 억제제 (예를 들어, 아세타졸아미드, 디클로르페나미드, 메타졸아미드, 에톡스졸아미드 및 도르졸아미드), 비-선택적 아드레날린성 효능제 (예를 들어, 에피네프린 및 디피베프린), α2-선택적 아드레날린성 효능제 (예를 들어, 아프라클로니딘 및 브리모니딘), β-차단제 (예를 들어, 티몰롤, 베타졸롤, 레보부놀롤, 카르테올롤 및 메티프라놀롤), 프로스타글란딘 유사체 (예를 들어, 라타노프로스트) 및 삼투 이뇨제 (예를 들어, 글리세린, 만니톨 및 이소소르비드); 코르티코스테로이드, 예컨대 베클로메타손, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 프레드니손, 프레니솔론, 덱사메타손, 플루티카손 및 히드로코르티손, 및 코르티코스테로이드 유사체, 예컨대 부데소니드를 포함한다.
알츠하이머병을 치료하는데 빈번히 사용되는 치료제의 예는 β-세크레타제 억제제 또는 γ-세크레타제 억제제; 글리신 수송 억제제, 타우 인산화 억제제; Aβ 올리고머 형성의 차단제; p25/CDK5 억제제; HMG-CoA 리덕타제 억제제; PPARγ 효능제, 예컨대 피오글리타존 및 로시글리타존; NK1/NK3 수용체 길항제; NSAID, 예를 들어 이부프로펜; 비타민 E; 항-아밀로이드 항체, 예를 들어 항-아밀로이드 인간화 모노클로날 항체; COX-2 억제제; 항염증 화합물, 예컨대 (R)-플루르비프로펜; CB-1 수용체 길항제 또는 CB-1 수용체 역 효능제; 항생제, 예컨대 독시시클린 및 리팜핀; N-메틸-D-아스파르테이트 (NMDA) 수용체 길항제, 예컨대 메만틴 및 네라멕산; NR2B 길항제; 안드로겐 수용체 조정제; 아세틸콜린에스테라제 억제제, 예컨대 갈란타민, 리바스티그민, 도네페질 및 타크린; mGluR5 조정제; 성장 호르몬 분비촉진제, 예컨대 이부타모렌, 이부타모렌 메실레이트 및 카프로모렐린; 히스타민 H3 길항제; AMPA 효능제; PDE IV 억제제; GABAA 역 효능제; GABAA α5 수용체 리간드; GABAB 수용체 리간드; 칼륨 채널 차단제; 뉴런 니코틴성 효능제; P-450 억제제, 예컨대 리토나비르를 포함한다.
정동 장애, 예컨대 우울증을 치료하는데 빈번히 사용되는 치료제의 예는, 제한 없이, 아미트립틸린, 아미트립틸린 옥시드, 데시프라민, 디벤제핀, 도술레핀, 독세핀, 클로로이미프라민, 이미프라민, 노르트립틸린, 미안세린, 마프로틸린, 트리미프라민, CP-122721, 엘자소난, PD-171729, MK-869, DOV-216303, DOV-21947, 리카르바제핀, 암페부타몬, 라다팍신, 빌라조돈, GSK-679769, GW-597599, NS-2359, GSK-876008, 프라미펙솔, 둘록세틴, 아토목세틴, LY-628535, 데스벤라팍신, 에스시탈로프람, LU-AA21004, 사레두탄트, SR-58611, SSR-149415, SSR-146977, 모클로베미드, R-673, R-1204, BMS-469458, DPC-368, Org-34517, Org-34850, CRH 수용체의 억제제, ONO-2333Ms, NBI-876008, AAG-561, NBI-34041, DPC-368, PD-171729, SSR-125543, 빌록사진, 트라조돈, 네파조돈, 미르타자핀, 벤라팍신, 레복세틴, 트라닐시프로민, 브로파로민, 모클로베미드, 시탈로프람, 에스시탈로프람, 파록세틴, 플루옥세틴, 플루복사민, 세르트랄린, 히페리쿰(Hypericum) (세인트 존스 워트(St. John's Wort)), 알프라졸람, 클로나제팜, 디아제팜, 로라제팜, 할라제팜, 클로르디아제폭시드, 및 기타 약물, 예컨대 부스피론, 클로니딘, 파고클론, 리스페리돈, 올란자핀, 퀘티아핀, 지프라시돈, 셀레콕시브, 피록시캄, 파레콕시브, 발데콕시브, PMI-001, PH-686464, SC-58236, 에토리콕시브, 로페콕시브, L-776967, 루미라콕시브, GW-406381, GW-644784, 멜록시캄, SVT-2016, PAC-10649, CS-706, LAS-34475, 시미콕시브, A-183827.0, 또는 니메술리드를 포함한다.
중독 및 약물 남용을 치료하는데 빈번히 사용되는 치료제의 예는, 제한 없이, 페넬진, 페닐알킬히드라진 (미국 특허 번호 4,786,653), 디술피람 ("안타부스(Antabuse)"), 2-이미노-5-페닐-4-옥사졸리디논, α-메틸-파라-티로신 또는 푸사르산, 피페라진 유도체 (미국 특허 번호 4,325,952), 클로니딘 (삼환계 항우울제 약물과 함께) (미국 특허 번호 4,788,189), γ-피론, 예컨대 말톨 또는 에틸 말톨 (미국 특허 번호 4,276,890), 아캄프로세이트, 가바펜틴, 비가바트린, 바클로펜, N-아세틸시스테인, 노카인, 모다나필, 파록세틴, 부프로피온, 미르타자핀, 토피라메이트, 온단세트론, 바레니클린, 오피오이드 수용체의 길항제, 예컨대 날트렉손, 날록손, 날메핀, 안탁손, L-α-아세틸 메타돌, 펜타조신, 부토르파놀, 날부핀, 부프레노르핀, 및 메타돈을 포함한다.
골다공증 치료에 빈번히 사용되고 골 무기질 함량을 조정할 수 있는 치료제의 예는 비스포스포네이트, 예컨대 알렌드로네이트 (포사맥스(Fosamax)®), 리세드로네이트 (악토넬(Actonel)®), 에티드로네이트 (디드로넬(Didronel)®), 파미드로네이트, 틸루드로네이트 (스켈리드(Skelid)®), 클로드로네이트 (보네포스(Bonefos)®; 로론(Loron)®), 네리드로네이트, 올파드로네이트, 졸레드로네이트 (조메타(Zometa)®) 및 이반드로네이트 (보니바(Boniva)®), 선택적 에스트로겐-수용체 조정제 (SERM), 예컨대 랄록시펜 (에비스타(Evista)®), 아르족시펜, 클로미펜, 바제독시펜, 라소폭시펜, 오르멜록시펜, 타목시펜, 및 토레미핀, 동화 요법, 예컨대 테리파라티드 (포르테오(Forteo)®; 재조합 부갑상선 호르몬), 및 스트론튬 라넬레이트, 및 부갑상선 호르몬의 재조합 펩티드 단편, 에스트로겐/프로게스테론 대체 요법, 모노클로날 항체, 핵 인자 kB 리간드의 수용체 활성화제 (RANKL)의 억제제, 예컨대 데노수맙, 오스테오프로테게린 및 펩스타틴 A, 카텝신 K의 억제제, 예컨대 비제한적으로 OST-4077 (푸란-2-카르복실산-(1-{1-[4-플루오로-2-(2-옥소-피롤리딘-1-일)-페닐]-3-옥소-피페리딘-3-일카르바모일}-시클로헥실)-아미드), 류펩틴, Cbz-Phe-Ala-CHN2, Cbz-Leu-Leu-Leu-알데히드, 시스타틴, 비가역적 시스테인 프로테아제 억제제, 예컨대 펩티드 할로메틸케톤, 펩티드 디아조메틸케톤, 및 에폭시드, 정지 비가역적 시스테인 프로테아제 억제제, 예컨대 아실옥시메틸케톤, 아자펩티드, 마이클(Michael) 수용자, 예컨대 펩티드 비닐 에스테르, 술폰 및 술포네이트, 가역적 시스테인 프로테아제 억제제, 예컨대 펩티드 알데히드, a-케토에스테르 및 a-케토아미드, 펩티드 메틸 케톤 및 그의 히드록실, 알킬옥시, 아릴옥시, 알킬티오 및 아릴티오 유도체, 1,3-비스-(아실아미노)-2-프로파논, 1,3-비스-(아실히드라지노)-카르보닐, 아실아미노-피라졸론, 피페리디논, 및 티아존-카르보닐-히드라지드, 인테그린 Avb3의 길항제 (또한 관련 기술분야에 비트로넥틴으로서 공지됨), 칼슘분해성 화합물 (PTH의 분비를 증가시키는 Ca2+ 수용체 길항제), 칼시토닌 (미아칼신(Miacalcin)®), 니트레이트, 예를 들어 비제한적으로 이소소르비드 모노니트레이트 (ISMO) 또는 니트로글리세린 연고 (NTG), 및 식이 보충제, 예컨대 칼슘 및 비타민 D, 및 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 대상체로부터 채취한 샘플 내의 시계 유전자 (예를 들어 Cry1 및 Cry2) 발현 수준을 측정하는 것을 기반으로 하는, 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 방법이다 (문헌 [Bjarnason, G. A. et al. Am. J. Pathol. 2001, 158, 1793; Akashi, M. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107, 15643]). 대상체로부터의 샘플 내에서 측정된 인간 시계 유전자, 예를 들어 Cry1 및 Cry2에 대한 리듬 mRNA 발현 프로파일은 일주기 시계가 말초 조직 내에 존재한다는 것을 나타낸다 (문헌 [Mohawk, J. A. et al. Ann. Rev. Neurosci. 2012, Epub ahead of print]). 이들 샘플 내의 일주기 시계 관련 유전자의 발현은 하루 동안 달라진다는 것이 입증된 바 있다. 게다가, 말초 혈액 단핵 세포에서의 시계 유전자 (예를 들어 Cry1 및 Cry2) 발현 패턴은 질환, 예컨대 비만에 의해 인간에서 변경된다 (문헌 [Tahira, K. et al. Arch. Med. Sci. 2011, 7, 933]). 말초 단핵 혈액 세포에서의 시계 유전자 (예를 들어 Cry1 및 Cry2) 발현의 변화는 혈청 렙틴, 아디포넥틴, 인슐린 및 hsCRP 수준, 혈장 지질, 글루코스, 멜라토닌 및 코르티솔 수준, 및 동물에서 조직, 예를 들어 간, 지방, 췌장 및 골격근에서의 시계 유전자 (예를 들어 Cry1 및 Cry2)의 발현과 상호관련될 수 있다. 치료될 대상체로부터 채취한 샘플을 화학식 I의 화합물과 접촉시키고, 리듬 mRNA 또는 단백질 발현 프로파일을 측정함으로써, 치료를 필요로 하는 환자를 확인할 수 있고, 약리학적 활성을 평가할 수 있다. 다른 실시양태에서, 1종 이상의 크립토크롬의 활성, 예를 들어 표적, 예컨대 Per1, Per2, 글루코코르티코이드 수용체 (GR), 또는 Cry 인식 부위를 함유하는 프로모터 서열, 예컨대, 예를 들어, CLOCK-BMAL1 프로모터에 결합하는 크립토크롬의 능력이 평가될 수 있다.
따라서, 본원에 개시된 대상의 한 측면은 제1 기간에서의 대상체로부터의 제1 샘플에서 1종 이상의 크립토크롬의 유효량을 측정하는 것; 제2 기간에서의 대상체로부터의 제2 샘플에서 1종 이상의 크립토크롬의 유효량을 측정하는 것; 및 제1 샘플에서 검출된 1종 이상의 크립토크롬의 양을 제2 샘플에서 검출된 1종 이상의 크립토크롬의 양 또는 참조 값과 비교하는 것을 포함하는, 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애의 진행 또는 예후를 모니터링하는 방법에 관한 것이다.
"진단", "진단하다", "예측하다" 또는 "예후"는 개체가 질환을 앓는다는 확정적인 또는 거의 확정적인 결정에 제한되지 않지만, 또한 개체가 건강한 개체 또는 일반적 집단과 비교하여 질환을 앓거나 질환이 발생할 증가된 가능성을 갖는다는 것을 결정하는 것을 포함한다.
본원에 사용된 "발현" 및 "발현 수준"은 하기: 유전자의 전구체 mRNA로의 전사; 성숙 mRNA의 생산을 위한 전구체 mRNA의 스플라이싱 및 기타 프로세싱; mRNA 안정성; 성숙 mRNA의 단백질로의 번역 (코돈 용법 및 tRNA 이용성 포함); 및 번역 생성물의 글리코실화 및/또는 기타 변형 (적절한 발현 및 기능에 필요한 경우) 중 1종 이상을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
"공식", "알고리즘" 또는 "모델"은, 하나 이상의 연속형 또는 카테고리형 입력 (본원에서 "파라미터"로 칭함)을 취하고 출력 값 (종종 "지수" 또는 "지수 값"으로 지칭됨)을 계산하는 임의의 수학적 방정식, 알고리즘, 분석 또는 프로그램화된 프로세스 또는 통계적 기술이다. "알고리즘"의 비제한적 예는 합, 비 및 회귀 연산자, 예컨대 계수 또는 지수, 값 변환 및 정규화 (제한 없이, 임상적 파라미터, 예컨대 성별, 연령, 체질량 지수 또는 민족성을 기반으로 하는 정규화 스킴 포함), 규칙 및 가이드라인, 통계적 분류 모델, 및 역사적 집단에 대해 훈련된 신경망을 포함한다. 본원에 정의된 바와 같은 Cry를 측정하는데 있어서의 특정한 사용 중에는 대상체 샘플에서 검출된 Cry의 수준과 대상체의 Cry-매개 질환 또는 장애의 발생 위험 사이의 관계를 "상호관련"시키기 위한 선형 및 비-선형 방정식 및 통계적 분류 분석이 있다.
"측정하는" 또는 "측정"은 임상적 또는 대상체-유래 샘플 내의 어느 주어진 물질의 존재, 부재, 수량 또는 양 (이는 유효량일 수 있음)을 평가하는 것, 예를 들어 이러한 물질의 정성적 또는 정량적 농도 수준의 도출, 또는 대상체의 임상적 파라미터의 값 또는 카테고리화를 달리 평가하는 것을 의미한다. "측정" 또는 "측정하는"은 또한 유형을 정성분석하거나, 또는 물질을 확인하는 것을 포함할 수 있다. "측정" 또는 "측정하는"은 또한 1종 이상의 Cry의 표적에 결합하는 능력에 관련될 수 있으며, 여기서 표적은 주기 유전자 또는 단백질 Per1 및 Per2, 글루코코르티코이드 수용체, (GR) 또는 CLOCK-BMAL1 유전자의 프로모터 영역일 수 있다. Cry의 측정은 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애를 진단, 검출 또는 학인하거나, 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애의 진행 또는 예후를 모니터링하거나, 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애의 재발을 예측하거나, 또는 대상체를 Cry-매개 질환 또는 장애의 발생 또는 Cry-매개 질환 또는 장애의 재발의 낮은 위험 또는 높은 위험을 갖는 것으로 분류하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 문맥에서의 "위험"은 Cry-매개 질환 또는 장애의 발생에서와 같이, 사건이 특정 기간에 걸쳐 일어날 확률에 관한 것이고, 대상체의 "절대" 위험 또는 "상대" 위험을 의미할 수 있다. 절대 위험은 관련 시간 코호트에 대한 측정후 실제 관찰을 참조로, 또는 관련 기간을 추적해 온 바 있는 통계적으로 유효한 역사적 코호트로부터 발생된 지수 값을 참조로 측정될 수 있다. 상대 위험은 임상 위험 인자를 평가하는 방법에 따라 달라질 수 있는, 낮은 위험 코호트의 절대 위험 또는 평균 집단 위험과 비교한 대상체의 절대 위험의 비를 지칭한다. 주어진 시험 결과에 대한 양성 사건 대 음성 사건의 비율인 오즈비가 또한 비-전환에 대해 통상적으로 사용된다 (오즈는 공식 p/(1-p)에 따르며, 여기서 p는 사건의 확률이고, (1-p)는 사건이 일어나지 않을 확률임). 본 발명의 문맥에서 평가될 수 있는 대안적인 연속형 척도는 Cry-매개 질환 또는 장애의 발생 또는 Cry-매개 질환 또는 장애의 상이한 단계, 예를 들어 Cry-매개 질환 또는 장애의 진행 또는 발생으로의 진행까지의 시간, 및 치료 전환 위험 감소 비를 포함한다.
본원에 개시된 대상의 문맥에서 "위험 평가" 또는 "위험의 평가"는 사건 또는 질환 상태가 일어날 확률, 오즈 또는 가능성을 측정하는 것, 사건의 발생 속도 또는 한 질환 상태로부터 또 다른 상태로의 전환, 즉 "정상" 상태로부터 Cry-매개 질환 또는 장애의 발생 위험에 있는 상태로의 전환, 또는 위험에 있는 상태로부터 Cry-매개 질환 또는 장애로의 전환, 또는 재발성 질환 또는 장애의 발생을 포괄한다. 위험 평가는 또한 이전에 측정된 집단을 참조로 절대 또는 상대 기간에서의 Cry-매개 질환 또는 장애의 다른 지수의 예측을 포함할 수 있다. 본 발명의 방법은, Cry-매개 질환 또는 장애로의 전환 위험의 연속형 또는 카테고리형 측정을 수행하여 질환 또는 장애의 발생 위험에 있는 것으로서 규정된 대상체를 진단하고 그의 카테고리의 위험 스펙트럼을 규정하는데 사용될 수 있다. 카테고리형 시나리오에서, 본 발명은 정상 및 위험에 있는 대상체 코호트 사이를 식별하는데 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 본 발명은 질환 상태로부터 위험에 있는 상태, 또는 정상으로부터 질환 상태를 식별하도록 사용될 수 있다.
본원에 사용된 "샘플"은 대상체로부터 단리된 생물학적 샘플이고, 예로서 및 제한 없이, 전혈, 혈청, 혈장, 혈액 세포, 내피 세포, 조직 생검, 림프액, 복수액, 간질액 (또한 "세포외액"으로 공지되고, 세포 사이의 공간에서 발견되는 유체, 예를 들어 특히 치은 열구액을 포괄함), 골수, 정액, 뇌척수액 (CSF), 타액, 점액, 객담, 땀, 소변, 또는 임의의 다른 분비액, 배출액 또는 다른 체액을 포함할 수 있다.
"통계적으로 유의한"은, 변경이 단독 기회에 의해 발생하는 것으로 예상할 수 있는 것보다 더 크다는 것 (이는 "가양성"일 수 있음)을 의미한다. 통계적 유의성은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 통상적으로 사용되는 유의성의 적도는, 적어도 단독 기회의 결과였다고 가정되는 주어진 데이터 지점과 같은 극단적인 결과를 얻을 확률을 제시하는 p-값을 포함한다. 결과는 종종 0.05 이하의 p-값에서 고도로 유의한 것으로 간주된다.
Cry-매개 질환 또는 장애의 위험은, 샘플 (예를 들어, 대상체 유래 샘플)에서 1종 이상의 크립토크롬의 "유효량"을 측정하고, 종종 다수의 개체의 결과로부터의 정보를 단일 측정으로 조합하기 위한 수학적 알고리즘 또는 공식을 이용하여 유효량을 참조 값과 비교함으로써 검출될 수 있다. Cry-매개 질환 또는 장애의 증가된 위험을 갖는 것으로 확인된 대상체는 임의로 치료 요법 또는 치료적 개입을 받도록, 예컨대 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을 단독요법으로서 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 투여 받거나 또는 외과적 개입 (이는 화학식 I의 화합물을 단독으로 또는 추가의 치료제 또는 다른 요법과 조합하여 투여한 후에 또는 그 전에 시행될 수 있음)을 시행받도록 선택될 수 있다.
샘플에서 이들 크립토크롬을 검출하는 방법은 많은 적용을 갖는다. 예를 들어, 1종 이상의 크립토크롬은 Cry-매개 질환 또는 장애의 진단 또는 예후를 보조하기 위해 측정될 수 있다. 또 다른 예에서, 크립토크롬의 검출 방법은 Cry-매개 질환 또는 장애의 치료에 대한 대상체에서의 반응을 모니터링하는데 사용될 수 있다. 또 다른 예에서, 방법은 생체내 또는 시험관내에서 크립토크롬의 발현을 조정하는 화합물을 검정하고 이를 확인하는데 사용될 수 있다.
본 발명은, Cry-매개 질환 또는 장애로 전환될 위험의 연속형 또는 카테고리형 측정을 수행하고, 이에 따라 질환 또는 장애의 발생 위험에 있는 것으로 규정된 대상체를 진단하고 그의 카테고리의 위험 스펙트럼을 규정하는데 사용될 수 있다. 카테고리형 시나리오에서, 본 발명의 방법은 정상 및 위험에 있는 대상체 코호트 사이를 식별하는데 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 본 발명은 질환으로부터 위험에 있는 것을, 또는 정상으로부터 질환을 식별하도록 사용될 수 있다. 이러한 다양한 사용은 개별 패널 또는 프로파일의 다양한 조합, 수학적 알고리즘 및/또는 컷-오프 지점을 필요로 할 수 있지만, 의도된 용도에 대한 상기 언급된 동일한 측정의 정확도에 적용될 수 있다.
위험에 있는 대상체를 확인하는 것은, 상기 대상체가 Cry-매개 질환 또는 장애로 전환되는 것을 지연, 감소 또는 예방하기 위한 다양한 치료적 개입 또는 치료 요법의 선택 및 개시를 가능하게 한다. 크립토크롬 단백질, 핵산, 다형성, 대사물 또는 다른 분석물의 유효량의 수준은 또한 치료 과정을 모니터링할 수 있게 한다. 이러한 방법에서, 생물학적 샘플은 Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 치료 요법, 예를 들어 치유적 치료를 받는 대상체로부터 제공될 수 있다. 이러한 치료 요법은 외과적 개입, 및 Cry-매개 질환 또는 장애를 앓는 것으로 진단되거나 확인된 대상체에서 사용된 치료제, 예를 들어 본원에 기재된 화학식 I의 화합물로의 치료를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 원하는 경우에, 생물학적 샘플은 치료 전, 치료 동안 또는 치료 후의 다양한 시점에서 대상체로부터 수득된다. 예를 들어, 대상체의 크립토크롬 프로파일을 참조 크립토크롬 프로파일과 비교하여 질환 상태를 결정하는 것은 1회 초과로 반복될 수 있으며, 여기서 대상체의 프로파일은 방법이 반복될 때마다 채취한 개별 샘플로부터 수득될 수 있다. 샘플은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 수행되는 바와 같이 규정된 시간 간격, 예컨대, 예를 들어 4시간, 8시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간 또는 임의의 적합한 시간 간격을 두고 대상체로부터 채취될 수 있다.
대상체의 유전자 구조의 차이는 Cry-매개 질환 또는 장애의 증상 또는 위험 인자를 조정할 수 있는 다양한 약물을 대사하는 그의 상대적 능력에서 차이의 발생시킬 수 있다. Cry-매개 질환 또는 장애를 앓거나, 또는 Cry-매개 질환 또는 장애의 발생 위험에 있는 대상체는 연령, 민족성, 및 다른 파라미터에 있어서 달라질 수 있다. 따라서, 본원에 정의된 바와 같은 1종 이상의 크립토크롬의 유효량을 단독으로 및 약물 대사에 대한 공지된 유전 인자와 함께 조합하여 둘 다 측정하는 것은, 선택된 대상체에서 실험되는 추정 치료 또는 방지가 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애를 치료하거나 예방하는데 적합할 것이라는 예정된 수준의 예측가능성을 가능하게 한다.
특정 대상체에 적절한 치료제 또는 약물을 확인하기 위해, 대상체로부터의 시험 샘플을 또한 치료제 또는 약물에 노출시킬 수 있고, 크립토크롬 단백질, 핵산, 다형성, 스플라이스 변이체, 대사물 또는 다른 분석물 중 하나 이상의 수준 또는 활성을 결정할 수 있다. 1종 이상의 크립토크롬 (예를 들어, Per1, Per2, GR, CLOCK-BMAL1 프로모터 등)에 직접 또는 간접적으로 결합하거나 영향을 받는 다른 유전자 또는 단백질이 또한 측정될 수 있다. 1종 이상의 크립토크롬의 수준은 Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 대상체 관리, 예를 들어 치료, 또는 치료제 또는 약물에 대한 노출 전 및 후에 대상체로부터 유래된 샘플과 비교될 수 있거나, 또는 이러한 치료 또는 노출의 결과로서 위험 인자에서 개선을 나타낸 하나 이상의 대상체로부터 유래된 샘플과 비교될 수 있다.
핵산은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 많은 방식으로, 예를 들어 추출 방법 (예를 들어, 용매 추출 포함), 친화도 정제 및 원심분리로 샘플로부터 수득될 수 있다. 선택적 침전은 또한 핵산을 정제할 수 있다. 겔 여과, 이온 교환, 선택적 흡착 또는 친화도 결합을 포함한 크로마토그래피 방법이 또한 이용될 수 있다. 핵산은 예를 들어 RNA, DNA일 수 있거나, 또는 cDNA로 합성될 수 있다. 핵산은 관련 기술분야에 널리 공지된 마이크로어레이 기술, 예를 들어 아피메트릭스 어레이에 이어서 다차원 척도 기술을 사용하여 검출될 수 있다. 문헌 [R. Ekins, R. and Chu, F.W. (1999) Trends Biotechnol. 17: 217-218; D. D. Shoemaker, et al., (2001) Nature 409(6822): 922-927] 및 미국 특허 번호 5,750,015를 참조한다.
원하는 경우에, 샘플은 1종 이상의 크립토크롬의 검출감도를 증진시키기 위해, 예를 들어 사전-분획화에 의해 제조될 수 있다. 사전-분획화의 방법은 예를 들어 시바크론(Cibacron) 청색 아가로스 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 헤파린 크로마토그래피, 렉틴 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 단일 가닥 DNA 친화성 크로마토그래피, 순차적 추출, 겔 전기영동 및 액체 크로마토그래피를 포함한다. 분석물은 또한 검출 전에 변형될 수 있다. 샘플은, 많은 양으로 존재하거나 샘플 내의 관심 대상 분자의 검출을 방해할 수 있는 단백질을 제거함으로써 사전-분획화될 수 있다. 예를 들어, 혈청 샘플에서, 혈청 알부민은 많은 양으로 존재하고, 1종 이상의 크립토크롬의 분석을 모호하게 할 수 있다. 따라서, 혈청 샘플은, 예를 들어 혈청 알부민에 특이적으로 결합하는 흡착제를 포함하는 기질을 사용하여 혈청 알부민을 제거함으로써 사전-분획화될 수 있고, 친화도 칼럼 또는 항-혈청 알부민 항체가 사용될 수 있다.
다른 실시양태에서, 샘플 내의 관심 대상 분자는 고해상도 전기영동, 예를 들어 1차원 또는 2차원 겔 전기영동에 의해 분리될 수 있다. 분획은 기체 상 이온 분광측정법에 의해 단리 및 추가 분석될 수 있다. 바람직하게는, 2차원 겔 전기영동은 1종 이상의 크립토크롬을 포함하는 스팟의 2차원 어레이를 생성하기 위해 사용된다. 예를 들어, 문헌 [Jungblut and Thiede, (1997) Mass Spectr. Rev. 16: 145-162]을 참조한다. 2차원 겔 전기영동은 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Deutscher ed., Methods in Enzymology vol. 182]을 참조한다. 전형적으로, 샘플은 예를 들어 등전 포커싱에 의해 분리될 수 있으며, 그 동안에 샘플 내의 1종 이상의 크립토크롬은 그의 순 전하가 0 (즉, 등전점)인 스팟에 도달할 때까지 pH 구배로 분리된다. 이러한 제1 분리 단계는 1차원 어레이를 생성한다. 1차원 어레이의 분자는 일반적으로 제1 분리 단계에 사용된 것과 구별되는 기술을 사용하여 추가로 분리된다. 예를 들어, 제2 차원에서, 등전 포커싱에 의해 분리된 관심 대상 분자는 소듐 도데실 술페이트의 존재 하에 폴리아크릴아미드 겔, 예컨대 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)을 사용하여 추가로 분리된다. SDS-PAGE 겔은 분자 질량을 기반으로 하는 추가의 분리를 가능하게 한다. 전형적으로, 2차원 겔 전기영동은 복합 혼합물 내에서 1000-200,000 Da의 분자 질량 범위에서 화학적으로 상이한 관심 대상 분자를 분리할 수 있다.
2차원 어레이에서의 관심 대상 분자는 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 검출될 수 있다. 예를 들어, 겔에서의 관심 대상 분자는 표지되거나 또는 염색될 수 있다 (예를 들어, 쿠마시 블루 또는 은 염색). 겔 전기영동이 본 발명의 1종 이상의 크립토크롬의 분자량에 상응하는 스팟을 생성하는 경우에, 스팟을 절제하여, 예를 들어 기체 상 이온 분광측정법, 질량 분광측정법 또는 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 추가 분석할 수 있다. 대안적으로, 관심 대상 분자를 함유하는 겔은 전기장을 적용함으로써 불활성 막으로 전달할 수 있다. 이어서, 관심 대상 분자의 분자량에 대략 상응하는 막 상의 스팟은 예를 들어 기체 상 이온 분광측정법, 질량 분광측정법 또는 HPLC에 의해 분석될 수 있다.
임의로, 관심 대상 분자는 그의 해상도를 개선하고 그의 정체를 결정하기 위해 분석 전에 변형될 수 있다. 예를 들어, 샘플은 분석 전에 단백질분해적 소화에 적용될 수 있다. 임의의 프로테아제가 사용될 수 있다. 불연속 수의 단편으로 단백질을 절단할 수 있는 프로테아제, 예컨대 트립신이 특히 유용하다. 소화로부터 생성된 단편은 관심 대상 분자에 대한 지문과 같은 기능을 할 수 있으며, 그로 인해 그의 간접적 검출을 가능하게 한다. 이는 바람직한 분자 즉, 당해 크립토크롬과 혼동될 수 있는 유사한 분자 질량을 갖는 관심 대상 분자가 존재하는 경우에 특히 유용하다. 또한, 소분자일수록 질량 분광측정법에 의해 보다 용이하게 분해되기 때문에 단백질분해 단편화는 고분자량 분자에 유용하다. 또 다른 예에서, 분자는 검출 해상도를 개선하기 위해 변형될 수 있다. 예를 들어, 뉴라미니다제는 음이온성 흡착제 (예를 들어, 양이온성 교환 어레이)에 대한 결합을 개선하고 검출 해상도를 개선하기 위해 당단백질로부터 말단 시알산 잔기를 제거하는데 사용될 수 있다. 또 다른 예에서, 또 다른 분자 개체에 특이적으로 결합하는 특정한 분자량의 태그를 부착시킴으로써 분자를 변형시켜, 이를 추가로 구별할 수 있다. 임의로, 이러한 변형된 관심 대상 분자를 검출한 후에, 변형된 버전의 물리적 및 화학적 특징을 단백질 데이터베이스 (예를 들어, 스위스프롯(SwissProt)) 내에서 매칭함으로써 분자의 정체를 추가로 결정할 수 있다.
기질, 예를 들어 바이오칩 또는 항체 상에 포획되면, 임의의 적합한 방법, 예컨대 본원에 기재된 것들 뿐만 아니라 관련 기술분야에 공지된 다른 방법을 사용하여 샘플 내의 1종 이상의 크립토크롬을 측정할 수 있다. 이러한 분자의 수준 또는 양의 실제 측정은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 이들 방법은, 제한 없이, 질량 분광측정법 (예를 들어, 레이저 탈착/이온화 질량 분광측정법), 형광 (예를 들어 샌드위치 면역검정), 표면 플라즈몬 공명, 타원편광측정법 및 원자력 현미경검사를 포함한다. 방법은, 하나 이상의 마이크로어레이, PCR 방법, 질량 분광측정법 (예를 들어 및 제한 없이, ESI-MS, ESI-MS/MS, ESI-MS/(MS)n, 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화 비행시간 질량 분광측정법 (MALDI-TOF-MS), 표면-증강 레이저 탈착/이온화 비행시간 질량 분광측정법 (SELDI-TOF-MS), 규소 상 탈착/이온화 (DIOS), 이차 이온 질량 분광측정법 (SIMS), 사중극자 비행시간 (Q-TOF), 대기압 화학적 이온화 질량 분광측정법 (APCI-MS), APCI-MS/MS, APCI-(MS)n, 대기압 광이온화 질량 분광측정법 (APPI-MS), APPI-MS/MS, 및 APPI-(MS)n, 사중극자 질량 분광측정법, 푸리에 변환 질량 분광측정법 (FTMS), 및 이온 트랩 질량 분광측정법 포함), 핵산 칩, 노던 블롯 혼성화, TMA, SDA, NASBA, PCR, 실시간 PCR, 역전사효소 PCR, 실시간 역전사효소 PCR, 계내 PCR, 질량 분광측정법과 결합된 크로마토그래피 분리, 고정화 항체를 사용한 단백질 포획, 또는 종래 면역검정을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,723,591; 5,801,155 및 6,084,102 및 문헌 [Higuchi, 1992 and 1993]을 참조한다. PCR 검정은 예를 들어 멀티-웰 플레이트 포맷 또는 칩, 예컨대 바이오트로브 오픈 어레이 칩(BioTrove OPEN ARRAY Chip) (바이오트로브, 매사추세츠주 워번)에서 수행될 수 있다.
예를 들어, 크립토크롬에 상응하는 서열 데이터베이스 엔트리 내의 서열을 사용하여, 예를 들어 노던 블롯 혼성화 분석, 또는 특정 핵산 서열을 특이적으로 및 바람직하게는 정량적으로 증폭시키는 방법으로 RNA 서열을 검출하기 위한 프로브를 구축할 수 있다. 또 다른 예로서, 서열은, 크립토크롬 서열에 특이적으로 또는 선택적으로 혼성화되고 예를 들어 증폭-기반 검출 방법, 예컨대 역전사 기반 폴리머라제 연쇄 반응 (RT-PCR), 예를 들어 정량적 실시간 RT-PCR로 이러한 서열을 증폭시키는데 사용되는 프라이머를 구축하는데 사용될 수 있다. 유전자 발현에서의 변경이 유전자 증폭, 결실, 다형성 및 돌연변이와 연관되는 경우에, 시험 및 참조 집단에서의 서열 비교는 대상체 및 참조 세포 집단에서 검사된 DNA 서열의 상대적 양을 비교함으로써 이루어질 수 있다. 본원에 사용된 용어 "특이적으로 (또는 선택적으로) 혼성화되다"는 핵산과 관련된 경우에 핵산의 이종 집단에서 핵산의 존재를 결정하는 결합 반응을 지칭한다. 따라서, 지정된 검정 조건 하에, 명시된 핵산 프로브 (억제 핵산 포함)는 배경의 적어도 2배로 특정한 관심 대상 핵산에 결합 또는 혼성화될 수 있고, 실질적으로 샘플 내에 존재하는 다른 핵산에 대해서는 유의한 양으로 결합 또는 혼성화되지 않는다.
크립토크롬의 수준은 또한 면역검정에 의해 결정될 수 있다. 본원에 상세히 논의된 바와 같이, 항체는 모노클로날, 폴리클로날, 키메라, 또는 상기 것들의 단편일 수 있고, 반응 생성물을 검출하는 단계는 임의의 적합한 면역검정으로 수행될 수 있다. 항체에 "특이적으로 (또는 선택적으로) 결합하는" 또는 단백질 또는 펩티드와 관련된 경우에 "와 특이적으로 (또는 선택적으로) 면역반응성인"이라는 어구는 단백질 및 다른 생물물질의 이종 집단에서 단백질의 존재를 결정하는 결합 반응을 지칭한다. 따라서, 지정된 면역검정 조건 하에, 특정 항체는 배경의 적어도 2배로 특정한 단백질에 결합되고, 실질적으로 샘플 내에 존재하는 다른 단백질에 대해서는 유의한 양으로 결합되지 않는다. 상기 조건 하에서의 항체에 대한 특이적 결합은 특정한 단백질에 대한 그의 특이성에 대해 선택되는 항체를 필요로 할 수 있다. 예를 들어, 특정 종, 예컨대 래트, 마우스, 또는 인간으로부터의 크립토크롬에 대해 생성된 폴리클로날 항체가 상기 크립토크롬과는 특이적으로 면역반응성이지만 크립토크롬의 다형성 변이체 및 대립유전자를 제외한 다른 단백질과는 그렇지 않은 폴리클로날 항체만을 얻기 위해 선택될 수 있다. 이러한 선택은 다른 종으로부터의 크립토크롬과 교차-반응하는 항체를 제외함으로써 달성할 수 있다.
