KR20160118486A - Gaba 생산 식물성 유산균을 이용한 혼합 곡류 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 피부화장료 - Google Patents

Abstract

본 발명은 혼합 곡류 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 본 발명에 사용된 곡류 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무, 기장 및 귀리를 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 한다. 본 발명의 혼합 곡류 발효 추출물은 여드름의 원인균으로 알려진 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대하여 항균 작용이 우수하고, 과다 지질 생성으로 면포가 발생하였을 때 이를 제거하여 면포로 인한 모공 막힘으로 유발될 수 있는 염증을 억제 또는 완화 효과가 우수하였다. 또한 DNCB를 처리하여 아토피 피부염을 유발시킨 아토피 동물 모델 NC/Nga 마우스에서 아토피 피부염 증상을 현저하게 개선하였고, 혈청내 IgE 항체 농도를 감소시켰을 뿐만 아니라, 비장림프구(Splenocyte)에서 측정되는 IFN-γ, IL-4, IL-12, IL-13의 Th1 및 Th2 사이토카인의 양을 모두 감소시켰다. 이에 따라, 본 발명에 따른 혼합 곡류의 유산균 발효 추출물은 곡류의 유효성분과 유산균에 의해 생산된 GABA 물질이 갖는 여드름 및 아토피성 피부염의 완화 효과가 상승적인 시너지(synergy) 작용으로 인하여 우수한 개선효과를 가져 화장료 조성물로 유용하게 적용될 수 있다.

Description

GABA 생산 식물성 유산균을 이용한 혼합 곡류 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 피부화장료{Cosmetic composition for anti-acne and atophy remedy containing mixed fermented grain seed by using lactic acid bacteria}

본 발명은 GABA 생산 식물성 유산균을 이용한 혼합 곡류 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 피부화장료에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무, 기장 및 귀리를 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 GABA 생산이 가능한 식물성 유산균으로 발효한 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 피부화장료에 관한 것이다.

발효는 미생물이 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해 또는 합성시키는 과정을 의미하며, 대표적인 발효 미생물로는 유산균, 고초균, 누룩균, 효모, 곰팡이, 초산균 등이 있다.

젖산균은 유산균이라고 하며 최종 대사산물로 젖산을 상당량 생산하는 세균을 일컫는다. 젖산균은 인간의 식생활에 있어 예전부터 이용되어 왔던 미생물의 하나로서 우리나라에서는 김치 등과 같은 발효 식품, 서양에서는 유가공 발효 식품에 많이 이용되고 있다. 최근에는 젖산균에 대한 연구가 활발히 진행되어 일반 식품뿐만 아니라 건강기능식품 및 의약품으로써 이용되는 등 그 응용범위가 넓어지고 있다. 그 중 식물성 유산균은 POLAB(Plant Originated Lactic Acid Bacteria)으로 지칭되어 일반 유산균과 차별적으로 취급되고 있으며 동양에서 예로부터 섭취하던 절임류, 김치 등의 식물 원료의 발효 식품에서 분리된 유산균을 말한다.

식물성 유산균은 일반 동물성 유산균과 비교하여 그 종류가 10배 이상 많을 뿐 아니라, 외부 환경에 대한 적응력이 뛰어나다. 즉 절임류와 같이 염분 농도가 높고, pH가 낮은 환경 및 김치와 같이 마늘 등의 항균물질이 많은 환경에서도 생육이 가능한 균주이다. 즉 한국의 김치는 고염분, 낮은 pH 및 천연 항균물질의 함량이 높은 상태이기 때문에 김치에서 분리되는 각종 균은 대표적인 식물성 유산균이며 따라서 잘 숙성된 김치는 식물성 유산균(POLAB)의 대표적인 보고라 할 수 있다.

이러한 특징을 가진 식물성 유산균을 섭취할 경우에는 동물성 유산균과 달리 위산에 대한 저항성이 강하여 위에서의 생존률이 높고, 장까지 생존상태로 도달하는 수가 많다. 또한 척박한 환경에서 생육하기 때문에 각종 생리활성 물질의 생산력이 뛰어난 경우가 많다. 그 대표적인 물질로는 항균펩타이드, 면역증강물질 및 다양한 생리기능 중 항염증 및 면역 억제 효과를 발휘하는 GABA(Gamma-Amino Butyric Acid) 등을 꼽을 수 있다.

여드름은 사춘기에 남성호르몬의 과잉으로 피지선의 분비가 왕성해지고 모낭의 상피가 이각화증을 일으켜 모낭이 막혀서 여드름의 기본 병변인 면포(comedone)가 형성된다. 모낭 내에 상주하는 균 중 특히 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)는 지방분해 효소를 분비하여 이 효소가 피지 중의 중성지방을 분해하여 유리 지방산을 형성하고 모낭을 자극한다. 또한 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 면역학적 반응이 여드름의 염증 반응에 기여한다.

이와 같은 원인으로 피지분비와 피지량의 증가를 촉진하며, 모공벽의 각질을 두텁게 하여 피지가 원활하게 배출되는 것을 막아 여드름을 발생시킨다. 간접적인 원인으로는 스트레스, 수면부족, 음주, 음식, 화장품 등이며, 스트레스를 받으면 스테로이드 호르몬과 안드로겐이 함께 분비되며, 술은 염증을 악화시키는 작용을 하고, 오일 함량이 많은 화장품은 모공을 막을 수 있어 여드름을 더 악화시킨다. 여드름은 복합적인 원인으로 발생하며, 현재 이각화 억제, 여드름균 억제, 염증반응 억제 등의 약물치료를 하고 있으며, 여드름의 치료 및 개선의 과제로는 피지생성 증가 억제, 여드름균 및 2차적 피부 감염균 억제, 모낭벽의 이각화 억제 등이다.

한편, 아토피성 피부염의 정확한 병태생리는 아직까지 완전히 이해되고 있지 않으나 유전적 소인과 함께 면역학적, 환경적 요인이 관여하리라고 생각되고 있으며 특히 면역학적 관점에서 많은 연구가 이루어지고 있다. 아토피성 피부염의 대부분을 차지하는 외인성 아토피성 피부염은 IgE와 연관된 면역기전에 의해 발생되는데 특정 알러젠에 대한 즉시형 면역반응보다는 T세포 이상에 의한 지연형 면역반응이 관여한다는 보고들이 많다. 아토피성 피부염의 주된 피부증상은 습진성 병변으로 피부단자검사상 나타나는 홍반과 팽진이 아니기 때문에 즉시형 면역반응 검사인 피부단자검사 결과만으로 아토피성 피부염의 직접적인 상관성을 평가하는 것에는 아직도 논란이 많다.