본 발명에 따라 수행된 면역검정은 동종 검정 또는 이종 검정일 수 있다. 동종 검정에서 면역학적 반응에는 통상적으로 특정 항체 (예를 들어, 항-크립토크롬 단백질 항체), 표지된 분석물 및 관심 대상 샘플이 관여한다. 표지로부터 발생되는 신호는 표지된 분석물에 대한 항체의 결합 시에 직접 또는 간접적으로 변형된다. 면역학적 반응 및 그 정도의 검출은 둘 다 균질 용액 중에서 수행될 수 있다. 사용될 수 있는 면역화학 표지는 자유 라디칼, 방사성동위원소, 형광 염료, 효소, 박테리오파지 또는 조효소를 포함한다.
이종 검정 접근법에서, 시약은 통상적으로 검출가능한 신호를 생성하기 위한 샘플, 항체 및 수단이다. 상기 기재된 바와 같은 샘플이 사용될 수 있다. 항체는 비드 (예컨대, 단백질 A 및 단백질 G 아가로스 비드), 플레이트 또는 슬라이드와 같은 지지체 상에 고정화되고, 액체 상 중에서 항원을 함유하는 것으로 의심되는 시편과 접촉될 수 있다. 이어서, 지지체가 액체 상으로부터 분리되고, 이러한 신호를 생성시키기 위한 수단을 사용하여 지지체 상 또는 액체 상 중 어느 하나가 검출가능한 신호에 대해 검사된다. 상기 신호는 샘플 내의 분석물의 존재와 관련된다. 검출가능한 신호를 생성하는 수단은 검출가능한 표지의 사용을 포함한다. 예시적인 검출가능한 표지는 자기 비드 (예를 들어, 디나비즈(DYNABEADS)™), 형광 염료, 효소 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시드, 알칼리성 포스파타제, 및 ELISA에 통상적으로 사용되는 다른 것들), 방사성표지 (예를 들어, 35S, 125I, 131I) 및 형광 표지 (예를 들어, 플루오레세인, 알렉사(Alexa), 녹색 형광 단백질, 로다민) 및 비색 표지, 예컨대 공지된 기술에 따른 콜로이드성 금 또는 유색 유리 또는 플라스틱 비드를 포함한다.
대안적으로, 샘플 내의 관심 대상 분자는, 예를 들어 제2 표지된 항체를 사용하여 결합된 크립토크롬-특이적 항체를 검출하는 간접 검정을 사용하여, 및/또는 예를 들어 크립토크롬의 독특한 에피토프에 결합하는 모노클로날 항체를 혼합물과 동시에 인큐베이션하는 경쟁 또는 억제 검정으로 검출할 수 있다. 예를 들어, 검출될 항원이 제2 결합 부위를 함유하는 경우에, 그 부위에 결합하는 항체가 검출가능한 기에 접합되고, 분리 단계 전에 액체 상 반응 용액에 첨가될 수 있다. 고체 지지체 상의 검출가능한 표지의 존재는 시험 샘플 내의 항원의 존재를 나타낸다. 항체-항원 복합체의 양 또는 존재를 측정하는 방법은 예를 들어 형광의 검출, 발광, 화학발광, 흡광도, 반사도, 투과도, 복굴절 또는 굴절률 (예를 들어, 표면 플라즈몬 공명, 타원편광측정법, 공명 거울 방법, 격자 커플러 도파관 방법 또는 간섭측정법)을 포함한다. 광학 방법은 현미경검사 (공초점 및 비-공초점 둘 다), 영상화 방법 및 비-영상화 방법을 포함한다. 전기화학적 방법은 전압전류법 및 전류측정법을 포함한다. 고주파 방법은 다극성 공명 분광분석법을 포함한다. 적합한 면역검정의 예는 이뮤노블롯팅 (예를 들어, 웨스턴 블롯팅, 슬롯 블롯 검정), 면역침전, 면역형광 방법, 화학발광 방법, 전기화학발광 (ECL) 또는 효소-연결된 면역검정, 예를 들어 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA) 및 방사성면역검정 (RIA)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일반적으로 문헌 [E. Maggio, Enzyme-Immunoassay, (1980) (CRC Press, Inc., Boca Raton, Fla.)]을 참조하며; 또한 미국 특허 번호 4,727,022; 4,659,678; 4,376,110; 4,275,149; 4,233,402; 및 4,230,767을 참조한다. 이들 방법은 또한 예를 들어 문헌 [Methods in Cell Biology: Antibodies in Cell Biology, volume 37 (Asai, ed. 1993); Basic and Clinical Immunology (Stites & Terr, eds., 7th ed. 1991); 및 Harlow & Lane (상기 문헌)]에 기재되어 있다. 이들 모두는 본원에 참조로 포함된다.
면역검정은 샘플 내의 1종 이상의 크립토크롬의 존재 또는 부재 뿐만 아니라 샘플 내의 양을 결정하는데 사용될 수 있다. 항체-마커 복합체의 양은 표준와 비교하여 결정할 수 있다. 표준은 예를 들어 샘플 내에 존재하는 것으로 공지된 공지의 화합물 또는 또 다른 단백질일 수 있다. 상기 주지된 바와 같이, 측정의 단위가 대조군과 비교될 수 있는 한, 1종 이상의 크립토크롬의 시험 양은 절대 단위로 측정될 필요가 없다.
단백질은 검출가능하게 상이한 질량을 특징으로 하는 다수의 상이한 형태로 샘플 내에 존재할 수 있다. 이들 형태는 번역전 및 번역후 변형 중 어느 하나 또는 둘 다로부터 생성될 수 있다. 번역전 변형된 형태는 대립유전자 변이체, 스플라이스 변이체, 및 RNA 편집 형태를 포함한다. 번역후 변형된 형태는 단백질분해적 절단 (예를 들어, 모 단백질의 단편), 글리코실화, 인산화, 지질화, 산화, 메틸화, 시스티닐화, 술폰화 및 아세틸화로부터 생성된 형태를 포함한다. 항체는 또한 단백질, 폴리펩티드, 돌연변이 및 다형성의 번역후 변형, 예컨대 티로신 인산화, 트레오닌 인산화, 세린 인산화, 글리코실화 (예를 들어, O-GlcNAc)를 검출하는데 유용할 수 있다. 이러한 항체는 관심 대상 단백질 또는 단백질들에서 인산화 아미노산을 특이적으로 검출하며, 본원에 기재된 이뮤노블롯팅, 면역형광 및 ELISA 검정에 사용될 수 있다. 이들 항체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 널리 공지되어 있고, 상업적으로 입수가능하다. 번역후 변형은 또한 준안정성 이온을 사용하여 리플렉터 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화-비행시간 질량 분광측정법 (MALDI-TOF)으로 결정될 수 있다 (문헌 [Wirth, U. et al. (2002) Proteomics 2(10): 1445-51]). 특정 단백질을 포함하는 단백질 및 그의 모든 변형된 형태의 집합은 본원에서 "단백질 클러스터"로 지칭된다. 특정 단백질 그 자체를 제외한 특정 단백질의 모든 변형된 형태의 집합은 본원에서 "변형된 단백질 클러스터"로서 지칭된다. 임의의 크립토크롬의 변형된 형태가 또한 본원에 개시된 방법에서 그 자체로 사용될 수 있다. 특정 경우에, 변형된 형태가 본원에 제시된 특정 형태에 비해 진단에서 보다 우수한 식별 능력을 나타낼 수 있다. 변형된 형태는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법론에 의해 초기에 검출될 수 있다.
대안적으로, 크립토크롬 단백질 및 핵산 대사물을 측정할 수 있다. 용어 "대사물"은 대사 프로세스의 임의의 화학적 또는 생화학적 생성물, 예컨대 생물학적 분자의 프로세싱, 절단 또는 소비에 의해 생성된 임의의 화합물 (예를 들어, 단백질, 핵산, 탄수화물, 또는 지질)을 포함한다. 대사물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 방법, 예를 들어 굴절률 분광분석법 (RI), 울트라-바이올렛 분광분석법 (UV), 형광 분석, 방사화학 분석, 근적외선 분광분석법 (근-IR), 핵 자기 공명 분광분석법 (NMR), 광 산란 분석 (LS), 질량 분광측정법, 열분해 질량 분광측정법, 비탁측정법, 분산 라만 분광분석법, 질량 분광측정법과 조합된 기체 크로마토그래피, 질량 분광측정법과 조합될 수 있는 액체 크로마토그래피 (고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 포함), 질량 분광측정법과 조합된 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화-비행시간 (MALDI-TOF), 질량 분광측정법과 조합된 이온 스프레이 분광분석법, 모세관 전기영동, 이온 이동성 분광측정법, 표면-증강 레이저 탈착/이온화 (SELDI), 광학 방법, 전기화학적 방법, 원자력 현미경검사, 고주파 방법, 표면 플라즈몬 공명, 타원편광측정법, NMR 및 IR 검출로 검출될 수 있다. (국제 출원 공개 번호 WO 04/056456 및 WO 04/088309를 참조하며, 이들 각각은 이로써 그 전문이 참조로 포함됨). 이와 관련하여, 다른 분석물은 상기-언급된 검출 방법 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 형광 염료, 예컨대 특히 플루오(Fluo) 시리즈, Fura-2A, Rhod-2를 사용하여 샘플에서 순환 칼슘 이온 (Ca2+)을 검출할 수 있다. 다른 대사물이 이러한 대사물을 검출하기 위해 특이적으로 설계되거나 주문제작된 시약을 사용하여 유사하게 검출될 수 있다.
Cry-매개 질환 또는 장애에는 1종 이상의 크립토크롬의 활성 또는 표적에 결합하는 1종 이상의 크립토크롬의 능력에서의 변화가 관련될 수 있다. 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 크립토크롬 단백질은 주기 단백질 Per 1 및/또는 Per2에 이종이량체로서 결합하는 것으로 여겨지며, 이는 이어서 CLOCK-BMAL1 유전자의 프로모터 영역에 결합하여 다수의 대사 프로세스와 충돌할 수 있는 피드백 루프에서의 전사 억제를 용이하게 한다. 따라서, 본 발명의 방법에 따라 1종 이상의 크립토크롬의 유효량을 측정하는 것은 Per1 및/또는 Per2, 글루코코르티코이드 수용체 (GR), 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 Cry의 임의의 다른 결합 표적에 결합하는 Cry 단백질의 능력에서의 증가 또는 감소를 평가하는 것을 포함할 수 있다. 단백질-단백질 상호작용의 측정은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 공동-면역침전, 효모 2종-하이브리드 검정, 표면 플라즈몬 공명, 이분자 형광 상보법, 탠덤 친화도 정제, 파지 디스플레이, 형광 편광/이방성, 이중 편광 간섭측정법, 형광 상관관계 분광분석법, 형광 공명 에너지 전달 등에 의해 용이해질 수 있다.
1종 이상의 크립토크롬의 활성은 또한 DNA 서열 즉, CLOCK-BMAL1 유전자, 또는 1종 이상의 크립토크롬에 의해 인식된 결합 부위를 함유하는 다른 유전자의 프로모터 영역에 결합하는 능력에서의 증가 또는 감소에 의해 측정될 수 있다. "프로모터", "프로모터 서열" 또는 "프로모터 영역"은, 세포 내의 RNA 폴리머라제에 결합하고 하류 (3' 방향) 코딩 서열의 전사를 개시하여 그의 발현을 제어할 수 있는 DNA 서열을 지칭한다. 본 발명을 규정하는 목적을 위해, 프로모터 서열은 전사 개시 부위 근처의 그의 3' 말단에서 결합되며, 상류 (5' 방향) 연장되어, 전사를 개시하는데 필요한 최소한의 수의 염기 또는 요소를 배경을 초과하는 검출가능한 수준으로 포함한다. 프로모터 서열 내에는 전사 개시 부위 (예를 들어, 뉴클레아제 S1로 맵핑시켜 편리하게 규정됨), 뿐만 아니라 RNA 폴리머라제의 결합을 일으키는 단백질 결합 도메인 (컨센서스 서열)이 존재할 것이다. 프로모터는 그 전체가 천연의 유전자로부터 유래될 수 있거나, 또는 자연에서 발견되는 상이한 프로모터로부터 유래된 상이한 요소로 구성될 수 있거나, 또는 심지어 합성 DNA 절편을 포함할 수 있다. 대부분의 경우에, 조절 서열의 정확한 경계가 완전하게 규정된 바 없으며, 상이한 길이의 DNA 단편들이 동일한 프로모터 활성을 가질 수 있다.
CLOCK-BMAL1 프로모터 (또는 Cry에 대한 결합 또는 인식 부위를 함유하는 임의의 다른 프로모터 영역)는 리포터 유전자에 "작동가능하게 연결될" 수 있다. 용어 "작동가능하게 연결된"은 하나의 기능이 다른 하나에 의해 영향을 받도록 하는, 단일 핵산 단편 상의 핵산 서열들의 회합을 지칭한다. 예를 들어, 프로모터는 코딩 서열의 발현에 영향을 미칠 수 있는 경우에 그 코딩 서열과 작동가능하게 연결된 것이다 (즉, 그 코딩 서열은 프로모터의 전사 제어 하에 있음). 코딩 서열은 조절 서열에 센스 또는 안티센스 배향으로 작동가능하게 연결될 수 있다. 용어 "리포터 유전자"는 리포터 유전자의 효과를 기반으로 확인될 수 있는 식별 인자를 코딩하는 핵산을 의미하며, 여기서 효과는 관심 대상 핵산의 유전을 추적하고/거나 관심 대상 핵산을 유전한 세포 또는 유기체를 확인하고/거나 유전자 발현 유도 또는 전사를 측정하기 위해 사용된다. 관련 기술분야에 공지되고 사용되는 리포터 유전자의 예는 루시페라제 (Luc), 녹색 형광 단백질 (GFP), 알칼리성 포스파타제 (ALP), 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제 (CAT), β-갈락토시다제 (LacZ), β-글루쿠로니다제 (Gus) 등을 포함한다. 선택 마커 유전자는 또한 리포터 유전자로 간주될 수 있다. 프로모터-리포터 유전자 구축물은 세포 내로 전달되거나 형질감염된 플라스미드 또는 발현 벡터에 함유될 수 있다. 리포터 유전자의 발현은 유전자 산물의 활성, 예를 들어 상기 예시된 리포터 유전자를 사용하는 경우에 효소 활성을 결정함으로써 검출될 수 있다.
용어 "플라스미드"는 종종 세포의 중심 대사의 부분이 아닌 유전자를 운반시키고, 통상적으로 원형 이중-가닥 DNA 분자의 형태인 염색체 외 요소를 지칭한다. 상기 요소는 다수의 뉴클레오티드 서열이, 선택된 유전자 산물에 대한 프로모터 단편 및 DNA 서열을 적절한 3' 비번역된 서열과 함께 세포 내로 도입할 수 있는 고유한 구축 내로 연결되거나 재조합된 바 있는, 임의의 공급원으로부터 유래된 선형, 원형 또는 초나선형의 단일- 또는 이중-가닥 DNA 또는 RNA의 자율 복제 서열, 게놈 통합 서열, 파지 또는 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 용어 "발현 벡터"는 숙주 내로의 형질전환 후에 삽입된 핵산 서열의 발현을 가능하게 하도록 설계된 벡터, 플라스미드 또는 비히클을 의미한다. 벡터는 관련 기술분야에 공지된 방법, 예를 들어 형질감염, 전기천공, 미세주사, 형질도입, 세포 융합, DEAE 덱스트란, 인산칼슘 침전, 리포펙션 (리소솜 융합), 유전자 건의 사용 또는 DNA 벡터 수송체에 의해 목적 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 임의의 세포, 예컨대 원핵 세포 또는 진핵 세포가 리포터 검정을 수행하는데 사용될 수 있다. 바람직하게는, 세포는 박테리아 세포, 진균 세포, 효모 세포, 선충류 세포, 곤충 세포, 어류 세포, 식물 세포, 조류 세포, 동물 세포 및 포유동물 세포일 수 있다. 세포는 일차 세포일 수 있거나, 또는 세포주로서 계속적으로 계대배양될 수 있다. 예시적인 세포 및 세포주는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된다.
DNA 서열에 결합하는 1종 이상의 크립토크롬의 활성 또는 능력을 측정하는 다른 방법은 염색질 면역침전 검정, 전기영동 이동성 변화 검정, DNA 풀-다운 검정, 마이크로플레이트 포획 및 검출 등을 포함한다.
이어서, 크립토크롬 단백질, 핵산, 다형성, 대사물 또는 다른 분석물의 유효량의 수준, 또는 크립토크롬 단백질, 또는 크립토크롬 단백질에 직접 또는 간접적으로 결합하는 표적의 활성이 결정될 수 있고, 참조 값, 예를 들어 질환 상태가 공지된 대조군 대상체 또는 집단, 또는 지수 값 또는 기준선 값과 비교될 수 있다. 참조 샘플 또는 지수 값 또는 기준선 값은 치료에 노출된 바 있는 하나 이상의 대상체로부터 얻거나 유도될 수 있거나, Cry-매개 질환 또는 장애의 발생 위험이 낮은 하나 이상의 대상체로부터 얻거나 유도될 수 있거나, 또는 치료에 대한 노출의 결과로서 질환 위험 인자에서 개선을 나타낸 대상체로부터 얻거나 유도될 수 있다. 대안적으로, 참조 샘플 또는 지수 값 또는 기준선 값은 치료에 노출된 바 없는 하나 이상의 대상체로부터 얻거나 유도될 수 있다. 예를 들어, 샘플은 치료의 진행을 모니터링하기 위해, Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 초기 치료 및 상기 질환 또는 장애에 대한 후속 치료를 받은 대상체로부터 수집될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 샘플을 제1 기간에, 예를 들어 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을 단독으로 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 사용하여 치료하기 전에 대상체로부터 채취하고, 이어서 본원에 기재된 바와 같이 1종 이상의 크립토크롬 (또는 크립토크롬 표적)을 측정 또는 검출할 수 있다. 그 후에, 제2 샘플을 제2 기간에, 예를 들어 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을 단독으로 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 사용하여 치료한 후에 대상체로부터 채취하고, 1종 이상의 크립토크롬 또는 크립토크롬 표적을 측정할 수 있다. 임의의 수의 샘플은 그의 유효성을 평가하기 위해 치료 과정 전반에 걸쳐 임의의 시간 간격을 두고 채취될 수 있다.
참조 값은 또한 본원에 개시된 것들과 같은 집단 연구로부터의 위험 예측 알고리즘 또는 컴퓨터 지수로부터 유도된 값을 포함할 수 있다. 이러한 문맥에서 유사한 용어는, 예를 들어 Cry-매개 질환 또는 장애를 검출할 수 없는 대상체와 같은 정상 대상체 또는 비-질환 대상체에서의 정상 대상체의 필적하는 샘플 내에 존재하는 크립토크롬의 평균 또는 중앙 양일 수 있는 "대조군"이다. 대조군 양은 시험 양을 측정하는 것과 동일하거나 실질적으로 유사한 실험 조건 하에 측정된다. 상관관계는 시험 샘플 내의 크립토크롬의 존재 또는 부재 및 대조군 내의 동일한 분자의 검출 빈도를 고려할 수 있다. 상관관계는 질환 상태의 결정을 용이하게 하기 위해 이러한 인자를 둘 다 고려할 수 있다.
Cry-매개 질환 또는 장애를 앓지 않고 Cry-매개 질환 또는 장애가 발생할 것으로 예상되지 않는 대상체의 참조 프로파일이 또한 본원에 개시된 방법에 따라 제조될 수 있다. 1종 이상의 크립토크롬의 측정이 또한 Cry-매개 질환 또는 장애를 앓는 대상체로부터 얻은 "대상체 프로파일"을 생성하는데 사용될 수 있다. 대상체 프로파일은, Cry-매개 질환 또는 장애의 발생 위험에 있는 대상체를 진단 또는 확인하고, 질환의 진행 뿐만 아니라 질환의 진행 속도를 모니터링하고, 치료 양식 또는 대상체 관리의 유효성을 모니터링하기 위해 참조 프로파일과 비교될 수 있다.
본 발명의 참조 및 대상체 프로파일은 기기-판독가능한 매체, 예컨대 비제한적으로 아날로그 또는 디지털 테이프, 예컨대 특히 VCR, CD-ROM, DVD-ROM, USB 플래쉬 매체에 의해 판독가능한 것들에 담길 수 있다. 이러한 기기-판독가능한 매체에는 또한 추가의 시험 결과, 예컨대, 제한 없이, 임상적 파라미터의 측정치 및 종래 실험 위험 인자가 담길 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 기기-판독가능한 매체는 또한 대상체 정보, 예컨대 의학적 병력 및 임의의 관련 가족력을 포함할 수 있다. 기기-판독가능한 매체에는 또한 다른 위험 알고리즘 및 컴퓨터 지수, 예컨대 본원에 기재된 것들과 관련된 정보가 담길 수 있다.
본원에 개시된 임의의 방법에서, 샘플로부터의 데이터는 검출 수단으로부터 진단 알고리즘이 담겨있는 컴퓨터 내로 직접적으로 공급될 수 있다. 대안적으로, 수득된 데이터는 진단 알고리즘이 담긴 별도의 컴퓨터 내로 수동으로 또는 자동화된 수단을 통해 공급될 수 있다. 따라서, 본 발명의 실시양태는 크립토크롬의 검출을 Cry-매개 질환 또는 장애의 진단 가능성과 상호관련시키는 것과 관련된 방법을 포함한다. 상관관계는 대조군 양 (크립토크롬의 상향 또는 하향 조절) (예를 들어, Cry-매개 질환 또는 장애를 검출할 수 없는 정상 대상체에서의 것)과 비교된, 샘플 내의 1종 이상의 크립토크롬의 양을 고려할 수 있다. 상관관계는 시험 샘플 내의 크립토크롬의 존재 또는 부재, 및 대조군 내의 동일한 분자의 검출 빈도를 고려할 수 있다. 상관관계는 대상체가 Cry-매개 질환 또는 장애를 앓거나 앓지 않는지의 여부의 결정을 용이하게 하기 위해 이러한 인자를 둘 다 고려할 수 있다.
데이터 분석은 검출된 마커의 신호 강도 (예를 들어, 피크의 높이)를 결정하는 단계 및 "극단치" (예정된 통계적 분포로부터 벗어나는 데이터)를 제거하는 단계를 포함할 수 있다. 관측된 피크는 일부 참조에 대한 각각의 피크의 높이를 계산하는 과정에 의해 정규화될 수 있다. 예를 들어, 참조는 기기 및 규모가 0으로 설정된 화학물질 (예를 들어, 에너지 흡수 분자)에 의해 생성된 배경 잡음일 수 있다. 각각의 관심 대상 분자에 대해 검출된 신호 강도는 바람직한 규모 (예를 들어, 100) 내에서의 상대 강도의 형태로 디스플레이될 수 있다. 대안적으로, 표준 (예를 들어, 혈청 단백질)이, 표준으로부터의 피크가 각각의 검출된 관심 대상 분자에 대해 관찰된 신호의 상대 강도를 계산하기 위한 참조로서 사용될 수 있도록 하는 샘플로 인정될 수 있다.
생성된 데이터는 디스플레이를 위한 다양한 포맷으로 변형되거나 전환될 수 있다. "스펙트럼 뷰 또는 보유물 지도"로 지칭되는 한 포맷에서, 표준 스펙트럼 뷰가 디스플레이될 수 있으며, 여기서 뷰는 각각의 특정한 분자량에서 검출기에 도달하는 분자의 양을 도시한다. "피크 지도"로 지칭되는 또 다른 포맷에서, 피크 높이 및 질량 정보만이 스펙트럼 뷰로부터 유지되어, 클리너 이미지를 생성하고, 거의 동일한 분자량을 갖는 관심 대상 분자를 보다 용이하게 확인할 수 있게 한다. "겔 뷰"로 지칭되는 또 다른 포맷에서, 피크 뷰로부터의 각각의 질량은 각각의 피크의 높이를 기반으로 그레이스케일 이미지로 전환되어 전기영동 겔 상의 밴드와 유사한 외양을 생성할 수 있다. "3-D 오버레이"로 지칭되는 또 다른 포맷에서, 몇몇 스펙트럼이 상대적 피크 높이에서의 미묘한 변화를 연구하기 위해 오버레이될 수 있다. "차이 지도 뷰"로서 지칭되는 또 다른 포맷에서, 2개 이상의 스펙트럼을 비교하여 샘플 사이에서 상향- 또는 하향-조절되는 고유한 관심 대상 분자를 편리하게 강조할 수 있다. 임의의 2개의 샘플로부터의 프로파일 (스펙트럼)은 시각적으로 비교될 수 있다. 또 다른 포맷에서, 스팟파이어 스캐터 플롯(Spotfire Scatter Plot)이 사용될 수 있으며, 여기서 검출된 관심 대상 분자는 플롯의 도트로서 플롯팅되며, 여기서 플롯의 한 축은 검출된 크립토크롬의 겉보기 분자량을 나타내고 또 다른 축은 검출된 크립토크롬의 신호 강도를 나타낸다. 각각의 샘플에 대해, 검출된 관심 대상 분자, 및 샘플 내에 존재하는 분자의 양은 컴퓨터 판독가능한 매체에 저장될 수 있다. 이어서, 이러한 데이터는 대조군 또는 참조 프로파일 또는 참조 값 (예를 들어, 대조군, 예를 들어 Cry-매개 질환 또는 장애를 검출할 수 없는 대상체에서 검출된 분자의 프로파일 또는 양)과 비교될 수 있다.
본원에 개시된 방법에서 생성된 데이터는 분류 모델을 사용하는 패턴 인식 프로세스를 사용하여 분류될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이어서, 샘플, 예컨대 "공지된 샘플"을 사용하여 생성된 데이터가 분류 모델을 "훈련"하는데 사용될 수 있다. "공지된 샘플"은 사전-분류된 (예를 들어, 질환 또는 비-질환) 샘플이다. 이어서, 공지된 샘플을 사용하여 생성된 데이터가 분류 모델을 "훈련"하는데 사용될 수 있다. "공지된 샘플"은 사전-분류된 샘플이다. 데이터는 분류 모델을 형성하는데 사용될 수 있으며, "훈련 데이터 세트"로 지칭될 수 있다. 훈련되면, 분류 모델은 미지의 샘플을 사용하여 생성된 데이터에서 패턴을 인식할 수 있다. 이어서, 분류 모델은 미지의 샘플을 클래스로 분류하는데 사용될 수 있다. 이는, 예를 들어 특정한 생물학적 샘플이 특정 생물학적 상태와 연관되는지의 여부 (예를 들어, 질환 대 비-질환)를 예측하는데 유용할 수 있다. 분류 모델을 형성하는데 사용된 훈련 데이터 세트는 미가공 데이터 또는 예비-가공된 데이터를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 미가공 데이터는 비행시간 스펙트럼 또는 질량 스펙트럼으로부터 직접적으로 수득될 수 있고, 이어서 임의의 적합한 방법으로 임의로 "예비-가공"될 수 있다. 이들과 같은 예비-가공 단계는 분류 모델을 훈련하는데 사용되는 데이터의 양을 감소시키기 위해 사용될 수 있다.
분류 모델은 데이터에 존재하는 객관적 파라미터를 기반으로 데이터 전체를 클래스로 분리하기 위해 계획된 임의의 적합한 통계적 분류 (또는 "학습") 방법을 사용하여 형성될 수 있다. 분류 방법은 감독 또는 무감독 방법일 수 있다. 감독 및 무감독 분류 프로세스의 예는 문헌 [Jain, "Statistical Pattern Recognition: A Review", IEEE Transactions on Pattern Analysis and Machine Intelligence, Vol. 22, No. 1, January 2000]에 기재되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 감독 분류에서, 공지된 카테고리의 예를 함유하는 훈련 데이터는 것은 각각의 공지된 클래스를 규정하는 추가의 한 세트의 관계를 학습하는 학습 메카니즘으로 제시된다. 이어서, 새로운 데이터는 학습 메카니즘에 적용될 수 있고, 이는 이어서 학습된 관계를 사용하여 새로운 데이터를 분류한다.
감독 분류 프로세스의 예는 선형 회귀 프로세스 (예를 들어, 다중 선형 회귀 (MLR), 부분 최소 제곱 (PLS) 회귀 및 주성분 회귀 (PCR)), 이진 결정 트리 (예를 들어, 재귀적 분할 프로세스, 예컨대 CART - 분류 및 회귀 트리), 인공 신경망, 예컨대 역전파망, 판별 분석 (예를 들어, 베이지안(Bayesian) 분류기 또는 피셔(Fischer) 분석), 로지스틱 분류기, 및 지지 벡터 분류기 (지지 벡터 기기)를 포함한다. 바람직한 감독 분류 방법은 재귀적 분할 프로세스 (미국 특허 출원 공개 번호 20020138208)이다. 무감독 분류는 훈련 데이터 세트가 유래된 스펙트럼을 사전 분류하지 않으면서 훈련 데이터 세트에서의 유사성을 기반으로 분류를 학습하도록 계획된다. 무감독 학습 방법은 클러스터 분석을 포함한다. 클러스터 분석은, 이상적으로 서로 매우 유사하고 다른 클러스터의 구성원과 매우 다른 구성원을 가져야 하는 "클러스터" 또는 군으로 데이터를 나누도록 계획된다. 이어서, 데이터 항목 사이의 차이를 측정하는 일부 차이 측정법을 사용하여 유사성을 측정하고, 서로 보다 가까운 데이터 항목을 함께 클러스터링한다. 클러스터링 기술은 맥퀸(MacQueen) K-평균 알고리즘 및 코호넨(Kohonen) 자기-조직화 지도 알고리즘을 포함한다. 생물학적 정보를 분류하는데 사용하기 위해 주장된 학습 알고리즘은 예를 들어 국제 출원 공개 번호 WO 01/31580 및 미국 특허 출원 공개 번호 20020193950, 20030004402 및 20030055615에 기재되어 있다. 또 다른 분류 방법은 통합 최대 분리성 분석 ("USMA") 분류기의 비-선형 버전을 사용하는 다변량 예측 모델을 포함한다. USMA 분류기의 상세사항은 미국 특허 출원 공개 번호 20030055615에 기재되어 있다.
다른 분류 알고리즘 및 공식은 특히 주성분 분석 (PCA), 교차-상관관계, 요인 회전, 로지스틱 회귀 (LogReg), 선형 판별 분석 (LDA), 고유유전자 선형 판별 분석 (ELDA), 랜덤 포레스트 (Random Forest: RF), 재귀적 분할 트리 (RPART), 뿐만 아니라 다른 관련된 결정 트리 분류 기술, 슈렁큰 센트로이드(Shrunken Centroid: SC), StepAIC, Kth-최근린, 부스팅, 결정 트리, 신경망, 베이지안 네트워크, 지지 벡터 기기, 리브-원-아웃 (Leave-One-Out: LOO), 10배 교차-확인 (10배 CV) 및 은닉 마르코프 모델을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
1종 이상의 크립토크롬의 검출 및 상관관계는 또한 임의의 적합한 수단, 예를 들어 소프트웨어 패키지, 예를 들어 어플라이드 매스(Applied Math), 진익스플로어(GenExplore)™, 2-원 클러스터 분석, 주성분 분석, 판별 분석, 자기-조직화 지도; 바이오디스커버리, 인크.(BioDiscovery, Inc., 캘리포니아주 로스앤젤레스) (이미진(ImaGene)™, 특수 영상 프로세싱 및 데이터 추출 소프트웨어, 매트랩(MatLab)®에 의해 가동; 진사이트(GeneSight): 계층적 클러스터링, 인공 신경망 (SOM), 주성분 분석, 시계열; 오토진(AutoGene)™; 클론트래커(CloneTracker)™); 진데이터 아게(GeneData AG, 스위스 바젤); MIT 화이트헤드 게놈 센터(Whitehead Genome Center)의 분자 패턴 인식 웹 사이트; 로제타 인파마틱스(Rosetta Inpharmatics, 워싱턴주 커클랜드), 리솔버(Resolver)™ 발현 데이터 분석 시스템; 스캐널리틱스, 인크.(Scanalytics, Inc., 버지니아주 페어팩스) (그의 마이크로어레이 스위트는 연구원이 유전자 발현 마이크로어레이 데이터를 획득하고, 시각화하고, 가공하고 분석하는 것을 가능하게 함); 어레이 분석용 소프트웨어 툴을 제공하는 TIGR (The Institute for Genome Research)을 사용하여 분석될 수 있다. 또한, 예를 들어 문헌 [Eisen and Brown, (1999) Methods Enzymol. 303: 179-205]을 참조한다.
질환 상태를 정성분석하는 방법의 특정 실시양태에서, 방법은 질환 또는 장애의 상태를 기반으로 대상체의 임상 치료를 관리 또는 변형시키는 것을 추가로 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 방법의 결과가 결정적이지 않거나 상태의 확인이 필요한 이유가 존재하는 경우에, 의사는 추가의 시험 (예를 들어, CT 스캔, PET 스캔, MRI 스캔, PET-CT 스캔, X선, 생검, 혈액 시험)을 지시할 수 있다. 대안적으로, 상태가 치료가 적절한 것으로 나타난 경우에, 의사는 치료를 위해 대상체를 스케줄링할 수 있다. 다른 경우에, 대상체는 치유적 치료 (예컨대, 수술 대신에 또는 그에 더하여 치료제를 (예컨대, 예를 들어, 본원에 정의된 화학식 I의 화합물을 단독으로 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여) 투여하는 것)를 받을 수 있다. 어떠한 추가 조치도 보장될 수는 없다. 게다가, 결과가 치료가 성공적이었음을 나타내는 경우에, 유지 요법이 필요할 수 있거나 또는 어떠한 추가 관리도 필요하지 않을 수 있다.
또한 본원에 개시된 대상은 크립토크롬이 대상체의 임상 치료 후에 다시 측정되는 경우의 방법을 제공한다. 이들 경우에, 방법은 Cry-매개 질환 또는 장애의 상태, 예를 들어 치료에 대한 반응, 질환의 차도 또는 질환의 진행을 모니터링하기 위해 사용된다. 방법은 대상체가 각각의 치료를 받은 후에 반복될 수 있고, 이는 의사가 치료 과정의 유효성을 추적할 수 있게 한다. 결과가 치료가 효과적이지 않은 것으로 나타난 경우에, 치료 과정은 그에 따라 변경될 수 있다.
본 발명은 질환 상태를 정성분석하고/거나 질환을 검출 또는 진단하기 위한 위한 키트 제공하며, 여기서 키트는 1종 이상의 크립토크롬을 검출하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 키트는 임의의 1종 이상의 본원에 기재된 크립토크롬을 검출하는데 사용될 수 있고, 상기 1종 이상의 크립토크롬은 질환 대상체 및 정상 대상체의 샘플에서 차별적으로 존재한다. 본 발명의 키트는 많은 적용을 갖는다. 예를 들어, 키트는 본원에 기재된 본 발명의 방법 중 어느 하나에, 예컨대 특히 대상체가 Cry-매개 질환 또는 장애를 앓는 경우 또는 음성 진단을 갖는 경우에 차별화되어 진단을 보조하도록 사용될 수 있다. 또 다른 예에서, 키트는 Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 시험관내 또는 생체내 동물 모델을 사용하여 1종 이상의 크립토크롬의 발현을 조정하는 화합물, 1종 이상의 크립토크롬의 활성을 조정하는 (즉, 표적, 예컨대 Per1, Per2, 글루코코르티코이드 수용체 (GR), 또는 크립토크롬에 의해 인식되는 프로모터 서열, 예컨대 CLOCK-BMAL1 프로모터 또는 임의의 다른 프로모터 서열에 결합하는 1종 이상의 크립토크롬의 능력에 영향을 미치는) 화합물을 확인하는데 사용될 수 있다. 또 다른 예에서, 키트는 본원에 정의된 바와 같은 1종 이상의 크립토크롬 단백질의 결합 표적을 확인하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 키트는 검출 시약, 예를 들어 함께 패키징된 핵산에 의해 코딩된 단백질에 대한 항체, 또는 헥산의 부분에 상보적인 상동 핵산 서열, 예컨대 올리고뉴클레오티드 서열, 프라이머 또는 압타머를 가짐으로써 1종 이상의 크립토크롬 핵산을 특이적으로 확인하는 핵산을 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 유전자의 단편일 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 예를 들어, 올리고뉴클레오티드는 200, 150, 100, 50, 25, 10개 또는 그 미만의 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 대안적으로, 검출 시약은 1종 이상의 크립토크롬 단백질 또는 그의 표적에 특이적으로 또는 선택적으로 결합하는 1종 이상의 항체일 수 있다. 키트는 개별 용기에 핵산 또는 항체 (이미 고체 매트릭스에 결합되거나, 또는 그를 매트릭스에 결합시키는 시약과 함께 별도로 패키징됨), 대조군 제제 (양성 및/또는 음성) 및/또는 검출가능한 표지, 예컨대 특히 플루오레세인, 녹색 형광 단백질, 로다민, 시아닌 염료, 알렉사 염로, 루시페라제, 방사성표지를 함유할 수 있다. 검정을 수행하기 위한, 및 질환 상태와의 상관관계에 대한 지침서 (예를 들어, 문서, 테이프, VCR, CD-ROM 등)가 키트에 포함될 수 있다.
예를 들어, 검출 시약은 고체 매트릭스, 예컨대 다공성 스트립 상에 고정화되어 적어도 1개의 검출 부위를 형성할 수 있다. 다공성 스트립의 측정 또는 검출 영역은 핵산을 함유하는 다수의 부위를 포함할 수 있다. 시험 스트립은 또한 음성 및/또는 양성 대조군에 대한 부위를 함유할 수 있다. 대안적으로, 대조군 부위가 시험 스트립과 분리된 스트립 상에 위치할 수 있다. 임의로, 상이한 검출 부위는 고정화된 핵산의 상이한 양을, 예를 들어 제1 검출 부위에서는 더 높은 양을, 후속 부위에서는 더 낮은 양을 함유할 수 있다. 시험 샘플의 첨가시에, 검출가능한 신호를 디스플레이하는 다수의 부위는 샘플 내에 존재하는 크립토크롬의 양의 정량적 표시를 제공한다. 검출 부위는 임의의 적합하게 검출가능한 형상으로 구성될 수 있고, 전형적으로 시험 스트립의 폭에 걸친 바 또는 도트의 형상이다. 기질 어레이는 예를 들어 고체 기질, 예를 들어 미국 특허 번호 5,744,305에 기재된 바와 같은 "칩" 상에 있을 수 있다. 대안적으로, 기질 어레이는 용액 어레이, 예를 들어 xMAP (루미넥스(Luminex), 텍사스주 오스틴), 사이베라(Cyvera) (일루미나(Illumina), 캘리포니아주 샌디에고), 셀카드(CellCard) (비트라 바이오사이언스(Vitra Bioscience), 캘리포니아주 마운틴 뷰) 및 퀀텀 도츠 모자이크(Quantum Dots' Mosaic) (인비트로젠(Invitrogen), 캘리포니아주 칼스배드)일 수 있다. 키트는 또한 샘플 DNA를 증폭 또는 단리하기 위한 시약 및/또는 효소를 함유할 수 있다. 키트는 실시간 PCR용 시약, 예를 들어 택맨(TaqMan) 프로브 및/또는 프라이머, 및 효소를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 (a) 흡착제를 그 위에 포함하는 기질 (여기서 흡착제는 크립토크롬의 결합을 유지하거나 또는 그에 달리 적합함) 및 (b) 샘플을 흡착제와 접촉시키고 흡착제에 의해 보유된 크립토크롬을 검출함으로써 크립토크롬을 검출하기 위한 지침서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 용리제 (대안으로서 또는 지침서와 조합하여) 또는 용리제의 제조를 위한 지침서를 포함할 수 있으며, 여기서 흡착제 및 용리제의 조합은 기체 상 이온 분광측정법을 사용한 크립토크롬의 검출을 가능하게 한다.
다른 실시양태에서, 키트는 흡착제를 그 위에 포함하는 제1 기질 (예를 들어, 흡착제로 관능화된 입자), 및 제1 기질이 위치하여 프로브를 형성할 수 있고 제거되어 기기, 예컨대, 예를 들어 기체 상 이온 분광계로 삽입될 수 있는 제2 기질을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 키트는, 제거되어 기기에 삽입될 수 있는, 기질 상에 흡착제를 함유하는 프로브 형태인 단일 기질을 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 키트는 사전-분획화 스핀 칼럼 (예를 들어, 시바크론 청색 아가로스 칼럼, 항-HSA 아가로스 칼럼, K-30 크기 배제 칼럼, Q-음이온 교환 스핀 칼럼, 단일 가닥 DNA 칼럼, 렉틴 칼럼 등)을 추가로 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 키트는 (a) 1종 이상의 크립토크롬에 특이적으로 결합하는 항체; 및 (b) 검출 시약을 포함한다. 항체는 예를 들어 크립토크롬 유전자의 유전자 산물에 대해 지시된 항체일 수 있다.
임의로, 키트는, 시험 샘플을 대조군 정보 표준과 비교하여, 샘플에서 검출된 1종 이상의 크립토크롬의 시험 양이 Cry-매개 질환 또는 장애의 진단과 일치하는 진단 양인 경우를 결정할 수 있도록, 표준 또는 대조군 정보를 추가로 포함할 수 있다.
몇몇 변형이 상기 상세히 기재된 바 있을지라도, 다른 변형 또는 변경이 가능하다. 특히, 본원에 제시된 것들 이외에도 추가의 특색 및/또는 변형이 제공될 수 있다. 예를 들어, 상기 기재된 구현은 개시된 특색의 다양한 조합 및 하위조합 및/또는 상기 개시된 몇몇 추가 특색의 조합 및 하위조합에 관한 것일 수 있다. 또한, 본원에 기재된 로직 흐름은 바람직한 결과를 달성하기 위해, 제시된 특정한 순서, 또는 순차적 순서를 요구하지 않는다. 다른 실시양태가 청구범위의 범주 내에 있을 수 있다.
실시예
실시예 1: 화합물의 합성에 대한 반응식
하기 반응식, 반응식 I, II, III, IV, V, 및 VI은 화학식 I의 화합물에 대한 합성 방법을 도시한다. 화학식 I의 화합물의 일반적 제조 방법에서, 가변기 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, a 및 b는 달리 언급되지 않는 한 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다. 기재된 본원의 반응식은 주어진 많은 화합물의 제조에 사용된 방법론의 일반적 설명을 제공하도록 의도된다. 그러나, 이는, 사용된 제조 방식이 본원에 기재된 일반적 절차보다 더 확장된 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 특히, 반응식에 따라 제조된 화합물이 본 발명의 범주 내의 신규 화합물을 제공하도록 추가로 변형될 수 있다는 것이 주목된다. 하기 화합물에 사용된 시약 및 중간체는 상업적으로 입수가능하거나, 또는 유기 합성 기술분야의 통상의 기술자에 의해 표준 문헌 절차에 따라 제조될 수 있다.
하기 반응식 I은 화학식 I의 화합물의 합성을 도시한다. 화학식 IV의 적절히 치환된 브로마이드 유도체를 적절한 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 또는 N,N-디메틸아세트아미드 중에서, 대략 0℃ 내지 150℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 24시간의 기간 동안 화학식 V의 적절한 카르바졸로 처리하여 화학식 III의 상응하는 옥시란 화합물을 제공한다. 화학식 IV의 브로마이드 화합물을 화학식 V의 카르바졸과 반응시켜 화학식 III의 화합물을 제공하기 위한 바람직한 조건은 반응을 N,N-디메틸포름아미드 중에서 0℃ 내지 실온에서 수산화칼륨의 존재 하에 20 내지 24시간 동안 수행하고, 이어서 추출 후처리하는 것을 포함한다. 화학식 III의 화합물을 적절한 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드, 디메틸 술폭시드 또는 N,N-디메틸아세트아미드 중에서 대략 실온 내지 150℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 3일의 기간 동안 적절한 화학식 II의 아미드 또는 우레아로 처리하여 화학식 I의 상응하는 아미드 또는 우레아 화합물을 제공한다. 화학식 III의 옥시란 화합물을 반응시켜 화학식 I의 화합물을 제공하기 위한 바람직한 조건은 반응을 N,N-디메틸포름아미드 중에서 실온에서 20 내지 24시간 동안 수소화나트륨으로 수행하고, 이어서 추출 후처리하는 것을 포함한다. 대안적으로, 화학식 III의 옥시란 화합물은 적절한 용매, 예컨대 디메틸 술폭시드와 적절한 염기, 예컨대 포타슘 tert-부톡시드 중에서, 실온에서 3일 동안 화학식 II의 아미드 또는 우레아와 반응하여 화학식 I의 화합물을 제공할 수 있다.
<반응식 I>
Figure pct00005
하기 반응식 II는 화학식 I의 화합물의 대안적 합성을 도시한다. 화학식 III의 적절히 치환된 옥시란 유도체를 적절한 용매, 예컨대 에탄올 중에서, 0℃ 내지 150℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 24시간의 기간 동안 화학식 VII의 적절한 디아민으로 처리하여 화학식 VI의 상응하는 디아민 화합물을 제공한다. 화학식 III의 옥시란 화합물을 화학식 VII의 디아민과 반응시켜 화학식 VI의 화합물을 제공하기 위한 바람직한 조건은 반응을 에탄올 중에서 40℃에서 20 내지 24시간 동안 수행하는 것을 포함한다. 화학식 VI의 화합물을 적절한 용매 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, 실온에서 5분 내지 24시간의 기간 동안 적절한 카르보닐화제, 예컨대 1,1'-카르보닐디이미다졸로 처리하여 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공한다.
<반응식 II>
Figure pct00006
하기 반응식 III은 화학식 I의 화합물의 대안적 합성을 도시한다. 화학식 II의 아미드 또는 우레아 화합물을 적절한 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, 대략 0℃ 내지 65℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 24시간의 기간 동안 화학식 IX의 적절히 치환된 브로마이드 유도체로 처리하여 화학식 VIII의 상응하는 옥시란 화합물을 제공한다. 화학식 IX의 브로마이드 화합물을 화학식 II의 아미드 또는 우레아와 반응시켜 화학식 VIII의 화합물을 제공하기 위한 바람직한 조건은 반응을 테트라히드로푸란 중에서 0℃ 내지 실온에서 수소화나트륨의 존재 하에 20 내지 24시간 동안 수행하고, 이어서 추출 후처리하는 것을 포함한다. 화학식 VIII의 화합물을 적절한 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 중에서, 0℃ 내지 70℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 24시간의 기간 동안 화학식 V의 적절한 카르바졸로 처리하여 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공한다. 화학식 VIII의 옥시란 화합물을 화학식 V의 카르바졸과 반응시켜 화학식 I의 화합물을 제공하기 위한 바람직한 조건은 반응을 N,N-디메틸포름아미드 중에서 실온 내지 70℃에서 수소화나트륨의 존재 하에 20 내지 24시간 동안 수행하여 화학식 I의 화합물을 제공하는 것을 포함한다.
<반응식 III>
Figure pct00007
하기 반응식 IV는 화학식 I의 화합물의 대안적 합성을 도시한다. 화학식 XIII의 Boc-보호된 아미노산 화합물을 암모니아, 적절한 커플링 시약, 예컨대 N,N,N',N'-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트, 적절한 염기, 예컨대 N,N-디이소프로필에틸아민 및 적절한 용매, 예컨대 디메틸포름아미드와, 대략 0℃ 내지 65℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 24시간의 기간 동안 처리하여 화학식 XII의 상응하는 아미드 화합물을 제공한다. 화학식 XII의 Boc-보호된 아미노 아미드 화합물을 적절한 용매, 예컨대 테트로히드로푸란 중에서, 대략 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 24시간의 기간 동안 적절한 환원제, 예컨대 보란으로 처리하여 화학식 XI의 상응하는 Boc-보호된 디아민 화합물을 제공한다. 화학식 III의 옥시란 화합물을 화학식 XI의 Boc-보호된 디아민과 반응시켜 화학식 X의 화합물을 제공하기 위한 바람직한 조건은 반응을 에탄올 중에서 70℃에서 16 내지 24시간 동안 수행하는 것을 포함한다. 화학식 X의 화합물을 적절한 용매, 예컨대 테트로히드로푸란 중에서, 대략 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 24시간의 기간 동안 적절한 염기, 예컨대 포타슘 tert-부톡시드로 처리하여 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공한다.
<반응식 IV>
Figure pct00008
하기 반응식 V는 화학식 I의 화합물의 대안적 합성을 도시한다. 화학식 XVI의 벤질-보호된 디아민 화합물을 적절한 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, 실온에서 5분 내지 24시간의 기간 동안 적절한 카르보닐화제, 예컨대 1,1'-카르보닐디이미다졸로 처리하여 화학식 XV의 상응하는 화합물을 제공한다. 화학식 III의 옥시란 화합물을 화학식 XV의 벤질-보호된 우레아와 반응시켜 화학식 XIV의 화합물을 제공하기 위한 바람직한 조건은 반응을 N,N-디메틸포름아미드 중에서 실온 내지 70℃에서 수소화나트륨의 존재 하에 16 내지 24시간 동안 수행하는 것을 포함한다. 화학식 XIV의 벤질-보호된 우레아 화합물을 적절한 촉매, 예컨대 탄소상 수산화팔라듐과 적절한 산, 예컨대 아세트산의 존재 하에, 적절한 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, 대략 실온 내지 100℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 5일의 기간 동안 1 내지 50 psi 수소로 처리하여 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공한다.
<반응식 V>
Figure pct00009
하기 반응식 VI은 화학식 I의 화합물의 대안적 합성을 도시한다. 화학식 XVII 또는 XVIII의 적절히 치환된 키랄 옥시란 유도체를 적절한 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 또는 테트라히드로푸란 중에서, 0℃ 내지 150℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 24시간의 기간 동안 화학식 II의 적절한 아미드 또는 우레아 화합물과 적절한 염기, 예컨대 수소화나트륨으로 처리하여 화학식 I의 상응하는 키랄 아미드 또는 우레아 화합물을 제공한다.
<반응식 VI>
Figure pct00010
하기 반응식 VII은 화학식 I의 화합물의 대안적 합성을 도시한다. 화학식 XVII 또는 XVIII의 적절히 치환된 키랄 옥시란 유도체를 적절한 용매, 예컨대 에탄올 중에서 0℃ 내지 150℃ 범위의 온도 내에서 대략 5분 내지 24시간의 기간 동안 화학식 VII의 적절한 디아민으로 처리하여 화학식 VI의 상응하는 키랄 디아민 화합물을 제공한다. 화학식 XVII 또는 XVIII의 옥시란 화합물을 화학식 VII의 디아민과 반응시켜 화학식 VI의 화합물을 제공하기 위한 바람직한 조건은 반응을 에탄올 중에서 55℃에서 5 내지 24시간 동안 수행하는 것을 포함한다. 화학식 VI의 화합물을 적절한 용매 예컨대 테트라히드로푸란 중에서, 실온에서 5분 내지 24시간의 기간 동안 적절한 카르보닐화제, 예컨대 1,1'-카르보닐디이미다졸로 처리하여 화학식 I의 상응하는 화합물을 제공한다.
<반응식 VII>
Figure pct00011
본원에 기재된 반응식에서, 화학식 I의 화합물을 제조하는데 유용한 중간체 내의 히드록실 기는 필요에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기로 보호될 수 있음이 이해되어야 한다. 예를 들어, 히드록실 기를 함유하는 중간체는 상응하는 tert-부틸디메틸실릴 에테르로서 보호되고, 후속적으로 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드로의 처리에 의해 탈보호되어 유리 히드록실 유도체를 제공할 수 있다. 적합한 보호기 및 그의 제거 방법은 문헌 ["Protective Groups in Organic Synthesis", 3rd Ed., T. W. Greene and P. G. M. Wuts (Wiley & Sons, 1999)]에 예시되어 있다.
1H 핵 자기 공명 (NMR) 스펙트럼은 모든 경우에 제안된 구조와 일치하였다. 특징적 화학적 이동 (δ)은 주요 피크의 지정을 위한 통상적인 약어를 사용하여 테트라메틸실란으로부터의 백만분율 다운필드로 주어진다: 예를 들어 s, 단일선; d, 이중선; t, 삼중선; q, 사중선; m, 다중선; br, 넓음. 질량 스펙트럼 (m/z)을 전기분무 이온화 (ESI) 또는 대기압 화학적 이온화 (APCI)를 사용하여 기록하였다. 박층 크로마토그래피 (TLC)가 사용된 바 있는 경우에, 이것은 실리카 겔 60 F254 플레이트를 사용하는 실리카 겔 TLC를 지칭하며, Rf는 TLC 플레이트 상에서 전방으로 화합물이 이동한 거리를 용매가 이동한 거리로 나눈 것이다. HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피를 지칭한다.
하기 구체적 실시예는 예시적 목적을 위해 포함되며, 본 개시내용을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
중간체의 제조
제조예 1: 2-클로로-4-플루오로-N-(4-플루오로페닐)아닐린
Figure pct00012
둥근 바닥 플라스크에 1-브로모-4-플루오로벤젠 (13.0 g, 74.3 mmol), 2-클로로-4-플루오로아닐린 (11.354 g, 78.0 mmol), 무수 톨루엔 (200 mL) 및 포타슘 tert-부톡시드 (10.003 g, 89.1 mmol)를 채웠다. 혼합물을 탈기하고, 질소로 재충전한 다음, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (2.041 g, 2.2 mmol) 및 트리-tert-부틸포스핀 (0.902 g, 4.5 mmol)을 첨가하고, 반응물을 100℃에서 질소 하에 16시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 혼합물을 산성 pH로 6 M 수성 염산을 사용하여 처리한 다음, 고체 탄산나트륨을 사용하여 염기성 pH로 역으로 조정하였다. 혼합물을 건조 (무수 황산마그네슘)시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (0-20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 황색빛 오일 (14 g, 79%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.14 (dd, 1H, J = 8.4, 3.0 Hz), 7.12-6.98 (m, 5H), 6.88 (td, 1H, J = 8.7, 3.0 Hz), 5.80 (br s, 1H).
제조예 2: 3,6-디플루오로-9H-카르바졸
Figure pct00013
탄산칼륨 (26.528 g, 191.9 mmol), 2-클로로-4-플루오로-N-(4-플루오로페닐)아닐린 (23.0 g, 96.0 mmol), 트리시클로헥실포스포늄 테트라플루오로보레이트 (3.534 g, 9.6 mmol), 팔라듐 디아세테이트 (1.077 g, 4.8 mmol), 및 무수 N,N-디메틸아세트아미드 (200 mL)의 혼합물을 130℃에서 질소 하에 16시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 처리하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 짧은 실리카 겔 칼럼 (20-50% 메틸렌 클로라이드/헥산)에 의해 정제하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 헥산-메틸렌 클로라이드로부터 재결정화하여 순수한 생성물 (17.2 g, 88%)을 백색 분말로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.00 (br s, 1H), 7.67 (dd, 2H, J = 8.7, 2.7 Hz), 7.36 (dd, 2H, J = 8.7, 4.2 Hz), 7.19 (td, 2H, J = 9.0, 2.7 Hz).
제조예 3: 9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸
Figure pct00014
분말 수산화칼륨 (3.36 g, 60 mmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드 (50 mL) 중 카르바졸 (8.36 g, 50 mmol)의 용액에 첨가하고, 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙조에서 냉각시키고, 에피브로모히드린 (10.3 mL, 125 mmol)을 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 반응물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 물 및 포화 수성 염화나트륨 용액으로 연속적으로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 헥산으로 연화처리하고, 에틸 아세테이트/헥산으로부터 재결정화하여 목적 생성물을 백색 침상물 (6.41 g, 58% 수율)로서 수득하였다. 결정의 제2 수확물을 모액으로부터 결정화하여 추가의 생성물 (1.2 g, 11%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.11-8.08 (m, 2H), 7.46-7.44 (m, 4H), 7.28-7.25 (m, 2H), 4.68-4.62 (dd, 1H, J = 3.1, 15.8 Hz) 4.45-4.38 (dd, 1H, J = 4.8, 15.9 Hz), 3.37 (m, 1H), 2.84-2.81 (dd, 1H, J = 4.2, 4.3 Hz), 2.60-2.57 (dd, 1H, J = 2.5, 5.0 Hz); HPLC 분석: (C18, 물 중 5-95% 아세토니트릴 + 0.1% 트리플루오로아세트산, 20분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 7.83분, 98.7%.
하기 화합물을 유사하게 제조하였다:
Figure pct00015
제조예 4: 1-벤조일피롤리딘-2-온
Figure pct00016
무수 테트라히드로푸란 (120 mL) 중 2-피롤리디논 (4.4 g, 51.7 mmol, 1.0 당량) 및 트리에틸아민 (15.4 mL, 111.2 mmol, 2.1 당량)의 차가운 0℃ 용액에 4-디메틸아미노피리딘 (0.075 g) 및 벤조일 클로라이드 (6.9 mL, 59.5 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 분획을 0.1 M 수성 염산, 포화 수성 중탄산나트륨, 및 포화 수성 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 적색 오일을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 20-65% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 회백색 고체 (5.63 g, 58%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.61-7.57 (m, 2H), 7.53-7.47 (tt, 1H, J = 1.5, 7.5 Hz), 7.42-7.37 (m, 2H), 3.98-3.94 (t, 2H, J = 7.1 Hz), 2.61-2.58 (t, 2H, J = 8.0 Hz), 2.20-2.10 (quint, 2H, J = 7.5 Hz). ESI (m/z): 190.1 (M+H).
제조예 5: 1-벤조일-3-플루오로피롤리딘-2-온
Figure pct00017
무수 테트라히드로푸란 (26 mL) 중 1-벤조일피롤리딘-2-온 (1 g, 5.3 mmol, 1.0 당량)의 -78℃ 용액에 리튬 디이소프로필아미드 (테트라히드로푸란 중 2 M 용액 3.382 mL, 6.8 mmol, 1.3 당량)를 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 무수 테트라히드로푸란 (5 mL) 중 N-플루오로벤젠 술폰이미드 (2.5 g, 7.9 mmol, 1.5 당량)의 용액을 -78℃에서 천천히 첨가하고, 반응을 -40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 수성 탄산수소나트륨을 첨가하고, 용액을 실온으로 가온하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 15-60% 에틸 아세테이트의 구배를 갖는 실리카 겔로부터 용리시키면서 정제하여 백색 고체 (0.595 g, 54%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.64-7.61 (m, 2H), 7.57-7.52 (tt, 1H, J = 1.5, 7.5 Hz), 7.45-7.39 (m, 2H), 5.28-5.06 (dt, 1H, J = 7.8, 51 Hz), 4.15-4.07 (m, 1H), 3.87-3.78 (m, 1H), 2.68-2.56 (m, 1H), 2.45-2.27 (m, 1H). 19F NMR (282 MHz, CDCl3): δ -188.9에서 -189.2 (ddd, J = 12.1, 24.2, 51.8 Hz).
제조예 6: 3-플루오로피롤리딘-2-온
Figure pct00018
무수 테트라히드로푸란 (5 mL) 중 1-벤조일-3-플루오로피롤리딘-2-온 (0.282 g, 1.4 mmol, 1.0 당량)의 용액에 옥틸아민 (0.259 mL, 1.6 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 70-100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 백색 고체 (0.104 g, 74% 수율)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.81 (br s, 1H), 5.11-4.89 (ddd, 1H, J = 6.3, 7.8, 52.8 Hz), 3.49-3.42 (m, 1H), 3.36-3.27 (m, 1H), 2.57-2.41 (m, 1H), 2.34-2.13 (m, 1H). 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 173.5-173.3 (d, J = 20 Hz), 89.9-87.4 (d, J = 182 Hz), 39.1 (d, J = 4 Hz), 28.6-28.4 (d, J = 20 Hz). 19F NMR (282 MHz, CDCl3): δ -190.1에서 -190.4 (ddd, J = 15, 27, 52 Hz).
제조예 7: tert-부틸 2-옥소피페리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00019
0℃에서 메틸렌 클로라이드 (100 mL) 중 피페리딘-2-온 (5 g, 50.4 mmol, 1.0 당량), 트리에틸아민 (14.022 mL, 100.9 mmol, 2.0 당량) 및 N,N-4-디메틸아미노피리딘 (0.123 g, 1.0 mmol)의 교반 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (16.512 g, 75.7 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 천천히 가온하고, 48시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, 유기 층을 1 N 수성 염산, 포화 수성 중탄산나트륨 및 포화 수성 염화나트륨을 사용하여 순차적으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 목적 생성물을 황색 오일 (8.5 g, 85%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 3.72-3.62 (m, 2H), 2.58-2.48 (m, 2H), 1.90-1.78 (m, 4H), 1.55 (s, 9H).
제조예 8: tert-부틸 3-플루오로-2-옥소피페리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00020
-78℃에서 질소 하에 무수 테트라히드로푸란 (70 mL) 중 tert-부틸 2-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (3 g, 15.1 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드 (테트라히드로푸란 중 1 M 용액 22.586 mL, 22.6 mmol, 1.5 당량)를 30분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 생성된 용액을 -78℃에서 45분 동안 교반한 다음, 무수 테트라히드로푸란 (30 mL) 중 N-플루오로벤젠 술폰이미드 (7.122 g, 22.6 mmol, 1.5 당량)의 용액을 30분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 2시간에 걸쳐 실온으로 천천히 가온되도록 하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 염화암모늄으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 상을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르로 처리하고, 고체를 버렸다. 용액을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 조 생성물 분획 및 디플루오로 부산물을 백색 고체 (1.5 g)로서 수득하였다. 조 생성물 분획을 실리카 겔 크로마토그래피의 제2 실행에 의해 추가로 정제하여 목적 생성물을 농후한 오일 (0.46 g, 14%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.92 (ddd, 1H, J = 47.4, 8.7, 6.3 Hz), 3.78-3.60 (m, 2H), 2.35 (m, 1H), 2.15-1.80 (m, 3H), 1.55 (s, 9H). 19F NMR (282 MHz, CDCl3): δ -185.2 (dt, J = 45.7, 15.5 Hz).
제조예 9: 3-플루오로피페리딘-2-온
Figure pct00021
메틸렌 클로라이드 (5 mL) 중 tert-부틸 3-플루오로-2-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (0.450 g, 2.1 mmol, 1.0 당량)의 0℃ 용액에 트리플루오로아세트산 (1 mL, 13.5 mmol, 6.5 당량)을 첨가하고, 생성된 용액을 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산 및 이어서 0-20% 메탄올/에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 분말 (0.23 g, 95%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.36 (br s, 1H), 4.85 (ddd, 1H, J = 46.8, 8.1, 5.4 Hz), 3.50-3.20 (m, 2H), 2.40-1.70 (m, 4H). 19F NMR (282 MHz, CDCl3): δ -186.5 (dt, J = 46.5, 15.5 Hz).
제조예 10: 3,3-디플루오로피페리딘-2-온
Figure pct00022
3,3-디플루오로피페리딘-2-온을 보고된 절차 (Kim, B. C. et al. Synthesis 2012, 44, 3165-3170)에 따라 제조하였다.
제조예 11: 1-벤조일-3,3-디플루오로피롤리딘-2-온
Figure pct00023
무수 테트라히드로푸란 (10 mL) 중 제조예 21B로부터의 1-벤조일-3-플루오로피롤리딘-2-온 (0.3 g, 1.4 mmol, 1.0 당량) 및 N-플루오로벤젠 술폰이미드 (0.639 g, 2.0 mmol, 1.4 당량)의 -78℃ 용액에 리튬 디이소프로필아미드 (테트라히드로푸란 중 2 M 용액 0.905 mL, 1.8 mmol, 1.3 당량)를 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 추가량의 리튬 디이소프로필아미드 용액 (0.5 당량) 및 N-플루오로벤젠 술폰이미드 (무수 테트라히드로푸란 0.5 mL 중 0.5 당량)를 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 수성 탄산수소나트륨을 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 15-50% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 백색 고체 (0.09 g, 23%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.66-7.61 (m, 2H), 7.59-7.55 (m, 1H), 7.47-7.44 (m, 2H), 4.02-3.97 (m, 2H), 2.70-2.56 (tt, 2H, J = 6.6, 14.7 Hz). 19F NMR (282 MHz, CDCl3): δ -106.0 to-106.1 (t, J = 15 Hz).
제조예 12: 3,3-디플루오로피롤리딘-2-온
Figure pct00024
무수 테트라히드로푸란 (1 mL) 중 1-벤조일-3,3-디플루오로피롤리딘-2-온 (0.085 g, 0.4 mmol, 1.0 당량)의 용액에 옥틸아민 (0.075 mL, 0.5 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 50-100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 백색 고체 (0.024 g, 52% 수율)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.93 (br s, 1H), 3.50-3.46 (br t, 2H, J = 6.0 Hz), 2.63-2.48 (tt, 2H, J = 6.6, 15.2 Hz). 19F NMR (282 MHz, CDCl3): δ -107.33에서 -107.44 (t, J = 15.2 Hz). 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 167.5-166.7 (t, J = 31 Hz), 121.1-114.4 (t, J = 248 Hz), 37.1 (t, J = 3.3 Hz), 31.2-30.6 (t, J = 23.1 Hz).
제조예 13: 1-벤질-3-메틸피롤리딘-2-온; 일반적 절차
Figure pct00025
무수 테트라히드로푸란 (15 mL) 중 1-벤질-2-피롤리디논 (0.422 g, 2.4 mmol, 1.0 당량)의 차가운 -78℃ 용액에 리튬 디이소프로필아미드 (2 M 용액 중 2.4 mL, 4.8 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 생성된 적색 용액을 -78℃에서 30분 동안 교반하고, 아이오도메탄 (0.6 mL, 9.6 mmol, 4.0 당량)을 첨가하였다. 용액을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온으로 16시간 동안 서서히 가온되도록 하였다. 포화 수성 염화암모늄을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 분획을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 35-80% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 생성물을 황갈색 액체 (0.374 g, 82%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.37-7.34 (m, 5H), 4.52-4.41 및 4.46-4.41 (ABq, 2H, J = 14.6 Hz), 3.27-3.15 (m, 2H), 2.60-2.46 (m, 1H), 2.28-2.15 (m, 1H), 1.68-1.58 (m, 1H), 1.28-1.25 (d, 3H, J = 7.2 Hz).
하기 화합물을 유사하게 제조하였다:
Figure pct00026
제조예 14: 1-벤질-3-시클로헥실피페리딘-2-온
질소 분위기 하에, 탄소 상 10% 팔라듐 (0.09 g)을 에탄올 (10 mL) 중 1-벤질-3-(시클로헥스-2-엔-1-일)피페리딘-2-온 (0.6 g, 2.3 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 수소의 분위기 하에 두고, 2일 동안 교반하였다. 현탁액을 셀라이트를 통해 여과하고, 감압 하에 농축시켜 목적 생성물을 투명한 액체 (0.578 g, 98%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.33-7.22 (m, 5H), 4.66-4.61 및 4.59-4.54 (ABq, 2H, J = 14.7 Hz), 3.19-3.14 (m, 2H), 2.34-2.21 (m, 2H), 1.86-1.52 (m, 9H), 1.39-1.04 (m, 5H); ESI (m/z): 272.2 (M+H).
제조예 15: 1-벤질-3-페닐피페리딘-2-온
Figure pct00028
문헌 [de Filippis, A. et al. Tetrahedron, 2004, 60, 9757]으로부터의 절차에 따라 합성하였다. 무수 테트라히드로푸란 중 N-벤질-2-피페리디논 (1.326 g, 7.0 mmol, 2.2 당량)의 차가운 (-20℃) 교반 용액 (14 mL, 0.5 M)에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (무수 테트라히드로푸란 중 1 M 용액 6.4 mL, 6.4 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 -20℃에서 20분 동안 교반하였다. 무수 테트라히드로푸란 (8 mL) 중 염화아연 (0.955 g, 7.0 mmol, 2.2 당량)의 용액을 첨가하고, 용액을 -20℃에서 20분 동안 교반하였다. 생성된 용액을 무수 테트라히드로푸란 (6 mL) 중 2-디시클로헥실포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐 (0.094 g), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.092 g), 및 브로모벤젠 (0.335 mL, 3.2 mmol, 1.0 당량)의 용액으로 캐뉼라로 삽입하고, 생성된 혼합물을 70℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응물을 수성 염화암모늄으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 분획을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 15-60% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 황색 액체 (0.629 g, 74%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.38-7.21 (m, 10H), 4.74-4.69 및 4.66-4.61 (AB, 2H, J = 14.4 Hz), 3.77-3.72 (dd, 1H, J = 6.0, 8.1 Hz), 3.41-3.28 (m, 2H), 2.23-2.13 (m, 1H), 2.05-1.69 (m, 3H).
제조예 16: 3-메틸피롤리딘-2-온
Figure pct00029
트리플루오로메탄술폰산 (0.604 mL, 6.8 mmol, 4.0 당량)을 톨루엔 (2 mL, 1 M) 중 1-벤질-3-메틸피롤리딘-2-온 (0.323 g, 1.7 mmol, 1.0 당량)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 중에서 195℃에서 25분 동안 가열하였다. 혼합물을 소량의 포화 수성 중탄산나트륨에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 합한 수성 층을 에틸 아세테이트로 다시 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 메틸렌 클로라이드 중 0-10% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물 (0.087 g)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.49 (br s), 3.37-3.26 (m, 2H), 2.53-2.28 (m, 2H), 1.80-1.65 (m, 1H), 1.21-1.19 (d, 3H, J = 6.6 Hz).
하기 화합물을 유사하게 제조하였다:
Figure pct00030
제조예 17: 1-벤질-3-(1-히드록시시클로부틸)피롤리딘-2-온
Figure pct00031
무수 테트라히드로푸란 (19 mL) 중 1-벤질-2-피롤리디논 (1.0 g, 5.7 mmol, 1.0 당량)의 차가운 (-78℃) 용액에 리튬 디이소프로필아미드 (테트라히드로푸란 중 2 M 용액 3.15 mL, 1.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 시클로부타논 (0.426 mL, 5.7 mmol, 1.0 당량) 및 삼플루오린화붕소 디에틸 에테레이트 (0.704 mL, 5.7 mmol, 1.0 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 염화암모늄으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 분획을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 50-100% 에틸 아세테이트의 구배를 갖는 실리카 겔로부터 용리시키면서 정제하여 백색 고체 (0.714 g, 51%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.36-7.20 (m, 5H), 4.56-4.51 및 4.42-4.37 (AB, 2H, J = 14.7 Hz), 4.24 (s, 1H), 3.28-3.21 (m, 2H), 2.78-2.72 (t, 1H, J = 2.7 Hz), 2.34-1.89 (m, 7H), 1.66-1.52 (m, 1H); ESI (m/z): 246.0 (M+H).
하기 화합물을 유사하게 제조하였다:
Figure pct00032
제조예 18: 1-벤질-3-시클로부틸리덴피롤리딘-2-온:
Figure pct00033
무수 메틸렌 클로라이드 (12 mL) 중 1-벤질-3-(1-히드록시시클로부틸)피롤리딘-2-온 (0.7 g, 2.9 mmol, 1.0 당량)의 차가운 (0℃) 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.485 mL, 14.3 mmol, 5.0 당량), N,N-4-디메틸아미노피리딘 (0.07 g, 0.6 mmol, 0.2 당량), 및 메탄술포닐 클로라이드 (0.331 mL, 4.3 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안, 실온에서 16시간 동안 교반하고, 환류 하에 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트와 포화 수성 염화암모늄 사이에 분배하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 20-60% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 황색 오일 (0.25 g, 38%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.33-7.23 (m, 5H), 4.47 (s, 2H), 3.27-3.19 (m, 4H), 2.75-2.69 (m, 2H), 2.52-2.46 (m, 2H), 2.18-2.08 (quint, 2H, J = 7.8 Hz); ESI (m/z): 228.2 (M+H).