아토피성 피부염 환자에서 세포 매개성 면역 장애는 약 80%까지 발생하는 것으로 알려져 있으며, 알러지(allergy) 반응은 면역계의 이상에서 비롯되며, 원인이 되는 알러젠(allergen)에 대한 면역 반응은 Th2 반응으로 진행되는 것으로 알려져 있다. 알러젠에 의해 활성화된 Th2 림프구는 IL-4, IL-5, IL-13을 생산하고 이들 사이토카인(cytokine)은 호산성백혈구(eosinophil), 호염기구(basophil), 비만세포(mast cell)과 같은 과립 세포를 염증 부위로 모이게 한다. 염증 부위에 모인 과립 세포들은 단독 또는 IgE에 의해 활성화되어 염증성 과립을 다량 방출함으로 알러지 또는 아토피(atopy) 증상을 유발하게 된다. 또한 Th2 림프구에서 생산된 IL-4와 IL-13은 B 림프구의 항체 생성을 증가시키며, 특히 IgE로의 이소타입 스위칭(isotype switching)을 유도하므로 IgE 생성이 증가하여 과립 세포들을 크게 활성화시키게 된다. Th1과 Th2 림프구에서 각각 생산되는 사이토카인(cytokine)은 상대편의 분화를 억제한다. 즉, Th2 림프구의 분화 및 증식은 Th1 사이토카인에 의하여 억제되는데, 특히 Th1 반응을 촉진하는 IFN-γ, IL-12는 Th2 사이토카인인 IL-4의 발현을 억제하여 B 림프구에서 항체 생산 및 IgE로의 이소타입 스위칭(isotype switching)을 감소시킨다. 따라서, Th1과 Th2 균형 조절을 통하여 알러지 및 아토피 반응을 경감시키려는 연구가 계속되고 있다.

아토피성 피부염 환자의 사회적 생활은 환자 삶의 질적인 부분에서 정서, 교우, 학습, 놀이뿐만 아니라, 외모에 변화를 초래하여 자존심, 생활의 장애, 정신과적 질환을 초래하여 가족관계에도 큰 영향을 주며, 특히 아토피 환자는 심한 가려움증으로 밤에 잠을 잘 자지 못하고, 신체에 대한 자신감 결여, 일반 아동에 비해 감정적으로 불안과 민감하면서 불만 표출이 어렵고, 소아기 성장 장애요인으로 작용하며, 특히 남아에서 이러한 위험이 더 큰 것으로 사춘기 이후에는 자살을 생각하는 경우도 있으며, 세균, 바이러스 진균 감염이 지속적으로 발생하여 심한 습진과 세균 감염으로 입원 치료가 필요한 경우도 있다.

따라서, 부작용이 없이 아토피와 여드름을 효과적으로 개선 할 수 있는 방법의 필요성이 요구되고 있다.

본 발명은 GABA 생산 유산균을 이용한 혼합 곡류 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 피부화장료에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무, 기장 및 귀리를 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 GABA 생산이 가능한 식물성 유산균으로 발효한 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 발효공정을 통한 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무, 기장 및 귀리를 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 발효 추출물을 만들고 이 추출물을 함유하는 여드름 및 아토피성 피부염에 개선 효과를 갖는 화장료이다.

본 발명에 사용된 곡류은 건조된 곡류의 분쇄물을 물과 혼합하고 GABA 생산능을 가진 식물성 유산균을 접종시키는 단계, 발효액을 숙성하는 단계로부터 얻은 발효액, 또는 그 발효액을 다시 일부 또는 전부 감압농축 및 동결건조하여 제조하여 얻은 농축물, 또는 발효액 및 농축액 중에 함유되고 있는 주 효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.

곡류 발효 추출물은 분쇄한 분말시료를 안정적인 온도에서 물에 혼합 후, GABA 생산능이 있는 유산균을 단독 또는 혼합한 발효공정을 통해 발효액을 수득하였으며, 발효 후 발효액을 감압농축 및 동결건조하여 사용하거나, 발효공정 수행 후 저온 숙성 또는 고온 숙성하는 공정을 포함할 수 있다.

상기의 발효를 위해 사용한 유산균은 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum)이며 발효 공정은 이들의 혼합 균주로 이루어진 군에서 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 한다. 유산균은 배양액을 pH 4.0-5.0, 유산균은 20-37 온도에서 3일 내지 7일간 배양하였다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기의 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않고 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다. 상기 곡류 발효 추출물은 조성물 전체에 대하여 동결건조 중량 기준 0.001 내지 80 중량%로 조성물에 존재할 수 있다.

만약 상기 곡류 발효 추출물이 나노캡슐, 마이크로캡슐, 나노좀 등의 제형으로 용액 또는 파우더 형태로 존재한다면 당업자는 상기 농도 범위 내에서 본 발명에 따른 조성물 내에 이 용액 또는 파우더의 양을 조절할 수 있을 것이다. 상기한 바와 같이 여드름 및 아토피성 피부염 개선 효과를 갖는 조성물로 가공된 화장품에 제공된다.

본 발명의 혼합 곡류 발효 추출물은 피부외용제로서 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 유연화장수, 밀크로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩 또는 보디 오일 등의 기초 화장료 및 파운데이션, 립스틱, 마스카라 또는 메이크업 베이스 등의 색조 화장료 형태로 제조할 수 있다. 본 발명의 화장료를 세정제로 사용할 경우, 세안제 및 목욕제를 제조할 수 있다. 이하 본 발명을 하기 위해 실시예와 실험예를 통하여 상세하게 설명하나, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 제시된 것일 뿐, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 GABA 생산 유산균을 이용한 혼합 곡류 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 피부화장료에 관한 것이다. 본 발명은 첫째, GABA 생산 유산균을 이용한 퀴노아, 아마란스, 기장, 귀리 혼합 발효 추출물은 복합적인 이유로 발생되는 여드름의 여드름균에 대한 항균력만이 개선된 것이 아니라 즉, 피지분비와 염증반응의 완화와 같은 효능이 동반되어 현저한 개선 효과를 보였다. 둘째, GABA 생산 유산균을 이용한 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물은 DNCB를 처리하여 아토피성 피부염을 유발시킨 아토피 동물 모델 NC/Nga 마우스에서 아토피성 피부염 증상을 현저하게 개선하였고, 혈청내 IgE 항체 농도를 감소시켰을 뿐만 아니라, 비장림프구(Splenocyte)로부터 분리한 면역세포에서 DNCB의해 유도되는 IFN-γ, IL-4, IL-12, IL-13의 Th1 및 Th2 사이토카인의 분비를 감소시켰다. 또한, 본 발명의 GABA 생산 유산균을 이용한 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효물은 뛰어난 피부 보습 효능을 가진다. 따라서, 본 발명의 상기 곡류 혼합 발효 추출물은 여드름 및 아토피성 피부염의 개선용 화장품 등으로 개발될 수 있다.