하기 화합물을 유사하게 제조하였다:
Figure pct00034
제조예 19: 1-벤질-3-시클로피롤리딘-2-온
Figure pct00035
에탄올 (11 mL) 중 1-벤질-3-시클로부틸리덴피롤리딘-2-온 (0.25 g, 1.0 mmol)의 용액에 탄소 상 10% 팔라듐 (0.05 g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 수소의 분위기 하에 72시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 감압 하에 농축시켜 투명한 오일 (0.242 g, 100%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.34-7.20 (m, 5H), 4.49-4.47 및 4.40-4.35 (ABq, 2H, J = 14.4 Hz), 3.18-3.13 (m, 2H), 2.69-2.47 (m, 2H), 2.20-1.64 (m, 8H); ESI (m/z): 230.2 (M+H).
하기 화합물을 유사하게 제조하였다:
Figure pct00036
제조예 20: 3-시클로피롤리딘-2-온:
Figure pct00037
1-벤질-3-시클로피롤리딘-2-온으로부터 제조예 18과 유사하게 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.45 (br s, 1H), 3.34-3.27 (m, 2H), 2.65-2.54 (m, 1H), 2.43-2.35 (m, 1H), 2.28-1.79 (m, 8H).
하기 화합물을 유사하게 제조하였다:
Figure pct00038
제조예 21: N1-시클로헥실에탄-1,2-디아민
Figure pct00039
무수 메탄올 (250 mL) 중 시클로헥사논 (6.26 g, 63.8 mmol), 에틸렌디아민 (42.64 mL, 637.8 mmol, 10.0 당량), 아세트산 (36.515 mL, 637.8 mmol, 10.0 당량), 및 4Å 분자체 (25 g)의 혼합물에 소듐 시아노보로히드라이드 (8.017 g, 127.6 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 48시간 동안 교반하고, 여과하여 고체를 제거하고, 반고체로 농축시켰다. 조 물질을 3 N 수성 수산화나트륨 (150 mL) 중에 용해시키고, 메틸렌 클로라이드로 3회 추출하였다. 합한 유기 분획을 약염기성 포화 수성 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 연황색 액체를 수득하였으며, 이를 진공 증류에 의해 정제하여 투명한 액체 (4.1 g, 45%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 2.80-2.76 (td, 2H, J = 0.9, 6.0 Hz), 2.68-2.64 (td, 2H, J = 0.9, 6.0 Hz), 2.43-2.34 (m, 1H), 1.89-1.83 (m, 2H), 1.74-1.70 (m, 2H), 1.62-1.57 (m, 1H), 1.32-0.98 (m, 8H).
제조예 22: 3-(시클로부틸아미노)프로판니트릴
Figure pct00040
실온에서, 시클로부틸아민 (5.90 mL, 59.8 mmol, 1.0 당량)을 15분에 걸쳐 메탄올 (7 mL) 중 아크릴로니트릴 (4.76 g, 89.7 mmol, 1.5 당량)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 환류 하에 1시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시키고, 목적 생성물을 진공 하에 증류하여 투명한 액체 (7.7 g, 98%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 3.29-3.21 (m, 1H), 2.88-2.83 (t, 2H, J = 6.6 Hz), 2.50-2.46 (t, 2H, J = 6.6 Hz), 2.26-2.20 (m, 2H), 1.76-1.63 (m, 4H), 1.30 (br s, 1H).
제조예 23: N1-시클로부틸프로판-1,3-디아민
Figure pct00041
무수 에테르 (120 mL) 중 수소화알루미늄리튬 (3.056 g, 80.5 mmol, 2.0 당량)의 냉각된 (0℃) 현탁액에 무수 디에틸 에테르 (40 mL) 중 3-(시클로부틸아미노)프로판니트릴 (5.0 g, 40.3 mmol, 1.0 당량)의 용액을 45분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하고, 환류 하에 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 격렬히 교반하면서 물 (3.1 mL), 이어서 15% 수성 수산화나트륨 (3.1 mL), 및 최종적으로 물 (9.3 mL)을 적가하였다. 생성된 슬러리를 실온으로 가온하고, 15분 동안 가온하고, 황산마그네슘을 첨가하면서, 추가로 15분 동안 교반하였다. 고체 물질을 유리 소결 필터를 통한 여과에 의해 제거하면서, 따뜻한 메틸렌 클로라이드로 다수회 세척하고, 유기 용액을 감압 하에 농축시켜 목적 생성물을 연황색 액체 (3.44 g, 66%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 3.14 (m, 1H), 2.69-2.62 (m, 2H), 2.53-2.45 (m, 2H), 2.13-2.10 (m, 2H), 1.56-1.48 (m, 6H), 1.33 (br s, 3H).
제조예 24: 3-(시클로펜틸아미노)프로판니트릴
Figure pct00042
실온에서, 시클로펜틸아민 (5.794 mL, 58.7 mmol, 1.0 당량)을 메탄올 (7 mL) 중 아크릴로니트릴 (5.79 mL, 88.1 mmol, 1.5 당량)의 용액에 적가하였다. 용액을 실온에서 30분 동안 및 환류 하에 1시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시키고, 목적 생성물을 진공 하에 증류하여 투명한 액체 (7.4 g, 91%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 3.14-3.04 (quin, 1H, J = 6.3 Hz), 2.91-2.87 (t, 2H, J = 6.9 Hz), 2.53-2.48 (td, 2H, J = 0.9, 6.9 Hz), 1.88-1.78 (m, 2H), 1.73-1.49 (m, 4H), 1.36-1.24 (m, 2H), 1.19 (br s, 1H).
제조예 25: N1-시클로펜틸프로판-1,3-디아민
Figure pct00043
무수 디에틸 에테르 (150 mL) 중 수소화알루미늄리튬 (3.295 g, 86.8 mmol, 2.0 당량)의 냉각된 (0℃) 현탁액에 무수 디에틸 에테르 (40 mL) 중 3-(시클로펜틸아미노)프로판니트릴 (6.0 g, 43.4 mmol, 1.0 당량)의 용액을 45분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 및 환류 하에 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 격렬히 교반하면서 물 (3.4 mL)에 이어서 15% 수성 수산화나트륨 (3.4 mL), 및 최종적으로 물 (10.2 mL)을 적가하였다. 생성된 슬러리를 실온으로 가온하고, 15분 동안 교반하고, 황산마그네슘을 첨가하고, 추가로 15분 동안 교반하였다. 고체 물질을 유리 소결 필터를 통한 여과에 의해 제거하고, 따뜻한 메틸렌 클로라이드로 다수회 세척하고, 유기 용액을 감압 하에 농축시켜 목적 생성물을 투명한 오일 (4.5 g, 73%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 3.05-2.96 (quint, 1H, J = 6.6 Hz), 2.74-2.71 (t, 2H, J = 6.6 Hz), 2.68-2.58 (t, 2H, J = 6.9 Hz), 1.85-1.68 (m, 2H), 1.62-1.42 (m, 6H), 1.34 (br s, 3H), 1.30-1.21 (m, 2H).
제조예 26: 1-((3-(시클로헥실아미노)프로필)아미노)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-메틸프로판-2-올; 일반적 절차
Figure pct00044
에탄올 (1 M) 중 N-시클로헥실-1,3-프로판디아민 (또는 다른 N-관능화 1,3-프로판디아민, 8.0 당량)의 용액에 3,6-디플루오로-9-((2-메틸옥시란-2-일)메틸)-9H-카르바졸 (1.0 당량, 또는 대안적으로 3,6-디플루오로-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하거나 또는 반응물이 LCMS에 의해 완결된 것으로 결정될 때까지 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이것을 칼럼 크로마토그래피에 의해 메틸렌 클로라이드 중 메탄올 및 0.1% 트리에틸아민의 적절한 구배를 갖는 HP 실리카 겔로부터 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 수득하였다.
Figure pct00045
Figure pct00046
제조예 27: tert-부틸 (1-아미노-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00047
Boc-DL-알라닌 (5.0 g, 26.4 mmol, 1.0 당량), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (15.033 g, 39.6 mmol, 1.5 당량), N,N-디이소프로필에틸아민 (8.735 mL, 52.9 mmol, 2.0 당량) 및 무수 디메틸포름아미드 (50 mL)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, 빙수로 냉각시키고, 암모니아 (2.250 g, 132.1 mmol, 5.0 당량)를 혼합물로 천천히 버블링하였다. 반응물을 밀봉된 용기 중에서 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 수득된 고체를 차가운 에틸 아세테이트 및 에테르로 세척하고, 건조시켜 생성물을 백색 분말 (2.9 g, 58%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.20 (br s, 1H), 5.50 (br s, 1H), 5.00 (br s, 1H), 4.20 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.40 (d, 3H, J = 7.2 Hz).
제조예 28: tert-부틸 (1-아미노프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00048
tert-부틸 (1-아미노-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트 (2.2 g)를 무수 테트라히드로푸란 (100 mL) 중에 용해시키고, 보란 (테트라히드로푸란 중 1 M 용액 40 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 어떠한 버블도 생성되지 않을 때까지 메탄올로 켄칭하였다. 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 가열한 다음, 농축 건조시켜 조 생성물을 시럽 (2.2 g)으로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계 반응에 사용하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.60 (br s, 1H), 3.65 (m, 1H), 2.76 (dd, 1H, J = 12.9, 5.1 Hz), 2.64 (dd, 1H, J = 12.9, 6.3 Hz), 1.47 (s, 9H), 1.14 (d, 3H, J = 6.9 Hz).
제조예 29: tert-부틸 (1-((3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)아미노)프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00049
질소 분위기 하에, 에탄올 (50 mL) 중 3,6-디플루오로-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.7 g) 및 tert-부틸 (1-아미노프로판-2-일)카르바메이트 (1.5 g)의 용액을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 메틸렌 클로라이드 중 0-20% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 회백색 발포체 (1.28 g)를 수득하였다. 생성물을 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다:
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.67 (dd, 2H, J = 8.7, 2.7 Hz), 7.42-7.37 (m, 2H), 7.22 (td, 2H, J = 9.0, 2.7 Hz), 4.55-4.30 (m, 3H), 4.13 (m, 1H), 3.78 (br s, 1H), 2.88 및 2.82 (dd, 1H, J = 12.0, 3.6 Hz), 2.70-2.50 (m, 3H), 1.45 (s, 9H), 1.13 및 1.11 (d, 3H, J = 6.6 Hz); ESI (m/z): 434.0 (M+H).
제조예 30: 3-(시클로프로필아미노)프로판니트릴
Figure pct00050
시클로프로필아민 (4.214 mL, 60.8 mmol, 1.0 당량)을 메탄올 (7 mL) 중 아크릴로니트릴 (4.840 g, 91.2 mmol, 1.5 당량)의 용액에 실온에서 천천히 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응물을 환류 가열하고, 1시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 농축시키고, 진공 하에 증류하여 투명한 액체 (5.5 g, 82%) 5.5 g을 수득하였다.
1H NMR (300MHz; CDCl3): δ 2.99 (t, 2H, J = 6.3 Hz), 2.51 (t, 2H, J = 6.3 Hz), 2.12 (m, 1H), 1.78 (br s, 1H), 0.49-0.32 (m, 4H); ESI (m/z): 111.5 (M+H).
제조예 31: N1-시클로프로필프로판-1,3-디아민
Figure pct00051
무수 테트라히드로푸란 (120 mL) 중 수소화알루미늄리튬 (3.445 g, 90.8 mmol, 2.0 당량)의 냉각된 (0℃) 현탁액에 10분에 걸쳐 무수 테트라히드로푸란 (20 mL) 중 3-(시클로프로필아미노)프로판니트릴 (5.000 g, 45.4 mmol, 1.0 당량)의 용액을 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, 환류 가열하고, 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 황산나트륨 10수화물을 발포가 중지될 때까지 첨가하였다. 현탁액을 10분 동안 교반하고, 고체를 여과 (테트라히드로푸란으로 세척함)하였다. 용액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
1H NMR (300MHz, CDCl3): δ 2.74-2.69 (m, 4H), 2.10-2.04 (m, 1H), 1.65-1.56 (m, 2H), 0.43-0.27 (m, 4H); ESI (m/z): 115.4 (M+H).
제조예 32: 1-에틸테트라히드로피리미딘-2(1H)-온; 디아민으로부터의 우레아의 합성에 대한 일반적 방법
Figure pct00052
격렬한 교반 하에, 적절한 N-관능화 1,3-프로판디아민 또는 1,2-에틸렌디아민 (10.0 mmol, 1.0 당량)을 무수 테트라히드로푸란 (0.05 M) 중 1,1'-카르보닐디이미다졸 (1.622 g, 10.0 mmol, 1.0 당량)의 용액에 첨가하였으며, 이를 외부 빙조를 사용하여 0℃에서 유지하였다. 용액을 실온으로 천천히 가온되도록 하고, 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 다음과 같이 후처리하였다: i) 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피에 의해 메틸렌 클로라이드 중 메탄올의 구배를 갖는 실리카 겔로부터 용리시키면서 정제하거나; 또는 ii) 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 연속적으로 1 N 수성 염산으로 2회 및 포화 수성 염화나트륨으로 1회 세척하고, 유기 층을 에틸 아세테이트로 1회 역-추출하고, 합한 유기 분획을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 목적 생성물을 수득하였으며, 이것을 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure pct00053
제조예 31: 1-에틸-3-(옥시란-2-일메틸)테트라히드로피리미딘-2(1H)-온; (옥시란-2-일메틸)-관능화 우레아의 제조에 대한 일반적 방법
Figure pct00054
무수 테트라히드로푸란 (0.2 M) 중 1-에틸테트라히드로피리미딘-2(1H)-온, 또는 제조예 6에서 생성된 대안적 시클릭 우레아 (1.0 당량)의 용액에 미네랄 오일 중 60% 수소화나트륨 (1.1 당량)을 첨가하고, 생성된 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 에피브로모히드린 (3.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온 또는 35℃에서 24시간 동안 교반하였다. 실리카 겔을 첨가하고, 현탁액을 감압 하에 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 - 목적 생성물을 메틸렌 클로라이드 중 메탄올의 적절한 구배로 용리시키면서 직접 정제하였다.
Figure pct00055
제조예 32: 1-에틸-3-((2-메틸옥시란-2-일)메틸)테트라히드로피리미딘-2(1H)-온; N-((2-메틸옥시란-2-일)메틸) 관능화 우레아의 제조에 대한 일반적 방법
무수 테트라히드로푸란 (0.2 M) 중 제조예 7에 생성된 시클릭 우레아 (1.0 당량)의 용액에 미네랄 오일 중 60% 수소화나트륨 (1.1 당량)을 첨가하고, 생성된 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 2-(클로로메틸)-2-메틸옥시란 (4.0 당량)을 실온에서 첨가하고, 혼합물을 70-90℃에서 밀봉된 튜브에서 밤새 교반하였다. 실리카 겔을 첨가하고, 현탁액을 감압 하에 농축시키고, 직접 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 - 목적 생성물을 메틸렌 클로라이드 중 메탄올의 구배로 용리시키면서 직접 정제하였다.
Figure pct00056
제조예 33: 3-(메틸아미노)부탄니트릴
Figure pct00057
메틸아민 (40% w/w 수용액 158.584 mL, 1842.3 mmol, 10.0 당량) 및 크로토노니트릴 (15 mL, 184.2 mmol, 1.0 당량)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 메틸렌 클로라이드 (3 x 100 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 목적 생성물을 무색 오일 (18 g, 100%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 2.96 (m, 1H), 2.47 (d, 2H, J = 6.0 Hz), 2.46 (s, 3H), 1.36 (d, 3H, J = 6.6 Hz).
제조예 34: N3-메틸부탄-1,3-디아민
Figure pct00058
파르 진탕기 플라스크에 메탄올 (100 mL)을 채우고, 0℃로 냉각시키고, 암모니아로 버블링하였다. 3-(메틸아미노)부탄니트릴 (4.8 g, 48.9 mmol, 1.0 당량) 및 한 숟가락의 라니 Ni를 첨가하였다. 반응물을 수소 하에 50 psi에서 10시간 동안 진탕시켰다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 투명한 오일 (5.0 g, 100%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 2.90-2.60 (m, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.70-1.40 (m, 2H), 1.08 (d, 3H, J = 6.0 Hz).
제조예 35: 1,6-디메틸테트라히드로피리미딘-2(1H)-온
Figure pct00059
0℃에서 무수 테트라히드로푸란 (100 mL) 중 N3-메틸부탄-1,3-디아민 (5.0 g, 48.9 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 1,1'-카르보닐디이미다졸 (7.935 g, 48.9 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 천천히 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 포화 수성 염화암모늄으로 처리하고, 메틸렌 클로라이드로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-20% 에탄올/메틸렌 클로라이드)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 고체 (1.8 g, 29%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.66 (br s, 1H), 3.53-3.35 (m, 2H), 3.25 (m, 1H), 2.95 (s, 3H), 2.05 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.24 (d, 3H, J = 6.3 Hz).
제조예 36: 2-(아미노메틸)-N-벤질아닐린
Figure pct00060
질소 분위기 하에, 무수 테트라히드로푸란 (25 mL) 중 2-(벤질아미노)벤조니트릴 (4.0 g, 19.2 mmol, 1.0 당량)의 용액을 무수 테트라히드로푸란 (60 mL) 중 수소화알루미늄리튬 (2.187 g, 57.6 mmol, 3.0 당량)의 차가운 (0℃) 현탁액에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 냉각시키고, 황산나트륨 10수화물을 발포가 중지될 때까지 (외부 수조/빙조로 냉각시킴) 첨가하였다. 혼합물을 여과하여 고체를 제거하고, 용액을 진공 하에 투명한 액체 (3.2 g, 79%)로 농축시켰다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.42-7.23 (m, 5H), 7.17-7.11 (td, 1H, J = 1.8, 7.5 Hz), 7.07-7.04 (m, 1H), 6.68-6.61 (m, 2H), 6.29 (br s, 1H), 4.40 (s, 2H), 3.99 (s, 2H), 1.31 (br s, 2H).
제조예 37: 1-벤질-3,4-디히드로퀴나졸린-2(1H)-온
Figure pct00061
무수 테트라히드로푸란 (142 mL) 중 2-(아미노메틸)-N-벤질아닐린 (1.5 g, 7.1 mmol, 1.0 당량)의 용액에 1,1'-카르보닐디이미다졸 (1.318 g, 8.1 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 용액을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 1 N 수성 염산 (20 mL)을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기 분획을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 백색 고체 (1.68 g, 99%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.33-7.20 (m, 5H), 7.11-7.03 (m, 2H), 6.95-6.91 (m, 1H), 6.74-6.71 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 5.13 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 1.60 (br s, 2H). ESI (m/z): 239.2 (M+H).
제조예 38: 1-벤질-3-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3,4-디히드로퀴나졸린-2(1H)-온
Figure pct00062
무수 디메틸포름아미드 (1 mL) 중 1-벤질-3,4-디히드로퀴나졸린-2(1H)-온 (0.105 g, 0.4 mmol, 1.8 당량)의 교반 용액에 미네랄 오일 중 60% 수소화나트륨 (0.01 g, 0.3 mmol, 1.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 3,6-디플루오로-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.065 g, 0.3 mmol, 1.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 55℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 염화암모늄에 붓고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기 분획을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황갈색 오일을 수득하였다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 20-60% 에틸 아세테이트/헥산의 구배로 용리시키면서 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다 (35%). ESI (m/z): 498.2 (M+H); HPLC 분석: (C18, 물 중 5-95% 아세토니트릴 + 0.1% 트리플루오로아세트산, 20분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 15.2분, 51%.
제조예 39: 1-벤질-3-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시-2-메틸프로필)-3,4-디히드로퀴나졸린-2(1H)-온
Figure pct00063
무수 디메틸포름아미드 (1 mL) 중 1-벤질-3,4-디히드로퀴나졸린-2(1H)-온 (0.099 g, 0.4 mmol, 1.8 당량)의 교반 용액에 미네랄 오일 중 60% 수소화나트륨 (0.01 g, 0.3 mmol, 1.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 3,6-디플루오로-9-((2-메틸옥시란-2-일)메틸)-9H-카르바졸 (0.065 g, 0.2 mmol, 1.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 55℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 염화암모늄에 붓고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기 분획을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황갈색 오일을 수득하였다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 20-60% 에틸 아세테이트/헥산의 구배로 용리시키면서 정제하여 회백색 고체 (0.086 g, 65%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.66-7.62 (dd, 2H, J = 2.4, 8.7 Hz), 7.45-7.40 (dd, 2H, J = 4.1, 8.9 Hz), 7.30-7.09 (m, 8H), 7.04-6.93 (m, 2H), 6.75-6.72 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 5.20-5.15 및 5.08-5.03 (ABq, 2H, J = 16.6 Hz), 4.74-4.69 및 4.59-4.54 (ABq, 2H, J = 14.3 Hz), 4.39-4.34 및 4.32-4.26 (ABq, 2H, J = 15.3 Hz), 4.09 (s, 1H), 3.97-3.93 및 3.51-3.47 (ABq, 2H, J = 14.4 Hz), 1.36 (s, 3H); ESI (m/z): 512.3 (M+H).
제조예 40: (R)-(2-메틸옥시란-2-일)메탄올
Figure pct00064
분쇄된 4 Å의 분자체 (15.0 g) 및 메틸렌 클로라이드 (300 mL)의 혼합물을 -10℃로 냉각시키고, 티타늄(IV) 이소프로폭시드 (2.072 mL, 7.0 mmol, 0.05 당량) 및 (-)-디에틸-D-타르트레이트 (2.126 g, 10.3 mmol, 0.07 당량)를 시린지에 의해 첨가하고, 이어서 80% 쿠멘 히드로퍼옥시드 (50.000 g, 262.8 mmol, 1.8 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 -10℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 -35℃로 냉각시키고, 디클로로메탄 (10 mL) 중 2-메틸-2-프로펜-1-올 (10.620 g, 147.3 mmol, 1.0 당량)의 용액을 1-2 mL 부분으로 30분에 걸쳐 시린지에 의해 첨가하였다. 반응 혼합물을 -35℃에서 1시간 동안 교반한 다음, -20℃ 동결기에 3일 동안 두었다. 혼합물을 0℃로 가온하고, 물을 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 수성 염화나트륨 (10 mL) 중 30% 수산화나트륨의 용액을 첨가하고, 이 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 메틸렌 클로라이드 (50 mL)로 세척하였다. 수성부를 분리하고, 메틸렌 클로라이드 (3 x 30 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 건조 (무수 황산마그네슘)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 무색 액체를 수득하였다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 20-100% 디에틸 에테르/헥산의 구배로 용리시키면서 정제하여 무색 오일 (6.2349 g 48%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 3.76 (dd, 1H, J = 4.5, 12.3 Hz), 3.6 (dd, 1H, J = 8.1, 12.3 Hz), 2.92 (d, 1H, J = 4.5 Hz), 2.66 (d, 1H, J = 4.8 Hz), 1.79 (br m, 1H), 1.36 (s, 3H).
(S) 거울상이성질체를 (+)-디에틸 타르트레이트로부터 유사한 방식으로 합성하였다.
제조예 41: (S)-(2-메틸옥시란-2-일)메틸 3-니트로벤젠술포네이트
Figure pct00065
-20℃에서 무수 메틸렌 클로라이드 (100 mL) 중 (R)-(2-메틸옥시란-2-일)메탄올 (5.000 g, 56.8 mmol, 1.0 당량), N,N-4-디메틸아미노피리딘 (0.100 g, 0.8 mmol, 1.4 mol %) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (15.776 mL, 88.9 mmol, 2.0 당량)의 교반 용액에 조금씩 15분에 걸쳐 3-니트로벤젠술포닐 클로라이드 (15.092 g, 68.1 mmol, 1.2 당량)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 0℃에 도달하도록 하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, 메틸렌 클로라이드로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 1 N 수성 염산, 포화 수성 중탄산나트륨, 및 포화 수성 염화나트륨으로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-80% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 목적 생성물을 황색 오일 (6.73 g, 43.4%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.77 (t, 1H, J = 1.8 Hz), 8.54 (m, 1H), 8.27 (m, 1H), 7.84 (t, 1H, J = 7.95 Hz), 4.29 (d, 1H, J = 11.1 Hz), 4.05 (d, 1H, J = 11.1 Hz), 2.73 (dd, 2H, J = 17.7, 4.8 Hz), 1.37 (s, 3H).
(R) 거울상이성질체를 유사한 방식으로 합성하였다.
제조예 42: (S)-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸
Figure pct00066
0℃에서 무수 디메틸포름아미드 (100 mL) 중 카르바졸 (5.15 g, 30.8 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 미네랄 오일 중 60% 수소화나트륨 (1.355 g, 33.9 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. (R)-(-)-글리시딜 노실레이트 (9.981 g, 38.5 mmol, 1.3 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 천천히 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 적색 오일을 수득하였다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (15-80% 메틸렌 클로라이드/헥산)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 고체 (4.95 g, 72%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.11-8.08 (dt, 2H, J = 0.9, 7.5 Hz), 7.48-7.46 (m, 4H), 7.28-7.23 (m, 2H), 4.67-4.61 (dd, 1H, J = 2.4, 15.9 Hz), 4.45-4.38 (dd, 1H, J = 5.0, 15.9 Hz), 3.39-3.34 (m, 1H), 2.83-2.80 (t, 1H, J = 4.2 Hz), 2.60-2.57 (dd, 1H, J = 2.4, 4.8 Hz). HPLC 분석: (C18, 물 중 5-95% 아세토니트릴 + 0.1% 트리플루오로아세트산, 20분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 13.2분, 99.5%. 키랄 HPLC 분석: (키랄셀 AD-H, 헥산 중 5-15% 이소프로판올, 20분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 8.12분, 3.8%; 8.54분, 96.1% (92.2% ee).
하기 화합물을 유사하게 제조하였다:
Figure pct00067
Figure pct00068
제조예 43: (1S,4R)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온
Figure pct00069
메탄올 (50 mL) 중 (1R)-(-)-2-아자비시클로[2.2.1]헵트-5-엔-3-온 (1.0 g, 9.2 mmol) 및 탄소 상 10% 팔라듐 (0.4 g)의 혼합물을 수소의 분위기 하에 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 메탄올로 세척하였다. 합한 유기부를 진공 하에 농축시켜 목적 생성물 (1 g, 98%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.91 (br s, 1H), 3.89 (s, 1H), 2.74 (s, 1H), 1.96-1.59 (m, 5H), 1.42-1.37 (m, 1H).
제조예 44: (1R,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온
Figure pct00070
메탄올 (40 mL) 중 (1S)-(+)-2-아자비시클로[2.2.1]헵트-5-엔-온 (1.0 g, 9.2 mmol, 1.0 당량) 및 탄소 상 10% 팔라듐 (0.4 g)의 혼합물을 주위 온도에서 수소의 분위기 하에 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 메탄올로 세척하였다. 합한 유기부를 진공 하에 농축시켜 목적 생성물 (1 g, 98%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.83 (br s, 1H), 3.89 (s, 1H), 2.74 (s, 1H), 1.96-1.59 (m, 5H), 1.42-1.38 (m, 1H).
제조예 45: (R)-5-(히드록시메틸)-2-피롤리디논 p-톨루엔술포네이트
Figure pct00071
(R)-(-)-5-(히드록시메틸)-2-피롤리디논 (1.0 g, 8.7 mmol, 1.0 당량)을 메틸렌 클로라이드 (40 mL) 중에 용해시켰다. 트리에틸아민 (1.569 mL, 11.3 mmol, 1.3 당량), p-톨루엔술포닐 클로라이드 (1.904 g, 10.0 mmol, 1.1 당량) 및 4-(디메틸아미노)피리딘 (0.12 g)을 빙냉 하에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 0.5 N 수성 염산을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 0.5 N 수성 염산, 물, 포화 수성 탄산수소나트륨, 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 분획을 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 백색 고체 (1.91 g, 81%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.79-7.76 (m, 2H), 7.38-7.35 (m, 2H), 5.73 (br s, 1H), 4.08-4.04 (dd, 1H, J = 3.5, 9.5 Hz), 3.98-3.93 (m, 1H), 3.85-3.82 (dd, 1H, J = 7.5, 9.5 Hz), 2.47 (s, 3H), 2.36-2.22 (m, 3H), 1.81-1.73 (m, 1H).
제조예 46: (S)-5-(아이오도메틸)피롤리딘-2-온
Figure pct00072
(S)-(5-옥소피롤리딘-2-일)메틸 4-메틸벤젠술포네이트 (4.5 g, 16.7 mmol, 1.0 당량)를 무수 아세토니트릴 (140 mL) 중에 용해시키고, 아이오딘화나트륨 (5.009 g, 33.4 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 8시간 동안 환류 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시키고, 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 티오황산나트륨, 물, 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 분획을 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 백색 고체 (2.0 g, 53%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.42 (br s, 1H), 3.90-3.82 (s, 1H), 3.27-3.16 (m, 2H), 2.53-2.29 (m, 3H), 1.88-1.17 (m, 1H).
제조예 47: (R)-5-(아이오도메틸)피롤리딘-2-온
Figure pct00073
(R)-5-(히드록시메틸)-2-피롤리디논 p-톨루엔술포네이트 (1.9 g, 7.1 mmol, 1.0 당량)를 무수 아세토니트릴 (60 mL) 중에 용해시키고, 아이오딘화나트륨 (2.09 g)을 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 8시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시키고, 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 티오황산나트륨, 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 분획을 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 회백색 고체 (0.97 g, 61%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.92 (br s, 1H), 3.89-3.85 (m, 1H), 3.28-3.15 (m, 2H), 2.53-2.30 (m, 3H), 1.88-1.78 (m, 1H).
제조예 48: (R)-5-메틸피롤리딘-2-온
Figure pct00074
(S)-5-(아이오도메틸)피롤리딘-2-온 (2.0 g, 8.9 mmol, 1.0 당량)을 에탄올 (60 mL) 중에 용해시키고, 탄산나트륨 (1.036 g, 9.8 mmol, 1.1 당량) 및 탄소 상 10% 팔라듐 (0.4 g)을 첨가하고, 혼합물을 수소 분위기 하에 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 오렌지색 반고체를 수득하였다. 수득된 잔류물에 5% 수성 티오황산나트륨을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 연황색 오일 (0.564 g, 64%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.61 (br s, 1H), 3.82-3.72 (sext, 1H, J = 6.6 Hz), 2.45-2.22 (m, 3H), 1.71-1.59 (m, 1H), 1.23-1.21 (d, 3H, J = 6.6 Hz).
제조예 49: (S)-5-메틸피롤리딘-2-온
Figure pct00075
(S)-5-아이오도메틸피롤리딘-2-온 (1.12 g)을 에탄올 (30 mL) 중에 용해시키고, 탄산나트륨 (0.53 g) 및 탄소 상 10% 팔라듐 (0.22 g)을 첨가하고, 혼합물을 수소 분위기 하에 8시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물에 5% 수성 티오황산나트륨을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (0.263 g, 61%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.34 (br s, 1H), 3.83-3.72 (sext, 1H, J = 6.3 Hz), 2.46-2.21 (m, 3H), 1.72-1.60 (m, 1H), 1.23-1.21 (d, 3H, J = 6.0 Hz).
제조예 50: (S)-1-((2-아미노에틸)아미노)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)프로판-2-올
Figure pct00076
에탄올 (2 mL) 중 (R)-3,6-디플루오로-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.1 g, 0.4 mmol, 1.0 당량) 및 에틸렌디아민 (0.232 g, 3.9 mmol, 10.0 당량)의 혼합물을 55℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켜 담황색 시럽을 수득하였으며, 이를 천천히 응고시켜 회백색 고체 (0.122 g, 96%)를 형성하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.68 (dd, 2H, J = 8.7, 2.7 Hz), 7.42 (dd, 2H, J = 8.7, 4.2 Hz), 7.22 (td, 2H, J = 9.0, 2.7 Hz), 4.33-4.31 (d, 2H, J = 5.4 Hz), 4.15 (m, 1H), 2.85-2.55 (m, 6H) 1.84 (br s, 4H). ESI (m/z): 320.2 (M+H).
제조예 51: (R)-4-벤질-3-(4-브로모부타노일)옥사졸리딘-2-온
Figure pct00077
둥근 바닥 플라스크에 4-브로모부티르산 (19.226 g, 115.1 mmol, 1.0 당량) 및 건조 디에틸 에테르 (500 mL)를 채웠다. 생성된 용액을 -78℃로 냉각시키고, 트리에틸아민 (16.473 mL, 118.5 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 이어서 트리메틸아세틸 클로라이드 (14.596 mL, 118.5 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 백색 침전물은 냉각 조를 제거 시 형성되었고, 반응 혼합물을 0℃로 가온되도록 하고, 2시간 동안 교반하고, 슬러리를 -78℃로 재냉각시켰다. 개별 반응 용기에서, 헥산 중 2.5 M n-부틸리튬 용액 (45.146 mL, 112.9 mmol, 1.0 당량)을 -78℃에서 무수 테트라히드로푸란 (170 mL) 중에서 교반하는 (R)-4-벤질-2-옥사졸리디논 (20.000 g, 112.9 mmol, 1.0 당량)의 용액에 적가하였다. 10분 후, 생성된 슬러리를 첨가하고, 넓은-구멍 캐뉼라에 의해, 혼합 무수물에 첨가하였다 (대략 100 mL 무수 테트라히드로푸란으로 세척됨). -78℃에서 15분 후, 혼합물을 0℃로 30분에 걸쳐 가온되도록 한 다음, 이 온도에서 1시간 동안 유지하였다. 이어서, 슬러리를 물 (180 mL)로 조심스럽게 켄칭하고, 추가로 5분 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트 (2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물, 포화 수성 중탄산나트륨 (500 mL), 포화 수성 염화나트륨 (400 mL)으로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 10-50% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 투명한 오일 (26.0 g, 71%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.19-7.37 (m, 5H), 4.63-4.71 (m, 1H), 4.16-4.25 (m, 2H), 3.52 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 3.29 (dd, 1H, J = 3.3, 13.5 Hz), 3.08-3.18 (m, 2H), 2.78 (dd, 1H, J = 9.6, 13.5 Hz), 2.21-2.30 (m, 2H).
(S) 거울상이성질체를 유사한 방식으로 합성하였다.
제조예 52: (R)-3-(4-아지도부타노일)-4-벤질옥사졸리딘-2-온
Figure pct00078
아지드화나트륨 (7.623 g, 117.3 mmol, 1.5 당량)을 무수 N,N-디메틸포름아미드 (225 mL) 중 (R)-4-벤질-3-(4-브로모부타노일)옥사졸리딘-2-온 (25.500 g, 78.2 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 55℃에서 15분 동안 및 70℃에서 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용액을 포화 수성 염화나트륨/에틸 아세테이트 (1.4 L)에 붓고, 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 오일 (22.0 g, 98%)을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.36- 7.19 (m, 5H), 4.62-4.72 (m, 1H), 4.10-4.25 (m, 2H), 3.41 (t, 2H, J = 6.6 Hz), 3.30 (dd, 1H, J = 3.3, 13.2 Hz), 2.99-3.10 (m, 2H), 2.79 (dd, 2H, J = 9.9, 13.5 Hz), 1.93-2.02 (m, 2H); HPLC 분석: (C18, 물 중 10-90% 아세토니트릴 + 0.1% 트리플루오로아세트산, 20분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 12.3분, 95%.
(S) 거울상이성질체를 유사한 방식으로 합성하였다.
제조예 53: (R)-3-((R)-4-아지도-2-메틸부타노일)-4-벤질옥사졸리딘-2-온
Figure pct00079
-78℃에서 무수 테트라히드로푸란 (125 mL) 중에서 교반하는 (R)-3-(4-아지도부타노일)-4-벤질옥사졸리딘-2-온 (20.600 g, 71.5 mmol, 1.0 당량)의 용액에, 테트라히드로푸란 중 1.0 M 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드 용액 (119.088 mL, 71.5 mmol, 1.0 당량)을 천천히 첨가하였다. 15분 후, 생성된 용액을 아이오도메탄 (4.671 mL, 75.0 mmol, 1.0 당량)으로 처리하였다. 냉각 조를 제거하고, 5분 후 반응 용기를 빙수조에 두고, 추가로 15분 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 중탄산나트륨 (300 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 수성 염화나트륨 (2 x 200 mL)으로 세척하고, 건조 (무수 황산마그네슘)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (400g 실리카 겔, 10-50% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 목적 생성물을 투명한 오일 (9.7 g, 45%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.20-7.38 (m, 5H), 4.65-4.72 (m, 1H), 4.15-4.26 (m, 2H), 3.85-3.79 (m, 1H), 3.35 (app. t, 2H, J = 6.0 Hz), 3.25 (dd, 1H, J = 13.5, 3.6Hz), 2.78 (dd, 1H, J = 13.0 Hz, 9.0 Hz), 2.04-2.18 (m, 1H), 1.67-1.78 (m, 1H), 1.27 (d, 3H, J = 6.9 Hz); HPLC 분석: (C18, 물 중 10-90% 아세토니트릴 + 0.1% 트리플루오로아세트산, 20분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 13.0분, 99.4%.
(S) 거울상이성질체를 유사한 방식으로 합성하였다.
제조예 54: (R)-3-메틸피롤리딘-2-온
Figure pct00080
실온에서 무수 테트라히드로푸란 (125 mL) 중에서 교반하는 (R)-3-((R)-4-아지도-2-메틸부타노일)-4-벤질옥사졸리딘-2-온 (9.650 g, 31.9 mmol, 1.0 당량)의 용액에 트리페닐포스핀 (16.744 g, 63.8 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 5분 후, (용액은 황색 및 버블로 변함), 물 (0.575 mL, 31.9 mmol, 1.0 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 생성된 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 75-100% 에틸 아세테이트/헥산, 이어서 100%에서 90% 에틸 아세테이트/메탄올 구배)에 의해 정제하여 목적 생성물 (2.98 g, 95%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.10 (br. s, 1H), 3.25-3.35 (m, 2H), 2.27-2.50 (m, 2H), 1.68-1.80 (m, 1H), 1.20 (d, 3H, J = 7.5 Hz).
(S) 거울상이성질체를 유사한 방식으로 합성하였다.
제조예 55: (S)-3-((트리메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-온
Figure pct00081
문헌 [Harris, B. D. et al. Synth. Commun. 1986, 16, 1815]의 절차에 따랐다. 트리메틸실릴 클로라이드 (0.805 mL, 6.3 mmol, 0.1 당량)를 실온에서 크실렌 (1 L) 중 (S)-(-)-4-아미노-2-히드록시부티르산 (15.000 g, 125.9 mmol, 1.0 당량) 및 헥사메틸디실라잔 (184.757 mL, 881.5 mmol, 7.0 당량)의 교반 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 4시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 무수 에탄올/메탄올 (1 L)로 희석하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 에틸 아세테이트/메틸렌 클로라이드 (30-80% 구배)를 사용하여 정제하여 백색 고체를 수득하였다. (17.9 g, 82%).
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6.49 (br s, 1H), 4.28-4.23 (t, 1H, J= 7.7 Hz), 3.40-3.21 (m, 2H), 2.42-2.32 (m, 2H), 2.08-1.95 (m, 2H), 0.18 (s, 9H).
제조예 56: (S)-tert-부틸 2-옥소-3-((트리메틸실릴)옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00082
문헌 [DiRocco, D. A. et al. J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 10872 & DiRocco, D. A. et al. WO 2012/009372]의 절차에 따랐다. 무수 메틸렌 클로라이드 (150 mL) 중 (S)-3-(트리메틸실릴옥시)피롤리딘-2-온 (6.00 g, 34.62 mmol, 1.0 당량)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (15.11 g, 69.24 mmol, 2.0 당량), 트리에틸아민 (4.82 mL, 34.62 mmol, 1.0 당량), 및 4-디메틸아미노피리딘 (4.23 g, 34.62 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 1 N 수성 염산 (100 mL)을 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 1 N 수성 염산 (2 x 50 mL), 및 포화 수성 염화나트륨 (1 x 50 mL)으로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하였다. 용액을 진공 하에 농축시켜 조 오일을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (0-15% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리시킴)에 의해 정제하여 투명한 점성 오일을 수득하였으며, 이를 동결기에서 응고시켰다 (3.93 g, 42%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.32-4.26 (dd, 1H, J = 8.4, 9.3 Hz), 3.82-3.74 (ddd, 1H, J = 2.1, 9.0, 11.1 Hz), 3.50-3.41 (m, 1H), 2.28-2.25 (m, 1H), 1.94-1.87 (m, 1H), 1.51 (s, 9H), 0.18 (s, 9H).
제조예 57: (R)-3-플루오로피롤리딘-2-온
Figure pct00083
무수 메틸렌 클로라이드 (55 mL) 중 (S)-tert-부틸 2-옥소-3-((트리메틸실릴)옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 (3 g, 11 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시켰으며, 이때 디에틸아미노황 트리플루오라이드 (2.9 mL, 22 mmol, 2.0 당량)를 적가하였다. 이어서, 용액을 실온으로 천천히 가온되도록 한 다음, 포화 수성 중탄산나트륨 (50 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 층을 분리한 다음, 유기 층을 포화 수성 염화암모늄 (2 x 25 mL)으로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 고체를 수득하였다. 이어서, 이 조 물질을 메틸렌 클로라이드 (40 mL) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (2.5 mL, 33 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 용액을 3시간 동안 교반하였으며, 이때 기체의 발생이 진정되었다. 진공 하에 농축시켜 황갈색 액체를 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (0-10% 메탄올/메틸렌 클로라이드로 용리시킴)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 고체 (0.77 g, 68%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.35 (br s, 1H), 5.15-4.93 (dt,1H, J = 7.6, 53.4 Hz), 3.50-3.34 (m, 2H), 2.53 (m, 1H), 2.39-2.21 (m, 1H).
제조예 58: (R)-3-히드록시피롤리딘-2-온
Figure pct00084
질소 분위기 하에, 무수 테트라히드로푸란 (175 mL) 중 4-니트로벤조산 (9.273 g, 55.5 mmol, 1.1 당량) 및 (S)-(-)-3-3히드록시-2-피롤리돈 (5.100 g, 50.4 mmol, 1.0 당량)의 교반 혼합물에 트리페닐포스핀 (26.461 g, 100.9 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 이 반응 혼합물에, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (14.898 mL, 75.7 mmol, 1.5 당량)를 적가 (냉수조로 외부 냉각시킴)하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 조 잔류물을 수득하였다. 메탄올 (130 mL)을 잔류물에 첨가하고, 이어서 탄산칼륨 (0.38 g)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 셀라이트 층을 메틸렌 클로라이드 중 1% 메탄올로 세척하였다. 여과물을 합하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트: 묽은 수성 염산 (20 mL, 9:1) 사이에 분배하고, 15분 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 3회 세척하였다. 수성 층을 농축 건조시키고, 고체 잔류물을 수득하였다. 조 잔류물을 메틸렌 클로라이드 중 1-2% 메탄올 (3 x 50 mL)로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 농축시켜 황갈색 오일 (3.3g, 60%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.32-4.27 (t, 1H, J = 8.5 Hz), 3.36-3.19 (m, 2H), 2.48-2.40 (m, 1H), 2.07-1.93 (m, 1H), 1.16-1.14 (d, 1H, J = 6.3 Hz).
제조예 59: (R)-3-((트리메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-온
Figure pct00085
트리메틸실릴 클로라이드 (0.405 mL, 3.2 mmol, 0.1 당량)를 실온에서 (R)-3-히드록시-2-피롤리돈 (3.200 g, 31.7 mmol, 1.0 당량), 크실렌 (45 mL), 및 헥사메틸디실라잔 (39.8 mL, 189 mmol, 6.0 당량)의 교반 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 온도 하에 5시간 동안 가열하고, 무수 에탄올 (50 mL)로 희석하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래프에 의해 용리액으로서 메틸렌 클로라이드 중 에틸 아세테이트 (30-80% 구배)를 사용하여 정제하여 투명한 오일을 수득하였으며, 이는 정치 시 회백색 고체로 고체화되었다. (2.57 g, 47%).
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ 6.89 (br s, 1H), 4.28-4.23 (t, 1H, J = 8.1 Hz), 3.40-3.21 (m, 2H), 2.42-2.32 (m, 1H), 2.08-1.95 (m, 1H), 0.18 (s, 9H).
제조예 60: (R)-tert-부틸 2-옥소-3-((트리메틸실릴)옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00086
무수 메틸렌 클로라이드 (75 mL) 중 (R)-3-((트리메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-온 (2.770 g, 16.0 mmol, 1.0 당량)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (6.971 g, 31.9 mmol, 2.0 당량), 트리에틸아민 (2.222 mL, 16.0 mmol, 1.0 당량), 및 N,N-4-디메틸아미노피리딘 (1.953 g, 16.0 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 0.1 N 수성 염산 (100 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 0.1 N 수성 염산 (2 x 100 mL), 및 포화 수성 염화나트륨 (1 x 100 mL)으로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (0-15% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리시킴)에 의해 정제하여 투명한 점성 오일 (2.1 g, 48%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.32-4.26 (dd, 1H, J = 8.1, 9.3 Hz), 3.82-3.74 (ddd, 1H, J = 2.1, 9.0, 11.1Hz), 3.50-3.41 (m, 1H), 2.32-2.23 (m, 1H), 1.97-1.87 (m, 1H), 1.54 (s, 9H), 0.18 (s, 9H).
제조예 61: (S)-3-플루오로피롤리딘-2-온
Figure pct00087
무수 메틸렌 클로라이드 (37 mL) 중 (R)-tert-부틸 2-옥소-3-((트리메틸실릴)옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 (2.100 g, 7.7 mmol, 1.0 당량)의 용액을 -78℃로 냉각시켰으며, 이때 디에틸아미노황 트리플루오라이드 (2.030 mL, 15.4 mmol, 2.0 당량)를 적가하였다. 이어서, 용액을 실온으로 천천히 가온되도록 한 다음, 포화 수성 중탄산나트륨 (33 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 포화 수성 염화암모늄 (2 x 16 mL)으로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 고체를 수득하였다. 이어서, 이 조 물질을 디클로로메탄 (30 mL) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (1.7 mL, 33 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 용액을 3시간 동안 교반하였으며, 이때 기체의 발생이 진정되었다. 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (0-10% 메탄올/메틸렌 클로라이드로 용리시킴)에 의해 정제하여 목적 생성물을 회백색 고체 (0.71 g, 90%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ 7.35 (br s, 1H), 5.15-4.93 (dt,1H, J = 7.6, 53.4 Hz), 3.50-3.34 (m, 2H), 2.53 (m, 1H), 2.39-2.21 (m, 1H).
제조예 62: 메틸 4-메틸-5-옥소펜타노에이트
Figure pct00088
문헌 [Oikawa, M. et al. Tetrahedron, 1995, 51, 62377]의 절차에 따랐다. 피페리딘 (54.425 mL, 551.0 mmol, 2.0 당량) 및 탄산칼륨 (13.774 g, 99.7 mmol, 0.4 당량)이 들은 플라스크를 수조에 담그고, 프로피온알데히드 (16.000 g, 275.5 mmol, 1.0 당량)를 20분에 걸쳐 격렬한 교반 하에 첨가하였다. 18시간 동안 교반한 후, 불용성 물질을 셀라이트의 패드 (디에틸 에테르로 세척된 패드)를 통해 여과하여 제거하였다. 여과물을 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 이와 같이 하여 수득한 조 엔아민을 아세토니트릴 (150 mL) 중에 용해시키고, 여기에 메틸 아실레이트 (47.433 g, 551.0 mmol, 2.0 당량)를 적가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 24시간 동안 교반하고, 이어서 아세트산 (31.541 mL, 551.0 mmol, 2.0 당량) 및 물 (150 mL)을 첨가하였다. 환류 하에 24시간 동안 교반한 후, 이것을 염화나트륨으로 포화시키고, 디에틸 에테르 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (무수 황산마그네슘)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피 (0-20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 부가물을 무색 오일 (22 g, 55%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDC13): δ 9.64 (d, 1H, J = 1.8 Hz), 3.69 (s, 3H), 2.50-2.35 (m, 3H), 2.07 (sext, 1H, J = 7.2 Hz), 1.71 (sext, 1H, J = 7.2 Hz), 1.14 (d, 3H, J = 7.2 Hz).
제조예 63: (3R,8S,8aR)-8-메틸-3-페닐테트라히드로-2H-옥사졸로[3,2-a]피리딘-5(3H)-온 및 (3R,8R,8aS)-8-메틸-3-페닐테트라히드로-2H-옥사졸로[3,2-a]피리딘-5(3H)-온
Figure pct00089
문헌 [Amat, M. et al. J. Org. Chem. 2014, 79, 2792]의 절차에 따랐다. 톨루엔 (100 mL) 중 메틸 4-메틸-5-옥소펜타노에이트 (5.780 g, 40.1 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 (R)-(-)-페닐글리신올 (5.500 g, 40.1 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 25시간 동안 가열하면서 딘-스타크 장치를 사용하여 생성된 물을 공비혼합 제거하였다. 냉각시킨 후, 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (칼럼은 TEA로 전처리되고, 이어서 0-70% 에틸 아세테이트/헥산으로 용리됨)에 의해 정제하여 목적 생성물: (3R,8S,8aS)-8-메틸-3-페닐테트라히드로-2H-옥사졸로[3,2-a]피리딘-5(3H)-온을 담황색 고체 (1.3 g, 14%)로서, 및 (3R,8S,8aR)-8-메틸-3-페닐테트라히드로-2H-옥사졸로[3,2-a]피리딘-5(3H)-온을 무색 시럽 (6.5 g, 70%)으로서 수득하였다. (3R,8S,8aS)-8-메틸-3-페닐테트라히드로-2H-옥사졸로[3,2-a]피리딘-5(3H)-온:
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.40-7.20 (m, 5H), 5.25 (t, 1H, J = 7.5 Hz), 4.61 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 4.48 (t, 1H, J = 8.7 Hz), 3.75 (dd, 1H, J = 9.0, 7.8 Hz), 2.55 (dd, 1H, J = 18.0, 6.0 Hz), 2.46-2.33 (m, 1H), 1.88-1.51 (m, 3H), 1.19 (d, 3H, J = 5.7 Hz); ESI (m/z): 232.7 (M+H). (3R,8S,8aR)-8-메틸-3-페닐테트라히드로-2H-옥사졸로[3,2-a]피리딘-5(3H)-온:
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.40-7.20 (m, 5H), 4.93 (d, 1H, J = 6.3 Hz), 4.44 (d, 1H, J = 9.3 Hz), 4.14 (dd, 1H, J = 8.7, 6.3 Hz), 4.01 (dd, 1H, J = 8.7, 1.2 Hz), 2.47-2.25 (m, 2H), 2.05-1.87 (m, 2H), 1.60-1.43 (m, 1H), 1.20 (d, 3H, J = 6.6 Hz); ESI (m/z): 232.7 (M+H).
제조예 64: (S)-1-((R)-2-히드록시-1-페닐에틸)-5-메틸피페리딘-2-온
Figure pct00090
문헌 [Amat, M. et al. J. Org. Chem. 2014, 79, 2792.]의 절차에 따랐다. 무수 메틸렌 클로라이드 (100 mL) 중 (3R,8S,8aR)-8-메틸-3-페닐테트라히드로-2H-옥사졸로[3,2-a]피리딘-5(3H)-온 (3.600 g, 15.6 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 트리에틸실란 (7.458 mL, 46.7 mmol, 3.0 당량) 및 염화티타늄 (IV) (7.697 mL, 70.0 mmol, 4.5 당량)을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 추가의 염화티타늄 (IV) (7.7 mL) 및 트리에틸실란 (7.5 mL)을 첨가하고, 교반을 50℃에서 24시간 동안 계속하였다. 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 (100 mL)에 부었다. 수성 상을 셀라이트 상에서 여과하고, 메틸렌 클로라이드로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산, 이어서 순수한 에틸 아세테이트) 상에서 크로파토그래피하여 목적 생성물을 무색 오일 (1.6 g, 44%)로서 수득하고, 출발 물질 (0.6 g)을 회수하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.40-7.20 (m, 5H), 5.80 (dd, 1H, J = 9.6, 4.8 Hz), 4.20-4.00 (m, 2H), 2.97 (ddd, 1H, J = 11.7, 4.8, 2.4 Hz), 2.84 (dd, 1H, J = 11.7, 9.9 Hz), 2.70 (br s, 1H), 2.59 (ddd, 1H, J = 17.7, 6.3, 3.0 Hz), 2.47 (ddd, 1H, J = 17.7, 11.1, 6.6Hz), 1.90-1.75 (m, 2H), 1.50 (m, 1H), 0.93 (d, 3H, J = 6.3 Hz).
제조예 65: (S)-5-메틸피페리딘-2-온
Figure pct00091
드라이 아이스 응축기가 구비된 2구 플라스크에서, (S)-1-((R)-2-히드록시-1-페닐에틸)-5-메틸피페리딘-2-온 (1.600 g, 6.9 mmol, 1.0 당량) 및 무수 테트라히드로푸란 (20 mL)으로 채웠다. 혼합물을 질소 분위기 하에 -78℃로 냉각시킨 다음, 암모니아 (50 mL)를 응축시켰다. 반응 온도를 -33℃로 올렸다. 작은 조각의 금속 나트륨을 청색이 유지될 때까지 첨가하고, 혼합물을 -33℃에서 5분 동안 교반하였다. 반응물을 고체 염화암모늄의 첨가에 의해 청색이 사라질 때까지 켄칭하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하고, 메틸렌 클로라이드를 첨가하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산, 이어서 20% 메탄올/에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물을 무색 오일 (0.480 g, 62%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.84 (br s, 1H), 3.10 (m, 1H), 2.94 (t, 1H, J = 10.8 Hz), 2.50-2.28 (m, 2H), 2.05-1.80 (m, 2H), 1.50 (m, 1H), 1.03 (d, 3H, J = 6.9 Hz).
제조예 66: (R)-1-((R)-2-히드록시-1-페닐에틸)-5-메틸피페리딘-2-온
Figure pct00092
문헌 [Amat, M. et al. J. Org. Chem. 2014, 79, 2792]의 절차에 따랐다. 무수 메틸렌 클로라이드 (50 mL) 중 (3R,8R,8aS)-8-메틸-3-페닐테트라히드로-2H-옥사졸로[3,2-a]피리딘-5(3H)-온 (1.000 g, 4.3 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 트리에틸실란 (2.072 mL, 13.0 mmol, 3.0 당량) 및 염화티타늄 (IV) (2.138 mL, 19.5 mmol, 4.5 당량)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 (50 mL)에 부었다. 수성 상을 셀라이트 상에서 여과하고, 메틸렌 클로라이드로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 크로마토그래피 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산, 이어서 에틸 아세테이트)하여 목적 생성물을 무색 시럽 (0.200 g, 20%)으로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.40-7.20 (m, 5H), 5.67 (dd, 1H, J = 7.8, 6.3 Hz), 4.20-4.05 (m, 2H), 3.15-3.00 (m, 2H), 2.65-2.40 (m, 3H), 2.00-1.75 (m, 2H), 1.40 (m, 1H), 0.89 (d, 3H, J = 6.9 Hz).
제조예 67: (R)-5-메틸피페리딘-2-온
Figure pct00093
드라이 아이스 응축기가 구비된 2구 플라스크에서, (R)-1-((S)-2-히드록시-1-페닐에틸)-5-메틸피페리딘-2-온 (0.200 g, 0.9 mmol, 1.0 당량) 및 무수 테트라히드로푸란 (5 mL)을 채웠다. 혼합물을 질소 분위기 하에 -78℃로 냉각시킨 다음, 암모니아 (15 mL)를 응축시켰다. 반응 온도를 -33℃로 올렸다. 작은 조각의 금속 나트륨을 청색이 유지될 때까지 첨가하고, 혼합물을 -33℃에서 5분 동안 교반하였다. 반응물을 청색이 사라질 때까지 고체 염화암모늄을 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하고, 메틸렌 클로라이드를 첨가하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산, 이어서 20% 메탄올/에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물을 황색 오일 (0.080 g, 82%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.85 (br s, 1H), 3.10 (m, 1H), 2.93 (t, 1H, J = 10.8 Hz), 2.50-2.28 (m, 2H), 2.05-1.80 (m, 2H), 1.50 (m, 1H), 1.03 (d, 3H, J = 6.6 Hz).
제조예 68: (S)-tert-부틸 (1-아미노-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00094
메탄올 (100 mL) 중 Boc-Ala-OMe (5.000 g, 24.6 mmol, 1.0 당량) 및 28% 수성 수산화암모늄 (100.00 mL, 1479.7 mmol, 60.1 당량)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 목적 생성물을 백색 고체 (4.65 g, 100%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.15 (br, 1H), 5.55 (br, 1H), 4.95 (br, 1H), 4.20 (br, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.39 (d, 3H, J = 7.2 Hz).
제조예 69: (S)-tert-부틸 (1-아미노프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00095
질소 하에 무수 테트라히드로푸란 (100 mL) 중 Boc-Ala-NH2 (4.600 g, 24.4 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 테트라히드로푸란 중 1.0 M 보란-테트라히드로푸란 착물 (85.536 mL, 85.5 mmol, 3.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 70℃에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 반응물을 어떠한 버블도 생성되지 않을 때까지 메탄올로 켄칭하였다. 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산, 이어서 0-30% 메탄올/메틸렌 클로라이드)에 의해 정제하여 목적 생성물을 반고체 (1.4 g, 33%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.60 (br s, 1H), 3.65 (m, 1H), 2.76 (dd, 1H, J = 12.9, 4.8 Hz), 2.64 (dd, 1H, J = 12.9, 6.6 Hz), 1.45 (s, 9H), 1.13 (d, 3H, J = 6.9 Hz).
제조예 70: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)아미노)프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00096
에탄올 (10 mL) 중 (R)-3,6-디플루오로-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.600 g, 2.3 mmol, 1.0 당량) 및 (S)-tert-부틸-(1-아미노프로판-2-일)카르바메이트 (1.210 g, 6.9 mmol, 3.0 당량)의 혼합물을 70℃에서 교반하였다. 15시간 후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산, 이어서 0-30% 메탄올/메틸렌 클로라이드)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 발포체 (0.750 g, 75%)로서 수득하고, 아민 출발 물질 (0.2 g)을 회수하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.67 (dd, 2H, J = 8.7, 2.4 Hz), 7.42 (dd, 2H, J = 8.7, 3.9 Hz), 7.22 (td, 2H, J = 9.0, 2.7 Hz), 4.50-4.25 (m, 3H), 4.13 (m, 1H), 3.78 (br s, 1H), 2.86 (dd, 1H, J = 12.0, 3.6 Hz), 2.70-2.50 (m, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.10 (d, 3H, J = 6.3 Hz); ESI (m/z): 434.0 (M+H).
제조예 71: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)아미노)프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00097
에탄올 (5 mL) 중 (R)-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.150 g, 0.7 mmol, 1.0 당량) 및 (S)-tert-부틸 (1-아미노프로판-2-일)카르바메이트 (0.200 g, 1.1 mmol, 1.7 당량)의 혼합물을 70℃에서 교반하였다. 15시간 후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 발포체 (0.120 g, 45%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.09 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.52-7.41 (m, 4H), 7.25-7.20 (m, 2H), 4.50-4.35 (m, 3H), 4.17 (m, 1H), 3.73 (m, 1H), 2.83 (dd, 1H, J = 11.7, 3.6 Hz), 2.66-2.47 (m, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.08 (d, 3H, J = 6.6 Hz); ESI (m/z): 398.1 (M+H).
제조예 72: (R)-tert-부틸 (1-아미노-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00098
메탄올 (100 mL) 중 Boc-D-Ala-OMe (5.000 g, 24.6 mmol, 1.0 당량) 및 28% 수성 수산화암모늄 (100 mL, 1479.7 mmol, 60.1 당량)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 목적 생성물을 백색 고체 (4.65 g, 100%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.15 (br, 1H), 5.60 (br, 1H), 5.00 (br, 1H), 4.20 (br, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.39 (d, 3H, J = 6.9 Hz).
제조예 73: (R)-tert-부틸 (1-아미노프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00099
질소 하에 무수 테트라히드로푸란 (100 mL) 중 Boc-D-Ala-NH2 (4.600 g, 24.4 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 테트라히드로푸란 중 1.0 M 보란-테트라히드로푸란 착물 (97.756 mL, 97.8 mmol, 4.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 70℃에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 반응물을 어떠한 버블도 생성되지 않을 때까지 메탄올로 켄칭하였다. 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-30% 메탄올/메틸렌 클로라이드)에 의해 정제하여 목적 생성물을 무색 오일 (1.5 g, 35%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.60 (br s, 1H), 3.65 (m, 1H), 2.75 (dd, 1H, J = 12.9, 5.1 Hz), 2.63 (dd, 1H, J = 12.9, 6.6 Hz), 1.45 (s, 9H), 1.41 (s, 2H), 1.12 (d, 3H, J = 6.3 Hz).
제조예 74: tert-부틸 ((R)-1-(((S)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)아미노)프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00100
에탄올 (10 mL) 중 (R)-3,6-디플루오로-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.200 g, 0.8 mmol, 1.0 당량) 및 (R)-tert-부틸 (1-아미노프로판-2-일)카르바메이트 (0.403 g, 2.3 mmol, 3.0 당량)의 혼합물을 70℃에서 교반하였다. 15시간 후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 (0-30% 메탄올/메틸렌 클로라이드)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 분말 (0.250 g, 75%)로서 단리시켰다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.68 (dd, 2H, J = 8.7, 2.7 Hz), 7.41 (dd, 2H, J = 9.3, 4.2 Hz), 7.22 (td, 2H, J = 9.3, 2.4 Hz), 4.43 (br s, 1H), 4.35 (d, 2H, J = 5.7 Hz), 4.12 (m, 1H), 3.78 (br s, 1H), 2.80 (dd, 1H, J = 12.3, 3.6 Hz), 2.63 (dd, 1H, J = 12.3, 5.7 Hz), 2.57 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 1.44 (s, 9H), 1.11 (d, 3H, J = 6.6 Hz); ESI (m/z): 434.0 (M+H).
제조예 75: tert-부틸 ((R)-1-(((S)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)아미노)프로판-2-일)카르바메이트
Figure pct00101
에탄올 (10 mL) 중 (R)-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.150 g, 0.7 mmol, 1.0 당량) 및 (R)-tert-부틸 (1-아미노프로판-2-일)카르바메이트 (0.351 g, 2.0 mmol, 3.0 당량)의 혼합물을 70℃에서 교반하였다. 15시간 후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 (0-30% 메탄올/메틸렌 클로라이드)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 발포체 (0.210 g, 78%)로서 단리시켰다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.10 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 7.55-7.40 (m, 4H), 7.27-7.20 (m, 2H), 4.60-4.30 (m, 3H), 4.16 (m, 1H), 3.78 (m, 1H), 2.80 (dd, 1H, J = 12.3, 3.6 Hz), 2.67 (dd, 1H, J = 12.0, 8.4 Hz), 2.60-2.50 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.10 (d, 3H, J = 6.6 Hz); ESI (m/z): 398.1 (M+H).
실시예 2: 화학식 I의 화합물의 제조
화합물 1: 1-(3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)피페리딘-2-온
Figure pct00102
디메틸 술폭시드 (5 mL) 중 피페리딘-2-온 (0.133 g, 1.3 mmol)의 교반 용액에 포타슘 tert-부톡시드 (0.151 g, 1.3 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.150 g, 0.7 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 건조 (무수 황산나트륨)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (50-100% 에틸 아세테이트/헥산)에 이어서 정제용 HPLC (C18, 30-80% 아세토니트릴/물, 0.1% 포름산 함유, 0-8분에 걸침)에 의해 정제하여 생성물을 백색 발포체 (0.098 g, 45%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.08 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.50-7.40 (m, 4H), 7.28-7.18 (m, 2H), 4.60-4.25 (m, 4H), 3.87 (dd, 1H, J = 14.1, 7.8 Hz), 3.15-2.95 (m, 3H), 2.36 (t, 2H, J = 5.7 Hz), 1.85-1.55 (m, 4H); ESI (m/z): 323.2 (M+H).
화합물 2 내지 72:
화합물 2 내지 72를 화합물 1에 대해 사용된 것들과 유사한 절차에 의해 제조하거나 또는 포타슘 tert-부톡시드 대신 수소화나트륨 (0.4 당량)을 사용함으로써 제조하였다. 대안적으로, 또한 포스파젠 염기 P4-t-Bu를 포타슘 tert-부톡시드 대신 사용하였다. 하기 표적을 위한 출발 물질이 상업적으로 입수가능하지 않은 경우에, 합성은 상기 제조예에 기재된다.
Figure pct00103
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
Figure pct00107
Figure pct00108
Figure pct00109
Figure pct00110
Figure pct00111
Figure pct00112
Figure pct00113
Figure pct00114
Figure pct00115
Figure pct00116
Figure pct00117
화합물 71: 1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)테트라히드로피리미딘-2(1H)-온
Figure pct00118
에탄올 (2 mL) 중 3,6-디플루오로-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.06 g, 0.2 mmol) 및 1,3-디아미노프로판 (0.195 mL, 2.3 mmol)의 혼합물을 40℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 담황색 오일을 수득하였다. ESI (m/z): 334.2 (M+H). 잔류물을 메틸렌 클로라이드 (10 mL) 중에 0℃에서 용해시키고, 4-디메틸아미노피리딘 (0.005 g) 및 1,1'-카르보닐디이미다졸 (0.056 g, 0.3 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (0-10% 메탄올/메틸렌 클로라이드)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 분말 (0.060 g, 72%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO): δ 7.99 (dd, 2H, J = 9.6, 2.7 Hz), 7.56 (dd, 2H, J = 9.0, 4.2 Hz), 7.30 (td, 2H, J = 9.0, 2.7 Hz), 6.29 (s, 1H), 5.24 (d, 1H, J = 5.4 Hz), 4.35 (dd, 1H, J = 15.0, 3.6 Hz), 4.24 (dd, 1H, J = 15.0, 8.1 Hz), 4.07 (m, 1H), 3.55-3.05 (m, 6H), 1.90-1.70 (m, 2H); ESI (m/z): 360.1 (M+H).
화합물 72 내지 84:
화합물 72 내지 84를 화합물 71에 대해 사용된 것들과 유사한 절차에 의해 적절한 디아민 예컨대 N-메틸-1,3-디아미노프로판, 에틸렌디아민, N-에틸에틸렌디아민, N1-시클로헥실프로판-1,3-디아민, N1-시클로부틸프로판-1,3-디아민, N1-시클로펜틸프로판-1,3-디아민 또는 프로판-1,2-디아민을 1,3-디아미노프로판 대신 사용하여 제조하였다. 사용된 비-상업적으로 입수가능한 디아민의 제조는 중간체의 제조예에 기재된다.
Figure pct00119
Figure pct00120
Figure pct00121
화합물 85: 1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-4-메틸이미다졸리딘-2-온
Figure pct00122
무수 테트라히드로푸란 (270 mL) 중 tert-부틸 (1-((3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)아미노)프로판-2-일)카르바메이트 (1.400 g, 80% 순도, 2.6 mmol, 1.0 당량) 및 포타슘 tert-부톡시드 (0.290 g, 2.6 mmol, 1.0 당량)의 혼합물을 환류 하에 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 아세트산 (0.1 mL) 및 실리카 겔을 첨가하고, 혼합물을 감압 하에 슬러리로 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 0-10% 메탄올/메틸렌 클로라이드의 구배로 용리시키면서 정제하여 고체를 수득하였다. 고체를 에틸 아세테이트로부터 결정화하여 백색 고체 (0.673 g, 72%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3; 부분입체이성질체의 혼합물): δ 7.69-7.65 (dd, 2H, J = 2.7, 8.7 Hz), 7.40-7.35 (dd, 2H, J = 4.1, 9.0 Hz), 7.24-7.18 (td, 2H, J = 2.7, 9.0 Hz), 4.47-4.19 (m, 5H), 3.82 (br m, 1H), 3.58-2.93 (m, 4H), 1.26-1.24 (d, 3H, J = 6.3 Hz); ESI (m/z): 360.9 (M+H).
화합물 86: 1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3-에틸테트라히드로피리미딘-2(1H)-온
Figure pct00123
무수 N,N-디메틸포름아미드 (0.3 mL) 중 3,6-디플루오로-9H-카르바졸 (0.065 g, 0.3 mmol)의 용액에 미네랄 오일 중 60% 수소화나트륨 (0.009 g, 0.2 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 무수 N,N-디메틸포름아미드 (0.3 mL) 중 1-에틸-3-(옥시란-2-일메틸)테트라히드로피리미딘-2(1H)-온 (0.055 g, 0.3 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 8시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (C18, 물 중 30-95% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 백색 고체 (0.072 g, 62%)를 수득하였다.
1H NMR (300MHz, CDCl3): δ 7.67-7.63 (dd, 2H, J = 2.6, 9.0 Hz), 7.39-7.35 (dd, 2H, J = 4.2, 8.7 Hz), 7.23-7.16 (td, 2H, J = 2.4, 9.0 Hz), 5.52 (d, 1H, J = 2.7 Hz), 4.37-4.21 (m, 3H), 3.86-3.79 (m, 1H), 3.43-2.98 (m, 6H), 2.88-2.83 (dd, 1H, J = 1.8, 14.7 Hz), 1.91-1.83 (quin, 2H, J = 5.9 Hz), 1.12-1.07 (t, 3H, J = 7.4 Hz); ESI (m/z): 388.1 (M+H); HPLC 분석: (C18, 물 중 10-90% 아세토니트릴, 20분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 12.8분, 100%.
화합물 87-100:
화합물 87-100을 화합물 88에 대해 사용된 것들과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
화합물 101: 1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3,4-디메틸테트라히드로피리미딘-2(1H)-온
Figure pct00127
무수 N,N-디메틸아세트아미드 (2 mL) 중 3,6-디플루오로-9H-카르바졸 (0.38 g, 1.9 mmol, 1.2 당량)의 교반 용액에 미네랄 오일 중 60% 수소화나트륨 (0.075 g, 1.9 mmol, 1.2 당량)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 생성된 카르바졸 소듐 용액을 사용을 위해 준비하였다.
0℃에서 건조 N,N-디메틸아세트아미드 (3 mL) 중 1,6-디메틸테트라히드로피리미딘-2(1H)-온 (0.2 g, 1.6 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 미네랄 오일 중 60% 수소화나트륨 (0.075 g, 1.9 mmol, 1.2 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 에피브로모히드린 (0.155 mL, 1.9 mmol, 1.2 당량)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 실온으로 천천히 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 카르바졸 소듐 용액을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 5시간 동안 가열하였다. 반응물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (0-100% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 순수한 생성물을 백색 발포체 (0.116 g, 19%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): (2종의 부분입체이성질체의 혼합물) δ 7.68 (dd, 2H, J = 8.7, 2.7 Hz), 7.40 (dd, 2H, J = 9.0, 4.2 Hz), 7.27-7.18 (m, 2H), 5.51 및 5.06 (d, 1H, J = 2.7 Hz), 4.50-4.20 (m, 3H), 3.90-3.74 (m, 1H), 3.50-2.75 (m, 7H), 2.05 (m, 1H), 1.60 (m, 1H), 1.21 및 1.17 (d, 3H, J = 6.6 Hz); ESI (m/z): 388.2 (M+H).
화합물 102: 3-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시-2-메틸프로필)-3,4-디히드로퀴나졸린-2(1H)-온
Figure pct00128
아세트산 (4 mL) 및 테트라히드로푸란 (2 mL) 중 1-벤질-3-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시-2-메틸프로필)-3,4-디히드로퀴나졸린-2(1H)-온 (0.102 g, 0.2 mmol, 1.0 당량) 및 탄소 상 20% 수산화팔라듐 (0.035 g)의 혼합물을 50 psi의 수소 하에 48시간 동안 교반하였다. 탄소 상 20% 수산화팔라듐 (0.02 g) 및 탄소 상 10% 팔라듐 (0.01g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50 psi의 수소 하에 72시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 농축시키고, 정제용 HPLC (C18, 물 중 40-80% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 백색 고체 (0.013 g, 15%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7.73-7.70 (dd, 2H, J = 2.6, 8.6 Hz), 7.55-7.51 (dd, 2H, J = 4.1, 9.2 Hz), 7.27-7.05 (m, 3H), 7.07-7.05 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 6.96-6.91 (td, 1H, J = 1.1, 7.5 Hz), 6.81-6.78 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 4.71 (s, 2H), 4.33 (s, 2H) 3.75-3.70, 3.59-3.54 (ABq, 2H, J = 14.4 Hz), 1.22 (s, 3H); ESI (m/z): 422.1 (M+H); HPLC 분석: (C18, 물 중 5-95% 아세토니트릴 + 0.1% 트리플루오로아세트산, 20분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 13.5분, 91.5%.