도 1은 아토피성 피부염 질환 모델의 구축 및 물질의 적용 일정을 개괄적으로 보여준다.
도 2는 HPLC를 이용한 Glutamic acid와 GABA 함량을 분석한 것으로 는 "A"는 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 추출물이며 "B"는 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물이다.
도 3은 아토피성 피부염 질환 유발 NC/Nga 마우스의 피부염 증상 점수를 보여준다.
도 4는 아토피성 피부염 질환 유발 9주 후에 NC/Nga 마우스의 피부 소양 횟수를 측정한 결과를 보여준다.
도 5는 아토피성 피부염 질환 유발 9주후에 촬영한 NC/Nga 마우스 피부 사진이다. "Normal"는 아토피성 피부염을 유발하지 않은 무처리군, "AD"는 아토피성 피부염을 유발한 대조군, "A"는 아토피성 피부염 질환 유발 후 4주간 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군, "B"는 아토피성 피부염 질환 유발 후 4주간 퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 발효 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군이다.
도 6,7,8은 아토피성 피부염을 유발한 NC/Nga 마우스 피부에서 표피의 두께와 호산성 백혈구(eosinophil)의 침투 모습을 보여주는 사진이다. "Normal"는 아토피성 피부염을 유발하지 않은 무처리군, "AD"는 아토피성 피부염을 유발한 대조군, "A"는 아토피성 피부염 질환 유발 후 4주간 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군, "B"는 아토피성 피부염 질환 유발 후 4주간 퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 발효 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군이다.
도 9,10은 아토피성 피부염을 유발시킨 NC/Nga 마우스 피부에서 비만세포(mast cell)의 세포수이다. "Normal"는 아토피성 피부염을 유발하지 않은 무처리군, "AD"는 아토피성 피부염을 유발한 대조군, "A"는 아토피성 피부염 질환 유발 후 4주간 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군, "B"는 아토피성 피부염 질환 유발 후 4주간 퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 발효 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군이다.
도 11은 아토피성 피부염을 유발시킨 NC/Nga 마우스 혈청에서 IgE 항체의 농도 변화를 보여준다. "Normal"는 아토피성 피부염을 유발하지 않은 무처리군, "AD"는 아토피성 피부염을 유발한 대조군, "A"는 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군, "B"는 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군, "C"는 퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군, "D"는 퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 발효 추출물을 포함한 화장수를 처리한 실험군이다.

이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 화장료 조성물은 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무, 기장 및 귀리를 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 발효 추출물 유효성분으로 포함한다.

상기 퀴노아는 다양한 영양소를 고루 지닌 슈퍼푸드(superfood)로 각광받으며, 어린이들의 이유식은 물론 임산부와 노인들의 건강식으로도 폭넓게 활용되고 있다. 쌀에 부족한 영양소들을 보충해 줄 수 있어서 쌀과 함께 밥을 지어 섭취하거나, 익혀서 채소와 곁들여 먹기도 하고, 가루를 내서 과자나 음료로 만들기도 한다. 퀴노아 열매의 껍질에는 쓴맛을 내는 사포닌이 다량 함유돼 면역력 강화와 항암 작용에도 뛰어나다. 또한 껍질의 쓴맛으로 인해 병충해의 접근도 적다.

상기 아마란스는 식물성 스쿠알렌, 폴리페놀, 토코트리에놀 등 항산화 및 항암 성분이 다량 함유되어, 혈당을 조절하기 때문에 당뇨, 고혈압, 고지혈증에 뛰어난 효능을 보인다. 체내 활성산소를 제거하는 항산화 기능은 면역력 증강, 노화 방지를 비롯해 호르몬 조절 효과로 피부 미용에도 도움을 준다. 더불어 불포화지방산과 식물성스테롤(phytosterol)의 높은 함유량 또한 혈중 콜레스테롤 수치와 혈당지수(GI : glycemic index)를 낮춰 당뇨, 고혈압, 동맥경화를 예방한다.

상기 보리는 폴리페놀 화합물이 항산화작용을 하여 활성산소를 제거함으로 인해 세포의 노화를 방지하며, 피부에 수분공급을 도와주고 거친 피부를 윤택하게 만들어 주며 메이크업으로 인한 피부트러블 증상에 도움을 준다.

상기 율무는 아토피원인이 되는 몸의 열과 염증을 가라앉히며 이뇨작용이 탁월해 체내 노폐물 배출을 도와준다. 또한 항노화작용 및 당뇨 예방에 효과가 탁월한 것으로 보고되어 있다.

상기 기장은 탄닌과 페놀 성분을 함유해 항산화 작용을 하며 몸을 따뜻하게 만들고 위장을 보호하며 소화를 촉진하고 설사를 멈추게 하는 효능이 있다. 또한 염증성 여드름에 효과가 있는 것으로 보고되어져 있다.

상기 귀리는 소염작용을 통해 피부트러블이나 각종 피부병에도 좋다. 불포화지방산을 풍부하게 함유하고 있어 혈압을 떨어뜨리는 효과를 준다. 귀리가 가지고 있는 식이섬유소는 배변을 용이하게 하고 필수아미노산 등은 성장기 어린이들의 발육을 촉진한다.

실시예

<실시예 1> 혼합 곡류 발효 추출물 제조 및 동물모델의 준비

혼합 곡류 분말의 건조 중량의 10배 양의 증류수를 가하여 잘 섞어준 후, pH를 4.0-5.0 조정하고, 미리 배양된 식물성 유산균 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis) 10⁵-10⁹ CFU/ml 또는 10⁵-10⁹ CFU/g 농도가 되도록 첨가한다. 락토바실러스 브레비스은 20-37℃ 온도에서 3 내지 7 일간 배양하였다. 발효를 종료하기 위해 80℃에서 10분간 열을 가하여 락토바실러스 브레비스의 기능상실을 유도하였다. 원심분리기를 이용하여 침전물을 제거하고 상등액을 채취하거나, 여과된 상등액을 60℃이하에서 감압농축한 후 동결건조하였고, 이를 화장수제로 제조하여 사용하였다. 5 주령의 수컷 NC/Nga 마우스를 구입하여 사육실의 실내온도를 22 내지 26℃로 유지시키고, 명암주기도 12시간 간격을 유지하였다. 사료는 항생제가 첨가되지 않은 분말 사료를 사용하였다.

< 실시예 2> 혼합 곡류 발효 추출물을 포함한 화장수 적용

실험 동물 모델에 아토피성 피부염을 9주간에 걸쳐 유발한 후, 4주 동안 아토피성 유발 조직에 혼합 곡류 발효 추출물을 포함한 화장수를 적용하여 그 효과를 관찰 하였다. 실험군은 아토피성 피부염을 유발시키지 않은 대조군, 아토피성 피부염을 유발시킨 대조군, 및 아토피성 피부염을 유발시키고 혼합 곡류 발효 추출물을 포함한 화장수를 적용한 실험군으로 각각 나누어 진행하였다. 각 군마다 마우스를 8 마리씩 배정하였다. 필요한 경우에 아토피성 피부염을 유발시키지 않은 군과 비교하였다.

< 실시예 3> 아토피성 피부염( Atopic Dermatitis )의 유발

NC/Nga 마우스에게 사람과 유사한 아토피성 피부염을 유발한다고 알려진 물질인 DNCB(1-Chloro-2,4-dinitrobenzene)를 사용하여 아토피성 피부염을 유발하였다. NC/Nga 마우스 등 부위를 깨끗하게 제모 한 후, 미세 상처가 치유되도록 24시간 방치하였다. 1% DNCB 용액(아세톤 : 올리브오일= 3 : 1) 200㎕를 등과 오른쪽 귀에 도포하여 알러젠을 감작시킨 뒤, 1차 도포 3일 후 1% DNCB 용액을 2차 도포하고, 1차 도포 1주차부터는 0.4% DNCB용액 15㎕을 도포하여 아토피성 피부염을 유발시켰다. 일주에 3회씩, 9주 동안 DNCB용액을 처리하여 아토피성 피부염을 충분히 유발시켰다(도1).

< 실시예 4> 아토피성 피부염 증상의 평가

관능평가는 DNCB 처리 1주차부터 주 3회씩 해당일 오전 10시에 평가하였다. 평가항목은 소양감, 태선화, 홍반, 찰과상, 짓무름의 5가지로 각 항목별 0(증상 없음), 1(약간), 2(보통), 3(심함)으로 점수를 매겨 총 15점 만점으로 하였다.

< 실시예 5> 소양행동 측정

아토피성 피부염을 유도한 직후, 4주에 걸쳐 시료처리 30분 전에 1시간 적응 시간 후, 30분 동안 마우스가 병변 부위를 긁는 시간을 측정하여 점수화 하였다.

< 실시예 6> 조직 염색

아토피성 피부염을 유발한 후 4주 후에 희생시키고, 등 피부를 적출하여 파라핀으로 고정한 귀 및 등 조직을 절편하여 비만세표(mast cell)는 톨루이딘 블루(Toluidine blue)로 염색하며, 호산성 백혈구(eosinophil)는 H&E(Haematoxylin-eosin) 염색법으로 염색하였다. 그 후 광학 현미경 상에서 약 400배의 비율로 관찰하였다. 각 군의 5마리의 마우스에서 각각 3개의 조직 절편을 얻은 다음, 하나의 절편에서 5부분의 250 nm * 250 nm 면적상에 보이는 침윤된 호산성 백혈구(eosinophil)의 수를 세고 침윤된 비만 세포(mast cell)의 과립, 탈 과립의 두 개의 군으로 분류한 다음 이를 평균화한 값을 구하였다. 다시 이 3개의 값을 평균하여 1마리 마우스의 평균값을 구하고, 각각 5마리에 대한 상기의 값을 평균하여 각 군의 비만세포 및 호산성 백혈구의 침윤 값으로 하였다.

< 실시예 7> 혈청 IgE 측정

혈청 중 IgE의 함량은 IgE ELISA kit를 이용한 효소결합 면역흡착 분석법으로 측정하였다. IgE 측정을 위한 혈액은 아토피성 피부염 유발 종료일에 안와채혈을 하여 -70℃에서 보관한 것과 시료처리 종료 후 최종 소양행동 평가 및 관능평가를 실시한 다음 에테르로 마취하여 하대정맥에서 채혈하여 얻은 혈액을 사용하였다. 채취한 혈액은 4℃ 3000rpm 15min 원심분리 후 혈청을 얻어 실험 전까지 -70℃에 보관하였다.

< 실시예 8> 비장림프구의 사이토카인 생성능 측정

아토피성 피부염 유발 마우스의 비장림프구(Splenocyte)로부터 얻은 각 조직의 단일 세포 부유액을 24 웰-플레이트에 각 5 X 10⁶ 세포씩 분주하고 ConA (Concanavalin A)을 최종 농도 10mg/ml이 되도록 넣어주었다. 37℃에서 48시간 배양한 후에 상층액을 취하여 IFN-γ, IL-4, IL-12, IL-13 생성량을 ELISA 방법으로 측정하였다.

실험 결과

< 실험예 1> 혼합 곡류의 최적 발효 미생물 탐색 및 발효 추출물에 함유된 성분 및 성분의 함량 측정

<1-1> 균주 조건별 발효 추출물의 활성성분 함량 변화

식품＊토양 유래 균의 혼합곡류 발효 후 총 페놀, 총 플라보노이드 및 가바 함량 변화(표1)

균주: 1, 락토바실러스 브레비스(Laqctobacillus brevis); 2, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei); 3, 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum); 4, 다이엘라 경희엔시스(Dyella kyungheensis); 5, 페도박터 경희엔시스(Pedobacter kyungheensis); 6, 스핑고박테리움 진세노시디무탄스(Sphingobacterium ginsenosidimutans).