하기 화합물을 화합물 102에 대해 사용된 것들과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
Figure pct00129
화합물 104: (1S,4R)-2-((R)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온
Figure pct00130
무수 테트라히드로푸란 (1.5 mL) 중 (1S,4R)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온 (0.051 g, 0.5 mmol, 2.0 당량)의 교반 용액에 미네랄 오일 중 60% 수소화나트륨 (0.009 g, 0.2 mmol, 1.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 60분 동안 교반하였다. (R)-3,6-디플루오로-9-(옥시란-2-일메틸)-9H-카르바졸 (0.060 g, 0.2 mmol, 1.0 당량)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 밀봉된 튜브에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 메탄올 중 1 N 아세트산 (0.02 mL)을 첨가한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 HPLC (C18, 물 중 30-95% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 백색 고체 (0.053 g, 61%)를 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.68-7.65 (dd, 2H, J = 2.6, 8.6 Hz), 7.38-7.33 (dd, 2H, J = 4.1, 8.9 Hz), 7.24-7.17 (td, 2H, J = 2.5, 9.0 Hz), 4.38-4.28 (m, 4H), 3.64 (br s, 1H), 3.43-3.38 (dd, 1H, J = 2.7, 14.1 Hz), 3.02-2.96 (dd, 1H, J = 2.7, 14.4 Hz), 2.90-2.89 (m, 1H), 1.96-1.40 (m, 6 H); ESI (m/z): 371.1 (M+H); HPLC 분석: (C18, 물 중 5-95% 아세토니트릴 + 0.1% 트리플루오로아세트산, 20분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 12.2분, 100%; 키랄 HPLC 분석 (키랄셀 AD-H, 헥산 중 15% 에탄올, 42분에 걸침: 체류 시간, 254 nm에서의 % 영역): 7.7분, 98.5%; 12.6분, 0.7% (98.5% de).
화합물 105-138:
화합물 105-138을 화합물 104에 대해 사용된 것들과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
Figure pct00131
Figure pct00132
Figure pct00133
Figure pct00134
Figure pct00135
Figure pct00136
Figure pct00137
Figure pct00138
Figure pct00139
Figure pct00140
Figure pct00141
Figure pct00142
화학식 I의 화합물을 평가하는데 유용한 구체적 검정은 하기 기재된 바와 같은, 시험 화합물의 효력을 평가하기 위한 Per2 검정 및 시험 화합물의 표적을 평가하기 위한 Cry1 검정을 포함한다.
실시예 3: 시험 화합물의 효력을 평가하기 위한 Per2 검정
화합물을 문헌 [Zhang, E. E. et al. Cell, 2009, 139, 199-210]에 이전에 기재된 바와 같이 고처리량 일주기 검정 시스템을 사용함으로써 스크리닝하였다. 간략히, Per2-dLuc를 보유하는 안정한 U2OS 리포터 세포를 코닝(Corning) 96-웰, 고체 백색, 편평 바닥, TC-처리된 마이크로플레이트 (코닝®)에 30,000개 세포/웰의 밀도로 플레이팅하고, 10% 태아 소 혈청 (FBS) 및 페니실린 (100 유닛/mL)-스트렙토마이신 (100 μg/mL)으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM)의 배지 중 5% CO2의 존재 하에 37℃에서 48시간 동안 인큐베이션하였다. 화학식 I의 화합물을 전형적으로 2 mg/mL의 농도에서 디메틸술폭시드 (DMSO) 중에 가용화시켰다. 이어서, DMSO 스톡을, 전형적으로 각각의 희석 단계에 대해 3배 희석하면서 DMSO 중에서 연속적으로 희석하였다. 48시간 기간 후, 세포 배양 배지를 플레이팅된 세포로부터 제거하고, 세포를 5 μM 포르스콜린 (토크리스(Tocris)®) 및 1 mM 딱정벌레 루시페린 (프로메가(Promega)®)로 보충된 200 μL/웰의 완전 세포 배양 배지 (상기 기재됨)와 동기화하였다. 동기화 직후, 1 μL의 화합물 희석물을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고, 간략히 진탕시키고, 35℃에서 최소 3일 동안 연속적으로 발광을 측정 (테칸(Tecan)® 인피니트(Infinite) M200 또는 테칸® 인피니트 M200 프로)함으로써 유전자 발현을 모니터링하였다. 미가공 발광 데이터 (카운트)를 먼저 멀티사이클(Multicycle)™ 소프트웨어 (악티메트릭스, 인크.(Actimetrics, Inc.))를 사용하여 분석하여 각각의 화합물 농도에 대한 진폭 (amp), 주기, 및 위상 (phz)을 결정하였다. 대조군 웰 (즉 화합물 무함유, 오직 DMSO)에 대한 주기 길이는 26-30시간이어야 한다. 이어서, Amp 데이터를 로그 화합물 농도 (M)에 대해 플롯팅하고, 비선형 회귀 분석에 의해 분석하여 EC50을 결정하였다.
하기 표는 구체적 화합물에 대한 Per2 EC50 데이터를 제공한다. EC50은 마이크로몰 농도로서 보고된다.
<표 1> Per2 검정 데이터
Figure pct00143
Figure pct00144
관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 본 검정을 용이하게 최적화하여 기재된 임의의 화합물에 대한 Per2 EC50 데이터를 결정할 수 있다.
실시예 4: 열 이동 결합 검정
인간 CRY1 단백질 (hCRY1)의 단리된 FAD-결합 도메인에 대한 화합물의 결합은 시차 주사 형광측정법 ('열 이동') 검정 (Pantoliano et al. (2001) J Biomol Screening 6, 429; Niesen et al. (2007) Nature Protocols 2, 2212)을 사용하여 결정하였다. hCRY1 (아미노산 잔기 1-494)와 C-말단 Myc-DDK 태그 (FADBD)의 FAD-결합 도메인을 HEK293T 세포 (카탈로그 # CRL-3216, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection))의 일시적 형질감염에 의해 생산하고, 항-FLAG 친화성 크로마토그래피 (카탈로그 # A2220, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich))에 의해 정제하였다. FADBD (웰당 0.5 μg)를 17.5 μl 트리스-완충 염수 (TBS) 중 DMSO (반응 중 5% DMSO 최종 농도) 중의 화합물의 희석물과 함께 얼음 상에서 10분 동안 인큐베이션한 다음, 2.5 μl의 8X 시프로-오렌지(Sypro-Orange) 염료 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies))를 각 웰에 첨가하였다. 삼중 웰을 각각의 화합물 농도에 대해 평가하였다. 용융 온도는 25℃에서 2분의 열 프로파일, 이어서 99℃까지 1℃/분의 램프 속도를 갖는 용융 곡선 모드를 사용하여 ABI7500 정량적 PCR 기기에서 측정하였다. 각 웰에 대한 용융 온도를 용융 곡선의 1차 도함수로부터 결정하였다. 용융 온도 (ΔTm)에서의 변화는 단독 5% DMSO 중 FADBD의 용융 온도의 차감에 의해 얻었다. 도 21에 제시된 바와 같이, ΔTm에서의 용량-의존성 증가가 화합물 72에 대해 관찰되었으며, 이는 상기 화합물이 hCRY1 FADBD 단백질과 물리적으로 회합하는 것을 나타내었다.
실시예 5: 시계 유전자 및 글루코스신생 유전자 발현에 대한 생체내 효과
본 실시예에서, 다양한 마우스 모델에서 시계 및 글루코스신생 유전자 발현에 대한 카르바졸-함유 아미드, 카르바메이트, 및 우레아의 효과를 검사하였다. 구체적으로, 4마리의 상이한 마우스 모델을 사용하였다: ICR 마우스, Balb/c 마우스, C57Bl/6J DIO (식이-유발 비만) 마우스, 및 db/db 마우스. C57Bl/6J DIO 및 db/db 마우스 둘 다는 당뇨병, 비만, 및 이상지혈증의 관련 기술분야-인지된 모델이다. 높은 지방 섭식에 반응하여 제II형 당뇨병성 발현형을 나타내는 식이 유발 지방 (DIO) 마우스는 비만, 고인슐린혈증, 인슐린 저항성 및 글루코스 불내성을 발생시킨다 (스리니바산(Srinivasan) 및 라마라오(Ramarao), 2007). db/db 마우스 (leprdb 마우스)는 렙틴 수용체를 코딩하는 db 유전자 내에 돌연변이를 갖는다. db/db 마우스는 자발적으로 과식증을 얻고, 비만이 되고, 고혈당, 고인슐린혈증 및 인슐린 내성을 갖게 된다.
유전자 발현에 대한 Cry 조정제 화합물의 효과를 검사하기 위한 생체내 연구는 하기 기재된 다양한 실험 방법을 사용하여 수행하였다.
4일 연구. 찰스 리버 래보러토리즈(Charles River Laboratories) (캘리포니아주 홀리스터)로부터 얻은 수컷 ICR 마우스 (30 - 35 g 체중)를 적어도 3일의 순응 후에 실험에 사용하였다. 마우스에게 비히클 (WFI 또는 10% 콜리포르) 또는 화합물 (50 mg/kg, 용량 부피 5mL/kg, PO)로 제1일의 오후에 시작하여 4일 동안 BID (1일 2회) 투여하였다. 화합물 또는 비히클의 마지막 용량을 수확의 아침에 투여하였다. 수확일 (최종 용량 후 6시간)에, 마우스를 CO2 질식에 의해 안락사시키고, 50mg의 간 조직을 절제하고, 500μl의 RNA 레이터를 함유하는 튜브에 두었다.
24시간 유전자 발현 연구. 수컷 C57Bl/6J DIO 마우스를 17주령 (캘리포니아주 사크라멘토 소재의 더 잭슨 래보러토리(The Jackson Laboratory))에 구입하고, 2주 기간 동안 순응시킨 후, 실험에 사용하였다. 전체 군 크기는 처리당 15마리였으며, 5개 시점으로 나누어 3마리의 마우스의 최종 군 사이즈를 제공하였다. 마우스에게 비히클 (주사용수 (WFI)) 또는 Cry 조정제 화합물 화합물 72 (WFI 중 50 mg/kg)를 5ml/kg의 용량 부피, BID로, 경구 위관영양을 통해 2일 동안 투여하면서 최종 제5 용량을 수확 12시간 전에 투여하였다.
전체적으로, 각각의 마우스는 실험 과정에 걸쳐 화합물의 5회 용량을 수용하였다. 마우스를 연구의 개시 전 저녁의 체중을 기준으로 하여 칭량하고, 각각의 처리에 대해 무작위로 할당하였다. 시작 제3일, 3:00 PM에, 비히클 및 화합물 72-처리된 군으로부터의 동물 군을 CO2 질식을 사용하여 안락사시키고, 50 mg의 간, 부고환 지방 및 골격근 각각을 절제하고, 500μl의 RNA레이터를 함유하는 튜브에 두었다. 이러한 절차는 그의 주어진 수확 시간에서 시점 군의 나머지에 대해 발생하였다. 화합물 수준의 후속 측정에 사용하기 위해 혈장 샘플을 또한 각각의 동물에 대해 취하고, 동결시켰다.
마우스 간 총 RNA 제조. E.Z.N.A.® HP 총 RNA 단리 키트 (R6812-01 및 매뉴얼 [Revised 2010]에 기재된 프로토콜)를 이용하여 간 샘플로부터 RNA를 제조 및 단리시켰다. RNA 샘플을 제조하기 위해, 10-30 mg의 샘플을 RNA-레이터로부터 제거하고, 1.5 ml 미세원심분리기 튜브에 두었다. GTC 용해 완충제 (700 μl)를 조직에 첨가하고, 이를 로터-스테이터 균질화기 (예를 들어 티슈-티어러(Tissue-Tearor), 모델 # 985370 바이오스펙 프로덕츠(BioSpec Products), 4.5 mm 프로브 함유, 카탈로그 # 985370-04)로 균질화한 다음, 전속력 (≥ 13,000 x g)으로 5분 동안 원심분리하였다. 청정화된 상청액을 2 mL 수집 튜브에 예비-삽입된 DNA 클리어런스 칼럼으로 피펫팅함으로써 옮겼다. 조립된 칼럼을 13,000 x g에서 1분 동안 원심분리하고, 통과물을 저장하였다. 동등 부피 (700μl)의 70% 에탄올을 용해물에 첨가하고, 혼합하였다. 이어서, 샘플을 2ml 수집 튜브에 위치한 하이바인드(HiBind) RNA 스핀 칼럼에 적용하였으며, 이를 10,000 x g에서 실온에서 60초 동안 원심분리하였다. RNA 세척 완충제 I (250 μl)을 2 ml 수집 튜브에 삽입된 새로운 하이바인드 RNA 칼럼 상에 직접 피펫팅함으로써 첨가하였다. 조립된 칼럼을 10,000 x g에서 60초 동안 원심분리하였다. RNA 칼럼을 새로운 2 ml 수집 튜브에 두었다. DNase I 원액을 각각의 칼럼 내 하이바인드 RNA 수지의 표면 상에 직접 피펫팅 (75μl)하였다 (DNAse 소화와 RNase 무함유 DNase 세트 (E1091) 사용: 각각의 하이바인드 RNA 칼럼에 대해, DNase I 원액을 하기와 같이 제조하였음: E.Z.N.A.® DNase I 소화 완충제 73.5μl, RNase 무함유 DNase I (20 쿠닛츠(Kunitz)/μl) 1.5μl = 총 부피 75μl.). 결합된 RNA를 갖는 칼럼을 실온 (25-30℃)에서 15분 동안 인큐베이션하였다. RNA 세척 완충제 I (500 μl)을 칼럼에 첨가하고, 벤치 탑에 2분 동안 두었다. 10,000 x g에서 60초 동안 원심분리한 후, 통과물을 버리고, 500μl의 RNA 세척 완충제 II를 첨가하고, 10,000 x g에서 60초 동안 원심분리하였다. 또 다른 500μl의 RNA 세척 완충제 II를 첨가하고, 칼럼 조립체를 10,000 x g에서 60초 동안 원심분리하였다. 칼럼을 최대 속도에서 2분 동안 원심분리하여 하이바인드 매트릭스를 완전히 건조시켰다. 칼럼을 깨끗한 1.5 ml 마이크로원심분리 튜브에 두고, 40-70μl의 분자 생물학 등급 물을 첨가하였다. 1분 동안 교반한 후, 칼럼을 최대 속도에서 2분 동안 원심분리하여 RNA를 용리시켰다. 단리된 RNA를 수집 튜브로 수집하였다.
마우스 혈액 총 RNA 제조. 전혈 RNA 연구를 위해, 수컷 db/db 마우스 (9주령, 메인주 바 하버 소재의 더 잭슨 래보러토리)를 각각의 실험 군에 대해 n = 8 마우스로 실험에 사용하였다. 마우스에게 화합물 72 (100 mg/kg, P.O; 용량 부피 5 ml/kg, 10% 콜리포르 중), 또는 10% 콜리포르를, ZT0 (7:00am) (ZT는 자이트게버(Zeitgeber) 시간을 지칭하며, 광이 켜져 마우스 기능일을 자극하는 시간을 나타냄)에서 3일 동안 1일 1회 투여하였다. ZT7.5 (2:30pm)에서의 최종일에, 동물을 CO2 질식을 사용하여 안락사시키고, 혈액을 심장으로부터 심장 천자를 통해 수집하였다. 혈액을 1.5 ml 총 부피가 되도록 RNA레이터 용액에 두었다. 총 RNA를 하기와 같이 암비온 마우스 리보퓨어(Ambion Mouse RiboPure) 혈액 RNA 단리 키트 AM1951을 사용하여 제조하였다. 샘플을 3분 동안 원심분리하면서 상청액을 버렸다. 2 ml의 용해 용액을 첨가하고, 볼텍싱하고, 15 ml 튜브에 옮기고, 이어서 수마이크로리터의 3M 아세트산나트륨을 첨가하였다. 3.8 ml의 총 부피가 되도록 용해 완충제를 첨가하고, 볼텍싱하였다. 샘플 혼합물을 1.5 ml 산 페놀: 클로로포름으로 추출하고, 수성 상을 회수하였다. 0.5 부피의 100% 에탄올을 첨가하고, 볼텍싱한 후, 샘플을 키트에 제공된 필터 칼럼을 통해 통과시키고, 750 마이크로리터의 세척 완충제 1로 세척하였다. 필터를 750 마이크로리터 세척 완충제 2/3의 2개의 패스로 세척하고, 건조시켰다. RNA를 200 마이크로리터의 분자 생물학 등급 물 (RNase-무함유) 중에 용리시켰다.
총 RNA의 정량분석. 레디플레이트(RediPlate) 96 리보그린 RNA 정량분석 키트 (인비트로젠(Invitrogen)) 레디플레이트 표준 곡선은 20 μl 재구성된 RNA 표준물을 180 μl 레디플레이트 TE 완충제 중에 재구성된 레디플레이트 웰에 옮김으로써 제조하였다. 간에 대해 오메가 바이오-텍(Omega Bio-Tek) HP 총 RNA 키트와 유사한 키트를 사용하여 30-100 mg의 조직으로부터 RNA를 제조하고, RNAse-무함유 물 중에 50 μl (마이크로리터)의 부피로 용리시키고, 5 μl의 총 RNA를 195 μl의 레디플레이트 TE 완충제 (RNA의 1:40 희석물), 믹스 중에 희석하였다. 5 μl를 195 μl TE 완충제 중에 재구성된 레디플레이트 웰에 옮기고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 후, 표준물 및 샘플을 함유하는 웰의 형광 강도를 480 nm에서의 여기 세트 및 520 nm에서의 방출 세트와 ~70%로의 획득 세트를 갖는 테칸 M200에서 판독하였다. 대안적으로, Ex 488 nm 및 Em 525 nm 및 515 nm의 컷오프를 갖는 플렉스스테이션(FlexStation) 3을 사용할 수 있다. 표준 곡선은 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism)에서 생성되었고, 샘플 판독 (미지)은 선행 회귀 분석을 통해 내삽하고, RNA 샘플 농도를 계산하였다.
cDNA의 제조. 고성능 cDNA 역전사 키트 (인비트로젠) 10X RT 완충제 (40-70μl), dNTP 및 무작위 프라이머를 얼음 상에서 해동하였다. 각각의 샘플에 대해 동일한 양 (통상적으로 0.5 - 4.0 μg)의 입력 RNA를 사용하여 반응을 40 μl의 총 부피로 설정하였다. 적절한 양의 총 RNA 및 뉴클레아제-무함유 H2O를 혼합하여 20 μl의 총 부피를 얻었다. 마스터 믹스를 각각의 반응에 대해 4.2 μl RNAse-무함유 H2O, 2 μl 10X RT 완충제, 0.8 μl 25X dNTP, 및 2 μl 무작위 프라이머로 생성하였다 (임의로, 10% 초과가 반응물의 총 개수에 첨가되어 충분한 부피를 보장하도록 수행될 수 있음). 역전사효소 (1 μl)를 각각의 반응에 대해 첨가하고, 볼텍싱 없이 조심스럽게 혼합하였다. 일부 중복 샘플 (전체 중 ~ 10%)을 RT(-) 세트에 할당하고, 충분한 마스터 믹스 결여 역전사효소가 이들 대조군을 포함하도록 제조하였다. 마스터 믹스 (20 μl) (또는 RT(-) 마스터 믹스)를 20 μl의 고정-입력 RNA 샘플이도록 첨가하였다. 반응물을 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하고, 85℃에서 5분 동안 가열하고, 얼음 상에 두었다. cDNA의 샘플은 다음날까지 사용할 경우 4℃에서 저장하고, 보다 긴 기간에 대해서는 -20℃에서 저장하였다.
RT-PCR. PCR 분석에 대해, 이용된 키트는 택맨(TaqMan)® 패스트 유니버셜 마스터 믹스(Fast Universal Master Mix) (2x), 노 앰페라제(No AmpErase)® UNG였다. ABI 7500 상에서 실행될 반응에 대해, 2 μl의 cDNA 주형 또는 RT(-) 대조군 주형을 각 웰에 두었다. 마스터 믹스는 실행될 각 샘플에 대해 1.0 μl 택맨 발현 검정 (프라이머/프로브) 및 7 μl 뉴클레아제-무함유 H2O를 포함하도록 제조되었고, 18 μl의 마스터 믹스 + 발현 검정 + 뉴클레아제-무함유 H2O를 각각의 2 μl 샘플에 첨가하고, 피펫팅함으로써 혼합하였다. 플레이트를 밀봉하고, 스핀 다운하고, ABI7500에 로딩하였다. 적어도 1종의 하우스키핑 mRNA 발현 검정 (예를 들어 GAPDH; Mm03302249_g1 또는 Hs02758991_g1)은 평가될 RNA 샘플의 각 세트에 포함되었다.
코어 시계 기능에 대한 Cry 조정제 화합물 72의 효과는 당뇨병성 마우스 및 비-당뇨병성 마우스에서 검사하였다. 17주령의 수컷 C57Bl/6J DIO 마우스 (캘리포니아주 사크라멘토 소재의 더 잭슨 래보러토리)를 고지방 식이 (HFD) 상에서 유지하고, 2주 기간 동안 순응시킨 후, 처리하여 당뇨병 및 비만을 재현하였다. 3마리의 마우스를 화합물 또는 비히클로 5개 시점 각각에 대해 처리하였다. 마우스에게 비히클 (주사용수 (WFI) 또는 화합물 72 (WFI 중 50 mg/kg)로 5ml/kg의 용량 부피, BID (1일 2회)로, 경구 위관영양을 통해 투여하였다. 전체적으로, 각각의 마우스는 실험 과정에 걸쳐 화합물의 5회 용량을 수용하였다. 마우스를 연구의 개시 전 저녁의 체중을 기준으로 하여 칭량하고, 각각의 처리에 대해 무작위로 할당하였다. 제3일 3:00 PM에서 시작하여, 비히클 및 화합물 72-처리된 군으로부터의 동물 군을 CO2 질식을 사용하여 안락사시키고, 50 mg의 간, 부고환 백색 지방, 및 골격근을 RNA 제조를 위해 절단하였다.
화합물 72의 효과는 또한 24시간에 걸쳐 일주기 mRNA 상에서 정상 Balb/c 마우스에서 검사하였다. 마우스는 찰스 리버로부터 입수한 8주령이고, 2주 동안 순응되도록 하였다. 마우스를 3일 동안 BID 투여하면서, 각각의 동물에 대해 총 7회 용량과 조직 수득 전 12시간째에 마지막 용량을 투여하였다. 마우스에게 비히클 (WFI) 또는 화합물 72 (WFI 중 50 mg/kg)로 5ml/kg의 용량 부피, BID로, 경구 위관영양을 통해 투여하였다. 제3일, 3:00 PM에 시작하여, 비히클 및 화합물 72 군으로부터의 동물 군을 희생시키고, 대략 50 mg의 간, 폐, 신장, 부신, 비장, 고환 지방 및 갈색 지방 조직을 절단하고, RNA레이터에 두었다.
비히클-처리된 C57Bl/6J DIO 마우스로부터의 코어 시계 mRNA는 특징적 일주기 발현 패턴을 나타내었다 (도 1). 그러나, 화합물 72 처리한 Per2 mRNA는 C57Bl/6J DIO 및 Balb/c 마우스 둘 다에서 24시간에 걸쳐 억제되고, 이들은 ZT8에서 가장 감소되고, 24시간 후에 ZT8에서 다시 감소되었다 (도 1A & B). Bmal1 mRNA는 ZT8 및 원래 ZT0 후 32시간째에 화합물 72 처리에 의해 마우스의 상기 스트레인 둘 다에서 실질적으로 증가되었다. Bmal1 전사체는 또한 C57Bl/6J DIO 마우스에서 현저한 위상 지연 및 Balb/c 마우스에서 보다 적은 정도를 나타내었다 (도 1C & D). Cry1에 대한 mRNA는 암주기 동안 그의 발현 피크 동안 억제되었다 (도 1E & F, 쉐이딩된 영역). 비히클-처리된 Balb/c 마우스에 비해 DIO 마우스에서 관찰된 비히클-처리된 Cry1 전사체에서의 위상 진전은 부분적으로 많은 일주기 패턴에 대한 고지방 식이의 공지된 효과로 인한 것일 수 있다 (Eckel-Mahan et al. (2013) Cell). Cry1 mRNA와 대조적으로, 비히클-처리된 마우스에서 주간 시간에서 Cry2에 대한 mRNA는 정점을 찍었으나, 이는 C57Bl/6J DIO 및 Balb/c 마우스 둘 다에서 화합물 72로의 처리에 의해 강하게 약화되었다 (도 1G & H).
상기 기재된 동일한 24시간 연구에서, 글루코스신생 유전자 Pck1 (PEPCK) 및 G6Pc (글루코스 6-포스파타제 촉매 서브유닛)에 대한 mRNA의 일주기 패턴은 C57Bl/6J DIO 마우스에서 비히클에 비해 화합물 72에 의해 실질적으로 변경되었다 (도 2A & C). 비히클-처리된 마우스는 다른 연구에서 사료-공급된 C57Bl/6J 마우스에 대해 관찰된 것 (Hughes et al. (2009))에 비해 평탄화되고 위상-진전된 패턴을 나타내었다. 화합물 72-처리된 C57Bl/6J DIO 마우스는 이른 저녁 (ZT14)에서 이들 글루코스신생 유전자 둘 다에 대한 발현의 피크를 나타내었으며, 이는 사료-공급된 마우스에서 관찰된 그의 발현의 피크 시간과 근접하였다 (Hughes et al. (2009)). Pck1 및 G6Pc에 대한 발현의 일주기 패턴은 이들이 Balb/c 마우스에서 보다 C57Bl/6J DIO 마우스에서, 비히클에 비해 화합물 72에 의해 더 변경되었다 (도 2B & D).
다중 Cry 조정제 화합물, 화합물 72, 화합물 48, 화합물 9 및 화합물 57의 효과는 ICR 마우스에서 검사하였다. 마우스를 각각의 화합물 (화합물 72, 화합물 48, 화합물 9 및 화합물 57)의 50 mg/kg을, PO (경구 투여)로, 5ml/kg의 용량 부피로 4일 동안, BID 또는 비히클 대조군으로 처리하였다. 각각의 화합물은 간 Per2 발현의 억제를 유발하였다 (도 3A). 화합물 48 처리는 ZT6에서 Bmal1 mRNA에서의 8배 증가를 생성하였고, 화합물 72 및 화합물 9 처리된 마우스는 4배 증가를 나타내고, 화합물 57 처리된 마우스는 적어도 2배 증가를 나타내었다 (도 3B). 화합물 72, 화합물 48 및 화합물 9는 또한 Cry2 전사체에서의 감소를 유발하였다 (도 3C).
전혈 내 코어 시계 유전자 mRNA의 수준은 처리된 대상체에서 화합물의 효과를 결정하는 비-침습적 방법을 제공할 수 있다. 수컷 db/db 마우스 (9주령, 메인주 바 하버 소재의 더 잭슨 래보러토리)를 각 실험 군에 대해 n = 8로 사용하였다. 마우스에게 화합물 72 (100 mg/kg, P.O; 용량 부피 5 ml/kg, 10% 콜리포르 중), 또는 10% 콜리포르를 ZT0 (7:00am)에서 3일 동안 1일 1회 투여하였다 (ZT는 자이트게버 시간을 지칭하며, 광이 켜져 마우스 기능일을 자극하는 시간을 나타냄). 최종일 ZT7.5 (2:30pm)에서, 동물을 CO2 질식을 사용하여 안락사시키고, 혈액을 심장으로부터 심장 천자를 통해 수집하였다. RT-qPCR에 의한 검정을 위해 전혈을 RNA레이터를 함유하는 튜브로 옮겼다.
D-박스 결합 단백질 Dbp는 강하게 일주기 방식으로 조절된다. 화합물 72는 이 연구에서 Dbp 유전자 발현의 통계적으로 유의한 억제를 유발하였으며 (도 4), 이러한 화합물로 처리된 마우스에서의 백혈구는 전체 유기체에서 코어 시계 메카니즘에 대한 화합물의 효과에 관한 정보를 제공할 수 있음을 입증하였다. 이러한 정보는 Cry 조정제 및 코어 일주기 메카니즘에 영향을 미치는 다른 치료제의 효과를 평가하기 위한 진단 마커로서, 또는 바이오마커로서 사용될 수 있다.
코어 시계 메카니즘과 직접적으로 상호작용하는 화합물에 대해, 투여 시간은 그의 효과를 최대화하는데 결정적일 수 있다. db/db 마우스를 ZT0 또는 ZT10에서 주어진 화합물 72의 단일 용량 (50 mg/kg)으로 처리하였다. 전자 (ZT0)는 마우스 간에서 Cry1 및 Bmal1 단백질의 피크와 일치하고, 후자 (ZT10)는 Cry1 및 Bmal1의 대략 최저점과 상응한다. 간 조직을 각각에 대해 7.5시간 후에 취하고, 샘플을 RT-qPCR에 의해 코어 시계 유전자 mRNA에 대해 검사하였다. 화합물 72가 최저점과 비교하여 피크에서 시계 mRNA에 비교적 더 크게 영향을 미쳤으며 (도 5), 전자의 시간 즈음의 투여는 시계 메카니즘에 보다 더 큰 효과를 제공하고, 이는 추가로 시계의 대사 출력에 보다 큰 효과를 초래할 수 있다.
실시예 6: 당뇨병 마우스 모델에서의 시계 유전자 발현의 피크 또는 최저점에서 투여된 화합물 72의 단일 용량의 효과
글루코스 대사에 대한 화합물 72의 효과는 제II형 당뇨병의 db/db 마우스 모델에서의 코어 시계 유전자 Cry1/Bmal1 발현의 피크 또는 최저점에서 투여된 단일 용량으로서 투여되는 경우에 평가하였다.
Leprdb (6주령)에 대해 동형접합인 수컷 db/db 마우스를 더 잭슨 래보러토리 (메인주 바 하버)로부터 입수하였다. 마우스를 정상 명/암 주기 (점등: 07:00 - 19:00시) 상에서 표준 펠릿화 마우스 식이 및 물에 자유롭게 접근가능하게 하면서 군 수용하였다. 동물을 이들 조건에서 실험 전 2주 동안 익숙해지도록 하였다. 마우스를 2개의 연구 아암으로 분할하여, Cry1 및 Bmal1 유전자 발현의 피크 또는 최저점에서 투여되도록 하였다. 마우스에게 비히클 (10% 콜리포르, 시그마-알드리치) 또는 화합물 72 (물 중 10% 콜리포르 중 50 mg/kg)를 5ml/kg의 용량 부피로, QD, 경구 위관영양을 통해, ZT0 (피크, 7:00am) 또는 ZT10 (최저점, 5:00pm)에서 1회 투여하였다. 동물을 제0일에 칭량하고, 치료 군으로 무작위로 할당하여 각각의 군이 유사한 평균 출발 체중을 갖도록 하였다. ZT0에서 투여된 마우스를, 이들이 깨끗한 케이지로 옮겨졌을 때 10:30pm에서 시작하여 밤새 금식시키고, 12시간의 기간 동안 음식물이 아닌 물에만 자유롭게 접근가능하도록 하였다. ZT10에서 투여된 마우스를 동일한 방식으로 8:30am에 시작하여 금식시켰다. 연구일에, 투여 후, 마우스는 공복 혈액 글루코스의 측정 전 2시간째에 꼬리 절단 손상을 진행시켜, 절차가 유발할 수 있는 임의의 스트레스로부터 회복되도록 하였다. 공복 혈액 글루코스 (FBG)는 알파(Alpha)TRAK 혈당측정기 (미국 소재의 애보트 래보러토리즈(Abbott Laboratories))를 사용하여 10:30am 또는 8:30pm에서 동물로부터 평가하였다. 11:30am (피크 투여된 마우스) 또는 9:30pm (최저점 투여된 마우스)에서 각각의 동물에게 글루코스의 0.5g/kg으로 투여한 다음, 혈액 글루코스를 글루코스 로드 후 t = 15, 30, 60, 90 및 120분에서 측정하였다. 동물을 치사시키고, 이어서 다른 종점 결정을 위해 마지막 혈액 수집 및 조직 및 혈액 수확하였다.
OGTT 동안 취한 공복 혈액 글루코스 값 및 글루코스 측정치를 평균내고, 그래프화하였다 (캘리포니아주 라 졸라 소재의 그래프패드 프리즘, 그래프패드 소프트웨어(GraphPad Software)). 곡선하 면적 (AUC)을 각각의 개별 동물에 대해 계산하였다. 일원 ANOVA에 이어서 적절한 후검정을 사용하여 통계적 분석을 수행하였다. 유의성은 p < 0.05인 경우에 수용되었다. 데이터는 평균 및 S.E.M으로서 나타내어진다.
db/db 마우스로의 Cry1 및 Bmal1 유전자 발현의 피크에서 투여된 단일 용량에서의 화합물 72 (50 mg/kg, PO)의 투여는 비히클 대조군과 비교하여 OGTT 측정에 대해 명백한 효과를 발생시켰으나 (도 6A), 최저점에서 투여된 경우에 어떠한 효과도 없었다 (도 6B). 유전자 발현의 피크에서 투여된 동물의 OGTT로부터 계산된 AUC는 화합물 72 처리가 14%의 글루코스 변동에서의 감소를 발생시켰음을 나타내었다 (74098 +/- 4194에서 63842 +/- 4318로; 도 7).
실시예 7: 당뇨병 마우스 모델에서 7일에 걸쳐 투여된 화합물 72의 단일 용량의 효과
글루코스 대사 및 인슐린 수준에 대한 화합물 72의 효과는 단일 용량이 제II형 당뇨병의 db/db 마우스 모델에서 7일에 걸쳐 투여된 단일 용량으로서 투여되는 경우에 평가하였다.
Leprdb (6주령)에 대해 동형접합인 수컷 db/db 마우스를 더 잭슨 래보러토리 (메인주 바 하버)로부터 입수하였다. 마우스를 정상 명/암 주기 (점등: 07:00 - 19:00시) 상에서 표준 펠릿화 마우스 식이 및 물에 자유롭게 접근가능하게 하면서 군 수용하였다. 동물을 이들 조건에서 실험 전 2주 동안 익숙해지도록 하였다. 마우스에게 비히클 (10% 콜리포르, 시그마-알드리치) 또는 화합물 72 (물 중 10% 콜리포르 중 50 mg/kg)를 5ml/kg의 용량 부피로, QD, 경구 위관영양을 통해, ZT0 (7:00am)에서 7일 동안 투여하였다. 마우스를 제0일에 칭량하고, 치료 군으로 무작위로 할당하여 각각의 군이 유사한 평균 출발 체중을 갖도록 하였다. 종점 측정 전의 저녁 10:30pm에서, 마우스를 깨끗한 케이지에 두고, 12시간의 기간 동안 음식물이 아닌 물에만 자유롭게 접근가능하게 한 후, 공복 혈액 글루코스 측정하였다. 연구의 최종일에, 동물을 정상 투여한 다음, 공복 혈액 글루코스의 측정 전 2시간째에 꼬리 절단 손상을 진행시켜, 절차가 유발할 수 있는 임의의 스트레스로부터 회복되도록 하였다. 공복 혈액 글루코스 (FBG)는 알파TRAK 혈당측정기 (미국 소재의 애보트 래보러토리즈)를 사용하여 10:30am에서 동물로부터 평가하였다. FBG 측정 후 혈액을 꼬리 밀킹 기술을 사용하여, 각각의 마우스로부터 모세관 튜브 내로 수집하였다. 모세관 튜브를 적혈구용적률 (BD 트리악(BD Triac) 0200)에서 원심분리하고, 생성된 혈장을 에펜도르프로 옮겼다. t = 0시간으로서 표지된 이러한 샘플을 -80℃에서 동결시켜 인슐린의 후속 측정을 가능하게 하였다. 11:30am에서 각각의 동물에게 글루코스의 0.5g/kg을 투여한 다음, 혈액 글루코스를 글루코스 로드 후 t = 15, 30, 60, 90 및 120분에서 측정하였다. OGTT의 종료 시 혈액을 상기 기재된 바와 같이 t = 2시간 인슐린 결정을 위해 수집하였다. 동물을 치사시키고, 이어서 다른 종점 결정을 위해 마지막 혈액 수집 및 조직 및 혈액 수확하였다 (다른 곳에 상세화됨). 화합물 72 처리된 동물로부터의 혈장 및 간 조직을 LC/MS/MS를 사용하고 공지된 화합물 양의 표준 곡선과 비교하여 화합물 수준의 측정을 위한 CRO에 적용하였다.