혼합곡류: 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무

균주 및 혼합곡류 추출물 함 량	혼합곡류 추출물	1	2	3	4	5	6
총 페놀 (g/ mg of extract )	16.2	24.5	25.7	24.3	16.2	16.3	16.2
총 플라보노이드 (g/ mg of extract )	6.8	9.6	8.9	9.4	6.8	6.9	6.8
가바( GABA ) ( mM )	0.02	0.45	0.41	0.38	0.02	0.02	0.02

식물성 유산균별 혼합곡류 발효 후 총 페놀, 총 플라보노이드 및 가바 함량 변화(표2)

균주: 1, 락토바실러스 브레비스(Laqctobacillus brevis); 2, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei); 3, 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum); 4, 락토바실러스 옥타키엔시스(Lactobacillus otakiensis); 5, 락토바실러스 라피(Lactobacillus rapi); 6, 락토바실러스 나무렌시스(Lactobacillus namurensis).

혼합곡류: 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무

균주 및 혼합곡류 추출물 함 량	혼합곡류 추출물	1	2	3	4	5	6
총 페놀 (g/ mg of extract )	16.2	24.5	25.7	24.3	19.9	20.5	18.2
총 플라보노이드 (g/ mg of extract )	6.8	9.6	8.9	9.4	7.2	7.9	7.5
가바( GABA ) ( mM )	0.02	0.45	0.41	0.38	0.02	0.02	0.02

혼합된 식물성 유산균 균주별 혼합곡류 발효 후 총 페놀, 총 플라보노이드 및 가바 함량 변화(표3)

균주: 1, 락토바실러스 브레비스(Laqctobacillus brevis); 2, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei); 3, 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum).

혼합곡류: 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무

균 주	총 페놀 (g/ mg of extract )	총 플라보노이드 (g/ mg of extract )	가바( GABA ) ( mM )
혼합곡류 추출물	16.2	6.8	0.02
1	24.5	9.6	0.45
2	25.7	8.9	0.41
3	24.3	9.4	0.38
1, 2	26.4	9.6	0.44
1, 3	24.0	9.3	0.46
2, 3	22.5	8.5	0.37
1, 2, 3	25.4	9.7	0.45

<1-2> 총 페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량 측정

총 페놀 함량 측정은 하기와 같이 수행하였다. 시료 200㎕에 1N Folin Ciocalteau 용액 200㎕을 넣고 10% 탄산나트륨 용액 200㎕을 넣어 상온에서 10분간 방치하였다. 반응액을 150g에서 10분간 원심분리하여 상등액을 Microplate reader(Chromate, USA)를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정한다. 이때 표준곡선은 galic acid 0.1% 농도를 희석하여 작성하였고, 검량선으로부터 시료의 총페놀함량을 산출하였다.

총 플라보노이드 함량 측정은 하기와 같이 수행하였다. 시료용액 1% 100㎕과 에탄올 300㎕, 10% 질산알루미늄용액 20㎕, 1M 초산칼륨용액 20l, 물 560㎕을 가하여 충분히 교반한다. 실온에서 40분간 정치 후 액층을 Microplate reader 를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정한다. 공시험은 시료 용액 대신 에탄올 용액을 이용하여 동일하게 처리하였고, 시료 blank는 질산알루미늄용액 대신 물을 사용한 것을 사용하였다. 이때 표준곡선은 Quercetin 0.05% 농도를 희석하여 작성하였고, 검량선으로부터 시료의 총플라보노이드 함량을 산출하였다 (표4).

총 페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량(표4)

시 료 명	총 페놀 함량 (g/ mg of extract )	총 플라보노이드 함량 (g/ mg of extract )
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 추출물	16.2	6.8
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물	24.5	9.6
퀴노아, 아마란스, 기장, 귀리 혼합 추출물	15.7	6.3
퀴노아, 아마란스, 기장, 귀리 혼합 발효 추출물	22.1	8.5

<1-3> GABA 함량 측정

GABA의 정량적 분석은 다음과 같이 역상 HPLC (Waters)를 이용하여 측정하였다. 우선, 시료를 12,000 rpm에서 10분간 원심 분리한 후 상등액을 멤브레인 필터로 여과하고 적당한 농도로 3차 증류수에 희석하였다. 이렇게 준비된 시료를 o-프탈디알데히드 (o-phthaldialdehyde: OPA)를 이용한 프리-컬럼 반응의 유도체화 과정 후 역상 HPLC를 수행하였다. OPA 용액 (pH 9.3)은 5.0ml의 메탄올성 OPA, 20ml 보레이트 완충액 (pH 9.9) 및 50㎕ 2-머르캅토에탄올을 혼합하여 제조하였다. 메탄올성 OPA는 2.56 g의 OPA를 5ml의 메탄올에 용해하여 제조하였고, 보레이트 완충액은 0.2 M 보르산 및 0.2 M 수산화 나트륨을 50:50(v/v)을 혼합한 후 0.2 M 포타슘 클로라이드를 넣어 사용하였다. OPA 용액은 2시간 지나서 사용하고 제조한 후 일주일정도 까지는 안정하였다. 제조한 OPA 용액 230㎕와 270㎕의 시료를 잘 혼합한 후 5분 정도 상온에서 반응시켰다. 너무 오랜 시간 상온에서 방치하면 유도체의 불안정성 때문에 역상 HPLC의 피크 모양이나 면적값이 다르게 나올 수 있으므로 상온에서 10분 이상 방치하지 않고 역상 HPLC를 수행하였고, 유도체화된 시료 20㎕를 컬럼에 주입하였다. HPLC 컬럼으로는 XTerra 컬럼 (Waters, : RP18 5㎛, 4.6mm x 150mm)을 사용하였으며, 이동상으로는 0.05 M 소듐 아세테이트 (pH 7.2)을 용매 A로, 아세토니트릴 (HPLC 등급)을 B로, 메탄올 (HPLC 등급)을 C로, 그리고 0.1 M 소듐 아세테이트, 아세토니트릴 (HPLC 등급) 및 메탄올 (HPLC 등급)이 각각 46:44:10(v/v)으로 혼합된 것 (pH 7.2)을 용매 D로 사용하였다.

표5에서 나타낸 바와 같이 유산균 발효 후 혼합 곡류의 GABA 함량이 전체적으로 늘어난 것을 볼 수 있다. 또한 도2에 나타난 바와 같이 HPLC 분석한 데이터를 통하여 GABA 함량 증가를 확인할 수 있다.

혼합 곡류 추출물 및 혼합 곡류 발효 추출물의 발효 시간별 GABA 함량 변화 비교(표5)

시 료 명		GABA 함량( mM )
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 추출물	-	0.02
	-	0.02
	-	0.02
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물	24시간	0.05
	48시간	0.23
	72시간	0.45
퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 추출물	-	0.18
	-	0.18
	-	0.18
퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 발효 추출물	24시간	0.04
	48시간	0.28
	72시간	0.51

< 실험예 2> 화장수 베이스 제조

혼합 곡류 발효 추출물을 함유한 화장료를 포함한 화장수 베이스를 제조하였다. 본 실험에 사용된 화장료는 액상의 형태이고, 그 조성은 표6에 나타낸 바와 같다. 우선 표에 기록되어 있는 원료 함량을 중량별로 첨가한 후 A상에 정제수(30%)를 첨가하여 60℃까지 가열한 후 A상중에 B상을 천천히 첨가하여 균일하게 혼합한다. 그 후 45℃까지 냉각하고 남은 B상의 정제수를 첨가하고 균일하게 교반하여 실온까지 냉각하여 화장수을 제조하였다(표6 참조).

화장수 베이스 제조(표6)

구분	성분	중량%
A	정제수	to 100
	글리세린	1.00
	디소듐이디티에이	0.02
	부틸렌글라이콜	2.00
	방부제	적량
B	혼합 곡류 발효 추출물	5.00

< 실험예 3> 여드름균에 대한 항균력 시험

표7와 같이 제조된 각각의 화장료 조성물을 가지고 여드름 원인 균주인 프로피오니박테리움 아크네스(ATCC 6919)에 대하여 항균력을 시험하였다. 프로피오니박테리움 아크네스는 BHI 액체배지에 접종하여 혐기 배양한 배양액을 사용하였다. BHI 액체배지(pH 6.8) 또는 LB 액체배지(pH 4.5) 15ml에 상기 시험 균액을 0.15ml 첨가하여 잘 혼합한 것을 희석용액으로 사용하였다. 시험 방법은 다음과 같이 (가) 96웰-플레이트(96well plate) 1번 행에 출발 농도에 맞도록 시료를 넣고 희석용액으로 총량을 200㎕로 맞춘다. 나머지 웰들에는 희석용액 100㎕씩을 넣는다. (나) 1번 행의 혼합액을 잘 섞어준 다음 100㎕를 취하여 2번 행에 넣고 잘 섞어준 다음, 다시 100㎕를 취하여 3번행에 넣는 방식으로 이중 희석(double dilution)을 행한다. (다) 32℃에서 24시간 내지 48시간 정치 배양한 후 현탁된 정도로 균의 증식 유무를 판단하여 균의 증식이 없는 최소농도를 MIC(최소저지농도; Minimun Inhibitory concentration)값으로 결정한다. 여드름균에 대한 항균력 시험 결과를 아래 표 8에 나타내었다.

		실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6
A	정제수	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	글리세린	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
	부틸렌글라이콜	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00
B	방부제	적량	적량	적량	적량	적량	적량
	퀴노아, 아마란스 보리, 율무 혼합 추출물	-	1.0	-	-	-	-
	퀴노아, 아마란스 보리, 율무 혼합 발효 추출물	-	-	1.0	-	-	1.0
	퀴노아, 아마란스 귀리, 기장 혼합 추출물	-	-	-	1.0	-	-
	퀴노아, 아마란스 귀리, 기장 혼합 발효 추출물	-	-	-	-	1.0	1.0

항목	pH	프로피오니박테리움 아크네스
실시예 1	6.8	<40ppm
실시예 2	6.7	<36ppm
실시예 3	6.2	<25ppm
실시예 4	6.7	<31ppm
실시예 5	6.2	<20ppm
실시예 6	6.2	<20ppm

실험 결과, MIC에서 ppm농도가 적을수록 여드름균에 대해 유효한 물질이라고 할 수 있다. 혼합 곡류 추출물 및 혼합 곡류 발효 추출물을 포함하지 않은 실시예 1은 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 항균력을 확인 할 수 없었으며, 전제적으로 혼합 곡류 발효 추출물 (실시예 3, 실시예 5, 실시예 6)이 혼합 곡류 추출물에 비해 월등히 항균력이 우수한 것을 확인 하였다. 또한 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물(실시예 3)에 비해 퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 발효 추출물(실시예 5)이 MIC 20 ppm 내지 1ppm으로 항균력이 뛰어난 것을 확인하였다

< 실험예 4> 여드름 개선과 피지분비 감소 및 자극 유무의 시험

여드름을 보유하고 있는 20명중 10명씩 2그룹으로 상기 실시예 3과 실시예 5로 제조된 화장료 조성물을 각각 4주 기간 동안 사용하게 하였다. 여드름 개선 척도는 1점에서 5점까지로 하고, 1점은 아니다, 3점은 보통이다, 5점은 매우 그렇다로 표기하도록 하였다. 실험 결과는 하기의 표9에 10명의 평균점수로 표기하였다. 여드름 소멸 시기는 소멸이 판독된 일수를 기준으로 하였다. 피지분비 감소는 1점에서 5점까지로 하고, 1점은 아니다, 3점은 보통이다, 5점은 매우 그렇다로 표기하도록 하였다. 실험 결과는 하기 표9에 10명의 평균점수로 표기하였다. 피부자극의 유무는 (자극반응을 보인 명수)/(총 시험자수)로 보았다.