OGTT 동안 취한 공복 혈액 글루코스 값 및 글루코스 측정치를 평균내고, 그래프화하였다 (캘리포니아주 라 졸라 소재의 그래프패드 프리즘, 그래프패드 소프트웨어). 곡선하 면적 (AUC)을 각각의 개별 동물에 대해 계산하였다. 혈장 인슐린 수준을 초감수성 인슐린 ELISA (뉴햄프셔주 세일럼 소재의 알프코(ALPCO))를 사용하여 결정하였다. HOMA-IR (항상성 모델 평가-인슐린 내성)을 하기 식을 사용하여 계산하였다: (FPI (μU/L) x FPG (mmol/L))/22.5, 여기서 FPI 및 FPG는 각각 공복 혈장 인슐린 및 공복 혈장 글루코스를 나타낸다. 인슐린 데이터는 또한 그래프패드 프리즘 포맷으로 나타내어졌다. 일원 ANOVA에 이어서 적절한 후검정을 사용하여 통계적 분석을 수행하였다. 유의성은 p < 0.05인 경우에 수용되었다. 데이터는 평균 및 S.E.M으로서 나타내어진다.
db/db 마우스에게의 7일 동안의 화합물 72 (50 mg/kg, PO)의 투여는 비히클 대조군과 비교하여 FBG에서의 유의한 감소를 발생시켰다 (484.9 +/- 34.37 mg/dL에서 385.0 +/- 29.69 mg/dL로; 도 8A). OGTT 측정의 과정 동안, 화합물 72 처리된 동물은 비히클 대조군보다 더 낮았다 (도 8B). OGTT로부터 계산된 AUC는 화합물 72 투여가 글루코스 변동에서의 유의한 감소를 발생시켰음을 나타내었다 (54845 +/- 4112에서 35942 +/- 3192로; 도 8C).
혈장 인슐린 측정을 t = 0 및 t = 2시간에서 취한 샘플로부터 행하였으며, 도 9A에 제시된다. 인슐린은 t = 0 및 t = 2시간 시점 둘 다에서 화합물 72로의 처리에 의해 각각 20% 및 21%까지 감소되었다 (각각 4.70 +/- 0.76에서 3.78 +/- 0.69ng/mL로 및 3.17 +/- 0.67에서 2.53 +/- 0.50ng/mL로). HOMA-IR (인슐린으로의 재감작의 지표)은 139.91 +/- 26.57에서 93.69 +/- 23.60 유닛으로 33%까지 감소되었다 (도 9B).
화합물 72 화합물 수준을 연구 종료에서 취한 샘플로부터 평가하였으며, 비교 목적을 위해 실시예 3에 기재된 바와 같은 Per2 검정으로부터 결정된 EC50 값과 함께 도 10에 제시된다. 화합물 72는 마지막 용량의 투여 후 대략 8시간째에 혈장 및 간 둘 다에서 발견되었다 (혈장: 0.53 +/- 0.03 μM; 간: 0.67 +/- 0.05 μM, 평균 및 S.E.M으로서 제시됨). 양쪽 경우에 화합물 수준은 화합물 72에 대해 결정된 Per2 EC50 값보다 약간 더 높았다 (0.4 μM; 혈장 및 간에서의 EC50 값보다 각각 1.3배 및 1.7배 더 높음).
실시예 8: 당뇨병 마우스 모델에서의 화합물 72의 증가하는 투여량의 효과
화합물 72의 효과는 제II형 당뇨병의 db/db 마우스 모델에서 글루코스 대사 및 인슐린 수준에 대해 7일에 걸쳐 투여된 증가하는 용량에 대해 평가하였다.
Leprdb (5주령)에 대해 동형접합인 수컷 db/db 마우스를 더 잭슨 래보러토리 (메인주 바 하버)로부터 입수하였다. 마우스를 정상 명/암 주기 (점등: 07:00 - 19:00시) 상에서 표준 펠릿화 마우스 식이 및 물에 자유롭게 접근가능하게 하면서 군 수용하였다. 동물을 이들 조건에서 실험 전 2주 동안 익숙해지도록 하였다. 마우스에게 비히클 (10% 콜리포르, 시그마-알드리치) 또는 화합물 72 (물 중 10% 콜리포르 중)를 10, 50 또는 100 mg/kg에서 5ml/kg의 용량 부피로, QD, 경구 위관영양을 통해, ZT0 (7:00am)에서 7일 동안 투여하였다. 수행된 실험 방법은 실시예 11에 상술된 바와 동일하였다. 화합물 72 처리된 동물로부터의 혈장 및 간 조직에서의 화합물 수준을 LC/MS/MS를 사용하여 측정하고, 공지된 화합물 양의 표준 곡선과 비교하였다.
db/db 마우스에게의 7일 동안의 상승 용량에서의 화합물 72의 투여가 50 및 100 mg/kg에서 비히클 대조준과 비교하여 공복 혈액 글루코스 수준에서의 감소를 발생시켰을지라도, 이는 통계적 유의성에 도달하지는 않았다 (비히클 대조군: 491.0 +/- 51.30 mg/dL, 50 mg/kg: 402.8 +/- 25.25 mg/dL, 100 mg/kg: 420.7 +/- 26.44 mg/dL; 도 11A). 10 mg/kg의 용량에서 투여된 화합물 72는 공복 혈액 글루코스 수준에서의 어떠한 감소도 입증하지 않았다 (503.5 +/- 49.68 mg/dL). OGTT 측정의 과정 동안, 화합물 72 처리된 동물은 글루코스 로드 후 동물로부터의 글루코스 변동에 대한 용량 의존성 효과를 입증하였다 (도 11B). OGTT로부터 계산된 곡선하 면적은 화합물 72 투여가 글루코스 AUC를 용량 의존성 방식으로 감소시키며, 이것이 100 mg/kg에서 유의하였음을 나타내었다 (비히클: 46088 +/- 3303, 10 mg/kg: 39771 +/- 4244, 50 mg/kg: 35527 +/- 3215, 100 mg/kg: 28499 +/- 3079; 도 11C).
혈장 인슐린 측정을 t = 0 및 t = 2시간에서 취한 샘플로부터 행하였으며, 도 12A에 제시된다. 인슐린은 100 mg/kg에서 투여 시, t = 0에서, 화합물 72로의 처리에 의해 감소되었다 (5.68 +/- 0.43에서 4.63 +/- 0.17 ng/mL로 (각각 비히클 및 100 mg/kg 군)). HOMA-IR은 화합물 72 투여 후 용량 의존성 방식으로 감소되었다 (비히클: 169.3 +/- 18.41, 10 mg/kg: 172.7 +/- 16.61, 50 mg/kg: 149.2 +/- 16.49, 100 mg/kg: 111.9 +/- 9.02 유닛; 도 12B). 100 mg/kg에서, 화합물 72의 효과는 유의하였다 (비히클 대조군과 비교하여 34% 감소).
화합물 72 화합물 수준을 연구 종료에서 취한 샘플로부터 평가하였으며, 비교 목적을 위해 Per2 EC50 값 (실시예 3에 기재된 바와 같음)과 함께 도 13에 제시된다. 화합물 72는 마지막 용량의 투여 후 대략 8시간째에 혈장 및 간 둘 다에서, 투여된 용량에서의 증가에 비례하여 증가된 노출 수준으로 발견되었다 (혈장, 10 mg/kg: 0.09 +/- 0.01 μM; 50 mg/kg: 0.57 +/- 0.03 μM; 100 mg/kg: 1.22 +/- 0.17 μM; 간, 10 mg/kg: 0.12 +/- 0.01 μM; 50 mg/kg: 0.78 +/- 0.06 μM; 100 mg/kg: 1.81 +/- 0.22 μM). 혈장 및 간 둘 다에서 노출 수준은 각각 혈장 및 간에서의 Per2 EC50 값보다 50 mg/kg에서 1.4배 및 1.95배 더 높고, 100 mg/kg에서 3배 및 4.5배 더 높았다.
실시예 9: 당뇨병 마우스 모델에서의 화합물 9의 증가하는 투여량의 효과
화합물 9의 효과는 제II형 당뇨병의 db/db 마우스 모델에서 글루코스 대사 및 인슐린 수준에 대해 7일에 걸쳐 투여된 증가하는 용량에 대해 평가하였다.
Leprdb (5주령)에 대해 동형접합인 수컷 db/db 마우스를 더 잭슨 래보러토리 (메인주 바 하버)로부터 입수하였다. 마우스를 정상 명/암 주기 (점등: 07:00 - 19:00시) 상에서 표준 펠릿화 마우스 식이 및 물에 자유롭게 접근가능하게 하면서 군 수용하였다. 동물을 이들 조건에서 실험 전 2주 동안 익숙해지도록 하였다. 마우스에게 비히클 (10% 콜리포르, 시그마-알드리치) 또는 화합물 9를 30, 100 또는 300 mg/kg에서, 또는 로시글리타존 (물 중 10% 콜리포르 중)을 30 mg/kg에서 5ml/kg의 용량 부피로, QD, 경구 위관영양을 통해, ZT0 (7:00am)에서 7일 동안 투여하였다. 로시글리타존은 양성 대조군에 사용된 항당뇨병제 치료제이다. 수행된 실험 방법은 실시예 11에 상술된 바와 동일하였다. 화합물 9 처리된 동물로부터의 혈장 및 간 조직에서의 화합물 수준을 LC/MS/MS를 사용하여 측정하고, 공지된 화합물 양의 표준 곡선과 비교하였다.
db/db 마우스에게의 7일 동안의 상승 용량에서의 화합물 9의 투여는 비히클 대조군과 비교하여 100 mg/kg에서 공복 혈액 글루코스 수준에서의 감소를 발생시켰으나 (492.8 +/- 48.07에서 403.1 +/- 39.73 mg/dL로; 도 14A), 전체적으로 통계적으로 유의한 효과를 발생시키지 않았다. 30 및 100 mg/kg의 용량에서 투여된 화합물 9는 OGTT 동안 글루코스 수준 측정에서의 용량 의존성 감소와 함께, 300 mg/kg의 시험된 가장 높은 용량에서 어떠한 증가된 효과도 관찰되지 않았음을 입증하였다 (도 14B). OGTT로부터 계산된 곡선하 면적은 화합물 9의 투여가 글루코스 AUC를 용량 의존성 방식으로 감소시켰으며, 이는 100 및 300 mg/kg 둘 다에서 유의하였음을 나타내었다 (비히클: 56046 +/- 3204, 30 mg/kg: 44442 +/- 3895, 100 mg/kg: 33643 +/- 4822, 300 mg/kg: 33650 +/- 4688; 도 8C). 글루코스 AUC는 비히클 대조군으로부터 30, 100 및 300 mg/kg에서 각각 21%, 40% 및 40%까지 감소되었다. 동물 모델에 양성 대조군으로서 사용된 로시글리타존은 공복 혈액 글루코스 (492.8 +/- 48.07에서 280.4 +/- 13.66 mg/dL로; 도 14A), 및 글루코스 AUC (56046 +/- 3204에서 11502 +/- 2118 유닛으로; 도 14C)를 유의하게 억제하였다.
혈장 인슐린 측정을 t = 0 및 t = 2시간에서 취한 샘플로부터 행하였으며, 도 15A에 제시된다. 인슐린은 t = 0 (비히클: 14.89 +/- 2.93, 30 mg/kg: 10.94 +/- 1.62, 100 mg/kg: 7.71 +/- 1.26, 300 mg/kg: 10.54 +/- 1.6 ng/mL) 및 t = 2시간 (비히클: 7.44 +/- 0.92, 30 mg/kg: 5.76 +/- 0.11, 100 mg/kg: 3.70 +/- 0.29, 300 mg/kg: 4.01 +/- 0.44 ng/mL) 둘 다에서 화합물 9로의 처리 후 감소되었다. HOMA-IR이 화합물 9의 투여 후 용량 의존성 방식으로 감소되었을지라도, 이 종점에서 300 mg/kg에서의 화합물의 보다 더 적은 효과가 존재하였다 (비히클: 438.8 +/- 87.88, 30 mg/kg: 289.9 +/- 24.40, 100 mg/kg: 175.3 +/- 27.52, 300 mg/kg: 301.4 +/- 52.66 유닛; 도 15B). 100 mg/kg에서, 화합물 9의 효과는 유의하였다 (비히클 대조군과 비교하여 60% 감소). 로시글리타존은 t = 0 및 t = 2시간 (각각 3.05 +/- 0.14 및 2.28 +/- 0.08 ng/mL; 도 15A)에서 인슐린 수준을 감소시켰을 뿐만 아니라, HOMA-IR (50.58 +/- 3.52 유닛, 도 15B)을 유의하게 감소시켰다.
화합물 9 조직 수준을 연구 종료에서 취한 간 샘플로부터 평가하였으며, 이는 비교 목적을 위해 Per2 EC50 값과 함께 도 16에 제시된다. 화합물 9는 마지막 용량의 투여 후 대략 8시간째에 혈장 간에서 30 mg/kg 및 100 mg/kg 사이의 용량으로 투여된 용량에서의 증가에 비례하여 증가된 노출 수준으로 발견되었다. 300 mg/kg에서의 노출 수준은 약물의 축적을 나타내었다 (예상된 바와 같은 3배가 아닌 7.1배 증가함). 화합물 9의 30, 100 또는 300 mg/kg 투여된 동물의 간 샘플에서의 화합물 수준은 각각 0.19 +/- 0.02 μM, 0.67 +/- 0.05 μM 및 4.77 +/- 1.06 μM이었다. 30 mg/kg 화합물 9의 투여 후 간 노출 수준은 Per2 EC50 값 (0.3 μM)보다 대략 1.6배 낮았으나, 수준은 100 mg/kg 및 300 mg/kg에서 각각 2.2배 및 15.9배 더 높았다.
실시예 10: 식이-유발 비만 마우스 모델에서의 화합물 72의 효과
화합물 72의 효과는 제II형 당뇨병의 식이-유발 비만 (DIO) 마우스 모델에서 검사하였다.
수컷 C57/Bl6J DIO 마우스를 더 잭슨 래보러토리 (캘리포니아주 사크라멘토)로부터 입수하였다. 마우스를 정상 명/암 주기 (점등: 07:00 - 19:00시) 상에서 고지방 식이 (D12492 (60kcal% 지방), 리서치 다이어츠, 인크.(Research Diets, Inc.)) 및 물에 자유롭게 접근가능하게 하면서 군 수용하였다. 동물을 이들 조건에서 실험 전 적어도 2주 동안 익숙해지도록 하고, 대략 24주령에서 사용하였다. 마우스에게 비히클 (10% 콜리포르, 시그마-알드리치), 화합물 72 (물 중 10% 콜리포르 중 100 mg/kg) 또는 로시글리타존 (물 중 10% 콜리포르 중 30 mg/kg)을 5ml/kg의 용량 부피로, QD, 경구 위관영양을 통해, ZT0 (7:00am)에서 7일 동안 투여하였다. 로시글리타존은 양성 대조군에 사용된 항당뇨병제 치료제이다. 마우스를 제0일에 칭량하고, 치료 군으로 무작위로 할당하여 각각의 군이 유사한 평균 출발 체중을 갖도록 하였다. 종점 측정 전의 저녁 10:30pm에서, 마우스를 깨끗한 케이지에 두고, 12시간의 기간 동안 음식물이 아닌 물에만 자유롭게 접근가능하게 한 후, 공복 혈액 글루코스 측정하였다. 연구의 최종일에, 동물을 정상 투여한 다음, 공복 혈액 글루코스의 측정 전 2시간째에 꼬리 절단 손상을 진행시켜, 절차가 유발할 수 있는 임의의 스트레스로부터 회복되도록 하였다. 공복 혈액 글루코스 (FBG)는 알파TRAK 혈당측정기 (미국 소재의 애보트 래보러토리즈)를 사용하여 10:30am에서 동물로부터 평가하였다. FBG 측정 후 혈액을 꼬리 밀킹 기술을 사용하여, 각각의 마우스로부터 모세관 튜브 내로 수집하였다. 모세관 튜브를 적혈구용적률 (BD 트리악 0200)에서 원심분리하고, 생성된 혈장을 에펜도르프로 옮겼다. t = 0시간으로서 표지된 이러한 샘플을 -80℃에서 동결시켜 인슐린의 후속 측정을 가능하게 하였다. 11:30am에서 각각의 동물에게 글루코스의 1.5g/kg을 투여한 다음, 혈액 글루코스를 글루코스 로드 후 t = 15, 30, 60, 90 및 120분에서 측정하였다. OGTT의 종료 시 혈액을 상기 기재된 바와 같이 t = 2시간 인슐린 결정을 위해 수집하였다. 동물을 치사시키고, 이어서 다른 종점 결정을 위해 마지막 혈액 수집 및 조직 및 혈액 수확하였다.
OGTT 동안 취한 공복 혈액 글루코스 값 및 글루코스 측정치를 평균내고, 그래프화하였다 (캘리포니아주 라 졸라 소재의 그래프패드 프리즘, 그래프패드 소프트웨어). 곡선하 면적 (AUC)을 각각의 개별 동물에 대해 계산하였다. 혈장 인슐린 수준을 초감수성 인슐린 ELISA (뉴햄프셔주 세일럼 소재의 알프코)를 사용하여 결정하였다. HOMA-IR (항상성 모델 평가-인슐린 내성)을 하기 식을 사용하여 계산하였다: (FPI (μU/L) x FPG (mmol/L))/22.5, 여기서 FPI 및 FPG는 각각 공복 혈장 인슐린 및 공복 혈장 글루코스를 나타낸다. 인슐린 데이터는 또한 그래프패드 프리즘 포맷으로 나타내어졌다. 일원 ANOVA에 이어서 적절한 후검정을 사용하여 통계적 분석을 수행하였다. 유의성은 p < 0.05인 경우에 수용되었다. 데이터는 평균 및 S.E.M으로서 나타내어진다.
C57/Bl6J DIO 마우스에게의 7일 동안의 화합물 72 (100 mg/kg, PO)의 투여는 비히클 대조군과 비교하여 공복 혈액 글루코스 수준에서의 유의한 감소를 발생시켰다 (237.2 +/- 15.29 mg/dL에서 177.1 +/- 8.28 mg/dL로; 도 17A). OGTT 측정의 과정 동안, 화합물 72 처리된 동물은 비히클 대조군보다 훨씬 더 낮았다 (도 17B). OGTT로부터 계산된 AUC는 화합물 72 투여가 글루코스 변동에서의 유의한 감소를 발생시켰음을 나타내었다 (31511 +/- 1670에서 17055 +/- 769.1로; 도 17C). 동물 모델에 대해 양성 대조군으로서 사용된 로시글리타존은 공복 혈액 글루코스를 153.9 +/- 5.05 mg/dL로 및 글루코스 AUC를 11500 +/- 1104 유닛으로 감소시켰다.
혈장 인슐린 측정을 t = 0 및 t = 2시간에서 취한 샘플로부터 행하였으며, 도 18A에 제시된다. 인슐린은 t = 0 (비히클: 5.00 +/- 0.92, 100 mg/kg: 3.12 +/- 0.24, ng/mL) 및 t = 2시간 (비히클: 4.82 +/- 0.60, 100 mg/kg: 2.88 +/- 0.21 ng/mL) 둘 다에서 화합물 72로의 처리 후 감소되었다. HOMA-IR은 화합물 72 투여 후 유의하게 감소되었다 (비히클: 70.76 +/- 11.30, 100 mg/kg: 32.54 +/-3.37 유닛; 도 18B). 로시글리타존 (30 mg/kg)은 t = 0 및 t = 2시간에서 인슐린을 감소시키고 (각각 2.70 +/-0.12 및 2.30 +/- 0.06 ng/mL로), HOMA-IR을 유의하게 감소시켰다 (24.60 +/- 1.42 유닛으로).
실시예 11: 래트에서 코르티손 유도된 인슐린 저항성의 발생에 대한 화합물 72의 효과
6일 동안의 래트에게의 코르티손의 반복 투여는 체중에서의 유의한 감소를 유발하며, 이는 혈장 인슐린 및 글루코스에서의 유의한 상승과 연관된다. 이들 효과는 11-βHSD1 활성에 의해 생성된 코르티솔을 통해 매개된다. 글루코코르티코이드 수용체 길항제 예컨대 미페프리스톤은 인슐린 저항성에 대한 코르티솔의 효과를 호전시킨다. 이들 실험의 목표는 래트에서 코르티손-유도된 인슐린 저항성의 발생에 대한 화합물 72의 효과를 결정하는 것이었다.
동물에게 시험 화합물과 조합된 코르티손 (30 mg/kg sc qd)을 6일 동안 투여한 다음, 코르티손의 최종 용량 후 27시간째에 종결시켰다. 참조 표준물 (미페프리스톤)이 또한 포함되었다. 코르티손 21-아세테이트 (시그마 C-3130)를 레나에스씨아이(RenaSci)에 의해 공급하고, 미세 현탁액으로서 1% 메틸셀룰로스 중에 피하 경로를 통해 5 ml/kg의 용량 부피를 사용하여 투여하였다. 화합물 72 (물 중 10% 콜리포르 중 50 mg/kg)를 5 ml/kg의 용량 부피를 사용하여 경구 위관영양을 통해 QD 투여하였다. 미페프리스톤 (시그마 M8046)은 레나에스씨아이에 의해 제공되었다.
글루코스 및 인슐린 결정은 12시간 금식 후, 마지막 코르티손 용량 후 대략 27시간째에 취한 꼬리 정맥 혈액으로부터 수득된 혈장 샘플 상에서 수행하였다. 이어서, 동물을 치사시키고, 말단 (심장) 혈액 샘플을 혈장이 제조된 곳으로부터 취하였다.
34마리의 수컷 스프라그 돌리 래트 (체중 범위 200-250 g)를 영국 켄트주 마르게이트 소재의 찰스 리버로부터 주문하였다. 래트를 정상 명/암 주기 (점등: 07:00 - 19:00시) 상에서 표준 펠릿화 래트 식이 및 수돗물에 항상 자유롭게 접근가능하게 하면서 군 수용하였다. 동물을 이들 조건에서 실험 전 2주 동안 익숙해지도록 하였다. 후속적으로, 동물은 t=0시간 (07:00)에서 비히클로 1일 1회 투여되는 동안 3일 기준선 주기를 진행하였다. 이러한 절차는 연구에서 스트레스-관련 효과의 발생률을 감소시키는 것으로 밝혀진 바 있다. 모든 약물을 하기 표 2에 제시된 바와 같이 6일 동안 투여하였다. 체중을 07:00 (t=0 시간)에서 투여 시작 직전에 기록하였다. 코르티손을 피하 경로 (sc)를 통해 투여하면서, 화합물 72 및 미페프리스톤을 t=0 시간에서의 코르티손 투여 직후에 경구로, 위관영양을 통해 투여하였다.
<표 2>
Figure pct00145
투여 제6일에 22:30 (제7일 종결과 일치하도록 하는 시간)에 시작하여 래트를 12시간 동안 금식시켰다. 제7일에 래트에게 코르티손 (sc)이 아닌 비히클을 투여하고, 이어서 07:00에서 통상적으로 비히클/ 화합물 72/미페프리스톤을 경구 투여하였다. 제7일 10:30에서, 코르티손의 최종 용량 후 27시간째에, 혈액 샘플 (300 μl)을 외측 꼬리 정맥으로부터 EDTA (사르스테트(Sarstedt) 16.444)를 함유하는 튜브로 취하였다. 혈액을 원심분리하고, 생성된 혈장 분취물을 -75℃에서 저장하였다. 동물을 CO2 질식에 의해 안락사시키고, 경추 탈구하였다. 말단 혈액 (대략 10 ml)을 EDTA (사르스테트 5 ml 32.332)를 함유하는 튜브로 심장 천자에 의해 수집한 다음, 원심분리하고, 혈장을 -75℃에서 저장하였다. 꼬리 정맥 혈장을 상업용 임상 시약 (써모일렉트론 인피니티(Thermoelectron Infinity) 글루코스 시약 (TR15421))을 사용하여 글루코스 (n=2)에 대해 및 메르코디아(Mercodia) 초감수성 래트 인슐린 래트 ELISA (10-1251-10)를 사용하여 인슐린 (n=1)에 대해 분석하였다.
혈장 글루코스 및 인슐린을 강건한 회귀 또는 일반적 선형 모델에 의해 처리를 인자로서 및 출혈 순서 및 기준선 체중을 공변량으로서 사용하여 분석하였다. 적절한 경우에 로그 변환을 사용하였다. 비히클 군 및 코르티손 군으로부터의 유의한 차이를 결정하기 위해 적절한 다중 비교 시험 (양측)을 사용하였다. P<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.
래트에게의 화합물 72의 투여는 코르티손 투여 처리에 의해 유발된 혈장 글루코스 및 인슐린에서의 증가를 유의하게 감소시켰다. 혈장 글루코스 수준은 코르티손으로의 처리 후 6.28 +/- 0.30 mM에서 10.17 +/- 0.51 mM로 증가되었으며, 이는 화합물 72 (50 mg/kg)에 의해 8.55 +/- 0.3 mM (p < 0.01; 평균 및 S.E.M)로 유의하게 감소되었다. 혈장 인슐린 수준은 코르티손 처리 시 0.70 +/- 0.11ng/mL에서 8.19 +/- 0.91ng/mL로 증가되었으며, 이는 화합물 72 (50 mg/kg)에 의해 5.24 +/- 1.11ng/mL로 감소되었다 (p < 0.05; 평균 및 S.E.M으로서 나타내어진 데이터; 도 19). 동물 모델에 대해 양성 대조군으로서 사용된 미페프리스톤은 혈장 글루코스 및 혈장 인슐린을 각각 7.43 +/- 0.27 ng/mL 및 3.62 +/- 0.29 ng/mL로 유의하게 감소시켰다.
HOMA-IR 값은 화합물 9에 기재된 바와 같이 계산되었으며, 데이터는 도 20에 제시된다. 코르티손 처리는 비히클: 비히클 대조군 (5.27 +/- 1.04 유닛)과 비교하여 HOMA-IR을 95.57 +/- 11.4 유닛으로 증가시켰다. 화합물 72 (50 mg/kg) 및 미페프리스톤의 투여는 인슐린 내성 래트에서 HOMA-IR 값을 각각 56.94 +/- 11.18 유닛 및 29.99 +/- 2.54 유닛으로 유의하게 감소시켰다.
실시예 12: 화합물 9 및 화합물 72의 약동학적 (PK) 분석
수컷 ICR 마우스 (30 - 40 g 체중, 찰스 리버 래보러토리즈)를 각각의 실험 군에 대해 n = 3 마우스를 실험에 사용하였다 (연구에 대해 총 27마리 마우스). 마우스에게 Cry 조정제 화합물 9 또는 화합물 72 (50 mg/kg, P.O; 용량 부피 5 ml/kg, 10% 콜리포르 중)를 투여하였다. 투여 후 하기 시점에서 혈액 및 간 조직을 수집하였다: 15, 30, 60, 90분, 3, 6, 12 및 24시간. 동물의 대조군 (T0)을 또한 샘플링하였다. 동물을 CO2로 안락사시키고, 혈액을 심장으로부터 심장 천자를 사용하여 수집하여, EDTA 튜브로 옮긴 다음, 5400 rpm에서 4℃에서 5분 동안 원심분리하였다. 생성된 혈장을 드라이 아이스를 사용하여 동결시킨 다음, 검정을 위해 준비될 때까지 -80℃에서 저장하였다. 간 조직을 각각의 동물로부터 제거하고, 0.5g을 에펜도르프에 수집하고, 동결시키고, 약동학적 측정에 적용하였다. 각각의 동물로부터의 혈장 및 간 조직을 화합물 수준의 측정을 위해, LC/MS/MS를 사용하며 혈장 및 간 둘 다에서 공지된 화합물 양의 표준 곡선과 비교하여 CRO에 적용하였다. 미가공 데이터는 PK 파라미터 (Cmax, Tmax, 제거 t1/2, MRT (평균 체류 시간), AUC (곡선하 면적) - (0- 마지막 및 % 외삽)에 대해 윈논린(WinNonLin)을 사용하여 분석하였다.
수컷 SD 래트 (250-300 g 체중, 찰스 리버 래보러토리즈)를 각각의 실험 군에 대해 n = 4 마우스를 실험에 사용하였다. 래트에게 화합물 72 (50 mg/kg, P.O; 용량 부피 5 ml/kg, 10% 콜리포르 중)를 투여하였다. 투여 후 하기 시점에서 혈액을 수집하였다: 15, 30, 60, 90분, 3, 6, 12 및 24시간. 투여전 샘플을 또한 수집하였다. 리셋(Reset)에 전달 전에 찰스 리버에서의 기술 스태프에 의해 동물에게 캐뉼라를 삽입하였다. 전혈 (0.3ml)을 각각의 시점에 우측 통상 경정맥에서의 캐뉼라로부터 수집하였다. 전혈을 EDTA 튜브로 옮긴 다음, 5400 rpm에서 4℃에서 5분 동안 원심분리하였다. 생성된 혈장을 드라이 아이스를 사용하여 동결시킨 다음, 검정을 위해 준비될 때까지 -80℃에서 저장하였다. 0.9% 염화나트륨 (0.3ml)을 각각의 혈액 채취 후 유체 보충을 위해 투여하였다. 나트륨 헤파린 (500IU/ml) 0.1ml를 12시간 시점 후에 잠금 용액으로서 사용하였다. 샘플을 상기 기재된 바와 같이 평가하였다. 표 3 및 4는 상기 분석으로부터의 결과를 요약한다.
<표 3> 화합물 9 및 화합물 72의 PK 파라미터
Figure pct00146
*평균 및 S.E.M으로서 제시된 4회의 실험으로부터의 데이터를 나타냄.
<표 4> 미결합 노출 데이터
Figure pct00147
*평균 및 S.E.M으로서 제시된 4회의 실험으로부터의 데이터를 나타냄.
실시예 13: 식이-유발 비만 마우스 모델에서의 화합물 72의 증가하는 투여량의 효과
화합물 72의 효과는 제II형 당뇨병의 식이-유발 비만 (DIO) 마우스 모델에서 증가하는 용량에 대해 평가하였다.
수컷 C57/Bl6J DIO 마우스를 더 잭슨 래보러토리 (캘리포니아주 사크라멘토)로부터 입수하였다. 마우스를 정상 명/암 주기 (점등: 07:00 - 19:00시) 상에서 고지방 식이 (D12492 (60kcal% 지방), 리서치 다이어츠, 인크.) 및 물에 자유롭게 접근가능하게 하면서 군 수용하였다. 동물을 이들 조건에서 실험 전 적어도 2주 동안 익숙해지도록 하고, 대략 26주령에서 사용하였다. 마우스에게 비히클 (10% 콜리포르, 시그마-알드리치), 화합물 72 (물 중 10% 콜리포르 중 10, 30 또는 100 mg/kg) 또는 로시글리타존 (물 중 10% 콜리포르 중 30 mg/kg)을 5ml/kg의 용량 부피로, QD, 경구 위관영양을 통해, ZT0 (7:00am)에서 7일 동안 투여하였다. 바람직한 실험 방법은 실시예 10에 상술된 것들과 동일하였다.
C57/Bl6J DIO 마우스에게의 7일 동안의 상승 용량에서의 화합물 72의 투여는 100 mg/kg에서 유의성에 도달하는 비히클 대조군과 비교하여 금식 혈액 글루코스 수준에서의 감소를 발생시켰다 (비히클 대조군: 226.9 +/- 13.11 mg/dL, 10 mg/kg: 206.8 +/- 8.36 mg/dL, 30 mg/kg: 197.5 +/- 12.06 mg/dL, 100 mg/kg: 176.3 +/- 7.83 mg/dL, 도 22A). OGTT 측정의 과정 동안, 화합물 72 처리된 동물은 글루코스 로드 후 글루코스 변동에서의 감소를 입증하였다 (도 22B). OGTT로부터 계산된 곡선하 면적은 화합물 72 투여가 글루코스 AUC를 감소시켜, 30 및 100 mg/kg에서의 유의성을 입증하였음을 나타내었다 (비히클: 26090 +/- 1917, 10 mg/kg: 22563 +/- 1224, 30 mg/kg: 19033 +/- 1934, 100 mg/kg: 19502 +/- 2404 유닛; 도 22C). 동물 모델에 대해 양성 대조군으로서 사용된 로시글리타존은 금식 혈액 글루코스 (226.9 +/- 13.11에서 161.1 +/- 8.06 mg/dL; 도 22A), 및 글루코스 AUC (26090 +/- 1917에서 9858 +/- 1281 유닛; 도 22C)를 유의하게 억제하였다.

Claims (55)

  1. 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
    <화학식 I>
    Figure pct00148

    여기서
    각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q는 독립적으로 N 또는 C이고;
    각각의 R1 및 R2는, A, D, E, G, J, L, M, 또는 Q가 C인 경우에, 독립적으로 H, 할로, 시아노, 니트로, -CF3, -CHF2, -CH2F, 트리플루오로메톡시, 아지도, 히드록실, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R8, -(C=O)-O-R8, -O-(C=O)-R8, -NR8(C=O)-R10, -(C=O)-NR8R9, -NR8R9, -NR8OR9, -S(O)cNR8R9, -S(O)d(C1-C8)알킬, -O-SO2-R8, NR8-S(O)c, -(CR8R9)d(3-10)-원 시클로알킬, -(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(C6-C10)아릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    각각의 R3 및 R5는 독립적으로 H, 시아노, -CF3, -CHF2, -CH2F, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R8, -(C=O)-O-R8, -(C=O)-NR8R9, -S(O)cNR8R9, -S(O)d(C1-C8)알킬, -(CR8R9)d(3-10)-원 시클로알킬, -(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(C6-C10)아릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    여기서 각각의 R3 기는 4-12원 모노- 또는 비시클릭 고리로서 서로에 임의로 연결되고;
    여기서 각각의 R5 기는 4-12원 모노- 또는 비시클릭 고리로서 서로에 임의로 연결되고;
    R4는 H, -CF3, -CHF2, -CH2F, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R8, -(C=O)-O-R8, -(C=O)-NR8R9, -(CR8R9)d(3-10)-원 시클로알킬, -(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(C6-C10)아릴, -(CR8R9)f(C=O)(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(C6-C10)아릴, -(CR8R9)eO(CR8R9)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR8R9)fS(O)d(CR8R9)e(4-10)-원 헤테로시클릴이고;
    여기서 R6 및 R7은 4-12원 모노- 또는 비시클릭 고리로서 서로에 연결되고;
    각각의 R8, R9 및 R10은 독립적으로 H, (C1-C6)알킬, -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)g(C6-C10)아릴, 및 -(CR11R12)g(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    상기 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, 및 R16의 (C1-C6)알킬, (3-10)-원 시클로알킬, (C6-C10)아릴 및 (4-10)-원 헤테로시클릴의 임의의 탄소 원자는 독립적으로 할로, 시아노, 니트로, -CF3, -CHF2, -CH2F, 트리플루오로메톡시, 아지도, 히드록실, -O-R15, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R11, -(C=O)-R15, -(C=O)-O-R11, -(C=O)-O-R15, -O-(C=O)-R11, -O-(C=O)-R15, -NR11(C=O)-R13, -(C=O)-NR11R12, -(C=O)-NR11R15, -NR11R12, -NR11R15, -NR11OR12, -NR11OR15, -S(O)cNR11R12, -S(O)cNR11R15, -S(O)d(C1-C6)알킬, -S(O)dR15, -O-SO2-R11, -O-SO2-R15, -NR11-S(O)c, -NR15-S(O)c, -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)e(C6-C10)아릴, -(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(C6-C10)아릴, -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)eO(CR11R12)f(C6-C10)아릴, -(CR11R12)eO(CR11R12)f(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)fS(O)d(CR11R12)e(C6-C10)아릴, 및 -(CR11R12)fS(O)d(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴로부터 각각 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R14 치환기로 임의로 치환되고;
    상기 R14의 (C1-C6)알킬, (3-10)-원 시클로알킬, (C6-C10)아릴 및 (4-10)-원 헤테로시클릴의 임의의 탄소 원자는 독립적으로 할로, 시아노, 니트로, -CF3, -CHF2, -CH2F, 트리플루오로메톡시, 아지도, (CH2)eOH, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R11, -(C=O)-R15, -(C=O)-O-R11, -(C=O)-O-R15, -O-(C=O)-R11, -O-(C=O)-R15, -NR11(C=O)-R13, -(C=O)-NR11R12, -NR11R12, 및 -NR11R15로부터 각각 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R16 치환기로 임의로 치환되고;
    상기 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R14, 및 R15의 (4-10)-원 헤테로시클릴의 임의의 질소 원자는 독립적으로 (C1-C6)알킬, (C2-C6)알케닐, (C2-C6)알키닐, -(C=O)-R11, -(C=O)-O-R11, -(C=O)-NR11R12, -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)e(C6-C10)아릴, -(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴, -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(C6-C10)아릴, 또는 -(CR11R12)f(C=O)(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴로 임의로 치환되고;
    각각의 R11, R12, 및 R13은 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬이고;
    R15는 -(CR11R12)e(3-10)-원 시클로알킬, -(CR11R12)e(C6-C10)아릴, 또는 -(CR11R12)e(4-10)-원 헤테로시클릴이고;
    a 및 b는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 또는 4이고;
    c는 1 또는 2이고;
    d는 0, 1, 또는 2이고;
    e, f, 및 g는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이다.