실험군	여드름 개선	여드름 소멸 시기	피지분비 감소	자극 유무
실시예 3군	4.2	7일	3.8	1/10
실시예 5군	4.8	4일	4.6	0/10

< 실험예 5> DNCB 유발 아토피성 피부염 완화 효능 평가

NC/Nga 마우스에 DNCB를 9주 동안 도포하여 아토피성 피부염을 유발시켰다. 아토피성 피부염을 유발시키지 않은 무처리군에서는 9주 동안 피부염 증상이 전혀 나타나지 않았다. 아토피성 피부염을 유발시킨 대조군의 마우스에서는 유발 첫 주에 미약한 건조, 홍반, 출혈부터 관찰되기 시작하여 최종 9주차에 심각한 표피 박리, 짓무름, 태선화가 관찰되었다. 아토피성 피부염을 유발 후 4주간 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 함유한 화장수를 적용한 실험군의 경우, 대조군(control)에 비하여 증상이 완화되어 피부염 평가 점수가 절반 정도로 유지되었다(도 3 참조). 아토피성 피부염 유발 마우스의 소양 행동 횟수를 측정한 결과에서도 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 함유한 화장수의 항-아토피성 피부염 효과가 잘 나타났다. 즉, 아토피성 피부염이 유도된 대조군(control)의 경우 피부염을 유발시킨 후 2주 동안에 점점 더 긁는 횟수가 증가하다가, 10 일 이후로 긁는 정도가 완화되는 경향을 보였으나, 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 함유한 화장수를 적용한 실험군에서는 긁는 정도가 도포 직후부터 개선되어 치료 종료 시에는 긁는 횟수가 거의 정상 수준까지 감소하였다(도 4 참조). 아토피성 피부염 유발 21일 후에 실험 마우스의 실제 피부를 관찰하였다. 도 5의 피부염 부위의 피부를 촬영한 사진에서 알 수 있는 바와 같이, 아토피성 피부염 유발 대조군은 심한 건조와 태선화, 홍반, 찰과상, 짓무름 등의 피부염 증상이 관찰된 반면, 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 함유한 화장수를 적용한 실험군은 외관상으로 대조군에 비해 매우 가벼운 정도의 건조와 표피 박리만 관찰되었다 (도 5 참조).

< 실험예 6> 조직염색

아토피성 피부염에서는 반복되는 염증 반응에 따라 피부의 두께가 증가하고, 호산성백혈구(eosinophil), 비만세포(mast cell) 등 주요 면역 세포가 조직 내로 많이 침윤하여 염증 반응을 일으키는 것으로 알려져 있다. NC/Nga 마우스의 피부를 적출하여 H&E(Haematoxylin-eosin) 염색으로 확인한 결과 아토피성 피부염을 유발시킨 대조군에서는 750㎛ 정도의 피부 두께가 나타나는 반면, 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 함유한 화장수를 적용 실험군에서는 절반 수준인 350㎛의 두께를 유지하는 것으로 확인되었으며, 호산성 백혈구(eosinophil)의 세포수 감소 또한 관찰 되었다(도6,7,8 참조). 염증 조직 내 비만세포(mast cell)의 침윤을 확인하기 위해, 톨루이딘 블루(toluidine blue) 염색을 시행한 결과, 아토피성 피부염 유발 대조군이 무처리군 보다 비만세포수가 증가하였으나, 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 함유한 화장수를 적용한 실험군에서는 대조군에 비해 비만세포수가 감소하였다. 실제의 염색 사진에서도 아토피성 피부염 유발 대조군에서 많은 수의 비만세포(mast cell)가 관찰된 반면, 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물을 함유한 화장수 적용군에서는 적은 수의 세포가 관찰되었다(도9,10 참조).

< 실험예 7> 혈청 IgE 측정

아토피성 피부염에서는 IgE 항체 농도가 증가하여 비만세포(mast cell)의 활성화를 유도하게 되는데, 비만세포(mast cell)는 활성화되면 염증을 매개하는 활성이 매우 뛰어난 과립들을 방출하여 심각한 면역 반응과 과민반응을 일으키게 된다. 아토피성 피부염 유발 12일 및 24일 후에 혈청에서 IgE 농도를 측정한 결과, 아토피 유도 대조군에 비하여 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물 적용군에서 항체 농도가 통계적으로 유의성 있게 감소하였다 (도11 참조).

< 실험예 8> 사이토카인 생성능 측정

면역 세포의 활성화에 관여하는 사이토카인(cytokine)을 생성능을 평가하여 아토피 유발에 대한 면역반응의 정도를 확인하였다. Th1 림프구에서 생성되는 IFN-γ, IL-12는 대식세포(macrophage)를 활성화시키며, 아토피가 만성화 되었을 때 현저하게 증가하여 각질세포에서 GM-CSF(Granulocyte macrophage colony-stimulating factor) 생산을 유도하여 아토피 피부염을 유발한다. NC/Nga 마우스에서 적출한 비장림프구에서 세포를 분리하여 DNCB로 48 시간 동안 자극시킨 후, Th1 사이토카인인 IFN-γ와 IL-12의 생성을 확인한 결과, 아토피 유발 대조군에 비하여 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물 적용 실험군은 비장림프구의 IFN-γ와 IL-12가 현저하게 줄어들었다(표10 참조). IL-4와 IL-13은 Th2 림프구에서 생성되는 사이토카인으로써 Th1 림프구의 분화와 대식세포(macrophage)의 활성화를 억제하는 역할을 담당하고, B 림프구에 영향을 주어 IgE 항체 생성을 증가시킨다. 비장림프구 세포 배양에서 IL-4와 IL-13 은 모두 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 발효 추출물 투여군에서 크게 감소하는 현상을 보였다(표11 참조).

Th1 세포에서 분비되는 사이토카인인 INF -와 IL -12의 분비에 대한 혼합 곡류 발효 추출물의 영향(표10)

농도(㎍/㎕) 시료	INF-γ			IL-12
	1	5	10	1	5	10
대조군	0.6	-	-	1.1	-	-
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 추출물	0.45	0.44	0.38	0.88	0.85	0.62
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물	0.21	0.20	0.08	0.65	0.60	0.35
퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 추출물	0.51	0.50	0.45	0.92	0.89	0.78
퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 발효 추출물	0.38	0.38	0.22	0.84	0.82	0.48

Th2 세포에서 분비되는 사이토카인인 IL -4와 IL -13의 분비에 대한 혼합 곡류 발효 추출물의 영향(표11)

농도(㎍/㎕) 시료	IL-4			IL-13
	1	5	10	1	5	10
대조군	1.30	-	-	1.20	-	-
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 추출물	1.14	0.93	0.78	1.00	0.85	0.75
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물	0.93	0.64	0.52	0.79	0.65	0.56
퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 추출물	1.23	1.00	0.82	1.09	0.91	0.82
퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 발효 추출물	1.00	0.88	0.69	0.98	0.81	0.70

< 실험예 9> 데시게이터를 이용한 보습력 측정

본 발명에 따른 퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물 및 퀴노아, 아마란스, 기장, 귀리 혼합 발효 추출물 5ml를 플레이트에 넣은 후 완전건조 된 CaCl₂를 흡습제로 하여 35℃ 데시케이터에서 무게를 측정하였다. 무게는 총 144시간 동안 측정하였다. 화장품 배합의 보습성분으로서 일반적으로 사용되는 1,3-부틸렌 글리콜(BG)과 혼합추출물을 비교하여 실험결과를 나타내었다. 그 결과를 표12에 나타내었다.

수학식 2

보습력(%) = (1 - △S/S) x 100

여기서, S는 초기 표본의 무게이고, △S는 초기 표본의 무게에서 최종 표본의 무게를 차감한 값이다.

혼합 곡류 발효 추출물의 데시게이터를 이용한 보습력 측정(표12)

시간( hr )	보습력 (%)
	BG	퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 추출물	퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물	퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 추출물	퀴노아, 아마란스, 귀리, 기장 혼합 발효 추출물
24	100	100	100	100	100
48	92	87	93	83	96
72	85	75	92	79	91
120	82	70	90	75	88
144	74	58	87	66	82

표 12 에 나타낸 바와 같이, 혼합 곡류 발효 추출물이 혼합 곡류 추출물과 BG에 비해 본 발명에 따른 혼합 곡류 발효 추출물의 보습력이 시간 경과에 따라 유의적으로 높은 것을 알 수 있다.

< 실험예 10> 피부 안전도 측정

본 발명에 따른 화장품의 피부 안전성 검사를 측정하기 위하여 통상의 패취(patch test) 테스트를 실시하였다. 연구대상은 건강한 30-40대 성인 남녀 15명을 대상으로 팔 하박부 안쪽에 실험예 2에서 제조된 화장품을 첩포한 후 48시간 후에 첨포를 제거하여 피부의 상태(자극 정도)를 관찰하였다. 그 결과는 하기 표 13에 나타내었다.

피부 안전도 측정(표13)

시험군	패취테스트( 사람수 )
		***	**	*
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 추출물	48시간 후	0	1	14
퀴노아, 아마란스, 보리, 율무 혼합 발효 추출물	48시간 후	0	0	15
퀴노아, 아마란스, 기장, 귀리 혼합 추출물	48시간 후	0	0	15
퀴노아, 아마란스, 기장, 귀리 혼합 발효 추출물	48시간 후	0	0	15

*** : 매우 자극이 심함

** : 약간의 자극이 있음

* : 자극이 없음(음성)

없음

Claims (15)

1. 퀴노아, 아마란스, 기장, 귀리, 보리 및 율무를 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 하는 혼합 발효 추출물을 함유하는 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 퀴노아 3 ~ 35 중량부, 아마란스 3 ~ 35 중량부, 귀리 3 ~ 25 중량부, 기장 3 ~ 25 중량부를 물과 혼합하고 GABA 생산능을 가진 식물성 유산균을 접종하여 발효시키고, 그로부터 수득되는 발효액을 숙성시켜서 수득되는 혼합 곡류 발효 추출물의 건조 중량을 기준으로 조성물 전체에 대해 0.001 내지 80중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 퀴노아 3 ~ 35 중량부, 아마란스 3 ~ 35 중량부, 보리 3 ~ 25 중량부, 율무 3 ~ 25 중량부를 물과 혼합하고 GABA 생산능을 가진 식물성 유산균을 접종하여 발효시키고, 그로부터 수득되는 발효액을 숙성시켜서 수득되는 혼합 곡류 발효 추출물의 건조 중량을 기준으로 조성물 전체에 대해 0.001 내지 80중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염의 개선용 화장료 조성물.
4. 제 2 내지 3항에 있어서, 상기 유산균은 김치에서 분리한 락토바실러스(Lactobacillus) 속 균주인 것을 특징으로 하는 혼합 곡류 발효 추출물.
5. 제 4 항에 있어서, 상기 락토바실러스 속 균주는 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum) 및 이들의 혼합 균주로 이루어진 군에서 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 하는 발효 방법.
6. 제 1 내지 2 항에 있어서, 유산균 접종량은 10⁵-10⁹ CFU/ml인 것을 특징으로 하는 혼합 곡류 발효 추출물.
7. 제 1 내지 2 항에 있어서, 상기 혼합 곡류 발효 추출물이 발효액 또는 추출 후 감압농축 및 동결건조된 것을 특징으로 하는 상기 화장료 조성물.
8. 제 1 내지 2 항에 있어서, 상기 발효가 배양액의 pH를 4.0 내지 5.0으로 조정하고, 20 내지 37℃에서 24시간 내지 72시간 배양하는 것을 특징으로 하는 상기 화장료 조성물.
9. 제 1 내지 2 항에 있어서, 상기 혼합 곡류 발효 추출물이 함유하는 유효성분에 대한 추출수율 증가 및 발효과정을 통한 생리활성 기능을 갖는 고분자 화합물의 저분자 화합물의 전환을 특징으로 하는 상기 화장료 조성물.
10. 제 1 항에 있어서, 상기 혼합 곡류 발효 추출물은 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 항균효과를 가짐으로써 면포생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
11. 제 2 항에 있어서, 상기 혼합 곡류 발효 추출물은 아토피성 피부염 유발원인의 사이토카인 분비를 억제하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
12. 제 1 항에 있어서, 상기 혼합 곡류 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용, 여드름 개선용 화장료 조성물.
13. 제 2 항에 있어서, 상기 혼합 곡류 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용, 아토피성 피부염 개선용 화장료 조성물.
14. 제 1 내지 2 항에 있어서 상기 화장료 조성물이 상기 혼합 곡류 발효 추출물을 함유하는 나노캡슐, 마이크로캡슐, 나노좀 등의 제형으로 되는 것을 특징으로 하는 상기 화장료 조성물.
15. 상기 화장료 조성물의 제형은 유연 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 밀크로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O)형의 에멀젼, 페이스크성 또는 고체 무수 생성물, 소구체를 사용한 수성 상에서의 오일 분산물, 이온성 또는 비이온성 형태의 지질 소포체의 형태, 연고, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩 또는 보디오일 등의 기초 화장료, 수중유형 또는 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도우, 마스카라, 치크칼라 및 아이브로우펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 등의 색조 화장료 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 여드름 및 아토피성 피부염 개선용 화장료 조성물.
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    

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