  2. 제1항에 있어서, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q가 C이고; 각각의 R1 및 R2가 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4가 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5가 H이고; R6 및 R7이 4-12원 모노- 또는 비시클릭 아미드 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f가 본원에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
  3. 제1항에 있어서, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q가 C이고; 각각의 R1 및 R2가 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4가 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5가 H이고; R6 및 R7이 4-12원 모노- 또는 비시클릭 우레아 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f가 본원에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
  4. 제1항에 있어서, 화합물이 C-3에서 (R)-배위를 보유하는 단일 거울상이성질체이며, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q가 C이고; 각각의 R1 및 R2가 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4가 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5가 H이고; R6 및 R7이 4-12원 모노- 또는 비시클릭 아미드 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f가 본원에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
  5. 제1항에 있어서, 화합물이 C-3에서 (R)-배위를 보유하는 단일 거울상이성질체이며, 각각의 A, D, E, G, J, L, M, 및 Q가 C이고; 각각의 R1 및 R2가 독립적으로 H 또는 할로로부터 선택되고; R4가 H 또는 (C1-C6)알킬이고, R3 및 R5가 H이고; R6 및 R7이 4-12원 모노- 또는 비시클릭 우레아 고리로서 서로에 연결되고; R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, a, b, c, d, e, 및 f가 본원에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
  6. 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물:
    1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온
    2-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온
    1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)이미다졸리딘-2-온
    (1R,4S)-2-((R)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온
    (R)-1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)이미다졸리딘-2-온
    (R)-1-((R)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온
    (S)-1-((S)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시-2-메틸프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온
    (R)-1-((R)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-4-메틸이미다졸리딘-2-온;
    또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
  7. 제6항에 있어서, 1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  8. 제6항에 있어서, 2-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
  9. 제6항에 있어서, 1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)이미다졸리딘-2-온인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
  10. 제6항에 있어서, (1R,4S)-2-((R)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-온인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
  11. 제6항에 있어서, (R)-1-(3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)이미다졸리딘-2-온인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
  12. 제6항에 있어서, (R)-1-((R)-3-(3,6-디플루오로-9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
  13. 제6항에 있어서, (S)-1-((S)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시-2-메틸프로필)-3-플루오로피롤리딘-2-온인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
  14. 제6항에 있어서, (R)-1-((R)-3-(9H-카르바졸-9-일)-2-히드록시프로필)-4-메틸이미다졸리딘-2-온인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
  15. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 Cry1 또는 Cry2를 조정하는 것인 화합물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 조정이
    (i) Cry1 또는 Cry2에 결합시키는 것;
    (ii) Cry1 또는 Cry2의 변형을 억제하는 것;
    (iii) Cry1 또는 Cry2 국재화를 변경시키는 것;
    (iv) Cry1 또는 Cry2 안정화를 증가 또는 감소시키는 것;
    (v) 표적에 대한 Cry1 또는 Cry2 사이의 결합을 증가 또는 감소시키는 것;
    (vi) Cry1 또는 Cry2 활성을 증가 또는 감소시키는 것; 및
    (vii) Cry1 또는 Cry2 표적의 활성을 증가 또는 감소시키는 것
    중 어느 하나를 포함하는 것인 화합물.
  17. 제16항에 있어서, 상기 표적이 Per1, Per2, 글루코코르티코이드 수용체 (GR), CLOCK, BMAL1, 또는 CLOCK-BMAL1 프로모터 서열인 화합물.
  18. 제1항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물, 및 제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 1종 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 1종 이상의 추가의 치료제가 DPP-IV 억제제, SGLT2 억제제, 메트포르민 및 술포닐우레아로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 제약 조성물.
  21. 제19항에 있어서, 상기 1종 이상의 추가의 치료제가 시그니포르(Signifor)®, 케토코나졸, 메티라폰, 미토탄, 에토미데이트, 코르림(Korlym)®, 표피 성장 인자 수용체 억제제, 알도스테론 신타제/11β-히드록실라제 억제제 LCI699 및 레보케토코나졸 (COR-003)로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 제약 조성물.
  22. 대상체에게 치료 유효량의 제18항에 따른 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법.
  23. 대상체에게 치료 유효량의 제18항에 따른 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애의 증상을 완화시키는 방법.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, Cry-매개 질환 또는 장애가 당뇨병, 당뇨병, 당뇨병성 합병증 예컨대 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 신병증, 백내장 형성, 녹내장, 당뇨병성 혈관병증, 아테롬성동맥경화증; 비알콜성 지방간염 (NASH); 비-알콜성 지방간 질환 (NAFLD); 천식; 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 대사 증후군; 인슐린 저항성 증후군; 비만; 녹내장; 쿠싱 증후군; 정신병적 우울증; 알츠하이머병; 신경병증성 통증; 약물 남용; 골다공증; 암; 황반 변성; 및 근병증으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  25. 제22항 또는 제23항에 있어서, 대상체에게 1종 이상의 추가의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 1종 이상의 추가의 치료제가 DPP-IV 억제제, SGLT2 억제제, 메트포르민 및 술포닐우레아로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  27. 제25항에 있어서, 상기 1종 이상의 추가의 치료제가 시그니포르®, 케토코나졸, 메티라폰, 미토탄, 에토미데이트, 코르림®, 표피 성장 인자 수용체 억제제, 알도스테론 신타제/11β-히드록실라제 억제제 LCI699 및 레보케토코나졸 (COR-003)로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  28. 제1 기간에서의 대상체로부터의 제1 샘플에서 1종 이상의 크립토크롬 또는 크립토크롬-조절 유전자의 유효량을 측정하는 것;
    제2 기간에서의 대상체로부터의 제2 샘플에서 1종 이상의 크립토크롬 또는 크립토크롬-조절 유전자의 유효량을 측정하는 것; 및
    제1 샘플에서 검출된 1종 이상의 크립토크롬 또는 크립토크롬-조절 유전자의 양을 제2 샘플에서 검출된 1종 이상의 크립토크롬 또는 크립토크롬-조절 유전자의 양, 또는 참조 값과 비교하는 것
    을 포함하는, 대상체에서 Cry-매개 질환 또는 장애의 진행 또는 예후를 모니터링하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 1종 이상의 크립토크롬-조절 유전자가 Dbp, Rev-erb 알파, Rev-erb 베타, Ror 알파, Ror 베타, Ror 감마, Per1, Per2, Per3, Cry1, Cry2, Pck1, G6Pc, Avp, Vip, Cck, SP (물질 P), AA-Nat, PK2 (프로키네티신 2), c-Myc, MyoD 및 Nampt로 이루어진 군으로부터 선택된, E-박스 서열을 그의 프로모터 내에 함유하는 유전자인 방법.
  30. 제28항에 있어서, 모니터링이 대상체에서의 Cry-매개 질환 또는 장애의 발생 위험의 변화를 평가하는 것을 포함하는 것인 방법.
  31. 제28항에 있어서, 대상체가 이전에 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 치료받은 바 있는 대상체, 이전에 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 치료받은 바 없는 대상체, 또는 이전에 Cry-매개 질환 또는 장애로 진단받은 바 없는 대상체를 포함하는 것인 방법.
  32. 제28항에 있어서, 샘플이 전혈, 혈청, 혈장, 혈액 세포, 내피 세포, 조직 생검, 림프액, 복수액, 간질액, 골수, 뇌척수액 (CSF), 정액, 타액, 점액, 객담, 땀 또는 소변인 방법.
  33. 제28항에 있어서, 제1 샘플이 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 치료하기 전에 대상체로부터 채취된 것인 방법.
  34. 제28항에 있어서, 제2 샘플이 Cry-매개 질환 또는 장애에 대해 치료한 후에 대상체로부터 채취된 것인 방법.
  35. 제28항에 있어서, 대상체가 제18항의 제약 조성물로 치료되는 것인 방법.
  36. 제28항에 있어서, 모니터링이 대상체에 대한 치료를 선택하는 것 및/또는 Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 치료의 유효성을 모니터링하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
  37. 제36항에 있어서, Cry-매개 질환 또는 장애에 대한 치료가 외과적 개입, 제18항의 제약 조성물을 단독으로 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 투여하는 것, 제18항의 제약 조성물을 단독으로 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 투여한 후의 또는 그 전의 외과적 개입, 또는 추가 조치를 취하지 않는 것을 포함하는 것인 방법.
  38. 제28항에 있어서, 참조 값이 지수 값, 1종 이상의 Cry-매개 질환 또는 장애 위험 예측 알고리즘으로부터 유도된 값, Cry-매개 질환 또는 장애를 앓지 않는 대상체로부터 유도된 값, 또는 Cry-매개 질환 또는 장애로 진단된 대상체로부터 유도된 값을 포함하는 것인 방법.
  39. 제28항에 있어서, 측정이 1종 이상의 크립토크롬의 존재 또는 부재를 검출하는 것, 1종 이상의 크립토크롬의 양을 정량분석하는 것, 1종 이상의 크립토크롬의 유형을 정성분석하는 것, 및 표적에 결합하는 1종 이상의 크립토크롬의 능력을 평가하는 것을 포함하는 것인 방법.
  40. 제39항에 있어서, 표적이 Per1, Per2, 글루코코르티코이드 수용체 (GR) 또는 CLOCK-BMAL1 프로모터 서열인 방법.
  41. 제28항에 있어서, Cry-매개 질환 또는 장애가 당뇨병, 당뇨병성 합병증 예컨대 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 신병증, 백내장 형성, 녹내장, 당뇨병성 혈관병증, 아테롬성동맥경화증; 비알콜성 지방간염 (NASH); 비-알콜성 지방간 질환 (NAFLD); 천식; 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 대사 증후군; 인슐린 저항성 증후군; 비만; 녹내장; 쿠싱 증후군; 정신병적 우울증; 알츠하이머병; 신경병증성 통증; 약물 남용; 골다공증; 암; 황반 변성; 및 근병증으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  42. 제1항에 있어서, A, D, E, G, J, L, M, 및 Q가 탄소인 화합물.
  43. 제1항에 있어서, R1 및 R2가 수소인 화합물.
  44. 제1항에 있어서, R1 및 R2가 플루오린이고, a 및 b가 1인 화합물.
  45. 제1항에 있어서, R3 및 R5가 수소인 화합물.
  46. 제1항에 있어서, R3, R4, 및 R5가 수소인 화합물.
  47. 제1항에 있어서, R6 및 R7이 연결되어 임의로 치환된 모노시클릭 고리를 형성하는 것인 화합물.
  48. 제1항에 있어서, R6 및 R7이 연결되어 임의로 치환된 융합된 비시클릭 고리를 형성하는 것인 화합물.
  49. 제1항에 있어서, R6 및 R7이 연결되어 임의로 치환된 가교된 비시클릭 고리를 형성하는 것인 화합물.
  50. 제1항에 있어서, R6 및 R7이 연결되어 임의로 치환된 스피로 비시클릭 고리를 형성하는 것인 화합물.
  51. 제1항에 있어서, R6 및 R7이 연결되어 임의로 치환된 피롤리디논 고리를 형성하는 것인 화합물.
  52. 제1항에 있어서, R6 및 R7이 연결되어 임의로 치환된 이미다졸리디논 고리를 형성하는 것인 화합물.
  53. 제1항에 있어서, R6 및 R7이 연결되어 임의로 치환된 피페리디논 고리를 형성하는 것인 화합물.
  54. 제1항에 있어서, R6 및 R7이 연결되어 임의로 치환된 피리미디논 고리를 형성하는 것인 화합물.
  55. 제48항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, R6 및 R7에 의해 형성된 고리가 플루오린, 메틸 기, 에틸 기, 이소프로필 기, C3-6 시클로알칸, 또는 페닐 기로 독점적으로 치환된 것인 화합물.
KR1020167030709A 2014-04-07 2015-04-06 크립토크롬 조정제로서의 카르바졸-함유 아미드, 카르바메이트, 및 우레아 KR102224423B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461976350P 2014-04-07 2014-04-07
US61/976,350 2014-04-07
PCT/US2015/024537 WO2015157182A1 (en) 2014-04-07 2015-04-06 Carbazole-containing amides, carbamates, and ureas as cryptochrome modulators

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160140909A true KR20160140909A (ko) 2016-12-07
KR102224423B1 KR102224423B1 (ko) 2021-03-05

Family

ID=53008857

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167030709A KR102224423B1 (ko) 2014-04-07 2015-04-06 크립토크롬 조정제로서의 카르바졸-함유 아미드, 카르바메이트, 및 우레아

Country Status (22)

Country Link
US (5) US10005759B2 (ko)
EP (2) EP3129366B1 (ko)
JP (4) JP6601916B2 (ko)
KR (1) KR102224423B1 (ko)
CN (2) CN106458891B (ko)
AR (1) AR099970A1 (ko)
AU (1) AU2015244060B2 (ko)
CA (1) CA2944074C (ko)
DK (1) DK3129366T3 (ko)
ES (1) ES2886469T3 (ko)
HR (1) HRP20211372T1 (ko)
HU (1) HUE055547T2 (ko)
IL (1) IL248240B (ko)
LT (1) LT3129366T (ko)
MX (1) MX371096B (ko)
NZ (1) NZ724683A (ko)
PL (1) PL3129366T3 (ko)
RU (1) RU2705094C2 (ko)
SG (1) SG11201608020YA (ko)
SI (1) SI3129366T1 (ko)
TW (1) TWI690521B (ko)
WO (1) WO2015157182A1 (ko)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201407402TA (en) * 2012-05-11 2014-12-30 Reset Therapeutics Inc Carbazole-containing sulfonamides as cryptochrome modulators
TWI690521B (zh) 2014-04-07 2020-04-11 美商同步製藥公司 作為隱花色素調節劑之含有咔唑之醯胺類、胺基甲酸酯類及脲類
WO2018013546A1 (en) * 2016-07-11 2018-01-18 The Regents Of The University Of California Bic inhibitor of cry-cry and cry-cib oligomerization/clustering
US10906905B2 (en) 2016-10-14 2021-02-02 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Five-membered heteroaryl ring bridged ring derivative, preparation method therefor and medical use thereof
JP6835308B2 (ja) * 2016-10-19 2021-02-24 国立研究開発法人理化学研究所 クリプトクロムの機能を抑制するための組成物
WO2018175443A1 (en) * 2017-03-20 2018-09-27 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Targeted gene therapies for pain and other neuro-related disorders
CN112105609A (zh) * 2018-03-22 2020-12-18 奥瑞基尼探索技术有限公司 作为prmt5抑制剂的取代的咪唑烷-2-酮衍生物
US20210349103A1 (en) * 2018-06-18 2021-11-11 Duke University Metabolic biomarkers of nafld/nash and related disease phenotypes and methods of using same
CA3121202A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Nuvation Bio Inc. Pyrrole and pyrazole compounds and methods of use thereof
CN111285793B (zh) * 2019-03-01 2022-04-22 广州中医药大学(广州中医药研究院) 氟取代双分子咔唑衍生物、其制备方法及应用
CN111217741B (zh) * 2019-03-01 2022-03-15 广东省中医院（广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院） 氟取代单咔唑类衍生物、其制备方法及应用
KR20210135278A (ko) 2019-03-04 2021-11-12 스트롱브릿지 더블린 리미티드 레보케토코나졸로 질환을 치료하는 방법
US20220296604A1 (en) * 2019-08-08 2022-09-22 New York University Indole compounds as modulators of rage activity and uses thereof
CN112162028A (zh) * 2020-09-29 2021-01-01 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 一种用于草莓组织中维生素c的质谱成像方法
GB202106143D0 (en) * 2021-04-29 2021-06-16 Adaptive Diagnostics Ltd Determination of the presence of a target species
CN112986451B (zh) * 2021-05-06 2022-05-17 湖南师范大学 一种基于风味特征的杂交鱼类肉品质评价方法
CN113461674B (zh) * 2021-08-09 2022-05-13 山东农业大学 一种促进植物根系生长的酰胺类化合物及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003105759A2 (en) * 2002-06-12 2003-12-24 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Pharmacologic inhibition of myc function
WO2014039515A2 (en) * 2012-09-04 2014-03-13 University Of Massachusetts Antifungal agents and uses thereof

Family Cites Families (104)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4302386A (en) 1978-08-25 1981-11-24 The Ohio State University Antigenic modification of polypeptides
US4105776A (en) 1976-06-21 1978-08-08 E. R. Squibb & Sons, Inc. Proline derivatives and related compounds
CA1178414A (en) 1978-02-08 1984-11-27 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha (Trading Under The Name Of Toyobo Co., Ltd.) Packaging material having excellent seal packaging property
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4233402A (en) 1978-04-05 1980-11-11 Syva Company Reagents and method employing channeling
US4325952A (en) 1978-04-18 1982-04-20 Aziende Chimiche Riunite Angelini Francesco Method of treating abstinence syndrome with cycloaklyltriazoles
US4316906A (en) 1978-08-11 1982-02-23 E. R. Squibb & Sons, Inc. Mercaptoacyl derivatives of substituted prolines
IL58849A (en) 1978-12-11 1983-03-31 Merck & Co Inc Carboxyalkyl dipeptides and derivatives thereof,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US4276890A (en) 1979-04-11 1981-07-07 Fichera Anthony T Tobacco smoking inhibitor
US4231938A (en) 1979-06-15 1980-11-04 Merck & Co., Inc. Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation
US4508729A (en) 1979-12-07 1985-04-02 Adir Substituted iminodiacids, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US4444784A (en) 1980-08-05 1984-04-24 Merck & Co., Inc. Antihypercholesterolemic compounds
DK149080C (da) 1980-06-06 1986-07-28 Sankyo Co Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af ml-236b-carboxylsyre
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4344949A (en) 1980-10-03 1982-08-17 Warner-Lambert Company Substituted acyl derivatives of 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acids
ZA817261B (en) 1980-10-23 1982-09-29 Schering Corp Carboxyalkyl dipeptides,processes for their production and pharmaceutical compositions containing them
US4337201A (en) 1980-12-04 1982-06-29 E. R. Squibb & Sons, Inc. Phosphinylalkanoyl substituted prolines
US4410520A (en) 1981-11-09 1983-10-18 Ciba-Geigy Corporation 3-Amino-[1]-benzazepin-2-one-1-alkanoic acids
GB2128984B (en) 1982-05-12 1985-05-22 Hoffmann La Roche Diaza-bicyclic compounds
US4659678A (en) 1982-09-29 1987-04-21 Serono Diagnostics Limited Immunoassay of antigens
US4739073A (en) 1983-11-04 1988-04-19 Sandoz Pharmaceuticals Corp. Intermediates in the synthesis of indole analogs of mevalonolactone and derivatives thereof
US4727022A (en) 1984-03-14 1988-02-23 Syntex (U.S.A.) Inc. Methods for modulating ligand-receptor interactions and their application
US4780401A (en) 1984-04-09 1988-10-25 Ciba-Geigy Corporation Novel monoclonal antibodies to human renin and hybridoma cells, processes for their preparation and their applications
US4845079A (en) 1985-01-23 1989-07-04 Luly Jay R Peptidylaminodiols
US5066643A (en) 1985-02-19 1991-11-19 Sandoz Ltd. Fluorine and chlorine statine or statone containing peptides and method of use
US4894437A (en) 1985-11-15 1990-01-16 The Upjohn Company Novel renin inhibiting polypeptide analogs containing S-aryl-D- or L- or DL-cysteinyl, 3-(arylthio)lactic acid or 3-(arylthio)alkyl moieties
US4885292A (en) 1986-02-03 1989-12-05 E. R. Squibb & Sons, Inc. N-heterocyclic alcohol renin inhibitors
US4816463A (en) 1986-04-01 1989-03-28 Warner-Lambert Company Substituted diimidazo [1,5-a: 4',5'-d]pyridines having antihypertensive activity
CA1334092C (en) 1986-07-11 1995-01-24 David John Carini Angiotensin ii receptor blocking imidazoles
US4772684A (en) 1987-01-20 1988-09-20 Triton Biosciences, Inc. Peptides affecting blood pressure regulation
US4786653A (en) 1987-08-24 1988-11-22 Golwyn Daniel H Treatment of neurotransmitter-linked drug abuse
US5089471A (en) 1987-10-01 1992-02-18 G. D. Searle & Co. Peptidyl beta-aminoacyl aminodiol carbamates as anti-hypertensive agents
US4980283A (en) 1987-10-01 1990-12-25 Merck & Co., Inc. Renin-inhibitory pepstatin phenyl derivatives
US5034512A (en) 1987-10-22 1991-07-23 Warner-Lambert Company Branched backbone renin inhibitors
US5063207A (en) 1987-10-26 1991-11-05 Warner-Lambert Company Renin inhibitors, method for using them, and compositions containing them
US5055466A (en) 1987-11-23 1991-10-08 E. R. Squibb & Sons, Inc. N-morpholino derivatives and their use as anti-hypertensive agents
US5081127A (en) 1988-01-07 1992-01-14 E. I. Du Pont De Nemours And Company Substituted 1,2,3-triazole angiotensin II antagonists
US5036054A (en) 1988-02-11 1991-07-30 Warner-Lambert Company Renin inhibitors containing alpha-heteroatom amino acids
US4788189A (en) 1988-02-29 1988-11-29 Glazer Howard I Method to treat smoking withdrawal symptoms by potentiated central noradrenergic blocking
US5036053A (en) 1988-05-27 1991-07-30 Warner-Lambert Company Diol-containing renin inhibitors
DE3841520A1 (de) 1988-12-09 1990-06-13 Hoechst Ag Enzymhemmende harnstoffderivate von dipeptiden, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende mittel und ihre verwendung
US5106835A (en) 1988-12-27 1992-04-21 American Cyanamid Company Renin inhibitors
DE4004820A1 (de) 1989-08-05 1991-04-25 Bayer Ag Renininhibitoren, verfahren zur herstellung und ihre verwendung in arzneimitteln
US5064825A (en) 1989-06-01 1991-11-12 Merck & Co., Inc. Angiotensin ii antagonists
US5744101A (en) 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
FI94339C (fi) 1989-07-21 1995-08-25 Warner Lambert Co Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen /R-(R*,R*)/-2-(4-fluorifenyyli)- , -dihydroksi-5-(1-metyylietyyli)-3-fenyyli-4-/(fenyyliamino)karbonyyli/-1H-pyrroli-1-heptaanihapon ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi
US5063208A (en) 1989-07-26 1991-11-05 Abbott Laboratories Peptidyl aminodiol renin inhibitors
US5098924A (en) 1989-09-15 1992-03-24 E. R. Squibb & Sons, Inc. Diol sulfonamide and sulfinyl renin inhibitors
US5104869A (en) 1989-10-11 1992-04-14 American Cyanamid Company Renin inhibitors
US5114937A (en) 1989-11-28 1992-05-19 Warner-Lambert Company Renin inhibiting nonpeptides
US5073566A (en) 1989-11-30 1991-12-17 Eli Lilly And Company Angiotensin ii antagonist 1,3-imidazoles and use thereas
US5750015A (en) 1990-02-28 1998-05-12 Soane Biosciences Method and device for moving molecules by the application of a plurality of electrical fields
US5095119A (en) 1990-03-08 1992-03-10 American Home Products Corporation Renin inhibitors
US5064965A (en) 1990-03-08 1991-11-12 American Home Products Corporation Renin inhibitors
US5075451A (en) 1990-03-08 1991-12-24 American Home Products Corporation Pyrrolimidazolones useful as renin inhibitors
US5085992A (en) 1990-07-19 1992-02-04 Merck & Co., Inc. Microbial transformation process for antihypertensive products
US5087634A (en) 1990-10-31 1992-02-11 G. D. Searle & Co. N-substituted imidazol-2-one compounds for treatment of circulatory disorders
US5071837A (en) 1990-11-28 1991-12-10 Warner-Lambert Company Novel renin inhibiting peptides
US5604260A (en) 1992-12-11 1997-02-18 Merck Frosst Canada Inc. 5-methanesulfonamido-1-indanones as an inhibitor of cyclooxygenase-2
GB9602877D0 (en) 1996-02-13 1996-04-10 Merck Frosst Canada Inc 3,4-Diaryl-2-hydroxy-2,5- dihydrofurans as prodrugs to cox-2 inhibitors
US5474995A (en) 1993-06-24 1995-12-12 Merck Frosst Canada, Inc. Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors
US5538848A (en) 1994-11-16 1996-07-23 Applied Biosystems Division, Perkin-Elmer Corp. Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe
EP0739340A1 (en) 1994-01-10 1996-10-30 Merck Frosst Canada Inc. Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors
US5521213A (en) 1994-08-29 1996-05-28 Merck Frosst Canada, Inc. Diaryl bicyclic heterocycles as inhibitors of cyclooxygenase-2
CA2200462A1 (en) 1994-10-27 1996-05-09 Merck Frosst Canada Inc. Stilbene derivatives useful as cyclooxygenase-2 inhibitors
US5552422A (en) 1995-01-11 1996-09-03 Merck Frosst Canada, Inc. Aryl substituted 5,5 fused aromatic nitrogen compounds as anti-inflammatory agents
US5801155A (en) 1995-04-03 1998-09-01 Epoch Pharmaceuticals, Inc. Covalently linked oligonucleotide minor grove binder conjugates
US5691374A (en) 1995-05-18 1997-11-25 Merck Frosst Canada Inc. Diaryl-5-oxygenated-2-(5H) -furanones as COX-2 inhibitors
US5639780A (en) 1995-05-22 1997-06-17 Merck Frosst Canada, Inc. N-benzyl indol-3-yl butanoic acid derivatives as cyclooxygenase inhibitors
US5604253A (en) 1995-05-22 1997-02-18 Merck Frosst Canada, Inc. N-benzylindol-3-yl propanoic acid derivatives as cyclooxygenase inhibitors
US5643933A (en) 1995-06-02 1997-07-01 G. D. Searle & Co. Substituted sulfonylphenylheterocycles as cyclooxygenase-2 and 5-lipoxygenase inhibitors
US5789413A (en) 1996-02-01 1998-08-04 Merck Frosst Canada, Inc. Alkylated styrenes as prodrugs to COX-2 inhibitors
US5733909A (en) 1996-02-01 1998-03-31 Merck Frosst Canada, Inc. Diphenyl stilbenes as prodrugs to COX-2 inhibitors
GB9607503D0 (en) 1996-04-11 1996-06-12 Merck Frosst Canada Inc Bisaryl cyclobutenes derivatives as cyclooxygenase inhibitors
US5922742A (en) 1996-04-23 1999-07-13 Merck Frosst Canada Pyridinyl-2-cyclopenten-1-ones as selective cyclooxygenase-2 inhibitors
US5677318A (en) 1996-07-11 1997-10-14 Merck Frosst Canada, Inc. Diphenyl-1,2-3-thiadiazoles as anti-inflammatory agents
US5861419A (en) 1996-07-18 1999-01-19 Merck Frosst Canad, Inc. Substituted pyridines as selective cyclooxygenase-2 inhibitors
AR008331A1 (es) 1997-01-23 1999-12-29 Smithkline Beecham Corp Compuestos antagonistas de un receptor de il-8, uso de los mismos para la fabricacion de medicamentos, procedimiento para su obtencion, composicionesfarmaceuticas que los contienen
WO2001007654A1 (en) 1999-07-22 2001-02-01 The General Hospital Corporation Method for identifying compounds which modulate circadian rhythm
US6399631B1 (en) 1999-07-23 2002-06-04 Pfizer Inc. Carbazole neuropeptide Y5 antagonists
AU779635B2 (en) 1999-10-27 2005-02-03 Health Discovery Corporation Methods and devices for identifying patterns in biological systems and methods for uses thereof
SG144731A1 (en) 2000-07-18 2008-08-28 Correlogic Systems Inc A process for discriminating between biological states based on hidden patterns from biological data
WO2002042733A2 (en) 2000-11-16 2002-05-30 Ciphergen Biosystems, Inc. Method for analyzing mass spectra
US7113896B2 (en) 2001-05-11 2006-09-26 Zhen Zhang System and methods for processing biological expression data
US20020193950A1 (en) 2002-02-25 2002-12-19 Gavin Edward J. Method for analyzing mass spectra
US20040121305A1 (en) 2002-12-18 2004-06-24 Wiegand Roger Charles Generation of efficacy, toxicity and disease signatures and methods of use thereof
US20050101023A1 (en) 2003-03-28 2005-05-12 Rogers James A. Methods for diagnosing urinary tract and prostatic disorders
JP4705630B2 (ja) 2004-03-26 2011-06-22 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー テトラヒドロカルバゾール及び誘導体
BRPI0514397A (pt) 2004-08-19 2008-06-10 Aventis Pharma Inc derivados de 3-ariltioindol-2-carboxamida e análogos destes como inibidores de caseìna cinase iépsilon
ES2882684T3 (es) 2006-04-07 2021-12-02 Vertex Pharma Preparación de moduladores de transportadores del casete de unión a ATP
CL2007003591A1 (es) 2006-12-12 2008-02-29 Wyeth Corp Compuestos derivados de sulfonamida ciclicos, inhibidores de retoma de monoamina; procedimiento de preparacion; composicion farmaceutica; y uso para el tratamiento o prevencion de disfuncion sexual, trastorno gastrointestinal, trastorno genitourinari
CA2709784A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 University Of Rochester Method for altering the lifespan of eukaryotic organisms
UA107652C2 (en) * 2008-10-06 2015-02-10 Incuron Llc Carbazole compounds and therapeutic uses of the compounds
BRPI1006825A2 (pt) * 2009-01-09 2019-04-24 Univ Texas compostos pró-neurogênicos
US9162980B2 (en) * 2009-01-09 2015-10-20 Board Of Regents Of The University Of Texas System Anti-depression compounds
US9962368B2 (en) 2009-01-09 2018-05-08 Board Of Regents Of The University Of Texas System Pro-neurogenic compounds
US8362277B2 (en) 2009-01-09 2013-01-29 Board Of Regents Of The University Of Texas System Pro-neurogenic compounds
JP6126528B2 (ja) * 2010-07-07 2017-05-10 ザ・ボード・オブ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・テキサス・システムＴｈｅ Ｂｏａｒｄ Ｏｆ Ｒｅｇｅｎｔｓ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ｓｙｓｔｅｍ 神経新生促進化合物
US20130116445A1 (en) 2010-07-12 2013-05-09 Colorado State University Research Foundation Triazolium carbene catalysts and processes for asymmetric carbon-carbon bond formation
SG11201407402TA (en) * 2012-05-11 2014-12-30 Reset Therapeutics Inc Carbazole-containing sulfonamides as cryptochrome modulators
WO2014031125A1 (en) * 2012-08-24 2014-02-27 Board Of Regents Of The University Of Texas System Pro-neurogenic compounds
US9357781B2 (en) * 2013-05-03 2016-06-07 Inscent, Inc. Honeybee repellents and uses thereof
US9353078B2 (en) 2013-10-01 2016-05-31 New York University Amino, amido and heterocyclic compounds as modulators of rage activity and uses thereof
TWI690521B (zh) 2014-04-07 2020-04-11 美商同步製藥公司 作為隱花色素調節劑之含有咔唑之醯胺類、胺基甲酸酯類及脲類

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003105759A2 (en) * 2002-06-12 2003-12-24 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Pharmacologic inhibition of myc function
WO2014039515A2 (en) * 2012-09-04 2014-03-13 University Of Massachusetts Antifungal agents and uses thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
STN Cas. No. 1222876-06-3* *
논문 ACS. Med. Chem. Lett. Vol. 4 (11), pp. 1037-1041 (2013) *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2023154093A (ja) 2023-10-18
US20180334446A1 (en) 2018-11-22
DK3129366T3 (da) 2021-09-13
US20210171495A1 (en) 2021-06-10
RU2705094C2 (ru) 2019-11-05
IL248240B (en) 2020-08-31
AR099970A1 (es) 2016-08-31
IL248240A0 (en) 2016-11-30
CA2944074A1 (en) 2015-10-15
LT3129366T (lt) 2021-09-27
HUE055547T2 (hu) 2021-12-28
AU2015244060A1 (en) 2016-10-13
CA2944074C (en) 2023-04-04
RU2016143304A (ru) 2018-05-07
CN110003172A (zh) 2019-07-12
NZ724683A (en) 2023-03-31
US20190241540A1 (en) 2019-08-08
CN110003172B (zh) 2022-04-01
SI3129366T1 (sl) 2022-01-31
EP3129366B1 (en) 2021-06-09
EP3939971A1 (en) 2022-01-19
JP2019142959A (ja) 2019-08-29
US10759777B2 (en) 2020-09-01
CN106458891A (zh) 2017-02-22
PL3129366T3 (pl) 2022-01-03
ES2886469T3 (es) 2021-12-20
US20220411399A1 (en) 2022-12-29
JP2021155449A (ja) 2021-10-07
MX2016013105A (es) 2017-05-23
JP2017510611A (ja) 2017-04-13
AU2015244060B2 (en) 2019-08-01
SG11201608020YA (en) 2016-10-28
US10005759B2 (en) 2018-06-26
EP3129366A1 (en) 2017-02-15
MX371096B (es) 2020-01-16
TWI690521B (zh) 2020-04-11
JP6601916B2 (ja) 2019-11-06
HRP20211372T1 (hr) 2021-12-10
US10214507B2 (en) 2019-02-26
KR102224423B1 (ko) 2021-03-05
RU2016143304A3 (ko) 2018-10-05
CN106458891B (zh) 2019-04-09
WO2015157182A1 (en) 2015-10-15
US20150284362A1 (en) 2015-10-08
TW201605835A (zh) 2016-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10759777B2 (en) Carbazole-containing amides, carbamates, and ureas as cryptochrome modulators
US10383880B2 (en) Carbazole-containing sulfonamides as cryptochrome modulators
BR112016023446B1 (pt) Composto modulador de criptocromo (cry), composição farmacêutica que compreende o mesmo e uso da dita composição para o tratamento ou alívio de um sintoma de uma doença ou transtorno mediado por cry
BR112014028427B1 (pt) Compostos sulfonamidas contendo carbazola, composição farmacêutica compreendendo ditos compostos e usos terapêuticos da dita composição

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
A302 Request for accelerated examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant